HUP0202755A2 - C-peptid inzulin és inzulinanalógok jobb előállítására - Google Patents
C-peptid inzulin és inzulinanalógok jobb előállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0202755A2 HUP0202755A2 HU0202755A HUP0202755A HUP0202755A2 HU P0202755 A2 HUP0202755 A2 HU P0202755A2 HU 0202755 A HU0202755 A HU 0202755A HU P0202755 A HUP0202755 A HU P0202755A HU P0202755 A2 HUP0202755 A2 HU P0202755A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- insulin
- precursor
- dna
- human insulin
- vector
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 58
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims description 20
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims description 18
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims description 18
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 title claims description 10
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 title claims description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 29
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 28
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 21
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 101000687727 Homo sapiens Transcriptional regulator PINT87aa Proteins 0.000 description 6
- 102100024797 Transcriptional regulator PINT87aa Human genes 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 3
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N Arg-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- MMGCRPZQZWTZTA-IHRRRGAJSA-N Arg-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N MMGCRPZQZWTZTA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- OOZJHTXCLJUODH-QXEWZRGKSA-N Pro-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 OOZJHTXCLJUODH-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N Thr-Lys-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N 0.000 description 2
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 2
- GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCC(=O)O)=CNC2=C1 GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700007397 Arg(B31)- insulin Proteins 0.000 description 1
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N Arg-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N Asp-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100098985 Caenorhabditis elegans cct-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GYAUWXXORNTCHU-QWRGUYRKSA-N Gly-Cys-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 GYAUWXXORNTCHU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N Leu-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N Phe-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GLQFKOVWXPPFTP-VEVYYDQMSA-N Thr-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GLQFKOVWXPPFTP-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N Val-Cys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000012378 ammonium molybdate tetrahydrate Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIXLYHHVMHXSCP-UHFFFAOYSA-H azane;dihydroxy(dioxo)molybdenum;trioxomolybdenum;tetrahydrate Chemical compound N.N.N.N.N.N.O.O.O.O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O[Mo](O)(=O)=O.O[Mo](O)(=O)=O.O[Mo](O)(=O)=O FIXLYHHVMHXSCP-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 108700039926 insulin glulisine Proteins 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010073093 leucyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát képezi humán inzulin vagy inzulinanalóg alábbi, Iáltalános képletű előanyaga, Fus-B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21), ahol Fusadott esetben van jelen és jelentése egy tetszés szerinti szekvenciafúziós része, B(1-30) jelentése humán inzulin B-lánca, Y jelentése aC-terminálison bázisos aminosavval végződő aminosavlánc, n 2 és 50között változhat, és az Y aminosavlánc hosszát jelenti, és A(1-21)jelentése humán inzulin A-lánca, és az A- és/vagy a B-láncokaminosavak kicserélésével, deléciójával és/vagy addíciójávalmódosíthatók. A találmány tárgyát képezi továbbá az előanyagot kódolóDNS, a DNS-t tartalmazó vektor, az előanyag és a DNS előállításáraszolgáló eljárás, valamint az előanyag és a DNS alkalmazása. Atalálmány tárgyát képezi továbbá humán inzulin vagy inzulinanalógelőállítására szolgáló eljárás. A találmány humán inzulin vagyinzulinanalóg előállítására alkalmazható. Ó
Description
KÖZZÉTÉTELI
PÉLDÁNY
Képviselő:
Danubia
Szabadalmi és Védjegy Iroda Kft.
Budapest
C-peptid inzulin és inzulinanalógok jobb előállítására
A találmány tárgyát képezi a proinzulin előanyaga, illetve C-peptidjének egy szintetikus származéka, az előanyagot kódoló DNS, azt vektor, előállításukra szolgáló eljárás, alkalmazásaik.
A származékot tartalmazó proinzulinnak többféle szempontból jobbak a tulajdonságai, mint a majomból származó proinzulinnak, elsősorban az inzulinszármazék géntechnológiai előállítása során a végső hozam kedvezőbb.
A diabéteszes megbetegedések száma világszerte folyamatosan emelkedik. Ezzel arányosan nő az igény inzulinra vagy inzulinszármazékokra. Megoldandó feladat a jelenlegi eljárásoknak a hatóanyag hozamára történő optimalizálása. Az EP-B1 0 489 780 számú európai közzétételi iratban inzulin vagy származékai előállítására szolgáló eljárásról adnak kitanítást. Az ebben ismertetett vektorok humán inzulin előállítására szolgálnak a pINT90d-plazmiddal vagy kiindulási plazmidként az EP-A 0 821 006 számú európai közzétételi iratban ismertetett pINT302d-plazmid készítéséhez, amely egy His(B31) His(B32)Gly(A21)-inzulinszármazék előállítására
Aktaszámunk: 96435-9449/SG szolgál, vagy az EP-A 0 885 961 számú európai közzétételi iratban ismertetett pINT329d-vektor készítéséhez, amely a Lys(B3)Glu(B29)-inzulinszármazék előállítására szolgál.
Felismertük, hogy különösen előnyös proinzulinszármazék az I általános képletű vegyület,
Fus-B(l-30) -RDVP-Yn-A(l-21) (I) ahol
Fus jelentése adott esetben egy tetszés szerinti szekvencia fúziós része,
B(l-30) jelentése humán inzulin B-lánca,
Y jelentése a C-terminálison bázisos aminosavval végződő aminosavlánc, n 2 és 50 között változhat, és az Y-aminosavlánc hosszát jelenti, és
A(l-21) jelentése humán inzulin A-lánca, és az A- és/vagy a B-láncok aminosavak kicserélésével, deléciójával és/vagy addíciójával módosíthatók. Meglepő módon az inzulin A- illetőleg B-láncának összeállítása után azoknak azonos és egymástól eltérő, előnyös tulajdonságai figyelhetők meg.
Ha a humán B-láncot a humán A-lánccal az előnyös Cpeptiddel kötjük össze, olyan proinzulin keletkezik, amelynek expressziós hozama a vad típusú proinzulinéhoz hasonló, és amelynek inzulinná történő enzimes feldolgozása azonban könnyebben irányítható, oly módon, hogy melléktermékként nem keletkezik argininnel meghosszabbodott B-lánc, amelyet a gyógyszerré történő előállításkor el kell választani, amely során hozamveszteség lép fel.
Ha a C-terminálison két hisztidinnel meghosszabbított B-láncot az A21-helyzetben glicint tartalmazó humán inzulin A-láncával a találmány szerinti C-peptiddel kötjük össze, akkor körülbelül 20%-kal magasabb expressziós hozamot tapasztalunk a pINT90d-plazmiddal elérhető hozammal összehasonlítva, és csaknem ötször magasabb hozamot, mint amely a pINT302d-plazmiddal nyerhető. Ezen kívül az enzimes feldolgozás ugyanúgy könnyebben irányítható, mint ezt az előzőekben ismertetettük.
Ha egy Lys(B3)Glu(B29)-módosított B-láncot humán inzulin A-láncával a módosított C-peptiden keresztül kötünk össze, akkor a proinzulin-származék jobb feltekeredési tulajdonságait figyelhetjük meg a pINT329d által kódolt proinzulinnal összehasonlítva. A nyers, fúziós fehérje hozama jobb, és ugyanolyan szintet ér el, mint amely pINT90dnél figyelhető meg. Ezen kívül az enzimes feldolgozás is egyszerűbb.
Egy előnyös megvalósítási mód szerint az új C-peptid aminosavszekvenciája a következő:
CGCGATGTTCCTCAGGTGGAGCTGGGCGGGGGCCCTGGCGCAGGCAGCCTGCAGCCCTTG RDVPQVELGGGPGAGSLQPL
GCGCTGGAGGGGTCCCTGCAGAAGCGC (1. azonosítószámú szekvencia) ALEGSLQKR (2. azonosítószámú szekvencia)
Bemutatjuk a fent megadott C-peptidet kódoló, sok, lehetséges DNS-szekvencia egyikét is.
A találmány tárgyát képezi humán inzulin vagy inzulinanalóg I általános képletű előanyaga,
Fus-B (1-30) -RDVP-Yn _A (1-21) (I) ahol
Fus jelentése adott esetben egy tetszés szerinti szekvencia fúziós része,
B(l-30) jelentése humán inzulin B-lánca,
Y jelentése a C-terminálison bázisos aminosavval végződő aminosavlánc, n 2 és 50 között változhat, és az Y-aminosavlánc hosszát jelenti, és
A(l-21) jelentése humán inzulin A-lánca, és az A- és/vagy a B-láncok aminosavak kicserélésével, deléciójával és/vagy addiciójával módosíthatók, és ahol Yn előnyösen humán vagy majom eredetű inzulin Cpeptidjének 5-35 aminosavát jelenti, előnyösebben, ahol Yn humán inzulin 11-35 aminosavát jelenti.
A találmány egy további tárgyát képezik az előzőekben ismertetett előanyagok, ahol a humán inzulin B-láncában Lys(B3)Glu(B29) módosítások találhatók, vagy ahol a humán inzulin B- és A-lánca His(B31) His(B32)Gly(A21) módosításokat tartalmaz.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben is mertetett előanyagot kódoló DNS.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett előanyagot kódoló DNS-t tartalmazó vektor, amely előnyösen E. coli-ban történő expresszióra alkalmas expressziós vektor.
A találmány egy további tárgyát képezi az előzőekben ismertetett vektort tartalmazó E. coli sejt.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett előanyag előállítására szolgáló eljárás, amely során
a) az előzőekben ismertetett DNS-t az előzőekben ismertetett vektorba viszünk,
b) az (a) lépés szerinti vektort E. coli sejtbe juttatjuk,
c) az (a) lépés szerinti vektort tartalmazó, (b) lépés szerinti E. coli sejtet expresszióra alkalmazzuk, és
d) az előanyagot a tápközegből izoláljuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás az előzőekben ismertetett DNS előállítására, amely során
a) humán vagy majom eredetű inzulin cDNS-éből kiindulva PCR vagy más, molekuláris biológiai technológiák segítségével előállítjuk ezt a DNS-t, és
b) izoláljuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás humán inzulin vagy inzulinanalóg előállítására, amely során
a) az előzőekben ismertetett előanyagot az előzőekben ismertetett eljárás segítségével előállítjuk,
b) az (a) lépés szerinti előanyag feltekeredését megfelelő körülmények között oly módon érjük el, hogy a di szulfidhidak a humán inzulinhoz hasonló módon ki tudjanak épülni, és az RDVP-Yn-részt és adott esetben a Fus-sal jelölt fúziós részt enzimesen eltávolítjuk, és
c) a humán inzulint vagy inzulinanalógot tisztítjuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett előanyag alkalmazása inzulin vagy inzulinanalóg előállítására, előnyösen az inzulin vagy inzulinanalóg előállítása az előzőekben ismertetett eljárás szerint történik.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett DNS alkalmazása az előzőekben ismertetett előanyag előállítására.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett vektor alkalmazása az előzőekben ismertetett előanyag előállítására.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett E. coli sejt alkalmazása az előzőekben ismertetett előanyag előállítására.
A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy korlátoznák a találmány oltalmi körét.
1. példa
Proinzulin-származékok expressziój a
Az expressziót az EP-B1 0 489 780 számú európai közzétételi iratban leírtak szerint végezzük. Nagy térfogatban történő fermentáció esetén módosítások hajthatók végre. Az expressziós arányok összehasonlításánál azonban mindig ugyanazokat a körülményeket tartottuk be.
Nagyobb léptékű munkáknál a következő, általános fermentációs receptet alkalmaztuk, amelyet példaképpen 7,5 literes térfogatra ismertetünk:
Fermentációs térfogat:7,5 1
Sterilizációs körülmények: 121°C, 20 perc, pH 3,5, sterilizálás után ammóniával pH 7,0-re állítjuk.
Fermentációs hőmérséklet:37°C pH-szabályozás: pH 7,0, 25%-os ammóniaoldattal beállítva
Kevertetési fordulatszám: 1500 RPM
Levegőztetés: 15 Nl/min (2vvm)
Időtartam: kb. 24 óra
Rátáplálás: 65%-os glükózt adagolunk
200 mmoll_1h_1 OTR-értéktől állandó, 12 gl-1h-1 arányban.
Előtenyészet: inokulumampulIával rázatott tenyészetet oltunk és 3-4 órán keresztül 37°C-on, 250 RPM kevertetéssel inkubáljuk OD A540 ~ 1 értékig.
Oltás: A fermentort körülbelül ml előtenyészettel oltjuk. Indukció: A540 > 40 értéknél mg/1 (300 mg/fermentor) indol-propionsavat oldunk körülbelül 10 ml vizes nátrium-karbonát oldatban (0,17 g nátrium-karbonáttal) .
NI = normál liter, vvm = térfogat/térfogat/perc és
OTR = oxigén átadási sebesség
Fermentációs tápközegek:
| Recept száma GAI 100/95-000: | Tömeg | g/1 |
| glükóz-l-hidrát, D(+) min.80% | 44 | |
| citromsav-1-hidrát | 3,48 | |
| ammónium-szulfát, min. 95% | 6, 0 | |
| foszforsav, orto, 85% | 2,99 | |
| dikálium-hidrogénfoszfát | 1,18 | |
| nátrium-szülfát | 3, 0 | |
| magnézium-szulfát-7-hidrát, min 98% | 2,0 | |
| vas(III)-szulfát x H20 | 0, 5 | |
| nyomelemoldat: RL 1/85-000 | 1,0 ml | |
| tiamin-HCl | 0, 005 | |
| Desmophen 3600 | 0, 5 | |
| Nyomelemoldat | ||
| RL 1/85-000 | Tömeg | g/i |
| réz(II)-szulfát-5-hidrát | 1,6 | |
| kálium-jodid | 4,0 | |
| ammónium-molibdát-4-hidrát | 8,0 | |
| mangán (II)-szulfát-1-hidrát | 12, 3 | |
| cink-szulfát-7-hidrát | 16 | |
| bórsav | 20 | |
| Tápközeg a rázatott lombikban | ||
| Tömeg | g/i | |
| élesztőkivonat | 8, 0 | |
| glükóz | 1,0 | |
| nátrium-klórid | 3, 5 | |
| kálium-dihidrogénfoszfát | 1,32 | |
| dikálium-hidrogénfoszfát | 3, 68 |
2. példa
Inzulin előállítása
Az inzulin előállítása ismert eljárások szerint történik, mint például amelyeket az EP-B1 0 489 780 vagy az EP-A 0 885 961 számú európai közzétételi iratokban ismertetnek vagy tárgyalnak. A fúziós fehérje feltekeredése és feldolgozása („processzálódás) előnyösen az EP-B1 0 668 282 számú európai közzétételi iratban ismertetett eljárás (Id. 2. példa) szerint történik. Az EP 0 288 809 számú európai közzétételi irat szerinti feltekeredés után az üledék a további feldolgozás előtt kiszűrhető.
3. példa
A származékolt C-láncú, humán proinzulin B-RDVP Cn35—A vegyületet kódoló pINT358d-plazmid készítése
A plazmid előállításához az EP-B1 0 489 780 számú európai közzétételi iratban ismertetett Tir- és Insullláncindítókat alkalmaztuk. Ezenkívül két új láncindítószekvenciát is szintetizáltunk.
A PINT358ÍIII-láncindító szekvenciája a következő:
5'-CCC AAG ACC CGC GAT GTT CCT CAG GTG GAG CTG GGC GGG GGC CCT -3' (3. a.sz.) B28 B29 B30 Arg Asp Val Pro Cll C12 C12 C14 C15 C16 C17 C18 (4. a.sz.)
A PINT358revII-láncindító szekvenciája a következő:
5'-CAGCTCCACCTGAGGAACATCGCGGGTCTTGGGTGTGTAG-3' (5. a.sz.)
Mintaként a pINT90d-plazmid DNS-ével és a Tir/PINT358revII- és Insull/PINT358fIll-láncindítópárokkal az EP-B1 0 489 780 számú európai közzétételi iratnak megfelelően PCR-reakciót végzünk. Mindkét reakció termékeinek egy kis részét egyesitjük, és a Tir/Insull-láncindítópárral egy harmadik PCR-t végezünk. Ennek a reakciónak a termékét SalI/NcoI-enzimekkel emésztjük, és ennek a restrikciós emésztésnek a termékét tisztítás után az EP-B1 0 489 780 számú európai közzétételi iratban ismertetett pINT91dplazmid NcoI/Sall-gyel felnyitott vektor-DNS-ébe építjük. Az így készített plazmidot pINT358d-nek neveztük. A szerkezetét DNS-szekvenciavizsgálattal igazoljuk. Kompetens E. coli sejteket transzformálunk a plazmid-DNS-sel. A proinzulin baktériumban történő expressziója az 1. példában ismertetettek szerint történik. A 2. példa szerinti feltekeredés után következik a proinzulin enzimes átalakítása inzulinná, majd további tisztítás az EP-B1 0 347 781 számú európai közzétételi irat szerint. A pINT90d-ből levezetett eljárással összehasonlítva az ioncserélő kromatográfiás lépésben egy szélső frakció is nyerhető, mivel ez nem szenynyezett Arg(B31)-inzulinnal.
4. példa
A pINT362d-plazmid elkészítése Lys(B3)Glu(B29)-RDVPC11-35-proinzulin előállításához
A plazmid elkészítéséhez a pINT329d- és pINT358dplazmidok DNS-ét használjuk mintaként, és a Tir- és az Insull-láncindítókat alkalmazzuk. Ezenkívül két új láncin dítót, a Salforward- és a 329rev-láncindítókat is megszintetizáltuk .
A Salforward-láncinditó szekvenciája a következő:
5'-TACACACCCGAGACCCGCGATGTTCCTCAGG-3' (6. azonosítószámú szekvencia)
A vastagon szedett szekvenciarészletek azt a szekvenciát jelzik, amely a pINT358d-plazmiddal hibridizál, míg a többi rész a pINT329d-plazmid B-láncot kódoló részletének szekvenciájával homológ.
A 329rev-láncindító szekvenciája a következő:
5'-CCTGAGGAACATCGCGGGTCTCGGGTGTGTAG-3' (7. azonosítószámú szekvencia)
A vastagon szedett részletek a B-lánc végét alkotó és a pINT329d-plazmidban lévő arginin triplettjét leíró antiszensz szállal homológ szakaszt jelölik. A többi szekvencia a pINT358d-plazmiddal hibridizál. Két hosszabbítást végezünk PCR-rel. Ehhez a pINT329d-plazmid DNS-e szolgál mintaként a Tir/329rev-láncindítópárokkal, és a pINT358d DNS-e szolgál mintaként a Salforward/Insull-láncindítópár számára.
Mindkét reakció olyan fragmenseket eredményez, amelyek a Salforward-láncinditó szekvenciájával átfednek. Ily módon a két fragmens egy harmadik PCR-lépéssel egyesíthető, és Tir- és Insull-láncindítokkal egyetlen, az inzulin12 analógot kódoló DNS-szekvenciává illeszthetők. Ezt a reakcióterméket Ncol/Sail restrikciós enzimekkel hasítjuk, majd végül a pINT91d-ből származó, Sall/NcoI-gyel felnyitott vektorfragmensbe építjük. E. coli K12 MM294 törzsének kompetens sejtjeit a megfelelő ligációskeverékkel transzformáljuk. A transzformánsokból plazmid-DNS-t izolálunk és jellemzünk. A megfelelő plazmid a pINT362d jelölést kapta.
Az expresszió után a fúziós fehérjére a pINT90d-hez hasonló nyershozamot tapasztaltunk. A megfigyelt feltekeredési hozam a pINT329d-hez képest azonban körülbelül 40%-kal magasabb.
A pINT362d által kódolt fúziós fehérje szerkezete a következő:
MATTSTGNSAR FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPET RDVPQVELGGGPG
Fúziós rész B-lánc C-lánc
AGSLQPLALEGSLQKR GIVEQCCTSICSLYQLENYCN (8. a.sz.)
C-lánc (folyt.) A-lánc
5. példa
A pINT34 9d-plazmid készítése His (B31) His (B32) Gly (A21) -RDVP-Ci 1-35-proinzulin előállításához
Először is a pINT140d-plazmidot állítjuk elő, amelynek DNS-e a Gly(A21)-inzulin inzulinanalógot kódolja.
Ehhez a PCR-hez történő alkalmazáshoz láncindítóként két oligonukleotid szükséges.
A Tir-oligonukleotidot szensz, a 140drev-oligonukleotidot antiszensz láncindítóként alkalmazzuk.
140drev 5'-AAAGGTCGACTATTAGCCGCAGTA-3' (9. a.sz.) Stop Stop Gly Cys Tyr
A21 A21 Al9
Mindkét láncinditót hagyományos PCR-ben alkalmazzuk pINT90d-plazmid DNS-ével. A reakcióterméket az EP-B1 0 489 780 számú európai közzétételi irat szerint Ncol és Sáli restrikciós enzimekkel emésztjük, és végül a megfelelően felnyitott pINT69d-vektorba építjük. így kapjuk a pINT140dplazmidot, amelyet E. coli K12 MM294 törzsébe történő transzformáció után visszaizolálunk, és restrikciós és szekvenciavizsgálattal jellemzünk.
A pINT140d-plazmid DNS-éből kiindulva két PCRreakciót végzünk. Az első reakcióhoz a Tir-láncindítót alkalmazzuk és fordított láncindítóként a következő szekvenciájú PINT349a-t:
Val Gin Pro Val Asp Arg His His Thr Lys Pro Thr Tyr (10. a.sz. 5'-CACCTGAGGAACATCGCGGTGGTGGGTCTTGGGTGTGTAG-3' (11. a.sz.)
C12 Cll* * * * * B30 B29 B28 B27 B26
A csillaggal jelölt szekvenciák az újonnan bevitt aminosavak kodonjait mutatják.
A második PCR-reakciót az Insull- és PINT349bláncindítokkal hajtjuk végre.
A PINT349b-láncindító szekvenciája a következő:
Pro Lys Thr His His Arg Asp Vai Pro Gin Vai Glu Leu (12. a.sz.) 5'-ACCCAAGACCCACCACCGCGATGTTCCTCAGGTGGAGCTG-3' (13. a.sz.)
B28 B29 B30* * * * * C11 cl2 C13 C14
A DNS-szekvencia 34. helyzetétől az 1. helyzetéig a láncinditó komplementer a PINT349a-val. A két PCR-reakció termékei egy harmadik PCR-reakcióban a Tir- és az Insullláncinditókkal a kívánt proinzulin-származékot kódoló DNSfragmenssé állíthatók össze. Ennek a reakciónak a termékét az előzőekben ismertetettek szerint Ncol- és Sallenzimekkel emésztjük, és az ezekkel az enzimekkel felnyitott pINT91d-vektorfragmensbe építjük, és E. coli K12 törzsébe transzformáljuk. A transzformánsokból a plazmidok jellemzése után kapott, megfelelő plazmidkonstrukciókat pINT349d-nek jelöltük.
A fúziós fehérje vizsgálatával a fúziós fehérje hozamának nyilvánvaló emelkedését tapasztaljuk. A hozam meglepő módon körülbelül 20%-kal magasabb, mint amely pINT90dplazmiddal elérhető, és körülbelül ötször magasabb, mint a pINT30d-plazmiddal kapható hozam. A feltekeredési arány a pINT90d által kódolt, majom eredetű proinzulinnál elérhető aránnyal összehasonlítható.
SZEKVENCIALISTA (210)1 (211)87 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: C-peptidvariánst kódoló DNS (400)1 cgcgatgttc ctcaggtgga gctgggcggg ggccctggcg caggcagcct gcagcccttg 60 gcgctggagg ggtccctgca gaagcgc (210)2 (211)29 (212) PRT (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: C-Pep-inzulin variáns (400) 2
Arg Asp Vai Pro Gin Vai Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Alá Gly Ser
10 15
Leu Gin Pro Leu Alá Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg (210)3 (211)45 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: PINT 358ÍIII láncindító (400)3 cccaagaccc gcgatgttcc tcaggtggag ctgggcgggg gccct45 (210)4 (211)4 (212) PRT (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: PINT 358fIIIből származó fehérjerész szekvenciája (400)4
Arg Asp Val Pro (210)5 (211)40 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: PINT 358revII láncindító (400)5 cagctccacc tgaggaacat cgcgggtctt gggtgtgtag40 (210)6 (211)31 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: Sál „előre láncindító (400)6 tacacacccg agacccgcga tgttcctcag g (210)7 (211)32 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: 329rev láncindító (400) 7 cctgaggaac atcgcgggtc tcgggtgtgt ag (210) (211) (212) (213) (220) (223) (400)
Met Ala
Leu Cys
Arg Gly
Leu Gly
Gly Ser 65
Cys Ser (210) (211) (212) (213)
PRT mesterséges szekvencia
A mesterséges szekvencia leírása: inzulinprekurzor-variáns
Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Alá Arg Phe Val Lys Gin His 5 1015
Gly Ser His Leu Val Glu Alá Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu 20 2530
Phe Phe Tyr Thr Pro Glu Thr Arg Asp Val Pro Gin Val Glu 35 4045
Gly Gly Pro Gly Alá Gly Ser Leu Gin Pro Leu Alá Leu Glu 5560
Leu Gin Lys Arg Gly He Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile 70 7580
Leu Thr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn
8590
DNS mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: 140drev láncin- dító (400) aaaggtcgac tattagccgc agta (210) 10 (211) 13 (212) PRT (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: PINT 349a-ból származó fehérjerész szekvenciája (400)10
Val Gin Pro Val Asp Arg His His Thr Lys Pro Thr Tyr
1510 (210)11 (211)40 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: 349a láncindító (400)11 cacctgagga acatcgcggt ggtgggtctt gggtgtgtag
| (210) | 12 | |
| (211) | 13 | |
| (212) | PRT | |
| (213) (220) | mesterséges szekvencia | |
| (223) | A mesterséges szekvencia | leírása |
| származó fehérjerész szekvenciája | ||
| (400) | 12 | |
| Pro Lys | Thr His His Arg Asp Val Pro | Gin Val |
| 1 | 5 | 10 |
| (210) | 13 | |
| (211) | 40 | |
| (212) | DNS | |
| (213) (220) | mesterséges szekvencia | |
| (223) | A mesterséges szekvencia indító | leírása: |
| (400) | 13 |
PINT 349b-ből
Glu Leu
PINT 349b láncacccaagacc caccaccgcg atgttcctca ggtggagctg
Claims (18)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Humán inzulin vagy inzulinanalógok előanyaga, amely (I) általános képletűFus-B (1-30)-RDVP-Yn-A( 1-21) (I) ahol a képletbenFus adott esetben van jelen és jelentése egy tetszés szerinti szekvencia fúziós része,B(l-30) jelentése humán inzulin B-láncaY jelentése a C-terminálison bázisos aminosavval végződő aminosavlánc, n 2 és 50 között változhat, és az Y-aminosavlánc hosszát jelenti, ésA(1-21) jelentése humán inzulin A-lánca, és az A- és/vagy a B-láncok aminosavak kicserélésével, deléciójával és/vagy addiciójával módosíthatók.
- 2. Az 1. igénypont szerinti előanyag, ahol a képletben Yn humán vagy majom eredetű inzulin C-peptidjének 5-35 aminosavát jelenti.
- 3. Az 1. igénypont szerinti előanyag, ahol a képletben Yn humán inzulin 11-35 aminosavát jelenti.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti előanyag, amelyben a humán inzulin B-lánca Lys(B3)Glu(B29) módosításokat tartalmaz.
- 5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti előanyag, amelyben a humán inzulin B- és A-lánca His(B31) His(B32)Gly(A21) módosításokat tartalmaz.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti előanyagot kódoló DNS.
- 7. A 6. igénypont szerinti DNS-t tartalmazó vektor.
- 8. A 7. igénypont szerinti vektor, amely E. coliban történő expresszióra alkalmas expressziós vektor.
- 9. A 8. igénypont szerinti vektort tartalmazó E. coli sej t.
- 10. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti előanyag előállítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogya) a 6. igénypont szerinti DNS-t a 7. igénypont szerinti vektorba visszük be,b) az (a) lépés szerinti vektort E. coli sejtbe juttatjuk,c) az (a) lépés szerinti vektort tartalmazó, (b) lépés szerinti E. coli sejtet expresszióra alkalmazzuk, ésd) az előanyagot a tenyészet tápközegéből izoláljuk.
- 11. A 6. igénypont szerinti DNS előállítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogya) humán vagy majom eredetű inzulin cDNS-éből kiindulva PCR vagy más, molekuláris biológiai technológia segítségével létrehozzuk a 6. igénypont szerinti DNS-t, ésb) izoláljuk.
- 12. Humán inzulin vagy inzulinanalóg előállítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogya) a 10. igénypont szerinti eljárással előállítunk egy előanyagot,b) az (a) lépés szerinti előanyag feltekeredését alkalmas körülmények között úgy érjük el, hogy a diszulfidhidak a humán inzulinhoz hasonlóan ki tudnak alakulni, és az RDVP-Yn-részt és adott esetben a Fus-sal jelölt fúziós részt enzimesen eltávolítjuk, ésc) a humán inzulint vagy inzulinanalógot tisztítjuk.
- 13. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti előanyag alkalmazása inzulin vagy inzulinanalóg előállítására.
- 14. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az inzulin vagy inzulinanalóg előállítása a 12. igénypont szerinti eljárással történik.
- 15. A 6. igénypont szerinti DNS alkalmazása az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti előanyag előállítására.
- 16. A 8. igénypont szerinti vektor alkalmazása az 15. igénypontok bármelyike szerinti előanyag előállítására.
- 17. A 9. igénypont szerinti E. coli sejt alkalmazása az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti előanyag előállítására .
- 18. A 15., 16. vagy 17. igénypontok szerinti alkalmazás, ahol az előanyag előállítása a 10. igénypont szerinti eljárással történik.A meghatalmazott:DANUBIASzabadalmi és Védjegy Iroda Kft.Dr. Svingor Ádámszabadalmi ügyvivő
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19947456A DE19947456A1 (de) | 1999-10-02 | 1999-10-02 | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| PCT/EP2000/009017 WO2001025278A1 (de) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | C-peptid zur verbesserten herstellung von insulin und insulinanaloga |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0202755A2 true HUP0202755A2 (hu) | 2002-12-28 |
| HUP0202755A3 HUP0202755A3 (en) | 2005-01-28 |
| HU228313B1 HU228313B1 (en) | 2013-03-28 |
Family
ID=7924253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0202755A HU228313B1 (en) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | C-peptide for the improved production of insulin and insulin analogues |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6534288B1 (hu) |
| EP (1) | EP1222207B1 (hu) |
| JP (1) | JP4681784B2 (hu) |
| KR (1) | KR100823463B1 (hu) |
| CN (1) | CN1193042C (hu) |
| AT (1) | ATE380196T1 (hu) |
| AU (1) | AU778369B2 (hu) |
| BR (2) | BR0014464A (hu) |
| CA (1) | CA2385857C (hu) |
| CY (1) | CY1107860T1 (hu) |
| DE (2) | DE19947456A1 (hu) |
| DK (1) | DK1222207T3 (hu) |
| ES (1) | ES2295054T3 (hu) |
| HK (1) | HK1049016B (hu) |
| HU (1) | HU228313B1 (hu) |
| IL (2) | IL148942A0 (hu) |
| MX (1) | MXPA02003103A (hu) |
| NO (1) | NO329975B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ518066A (hu) |
| PL (1) | PL203195B1 (hu) |
| PT (1) | PT1222207E (hu) |
| SI (1) | SI1222207T1 (hu) |
| TW (1) | TWI265168B (hu) |
| WO (1) | WO2001025278A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200202520B (hu) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7176278B2 (en) | 2001-08-30 | 2007-02-13 | Biorexis Technology, Inc. | Modified transferrin fusion proteins |
| US20050250676A1 (en) * | 2001-11-19 | 2005-11-10 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Method of activating insulin receptor substrate-2 to stimulate insulin production |
| US20040038864A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-02-26 | Per Balschmidt | Use of dimethyl sulfone as isotonicity agent |
| DE10235168A1 (de) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| ES2369895T3 (es) * | 2003-12-03 | 2011-12-07 | Novo Nordisk A/S | Insulina monocatenaria. |
| CN1663960B (zh) * | 2004-03-01 | 2012-07-04 | 重庆富进生物医药有限公司 | 高效表达重组人胰岛素原及其类似物的新型c肽 |
| US8927015B2 (en) * | 2006-04-12 | 2015-01-06 | Emisphere Technologies, Inc. | Formulations for delivering insulin |
| AU2009203809B2 (en) * | 2008-01-09 | 2013-07-25 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile |
| CN101970476B (zh) | 2008-01-09 | 2014-08-27 | 塞诺菲-安万特德国有限公司 | 具有超延迟时效特征的胰岛素衍生物 |
| DE102008003566A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008025008A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008025007A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008003568A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| HUE068164T2 (hu) | 2008-10-17 | 2024-12-28 | Sanofi Aventis Deutschland | Egy inzulin és egy GLP-1 agonista kombinációja |
| SG10201500871TA (en) | 2009-11-13 | 2015-04-29 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist and methionine |
| CA2780460C (en) | 2009-11-13 | 2018-09-04 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist, an insulin and methionine |
| RS55378B1 (sr) | 2010-08-30 | 2017-03-31 | Sanofi Aventis Deutschland | Upotreba ave0010 za proizvodnju leka za tretman diabetes mellitus tipa 2 |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| BR112014004726A2 (pt) | 2011-08-29 | 2017-04-04 | Sanofi Aventis Deutschland | combinação farmacêutica para uso no controle glicêmico em pacientes de diabetes tipo 2 |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| TWI641381B (zh) | 2013-02-04 | 2018-11-21 | 法商賽諾菲公司 | 胰島素類似物及／或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物 |
| EP3091995B1 (en) | 2014-01-09 | 2024-03-20 | Sanofi | Stabilized pharmaceutical formulations of insulin aspart |
| SG11201604706TA (en) | 2014-01-09 | 2016-07-28 | Sanofi Sa | Stabilized pharmaceutical formulations of insulin aspart |
| WO2015104311A1 (en) | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Sanofi | Stabilized glycerol free pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives |
| TWI758239B (zh) | 2014-12-12 | 2022-03-21 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 甘精胰島素/利司那肽固定比率配製劑 |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
| WO2025099208A1 (en) | 2023-11-10 | 2025-05-15 | Intervet International B.V. | Recombinant insulin precursor |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PH16156A (en) * | 1980-03-27 | 1983-07-18 | Lilly Co Eli | Process for producing an insulin precursor |
| US4430266A (en) * | 1980-11-28 | 1984-02-07 | Eli Lilly And Company | Process for producing an insulin precursor |
| HRP940432B1 (en) * | 1994-08-05 | 2003-10-31 | Pliva Pharm & Chem Works | Dna sequences encoding biosynthetic insulin precursors and process for preparation of insulin |
| EP0821006B1 (de) * | 1996-07-26 | 2004-04-21 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| DE19726167B4 (de) * | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
-
1999
- 1999-10-02 DE DE19947456A patent/DE19947456A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-09-15 ES ES00960664T patent/ES2295054T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 DE DE50014830T patent/DE50014830D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 IL IL14894200A patent/IL148942A0/xx unknown
- 2000-09-15 HK HK03101211.8A patent/HK1049016B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 MX MXPA02003103A patent/MXPA02003103A/es active IP Right Grant
- 2000-09-15 BR BR0014464-9A patent/BR0014464A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 SI SI200030981T patent/SI1222207T1/sl unknown
- 2000-09-15 KR KR1020027004275A patent/KR100823463B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 HU HU0202755A patent/HU228313B1/hu unknown
- 2000-09-15 AT AT00960664T patent/ATE380196T1/de active
- 2000-09-15 AU AU72877/00A patent/AU778369B2/en not_active Expired
- 2000-09-15 NZ NZ518066A patent/NZ518066A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 WO PCT/EP2000/009017 patent/WO2001025278A1/de not_active Ceased
- 2000-09-15 PL PL354078A patent/PL203195B1/pl unknown
- 2000-09-15 DK DK00960664T patent/DK1222207T3/da active
- 2000-09-15 CN CNB008137137A patent/CN1193042C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 BR BRPI0014464A patent/BRPI0014464B8/pt unknown
- 2000-09-15 EP EP00960664A patent/EP1222207B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 JP JP2001528218A patent/JP4681784B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 PT PT00960664T patent/PT1222207E/pt unknown
- 2000-09-15 CA CA2385857A patent/CA2385857C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-29 TW TW089120149A patent/TWI265168B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-10-02 US US09/676,787 patent/US6534288B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-03-18 NO NO20021335A patent/NO329975B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-03-28 ZA ZA200202520A patent/ZA200202520B/xx unknown
- 2002-03-31 IL IL148942A patent/IL148942A/en active IP Right Grant
-
2008
- 2008-01-18 CY CY20081100078T patent/CY1107860T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUP0202755A2 (hu) | C-peptid inzulin és inzulinanalógok jobb előállítására | |
| AU593274B2 (en) | Insulin analogues and process for their preparation | |
| JP5695909B2 (ja) | 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体 | |
| IE65504B1 (en) | Insulin analogues | |
| DE69434909T3 (de) | Herstellung von humaninsulin | |
| NO301483B1 (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av humaninsulinanaloger | |
| NO300640B1 (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av nye insulinforbindelser | |
| US6001604A (en) | Refolding of proinsulins without addition of reducing agents | |
| CA2330183C (en) | Novel insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| WO1992011286A1 (en) | Oxidation resistant variants of parathyroid hormone | |
| HUP0202793A2 (hu) | A humán inzulin monomer analógjai | |
| RU2729381C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF644, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН | |
| AU8028387A (en) | Insulin precursors |