HUP0202793A2 - A humán inzulin monomer analógjai - Google Patents
A humán inzulin monomer analógjai Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0202793A2 HUP0202793A2 HU0202793A HUP0202793A HUP0202793A2 HU P0202793 A2 HUP0202793 A2 HU P0202793A2 HU 0202793 A HU0202793 A HU 0202793A HU P0202793 A HUP0202793 A HU P0202793A HU P0202793 A2 HUP0202793 A2 HU P0202793A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- des
- insulin analog
- insulin
- deletion
- human insulin
- Prior art date
Links
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims abstract description 38
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 18
- -1 Tyr amino acids Chemical group 0.000 claims 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 14
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 12
- 101000928314 Homo sapiens Aldehyde oxidase Proteins 0.000 description 12
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 11
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 11
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 9
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 5
- YPPFWRWCZNXINO-UHFFFAOYSA-N methyl 1-hydroxy-6-phenyl-4-(trifluoromethyl)indole-2-carboxylate Chemical compound C1=C2N(O)C(C(=O)OC)=CC2=C(C(F)(F)F)C=C1C1=CC=CC=C1 YPPFWRWCZNXINO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 3
- 101150051118 PTM1 gene Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N humalog Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N 0.000 description 3
- 229960002068 insulin lispro Drugs 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- SBKVPJHMSUXZTA-MEJXFZFPSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 SBKVPJHMSUXZTA-MEJXFZFPSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010038049 Mating Factor Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000001426 native polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 101150072436 H1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001506991 Komagataella phaffii GS115 Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229910052925 anhydrite Inorganic materials 0.000 description 1
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Humán inzulin monomer analógok, melyek a humán inzulin B-láncának 12.,16. és 26. helyzetében aminosav helyettesítéseket tartalmaznak, ésamelyek a B-lánc végein deléciókat is tartalmaznak. Ó
Description
k. .··.···:/·..··.
KÖZZÉTÉTELI .£. ·~· .·™ ··
Telefon: 461-1000, Fax: 461-10W PÉLDÁNY
74.337/SZE
A humán inzulin monomer analógjai
A jelen találmány új humán inzulin (Hl) monomer analógokra vonatkozik, melyek rekombináns DNS technikával állíthatók elő.
Az inzulin az inzulinfüggő diabetes kezelésében igen hatásos, és ezt a vegyületet klinikailag majdnem 80 éve alkalmazzák. A DNS technológia megjelenésével és a biotechnológiai ipar fejlődésével az állati hasnyálmirigyekből kivont inzulin helyét fokozatosan átvették a humán inzulin rekombináns formái, amiket mikrobiális rendszerekkel állítanak elő. Ezt az irányzatot két megfigyelés erősíti; a diabetes mellitusban szenvedő betegek száma globálisan nő, és a klinikai kezeléshez szükséges dózis milligrammos (mg) mennyiség.
Napjainkban a rekombináns humán inzulin kereskedelmi termeléséhez alkalmazott mikroorganizmusok az Escherichia coli és a Saccharomyces cerevisiae. Az Escherichia coli-ban a kifejezési szintek magasak, de a feldolgozásban a tisztítással kapcsolatos problémák gyakran a kitermelés csökkenéséhez vezetnek. Ezek a nehézségek az Saccharomyces cerevisiae-nel nem jelentkeznek, mivel a termelt inzulin a tenyészet közegébe kerül, ami a tisztítást felgyorsítja. Viszont az ebben a szervezetben megfigyelt kifejezés alacsony és ezt növelni nehéz.
Napjainkig a humán inzulin klinikai készítményét, a Lispro®-t, vezették be, mely a humán inzulin lassan ható polimer formája. Az inzulin monomer formái, melyeket a szakirodalomban leírtak [5,618,913 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi bejelentés] ezzel szemben viszonylag gyorsan hatnak, és a természetes állapot utánzását jobban megoldják. Ezért ezeknek a klinikai alkalmazásban van nagy jelentőségük. A kereskedelemi monomer inzulin, ami mint Lispro® kapható, a humán inzulin B-lánc 28. és 29. aminosavait fordítva tartalmazza, és a következőképpen rövidíthető: B28Lys,B29Pro.
A szakirodalomban közzétették [Kristensen és mtsai: J. Biol. Chem. 272(20),: 12978-12983 (1997)] az inzulin molekula különböző helyzeteiben az alanin helyettesítéseket, beleértve a B12, B16 és B26 helyeket. Az Alá egy bizonyos helyen történő egyszeri helyettesítése az eredményül kapott inzulin analóg kötőaktivitására hat.
A szakirodalomban közzétették [Wang és mtsai: Biochem. Mól. Bioi. Int. 39(6), 1245-1254 (1996)] a B12Thr-t, azaz egy olyan inzulin analógot, melyben a humán inzulin B-lánc 12. aminosavát (Val) Thr-rel helyettesítették. Itt is a kötési aktivitásra gyakorolt hatást vettek észre.
Az EP-A-0046979 számú szabadalmi bejelentésben a humán inzulin des-B30 származékát tették közzé.
Az EP-A-0291863 számú szabadalmi bejelentésben a humán inzulin des-Bl származékát tették közzé.
A jelen találmány szerinti új humán inzulin analógok a B12Thr, B16Ala és a B26Ala monomer variánsai; az utóbbiról mostanában felismerték, hogy nem monomer. Továbbá a B-lánc 12., 16. és 26. helyének bármelyik vagy összes aminosavait kicseréltük, miközben az analóg monomer maradt, és ahol a B-1 és/vagy B-30 végi aminosavak hiányozhatnak. Ahogy azt itt használjuk, az inzulin analóg szakkifejezés olyan vegyületet jelent, melynek molekuláris felépítése a humán inzulinéhoz hasonlít, beleértve az A7Cys és a B7Cys közötti diszulfidhidakat, és a A20Cys és a B19Cys közötti diszulfidhidakat, valamint a belső, az A6Cys és az AllCys közötti diszulfidhidakat, és azzal a feltevéssel, hogy inzulin aktivitást mutatnak.
Anélkül, hogy bármely elmélet irányában elköteleznénk magunkat, klinikai készítményekben az inzulin molekula belső felépítésében a B-lánc számos aminosava az inzulin polimerizációjáért felelős. Ezek közé a következők tartoznak: B12, B16 és B26. Nevezetesen a B12-ben a Val cseréje Thr-rel, vagy a B16. vagy a B26. helyzetben a Tyr cseréje Alá-val, ezeknél az inzulin analógoknál a magas koncentrációnál is megfigyelhető polimerizációs hajlam jelentősen csökken (lásd a 9. példát). A monomer struktúra létének fokozott tendenciáját a B-lánc egyik vagy mindkét végi aminosavának eltávolítása nem befolyásja.
Az alábbi séma a pNHI-2/AOXl, pNHI-3/AOXl, pNHI4/AOX1 expressziós plazmidok elkészítését és a YP99/NHI-2, YP99/NHI-3 és YP99/NHI-4 rekombináns sejtek kialakítását mutatja be. Itt a találmány vegyületeinek bemutató jellegű előállítási eljárását tesszük közzé, mely a pHI/PGK ingázó plazmidban fellelhető humán inzulin céltábla gén (Hl) használatának analógiá ján alapul. Ezt az ingázó vektort a pVT102-U plazmidból (a Canadian Research Institute-tól szereztük be) alakítottuk ki, és ezek után PCR-rel sokszoroztuk [Maniatis és mtsai: Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2. kiadás, New York: Cold Spring Harbour Laboratory (1989)], a humán inzulin céltábla gén (Hl) és az azt határoló alfa mating-faktor vezető szekvenciája (MFL) sok kópiájának kialakítása érdekében. A céltábla gént ezután a pPIC9 plazmidba klónoztuk, melyet felhasználása előtt BglII-vel linearizáltunk, majd végül szferoplaszt módszerrel a Pichia pastoris GS1 sejtekbe transzformáltunk. Miután a céltábla gént tartalmazó pPIC9 plazmid bejut a sejtekbe, a gazdasejt kromoszómális DNS-ébe integrálódik [Cregg és mtsai: és mtsai: Molecular & Cellular Biology 5, 3376 (1985)]. A HI gén nagy kópiaszámát hordozó transzformált sejteket G418 antibiotikummal választottuk ki, ahogy azt a szakirodalomban leírták [Scover és mtsai: Bio/Technology, 12, 181 (1994)]. A Hl több kópiájának jelenlétéről dot-lenyomatolási eljárással győződtünk meg [Clare és mtsai: Gene, 105, 205 (1991)]. A Hl gént nagy kópiaszámban hordozó sejteket fermentálással a humán inzulin előanyag kialakításához használtuk fel, majd tisztítás után triptikus transzpeptidálással humán inzulinná változtattuk.
A jelen találmány szerinti humán inzulin analógok rekombináns formáinak kialakításához előállítottuk a céltábla géneket. Ezt a szakirodalomban leírt hézag kettősszálú DNS módszerrel hajtottuk végre [Li YiPing és mtsai: Biotech. J., 3, 90 (1987)], ami a HI céltábla gén helyspecifikus mutálását lehetővé teszi. A primereket úgy terveztük meg, hogy specifikusan a B12Thr-t, B16Ala-t és B26Ala-t adja, ezek a primerek a következők:
A B12Thr (NHI-2) esetében lásd a szakirodalmat [Wang és mtsai: Biochem. Mól. Bioi. Int. 39(6), 1245-1254(1996)]. A B16Ala (NHI3) esetében: 5' TGA GGC TTT GNN YTT GGT TTG CG 3' (a szekvencia száma: 1), ahol N jelentése bármely nukleotid lehet (G, A, T vagy C), és Y jelentése C vagy G. A B26Ala (NHI-4) esetében: 5' GAA AGA GGTT TTC NNY ACT CCT AGG GC 3' (a szekvencia száma: 2), ahol N és Y jelentését lásd a fentiekben.
Az új humán inzulin analógok a B30Thr és/vagy a BIPhe eltávolításával kaphatók meg, például a des-Bl és/vagy a desB30 analóg kialakítással. Az aminosav eltávolítása ismert eljárással történhet. A triptikus transzpeptidáció helyett a des-B30 humán inzulin előállításához korlátozott hidrolízist adaptáltunk, ahol az előnyben részesített eljárásban tripszint használtunk, ez az eljárást tovább egyszerűsíti és az inzulin kitermelést fokozza. A jelen találmány inzulin analógjainak előállításához az előnyben részesített gazda a metilotróf élesztő, a Pichia pastoris, mivel a példák azt mutatták, hogy előnyei a következők: nagymérvű kifejezés, egyszerű alkalmazhatóság, alacsony termelési költség és sűrű tenyészet. Továbbá az eukarióta sejtrendszer előnyeit biztosítja, mint például a helyes feltekeredést és a kiválasztott fehérje megfelelő transzláció utáni kialakítását. A humán inzulin termelésének mértéknövelésében ezek az előnyök a P. pastoris alkalmazásának lehetőségét nagymértékben fokozzák.
A kereskedelmi fehérjék kifejezésében használatuk jelentőségét máshol mutatták be [Clare és mtsai: Gene, 105, 205 (1991); Hagenson és mtsai: Enzy. Micro. Tech., 11, 650 (1989); Steinlein és mtsai: Prot. Exp. Pur., 6, 619(1995)]. A találmány humán inzulin analógjai terápiásán felhasználhatók. A szakirodalomban jártas szakemberek számára alkalmazásuk és hasznuk nyilvánvaló, például a diabetes mellitus kezelésében.
Az 1. ábra a Pichia pastoris pNHI-2/AOXl plazmidjának kialakítását mutatja be.
A következő példák a jelen találmány bemutatására szolgálnak.
1, Példa
A mutált Η1 gén klónozása
A szakirodalomban leírt standard eljárással a Canadian Biotechnology Research Institute-tól beszerzett pVT102-U plazmidot használtuk fel a pHI/PGK plazmid kialakításához [Maniatis és mtsai: Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2. kiadás, New York: Cold Spring Harbour Laboratory (1989)]. A pHI/PGK konstrukció egy ingázó plazmid, melyben a foszfoglicerát kináz (PGK) promotert az alfa mating-faktor vezetőszekvencia (MFL) követi, a humán inzulin céltábla gén (Hl) közvetlen szekréciójának biztosításához, ami az MFL 5’ vég BamHI helyével és a Hl 3’ vég HindlII helyével határolt. A DNS fragmensekhez, melyek 5’ végen GGATCC BamHI hellyel, illetve 3’ végen GAATTC EcoRI hellyel MFL-t és ΗΙ-t tartalmaztak, templátként a pHl/PGK-t, 5’ primerként a TCCGGATCCATGAGATTT szekvenciát (a szekvencia száma: 3), 3’ primerként TGAATTCTTCTAGTTGCAGTAGTTT szekvenciát (a szekvencia száma: 4) használtuk fel, melyeket PCR sokszorozással kaptunk. Az MFL-t, és a céltábla NHI-2 (B12Thr), NHI-3 (B16Alá) és NHI-4 (B26Ala) céltábla géneket tartalmazó DNS-ek nyeréséhez a pHI/PGK plazmidban a Hl céltábla génen először helyspecifikus mutagenézist végeztünk, majd ezután PCR-rel sokszoroztunk. E fragmenseknek a pPIC9 plazmid (Invitrogen) AOX1 promotere mögé való inszertálásával, a pNHI2/AOX1, pNHI-3/AOXl és a pNHI-4/AOXl plazmidokhoz jutottunk (lásd a sémát és a hozzácsatolt rajzot, ahol a betű az első plazmidot mutatja, és a többi hasonló eljárással állítható elő). A jelen találmányban a mutált gének nyeréséhez használt primerek szekvencia számai a következők: 1, 2 és 3.
2. Példa
Az expressziós sejtek előállítása és szűrése
Az expressziós plazmidokat BglII-vel linearizáltuk és a P. pastoris GS115 (Invitrogen) sejtek szferoplasztos transzformálásához használtuk. Miután a linearizált plazmidok bejutottak a szferoplasztokba, a gazdasejt kromoszómális DNS-ébe beépültek [Cregg és mtsai: és mtsai: Molecular & Cellular Biology 5, 3376(1985)]. A rekombináns sejteket, melyeket YP99/NHI-2-nek, YP99/NHI-3-nak és YP99/HNI-4-nek neveztünk el, a nagy kópiaszámú céltábla génekkel G418 [Scover és mtsai:
Bio/Technology, 12, 181(1994)] antibiotikumon szelektáltuk, és dot-lenyomatolással azonosítottuk [Clare és mtsai: Gene, 105, 205(1991)].
3. Példa
A Hl analógok előanyagainak elkészítése
A nagysúrüségú fermentációt 15 literes fermentorban hajtottuk végre [Laroche és mtsai: BiolTechnology, 12, 1119 (1994)]. A fermentációban a következő sóoldatokat használtuk: BSM H3PO4 26,7 ml/1, CaSO4*H20 0,93 g/1, K2SO4 18,2 g/1, MgSO4*7H2O 14,9 g/1, KOH 4,13 g/1; PTM1 - CuSO4*5H2 0,6 g/1, KI 0,08 g/1, MnSO4*H20 3,0 g/1, NaMoO4*H2O 0,2 g/1, HBO3 0,02 g/1, CoC12*6H20 0,5 g/1, ZnSO4 20,0 g/1, H2SO4 5 ml/1, FeSO4*7H20 65,0 g/1.
A 6 liter BSM és 300 ml glicerint tartalmazó fermentációs táptalajt a fermentorban kisterileztük. pH-ját 5,5 50 % ammónium-hidroxiddal 5,5-re állítottuk. A táptalajok 1 literéhez 5 ml PTM1 sóoldatot adtunk, mely 1 mg biotint tartalmazott. A kifejezést végző sejteket 50 ml YPG-re oltottuk, és rázólombikban 30 °C-on 24 óráig tenyésztettük. A táplevest 600 ml YPG-hez adtuk, 3 lombikban 24 óráig rázattuk, a táptalajhoz hozzáadtuk és a glicerin kimerüléséig, 24 óráiig tenyésztettük. A PTMl-et (5 ml/1) és biotint (1 mg/1) tartalmazó metanol oldattal a kifejezést beindítottuk. Az indukciós fermentálást 84 óráig a fenti metanolos oldat táplálásával folytattuk. A fermentáció során a pH értékét 50 %-os ammónium-hidroxid adagolásával 5,5-ön tartottuk. A kifejezési szintet radio-immun vizsgálati módszerrel, SDSpoliakrilamid gélelektroforézissel [Schagger és mtsai: Analytical Biochemistry 166, 368 (1987)] és HPLC-vei mértük.
4. Példa
Az előanyagok elválasztása és tisztítása
A sejttestek eltávolítására a fermentációs táplevest centrifugáltuk. A felülúszót C8-as oszlopra vittük és HPLC-vel tisztítottuk. Egylépéses tisztítás után olyan terméket kaphatunk, mely natív poliakrilamid gélelektroforézissel homogén.
5. Példa
Az előanyagok transzpeptidezése
A 4. példából a Hl analógok tisztított előanyagait a következő összetételű oldattal 30 mg/ml koncentrációban feloldottuk: DMSO/l,4-butándiol/H20 Feleslegben ThríBu^-OBu1 adtunk és a pH-t ammónium-hidroxiddal 6,5-re állítottuk be. TPCK-tripszint adagoltunk (szubsztrát:enzim = 5:1) és a reakcióelegyet 25 °C-on 6 óráig inkubáltuk. A reakciót savanyítással állítottuk meg. A terméket acetonnal kicsaptuk, és C8 oszlopon HPLC-vel tisztítottuk.
6. Példa
A des-B30 analógok elkészítése
A Hl analógok tisztított előanyagait 0,1 M ammónium-bikarbonáttal (pH = 8,0) 10 mg/ml végkoncentrációban feloldottuk.
TPCK-tripszint adagoltunk hozzá (szubsztrát:enzim = 200:1) és a reakeióelegyet 25 °C-on egy éjszakán át inkubáltuk. A terméket natív poliakrilamid gélelektroforézissel analizáltuk.
7. Példa
A des-B 1 analógok elkészítése
A Hl analógokat a trifluorecetsavas kezelés megelőzően fenil-izotiocianáttal 1:2 moláris arányban reagáltattuk, , ahogy azt a szakirodalomban leírták [Bradenburg és Hoppe-Seyler: Physiol. Chem. 350, 471]. E reakció termékeit elválasztottuk és elektroforézissel analizáltuk, azt találtuk, hogy majdnem kizárólag az inzulin analóg des-B 1 formái fordulnak elő.
8. Példa
A des-B 1, des-B30 analógok elkészítése
A Hl analógok elöanyagait a 6. példában, majd ezt követően a 7. példában leírtaknak megfelelően állítottuk elő.
9. Példa
A strukturális formák meghatározása
A rekombináns humán inzulin analógok strukturális formáit a B-lánc egy vagy mindkét végi aminosav eltávolítása előtt elektroforetikusan meghatároztuk. Az egyes analógok elkészítése során Superdex G-75 (HR 10/30) oszlopkromatográfiát alkalmaztunk. A ΗΙ-t és a [B28Lys, B29Pro] inzulint (Lispro) negatív illetőleg pozitív kontrollként használtuk. Eluáló szerként foszfáttal puffereit sóoldatot (pH 7,4) használtunk és az áramlási sebességet állandó, 0,4 ml/percre állítottuk. A minta készítmény koncentrációja 1,2 mg/ml. A retenciós idő és a humán inzulin analógok csúcs-profiljait a következő táblázatban mutatjuk be.
| Minta | Retenciós idő (perc) | A csúcs jellemzője |
| Hl | 36,4 | nem szimmetrikus |
| [B28Lys,B29Pro]HI | 39,4 | szimmetrikus |
| [B12Thr]HI | 39,4 | szimmetrikus |
| [BlőAla] Hl | 38,3 | szimmetrikus |
| [B26Ala]HI | 38,9 | szimmetrikus |
Az eredmények azt mutatják, hogy a B12Thr, BlőAla és B26Ala Hl analógok monomer formában vannak. Hasonló retenciós idővel és csúccsal rendelkeznek mint a humán inzulin ismert pozitív kontrollja [B28Lys, B29Pro].
Séma:
pVT102-U (Canadian Biotech Res Inst.)
T ADHp eltávolítás és PGKp kicserélés együtt az a-MFL szekvencia és a Hl elöanyag gén adásával pHI/PGK (ingázó plazmid) a Hl elöanyag génnel és az a-MFL szekvenciával
T helyspecifikus mutagenezis, felhasználva a 1., 2. és 3.
szekvenciájú primereket pNHI-2, pNH-3 vagy pNHI-4/PGK az új Hl elöanyag génnel és az α-MFL szekvenciával
Φ PCR; az új céltábla gén sokszorozása.
Az NHI-3, NHI-3 vagy NHI-4 elöanyag gének és az a-MLF szekvencia több kópiájának termelése új elöanyag gének és α-MFL fragmens, melyet úgy alakítottunk ki, hogy a BamHI és EcoRI helyek közé kerüljön.
E fragmensek pPIC9 plazmidba építése éppen az AOX1 promoter után.
Expressziós plazmidok; pNHI-2/AOXl vagy pNHI-3/AOXl vagy pNHI-4/AOXl az expressziós plazmidot BglII-vel linearizáltuk és felhasználtuk a GS 115 sejtek transzformálásához.
A Pichia pastoris (GS 115 sejtek) transzformálása
Φ az új Hl előanyagok termelésére nézve a transzformált sejtek szűrése; a génszekvencia ellenőrzése és utána a nagy kitermelést biztosító sejtek G418-as szelektálása.
Transzformánsok: YP99/NHI-2, YP99/HNI-3 és YP99/NHI-4 sejtek
Ψ a sejtek BMS sóoldatban növesztése, metanolos indukció, az új Hl elöanyag tisztítása, humán inzulin analóggá alakítása, majd a B-lánc végi deléció(k) felhasználásával módosításuk.
Az alábbiakban ismertetjük a leírásban említett szekvenciákat.
A szekvenciák jegyzéke < 110> Shanghai Institute of Biotechnology, < 120> A humán inzulin monomer analógjai < 130> REP06372W0 < 140> még nem ismert < 141> 2000-09-08 < 160> 4 < 170> Patentin Ver. 2.1 < 210> 1 <211> 23 < 212> DNS < 213> mesterséges szekvencia <220>
<223> a mesterséges szekvencia leírása: oligonukleotid <400> 1 tgaggctttg nnyttggttt gcg 23 <210> 2 <211> 27 < 212> DNS < 213> mesterséges szekvencia <220>
< 223> a mesterséges szekvencia leírása: oligonukleotid <400> 2 gaaagaggtt ttcnnyactc ctagggc < 210> 3 < 211> 18 < 212> DNS < 213> mesterséges szekvencia <220>
< 223> a mesterséges szekvencia leírása: oligonukleotid < 400> 3 tccggatcca tgagattt 18 < 210> 4 < 211> 25 < 212> DNS < 213> mesterséges szekvencia <220>
< 223> a mesterséges szekvencia leírása: oligonukleotid < 400> 4 tgaattcttc tagttgcagt agttt 25
Claims (14)
1. Inzulin analóg, melynél a humán inzulin B-lánc 12., 16. vagy 26. aminosava eltér, nevezetesen Val, Tyr illetőleg Tyr aminosavakkal helyettesítve monomer formában van, és amely a Bl (Phe) és/vagy B30 (Thr) helyeken deléciót is tartalmaz.
2. Inzulin analóg terápiás felhasználáshoz, mely a humán inzulin B-lánc 16. vagy 26. aminosavában eltér, nevezetesen Val, Tyr illetőleg Tyr aminosavakkal helyettesítve monomer formát alkot.
3. Az 1. igénypont szerinti inzulin analóg, melyben a 12. aminosav Thr-rel helyettesített (B12Thr).
4. Az 1. vagy a 2. igénypont szerinti inzulin analóg, melyben a 16. aminosav Alá-val helyettesített (B16Alá).
5. Az 1. vagy a 2. igénypont szerinti inzulin analóg, melyben a 26. aminosav Alá-val helyettesített (B26Ala).
6. A 3. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a Bl. helyen deléciót tartalmaz (des-Bl, B12Thr).
7. A 3. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a B30. helyen deléciót tartalmaz (des-B30, B12Thr).
8. A 3. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a Bl. és B30. helyeken deléciót tartalmaz (des-Bl, des-B30, B12Thr).
9. A 4. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a Bl. helyen deléciót tartalmaz (des-Bl, B16Ala).
10. A 4. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a B30. helyen deléciót tartalmaz (des-B30, BlöAla).
11. A 4. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a Bl. és a B30. helyeken deléciót tartalmaz (des-B 1, des-B30, BlöAla).
12. A 4. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a Bl. helyen deléciót tartalmaz (des-B 1, B26Ala).
13. A 4. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a B30. helyen deléciót tartalmaz (des-B30, BlöAla).
14. A 15. igénypont szerinti inzulin analóg, mely a Bl. és a B30. helyeken deléciót tartalmaz (des-B 1, des-B30, B26Ala).
Szentp^teri Zsolt rzasadajmi ügyvivő ] szabadaimi
Rudaoest
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN99116851A CN1125081C (zh) | 1999-09-08 | 1999-09-08 | 重组天然和新型人胰岛素及其制备方法 |
| PCT/GB2000/003460 WO2001018052A1 (en) | 1999-09-08 | 2000-09-08 | Monomeric analogues of human insulin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0202793A2 true HUP0202793A2 (hu) | 2002-12-28 |
| HUP0202793A3 HUP0202793A3 (en) | 2005-07-28 |
Family
ID=5279521
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0202793A HUP0202793A3 (en) | 1999-09-08 | 2000-09-08 | Monomeric analogues of human insulin |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6800606B1 (hu) |
| EP (1) | EP1210369A1 (hu) |
| JP (1) | JP2003525867A (hu) |
| CN (1) | CN1125081C (hu) |
| AU (1) | AU767006B2 (hu) |
| BR (1) | BR0013840A (hu) |
| CA (1) | CA2383638A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ20021227A3 (hu) |
| HU (1) | HUP0202793A3 (hu) |
| IL (1) | IL148380A0 (hu) |
| MX (1) | MXPA02002489A (hu) |
| NO (1) | NO20021135L (hu) |
| PL (1) | PL354488A1 (hu) |
| TR (1) | TR200200599T2 (hu) |
| WO (1) | WO2001018052A1 (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AR025646A1 (es) * | 2000-09-13 | 2002-12-04 | Beta Lab Sa | Cepa de levaduras metilotroficas recombinantes productoras de un precursor de insulina, construcciones de adn y metodo para obtener la cepa. |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| ES2665853T3 (es) | 2012-03-29 | 2018-04-27 | Biocon Limited | Secreción de insulina glargina funcional directamente en el medio de cultivo mediante la sobreexpresión intracelularmente de Kex2p |
| CN102703552B (zh) * | 2012-05-15 | 2014-10-29 | 山东阿华生物药业有限公司 | 重组人胰岛素的制备方法及其产品 |
| CN102816819B (zh) * | 2012-08-13 | 2014-10-29 | 山东阿华生物药业有限公司 | 提高人胰岛素前体融合蛋白酶切转换成b30缺苏氨酸人胰岛素产率的方法 |
| CN110612112B (zh) * | 2016-12-09 | 2024-03-29 | 阿卡斯通生物科学公司 | 胰岛素-fc融合物及使用方法 |
| EP3841106A4 (en) | 2018-08-20 | 2022-08-10 | Biocon Biologics Limited | CHROMATOGRAPHY PROCEDURE FOR PURIFICATION OF INSULIN ANALOGUES |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3033127A1 (de) * | 1980-09-03 | 1982-04-08 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue analoga des insulins |
| DK58285D0 (da) | 1984-05-30 | 1985-02-08 | Novo Industri As | Peptider samt fremstilling og anvendelse deraf |
| PH25772A (en) | 1985-08-30 | 1991-10-18 | Novo Industri As | Insulin analogues, process for their preparation |
| DE3717370A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Hoechst Ag | Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus |
| PT93057B (pt) * | 1989-02-09 | 1995-12-29 | Lilly Co Eli | Processo para a preparacao de analogos da insulina |
| AU680462B2 (en) * | 1992-12-18 | 1997-07-31 | Eli Lilly And Company | Insulin analogs |
| CN1044856C (zh) | 1993-10-19 | 1999-09-01 | 中国科学院上海有机化学研究所 | 果聚糖同系混合物的药物、生产方法及其用途 |
| YU18596A (sh) | 1995-03-31 | 1998-07-10 | Eli Lilly And Company | Analogne formulacije monomernog insulina |
| EP1056776A1 (en) * | 1998-02-23 | 2000-12-06 | Neurocrine Biosciences, Inc. | Methods for treatment of diabetes using peptide analogues of insulin |
-
1999
- 1999-09-08 CN CN99116851A patent/CN1125081C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-09-08 PL PL00354488A patent/PL354488A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-09-08 CZ CZ20021227A patent/CZ20021227A3/cs unknown
- 2000-09-08 US US10/070,568 patent/US6800606B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-08 CA CA002383638A patent/CA2383638A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-08 EP EP00962653A patent/EP1210369A1/en not_active Withdrawn
- 2000-09-08 HU HU0202793A patent/HUP0202793A3/hu unknown
- 2000-09-08 BR BR0013840-1A patent/BR0013840A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-08 TR TR2002/00599T patent/TR200200599T2/xx unknown
- 2000-09-08 JP JP2001522274A patent/JP2003525867A/ja active Pending
- 2000-09-08 IL IL14838000A patent/IL148380A0/xx unknown
- 2000-09-08 AU AU74305/00A patent/AU767006B2/en not_active Ceased
- 2000-09-08 WO PCT/GB2000/003460 patent/WO2001018052A1/en not_active Ceased
- 2000-09-08 MX MXPA02002489A patent/MXPA02002489A/es active IP Right Grant
-
2002
- 2002-03-07 NO NO20021135A patent/NO20021135L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ20021227A3 (cs) | 2002-07-17 |
| TR200200599T2 (tr) | 2002-05-21 |
| CA2383638A1 (en) | 2001-03-15 |
| NO20021135D0 (no) | 2002-03-07 |
| PL354488A1 (en) | 2004-01-26 |
| EP1210369A1 (en) | 2002-06-05 |
| JP2003525867A (ja) | 2003-09-02 |
| US6800606B1 (en) | 2004-10-05 |
| CN1125081C (zh) | 2003-10-22 |
| AU767006B2 (en) | 2003-10-30 |
| CN1287124A (zh) | 2001-03-14 |
| IL148380A0 (en) | 2002-09-12 |
| WO2001018052A1 (en) | 2001-03-15 |
| HUP0202793A3 (en) | 2005-07-28 |
| MXPA02002489A (es) | 2002-08-28 |
| AU7430500A (en) | 2001-04-10 |
| BR0013840A (pt) | 2002-07-02 |
| NO20021135L (no) | 2002-03-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5202415A (en) | Insulin precursors | |
| US5618913A (en) | Insulin analogues | |
| RU2524423C2 (ru) | Новые производные инсулина с чрезвычайно замедленным профилем время/действие | |
| US8633156B2 (en) | Insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile | |
| JP3676573B2 (ja) | 迅速な作用発現を示す新規インスリン誘導体 | |
| AU648670B2 (en) | A-C-B Proinsulin, method of manufacturing and using same, and intermediates in insulin production | |
| EP0419504B1 (en) | Insulin analogues | |
| EP0216833B1 (en) | Novel insulin derivatives and pharmaceutical preparations containing these derivatives | |
| NO301483B1 (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av humaninsulinanaloger | |
| HUP0202755A2 (hu) | C-peptid inzulin és inzulinanalógok jobb előállítására | |
| CA2330183C (en) | Novel insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| HUP0202793A2 (hu) | A humán inzulin monomer analógjai | |
| US8691530B2 (en) | Process for obtaining aspart insulin using a Pichia pastoris yeast strain | |
| AU660421B2 (en) | Growth factor compositions, preparation and use | |
| CA2089143C (en) | Growth factor compositions, preparation and use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FD9A | Lapse of provisional protection due to non-payment of fees |