PL203195B1 - Prekursor insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, sposób wytwarzania prekursora, zastosowanie prekursora, DNA kodujący ten prekursor, sposób wytwarzania DNA, zastosowanie DNA, wektor zawierający DNA, zastosowanie wektora, komórka E.coli zawierająca ten wektor, zastosowanie komórki E.coli oraz sposób wytwarzania insuliny lub analogu insuliny - Google Patents
Prekursor insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, sposób wytwarzania prekursora, zastosowanie prekursora, DNA kodujący ten prekursor, sposób wytwarzania DNA, zastosowanie DNA, wektor zawierający DNA, zastosowanie wektora, komórka E.coli zawierająca ten wektor, zastosowanie komórki E.coli oraz sposób wytwarzania insuliny lub analogu insulinyInfo
- Publication number
- PL203195B1 PL203195B1 PL354078A PL35407800A PL203195B1 PL 203195 B1 PL203195 B1 PL 203195B1 PL 354078 A PL354078 A PL 354078A PL 35407800 A PL35407800 A PL 35407800A PL 203195 B1 PL203195 B1 PL 203195B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- insulin
- precursor
- dna
- chain
- vector
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 61
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims description 26
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims description 23
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims description 23
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 title claims description 11
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 title claims description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 30
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 22
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 7
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 6
- 101500025353 Homo sapiens Insulin A chain Proteins 0.000 claims description 6
- 101500025354 Homo sapiens Insulin B chain Proteins 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 101000687727 Homo sapiens Transcriptional regulator PINT87aa Proteins 0.000 description 6
- 102100024797 Transcriptional regulator PINT87aa Human genes 0.000 description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 6
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N Arg-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N Asp-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- ROLGIBMFNMZANA-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ROLGIBMFNMZANA-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- MMGCRPZQZWTZTA-IHRRRGAJSA-N Arg-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N MMGCRPZQZWTZTA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 2
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 2
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- OOZJHTXCLJUODH-QXEWZRGKSA-N Pro-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 OOZJHTXCLJUODH-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N Thr-Lys-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N 0.000 description 2
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCC(=O)O)=CNC2=C1 GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N Ala-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700007397 Arg(B31)- insulin Proteins 0.000 description 1
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N Arg-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100098985 Caenorhabditis elegans cct-3 gene Proteins 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N Cys-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N Gly-Ala-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC([O-])=O UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GYAUWXXORNTCHU-QWRGUYRKSA-N Gly-Cys-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 GYAUWXXORNTCHU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N Leu-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 1
- UEHYFUCOGHWASA-HJGDQZAQSA-N Pro-Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 UEHYFUCOGHWASA-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000012378 ammonium molybdate tetrahydrate Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIXLYHHVMHXSCP-UHFFFAOYSA-H azane;dihydroxy(dioxo)molybdenum;trioxomolybdenum;tetrahydrate Chemical compound N.N.N.N.N.N.O.O.O.O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O[Mo](O)(=O)=O.O[Mo](O)(=O)=O.O[Mo](O)(=O)=O FIXLYHHVMHXSCP-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 108700039926 insulin glulisine Proteins 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Opis wynalazku
Wynalazek niniejszy dotyczy prekursora insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, sposobu wytwarzania prekursora, zastosowania prekursora, DNA kodującego ten prekursor, sposobu wytwarzania DNA, zastosowania DNA, wektora zawierającego DNA, zastosowania wektora, komórki E. coli zawierającej ten wektor, zastosowania komórki E. coli oraz sposobu wytwarzania insuliny lub analogu insuliny. Proinsulina zawierająca syntetyczną pochodną C-peptydu z proinsuliny wykazuje w różny sposób właściwości lepsze od właściwości zwykłej proinsuliny małpiej, zwłaszcza lepsze są ostateczne wydajności każdorazowych pochodnych insuliny przy otrzymywaniu ich metodami inżynierii genetycznej.
Liczba zachorowań na cukrzycę wszędzie stale się powiększa. Proporcjonalnie do tego wzrasta też zapotrzebowanie na insulinę lub pochodne insuliny. Toteż, aktualne jest wciąż zadanie optymalizacji wydajności odnośnych już istniejących sposobów wytwarzania substancji aktywnej. W patencie europejskim EP-B1 0 489 780 zaproponowano sposób wytwarzania insuliny lub jej pochodnych. Opisane tam wektory służą do otrzymywania insuliny ludzkiej z udziałem plazmidu pINT90d, lub jako plazmidy wyjściowe do skonstruowania (opisanego w europejskim zgłoszeniu patentowym EP-A 0 821 006) plazmidu pINT302d służącego do wytworzenia pochodnej His(B31)His(B32)Gly(A21)-insuliny, albo do skonstruowania (opisanego w europejskim zgłoszeniu patentowym EP-A 0 885 961) wektora pINT329d, służącego do wytworzenia pochodnej Lys(B3)Glu(B29)insuliny.
Obecnie stwierdzono, że szczególnie korzystne są pochodne proinsuliny o wzorze I: B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21) (I) w którym:
B(1-30) oznacza łańcuch B insuliny ludzkiej zawierający modyfikacje Lys(B3)Glu(B29).
Yn oznacza aminokwasy 5-35 C-peptydu insuliny ludzkiej lub małpiej.
A(1-21) oznacza łańcuch A insuliny ludzkiej, a łańcuch A i/lub łańcuch B, insuliny ludzkiej zawierają modyfikację His(B31)His(B32)Gly(A21).
Modyfikowanie może polegać na wymianie aminokwasów, delecji i/lub addycji. Nieoczekiwanie stwierdzono przy tym występowanie takich samych lub różniących się korzyści wynikających ze składu łańcucha A lub B insuliny.
I tak, w przypadku, gdy łączy się ze sobą ludzki łań cuch B z ludzkim łańcuchem A poprzez korzystny C-peptyd, wtedy tworzy się proinsulina zachowująca się, jeśli chodzi o wydajność ekspresji, jak proinsulina typu dzikiego, z tym, że sterowanie jej enzymatyczną obróbką prowadzącą do otrzymania insuliny jest łatwiejsze, ponieważ nie powstają nawet śladowe szkodliwe ilości łańcucha B przedłużonego o argininę, który należy usunąć przy wytwarzaniu leku, co powoduje straty wydajności.
W przypadku, gdy łączy się łańcuch B przedłużony o dihistaminowy C-koniec z łańcuchem A insuliny ludzkiej zawierającej w pozycji A21 glicynę, z udziałem C-peptydu według wynalazku, wtedy stwierdza się wydajność ekspresji o około 20% wyższą w porównaniu z wydajnościami osiągalnymi w przypadku używania plazmidu pINT90d i prawie pięciokrotnie wyższą od wydajności obserwowanej w przypadku plazmidu pINT302. Do tego, uproszczone jest również sterowanie obróbką enzymatyczną, jak to już poprzednio opisano.
W przypadku, gdy łączy się ł a ń cuch B zmodyfikowany Lys(B3)Glu(B29) z ł a ń cuchem A insuliny ludzkiej, z zastosowaniem zmodyfikowanego C-peptydu, wtedy stwierdza się polepszenie związanych z fałdowaniem, właściwości pochodnej proinsuliny, w porównaniu z właściwościami proinsuliny kodowanej przez pINT329d. Wydajność surowego białka fuzyjnego jest wyższa i osiąga taki sam poziom, jaki obserwuje się w przypadku plazmidu pINT90d. Do tego uproszczone jest sterowanie obróbką enzymatyczną.
Szczególnie korzystną postać wykonania nowego C-peptydu można scharakteryzować następującą sekwencją aminokwasową:
CGCGATGTTCCTCAGGTGGAGCTGGGCGGGGGCCCTGGCGCAGGCAGCCTGCAGCCCTTGGCGCTGGAGGGGTCCCTGCAGAAGCGC *)
RDVP.QVELGGGPGAG3LQPLALEGSLQKR ** )
*) = SEQ ID NO.: 1.
**) = SEQ ID NO.: 2.
Również podana jest jedna z wielu możliwych sekwencji DNA, kodująca przedstawiony C-peptyd. Przedmiotem wynalazku jest prekursor insuliny lub analogu insuliny ludzkiej o wzorze I:
PL 203 195 B1
B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21) I w którym:
B(1-30) oznacza łańcuch B insuliny ludzkiej zawierający modyfikacje Lys(B3)Glu(B29),
Yn oznacza aminokwasy 5-35 C-peptydu insuliny ludzkiej lub małpiej,
A(1-21) oznacza łańcuch A insuliny ludzkiej, a łańcuch A i/lub łańcuch B insuliny ludzkiej zawiera modyfikację His(B31)His(B32)Gly(A21).
Korzystnie Yn oznacza aminokwasy 11 do 35 C-peptydu insuliny ludzkiej.
Ponadto, przedmiotem wynalazku jest DNA kodujący prekursor wyżej opisany.
Również, przedmiotem wynalazku jest wektor zawierający DNA kodujący prekursor jak wyżej opisano, korzystnie charakteryzujący się tym, że jest wektorem ekspresyjnym nadającym się do ekspresji w E. coli.
Dalszym przedmiotem wynalazku jest komórka E. coli, zawierająca wektor jak wyżej opisano. Dalszym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania prekursora wyżej opisanego, polegający na tym, że:
a) wprowadza się DNA, jak wyżej opisano, do wektora jak wyżej opisano;
b) wprowadza się wektor z pkt. (a) do komórki E. coli;
c) wykorzystuje się komórkę E. coli z (b) zawierającą wektor z (a) do ekspresji; oraz
d) wyodrębnia się prekursor z supernatantu po hodowli.
Ponadto, przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania DNA jak wyżej opisano, polegający na tym, że:
a) otrzymuje się DNA metodą PCR i innymi metodami z dziedziny biologii molekularnej, wychodząc z cDNA insuliny ludzkiej lub małpiej, oraz
b) wyodrębnia się otrzymany DNA.
Dalszym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, polegający na tym, że:
a) otrzymuje się prekursor jak wyżej opisano, sposobem jak wyżej opisano;
b) fałduje się prekursor według (a) w stosownych warunkach tak, że mogą się utworzyć mostki disiarczkowe takie, jakie występują w insulinie ludzkiej, a część RDVP-Yn może zostać usunięta metodą enzymatyczną; oraz
c) insulinę lub analog insuliny ludzkiej poddaje się oczyszczaniu.
Dalszym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie prekursora jak wyżej opisano do wytwarzania insuliny lub analogu insuliny, przy czym, korzystnie, wytworzenia insuliny lub analogu insuliny dokonuje się sposobem jak wyżej opisano.
Dalszym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie DNA jak wyżej opisano do wytwarzania prekursora jak wyżej opisano.
Także, przedmiotem wynalazku jest zastosowanie wektora jak wyżej opisano do wytwarzania prekursora jak wyżej opisano.
Dalszym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie komórki E. coli jak wyżej opisano do wytwarzania prekursora jak wyżej opisano.
Wynalazek zostanie objaśniony w sposób bardziej szczegółowy przy pomocy następujących przykładów, nie ograniczających w żaden sposób zakresu wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Ekspresja pochodnych proinsuliny
Ekspresji dokonuje się z zastosowaniem sposobu opisanego w dokumencie patentowym EP-B1
489 780. Przy tym, w przypadku fermentacji przeprowadzanych w dużej objętoś ci istnieje możliwość modyfikowania procesu. Jednakże, przy porównywaniu szybkości ekspresji, zachowuje się zawsze te same warunki.
W przerobach prowadzonych w większej skali obowiązuje następujący ogólny protokół fermentacji, podany tu, przykładowo, dla objętości 7,5 litra.
- Obję tość stosowana przy fermentacji: 7,5 litra.
- Warunki sterylizacji: 121°C, 20 min, pH 3,5, po sterylizacji skorygowane do 7,0 przy użyciu NH3 - Temperatura stosowana przy fermentacji: 37°C.
- Regulacja pH: pH 7,0, nastawiane przy uż yciu 25% wody amoniakalnej.
- Liczba obrotów mieszadł a: 1500 obr/min.
- Napowietrzanie: 15 Nl/min (2 vvm).
- Czas trwania: okoł o 24 godzin.
PL 203 195 B1
- Dokarmianie: dawkuje się 65% glukozę począwszy od wartości OTR 200 mmoll-1h-1, ze stałą szybkością wynoszącą 12 gl-1h-1.
- Hodowla wstępna: hodowlę trzęsawkową zaszczepia się zawartością ampułki posiewowej i inkubuje w ciągu 3-4 godzin w temperaturze 37°C przy 250 obr/min, aż do osiągnięcia OD A540 ~1.
- Zaszczepienie: fermentory zaszczepia się hodowlą wstępną użytą w ilości około 40 ml.
- Indukowanie: przy A540 >40 przy użyciu 40 mg/litr (300 mg/fermentor) kwasu indolopropionowego rozpuszczonego w około 10 ml wodnego roztworu Na2CO3 (z użyciem 0,17 g Na2CO3).
Użyte tu określenia skrótowe mają następujące znaczenie:
NI = litr normalny;
vvm = objętość/objętość/minutę;
OTR = oxygen transfer rate.
- Podłoża fermentacyjne:
Numer receptury zestawu GAI 100/95-000 Ilość g/litr
Monohydrat glukozy, D(+) min 80% 44
Monohydrat kwasu cytrynowego 3,48
Siarczan amonu min. 95% 6,0
Kwas ortofosforowy(V), 85% 2,99
Wodorofosforan dipotasowy 1,18
Siarczan sodu 3,0
Heptahydrat siarczanu magnezu, min. 98% 2,0
Siarczan żelaza (III) x H2O 0,5
Roztwór pierwiastków śladowych: RL 1/85-000 1,0 ml
Chlorowodorek tiaminy 0,005
Desmophen 3600 0,5
- Roztwór pierwiastków śladowych
RL 1/85-000 Ilość g/litr
Pentahydrat siarczanu miedzi(II) 1,6
Jodek potasu 4,0
Tetrahydrat molibdenianu amonu 8,0
Monohydrat siarczanu manganu(II) 12,3
Heptahydrat siarczanu cynku 16
Kwas ortoborowy 20
- Podłoże w kolbach trzęsawkowych
Ilość g/litr
Ekstrakt drożdżowy 8,0
Glukoza 1,0
NaCl 3,5
KH2PO4 1,32
K2HPO4 3,68
P r z y k ł a d 2
Wytwarzanie insulin
Wytwarzanie insulin przeprowadza się zgodnie ze znanymi sposobami postępowania, takimi jak, na przykład, metody opisane czy omówione w dokumentach patentowych EP-B1 0 489 780 lub EP-A 0 885 961. Metodą korzystną, jeśli chodzi o sfałdowanie i obróbkę odpowiedniego białka fuzyjnego, jest przy tym sposób opisany w dokumencie patentowym EP-B1 0 668 282 (patrz: przykład 2). Do tego, po sfałdowaniu zgodnie z dokumentem patentowym EP 0 288 809, można materiał przesączyć przed dalszą obróbką.
P r z y k ł a d 3
Konstrukcja plazmidu pINT358d kodującego ludzką proinsulinę B-RDVP-C11-35-A derywatyzowaną w odniesieniu do łańcucha C
Do wytworzenia plazmidu wykorzystuje się startery Tir i Insu11 opisane w dokumencie patentowym EP-B1 0 489 780. Dodatkowo zsyntetyzowano dwie nowe sekwencje starterowe.
Starter PINT358fIII ma sekwencję następującą:
PL 203 195 B1
5'-CCC AAG ACC CGC GAT GTT CCT CAG GTG GAG CTG GGC GGG GGC CCT-3' *) B28 B29 B30 Arg Asp Val Pro Cli C12 C13 C14 C15 C16 C17 C18 **)
*) = SEQ ID NO.: 3.
**) = SEQ ID NO.: 4.
Starter PINT358revII ma sekwencję następującą:
5'-CAGCTCCACCTGAGGAACATCGCGGGTCTTGGGTGTGTAG-3' (SEQ ID NO.:5).
Z zastosowaniem DNA plazmidu pINT90d jako matrycy przeprowadza się PCR z udziałem par starterów Tir/PINT358revII i Insu11/PINT358fIII, odpowiednio do sposobu postępowania opisanego w dokumencie patentowym EP-B1 0 489 780. Próbki produktów obu reakcji łączy się ze sobą i uż ywa w trzeciej PCR razem z parą starterów Tir/Insu11. Produkt tej reakcji poddaje się podwójnemu trawieniu z udziałem enzymów Sall/Ncol i produkt tego trawienia restrykcyjnego, po oczyszczeniu, wstawia do naciętego przez Ncol/Sall wektora DNA, również opisanego w dokumencie patentowym EP-B1 0 489 780, plazmidu pINT91d. Tak skonstruowanemu plazmidowi nadaje się oznaczenie pINT358d. Jego budowę ustala się na podstawie analizy sekwencji DNA. Kompetentne komórki E. coli transformuje się z udziałem DNA plazmidu. Ekspresja proinsuliny w bakteriach odbywa się zgodnie z przykładem 1. Po sfałdowaniu dokonanym zgodnie z przykładem 2 następuje enzymatyczne przekształcenie proinsuliny w insulinę i dalsze oczyszczanie według opisu w dokumencie patentowym EP-B1 0 347 781. Przy tym, w etapie chromatografii jonowymiennej, w porównaniu ze sposobem wywodzącym się z zastosowania pINT90d, moż e zostać dodatkowo wychwycona frakcja brzegowa, gdyż nie jest ona zanieczyszczona Arg(B31)-insuliną.
P r z y k ł a d 4
Konstrukcja plazmidu pINT362d przeznaczonego do wytwarzania Lys(B3)Glu(B29)-RDVP-C11-35-insuliny
Do skonstruowania plazmidu trzeba było użyć DNA plazmidów pINT329d i pINT358d jako matryc oraz starterów Tir i Insu11. Dodatkowo zsyntetyzowano dwa nowe startery: Salforward i 329rev.
Starter Salforward ma sekwencję następującą:
5'-TACACACCCGAGACCCGCGATGTTCCTCAGG-3' (SEQ ID NO.: 6)
Odcinek sekwencji wyróżniony tłustym drukiem zaznacza sekwencję, która hybrydyzuje do plazmidu pINT358d, podczas gdy pozostała część jest homologiczna z sekwencjami odcinka plazmidu pINT329d kodującego łańcuch B.
Starter 329rev ma sekwencję następującą:
5'-CCTGAGGAACATCGCGGGTCTCGGGTGTGTAC-3' (SEQ ID NO.: 7)
Odcinek sekwencji wyróżniony tłustym drukiem zaznacza region homologiczny z nicią antysensowną, tworzącą łańcuch B i określa tryplet dla argininy w plazmidzie pINT329d. Pozostała sekwencja hybrydyzuje do plazmidu pINT358d. Przeprowadza się dwie reakcje PCR. Przy tym, DNA plazmidu pINT329d służy jako matryca dla pary starterów Tir/329rev, a DNA plazmidu pINT358d jako matryca dla pary Salforward/Insu11.
Rezultatem obu tych reakcji są fragmenty, zachodzące na siebie sekwencją startera Salforward. Dzięki temu, oba te fragmenty można połączyć ze sobą w trzeciej PCR i przy pomocy starterów Tir i Insu11 zł o ż y ć ze sobą w jedną sekwencję DNA, koduj ą c ą analog insuliny. Tak otrzymany produkt reakcji rozszczepia się enzymami restrykcyjnymi Ncol/SalI,. po czym wstawia do naciętego przez SalI/Ncol fragmentu wektora z pINT91d. Kompetentne komórki E. coli szczepu K12 MM294 transformuje się odpowiednim produktem ligacji. Z transformantów wyodrębnia się plazmidowy DNA i charakteryzuje się go. Prawidłowemu plazmidowi nadaje się oznaczenie pINT362d.
Po ekspresji, stwierdza się porównywalną z pINT90d wydajność surowego białka fuzyjnego. Jednakże, stwierdzona wydajność sfałdowania jest, w porównaniu z pINT329d, wyższa o około 40%.
Struktura białka fuzyjnego kodowanego przez pINT362d przedstawia się następująco:
PL 203 195 B1
MATTSTGNSAR FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPET RDVPQVELGGGPG część fuzyjna łańcuch B łańcuch C
AGSLQPLALEGSLQKR GIVEQCCTSICSLYQLENYCN (SEQ ID NO.:8) łańcuch C c.d.
łańcuch A
P r z y k ł a d 5
Konstrukcja plazmidu pINT349d przeznaczonego do wytwarzania His(B31)His(B32)Gly(A21)RDVP-C11-35-proinsuliny
Najpierw otrzymuje się plazmid pINT140d, którego DNA koduje analog insuliny, Gly(A21)-insulinę. W tym celu potrzebne jest użycie dwóch oligonukleotydów do wykorzystania w PCR jako starterów: Oligonukleotyd Tir stosuje się jako starter sensowny, a oligonukleotyd 140drev jako starter antysensowny:
140drev 5'-AAAGGTCGACTATTAGCCGCAGTA-3' (SEQ ID NO.:9) stop stop Gly Cys Tyr
A21 A20 Al 9
Z udział em obu starterów i DNA plazmidu pINT90d przeprowadza się typową PCR. Produkt reakcji, odpowiednio do opisu w dokumencie patentowym EP-B1 0 489 780, poddaje się działaniu enzymów restrykcyjnych Ncol i SalI, po czym wstawia do naciętego wektora pINT69d. Tak powstaje plazmid pINT140d, który po transformacji w E. coli K12 MM294 wyodrębnia się i następnie charakteryzuje metodą analizy restrykcyjnej i sekwencyjnej.
Z zastosowaniem DNA plazmidu pINT140d jako materiał u wyjś ciowego, przeprowadza się dwie reakcje PCR. W pierwszej z nich używa się startera Tir, a jako startera odwrotnego PINT349a o następującej sekwencji:
Val Gin Pro Val Asp Arg His His Thr Lys Pro Thr Tyr (SEQ ID NO.:10)
5'-CACCTGAGGAACATCGCGGTGGTGGGTCTTGGGTGTGTAG-3'(SEQ ID NO.:11)
C12 Cli ***** B30 B29 B28 B27 B26
Sekwencje oznakowane gwiazdką oznaczają kodony dla nowo wprowadzonych aminokwasów.
Drugą PCR przeprowadza się z udziałem starterów Insu11 i PINT349b.
Starter PINT349b ma następującą sekwencję:
Pro Lys Thr His His Arg Asp Val Pro Gin Val Glu Leu(SEQ ID NO. :12)
5'-ACCCAAGACCCACCACCGCGATGTTCCTCAGGTGGAGCTG-3' (SEQ IN NO.: 13)
B28 B29 B30 ***** C11 cl2 C13 C14
Od pozycji 34 do pozycji 1 sekwencji DNA starter jest komplementarny dla PINT349a.
Tak więc, produkty reakcji z obu PCR można w trzeciej PCR, z udziałem starterów Tir i Insu11, złożyć we fragment DNA kodujący pożądaną pochodną proinsuliny. Produkt tej reakcji poddaje się działaniu enzymów Ncol i SalI i wstawia do naciętego przez te enzymy fragmentu wektora pINT91d, po czym transformuje w wykorzystaniem E. coli K12. Po scharakteryzowaniu plazmidów otrzymanych z transformantów, prawidłowej konstrukcji plazmidowej nadaje się oznaczenie pINT349d.
Przy badaniu ekspresji białka fuzyjnego okazuje się, że nastąpiło wyraźne podwyższenie wydajności białka fuzyjnego. Wydajność ta jest, zaskakująco, o około 20% większa od wydajności uzyskiwanej w przypadku pINT90d i około 5 razy większa od wydajności uzyskiwanej w przypadku plazmidu pINT30d. Stopień sfałdowania jest przy tym porównywalny ze stopniem sfałdowania obserwowanym w przypadku preproinsuliny małpiej, kodowanej przez pINT90d.
PL 203 195 B1
Wykaz sekwencji <110> Aventis Pharma Deutschland GMBH <130> 1999/L059 <140> 19947456.7 <141> 1999-10-02 <160> 13 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 87 <212> DNA <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: DNA kodujący wariant C-peptydu <400> 1 cgcgatgttc ctcaggtgga gctgggcggg ggccctggcg caggcagcct gcSgcccttg 60 gcgctggagg ggtccctgca gaagcgc 97 <210> 2 <211> 29 <212> PRT <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: wariantowa C-pep-insulina
PL 203 195 B1 <400> 2
| Arg 1 | Asp | Val | Pro | Gin 5 | Val | Glu | Leu | Gly Gly 10 | Gly | Pro | Gly Ala | Gly Ser 15 | |
| Leu | Gin | Pro | Leu | Ala | Leu | Glu | Gly | Ser | Leu | Gin | Lys | Arg | |
| 20 | 25 |
<210> 3 <211> 45 <212> DNA <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: starter PINT 358fIII <400> 3 cccaagaccc gcgatgttcc tcaggtggag ctgggcgggg gccct 45 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: częściowa sekwencja białka z PINT 358fIII <400> 4
Arg Asp Val Pro 1
| <210> | 5 |
| <211> | 40 |
| <212> | DNA |
| <213> | Sekwencja syntetyczna |
| <220> |
PL 203 195 B1 <223> Opis sekwencji syntetycznej: starter PINT 358revll <400> 5 cagctccacc tgaggaacat cgcgggtctt gggtgtgtag <210> 6 <211> 31 <212> DNA <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: starter Salforward <400> 6 tacacacccg agacccgcga tgttcctcag g
| <210> | 7 |
| <211> | 32 |
| <212> | DNA |
| <213> | Sekwencja syntetyczna |
| <220> | |
| <223> | Opis sekwencji syntet' |
| <400> | 7 |
cctgaggaac atcgcgggtc tcgggtgtgt ag <210> 8 <211> 91 <212> PRT <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej insuliny wariantowy prekursor <400> 8
PL 203 195 B1
| Met 1 | Ala | Thr | Thr | Ser 5 | Thr | Gly | Asn | Ser | Ala 10 | Arg | Phe | Val | Lys | Gin 15 | His |
| Leu | Cys | Gly | Ser | His | Leu | Val | Glu | Ala | Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Glu | Thr | Arg | Asp | Val | Pro | Gin | Val | Glu |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Gly | Gly | Gly | Pro | Gly | Ala | Gly | Ser | Leu | Gin | Pro | Leu | Ala | Leu | Glu |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Leu | Gin | Lys | Arg | Gly | Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Asn | |||||
| 85 | 90 |
<210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: starter 140drev <400> 9 aaaggtcgac tattagccgc agta <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: częściowa sekwencja białka z PINT 349a
PL 203 195 B1 <400> 10
Val Gin Pro Val Asp Arg His His Thr Lys Pro Thr Tyr 15 10 o i n \ -i ί s. Z. X \J X J.
<211> 40 <212> DNA <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: starter 349a <400> 11 cacctgagga acatcgcggt ggtgggtctt gggtgtgtag 40 <210> 12 <211> 13 ' <212> PRT <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: białkowa częściowa sekwencja z PINT 349b <400> 12
Pro Lys Thr His His Arg Asp Val Pro Gin Val Glu Leu 15 10 <210> 13 <211> 40 <212> DNA <213> Sekwencja syntetyczna <220>
<223> Opis sekwencji syntetycznej: starter PINT 349b <400> 13 acccaagacc caccaccgcg atgttcctca ggtggagctg 40
PL 203 195 B1
Claims (15)
- Zastrzeżenia patentowe1. Prekursor insuliny lub analogu insuliny ludzkiej o wzorze I:B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21) (I) w którym:B(1-30) oznacza łańcuch B insuliny ludzkiej zawierający modyfikacje Lys(B3)Glu(B29),Yn oznacza aminokwasy 5-35 C-peptydu insuliny ludzkiej lub małpiej.A(1-21) oznacza łańcuch A insuliny ludzkiej, a łańcuch A i/lub łańcuch B insuliny ludzkiej zawierają modyfikację His(B31)His(B32)Gly(A21).
- 2. Prekursor wedł ug zastrz. 1, znamienny tym, ż e Yn oznacza aminokwasy 11 - 35 C-peptydu insuliny ludzkiej.
- 3. DNA kodujący prekursor określony w zastrz. 1-2.
- 4. Wektor, zawierający DNA określony w zastrz. 3.
- 5. Wektor wedł ug zastrz. 4, znamienny tym, ż e stanowi wektor ekspresyjny przeznaczony do ekspresji w E. coli.
- 6. Komórka E. coli, zawierająca wektor okreś lony w zastrz. 5.
- 7. Sposób wytwarzania prekursora okreś lonego w zastrz. 1 - 2, znamienny tym, ż e:a) wprowadza się DNA określony w zastrz. 3 do wektora określonego w zastrz. 4;b) wprowadza się wektor z pkt. (a) do komórki E. coli;c) wykorzystuje się komórkę E. coli z (b) zawierającą wektor z (a) do ekspresji; orazd) wyodrębnia się prekursor z supernatantu po hodowli.
- 8. Sposób wytwarzania DNA okreś lonego w zastrz. 3, znamienny tym, ż e:a) otrzymuje się DNA określony w zastrz. 3 metodą PCR i innymi metodami z dziedziny biologii molekularnej, wychodząc z cDNA insuliny ludzkiej lub małpiej, orazb) wyodrębnia się otrzymany DNA.
- 9. Sposób wytwarzania insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, znamienny tym, ż e: a) otrzymuje się prekursor sposobem określonym w zastrz. 7; b) fałduje się prekursor według (a) w stosownych warunkach tak, że mogą się utworzyć mostki disiarczkowe takie, jakie występują w insulinie ludzkiej, a część RDVP-Yn może zostać usunięta metodą enzymatyczną; orazc) insulinę lub analog insuliny ludzkiej poddaje się oczyszczaniu.
- 10. Zastosowanie prekursora określonego w zastrz. 1-2 do wytwarzania insuliny lub analogu insuliny.
- 11. Zastosowanie według zastrz. 10, znamienne tym, że wytworzenia insuliny lub analogu insuliny dokonuje się sposobem określonym w zastrz. 9.
- 12. Zastosowanie DNA określonego w zastrz. 3 do wytwarzania prekursora określonego w zastrz. 1-2.
- 13. Zastosowanie wektora określonego w zastrz. 5 do wytwarzania prekursora określonego w zastrz. 1-2.
- 14. Zastosowanie komórki E. coli określonej w zastrz. 6 do wytwarzania prekursora określonego w zastrz. 1-2.
- 15. Zastosowanie według zastrz. 12 - 14, znamienne tym, że wytworzenia prekursora dokonuje się sposobem określonym w zastrz. 7.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19947456A DE19947456A1 (de) | 1999-10-02 | 1999-10-02 | C-Peptid zur verbesserten Herstellung von Insulin und Insulinanaloga |
| PCT/EP2000/009017 WO2001025278A1 (de) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | C-peptid zur verbesserten herstellung von insulin und insulinanaloga |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL354078A1 PL354078A1 (pl) | 2003-12-15 |
| PL203195B1 true PL203195B1 (pl) | 2009-09-30 |
Family
ID=7924253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL354078A PL203195B1 (pl) | 1999-10-02 | 2000-09-15 | Prekursor insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, sposób wytwarzania prekursora, zastosowanie prekursora, DNA kodujący ten prekursor, sposób wytwarzania DNA, zastosowanie DNA, wektor zawierający DNA, zastosowanie wektora, komórka E.coli zawierająca ten wektor, zastosowanie komórki E.coli oraz sposób wytwarzania insuliny lub analogu insuliny |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6534288B1 (pl) |
| EP (1) | EP1222207B1 (pl) |
| JP (1) | JP4681784B2 (pl) |
| KR (1) | KR100823463B1 (pl) |
| CN (1) | CN1193042C (pl) |
| AT (1) | ATE380196T1 (pl) |
| AU (1) | AU778369B2 (pl) |
| BR (2) | BR0014464A (pl) |
| CA (1) | CA2385857C (pl) |
| CY (1) | CY1107860T1 (pl) |
| DE (2) | DE19947456A1 (pl) |
| DK (1) | DK1222207T3 (pl) |
| ES (1) | ES2295054T3 (pl) |
| HK (1) | HK1049016B (pl) |
| HU (1) | HU228313B1 (pl) |
| IL (2) | IL148942A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA02003103A (pl) |
| NO (1) | NO329975B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ518066A (pl) |
| PL (1) | PL203195B1 (pl) |
| PT (1) | PT1222207E (pl) |
| SI (1) | SI1222207T1 (pl) |
| TW (1) | TWI265168B (pl) |
| WO (1) | WO2001025278A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA200202520B (pl) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7176278B2 (en) | 2001-08-30 | 2007-02-13 | Biorexis Technology, Inc. | Modified transferrin fusion proteins |
| US20050250676A1 (en) * | 2001-11-19 | 2005-11-10 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Method of activating insulin receptor substrate-2 to stimulate insulin production |
| US20040038864A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-02-26 | Per Balschmidt | Use of dimethyl sulfone as isotonicity agent |
| DE10235168A1 (de) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| ATE517119T1 (de) * | 2003-12-03 | 2011-08-15 | Novo Nordisk As | Einzelketteninsulin |
| CN1663960B (zh) * | 2004-03-01 | 2012-07-04 | 重庆富进生物医药有限公司 | 高效表达重组人胰岛素原及其类似物的新型c肽 |
| WO2007121318A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Emisphere Technologies, Inc. | Formulations for delivering insulin |
| DE102008025008A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| NZ586590A (en) * | 2008-01-09 | 2012-06-29 | Sanofi Aventis Deutschland | Insulin analogues or derivatives having an extremely delayed time-action profile |
| DE102008025007A1 (de) | 2008-05-24 | 2009-11-26 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008003568A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| DE102008003566A1 (de) | 2008-01-09 | 2009-07-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil |
| BRPI0907119A2 (pt) | 2008-01-09 | 2015-07-14 | Sanofi Aventis Deutschland | Derivados de insulina tendo um perfil de ação de tempo extremamente retardado |
| PL2349324T3 (pl) | 2008-10-17 | 2018-02-28 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Kombinacja insuliny i agonisty GLP-1 |
| RU2573995C2 (ru) | 2009-11-13 | 2016-01-27 | Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх | Фармацевтическая композиция, содержащая агонист гпп-1 и метионин |
| ES2534191T3 (es) | 2009-11-13 | 2015-04-20 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Composición farmacéutica que comprende un agonista de GLP-1, una insulina y metionina |
| SG187904A1 (en) | 2010-08-30 | 2013-04-30 | Sanofi Aventis Deutschland | Use of ave0010 for the manufacture of a medicament for the treatment of diabetes mellitus type 2 |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| PL2750699T3 (pl) | 2011-08-29 | 2015-12-31 | Sanofi Aventis Deutschland | Kombinacja farmaceutyczna do stosowania w kontroli glikemii u pacjentów z cukrzycą typu 2 |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| TWI780236B (zh) | 2013-02-04 | 2022-10-11 | 法商賽諾菲公司 | 胰島素類似物及/或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物 |
| EP3091965A1 (en) | 2014-01-09 | 2016-11-16 | Sanofi | Stabilized glycerol free pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives |
| RU2016132340A (ru) | 2014-01-09 | 2018-02-14 | Санофи | Стабилизированные фармацевтические составы на основе инсулина аспарта |
| WO2015104314A1 (en) | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Sanofi | Stabilized pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives |
| PE20171622A1 (es) | 2014-12-12 | 2017-11-02 | Sanofi Aventis Deutschland | Formulacion de relacion fija de insulina glargina/lixisenatida |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA811972B (en) * | 1980-03-27 | 1982-11-24 | Lilly Co Eli | Process for producing an insulin precursor |
| US4430266A (en) * | 1980-11-28 | 1984-02-07 | Eli Lilly And Company | Process for producing an insulin precursor |
| HRP940432B1 (en) * | 1994-08-05 | 2003-10-31 | Pliva Pharm & Chem Works | Dna sequences encoding biosynthetic insulin precursors and process for preparation of insulin |
| PT821006E (pt) * | 1996-07-26 | 2004-09-30 | Aventis Pharma Gmbh | Derivados de insulina com ligacao a zinco aumentada |
| DE19726167B4 (de) * | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
-
1999
- 1999-10-02 DE DE19947456A patent/DE19947456A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-09-15 HU HU0202755A patent/HU228313B1/hu unknown
- 2000-09-15 CA CA2385857A patent/CA2385857C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 PT PT00960664T patent/PT1222207E/pt unknown
- 2000-09-15 BR BR0014464-9A patent/BR0014464A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 NZ NZ518066A patent/NZ518066A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-09-15 KR KR1020027004275A patent/KR100823463B1/ko active IP Right Grant
- 2000-09-15 IL IL14894200A patent/IL148942A0/xx unknown
- 2000-09-15 SI SI200030981T patent/SI1222207T1/sl unknown
- 2000-09-15 BR BRPI0014464A patent/BRPI0014464B8/pt unknown
- 2000-09-15 DK DK00960664T patent/DK1222207T3/da active
- 2000-09-15 EP EP00960664A patent/EP1222207B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 AT AT00960664T patent/ATE380196T1/de active
- 2000-09-15 WO PCT/EP2000/009017 patent/WO2001025278A1/de active IP Right Grant
- 2000-09-15 CN CNB008137137A patent/CN1193042C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 AU AU72877/00A patent/AU778369B2/en not_active Expired
- 2000-09-15 MX MXPA02003103A patent/MXPA02003103A/es active IP Right Grant
- 2000-09-15 DE DE50014830T patent/DE50014830D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 JP JP2001528218A patent/JP4681784B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 ES ES00960664T patent/ES2295054T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-15 PL PL354078A patent/PL203195B1/pl unknown
- 2000-09-29 TW TW089120149A patent/TWI265168B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-10-02 US US09/676,787 patent/US6534288B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-03-18 NO NO20021335A patent/NO329975B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-03-28 ZA ZA200202520A patent/ZA200202520B/xx unknown
- 2002-03-31 IL IL148942A patent/IL148942A/en active IP Right Grant
-
2003
- 2003-02-18 HK HK03101211.8A patent/HK1049016B/zh not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-01-18 CY CY20081100078T patent/CY1107860T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL203195B1 (pl) | Prekursor insuliny lub analogu insuliny ludzkiej, sposób wytwarzania prekursora, zastosowanie prekursora, DNA kodujący ten prekursor, sposób wytwarzania DNA, zastosowanie DNA, wektor zawierający DNA, zastosowanie wektora, komórka E.coli zawierająca ten wektor, zastosowanie komórki E.coli oraz sposób wytwarzania insuliny lub analogu insuliny | |
| AU593274B2 (en) | Insulin analogues and process for their preparation | |
| JP5695909B2 (ja) | 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体 | |
| EP2371853B1 (en) | Insulin derivatives or its pharmaceutically acceptable salt, pharmaceutical composition, use of insulin derivative or its pharmaceutically acceptable salt and method of treatment | |
| CA2208095C (en) | Generation of human insulin | |
| DE19605657A1 (de) | Proinsulinderivat und Verfahren zur Herstellung von menschlichem Insulin | |
| US20120142891A1 (en) | Fusion protein systems suitable for high expression of peptides | |
| US6001604A (en) | Refolding of proinsulins without addition of reducing agents | |
| AU2007272057B2 (en) | Method for producing insulin analogs having a dibasic B chain terminus | |
| JPH06306100A (ja) | Ｖｉｐアナログ調製用融合蛋白、ｖｉｐアナログの製法並びにそのための遺伝子組換えプラスミド及び形質転換微生物 | |
| RU2729381C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF644, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН | |
| Nam et al. | Design and cloning of the gene for a novel insulin analogue,(B 30-homoserine) human insulin | |
| HUT72848A (en) | Dna sequences encoding novel biosynthetic insulin precursors and process for preparation of insulin |