NO328528B1

NO328528B1 - Fremgangsmate til rensing av et klavulansyresalt

Info

Publication number: NO328528B1
Application number: NO20025422A
Authority: NO
Inventors: Guo Zhang; John Mcknight
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 2000-05-13
Filing date: 2002-11-12
Publication date: 2010-03-08
Also published as: BR0110774A; EP1284978B2; SI1284978T2; MXPA02011192A; CA2408853C; ES2225524T3; DE60105016T2; PT1284978E; ES2225524T5; JP4954421B2; KR100827898B1; HUP0300869A3; US20060079676A1; HU228593B1; NZ522414A; BRPI0110774B8; PL206316B1; WO2001087891A1; CZ20023723A3; NO20025422D0

Description

Denne oppfinnelsen vedrører nye fremgangsmåter til fremstilling av klavulansyresalter i en renere tilstand.

Klavulansyre (Z)-(2R, 5R)-3-(2-hydroksyetyliden)-7-okso-4-oksa-1 -azabisyklo [3.2.0]heptan-2-karboksylsyre) er en P-laktamaseinhibitor som anvendes kommersielt som en komponent i farmasøytiske formuleringer, vanligvis på formen av dets farmasøytiske akseptable salter, særlig kaliumklavulanat. Klavulansyre fremstilles kommersielt ved dyrking av mikroorganismen Streptomyces clavuligerus, for eksempel som beskrevet i GB 1508977.

Klavulansyre kan ekstraheres fra kulturmediet på forskjellige måter. Normalt blir S. klavuligerus cellene først fjernet fra kulturmediet ved slike metoder som filtrering eller sentrifugering før slike ekstraksjonsprosedyrer startes. Klavulansyre kan ekstraheres fra dette klargjorte kulturmediet med løsningsmiddelekstraksjon fra kaldt klargjort kulturmedium som er justert til en sur pH. Ekstraksjon av hele næringsmediet er også mulig. Ved løsningsmiddel ekstraksjonsfremgangsmåten ekstraheres klavulansyren i et organisk løsningsmiddel. Etter separering av fasene finnes klavulansyre i løsningen i den organiske fasen.

Klavulansyren kan tilbakeekstraheres fra den organiske fasen til en ny vandig fase ved å gjøre bruk av den høyere vannløseligheten hos klavulansyresalter med organiske aminer, og å isolere et slikt aminsalt fra den vandige fasen. Ved en slik fremgangsmåte dannes aminsaltet som et mellomprodukt i omdanningsfremgangsmåten for råklavulansyre til et farmasøytisk akseptabelt salt. En slik fremgangsmåte er beskrevet i for eksempel EP-A-0 026 044, der en løsning av uren klavulansyre i et organisk løsningsmiddel kontaktes med t-butylamin til å danne t-butylaminsaltet av klavulansyre, som deretter isoleres. Andre lignende fremgangsmåter er kjent og disse benytter andre organiske aminer, slik som tertiært oktylamin (se EP-A-0 594 099 (Pharma Development) dietylamin, tri-(lavere alkyl) aminer, dimetylanilin og NN'-diisopropyletylendiamin. WO-A-93/25557 (SmithKline Beecham) beskriver en svært omfattende liste av aminer som kan benyttes på denne måten. WO-A-94/22873 (Gist Brocades) beskriver anvendelse av forskjellige tertiære diaminer slik som N,N,N',N'-tetrametyl-1,2-diaminoetan, N,N,N',N'-tetrametyl-l,6-diaminoheksan, 1,2-dipipeirdinoetan og dipiperidinometan. WO-A-96/20199 (Spurcourt) beskriver anvendelse av diaminoetere slik som bis (2-dimetylaminoetyl) eter. GB-A-2298201 (Spurcourt) beskriver anvendelse av forskjellige benzhydrylaminer. WO-A-96/33197 (LEK) beskriver anvendelse av ytterligere aminer inkludert symmetriske N,N'-alkyletylendiaminer, slik som N,N'-diisopropyl-etylendiamin, N,N'-dietylendiamin, N,N'-dibenzyletylendiamin ogN,N,N',N'-tetrametylendiamin. WO-A-98/21212 (Gist-Brocades) beskriver for eksempel en fremgangsmåte der aminene N,N,N',N'-tetrametylenetylendiamin, 1,3-bis(di-metylamino)-2-propanol, benzhydrylamin og bis (2-(dimetylamino) etyl)eter benyttes. WO-A-98/23622 (Biochemie) beskriver anvendelse av diisopropyl-etylen-diamin. WO-A-98/42858 (Cipan) beskriver en fremgangsmåte der et første alkalimetallsalt av klavulansyre fremstilles, og dette omdannes deretter til et andre alkalimetallsalt av klavulansyre. For eksempel fremstilles først natriumklavulanat, og deretter omdannes dette til kaliumklavulanat.

Etter isolering kan mellomproduktaminsaltet omdannes til et farmasøytisk nyttig salt av klavulansyre, særlig et alkalimetallsalt i særdeleshet kaliumklavulanat, generelt ved reaksjon av mellomproduktaminsaltet med en saltforløperforbindelse slik som kalium 2-etylheksanoat.

Fermenteringsprosessen hvorved klavulansyre fremstilles tilveiebringer også biprodukturenheter. Et antall slik urenheter er blitt identifisert som topper i HPLC

registreringen av rå klavulansyre, mellomproduktaminsalter og farmasøytisk akseptable salter av klavulansyre fremstilt ved konvensjonelle fremgangsmåter, men få er kjemisk identifisert. En slik urenhet er det nylig blitt identifisert av oppfinnerne av foreliggende søknad som N-succinyl tyrosin.

Det er ønskelig at så lite urenheter som mulig er tilstede i sluttproduktet av det farmasøytisk akseptable saltet av klavulansyre, og derfor at slike urenheter bør fjernes, enten under isoleringen av klavulansyre eller fra sluttproduktet. For eksempel kan slike urenheter fjernes fra det ovennevnte mellomprodukt av aminsaltet, ved omdannelsestrinnet for mellomproduktaminsaltet til det farmasøytiske akseptable saltet, eller fra sluttproduktsaltet.

Vellykket identifikasjon av denne urenheten som N-succinyl tyrosin har uventet gjort fremgangsmåter for å fremstille klavulansyresalter tilgjengelige som er forurenset med mindre N-succinyl tyrosin enn hva som hittil har vært mulig.

Denne fremgangsmåten kan være en rensefremgangsmåte der N-succinyl tyrosin fjernes fra et klavulansyresalt som er forurenset med dette. Derfor tilveiebringer tilveiebringer oppfinnelsen en rensefremgangsmåte der et klavulansyresalt, som er forurenset med eller antatt å være forurenset med N-succinyl tyrosin, utsettes for betingelser som er valgt for å fjerne N-succinyl tyrosin. Slike betingelser kan være kjemiske betingelser, for eksempel behandling med en eller flere egnede reagenser. Passende kan klavulansyresaltet, som er forurenset eller antatt å være forurenset med N-succinyl tyrosin, utsettes for slike betingelser ved eksponering for et flytende medium, for eksempel et organisk løsningsmiddel eller organisk løsningsmiddel- vannblanding, som inneholder et slikt reagens. En slik fremgangsmåte kan innebære vasking av klavulansyresaltet i en fast tilstand med et slikt flytende medium, eller krystallisasjon av klavulansyresaltet fra et slikt flytende medium. Alternativt kan klavulansyresaltet som er eller er antatt å være forurenset med N-succinyl tyrosin, eksponeres for et egnet reagens på fast form.

Alternativt kan rensefremgangsmåten være en fremgangsmåte der et klavulansyresalt som er eller er antatt å være forurenset med N-succinyl tyrosin, er suspendert eller oppløst i et flytende medium, for eksempel et organisk løsningsmiddel eller organisk løsningsmiddel- vannblanding, og er eksponert for et materiale som er valgt for å absorbere N-succinyl tyrosin og derved fjerne N-succinyl tyrosin fra saltet.

Alternativt kan fremgangsmåten være en preparativ fremgangsmåte der klavulansyresaltet fremstilles under betingelser som valgt for å minimere dannelsen av N-succinyl tyrosin og/eller dets bibeholdelse i klavulansyresalt produktet. For eksempel kan klavulansyresaltet fremstilles i et flytende medium, for eksempel et organisk løsningsmiddel, et vandig medium, eller en blanding av et organisk løsningsmiddel, som inneholder reagenser som fjerner N-succinyl tyrosin, eller utsettes for kjemiske eller fysikalske betingelser som fjerner N-succinyl tyrosin.

Saltet av klavulansyre som renses eller fremstilles ved fremgangsmåtene over kan være et klavulansyreaminsalt, for eksempel med en hvilken som helst av aminene som er referert til over, i særdeleshet tertiært butylamin, og dette aminsaltet kan deretter omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt av klavulansyre som er et sluttprodukt, slik som et alkalimetallsalt, for eksempel kaliumklavulanat. Alternativt kan saltet være et metallsalt av klavulansyre, for eksempel et alkalimetallsalt av klavulansyre, i særdeleshet kaliumklavulanat.

Det er videre uventet funnet at urenhetsnivået, slik som det ovennevnte N-succinyl tyrosin, i et klavulansyresalt kan reduseres dersom saltet eksponeres for et valgt pH område. Det er et formål ved denne oppfinnelsen å anvende dette funnet ved frembringelsen av forbedrede fremgangsmåter til fremstilling av slike farmasøytiske akseptable salter.

Ifølge denne oppfinnelsen tilveiebringes en fremgangsmåte til fremstilling av et farmasøytisk akseptabelt salt av klavulansyre, som omfatter å vaske et klavulansyresalt i et vaskemedium, eller omkrystallisering av et klavulansyresalt fra et omkrystallisasjonsmedium, eller fremstilling av et aminsalt av klavulansyre ved en reaksjon mellom et aminsalt av klavulansyre og en metallforløperforbindelse, i et flytende medium, kjennetegnet ved at vaskemediet, omkrystallisasjonsmediet eller det flytende mediet har en pH på 3,5-5,5.

Betegnelsen "pH" slik den her er benyttet inkluderer den konvensjonelle bruken av betegnelsen pH, som logaritmen av resiprokverdien av hydrogenionkonsentrasjonen. Uttrykket pH slik det her er benyttet inkluderer også den observerte pH, det vil se pH som målt ved å eksponere mediet for et konvensjonelt pH meter av kjent type, passende kalibrert ved kjente metoder. Normalt vil mediene som benyttes ved fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen inneholde noe vann.

Behandling av saltet på denne måten ved denne fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan redusere nivået av en eller flere urenheter, i særdeleshet nivået av N-succinyl tyrosin, i saltet, eller i ytterligere klavulansyresalter, for eksempel et farmasøytisk akseptabelt salt, som er fremstilt fra saltet.

I en første form av fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen kan saltet vaskes med mediet, det vil si et vaskemedium, med en pH på 3,5 - 5,5. Saltet kan være et aminsalt av klavulansyre, for eksempel med en hvilken som helst av aminene som det refereres til over, særlig tertiært butylamin, og dette aminsaltet kan vaskes med vaskemediet, og deretter kan aminsaltet eventuelt videre omdannes til et farmasøytisk akseptabelt klavulansyresalt som er sluttproduktet, slik som et alkalimetallsalt, for eksempel kaliumklavulanat. Alternativt kan saltet som er vasket være et metallsalt av klavulansyre, for eksempel et alkalimetallsalt av klavulansyre, særlig kaliumklavulanat.

Vaskemediet kan være et vandig vaskemedium ved en slik pH, for eksempel surgjort vann eller fortrinnsvis en blanding av vann og et vann- blandbart organisk

løsningsmiddel slik som en C1-7 alkylalkohol, som typisk inneholder 0,5-20% vekt:vekt vann, ved en slik pH. Det vandige vaskemediet, for eksempel vann eller en slik blanding av vann og et vann- blandbart organisk løsningsmiddel, kan passende være surgjort med

en mineralsyre, slik som svovelsyre, saltsyre eller salpetersyre, eller en organisk syre, for eksempel karboksylsyre slik som en C 1.7 alkansyre slik som edikksyre.

Denne første formen av fremgangsmåten kan derfor være en fremgangsmåte der et utgangsklavulanatsyresalt tilveiebringes og inneholder en eller flere urenheter slik som N-succinyl tyrosin, og saltet vaskes med vaskemediet, for derved å fremstille et produktklavulansyresalt der nivået av en eller flere av urenhetene er lavere.

Denne første formen av fremgangsmåten kan derfor være en fremgangsmåte der en eller flere av urenhetene slik som N-succinyl tyrosin, fjernes fra et utgangsklavulansyresalt, ved å vaske utgangsklavulansyresaltet med vaskemediet.

I en andre form av fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen kan saltet omkrystalliseres fra mediet ved pH på 3,5 - 5,5. For eksempel kan et aminsalt omkrystalliseres fra et slikt omkrystallisasjonsmedium, og kan deretter omdannes til et farmasøytisk akseptabelt klavulansyresalt som er sluttproduktet, slik som et alkalimetallsalt, for eksempel kaliumklavulanat ved metoder slik som de det er referert til over, for eksempel reaksjon ned kalium 2-etylheksanoat.

Ved denne omkrystalliseringsfremgangsmåten kan saltet, for eksempel aminsaltet, passende være oppløst i et vandig medium, for eksempel surgjort vann, eller en blanding av vann og et vann- blandbart organisk løsningsmiddel slik som en C 1.7 alkylalkohol. Fortrinnsvis er løsningskonsentrasjonen høy, for eksempel 10-40% eller mer, men det ser ikke ut til å være noen teoretisk øvre grense. Det vandige mediet kan initielt være ved en pH på mindre enn 6,5, eller pH kan justeres når den vandige løsningen er fremstilt, for eksempel kan den vandige løsningen deretter surgjøres med en syre, passende en mineralsyre, slik som svovelsyre, saltsyrer eller salpetersyre, eller en organisk syre for eksempel karboksylsyre slik som en C 1.7 alkansyre slik som edikksyre.

Saltet, for eksempel et aminsalt, kan deretter isoleres fra den vandige løsningen. Dette kan oppnås for eksempel ved krystallisering ved å blande løsningen, for eksempel en vandig løsning, med et utfellingsløsningsmiddel, slik som et vann- blandbart keton. Egnede ketoner inkluderer alifatiske ketoner, for eksempel et di-Ci-7 alkylketon, og aceton er foretrukket. Solvater av aminklavulanatsalter med slik ketoner er kjent og aminsaltet kan utfelle som ketonsolvatet. For eksempel kan løsningen fortynnes med et overskudd, for eksempel et 5-50 ganger overskudd av utfellingsløsningsmidlet for eksempel av et keton. Avkjøling av den fortynnede løsningen kan hjelpe til å forbedre utbytte av de utfelte krystaller av aminsaltet, for eksempel som et solvat, som kan isoleres.

Denne andre formen av fremgangsmåten kan derfor være en fremgangsmåte der et utgangssalt av flavulansyre som inneholder en eller flere urenheter slik som N-succinyl tyrosin frembringes, og saltet omkrystalliseres i omkrystalliseringsmediet, for derved å fremstille et produktklavulansyresalt der nivået av en eller flere urenheter er lavere.

Denne andre formen av fremgangsmåten kan derfor være en fremgangsmåte der en eller flere urenheter fjernes fra utgangssaltet av klavulansyre ved omkrystallisering av utgangssaltet av klavulansyre fra omkrystalliseringsmediet.

En tredje form av fremgangsmåten kan være en prepartiv fremgangsmåte der et aminsalt av klavulansyre fremstilles ved å reagere klavulansyre med et amin i et flytende medium ved en pH på 3,5 - 5,5.

Denne tredje formen av fremgangsmåten kan benyttes for å fremstille aminsalter av klavulansyre som inneholder et lavere nivå av urenheter slik som N-succinyl tyrosin enn hva som forekommer i aminsalter av klavulansyre som fremstilles ved alternative eller tidligere kjente metoder.

Ved en foretrukket utførelsesform av denne tredje formen av fremgangsmåten utføres reaksjonen i et tofasesystem, som er en organisk løsningsmiddelfase som inneholder klavulansyren, og en vandig fase hvori aminsaltet er ekstrahert og som er ved pH 3,5 - 5,5. Den vandige fasen kan derfor passende omfatte en vandig løsning eller suspensjon av aminet, særlig en vandig løsning eller suspensjon av tertiært butylamin. Den organiske løsningsmiddelfasen er fortrinnsvis i det alt vesentlige ikke- blandbar med vann, det vil si selv om noe blanding av løsningsmidlet med vann kan forekomme, gjennom det meste av fasediagrammet er to faser dannet.

For eksempel kan et tofasesystem etableres, som omfatter en organisk løsningsmiddelfase som inneholder oppløst klavulansyre, og en separat vandig fase, og det organiske aminet kan tilføres til dette tofasesystemet, for eksempel injiseres i den vandige fasen, med egnede blandebetingelser for eksempel røring eller turbulens, slik at aminsaltet ekstraheres inn i den vandige fasen når det dannes. Typisk kan den organiske fasen av en konsentrasjon på 5-100 g/l for eksempel 10 til 40 g/l i klavulansyre, for eksempel ca. 30 g/l. Egnede løsningsmidler for den organiske fasen inkluderer i det alt vesentlige vann- ikke blandbare Ci.7 alkyl-Ci-7 alkanoatestere slik som etylacetat og tertiært butylacetat, og di-Ci.7 alkylketoner slik som metylisobutylketon. En temperatur på ca. 0-5°C er foretrukket for denne reaksjonen. Den organiske løsningsmiddelfasen kan passende være produktet av en ekstraksjon av det organiske løsningsmidlet av en eventuelt for-renset, for eksempel filtrert og karbonbehandlet,

fermenteringsnæringsløsning hvori klavulansyre er blitt dannet.

Den vandige fasen kan passende tilveiebringes med tilbakeekstraksjon fra den organiske løsningsmiddelfasen ved en sirkulerende ekstraksjonssløyfe slik at en høy konsentrasjon av aminsaltet kan bygges opp i den vandige fasen. Den vandige fasen kan konsentreres til en høy konsentrasjon, for eksempel 25 vekt-% eller mer ved for eksempel sirkulasjon av den vandige ekstraksjonssløyfen i en passende tid.

Generelt surgjøres næringsløsningen til pH under 2,0 når klavulansyre ekstraheres fra en vandig næringsløsning for å danne en slik organisk ekstraksjonsfase. Kontrollert tilsetning av det organiske aminet til tofasesystemet som er beskrevet over kan anvendes for å regulere pH i den vandige fasen, som kan kontrolleres online. En foretrukket pH er igjen under 5,5.

Aminsaltet kan deretter isoleres fra den vandige fasen. Dette kan oppnås for eksempel ved krystallisasjon ved å blande den vandige løsningen med et utfellingsløsningsmiddel, slik som et vann- blandbart keton som beskrevet over, og denne krystallisasjonen kan utføres på en måte som er analog med omkrystalliseirngsprosessen som beskrevet over.

En fjerde form av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan være en preparativ fremgangsmåte der et metallsalt av klavulansyre dannes som et produkt ved en reaksjon mellom et aminsalt av klavulansyre og en metallsaltforløperforbindelse, i et flytende medium ved pH på 3,5 - 5,5. Denne fjerde formen av fremgangsmåten kan benyttes for å fremstille metallsalter av klavulansyre som inneholder et lavere nivå av urenheter slik som N-succinyl tyrosin enn hva som forekommer i metallsalter av klavulansyre som fremstilles ved alternative eller tidligere kjente metoder.

Foretrukne produktmetallsalter av klavulansyre som kan fremstilles ved denne fjerde formen av fremgangsmåten er salter av alkalimetaller og jordalkalimetaller, særlig kaliumklavulanat.

Denne fjerde formen av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen ser ut til å være egnet for anvendelse med alle metallsaltforløperforbindelser som kan omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt av klavulansyre ved reaksjon med et aminsalt av klavulansyre. Generelle klasser av egnede metallsaltforløperforbindelser inkluderer basiske anioner slik som hydrogenkarbonat, karbonat hydrogenfosfat, og særlig anioner av svake organiske karboksylsyrer, slik som alkansyre med formel R-CO2H der R er Ci. 20 alkyl, for eksempel Ci.8 alkyl, for eksempel salter av edikksyre, propionsyre og etylheksansyre, slik som 2-etyl heksansyre. Noen eksempler på forløperforbindelser innenfor disse generelle klassene inkluderer natrium- eller kaliumhydrogenkarbonat, kaliumhydrogenfosfat og kalsiumkarbonat. En foretrukket metallsaltforbindelse for kaliumklavulanat er kalium 2-etylheksanoat.

Reaksjonen ifølge denne fjerde formen av fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen utføres fortrinnsvis med aminsaltet i løsning eller suspensjon i en blanding av vann-blandbart organisk løsningsmiddel og vann, for eksempel en Ci.8 alkylalkohol eller en blanding av en slik alkohol med vann, for eksempel en isopropanol/vannblanding. Egnede forhold for en slik løsningsmiddel: vannblanding for å tilpasse spesielle behov kan bestemmes eksperimentelt, for eksempel en løsningsmiddel: vannblanding som inneholder 1-10% vekt:vekt vann, for eksempel ca. 1-5% vekt:vekt vann. Aminsaltet kan oppløses i et slikt løsningsmiddel som enten kan være ved pH 3,5 - 5,5, eller som kan reguleres til denne pH ved tilsetning av en egnet syre, for eksempel en mineralsyre eller en organisk syre som over. Aminsaltet kan passende foreligge i en løsningskonsentrasjon 0,1 - 1,0 M, for eksempel ca. 0,5 M i klavulanatenhet. En foretrukket pH er 5,5-5,0.

Selv om blanding av aminsaltet og forløperforbindelsen i en hvilken som helst rekkefølge er omfattet av oppfinnelsen, tilsettes metallsaltforløperen fortrinnsvis til en alkohol, for eksempel isopropanolløsning. En egnet løsningskonsentrasjon for denne forløperforbindelsesløsningen er 0,5-3,5 M, for eksempel ca. 2M. Langsom tilsetning av forløperløsningen er foretrukket, fortrinnsvis med røring og fortrinnsvis avkjøling etter tilsetning til en temperatur på under romtemperatur, for eksempel 0-5°C.

Metallsaltet av klavulansyreproduktet kan dannes som et bunnfall fra løsning. Utfelling av produktmetallsaltet av klavulansyre fra løsning kan anspores ved å blande løsningen med et utfellingsløsningsmiddel, for eksempel isopropanol, som beskrevet over. Det faste produktet kan isoleres fra reaksjonsmediet for eksempel ved filtrering og vasking av produktet.

I hver av fremgangsmåtene over kan pH i mediet som er definert over resultere i reduksjon av mengden av en eller flere urenheter slik som N-succinyl tyrosin i produktet relativt til analoge fremgangsmåter ved høyere pH.

Disse fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen kan omfatte en del av en felles fremgangsmåte til fremstilling av kaliumklavulanat fra råklavulansyre, for eksempel som dannet i en fermenteringsnæringsløsning, for eksempel hvori aminsaltet er benyttet som et mellomprodukt.

Denne felles fremgangsmåten kan omfatte trinnene (i) fermentering av en mikroorganisme som fremstiller en vandig næringsløsning som inneholder klavulansyre, (ii) ekstraksjon av klavulansyren i et organisk løsningsmiddel, (iii) omdanning av klavulansyren til et aminsalt av klavulansyre, (iv) eksponering av aminsaltet for en pH på 3,5 - 5,5, (v) omdanning av aminsaltet til kaliumklavulanat. Vaske- og/eller omkrystalliseringsfremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen kan for eksempel benyttes for salter av klavulansyre som er fremstilt som et produkt av et eller begge av trinnene(iii) og/eller (v). De preparative fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen kan for eksempel benyttes for en eller begge av fremstillingstrinnene(iii) og/eller (v), som beskrevet over.

Ved fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen som omfatter et farmasøytisk akseptabelt metallsalt av klavulansyre er et foretrukket salt kaliumklavulanat.

Ifølge denne oppfinnelsen tilveiebringes således en fremgangsmåte til fremstilling av kaliumklavulanat fra råklavulansyre, kjennetegnet ved at et mellomproduktaminsalt fremstilt fra råklavulansyre eksponeres for en pH på 3,5-5,5 i et flytende medium, og mellomproduktaminsaltet omdannes påfølgende til kaliumklavulanat.

Ved fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelsen som omfatter et aminsalt av klavulansyre er et foretrukket aminsalt det tertiære butylaminsaltet av klavulansyre.

Dette kan utføres, ved en kjent (se for eksempel EP-A-0 026 044, hvorved innholdet av denne her er inkludert ved referanse) reaksjon, ved reaksjon av tertiært butylamin med klavulansyre, og enkel isolering som et acetonsolvat. Både det tertiære butylaminsaltet og dets acetonsolvat kan lett omdannes til farmasøytiske akseptable salter av klavulansyre, for eksempel kaliumklavulanat, for eksempel som beskrevet i EP 0026044A. Imidlertid ser fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen i prinsippet ut til å være anvendbare for alle de aminsaltene som er kjent for å være nyttige som mellomprodukter ved omdanning av klavulansyre til et farmasøytisk akseptabelt salt slik som kaliumklavulanat. Som en konsekvens av dette ser disse fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen i prinsippet ut til å være effektive med alle slik aminer.

Eksempler på slike aminer, og deres tilsvarende aminsalter er for eksempel beskrevet i publikasjonene som det er referert til over, og inkluderer for eksempel amin poly-, for eksempel di-, klavulanatsalter dersom aminet har mer enn en amino-enhet. Andre egnede aminsalter inkluderer de som er referert til i publikasjonene som er nevnt over, for eksempel tertiært oktylamin, dietylamin, tri-(lavere alkyl) aminer, dimetylanilin, NN'-diisopropyl-etylendiamin, tertiære diaminer slik som N,N,N',N'-tetrametyl-l,2-diaminoetan, N,N,N^N'-tetrametyl-l,6-diaminoheksan, 1,2-dipiperidinoetan og dipiperidinometan, diaminoetere slik som bis (2-dimetylaminoetyl)eter, benzhydrylaminer, N,N'-alkyletylendiaminer, slik som N,N'-diisopropyletylen diamin, N,N'-dietylen diamin, N,N'-dibenzyletylen diamin, N,N,N',N'-tetrametylendiamin, N,N,N W'-tetrametyletylendiamin, 1,3 -bis(di-metylamino)-2-propanol,benzhydrylamin og bis (2-(dimetylamino)etyl) eter, og diisopropyletylendiamin.

Fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer videre et produkt, aminsalt av klavulansyre, som er et produkt av en hvilken som helst av de ovenforbeskrevne prosessene, særlig tertiært betylaminklavulanat.

Fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer videre et produkt, farmasøytisk akseptabelt metallsalt av klavulansyrer, som er et produkt av en hvilken som helst av de ovenfor beskrevne fremgangsmåtene, særlig kaliumklavulanat.

Disse produktene er karakterisert ved uenhetsnivåer, særlig av N-succinyl tyrosin, som er mindre enn de som kan oppnås via kjente fremgangsmåter, særlig ved fremgangsmåten som er utført i et medium med en pH som er over den definerte.

Oppfinnelsen vil nå bli beskrevet kun ved hjelp av eksempler.

Eksempel 1,2, og 3 er uttrykt som reduksjon av den totale mengden av urenheter i produktsaltet av klavulansyre, og eksempel 4, 5 og 6 er uttrykt som reduksjon av den spesifikke urenheten N-succinyl tyrosin.

Eksempel 1: Surgjøring av aminsalt under aminsalt krystallisering

30 g tertiært-butylamin ("t-BA") klavulanatsalt ble oppløst i vann for å gi en 30% pfa

(det vil si beregnet som "pure free acid", det vil si klavulansyreenhet ved vekt:volum)

løsning. pH i løsningen ble målt og surgjort til pH 4,5 med tilnærmet 1,1 ml 50% svovelsyre eller konsentrert salpetersyre. Et 5x volum av aceton ble tilsatt og blandingen ble rørt i 15 minutter. Ytterligere aceton ble tilsatt i løpet av 20 minutter opptil 35x den vandige volumet. Til nå ble aminsaltløsningen holdt ved romtemperatur. Produkt t-BA saltet utkrystalliserte og ble avkjølt ved 0-5°C i 60 minutter og samlet opp ved filtrering. Produktet ble vasket med 600 ml aceton, før tørking i 12 timer under vakuum. Denne prosedyren ble gjentatt ved "naturlig" pH uten syretilsetning, det vil si ca. pH 7,5. t-BA saltet som ble oppnådd ved å benytte disse prosedyrene ble deretter omdannet til produktkaliumklavulanatet ved å benytte en kjent metode, og nivåer av samlede urenheter i kaliumklavulanatet som ble fremstilt ved å benytte prøvene av t-BA saltet ble målt til følgende:

Eksempel 2: Fremstilling av amin klavulanatsalt fra klavulansyre og amin under sure betingelser.

1001 av et vandig konsentrat av klavulansyre (ca. 20-40 g/l), fra en filtrert konsentrert fermenteringsnæringsløsning ble løsningsmiddel ekstrahert ved pH 1,5 til metylisobutylketon ("MIBK"). Den klavulansyrerike MIBK ble behandlet med karbon

(171) og tilbake ekstrahert i vann som var regulert til pH 4,5 ved kontrollert injeksjon av 50% MIBK løsning av t-BA. Ved å kontrollere t-BA tilsetningshastigheten kunne pH i den vandige fasen settes, og pH 4,5 og pH 5,4 ble benyttet i separate eksperimenter. Med en gang den vandige tilbakeekstraherte løsningen hadde nådd en passende krystalliseringskonsentrasjon ble en 100 ml alikvot krystallisert ved tilsetning av 35 volumer aceton og det utfelte produktet ble isolert som i eksempel 1 over. Det videre krystalliserte aminet ble omdannet til kaliumsalt og analysert med hensyn på totalt urenhetsnivå. Dette ble deretter gjentatt med en vannfase med pH 5,4. Ved å benytte pH 4,5 ble nivået av samlede urenheter i kaliumklavulanatet redusert med 50% relativt til nivået ved pH 5,4.

Eksempel 3. Omdanning av et aminsalt til kaliumklavulanat

25 g av t-BA klavulanat ble oppløst i en blanding av isopropanol (81 ml) og destillert vann (10 ml) og pH ble redusert til pH 6,8 med isedikksyre. Under røring ble ytterligere 145 ml isopropanol tilsatt og 59,5 ml kalium 2-etylheksanoat (1,92N) oppløst i isopropanol ble tilsatt dråpevis i løpet av 20 minutter. Den så dannede slurryen ble rørt i 120 minutter i et isbad ved 0-5°C og filtrert. Kaliumklavulanatkaken ble vasket med aceton (120 ml og 200 ml) og tørket under vakuum med nitrogentilstrømning. Endring av volumet av isedikksyre som ble tilsatt varierte pH i oppløsningsløsningen. Resultater indikerer effekten av mengden av totale urenheter i kaliumklavulanatet ("Kclav") og samlet utbytte av kaliumklavulanat er vist i tabellen nedenfor.

Eksperimentene beskrevet i eksempel 3 over ble gjentatt ved å benytte andre syrer enn edikksyre for å oppnå den spesifiserte pH, for eksempel saltsyre ble benyttet med lignende resultater.

Eksempel 4: Surgjøring av aminsalt ved aminsaltkrystallisering

løsning. pH i løsningen ble målt og surgjort til pH 4,5 med tilnærmet 1,1 ml 50% svovelsyre eller konsentrert salpetersyre. Et 5x volum av aceton ble tilsatt og blandingen ble rørt i 15 minutter. Ytterligere aceton ble tilsatt i løpet av 20 minutter opp

til 35x det vandige volumetTil nå ble aminsaltløsningen holdt ved romtemperatur. Produkt t-BA saltet utkrystalliserte og ble avkjølt ved 0-5°C i 60 minutter og samlet opp ved filtrering. Produktet ble vasket med 600 ml aceton, før tørking i 12 timer under vakuum. Denne prosedyren ble gjentatt ved "naturlig" pH uten syretilsetning, det vil si ca. pH 8,5. N-succinyl tyrosin nivået i t-BA saltet som var oppnådd ved å benytte disse prosedyrene ble deretter målt som følger:

Eksempel 5: Fremstilling av amin klavulanatsalt fra klavulansyre og amin under sure betingelser.

1001 av et vandig konsentrat av klavulansyre (ca. 20-40 g/l), fra filtrert konsentrert fermenteringsnæringsløsning ble løsningsmiddelekstrahert ved pH 1,5 til metyl isobutylketon ("MIBK"). Klavulansyrerik MIBK ble behandlet med karbon (171) og tilbakeekstrahert i vann som var regulert til pH 4,5 ved kontrollert injeksjon av en 50% MIBK løsning av t-BA. Ved å kontrollere t-BA tilsetningshastigheten kunne pH for den vandige fasen settes, og pH 4,5 og pH 5,4 ble benyttet i separerte eksperimenter. Med en gang den vandige tilbakeekstraksjonsløsningen hadde nådd en egnet krystallisasjonskonsentrasjon, ble en 100 ml alikvot krystallisert ved tilsetning av 35 volumer av aceton og det utfelte produktet ble isolert som i eksempel 1 over. Det påfølgende krystallisert aminet ble omdannet til kaliumsalt og analysert med hensyn på N-succinyl tyrosin nivåer. Dette ble deretter gjentatt med en vandig fase med pH 5,4. Ved å benytte pH 4,5 ble nivået av N-succinyl tyrosin urenhet i kaliumklavulanatet redusert 26 ganger relativt til nivået ved en pH på 5,4.

Eksempel 6. Omdanning av et aminsalt til kaliumklavulanat.

25 g av t-BA klavulanat ble oppløst i en blanding av isopropanol (81 ml) og destillert vann (10 ml), og pH ble redusert til pH 6,8 med isedikksyre. Under røring ble ytterligere 145 ml isopropanol tilsatt og 59,5 ml kalium 2-etylheksanoat (1,92N) oppløst i isopropanol tilsatt dråpevis i løpet av 20 minutter. Den så dannede slurryen ble rørt i 120 minutter i et isbad ved 0,5°C og filtrert. Kaliumklavulanatkaken ble vasket med

aceton (120 ml og 200 ml) og tørket under vakuum med nitrogentilstrømning. Ved å endre volumet av isedikksyre som ble tilsatt varierte pH i oppløsningsløsningen. Resultater indikerer effekten på mengden av N-succinyl tyrosin urenhet i kaliumklavulanatet ("Kclav") og samlet utbytte av kaliumklavulanat er vist i tabellen nedenfor.

Eksemplene som er beskrevet i eksempel 6 over ble gjentatt ved å benytte andre syrer enn edikksyre for å oppnå den spesifiserte pH, for eksempel saltsyre ble benyttet med lignende resultater.

Claims

1. Fremgangsmåte til fremstilling av et farmasøytisk akseptabelt salt av klavulansyre, som omfatter å vaske et klavulansyresalt i et vaskemedium, eller omkrystallisering av et klavulansyresalt fra et omkrystallisasjonsmedium, eller fremstilling av et aminsalt av klavulansyre ved en reaksjon mellom et aminsalt av klavulansyre og en metallforløper-forbindelse, i et flytende medium, karakterisert ved at vaskemediet, omkrystallisasjonsmediet eller det flytende mediet har en pH på 3,5-5,5.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at saltet vaskes med et vaskemedium som har en pH på 3,5-5,5.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at saltet som er vasket er et mellomproduktaminsalt av klavulansyre, for påfølgende omdanning til et sluttprodukt som er et farmasøytisk akseptabelt metallsalt av klavulansyre.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at saltet som er vasket er et metallsalt av klavulansyre.

5. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 2-4, karakterisert ved at vaskemediet er en blanding av vann og et vann-blandbart organisk løsningsmiddel som har en pH på 3,5-5,5.

6. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 2-5, karakterisert ved at den omfatter en fremgangsmåte der et utgangssalt av klavulansyre som inneholder en eller flere urenheter tilveiebringes, og saltet vaskes med vaskemediet, for derved å fremstille et klavulansyresaltprodukt der nivået av en eller flere urenheter er lavere.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at klavulansyresaltet omkrystalliseres fra et omkrystallisasjonsmedium som har en pH på 3,5-5,5.

8. Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at klavulansyresaltet er et mellomproduktaminsalt av klavulansyre for påfølgende omdannelse til et sluttprodukt som er et farmasøytisk akseptabelt metallsalt av klavulansyre.

9. Fremgangsmåte ifølge krav 7 eller 8, karakterisert ved at saltet oppløses i et vandig medium som er en pH på 3,5-5,5, eller som videre blir regulert til pH på 3,5-5,5, og deretter isoleres saltet fra den vandige løsningen ved krystallisasjon ved å blande løsningen med et utfellingsløsningsmiddel.

10. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 7-9, karakterisert ved at den omfatter en fremgangsmåte der et utgangsklavulansyresalt som inneholder en eller flere urenheter tilveiebringes, og saltet omkrystalliseres fra omkrystallisasjonsmediet, for derved å fremstille et produktsalt av klavulansyre der nivået av en eller flere urenheter er lavere.

11. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter en preparativ fremgangsmåte der amin- eller metallsaltet av klavulansyre fremstilles i et flytende medium som har en pH på 3,5-5,5.

12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at den er en preparativ fremgangsmåte der aminsaltet av klavulansyre fremstilles, og som utføres i et tofasesystem, som er en organisk løsningsmiddelfase som inneholder klavulansyre, og en vandig fase hvori aminsaltet er ekstrahert og som har en pH på 3,5-5,5.

13. Fremgangsmåte ifølge krav 1, som er en preparativ fremgangsmåte der et metallsalt av klavulansyre dannes som et produkt ved en reaksjon mellom et aminsalt av klavulansyre og en metallsaltforløperforbindelse, i et flytende medium som har en pH på 3,5-5,5, og som er karakterisert ved at metallsaltet, kaliumklavulanat, fremstilles.

14. Fremgangsmåte ifølge krav 1, som er en preparativ fremgangsmåte der metallsaltet av klavulansyre dannes som et produkt ved en reaksjon mellom et aminsalt av klavulansyre og en metallsaltforløperforbindelse, i et flytende medium som har en pH på 3,5-5,5, og er karakterisert ved at den utføres med aminsaltet i løsning i en blanding av et vann-blandbart organisk løsningsmiddel og vann enten ved pH på 3,5-5,5, eller som videre reguleres til pH på 3,5-5,5 og metallsaltforløperen tilsettes til denne løsningen av aminsaltet.

15. Fremgangsmåte til fremstilling av kaliumklavulanat fra råklavulansyre, karakterisert ved at et mellomproduktaminsalt fremstilt fra råklavulansyre eksponeres for en pH på 3,5-5,5 i et flytende medium, og mellomproduktaminsaltet omdannes påfølgende til kaliumklavulanat.

16. Fremgangsmåte ifølge krav 15, karakterisert ved at den omfatter trinnene (i) fermentering av en mikroorganisme som produserer en vandig næringsløsning som inneholder klavulansyre, (ii) ekstraksjon av klavulansyren til et organisk løsningsmiddel, (iii) omdanning av klavulansyren til et mellomproduktaminsalt av klavulansyre, (iv) eksponering av aminsaltet for en pH på 3,5-5,5, (v) omdanning av aminsaltet til kaliumklavulanat.

17. Fremgangsmåte ifølge krav 15 eller 16, karakterisert ved at mellomproduktaminsaltet er tertiært butylaminklavulanat.

18. Fremgangsmåte ifølge krav 15,16 eller 17, karakterisert v e d at omdannelsen av klavulansyren til mellomproduktaminsaltet i trinn (iii) utføres ved en pH på 3,5-5,5.

19. Fremgangsmåte ifølge krav 6 eller 10, karakterisert ved at de nevnte urenhetene er N-succinyl tyrosin.