HU228313B1 - C-peptide for the improved production of insulin and insulin analogues - Google Patents
C-peptide for the improved production of insulin and insulin analogues Download PDFInfo
- Publication number
- HU228313B1 HU228313B1 HU0202755A HUP0202755A HU228313B1 HU 228313 B1 HU228313 B1 HU 228313B1 HU 0202755 A HU0202755 A HU 0202755A HU P0202755 A HUP0202755 A HU P0202755A HU 228313 B1 HU228313 B1 HU 228313B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- insulin
- precursor
- vector
- dna
- chain
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 55
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims description 22
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims description 21
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims description 21
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 title claims description 9
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 title claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 23
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims description 22
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 8
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 7
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 6
- 241000510930 Brachyspira pilosicoli Species 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000687727 Homo sapiens Transcriptional regulator PINT87aa Proteins 0.000 description 4
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102100024797 Transcriptional regulator PINT87aa Human genes 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N Arg-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N Asp-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- OOZJHTXCLJUODH-QXEWZRGKSA-N Pro-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 OOZJHTXCLJUODH-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- YTAHJIFKAKIKAV-XNMGPUDCSA-N [(1R)-3-morpholin-4-yl-1-phenylpropyl] N-[(3S)-2-oxo-5-phenyl-1,3-dihydro-1,4-benzodiazepin-3-yl]carbamate Chemical compound O=C1[C@H](N=C(C2=C(N1)C=CC=C2)C1=CC=CC=C1)NC(O[C@H](CCN1CCOCC1)C1=CC=CC=C1)=O YTAHJIFKAKIKAV-XNMGPUDCSA-N 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108010073093 leucyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 2
- XWTNPSHCJMZAHQ-QMMMGPOBSA-N 2-[[2-[[2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XWTNPSHCJMZAHQ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCC(=O)O)=CNC2=C1 GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100098985 Caenorhabditis elegans cct-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010011469 Crying Diseases 0.000 description 1
- GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 101150010725 Dro gene Proteins 0.000 description 1
- 241000617670 Escherichia coli K2 Species 0.000 description 1
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- TWYSSILQABLLME-HJGDQZAQSA-N Glu-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYSSILQABLLME-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GYAUWXXORNTCHU-QWRGUYRKSA-N Gly-Cys-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 GYAUWXXORNTCHU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- CNHSMSFYVARZLI-YJRXYDGGSA-N His-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CNHSMSFYVARZLI-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N Leu-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N Leu-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LOGFVTREOLYCPF-RHYQMDGZSA-N Lys-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N Thr-Lys-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N Val-Cys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000015114 espresso Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 proline insulin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 1
- RNZCSKGULNFAMC-UHFFFAOYSA-L zinc;hydrogen sulfate;hydroxide Chemical compound O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RNZCSKGULNFAMC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Description
C-pepfcid inzulin és inzulínanalőgok jobb előállítására
A találmány tárgyát képezi a proinzulin elöanyaga, illetve C-peptidjének egy szintetikus származéka, az előanyagot kódoló DNS, azt vektor, előállításukra szolgáló eljárás, alkalmazásaik.
A származékot tartalmazó proinzulinnak többféle szempontból jobbak a tulajdonságai, mint a majomból származó proínzulínnak, elsősorban az inzuiinszármazék géntechnológiai előállítása során a végső hozam kedvezőbb.
A diabéteszes megbetegedések száma világszerte folyamatosára emelkedik. Ezzel arányosan nő az igény inzulinra vagy inzulinssármasékokra, Megoldandó feladat a jelenlegi eljárásoknak a hatóanyag hozamára történő optimalizálása,. Az EP-B1 0 489' 780 számú európai közzétételi, iratban inzulin vagy származékai előállítására szolgáló eljárásról adnak kitanítást. Az ebben ismertetett vektorok humán inzulin előállítására szolgálnak a plNTáOd-plazmiddal vagy kiindulási plazmádként az EF-A 0 821 0Q6 számú európai közzétételi iratban ismertetett pINT3ö2d~piazmid készítéséhez, amely egy His(B31)His(S32)Sly(A21)“inzuiinszármazék előállítására
Aktaszámunk: 96435-9449/SG
X ** szolgái., vagy az EF-A 0 865 961 számú európai közzétételi iratban ismertetett pIHT329ő~ vektor készítéséhez, amely a Lys(33)Gin <829)“inzulinszármazék előállítására szolgál.
Felismertük, hogy különösen előnyös proínzuiínszármazék az I általános képletű vegyület,
Fus-B }1~- 30;.....RDVB-vy-A (1-21) (I;
ahöl
Fus jelentése adott esetben egy tetszés szerinti szekvencia fúziós része,
Bíl~31d jelentése humán inzulin B-lánca, ¥ jelentése a C~terminálison bázison aminosavval végződő aminosavláne,
n. 2 és 50 között változhat, és az Y~aminosavláne hosszát jelenti, és
A<1-21) jelentése humán inzulin A-lánca, és az A- és/'vagy a 8-Iánook eminosavak kicserélésével, deléciőjával és/vagy addíciőjával módosíthatók. Meglepő módon az inzulin A- 'illetőleg 3-Iáncának összeállítása után azoknak azonos és egymástól eltérő, előnyös tulajdonságai figyelhetők meg.
Ha a humán B-láncot a humán A-lánccal az előnyős C~ pepiiddel kötjük össze, olyan proinzuiin keletkezik, amelynek expresszíős hozama a vad típusú proinzulinénoz hasonló, és amelynek inzulinná történő enzimes feldolgozása azonban könnyebben irányítható, oly módon, hogy melléktermékként nem keletkezik argininnel meghosszabbodott B-Iánc, amelyet a gyógyszerré történő előállításkor el keli választani, amely során hozamveszteség lép fel.
*·«
Ha a C-terminálísón két hisztidinnel meghosszabbított B-láncot az Ά21-helyzetben glícint tartalmazd humán inzulin .A-láncával a találmány szerinti C-peptiddei kötjük össze, akkor körülbelül 2oi-kal magasabb ezpressziös hozamot tapasztalunk a pINTRöc-plazmiddal elérhető hozammal összehasonlítva, és csaknem ötször magasabb hozamot, mint amely a plNTdOzd-plazmiddal nyerhető. Ezen kívül az enzimes feldolgozás ugyanúgy könnyebben irányítható, mint ezt az előzőekben í sjae r tetettük,
Ha egy rys{B3tGlu(32A)-módosított B-láncot humán inzulin A-láncával a módosított C-peptiden keresztül kötünk össze, akkor a proínzulin-származék jobb feitekeredésí tulajdonságait figyelhetjük meg a pibT32Sd által kódolt proinznllnnal összehasonlítva. A nyers, fúziós fehérje hozama jobb, és ugyanolyan szintet ér el, mint amely plNTáOdnél figyelhető meg, Ezen kívül az enzimes feldolgozás is egyszerűbb.
Egy előnyös megvalósításd möd szerint az új C-peptíd aminosavszekvenoíája a következő:
CGCGATGTTCCTCAGGCGGAGGTGGGCGGGGGCCCTGGCGCAGGCAGCCTGCAGCCCTTG
R D V B Q V S L G G G B G A G S L Q P L GCGCTGGAGGGGTCCGTGCAGAAGGGC (1, azonos!tészámú szekvencia)
A L S G S L Q K R (2, azonosítászárná szekvencia) « >
X *
Bemutatjuk a fent megadott C-peptldet kódoló, .ehet séges DilS-szekvencia egyikét is.
A találmány tárgyát képezi humán inzulin ..nzul inanalög- 1 általános képletű eiőanyaga,
Fus~B(!~3O} -RDVP~Yn~A<I~21} (I) ahol
Fos jelentése adott esetben egy tetszés ssei szekvencia .fúziós .része,
3(1-30} jelentése humán inzulin B~lánca, ¥ jelentése a C-terminálison bázlsos amínosavval sok, zagy végződő aminosavlánc, n 2 és 50 között változhat, és az Y-aminosavlánc hosszát, jelenti, és
A(1-21) jelentése humán inzulin A-lánca, és az A- és/vagy a B~láncok amínosavak kicserélésével, deiéciójavai és/vagy addiciojávai módosíthatók, és ahol előnyösen humán vagy majom, eredetű inzulin Cgeptidjenek 5-35 aminosavát jelenti, előnyösebben, ahol ¥„ humán inzulin 11-35 aminosavát jelenti.
A találmány egy további tárgyát képezik az előzőekben ismertetett elóanyagok, ahol a humán inzulin B-láncában Lys(33)Glu(B29) módosítások találhatók, vagy ahol a humán inzulin B- és A-lánca His(B3i)His(B32)Gly (A21} módosításokat tartalmaz.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben Ismertetett előanvagot kódoló DNS.
A találmány tárgyát képes! továbbá az előzőekben ismertetett előanyagot kódoló DNS-t tartalmazó vektor, amely előnyösen ű, coli-ban történő expresszíöra alkalmas expressziős vektor.
A. találmány egy további tárgyát képezi az előzőekben ismertetett vektort tartalmazó £, coli sejt,
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett elöanyag előállítására szolgáló eljárás, amely során aj az előzőekben ismertetett DdS-t az előzőekben ismertetett vektorba viszünk, bj az (aj lépés szerinti vektort A. coli sejtbe juttatjuk, ej az {aj lépés szerinti vektort tartalmazó, (b; lépés szerinti A. coli sejtet expresszióra alkalmazzuk, és
d) az előanyagot a tápközegbol izoláljuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás az előzőekben ismertetett DNS előállítására, amely során aj humán vagy majom eredetű inzulin cDNS-ébőI kiindulva PCB. vagy más, molekuláris biológiai technológiák segítségével előállítjuk ezt a BűS-t, és bj izoláljuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás humán inzulin vagy inzuiinanaiőg előállítására, amely során
a) az előzőekben ismertetett előanyagot az előzőekben ismertetett eljárás segítségével előállítjuk, bj az {aj lépés szerinti elöanyag feitekeredését megfelelő körülmények között oly módon érjük ai, hogy a dlszuifidhídak a humán inzulinhoz hasonló módon ki tudjanak épülni, és az RDVP-Yfnrészt és adott esetben a Fus-sal jelölt fúziós részt enzimesen eltávolítjuk, és ej a humán inzulint vagy ín2uiínanalőgot tisztítjuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett előanyag alkalmazása inzulin vagy inzulinanalőg előállítására, előnyösen az inzulin vagy inzulinanalőg előállítása az előzőekben ismertetett eljárás szerint történik.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett DNS alkalmazása az előzőekben Ismertetett előanyag előállítására.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett vektor alkalmazása az előzőekben ismertetett elő an. vág előállítására.
A találmány tárgyát képezi továbbá az előzőekben ismertetett A. oolí sejt alkalmazása az előzőekben ismertetett előanyag előállítására.
A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy korlátoznák a találmány oltalmi körét.
1, példa
Prolnzulin-származékok expressziója
Az expressziőt az EP-B1 0 489 780 számé európai közzétételi iratban leírtak szerint végezzük. Nagy térfogatban történő fermentáció esetén módosítások hajthatók végre. Az ezpresszíós arányok összehasonlításánál azonban mindig ugyanazokat a körülményeket tartottuk be.
«.».*·♦
Nagyobb léptékű munkáknál a következő, általános férmentáciös receptet alkaimaztük, amelyet példaképpen 7,5 literes térfogatra Ismertetünk;
Fermentációs térfogat; 7,5 1
Sterilizációs körülmények; 121C, 20 perc, pH 3,5, sterilizálás után ammóniával. pH 7,0-re állítjuk.
Fermentációs hőmérséklet: 37°C pH-szabályozás: pH 7,0, 25R-os ammőniaoidattal beállítva
Kevertetesd fordulatszám; 1500 RPM
Levegőztetés: 15 Nl/.ain (2 vvm} időtartam: kb. 24 óra
Rétápiáiás: 05%-os glükózt adagolunk
200 κσαοΐΐ1^1 OTR-értéktöi állandó, 12 gl'^h'·' arányban.
Eiőtenyészet: inokuluraampul iával rázatott tenyészetet oltunk és 3-4 őrén keresztül. 3?°C~oxz, 250 RPM kevertetéssei inkubáljuk OD A540 ~ 1 értékig.
Oltás: A fermentort körülbelül ml elötenyészettel oltjuk.
Indukció: A<,:r > 40 értéknél mg/1 (300 mg/fermentor) indol-propíonsavat oldunk körülbelül 10 ml vizes nátrium-karbonát oldatban (0,17 g nátrium-karbonáttal) .
hl - normál liter, vvm - térfogat/térfogat/perc és oxigén átadási sebesség
-» *
- δ Fe rmentáci ős táp közegek;
| Recept száma GA1 100/95-000: | Tömeg g/i |
| glüköz-l-hidrát, D(+> min.80% | 44 |
| citromsav-1-hidrát | 3, 48 |
| armxőniüm-szulfát, min, 95% | 6, 0 |
| foszforsav, orto, 85% | 2, 99 |
| d 1 ká 1 1 w h 1 dr og én foszfát | 1,18 |
| nát r inm -szulfát | 3,0 |
| magnézium-szülfát-7-hidrát, min 98% | 2,0 |
| vas (111)-szulfát x H20 | 0,5 |
| nyomé leíróidat: RL 1/85-000 | 1,0 mi |
| tiamin-HCl | 0,005 |
| Desmophon 3600 | 0, 5 |
| NyomaIemoIdát | |
| RL 1/85-000 | Tömeg g/1 |
| réz (XT) -szülfát-5-hidrót | 1,6 |
| kálium-jodid | 4,0 |
| ammő η 1 ua- író 1 i b d át -4 - hidrát | 8, 0 |
| mangán f1Ip-szüliát-l-hrdrát | 12,3 |
| cink~szuifát~7~hidrát | 16 |
| bórsav | 20 |
| Tápközeg a rázatott lombikban | |
| Tömeg g/i | |
| é1e s z t Ö k1vonat | 6,0 |
| glükóz | 1,0 |
| nátrium-kloríd | 3,5 |
| kálium-dihidrogénfoszíát | 1,32 |
| dl ká 1 i üss- h 1 dro gén fos z f á t | 3, 68 |
*** ¢:
πζuΠη előállítása
Az inzulin előállítása Ismert eljárások szerint történik, mint például, amelyeket au EP-Bl 0 4 89 PSD vagy az EP-A 0 385 961 számú európai közzétételi iratokban ismertetnek vagy tárgyalnak. A fúziós fehérje feltekeredése és feldolgozása („processzálődás) előnyösen az SP-31 0 668 282 számú európai közzétételi iratban ismertetett eljárás (Id. 2. példa) szerint történik. Az EP 0 288 809 számú európai közzétételi irat szerinti feitekeredés után az üledék a további feldolgozás előtt kiszűrhető.
A_ s rá mázé kol t C-láncú, humán prolnzulln B-RDVP Cl i..
;«-A vegyüietet kódoló plbTűSEd-plazmfá készítése
A plazmád előállításához az EP-Bl 0 489 780 számú európai közzétételi iratban ismertetett Tir- és Tnsullláncíndltokát alkalmaztuk. Ezenkívül két új láncindítószekvenciát is szintetizáltunk.
A PlbT358fIXI-íánoindítö szekvenciája a kővetkező:
S'-CCC AAO Λ00 000 SAV SÍT CCT OAG CTG GAÖ CTG GOO OtG GOO CCT -3' (3. a.ss.;
828 B2$ B30 Arg Asg Val Pro 011 C12 012 014 Cl5 016 017 Cl8 <4. s.sz-í
A PrbT3S8reviI-láiicínáítő szekvenciája a következő:
5! -GAGGTCCACCTGAGGAACATCGCGGGTCTTGGGTGTGTAG-A (5. a.sz.) ♦ *
- 10 Mintaként a piNT90d~plazmi.á DNS-ével és a Tír/BlNT33BrevII~ és Insuil/FINTSőSflli-láncinditőpárokkai 3.Σ EP-B1 0 489 ?8Ö száma európai közzétételi iratnak megfelelően FCR-reakcíot végzünk. Mindkét reakció termékeinek agy kis részét egyesítjük, és a Tir/Insull-láncinőitöpárral egy harmadik PCP-t végezünk. Ennek a reakciónak a termékét őall/Acol-enzimekkel emésztjük, és ennek a restrikciós emésztésnek a termékét tisztítás után az EP-BI 0 489 780 számú európai közzétételi iratban ismertetett pX.NTS.ldplazmid ifcoT/Sáli-gyei felnyitott vektor-DNS-ébe építjük. Az így készített plazmídot pIKT3S8d-nek neveztük. A szerkezetét DKS-szekvenciavizsgáiattal igazoljuk. Kompetens E. coll sejteket transzformálunk a plazmíd-DNü-sei. A proinzulin baktériumban történő expressziöja. az 1. példában ismertetettek szerint történik. A 2. példa szerinti fedtekeredés után következik a proinzulin enzimes átalakítása inzulinná, majd további tisztítás az EP-B-1 0 347 781 számú európai közzétételi irat szerint. A pINTSöd-bő'l levezetett eljárással összehasonlítva az ioncserélő kromatográfiás lépésben egy szélső frakció is nyerhető, mivel ez nem szenynyezet t Arg (B3I) - inzulinnal.
A pINT3 52ö-piazm:id elkészíts se L y s (B 3) G1 u (.329) - RDVFCϊj..?s~proinzulin előállításához
A plazmád elkészítéséhez a piNT328d~ és pXNT358d~ plazmidok DNS-ét használjuk mintaként, és a Tir- és az Insull-láncinditókat alkalmazzuk. Ezenkívül két új iáneín* '·♦♦ * * * >
öltöt, a Ssiforward- és a 329rev~lánclnditőkat is megszin— tetizaituk.
A Saiforward-Iáncindltó szekvenciája a következő:
5' -TACACACCCGAGACCCGCGATGTTCCTCAGG-3r (6. azonos!tőszámú szekvencia)
A vastagon szedett szekvenciarészietek azt a szekvenciát jelzik, amely a plNT358d-plazmiddaI hlforiőizál, míg a többi rész a plbT329á~pl.azmid B-láncot kódoló részletének szekvenciájával homológ.
A 329rev-Iáncindító szekvenciája a következő:
5z~CCTGAGGAACATCGCGGGTCTCGGGTG2GTAG“3f (7. azonosítószámú szekvencia)
A. vastagon szedett részietek a B-iánc végét alkotó és a plNT329d-plazmídban lévő arginin triplettjét leíró antiszensz szállal homológ szakaszt jelölik, A többi szekvencia a pINT358d-plszmiddai hífcridizál. Két hosszabbítást végezünk PGR-rel. Ehhez a p!NT329d~plazmid DNS-e szolgái mintaként a Xir/329rev~láncánáltopánokkal, és a plbT358d DNS-e szolgái mintaként a. Sa.lforward/Insnll-iáncinditőpár sz áma r a.
Mindkét reakció olyan fragmenseket eredményez, amelyek a Salforward-láneinditő szekvenciájával átfednek. Ily módon a két fragmens egy harmadik ?CR-lépessel egyesíthető, és Tir- és Insull-láncínditökkal egyetlen, az inzulin··· * * *♦* »* V «.« analógot kódoló DNS-szekvenciává illeszthetők. Ezt a reakbioterméket Hcol/Sa.21 restrikciós enzimekkel hasítjuk, majd végül a p!bT91d~ből származó,· Sáil/McoI-gyel felnyitott vektortragmensbe építjük, E. coli KI2 MM294 törzsének kompetens sejtjeit a megfelelő ligációskeverékkei transzformáljuk. A transzformánsakbői plazmiö-DES-t izolálunk és jellemzőnk. A megfelelő plazmid a pINT362d jelölést 'kapta.
Az expresszié után. a. fúziós fehérjére a pldTSúd-hez hasonló nyershozamot tapasztaltunk. A megfigyelt feltekeredésí hozam a pld?323d~hez képest azonban körülbelül éOk~kal magasabb
A pINT362ö által kódolt fúziós fehérje szerkezete a következő:
MATTSTGRSAR FV'KQKLCGSKLVEALYLYÜGERGFFYTPE? EDVPQVELGGGPG
Fúziós rész S-Iánc C-lánc
AGSLQPLALEGSLQKR GlVEQCCTSICSlYQÓEdYCN (8. a.SZ.)
C~lánc (folyt.} A-lánc
A pIFT349dgplazmÍd készítése Hls (B.31) Hís(B32i G1y{A21)-RDYR-C = i_3<-proInzulin előáll!tásához
Először is a pIRTlőöd-plazmidot állítjuk elő, amelynek DNS~e a Gly{Ά21)-inzulin inzu.li.nanalogot kódolja.
Ehhez a PCR-hez történő alkalmazáshoz láncindítóként két oligonukleotid szükséges.
A ?ir-olígonukleotídot szensz, iáödrev-oligönukieotídot antiszensz lánclndltöként alkalmazzuk.
' ·> ...
léödrev 3'-AAAGGTCGACTATTAGCCGCAGTA-3? (9, a.szj
Stop Stop Gly Cys Tyr
Ml A21 AI9
Mindkét láncindítót hagyományos PCH-ben alkalmazzuk plATPOd-plazmid DdS-évei. A reakcióterméket az EP-Bl 0 439 780 számú európai közzétételi irat szerint NcöI és dali restrikciós enzimekkel emésztjük, és végül a megfelelően felnyitott plKTS9d-vektorba építjük, így kapjuk a pIATláOdpiazmidot, amelyet El coli Ki 2 MM294 törzsébe történő transzformáció után visszaizolálunk, és restrikciós és szekvenciávázsyálattal jellemzünk„
A piE'Tláöd-plazmid DhS-éből kiindulva két PCEreakciót végzünk, Az első reakcióhoz a Tír-láncinditöt alkalmazzuk és fordított Iáncindltöként a következő szekvenciáié. PlNT34Sa-t::
Val Gin Pro Val Asp Arc His His Thr Lys Pro Thr Tyr (10. a.sz.
5' -CACGTGAGGAACATCGCGGTGGTGGGTCTTGGGTGTGTAG'··3' (11, a.82ó
G12 Cll* * * * * B3Ö B29 B23 B27 B26
A csillaggal jelölt szekvenciák az újonnan bevált aminosavak kodonja.it mutatják.
A második ?CR-reakciót az lusull- és PINT349bláncínőitokkal hajtjuk végre.
A PINT349fe-iáncinditő szekvenciája a következő:
Pro Lys Tör His His Arg Asp Vál Pro Gin. Val Glu Len (.12. a.sz.j 5f ~.ACCCAAGACCCACCACCGGGATGT?CCTCAGGTGGAGCTG~3f (13. a. ss.}
B28 829 830* * * * * Cll C12 C13 C14
A DNS~szekvencia 34. helyzetétől az 1, helyzetéig a láncindító komplementer a PINT349a~val. A két PCR~reákelőtermékei egy harmadik PCR~reakciőban a Tír- és az insuliláncindítokkal a kívánt proínzaiin-származékot kódoló DNSfragmenssé állíthatók össze. Ennek a reakciónak a termékét az előzőekben ismertetettek szerint Nöol- és Sálienzimekkel emésztjük, és az ezekkel az enzimekkel felnyitott pINTSld-vektorfragmensbe építjük, és coli K12 törzsébe transzformáljuk. A transzíormánsokböl a pl a zml dók jellemzése után kapott# megfelelő plazmidkonstrukciőkat p-INT349d~nek jelöltük.
A fúziós fehérje vizsgálatával a fúziós fehérje hozamának nyilvánvaló emelkedését tapasztaljuk. A hozam meglepő módon körülbelül 2.0%-kel magasabb, mint amely p-INT90d~ plazmáddal elérhető# és körülbelül, ötször magasabb, mint a pINT3éd”piazm.iddal kapható hozam, A feltekeredésl arány a pINTSOd által kódolt, majom eredetű proinzuiinnái elérhető aránnyal összehasonlítható.
SZEKVENCIÁIISTA (2I0;
{2 11 ) í ' ' · i
DNS mesterséges szemvencra i22ü
A mesterséges szekvencia leírása: C-pept iávariánst kódoló DNS (4 00) 1 cgcgatgttc ctcaggtgga getgggcggg ggccctggcg caggcagcct gcagcccttg 60 gcgctgga-gg ggtcccfgca gaagcgc 87 ?R7 mesterséges szekvencia {220} (223) A mesterséges szekvencia leírása; C~Pep~inzulin variáns
Arg Asp Val Pro Gin Vai Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Alá Gly Ser
3 lo io
Leu Gin Pro Lea Alá Leu Glu Gly Ser len Gin Lys Arg ♦ ♦ <212;
DNS mos terséc&s székvénei<
szza; a mesterséges láncindító i400) 3 cccaagaccc gcgatgttcc tcaggtggag ctqggcgggg gccct skvencia leírása: PINT 3S8f.I.II.
(212; PRT (213; mesterséges- szekvencia (220) (223.) A mesterséges szekvencia leírása: P1N? 358 bői. származó fehérjerész szekvenciája (4DÖ; 4
Arg Asp Val Pro o;
(211) d ί z X2 !
DNS mesterséges szeKves?
(223)
A mesterséges szekvencia leírási láncind!tó
ONT 358révI esgctceace fcgaggaacat cgcgggtctt gggtgtgtag (210)
DNS mesterséges szekvencia (223) A mesterséges szekvencia leírása: Sál „előre sinciro
Alt :g agacccgcga tgttcctcag g ,· s: \ (212) (213)
DNS mesterséges szekvencia
A mesterséges szekvencia leírása:
indító
329rev lánc xctgaggaae atcgcgggtc tegggtgtgt a<
* ·»
- 18 ί 'η η
PRT mesterséges szekvencia a mesterséges szerverei;
ρ r e ka r z o r ~ v a r i án s .sírása .(4 0 0 ) 8
Mefc Alá ihr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Alá Arg Phe Vál Lys Gin Kis s in ; c
Leu Cys Gly Ser Kis Len Val Glu Alá Lea Tyr Len Val Cys Gly Gin
25 30
Arg Gly Phe Phe Tyr Th ?ro Glu Thr Arg Asp Val Pro Gin Val Glu
0 4 5
Leu Gly Gly Gly Pro -Gly Ai.«
Gi v Ser
Pro Leu Alz
Gly Ser Leu Gin Lys Arg Gly He Vei Gin Gin
6S 70 75
Cys Ser Leu Thr Gin Leu Gin Asn Tyr Cys Asn
,.ys r.ys ov« τη»· (212) (213) mestezseges azexvénere (22 3) A mesterséges szekvencia leírása:
di t ő iOdrev ián cm•400) 9 aaaggtcgac tattageogc agta cő -¾
2Í0) í 212) PR’X (213) jrestercégec szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: PINT 349a~bő) származó fehérjerész szekvenciája (400) 10
Va'i Gin Pro Val Asp Arg His Kis Thr Lys Pro Thr Tyr
5 10
212) ? -j
Έγ?· 7 •í* mesfersénes szekvencia (223) / 4 Λ «Λ \ k őt V V :
A. mesterséges szekvencia leírása: 34 9
II láncindító caoctgagga. acatcgcggt ggtgggtctt gggtgtgtag *·χ«*
12.
(213; mesterséges szekvencia 'Ί <·< .(223) A mesterséges szekvencia leírása: PINT 342b-bő( származó fehérjerész szekvenciája (iöO) 12
Pro Lys Tar His His Arg Asp Val Pro Gin Val Gin Len .31 (210/ (£11) (212;
(213)
DNS mesterseces szekven<
I ·> ·-> ’7> Λ
A mesterséges szekvencia leírása: PINT 349b Iái
Indító acccsagaco caccaccgcg atgttcctca ggtggagctg
Claims (17)
- SZABADALMI IGÉFYPOhlOK1. Humán inzulin vagy Inzulinana lógok előanyaga, amely (A általános képletűFus~B( 1.-30) -ADVP-Y.·-A (1 ~2 A (1) ahol a képletbenFus adott esetben van jelen és jelentése egy tetszés szerinti szekvencia fúziós része,8(1-30). jelentése humán inzulin B-láncaY jelentése a C-terminálison bázison axninosavval végződő aminosavlánc, n 2 és 50 között változhat, és az Y-aminosavláno hosszat jelenti, ésA(1-2A jelentése humán inzulin Ά-lánca, és az A- és/vagy a B-láncok aminosavak kicserélésével, deléciójával és/vagy addíoiőjával módosíthatok.
- 2. Az 1. igénypont szerinti előanyag, ahol a képletben ϊ humán vagy majom eredetű inzulin C-peptIdjének S-3S aminosavát jeient1.
- 3. Az 1. igénypont szerinti előanyag, ahol a képletben Yn humán inzulin. 11-35 ami.nosavát jelenti,
- 4. Az. 1-3. igénypontok bármelyike szerinti előanyag, amelyben a humán inzulin B-lánca. Lys(33)Gin(S2A módosításokat tartalmaz.
- 5. Az 1-3. igénypontok, bármelyike szerinti előanyag, amelyben a humán inzulin B- és A-lánoa His(B31)His(832)oly(A21) módosításokat tartalmaz.*φ φφφ φ*
- 6. Αζ 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eiőanyagot .ΖΌ0Ο .:. 0 dSto ν
- 7. A 6. igénypont szerinti DNS-fc tartalmazó vektor.
- 8. A 7. igénypont szerinti vektor, amely coliban történő expressziére alkalmas expressziős vektor.
- 9. A 8. igénypont szerinti vektort tartalmazó áh coli λ 'ή r
- 10. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti előanyag előállítására szolgáié eljárás, aszal jellemezve, hogy aj a 6. igénypont szerinti DNS-t a 7. igénypont szerinti. vektorba visszük be,b) az (a) lépés szerinti vaktort £, coli sejtbe juttatjuk,c) az (a) lépés szerinti vektort tartalmazó, (b) lépés szerinti A. coli sejtet expresszióra alkalmazzuk, és <d) az slőanyagot a tenyészet táp közegéből izoláljuk.
- 11. A 6. igénypont szerinti DNS előállítására szolgáló eljárás, azzal jellemezbe, hogy aj humán vagy majom eredetű inzulin cDNS-ébol kiindulva PCH vagy más, molekuláris biológiai technológia segítségével létrehozzuk a 6. igénypont szerinti DNS-t, és b; izoláljuk.
- 12. Humán inzulin vagy inzulinanalóg' előállítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogya) a 10. igénypont szerinti eljárással előállítunk egy eiőanyagot, *«b) az (.a) lépés szerinti eiőanyag feltekeredését alkalmas körülmények között úgy érjük el, hogy a díszulfidhidák a humán inzulinhoz hasonlóan ki tudnak alakulni, és az ADVl-iy-részt ős adott esetben a Fus-sal jelölt fúziós részt enzimesen eltávolítjuk, ésc) a humán inzulint vagy ínzulinanaiögot tisztítjuk.
- 13. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eiőanyag alkalmazása inzulin vagy inzulinanalég előállítására.
- 14. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az Inzulin vagy inzulinanalóg előállítása a 12. igénypont szerinti eljárással történik.
- 15. A. 6. igénypont szerinti DNS alkalmazása az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eiőanyag előállítására.
- 16. A 3. igénypont szerinti vektor alkalmazása az Ιο. igénypontok bármelyike szerinti eiőanyag előállítására.
- 17. A 9. igénypont szerinti A. coli sejt alkalmazása az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eiőanyag előállítására .It. A 15., 16. vagy 17. igénypontok szerinti alkalmazás, ahol az eiőanyag előállítása a 10. igénypont szerinti eljárással történik.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19947456A DE19947456A1 (de) | 1999-10-02 | 1999-10-02 | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| PCT/EP2000/009017 WO2001025278A1 (de) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | C-peptid zur verbesserten herstellung von insulin und insulinanaloga |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0202755A2 HUP0202755A2 (hu) | 2002-12-28 |
| HUP0202755A3 HUP0202755A3 (en) | 2005-01-28 |
| HU228313B1 true HU228313B1 (en) | 2013-03-28 |
Family
ID=7924253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0202755A HU228313B1 (en) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | C-peptide for the improved production of insulin and insulin analogues |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6534288B1 (hu) |
| EP (1) | EP1222207B1 (hu) |
| JP (1) | JP4681784B2 (hu) |
| KR (1) | KR100823463B1 (hu) |
| CN (1) | CN1193042C (hu) |
| AT (1) | ATE380196T1 (hu) |
| AU (1) | AU778369B2 (hu) |
| BR (2) | BRPI0014464B8 (hu) |
| CA (1) | CA2385857C (hu) |
| CY (1) | CY1107860T1 (hu) |
| DE (2) | DE19947456A1 (hu) |
| DK (1) | DK1222207T3 (hu) |
| ES (1) | ES2295054T3 (hu) |
| HK (1) | HK1049016B (hu) |
| HU (1) | HU228313B1 (hu) |
| IL (2) | IL148942A0 (hu) |
| MX (1) | MXPA02003103A (hu) |
| NO (1) | NO329975B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ518066A (hu) |
| PL (1) | PL203195B1 (hu) |
| PT (1) | PT1222207E (hu) |
| SI (1) | SI1222207T1 (hu) |
| TW (1) | TWI265168B (hu) |
| WO (1) | WO2001025278A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200202520B (hu) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7176278B2 (en) | 2001-08-30 | 2007-02-13 | Biorexis Technology, Inc. | Modified transferrin fusion proteins |
| US20050250676A1 (en) * | 2001-11-19 | 2005-11-10 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Method of activating insulin receptor substrate-2 to stimulate insulin production |
| US20040038864A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-02-26 | Per Balschmidt | Use of dimethyl sulfone as isotonicity agent |
| DE10235168A1 (de) * | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| EP1692168B1 (en) * | 2003-12-03 | 2011-07-20 | Novo Nordisk A/S | Single-chain insulin |
| CN1663960B (zh) * | 2004-03-01 | 2012-07-04 | 重庆富进生物医药有限公司 | 高效表达重组人胰岛素原及其类似物的新型c肽 |
| WO2007121318A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Emisphere Technologies, Inc. | Formulations for delivering insulin |
| CA2711752A1 (en) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile |
| DE102008003568A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008025007A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008003566A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008025008A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| PL2229407T3 (pl) * | 2008-01-09 | 2017-06-30 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Nowe pochodne insuliny o ekstremalnie spowolnionym profilu czasu działania |
| PT3228320T (pt) | 2008-10-17 | 2020-03-26 | Sanofi Aventis Deutschland | Combinação de uma insulina e de um agonista do glp-1 |
| JP5973918B2 (ja) | 2009-11-13 | 2016-08-23 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | Ｇｌｐ−１アゴニスト及びメチオニンを含む薬学的組成物 |
| TR201809460T4 (tr) | 2009-11-13 | 2018-07-23 | Sanofi Aventis Deutschland | Bir GLP- 1-agonisti, bir insülin ve metiyonin içeren farmasötik bileşim. |
| JP6199186B2 (ja) | 2010-08-30 | 2017-09-20 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | ２型糖尿病の治療用の医薬の製造のためのａｖｅ００１０の使用 |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| AR087693A1 (es) | 2011-08-29 | 2014-04-09 | Sanofi Aventis Deutschland | Combinacion farmaceutica para uso en el control glucemico en pacientes con diabetes de tipo 2 |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| TWI780236B (zh) | 2013-02-04 | 2022-10-11 | 法商賽諾菲公司 | 胰島素類似物及/或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物 |
| MX2016008979A (es) | 2014-01-09 | 2016-10-04 | Sanofi Sa | Formulaciones farmaceuticas estabilizadas de analogos de insulina y/o derivados de insulina. |
| BR112016015851A2 (pt) | 2014-01-09 | 2017-08-08 | Sanofi Sa | Formulações farmacêuticas estabilizadas de insulina aspart |
| CN105899191B (zh) | 2014-01-09 | 2020-06-16 | 赛诺菲 | 胰岛素类似物和/或胰岛素衍生物的稳定化不含甘油的药物制剂 |
| CA2970200A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin glargine/lixisenatide fixed ratio formulation |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PH16156A (en) * | 1980-03-27 | 1983-07-18 | Lilly Co Eli | Process for producing an insulin precursor |
| US4430266A (en) * | 1980-11-28 | 1984-02-07 | Eli Lilly And Company | Process for producing an insulin precursor |
| HRP940432B1 (en) * | 1994-08-05 | 2003-10-31 | Pliva Pharm & Chem Works | Dna sequences encoding biosynthetic insulin precursors and process for preparation of insulin |
| PT821006E (pt) * | 1996-07-26 | 2004-09-30 | Aventis Pharma Gmbh | Derivados de insulina com ligacao a zinco aumentada |
| DE19726167B4 (de) * | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
-
1999
- 1999-10-02 DE DE19947456A patent/DE19947456A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-09-15 PT PT00960664T patent/PT1222207E/pt unknown
- 2000-09-15 BR BRPI0014464A patent/BRPI0014464B8/pt unknown
- 2000-09-15 AT AT00960664T patent/ATE380196T1/de active
- 2000-09-15 DK DK00960664T patent/DK1222207T3/da active
- 2000-09-15 ES ES00960664T patent/ES2295054T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 IL IL14894200A patent/IL148942A0/xx unknown
- 2000-09-15 EP EP00960664A patent/EP1222207B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 NZ NZ518066A patent/NZ518066A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 CN CNB008137137A patent/CN1193042C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 MX MXPA02003103A patent/MXPA02003103A/es active IP Right Grant
- 2000-09-15 KR KR1020027004275A patent/KR100823463B1/ko active IP Right Grant
- 2000-09-15 PL PL354078A patent/PL203195B1/pl unknown
- 2000-09-15 WO PCT/EP2000/009017 patent/WO2001025278A1/de active IP Right Grant
- 2000-09-15 HU HU0202755A patent/HU228313B1/hu unknown
- 2000-09-15 DE DE50014830T patent/DE50014830D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 JP JP2001528218A patent/JP4681784B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 CA CA2385857A patent/CA2385857C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 BR BR0014464-9A patent/BR0014464A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 AU AU72877/00A patent/AU778369B2/en not_active Expired
- 2000-09-15 SI SI200030981T patent/SI1222207T1/sl unknown
- 2000-09-29 TW TW089120149A patent/TWI265168B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-10-02 US US09/676,787 patent/US6534288B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-03-18 NO NO20021335A patent/NO329975B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-03-28 ZA ZA200202520A patent/ZA200202520B/xx unknown
- 2002-03-31 IL IL148942A patent/IL148942A/en active IP Right Grant
-
2003
- 2003-02-18 HK HK03101211.8A patent/HK1049016B/zh not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-01-18 CY CY20081100078T patent/CY1107860T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU228313B1 (en) | C-peptide for the improved production of insulin and insulin analogues | |
| FI102182B (fi) | Menetelmä ihmisen insuliinianalogien valmistamiseksi | |
| US5962267A (en) | Proinsulin derivative and process for producing human insulin | |
| FI87801B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskoinsulinprekursorer samt i foerfarandet anvaenda dna-sekvensen och plasmider | |
| EP0429586B1 (en) | Growth hormone fusion proteins | |
| KR920007439B1 (ko) | 하이브리드 인간 백혈구 인터페론 | |
| EP2201120B1 (en) | Gcsf fusion protein systems suitable for high expression of peptides | |
| HU214236B (hu) | Eljárás hirudin és hirudinvariánsok előállítására | |
| JPH029390A (ja) | ヒルジン変異体とその用途及び製造方法 | |
| AU2007272057B2 (en) | Method for producing insulin analogs having a dibasic B chain terminus | |
| WO2012115638A1 (en) | Glargine proinsulin compositions and methods of producing glargine insulin analogs therefrom | |
| JPH0690759A (ja) | 新規ペプチド | |
| JPH0816120B2 (ja) | 成長ホルモン放出因子を含むハイブリドポリペプチド | |
| RU2316590C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pE-His8-TrxL-Ar2, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК, СОДЕРЖАЩИЙ АНТИМИКРОБНЫЙ ПЕПТИД АРЕНИЦИН МОРСКОГО КОЛЬЧАТОГО ЧЕРВЯ Arenicola marina, И ШТАММ Escherichia coli BL21(DE3)/pE-His8-TrxL-Ar2 - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА, СОДЕРЖАЩЕГО АРЕНИЦИН | |
| RU2729381C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF644, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН | |
| JPH06306100A (ja) | Ｖｉｐアナログ調製用融合蛋白、ｖｉｐアナログの製法並びにそのための遺伝子組換えプラスミド及び形質転換微生物 | |
| EP0857732A1 (en) | Human pec-60-like protein and dna encoding the same | |
| AU633099B2 (en) | Growth hormone fusion proteins | |
| AU633099C (en) | Growth hormone fusion proteins | |
| JPH04295499A (ja) | 抗ウイルス性タンパク質 | |
| WO2012115641A1 (en) | Lis-pro proinsulin compositions and methods of producing lis-pro insulin analogs therefrom | |
| WO2012115637A1 (en) | Aspart proinsulin compositions and methods of producing aspart insulin analogs |