MXPA04000514A

MXPA04000514A - Composiciones hemostaticas secas y metodos para su preparacion.

Info

Publication number: MXPA04000514A
Application number: MXPA04000514A
Authority: MX
Inventors: J Reich Cary
Original assignee: Baxter Healthcare Sa
Priority date: 2001-07-17
Filing date: 2002-06-21
Publication date: 2005-03-07
Also published as: DE60230079D1; BRPI0211258B1; US20030064109A1; EP1414370A1; BRPI0211258B8; CN100402096C; CN101284146A; EP1803417A1; WO2003007845A9; HK1060277A1; HK1103342A1; US20080286376A1; US20070248685A1; EP1803417B1; US7435425B2; DK1414370T3; CA2453592C; DK1803417T3; JP4316374B2; PT1803417E

Abstract

Las composiciones de gelatina reticuladas secas son preparadas de modo que se vuelven a hidratar rapidamente para producir hidrogels de gelatina adecuados como selladores hemostaticos. La gelatina es reticulada en la presencia de ciertas ayudas de rehidratacion tales como polietiIengIicol, polivinilprovidona, y dextrano con el objeto de producir un polvo de gelatina reticulado seco. Se ha descubierto que el uso de los auxiliares de rehidratacion aumenta de manera substancial el indice de rehidratacion en la presencia de un medio de rehidratacion acuoso, generalmente una solucion salina que contiene trombina.

Description

COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS SECAS Y MÉTODOS PARA SU PREPARACIÓN Campo de la Invención La presente invención se refiere generalmente, a composiciones de colágeno y derivados de colágeno y métodos para su preparación. En particular, la presente invención se refiere a un método para producir una gelatina reticulada seca u otra composición de colágeno o derivada de colágeno, la cual tiene la capacidad de absorber el agua en un índice aumentado. Antecedentes de la Invención Fusión Medical Technologies, Inc., cesionario de la presente solicitud, produce una composición hemostática bajo el nombre comercial de FloSeal®. El producto FloSeal® está disponible en un empaque que incluye dos jeringas. Una primera jeringa es llenada con gránulos de gelatina bovina reticulada, los cuales son previamente hidratados con una solución reguladora. El hidrogel de gelatina contiene aproximadamente el 85% (p/p) de agua y se encuentra en la forma de un hidrogel que puede fluir. La trombina en la solución salina acuosa es mezclada con el hidrogel de gelatina inmediatamente antes de usarlo en la sala de operaciones. La trombina es preparada en solución salina e introducida en una segunda jeringa, y las jeringas son conectadas juntas permitiendo la mezcla de la trombina y la gelatina. Se ha descubierto que la mezcla resultante de los gránulos de hidrogel de gelatina y la trombina, es un sellador hemostático altamente efectivo cuando es aplicado a un sitio de sangrado. Generalmente, el sellador será aplicado a través de la jeringa la cual ha sido mezclada en el sitio del sangrado. La sangre se percolará a través del lecho resultante de gránulos de hidrogel , y la trombina reacciona con el fibrinógeno en la sangre para formar un coágulo de fibrina alrededor de la gelatina para sellar el sitio de sangrado. Aunque es altamente efectivo, el producto FloSeal® presente tiene una vida en el almacén limitada. Se · considera que la estabilidad de la gelatina es reducida por la hidrólisis del hidrogel empacado. Para limitar la degradación hidrolítica posible, el producto FloSeal® generalmente es embarcado en un empaque protegido de la temperatura. Por estas razones, sería deseable proporcionar composiciones selladoras hemostáticas mejoradas del tipo que combinan un colágeno, gelatina, u otro hidrogel derivado de colágeno con una solución acuosa que contiene trombina. En particular, sería deseable proporcionar dichas composiciones en una fórmula la cual fuera resistente a la degradación hidrolítica y la cual , por lo tanto, tuviera una vida en almacén más larga. Sería particularmente deseable proporcionar composiciones mejoradas que tienen, tanto una actividad hemostática comparable con el producto FloSeal® acatual, como una vida en el almacén más larga. Dichas composiciones serían más benéficas si pudieran ser rehidratadas rápidamente para el uso subsecuente, generalmente de modo que pudieran ser extruídas a través de una jeringa. Por lo menos algunos de estos objetivos se cumplirán por las invenciones descritas a continuación.

El producto FloSeal® que se consigue en Fusión Medical Technologies, Inc. , se describe en la publicación de Hood et al. , en Efficacy of Topical Hemostat FloSeal™ en Vascular Surgery, un Extracto patrocinado por Fusión Medical Technologies, Inc. , el cual fue presentado públicamente en Septiembre de 1 999. Las patentes que cubren el producto FloSeal® incluyen las Patentes Norteamericanas Nos. 6,063, 061 y 6,066,325. Un sistema de jeringa doble adecuado para mezclar y administrar un colágeno, o gelatina, o un componente derivado de otro colágeno y un componente de trombina del producto FloSeal™ se describe en la Patente Norteamericana No. 5,908,054. Las descripciones completas de cada una de estas patentes están incorporadas a la presente descripción como referencia. Sumario de la I nvención La presente invención proporciona composiciones selladoras hemostáticas mejoradas, y métodos para la preparación de dichas composiciones mejoradas, y equipos que comprenden las composiciones mejoradas. Los métodos y composiciones serán particularmente útiles para proporcionar la hemostasis en los sitios de sangrado, incluyendo los sitios de sangrado quirúrgicos, sitios de sangrado traumático y similares. Un uso de ejemplo de las composiciones puede ser en el sellado de un aparato de tejido arriba de la penetración de un vaso sanguíneo creada por la cateterización vascular. Las composiciones comprenden un polvo de gelatina reticulado seco, el cual ha sido preparado para que se rehidrate rápidamente. El polvo de gelatina de preferencia comprende partículas relativamente grandes, a las que también nos referimos como fragmentos o subunidades, tal y como se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 6, 063 ,061 y 6,066,325, cuyas descripciones completas han sido incorporadas anteriormente a la presente descripción como referencia. Un tamaño de partícula preferido se encontrará en un rango de 150 pm a 750 pm, pero los tamaños de partícula fuera de este rango preferido, pueden encontrar uso en muchas circunstancias. Las composiciones secas también mostrarán un "hinchado de equilibrio" importante cuando son expuestas a un medio de rehidratación acuoso. De preferencia, el hinchado se encontrará en un rango del 400% al 1 000% , pero puede encontrarse fuera de este rango, tal y como se establece en las patentes anteriormente mencionadas. El "hinchado de equilibrio" puede ser determinado restando el peso seco del polvo de hidrogel de gelatina de su peso cuando está completamente hidratado y por lo tanto, completamente hinchado. La diferencia entonces es dividida entre el peso seco y multiplicada por 1 00 para que proporcione la medida de hinchazón. El peso seco debe ser medido después de la exposición del material a temperatura elevada por un tiempo suficiente para eliminar substancialmente toda la humedad residual, es decir, dos horas a una temperatura de 1 20°C. La hidratación de equilibrio del material se puede lograr sumergiendo el material seco en un medio de rehidratacion adecuado, tal como una solución salina acuosa, por un período de tiempo suficiente para que el contenido de agua se vuelva constante, generalmente de 18 a 24 horas a temperatura ambiente. Los polvos de gelatina reticulados secos de la presente invención generalmente tendrán algo de humedad residual , pero serán lo suficientemente secos para lograr la estabilidad deseada y la vida prolongada en el almacén. Generalmente, las composiciones secas tendrán un contenido de humedad debajo del 20% en peso (p/p) o menor, teniendo preferentemente un contenido de humedad en un rango del 5% en peso hasta el 1 5% en peso. Para mantener el secado, las composiciones generalmente serán empacadas de una manera adecuada para evitar la incursión de la humedad, tal y como se describe con mayor detalle en relación con los equipos de la presente invención. En un aspecto particular de la presente invención, las composiciones comprenderán polvos de gelatina reticulada que tienen un contenido de humedad del 20% (p/p) o menor, en donde el polvo fue reticulado en la presencia de un auxiliar de rehidratacion, de modo que el polvo tiene un índice de rehidratacion acuosa, el cual es por lo menos 5% más alto que el índice de rehidratacion de un polvo similar preparado sin el auxiliar de rehidratacion. El "índice de rehidratacion" se define en la presente descripción como la cantidad de una solución acuosa, generalmente una solución salina al 0.9% (p/p) que es absorbida por un gramo de polvo (envase de peso seco) dentro de treinta segundos, expresado como gm/gm. Las técnicas particulares para la medición del índice se describen en ia sección Experimental que se encuentra más adelante. Las composiciones preferidas de la presente invención tendrán un índice de re idratación de por lo menos 3 gm/gm, preferentemente de 3.5 gm/gm, y con frecuencia de 3.75 gm/gm o mayores. Los índices de rehidratación de los polvos similares preparados sin los auxiliares de rehidratación, generalmente se encuentran debajo de tres, y un aumento de porcentaje en el índice de rehidratación generalmente será de por lo menos el 5%, siendo preferentemente de por lo menos el 10% , y más preferentemente de por lo menos el 25% o mayor. Los polvos de gelatina reticulada secos de la presente invención que tienen índices de rehidratación mejorados, de preferencia son obtenidos preparando los polvos en la presencia de ciertos auxiliares de rehidratación. Dichos auxiliares de rehidratación estarán presentes durante la preparación de los polvos, pero generalmente serán removidos de los productos finales. Por ejemplo, los auxiliares de rehidratación que están presentes en aproximadamente el 20% del contenido total de sólidos, generalmente serán reducidos a una cantidad inferior a 1 % en el producto final, y con frecuencia, debajo del 0.5% en peso. Los auxiliares de rehidratación de ejemplo incluyen polietilénglicol (PEG), que tiene de preferencia un peso molecular de aproximadamente 1000; polivinilpirrolidona (PVP), teniendo preferentemente un peso molecular promedio de aproximadamente 50, 000; y dextrano, teniendo generalmente un peso molecular promedio de aproximadamente 40,000. se prefiere emplear por lo menos dos de estos auxiliares de rehidratación cuando se preparan las composiciones de la presente invención , y más particularmente se prefiere emplear los tres. Los métodos de la presente invención comprenden, por lo tanto, proporcionar una solución acuosa de una gelatina no reticulada combinada con un auxiliar de rehidratación. La gelatina sin reticular generalmente estará presente en una solución acuosa en una cantidad del 5% (p/p) hasta el 1 5% (p/p), y el auxiliar de rehidratación generalmente estará presente en una cantidad del 5% al 30% (p/p) basado en el peso de la gelatina en la solución acuosa. Preferentemente, el auxiliar de rehidratación comprende PEG en una cantidad del 2.5% al 20% (p/p) basada en el peso de la gelatina, PVP en una cantidad del 1 .25% al 20% (p/p), y dextrano en una cantidad de 1 .25% al 20% (p/p). La gelatina sin reticular junto con el auxiliar de rehidratación es entonces reticulado de una manera adecuada para formar un hidrogel. Por ejemplo, las moléculas poliméricas pueden ser reticuladas utilizando agentes de reticulación bi- o polifunclonales, los cuales se enlazan de manera covalente a dos o más cadenas de las moléculas de polímero. Los agentes de reticulación bifuncionales de ejemplo incluyen aldehidos, epoxis, succinimidas, carbodiimidas, maleimidas, azidas, carbonatos, isocianatos, divinil sulfona, alcoholes, aminas, imidatos, anhídridos, haluros, silanos, diazoacetato, aziridinas, y similares. Alternativamente, la reticulación puede ser lograda utilizando oxidantes y otros agentes, tales como periodatos, los cuales activan las cadenas laterales o porciones en el polímero de modo que puedan reaccionar con otras cadenas laterales o porciones para formar los enlaces de reticulación. Un método de reticulación adicional comprende la exposición de los polímeros a la radiación, tales como radiación gamma, para activar las cadenas de polímero para permitir las reacciones de reticulación . Los métodos de reticulación dihidrotérmicos también pueden ser adecuados. Los métodos preferidos para reticular las moléculas de gelatina se describen más adelante. Los métodos de ejemplo para producir las gelatinas reticuladas son los siguientes. La gelatina es obtenida y suspendida en una solución acuosa para formar un hidrogel sin reticular, que tiene generalmente un contenido de sólidos del 1 % al 70% en peso, generalmente del 3% al 10% en peso. La gelatina es reticulada, generalmente mediante la exposición, ya sea a glutaraldehído (por ejemplo, de 0.01 % a 0.05% p/p, durante la noche a una temperatura de 0°C a 15°C en un regulador acuoso), periodato de sodio (es decir, 0.05 , sostenido a una temperatura de 0°C a 1 5°C durante 48 horas) o 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida ("EDC") (es decir del 0.5% al 1 .5% p/p durante la noche a temperatura ambiente), o mediante la exposición a una radiación de rayos de electrones o rayos gamma de aproximadamente 0.3 a 3 megarads.

Alternativamente, las partículas de gelatina pueden ser suspendidas en un alcohol , preferentemente alcohol metílico o alcohol etílico, con un contenido de sólidos del 1 % al 70% en peso, generalmente del 3% al 10% en peso, y reticulados mediante la exposición a un agente de reticulación, generalmente glutaraldehído (por ejemplo, del 0.01 % al 0.1 % p/p, durante la noche a temperatura ambiente). En el caso de los aldehidos, el pH debe ser sostenido en un rango de aproximadamente 6 hasta aproximadamente 1 1 , de preferencia de 7 a 1 0. Cuando se efectúa la reticulación con glutaraldehído, los retículos son formados por medio de una base de Schiff, los cuales pueden ser estabilizados mediante una reducción posterior, por ejemplo, mediante el tratamiento con borohidruro de sodio. Después de la reticulación, los gránulos resultantes pueden ser lavados en agua y opcionalmente enjuagados en un alcohol , y secados. Los polvos secos resultantes entonces pueden ser cargados en los aplicadores de la presente invención, tal y como se describen con mayor detalle más adelante. Después de la reticulación, por lo menos el 50% (p/p) del auxiliar de rehidratación será removido del hidrogel resultante. Generalmente, el auxiliar de rehidratación es removido mediante filtración del hidrogel seguida por lavado de la torta de filtro resultante. Dicho paso de filtración/lavado puede ser repetido una o más veces adicionales con el objeto de limpiar el producto hasta un nivel deseado y remover por lo menos del 50% del auxiliar de rehidratación, removiendo preferentemente por lo menos el 90% (p/p) del auxiliar de rehidratación originalmente presente. Después de la filtración, la gelatina es secada, generalmente mediante un secado de la torta de filtro final que fue producida. La torta de filtro seca entonces puede ser descompuesta o molida para producir el polvo reticulado que tiene un tamaño de partícula en los rangos deseados establecidos anteriormente. Los equipos de acuerdo con la presente invención comprenderán un primer contenedor que tiene el polvo de gelatina reticulado seco de la presente invención, tal y como se describió anteriormente. Los equipos comprenderán además un segundo contenedor que tiene un medio de rehidratación acuoso, generalmente una solución salina u otra solución acuosa que comprende trombina, la cual se pretende que sea mezclada con la gelatina conforme la gelatina es rehidratada. Los contenedores pueden ser de cualquier forma, pero preferentemente serán en la forma de jeringas, las cuales permitan el mezclado de la gelatina seca con el medio de rehidratación. Breve Descripción de los Dibujos La figura 1, ilustra un equipo construido de acuerdo con los principios de la presente invención. Descripción Detallada de la Invención Los siguientes ejemplos se ofrecen a modo de ilustración y no a modo de limitación. Ejemplo 1: Preparación del polvo de gelatina Las tiras de coria bovina fueron suspendidas en una solución de hidróxido de sodio con una concentración de 1 M a 2M durante 1 hora a temperatura ambiente, neutralizadas con ácido fosfórico y enjuagadas. Las tiras tratadas fueron entonces suspendidas nuevamente en agua desionizada, y el pH fue ajustado a un pH de 7 a 8, y calentadas a una temperatura de 70°C. Se utilizó un homogeneizador para reducir más el tamaño de las tiras. Después de 1 hora a una temperatura de 70°C, la coria fue solubilizada de forma extensa a gelatina. La cantidad de coria fue seleccionada de modo que el contenido de sólidos de la solución de gelatina resultante fuera de aproximadamente el 3 al 10% (p/p), generalmente del 7 al 10% . La solución fue fundida en la forma de capas delgadas en charolas de metal recubiertas con Teflon®, secadas y molidas para formar el polvo de gelatina. Ejemplo 2: Preparación del "polvo de gelatina modificado". Los auxiliares de rehidratación (Tabla 1 ) fueron disueltos en 500 mL de agua desionizada a una temperatura de 50°C y luego fue agregada a la solución una cantidad del polvo de gelatina derivada del bovino, preparada igual que en el Ejemplo 1 , . La concentración final de gelatina en la solución fue seleccionada para que fuera de aproximadamente el 8% (p/p, base de polvo de gelatina a granel), y la cantidad total de auxiliares de rehidratación en la solución fue seleccionado igual que en los ejemplos del 9 al 44 (Tablas 1 y 2). Después de que la gelatina se disolvió, la solución fue vertida en charolas de metal recubiertas con Teflon® y secadas. Las láminas de gelatina seca fueron molidas para formar el "polvo de gelatina modificado". Alternativamente, las tiras de coria bovina fueron suspendidas en una solución de hidróxido de sodio en una concentración de 1 M a 2M durante 1 hora a temperatura ambiente, neutralizadas con ácido fosfórico y enjuagadas. Las tiras tratadas . se volvieron a suspender en agua desionizada, y el pH se ajustó a un pH de 7 a 8, y se calentó a una temperatura de 70°C. Se utilizó un homogeneizador para reducir todavía más el tamaño de las tiras. Después de 1 hora a una temperatura de 70°C, la coria se solubilizó de manera importante hasta formar gelatina. La cantidad de coria fue seleccionada de modo que el contenido de sólidos de la solución de gelatina resultante fuera de aproximadamente el 3 al 1 0% (p/p), generalmente del 7 al 1 0%. Las cantidades de los auxiliares de rehidratación fueron seleccionadas igual que en los ejemplos del 9 al 44 (Tablas 1 y 2) y luego fueron agregadas a la solución de gelatina, ya sea en forma sólida o disueltas en un volumen pequeño de agua. La solución fue fundida en capas delgadas sobre charolas de metal recubiertas con Teflon® secadas y molidas para formar el "polvo de gelatina modificado". Los ejemplos de varias formulaciones para la gelatina modificadas se proporcionan en las Tablas 1 y 2. Ejemplo 3: Preparación del polvo de gelatina reticulado a partir del "polvo de gelatina modificado". Se enfriaron 600 mL de un regulador de fosfato 0.2 M (pH 9.2 ± 0.2) a una temperatura inferior a 1 2°C. Se le agregaron 0.32 mL de glutaraldehído (25%) a la solución reguladora y luego fueron agregados los 20 gramos de polvo de gelatina modificada, dando como resultado una concentración de glutaraldehído de 4000 ppm (glutaraldehído a gelatina modificada, peso básico a granel). La gelatina fue suspendida en la solución de glutaraldehído con una barra de agitación. El pH de cada una de las suspensiones fue ajustado a un rango de 9.2 ± 0.2 y luego mantenido a una temperatura de 9 a 1 2°C, y un pH de 9.2 ± 0.2 por un período de 1 9 horas. La suspensión fue filtrada y la torta del filtro fue lavada con agua desionizada tres veces cubriendo completamente la torta de filtro con agua desionizada y luego permitiendo que el vacío condujera el agua del enjuague a través de la torta. La torta del filtro se dejó en el embudo durante cada enjuague. Se disolvieron 0.2 g de NaBH4 en 600 mL de regulador de fosfato 25 mM , pH 7.4 0.2, en un vaso de precipitación. La torta del filtro anterior fue suspendida en la solución de NaBH4 a temperatura ambiente (aproximadamente 22°C) durante 3 horas, y luego filtrada para remover el líquido. La torta del filtro luego fue suspendida en 600 mL de solución reguladora a temperatura ambiente (aproximadamente 22°C) durante 30 minutos y filtrada nuevamente. El regulador estaba compuesto de fosfato de sodio (anhidro dibásico o monohidrato monobásico) y ascorbato de sodio. El procedimiento anterior se repitió dos veces para asegurar que estuviera presente el índice de sales apropiado para la gelatina para formar una composición reguladora deseada al momento de la reconstitución. La torta del filtro fue secada, luego molida con una Mezcladora Waring , dando como resultado un "polvo de gelatina reticulado". Este método también se utilizó para preparar el polvo de gelatina reticulado a partir del polvo de gelatina sin modificar, es decir, la gelatina a la cual no se le había agregado auxiliar de rehidratación durante su preparación. Ejemplo 4: Preparación de un producto irradiado a partir del polvo de gelatina reticulado. Se colocaron aproximadamente 800 mg (peso al granel) del polvo de gelatina reticulado, preparado igual que en el ejemplo 2, en cada uno de varias jeringas de 5 ce. Las jeringas que contienen el polvo fueron esterilizadas con irradiación gama a temperatura ambiente. Ejemplo 5: Uso del producto como un agente hemostático. Una jeringa del producto con un contenido de aproximadamente 0.8 g del polvo de gelatina reticulado irradiado, se preparó a partir del polvo de gelatina modificado. El polvo de gelatina modificado fue preparado igual que en el Ejemplo 2. La gelatina modificada fue reticulada adicionalmente e irradiada igual que en los Ejemplos 3 y 4. El producto fue mezclado con 4 mL de solución salina con un contenido de aproximadamente 1 000 Unidades de trombina bovina por mililitro. La mezcla se logró pasando el producto hacia delante y hacia atrás entre dos jeringas conectadas con un conector Luer directo de hembra a hembra. El polvo en la jeringa fue hidratado conforme fue mezclado con la solución de trombina, formando los granulos de hidrogel . Una lesión cuadrada de aproximadamente 1 cm x 1 cm x 0.2 cm de profundidad, fue creada en el hígado de un cerdo de granja. El cerdo había sido anticoagulado con heparina, de modo que su tiempo de coagulación fue activado (ACT) de tres a cinco veces a su valor de línea de base, y la lesión sangró libremente antes del tratamiento. Después de aproximadamente 30 segundos del inicio de la mezcla, aproximadamente 2 ml_ del polvo hidratado fue extruído de la jeringa sobre la lesión y sostenido en su lugar con compresión durante dos minutos. Después de que se eliminó la compresión, la lesión tratada fue observada para determinar el sangrado en 3 minutos, 1 0 minutos y 50 minutos posteriores a la aplicación. No se observó sangrado de la lesión tratada en las observaciones de los 3 minutos y 1 0 minutos. Después de la observación de los 1 0 minutos, la lesión tratada fue irrigada con solución salina. Mientras se removía el material excedente, no se observó un nuevo sangrado. La lesión se observó nuevamente a los 50 minutos posteriores a la aplicación, y no se observó sangrado. Ejemplo 6: Determinación del índice de rehidratación de un polvo. El "índice de rehidratación" de un polvo fue medido de la manera siguiente. El polvo empacado, en una jeringa de 5 ce, fue mezclado en una jeringa con un contenido de un volumen de solución acuosa mediante el paso entre las dos jeringas conectadas con un aditamento Luer durante 30 segundos. El volumen de solución acuosa fue seleccionada para que fuera excedente de lo que se podría esperar que fuera absorbido en 30 segundos. Generalmente, se mezclaron 0.8 g (peso al granel) del polvo con 3 ml_ de una solución de cloruro de sodio al 0.9%. La mezcla resultante entonces fue filtrada inmediatamente para remover cualquier líquido sin absorber. El material filtrado húmedo fue pesado, luego secado en un horno a una temperatura de 120°C durante dos horas y se volvió a pesar. La medición dio la cantidad total de agua removida del material húmedo y el peso del polvo seco. La cantidad de agua que había sido absorbida del polvo fue calculada entonces después de que se hizo una pequeña corrección para la humedad residual que había estado presente en el polvo originalmente. El "índice de rehidratación" fue proporcionado como la masa de solución salina absorbida por gramo de peso seco del polvo en ese intervalo de 30 segundos. En el cálculo siguiente, los sólidos de la fracción del polvo de granel ("S") fue medido independientemente mediante el secado del polvo a granel a una temperatura de 120°C durante 2 horas y el pesado del polvo antes y después del secado. El valor de S se proporciona de la manera siguiente: _ peso después del secado a 120°C, 2 horas ^ ~ peso antes del secado Cálculo del índice de rehidratación: A: peso inicial de la charola y el papel de filtro B: peso de la charola, el papel de filtro y polvo hidratado C: peso de la charola, el papel de filtro y la muestra después del secado en el horno S: fracción de sólidos del polvo al granel originalmente en la jeringa M : gramos de solución salina absorbido por gramo de polvo (peso seco) durante la mezcla ("índice de absorción") = (B-A)-{C-A)IS {C~A) Ejemplo 7: índice de rehidratación y determinación de propiedades físicas para varios lotes de producto de polvo. Las Tablas 1 y 2 ilustran los resultados de las mediciones del índice de rehidratación revisados en uno de varios lotes de producto de polvo (Ejemplos 9 a 23). Estos se hicieron utilizando los métodos de acuerdo con los Ejemplos 1 , 2, 3, y 4. Excepto los Ejemplos 9 y 17, estos fueron preparados a partir de gelatinas modificadas que fueron hechas con proporciones diferentes de gelatina y los siguientes auxiliares de rehidratación: polietilénglicol (PEG), peso molecular promedio 1000; polivinilpirrolidona (PVP), designación "k-30", correspondiente a un peso molecular promedio de aproximadamente 50,000; y dextrano, peso molecular promedio 40,000. Se puede apreciar que el uso de las diferentes combinaciones de gelatina y auxiliares de rehidratación pueden dar como resultado un producto de polvo que absorbe más solución salina acuosa en 30 segundos por gramo de polvo, que un producto de polvo hecho a partir de gelatina al cual no se le han agregado auxiliares de rehidratación. También se puede apreciar que la combinación de gelatina, PEG, PVP y dextrano en un índice de peso al granel de 80: 10:5:5 en la gelatina modificada (Ejemplo 10) produce un producto de polvo que absorbe aproximadamente el 33% más de solución salina por gramo en 30 segundos que el producto de polvo hecho a partir de gelatina sin modificar. La Tabla 1 también proporciona los valores de otras propiedades físicas determinadas para los lotes de productos de polvo. Los "porcentajes de sólidos" fueron determinados pesando el polvo antes y después del secado a una temperatura de 120°C durante dos horas para eliminar la humedad residual. La "temperatura pico DSC" se refiere a la temperatura en la cual se exhibió un pico en un termograma de una medición de calorimetría de exploración diferencial conducida a una temperatura de 1 °C a 70°C. La "hinchazón de equilibrio" fue determinada suspendiendo el polvo en un exceso de solución salina por un período de por lo menos 18 horas a temperatura ambiente. El polvo hidratado fue pesado para determinar su "peso húmedo de equilibrio" y secado a una temperatura de 120°C durante dos horas y se volvió a secar para determinar su "peso seco". La hinchazón de equilibrio es proporcionada como: peso de equilibrio húmedo - peso seco Hinchazón de equilibrio (%) = 100% X— peso seco Los valores para el "tamaño de partícula promedio" fueron medidos por medio de difusión de luz en un analizador de tamaño de partícula Coulter LS. A partir de los datos presentados en la Tabla 1 , parece que el uso apropiado de los auxiliares de rehidratación puede cambiar el índice de rehidratación del producto de polvo, sin cambiar de manera importante sus otras propiedades físicas. Ejemplo 8: Medición de los niveles de polietilénglicol , polivinilpirrolidona y dextrano en el polvo de gelatina modificado y en el polvo reticulado. Aproximadamente 50 mg de gelatina modificada o 250 mg de polvo reticulado irradiado fueron suspendidos en 1 0 mL de agua desionizada y calentados durante 3 horas a una temperatura de 65°C. Luego las muestras fueron centrifugadas durante 15 minutos a una velocidad de 2000 rpm. El sobrenadante resultante fue filtrado a través de un filtro Gelman Acrodisc de 0.45 pm , siendo descartado el primer mL. La muestra resultante entonces fue probada por tres métodos de cromatografía líquida de alto rendimiento diferentes (H PLC) para cuantificar el polietilénglicol (PEG), la polivinilpirrolidona (PVP), y el dextrano en la muestra. Para el PEG, se inyectaron 100 pL de la muestra en una columna Waters Ultrahidrogel 120, de 7.8 x 300 mm, con una columna de protección y un filtro previo utilizando agua desionizada como la fase móvil. El detector de índice de refracción fue utilizado para monitorear el efluente. Para la PVP, se inyectaron 1 00 µ?_ de la muestra en una columna Phenomenex Kingsorb C1 8 de 5pm, de 4.6 x 150 mm, con una columna de protección y un filtro previo, utilizando un gradiente de metanol y fosfato de sodio acuoso como la fase móvil. El detector de absorbancia ultravioleta fue utilizado para monitorear el efluente. Para el dextrano, se Inyectaron 1 00 µ?_ de la muestra en una columna Waters Ultrahidrogel Lineal , de 7.8 x 300 mm, con una columna de protección y filtro previo, utilizando fosfato de sodio 0.1 M , pH de 7, y acetonitrilo en una proporción de 90: 1 0 como la fase móvil. Se utilizó un detector de índice de refracción para monitorear el efluente. Todas las columnas fueron calentadas a una temperatura de 40°C para los análisis. El límite de cuantificación fue de aproximadamente 0.1 % (p/p muestra) para PEG y PVP, y de 0.2% (p/p muestra) para el dextrano. La gelatina modificada fue preparada de acuerdo con el Ejemplo 2: La gelatina modificada fue analizada para el PEG, PVP y el dextrano de la manera descrita anteriormente. Los resultados indicaron que el PEG , PVP, y el dextrano estaban presentes en 1 6%, 8%, y 3% (p/p al granel), respectivamente. La gelatina modificada fue sometida posteriormente a reticulación , tratamiento de borohidruro de sodio y enjuague de acuerdo con el Ejemplo 3, para formar el polvo de gelatina modificado reticulado. Cuando este polvo fue analizado para el PEG, PVP, y el dextrano por HPLC en la manera descrita anteriormente, se encontró que el contenido de cada uno de los tres auxiliares de rehidratación estaba debajo del límite de cuantificación. Ejemplo 9: Producto de polvo hecho sin auxiliares de rehidratacíón Se preparó gelatina sin modificar-es decir, gelatina a la cual no se le agregaron auxiliares de procesamiento- a partir de tiras de coria bovina igual que en el Ejemplo 1 , y fueron reticuladas igual que en el Ejemplo 3. La gelatina sin modificar reticulada entonces fue empacada en jeringas e irradiada con rayos gama igual que en el Ejemplo 4. Las propiedades físicas del producto resultante fueron medidas igual que en los Ejemplos 6 y 7, y se proporcionan en la Tabla 1 . Ejemplos del 10 al 23: Producto de polvo hecho con auxiliares de rehidratacíón . Los lotes de gelatina modificada fueron preparados igual que en el Ejemplo 2 a partir del polvo de gelatina o tiras de coria y a partir de uno, dos, o tres auxiliares de rehidratacíón. La Tabla 1 proporciona las proporciones de la gelatina al granel y los auxiliares de rehidratacíón utilizados. La gelatina modificada fue reticulada entonces igual que en el Ejemplo 3. Excepto el Ejemplo 17, los auxiliares de rehidratacíón utilizados fueron a partir de la siguiente lista: polietilénglicol (PEG) de un peso molecular promedio de aproximadamente 1 000; polivinilpirrolidona (PVP), designación "k-30", de un peso molecular promedio de aproximadamente 50, 000; y dextrano, de un peso molecular promedio de aproximadamente 40,000. En el Ejemplo 17, se utilizó PEG de un peso molecular promedio de aproximadamente 400. La gelatina modificada reticulada entonces fue empacada en jeringas y se le sometió a irradiación gama igual que en el Ejemplo 4. Las propiedades físicas del producto de polvo resultante de cada una de estas preparaciones fue medida igual que en los Ejemplos 6 y 7 y se proporcionan en la Tabla 1 . Los datos proporcionados con la formulación del Ejemplo 10 son el promedio y la desviación estándar de nueve lotes preparados de acuerdo con esa formulación. Ejemplos del 24 al 44: Producto de polvo hecho con diferentes auxiliares de rehidratación . Los lotes de gelatina modificada fueron preparados igual que en el Ejemplo 2 a partir de polvos de gelatina o tiras de coria y a partir de uno de varios auxiliares de rehidratación. La Tabla 2 proporciona la identidad y concentración del auxiliar de rehidratación utilizado en cada lote como una proporción del peso de gelatina al granel al auxiliar de rehidratación , y como un porcentaje del soluble a granel total utilizado para preparar la gelatina modificada. Entonces la gelatina fue reticulada igual que en el Ejemplo 3. La gelatina modificada reticulada fue empacada en jeringas y se sometió a irradiación gamma igual que en el Ejemplo 4. Las propiedades físicas del producto de polvo resultante de cada una de estas preparaciones fueron medidas igual que en los Ejemplos 6 y 7, y se proporcionan en la Tabla 2. Los datos para la formulación del Ejemplo 9 se proporcionan en la Tabla 2 con propósitos de comparación .

O TABLA 1 % De peso al granel objetivo en Propiedades del producto de polvo después de la reticulación e irradiación qamma gelatina modificada Gelatina PEG PVP Dextrano temp. pico Hinchazón Tamaño de (peso MW = MW - MW = DSC de eauilibrio partícula » Re- Lote al granel) 1000 D 50000 D 40000 D % sólidos CC) (%) prom.(pm) hidratación Sin adición de auxiliar de rehidratación Ejemplo 9 208-32 100 0 0 0 88.6 41.3 551 440 2.85 Composición preferida (mezcla de cuatro vías) prom. de 9 lotes 80 10 5 5 87.6 42.1 595 423 3.79 Ejemplo 10 desv. estándar de 9 lotes 1.0 1.4 43 65 0.15 Mezclas de tres vias Ejemplo 11 228-69-1 80 10 10 0 88.1 40.8 667 387 3.51 Ejemplo 12 228-69-2 80 10 0 10 88.4 40.6 670 367 3.14 Ejemplo 13 228-78 80 0 10 10 86.7 41 632 414 3.20 Mezclas de gelatina PEG Ejemplo 14 212-39-2 94 6 0 0 86.2 44.4 502 372 2.68 Ejemplo 15 228-42-3 89 11 0 0 88.6 42.8 594 428 3.16 Ejemplo 16 72&-?? 80 20 0 0 88.9 42.4 575 312 3.47 Ejemplo 17 214-62-1 89 11** 0 0 87.1 40.7 599 406 3.1 Mezclas de gelatina PVP Ejemplo 18 228-38-3 94 0 6 0 88.2 42.2 567 399 3.26 Ejemplo 19 228-38-2 89 0 11 0 88.3 41.0 605 422 3.44 Ejemplo 20 228-38 80 0 20 0 88.6 42.4 596 401 3.52 Mezclas de gelatina de xtrano Ejemplo 21 228-35-3 94 0 0 6 88.1 40.5 631 395 3.18 Ejemplo 22 228-35-2 89 0 0 11 88.3 41.4 598 345 3.03 Ejemplo 23 228-35-1 80 0 0 20 88.5 41.9 624 392 3.01 '-Indice de rehidratación definido como gramos de solución salina por gramo de producto de polvo (peso seco) en 30 seg. **-PEG (PM =400) usado en vez de PM=1000 o TAPIA 2 Auxiliar de re-hidratación Propiedades físicas Concentración de auxiliar de procesamiento en peso de |a gelatina temp. Tamaño PM u gelatina rnodificada pico Hinchazón de * índice de otra al granel: (<% en pes0 Re- % DSC de equilibrio partícula Lote tipo designación auxiliar al granel) sólidos ("O (%) prom.(pm) hidratación Ejemplo 9 208-32 sin auxiliares de re-hidratación 88.6 41.3 551 440 2.85 Ejemplo 24 214-11-1 glicerol n/a 4 20% 85.5 43.4 483 653 2.19 Ejemplo 25 214- 1-2 glicerol n/a 8 1 % 86.4 43.4 529 421 2.62 Ejemplo 26 214-1 -3 glicerol n/a 16 6% 86.5 43.0 543 398 2.35 Ejemplo 27 214-44-1 dextrano 148000 D 4 20% 85.5 nr 634 433 2.62 Ejemplo 28 214-44-2 dextrano 148000 D 8 11% 85.4 nr 607 453 2.57 Ejemplo 29 214-44-3 dextrano 148000 D 16 6% 85.5 nr 603 527 2.33 Ejemplo 30 214-44-4 dextrano 148000 D 32 3% 85.7 nr 531 49 2.37 Ejemplo 31 228-35-4 dextrano 40000 D 32 3% 84.5 41.4 633 380 2.59 Ejemplo 32 214-50-1 PVP k-90 4 20% 85.3 44.0 612 664 2.41 Ejemplo 33 2 4-50-2 PVP k-90 8 1 % 85.6 44.3 538 581 2.71 Ejemplo 34 214-50-3 PVP k-90 16 6% 85.6 44.1 527 593 2.78 Ejemplo 35 214-50-4 PVP k-90 32 3% 86.1 43.0 597 538 2.76 Ejemplo 36 214-53-4 PVP k-30 32 3% 87.3 41.1 580 447 2.72 Ejemplo 37 214-59-1 PEG 400 4 20% 86.7 42.0 595 407 2.18 Ejemplo 38 214-66-1 PEG 400 6 14% 86.5 40.8 603 501 2.63 Ejemplo 39 212-39-1 PEG 400 16 6% 86.2· 43.8 513 403 2.11 Ejemplo 40 212-39-2 PEG 1000 16 6% 86.2 44.4 502 372 2.68 Ejemplo 41 214-59-3 PEG 8000 4 20% 87.4 41.5 548 429 2.87 Ejemplo 42 214-66-3 PEG 8000 6 14% 86.9 41.4 581 426 3.80 Ejemplo 43 2 4-62-3 PEG 8000 8 1% 86.8 42.0 631 511 2.78 Ejemplo 44 212-39-3 PEG 8000 16 6% 86.4 44.6 546 518 2.72 no reportado "-índice de re-hidratación definido como gramos de solución salina absorbida por gramo de producto en polvo (peso seco) en 30 seg.

Aunque la anterior es una descripción completa de las modalidades preferidas de la presente invención, se pueden utilizar varias alternativas, modificaciones y equivalentes. Por lo tanto, la descripción anterior no deberá ser tomada como una limitación del alcance de la invención, el cual está definido por las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVIN DICACION ES 1 . Un método para preparar un polvo de gelatina reticulado substancialmente seco, comprendiendo dicho método: proporcionar una solución acuosa que comprende gelatina enlazada combinada con al menos un auxiliar de rehidratación; secar la solución de gelatina y el auxiliar de rehidratación para producir sólidos; moler los sólidos para producir un polvo; reticular el polvo; eliminar por lo menos el 50% (p/p) del auxiliar de rehidratación; y secar la gelatina reticulada para producir un polvo que tiene un contenido de humedad inferior al 20% (p/p). 2. Un método tal y como se describe en la reivindicación 1 , caracterizado porque el auxiliar de rehidratación comprende uno, dos, o tres de los materiales seleccionados del grupo consistente de polietilénglicol (PEG), polivinilpirrolidona (PVP), y dextrano. 3. Un método tal y como se describe en las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque el auxiliar de rehidratación está presente en una concentración en un rango del 5% al 30% en peso basado en el peso de gelatina presente en la solución acuosa. 4. Un método tal y como se describe en la reivindicación 3, caracterizado porque el auxiliar de rehidratación comprende PEG en un rango del 2.5% ai 20% en peso, PVP en un rango del 1 .25% al 20% en peso, y dextrano en un rango del 1 .25% al 20% en peso. 5. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la reticulación comprende agregar un agente de reticulación a la solución de gelatina. 6. Un método tal y como se describe en la reivindicación 5, caracterizado porque el agente de reticulación comprende glutaraldehído. 7. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la remoción de por lo menos el 50% del auxiliar de rehidratación comprende la filtración de la suspensión del polvo reticulado en un solvente seguido por la filtración de la gelatina para producir una torta de filtro y lavar la torta de filtro para remover el auxiliar de rehidratación. 8. Un método tal y como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el lavado de la torta de filtro remueve por lo menos el 90% (p/p) del auxiliar de rehidratación originalmente presente en la gelatina. 9. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el secado comprende el secado de la torta del filtro después del lavado, en donde el método comprende además el secado de la torta de filtro molida para producir un polvo de gelatina molido seco. 1 0. Una composición que comprende un polvo de gelatina reticulado que tiene un contenido de humedad del 20% (p/p) o menor, caracterizado porque el polvo fue reticulado en la presencia de un auxiliar de rehidratación de modo que el polvo tiene un índice de rehidratación acuosa el cual es por lo menos el 5% más alto que el índice de rehidratación de un polvo similar, preparado sin el auxiliar de rehidratación . 1 1 . Una composición tal y como se describe en la composición 10, caracterizada porque el polvo tiene un índice de rehidratación el cual es por lo menos el 10% y opcionalmente, por lo menos el 25% más alto que el índice de rehidratación de un polvo similar, preparado sin el auxiliar de rehidratación . 12. Una composición tal y como se describe en las reivindicaciones 1 0 ó 1 1 , caracterizada porque el auxiliar de rehidratación comprende uno, dos, o tres de los materiales seleccionados del grupo consistente de polietilénglicol (PEG) polivinilpirrolidona (PVP), y dextrano. 1 3. Una composición tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el polvo tiene un tamaño de partícula promedio en un rango de 1 50 µ?? a 750 µ??. 14. Una composición tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el polvo tiene una hinchazón de equilibrio en un rango del 400% a 1000%. 1 5. Un equipo que comprende: un primer contenedor que contiene polvo de gelatina reticulado tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 12 a la 1 9; y un segundo contenedor que contiene un medio de rehidratacion acuoso. 1 6. Un equipo tal y como se describe en la reivindicación 1 5, caracterizado porque el primer contenedor es una jeringa. 1 7. Un equipo tal y como se describe en la reivindicación 1 6, caracterizado porque el segundo contenedor es una jeringa. 1 8. Un equipo tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el medio de rehidratacion acuoso comprende trombina. 1 9. Un equipo tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, el cual comprende además instrucciones para su uso que establecen un método para combinar el polvo de gelatina reticulado y el medio de rehidratacion para producir un hidrogel de gelatina fragmentado que contiene trombina y aplicar el hidrogel a un sitio de una herida. 20. Un equipo tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, el cual comprende además un empaque que contiene el primer y el segundo contenedores. RESUME N Las composiciones de gelatina reticuladas secas son preparadas de modo que se vuelven a hidratar rápidamente para producir hidrogels de gelatina adecuados como selladores hemostáticos. La gelatina es reticulada en la presencia de ciertas ayudas de rehidratacion tales como polietilénglicol, polivinilprovidona, y dextrano con el objeto de producir un polvo de gelatina reticulado seco. Se ha descubierto que el uso de los auxiliares de rehidratacion aumenta de manera substancial el índice de rehidratacion en la presencia de un medio de rehidratacion acuoso, generalmente una solución salina que contiene trombina.