NL8900111A

NL8900111A - Cefalosporinezouten en injecteerbare composities.

Info

Publication number: NL8900111A
Application number: NL8900111A
Authority: NL
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1988-01-19
Filing date: 1989-01-18
Publication date: 1989-08-16
Also published as: SE505258C2; GB8901073D0; HUT50347A; OA09227A; DK20789A; LU87432A1; FI86854C; PT89474B; CY1663A; JPH0725768B2; NZ227605A; EG18749A; SK24389A3; ATA8589A; GR1001218B; AU2862389A; CZ24389A3; US4910301A; DK20789D0; IT8947539A0

Description

4- VO 1356

Cefalosporinezouten en injecteerbare composities.

De uitvinding heeft betrekking op temperatuur-stabiele half-synthetische cefalosporinezouten, waarvan de bereiding niet in de literatuur is beschreven, alsmede op de bereiding van zulke zouten en op mengsels, die deze 5 zouten bevatten.

Het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899 beschrijft 7-[o-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoximinoaceetamido] -3-C(l-methyl-l-pyrrolidinio)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat in de zwitterion-vorm en vermeldt overeenkomstige zuuradditie-10 -outen (die in de zwitterion-vorm in injecteerbare composities aanwezig zijn), waarbij wordt vermeld dat de zwitterion-vorm een bredere spectrumactiviteit bezit dan ceftazidime en cefotaxime.

De bedoelde cefalosporinen zijn echter slechts ge-15 durende enige uren stabiel als injecteerbare composities, terwijl de zwitterion-vorm zelfs als droog poeder bij kamertemperatuur instabiel is en reeds bij opslag gedurende êén week bij verhoogde temperatuur (b.v. 45°C en hoger) 30% of meer van zijn activiteit verliest en daarom speciaal ge-20 isoleerde verpakking en/of koeling vereist, zodat het zich wat verpakking en opslag betreft in het nadeel bevindt ten opzichte van ceftazidime en cefotaxime.

Hoewel in het genoemde octrooischrift melding wordt gemaakt van zuuradditiezouten, wordt niet beschreven hoe 25 deze kunnen worden bereid en evenmin wordt vermeld of zulke zouten in de vorm van een droog poeder een goede stabiliteit bezitten, en zo ja, welke. Kessler e.a., "Comparison of a New Cephalosporin, BMY 28142, with Other Broad-Spectrum P-Lactam Antibiotics", Antimicrobial Agents and Chëmo-30 therapy, 2T_, nr. 2 (februari 1985) 207-216 noemen het sul-faatzout, maar vermelden niet hoe dit moet worden bereid of dat dit zout stabiel is bij kamertemperatuur en in de vorm van een droog poeder een goede stabiliteit bij verhoogde temperatuur bezit.

890011 17- ff -2-

Gevonden werd dat bepaalde kristallijne zuuradditie-zouten van 7- [a-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyimino-aceetamido]-3-[(1-methyl-l-pyrrolidinio)methyl] -3-cefem-4-carboxylaat in droge poedervorm een uitstekende stabili-5 teit bij kamertemperatuur en in vergelijking met de zwitter-ion-vorm een betere stabiliteit bij verhoogde temperatuur bezitten. Onder "droge poedervorm" wordt hier verstaan een vocht-• gehalte van minder dan 5 gew.%, bepaald door meting van het gewichtsverlies bij droging onder atmosferische druk en bij 10 een temperatuur van minder dan 70°C.

Deze zuuradditiezouten zijn de kristallijne zouten van 7— Ca—(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoaceetamidol- 3- [ (1-methyl-l-pyrrolidinio)methyl] -3-cefem-4-carboxylaat, gekozen uit de zwavelzuur-, di-salpeterzuur-, mono-zout-15 zuur- en di-zoutzuuradditiezouten en orthofosforzuuradditie-zouten (1,5-2 mol orthofosforzuur per mol zout, bijvoorbeeld een traject vanaf de sesqui- tot de di-orthofosforzuurzou-ten) of solvaten daarvan. Onder "kristallijn" wordt hier verstaan tenminste enige kenmerkende rangschikking van mole-20 culen. Terwijl de zwavelzuur-, di-salpeterzuur-, di-zout-zuur- en orthof os for zuuradditiezouten in duidelijk' kristallijne vorm worden bereid (zoals blijkt uit de dubbele breking onder een polarisatiemicroscoop) met een nauwkeurige molecuulrangschikking, werden de mono-zoutzuuradditiezouten 25 bereid met slechts enige regelmaat in de rangschikking van de moleculen (zoals blijkt uit de povere dubbele breking onder de polarisatiemicroscoop) en niet een precies voorstelbare rangschikking, zodat dit zout "pover" kristallijn is. De term "kristallijn" omvat hier niet alleen de duide-30 lijk kristallijne zouten, maar ook het "pover" kristallijne mono-zoutzuuradditiezout.

Wanneer de onderhavige zuuradditiezouten worden gevormd tot waterige injecteerbare composities en op een pH van 6,0 zijn gebracht, leveren zij het zwitterion in oplos-35 sing. Het zwitterion heeft de op het formuleblad afgeheelde structuur.

8900111;

V

-3-

De bruikbaarheid van de zwitterion-vorm in een breed spectrum tegen diverse organismen en dus ook van de uit de onderhavige zouten bereide waterige composities wordt getoond door de gegevens in het Amerikaanse octrooischrift 5 4.406.899.

Waterige composities, die uit de onderhavige zuur-additiezouten zijn bereid door simpele toevoeging van steriel water, geven zure oplossingen, die bij intraveneuze toediening aan konijnen onaanvaardbare irritatie veroor-10 zaken en bij intramusculaire toediening aan konijnen onaanvaardbaar pijnlijk zijn. De zwavelzuur- en di-salpeter-zuuradditiezouten hebben geringe oplosbaarheden, die onvoldoende zijn voor typische injecteerbare composities.

Gevonden werd dat deze bezwaren kunnen worden opgeheven 15 door toepassing van de onderhavige zouten in een fysisch mengsel (d.w.z. een mengsel van vaste stoffen) met een farmaceutisch aanvaardbare niet-toxische organische of anorganische base in hoeveelheden ter verkrijging van een pH van ongeveer 3,5 tot ongeveer 7 bij verdunning met water 20 tot een zwitterion-activiteit van 1-400 mg/ml, normaliter 250 mg/ml (bepaald door "high performance liquid chromat-ography", als HPLC).

Het zout, dat voor toepassing als bereidingstussen-produkt de voorkeur heeft, is het kristallijne zwavelzuur^ · 25 additiezout. Het heeft de voorkeur omdat zijn geringe oplosbaarheid in water (25 mg/ml) het mogelijk maakt dat het bij kristallisatie in een hoge opbrengst en met goede zuiverheid uit een waterige medium kan worden gewonnen.

Het kristallijne zwavelzuuradditiezout kan worden 30 bereid door (a) vorming van een mengsel van (i) ten minste 1 molequivalent zwavelzuur en (ii) zwitterion in een zodanige hoeveelheid dat het in het mengsel aanwezig is in een concentratie van meer dan 25 mg/ml, (b) kristallisatie van het zwavelzuuradditiezout en (c) isolering van het 35 kristallijne zwavelzuuradditiezout.

89 00 1 11 ƒ -4-

De onderhavige kristallijne zouten (verder aan te duiden als de onderhavige zouten) hebben een uitstekende stabiliteit bij kamertemperatuur en vertonen een potentie-verlies (bepaald door HPLC) van minder dan 1% bij opslag 5 gedurende een maand bij kamertemperatuur. Deze zouten hebben tevens een uitstekende stabiliteit bij verhoogde temperaturen en vertonen een potentieverlies (bepaald door HPLC) van minder dan 15% bij opslag gedurende een maand bij 45-56°C.

10 Het zwavelzuuradditiezout heeft de voorkeur. Het vertoont een potentieverlies van minder dan 10% bij opslag gedurende een maand bij 45-56°C. Zeer belangrijk is dat het een geringe oplosbaarheid in water heeft, met name ongeveer 25 mg/ml, en daardoor met een minimaal verlies in water kan 15 worden gekristalliseerd.

Het onderhavige di-salpeterzuuradditiezout heeft eveneens een geringe oplosbaarheid in water, met name ongeveer 60 mg/ml, en geeft derhalve ook een gering verlies bij kristallisatie in water.

20 De mono-zoutzuur-, di-zoutzuur- en sesqui- of di- orthofosforzuuradditiezouten hebben oplosbaarheden in water van meer dan 200 mg/ml en worden daarom bij voorkeur gekristalliseerd in organische oplosmiddelen in plaats van water, teneinde goede opbrengsten te verkrijgen.

25 Zoals reeds vermeld wordt het onderhavige zwavelzuur additiezout bereid door (a) vorming van een mengsel van (i) ten minste 1 molequivalent zwavelzuur en (ii) zwitter-ion dat met het zout overeenkomt, in een zodanige hoeveelheid dat het in het mengsel aanwezig is in een concentra-30 tie van meer dan 25 mg/ml, (b) veroorzaking van kristallisatie en (c) isoleren van het kristallijne zwavelzuuradditiezout. Bij voorkeur wordt het zwitterion in trap (a) toegepast in een zodanige hoeveelheid, dat het in het mengsel aanwezig is in een concentratie van 100-200 mg/ml, 35 en wordt trap (b) uitgevoerd in een waterig medium, dat 8900111.

V

-5- vrij is van organisch oplosmiddel. Normaliter wordt niet meer dan 2 molequivalent zwavelzuur in trap (a) toegepast. Normaliter wordt zwitterion in trap (a) toegepast in een zodanige hoeveelheid, dat het in het mengsel aanwezig is 5 in een concentratie van minder dan 500 mg/ml.

Trap (a) wordt gemakkelijk uitgevoerd door toevoeging van vast zwitterion aan een zwavelzuuroplossing (b.v.

IN ^SQ^) onder snel roeren en vorming van een oplossing.

Ook kan trap (a) worden uitgevoerd door oplossen van vast 10 zwitterion in water en langzame toevoeging onder roeren van zwavelzuur onder vorming van een oplossing.

Trap (b) wordt uitgevoerd door veroorzaking van kristallisatie, bij voorkeur door enting, gevolgd door suspenderen, bij voorkeur gedurende 15 minuten tot 2 uur.

15 Bij voorkeur wordt de kristallisatie uitgevoerd in een waterig medium, dat vrij is van organisch oplosmiddel, in welk geval normaliter zuiverheden van meer dan 98% worden verkregen. Hoewel de aanwezigheid van organisch oplosmiddel zoals aceton, de kristallisatie bevordert en de op-20 brengst verhoogt door verlaging van de oplosbaarheid van het gevormde zwavelzuuradditiezout in het kristallisatie-medium, bevordert het ook de precipitatie van verontreinigingen, waardoor de zuiverheid wordt verminderd. Wanneer het zwitterion in trap (a) wordt toegepast in een zodanige 25 hoeveelheid dat het in het mengsel aanwezig is in een hoeveelheid minder dan 25 mg/ml moet organisch oplosmiddel, bij voorkeur aceton, in het kristallisatiemedium worden opgenomen ten behoeve van een redelijke isolering. Wanneer aceton wordt gebruikt, is dat op geschikte wijze in hoe-30 veelheden van 0,5-10 volume per volume waterig kristallisatiemedium.

Trap (c) wordt uitgevoerd door afscheiding van de kristallen uit het kristallisatiemedium, bij voorkeur door vacuümfiltratie, gevolgd door wassen, bijvoorbeeld met 35 aceton/water en dan met alleen aceton of met 0,1N zwavelzuur (b.v. 1/10 volume) en dan met aceton (b.v. 1/4 volume)^ 89 00111 .

.-6- f gevolgd door drogen, bijvoorbeeld door drogen in vacuo bij 30-50°C gedurende 4-20 uur.

Deze werkwijze voor de vorming van het zwavelzuur-additiezout leidt tot de zuivering van de zwitterion-vorm 5 wegens de beperkte oplosbaarheid van het zwavelzuuradditie-zout in vergelijking met de zwitterion-vorm en kan worden toegepast voor zuivering van het zwitterion zonder dat het als een vaste stof wordt geïsoleerd. Indien men nagenoeg zuiver zwitterion (vrije base) uit het gevormde zwavelzuur-10 additiezout wenst te verkrijgen, kan zulks worden uitgevoerd door oplossen van het zout in water, toevoeging van Ba(OH)2^81^0 in een hoeveelheid van 90-100% van de theorie bij een pH van minder dan 6,5 onder precipitatie van BaSO^, verwijdering van het BaSO^ door filtratie en winning van 15 het filtraat, dat het zwitterion in oplossing bevat, waarna het filtraat als oplossing kan worden gebruikt. Ook kan het vaste zwitterion (vrije base) worden geïsoleerd door lyofilisering van het filtraat of door toevoeging van aceton aan het filtraat onder precipitatie van amorf 20 zwitterion, gevolgd door winning van vast zwitterion door vacuümfiltratie, wassen van het vaste materiaal, bijvoorbeeld met aceton, en drogen in vacuo. Ook kan het zwavel-zuuradditiezout in de vrije base worden omgezet met behulp van ionen-uitwisselende harsen, bijvoorbeeld Dowex WGR 25 (een zwak basische anion-uitwisselende hars) en Dowex XU-40090.01 (een sterk zure kation-uitwisselende hars), met daaropvolgende lyofilisering.

Het onderhavige kristallijne di-salpeterzuuradditie-zout kan worden verkregen door menging van (i) ten minste 30 2 molequivalent salpeterzuur en (ii) zwitterion, dat met het zout overeenkomt, in een zodanige hoeveelheid dat het in het mengsel aanwezig is in een concentratie van meer dan 100 mg/ml, gevolgd door inleiding van de kristallisatie door enting of wrijving met een glasstaaf, verdunning 35 met 2-propanol en koeling. Het kristallijne di-salpeter-zuuradditiezout wordt gewonnen, bijvoorbeeld door filtra- 8900111.

V

Η -7- tie, wassen, bijvoorbeeld achtereenvolgens met 2-propanol-H20 (50% volume/volume), 2-propanol en ether, en drogen in vacuo bij 50°C gedurende 2 uur.

Het onderhavige mono-zoutzuuradditiezout wordt be-5 reid door oplossen van zwitterion in ongeveer 1 molequi-valent zoutzuur en veroorzaking van kristallisatie door toevoeging van aceton onder roeren en voortzetting van het •roeren, gevolgd door isolering van de kristallen, bijvoorbeeld door vacuümfiltratie, wassen met aceton en drogen 10 in vacuo. Ook kan het mono-zoutzuuradditiezout worden bereid uit het di-zoutzuuradditiezout door suspenderen van het di-zoutzuuradditiezout in methyleenchloride en toevoeging van 1 molequivalent triëthylamine, gevolgd door suspender ing onder vorming van het mono-zoutzuuradditiezout, 15 dat wordt geïsoleerd, bijvoorbeeld door vacuümfiltratie, wassen met methyleenchloride en drogen in vacuo.

Het onderhavige kristallijne di-zoutzuuradditiezout wordt bereid door oplossen van zwitterion in ten minste 2 molequivalenten zoutzuur, veroorzaken van kristallisatie 20 door toevoeging van aceton en isoleren van kristallen, bijvoorbeeld door vacuümfiltratie, wassen met aceton en drogen in vacuo.

Het onderhavige di-orthofosforzuuradditiezout wordt bereid door oplossen van het zwitterion in ten minste twee 25 molequivalent fosforzuur, veroorzaking van kristallisatie door toevoeging van aceton en isolering van kristallen, bijvoorbeeld door vacuümfiltratie, gevolgd door eerst wassen met aceton en vervolgens met ether en dan drogen in vacuo.

Het kristallijne sesqui-orthofosforzuuradditiezout wordt 30 op dezelfde wijze bereid, behalve dat ongeveer 1,5 mol equivalent fosforzuur wordt gebruikt en bij voorkeur methanol wordt toegepast ter bevordering van de kristallisatie.

De onderhavige zouten worden gevormd tot injecteer-bare composities door verdunning met steriel water en 35 bufferen tot een pH van 3,5-7 onder vorming van een injec-teerbare concentratie van 1-400 mg zwitterion per ml.

8900 1 1 1 .« ί· -8- «r

Geschikte buffermiddelen zijn bijvoorbeeld trinatrium-orthofosfaat, natriumbicarbonaat, natriumcitraat, N-methyl-glucamine, L(+) lysine en L(+) arginine. Voor intramuscu-laire of intraveneuze toediening aan een volwassen mens 5 is een totale dosis van 750-3000 mg per dag in verdeelde doses normaliter voldoende.

Het is niet gewenst dat de onderhavige zouten tot injecteerbare composities worden gevormd door eenvoudige toevoeging van steriel water, omdat de zwavelzuur- en di-10 salpeterzuuradditiezouten niet voldoende oplosbaar zijn voor de vorming van composities van normale concentratie voor toediening en omdat de onderhavige zouten in oplossing composities met een zeer lage pH (1,8-2,5) vormen, die bij injectie pijn veroorzaken. Zoals reeds vermeld werd 15 gevonden dat deze nadelen kunnen worden opgeheven door vorming van een fysisch, met name vast, mengsel van de onderhavige zouten met farmaceutisch aanvaardbare, normaliter vaste niet-'toxische organische of anorganische basen in zodanige hoeveelheden, dat een pH van 3,5-7, bij voorkeur 20 van 4-6 wordt verkregen bij verdunning van het mengsel met water tot een injecteerbare concentratie tussen 1-400 zwit-terion per ml, bijvoorbeeld tot een zwitterionactiviteit van 250 mg/ml, bepaald door HPLC.

De exacte hoeveelheden van de ingrediënten in het 25 fysische mengsel variëren van lading tot lading van het zout, daar de zuiverheid van het zout van lading tot lading varieert. De hoeveelheden van de bestanddelen worden voor een bepaalde lading vastgesteld door voortitratie met betrekking tot een monster ter verkrijging van een gekozen 30 pH binnen het genoemde traject.

Het fysische mengsel kan dank zij de stabiliteit van de onderhavige zouten zonder bezwaar in vaste vorm worden bewaard en vervoerd en wordt gemakkelijk in een injecteerbare compositie omgezet door eenvoudige toevoeging van 35 water, hetgeen bijvoorbeeld vlak voor het gebruik door een verpleegkundige of arts kan geschieden.

88 00111 .i -9-

Het fysische mengsel wordt verkregen door menging van het zout en de base tot een uniform mengsel/ bij voorbeeld met behulp van een standaardmenger in een droge atmosfeer en wordt vervolgens bij voorkeur uitgevuld in 5 een ampul of ander vat, alles onder aseptische omstandigheden .

Voorbeelden van geschikte basen voor gebruik in het mengsel zijn trinatriumorthofosfaat, natriumbicarbonaat, natriumcitraat, N-methylglycamine, L(+) lysine en L(+) ar-10 ginine. L(+) lysine en L(+) arginine hebben de voorkeur, daar mengsels die deze basen bevatten met water injecteer-bare composities opleveren, die bij injectie in dieren minder pijn veroorzaken dan composities, afgeleid van mengsels die andere basen bevatten. Met bijzondere voorkeur 15 wordt het L(+) arginine toegepast in een zodanige hoeveelheid, dat een pH van 3,5-6 wordt verkregen bij verdunning van het mengsel met water onder verschaffing van een compositie met een zwitterion-activiteit van 250 mg/ml (bepaald door HPLC).

20 De onderhavige zouten en de nagenoeg droge fysische mengsels, die deze zouten bevatten, kunnen zonder koeling of geïsoleerde verpakking worden bewaard zonder hun hoge potentie te verliezen.

In diverse van de hier beschreven preparaten wordt 25 het instabiele zwitterion als uitgangsmateriaal gebruikt.

De bereiding daarvan is beschreven in voorbeeld 1-3 van het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899. In dat octrooi-schrift wordt het zwitterion aangeduid als 7-C(Z)-2-methoxy-imino-2-(2-aminothiazol-4-yl)aceetamido-]-3-[(1-methyl-l-30 pyrrolidinium)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat.

De uitvinding wordt aan de hand van de volgende voorbeelden nader toegelicht.

Voorbeeld I

Bereiding van het zwavelzuuradditiezout 35 Aan 10 ml snel geroerde IN zwavelzuuroplossing (1,59 molequivalent) wordt 1,5 g zwitterion langzaam bij 89 00 1 11 .

it -10- 20-26°C toegevoegd. Men verkrijgt een oplossing. De kristallisatie wordt op gang gebracht door enting met kristallijn zwavelzuuradditiezout, waarna de kristallijne massa gedurende 0,5 uur wordt gesuspendeerd. Vervolgens worden 5 de kristallen afgescheiden door vacuümfiltratie, gewassen met 3 ml 50%’s aceton/water (volume/volume) en met twee porties van 5 ml aceton, en overnacht in vacuo gedroogd bij 40-50°C.

Een typische opbrengst is 1,3 g zwavelzuuradditie- 10 zout.

Analyse: Berekend voor C]_9H24N605S2.I^SO^: %C, 39,44; %H, 4,53; %N, 14,52; %S, 16,62; %H20, geen.

Gevonden: %C, 38,91; %H, 4,57; %N, 14,64; %S, 16,71; %H20, 1,42.

15 Voorbeeld II

Bereiding van het zwavelzuuradditiezout

In 5 ml water wordt 1,5 g zwitterion opgelost, waarna onder roeren 5 ml 1M H2SO^ langzaam aan de oplossing wordt toegevoegd. De kristallisatie wordt op gang gebracht 20 door enting met kristallijn zuuradditiezout, waarna de kristallijne massa gedurende 0,5 uur wordt gesuspendeerd. Daarna worden de kristallen afgescheiden door vacuümfiltratie, gewassen met 3 ml 50%'s aceton/water (volume/volume) en met twee porties van 5 ml aceton, en overnacht in vacuo 25 gedroogd bij 40-50°C.

De typische opbrengst is 1,3 g zwavelzuuradditiezout .

Voorbeeld III

Bereiding van het di-salpeterzuuradditiezout 30 In 2N salpeterzuur (0,5 ml) wordt 300 mg zwitterion opgelost. De oplossing wordt gewreven met een glazen staaf, verdund met 2-propanol (0,4 ml) en gekoeld. De kristallijne titelverbinding wordt verzameld en wordt achtereenvolgens gewassen met 0,4 ml 2-propanol/H20 (1:1), 2-propanol en dan 35 ether, waarbij 127 mg van het dinitraatzout wordt verkregen.

8900111.

1.

-11-

Analyse; Berekend voor Cj^^^NgOt-Sj. 2ϋΝ0^' %C, 37,62? %H, 4,32; %N 18,47? %S, 10,57.

Gevonden: %C, 36,92? %H, 4,10? %N, 18,08, %S, 10,67 (I^O gehalte 0,90%) .

5 Voorbeeld IV

Bereiding van het mono-zoutzuuradditiezout

In 2,08 ml IN HC1 (1 molequivalent) wordt bij 20-25°C 1 g zwitterion opgelost. Onder snel roeren wordt in de loop van 15 minuten 30 ml aceton toegevoegd, waarbij 10 zich kristallen vormen. Het roeren wordt 1 uur voortgezet.

De kristallen worden geïsoleerd door vacuümfiltratie, gewassen met 10 ml aceton en gedurende 2 uur in vacuo gedroogd bij 50°C.

Een typische opbrengst is 0,9 g kristallijn mono-15 hydrochloridezout.

Analyse: Berekend voor ^(^24^^5^2.HC1: %C, 41,37; %H, 4,75; %N, 15,2? %S, 11,63? %C1, 12,86.

Gevonden: %C, 39,32? %H, 4,88? %N, 13,95; %S, 11,28; %C1, 12,44; %H20, 4,5.

20 (Gecorrigeerd voor ^0: %C, 41,17; %N, 14,61? %S, 11,82; %C1, 13,03).

Voorbeeld V

Bereiding van het di-zoutzuuradditiezout en bereiding van het mono-zoutzuuradditiezout daaruit 25 In 2 ml IN HCl wordt 350 mg zwitterion opgelost.

Aan de verkregen oplossing wordt onder snel roeren in de loop van 5 minuten 10 ml aceton toegevoegd, waarbij zich kristallen vormen. Het roeren wordt nog 5 minuten voortgezet. Daarna wordt nog 10 ml aceton toegevoegd en wordt 30 het roeren 0,5 uur voortgezet. De kristallen worden verwijderd door vacuümfiltratie, gewassen met twee porties van 5 ml aceton en gedurende 24 uur in vacuo gedroogd bij 40-45°C.

Een typische opbrengst is 300 mg kristallijn di-35 zoutzuuradditiezout.

8900111.

-12- i

Analyse: Berekend voor C-^H24NgO,-S2.2HC1: %C, 41,38; %H, 4,75; %N, 15,2; %S, 11,62; %C1, 12,8,

Gevonden: %C, 40,78; %H, 4,98; %N, 14,7; %S, 11,25; %H20, 1,25.

5 (Gecorrigeerd voor ^0: %C, 41,1; %N, 14,88; %S, 11,39; %C1, 11,94).

In 20 ml methyleenchloride wordt 1 g van het op de beschreven wijze bereide di-zoutzuuradditiezout bij 20-25°C gesuspendeerd in een gesloten kolf, waaraan in de 10 loop van 15 minuten 0,28 ml triëthylamine wordt toegevoegd. Daarna wordt de kristallijne massa 5 uur gesuspendeerd.

De verkregen mono-zoutzuuradditiezouten worden door vacuüm-filtratie geïsoleerd, gewassen met twee porties van 5 ml methyleenchloride en gedurende 2 uur in vacuo gedroogd bij 15 50°C. Een typische opbrengst is 800 mg.

Voorbeeld VI

Bereiding van het di-orthofosforzuuradditiezout

In 3,4 ml van een H3PC>4 oplossing, die 144 mg H^PC^ per ml bevat (2,2 molequivalent) wordt bij 15°C 1 g zwit-20 terion opgelost. De verkregen oplossing wordt geklaard door filtratie. Aan de geklaarde oplossing wordt onder snel roeren 12 ml aceton in de loop van 10 minuten toegevoegd, waarbij zich kristallen vormen. Het roeren wordt nog 10 minuten voortgezet. Vervolgens wordt 30 ml aceton in 25 de loop van 10 minuten toegevoegd en wordt het roeren nog 15 minuten voortgezet. De kristallen worden verzameld door vacuümfiltratie, gewassen met twee porties van 5 ml aceton en twee porties van 5 ml ether en in hoog vacuüm gedurende 16 uur gedroogd.

30 Een typische opbrengst voor dit type bereiding was 1,1 g kristallijn di-orthofosforzuuradditiezout.

Analyse; Berekend voor ci9H24N6°5S2'2H3PC>4: %C, 33,72; %H, 4,47; %N, 12,42.

Gevonden: %C, 33,43; %H, 4,65; %N, 12,02; 35 %H20, 1,82.

(Gecorrigeerd voor H20: %C, 34,0; %N, 12,2).

8900 1 1 1 ,' Η -13-

Het sesqui-orthofosforzuuradditiezout wordt op analoge wijze bereid, behalve dat bij voorkeur methanol wordt gebruikt in plaats van alle andere oplosmiddelen.

Dit is een gewenst zout voor farmaceutische doseervormen.

5 Voorbeeld VII

Stabiliteiten bij verhoogde temperaturen

De stabiliteiten bij verhoogde temperatuur werden bepaald door opslag van de preparaten in droge houders bij onderstaand vermelde temperaturen en perioden, en potentie-1Ö verliezen of -winsten werden door HPLC bepaald. Een %-potentiewinst wordt getoond door een plus-teken voor een getal. Een potentieverlies van minder dan 10% over een periode van 2-4 weken verblijf bij 45-56°C wijst gewoonlijk op een potentieverlies van minder dan 10% over een 15 periode van 2-3 jaar bij kamertemperatuur.

8900 1 1 1 .

-14- o 2 ~ - S i ' ' 2 a w u o o rtj

o Q

o — vo H +

+J (N

'sf I O I I * I

cn -P

w

H O

PI Ph H

> Λ 2 cn ^ o di> U Μ CN I + - I I - O g CS m vo ra 10 &

CO

+ +) r·'- r~ iH r- O * - o “ in -P cn co cn in (O 'S'

ID I «· » *· I I

rH O VO

iH

00

•N* rH in VD O "531 O

Γ~ + ^ *> - *·

._. O VO rH

U 2

o H

m 2 *ï< M _ ;g ·=3< m o ·—' CN rH CO *· - I " in co cn cn in + +) CO 00 t—i r^· o «· o o cn -P oo -¾1 _____CN_______

\ -P

\ +» P

\ 3 -P 0

\ C -P 0 P N

\ O P N O

\ -PO -P N CN

\ p N CN 2 —.

\ 0) —. 0 CN

\ 4J «s* rn n —. O

\ +J o O H' CU

\ -π cn a η o cn \ £ cn a ο κ μ Ν. ν κ —' cd 8900 1 1 1 .

« -15-

Voorbeeld VIII

Beproeving van fysische mengsels

Er werden fysische mengsels bereid van kristallijn zwavelzuuradditiezout met (a) trinatriumorthofosfaat, 5 (b) natriumbicarbonaat, (c) L(+) lysine, en (d) L(+) argi nine. De basen werden toegevoegd in zodanige hoeveelheden, dat bij verdunning van het mengsel met water tot een zwitterion-activiteit van 250 mg/ml (bepaald door HPLC de volgende pH's werden verkregen: trinatriumorthofosfaat 10 (een pH van 6,0), natriumbicarbonaat (een pH van 6,0), L(+) lysine (een pH van 6,0), en L(+) arginine (een pH van 6,0). Injecteerbare composities werden bereid door reconstitute met steriel water tot een zwitterion-activiteit van 250 mg/ml, bepaald door HPLC. Er waren geen oplosbaar-15 heidsproblemen. De injecties (100 mg/kg) werden intramus-culair uitgevoerd op konijnen met pijn binnen aanvaardbare drempels. De minste pijn werd ondervonden met de arginine-bevattende compositie.

Analoge resultaten van goede oplosbaarheid en aan-20 vaardbare pijn bij intramusculaire injectie worden verkregen bij gebruik van de andere onderhavige zouten in fysische mengsels met de genoemde basen.

Fig. 1 toont het infrarood-absorptiespectrum van het kristallijne sulfaatzout, bereid op de in voorbeeld I 25 of II beschreven wijze, in de kristalvorm gekorreld met kalitimbromide.

Het röntgenpoederdiffractiepatroon van het kristal-lijne sulfaatzout van 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoaceetamido] -3-[(l-methyl-l-pyrrolidinio)methyl>3-30 cefem-4-carboxylaat, bereid op de in voorbeeld I of II beschreven wijze, werd bepaald met een Rigaku Powder Diffractometer met een röntgenbuis met koperen trefplaat, een nikkelfilter en met het monster in een glazen schaal.

De aftastsnelheid van 2°/min over het traject van 5°-40° 35 waarbij mechanisch een grafiek werd opgetekend om de hoeken van maximumdiffractie te tonen. Hieruit werden de (d) af- 8900 1 1 1 .

-16- 4 standen en relatieve intensiteiten (I/l ) berekend. Zij zijn onderstaand vermeld.

d afstand (A) I/I (%) 9,20 100 5 6,80 50 5.50 28 5,09 22 4.50 38 4,41 44 10 4,19 63 3,78 38 3,64 44 3,39 25 3,31 31 15 3,15 47

Voorbeeld IX

Bereiding van het sesquifosfaatzout

Het zwitterion, 0,70 g, wordt onder snel roeren opgelost in 2,2-2,4 ml 85% fosforzuur (2,1-2,2 molequivalent), 20 dat 1:10 (volume/volume) met water is verdund. De oplossing wordt geklaard door filtratie door een membraanfilter met porie-openingen van 0,22-0,45 micrometer. In de loop van 30-60 minuten wordt onder snel roeren 5-7 vol.dln (15-20 ml) methanol aan het filtraat toegevoegd. Tijdens deze behande-25 ling vormen zich kristallen en het snelle roeren wordt 1,5-2 uur voortgezet. Het kristallijne produkt wordt gewonnen door vacuümfiltratie. Het produkt wordt op het filter gewassen, eerst met 6-8 ml 1:1 (volume/volume) methanol : aceton, waarbij wordt gezorgd dat een dichtgepakte filter-30 koek wordt gehandhaafd, en vervolgens met aceton. Het produkt wordt gedurende 2 uur in vacuo bij 50°C gedroogd; de typische opbrengst is 0,7-0,75 g.

8900111.

-17-

Interpretatie IR-spectrum (zie fig. 2) (IR, Kbr korrel)

Piekpositie (cm"1) Functionele groep 2800-3400 NH, , carboxyl OH, 5 1780 a-lactam C=0 1680 carboxyl C=0 1660 amide C=0

1630 C=N, C=C

1550 amide OH

10 980,1040 P04=

Gedrag bij verhitting

De differentiële calorimetrische aftastregistratie toont een exotherm effect bij 171,8°C.

Röntgendiffractiepatroon 15 Het röntgendiffractiepatroon van het sesquifosfaat- zout werd op dezelfde wijze als hierboven beschreven met betrekking tot het sulfaatzout gemeten met een Rigaku Powder Diffractometer met de volgende resultaten.

Sesguifosfaatdiffractiepatroon 20 _d_ Ul0 lil 11,04 32 9.2 16 7,89 24 7.02 42 25 6,7 32 5.5 26 4,64 100 4,456 53 4.3 58 30 3,88 26 3,75 89 3,56 21 3,31 26 3.05 16 8300111.

ί -18- NMR-interpretatie ('"Η 90 MHz NMR, D20 oplossing)

Chemische Shift (dpm 6 vs. TSP) Beschrijving Integraal Toekenning 5 2,0-2,4 Multiplet 4 14CH2, 14'CH2 3,04 Singlet 3 12CH3 3,3-3,6 Multiplet 5 2CH, 13CH,,, 13'CH2 δ

10 3,94 Doublet 1 2CH

4.12 Singlet 3 20CH3

4.12 Doublet 1 11CH

4,8 Doublet 1 11CH

5,42 Doublet 1 6CH

15 5,88 Doublet 1 7CH

7,21 Singlet 1 18CH

Stabiliteit

Tijd-temperatuur % verlies 1 dag; 100°C 10,9 20 3 dagen; 70°C 0 7 dagen; 70°C 1,9 1 week; 56°C 1,0 2 weken; 56°C 1,4 4 weken; 56°C 0 25 1 weken; 45°C 0 2 weken; 45°C 1,4 4 weken; 45°C 0,7 8 weken; 45°C 1,6 1 maand; 37°C 2,5 t 890 0 1 1 1 .

-19-

Elementairanalyse (qew.%)

Gevonden Droge basis Theorie (sesquifosfaat) C 35,44 36,3 36,4 H 4,66 4,41 4,7 5 N 12,88 13,2 13,4 H20 2,29* - raonohydraat = 2,8% H20 H3P04 23,06 23,6 23,6

* Volgens Karl Fischer Voorbeeld X

10 Kristallisatie van het fosfaatzout met methanol

Herkristalliseerd sulfaatzout, bereid op de in voorbeeld I of II beschreven wijze, 25 g, wordt opgelost in 400 ml l,l,2-trichloor-2,2,l-trifluorethaan (Freon TF ) , waarna de oplossing wordt behandeld met 50 ml Amberlite LA-2 15 (een in water onoplosbaar, in organisch oplosmiddel oplosbaar alifatisch secundair amine, waarvan de zouten met mineraal zuur eveneens in organisch oplosmiddel oplosbaar zijn) en 50 ml water. Na krachtig roeren van het mengsel gedurende 70 minuten worden de fasen gescheiden en wordt de 20 waterige fase, die het zwitterion bevat, gewonnen na behandeling daarvan met een verdere hoeveelheid van 40 ml Amberlite LA-2, extractie met een verdere hoeveelheid van 310 ml Freon TF, behandeling met ontkleuringskool en filtratie.

25 De helft van de verkregen waterige oplossing van het zwitterion, volume 33,5 ml, wordt in een geroerd vat gebracht en behandeld met 1,65 ml 85%'s fosforzuur. Een verdere hoeveelheid van 1,65 ml 85%'s fosforzuur wordt gemengd met 90 ml methanol en langzaam in de loop van 30 minuten 30 bij 25°C toegevoegd aan de waterige zwitterion-oplossing.

Er vormt zich een suspensie van het gewenste sesquifosfaat-zout en het roeren wordt gedurende 1 uur bij 25°C voortgezet. Het produkt wordt dan door afzuigfiltratie verzameld, gewassen met 30 ml absolute ethanol en vervolgens met 15 ml 35 methyleenchloride, en gedurende 15 uur bij 45°C in vacuo 8900 1 1 1 .’ i -20- gedroogd. Opbrengst 9,80 g (72% op biotestbasis) van 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoaceetamido]--3-[(l-methyl-l-pyrrolidinio)methyl-3-cefem-4-carboxylaat-fosfaatzout, bevattende 1,5 molequivalent H3PC>4 en gekarak-5 teriseerd door de differentiële calorimeteraftastregistra-tie, infraroodabsorptiespectrum en röntgendiffractiepatroon.

Voorbeeld XI

Bereiding van het dihydrochloridemonohydraat uit het sulfaat - amineproces 10 (a) Omzetting van sulfaat in zwitterion.

Het op de in voorbeeld I beschreven wijze bereide sulfaatzout, 300 g (0,581 mol) wordt toegevoegd aan een geroerd mengsel van Amberlite LA-2 (600,5 ml, 1,332 mol), Freon TF (4,5 L) en Water for Injection USP (900 ml), 15 waarna het mengsel een 1 uur bij 23°C wordt geroerd.

Na fasenscheiding wordt de organische laag gewassen met water (225 ml) en worden de samengevoegde waterige fasen 1 uur bij 23°C geroerd met een oplossing van Amberlite LA-2 (421 ml, 0,933 mol) in Freon TF (3,6 1). De waterige 20 fase wordt geëxtraheerd met Freon TF (2 x 375 ml) en het resterende oplosmiddel wordt door vacuüm verwijderd.

De oplossing wordt behandeld met ontkleuringskool (30 g) en diatomeeënfiltreerhulpmiddel (24 g) , waarna het vaste materiaal door vacuümfiltratie wordt verwijderd en met water 25 (420 ml) wordt gewassen.

(b) Omzetting van het zwitterion in het dihydrochloridemonohydraat .

Het. filtraat van trap (a) wordt afgekoeld tot 5°C.

Aan het filtraat wordt waterig zoutzuur (6 N; 302,4 ml, 30 1,82 mol) toegevoegd, gevolgd door aceton (3,61 1) onder handhaving van een temperatuur van 5-9°C. Nadat de kristallisatie is begonnen (diverse middelen voor inleiding van de kristallisatie kunnen wenselijk zijn, zoals enting) wordt het mengsel behandeld met waterig zoutzuur (6N; 216 ml), 35 1,3 mol). Het mengsel wordt dan gedurende 10 minuten ge roerd en behandeld met een verdere hoeveelheid aceton 88 0 0 1 1 1 .

-21- (9,02 1) door toevoeging in de loop van 1 uur bij 5-8°C.

De suspensie wordt 1 uur bij 0-5°C geroerd, waarna het produkt wordt verzameld door filtratie, gewassen met aceton (2 x 750 ml) en in vacuo bij 45°C tot constant gewicht ge-5 droogd (20 uur). Het dihydrochloridemonohydraat wordt verkregen als een witte kristallijne vaste stof (259,7 g, 88,6% activiteit) . De NMR- en IR-spectra bevestigden de toegekende structuur; de door HPLC-analyse gemeten zuiverheid bedroeg 100%.

10 Analyse: Berekend voor *^0: C, 39,93; H, 4,94; N, 14,70; S, 11,22; Cl, 12,41; H20, 3,15;

Gevonden: C, 39,70; H, 4,80; N, 14,64; S, 11,12; Cl, 12,44; H20, 3,34.

RSntqendiffractiepatroon 15 Het röntgendiffractiepatroon van het op de in voor beeld XI beschreven wijze bereide kristallijne dihydrochloridemonohydraat werd gemeten met een Rigaku Powder Diffractometer met een röntgenbuis met koperen trefplaat, een nikkelfilter en het monster in een glazen schaal. De 20 aftastsnelheid bedroeg 2°C/min over het traject van 5-40° en een registratie werd mechanisch gemaakt voor het tonen van de hoeken van maximumdiffractie. Hieruit werden de (d) afstanden en relatieve intensiteiten (I/IQ) berekend, welke onderstaand zijn vermeld.

25 8900 1 1 1 .

-22- Röntgenpoederdiffractie dihydrochloridexnonohydraat d i/ig Hl 10,21 100 5 8,62 13 6,78 23 6,28 9 5,84 9 5,12 4 10 5,01 9 4.95 5 4,74 38 4.62 4 4.50 4 15 4,44 4 4,26 32 4.10 4 3.95 33 3,90 28 20 3,78 39 3,64 5 3,59 13 3,48 10 3,39 15 25 3,32 10 3,21 10 3.11 10 3,04 5 2,99 13 30 2,93 15 2,76 5 2.63 10 2.51 10 2,43 5 35 2,38 7 6900 1 1 1.

-23-

Voorbeeld XII

Bereiding van dihydrochloridemonohydraat uit sulfaat -harsproces (a) Omzetting van sulfaat in zwitterion.

5 Het op de in voorbeeld 1 beschreven wijze bereide sulfaatzout (300 g, 0,518 mol) wordt toegevoegd aan een mechanisch geroerde suspensie van Dowex WGR-hars (568,6 g, 1,762 mol) in Water for Injection, USP (690 ml), waarna het mengsel 1 uur bij 20°C wordt geroerd. De hars is een 10 zwak basisch epoxyaminepolymeer. Na de mengperiode wordt de hars verwijderd door vacuümfiltratie en wassen met water (2 x 288 ml). Het filtraat wordt behandeld met ont-kleuringskool (15 g) en diatomeeënfiltreerhulpmiddel (7,5 g) , waarna het vaste materiaal door filtratie wordt 15 verwijderd en wordt gewassen met water (2 x 144 ml).

(b) Omzetting van het zwitterion in het dihydrochloridemonohydraat .

Het filtraat van trap (a) wordt omgezet op dezelfde wijze als beschreven in voorbeeld XI (b). In plaats van 20 Dowex WGR in voorbeeld XII (a) kunnen andere zwakbasische, in water onoplosbare deeltjesvormige ionenuitwisselende harsen worden gebruikt. In dit voorbeeld is dat Bio-Rad AG3-X4A, een zwak basische polystyreendivinylbenzeenhars. Bij de procedures van voorbeeld XI en XII wordt 25 routinematig monohydraat verkregen met een watergehalte van 2,46-3,70% met een gemiddelde waarde van 3,31%. De uit de stoechiometrische formule berekende waarde is 3,15%. Drogen bij 57°C in een desiccator bij verlaagde druk (0,001 mmHg) boven P2°5 gedurende 5 dagen of bij ver-30 laagde druk (10 mmHg) bij 45°C gedurende 2 dagen resulteert in geen gewichtsverlies. De opslagstabiliteit bij 56eC gedurende 3 weken gaf een potentieverlies van 0,6%, hetgeen een aanmerkelijke verbetering was ten opzichte van het anhydraat (1,25% ^0), beschreven in voorbeeld V 35 (7,2% verlies in 4 weken bij 56°C).

8900111.

-24-

Het dihydrochloridemonohydraat van voorbeelden XI en XII werd verder gekarakteriseerd door thermografiemetri-sche analyse (TGA) en door differentiële scanning-calori-metrie (DSC). De DSC-curve wordt gekarakteriseerd door 5 een beginpiektemperatuur (exotherm) van 196,8°C. De TGA-curve wordt gekarakteriseerd door een gewichtsverlies (hydraatwater) van 3,17% over het temperatuurtraject van 40,5-153,3°C. Het theoretische gewichtverlies bedraagt 3,15%. Dit gedrag is typisch voor hydraten van bekende 10 cefalosporine-antibiotica.

Het dihydraat van 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoaceetamido]-3-[(1-methyl-l-pyrrolidinio)-methyl]-3-cefem-4-carboxylaatdihydrochloride wordt bereid door hydratatie van het in de voorbeelden XI en XII be-15 schreven monohydraat door blootstelling aan lucht met een relatieve vochtigheid van meer dan 70%. Hoewel het tweede molecuul van het hydraatwater niet zo stevig in het dihydraat wordt vastgehouden als het geval is met het watermolecuul in het monohydraat, wordt toch uniform een con-20 sistente compositie verkregen, zoals blijkt uit elementair-analyse, waarbij het dihydraat verder van het monohydraat kan worden onderscheiden door DSC, TGA en het röntgen-poederdiffractiepatroon.

Voorbeeld XIII

25 Bereiding van het dihydrochloridedihydraat

Het op de in voorbeeld XII beschreven wijze bereide dihydrochloridemonohydraat wordt 2-7 dagen in een ruimte met een relatieve vochtigheid van 80-93% en een temperatuur van 25-37°C gehouden. Bij elke proef werd de vorming 30 van het dihydrochloridedihydraat door analyse vastgesteld. Vier monsters toonden de volgende analytische resultaten.

8900111.

% -25-

Analytische resultaten voor dihydrochloridedihydraat

Theoretische _Monster _ waarde 8-1B 12-2 28-1 28-2 C 38,71 38,76 38,64 38,74 38,53 5 H 5,13 5,03 4,96 4,79 4,77 N 14,26 14,22 14,19 14,24 14,18 S 10,88 10,66 10,22

Cl 12,03 11,90 11,84 12,12 11,90 H20* % 6,11 6,16 6,99 6,34 6,11 10 DSC endotherm °C 81,6 84,6 85,6 84,6 exotherm °C 187,8 188,5 187,8 185,7 TGA (% gewichtsverlies) 25-68 °C 2,1 2,3 2,9 3,2 68-180°C 3,4 3,5 3,1 3,1 15 Totaal 5,5 5,8 6,0 6,3 * Volgens Karl Fisher

Het in voorbeeld XIII beschreven dihydrochloride-dihydraat kan gemakkelijk worden gedroogd tot hetzelfde dihydrochloridemonohydraat als beschreven in de voorbeelden 20 XI en XII. Dit kan tot stand worden gebracht door drogen in vacuo of over een droogmiddel, zoals De °Ps^a9~ stabiliteit bij verhoogde temperaturen, gemeten aan de chemische en biologische potentie van het monster, was voor het monohydraat en het dihydraat ongeveer gelijk, 25 maar bij het dihydraat werd de vorming van sporen hoeveelheden van onoplosbare deeltjes waargenomen. Het monohydraat, dat tot ongeveer 1 gew.% bijkomend water bevat, is dan ook de voorkeursvorm (totaal watergehalte ongeveer 2,5-4,1%). Dergelijk materiaal vertoont bij opslag gedu-30 rende 3 weken bij 56°C ten minste 96% behoud van potentie.

8900 1 ) 1.*

Claims

1. Temperatuur-stabiele kristallijne zouten van 7- [a-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoaceetamido]-

2. Kristallijne zouten volgens conclusie 1, gekozen uit de zwavelzuur-, mono-zoutzuur-, di-zoutzuur- en ortho- 10 fosforzuuradditiezouten of solvaten daarvan.

3. Fysisch mengsel van een zout volgens conclusie 1, met een farmaceutisch aanvaardbare, niet-toxische organische of anorganische base in zodanige hoeveelheden, dat een pH van 3,5-7 wordt verkregen bij verdunning van het 15 mengsel met water tot een injecteerbare concentratie.

3-C (1-methyl-l-pyrrolidinio)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat, gekozen uit de zwavelzuur-/ di-salpeterzuur-, mono-zout-5 zuur- en di-zoutzuuradditiezouten en orthofosforzuuraddi-tiezouten, die 1,5-2 molequivalent H^PO^ bevatten, of solvaten daarvan.

4. Fysisch mengsel volgens conclusie 3, waarin het zout en de base aanwezig zijn in zodanige hoeveelheden, dat een pH van 4-6 wordt verkregen bij verdunning van het mengsel met water tot een injecteerbare concentratie.

5. Fysisch mengsel volgens conclusie 4, waarin de base L( + ) lysine is.

6. Fysisch mengsel volgens conclusie 4, waarin de base L(+) arginine is.

7. Werkwijze ter bereiding van het zwavelzuuradditie-25 zout, met het kenmerk, dat (a) een mengsel wordt gevormd van (i) ten minste 1 molequivalent zwavelzuur en (ii) met het zout overeenkomend zwitterion, (b) het zwavelzuuradditiezout tot kristallisatie 30 .....wordt gebracht, met dien verstande dat wanneer het zwitterion in het mengsel aanwezig is in een concentratie van minder dan 25 mg/ml de kristallisatie wordt uitgevoerd in tegenwoordigheid van een organisch oplosmiddel, en (c) het kristallijne zwavelzuuradditiezout wordt 35 gewonnen. 89 00 1 1 1 : 5 -27-

8. Werkwijze volgens conclusie 7, met het kenmerk, dat trap (b) wordt uitgevoerd in een waterig medium, dat vrij is van organisch oplosmiddel.

9. Werkwijze volgens conclusie 8, met het kenmerk, 5 dat in trap (a) het zwitterion wordt toegepast in een zodanige hoeveelheid, dat het in het mengsel aanwezig is in een concentratie van minder dan 500 mg/ml.

10. Werkwijze volgens conclusie 7, met het kenmerk, dat de hoeveelheid zwitterion, die in trap (a) wordt toe- 10 gepast, zodanig is dat het zwitterion in het mengsel aanwezig is in een concentratie van meer dan 25 mg/ml.

11. Werkwijze volgens conclusie 8, met het kenmerk, dat het zwitterion in trap (a) wordt toegepast in een zodanige hoeveelheid, dat het in het mengsel aanwezig is 15 in een concentratie van 100-200 mg/ml.

12. Het kristallijne zwavelzuuradditiezout volgens conclusie 1.

13. Kristallijn 7-Co -{2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-me-thoxyiminoaceetamido]-3-C l-methyl-l-pyrrolidinio)methyU - 20 3-cefem-4-carboxylaatsulfaatzout met het volgende röntgen-poederdiffractiepatroon: d afstand (A) I/I_ (%) --- -o - 9,20 100 6,86 50 25 5,50 28 5,09 22 4,50 38 4,41 44 4,19 63 30 3,78 38 3,64 44 3,39 25 3,31 31 3,15 47 83 0011 1v Η -28-

14. Het kristallijne orthofosforzuuradditiezout van conclusie 1 en hydraten daarvan.

15. Kristallijn 7-Ca (2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-me-thoxyiminoaceetamido] -3-C(1-methylpyrrolidinio)-methyl] - 5 3-cefem-4-carboxylaatfosfaat met het volgende röntgen-poederdiffractiepatroon: -A- 11,04 32 9.2 16 10 7,89 24 7.02 42 6,7 32 5.5 26 4,64 100 15 4,456 53 4.3 58 3,88 26 3,75 89 3,56 21 20 3,31 26 3.05 16

16. Het kristallijne 7-Ca-(2-aminothiazol-4-yl) - α-(Z) -methoxyiminoaceetamido] -3-C(1-methylpyrrolidinio)methyl]- 3-ce£em-4-carboxylaatdihydrochloride van conclusie 1.

17. Kristallijn 7-Ca-(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)- methoxyiminoaceetamido] -3-C(1-methylpyrrolidinio)methyl]- 3-cefem-4-carboxylaatdihydrochloridehydraat van conclusie 1, bevattende 2,5-7,0 gew.% water.

18. Kristallijn 7-Ca -(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-30 methoxyiminoaceetamido]-3-C(1-methylpyrrolidinio)methyl]- 3-cefem-4-carboxylaatdihydrochloridemonohydraat van conclusie 1, bevattende 2,5-4,1 gew.% water. 8900111. * -29-

19. Kristallijn 7-[α -(2-aminothiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoaceetamido] -3-[ (l-inethylpyrrolidinio)methylj- 3-cefem-4-carboxylaatdihydrochlorideinonohydraat van conclusie 1 met het volgende rontgenpoederdiffractiepatroon 5 _A_ I/IQ(%) 10,21 100 8,62 13 6.78 23 6,28 9 10 5,84 9 5,12 4 5,01 9 4,95 5 4,74 38 15 4,62 4 4,50 4 4,44 4 4,26 32 4.10 4 20 3,95 33 3,90 28 3.78 39 3,64 5 3,59 13 25 3,48 10 3,39 15 3,32 10 3,21 10 3.11 10 30 3,04 5 2,99 13 2,93 15 2,76 5 2,63 10 35 2,51 10 2,43 5 2,38 7 8900111.