NO314017B1 - Fremgangsmåter for in vivo-avlevering av biologiske stoffer og sammensetninger som er nyttige for dette - Google Patents

Fremgangsmåter for in vivo-avlevering av biologiske stoffer og sammensetninger som er nyttige for dette Download PDF

Info

Publication number
NO314017B1
NO314017B1 NO19953278A NO953278A NO314017B1 NO 314017 B1 NO314017 B1 NO 314017B1 NO 19953278 A NO19953278 A NO 19953278A NO 953278 A NO953278 A NO 953278A NO 314017 B1 NO314017 B1 NO 314017B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
hemoglobin
composition according
oxygen
agents
shell
Prior art date
Application number
NO19953278A
Other languages
English (en)
Other versions
NO953278D0 (no
NO953278L (no
Inventor
Mark W Grinstaff
Patrick Soon-Shiong
Michael Wong
Paul A Sandford
Kenneth S Suslick
Neil P Desai
Original Assignee
Vivorx Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26697503&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO314017(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/023,698 external-priority patent/US5439686A/en
Priority claimed from US08/035,150 external-priority patent/US5362478A/en
Application filed by Vivorx Pharmaceuticals Inc filed Critical Vivorx Pharmaceuticals Inc
Publication of NO953278D0 publication Critical patent/NO953278D0/no
Publication of NO953278L publication Critical patent/NO953278L/no
Publication of NO314017B1 publication Critical patent/NO314017B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0026—Blood substitute; Oxygen transporting formulations; Plasma extender
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/12—Macromolecular compounds
    • A61K49/126—Linear polymers, e.g. dextran, inulin, PEG
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1821—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1824—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles
    • A61K49/1827—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle
    • A61K49/1851—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with an organic macromolecular compound, i.e. oligomeric, polymeric, dendrimeric organic molecule
    • A61K49/1863—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with an organic macromolecular compound, i.e. oligomeric, polymeric, dendrimeric organic molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or derivative thereof, e.g. chitosan, chitin, cellulose, pectin, starch
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
    • A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
    • A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
    • A61K49/223—Microbubbles, hollow microspheres, free gas bubbles, gas microspheres
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
    • A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
    • A61K49/226—Solutes, emulsions, suspensions, dispersions, semi-solid forms, e.g. hydrogels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/5052—Proteins, e.g. albumin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5161—Polysaccharides, e.g. alginate, chitosan, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Acoustics & Sound (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår in vivo-avlevering av biologiske stoffer. Ifølge et aspekt er det biologiske stoffet assosiert med et polymert skall formulert fra et bioforenlig materiale. Det biologiske stoffet kan være assosiert med det polymere skallet selv og/eller det biologiske stoffet, eventuelt suspendert/dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, kan være omsluttet av det polymere skallet. Ifølge et annet aspekt, blir det biologiske stoffet assosiert med polymert skall administrert til et individ, eventuelt dispergert i en passende bioforenlig væske.
Bakgrunn for oppfinnelsen
Mikrokapsler og fremmedlegemer til stede i blodet blir generelt fjernet fra sirkulasjon av "blodfiltreirngsorganer", nemlig nyrene, lungene og leveren. Partikulert materiale som finnes i normalt helblod omfatter røde blodceller (typisk 8 mikron i diameter), hvite blodceller (typisk 6-8 mikron i diameter) og blodplater (typisk 1-3 mikron i diameter). Mikrosirkulasjon i de fleste organer og vev tillater den frie passasjen av disse blodcellene. Når mikrotromboli (blodklumper) større enn 10-15 mikron, er til stede i sirkulasjon, er den en risiko for infarktdannelse eller blokkering av kapillærene, noe som fører til iskemi eller oksygenmangel og mulig vevsdød. Injeksjon i sirkulasjons-systemet av partikler større enn 10-15 mikron i diameter, må derfor unngås. En suspensjon av partikler mindre enn 7-8 mikron er imidlertid relativt sikker og har blitt benyttet for levering av farmasøytisk aktive midler i form av liposomer og emulsjoner, næringsmidler og kontrastmedier for avbildningsanvendelse.
Størrelsen av partiklene og deres leveringsmåte bestemmer deres biologiske oppførsel. Strand et al. [i Microspheres-Biomedical Applications, utg. A. Rembaum, s. 193-227, CRC Press (1988)] har beskrevet at skjebnen til partikler er avhengig av deres størrelse. Partikler i størrelsesområdet noen få nanometer (nm) til 100 nm går inn i de lymfatiske kapillærene etter interstitiell injeksjon og fagocytose kan opptre i lymfenodene. Etter intravenøs/intraarteriell injeksjon, vil partikler mindre enn omkring 2 mikron hurtig bli fjernet fra blodstrømmen av det retikulo-endtothelie-systemet (RES), også kjent som det mononukleære fagocyttsystemet (MPS). Partikler større enn omkring 7 mikron vil etter intravenøs injeksjon bli fanget opp i lungekapillærene. Etter intraarteriell injeksjon, blir partiklene fanget opp i de første kapillærene de når. Inhalerte partikler blir fanget opp av alveolare makrofager.
Farmasøytika som er vann-uoppløselige eller dårlig vannoppløselige og sensitive for sure miljøer i magen kan ikke bli administrert på konvensjonell måte (f.eks. ved intrave-nøs injeksjon eller oraladministrasjon). Den parenterale administrasjon av slike farma-søytika har blitt oppnådd ved emulgering av olje-oppløst medikament med en vandig væske (slik som normalt saltvann) i nærvær av overflateaktive midler eller emulsjons-stabilisatorer for å produsere stabile mikroemulsjoner. Disse emulsjonene kan bli injisert intravenøst, forutsatt at komponentene i emulsjonen er farmakologisk inerte. F.eks. beskriver US-PS 4 073 943 administrasjon av vann-uoppløselig farmakologisk aktive midler oppløst i oljer og emulgert med vann i nærvær av overflateaktive midler som egg-fosfatider, pluronika (kopolymerer av polypropylenglykol og polyetylenglykol), polyglycerololeat, osv. PCT nr. WO 85/00011 beskriver farmasøytiske mikrodrå-per av anestetika belagt med et fosfolipid, slik som dimyristoylfosfatidylcholin, med passende dimensjoner for intradermal eller intravenøs injeksjon.
Proteinmikrosfærer har blitt rapportert i litteraturen som bærere av farmakologiske eller diagnostiske midler. Mikrosfærer av albumin har blitt fremstilt ved enten varmedenaturering eller kjemisk tverrbinding. Varmedenaturerte mikrosfærer blir produsert fra en emulgert blanding (f.eks. albumin, midlet som skal innlemmes og en passende olje) ved temperaturer mellom 100°C og 150°C. Mikrosfærene blir så vasket med et passende oppløsningsmiddel og lagret. Leucuta et al. [International Journal of Pharmaceutics, vol. 41:213-217 (1988)] beskriver fremgangsmåten for fremstilling av varmedenaturerte mikrosfærer.
Prosedyren for fremstilling av kjemisk tverrbundne mikrosfærer omfatter behandling av emulsjonen med glutaraldehyd for å tverrbinde proteinet, fulgt av vasking og lagring. Lee et al. [Science, vol. 213:233-235 (1981)] og US-PS 4 671 954 angir denne fremgangsmåten for fremstilling.
Teknikkene ovenfor for fremstilling av proteinmikrosfærer som bærere for farmakologisk aktive midler er, selv om de er i stand til å levere vannoppløselige midler, ikke i stand til å omslutte vann-uoppløselige stoffer. Denne begrensningen er iboende i teknikkene ved fremstilling som bygger på tverrbinding eller varmedenaturering av pro-teinkomponenten i den vandige fasen av en vann-i-oljeemulsjon. Eventuelle vannoppløselige midler oppløst i den proteininneholdende vandige fasen kan bli omsluttet i den resulterende tverrbundne eller varmedenaturerte proteinmatriksen, men et dårlig vannoppløselig eller oljeoppløselig middel kan ikke bli innlemmet i proteinmatriksen dannet ved disse teknikker.
Den dårlige vannoppløseligheten til mange biologiske stoffer representerer således et problem for human administrasjon. Praktisk kan leveringen av farmakologisk aktive midler som i seg selv er uoppløselige eller dårlige oppløselige i vandig medium, bli alvorlig skadelidende dersom oral levering ikke er effektiv. Følgelig krever for tiden benyttede formuleringer for levering av farmakologisk aktive midler som i seg selv er uoppløselige eller dårlig oppløselige i vandige medium, tilsetning av midler for å solubilisere det farmakologisk aktive stoffet. Alvorlige allergiske reaksjoner forårsaket av midlene (f.eks. emulgeringsmidler) benyttet for å solubilisere farmakologisk aktive midler er imidlertid hyppige. Et vanlig regime for administrasjon omfatter således behandling av pasienten med antihistaminer og steroider før injeksjon av det farmakologisk aktive stoffet for å redusere de allergiske sideeffektene til midlet benyttet for å hjelpe til i medikamentleveringen.
I et forsøk på å forbedre vannoppløseligheten til medikamenter som i seg selv er uopp-løselige eller dårlig oppløselige i vandige medium, har flere forskere kjemisk modifisert strukturen til medikamentet med funksjonelle grupper som gir øket vannoppløselighet. Blant kjemiske modifikasjoner beskrevet i teknikken er fremstilling av sulfonerte derivater [Kingston et al., US-PS 5 059 699 (1991)] og aminosyreestere [Mathew et al., J. Med. Chem., vol. 35:145-151 (1992)] som viser signifikant biologisk aktivitet. Modifikasjoner for å produsere vannoppløselige derivater som letter den intravenøse leveringen i vandig medium (oppløst i en uskadelig bærer slik som normalt saltvann) av medikamenter som i seg selv er uoppløselige eller dårlig oppløselige. Slike modifikasjoner øker imidlertid kostnaden ved medikamentfremstillingen, og kan indusere uønskede bi-reaksjoner og/eller allergiske reaksjoner og/eller redusere effektiviteten til medikamentet.
Blant de biologiske stoffene som hyppig er vanskelig å levere er oksygen. Faktisk kan behovet for klinisk sikre og effektive oksygenbærende media for anvendelse som substitutter for røde blodceller ("blodsubstitutter" eller "kunstig blod") ikke overdrives. Noen av de potensielle anvendelsene for slike media omfatter (a) generell transfusjonsanven-delse inkludert både rutine og nødsituasjoner for å erstatte akutt blodtap, (b) støtte for organer in vitro før transplantasjon eller in vivo under kirurgiske innrep, (c) øking av oksygenlevering til iskemisk vev og organer in vivo, (d) øking av oksygenleveringen til dårlig vaskularisert tumor for å øke behandlingseffektiviteten ved stråleterapi eller kjemoterapi, (e) støtte for organer eller dyr under eksperimentelle undersøkelser og (f) øket oksygentransport til levende celler i kulturmedium.
Blodtransfusjoner blir benyttet for å supplere det hemodynamiske systemet hos pasienten som lider av forskjellige forstyrrelser, inkludert redusert blodvolum eller hypovolemi (f.eks. på grunn av blødning), et redusert antall blodceller (f.eks. på grunn av ben-margsdestruksjon), eller skadede eller svekkede blodceller (f.eks. på grunn av hemolytisk anemi). Blodtransfusjoner tjener ikke kun til å øke det intravaskulære volumet, men også for å tilføre røde blodceller som bærer oppløst oksygen og mulige oksygenlevering til vev.
Ved transfusjon av pasienter som har hatt betydelig blodtap, vil ofte tilpassingen av do-nor og mottagerblodtypen utsette pasienten for perioder med oksygenmangel som er skadelig. Videre, selv når autologe, pasientdonerte, røde blodceller er tilgjengelige gjennom tidligere blodtapping og lagring, avtar den oksygenbærende kapasiteten og sikkerheten til disse autologe cellene som en konsekvens av lagring. Følgelig kan pasienten i en periode på så mye som 24 timer etter transfusjon, bli utsatt for sub-optimal oksygenlevering. Det er alltid en fare til stede for at pasienten utsettes for viral og/eller bakteriell kontaminasjon i alle transfusjoner av helblod og røde blodceller avledet derav.
Det er et akseptert behov for stoffer som er nyttige for oksygentransport og -levering under normale miljømessige betingelser som har de følgende egenskaper. Ideelt, vil et stoff benyttet for oksygentransport og -levering være i stand til å bære og levere oksygen til innretninger, organer og vev slik at normalt oksygentrykk kan bli opprettholdt i disse miljøene. Et slikt stoff vil ideelt være sikkert og ikke-toksisk, fritt for bakteriell og/eller viral kontaminasjon og være ikke-antigent og ikke-pyrogent (dvs. mindre enn 0,25 EU/ml). I tillegg, vil stoffet benyttet for oksygentransport og -levering ha viskositeten, kolloide og osmotiske egenskaper som er sammenlignbare med blod. Det er også ønskelig at et slikt stoff vil bli opprettholdt i det vaskulære systemet til pasienten i en lengre tidsperiode for således å tillate erytropoiesis og modning av pasientens egne blodceller. Videre, er det fordelaktig at det benyttede stoffet ikke for-styrrer eller hindrer erytropoiesen.
I dag er et antall intravenøse væsker tilgjengelige for behandling av akutt hypovolemi, inkludert krystalloider, slik som Ringers oppløsning med laktat eller normalt saltvann og kolloidale oppløsninger, slik som humant blodserumalbumin. Krystalloider og kollo-ider korrigerer temporært volummisforholdet, men supplementerer ikke direkte oksygenlevering til vevet. Mens blodtransfusjon er den foretrukne behandlingsmåten, er tilgjengeligheten av tilstrekkelige mengder av en sikker tilførsel av blod, et stort problem.
Ytterligere biologiske stoffer, som ofte i seg selv er uoppløselige eller som oppløses dårlig i vandig medium, og som det er ønskelig å administrere oppløst i en uskadelig bærer slik som normalt saltvann, og som gir et minimum av uønskede bivirkninger og/eller allergiske reaksjoner, er diagnostiske midler slik som kontrastmidler. Kontrastmidler er ønskelig i radiologisk avbildning da de forbedrer visualiseringen av organer (dvs. deres lokalisering, størrelse og konformasjon) og andre cellulære strukturer fra det omgivende medium. De myke vev f.eks., har tilsvarende cellesammensetning (dvs. de er primært sammensatt av vann) selv om de har meget forskjellige biologiske funksjo-ner (f.eks. lever og pankreas).
Magnetisk resonansavbildning (MRI) eller kjernemagnetisk resonans (NMR)-avbildning bygger på deteksjon av visse atomære kjerner ved en påsatt magnetisk feltstyrke ved anvendelse av radiofrekvensstråling. Til en viss grad tilsvarer dette røntgencompu-tertomografi (CT), ved at den (i noen tilfeller) gir tverrsnittsbilder av organer med po-tensiell utmerket oppløsning av mykt vev. I dagens anvendelse består bildene av et dis-tribusjonskart av protoner i organer og vev. Til forskjell fra røntgencomputertomografi, gir imidlertid ikke MRI ioniserende bestråling. MRI er derfor en sikker ikke-invasiv teknikk for medisinsk avbildning.
Mens fenomenet NMR ble oppdaget i 1954, har den kun nylig funnet anvendelse i medisinsk diagnostikk som et middel for kartlegging av interne strukturer. Teknikken ble først utviklet av Lauterbur [Nature, 242:190-191 (1973)].
Det er velkjent at kjerner med passende kjemespinn innretter seg i retning av det påsatte magnetfelt. Hjernespinnet kan bli innrettet på en av to måter: med eller mot det eksterne magnetiske feltet. Innrettingen med feltet er mer stabilt; mens energi må bli absorbert for å innrette dem i den mindre stabile tilstand (dvs. mot det påsatte felt). For protoner, vandrer eller resonnerer disse kjernene med en frekvens på 42,6 MHz i nærvær av et magnetfelt på 1 tesla (1 tesla = 10^ gauss). Ved denne frekvensen, vil en radiofrekvens (RF) -puls av bestråling eksitere kjernen og forandre deres spinnorientering, slik at den blir innrettet mot det påsatte magnetfeltet. Etter RF-pulsen vil de eksiterte kjernene "re-laksere" eller returnere til likevekt eller innretting med det magnetiske feltet. Forløpet av relakseringssignalet kan bli beskrevet ved bruk av to relakseringstermer. T\, spinn-gitter-relakseringstid eller longitudinal relakseringstid, er tiden som er nødvendig for kjernen for å returnere til likevekt langs retningen til det eksternt påførte magnetfeltet. Den andre, T2, eller spinn-spinn-relakseringstiden, er forbundet defasing av den initielle koherente presisjonen til individuelle protonspinn. Relaksjonstiden for forskjellige flu-ider, organer og vev av forskjellige arter av pattedyr er veldokumentert.
En fordel med MRI er at forskjellige scanningplan og snitt-tykkelser kan bli utvalgt uten tap av oppløsning. Dette tillater at høy kvalitet av transversal, koronal og sagital avbildning oppnås direkte. Fravær av enhver form for mekanisk bevegelige deler i MRI-utstyret gir en høy grad av pålitelighet. Det er generelt antatt at MRI har større potensial enn røntgencomputertomografi (CT) for selektiv undersøkelse av vev. Ved CT, bestemmer røntgenstrålesvekkingskoeffisienten alene bildekontrastene, mens minst tre separate variabler (Tj, T2 og kjernespinndensitet) bidrar til det magnetiske resonansbildet.
På grunn av små fysio-kjemiske forskjeller i organer og vev, kan MRI være i stand til å differensiere vevstyper og detektere sykdommer som ikke kan bli detektert ved røntgen eller CT. Til sammenligning, er CT og røntgen kun sensitive for forskjeller i elektron-densitet i vev og organer. Avbildningene som kan fremskaffes ved MRI-teknikker gjør det også mulig for en lege å detektere strukturer som er mindre enn de som er detekter-bare ved CT på grunn av bedre rom-oppløsning. I tillegg kan ethvert avbildnings-scan-ningsplan lett oppnås ved bruk av MRI-teknikker, inkludert transvers, koronal og sagital.
For tiden blir MRI benyttet for å hjelpe til i diagnose av mange medisinske forstyrrelser. Eksempler på dette er leddskader, benmargsforstyrrelser, bløtvevtumorer, mediastinal invasjon, lymfadenopati, cavernøs hemangiom, hemokromatosis, cirrhose, renal cellekarsinom, uterin leiomyom, adenomyosis, endometriosis, brystkarsinom, stenosis, koronar arteriesykdom, aortisk disseksjon, lipomatøs hypertrofi, arteriell septum, konstriktiv perikarditt og lignende [se f.eks. Edelman & Warach, Medical Progress, 328:708-716 (1993); Edelman & Warach, New England J. of Medicine, 328:785-791
(1993)].
Rutinemessig benyttet magnetresonansavbildning er i dag basert på protonsignaler som kommer fra vannmolekyler i cellene. Følgelig er det ofte vanskelig å tyde avbildninger og skille mellom individuelle organer og cellulære strukturer. Det er to potensielle måter bedre å differensiere protonsignaler. Den første omfatter anvendelse av kontrastmiddel som forandrer T\ eller T2 til vannmolekylene i én region sammenlignet med en annen. F.eks. forkorter gadoliniumdietylentiraminpentaeddiksyre (Gd-DTPA) proton Ti relakseringstid til vannmolekyler i nærhet til dette, derved forbedres de oppnådde avbildningene.
Paramagnetiske kationer, slik som f.eks. Gd, Mn og Fe er utmerkede MRI-kontrastmidler som foreslått ovenfor. Deres evne til å forkorte protonets Ti relakseringstid til det omgivende vann muliggjør forbedrede MRI-avbildninger som ellers ville være ulesbare.
En annen måte for å differensiere individuelle organer og cellulære strukturer, er å introdusere andre kjemer for avbildning (dvs. et avbildningsmiddel). Ved bruk av denne andre tilnærmingen, kan avbildning kun skje der hvor kontrastmidlet har blitt levert. En fordel ved denne metode er det faktum at avbildning er fri for forstyrrelse fra det omgivende vannet. Passende kontrastmidler må være bio-forenlige (dvs. ikke-toksiske, kjemisk stabile og ikke-reaktive overfor vev) og med begrenset levetid før eliminering fra kroppen.
Selv om hydrogen typisk har blitt valgt som basis for MRI-scanning (på grunn av dets rikelige nærvær i kroppen), kan dette resultere i dårlige avbildede områder på grunn av mangel på kontrast. Anvendelsen av andre aktive MRI-kjerner (slik som fluor) kan derfor være fordelaktig. Anvendelsen av visse perfluorkarboner i forskjellige diagnostiske avbildningsteknologier slik som ultralyd, magnetisk resonans, radiograf! og computer-tomograf! er blitt beskrevet i en artikkel av Mattery [se SPIE, 625, XIV/PACS IV, 18-23 (1986)]. Anvendelse av fluor er fordelaktig da fluor naturlig ikke blir funnet i kroppen.
Kjent teknikk som innebærer fluorinneholdende forbindelser som er nyttige for magnetisk resonansavbildning for medisinsk diagnostiske formål, er begrenset til en utvalgt gruppe av fluorinneholdende molekyler som er vannoppløselige eller kan danne emulsjoner. Følgelig har kjent teknikk som anvender fluorkarbonemulsjoner av vandig oppløselige fluorkarboner, mange ulemper, f.eks. 1) anvendelsen av ustabile emulsjoner, 2) mangel på organspesifisitet og målsøking, 3) muligheten for indusering av allergiske reaksjoner på grunn av anvendelse av emulgeringsmidler og overflateaktive midler (f.eks. egg-fosfatider og eggeplomme-lecitin), 4) begrenset leveringskapasitet og 5) vannoppløselige fluorkarboner blir hurtig fortynnet i blodet etter intravenøs injeksjon.
Kort beskrivelse av oppfinnelsen
Ifølge foreliggende oppfinnelse blir det fremskaffet sammensetninger som er nyttige for in vivo-avlevering av biologiske stoffer, i form av mikropartikler som passer for parenteral administrasjon i vandig suspensjon. Oppfinnelsens sammensetninger omfatter biologiske stoffer (som et fast stoff, væske eller gass) assosiert med et polymert skall. Det polymere skallet er et bio-forenlig materiale, tverrbundet ved nærvær av disulfidbindinger. Det polymere skallet forbundet med det biologiske stoffet blir eventuelt suspendert i et bio-forenlig medium for administrasjon. Anvendelse av oppfinnelsens sammensetninger for avlevering av biologiske stoffer gjør at det ikke er nødvendig for administrasjon av biologiske stoffer i en emulsjon inneholdende f.eks. etanol og polyetoksylert kastorolje, fortynnet i normalt saltvann (se f.eks. Norton et al. i Abstracts of the 2nd National Cancer Institute Workshop on Taxol & Taxus, 23.-24. september 1992). En ulempe ved slike kjente sammensetninger er deres mulighet for å produsere allergiske bivirkninger.
Ifølge en annen side av foreliggende oppfinnelse ble det overraskende og uventet funnet at uoppløselige konstruksjoner av proteinet hemoglobin (Hb) fremstilt ifølge oppfinnelsen, binder oksygen reversibelt. Uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner (IHC) ifølge oppfinnelsen binder oksygen med oksygenaffiniteter tilsvarende de oppnådd med opplø-selige hemoglobinmolekyler i røde blodceller, eller oppløselige modifiserte hemoglobinmolekyler som har blitt beskrevet i kjent teknikk som potensielle blodsubstitutter.
Ifølge en annen side av oppfinnelsen ble det fremskaffet fremgangsmåter for å omslutte biologiske stoffer i et polymert skall. Videre ble det ifølge foreliggende oppfinnelse fremskaffet midler for oppnåelse av lokale oksygen- og temperaturdata og for oppnåelse av fluormagnetiske resonansavbildninger av kroppsorganer og vev.
For avlevering av biologiske stoffer i form av mikropartikulære suspensjoner som tillater en viss grad av målsøking til organer slik som lever, lunger, milt, lymfatisk sirkulasjon og lignende, ved anvendelse av partikler med varierende størrelse og administrering på forskjellige måter. Oppfinnelsens fremgangsmåte for avlevering tillater ytterligere administrasjon av biologiske stoffer, slik som hovedsakelig vann-uoppløselige farmakologisk aktive midler, ved anvendelse av mye mindre volum væske og med behov for sterkt reduserte administrasjonstider, sammenlignet med administrasjons volum er og tider som er nødvendig ved avleveringssystemer ifølge kjent teknikk (f.eks. intravenøs infusjon av omkring 1 til 2 liter fluid i løpet av en 24-timers periode, er nødvendig for å levere en typisk human dose av 200-400 mg taxol).
En suspensjon av polymere skall ifølge oppfinnelsen kan f.eks. administreres intrave-nøst for å muliggjøre avbildning av vaskulariserte organer (f.eks. lever, milt, lymfe og lunger) og benmarg. Organmålspesi fisi tet ble oppnådd som et resultat av opptak av de mikronstørrelse organfluorinneholdende polymere skall av det retikuloendothel-systemet (RES) (også kjent som mononukleær fagocytt (MNP)-system). Organer slik som lever og milt spiller en viktig rolle i fjerning av fremmede stoffer (f.eks. partikulære stoffer) fra blodstrømrnen og er således ofte referert til som "blodfiltreringsorganer". Disse organene utgjør en hoveddel av RES. I tillegg inneholder lymfenoder i den lymfatiske sirkulasjon, celler av RES. Følgelig er avbildning av det lymfatiske systemet mulig ved anvendelse av de mikronstørrelse organfluorinneholdende polymere skall ifølge foreliggende oppfinnelse. Gitt oralt eller som en stikkpille, kan avbildning av magen og magetarmkanalen utføres. Slike suspensjoner kan også bli injisert i ikke-vaskulære rom, slik som det cerebrospinale hulrom, for å tillate avbildning av slike rom.
Som en ytterligere utførelsesform av oppfinnelsen, kan paramagnetiske kationer slik som Gd, Mn, Fe og lignende bli bundet til polyanioner, slik som alginat, og benyttes som effektive MRI-kontrastmidler.
Foreliggende oppfinnelse overvinner ulempene ved kjent teknikk for å fremskaffe 1) in-jiserbare suspensjoner av polymere skall inneholdende biologiske stoffer, 2) biologiske aktive stoffer i en form som har økt stabilitet sammenlignet med enkle emulsjoner, 3) organmålsøkingsspesifisitet (f.eks. lever, milt, lunge og lignende) på grunn av opptak av de polymere skall ifølge oppfinnelsen av RES-og NMP-systemet, 4) emulsjonsfrie systemer for derved å unngå at midlet potensielt kan fremkalle allergiske reaksjoner og 5) muligheten til å injisere relativt mindre doser av det biologiske stoffet og likevel oppnå god respons på grunn av at de polymere skallene inneholdende biologiske stoffer ifølge oppfinnelsen, kan målrettes mot spesifikke organer.
Kort beskrivelse av figurene
Figur 1 viser skjematisk et polymert skall fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse.
I figuren viser A til det uoppløselige disulfid-tverrbundne skallet, B viser til det indre av det polymere skallet som kan inneholde oksygen eller annen gass, et fluorkarbon inneholdende oppløst oksygen, en bio-forenlig olje med biologisk stoff oppløst deri, en vann-i-oljeemulsjon inneholdende biologisk stoff oppløst i vandig medium, en suspensjon av faste partikler dispergert i en væske og lignende, C angir tykkelsen av det polymere skallet, typisk omkring 5-50 nanometer og D viser til diameteren av det polymere skallet, typisk i området fra omkring 0,1 opptil 20 nm.
Figur 2 viser oksygenbindingskurver (dvs. en kurve over Hill-koeffisient (n) som en funksjon av oksygenets partielle trykk) for en oppløsning av stroma-fri hemoglobin (den avbrutte linjen) og en oppløsning inneholdende uoppløse-liggjort hemoglobinkonstruksjoner ifølge foreliggende oppfinnelse (den heltrukne linjen). Faktiske data med uoppløseliggjort hemoglobinkonstruksjoner ifølge oppfinnelsen er vist med fylte bokser.
Figur 3 viser oksygenbindingskurver for en oppløsning av stroma-fritt hemoglobin (den brutte linjen) og en oppløsning inneholdende uoppløseliggjort hemoglobinkonstruksjoner ifølge foreliggende oppfinnelse (den heltrukne linjen) etter behandling med 1,7 mM av den allosteriske effektor, 2,3-bisfosfogly-cerat (2,3 BPG). Faktiske datapunkter med de uoppløseliggjorte hemoglo-binkonstruksjonerr ifølge foreliggende oppfinnelse er vist som fylte bokser.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Ifølge foreliggende oppfinnelse ble det fremskaffet sammensetninger for in vivo-avlevering av et biologisk stoff,
hvor nevnte biologiske stoffer valgt blant:
et faststoff, eventuelt dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, hovedsakelig
fullstendig inneholdt i et polymert skall,
en væske, eventuelt dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, hovedsakelig
fullstendig omsluttet inne i et polymert skall,
en gass, eventuelt dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, hovedsakelig
fullstendig omsluttet inne i et polymert skall,
en gass assosiert med et polymert skall, en blanding av to eller flere derav,
hvor den største tverrsnittsdimensjonen til nevnte skall ikke er større enn 10 mikron,
hvor nevnte polymere skall omfatter et bioforenlig materiale som er hovedsakelig tverrbundet ved hjelp av disulfidbindinger, og
hvor det indre av nevnte polymere skall er eventuelt modifisert med et passende middel, hvor nevnte middel er bundet til nevnte polymere skall ved en eventuelt kovalent binding.
Oppfinnelsen omfatter også en fremgangsmåte for fremstilling av et biologisk stoff for in vivo-avlevering, hvor nevnte fremgangsmåte omfatter å utsette vandig medium inneholdende bioforenlig materiale som er i stand til å bli tverrbundet av disulfidbindinger og biologisk stoff for høy intensitets ultralydbetingelser i en tid som er tilstrekkelig for å gi tverrbinding av nevnte bioforenlige materiale ved disulfidbindinger.
Som benyttet her, refererer uttrykket "in vivo-avlevering" til avlevering av et biologisk stoff ved slike administrasjonsveier som oralt, intravenøst, subkutant, intraperitonealt, intratekalt, intramuskulært, intrakranialt, inhalasjon, topikalt, transdermalt, stikkpiller (rektalt), pessarisk (vaginalt) og lignende.
Som benyttet her, refererer uttrykket "biologiske stoffer" til farmasøytisk aktive midler (slik som analgesiske midler, anestetiske midler, anti-histaminmidler, antibiotika, anti-depressive midler, anti-diabetiske midler, anti-fungale midler, anti-hypertensive midler, anti-inflammatoriske midler, anti-neoplastiske midler, anksiolytiske midler, enzymatisk aktive midler, nukleinsyrekonstruksjoner, immunstimulerende midler, immunsuppressive midler, fysiologisk aktive gasser, vaksiner, og lignende), diagnostiske midler (slik som ultralydkontrastmidler, radiokontrastmidler eller magnetiske kontrastmidler), midler av næringsmessig verdi og lignende.
Som benyttet her, refererer uttrykket "mikron" til en måleenhet på en tusendels millimeter.
Et antall bioforenlige materialer kan bli benyttet i utførelsen av foreliggende oppfinnelse for formulering av et polymert skall. Som benyttet her, beskriver uttrykket "bioforenlig" et stoff som fortrinnsvis ikke forandrer eller påvirker på noen negativ måte det biologiske systemet i hvilket det blir introdusert. Hovedsakelig er alle slike materialer nøytrale eller syntetiske, som bærer sulfhydrylgrupper eller disulfidbindinger innen dets struktur kan bli benyttet for fremstilling av et disulfid-tverrbundet skall. Sulfhydryl-gruppene eller disulfidbindingene kan være forhåndseksisterende i strukturen i det bio-forenlige materialet, eller de kan bli innført i en passende kjemisk modifikasjon. F.eks. er naturlig forekommende bioforenlige materialer slike som proteiner, polypeptider, oli-gopeptider, polynukleotider, polysakkarider (f.eks. stivelse, cellulose, dekstraner, alginater, chitosan, pektin, hyaluronsyre og lignende), lipider og så videre, kandidater for slike modifikasjoner. Andre bindinger, slik som estere, amider, etere og lignende, kan også bli dannet under det ultrasoniske bestrålingstrinnet (så lenge de nødvendige funksjonelle gruppene er til stede i startmaterialet).
Som eksempler på passende bioforenlige materialer, naturlig forekommende eller syntetiske proteiner, kan de benyttes så lenge slike proteiner har tilstrekkelig sulfhydryl- eller disulfidgrupper slik at tverrbinding (med disulfid-bindingsdannelse, f.eks., som et resultat av oksidering under ultrasonisk bestråling) opptrer. Eksempler på passende proteiner omfatter albumin (som kan inneholde 35 cysteinrester), insulin (som inneholder 6 cyste-iner), hemoglobin (som inneholder 6 cysteinrester pr. a2p2-enhet), lysozym (som inneholder 8 cysteinrester), immunoglobuliner, a-2-makroglobulin, fibronektin, vitronektin, fibrinogen og lignende, så vel som kombinasjoner av hvilke som helst to eller flere av disse.
For tiden foretrukne proteiner for anvendelse i dannelsen av et polymert skall er albumin. Et annet for tiden foretrukket protein for anvendelse til å danne et polymert skall er hemoglobin. Enda et for tiden foretrukket protein for anvendelse til å danne et polymert skall er en kombinasjon av albumin og hemoglobin. Eventuelt kan proteiner slik som a-2-makroglobulin, et velkjent opsonin, benyttes for å øke opptaket av partiklene med biologisk stoff av makrofaglignende celler, eller øke opptaket av i skall omsluttede partikler inn i leveren og milten. Andre funksjonelle proteiner, slik som antistoffer eller enzymer, som kan muliggjøre målsøking av det biologiske stoffet til et ønsket sete, kan også bli benyttet i dannelsen av det polymere skall.
Tilsvarende, er syntetiske polypeptider inneholdende sulfhydryl- eller disulfidgrupper også gode kandidater for dannelsen av partikler med et polymert skall. I tillegg er polyalkylenglykoler (f.eks. lineære eller forgrenetkjedede), polyvinylalkohol, polyhydroksyetylmetakrylat, polyakrylsyre, polyetyloksazolin, polyakrylamid, polyvinylpyrrolidon og lignende, gode kandidater for kjemisk modifikasjon (for å introdusere sulfhydrylgrupper og/eller disulfidbindinger) og skalldannelse (ved å gi tverrbinding derav).
I fremstillingen av oppfinnelsens sammensetninger kan man eventuelt benytte et dispergeringsmiddel for å suspendere eller oppløse biologiske stoffer. Dispergeringsmidlene som er omfattet for utførelsen av foreliggende oppfinnelse, omfatter en hvilken som helst væske som er i stand til å suspendere eller oppløse biologiske stoffer, men ikke kjemisk reagere med verken polymeren benyttet for å produsere skallet, eller det biologiske stoffet. Eksempler omfatter vann, vegetabilske oljer (f.eks. soyabønneolje, mineralolje, maisolje, rapsfrøolje, kokosolje, olivenolje, safranolje, bomullsfrøolje og lignende), alifatiske, cykloalifatiske eller aromatiske hydrokarboner med 4-30 karbonatomer (f.eks. n dodecan, n-decan, n-heksan, cykloheksan, toluen, benzen og lignende), alifatiske eller aromatiske alkoholer med 1-30 karbonatomer (f.eks. oktanol og lignende), alifatiske eller aromatiske estere med 2-30 karbonatomer (f.eks. etylkaprylat (oktanoat) og lignende), alkyl , aryl eller cykliske etere med 2-30 karbonatomer (f.eks. dietyleter, tetrahydrofuran og lignende), alkyl-, eller arylhalider med 1-30 karbonatomer (og eventuelt mer enn en halogensubstituent, f.eks. CH3CI, CH2CI2, CH2CI-CH2CI og lignende), ketoner med 3-30 karbonatomer (f.eks. aceton, metyletylketon og lignende), polyalkylenglykoler (f.eks. polyetylenglykol og lignende) eller kombinasjoner av to eller flere av disse.
Spesielt foretrukne kombinasjoner av dispergeringsmidler omfatter flyktige væsker slik som diklormetan, etylacetat, benzen og lignende (dvs. oppløsningsmidler som har en høy grad av oppløselighet for det farmakologisk aktive midlet og er oppløselig i det andre benyttede dispergeringsmidlet) sammen med et mindre flyktig dispergeringsmiddel. Når det blir tilsatt til det andre dispergeringsmidlet, hjelper disse flyktige additivene til å drive oppløseligheten til det farmakologiske aktive midlet inn i dispergeirngsmidlet. Dette er ønskelig da dette trinnet vanligvis er tidkrevende. Etter oppløsning kan den flyktige komponenten fjernes ved avdamping (eventuelt under vakuum).
Partikler av biologisk stoff som hovedsakelig er fullstendig omhyllet av et polymert skall eller assosiert derved, fremstilt som beskrevet her, blir levert rent eller eventuelt som en suspensjon i et bioforenlig medium. Dette mediet kan være valgt blant vann, bufret vandig medium, saltvann, bufret saltvann, eventuelt bufrede oppløsninger av aminosyrer, eventuelt bufrede oppløsninger av proteiner, eventuelt bufrede oppløsninger av sukre, eventuelt bufrede oppløsninger av karbohydrater, eventuelt bufrede av vitaminer, eventuelt bufrede oppløsninger av syntetiske polymerer, lipidinneholdende emulsjoner og lignende.
Ifølge en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse blir det fremskaffet en fremgangsmåte for preparering av et biologisk stoff for in vivo-avlevering, og den kjente fremgangsmåten omfatter å utsette mediet inneholdende bioforenlig materiale som er i stand til å bli tverrbundet med disulfidbindinger og biologisk stoff for høy intensitets-ultralydbetingelser for en tid som er tilstrekkelig for å fremme tverrbinding av nevnte bioforenlige materiale ved disulfidbindinger;
hvor nevnte biologisk stoff er hovedsakelig fullstendig omsluttet i et polymert skall, og
hvor det største tverrsnittet i det nevnte skall ikke er mer enn 10 mikron.
Således blir det syntetisert biologisk stoffet ifølge foreliggende oppfinnelse, omsluttet av et polymert skall ved bruk av høy intensitetsultralyd. To ikke-lineære akustiske pro-sesser er involvert i dannelsen av stabile polymere skall (dvs. akustisk emulgering og kavitering). Først dispergerer akustisk emulgering det biologiske stoffet inn i vandig proteinoppløsning. Den dannede dispersjonen blir så kjemisk tverrbundet og stabilisert ved dannelsen av disulfidbindinger. Disulfidbindingene blir dannet fra cysteinrestene (i tilfellet hvor polymeren er et protein slik som albumin) som blir oksidert ved superoksid som blir produsert via akustisk kavitering.
Den resulterende suspensjon blir eventuelt filtrert gjennom centricon-filtere (100 kDa "cutoff") og de filtrerte konstruksjonene eller mikroboblene blir resuspendert i normalt saltvann eller passende buffer. Figur 1 viser skjematisk en slik konstruksjon. Den gjennomsnittlige diameteren til disse konstruksjonene er omkring 2 mikron. Partikkelstørrelsesdistribusjonen, bestemt ved en Elzone-partikkelteller, blir sett å være svært smal (en gaussisk distribusjon med en gjennomsnittlig diameter på omkring 3 mikron blir typisk observert). Størrelsesområdet til oppnådde partikler ved denne teknikken er mellom
0,1 mikron og 20 mikron. Et foretrukket størrelsesområde er 0,5 til 10 mikron og det mest foretrukne området er 1 til 5 mikron. Denne størrelsen er ideelt tilpasset for medisinsk anvendelse, da intravenøs eller intraarteriell injeksjon kan bli utført uten risiko for blokkering av små blodkar og påfølgende vevsskade (iskemi på grunn av oksygenmangel). Til sammenligning har normale rød blodceller en diameter på omkring 8 mikron.
En ikke-opplagt egenskap i den ovenfor beskrevne prosessen er valget av dispergeringsmiddel, spesielt når det gjelder polariteten til dispergeringsmidlet. Dannelsen av et skall omkring partiklene av biologisk stoff omfatter reorientering av det bioforenlige materialet ved grensesnittet mellom den vandige og ikke-vandige fasen slik at de hydrofile regionene innen det bioforenlige materialet blir eksponert for den vandige fasen, mens de hydrofobe regionene i det bioforenlige materialet blir orientert mot den ikke-vandige fasen. I situasjoner hvor det bioforenlige materialet er et protein, må energi tilføres til polymeren for å gj utfolding eller forandring av konformasjonen til denne. Den frie grensesnittsenergien (interfasial tensjon) mellom de to væskefasene (dvs. vandig og ikke-vandig) bidrar til forandringer i proteinkonformasjonen ved dette grensesnittet. Termal energi bidrar også til energireservene som er nødvendige for utfolding og/eller forandring av proteinkonformasjonen.
Termal energitilførsel er en funksjon av slike variabler som den akustiske kraft benyttet i den høye intensitetsultrasonisk bestrålingsprosessen, den høye intensitetsultrasonisk bestrålingstiden, egenskapen til materialet som blir utsatt for høy intensitetsultrasonisk bestråling, volumet av materialet som blir utsatt for høy intensitetsultrasonisk bestråling og lignende. Den akustiske kraften ved høye intensitetsultrasoniske bestrålingsprosesser kan variere meget, og faller typisk i området fra omkring 1 til opptil 1000 watt/cm<2>; med en akustisk kraft i området fra 50 opptil 200 watt/cm<2> som et foretrukket område. Tilsvarende, kan eksponeringstiden for intensitetsultrasonisk bestråling variere vidt, typisk innen området fra få sekunder opptil omkring 5 minutter. Foretrukket vil eksponeringstiden for intensitetsultrasonisk bestråling falle innenfor området 15 til 60 sekunder. Fagmannen innen fagområdet vil forstå at desto høyere akustisk kraft som blir påført, desto lavere eksponeringstid for høy intensitetsultrasonisk bestråling er nødvendig, og vice versa.
Grensesnittsfri energi er direkte proporsjonal med polaritetsforskjellen mellom de to væskene. Ved en gitt driftstemperatur, er et minimum fri energi ved grensesnittet mellom de to væskene essensielt for å danne det ønskede polymerskall. Dersom en homo-log serie av dispergeirngsmidler blir tatt med en gradvis forandring i polaritet, f.eks. etylestere av alkanoinsyrer, så er de høyere homologene økende ikke-polare, dvs. grensesnittsspenningen mellom disse dispergeringsmidlene og vannet øker ettersom antallet karbonatomer i esteren øker. Således er det funnet at selv om etylacetat ikke er bland-bart med vann (dvs. en ester med en 2-karbonsyre) ved romtemperatur (~20°C), vil dispergeirngsmidlet alene ikke gi et signifikant utbytte av polymerskallbelagte partikler. Derimot gir en høyere ester slik som etyloktanoat (ester av en 8-karbonsyre) polymerskallbelagte partikler i høyere utbytte. Faktisk, gir etylheptanoat (ester av en 7-karbonsyre) et moderat utbytte, mens de lavere esterne (estere av 3-, 4-, 5- eller 6-karbonsyrer) gir dårlig utbytte. Ved en gitt temperatur kan man således sette en tilstand av minimum vandig dispergeirngsmiddel grensesnittsspenning som er nødvendig for å danne høye utbytter av polymerskallbelagte partikler.
Temperaturen er en annen variabel som må manipuleres for å påvirke utbyttet av polymerskallbelagte partikler. Generelt avtar overflatespenningen til en væske med økende temperatur. Forandringsraten til overflatespenningen i forhold til temperaturen er ofte forskjellig for forskjellige væsker. F.eks. kan således grensesnittsspenningen (AY) mellom to væsker være AY[ ved temperatur Tj og AY2 ved temperatur T2. Dersom AY\ ved T] er nær det minimum som er nødvendig for å danne polymere skall ifølge foreliggende oppfinnelse og hvis AY2 (ved temperatur T2) er større enn AYj, så vil en forandring i temperatur fra 1\ til T2 øke utbyttet av polymere skall. Dette blir faktisk observert i tilfellet med etylheptanoat som gir et moderat utbytte ved 20°C, men som gir et høyt utbytte ved 10°C.
Temperaturen påvirker også damptrykket til de benyttede væskene. Desto lavere temperatur, desto lavere totalt damptrykk. Desto lavere totalt damptrykk, desto mer effektivt er kollapsen av kavitasjonsboblen. En mer effektiv kollaps av den ultrasoniske bestrå-lingsboblen korrelerer med en økende rate av superoksid (H02)-dannelsen. Øket rate av superoksiddannelse fører til øket utbytte av polymere skall ved lavere temperaturer. Som en motvekt øker imidlertid reaksjonshastigheten for oksidasjon av sulfhydrylgrupper (dvs. for å danne disulfidbindinger) av superoksidioner med økende temperatur. For en gitt væske utsatt for ultrasoniske bestrålingsbetingelser, eksisterer det således et relativt nært optimalt driftsområde for temperaturer innen hvilket et høyt utbytte av polymert skall blir oppnådd.
Således styrer en kombinasjon av to effekter, dvs. forandringen i overflatespenning med temperaturen (som direkte påvirker utfoldingen og/eller konformasjonsforandringene til polymeren) og forandringen i reaksjonsutbyttet (reaksjonen med tverrbinding av polymeren via dannelsen av disulfidbindinger) med temperaturen av totalomdanningen eller utbyttet av polymerskallbelagte partikler. Temperaturer som passer for fremstillingen av polymere skall ifølge oppfinnelsen faller innenfor området omkring 0-80°C.
Den ultrasoniske bestrålingsprosessen beskrevet ovenfor kan bli manipulert for å produsere polymerskallbelagte partikler inneholdende biologisk stoff innen et størrel-sesområde. Foretrukne partikkelradier faller innen området fra omkring 0,1 til omkring 5 mikron. En smalere størrelsesdistribusjon i dette området er meget passende for intra-venøs avlevering av biologiske stoffer. De polymerskallbelagte partiklene blir her fortrinnsvis suspendert i et bioforenlig medium (som beskrevet her) før administrasjon ved passende midler.
I tillegg kan det polymere skall eventuelt bli modifisert ved et passende middel, hvor
midlet er forbundet med det polymere skall gjennom en eventuell kovalent binding. Kovalente bindinger omfattet for slike bindinger omfatter ester, eter, uretan, diester, amid, sekundært eller tertiært amin, fosfatester, sulfatester og lignende binder. Passende midler omfattet for denne eventuelle modifikasjonen av det polymere skall omfatter syntetiske polymerer (polyalkylenglykoler (f.eks. lineære eller forgrenede polyetylenglyko-ler), polyvinylalkohol, polyhydroksyetylmetakryl, polyakrylsyre, poletyloksazolin, po-
lyakrylamid, polyvinylpyrrolidon og lignende), fosfolipider (slik som fosfatidylcholin (PC), fosfatidyletanolamin (PE), fosfatidylinositol (PI), sphingomyelin og lignende), proteiner (slik som enzymer, antistoffer og lignende), polysakkarider (slik som stivelse, cellulose, dekstraner, alginater, chitosan, pektin, hyaluronsyre og lignende), kjemiske modifikasjonsmidler (slik som pyridoksal-5<1->fosfat, derivater av pyridoksal, dialdehy-der, diaspirinestere og lignende) eller kombinasjoner av hvilke som helst av to eller flere av disse.
Variasjoner av det generelle tema av oppløste biologiske stoffer innkapslet i et polymert skall er mulige. En suspensjon av fine partikler av biologisk stoff i et bioforenlig dispergeringsmiddel kan bli benyttet (i stedet for et bioforenlig dispergeirngsmiddel inneholdende oppløst biologisk stoff) til å produsere et polymert skall inneholdende disperge-ringsmiddelsuspenderte partikler av biologisk stoff. Med andre ord, kan det polymere skall inneholde en mettet oppløsning av biologisk stoff i dispergeringsmidlet. Andre variasjoner av polymere skall inneholdende en fast kjerne av biologisk stoff produsert ved initiell oppløsning av biologisk stoff i et flyktig, organisk oppløsningsmiddel (f.eks. benzen), dannelse av det polymere skall og avdamping av det flyktige oppløsningsmid-let under vakuum, f.eks. i en rotasjonsfordamper, eller frysetørking av hele suspensjonen. Dette resulterer i en struktur med en fast kjerne av biologisk stoff omgitt av en polymer kappe. Den siste fremgangsmåten er spesielt fordelaktig for avlevering av høyere doser av biologisk stoff i et relativt lite volum. I noen tilfeller kan det bioforenlige materialet som former skallet omkring kjernen, selv være et terapeutisk eller diagnostisk middel, f.eks. i tilfellet insulin, som kan bli avlevert som en del av et polymert skall dannet i den ultrasoniske bestrålingsprosessen beskrevet ovenfor. I andre tilfeller kan polymeren som danner skallet bidra i avleveringen av det biologiske stoffet, f.eks. som i tilfellet hemoglobin, som kan bli avlevert som del av et polymert skall dannet ved den ultrasoniske bestrålingsprosessen beskrevet ovenfor, for derved å gi et blodsubstitutt med en høy bindingskapasitet for oksygen.
Variasjoner i det polymere skallet er også mulig. F.eks. kan en mindre mengde PEG inneholdende sulfhydrylgrupper bli inkludert med polymeren. Ved eksponering for ultrasonisk bestråling, blir PEG tverrbundet inn i polymeren og utgjør en komponent av det polymere skall. Alternativt kan PEG bli bundet til det polymere skall etter fremstillingen av skallet (heller enn å bli inkludert som del av mediet fra hvilket skallet blir fremstilt).
PEG er kjent for dets ikke-adhesive karakter og har blitt forbundet til proteiner og enzymer for å øke deres sirkulasjonstid in vivo [Abuchoeski et al., J. Biol. Chem., vol. 252:3578 (1977)]. PEG har også blitt bundet til fosfolipider som danner lipide bilag i liposomer for å redusere deres opptak og forlenge levetiden in vivo [Klibanov et al., FEBS Letters, vol. 268:235 (1990)]. Inkorporering av PEG i veggene av tverrbundne proteinskall forandrer således deres blodsirkuleringstid. Denne egenskap kan utnyttes for å holde høye blodnivåer av biologisk stoff og forlenget frigivningstid for det biologiske stoffet.
Nyttig for modifikasjon av det polymere skall er elektrofile PEG-derivater inkludert PEG-imidazoler, succinimidylsuccinater, nitrofenylkarbonater, tresylater og lignende; nukleofile PEG-derivater inkludert PEG-aminer, aminosyreestere, hydrazider, tioler og lignende. Det PEG-modifiserte polymere skallet vil være forventet å overleve i sirkulasjon i lengre perioder enn deres ikke-modifiserte motparter. Modifikasjonen av polymere skall med PEG kan bli utført før dannelsen av skallet, eller etter dannelsen derav. Den nå foretrukne teknikken er å modifisere det polymere skall etter dannelsen derav. Andre polymerer som omfatter dekstran, alginater, hydroksyetylstivelse og andre, kan bli benyttet i modifikasjon av det polymere skall.
Fagmannen vil forstå at flere variasjoner er mulige innen rammen av foreliggende oppfinnelse. F.eks., kan dispergeringsmidlet i det polymere skall varieres, en stor variasjon av biologiske stoffer kan bli benyttet og et stort område av proteiner så vel som andre naturlige og syntetiske polymerer kan bli benyttet for å danne veggene i det polymere skall. Anvendelsen er også relativt vidstrakt. Andre enn biomedisinske anvendelser, slik som avlevering av medikamenter, diagnostiske midler (i avbildningsanvendelser), kunstig blod (sonokjemisk tverrbundet hemoglobin) og parenterale næringsmidler, kan det polymere skall-strukturen ifølge oppfinnelsen bli innlemmet i kosmetiske anvendelser slik som hudkremer og hårstellprodukter, i parfyme-anvendelser, i trykksensitivt blekk, pesticider og lignende.
Ifølge en utførelsesform av foreliggende oppfinnelse blir de polymere skall fremstilt som beskrevet ovenfor, benyttet i in vivo-avleveringer av biologiske stoffer, slik som farmasøytisk aktive midler, diagnostiske midler eller midler med næringsmessig verdi. Eksempler på farmakologisk aktive midler omfattet for anvendelse i utførelsen av foreliggende oppfinnelse omfatter analgesika (f.eks. acetominofen, aspirin, ibuprofen, mor-fin og derivater derav, og lignende), anestetiske gasser (f.eks. cyklopropan, enfluoran,
halotan, isofluoran, metoksyfluoran, nitrogenoksid og lignende), anti-astmatiske midler (f.eks. azelastin, ketotifen, traksanox og lignende), antibiotika (f.eks. neomycin, strepto-
mycin, kloramfenikol, cefalosporin, ampicillin, penicillin, tetracyklin og lignende), anti-depressive midler (f.eks. nefopam, oksypertin, imipramin, trazadon og lignende), anti-diabetiske midler (f.eks. biguanidiner, hormoner, sulfonylureaderivater og lignende), anti-fungale midler (f.eks. amfotericin B, nystatin, candicidin og lignende), anti-hypertensive midler (f.eks. propanolol, propafenon, oksyprenolol, nifedipin, reser-pin og lignende), steroidale anti-inflammatoriske midler (f.eks. kortison, hydrokortison, deksametason, prenisolon, prednison, fluazacort og lignende), ikke-steroidal anti-inflammatoriske midler (f.eks. indometacin, ibuprofen, ramifenizon, piroksicam og lignende), anti-neoplastiske midler (f.eks. adriamycin, cyklofosfamid, aktinomycin, bleo-mycin, duanorubicin, doksorubicin, epirubicin, mitomycin, metotreksat, fluoruracil, karboplatin, karmustin (BCNU), cisplatin, etoposid, interferoner, fenesterin, taxol (som benyttet her, er uttrykket "taxol" ment å omfatte taxol-analoger og promedikamenter, taxa-ner og andre taxol-lignende medikamenter, f.eks. Taxotere og lignende), kampotecin og derivater derav (hvis forbindelser er lovende for behandling av coloncancer), vinblastin, vinkristin, så vel som hormonelle anti-neoplastiske midler slik som østrogener, progestogener, tamoksifen og lignende), anksiolytiske midler (f.eks. dantrolen, diazepam og lignende), enzymatisk aktive midler (f.eks. DNAse, ribozymer og lignende), nukleinsyrekonstruksjoner (f.eks. IGF-1-kodende sekvens, faktor Vffl-kodende sekvens, faktor IX-kodende sekvens, antisens-nukleotidsekvenser og lignende), immunostimulerende midler (f.eks. interleukiner, interferoner, vaksiner og lignende), immunosuppressive midler (f.eks. cyklosporin (CsA), asatioprin, mizorobin, FK506, prednison og lignende), fysiologisk aktive gasser (f.eks. luft, oksygen, argon, nitrogen, karbonmonoksid, karbondioksid, helium, xenon, nitrogenoksid, salpeteroksid, nitrogendioksid og lignende, så vel som kombinasjoner som hvilke som helst to eller flere derav), så vel som andre farmakologisk aktive midler slik som cimetidin, mitotan, visadin, halonitrosoureaer, antacykliner, ellipticin, benzokain, barbiturater og lignende.
Eksempler på diagnostiske midler omfattet for anvendelse ved utførelse av foreliggende oppfinnelse omfatter ultralydkontrastmidler, radiokontrastmidler (f.eks. jod-oktaner, ha-logenkarboner, renegrafin og lignende), magnetiske kontrastmidler (f.eks. fluorkarboner, lipidoppløselige paramagnetiske forbindelser, GdDTPA, vandige paramagnetiske forbindelser og lignende), så vel som andre midler (f.eks. gasser slik som argon, nitrogen, karbonmonoksid, karbondioksid, helim, xenon, nitrogenoksid, salpeteroksid, nitrogendioksid og lignende, så vel som kombinasjoner av hvilke som helst av to eller flere av disse).
Eksempler på midler av næringsmessig verdi omfattet for anvendelse av utførelse av foreliggende oppfinnelse omfatter aminosyrer, sukkere, proteiner, karbohydrater, fettopp-løselige vitaminer (f.eks. vitamin A, D, E, K og lignende) eller fett, eller kombinasjoner av hvilke som helst av to eller flere av disse.
Nøkkelforskjeller mellom de polymere skall ifølge oppfinnelsen inneholdende biologisk stoff, og proteinmikrosfærer ifølge kjent teknikk er egenskapen ved dannelsen og den endelige tilstanden til proteinet etter dannelsen av det polymere skall; og dets evne til å bære dårlig vannoppløselige eller hovedsakelig vann-uoppløselige midler. Ifølge foreliggende oppfinnelse, blir polymeren (f.eks. et protein) selektivt kjemisk tverrbundet gjennom dannelsen av disulfidbindinger gjennom f.eks. aminosyren cystein som opptrer i den naturlige strukturen av flere proteiner. En ultrasonisk bestrålingsprosess blir benyttet for å dispergere et dispergeringsmiddel inneholdende oppløst eller suspendert biologisk stoff i en vandig oppløsning av et bioforenlig materiale som bærer sulfhydryl-eller disulfidgrupper (f.eks. albumin), hvorved et skall av tverrbundet polymer blir dannet rundt fine dråper av ikke-vandig medium. Den ultrasonisk bestrålingsprosessen produserer kavitering av væsken som forårsaker kraftig lokal oppvarming og resulterer i dannelsen av superoksidioner som tverrbinder polymeren ved oksidering av sulfhyd-rylrestene (og/eller ødeleggelse av eksisterende disulfidbindinger) for å danne nye, tverrbindende disulfidbindinger.
I motsetning til foreliggende prosess, er den kjente fremgangsmåten ved glutaraldehyd-tverrbinding ikke-spesifikk og hovedsakelig reaktiv med en hvilken som helst nukleofil gruppe som er til stede i proteinstrukturen (f.eks. aminer, sulfhydryler og hydroksyler). Varmedenaturering som vist i kjent teknikk forandrer betydelig og irreversibelt proteinstrukturen. I motsetning er disulfiddannelsen omfattet ved foreliggende oppfinnelse, meget spesifikk og denaturer hovedsakelig ikke proteinet. I tillegg er partikler eller smådråper av biologisk stoff inneholdt i et polymert skall forskjellige fra tverrbundne eller varmedenaturerte proteinmikrosfærer ifølge kjent teknikk fordi det polymere skall produsert ifølge oppfinnelsens prosess er relativt tynt sammenlignet med diameteren av den belagte partikkelen. Det har blitt funnet (ved transmisjonselektronmikroskopi) at "skalltykkelsen" av det polymere belegget er omkring 25 nanometer for en belagt partikkel med en diameter opptil 1 mikron (1000 nanometer). I motsetning har mikrosfærer ifølge kjent teknikk ikke noe proteinskall, men har i stedet protein dispergert gjennom hele volumet av mikrosfæren.
Det polymere skall som inneholder fast, flytende eller gasskjerne av biologisk stoff tillater avlevering av høye doser av biologisk stoff i relativt små volumer. Dette minimaliserer pasientens ubehag ved å motta store volumer av fluid og forkorter sykehusopphol-det. I tillegg er veggene i det polymere skallet generelt fullstendig degraderbart in vivo av proteolytiske enzymer (f.eks. når polymeren er et protein), noe som ikke resulterer i bivirkninger fra avleveringssystemet, slik det ofte er tilfellet med kjente formuleringer.
Ifølge denne utførelsesformen av foreliggende oppfinnelse er smådråper eller partikler av biologisk stoff inneholdt i et skall med en tverrsnittsdiameter på ikke mer enn omkring 10 mikron. En tverrsnittsdiameter på mindre enn 5 mikron er mer foretrukket, mens en tverrsnittsdiameter på omkring 2 mikron for tiden er det mest foretrukne ved intravenøs administrasjon.
Ifølge en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse er det blitt oppdaget at det polymere skall beskrevet her, når det blir fremstilt fra hemoglobin, har overraskende høy oksygenbindende evne og derfor er nyttige som blodsubstitutter. Hemoglobin (Lehninger, i Biochemistry, Worth Publishers, Inc. New York, s. 145-149,1975) er et 64.500 MW-protein som består av en tetramer (to a- og to B-kjeder). Hver a- og B-kjede binder en hemegruppe ved en ikke-kovalent binding, a- og B-kjedene er også holdt sammen ved ikke-kovalente bindinger som et resultat av hydrogenbinding og van der Waal'ske krefter. De fire hemegruppene, en i hver subenhet, er også i stand til å binde fire molekyler av oksygen. Disse flate hemegruppene inneholder et jernatom som er i en kvadratisk plankoordinering. De fire hemegruppene er plassert relativt langt fra hverandre i det intakte molekylet.
Interaksjon eller samarbeide av heme-enhetene i bindingen av oksygen øker sterkt den oksygenbindende kapasiteten til hver heme-enhet innen det tetramere hemoglobinmolekylet. Generelt, vil en enkelt isolert heme-enhet være forventet å binde et enkelt molekyl av oksygen. Imidlertid samarbeider nabo-heme-enhetene innen hemoglobinmolekylet for å øke bundet oksygen pr. heme-enhet. Dette samarbeidet er beskrevet i trykk av "Hill Coefficient", hvis verdi reflekterer antallet sammenbindende oksygenbindende seter. For nativt hemoglobin er Hill-koefifsienten omkring 2,8.
Oppløselig hemoglobin utgjør omkring 90% av totalt protein i røde blodceller. 100 ml av helblod er i stand til å absorbere omkring 21 ml gassformig oksygen på grunn av bin-dingsevnen til hemoglobinet. Like viktig som binding av oksygenet, er hemoglobinets effektive frigiving av bundet oksygen til vev. Hemoglobinets evne til å binde og frigi oksygen er ofte kvantitativt uttrykt som P50 (eller Pi/2). F.eks. P50 for helblod, dvs. partialtrykket for oksygen som resulterer i 50% metting av hemoglobin, er omkring 28 mm
Hg.
Sammenligningen mellom partialtrykk til oksygen og prosent metting av hemoglobin kan fremsettes som en sigmoidal kurve, hvis posisjon er påvirket av pH (Bohr-effekten). Desto høyere pH til hemoglobinoppløsningen er ved et gitt partialtrykk av oksygen, desto høyere er prosent metting med oksygen, og desto lavere er P50; oksygenmettingskurven blir skiftet mot venstre på abscissen. Motsatt, desto lavere pH til hemoglobin-oppløsningen er, desto lavere er prosent metting med oksygen, og desto høyere er P50; oksygenmettingskurven er skiftet mot høyre på abscissen. Siden hemoglobin går fra relativt alkalisk pH i lungene til relativ sur pH i oksygenfattig vev (som produserer melke-syre ved anaerob respirasjon), vil hemoglobinmolekylet ha en tendens til å frigi dets oksygen. Affiniteten til hemoglobin for oksygen endres således generelt i den motsatte retning i forhold til P50 til hemoglobin.
Modifikasjoner av hemoglobinmolekylet eller dets konformasjon kan være forbundet med forandringer i oksygenbindingsaffiniteten. F.eks., assosiasjon med 2,3-difosfogly-cerat (2,3-DPG, som opptrer inne i RBC) løsner assosiasjonen mellom oksygen og hemoglobin, letter frigivingen av oksygen til vevene; serumnivåer av 2,3-DPG øker under fysiologiske betingelser derfor er en øket avlevering av oksygen ønskelig, f.eks. ved store høyder og under graviditet. Oksidasjon av jemionet i den heme-prostetiske gruppen fra Fe(II) til Fe(IH) resulterer i dannelsen av met-hemoglobin (met-Hb), som binder vann svært tett for å hindre oksygenoverføring. Denne oksideringen eller "auto-oksideringen" er en pågående prosess in vivo som styrt av et system av redoks-enzymer i den røde blodcellen.
Hemoglobin, proteinet for oksygentransport og avlevering, kan bli separert fra den røde blodcellens veggmembraner eller stroma (stroma inneholder de spesifikke antigener som bestemmer blodtypen) og andre celle og plasmakomponenter. Hvis en slik separa-sjon og isolering blir utført, inneholder det resulterende stroma-frie hemoglobin ingen antigeniske materialer; blodtyping og matching er ikke lenger nødvendig.
Stroma-fritt hemoglobin (SFH), tatt ut av den røde blodcellens mikromiljø, er blitt funnet å ha tendens til å binde oksygen for tett (en lav P50) og har også en kort halveringstid etter transfusjon. Den lave P50 som kan ses ved et skift mot venstre i hemoglo-binoksygenbindingskurven, var delvis en konsekvens av eksponeringen av stroma-fritt hemoglobin for høyere pH i plasma (7,4) enn den som var erfart inne i erytrocytten (7,2);dessuten ble den naturlige assosiasjonen mellom hemoglobin og 2,3-difosfoglyce-rat ødelagt når hemoglobin ble fjernet fra den røde blodcellen, noe som ytterligere sen-ker P50. Angående fjerningen fra sirkulasjon, er det blitt observert at stroma-fritt hemoglobin hurtig blir eliminert fra nyrene, med en transfusjonshalveringstid (ti/2) på omkring 100 minutter. Hill-koefifsienten for SFH er i området 2,3-2,8.
Kjemisk modifisert hemoglobin som imøtekommer noen av ulempene til stroma-fritt hemoglobin har blitt undersøkt. Beskrevne modifikasjoner i kjent teknikk omfatter forskjellige midler for intramolekylær tverrbinding av stroma-fritt hemoglobin; midler for intramolekylær tverrbinding av stroma-fritt hemoglobin med midler med lavere molekylvekt; midler for intra- og intermolekylær tverrbinding av stroma-fritt hemoglobin med lave molekylære midler; og midler for kobling av stroma-fritt hemoglobin til andre polymerer.
Metoder for intramolekylær tverrbinding av stroma-fritt hemoglobin er kjent i teknikk-ken. Se f.eks. US-PS 4 584 130,4 598 064 og 4 600 531. Denne behandlingen modifise-rer stroma-fritt hemoglobin ved kovalent binding av lysin-99-restene på a-kjedene av proteinet via en fumaratbro. Som en konsekvens av denne intramolekylære tverrbindingen, har diaspirin-tverrbundet hemoglobin en oksygenaffinitet ekvivalent til den til blod. Videre kan diaspirin-tverrbundet hemoglobin (molekylvekt 64.500) ikke lenger bli brutt ned til dimerer (molekylvekt 32.250). Som et resultat er retensjonstiden til diaspirin-a-a-tverrbundet hemoglobin 4 til 8 timer (som er to til fire ganger den for stroma-fritt hemoglobin). Imidlertid er dette ikke tilstrekkelig tid for behandling av akutt blød-ning, siden det er nødvendig med en oksygenbærer som kan bære oksygen i flere dager, når pasienten har tapt betydelige mengder blod. P50 til diaspirin-tverrbundet hemoglobin er i det fysiologiske området (24-28 mm Hg), på samme måte som Hill-koeffisien-ten (2,5-2,8).
Hemoglobinmolekyler er også blitt rntermolekylært tverrbundet til hverandre gjennom anvendelse av lavmolekylære tverrbindingsmidler. F.eks. er kobling av hemoglobinmolekyler til hverandre og/eller til serumproteiner og gelatinderivater ved bruk av dialde-hyder, optimalt fulgt av tilsetning av pyridoksalfosfat, beskrevet i US-PS 4 336 248. Tverrbinding med bifunksjonelle eller polyfunksjonelle, lavmolekylære tverrbindingsmidler har blitt beskrevet i US-PS 4 001 401,4 001 200,4 053 590 og 4 061 736. Produktene av intermolekylære hemoglobintverrbindinger er ofte ikke enkle oppløselige tetramerer, men multiple tetramerer av hemoglobin kovalent bundet for å danne opplø-selige oligomerer. Typisk, har produkter av slik intermolekylær tverrbindinger oksygenbærende og oksygenleverende egenskaper som ikke er ekvivalente med blod (P50 på 18-23 for glutaraldehyd-polymerisert hemoglobin sammenlignet med P50 for 28 for helblod) og Hill-koefifsienter i området 1,8-2,8). Videre, er kjente produkter av intermolekylær tverrbinding av glutaraldehyd kjent å være antigene [se D.H. Marks et al. i Military Med., 152:473 (1987)].
Generelt reduserer den intramolekylære og intermolekylære tverrbinding av hemoglobin noe av de renale toksisitetsproblemene som er resultat av dissosiasjonen av ikke-modifisert hemoglobin til aB-dimerer. Imidlertid, via det kolloidal osmotiske trykk (COP) ut-vist av oppløselig hemoglobin er ikke signifikant redusert av intramolekylær tverrbinding. Det begrenser derfor doseringsnivåene av oppløselig hemoglobinblodsubstitutter som passer for administrasjon. Generelt resulterer økning i COP i en reduksjon i hydro-statisk trykk og en samtidig reduksjon i glomerular filtreringsrate, noe som resulterer i oliguria og, i alvorlige tilfeller, anuria. Administrasjonen av oppløselig hemoglobin beskrevet i kjent teknikk har resultert i bradykardia, en økning av blodtrykk, og et fall i kreatinin-fieming. Vasokonstriksjon og turbulær obstruksjon har blitt foreslått som årsak til renale effekter, som alle er bundet til anvendelse av oppløselig hemoglobin som blodsubstitutter. En sterkt polymerisert form for hemoglobin, slik som kan bli preparert som beskrevet her, kan når den blir benyttet som et blodsubstitutt, lette disse problemene.
Høyt fluorinerte forbindelser og spesielt perfluorkarbonforbindelser, har også blitt vur-dert som substitutter for røde blodceller på grunn av deres høye oksygenoppløselighet. Blant de høyt fluorinerte forbindelsene som er nyttige for slike anvendelser er perfluor-karbonene, f.eks. perfluordecalin, perfluorindan, perfluormetyl, adamantan, perfluortripropylamin, perfluortributylamin, perfluoroktylbromid og lignende. For intravenøs anvendelse må disse fluorkarbonene som er ikke-blandbare i vann, bli dispergert som inji-serbare emulsjoner. Emulgeringsmidler som typisk blir benyttet i disse anvendelsene er eggeplommelecitin og eggefosfatider, som begge har potensiale for å gi allergiske reaksjoner. Se f.eks. PCT 92/06517, som beskriver en emulsjon som inneholder et fluorkje-mikalium og fosfolipider, slik som lysofosfatidylcholin og lysofosfatidyletanolamin som overflateaktive midler, eller PCT 93/11868 som beskriver en emulsjon med eggeplommelecitin som en emulgator som inneholder høyt fluorinerte, klorsubstituerte, ikke-cykliske, organiske forbindelser som oksygenbærere.
Fluosol-DA (Alpha Therapeutics), en emulsjon av perfluordecalin og perfluortripropylamin, er det eneste FDA-godkjente produktet for anvendelse for forebygging av tran-sient iskemi under ballong-koronar angioplasti. Et annet fluorkarbonprodukt, Oxygent
(Alliance Pharmaceuticals) eller perfluoroktylbromid har blitt godkjent som et oralt avbildningsmiddel. For en oversikt over perfluorforbindelser som blodsubstitutter se Riess et al. i Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 17:621 -634 (1978).
Blodsubstitutter beskrevet i kjent teknikk omfatter kun oppløselige hemoglobiner som
oksygenbærere. Faktisk er det konvensjonelt akseptert at et uoppløselig hemoglobinmo-lekyl (f.eks. et som er kraftig polymerisert, eller tverrbundet med andre hemoglobinmolekyler til uoppløselighetspunktet, eller er uoppløselig på grunn av stor denaturering og lignende) ikke er en kandidat for reversibel binding av oksygen, på grunn av høy sannsynlighet for destruksjon eller oppriving av det oksygenbindende setet til molekylet. I tillegg har de oppløselige hemoglobinene ifølge kjent teknikk, Hill-koeffisienter som ikke er større enn det til ikke-modifisert nativt hemoglobin.
Derimot er polymere skall fremstilt fra hemoglobin, som beskrevet her, "gigantiske"
makroskopiske molekyler (på grunn av stor polymerisering eller tverrbinding av et stort antall av hemoglobintetramermolekyler) som, på grunn av den store størrelsen derav, er uoppløselige i vandig medium. Polymeriseringen opptrer som et resultat av tverrbinding av sulfhydrylgrupper på cysteinrestene av proteinet under den ultrasoniske bestrålingsprosessen. Polymere skall fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter typisk omkring IO-* tverrbundne polymermolekyler og kan ha så mange som 10^ hemoglobintet-ramerer tverrbundet til en enkel makroskopisk "megamer" av hemoglobin. Det har uventet blitt funnet at oksygen kan binde reversibelt til disse uoppløselige konstruksjonene med affiniteter som i det nyttige området for et rødt blodcelle-(RBC)-substitutt, dvs. P50 mellom omkring 10 mm Hg til omkring 50 mm Hg.
En annen overraskende og uventet observasjon angående de uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene (IHC) ifølge foreliggende oppfinnelse, er den overraskende høye Hill-koeffisienten (n) til disse. Hill-koefifsienten er et mål for nivået av kooperativitet mellom de oksygenbindende setene (heme-enheter) i hemoglobintetramermolekylet. Maksi-mum Hill-koeffisient for nativt hemoglobin er omkring 2,8, mens Hill-koefifsienten som er rapportert innen kjent teknikks modifiserte hemoglobiner er mindre enn 2,8. De målte Hill-koefifsientene for uoppløselig hemoglobinkonstruksjoner ifølge foreliggende oppfinnelse er ekstraordinært store, og ligger typisk i området fra omkring 5 til omkring 25. Uten å være bundet av noen teori for virkning, kan disse overraskende høye verdi-ene skyldes interaksjon eller kommunikasjon mellom de oksygenbindende setene til na-boliggende tverrbundne tetramere hemoglobinenheter. Det er antatt at de store Hill-koeffisientene er en indikasjon at multiple tetramerer samarbeider i å koble fra deoksy-T
("tense") til oksy-R ("relaxed") tilstand i den uoppløselige konstruksjonen ved binding av oksygen.
De uventet høye observerte Hill-koeffisientene i hemoglobinkonstruksjonen ifølge foreliggende oppfinnelse, har den fordel at mengden oksygen båret pr. tetramer-enheter med hemoglobin sterkt overskrider det som er oppnåelig med nativt hemoglobin eller modifisert hemoglobin ifølge kjent teknikk. Denne økede oksygenbærende kapasiteten er sterkt fordelaktig ved bruk av foreliggende oppfinnelse som et RBC-substitutt.
Hemoglobinkonstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse oppnår deres maksimale Hill-koeffisienter ved partielle trykk av oksygen i området fra omkring 40-100 mm Hg. Med andre ord blir maksimal kooperativitet oppnådd i dette området av oksygentrykk. Da typisk alveolart pC<2 ligger i dette området, vil maksimalt opptak av oksygen fra lungene av hemoglobinkonstruksjonene bli oppnådd når oppfinnelsens konstruksjoner blir benyttet som et blodsubstitutt.
Med andre ord er frigivningen av oksygen til vevet ved foreliggende konstruksjoner tilsvarende den til fysiologisk hemoglobin, dvs. i typisk vev pC«2 (< 40 mm Hg), blir det
meste av oksygenet bundet til uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene frigitt for oksygenering av vev. Tverrbundet, uoppløselig hemoglobin ifølge foreliggende oppfinnelse har således en uvanlig evne til binde oksygen med en høyere kapasitet (på grunn av stor Hill-koeffisient) enn tidligere hemoglobin ved typisk lastetrykk (slik som i lungene), mens den samtidig opprettholder evnen til å frigi oksygen effektivt ved typiske trykk som er til stede i vevet.
På grunn av deres tverrbundne natur og størrelse, er det sannsynlig at de uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene ifølge oppfinnelsen har en in vivo-sirkulasjonstid som er betydelig lengre enn røde celle-(RBC)-substitutter ifølge kjent teknikk. På grunn av deres store molekylære (makroskopiske) størrelse, er det ikke sannsynlig at de induserer nyre-toksisitetsproblemer som er vanlige med konvensjonelle tetramere eller oligomere oppløselige former av hemoglobin beskrevet i kjent teknikk.
De hule ("boble-lignende" eller mikrobobler) uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse, kan fylles med en passende gass inne i hemoglobinskallet eller -membranen. Når hemoglobin-"mikroboblene" Således er ekvilibrert med oksygen, f.eks. ved en ekstern anordning eller i lungene, er den sentrale kjernen av konstruksjonene eller boblene mettet med ubundet eller fritt oksygen som kommer inn i kjernen ved molekylær diffusjon. Konstruksjonene bærer således ubundet molekylært oksygen inne i deres hule kjemereservoar i tillegg til oksygenet bundet til hemoglobinet som danner mikrobobleskallet eller -membranen. Dette systemets evne til å bære ubundet (men omsluttet) oksygen øker i sterk grad den oksygenbærende kapasiteten til systemet i tillegg til oksygenet båret av hemoglobinet alene. Ingen av de kjente substituttene viser denne evnen til å bære et reservoar av ubundet molekylær oksygen sammen med oksygen bundet til hemoglobin.
Uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner kan også være forhåndslastet eller mettet med oksygen før intravaskulær administrasjon for maksimal oksygenavlevering under en kort tilførselstid slik som ved koronar angioplasti eller tumorterapi.
Den særskilte cellulære egenskapen til uoppløselig hemoglobinkonstruksjoner ifølge foreliggende oppfinnelse gjør det sannsynlig at de transporterer oksygen på en fysiologisk måte, ikke ulikt røde blodceller in vivo. På grunn av den "megamere" egenskapen til oppfinnelsens uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner, vil de ha et kolloidalt osmotisk trykk eller onkotisk trykk som er neglisjerbart sammenlignet med en ekvivalent mengde (i oksygenbærende kapasitet) av oppløselig hemoglobin ifølge kjent teknikk. Dette vil tillate intravenøs infusjon av høye konsentrasjoner av foreliggende hemoglobinkonstruksjoner, mens oppløselig hemoglobin ifølge kjent teknikk kan bli infusert med en maksimal konsentrasjon på kun 6- 8 g/dl i frykt for alvorlig vanntap fra vev som omgir det vaskulære rom på grunn av osmotisk gradient.
Foreliggende oppfinnelse retter seg mot anvendelse av andre oksygenbindende proteiner som RBC-substitutter. Som et eksempel kan proteinet myoglobin, som har en enkel oksygenbindende hemegruppe (men ingen tverrbindende cysteinrester) bli forventet å opp-føre seg på samme måte. En genetisk bearbeidet myoglobin med minst to tverrbundne cysteinrester kan bli benyttet for å generere en uoppløselig myoglobinkonstruksjon. En kombinasjon av oksygenbindende proteiner med proteiner som ikke har affinitet for oksygen kan bli benyttet i dannelsen av de uoppløselige konstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse, f.eks. kan hemoglobin og albumin kan benyttes.
Foreliggende sammensetning har en signifikant fordel overfor innkapslete hemoglobinsammensetninger ifølge kjent teknikk. Liposomale hemoglobinformuleringer av kjent teknikk omfatter oppløselig hemoglobin i et eksternt lipidlag. Liposom-innkapslete hemoglobinsammensetninger ifølge kjent teknikk har flere ulemper som er overvunnet ved foreliggende oppfinnelse. Lekkasje av oppløselig hemoglobin fra liposomale sammensetninger kan potensielt forårsake nefrotoksisitet. De uoppløselige konstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse vil ikke lekke oppløselig hemoglobin på grunn av deres sterkt tverrbundne egenskap. Aggregeringen av liposomer er kjent for å aktivere kom-plementproteinet C3a. Denne aggregeringen er ikke sannsynlig for uoppløselige kon-
i struksjoner på grunn av deres størrelse som er betydelig større enn det liposomale stør-relsesområdet.
Foreliggende sammensetninger av uoppløselig tverrbundet hemoglobin unngår toksisitet
som er forbundet med oppløselige hemoglobinsammensetninger ifølge kjent teknikk. Nefrotoksisitet eller renal toksisitet av hemoglobin er hovedsakelig relatert til fjerningen av oppløselig dimert, tetramert eller oligomert hemoglobin fra sirkulasjonen. Hemoglobinet ifølge foreliggende oppfinnelse som er sterkt tverrbundet eller "megamert" kan ikke fjernes av nyrene og det er usannsynlig at det fører til nefrotoksisitet. De uoppløse-lige konstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse kan ikke bli fjernet av nyrene og
! kan derfor omgå dette problemet. En ytterligere fordel med de sterkt tverrbundne hemoglobinkonstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse i forhold til kjent teknikk, er den økede intravaskulære varighet på grunn av den uoppløselige form.
Morfologien til de uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene (IHC) blir bestemt ved bruk av transmisjonselektronmikroskopi (TEM). For å oppnå TEM-mikrografer av et tverrsnitt av bovint IHC, ble IHC fiksert med glutaraldehyd, farget med osmiumtetrok-sid og kaliumferrocyanat (for å gi kontrast i regioner med høy proteinkonsentrasjon), bakt inn i en lav viskositetsharpiks og ultra-mikrotomert (skivetykkelse ca. 75 nm).
Krymping i totaldiameteren og noe ødeleggelse i fasongen av IHC er forventet under
i denne prosessen, den sanne diameteren til IHC best representert ved oppløsningspartik-kelstørrelsesdistribusjon (3 mikron; standard avvik 1), heller enn direkte måling fra TEM-mikrografen. En nærmere undersøkelse av TEM-mikrografen viser tre distinktive regioner; en klar sentral region; et mørkt, tynt lag omkring partikkelen; og en løst forbundet, diffus, sparklet grå region forbundet med den ytre overflaten av partikkelen. Det mørke, tynne laget er IHC-skallet. Det inneholder en høy densitet av protein og under fargeprosedyren, utvikler den mest kontrast. Det løst forbundne, grå materialet synes å være nativt protein som festes til IHC-skallet under fikseringstrinnet i prøvepreparerin-gen. Initielle målinger av denne og andre mikrografer indikerer skalltykkelsen til bovint
hemoglobin IHC og er omkring 25-35 nm. Hemoglobin er et røft sfærisk protein
i (L. Stryer, Biochemistry, W.H. Freeman, New York, 1988) med en diameter på 5,5 nm.
Proteinskallet til IHC er således omkring 4 til 20 hemoglobinmolekyler (tetramerer) tykk. En 3,0 um diameter boble vil således inneholde omkring 10^ til 10^ hemoglobin-
molekyler.
Undersøkelse av uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner (IHC) ifølge foreliggende oppfinnelse (mikrobobler eller mikrosfærer) ved sirkulær dikroisme avslørte at innholdet av a-heliks og p-platestrukturer i IHC ikke var signifikant forskjellig fra det til ren-set stroma-fritt hemoglobin (SFH). Denne observasjonen er signifikant og den indikerer at tverrbindingsprosedyren og dannelsen av uoppløselig hemoglobin ikke resulterer i denaturering (dvs. forandringen i den tertiære og kvatemære struktur) til proteinet. Denne observasjon er naturligvis i samsvar med funksjonelle data som viser retensjonen av reversibel oksygenbinding og kooperativitet mellom oksygenbindende heme-enheter etter det syntetiske trinnet.
De oksygenbindende egenskapene til IHC har blitt bestemt. Siden hemoglobin i met-Fe(IH)-form ikke kan binde oksygen, ble reduksjonssystemet ifølge Hyashi et al. (A. Hyashi, T. Suzuki, M. Shin., Biochim. Biophus. Acta, 310:309,1973) benyttet for å redusere Fe(III) til Fe(II). Reduksjonssystemet består av forskjellige konsentrasjoner av glukose-6-fosfat, glukose-6-fosfat-dehydrogenase, NADP, ferredoksin, ferredoksin-reduktase og katalase. Før hvert oksygenbindingseksperiment ble reduksjonssystemet tilsatt til IHC og holdt ved 4°C i 24-36 timer.
Et bovint og humant hemoglobin IHC ble syntetisert som beskrevet i eksempel 14. Fagmannen kan forstå, at det benyttede hemoglobin kan bli avledet fra et hvilket som helst virveldyr, virvelløse dyr eller eukaryot kilde eller kan være produkt av genetisk manipu-lering av virveldyr, virvelløse dyr eller eukaryote celler. Tabell 1 gir en oppsummering av de foreliggende resultatene.
Note: Hill-koeffisienten(e) for BHb-mikroboblene er beregnet fra formelen:
hvor Y er fraksjonen oksygenert og Pq2 er oksygentrykket.
For mikroboblene er hvert Alog(Y/l-Y) gjennomsnitt for fire etterfølgende punkter.
Alle bindingseksperimentene ble gjort ved 25°C i Tris-buffer (pH 7,4). EHC beholder deres evne til å binde oksygenreversibiliteten som demonstrert ved UV-synlig spekter av IHC som indikerer nærværet av met-Fe(III)-, oksy-Fe(II)- og deoksy-Fe(II)-former. IHC kan bli cyklisert mellom deoksy- og oksytilstander i mer enn ti cykluser uten betydelig degradering. Dette er viktig fordi det indikerer at miljøet som omgir det aktive heme-setet ikke er betydelig forandret i prosessen for å fremstille det IHC røde blodcel-lesubstituttet.
Disse oksygenbindende data antyder at IHC omfatter hovedsakelig ikke-denaturert hemoglobin. Dersom det var denaturert, ville ingen fysiologiske (eller lavere) reaktivitet bli observert.
Oksygenbindende kurver for det reduserte hemoglobin IHC og nativ stroma-fritt hemoglobin i fråvær av fosfat har sigmoidal form, noe som indikerer kooperativitet i oksy-genbindingen. Psø-verdiene (trykket ved hvilket halvparten av de tilgjengelige bin-dingssetene på hemoglobin er bundet av oksygen) er tilsvarende i begge kurver (21 torr versus 22 torr). Dette resultatet indikerer at IHC binder og frigjør oksygen ved tilsvarende oksygentrykk som nativt hemoglobin. Det er slående at maksimal Hill-koeffisient, nmaks (indikerer nivået av kooperativitet mellom oksygenbindende seter) i IHC er signifikant høyere enn det til stroma-fritt hemoglobinoppløsning (9,5 versus 2,6; se figur 2). Hill-koeffisientene (n) er beregnet for bruk av formelen:
hvor: Y er fraksjon oksygenert, og
P02 er oksygenpartialtrykk.
Noe utjevning ble gjort ved et gjennomsnitt av hver
(Å)log(Y/l-Y)-term over fem etterfølgende punkter.
Allosteriske effektorer av nativt hemoglobin slik som inositolheksafosfat (IHP) og 2,3-bisfosforglycerat (2,3-BPG) har blitt vist å øke både P50 (dvs. senke oksygen-affiniteten) og å øke kooperativiteten. De samme effektene er sett i IHC. Selv om P5Q-verdiene er øket ved den samme mengde, blir en mer dramatisk effekt sett i kooperativiteten til IHC. nmaksØkte dramatisk i forhold til nativt hemoglobin i nærvær av 1,7 mM IHP (17,6 vs. 2,8) og 2,3-BPG (14 vs. 2,8) (se figur 3 og tabell 1).
Den uventede, store økningen i kooperativitet synes å være årsak til kovalent binding mellom hemoglobintetrameren i IHC-skallet. Hill-koefifsienten kan ikke være større enn antallet vekselvirkende bindingsseter. Verdien på omkring 2,8 i nativt hemoglobin reflekterer kooperativiteten i en tetramer. I IHC-skallet er det imidlertid kommunikasjon mellom flere tverrbundne tetramerer (fra dannelsen av disulfidbindinger) etter binding av oksygen. Interaksjonene mellom nærmeste-nabo-tetramerer er sannsynligvis sterke; imidlertid kan ytterligere svake interaksjoner mellom tetramerer med større avstand ek-sistere. Den store nma^s er essensielt indikasjon på at multiple tetramerer samarbeider i kobling fra deoksy-T- til oksy-R-tilstand i IHC-skallet etter binding av oksygen. Igjen, viser TEM-mikrografer av hemoglobin IHC en skalltykkelse på omkring seks hemoglo-bintetramerer. En boble på 3,0 um diameter vil inneholde omkring 10^ til 10*2 hemoglobinmolekyler.
Stabilitet ved lagring til IHC ble testet ved partikkeltellinger ved forskjellige tidsperio-der etter fremstilling. IHC ble lagret i sterilt saltvann ved 4°C i opptil 6 måneder. Ved 3 måneder ble konsentrasjonen av IHC redusert med omkring 10%, mens konsentrasjonen ved 6 måneder hadde falt med omkring 25-30%.
Auto-oksidasjonsraten til IHC (fra oksy-Fe(H) til met Fe(IH)) har blitt bestemt å være større enn 60 timer, 96 timer og 25 dager ved henholdsvis 37°C, 25°C og 4°C. Ingen spesielle forholdsregler ble tatt for å opprettholde en inert atmosfære når disse resultatene ble oppnådd. Kjent teknikk illustrerer klart fordelen ved å opprettholde en inert atmosfære slik som nitrogen for å redusere raten av auto-oksidering av hemoglobin. Lagring under slike betingelser vil forventes å gi en sterk økning av fraksjonen av Fe(II)-hemoglobin opprettholdt over en lenger tidsperiode.
I tillegg, kan auto-oksidering bli forhindret ved lagring av IHC-suspensjon med reduksjonssystemet ifølge Hyashi et al. beskrevet ovenfor.
Pasteurisering ble undersøkt som en fremgangsmåte for sluttrinnssterilisering for IHC-suspensjonene. Flere forskjellige pasteuriseringsbetingelser ble benyttet. Partikkeltellinger etter hver tilstand ble benyttet for å bestemme eventuelle skadelige effekter fra temperaturen på IHC.
Betingelse 1: Temperaturen i IHC-suspensjonen ble øket fra 25 til 62,8°C i 8 minutter og så holdt ved denne temperaturen i 30 minutter. Partikkeltellinger viste en degradering på mindre enn 20%.
Betingelse 2: Temperaturen i IHC-suspensjonen ble øket fra 25 til 71,7°C i 10 minutter og holdt ved denne temperaturen i 15 minutter. Partikkeltellinger viste en degradering på mindre enn 20%.
Betingelse 3: Temperaturen i IHC-suspensjonen ble øket fra 25 til 89,5°C på 12 minutter og holdt ved denne temperaturen i 2 sekunder. Partikkeltellinger viste en alvorlig de-
gradering på mer enn 70%.
Betingelsene 1 og 2 ble således funnet å passe som pasteuriseringsmoduser. y-bestråling som en endetrinns-steriliseringsmulighet er også egnet.
Oksygenaffiniteten (eller P50) til IHC kan bli forandret ved kjemisk modifikasjon av
hemoglobinet med kjente allosteriske effektorer. Generelt, begrenser modifikasjonen av hemoglobin transisjonen mellom de to oksy- og deoksy-konformasjonene, slik at oksy-generingsfunksjonen nesten alltid blir endret på en eller annen måte. F.eks., dersom hemoglobin blir modifisert i oksy-formen, blir høy oksygenaffinitet vanligvis favorisert, mens det motsatte er tilfellet hvis modifikasjon blir utført i deoksy-tilstanden. Derivater av pyridoksal er nyttige modifikatorer siden dette molekylet etterligner den naturlige, allosteriske effektor 2,3-disfosforgIycerat (DPG). De bindes til terminale aminogrupper i hemoglobin. F.eks. kan hemoglobinet reagere med pyridoksal-5'-fosfat (PLP) som etterligner naturlig interaksjon av 2,3-DPG for å øke P5Q. Andre derivater av pyridoksal slik som 2-nor-2-formyl-PLP, et bifunksjonelt middel som binder seg til hemoglobin fi-kjeder, eller bis-pyridoksal-tetrafosfat er nyttige modifikatorer. Andre tverrbindere slik som acyl-tris(natriummetylfosfater) kan også bli benyttet for å tverrbinde 13-kjedene.
Aldehydmodifikatorer kan også benyttes. F.eks. er glutaraldehyd nyttig ved polymerisering av hemoglobin og kan benyttes i forbindelse med PLP.
Diaspirin-estere slik som 3,5-bis(dibromsalicyl)fumarat og den tilsvarende monoaspirin er nyttige allosteriske modifikatorer. Aspirin binder seg mellom a-kjeden av hemoglobin og det monofunksjonelle reagenset til en intern lysin. Begge øker P50 til hemoglobin.
"Lav affinitet"- eller "høy affinitet"-konstruksjoner kan således bli fremstilt for anvendelse i situasjoner andre enn traumer og akutt blodtap, slik som i situasjoner hvor lokal avlevering av oksygen er nødvendig eller fordelaktig.
En "lav-affinitets"-konstruksjon, dvs. en med en høy P50 (> 28 mm Hg), produsert ved teknikkene ovenfor har nytte i anvendelsen av oksygen som et hjelpestoff i behandling av tumorer ved bestråling eller kjemoterapi. Slike konstruksjoner blir fylt til maksimal oksygenkapasitet på utsiden av kroppen og så administrert til sirkulasjon i tumoren. Dette tillater at store mengder oksygen blir frigitt i tumoren. Aktivert oksygen produsert i nærvær av stråling eller kjemoterapi resulterer i større cytotoksisitetsaktivitet ved tu-
morsetet.
E "høy-affinitets"-konstruksjon (P50 < 28 mm Hg) har anvendelse for "iskemisk oksygenavlevering". Iskemi, eller oksygensvikt i vev kan opptre ved et antall patologiske til-stander, f.eks. slag, myokardialt infarkt og lignende. Den foretrukne frigjvingen av oksygen i slike områder vil hjelpe til å minimalisere permanent vevsskade. En oksygenbærer eller RBC-substitutt med oksygenaffinitet tilsvarende helblod vil ikke favorisere ok-sygenfrigivning ved et slikt sete. Imidlertid kan en med en høy oksygen-affinitet (dvs. en lav P50 sammenlignet med helblod), beholde det meste av dets oksygen under til-stander ved de vanlige oksygengradientene, men vil frigi sitt oksygen ved et slikt iskemisk sete på grunn av den store oksygengradienten mellom blodet og vevet. Affinite-tene til uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli manipulert til en passende verdi (P50) for slik anvendelse ved forandring av tverrbin-dingsnaturen, eller ved anvendelsen av et egnet naturlig hemoglobin med den ønskede affinitet, eller ved anvendelse av et genetisk manipulert hemoglobin med egnet affinitet.
De uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli
innkapslet og derved virke som effektive bærere for farmakologiske midler slik som oksygenbærere (f.eks. fluorkarboner), medikamenter, diagnostiske midler og lignende. De innkapslede fluorkarbonene (FC) er effektive oksygenbærere som transporterer og frigir oppløst oksygen med et lineært forhold til partialtrykket av oksygen mens hemoglobinskallet i IHC transporterer og frigir bundet oksygen med et sigmoidalt forhold til oksygentrykket. Denne unike kombinasjonen av hemoglobin og fluorkarbon i den samme formuleringen tillater maksimal transport og frigivning av oksygen in vivo.
Evnen til å avlevere hemoglobin (Hb) og fluorkarbon (FC) samtidig har ikke blitt beskrevet i kjent teknikk. Innkapslede fluorkarboner i kjernen av hemoglobinskallet er i stand til å virke som et oksygenreservoar. Denne kombinasjonen tillater levering av oksygen bundet til bæreren i et sigmoidalt forhold til trykket (dvs. for hemoglobin) så vel som lineært forhold til trykket (dvs. for fluorkarbonet). Denne kombinasjonen tillater "bakgrunn"-frigivelse av oksygen på en lineær måte (fra fluorkarbon) i forhold til vevets pC<2 og "bolus"-firgivelse av oksygen på en sigmoidal form (fra hemoglobin) i forhold til vevs p02- Dette gir en mer effektiv oksygenavlevering, spesielt i tilfeller hvor store mengder oksygen skal bli levert i korte perioder, f.eks. ved vevsiskemi eller tumorterapi.
Hb/FC-kombinasjonen har den tilleggsfordelen ved ekstern monitorering i forhold til lo-kaliseringen av den intravaskulært avleverte dosen. Da l^p-kjernen lett blir avbildet ved magnetisk resonansavbildning (MRI), er det mulig å spore akkumuleringen av den leverte suspensjonen i vaskulaturen og vevet. Dette har store fordeler ved tumorbehand-ling hvor oksygen blir benyttet som et hjelpestoff med bestråling eller kjemoterapi for presist å monitorere avleveringen av oksygen bærende hemoglobin/FC-suspensjon til det ønskede setet.
Et antall fluorkarboner (FC) egner seg for anvendelse ved utførelsen av foreliggende oppfinnelse, dette er beskrevet i detalj nedenfor.
Videre kan proteiner som ikke har noen oksygenbindende evne, men har tverrbindende cysteinrester eller sulfhydrylgrupper (native eller kunstig innførte), bli benyttet for å innkapsle bioforenlige fluorkarboner med passende oksygenaffinitet for anvendelse som blodsubstitutter. Som et eksempel kan albumin benyttes for å innkapsle perfluordecalin eller perfluortripropylamin for anvendelse som blodsubstitutter.
Flere medikamenter er kandidater for innkapsling i hemoglobinmikrosfærer ifølge oppfinnelsen. Flere kjemoterapeutiske midler krever nærvær av oksygen for maksimal tumor-cytotoksisitet. Leveringen av slike medikamenter inne i konstruksjonene av en oksygenbærer slik som hemoglobin, kombinerer effektivt de essensielle komponentene for cytotoksisiteten i en enkelt pakke. Flere nyttige cytotoksiske medikamenter er oljeopp-løselige. Disse medikamentene kan bli oppløst i et fluorkarbon eller annen bioforenlig olje slik som soyabønneolje, safranolje, kokosolje, olivenolje, bomullsfrøolje og lignende. Olje/medikant-oppløsningen blir utsatt for ultrasonisk bestråling med en hemo-globinoppløsning for å produsere mikrosfærer av olje/medikament inne i et skall av tverrbundet uoppløselig hemoglobin. Suspensjonen kan bli oksygenert før intravenøs administrasjon. Oljeoppløselige cytotoksiske medikamenter omfatter cyklofosfamid, BCNU, melfalan, mitomyciner, taxol og derivater, taxotere og derivater, kampotecin, adriamycin, etoposid, tamoksifen, vinblastin, vinkristin og lignende; ikke-steroidale anti-inflammatoriske midler slik som ibuprofen, aspirin, piroksicam, cimetidin og lignende; steroider slik som østrogen, prednisolon, kortison, hydrokortison, diflorason og lignende, medikamenter slik som fenesterin, mitotan, visadin, halonitrosoureaer, antro-cykliner, ellipticin, diazepam og lignende; immunosuppressive midler slik som cyklosporin, azatioprin, FK506 og lignende.
Vannoppløselige medikamenter kan også bli innkapslet i IHC-skallet ved en fremgangsmåte med dobbel emulsjon. Først vil en vandig medikamentoppløsning emulgert med en bioforenlig olje for å oppnå en vann-i-olje (W/0)-emulsjon. W/O-ernulsjonen blir behandlet som en oljefase og utsatt for ultrasonisk bestråling med en vandig hemoglo-binoppløsning som ovenfor for å produsere IHC som inneholder i skallet en mikroemulsjon av det ønskelige vannoppløselige medikamentet. Emulgatorer omfattet for anvendelse i denne utførelsesformen av foreliggende oppfinnelse omfatter pluroniker (blokk-kopolymerer av polyetylenoksid og polypropylenoksid), fosfolipider av eggeplomme-opprinnelse (f.eks. egg-fosfatider, eggeplommelecitin og lignende); fettsyreestere (f.eks. glycerol-mono- og di-stearat, glycerol-mono- og di-palmitat og lignende). Vannopplø-selige medikamenter omfattet for anvendelse i denne utførelsesformen ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter antineoplastiske medikamenter slik som aktinomycin, bleo-mycin, cyklofosfamid, duanorubicin, doksorubicin, epirubicin, fiuoruracil, karboplatin, cisplatin, interferoner, interleukiner, metotreksat, mitomyciner, tamoksifen, østrogener, progestogener og lignende.
Den doble emulsjonsteknikken passer også for levering av andre vannoppløselige materialer for terapeutisk, diagnostisk eller næringsmessig verdi. F.eks. kan hemoglobininnholdet i IHC bli øket ved innkapsling av en hemoglobin-mikroemulsjon inn i IHC.
For å gjøre IHC likere blodceller, kan et fosfolipidbilag bli dannet rundt de tverrbundne hemoglobinmikroboblene. Slike bilag resulterer i dannelsen av en sann "rød blodcelle-analog" og kan bli fremstilt i en totrinns prosess. Fylte fosfolipider eller lipider benyttet i dannelsen av dette bilaget omfatter fosfatidylcholin, fosfatidyletanol, fosfatidylglycerol, sfingomyelin, dimyristoylfosfatidinsyre, dipalmitoylfosfatidinsyre, sarkosinater (sarkosinamider), betainer, monomere og dimere alkyder og lignende. Ikke-ioniske lipider kan også bli benyttet i foreliggende oppfinnelse, inkludert polyetylenfettsyrees-tere, polyetylenfettsyreetere, dietanolamider, langkjedede acylheksosamider, langkjedede acylaminosyreamider, langkjedede aminosyreaminer, polyoksyetylensorbitanes-tere, polyoksyglycerol-mono- og di-estere, glycerol-mono- og di-stearat, glycerolmono-og di-oleat, glycerol-mono- og di-palmitat og lignende.
Andre variasjoner av denne teknikken anvender fotopolymeriserbare lipider eller lipider som lett kan bli tverrbundet ved en kjemisk reaksjon for å gj en mer stabil lipid-"membran"-kappe. Fotopolymeriserbare lipider som kan bli benyttet i foreliggende oppfinnelse omfatter akrylat- eller metakrylat-substituerte lipider (slik som fosfatidylcholin, fosfatidyletanolamin, fosfatidylserin, fosfatidylglycerol, dimyristoylfosfatidinsyre, dipalmitoylfosfatidinsyre og lignende); lipider med nativ polymeriserbar umettethet (slik som umettede fosfatidylcholiner med diacetylengrupper eller konjugerte diengrupper og lignende) osv. Lipider som lett oppnår tverrbinding via tioldisulfidbytte er også gode kandidater for dannelsen av en stabil lipidkappe for IHC. Eksempler på slike lipider omfatter derivater av fosfatidylcholiner esterifisert med lipoinsyre og lignende.
IHC syntetisert ved ultrasonisk bestråling kan bli administrert som en suspensjon i et bioforenlig medium, som beskrevet ovenfor, så vel som andre midler av næringsmessig verdi.
Foretrukne veier for in vivo-administrasjon er intravenøst, intraarterielt, intramuskulært, subkutant, intraperitonealt, oralt, inhalering, topikalt, transdermalt, stikkpiller, pessarer og lignende.
Ved en oppsummering har de uoppløselige hemoglobinkonstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse tallrike fordeler overfor kjent oppløselig hemoglobin, innkapslet opp-løselig hemoglobin ifølge kjent teknikk og fluorkarbon-blodsubstitutter eller oksygenbærere ifølge kjent teknikk. Disse fordelene omfatter: høyere oksygenkapasitet;
variabel oksygenaffinitet;
uoppløselige "megamert" hemoglobin som er forventet å bli lengre i sirkulasjon enn
kjent tetramert eller oligomert oppløselig hemoglobin;
lavere potensial for nyretoksisitet på grunn av større molekylær størrelse;
mindre sannsynlighet for å lekk hemoglobin enn liposomalt innkapslet hemoglobin; på grunn av mye større størrelse enn liposomer, er dannelsen av aggregater som
stimulerer komplementproteiner usannsynlige;
oppfører seg mer likt RBC på grunn av diskret "cellulær" natur sammenlignet med
oppløselig hemoglobin ifølge kjent teknikk;
kan bære et reservoar av ubundet oksygen sammen med oksygen bundet til hemoglobin;
kan bli benyttet som en fluorkarbon(FC)bærer uten potensielle allergiske og toksiske emulgatorer;
tverrbundet hemoglobin i Hb/FC-konstruksjoner sikrer forbedret stabilitet i forhold til kjente emulgerte systemer som benytter eggfosfatider og/eller syntetiske overflateaktive midler;
frigivingsprofiler av oksygen fra Hb/FC er en kombinasjon av sigmoidal og lineær
relasjon til vevets PC7;
Hb/FC-konstruksjoner kan bli detektert og monitorert in vivo ved ^F MRI; hemoglobin eller Hb/FC-konstruksjoner kan bli benyttet som medikamentbærere i tillegg til å bære oksygen;
en lipid-bilagsmembran kan bli nyttet for å la hemoglobinkonstruksjonene synes
mer fysiologiske;
hemoglobinkonstruksjonen kan bli modifisert på polymerer slik som PEG for ytterligere å øke intravaskulær likevektstilstand.
Ifølge enda en side ved foreliggende oppfinnelse er det blitt funnet at organfluoirnnehol-dende forbindelser som generelt er hydrofobe, ikke blandbare med vann og følgelig vanskelig å administrere, kan bli omsluttet i polymere skall (som beskrevet ovenfor) for å lette avleveringen. Organfluorinneholdende forbindelser omsluttet inn i polymerskall er lett anvendbare og bioforenlige. Partikkelstørrelsen til de polymere skall produsert ifølge foreliggende oppfinnelse har en gjennomsnittlig diameter på omkring 2 mikron som er ideelt for medisinsk anvendelse, intravenøse eller intraarterielle injeksjoner kan bli utført uten risiko for blokkering av små kar og påfølgende vevsskade (f.eks. på grunn av iskemi på grunn av oksygenmangel). For sammenligning er størrelsen på røde blodceller omkring 8 mikron i diameter (injiserbart biomateriale må derfor være mindre enn 8-10 mikron i diameter for å forhindre blodkarblokkering).
Naturlig forefinnende fluoratomer (^F) gir et klart nukleært magnetisk resonanssignal og kan således virke som et kontrastmiddel eller "probe" i MRI. De spesifikke fordelene for anvendelse av ^F omfatter: 1) en ekstremt lav naturlig konsentrasjon i kroppen
(fluor er ikke naturlig funnet i kroppen), 2) en høy kjernemagnetisk resonanssensitivitet, 3) et magnogyrisk forhold nært det til * H, og tillater således at <l>^F magnetisk resonansavbildning kan bli utført med mindre modifikasjoner av eksisterende MRI-utstyr, og 4) lav toksisitet til de fleste organfluorinneholdende forbindelsene.
Generelt, er fluorkarboner ikke-toksiske og bioforenlige. Fluorkarboner er stabile og ikke-reaktive og følgelig er det ikke sannsynlig at de blir metabolisert på grunn av deres sterke karbonfluorbindinger (omkring 130 kcal/mol). For sammenligning, er karbon-hydrogenbindinger (omkring 100 kcal/mol) svakere og mye mer reaktive. FD A har godkjent to fluorkarboner, perfluortirpropylamin og perfluordecalin, for medisinsk anvendelse som blodsubstitutter under handelsnavnet Fluosol DA.
Et antall forskjellige fluorkarboner kan bli benyttet ved utførelsen av foreliggende oppfinnelse. F.eks. kan forbindelser som tilfredsstiller den følgende generelle formel bli innlemmet i polymere skall ved anvendelse av oppfinnelsens fremgangsmåte som beskrevet her:
00 cx<F>2x+y-zAz>nvor
x = 1 - 30, fortrinnsvis 5 -15,
y = 2; eller 0 eller 2, når x < 2; eller 4 når x <4,
z = et helt tall fra 0 opptil (2x+y-l), og
A er valgt blant H, halogener forskjellig fra F, CN, OR, hvor R er H, alkyl,
fluoralkyl, alkenyl, fluoralkenyl, alkynyl, fluoralkynyl, aryl, fluoraryl, alkanoyl, fluoralkanoyl, alkenoyl, fluoralkenoyl, alkynoyl, fluoralkynoyl,
(°) [cxF2x+y'-zAz]aJ<R>b-a. hv°r
x, z A og R er som definert ovenfor,
y1 = 1; eller 1 eller 3, når x <2; eller 6 når x <4,
J = 0, S,N,P,AlellerSi,
a= 1,2,3 eller 4, og
b = 2 for en divalent J, eller
3 for en trivalent J,
4 for en tetravalent J,
(c) A'-[(CF2)x-0]c-A",hvor
x er som definert ovenfor,
A' er valgt blant H, halogener, CN, OR, hvor R er H, alkyl, fluoralkyl, alkenyl, fluoralkenyl, alkynyl, fluoralkynyl, aryl, fluoraryl, alkanoyl, fluoralkanoyl, alkenoyl, fluoralkenoyl, alkynoyl, fluoralkynoyl,
A" er valgt blant H eller R, hvor R er som definert ovenfor,
c = 1 - 200, fortrinnsvis 2 - 50, eller
(<d>) [(<CF>2)x-<0>]c.
hvor:
x er som definert ovenfor, og
c<*> - 2 - 20, fortrinnsvis 2 - 8,
så vel som blandinger av hvilke som helst av to eller flere derav.
Inkludert i generell formel ovenfor er forbindelsene som har de generelle formlene slik
som:
Cx<F>2x» slik som f.eks. perfluor-1-heksen (CgF^X perfluor-2-heksen (CgF^)» <pe>rfluor-3-heksen (CgFi2) og lignende,
cyklo-CxF2x, slik som f.eks. perfluorcykloheksan (CgF^), perfluorcyklooktan (CgFig) og lignende,
Cx<F>2x-2> slik 80111 f-eks. perfluor-1-heksyn (CqFjq), <p>erfluor-2-heksyn (CgFiø), perfluor-3-heksyn ( C^ F\q) og lignende,
bicyklo-CxF2x_2» slik som f.eks. perfluordecalin (Cjo<F>is) og lignende,
CxF2x+2, slik som f.eks. perfluorheksan (C<gF>^), perfluoroktan (CgFi g), perfluorno-nan (CqF2o)> perfluordecan (CiqF22)> perfluordodecan (C12F26) °S lignende,
CXF2X_4, slik som f.eks. perfluor-2,4-heksadien og lignende,
CxF2x+i A, slik som f.eks. perfluortripropylamin [(C3F7)3N], perfluortributylamin [(C4F9)3>T], perfluor-tert-tributylamin
og lignende,
<C>x<F>2x-2A2, slik som f.eks. CiøHj<g>l^ og lignende,
så vel som slik sterkt fluorinerte forbindelser som perfluorindan, perfluormetyl-adamantan, perfluoroktylbromid, perfluordimetylcyklooktan, perfluorcyklooktylbromid, perfluor-crown-etere og lignende.
Ved siden av lineære, forgrenetkjedede og cykliske fluorinneholdende forbindelser som angitt ovenfor, er fluorinerte crown-etere (slik som f.eks. perfluor-12-crown-4, perfluor-15-crown-5, perfluor-18-crown-6 og lignende) også omfattet for anvendelse av utførel-sen av foreliggende oppfinnelse.
For å oppnå gode magnetiske resonansavbildninger med høye signaler i forhold til støy, er det fordelaktig å ha et høyt antall ekvivalente fluoriner. Som benyttet her refererer uttrykket "ekvivalente fluoriner" seg til de fluorsubstituentene av en fluorinneholdende forbindelse som eksisterer i et hovedsakelig likt mikro-miljø (dvs. hovedsakelig tilsvarende magnetisk miljø). Ekvivalente fluoriner vil produsere et avbildningssignal. Et høyt antall ekvivalente fluoriner vil produsere et sterkt signal, ikke-fortynnet av konkur-rerende signaler av "ikke-ekvivalente" fluoriner.
Som benyttet her, betyr uttrykket "ikke-ekvivalente fluoriner" de fluorsubstituentene av en fluorinneholdende forbindelse som eksisterer i et hovedsakelig ikke-tilsvarende mikromiljø (dvs. hovedsakelig ikke-tilsvarende magnetisk miljø), i forhold til andre fluorsubstituenter har den samme fluorinneholdende forbindelsen. I motsetning til ekvivalente fluoriner, vil ikke-ekvivalente fluoriner gi multiple signaler på grunn av deres forskjellige kjemiske skift. Mens forbindelser med et høyt antall ikke-ekvivalente fluoriner er tilfredsstillende for MRI-anvendelser, er slike forbindelser ikke ideelle for maksimal avbildning.
Av spesiell interesse for anvendelse for vaskulær avbildning er fluorkarbon-inneholdende polymere skall som har forlenget sirkulasjonstid. For tiden benyttede angiogra-fiske teknikker benytter røntgenstrålekontrastmedia og er invasive prosedyrer. Potensia-let for <1>H-MRI har nylig blitt demonstrert for angiografi-anvendelser [Edelman & Warach, New England J. of Medicine, 328:785-791 (1993)]. Likeledes, er <19>F-MRI nyttig for angiografi, mens et antall fordeler slik som evnen til å oppnå høy kontrast i forhold til omgivende vev (som ikke inneholder nativt fluorin). Eksempler på anvendelser av slik metodologi omfatter diagnose og identifisering av intrakraniale aneurysmer, arteriovenøse misdannelser, okklusjoner i superior vena cava, inferior vena cava, portvenen, den palviske venen, den renale venen, den renale mesenteriske arterie, den peri-fere mesenteriske arterie og lignende.
Fluorinneholdende forbindelser innkapslet av polymere skall ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli benyttet for flere forskjellige formål, feks. for å oppnå magnetiske resonansavbildninger av forskjellige organer og/eller vev, for å oppnå oksygenprofiler i organer og/eller vev, og også for å måle lokale temperaturer. Oppfinnelsens kontrastmidler er ikke begrenset til MRI-anvendelser, men kan også bli benyttet for slike anvendelser som ultrasonografi og radiologi. Den andre isotopen av fluor, <18>ps kan bli benyttet som et positron-emisjons-tomografi (PET) kontrastmiddel. Med et fluorinneholdende kontrastmiddel kan således både PET og MRI-diagnose bli utført. Innkapsling av andre avbildningsmidler slik som teknetium- og thalliumforbindelser kan benyttes som radiokontrastmedier. To eksempler på slike kontrastmidler omfatter neurolytt og kardio-lytt.
Anvendelsen av oppfinnelsens sammensetninger for oksygendeteksjon er basert på de dramatiske forandringene i NMR-relaksjonsraten til i nærvær av et paramagnetisk
stoff som oksygen. Da oksygen er paramagnetisk, kan det vekselvirke med fluorkjernen, øke relaksjonstiden til ^F fra den eksiterte tilstanden til normaltilstanden. Ved monitorering av denne forandringen i relaksjonsrate, er det mulig å bestemme oksygenkonsentrasjonen i et lokalt område (ved kalibrering av MRI-signalet til en kjent konsentrasjon av oksygen).
Nyheten i dette systemet ligger f.eks. i 1) anvendelse av MRI for å oppnå oksygeninfor-masjon, 2) anvendelse av oksygen-paramagnetisk påvirkning på ^F-MRI (NMR)-signal, 3) anvendelse av polymere skall for å oppnå et konstant og beskyttende miljø som også er permeabelt for oksygen, og lignende.
Ved anvendelse av fluorinneholdende forbindelser som er faste stoffer som gjennomgår en fasetransisjon over fysiologiske temperaturområder (f.eks. forbindelser med høy molekylvekt eller kombinasjoner av fluorinneholdende forbindelser), kan MRI også bli benyttet for å måle lokale temperaturer. Relaksjonstiden er mye lenger i stoffer enn i væsker, således vil relaksjonstiden reduseres dramatisk ettersom transisjonstemperatu-ren (dvs. fra faststoff til væske) oppnås. Dramatiske forandringer blir observert i NMR-spekteret under fasetransisjon av fast stoff til væske. Formen på MRI-signalet for en gitt fluorinneholdende forbindelse kan bli kalibrert til en kjent temperatur. Ved anvendelse av en høymolekylvektfluorinneholdende forbindelse med et polymert skall (f.eks. en fluorinneholdende forbindelse som har et smeltepunkt på 15°C) eller ved anvendelse av en kombinasjon av fluorinneholdende forbindelse med en ikke-fluorinert forbindelse innen det polymere skall, kan innholdet av det indre av det polymere skall bli valgt slik at et ønsket temperaturområde for fasetransisjon skjer (typisk i området fra omkring 22-55°C). Fluorkarbonene innen skallet vil gjennomgå en fast til flytende fasetransisjon over det ønskede temperaturområdet, for betydelig å endre de observerte reaksjonsra-tene, for således å tillate in vivo temperaturbestemmelse. Lokal temperatuirnformasjon vil være spesielt nyttig f.eks. for monitorering av cancerpasienter under hypertermi-behandling av cancer eller i deteksjon av cancerceller (cancerceller er kaldere enn normale celler).
Den benyttede fluorinneholdende sammensetningen vil bestemme temperaturområdet for fasetransisjonen. Teknikken kan således bli benyttet over et vidt temperaturområde, ved ganske enkelt å forandre sammensetningen til den fluorinneholdende sammensetningen. F.eks., vil rent perfluordodecan (C12F26) omsluttet i et polymert skall, gjennomgå en fast til flytende fasetransisjon ved smeltepunktet til fluorkarbonet (75°C). Imidlertid ville denne transisjonen være skarp og kun en liten mengde av temperaturin-formasjonen vil oppnås. For å oppnå større informasjon, kan smeltepunktet til den fluorinneholdende sammensetningen bli fordelt over et større område, f.eks. ved å tilsette en annen komponent til den rene fluorinneholdende sammensetningen. Det er velkjent i teknikken at en blanding vil ha et lavere og bredere smeltepunktområde enn den tilsvarende rene forbindelsen. Tilsvarende vil f.eks. formulering av perfluordodecan med et fluorkarbon med lavere molekylvekt utvide smeltepunktområdet for den omsluttede sammensetningen. Tilsvarende vil en blanding av fluorinneholdende forbindelse (f.eks. perfluordodecan) med et alkan (f.eks. pentan), f.eks. utvide smeltepunktområdet til den omsluttede sammensetningen.
I tillegg kan kjemisk modifiserte, langkjedede fettsyrer (f.eks. heptadedcanoinsyre
[C17H34O2], nonadecanoinsyre [CiQH3g02] og lignende), alkoholer (f.eks. nonadeca-nol [<C>19H40O], Docosanol [C22H46O] og lignende) til hvilke fluor kan bli kjemisk tilsatt, også bli benyttet i utførelsen av foreliggende oppfinnelse. F.eks., en dehydrerings-koblingsreaksjon mellom perfluor-tert-butanol (t-C4FQ-OH; PCR CHEMICALS) med
en hvilken som helst av de ovenfor beskrevne reaktive oksygeninneholdende forbindelsene, vil produsere et molekyl som undergår en fast til flytende fasetransisjon og en som har ni ekvivalente fluorer. Tilsvarende vil f.eks. en blanding av en fluorert fettsyre og kolesterol gi bredere smeltepunktsområde sammenlignet med rene fluorerte fettsyrer for derved å tillate at lokal temperaturmåling blir utført.
Nyheten ved dette temperaturdeteksjonssystemet ligger f.eks. 1) i anvendelsen av MRI for å oppnå rommelig oppløst temperaturinformsjon, 2) ved anvendelsen av temperatur-avhengighet av MRI (NMR)-signal, 3) i anvendelsen av en fluorkarbon-inneholdende sammensetning som gjennomgår en fast til væskefase transisjon i det beskrevne temperaturområdet, 4) i anvendelsen av det polymere skall for å gi et konstant og beskyttende miljø for mediet, og 5) for å oppnå temperaturinformasjon samtidig med morfologiin-formasjon.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er partikler av den fluorinneholdende sammensetningen inneholdt i et skall med en tverrsnittsdiameter som ikke er større enn omkring 10 mikron (som benyttet her, refererer uttrykket "mikron" til en målingsenhet på et tusendels millimeter). En tverrsnittsdiameter på mindre enn 5 mikron er mer foretrukket, mens en tverrsnittsdiameter mindre enn 1 mikron for tiden er mest foretrukket for den intrave-nøse administrasjons vei.
Kontrastmidler ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli introdusert i kroppen via forskjellige veier avhengig av avbildningsbehovene. F.eks., kan vandige væskesuspensjo-ner bli plassert i magetarmkanalen ved oralt inntak eller stikkpiller (f.eks. for å oppnå avbildning av magen og magetarmkanalen), satt inn ved sprøyte inn i ikke-vaskulære rom slik som det cerebrospinale hulrommet, eller injisert i det vaskulære system generelt eller inn i karene i et spesifikt organ, slik som den koronare arterien. I tillegg kan kontrastmidlene ifølge oppfinnelsen også bli injisert i andre kroppsrom slik som det an-teriore og posteriore øyerom, øret, urinblæren (f.eks. ved hjelp av uretra), det peritone-ale hulrom, ureter, uretra, renal pelvis, hulrommet i ben, lymfatiske kar, subarachonoide rom, ventrikulære hulrom og lignende.
Det polymere skall inneholdende faste eller flytende kjerner av fluorinneholdende sammensetninger tillater direkte levering av høye doser av fluorinneholdende sammensetning i relativt små volum. Dette minimaliserer pasientens ubehag ved mottak av store volum med væske.
Ifølge en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse angis det en tilnærmings-måte for problemet med administrering av hovedsakelig vann-uoppløselige medikamenter slik som taxol, som ikke har blitt beskrevet i litteraturen. Således har det blitt beskrevet at leveringen av slike medikamenter kan bli utført ved vandige suspensjoner av mik-ronstørrelsespartikler, eller en vandig suspensjon inneholdende enten partikler av slike medikamenter eller medikamenter oppløst i en bioforenlig, ikke-vandig væske. Denne tilnærming ville fremme leveringen av slike medikamenter ved relativt høye konsentrasjoner og derved unngå anvendelsen av emulgeringsmidler og deres toksiske bivirkninger.
Ifølge enda en utførelsesform av foreliggende oppfinnelse blir den ovenfor beskrevne måte for administrasjon muliggjort ved nye medikamentinneholdende sammensetninger hvor hovedsakelig vann-uoppløselige medikamenter slik som taxol blir suspendert i en bioforenlig væske, og hvor den resulterende suspensjonen inneholder partikler av slikt medikament (f.eks. taxol) som har en tverrsnittsdimensjon som ikke er større enn omkring 10 mikron. Den ønskede partikkelstørrelsen på mindre enn 10 mikron kan bli oppnådd på forskjellige måter, f.eks. ved oppmaling, sprøytetørking, utfelling, ultrasonisk bestråling og lignende.
På grunn av krystallstørrelsen som konvensjonelt blir oppnådd av hovedsakelig vann-uoppløselige medikamenter slik som taxol som er større enn 20 mikron, har faste partikler av slike medikamenter (f.eks. taxol) ikke blitt levert i form av en suspensjon i en bærer slik som normalt saltvann. Imidlertid beskriver foreliggende oppfinnelse leveringen av en partikulær suspensjon av hovedsakelig vann-uoppløselige medikamenter (slik som taxol) malt opp til en størrelse som er mindre enn omkring 10 mikron, fortrinnsvis mindre enn omkring 5 mikron og mest foretrukket mindre enn omkring 1 mikron, som tillater intravenøs levering i form av en suspensjon uten risiko for blokkering av mikro-sirkulasjonen i organer og vev.
På grunn av mikropartikkelegenskapen til det leverte medikamentet blir det meste fjernet fra sirkulasjon av organer som har retikuloendothetiale systemer slik som milt, lever og lunger. Dette gir rom for at farmakologisk aktive midler i partikulær form blir målrettet for slike seter i kroppen.
Bioforenlige væsker omfattet ved anvendelse i utførelsesformen er de samme som beskrevet ovenfor. I tillegg kan parenterale næringsstoffer slik som Intralipid (handelsnavn for en kommersielt tilgjengelig fettemulsjon benyttet for et parenteralt næringsmiddel; tilgjengelig fra Kabi Vitrum, Inc., Clayton, North Carolina), Nutralipid (handelsnavn for en kommersielt tilgjengelig fettemulsjon benyttet som parenteralt næringsmiddel; tilgjengelig fra McGaw, Irvine, California), Liposyn III (handelsnavn for en kommersielt tilgjengelig fettemulsjon benyttet som et parenteralt næringsmiddel (inneholdende 20% soyabønneolje, 1,2% eggfosfatider og 2,5% glycerin); tilgjengelig fra Abbott Laboratories, North Chicago, Illinois) og lignende bli benyttet som bærer for medikamentpartiklene. Alternativt, hvis den bioforenlige væsken inneholder et medikament-oppløsende materiale slik som soyabønneolje (f.eks. som i tilfellet Intralipid), kan medikamentet bli delvis eller fullstendig oppløst i bærervæsken for å hjelpe til ved dets levering. Et eksempel på et tilfelle er leveringen av taxol i Intralipid som bæreren. For tiden foretrukne bioforenlige væsker for anvendelse i denne utførelsesformen er parenterale næringsmidler, slik som de beskrevet ovenfor.
Ifølge enda en utførelsesform av foreliggende oppfinnelse blir det fremskaffet en sammensetning for in vivo-avlevering av taxol hvor taxol er oppløst i et parenteralt næringsmiddel.
Oppfinnelsen vil nå bli beskrevet mer detaljert med referanse til de følgende ikke-be-grensende eksempler.
Eksempel 1
Fremstilling av proteinskall inneholdende olje
3 ml av en USP (United States Pharmacopæia) 5% human serumalbuminoppløsning (Alpha Therapeutic Corporation) ble tatt opp i et sylindrisk kar som kan bli forbundet til en sonikeringsprobe (Heat Systems, modell XL2020). Albuminoppløsningen ble lagt over med 6,5 ml av USP-grad soyabønneolje (soyaolje). Tuppen av sonikeringsproben ble brakt til grensesnittet mellom de to oppløsningene og det hele ble holdt i et kjølebad ved 20°C. Systemet fikk etablere en likevekt og sonikatoren ble skrudd på i 30 sekunder. Kraftig blanding oppsto, og en melkehvit suspensjon ble oppnådd. Suspensjonen ble fortynnet l :5 med normalt saltvann. En partikkelteller (Particle Data Systems, Elzone, modell 280 PC) ble benyttet for å bestemme distribusjonen og konsentrasjonen av de oljeinneholdende proteinskall. De resulterende proteinskallene ble bestemt å ha et maksimalt tverrsnitt på omkring 1,35 ± 0,73 mikron, og den totale konsentrasjonen ble bestemt å være ca. 10^ skall/ml i den opprinnelige suspensjonen.
Som en kontroll dannet komponentene ovenfor i fravær av protein, ikke en stabil mikroemulsjon når den ble utsatt for ultrasonisk bestråling. Dette resultatet antydet at proteinet er essensielt for dannelsen av mikrosfærer. Dette blir bekreftet ved scanning-elek-tronmikroskopi- og transmisjonselektronmikroskopistudier beskrevet nedenfor.
Eksempel 2
Parametere som påvirker dannelsen av pol<y>mert skall
Flere variabler slik som proteinkonsentrasjon, temperatur, sonikeringstid, konsentrasjon av farmakologisk aktivt middel og akustisk intensitet ble testet for å optimalisere dannelsen av polymere skall. Disse parametrene blir bestemt for tverrbundet bovint serum-albuminskall inneholdende toluen.
Polymere skall fremstilt fra oppløsninger med proteinkonsentrasjoner på 1%, 2,5%, 5% og 10% ble talt med partikkeltelleren for å bestemme forandring i størrelsen og antall
polymere skall fremstilt. Størrelsen av de polymere skall ble funnet å ikke variere bredt med proteinkonsentrasjonen, men antallet polymere skall pr. ml i "melkesuspensjonen" ble dannet, øket med økende konsentrasjon av protein opp til 5%. Ingen signifikant forandring i antallet polymere skall ble funnet over denne konsentrasjonen.
Initielle kartemperaturer ble funnet å være viktig for optimal preparering av polymere skall. Typisk ble initielle kartemperatur holdt mellom 0°C og 45°C. Vannoljegrense-snittsspenningen til oljene benyttet for dannelsen av polymere skall er en viktig parame-ter, som også varierte som en funksjon av temperatur. Konsentrasjonen av farmakologisk aktivt middel ble funnet å ikke gi en betydelig effekt på utbyttet av proteinskall. Det er relativt uviktig om det farmakologisk aktive stoffet er innlemmet i den oppløste tilstand eller suspendert i dispergeringsmediet.
Sonikeringstid var en viktig faktor som bestemte antallet polymere skall produsert
pr. ml. Det ble funnet at en sonikeringstid større enn 3 minutter produserte en økning i totaltellingen av polymere skall, noe som indikerer mulig destruksjon av polymere skall på grunn av eksessiv sonikering. Sonikeringstider lavere enn 3 minutter ble funnet å produsere adekvate antall polymere skall.
Ifølge nomografen fremskaffet av forhandleren av sonikatoren, er den akustiske kraften fra den benyttede sonikatoren her omkring 150 watt/cm<2>. Tre kraftinnstillinger for å øke kraften ble benyttet og det ble funnet at det maksimale antallet polymere skall ble produsert ved de høyeste kraftinnstillingene.
Eksempel 3
Fremstilling av polymere skall inneholdende oppløst taxol
Taxol ble oppløst i USP-grad soyabønneolje ved en konsentrasjon på 2 mg/ml. 3 ml av en USP 5% human serumalbuminoppløsning ble tatt opp i et sylindrisk kar som kunne bli forbundet med en sonikeringsprobe. Albuminoppløsningen ble lagt over med 6,5 ml soyabønneolje/taxol-oppløsning. Tippen av sonikeringsproben ble brakt til grensesnittet mellom de to oppløsningene og det hele ble holdt i likevekt og sonikatoren skrudd på i 30 sekunder. Kraftig blanding opptrådte og en stabil, melkehvit suspensjon ble oppnådd som inneholdt proteinveggede polymere skall som omsluttet olje/taxol-oppløsningen.
For å oppnå en høyere mengde av medikament i de tverrbundne proteinskallene, ble et gjensidig oppløsningsmiddel for oljen og medikamentet (i hvilken medikamentet hadde en betydelig høyere oppløselighet), blandet med oljen. Forutsatt at dette oppløsnings-middelet er relativt ikke-toksisk (f.eks. etylacetat), kan det bli injisert sammen med den opprinnelige bæreren. I andre tilfeller kan det bli fjernet ved avdamping av væsken under vakuum etter fremstilling av de polymere skall.
Eksempel 4
Stabilitet av polymere skall
Suspensjoner av polymere skall ved en kjent konsentrasjon ble analysert for stabilitet ved tre forskjellige temperaturer (dvs. 4°C, 25°C og 38°C). Stabiliteten ble målt ved forandringen av partikkeltelling over tid. Tverrbundet protein (albumin) skall inneholdende soyabønneolje (SBO) ble fremstilt som beskrevet ovenfor (se eksempel 1), fortynnet med saltvann til en endelig konsentrasjon på 20% og lagret ved temperaturene ovenfor. Partikkeltelling (Elzone) oppnådd for hver av prøvene som en funksjon av tid er opp-summert i tabell 2.
Som demonstrert ved dataene ovenfor, forblir konsentrasjonen av talte partikler (dvs. polymere skall) hovedsakelig konstant over eksperimentets varighet. Området er relativt konstant og forblir mellom omkring 7-9*10^/ml, noe som indikerer god stabilitet for polymere skall under forskjellige temperaturbetingelser over nesten fire uker.
Eksempel 5
In vivo- biodistribusjon - Tverrbundne proteinskall inneholdende et fluorfor
For å bestemme opptaket og biodistirbusjonen av en væske omsluttet inne i proteinpoly-merskallet etter intravenøs injeksjon, ble et fluorescent fargestoff (rubren, tilgjengelig fra Aldrich) omsluttet i et humant serumalbumin (HS A) proteinpolymerskall og benyttet som en markør. Rubren ble således oppløst i toluen og tverrbundet albuminskall inneholdende toluen/rubren ble fremstilt som beskrevet ovenfor ved ultrasonisk bestråling. Den resulterende melkeaktige suspensjonen ble fortynnet fem ganger i normalt saltvann. 2 ml av den fortynnede suspensjonen ble så injisert inn i nålevenen til en rotte i løpet av over 10 minutter. Et dyr ble avlivet en time etter injeksjon og et annet 24 timer etter injeksjon.
100 mikron frosne seksjoner av lunge, lever, nyre, milt og benmarg ble undersøkt under et fluorescense-mikroskop for nærværet av et polymert skallomsluttet fluorescent fargestoff eller frigitt fargestoff. Ved én time, synes majoriteten av polymere skall å være intakte (dvs. syntes som klare fluorescerende partikler med omkring 1 mikron diameter), og var lokalisert i lungene og leveren. Ved 24 timer ble fargen observert i leveren, lungene, milten og benmargen. En generell farging av vevet ble også observert, noe som indikerer at skallveggen i det polymere skall hadde blitt fordøyd og at fargestoffet var frigitt derfra. Dette resultatet var i samsvar med forventningene og demonstrerte poten-siell anvendelse av oppfinnelsens sammensetninger for forsinket eller kontrollert frigiving av et omsluttet, farmasøytisk middel slik som taxol.
Eksempel 6
Toksisitet av polymere skall inneholdende soyabønneolje ( SBO
Polymere skall inneholdende soyabønneolje ble fremstilt som beskrevet i eksempel 1. Den resulterende suspensjonen ble fortynnet i normalt saltvann for å gi to forskjellige oppløsninger, én inneholdende 20% SBO og den andre inneholdende 30% SBO.
Intralipid, et kommersielt tilgjengelig TPN-middel, inneholder 20% SBO. LD50 for Intralipid i mus er 120 ml/kg eller omkring 4 ml for en 30 g mus, når den blir injisert ved 1 cc/min.
To grupper mus (tre mus i hver gruppe; hver mus med en vekt på omkring 30 g) ble behandlet med oppfinnelsens sammensetning inneholdende SBO som følger. Hver mus ble injisert med 4 ml av den fremstilte suspensjonen av SBO-inneholdende polymere skall. Hvert medlem av den ene gruppen mottok suspensjonen inneholdende 20% SBO, mens medlemmene av den andre gruppen mottok suspensjonen inneholdende 30%
SBO.
Alle tre musene i gruppen som mottok suspensjonen inneholdende 2% SBO overlevde slik behandling og viste ingen større toksisitet i noe vev eller organ ved observasjon en uke etter SBO-behandling. Kun én av de tre musene som mottok suspensjonen inneholdende 30% SBO døde etter injeksjon. Disse resultatene demonstrerer klart at oljen inneholdt i polymere skall ifølge foreliggende oppfinnelse ikke er toksisk ved dets LD5Ø-dose sammenlignet med en kommersielt tilgjengelig SBO-formulering (Intralipid). Denne effekten kan skyldes den sakte frigivingen (dvs. en kontrollert hastighet ved hvilket blir biotilgjengelig) til oljen i det polymere skall. Slik sakte frigiving forhindrer opp-nåelsen av en dødelig dose av olje i motsetning til de høye oljedoseringene oppnådd med kommersielt tilgjengelige emulsjoner.
Eksempel 7
In vivo- biotilgjengelighet fra so<y>abønneolje frigitt fra polymere skall
En test ble utført for å bestemme den langsomme eller vedvarende frigivelse av polymert skall-omsluttet materiale etter injeksjon av en suspensjon av polymere skall inn i blodstrømmen hos rotter. Tverrbundet protein (albumin) veggede polymere skall inneholdende soyabønneolje (SBO) ble fremstilt ved sonikering som beskrevet ovenfor. Den resulterende suspensjonen av oljeinneholdende polymere skall ble fortynnet i saltvann til en endelig suspensjon inneholdende 20% olje. 5 ml av denne suspensjonen ble injisert inn i den kanylerte eksterne jugulare venen hos rotter over en 10 minutters periode. Blod ble oppsamlet fra disse rottene på flere tidspunkt etter injeksjon og nivået av triglycerider (soyabønneolje er hovedsakelig triglycerid) i blodstrømmen ble bestemt ved rutineanalyse.
5 ml av en kommersielt tilgjengelig fettemulsjon (Intralipid, et vandig parenteralt næringsmiddel - inneholdende 20% soyabønneolje, 1,2% eggeplomme-fosfolipider og 2,25% glycerin) ble benyttet som en kontroll. Kontrollen benytter egg-fosfatider som et emulgeringsmiddel for å stabilisere emulsjonen. En sammenligning av serumnivåer av triglycerider i de to tilfellene vil gi en direkte sammenligning av biotilgjengeligheten av oljen som en funksjon av tid. I tillegg til suspensjonen av polymere skall inneholdende 20% olje, ble 5 ml av en prøve av oljeinneholdende polymere skall i saltvann med en endelig konsentrasjon på 30% olje også injisert. To rotter ble benyttet i hver av tre grupper. Blodnivåene av triglycerider i hvert tilfelle er oppsatt i tabell 3, gitt i enheter på mg/dl.
Blodnivåer for injeksjon er vist i kolonnen merket med "Pre". For Intralipid-kontrollen var meget høye triglyceridnivåer sett etter injeksjon. Triglyceridnivåer ble så sett å ta omkring 24 timer på å komme ned til preinjeksjonsnivåer. Oljen ble således sett umiddelbart å være tilgjengelig for metabolismen etter injeksjon.
Suspensjonen av oljeinneholdende, polymere skall inneholdende den samme mengden total olje som Intralipid (20%) viser en dramatisk forskjell i tilgjengelighet av detekter-bare triglycerider i serum. Nivåene stiger til omkring to ganger dens normale verdi og blir opprettholdt ved dette nivået i mange timer, noe som indikerer en langsom eller vedvarende frigiving av triglycerid inn i blodet ved nivåer som er nær normalt. Gruppen som mottar oljeinneholdende polymere skall inneholder 30% olje viser et høyere nivå av triglycerider (i samsvar med den høyere administrerte dose) som faller til normalt i løpet av 48 timer. Igjen stiger blodnivåene av triglycerider ikke astronomisk i denne gruppen, sammenlignet med kontrollgruppen som mottar Intralipid. Dette indikerer igjen den langsomme og vedvarende tilgjengeligheten av olje fra oppfinnelsens sammensetning som har fordelen ved å unngå fall i høye blodnivåer av materialet inneholdt inn i de polymere skall og tilgjengeligheten over en forlenget periode ved akseptable nivåer. Medikamenter levert inn i polymere skall ifølge foreliggende oppfinnelse vil klart oppnå de samme fordeler.
Et slikt system av soyabønneoljeinneholdende polymere skall kan bli suspendert i en vandig oppløsning av aminosyrer, essensielt elektrolytter, vitaminer og sukre for å danne et totalt parenteralt næringsmiddel (TPN). Et slikt TPN kan ikke bli formulert i de nå tilgjengelige fettemulsjoner (f.eks. Intralipid) på grunn av instabiliteten til emulsjo-
nen i nærvær av elektrolytter.
Eksempel 8 Fremstilling av tverrbundne protein- veeeede polymere skall inneholdende en fast kjerne av farmasøytisk aktivt middel
En annen fremgangsmåte for levering av dårlig vannoppløselig medikament slik som taxol inn i et polymert skall er å fremstille et skall av polymert materiale rundt en fast medikamentkjeme. En slik "proteinbelagt" medikamentpartikkel kan bli fremstilt som følger. Prosedyren beskrevet i eksempel 3 ble gjentatt ved bruk av et organisk oppløs-ningsmiddel for å oppløse taxol ved en relativ høy konsentrasjon. Oppløsningsmidler som generelt blir benyttet er organiske, slik som benzen, toluen, heksan, etyleter og lignende. Polymere skall blir produsert som beskrevet i eksempel 3. 5 ml av den melkeaktige suspensjonen er polymere skall inneholdende oppløst taxol ble fortynnet til 10 ml normalt saltvann. Denne suspensjonen blir plassert i en rotasjonsevaporator ved romtemperatur og de flyktige, organiske midlene fjernet ved vakuum. Etter omkring 2 timer i rotasjonsevaporatoren blir disse polymere skall undersøkt under et mikroskop for å av-sløre opake kjerner, noe som indikerer fjerning av hovedsakelig alt organisk oppløs-ningsmiddel og nærværet av fast taxol i et skall av protein.
Alternativt blir polymere skall med kjerner av organisk oppløsningsmiddelinneholdende oppløst medikament frysetørket for å oppnå et tørt, smuldret pulver som kan bli resuspendert i saltvann (eller en annen passende væske) ved anvendelsestiden. I tilfelle med andre medikamenter som ikke kan være i fast fase ved romtemperatur, blir et polymert skall med flytende kjerne fremstilt. Denne fremgangsmåten tillater fremstilling av tverrbundne protein-veggede skall inneholdende ikke-fortynnet medikament deri. Partikkel-størrelsesanalyser viser at disse polymere skall er mindre enn de inneholdende olje. Selv om det nå foretrukne protein for anvendelse i dannelsen av det polymere skall er albumin, kan andre proteiner slik som a-2-makroglobulin, et kjent opsonin, bli benyttet for å øke opptaket av de polymere skall av makrofaglignende celler. Alternativt kan et PEG-sulfhydryl (beskrevet nedenfor) bli tilsatt under dannelsen av det polymere skall for å produsere polymere skall med øket sirkuleringstid in vivo.
Eksempel 9
In vivo- sirkulasjon og fri<g>ivelseskinetikk av pol<y>mere skall
Polymere skall med fast kjerne inneholdende taxol ble fremstilt som beskrevet ovenfor
(se f.eks. eksempel 3) og suspendert i normalt saltvann. Konsentrasjonen av taxol i suspensjonen ble målt ved HPLC som følger. Først ble taxol i det polymere skall frigitt ved tilsetning av 0,1 M merkaptoetanol (resulterende i utbytting av proteindisulfid-tverrbindinger og nedbryting av tverrbindingen i det polymere skall), så ble det frigitte taxol ekstrahert fra suspensjon med acetonitril. Den resulterende blandingen ble sentrifugert og supernatanten frysetørket. Lyofilisatet ble oppløst i metanol og injisert i en HPLC for å bestemme konsentrasjonen av taxol i suspensjonen. Taxolkonsentrasjonen ble funnet å være omkring 1,6 mg/ml.
Rotter ble injisert med 2 ml av denne suspensjonen gjennom et jugulært kateter. Dyrene ble avlivet etter 2 timer og mengden taxol til stede i leveren ble bestemt ved HPLC. Dette krever homogenisering av leveren, fulgt av ekstrahering med acetonitril og lyofili-sering av supernatanten etter sentrifugering. Lyofilisatet ble oppløst i metanol og injisert inn en HPLC. Omkring 15% av den administrerte dose av taxol er funnet i leveren ved 22 timer, noe som indikerte en signifikant dosering til leveren. Dette resultatet er i samsvar med den kjente funksjonen til det retikuloendotheliale systemet i leveren i rensing av små partikler fra blodet.
Eksempel 10
Fremstilling av tverrbundne PEG- veggede polymere skall
Som et alternativ for anvendelse av tiol (sulfhydryl) inneholdende proteiner i dannelsen av, eller som et additiv til polymere skall ifølge oppfinnelsen, ble en tiol-inneholdende PEG fremstilt. PEG er kjent å være ikke-toksisk, ikke-inflammatorisk, ikke-adhesiv til celler og generelt biologisk inert. Det har blitt bundet til proteiner for å redusere deres antigenisitet og til liposom-dannende lipider for å øke deres sirkulasjonstid in vivo. Innlemming av PEG inn i et hovedsakelig proteinskall vil således være forventet å øke sir-kulasjonstiden så vel som stabiliteten til det polymere skall. Ved å variere konsentrasjonen av PEG-tiol tilsatt til 5% albuminoppløsningen, var det mulig å oppnå polymere skall med varierende stabilitet in vivo. PEG-tiol ble fremstilt ved teknikker tilgjengelige i litteraturen (slik som teknikken ifølge Harris og Herati som beskrevet i Polymer Preprints, vol. 32:154-155 (1991)).
PEG-tiol med molekylvekt 2000 g/mol ble oppløst ved en konsentrasjon på 1% (0,1 g tilsatt til 10 ml) i en 5% albuminoppløsning. Denne protein/PEG-oppløsningén ble lagt over med olje som beskrevet i eksempel 1 og sonikert for å gi oljeinneholdende polymere skall med vegger omfattende tverrbundet protein og PEG. Disse polymere skall
ble testet for stabilitet som beskrevet i eksempel 4.
Andre syntetiske vannoppløselige polymerer som kan bli modifisert med tiolgrupper og benyttet i stedet for PEG omfatter f.eks. polyvinylalkohol, polyhydroksyetylmetakrylat, polyakrylsyre, poletyloksazolin, polyakrylamid, polyvinylpyrrolidinon, polysakkarider (slik som chitosan, alginater, hyaluronsyre, dekstraner, stivelse, pektin og lignende) og lignende.
F.eks. ble fluorkarboninneholdende proteinskall med forlenget sirkulasjonstid in vivo, funnet å ha spesielle fortrinn ved avbildning av det vaskulære systemet. Disse skallene forble i sirkulasjon i forlengede perioder, i forhold til skall som ikke inneholdt PEG i skallveggene. Dette tillot f.eks. visualisering av den kardiale sirkulasjon og ga en ikke-invasiv måte for evaluering av den koronare sirkulasjon i stedet for anvendelse av konvensjonelle invasive teknikker slik som angiografi.
Eksempel 11
Målrettin<g> av immunsuppressivt middel til transplanterte organer ved anvendelse av intravenøs levering av polymere skall inneholdende slike midler
Immunsuppressive midler blir ekstensivt brukt etter organtransplantasjon for forhind-ring av awisningsmekanismen. Spesielt forlenger cyklosporin, et kraftig immunsuppressivt middel, overlevelsen til allogene transplantater som inkluderer hud, hjerte, nyre, pankreas, benmarg, tynntarm og lunger hos dyr. Cyklosporin har vært vist å un-dertrykke humoral immunitet og i større grad cellemedierte reaksjoner slik som allograft avvisning, forsinket hypersensivitet, eksperimentell allergisk encefalomyelitt, Freunds adjuvant artritt og "graft versus" vertssykdom i mange dyrearter for forskjellige organer. Suksessfulle nyre-, lever- og hjerte-allogene transplanteringer har blitt utført i mennesker ved bruk av cyklosporin.
Cyklosporin blir nå for tiden levert i oral form, enten som kapsler inneholdende en opp-løsning av cyklosporin i alkohol og oljer slik som maisolje, polyoksyetylerte glycerider og lignende, eller som en oppløsning i olivenolje, polyoksyetylerte glycerider og lignende. Det ble også administrert ved intravenøs injeksjon hvor det blir oppløst i en opp-løsning av etanol (omkring 30%) og Cremaphor (polyoksyetylert castorolje) som må være fortynnet 1:20 til 1:100 i normalt saltvann eller 5% dekstrose før injeksjon. Sammenlignet med en intravenøs (i.v.) infusjon, ble den absolutte biotilgjengeligheten av den orale oppløsningen omkring 30% (Sandoz Pharmaceutical Corporation, Publication SDI-Z10 (A4), 1990). Generelt har i.v.-levering av cyklosporin tilsvarende problemer som den i dag utførte i.v.-leveringen av taxol, dvs. anafylaktiske og allergiske reaksjoner antatt å være forårsaket av Cremaphor, leveringsbærer benyttet for i.v.-formuleringen. I tillegg forhindrer intravenøs levering av medikamentet (f.eks. cyklosporin) innkapslet som beskrevet her, farlige toppblodnivåer umiddelbart etter administrasjon av medikamentet. F.eks. viste en sammenligning av for tiden tilgjengelige formuleringer av cyklosporin med den ovenfor beskrevne innkapslede form av cyklosporin, en fem gangers reduksjon i toppblodnivåer av cyklosporin umiddelbart etter injeksjon.
For å unngå problemene forbundet med Cremaphor, kan cyklosporin inneholdt i polymere skall som beskrevet ovenfor, bli levert ved i.v.-injeksjon. Det kan bli oppløst i en bioforenlig olje eller et antall av andre oppløsningsmidler hvoretter det kan bli dispergert i polymere skall ved sonikering som beskrevet ovenfor. I tillegg, en viktig fordel ved leveringen av cyklosporin (eller andre immunsuppressive midler) i polymere skall har fordelen ved lokal målsøking ved opptak av injisert materiale ved RES-systemet i leveren. Det kan til en viss grad unngå systemisk toksisitet og redusere effektiv dosering på grunn av lokal målretting. Effektiviteten av leveringen og målretting til leveren av taxol inneholdt i polymere skall etter intravenøs injeksjon er illustrert i eksempel 9. Et tilsvarende resultat vil være forventet ved levering av cyklosporin (eller andre mulige immunsuppressive midler) ifølge foreliggende oppfinnelse.
Eksempel 12
Antistoffrnålretting av pol<y>mere skall
Egenskapen til de polymere skall ifølge oppfinnelsen tillater festing av monoklonale eller polyklonale antistoffer til det polymere skall eller innlemming av antistoffer i det polymere skallet. Antistoffer kan bli innlemmet i de polymere skall ettersom det polymere mikrokapselskallet blir dannet, eller antistoffene kan bli bundet til de polymere mikro-kapselskallene etter fremstilling derav. Standardproteinimmobiliseringsteknikker kan bli benyttet for dette formål. F.eks. med proteinmikrokapslene fremstilt fra et protein slik som albumin, er et stort antall aminogrupper på albumin-lysinrestene tilgjengelige for festing av passende modifiserte antistoff. Som et eksempel, kan antitumormidler bli levert til en tumor ved innlemming av antistoffer mot tumoren i det polymere skall når den blir dannet, eller antistoffer mot tumoren kan bli bundet til det polymere mikrokapselskallet etter fremstilling derav. Som et annet eksempel, kan genprodukter bli levert til spesifikke celler (f.eks. hepatocytter eller visse stamceller i benmargen) ved innlemming av antistoffer mot reseptorer på målcellen i det polymere skall når det blir dannet, eller antistoffer mot reseptorer på målcellen kan bli bundet til det polymere mikrokapselskallet etter fremstilling derav. I tillegg kan monoklonale antistoffer mot nukleære reseptorer bli benyttet for å målrette det innkapslede produktet til kjernen i visse celletyper.
Eksempel 13
Pol<y>mere skall som bærere for polynukleotidkonstruksioner. enz<y>mer oe vaksiner
Ettersom genterapi blir mer akseptert som et mulig terapeutisk valg (for tiden har over 40 humane gen-overføirngsforslag blitt godkjent av NTH og/eller FDA review boards),
en av barrierene som må overkommes i implementeringen av denne terapeutiske tilnærmingen er tilbakeholdenheten for å anvende virale vektorer for innlemmelse av genetisk materiale i genomet i en human celle. Virus er i seg selv toksiske. Risikoen i dette systemet i anvendelse av virale vektorer i genterapi, spesielt for behandling av ikke-letale,
ikke-genetiske sykdommer, er således uakseptabel. Uheldigvis blir ikke plasmider over-ført uten anvendelse av virale vektorer vanligvis inkorporert i genomet hos målcellen. I tillegg, som konvensjonelle medikamenter, har slike plasmider en endelig halveringstid i kroppen. En generell begrensning for implementering av genterapi (så vel som anti-sensterapi, som er en motsatt form av genterapi, hvor en nukleinsyre eller oligonukleo-tid er innført for å hemme genekspresjon) har vært at terapien ikke evner effektivt å levere nukleinsyrer eller oligonukleotider som er for store til å trenge gjennom cellemem-branen.
Innkapslingen av DNA, RNA, plasmider, oligonukleotider, enzymer og lignende inn i protein-mikrokapselskall som beskrevet her kan lette deres målrettede levering til lever, lunge, milt, lymfe og benmarg. Ifølge foreliggende oppfinnelse kan således biologiske stoffer bli levert til intracellulære lokaliseringer uten påfølgende risiko forbundet ved anvendelse av virale vektorer. Denne typen formuleringer muliggjør det ikke-spesifikke opptaket eller endocytosen av de polymere skall direkte fra blodstrømmen til cellene i RES, inn i muskelceller ved intramuskulær injeksjon eller ved direkte injeksjon inn i tumorer. I tillegg kan monoklonale antistoffer mot nukleære reseptorer bli benyttet for å målrette de innkapslede produktene i kjernen for visse celletyper.
Sykdommer som kan bli målsøkt ved slike konstruksjoner omfatter diabetes, hepatitt, hemofili, cystisk fibrose, multippel sklerose, cancer generelt, influensa, AIDS og lignende. F.eks. kan genet for insulinlignende vekstfaktor (IGF-1) bli innkapslet i protein-mikrokapselskallene for levering for behandling av diabetisk perifer neuropati og cachexia. Gener som koder for faktor IX og faktor VIII (anvendelig for behandling av hemofili) kan bli målrettet til leveren ved innkapsling i protein-mikrokapselede skall ifølge foreliggende oppfinnelse. Tilsvarende kan genet for lavdensitets-lipoprotein (LDL)-reseptoren bli målrettet til leveren for behandling av aterosklerose ved innkapsling inn proteinmikrokapslede skall ifølge foreliggende oppfinnelse.
Andre gener som er nyttige for utførelsen av foreliggende oppfinnelse er gener som re-stimulerer kroppens immunrespons mot cancerceller. F.eks. kan antigener slik som HLA-B7, kodet av DNA inneholdt i et plasmid, bli innlemmet i et proteinmikrokapselskall ifølge oppfinnelsen for injeksjon direkte inn i en tumor (slik som en hudcancer). Straks den er i en slik tumor, vil antigenet få tilgang til de tumorspesifikke cellene som høyner nivået av cytokiner (f.eks. IL-2) som gjør en tumor til et mål for immunsyste-mets angrep.
Et annet eksempel er plasmider inneholdende deler av adeno-assosierte virusgenom for innkapsling i proteinmikrokapselskall ifølge foreliggende oppfinnelse. I tillegg kan proteinmikrokapslede skall ifølge foreliggende oppfinnelse bli benyttet for levering av terapeutiske gener til CD8+ T-celler for adoptiv immunterapi mot forskjellige tumorer og infeksjonssykdommer.
Proteinmikrokapselskall ifølge foreliggende oppfinnelse kan også bli benyttet som et le-veringssystem for å bekjempe infektiøse sykdommer via den målrettede leveringen av et antisens-nukleotid, f.eks. mot hepatitt B-virus. Et eksempel på en slik antisens-oligo-nukleotid er et 21-mer fosfortioat mot polyadenyleringssignalet fra hepatitt B-virus.
Proteinmikrokapselskall ifølge foreliggende oppfinnelse kan også bli benyttet for levering av cystisk fibrose transmembranregulator (CFTR)-genet. Mennesker som mangler dette genet utvikler cystisk fibrose som kan bli behandlet ved nebulisering av protein-mikrokapselskall ifølge foreliggende oppfinnelse inneholdende CFTR-genet og inhalering direkte inn i lungene.
Enzymer kan også bli levert ved bruk av proteinmikrokapselskall ifølge foreliggende oppfinnelse. F.eks. kan enzymet, DNAse bli innkapslet og levert til lungene. Tilsvarende kan ribozymer bli innkapslet og målrettet for til viruskonvoluttproteiner eller vi-rusinfiserte celler ved å binde passende antistoffer til det ytre av det polymere skall. Vaksiner kan også bli innkapslet i polymere mikrokapsler ifølge oppfinnelsen og bli benyttet for subkutan, intramuskulær eller intravenøs levering.
Eksempel 14
Fremstillin<g> av uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner (IHC) for anvendelse som røde blodcellesubstitutter
En 20 ml glassreaksjonscelle, titaniumhorn og krage ble vasket med alkohol og sterilt saltvann før syntesen på samme måte som alt benyttet utstyr. I en typisk reaksjon ble 3,5 ml av 5% oppløsning vekt/volum hemoglobin (humant eller bovint) tilsatt til en reaksjonscelle som ble forbundet til det ultrasoniske horn (Heat Systems XL202, 20 kHz, 400 W maksimal kraft). Hornet og cellene ble så neddykket i et temperaturkontrollerende bad satt ved 55°C. Reaksjonen ble kjørt ved 55°C som syntes å være optimum, imidlertid kan produktet bli syntetisert over et vidt område temperaturer (0 til 80°C). pH var 6,8. Temperaturkontrollen er kritisk ved høyt utbytte av materialet og den optimale temperaturen avhenger av den spesifikke eksperimentelle konfigurasjonen. Den ultrasoniske kilden ble skrudd på med en styrkeinnstilling satt til 7. Ved anvendelse av produsentens nomograf antydet et kraftutbytte på omkring 150 W/cm<2>. Reaksjonen var fullført etter omkring 30 sekunder. Utbytter ved kortere og lengre reaksjonstider syntes å være mindre. For bovint hemoglobin, ble en 2,5% vekt/volum oppløsning ledet gjennom en Sephadex G-25-gelfUtreringskolonne for å fjerne eventuelle anioner slik som fosfater. I en typisk syntese for humant hemoglobin IHC, ble det ultrasoniske hom plassert ved luftvanngrenseflaten. Den produserte, homogene suspensjonen inneholder proteinholdige røde blodceller. Den vandige suspensjonen kan så bli lagret i en steril beholder ved 4°C.
En typisk reaksjon gir en oppløsning som inneholder omkring 3 x IO** IHC-celler pr. ml med en gjennomsnittlig diameter på 3 mikron med et standardavvik på 1 mikron. Denne syntesen ga utbytter av høy konsentrasjon av mikronstørrelse-biomateriale med smal størrelsesdistribusjon.
Etter syntesen forble IHC som en suspensjon i den native proteinoppløsmngen. For å separere IHC fra ikke-reagert protein, ble forskjellige metoder benyttet: filtrering, sentrifugering og dialyse. Den første metoden omfatter filtrering av blandingen gjennom et Anotop-sprøytefilter med 0,2 um diameter porestørrelse (Whatman, Inc.). Filteret ble vasket med flere volumer vann inntil filtratet inneholdt svært lite eller intet protein (ifølge UV-synlig spektroskopi). IHC ble vasket ut igjen av filtre og resuspendert i et ekvivalent volum med saltvann. Den andre renseprosedyren omfattet anvendelse av et Centricon-sentrifugefilter med en høy molekylær cut-off på 100 kilodalton (kD). Sentri-fugefilteret er et sentrifugerar separert med en filtreringsmembran i midten. Sentrifugering av IHC-oppløsningen ved 1000 G i 5 minutter tillot det meste av det ikkereagerte hemoglobinet (64,5 kD) å passere gjennom membranen. Til sist ble dialyse med en stor molekylær vekt (300 kD) membran også benyttet for å rense IHC. Imidlertid krever denne metoden omkring 2 dagers dialyse. Den foretrukne fremgangsmåten for rensing av IHC er Centricon-sentrifugering.
Eksempel 15
Fremstilling av uoppløselig hemoelobin/ albuminkonstruksjon flHAQ som et rødt blodcellesubstitutt
En 20 ml glassreaksjonscelle, titaniumhorn og krage ble vasket med alkohol og sterilt saltvann på samme måte som alt benyttet utstyr før syntesen. I en typisk reaksjon ble 3,5 ml av 5% oppløsning vekt/volum hemoglobin (humant eller bovint) tilsatt til en reaksjonscelle som ble forbundet til det ultrasoniske horn (Heat Systems XL202,20 kHz, 400 W maksimal kraft). Hornet og cellene ble så senket ned i et temperaturkontrollerende bad ved 55°C. Reaksjonen ble kjørt ved 55°C som syntes å være optimum, imidlertid kan produktet bli syntetisert over et bredt temperaturområde (0 til 80°C). pH var 6,8. Temperaturkontrollen er kritisk for høyt utbytte av materialet og den optimale temperaturen avhenger av den spesifikke eksperimentelle konfigurasjonen. Den ultrasoniske kilden ble skrudd på med en styrkeinnstilling satt til 7. Ved anvendelse av produsentens nomograf antydet et kraftutbytte på omkring 150 W/cm<2>. Reaksjonen var full-ført etter omkring 30 sekunder. Utbytter ved kortere og lengre reaksjonstider syntes å være mindre. Den homogene suspensjonen som ble fremstilt, inneholdt proteinholdige røde blodcellesubstitutter. Den vandige suspensjonen ble filtrert, vasket, resuspendert i sterilt, bufret saltvann og lagret i en steril beholder ved 4°C.
Igjen, som beskrevet ovenfor, ga en typisk reaksjon oppløsning som inneholdt omkring IO** skall pr. ml med en gjennomsnittlig skalldiameter på 3 mikron med et standardavvik på 1 mikron. Denne synteseprosedyren ga høye konsentrasjoner av mikronstørrelse biomateriale med smal størrelsesdistribusjon.
Alternativt kan et gjennomstrømningssystem som tillater kontinuerlig prosessering av IHC bli benyttet. Et slikt system består av peristaltiske pumper som kontinuerlig pumper strømmer av hemoglobin og eventuelt en bioforenlig olje eller fluorkarbon inn i et reaksjonskar med en sonikatorprobe. En passende oppholdstid blir opprettholdt i karet og IHC gjenvunnet ved overstrømning fra karet inn i en gjenvinningstank. Den ikkereagerte hemoglobinoppløsningen ble resirkulert inne i reaksjonskaret.
Eksempel 16
Fremstilling av uoppløselig hemoglobinkonstruksjoner. inneholdende innkapslede fluorkarboner
En 20 ml glassreaksjonscelle, titaniumhorn og krage ble vasket med alkohol og sterilt saltvann før syntesen på samme måte som alt benyttet utstyr. I en typisk reaksjon, ble 3,5 ml av 5% vekt/volum hemoglobin (humant eller bovint) tilsatt til en reaksjonscelle som ble forbundet til det ultrasoniske hornet (Heat Systems XL202,20 kHz, 400 W maksimal kraft). Et fluorkarbon, perfluordecalin 3,5 ml, ble tilsatt til reaksjonskaret. Homet og cellen ble senket ned i et temperaturkontrollbad satt til 20°C. pH til den vandige fasen var 6,8. Den ultrasoniske kilden ble skrudd på med en styrkeinnstilling satt til 7. Ved bruk av fremstillerens nomograf antydet et kraftutbytte på omkring 150 W/cm<2. >Reaksjonen var fullstendig etter omkring 30 sekunder. Den produserte, homogene suspensjon inneholdt mikrokapsler eller mikrosfærer av tverrbundne, uoppløselige hemoglobinskall med innkapslet perfluordecalin i det indre. Den melkeaktige suspensjonen ble filtrert, vasket, resuspendert i sterilt bufret saltvann som ovenfor og lagret i en steril beholder ved 4°C.
Igjen som beskrevet ovenfor, ga typisk reaksjon en oppløsning inneholdende omkring 10<&> celler pr. ml med en gjennomsnitts skalldiameter på 3 mikron med et standardavvik på 1 mikron. Denne syntetiske prosedyren ga høye konsentrasjoner av mikronstørrelse biomateriale med smal størrelsesdistribusjon.
Eksempel 17
Fremstillin<g> av uoppløselig albuminkonstruksioner inneholdende innkapslede fluorkarboner
En 20 ml glassreaksjonscelle, titaniumhorn og krage ble vasket med alkohol og sterilt saltvann før syntesen på samme måte som resten av det benyttede utstyr. I en typisk reaksjon, ble 3,5 ml av 5% oppløsning vekt/volum hemoglobin (humant eller bovint) tilsatt til en reaksjonscelle som var bundet til et ultrasonisk horn (Heat Systems XL202, 20 kHz, 400 W maksimal kraft). Et fluorkarbon, perfluordecalin (eller perfluortripropylamin) 2,5 ml, ble tilsatt til reaksjonskaret. Hornet og cellen ble så senket ned i et temperaturkontrollbad satt til 20°C. pH til den vandige fasen var 6,8. Den ultrasoniske kilden ble satt på med en styrkeinnstilling satt til 7. Ved anvendelse av produsentens nomograf antydet et kraftutbytte på omkring 150 W/cm<2>. Reaksjonen var fullstendig i lø-pet av omkring 30 sekunder. Den produserte, homogene suspensjonen inneholder mikrokapsler eller mikrosfærer av tverrbundet, uoppløselig albuminskall med innkapslet perfluordecalin (eller perfluortripropylamin) i sitt indre. Den melkeaktige suspensjonen ble filtrert, vasket, resuspendert i sterilt, bufret saltvann som ovenfor og lagret i en steril beholder ved 4°C.
Igjen, som beskrevet ovenfor, gir en typisk reaksjon en oppløsning som inneholder omkring 10^ skall pr. ml med en gjennomsnittlig diameter på 3 mikron med et standardavvik på 1 mikron. Denne syntetiske prosedyren ga høye konsentrasjoner av mikron-størrelse biomateriale med smal størrelsesdistribusjon.
Eksempel 18
Uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner videre modifisert med allosterisk modifikator slik som pyridoksal- 5'- fosfat ( PLP)
For å oppnå hemoglobinkonstruksjoner med variable affiniteter for oksygen (dvs. variabel P50) ble IHC ytterligere reagert med PLP, en kjent allosterisk modulator. En suspensjon av IHC (fremstilt som i eksempel 14) i tris-buffer ble deoksygenert ved 10°C under nitrogen. 10 ml deoksygenert IHC-suspensjon ble tatt i hver av seks separate reaksjonskar. Forskjellige molarforhold av PLP/Hb ble tilsatt til hvert av karene. De var 0,1/3,0,0,75/3,0,1,5/3,0,3,0/3,0,4,2/3,0,6,0/3,0. Etter 30 minutter ble et 10 gangers overskudd av natriumborhydrid tilsatt og ble tillatt å redusere Schiffs-basen i ytterligere 30 minutter. Suspensjonen ble så filtrert ved sentrifugering, vasket ("backwashed") tre ganger med bufret saltvann, resuspendert i bufret saltvann og lagret ved 4°C. Denne modifikasjonen var rettet mot de amino-terminale gruppene av b-globinkjeden i deoksy-hemoglobin. Hva dette angår etterligner modifikasjonen nær virkningen av 2,3-DPG (som binder lysin EF6(82)b) ved stabilisering av deoksy-konformasjonen.
De seks forskjellige gradene av modifikasjon vil resultere i IHC med økende P50 (redusert oksygenaffinitet) med økende grad av PLP-substitusjon.
Eksempel 19
Uo<pp>løseli<g>e konstruksjoner med tverrbundne skall av hemoglobin og polyetylenglvkol
Polyetylenglykol (PEG) er kjent å være ikke-toksisk, ikke-inflammatorisk, ikke-adhe-sivt til celler og generelt biologisk inert. Proteiner som er forbundet med PEG har blitt funnet å være mindre antigene. Med liposomer ble sirkulasjonen funnet å øke etter binding/inkorporering av PEG. Inkorporering av PEG i RBC er således forventet å øke sir-kulasjonstiden. Ved å variere konsentrasjonen av PEG-tiol tilsatt til proteinet (f.eks. hemoglobin), var det mulig å fremstille PEG-hemoglobin RBC som hadde varierende stabiliteten PEG-tiol ble fremstilt ved teknikker kjent i litteraturen (slik som Harris og Heart, Polymer Preprints, 32:154 (1991)).
PEG-tiol med molekylvekt 2000 g/mol ble oppløst ved en konsentrasjon på 1% (0,1 g tilsatt til 10 ml) i en 5% hemoglobinoppløsning. Protein-PEG-oppløsningen ble sonikert for å danne proteinholdige røde blodcellesubstitutter som beskrevet i eksempel 14.
Eksempel 20
Uoppløseli<g>e hemoglobinkonstruksjoner med polvetvlen<g>lvkol kovalent forbundet til skallets ytre
IHC ble fremstilt som beskrevet i eksempel 14. Polyetylenglykol med molekylvekt 10.000 (PEG 10k) ble reagert med l,lMcarbonyldiimidazol CDI ifølge teknikker tilgjengelige i litteraturen (Beauchamp et al., Analytical Biochemistry, 131_:25-33,1983). IHC ble suspendert i 50 mM boratbuffer, pH 8,0 og PEG-CDI (2 ganger molart overskudd i forhold til totalt hemoglobinlysiner) ble tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt ved romtemperatur i 6 timer. Det resulterende PEG-IHC ble så separert ved filtrering, vasket i saltvann og resuspendert i sterilt, bufret saltvann.
Eksempel 21
Parametere som påvirker dannelsen av uo<pp>løselige hemoglobinkonstruksjoner
Flere variabler, slik som proteinkonsentrasjon, temperatur, sonikeringstid, akustisk intensitet, pH ble testet for å optimalisere dannelsen av IHC.
Disse materialene ble fremstilt fra 1%, 2,5%, 5% og 10% hemoglobinoppløsninger. De ble også fremstilt fra blandet proteinoppløsning slik som hemoglobin og humant serumalbumin med konsentrasjoner i området fra 1 til 10%. Størrelsen og konsentrasjonene ble bestemt med en partikkelteller. Størrelsen ble funnet ikke å bli signifikant hindret med start-proteinkonsentrasjonen. Antallet fremstilt økte med økende start-proteinkonsentrasjon på opptil omkring 5%. Ingen signifikant endring i antallet ble funnet å opptre over denne konsentrasjonen.
Initiell kartemperatur ble funnet å være viktig for optimal fremstilling av IHC. Typisk ble den initielle reaksjonstemperaturen opprettholdt mellom 0 og 80°C. Den optimale starttemperaturen var omkring 70°C.
Sonikeringstiden var også en viktig faktor for bestemmelse av antallet IHC produsert pr. ml. Det ble funnet at en sonikeringstid på omkring 30 sekunder var god for syntese av en høy konsentrasjon av IHC. Lange og korte sonikeringstider produserte lavere, men likevel et adekvat antall IHC.
Ifølge nomografen levert av leverandøren for sonikatoren, var den akustiske kraften for sonikatoren benyttet i disse eksperimentene omkring 150 watt/cm<2>. Andre kraftsettinger ble også funnet å produsere et stort antall IHC.
Eksempel 22
Uo<pp>løseli<g>e hemo<g>lobinkonstruksjoner som medikamentbasrere av oljeoppløselige medikamenter
De cytotoksiske effektene til flere antineoplastiske medikamenter ble kraftig øket i nærvær av oksygen. Det er derfor ønskelig å levere et medikament til et tumorsete under
samtidig økning av oksygenkonsentrasjonen ved setet. Hemoglobinmikrosfærene ifølge foreliggende oppfinnelse tillater dette. Eksempel 16 ovenfor beskriver innkapslingen av en fluorkarbonvæske i et skall av uoppløselig hemoglobin. Cytotoksiske medikamenter slik som cyklofosfamid, BCNU, Malphalan, taxol, kamtotecin, adriamycin, etoposid og lignende kan bli oppløst i fluorkarbonet eller andre passende oljer slik som soyabønne-olje og innkapslet i hemoglobinkonstruksjonet.
Taxol ble oppløst i soyabønneolje (SBO) ved en konsentrasjon på 5 mg/ml. 3,5 ml av en 5% hemoglobinoppløsning ble tatt opp i et reaksjonskar og 3,5 ml av SBO/taxol ble tilsatt til karet. De to faseblandingene ble sonikert som beskrevet i eksempel 16 for å oppnå tverrbinding av uoppløselig hemoglobinskall inneholdende SBO/taxol.
Eksempel 23
Polymere skall som medikamentbærere for vannoppløselige medikamenter
Flere vannoppløselige medikamenter er kandidater for innkapsling i polymere skall. Som et eksempel ble metotreksat oppløst i vann ved en konsentrasjon på 5 mg/ml. 1 ml av denne vandige oppløsningen ble emulgert med 4 ml soyabønneolje ved bruk av Pluronic-65 (blokk-kopolymer av polyetylenoksid og polypropylenoksid) for å danne en stabil vanniolje (W/0)-mikroemulsjon. 3,5 ml av en 5% hemoglobinoppløsning ble lagt over med 3,5 ml av denne W/O-mikroemulsjonen og sonikert i 30 sekunder for å oppnå uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner inneholdende en innkapslet mikroemulsjon med metotreksat.
Eksempel 24
Pol<y>mere skall er proteinbærere
Flere proteiner er kandidater for innkapsling i polymere skall, f.eks. hemoglobin, albumin og lignende. F.eks. kan en fremgangsmåte for øking av hemoglobininnholdet til IHC, være at hemoglobinet innkapsles i IHC i stedet for det vannoppløselige medikamentet i eksempel 23. Hemoglobin ble oppløst i vann ved en konsentrasjon på 10%. 1 ml av denne vandige oppløsningen ble emulgert med 4 ml soyabønneolje ved bruk av Pluronic-65 (blokk-kopolymer av polyetylenoksid og polypropylenoksid) for å danne en stabil vanniolje (W/0)-mikroemulsjon. 3,5 ml av en 5% hemoglobinoppløsning ble lagt over med 3,5 ml av denne W/O-mikroemulsjon inneholdende hemoglobin. To-fase-blandingen ble sonikert i 30 sekunder for å gi uoppløselig hemoglobinkonstruksjoner inneholder en innkapslet mikroemulsjon som også inneholdt hemoglobin. Denne fremgangsmåten tjente til å øke den totale mengden hemoglobin pr. mikrosfære av IHC og derfor øker den oksygenbærende evnen til bundet oksygen.
Eksempel 25
In vivo- administrasion av albumin/ fluorkarbonkonstruksjoner - Magnetisk resonansavbildning f ^ F- MRD for å detektere biodistribusjon
Albuminkonstruksjoner inneholdende perfluomonan ble fremstilt som i eksempel 17. Den endelige suspensjonen ble innstilt til 20 volum-% av fluorkarbonet i sterilt saltvann. 2 ml av denne suspensjonen ble injisert via nålevenen inn i en ketaminanestetisert Sprague-Dawley-rotte. In vivo-distribusjon av fluorkarbonet ble monitorert ved ^F-MRI på et Bruker 500 MHz NMR-instrument. Rotten ble plassert i en 10 cm <19>F spole og avbildet ved bruk av en Tj veid sekvens med TR = 1 sekund, TE = 20 millisekunder, og datamatriks på 256 x 128.
1 time etter administrasjon ble det meste FC funnet å være akkumulert i leveren, lungene og milten. Noe FC kunne bli detektert i benmargen. Hemoglobinkonstruksjoner vil bli forventet å oppføre seg på en identisk måte hva angår vevslokalisering og akkumule-ring. Disse observasjonene har viktige implikasjoner for behandling av lever- og lunge-tumorer og muligens for behandling av neoplastiske celler i benmarg med høye doser av oksygen i sammenheng med lokal levering av cytotoksisk medikament eller som en adjuvant til stråleterapi.
Eksempel 26
In vivo- administrasjon av medikament- inneholdende konstruksjoner
Uoppløselige hemoglobinkonstruksjoner inneholdende innkapslet taxol (i SBO) ble fremstilt som i eksempel 22. Den endelige suspensjonen ble innstilt til å inneholde 20 volum-% SBO i sterilt saltvann. 2 ml av denne suspensjonen ble injisert via halevenein-jeksjon inn i en ketamin-anestetisert Sprague-Dawley-rotte.
Rotten ble avlivet 2 timer etter injeksjon og leveren tatt ut. Leveren ble homogenisert med et volum saltvann og ekstrahert med etylacetat. Ekstraktet ble lyofilisert, oppløst i metanol og injisert i en HPLC-kolonne. Omkring 15% av den initielle dosen av ikke-metabolisert taxol ble gjenvunnet fra leveren. Dette bestemte evnen til målsøking av antineoplastiske medikamenter til leveren i sammenheng med levering av oksygen til disse setene.
Eksempel 27
Akutt bloderstatningsmodell for uoppløselig hemoglobin- blodsubstitutter
Anestetiserte Sprague-Dawley-rotter (350-400 g) ble kateterisert gjennom den eksterne jugulære venen. Omkring 70% av blodvolumet ble fjernet over en 10 minutters periode. Rottene ble holdt ved denne tilstanden i ytterligere 10 minutter, hvoretter de ble rein-fusert med en iso-onkotisk suspensjon av oksygenert IHC med en P50 på 28 mm Hg. Det gjennomsnittlige, arterielle trykket, hjerteraten og brystraten ble monitorert kontinuerlig. Overlevingen av disse rottene ble fulgt over tid.
Eksempel 28
Uo ppløselige hemoglobinkonstruksjoner for reversering av vevs- iskemi
Evnen til IHC til fortrinnsvis å levere oksygen til et iskemisk sete ble undersøkt. IHC med "høy affinitet", dvs. P50 < 28 mm Hg, er nyttig for dette formål da de vil frigi oksygen kun i de setene hvor oksygengradientene er større enn det som normalt er til stede i sirkulasjonen, dvs. ved et iskemisk sete. En IHC med P50 på 20 mm Hg ble benyttet for dette formålet.
En bilateral karotid okklusjonsmodell i en rotte ble benyttet som en modell for "slag" eller cerebral iskemi. Begge karotidarteriene ble tilstoppet ved temporær ligatur i en ketamin-anestetisert Sprague-Dawley-rotte. I kontrollrotten ble ligaturen fjemet etter 15 minutter og normal blodstrøm gjenopptatt. I den eksperimentelle rotten, ble 1 ml av en høy-affinitets IHC-suspensjon i saltvann infusert direkte i hver karotidarterie etter ekstern oksygenering av IHC-suspensjonen i en oksygeneringsanordning. 24 timer etter behandlingen ble rottene avlivet, deres hjerner tatt ut, fiksert, snittet og farget med nitro-blue tetrazolium (NBT) eller tryptan-blue for å bestemme graden av celledød. En lav grad av celledød, som bestemt ved tryptan-blue-farging, er forventet i den eksperimentelle rotten som mottok oppfinnelsens IHC.
Eksempel 29
Evaluering av in vivo- sirkulasjons- halveringstid av uoppløseli<g>e hemoglobinkonstruksjoner
Anstetiserte Sprague-Dawley-rotter (350-400 g) ble kateterisert gjennom den eksterne jugulære venen. En injeksjonsbolus av en iso-onkotisk suspensjon av IHC ekvivalent til 20% av dyrets blodvolum ble gitt gjennom kateteret. Blod ble tatt ut ved prøvetakingsti-der i området fra 0,25 til 92 timer. Blodprøver ble sentrifugert og plasma observert for tegn på hemolyse eller nærvær av oppløselig hemoglobin. Siden "mikroboblene" av IHC har et indre med gass (og derfor har lavere densitet enn vann), stiger de til overflaten av plasmaet etter sentrifugering. Mikroboblene blir skummet av, resuspendert i saltvann og talt i en partikkelteller. Halveringstiden til IHC i sirkulasjon ble så bestemt. Sammenlignet med kjent teknikks hemoglobin-baserte blodsubstitutter er det forventet at oppfinnelsen IHC vil demonstrere forbedret sirkulasjonshalveringstid.
Eksempel 30
IHC for organkonservering - Konservering av rottehjerte
Hjertet ble kirurgisk fjemet fra en anestetisert Sprague-Dawley-rotte og kunstig respirert med romluft. Hjertet ble senket ned i krystalloid medium ("Cardioplegia-medium" - CM) med den samme sammensetningen som IHC (eller IHC/FC eller albumin/FC) kon-serveringsmedium, men uten hemoglobinkomponenten. Hjertet ble perfusert med CM i flere minutter og avkjølt til 11 °C. Hjertet ble så preservert med 140 ml IHC/preserve-ringsmedium i 12 timer ved 12°C. IHC-mediet ble så kontinuerlig perfusert gjennom hjertet ved lavt trykk (18 mm Hg) og kontinuerlig ekvilibrert med 95% 0^/5% C02-Etter 12 timers preservering ble kontraktiliteten, pumpingen og den energetiske funksjonen til hjertet testet ved bruk av et isolert arbeidende rottehjerte-apparat.
Eksempel 31
Utnyttelse av IHC- medium i kardioplegi for åpen hiertekirurgi
Kardiopulmonær bypass ble etablert og oksygenert "kardioplegiamedium" inneholdende IHC (eller IHC/FC eller albumin/FC) som oksygenbærer, ved 4°C, ble levert som en
porsjon av 500 til 100 ml inn i den aortiske rot eller aortisk kryssklemme og ventilering. Ytterligere doser av kaldt medium ble levert til den venstre og høyre koronære ostia og i tilfellet for bypass-kirurgi, ble mediet også levert inn i enden av transplantatet før endelig anastomose. Mediet ble levert hvert 15. til 20. minutt i mengder tilstrekkelig for å opprettholde en avkjølt myokardial temperatur. Etter fullførelse av prosedyren, ble fast-bindingen av aorta fjernet og gjenoppvarming av hjertet ble startet.
Eksempel 32
Anvendelighet av IHC- medium i angioplasti eller ateroektomi
IHC (eller IHC/FC eller albumin/FC) mediet ble administrert under intervensjonelle prosedyrer gjennomført for å gjenopprette strømning eller underperfuserte regioner av et organ. Eksempler på slike prosedyrer er angioplasti og ateroektomi. Regionell iskemi kan bli mildnet under ballonginflasjon ifølge den perkutane transluminale koronare angioplasti-prosedyren ved levering av oksygenert IHC-medium ved en hastighet på omkring 60 ml/min. gjennom sentral-lumen av det utvidede ballongkateteret. Mediet ble administrert ved kroppstemperatur og inneholder f.eks. fysiologisk forenlig Ringers elektrolytter og substrater. En dose av oksygen ekvilibrert IHC-medium ble infusert under hver ballong-inflasjonsperiode. En tilsvarende prosedyre ble benyttet under perio-den ved ballonginflasjon i ateroektomiprosedyrer ble benyttet for fysisk å fjerne forhindringer i kar med kniv eller laser. Infusjon av medium direkte i tette kar under enzymatisk trombolytiske prosedyrer kan bli gjort for å gi oksygenering distalt til obstruk-sjonen ettersom den blir lysert. Idag blir Fluosol-DA benyttet under noen angioplasti-prosedyrer; IHC (eller IHC/FC eller albumin/FC)-medium ifølge foreliggende oppfinnelse kan erstatte Fluosol-DA.
Eksempel 33
Syntese av dodecafluornonan f CoF^ p) innesluttet i et polymert skall
En 20 ml glassreaksjonscelle, titaniumhorn og krage ble vasket med alkohol og sterilt saltvann før syntesen på samme måte som resten av det benyttede utstyret. I en typisk reaksjon ble 3,5 ml sterilt 5% vekt/volum USP (United States Pharmacopaeia) humant serumalbumin (Alpha Therapeutics Corporation) tilsatt til en reaksjonscelle og cellen forbundet til det ultrasoniske horn (Heat Systems XL2020,20 kHz, 400 W maksimal kraft). Hornet og cellen ble senket ned i et temperaturkontrollerende bad satt til 22°C. Reaksjonen ble kjørt ved 22°C som syntes å være optimalt, imidlertid kan produktet bli syntetisert over et stort temperaturområde (0 opptil 40°C). Temperaturkontrollen er kritisk for å gi høyt utbytte av materiale og den optimale temperaturen avhenger av den spesifikke eksperimentelle konfigurasjonen. 6 ml dodecafluornonan (C9F20) ble deretter tilsatt og den ultrasoniske kilden skrudd på med en styrkeinnstilling satt til 7. Mengden fluorkarbon tilsatt kan bli variert fra mindre enn 1 ml og opptil omkring 13 ml med godt utbytte av proteinpolymerskall. Reaksjonen er fullstendig etter omkring 30 sekunder. Utbyttene ved kortere og lengere reaksjonstider synes å være lavere. Den produserte homogene suspensjonen inneholder de innesluttede dodecafluomonanene i et proteinpolymert skall og omkring 60 volum-% perfluomonan. Den vandige suspensjonen kan så bli lagret i en steril beholder ved 4°C.
En typisk reaksjon gir en oppløsning som inneholder omkring 1 x 10^ skall pr. ml med en gjennomsnittlig skalldiameter på 2 mikron med et standardavvik på 1 mikron. Denne syntetiske prosedyren er sett å gi høy konsentrasjon av mikro-størrelsesbiomateriale med smal størrelsesdistribusjon.
Eksempel 34
Syntese av perfluortirbutylamin ( C|2F27 N) eller perlfuortripropvlamin ( C9F2iN) innesluttet i polymere skall
Den 5% vekt/volum USP humane serumalbuminet (3,5 ml) og fluoraminet (6 ml) ble
tilsatt til en glassreaksjonscelle og bestrålet med høy-intensitets ultralyd. Reaksjonsbe-tingelsene var en styrkeinnstilling satt til 7, en badtemperatur på 22°C og en reaksjonstid på omkring 30 sekunder. Igjen blir høy konsentrasjon av både perfluortirpropylamin [(C3F7)N] og perfluortirbutylami<n> [(C^FgtøN] innesluttet i et proteinpolymert skall syntetisert (1 x 10^ skall/ml) med en gjennomsnittlig diameter på 2 mikron.
Eksempel 35
Syntese av perfluordecalin ( CipFi innesluttet i et <p>ol<y>mert skall
5% vekt/volum USP humant serumalbumin (3,5 ml) og perfluordecalin (Ciqf1& 6" m0 ble tilsatt til en glassreaksjonscelle og bestrålt med høy-intensitets ultralyd. Reaksjons-betingelsene var en styrkeinnstilling satt til 7, en badtemperatur på 22°C og en reaksjonstid på omkring 30 sekunder. Høye konsentrasjoner med smal størrelsesdistribusjon av perfluordecalin inneholdt i proteinpolymere skall ble syntetisert. Enn videre, da perfluordecalin og perfluortripropylamin er hovedbestanddelene i FDA-godkjente fluorkarbonet, Fluosol DA, skulle den medisinske anvendelsen av disse forbindelsene ved medisinsk avbildning lett kunne aksepteres av godkjenningsmyndigheter.
Eksempel 36
Syntese av perfluor- 15- crown- 5 f Ci QF20O5 I innesluttet i et pol<y>mert skall
5% vekt/volum USP humant serumalbumin (3,5 ml) og fluor-crowneteren (C10F20O5; 6 ml) ble tilsatt til en glassreaksjonscelle og bestrålt med høy-intensitets ultralyd. Reak-sjonsbetingelsene var en styrkeinnstilling satt til 7, en badtemperatur på 22°C og en reaksjonstid på omkring 30 sekunder. Som tidligere ble høye konsentrasjoner av fluor-crowneteren inneholdt i proteinpolymert skall med smal størrelsesdistribusjon syntetisert. Faktisk var disse eksperimentelle prosedyrene for å syntetisere fluorkarbon-fylte polymere skall typisk for alle de undersøkte fluorkarbonene.
Eksempel 37
Syntese av perfluor- t- butvlbuten ( CrøFigH g) innesluttet i et <p>ol<y>mert skall
5% vekt/volum USP humant serumalbumin (3,5 ml) og CiøFigH2 (6 ml) kan bli tilsatt til en glassreaksjonscelle og bestrålt med høy-intensitets ultralyd. Reaksjonsbe-tingelsene omfatter en styrkeinnstilling satt til 7, en badtemperatur på 22°C og en reaksjonstid på omkring 30 sekunder vil typisk bli benyttet. Ved denne prosedyren kan proteinpolymere skall med en høy konsentrasjon av fluor-t-butylbutan innesluttet deri bli syntetisert.
Eksempel 38
Toksisitet av fluorkarboner inneholdt i polymere skall
5 rotter ble injisert gjennom en katerisert jugularvene med 5 ml av en 20% v/v fluorkarbonsuspensjon (perfluomonan inneholdt i et HSA-proteinpolymert skall) i løpet av 10 minutter. Fluorkarboner er generelt ikke-toksiske på grunn av de sterke fluor-karbon-bindingene; faktisk har fluorkarboner blitt benyttet med suksess som FDA-godkjente kunstige blodsubstitutter (Fluosol DA). Rottene ble avlivet ved spesifikke tider og ob-dusert. Ved siden av å observere den generelle helsetilstanden til rottene, ble lever, milt, lunger og nyrer grundig undersøkt. Rottene ble undersøkt ved 0,5,2,8 og 24 timer og var alle sunne uten inflammert vev eller organer. Den femte rotten var enda i live og sunn etter 90 dager. Til sammenligning er denne dosen av FDA-godkjent soyabønneolje LD5ø-mengden, noe som antyder at fluorkarbonene er ikke-toksiske og sikre.
Eksempel 39
<19>f nukleær magnetisk resonansspektrosko<p>i av rent fluorkarbon og et fluorkarbon innesluttet i et polymert skall
NMR-spektra til fluorkarbon inneholdt i et proteinpolymert skall og rene fluorkarboner ble satt på et Bruker 500 MHz NMR-instrument. Instrumentet ble justert for <1>?F ved dets resonansfrekvens på 470,56 MHz. Et deuterium-oppløsningsmiddel ble benyttet for låsing og alle spektra ble sammenlignet med ekstern referanse til Freon (CCI3F) ved 0 ppm. Perfluomonan og CDCI3 ble plassert i et 5 mm NMR-rør. Spektra til rent perfluomonan ble oppnådd med to sett av skarpe topper, en ved -87 ppm, og et andre sett med topper ved -127, -128 og -133 ppm.
En suspensjon av perfluomonan innesluttet i HSA-proteinpolymert skall, ble resuspendert i D20 og et tilsvarende NMR-spektrum ble oppnådd. Sterke signaler ble oppnådd
fra den 20% v/v fluorkarbonsuspensjon med topper eller resonanser ved -81,-121,-122 og -126 ppm. Inneslutningen av fluorkarbonet i det polymere skallet under den ultrasoniske bestrålingen resulterte ikke i kjemiske eller strukturelle forandringer i perluorona-net. F.eks., med C9F20 ble to separate resonanser observert: en tilsvarende til CF3 ved omkring -80 ppm og det andre settet av resonanser ved omkring -125 ppm, tilsvarende til CF2-gruppen.
Eksempel 40
l^ F nukleærmagnetisk resonansspektroskopi av fluorkarboner for å måle lokale temperaturer
Variabel temperatur NMR-spekter av fluorkarboner ble oppnådd på et Bruker 500 MHz NMR-instrument. Instrumentet ble innstilt for <19>p ved dets resonansfrekvens på 470,56 MHz. Et deuterium-oppløsningsmiddel (dg-dimetylsulfoksid [05-DMSO]) ble benyttet for låsing og alle spektra ble eksternt sammenlignet med freon (CCI3F) ved 0 ppm. Perfluordodecan, som har et smeltepunkt på 77°C, og dg-DMSO ble plassert i et 5 mm NMR-rør ved romtemperatur. Fluorspekteret ble tatt ved forskjellige temperaturer og alle linjevidder ble målt. Linjeviddedata ved -81 ppm, som funksjon av temperaturen, er vist nedenfor:
Det brede spekteret ved lave temperaturer starter og blir skarp ettersom temperaturen øker, som et resultat av at perfluordodecanet gjennomgår en faststoff til flytende-fasetransisjon. Forandringen er skarp og brå med temperatur, noe som er forventet for et rent materiale.
For å utvide og senke smeltetemperaturn, ble pentan tilsatt (omkring 2% v/v) til perfluordodecanet. Som sett ovenfor, ble det vide spekteret ved lave temperaturer skarpere etter hvert som perfluordodecanet gjennomgikk dets faststoff til flytende-fase-transisjon. Linjeviddedata som funksjon av temperatur for perfluordodecan/pentan-blandingen er vist nedenfor:
Den resulterende perfluordodecan/pentan-blandingen har et lavere smeltepunkt som var videre enn forventet. Med dette systemet kan temperaturmålinger bli gjort i området fra 27°C til 77°C. Således, gitt en linjevidde, er det mulig å bestemme den lokale temperaturen.
Et eksempel for anvendelse av denne teknikken for å bestemme lokale temperaturer in vivo omfatter injeksjon av proteinskall inneholdende fluorkarbonblandinger (f.eks. slik som beskrevet ovenfor) med brede smeltetransisjoner som har temperatur-linjevidde-korrelasjoner (som kan bli empiriske). En slik formulering vil bli plassert i leveren eller milten og, i tillegg til å tjene som et <19>F MRI-kontrastmiddel, kan det samtidig bli benyttet for å bestemme lokale temperaturvariasjoner i organet (for å tillate avledning av patologien til signifikante abnormaliteter i vevet).
Eksempel 41
l^ F magnetisk resonans- fantom- avbildninger
To typer av innesluttede fluorkarboner inneholdt i polymere skall ble benyttet i denne fantom-studien. Perfluomonan og perfluortributylamin inneholdt i HSA-proteinpolymere skall ble syntetisert som beskrevet i eksemplene 33 og 34. Den syntetiserte suspensjonen som var 60% fluorkarbon ble fortynnet med saltvann og 2 ml ble plassert i polystyrenrør. Polystyrenrørene ble så plassert i et kommersielt tilgjengelig Siemens 2T MRI-instrument (10 cm ^p-spole) som ble drevet ved 1,5 tesla. ^ F magnetisk resonansavbildning av rørene ble tatt i løpet av en 5 minutters periode med en ekkotid (TE) på 10 millisekunder og en repetisjonstid (TR) på 300 sekunder (256 x 256 matriks).
Perfluomonan inneholdt i polymere skall
Gode MR-fantom-avbildninger ble observert selv ved lave konsentrasjoner perfluomonan innesluttet i polymere skall. Meget tilsvarende data ble observert med polymere skall som inneholdt perfluortirbutylamin. Kun ved høye fortynninger (1/100; 0,02M)
var avbildningen av dårlig kvalitet og oppløsning.
Eksempel 42
l^ F magnetisk resonansavbildnine av lever og milt in vitro
300 g rotter ble injisert med 2 ml av 20% v/v perfluomonan inneholdt i en suspensjon av HSA-proteinpolymere skall. Ved 2 timer og ved 5 dager ble en rotte avlivet og leveren, milten, nyrene og lungene ble fjernet. F.eks. hele leveren ble så plassert i et 4 tesla MRI-instrument drevet med en 10 cm <19>F-spole. <l9>F magnetisk resonansavbildninger av leveren, milt og nyre ble oppnådd ved bruk av en Tj veid sekvens med TR = 1 sekund, en TE på 20 millisekunder og en datamatriks på 256 x 128 (dvs. 128 fasekodende trinn, 16 signal gjennomsnitt).
<1>F MRI-avbildninger av leveren viste regioner med varierende intensitet som korrelerte til varierende grad av leveropptak av de polymere skall. F.eks. ble en mørk region tilsvarende til portvenen observert hvor man ikke kunne forvente nærværet av perfluomonan-inneholdende polymere skall da det meste av skallene er konsentrert intracellulært i RES i leveren.
Den gjennomsnittlige avbildningsintensiteten i lever-scannet ved 2 timer etter injeksjon var omkring 20-30% høyere enn den i scannet målt 5 dager etter injeksjon, noe som indikerer en viss spredning av perfluornonanet, muligens gjennom nedbrytning av de polymere skall. Overalt ble det oppnådd utmerkede kvalitetsavbildninger som viser lever-morfologien, noe som demonstrerer det potensielle til denne teknikken i diagnosen og lokalisering av abnormal patologi i leveren.
Eksempel 43
In vivo <19>p magnetisk resonansavbildning av lever og milt
En 150 g rotte ble injisert med 2 ml av en 20% v/v perfluomonan (C9F20) inneholdt i HSA-poIymere skall i løpet av 10 minutter. Hele rotten ble så plassert i et 4 tesla MRI-instrument som ble drevet med en 10 cm <l>^F-spole. Rotten var anestetisert med ketamin før bildeopptak. ^F magnet resonansavbildninger av hele rotten, så vel som individuelle organer slik som lever, milt og nyre, ble funnet ved bruk av en Tj veid sekvens med TR er lik 1 sekund, en TE lik 20 millisekund og en datamatriks på 256 x 128 (dvs. 128 fase-kodende trinn, 16 signal gjennomsnitt).
Rottene ble avbildet 15 minutter, 2 timer og 24 timer etter injeksjon av perfluomonan-inneholdende HSA-proteinpolymere skall. Totalt ble utmerkede kvalitetsavbildninger som viser lever- og miltmorfologi oppnådd, noe som demonstrerer det potensielle til denne teknikken ved diagnose og lokalisering av abnormal patologi i leverens RES-inneholdende organer.
Eksempel 44
Bestemmelse av lokale temperaturer ved bruk av in vivo ^F magnetisk resonansavbildning
En 300 g rotte ble injisert med 5 ml av en 20% v/v perfluordodecan/2% pentan (eller perfluornonandecansyre og 1% kolesterol) inneholdt i HSA-polymere skall i løpet av 10 minutter. Rotten ble plassert i en 15 cm spole (en Siemens 1,5 tesla MRI-magnet). En TE på 10 millisekunder og TR på 300 sekunder ble benyttet for å samle avbildninger (256 x 256 matriks). Rotten ble bedøvet med ketamin før oppsamling av data. Leveren og milten ble avbildet over en 15 minutters periode ved at det ble tatt 5 mm skivetykkelser. Data ble oppsamlet ved romtemperatur og omkring 37°C, ved å pakke inn den be-visstløse rotten i et varmeteppe.
Eksempel 45
In vivo oksygen- bestemmelse ved anvendelse av ^ F magnetisk resonansavbildning
En 300 g rotte ble injisert med 5 ml av en 20% v/v perfluomonan inneholdt i HSA-polymere skall i løpet av 10 minutter. Rotten ble deretter plassert i en 15 cm spole (en Siemens 1,5 tesla MRI-magnet). En TE på 70 millisekunder og TR på 3 sekunder ble benyttet for å oppsamle avbildningene (256 x 256 matriks). Rotten ble plassert i et fast-holdingsutstyr før oppsamling av data. Rotten ble først satt i et oksygenkammer for å øke oksygenmetabolismen og linjevidden og avbildninger ble oppsamlet. Rotten ble deretter injisert med ketamin for å redusere forbruket av oksygen og igjen ble linjevidden og avbildninger oppsamlet. Linjevidden og intensiteten av avbildningen ble observert å forandre seg tilsvarende til mengden av oppløst oksygen i rotten. Den største linjevidden ble observert ved høye oksygenkonsentrasjoner. Leveren og milten ble avbildet i løpet av 15 minutter ved å ta 5 mm skivetykkelser. To datasett ble oppsamlet, ett ved romtemperatur og det andre ved 37°C ved å pakke inn den bedøvede rotten i et varmeteppe.
Eksempel 46
Fremstilling taxolpartikler
Krystaller av taxoler (Sigma Chemical) ble malt opp i en kulemølle inntil partiklene av fast taxol hadde en partikkelstørrelse på mindre enn 10 mikron. Størrelsen av partiklene ble bestemt ved å suspendere partiklene i isotont saltvann og telling ved hjelp av en partikkelteller (Elzone, Particle Data). Oppmaling ble fortsatt inntil 100% av partiklene hadde en størrelse som var mindre 5 mikron. Foretrukken partikkelstørrelse for intrave-nøs levering er mindre enn 5 mikron og mest foretrukket mindre enn 1 mikron.
Alternativt ble partikler av taxol oppnådd ved sonikering av en suspensjon av taxol i vann inntil alle partiklene var under 10 mikron.
Taxolpartikler mindre enn 10 mikron kan også bli oppnådd ved utfelling av taxol i en oppløsning av taxol i etanol ved tilsetning av vann inntil det ble oppnådd en uklar suspensjon. Eventuelt kan oppløsningen av taxol bli sonikert under vanntilsetningen inntil en uklar suspensjon var oppnådd. Den resulterende suspensjonen ble så filtrert og tørket for å oppnå rene taxolpartikler i det ønskede størrelsesområdet.
Fine partikler av taxol ble fremstilt ved sprøytetørking av en oppløsning av taxol i flyktig, organisk oppløsningsmiddel slik som etanol. Oppløsningen ble suspendert gjennom en ultrasonisk dyse som formet smådråper av etanol inneholdende taxol. Dersom etano-let fordampet i sprøytetørkeren, ble fine partikler av taxol oppnådd. Partikkelstørrelsen kan varieres ved forandring av konsentrasjonen av taxol i etanol, justering av gjennom-strømningshastigheten av væsken gjennom dysen og sonikeringskraften.
Eksempel 47
Syntese av paramagnetiske kationer bundet til <p>olvanioner
Syntese av Gd-alginater kan bli utført, f.eks. ved dispergering av alginatet i en oppløs-ning av GdCl3. F.eks. kan små sfæriske partikler av Gd-alginat som passer for intravaskulær injeksjon bli syntetisert ved ultrasonisk bestråling av en oppløsning inneholdende Gd-ioner (f.eks. GdCl3) og tilsetning av små mengder av Na-alginatoppløsning. Alginatet ble dispergert i oppløsningen av Gd-ioner ved ultrasonisk bestråling og tverrbundet ved de multivalente Gd-ionene, for å produsere mikron-størrelsespartikler med Gd-alginat. Ved siden av ultrasonisk bestråling, kan lav- eller høy-hastighetsblanding også bli benyttet.
Alternativt kan en oppløsning av Na-alginat bli overlagt eller lagt på et ublandbart organisk oppløsningsmiddel eller olje (f.eks. soyabønneolje, solsikkeolje, toluen, metylen-klorid, kloroform og lignende). Væskene ble utsatt for ultrasonisk bestråling hvorved den alginatinneholdende vandige fasen ble dispergert inn i den organiske fasen, så ble en oppløsning av multivalente ioner (f.eks. GdCl3, MnC^, FeCl3 og lignende) tilsatt. Na-alginatet ble derved tverrbundet for å gi små sfæriske partikler av Gd-alginat som passer for anvendelse som et MRI-kontrastmiddel etter intravaskulær injeksjon. Essensielt kan en hvilken som helst syntetisk teknikk som benytter alginater og multivalente kationer benyttes for å danne sfærer, fibre, plater, blokker og lignende.

Claims (27)

1. Sammensetning for in vivo-avlevering av et biologisk stoff, hvor nevnte biologisk stoff er valgt blant: et faststoff, eventuelt dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, hovedsakelig fullstendig inneholdt i et polymert skall, en væske, eventuelt dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, hovedsakelig fullstendig inneholdt i et polymert skall, en gass, eventuelt dispergert i et bioforenlig dispergeringsmiddel, hovedsakelig inneholdt i et polymert skall, en gass assosiert med et polymert skall, eller en kombinasjon av hvilke som helst to eller flere derav, hvor den største tverrsnittsdimensjonen til nevnte skall ikke er større enn 10 mikron, hvor nevnte polymere skall omfatter et bioforenlig materiale som er hovedsakelig tverrbundet ved hjelp av disulfidbindinger, og hvor nevnte polymere skall eventuelt er modifisert med et passende middel, hvor nevnte middel eventuelt er forbundet med nevnte polymere skall gjennom en eventuelt kovalent binding.
2. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte polymere skall, inkludert faststoffet, væsken eller gassen assosiert deri, passer for anvendelse som et blodsubstitutt.
3. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte biologisk stoff er valgt blant et farmasøytisk aktivt middel, et diagnostisk middel eller et middel med næringsmessig verdi.
4. Sammensetningen ifølge krav 3, karakterisert ved at nevnte farmasøytisk aktive stoff er valgt blant analgesiske midler, anestetiske midler, anti-astmatiske midler, antibiotika, anti-depressive midler, anti-diabetiske midler, anti-fungale midler, anti-hypertensive midler, anti-inflammatoriske midler, anti-neoplastiske midler, anksiolytiske midler, enzymatisk aktive midler, nukleinsyrekonstruksjoner, immunostimulerende midler, immunosuppressive midler, fysiologisk aktive gasser eller vaksiner.
5. Sammensetningen ifølge krav 4, karakterisert ved at nevnte farmasøytisk aktive middel er en nukleinsyrekonstruksjon.
6. Sammensetningen ifølge krav 3, karakterisert ved at nevnte diagnostiske middel er valgt blant ultralydkontrastmidler, radiokontrastmidler eller magnetiske kontrastmidler.
7. Sammensetningen ifølge krav 6, karakterisert ved at nevnte magnetkontrastmiddel er et fluorinneholdende magnetisk resonansavbildningsmiddel.
8. Sammensetningen ifølge krav 7, karakterisert ved at nevnte fluorinneholdende magnetiske resonansavbildningsmiddel er valgt blant: (a) cxF2x+y-zAz>hvor x = l - 30, y = 2; eller 0 eller 2, når x ±2; eller -4 når x > 4, z = et hvilket som helst helt tall fra 0 opptil (2x+y-l), og A er valgt blant H, halogener forskjellig fra F, -CN, -OR, hvor R er H, alkyl, fluoralkyl, alkenyl, fluoralkenyl, alkynyl, fluoralkynyl, aryl, fluoraryl, alkanoyl, fluoralkanoyl, alkenoyl, fluoralkenoyl, alkynoyl, fluoralkynoyl, (b) [CxF2x+y'.zAz]aJRb.a. hvor x, z A og R er som definert ovenfor, y' = 1; eller -1 eller -3, når x >2; eller -6 når x >4, J = 0,S, N, P, Al eller Si, a = 1,2, 3 eller 4, og b = 2 for en divalent J, eller 3 for en trivalent J, eller 4 for en tetravalent J, (c) A'-[(CF2)x-0]c-A",hvor x er som definert ovenfor, A<1> er valgt blant H, halogener, -CN, -OR, hvor R er H, alkyl, fluoralkyl, alkenyl, fluoralkenyl, alkynyl, fluoralkynyl, aryl, fluoraryl, alkanoyl, fluoralkanoyl, alkenoyl, fluoralkenoyl, alkynoyl, fluoralkynoyl, A" er valgt blant H eller R, hvor R er som definert ovenfor, c = 1 - 300, eller (<d>) r(<CF>2)x-<0>]c. hvor: x er som definert ovenfor, og c' = 2 - 20, så vel som blandinger av hvilke som helst to eller flere derav.
9. Sammensetningen ifølge krav 7, karakterisert ved at nevnte diagnostiske middel er i stand til å gjennomgå en forandring i relaksjonshas-tigheten på grunn av forandringer i den lokale oksygenkonsentrasjonen.
10. Sammensetningen ifølge krav 7, karakterisert ved at nevnte diagnostiske middel er i stand til å gjennomgå en faststoff til flytende fase transisjon i temperaturområdet fra 22 til 55°C.
11. Sammensetningen ifølge krav 3, karakterisert ved at nevnte middel er valgt blant aminosyrer, proteiner, nukleinsyrer, sukre, karbohydrater, lipidoppløselige vitaminer, lipider eller kombinasjoner av hvilke som helst to eller flere derav.
12. Sammensetningen ifølge krav 3, karakterisert ved at nevnte farmakologiske aktive middel i nevnte skall er oppløst eller suspendert i et bioforenlig dispergeringsmiddel.
13. Sammensetningen ifølge krav 12, karakterisert ved at nevnte bioforenlige dispergeringsmiddel er valgt blant soyabønneolje, kokosnøttolje, olivenolje, safranolje, bomullsfrøolje, alifatiske, cykloalifatiske eller aromatiske hydrokarboner med 4-30 karbonatomer, alifatiske eller aromatiske alkoholer med 2-30 karbonatomer, alifatiske eller aromatiske estere med 2-30 karbonatomer, alkyl-, aryl- eller cykliske etere med 2-30 karbonatomer, alkyl-, eller arylhalider med 1-30 karbonatomer som eventuelt har flere enn en halogensubstituent, ketoner med 3-30 karbonatomer, polyalkylenglykol, eller en kombinasjon av hvilke som helst to eller flere derav.
14. Sammensetningen ifølge krav 3, karakterisert ved at nevnte farmakologisk aktive middel er inneholdt rent i nevnte skall.
15. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte tverrbundne polymer er en naturlig forekommende polymer, en syntetisk polymer eller en kombinasjon derav, hvor nevnte polymer, før tverrbinding, har kovalent bundet dertil sulhydrylgrupper eller disulfidbindinger.
16. Sammensetningen ifølge krav 15, karakterisert ved at nevnte naturlig forekommende polymer er valgt blant proteiner inneholdende sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polypeptider inneholdende sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, lipider inneholdende sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polynukleinsyrer inneholdende sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper eller polysakkarider inneholdende sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper.
17. Sammensetningen ifølge krav 16, karakterisert ved at nevnte proteiner er valgt blant hemoglobin, myoglobin, albumin, insulin, lysozym, immunoglobuliner, a-2-makroglobulin, fibronektin, vitronektin, fibrinogen eller en kombinasjon av hvilke som helst to eller flere derav.
18. Sammensetningen ifølge krav 17, karakterisert ved at nevnte protein er albumin.
19. Sammensetningen ifølge krav 17, karakterisert ved at nevnte protein er hemoglobin.
20. Sammensetningen ifølge krav 17, karakterisert ved at nevnte protein er en kombinasjon av albumin og hemoglobin.
21. Sammensetningen ifølge krav 16, karakterisert ved at nevnte polysakkaridet er valgt blant alginat, alginater med høyt M-innhold, polyman-nuroninsyre, polymannuronater, hyaluronsyre, hyaluronat, heparin, dekstran, chitosan, chitin, cellulose, stivelse, glykogen, guargummi, Johannesbrød-bønnegummi, dekstran, levan, inulin, cyklodekstran, agarose, xantangummi, carageenan, heparin, pektin, gellan-gummi, scleroglukan eller kombinasjoner av hvilke som helst to eller flere derav.
22. Sammensetningen ifølge krav 15, karakterisert ved at nevnte syntetiske polymer er valgt blant syntetiske polyaminosyrer inneholdende cysteinrester og/eller disulfidgrupper, syntetiske polypeptider inneholdende sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyvinylalkohol modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyhydroksyetylmetakryl modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyakrylsyre modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyetyloksazolin modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyakrylamid modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyvinylpyrrolidin modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, polyalkylenglykoler modifisert til å inneholde frie sulfhydrylgrupper og/eller disulfidgrupper, så vel som blandinger av hvilke som helst to eller flere derav.
23. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte gass er valgt blant luft, oksygen, argon, nitrogen, karbonmonoksid, karbondioksid, helium, xenon, nitrogenoksid, salpeteroksid, nitrogendioksid eller kombinasjoner av hvilke som helst to eller flere derav.
24. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at disulfidbindingene på den tverrbundne polymer er dannet ved ultrasonisk bestråling.
25. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte polymere skall inneholdende biologisk stoff blir suspendert i et bioforenlig medium og hvor nevnte bioforenlige medium er valgt blant vann, bufret vandig media, saltvann, bufret saltvann, oppløsninger av aminosyrer, oppløsninger av proteiner, opp-løsninger av sukre, oppløsninger av vitaminer, oppløsninger av karbohydrater, oppløs-ninger av syntetiske polymerer, lipidinneholdende emulsjoner eller kombinasjoner av hvilke som helst to eller flere derav.
26. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte polymere skall er modifisert av et passende middel hvor nevnte passende middel er valgt blant en syntetisk polymer, fosfolipid, et protein, en polysakkarid, et overflate-aktivt middel, et kjemisk modifiserende middel eller en kombinasjon derav, hvor nevnte middel er assosiert med nevnte polymere skall gjennom en eventuell kovalent binding.
27. Fremgangsmåte for fremstilling av et biologisk stoff for in vivo-avlevering ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte fremgangsmåte omfatter å utsette vandig medium inneholdende bioforenlig materiale som er i stand til å bli tverrbundet av disulfidbindinger og biologisk stoff for høy intensitets ultralydbetingelser i et tidsrom som er tilstrekkelig for å gi tverrbinding av nevnte bioforenlige materiale ved disulfidbindinger; hvor nevnte middel hovedsakelig er fullstendig inneholdt i et polymert skall, og hvor den største tverrsnittsdimensjonen av nevnte skall ikke er større enn 10 mikron.
NO19953278A 1993-02-22 1995-08-21 Fremgangsmåter for in vivo-avlevering av biologiske stoffer og sammensetninger som er nyttige for dette NO314017B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/023,698 US5439686A (en) 1993-02-22 1993-02-22 Methods for in vivo delivery of substantially water insoluble pharmacologically active agents and compositions useful therefor
US08/035,150 US5362478A (en) 1993-03-26 1993-03-26 Magnetic resonance imaging with fluorocarbons encapsulated in a cross-linked polymeric shell
PCT/US1994/001985 WO1994018954A1 (en) 1993-02-22 1994-02-22 Methods for in vivo delivery of biologics and compositions useful therefor

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO953278D0 NO953278D0 (no) 1995-08-21
NO953278L NO953278L (no) 1995-10-13
NO314017B1 true NO314017B1 (no) 2003-01-20

Family

ID=26697503

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19953278A NO314017B1 (no) 1993-02-22 1995-08-21 Fremgangsmåter for in vivo-avlevering av biologiske stoffer og sammensetninger som er nyttige for dette

Country Status (16)

Country Link
US (4) US5498421A (no)
EP (1) EP0693924B2 (no)
JP (1) JP3746293B2 (no)
CN (1) CN1245156C (no)
AT (1) ATE264671T1 (no)
AU (1) AU673057B2 (no)
BR (1) BR9405798A (no)
CA (1) CA2155947C (no)
DE (1) DE69433723T3 (no)
DK (1) DK0693924T4 (no)
ES (1) ES2219646T5 (no)
HK (1) HK1097449A1 (no)
NO (1) NO314017B1 (no)
NZ (1) NZ262679A (no)
PT (1) PT693924E (no)
WO (1) WO1994018954A1 (no)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT106738A (pt) * 2013-01-09 2014-07-09 Hovione Farmaciencia Sa Secagem dinâmica de suspensões para o controlo do fenómeno de degradação difusional de ostwald (ostwald ripening)

Families Citing this family (389)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5580575A (en) 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
US6001335A (en) 1989-12-22 1999-12-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Contrasting agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US6088613A (en) 1989-12-22 2000-07-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of magnetic resonance focused surgical and therapeutic ultrasound
US5922304A (en) 1989-12-22 1999-07-13 Imarx Pharmaceutical Corp. Gaseous precursor filled microspheres as magnetic resonance imaging contrast agents
US5305757A (en) 1989-12-22 1994-04-26 Unger Evan C Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents
US5656211A (en) 1989-12-22 1997-08-12 Imarx Pharmaceutical Corp. Apparatus and method for making gas-filled vesicles of optimal size
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5776429A (en) 1989-12-22 1998-07-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas-filled microspheres using a lyophilized lipids
US6551576B1 (en) 1989-12-22 2003-04-22 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US6146657A (en) 1989-12-22 2000-11-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas-filled lipid spheres for use in diagnostic and therapeutic applications
US5733572A (en) 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
US5542935A (en) 1989-12-22 1996-08-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic delivery systems related applications
US20020150539A1 (en) * 1989-12-22 2002-10-17 Unger Evan C. Ultrasound imaging and treatment
US5370901A (en) * 1991-02-15 1994-12-06 Bracco International B.V. Compositions for increasing the image contrast in diagnostic investigations of the digestive tract of patients
US5874062A (en) 1991-04-05 1999-02-23 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of computed tomography using perfluorocarbon gaseous filled microspheres as contrast agents
US5205290A (en) 1991-04-05 1993-04-27 Unger Evan C Low density microspheres and their use as contrast agents for computed tomography
GB9221329D0 (en) * 1992-10-10 1992-11-25 Delta Biotechnology Ltd Preparation of further diagnostic agents
US5981568A (en) 1993-01-28 1999-11-09 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6528067B1 (en) 1993-02-22 2003-03-04 American Bioscience, Inc. Total nutrient admixtures as stable multicomponent liquids or dry powders and methods for the preparation thereof
US20030068362A1 (en) * 1993-02-22 2003-04-10 American Bioscience, Inc. Methods and formulations for the delivery of pharmacologically active agents
US5439686A (en) * 1993-02-22 1995-08-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for in vivo delivery of substantially water insoluble pharmacologically active agents and compositions useful therefor
US6537579B1 (en) 1993-02-22 2003-03-25 American Bioscience, Inc. Compositions and methods for administration of pharmacologically active compounds
US20070122465A1 (en) * 1993-02-22 2007-05-31 Desai Neil P Novel formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
US6753006B1 (en) 1993-02-22 2004-06-22 American Bioscience, Inc. Paclitaxel-containing formulations
US20030073642A1 (en) * 1993-02-22 2003-04-17 American Bioscience, Inc. Methods and formulations for delivery of pharmacologically active agents
US5916596A (en) * 1993-02-22 1999-06-29 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
US20030133955A1 (en) * 1993-02-22 2003-07-17 American Bioscience, Inc. Methods and compositions useful for administration of chemotherapeutic agents
US5997904A (en) * 1993-02-22 1999-12-07 American Bioscience, Inc. Total nutrient admixtures as stable multicomponent liquids or dry powders and methods for the preparation thereof
US6749868B1 (en) 1993-02-22 2004-06-15 American Bioscience, Inc. Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
EP0693924B2 (en) * 1993-02-22 2008-04-09 Abraxis BioScience, Inc. Methods for (in vivo) delivery of biologics and compositions useful therefor
US5855865A (en) * 1993-07-02 1999-01-05 Molecular Biosystems, Inc. Method for making encapsulated gas microspheres from heat denatured protein in the absence of oxygen gas
US7083572B2 (en) * 1993-11-30 2006-08-01 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Therapeutic delivery systems
AU710504B2 (en) * 1994-03-15 1999-09-23 Brown University Research Foundation Polymeric gene delivery system
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5736121A (en) 1994-05-23 1998-04-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized homogenous suspensions as computed tomography contrast agents
US6159445A (en) * 1994-07-20 2000-12-12 Nycomed Imaging As Light imaging contrast agents
US5965109A (en) * 1994-08-02 1999-10-12 Molecular Biosystems, Inc. Process for making insoluble gas-filled microspheres containing a liquid hydrophobic barrier
AUPM922594A0 (en) 1994-11-04 1994-11-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Reduction of methane production in animals
GB9423419D0 (en) 1994-11-19 1995-01-11 Andaris Ltd Preparation of hollow microcapsules
US6333021B1 (en) 1994-11-22 2001-12-25 Bracco Research S.A. Microcapsules, method of making and their use
US6743779B1 (en) 1994-11-29 2004-06-01 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering compounds into a cell
GB9502065D0 (en) * 1995-02-02 1995-03-22 Nycomed Imaging As Contrast media
US6540981B2 (en) 1997-12-04 2003-04-01 Amersham Health As Light imaging contrast agents
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US5916790A (en) * 1995-03-03 1999-06-29 Metabolex, Inc. Encapsulation compositions, and methods
CA2214088A1 (en) * 1995-03-03 1996-09-12 Metabolex Inc. Novel encapsulation process by a gelling polymer
GB9506844D0 (en) * 1995-04-03 1995-05-24 Armitage Ian M Pharmaceutical microencapsulation
JPH10501823A (ja) * 1995-04-10 1998-02-17 バクスター、インターナショナル、インコーポレイテッド クモ膜下出血の治療における架橋ヘモグロビンの使用
US5834012A (en) * 1995-05-03 1998-11-10 Roman Perez-Soler Lipid complexed topoisomerase I inhibitors
US5997898A (en) 1995-06-06 1999-12-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized compositions of fluorinated amphiphiles for methods of therapeutic delivery
US6033645A (en) 1996-06-19 2000-03-07 Unger; Evan C. Methods for diagnostic imaging by regulating the administration rate of a contrast agent
EP0831935A4 (en) * 1995-06-07 2001-08-29 Mallinckrodt Medical Inc GASEOUS ULTRASONIC CONTRAST AGENTS AND RELATED METHODS
WO2004073750A1 (en) * 1995-06-07 2004-09-02 Harald Dugstad Improvements in or relating to contrast agents
US6565842B1 (en) 1995-06-07 2003-05-20 American Bioscience, Inc. Crosslinkable polypeptide compositions
US6231834B1 (en) 1995-06-07 2001-05-15 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for ultrasound imaging involving the use of a contrast agent and multiple images and processing of same
US6521211B1 (en) 1995-06-07 2003-02-18 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Methods of imaging and treatment with targeted compositions
US6139819A (en) 1995-06-07 2000-10-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Targeted contrast agents for diagnostic and therapeutic use
US7611533B2 (en) * 1995-06-07 2009-11-03 Cook Incorporated Coated implantable medical device
US5804162A (en) * 1995-06-07 1998-09-08 Alliance Pharmaceutical Corp. Gas emulsions stabilized with fluorinated ethers having low Ostwald coefficients
US20020119102A1 (en) * 1996-06-05 2002-08-29 Alexey Kabalnov Gas emulsions stabilized with fluorinated ethers having low ostwald coefficients
FR2736930B1 (fr) * 1995-07-17 1997-09-19 Biocem Procede de production, par des cellules vegetales, de proteines heminiques, proteines ainsi obtenues et produits contenant ces proteines
US6143211A (en) 1995-07-21 2000-11-07 Brown University Foundation Process for preparing microparticles through phase inversion phenomena
WO1997003702A1 (en) 1995-07-21 1997-02-06 Brown University Research Foundation A method for gene therapy using nucleic acid loaded polymeric microparticles
US6248720B1 (en) 1996-07-03 2001-06-19 Brown University Research Foundation Method for gene therapy using nucleic acid loaded polymeric microparticles
US5733869A (en) * 1995-10-06 1998-03-31 Baxter International, Inc. Therapeutic administration of hemoglobin in cardiac arrest
EP0862419B2 (en) 1995-11-09 2010-11-17 Microbiological Research Authority Microencapsulated dna for vaccination and gene therapy
US6270795B1 (en) * 1995-11-09 2001-08-07 Microbiological Research Authority Method of making microencapsulated DNA for vaccination and gene therapy
US6368586B1 (en) 1996-01-26 2002-04-09 Brown University Research Foundation Methods and compositions for enhancing the bioadhesive properties of polymers
US5985312A (en) * 1996-01-26 1999-11-16 Brown University Research Foundation Methods and compositions for enhancing the bioadhesive properties of polymers
US5767297A (en) * 1997-02-05 1998-06-16 Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd. Taxoid derivative and method of producing thereof
US5753477A (en) * 1996-03-19 1998-05-19 University Technology Corporation Magneto-biolistic methods
US5869539A (en) * 1996-04-17 1999-02-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Emulsions of perfluoro compounds as solvents for nitric oxide (NO)
EP0935415B1 (en) 1996-05-01 2006-11-22 Imarx Pharmaceutical Corp. In vitro methods for delivering nucleic acids into a cell
US6184037B1 (en) * 1996-05-17 2001-02-06 Genemedicine, Inc. Chitosan related compositions and methods for delivery of nucleic acids and oligonucleotides into a cell
US5773461A (en) * 1996-06-06 1998-06-30 Bristol-Myers Squibb Company 7-deoxy-6-substituted paclitaxels
US6491903B1 (en) * 1996-06-27 2002-12-10 Washington University Particles comprising amphiphilic copolymers
US5849727A (en) * 1996-06-28 1998-12-15 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for altering the biodistribution of biological agents
US5837221A (en) * 1996-07-29 1998-11-17 Acusphere, Inc. Polymer-lipid microencapsulated gases for use as imaging agents
US6414139B1 (en) 1996-09-03 2002-07-02 Imarx Therapeutics, Inc. Silicon amphiphilic compounds and the use thereof
US6017310A (en) * 1996-09-07 2000-01-25 Andaris Limited Use of hollow microcapsules
US5846517A (en) * 1996-09-11 1998-12-08 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for diagnostic imaging using a renal contrast agent and a vasodilator
ES2289188T3 (es) * 1996-09-11 2008-02-01 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Procedimiento para la obtencion de imagenes para el diagnostico usando un agente de contraste y un vasodilatador.
US20070092563A1 (en) * 1996-10-01 2007-04-26 Abraxis Bioscience, Inc. Novel formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
US6083484A (en) * 1996-10-17 2000-07-04 Molecular Biosystems, Inc. Microparticles stabilized by polynuclear chromium complexes and their use as ultrasound contrast agents
AU733495B2 (en) * 1996-10-28 2001-05-17 Nycomed Imaging As Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents
US6331289B1 (en) * 1996-10-28 2001-12-18 Nycomed Imaging As Targeted diagnostic/therapeutic agents having more than one different vectors
US6413763B1 (en) 1996-11-12 2002-07-02 The University Of Akron Method of removing gas from a site using gas vesicles of cells
AU5359198A (en) * 1996-11-12 1998-06-03 University Of Akron, The Compositions and methods relating to the production, isolation, and modification of gas vesicles
US9107949B2 (en) 1996-11-12 2015-08-18 The University Of Akron Method for using naturally occurring gas vesicles as ultrasound contrast agent
US5804551A (en) * 1996-11-12 1998-09-08 Baxter International Inc. Pretraumatic use of hemoglobin
AU5161298A (en) * 1996-11-25 1998-06-22 Imarx Pharmaceutical Corp. Perfluorinated-ether compositions as diagnostic contrast agents
US6068600A (en) * 1996-12-06 2000-05-30 Quadrant Healthcare (Uk) Limited Use of hollow microcapsules
US20030105156A1 (en) * 1997-01-07 2003-06-05 Nagesh Palepu Method for administration of a taxane/tocopherol formulation to enhance taxane therapeutic utility
US20020182258A1 (en) * 1997-01-22 2002-12-05 Zycos Inc., A Delaware Corporation Microparticles for delivery of nucleic acid
US6090800A (en) 1997-05-06 2000-07-18 Imarx Pharmaceutical Corp. Lipid soluble steroid prodrugs
US6537246B1 (en) * 1997-06-18 2003-03-25 Imarx Therapeutics, Inc. Oxygen delivery agents and uses for the same
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US6143276A (en) 1997-03-21 2000-11-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering bioactive agents to regions of elevated temperatures
US6048551A (en) * 1997-03-27 2000-04-11 Hilfinger; John M. Microsphere encapsulation of gene transfer vectors
ES2388248T3 (es) * 1997-03-31 2012-10-11 Boston Scientific Scimed Limited Forma de dosificación que comprende taxol en forma cristalina
US6416740B1 (en) 1997-05-13 2002-07-09 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Acoustically active drug delivery systems
US20020039594A1 (en) * 1997-05-13 2002-04-04 Evan C. Unger Solid porous matrices and methods of making and using the same
DE19720083A1 (de) * 1997-05-14 1998-11-19 Silvia Zender Arzneimittel
US6245318B1 (en) * 1997-05-27 2001-06-12 Mallinckrodt Inc. Selectively binding ultrasound contrast agents
HU224589B1 (hu) * 1997-06-03 2005-11-28 Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd. Taxoidszármazékok és eljárás előállításukra
US20030199425A1 (en) * 1997-06-27 2003-10-23 Desai Neil P. Compositions and methods for treatment of hyperplasia
US8853260B2 (en) * 1997-06-27 2014-10-07 Abraxis Bioscience, Llc Formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
CN100462066C (zh) * 1997-06-27 2009-02-18 美国生物科学有限公司 药剂的新制剂及其制备和应用方法
KR101180181B1 (ko) * 1997-06-27 2012-09-05 아브락시스 바이오사이언스, 엘엘씨 나노 입자 및 그의 제조 방법
US6045777A (en) * 1997-06-30 2000-04-04 Acusphere, Inc. Method for enhancing the echogenicity and decreasing the attenuation of microencapsulated gases
US6977074B2 (en) * 1997-07-10 2005-12-20 Mannkind Corporation Method of inducing a CTL response
EP1007673B1 (en) 1997-07-30 2008-12-17 Emory University Novel bone mineralization proteins, dna, vectors, expression systems
US7923250B2 (en) 1997-07-30 2011-04-12 Warsaw Orthopedic, Inc. Methods of expressing LIM mineralization protein in non-osseous cells
US7135191B2 (en) * 1997-09-04 2006-11-14 Zsolt Istvan Hertelendy Urogenital or anorectal transmucosal vaccine delivery system
US6548047B1 (en) 1997-09-15 2003-04-15 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Thermal preactivation of gaseous precursor filled compositions
WO1999016318A1 (en) * 1997-09-26 1999-04-08 Uab Research Foundation Reduced antigenic cells and uses therefor
US20030220234A1 (en) * 1998-11-02 2003-11-27 Selvaraj Naicker Deuterated cyclosporine analogs and their use as immunodulating agents
US6726934B1 (en) * 1997-10-09 2004-04-27 Vanderbilt University Micro-particulate and nano-particulate polymeric delivery system
AU747099B2 (en) 1997-10-31 2002-05-09 Pharmacia Corporation Gellan gum tablet coating
US7229841B2 (en) * 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
WO1999024016A1 (en) * 1997-11-10 1999-05-20 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Emulsions for aerosolization and drug delivery
US6407218B1 (en) * 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US6123923A (en) 1997-12-18 2000-09-26 Imarx Pharmaceutical Corp. Optoacoustic contrast agents and methods for their use
US5851544A (en) * 1997-12-18 1998-12-22 Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco, Inc. Cosmetic skin or hair care compositions containing fluorocarbons infused with carbon dioxide
US20010003580A1 (en) 1998-01-14 2001-06-14 Poh K. Hui Preparation of a lipid blend and a phospholipid suspension containing the lipid blend
WO1999058134A1 (en) * 1998-05-11 1999-11-18 Purdue Research Foundation Methods and compositions for nucleic acid delivery
US20030059465A1 (en) * 1998-05-11 2003-03-27 Unger Evan C. Stabilized nanoparticle formulations of camptotheca derivatives
US6169078B1 (en) * 1998-05-12 2001-01-02 University Of Florida Materials and methods for the intracellular delivery of substances
AU3969099A (en) * 1998-05-13 1999-11-29 Light Sciences Limited Partnership Controlled activation of targeted radionuclides
US7427602B1 (en) * 1998-05-13 2008-09-23 The Regents Of The University Of Michigan Sustained DNA delivery from structural matrices
US6406719B1 (en) 1998-05-13 2002-06-18 Microbiological Research Authority Encapsulation of bioactive agents
GB9810236D0 (en) 1998-05-13 1998-07-08 Microbiological Res Authority Improvements relating to encapsulation of bioactive agents
KR100566336B1 (ko) 1998-06-04 2006-03-31 가오가부시끼가이샤 폴리머 에멀젼 및 그 제조법
US6103275A (en) * 1998-06-10 2000-08-15 Nitric Oxide Solutions Systems and methods for topical treatment with nitric oxide
US20020022588A1 (en) * 1998-06-23 2002-02-21 James Wilkie Methods and compositions for sealing tissue leaks
JP4198318B2 (ja) * 1998-08-19 2008-12-17 ヤーゴテック アクチェンゲゼルシャフト プロポフォールの注射可能水性分散物
US6485747B1 (en) 1998-10-30 2002-11-26 Monsanto Company Coated active tablet(s)
US7521068B2 (en) 1998-11-12 2009-04-21 Elan Pharma International Ltd. Dry powder aerosols of nanoparticulate drugs
DE19852928C1 (de) 1998-11-17 2000-08-03 Steffen Panzner Strukturen in Form von Hohlkugeln
US6864301B2 (en) * 1998-11-30 2005-03-08 The Regents Of The University Of Colorado Preparation and use of photopolymerized microparticles
US6040330A (en) * 1999-01-08 2000-03-21 Bionumerik Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulations of taxanes
US6958212B1 (en) * 1999-02-01 2005-10-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
AU773914B2 (en) * 1999-02-01 2004-06-10 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Biomaterials formed by nucleophilic addition reaction to conjugated unsaturated groups
US6500807B1 (en) 1999-02-02 2002-12-31 Safescience, Inc. Modified pectin and nucleic acid composition
US6444192B1 (en) * 1999-02-05 2002-09-03 The Regents Of The University Of California Diagnostic imaging of lymph structures
AU3243300A (en) * 1999-02-23 2000-09-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Multiparticulate formulation
US6767928B1 (en) 1999-03-19 2004-07-27 The Regents Of The University Of Michigan Mineralization and biological modification of biomaterial surfaces
ES2199815T3 (es) * 1999-03-19 2004-03-01 The Regents Of The University Of Michigan Mineralizacion y desarrollo celular supeerficial sobre biomateriales.
US6398772B1 (en) * 1999-03-26 2002-06-04 Coraje, Inc. Method and apparatus for emergency treatment of patients experiencing a thrombotic vascular occlusion
US7678390B2 (en) * 1999-04-01 2010-03-16 Yale University Carbon monoxide as a biomarker and therapeutic agent
US6852334B1 (en) * 1999-04-20 2005-02-08 The University Of British Columbia Cationic peg-lipids and methods of use
US6426145B1 (en) 1999-05-20 2002-07-30 Scimed Life Systems, Inc. Radiopaque compositions for visualization of medical devices
EP1102784A4 (en) * 1999-06-07 2009-12-30 Mirus Bio Corp A CONNECTION WITH A LABILES DISULFIDE TIE
JP4737904B2 (ja) * 1999-09-10 2011-08-03 シンジェンタ リミテッド 可変放出マイクロカプセル
WO2001024705A1 (en) * 1999-10-06 2001-04-12 Imarx Therapeutics, Inc. Improved methods for delivering bioactive agents
ATE285223T1 (de) * 1999-10-08 2005-01-15 Coty Bv Kosmetische wirkstoffzubereitung mit synergistisch erhöhtem radikalschutzfaktor
US20050037086A1 (en) * 1999-11-19 2005-02-17 Zycos Inc., A Delaware Corporation Continuous-flow method for preparing microparticles
US7129329B1 (en) * 1999-12-06 2006-10-31 University Of Hawaii Heme proteins hemAT-Hs and hemAT-Bs and their use in medicine and microsensors
US6749865B2 (en) * 2000-02-15 2004-06-15 Genzyme Corporation Modification of biopolymers for improved drug delivery
AU2001238346A1 (en) * 2000-02-15 2001-08-27 Genzyme Corporation Modification of biopolymers for improved drug delivery
EP1267946A4 (en) 2000-02-28 2008-07-02 Genesegues Inc SYSTEM AND METHOD FOR ENCAPSULATING NANOCAPSULES
DE10010264A1 (de) 2000-03-02 2001-09-13 Novosom Gmbh Stabilisierte Liposomen und Hüllstrukturen
US7189705B2 (en) * 2000-04-20 2007-03-13 The University Of British Columbia Methods of enhancing SPLP-mediated transfection using endosomal membrane destabilizers
ITMI20001107A1 (it) * 2000-05-18 2001-11-18 Acs Dobfar Spa Metodo per il trattamento di tumori solici mediante microparticelle di albumina incorporanti paclitaxel
EP1292285A4 (en) * 2000-06-02 2009-07-22 Eisai Corp North America SYSTEMS FOR DISPENSING BIOACTIVE AGENTS
US7291673B2 (en) * 2000-06-02 2007-11-06 Eidgenossiche Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
US20020076443A1 (en) * 2000-06-19 2002-06-20 Stanley Stein Multiple phase cross-linked compositions and uses thereof
EP1355965B1 (en) * 2000-10-19 2012-09-19 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Method of synthesizing block copolymers for multifunctional self-assembled systems
US20060280724A1 (en) * 2000-11-04 2006-12-14 Ferguson Ian A Identification of ligands that enable endocytosis, using in vivo manipulation of neuronal fibers
DE10108799A1 (de) * 2001-02-19 2002-09-05 Laser & Med Tech Gmbh Verfahren und Vorrichtung zur Ultraschallimpfung von biologischem Zellmaterial
CA2440844A1 (en) * 2001-03-20 2002-09-26 Universitat Zurich Two-phase processing of thermosensitive polymers for use as biomaterials
IL158654A0 (en) * 2001-04-30 2004-05-12 Cytimmune Sciences Inc Colloidal metal compositions and methods
AU2002318377B2 (en) * 2001-06-21 2008-06-19 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Carbon monoxide improves outcomes in tissue and organ transplants and suppresses apoptosis
EP1408932A4 (en) * 2001-06-23 2009-02-25 Lyotropic Therapeutics Inc PARTICLES WITH ENHANCED SOLUBILIZATION CAPACITY
US6797257B2 (en) * 2001-06-26 2004-09-28 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Paramagnetic polymerized protein microspheres and methods of preparation thereof
TWI332943B (en) * 2001-07-10 2010-11-11 Synta Pharmaceuticals Corp Taxol enhancer compounds
ATE392812T1 (de) * 2001-07-10 2008-05-15 Sonogene Llc Verbesserung der transfektion von dna in die leber
TWI297335B (en) 2001-07-10 2008-06-01 Synta Pharmaceuticals Corp Taxol enhancer compounds
TWI252847B (en) * 2001-07-10 2006-04-11 Synta Pharmaceuticals Corp Synthesis of taxol enhancers
CN1335182A (zh) * 2001-08-08 2002-02-13 华中科技大学 胰岛素口腔喷剂及其制备工艺
CA2456806C (en) * 2001-08-08 2011-10-18 Brown University Research Foundation Methods for micronization of hydrophobic drugs
US20030054042A1 (en) * 2001-09-14 2003-03-20 Elaine Liversidge Stabilization of chemical compounds using nanoparticulate formulations
WO2003028657A2 (en) * 2001-10-03 2003-04-10 The Johns Hopkins University Compositions for oral gene therapy and methods of using same
KR100982466B1 (ko) * 2001-10-19 2010-09-16 이소테크니카 인코포레이티드 시클로스포린 유사체의 합성
WO2003049701A2 (en) * 2001-12-10 2003-06-19 Spherics, Inc. Methods and products useful in the formation and isolation of microparticles
EP1319423A3 (en) 2001-12-11 2003-10-08 Dornier Medtech System GmbH Apparatus and method for initiating chemical reactions and for the targeted delivery of drugs or other agents
JP3816809B2 (ja) * 2002-01-30 2006-08-30 株式会社日立製作所 薬剤、薬剤キャリア、薬剤の製造方法及び腫瘍の治療方法
EA200401070A1 (ru) * 2002-02-13 2005-02-24 Бет Изрейэл Диконисс Медикал Сентер, Инк. Способы лечения сосудистых заболеваний
IL148299A (en) * 2002-02-21 2014-04-30 Technion Res & Dev Foundation Ultrasonic to the heart
DE10211886B4 (de) * 2002-03-18 2004-07-15 Dornier Medtech Gmbh Verfahren und Einrichtung zum Erzeugen bipolarer akustischer Impulse
US20030179692A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Yoshitaka Ohotomo Storage medium
DE60309300T3 (de) * 2002-03-20 2011-02-24 Elan Pharma International Ltd. Nanopartikelzusammensetzungen von angiogeneseinhibitoren
US20080220075A1 (en) * 2002-03-20 2008-09-11 Elan Pharma International Ltd. Nanoparticulate compositions of angiogenesis inhibitors
US8282912B2 (en) * 2002-03-22 2012-10-09 Kuros Biosurgery, AG Compositions for tissue augmentation
ITMI20020680A1 (it) * 2002-03-29 2003-09-29 Acs Dobfar Spa Composizione antitumorale migliorata a base di paclitaxel e metodo per il suo ottenimento
ITMI20020681A1 (it) * 2002-03-29 2003-09-29 Acs Dobfar Spa Procedimento per la produzione di nanoparticelle di paclitaxel ed albumina
US20040038303A1 (en) * 2002-04-08 2004-02-26 Unger Gretchen M. Biologic modulations with nanoparticles
RS91004A (en) * 2002-04-15 2007-02-05 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education, Methods of treating ileus
WO2003088981A1 (en) * 2002-04-15 2003-10-30 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods of treating necrotizing enterocolitis
JP2005522521A (ja) 2002-04-15 2005-07-28 ベス イスラエル デアコネス メディカル センター ヘムオキシゲナーゼ−１およびヘム分解産物の使用法
US20040126400A1 (en) * 2002-05-03 2004-07-01 Iversen Patrick L. Delivery of therapeutic compounds via microparticles or microbubbles
AU2003234576A1 (en) * 2002-05-17 2003-12-02 Case Western Reserve University Chemical shift markers for improved wireless fiducial marker tracking
RS99304A (en) * 2002-05-17 2007-04-10 Yale University, Methods of treating hepatitis
DE10223196B4 (de) * 2002-05-24 2004-05-13 Dornier Medtech Systems Gmbh Verfahren und Einrichtung zum Transferieren von Molekülen in Zellen
UA87438C2 (ru) * 2002-06-05 2009-07-27 Йельский Университет Способы лечения или профилактики рака, способ проведения хирургической операции по удалению рака и применения монооксида углерода
WO2004000368A1 (en) * 2002-06-21 2003-12-31 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Pharmaceutical use of nitric oxide, heme oxygenase-1 and products of heme degradation
AU2003247671B2 (en) * 2002-07-15 2008-02-14 Alcon, Inc. Bioerodible film for ophthalmic drug delivery
WO2004009134A1 (en) * 2002-07-22 2004-01-29 Bracco Imaging S.P.A. Procedures of cellular labelling with paramagnetic complexes for mri applications
EP2277551B1 (en) 2002-09-06 2013-05-08 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for delivering the therapeutic agents covalently bound thereto
DE10244847A1 (de) 2002-09-20 2004-04-01 Ulrich Prof. Dr. Speck Medizinische Vorrichtung zur Arzneimittelabgabe
RS20050344A (en) * 2002-11-07 2007-11-15 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education, Treatment for hemorrhagic shock
KR100514092B1 (ko) * 2002-11-23 2005-09-13 한국생명공학연구원 양이온성 고분자 물질과 음이온성 고분자 물질을 이용한 새로운 다중 유전자 전달 복합체
IL153124A (en) * 2002-11-27 2010-06-30 Herbal Synthesis Corp Solid composition that can be glued to the lining
TR200502189T1 (tr) * 2002-12-09 2007-01-22 American Bioscience, Inc. Kompozisyonlar ve farmakolojik etken maddelerin aktarımı için yöntemler.
US7311926B2 (en) * 2002-12-20 2007-12-25 Battelle Memorial Institute Biocomposite materials and methods for making the same
FR2848854B1 (fr) * 2002-12-24 2005-03-18 Coletica Particules comprenant un biopolymere degradable sous l'effet d'une onde electromagnetique telle qu'emise par un rayonnement solaire
TWI330079B (en) * 2003-01-15 2010-09-11 Synta Pharmaceuticals Corp Treatment for cancers
US7623908B2 (en) 2003-01-24 2009-11-24 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Nonlinear interferometric vibrational imaging
JP2004290745A (ja) * 2003-03-25 2004-10-21 Ajinomoto Co Inc マイクロカプセルの製造法
US20040225022A1 (en) * 2003-05-09 2004-11-11 Desai Neil P. Propofol formulation containing reduced oil and surfactants
US20040247624A1 (en) * 2003-06-05 2004-12-09 Unger Evan Charles Methods of making pharmaceutical formulations for the delivery of drugs having low aqueous solubility
US7217410B2 (en) * 2003-06-17 2007-05-15 The Board Of Trustees Of The Universtiy Of Illinois Surface modified protein microparticles
US7198777B2 (en) * 2003-06-17 2007-04-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Optical contrast agents for optically modifying incident radiation
US8476010B2 (en) 2003-07-10 2013-07-02 App Pharmaceuticals Llc Propofol formulations with non-reactive container closures
US7217270B2 (en) * 2003-09-08 2007-05-15 Mectra Labs, Inc. Method and material for coating electro-cautery probes and lubricating surgical instruments
US20050181018A1 (en) * 2003-09-19 2005-08-18 Peyman Gholam A. Ocular drug delivery
AU2004311630A1 (en) * 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US7610074B2 (en) * 2004-01-08 2009-10-27 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Multi-functional plasmon-resonant contrast agents for optical coherence tomography
CA2560544C (en) 2004-01-16 2015-05-19 Carnegie Mellon University Cellular labeling for nuclear magnetic resonance techniques
CA2554755A1 (en) * 2004-01-28 2005-08-11 Cytimmune Sciences, Inc. Functionalized colloidal metal compositions and methods
WO2005097208A2 (en) * 2004-03-26 2005-10-20 University Of Florida Research Foundation, Inc. Tissue oxygenation measurements
WO2005103080A2 (en) * 2004-04-21 2005-11-03 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Stable oxidation resistant powdered hemoglobin, methods of preparing same, and uses thereof
US20090004277A1 (en) * 2004-05-18 2009-01-01 Franchini Miriam K Nanoparticle dispersion containing lactam compound
CA2567741A1 (en) * 2004-05-25 2006-03-30 Chimeracore, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
US8012457B2 (en) * 2004-06-04 2011-09-06 Acusphere, Inc. Ultrasound contrast agent dosage formulation
EP1750862B1 (en) * 2004-06-04 2011-01-05 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Pharmaceutical composition containing irbesartan
WO2006009940A1 (en) * 2004-06-23 2006-01-26 Synta Pharmaceuticals Corp. Bis(thio-hydrazide amide) salts for treatment of cancers
KR100578382B1 (ko) 2004-07-16 2006-05-11 나재운 항암제의 전달체용 수용성 키토산 나노입자 및 그 제조방법
US7289840B2 (en) 2004-09-22 2007-10-30 Receptomon, Llc Method for monitoring early treatment response
US20080269163A1 (en) * 2004-10-19 2008-10-30 Sostaric Joe Z Methods and Compositions for Protecting Cells from Ultrasound-Mediated Cytolysis
JP4804906B2 (ja) * 2004-12-15 2011-11-02 ドルニエル メドテック システムズ ゲーエムベーハー 循環器および神経疾患の患者における細胞治療および組織再生の衝撃波による改良方法
MX2007009354A (es) * 2005-02-03 2008-01-14 Epix Pharm Inc Metodos de perfusion en estado estable.
US7622102B2 (en) * 2005-02-08 2009-11-24 Receptomon, Llc Method for monitoring early treatment response
HUE038768T2 (hu) * 2005-02-18 2018-11-28 Abraxis Bioscience Llc Terápiás szerek kombinációi, valamint beadásukra szolgáló módszerek, és kombinációs terápia
US8735394B2 (en) 2005-02-18 2014-05-27 Abraxis Bioscience, Llc Combinations and modes of administration of therapeutic agents and combination therapy
US7586618B2 (en) * 2005-02-28 2009-09-08 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Distinguishing non-resonant four-wave-mixing noise in coherent stokes and anti-stokes Raman scattering
US8131337B2 (en) * 2005-04-05 2012-03-06 Receptomon, Llc Method for monitoring early treatment response
US20060229585A1 (en) * 2005-04-11 2006-10-12 Minu, L.L.C. Drug delivery to the crystalline lens and other ocular structures
US7722581B2 (en) * 2005-04-11 2010-05-25 Gholam A. Peyman Crystalline lens drug delivery
US8017654B2 (en) * 2005-04-15 2011-09-13 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination cancer therapy with bis(thiohydrazide) amide compounds
US7725169B2 (en) * 2005-04-15 2010-05-25 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Contrast enhanced spectroscopic optical coherence tomography
US9505867B2 (en) * 2005-05-31 2016-11-29 Ecole Polytechmique Fédérale De Lausanne Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
ES2277743B2 (es) 2005-06-02 2008-12-16 Universidade De Santiago De Compostela Nanoparticulas que comprenden quitosano y ciclodextrina.
CN101006343B (zh) * 2005-06-30 2012-10-31 阿姆泰克株式会社 一种用于医疗器具洗净评价的指示组合物
TWI417114B (zh) 2005-08-31 2013-12-01 Abraxis Bioscience Llc 具有增強穩定性之弱水溶性藥物之組合物及其製備方法
CN101291658B (zh) * 2005-08-31 2014-04-16 阿布拉科斯生物科学有限公司 用于制备稳定性增加的水难溶性药物的组合物和方法
KR20080074207A (ko) * 2005-12-05 2008-08-12 닛토덴코 가부시키가이샤 폴리글루타메이트-아미노산 콘쥬게이트 및 이의 제조 방법
WO2007090147A2 (en) 2006-01-31 2007-08-09 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method and apparatus for measurement of optical properties in tissue
WO2008108776A1 (en) * 2006-04-07 2008-09-12 Chimeros, Inc. Compositions and methods for treating b- cell malignancies
CA2649333C (en) 2006-04-14 2016-10-04 Carnegie Mellon University Cellular labeling and quantification for nuclear magnetic resonance techniques
US7744928B2 (en) * 2006-04-14 2010-06-29 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods and compositions for treatment of lesioned sites of body vessels
US7458953B2 (en) * 2006-06-20 2008-12-02 Gholam A. Peyman Ocular drainage device
TWI440632B (zh) 2006-08-21 2014-06-11 Synta Pharmaceuticals Corp 用於治療增生性疾病的化合物
US20100055459A1 (en) * 2006-08-30 2010-03-04 Liquidia Technologies, Inc. Nanoparticles Having Functional Additives for Self and Directed Assembly and Methods of Fabricating Same
US20080280987A1 (en) * 2006-08-31 2008-11-13 Desai Neil P Methods of inhibiting angiogenesis and treating angiogenesis-associated diseases
AU2007290490B2 (en) * 2006-08-31 2011-09-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination with bis(thiohydrazide amides) for treating cancer
US9498528B2 (en) * 2006-09-13 2016-11-22 Genzyme Corporation Treatment of multiple sclerosis (MS)
SI2117520T1 (sl) 2006-12-14 2019-01-31 Abraxis Bioscience, Llc Zdravljenje raka dojk glede na status hormonskih receptorjev z nano delci, ki zajemajo taksan
JP2010516625A (ja) 2007-01-24 2010-05-20 インサート セラピューティクス， インコーポレイテッド 制御された薬物送達のためのテザー基を有するポリマー−薬物コンジュゲート
US20080181852A1 (en) * 2007-01-29 2008-07-31 Nitto Denko Corporation Multi-functional Drug Carriers
MX2009009537A (es) * 2007-03-07 2009-09-16 Abraxis Bioscience Llc Nanoparticula que comprende rapamicina y albumina como agente anticancer.
DE102007015598A1 (de) * 2007-03-29 2008-10-02 Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf Verwendung von fluorhaltigen Verbindungen zu Diagnosezwecken mit Hilfe bildgebender Verfahren
WO2008124632A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Amphiphilic compound assisted nanoparticles for targeted delivery
WO2008124165A2 (en) * 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
CN101674852A (zh) * 2007-04-10 2010-03-17 日东电工株式会社 多功能聚谷氨酸盐药物载体
KR20100016416A (ko) * 2007-04-10 2010-02-12 새인트 시메온 엘디에이 리소자임 및 ｃ-1/ｃ-4 다당류를 함유하는 조성물, 및 구강 관리, 미용학 및 피부과, 피임, 비뇨기과 및 부인과에서의 이의 용도
CN101711168B (zh) 2007-04-13 2013-05-01 库罗斯生物外科股份公司 聚合物组织封闭剂
WO2008137148A2 (en) * 2007-05-03 2008-11-13 Abraxis Bioscience, Llc Methods and compositions for treating pulmonary hypertension
US8197828B2 (en) 2007-05-09 2012-06-12 Nitto Denko Corporation Compositions that include a hydrophobic compound and a polyamino acid conjugate
CN101730549B (zh) * 2007-05-09 2015-12-09 日东电工株式会社 与铂类药物结合的聚合物
WO2008150532A1 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Abraxis Bioscience, Llc Methods and compositions for treating recurrent cancer
AU2008275578B2 (en) 2007-07-10 2014-04-10 Carnegie Mellon University Compositions and methods for producing cellular labels for nuclear magnetic resonance techniques
WO2009036368A2 (en) * 2007-09-14 2009-03-19 Nitto Denko Corporation Drug carriers
EP2200932A4 (en) * 2007-09-21 2014-09-10 Cytimmune Sciences Inc NANOTHERAPEUTIC COLLOIDAL METAL COMPOSITIONS AND METHODS
US20110014118A1 (en) * 2007-09-21 2011-01-20 Lawrence Tamarkin Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods
HUE035101T2 (hu) 2007-09-28 2018-05-02 Pfizer Ráksejtek célzása nanorészecskék alkalmazásával
CA2706700A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
US8063020B2 (en) * 2007-12-22 2011-11-22 Simpkins Cuthbert O Resuscitation fluid
US8618056B2 (en) 2007-12-22 2013-12-31 Cuthbert O. Simpkins Methods and compositions for treating conditions related to lack of blood supply, shock and neuronal injuries
US8906855B2 (en) 2007-12-22 2014-12-09 Vivacelle Bio, Inc. Methods and compositions for treating conditions related to lack of blood supply, shock and neuronal injuries
US7751057B2 (en) 2008-01-18 2010-07-06 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Magnetomotive optical coherence tomography
US8983580B2 (en) * 2008-01-18 2015-03-17 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Low-coherence interferometry and optical coherence tomography for image-guided surgical treatment of solid tumors
US8115934B2 (en) 2008-01-18 2012-02-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Device and method for imaging the ear using optical coherence tomography
US8986253B2 (en) 2008-01-25 2015-03-24 Tandem Diabetes Care, Inc. Two chamber pumps and related methods
AU2009222230A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-11 Nitto Denko Corporation Polymer paclitaxel conjugates and methods for treating cancer
KR20150136137A (ko) * 2008-04-10 2015-12-04 아브락시스 바이오사이언스, 엘엘씨 소수성 탁산 유도체의 조성물 및 그의 용도
CA2721153C (en) * 2008-04-10 2018-10-02 Abraxis Bioscience, Llc Compositions of hydrophobic taxane derivatives and uses thereof
TWI573806B (zh) 2008-04-17 2017-03-11 巴克斯歐塔公司 生物活性胜肽
DE102008045152A1 (de) * 2008-07-09 2010-01-14 Universität Duisburg-Essen Künstliche Sauerstoffträger und ihre Verwendung
CN101642570B (zh) * 2008-08-07 2012-09-05 江苏大学附属医院 一氧化碳释放分子和肝素在制备治疗脓毒症药物中的应用
US8408421B2 (en) 2008-09-16 2013-04-02 Tandem Diabetes Care, Inc. Flow regulating stopcocks and related methods
EP2334234A4 (en) 2008-09-19 2013-03-20 Tandem Diabetes Care Inc DEVICE FOR MEASURING THE CONCENTRATION OF A SOLVED SUBSTANCE AND CORRESPONDING METHOD
US20100114057A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-06 Medtronic, Inc. System and method for delivery of biologic agents
US8870848B2 (en) 2008-10-31 2014-10-28 Medtronic, Inc. System and method for delivery of biologic agents
WO2010068432A1 (en) 2008-11-25 2010-06-17 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Block copolymers and uses thereof
JP5739816B2 (ja) 2008-12-19 2015-06-24 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ Ｔｆｐｉインヒビターおよび使用法
CA2753214C (en) 2009-02-27 2017-07-25 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for determination of flow reservoir volume
US9250106B2 (en) 2009-02-27 2016-02-02 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for determination of flow reservoir volume
US11235062B2 (en) * 2009-03-06 2022-02-01 Metaqor Llc Dynamic bio-nanoparticle elements
US11096901B2 (en) 2009-03-06 2021-08-24 Metaqor Llc Dynamic bio-nanoparticle platforms
WO2010120874A2 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Chimeros, Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
DK2419732T3 (da) 2009-04-15 2019-12-16 Abraxis Bioscience Llc Prionfrie nanopartikelsammensætninger og fremgangsmåder
US10369256B2 (en) 2009-07-10 2019-08-06 Boston Scientific Scimed, Inc. Use of nanocrystals for drug delivery from a balloon
US8758323B2 (en) 2009-07-30 2014-06-24 Tandem Diabetes Care, Inc. Infusion pump system with disposable cartridge having pressure venting and pressure feedback
US11285494B2 (en) 2009-08-25 2022-03-29 Nanoshell Company, Llc Method and apparatus for continuous removal of sub-micron sized particles in a closed loop liquid flow system
US10099227B2 (en) 2009-08-25 2018-10-16 Nanoshell Company, Llc Method and apparatus for continuous removal of sub-micron sized particles in a closed loop liquid flow system
EP2470282A4 (en) 2009-08-25 2015-07-29 Agnes Ostafin METHOD AND APPARATUS FOR CONTINUOUS REMOVAL OF SUBMICRONIC PARTICLES PRESENT IN A CLOSED-CIRCUIT FLUID FLOW SYSTEM
US10751464B2 (en) 2009-08-25 2020-08-25 Nanoshell Company, Llc Therapeutic retrieval of targets in biological fluids
EP2501234B1 (en) * 2009-11-20 2017-09-13 Tonix Pharma Holdings Limited Methods and compositions for treating symptoms associated with post-traumatic stress disorder using cyclobenzaprine
CN102781237A (zh) * 2009-11-23 2012-11-14 天蓝制药公司 用于传递治疗剂的基于环糊精的聚合物
WO2011069082A2 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 The Regents Of The University Of Michigan Red blood cell-mimetic particles and methods for making and use thereof
EP2531173B1 (en) * 2010-02-03 2018-09-26 Oncbiomune, L.L.C. Taxane- and taxoid-protein compositions
TWI438009B (zh) * 2010-02-19 2014-05-21 Teikoku Pharma Usa Inc 紫杉烷前－乳劑調配物及其製造與使用之方法
WO2011115712A2 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Baxter International Inc Tfpi inhibitors and methods of use
HUE027749T2 (en) 2010-03-26 2016-10-28 Abraxis Bioscience Llc Methods of treating hepatocellular carcinoma
RU2016119999A (ru) 2010-03-29 2018-11-08 АБРАКСИС БАЙОСАЙЕНС, ЭлЭлСи Способы лечения онкологических заболеваний
NZ602635A (en) 2010-03-29 2014-12-24 Abraxis Bioscience Llc Methods of enhancing drug delivery and effectiveness of therapeutic agents
MX341082B (es) 2010-05-03 2016-08-08 Teikoku Pharma Usa Inc Formulaciones de pro-emulsion de taxano no acuosas y metodos para hacer y usar las mismas.
US10806383B2 (en) * 2010-05-04 2020-10-20 Massachusetts Institute Of Technology Implantable dissolved oxygen sensor and methods of use
US9399071B2 (en) 2010-06-04 2016-07-26 Abraxis Bioscience, Llc Methods of treatment of pancreatic cancer
US20110319389A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Tonix Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating fatigue associated with disordered sleep using very low dose cyclobenzaprine
ES2386177B1 (es) 2010-09-21 2013-09-23 Lipotec, S.A. Nanocapsulas conteniendo microemulsiones
WO2012054841A2 (en) 2010-10-22 2012-04-26 The Regents Of The University Of Michigan Optical devices with switchable particles
AR084044A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Pharmasset Inc Compuestos 2’-espiro-nucleosidos
US11998516B2 (en) 2011-03-07 2024-06-04 Tonix Pharma Holdings Limited Methods and compositions for treating depression using cyclobenzaprine
BR112013027674A2 (pt) 2011-04-28 2016-09-06 Abraxis Bioscience Llc "usos de composições de nanopartículas, composições compreendendo as referidas nanopartículas e cateter com uma agulha".
CA2838387A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Chevron Phillips Chemical Company Lp Use of metallocene compounds for cancer treatment
AU2012267484B2 (en) 2011-06-10 2017-03-23 Bioverativ Therapeutics Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
WO2013021353A1 (en) * 2011-08-11 2013-02-14 Bar-Ilan University Surface modified proteinaceous spherical particles and uses thereof
JP2014527072A (ja) 2011-09-09 2014-10-09 バイオメド リアルティー， エル．ピー． ウイルスタンパク質の集合を制御するための方法および組成物
WO2013084207A1 (pt) 2011-12-07 2013-06-13 Universidade Do Minho Formulações micelares proteicas e respectivo método de produção
PL2790675T3 (pl) 2011-12-14 2019-12-31 Abraxis Bioscience, Llc Zastosowanie polimerowych rozczynników do liofilizacji lub zamrażania cząstek
GB201221305D0 (en) * 2012-11-27 2013-01-09 Greater Glasgow Health Board Improved methods of assessing metabolic function
WO2013141965A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Baxter International Inc. Tfpi inhibitors and methods of use
WO2013151682A1 (en) 2012-04-06 2013-10-10 Children's Medical Center Corporation Process for forming microbubbles with high oxygen content and uses thereof
WO2013158895A1 (en) * 2012-04-18 2013-10-24 University Of Utah Research Foundation Novel echogenic contrast agents
US9335910B2 (en) 2012-04-23 2016-05-10 Tandem Diabetes Care, Inc. System and method for reduction of inadvertent activation of medical device during manipulation
US9180242B2 (en) 2012-05-17 2015-11-10 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for multiple fluid transfer
US9715327B2 (en) 2012-06-07 2017-07-25 Tandem Diabetes Care, Inc. Preventing inadvertent changes in ambulatory medical devices
JP2015521589A (ja) 2012-06-08 2015-07-30 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． プロコアグラント化合物
CN110464709A (zh) 2012-08-10 2019-11-19 德克萨斯州大学系统董事会 用于治疗中风的神经保护性脂质体组合物和方法
JO3685B1 (ar) 2012-10-01 2020-08-27 Teikoku Pharma Usa Inc صيغ التشتيت الجسيمي للتاكسين غير المائي وطرق استخدامها
WO2014055493A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for polymer precipitation and generation of particles
US9149455B2 (en) 2012-11-09 2015-10-06 Abraxis Bioscience, Llc Methods of treating melanoma
EP2921166B1 (en) * 2012-11-15 2017-06-14 Utah-Inha DDS & Advanced Therapeutics Research Center Biodegradable microbeads with improved anticancer drug adsorptivity, containing albumin and dextran sulfate, and preparation method therefor
KR102180342B1 (ko) 2012-11-30 2020-11-18 노보메딕스 엘엘씨 치환된 바이아릴 설폰아미드 및 이의 용도
US9511046B2 (en) 2013-01-11 2016-12-06 Abraxis Bioscience, Llc Methods of treating pancreatic cancer
CN105228612A (zh) 2013-03-12 2016-01-06 阿布拉科斯生物科学有限公司 治疗肺癌的方法
US9173998B2 (en) 2013-03-14 2015-11-03 Tandem Diabetes Care, Inc. System and method for detecting occlusions in an infusion pump
ES2881851T3 (es) 2013-03-14 2021-11-30 Abraxis Bioscience Llc Métodos para tratar el cáncer de vejiga
US9101745B2 (en) 2013-03-14 2015-08-11 Sonogene Llc Sonochemical induction of ABCA1 expression and compositions therefor
US10577554B2 (en) 2013-03-15 2020-03-03 Children's Medical Center Corporation Gas-filled stabilized particles and methods of use
US9421329B2 (en) 2013-03-15 2016-08-23 Tandem Diabetes Care, Inc. Infusion device occlusion detection system
EP2968163A4 (en) * 2013-03-15 2017-01-25 Children's Medical Center Corporation Hollow particles encapsulating a biological gas and methods of use
EP4082552A1 (en) * 2013-03-15 2022-11-02 The Board of Regents of the University of Texas System Liquids rich in noble gas and methods of their preparation and use
EP2968992B8 (en) 2013-03-15 2020-01-15 Tonix Pharma Holdings Limited Eutectic formulations of cyclobenzaprine hydrochloride and mannitol
WO2014209855A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Anthrogenesis Corporation Methods of expanding t cells
WO2015013510A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Epfl High aspect ratio nanofibril materials
US20150140537A1 (en) * 2013-11-19 2015-05-21 Spectra Group Limited, Inc. Blood simulant for simulatoin-based medical trauma training
WO2015018380A2 (en) 2014-07-03 2015-02-12 Cspc Zhongqi Pharmaceutical Technology(Shijiazhuang)Co., Ltd. Therapeutic nanoparticles and the preparation methods thereof
CN111700877A (zh) 2014-09-03 2020-09-25 吉倪塞思公司 治疗性纳米粒子和相关的组合物、方法和系统
CN107072968B (zh) 2014-09-18 2021-01-12 通尼克斯制药控股有限公司 环苯扎林盐酸盐的低共熔混合物配制剂
US10705070B1 (en) 2015-03-05 2020-07-07 Abraxis Bioscience, Llc Methods of assessing suitability of use of pharmaceutical compositions of albumin and poorly water soluble drug
US10527604B1 (en) 2015-03-05 2020-01-07 Abraxis Bioscience, Llc Methods of assessing suitability of use of pharmaceutical compositions of albumin and paclitaxel
PL3313401T3 (pl) 2015-06-29 2022-02-07 Abraxis Bioscience, Llc Nanocząsteczki zawierające sirolimus i albuminę do stosowania w leczeniu nowotworów z komórek epitelioidnych
CN105901706B (zh) * 2016-04-21 2019-01-25 长江大学 一种鹅血抗氧化水解物及其微胶囊的制备方法
TR201606102A2 (tr) * 2016-05-10 2016-10-21 Tolgay Tuyan Ilhan Karin i̇çi̇ uygulanan kanser tedavi̇leri̇nde oksi̇jen konsantrasyonu ölçümü yapabi̇len ve veri̇len oksi̇jen dozaji üzeri̇nde deği̇şi̇kli̇k yapmayi sağlayan ci̇haz
WO2018160752A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Children's Medical Center Corporation Stimuli-responsive particles encapsulating a gas and methods of use
EP3723860A1 (en) 2017-12-11 2020-10-21 Tonix Pharma Holdings Limited Cyclobenzaprine treatment for agitation, psychosis and cognitive decline in dementia and neurodegenerative conditions
CN112188892A (zh) 2018-03-20 2021-01-05 阿布拉科斯生物科学有限公司 通过mTOR抑制剂和白蛋白的纳米颗粒的施用治疗中枢神经系统障碍的方法
WO2020115283A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 Baxalta GmbH Bispecific antibodies binding factor ixa and factor x
WO2020114615A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 Baxalta GmbH Bispecific antibodies binding factor ixa and factor x
WO2021067495A1 (en) * 2019-10-04 2021-04-08 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Micron sized droplets with solid endoskeleton or exoskeleton which tunes the thermal stability of the liquid droplets
MX2022004989A (es) 2019-10-28 2022-07-21 Abraxis Bioscience Llc Composiciones farmaceuticas de albumina y rapamicina.
CN112891566A (zh) * 2019-12-04 2021-06-04 中国科学院宁波工业技术研究院慈溪生物医学工程研究所 一种纳米材料及其制备方法和包含其的造影剂
US11366091B2 (en) * 2020-02-11 2022-06-21 Saudi Arabian Oil Company High temperature high pressure (HTHP) cell in sum frequency generation (SFG) spectroscopy for oil/brine interface analysis with reservoir conditions and dynamic compositions
CN112546406B (zh) * 2020-11-20 2022-04-22 广东药科大学 一种微型机器人给药装置及给药系统
WO2023164487A1 (en) * 2022-02-22 2023-08-31 Brown University Compositions and methods to achieve systemic uptake of particles following oral or mucosal administration
WO2024046999A1 (de) 2022-08-31 2024-03-07 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Lecithin-modifizierte nanoskalierte sauerstoffträger (lenox)

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3959457A (en) * 1970-06-05 1976-05-25 Temple University Microparticulate material and method of making such material
US4073943A (en) * 1974-09-11 1978-02-14 Apoteksvarucentralen Vitrum Ab Method of enhancing the administration of pharmalogically active agents
US4247406A (en) * 1979-04-23 1981-01-27 Widder Kenneth J Intravascularly-administrable, magnetically-localizable biodegradable carrier
JPS5933017B2 (ja) * 1980-03-14 1984-08-13 株式会社成和化成 マイクロカプセル用壁財
US4558032A (en) * 1981-12-31 1985-12-10 Neomed Inc. Synthetic whole blood substitute and a method of making the same
US4572203A (en) * 1983-01-27 1986-02-25 Feinstein Steven B Contact agents for ultrasonic imaging
US4718433A (en) 1983-01-27 1988-01-12 Feinstein Steven B Contrast agents for ultrasonic imaging
US4622219A (en) * 1983-06-17 1986-11-11 Haynes Duncan H Method of inducing local anesthesia using microdroplets of a general anesthetic
ATE34407T1 (de) * 1983-06-22 1988-06-15 Stolle Res & Dev Eingekapselte zellen, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung.
US4671954A (en) * 1983-12-13 1987-06-09 University Of Florida Microspheres for incorporation of therapeutic substances and methods of preparation thereof
CA1215922A (en) * 1984-05-25 1986-12-30 Connaught Laboratories Limited Microencapsulation of living tissue and cells
US4753788A (en) * 1985-01-31 1988-06-28 Vestar Research Inc. Method for preparing small vesicles using microemulsification
SE459005B (sv) * 1985-07-12 1989-05-29 Aake Rikard Lindahl Saett att framstaella sfaeriska polymerpartiklar
US5023271A (en) * 1985-08-13 1991-06-11 California Biotechnology Inc. Pharmaceutical microemulsions
WO1988001506A1 (en) * 1986-08-28 1988-03-10 Thomas Ko Sai Ying Microgranular preparation useful in the delivery of biologically active materials to the intestinal regions of animals
US4925678A (en) * 1987-04-01 1990-05-15 Ranney David F Endothelial envelopment drug carriers
US5000960A (en) * 1987-03-13 1991-03-19 Micro-Pak, Inc. Protein coupling to lipid vesicles
IE59934B1 (en) * 1987-06-19 1994-05-04 Elan Corp Plc Liquid suspension for oral administration
US4975278A (en) * 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
SE8704158L (sv) * 1987-10-26 1989-04-27 Carbomatrix Ab C O Ulf Schroed Mikrosfaerer, foerfarande foer framstaellning daerav och anvaendning daerav
IE61591B1 (en) * 1987-12-29 1994-11-16 Molecular Biosystems Inc Concentrated stabilized microbubble-type ultrasonic imaging agent and method of production
US4844882A (en) 1987-12-29 1989-07-04 Molecular Biosystems, Inc. Concentrated stabilized microbubble-type ultrasonic imaging agent
US4861579A (en) * 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
US4929446A (en) * 1988-04-19 1990-05-29 American Cyanamid Company Unit dosage form
NO176278C (no) * 1988-08-24 1995-03-08 Allied Colloids Ltd Fremgangsmåte for fremstilling av en partikkelformig blanding av aktiv bestanddel i et polymert materiale
US5026559A (en) * 1989-04-03 1991-06-25 Kinaform Technology, Inc. Sustained-release pharmaceutical preparation
US5019400A (en) * 1989-05-01 1991-05-28 Enzytech, Inc. Very low temperature casting of controlled release microspheres
WO1990013285A1 (en) * 1989-05-01 1990-11-15 Enzytech, Inc. Process for producing small particles of biologically active molecules
FR2651680B1 (fr) * 1989-09-14 1991-12-27 Medgenix Group Sa Nouveau procede de preparation de microparticules lipidiques.
US5250283A (en) * 1990-03-28 1993-10-05 Molecular Biosystems, Inc. Organic contrast agent analog and method of making same
AU636743B2 (en) * 1990-04-17 1993-05-06 Isp Investment Inc. Preparation of discrete microdroplets of an oil in water stabilized by in situ polymerization of a water-soluble vinyl monomer
US5059699A (en) * 1990-08-28 1991-10-22 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble derivatives of taxol
US5110606A (en) * 1990-11-13 1992-05-05 Affinity Biotech, Inc. Non-aqueous microemulsions for drug delivery
AU642066B2 (en) * 1991-01-25 1993-10-07 Nanosystems L.L.C. X-ray contrast compositions useful in medical imaging
GB9106686D0 (en) * 1991-03-28 1991-05-15 Hafslund Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
US5362478A (en) * 1993-03-26 1994-11-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Magnetic resonance imaging with fluorocarbons encapsulated in a cross-linked polymeric shell
US6096331A (en) * 1993-02-22 2000-08-01 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions useful for administration of chemotherapeutic agents
EP0693924B2 (en) * 1993-02-22 2008-04-09 Abraxis BioScience, Inc. Methods for (in vivo) delivery of biologics and compositions useful therefor
US5439686A (en) * 1993-02-22 1995-08-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for in vivo delivery of substantially water insoluble pharmacologically active agents and compositions useful therefor
US5916596A (en) * 1993-02-22 1999-06-29 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
US5665382A (en) * 1993-02-22 1997-09-09 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of pharmaceutically active agents for in vivo delivery

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT106738A (pt) * 2013-01-09 2014-07-09 Hovione Farmaciencia Sa Secagem dinâmica de suspensões para o controlo do fenómeno de degradação difusional de ostwald (ostwald ripening)

Also Published As

Publication number Publication date
ES2219646T3 (es) 2004-12-01
DE69433723T2 (de) 2005-02-24
US5635207A (en) 1997-06-03
US5498421A (en) 1996-03-12
US20090048331A1 (en) 2009-02-19
DE69433723T3 (de) 2008-10-30
EP0693924A4 (en) 1997-08-06
AU6249094A (en) 1994-09-14
BR9405798A (pt) 1995-12-12
CN1245156C (zh) 2006-03-15
CN1118136A (zh) 1996-03-06
DK0693924T4 (da) 2008-08-04
ATE264671T1 (de) 2004-05-15
DE69433723D1 (de) 2004-05-27
JP3746293B2 (ja) 2006-02-15
DK0693924T3 (da) 2004-08-09
EP0693924B2 (en) 2008-04-09
AU673057B2 (en) 1996-10-24
EP0693924A1 (en) 1996-01-31
WO1994018954A1 (en) 1994-09-01
CA2155947A1 (en) 1994-09-01
EP0693924B1 (en) 2004-04-21
NO953278D0 (no) 1995-08-21
ES2219646T5 (es) 2008-11-01
NO953278L (no) 1995-10-13
US5639473A (en) 1997-06-17
PT693924E (pt) 2004-09-30
JPH08507075A (ja) 1996-07-30
HK1097449A1 (en) 2007-06-29
NZ262679A (en) 1997-08-22
CA2155947C (en) 2007-08-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5639473A (en) Methods for the preparation of nucleic acids for in vivo delivery
US5665382A (en) Methods for the preparation of pharmaceutically active agents for in vivo delivery
US5650156A (en) Methods for in vivo delivery of nutriceuticals and compositions useful therefor
US5665383A (en) Methods for the preparation of immunostimulating agents for in vivo delivery
CN1839806B (zh) 用于体内传送生物制品的方法及用于该方法的组合物
KR100904931B1 (ko) 나노 입자 및 그의 제조 방법
Krafft et al. Therapeutic oxygen delivery by perfluorocarbon-based colloids
US6096331A (en) Methods and compositions useful for administration of chemotherapeutic agents
Wrobeln et al. Albumin-derived perfluorocarbon-based artificial oxygen carriers: A physico-chemical characterization and first in vivo evaluation of biocompatibility
JP2014518862A (ja) 薬物送達用ポリマーナノ粒子
Shi et al. Hemoglobin conjugated micelles based on triblock biodegradable polymers as artificial oxygen carriers
US20060257326A1 (en) Methods and formulations for delivery of pharmacologically active agents
US20030133955A1 (en) Methods and compositions useful for administration of chemotherapeutic agents
Kale et al. Albumin based iohexol nanoparticles for computed tomography: an in vivo study
US8945611B2 (en) Artificial oxygen carriers and use thereof
KR101180181B1 (ko) 나노 입자 및 그의 제조 방법
Zhang et al. Multifunctional Polymeric Nanocarriers for Targeted Brain Delivery
LEVINE et al. Perfluorochemical emulsions: potential clinical uses and new developments
CN115350288A (zh) 聚合物囊泡稳定的药物-碘油乳液及其制备方法与应用
CN116173233A (zh) Pd-1靶向负载姜黄素的纳米制剂、制备及在肾脏疾病的应用
KR20050020988A (ko) 스텔스 지질 나노캡슐, 이의 제조 방법, 및 유효성분(들)을 위한 담체로서 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired