MX2012014002A - Proceso para elaborar composiciones hemostaticas secas y estables. - Google Patents

Abstract

Se describe un procedimiento para elaborar una composición hemostática seca y estable, dicho procedimiento comprende a) proporcionar un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, b) proporcionar un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis, c) proporcionar dicho primer componente y dich6 segundo componente en una forma combinada en un contenedor final, c1) ya sea por el llenado con dicho primer componente y dicho segundo componente en dicho contenedor final de manera que se obtiene una mezcla seca en dicho contenedor final, c2) o proporcionar dicho primer componente o dicho segundo componente en dicho contenedor final y agregar dicho segundo componente o dicho primer componente de manera que se obtiene una combinación de dicho primer componente con dicho segundo componente en dicho contendor final, d) terminar el contenedor final para un dispositivo farmacéutico que se puede almacenar que contiene dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada como una composición hemostática seca y estable.

Description

PROCESO PARA ELABORAR COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS SECAS Y ESTABLES Campo de la Invención La presente invención se refiere a procesos para elaborar composiciones hemostáticas en forma de almacenamiento estable.

Antecedentes de la Invención Las composiciones hemostáticas en la forma de almacenamiento estable secas que comprenden material biocompatible, biodegradable, granular estable seco son conocidas, por ejemplo de los documentos de patente WO 98/008550A o WO 2003/007845A. Estos productos han sido aplicados con éxito en la materia para hemostasis. Floseal® es un ejemplo para un agente hemostático poderoso y versátil que consiste en una matriz de gelatina granular dilatada en una solución que contiene trombina para formar una pasta que puede fluir.

Debido a que dichos productos tienen que ser aplicados en humanos, es necesario proporcionar los estándares de seguridad más altos para calidad, estabilidad de almacenamiento y esterilidad de los productos finales y los componentes de los mismos. Por otra parte, la fabricación y manejo deben realizarse de la mantea más conveniente y eficiente posibles. Si las composiciones hemostáticas requieren un componente de trombina para utilizarse, es un desafío la provisión de este componente de trombina en el producto final. Debido a que la trombina y el material de matriz normalmente tienen propiedades diferentes con respecto a los requerimientos de fabricación, éstos tienen que ser fabricados y provistos por separado. Por ejemplo, los requerimientos de esterilización pueden diferir de manera significativa entre el material de matriz granular relativamente estable (con frecuencia también reticulado) y los componentes de proteína, tales como trombina. Mientras que dichos materiales de matriz normalmente pueden ser esterilizados mediante métodos de esterilización poderosos (tales como autoclave, irradiación gama, etc.), la trombina (como una enzima) tiene que ser tratada con más cuidados. Esos métodos de esterilización poderosos, normalmente no son posibles para la trombina debido a la pérdida de actividad enzimática producida por dichos tratamientos difíciles. Por razones de estabilidad, dichos productos (así como también los productos de acuerdo con la presente invención) normalmente son provistos en una forma seca y se lleva a la forma "lista para utilizarse" (la cual normalmente es en la forma de un (hidro)gel, suspensión o solución) inmediatamente antes del uso, que necesitan la adición de agentes de humectación o solución (suspensión) y la mezcla del componente de material de matriz con el componente de trombina. La reconstitución de trombina o el paso de mezclado de una solución de trombina con el material de matriz granular son pasos, los cuales normalmente requieren de cierto tiempo y manejo y pueden producir problemas, especialmente en el cuidado intensivo de la salud.

Es un objeto de la presente invención superar dichos problemas y proporcionar los métodos adecuados para elaborar una composición hemostática seca y de almacenamiento estable que se puede proporcionar y utilizar en forma conveniente.

Estos métodos deben proporcionar formatos de producto que permiten una provisión convenienté de las composiciones hemostáticas "listas para utilizarse", especialmente en la medicina de cuidados intensivos, en donde el número de pasos de manejo debe mantenerse tan bajo como sea posible.

Breve Descripción de la Invención Por consiguiente, la presente invención proporciona un procedimiento para elaborar una composición hemostática seca y estable, dicho procedimiento comprende: a) proporcionar un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, tal como una preparación de trombina seca, b) proporcionar un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis, c) proporcionar dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada en un contenedor final, d) ya sea llenar dicho primer componente y dicho segundo componente en dicho contenedor final de manera que se obtiene una mezcla seca en dicho contenedor final, c2) o proporcionar dicho primer componente o dicho segundo componente en dicho contenedor final y agregar dicho segundo componente o dicho primer componente de manera que se obtiene una combinación de dicho primer componente con dicho segundo componente en dicho contenedor final, d) terminar el contenedor final para un dispositivo farmacéutico que se puede almacenar, dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada como una composición hemostática seca y estable.

El procedimiento proporciona la composición seca y estable de acuerdo con la presente invención en una forma conveniente que permite que la composición sea reconstituida fácilmente para su uso médico. La presente invención se refiere adicionalmente a un método para administrar una composición hemostática a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento de la presente invención al sitio objetivo. De acuerdo con otro aspecto, la presente invención se refiere a un contenedor final terminado obtenido mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención. La presente invención también se refiere a un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática producida mediante el procedimiento de la presente invención con un diluyente farmacéuticamente aceptable, así como también a un equipo que comprende el contenedor final terminado y otros medios para aplicar la composición (por ejemplo, un contenedor de diluyente). Las composiciones de acuerdo con la presente invención son particularmente útiles para proporcionar hemostasis en sitios de sangrado, incluyendo sitios de sangrado quirúrgico, sitios de sangrado traumático y los similares. Un uso de ejemplo de las composiciones puede ser en el sellado del tracto de tejido sobre una penetración de vaso sanguíneo creada para la cateterización vascular.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona un mejoramiento para la administración y manejo de composiciones hemostática, principalmente al proporcionar un producto de dos componentes en un formato de composición única conveniente. Las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención contienen un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, tal como una preparación de trombina seca (el "componente de trombina") y un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis (el "componente polimérico biocompatible hemostático"). Pueden estar presentes componentes adicionales. Los productos de este tipo son conocidos en principio en la materia, todavía en un formato diferente: normalmente, los componentes son provistos en la forma de entidades separadas en forma seca. Antes de mezclar los componentes para la administración en un paciente, los componentes secos normalmente se ponen en contacto por separados con los diluyentes adecuados. La mezcla de los componentes se realiza entonces mezclando los componentes reconstituidos por separado. Por ejemplo, un componente de trombina seco puede ser provisto, el cual es reconstituido mediante un diluyente farmacéuticamente aceptable (acuoso). La solución de trombina obtenida después de la reconstitución es utilizada entonces para mojar o solubilizar el polímero, normalmente bajo la formación de un hidrogel, el cual es aplicado entonces al paciente. Debido a que esto es por lo menos un procedimiento de dos pasos, el producto es "listo para utilizarse", sería más conveniente si un producto pudiera necesitar únicamente de un paso antes de estar listo para utilizarse. Sin embargo, como se estableció anteriormente, la naturaleza de los dos componentes evita una mezcla simple de los componentes en el curso del método de producción, principalmente debido a las pérdidas de estabilidad y actividad.

Con la presente invención, se proporcionan los procedimientos de producción, los cuales permiten que los dos componentes son provistos listos en una forma seca combinada lista para que se reconstituyan juntas. Los procedimientos de acuerdo con la presente invención no son únicamente factibles para los experimentos científicos de la mesa de trabajo, sino que son adecuados para la producción farmacéutica masiva industrial. Con la presente invención, fue posible proporcionar esta composición hemostática ya mezclada sin el riesgo de una degradación no deseada o pérdida de la actividad enzimática . Las composiciones resultantes tienen una estabilidad de almacenamiento que se puede comparar con la de los productos conocidos con anterioridad, aunque son más convenientes para el manejo debido a que la reconstitución y mezcla separada antes de la administración médica no es necesaria con los productos que se pueden obtener con la presente invención. Proporcionar un hidrogel, suspensión o solución lista para utilizarse de la composición hemostática es posible en un procedimiento de un paso, agregando simplemente un diluyente farmacéuticamente aceptable adecuado a la composición en el contenedor final. El contenedor final preferentemente es una jeringa diseñada para administrar directamente la composición hemostática después del contacto con el diluyente.

El agente que induce la coagulación es una sustancia seleccionada del grupo que consiste en trombina, un veneno de serpiente, un activador de plaquetas, un receptor de trombina que activa péptidos y un agente de precipitación de fibrinógeno, preferentemente es trombina.

La "preparación de trombina seca" puede ser elaborada a partir de cualquier preparación de trombina, la cual es adecuada para utilizarse en humanos (es decir, farmacéuticamente aceptable). Las fuentes adecuadas de trombina incluyen sangre, plasma o suero de humano o bobino (trombina de otras fuentes animales puede ser aplicada si no se esperan reacciones inmunes adversas) y la trombina de origen recombinante (por ejemplo, trombina recombinante humana); la trombina humana autóloga puede ser preferida para algunas aplicaciones. Preferentemente, la composición hemostática contiene de 10 a 100,000 Unidades internacionales (I.U.) de trombina, más preferentemente de 100 a 10,000 I.U., especialmente de 500 a 5,000 I.U. La concentración de trombina en la composición "lista para utilizarse" preferentemente está dentro del rango de 10 a 10,000 I.U.., más preferentemente de 50 a 5,000 I.U., especialmente de 100 a 1,000 I.U. /mi. El diluyente se utiliza en una cantidad para lograr la concentración final deseada en la composición "lista para utilizarse".

La "preparación seca de un polímero biocompatible" de acuerdo con la presente invención es conocido, por ejemplo, del documento WO 98/08550 A. Preferentemente, el polímero es un material granular biocompatible, biodegradable, estable en seco.

Una composición hemostática "seca" de acuerdo con la presente invención únicamente tiene un contenido residual de humedad, el cual puede corresponder aproximadamente al contenido de humedad de productos disponibles comparables, tales como Floseal® (Floseal, por ejemplo, tiene aproximadamente el 12% de humedad en la forma de un producto seco). Normalmente, la composición seca de acuerdo con la presente invención tiene un contenido de humedad residual por debajo de estos productos, preferentemente por debajo del 10% de humedad, más preferentemente por debajo del 5% de humedad, especialmente, por debajo del 1% de humedad. La composición hemostática de acuerdo con la presente invención también puede tener un contenido menor de humedad, por ejemplo, del 0.1% o incluso menor. Los contenidos de humedad preferidos de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención son del 0.1 al 10%, especialmente del 0.5 al 5%.

De acuerdo con la presente invención, la composición hemostática es provista en forma seca en el contenedor final. En la forma seca, los procedimientos de degradación o desactivación para los componentes, son reducidos de manera significativa y adecuada para permitir la estabilidad de almacenamiento. La estabilidad de almacenamiento adecuada puede determinarse con base en la actividad de trombina. Por consiguiente, una composición hemostática seca del tipo presente es estable en el almacenamiento, si no es menor que 400 I.U. /mi (para un producto de 500 I.U./ml) después de la reconstitución pasados 24 meses de almacenamiento en la forma seca a temperatura ambiente (25°C) todavía están presentes (es decir, el 80% de la actividad de trombina o más permanecen en comparación con la actividad inicial antes de la liofilización). Preferentemente, la composición de acuerdo con la presente invención tiene una estabilidad de almacenamiento mayor, es decir, de por lo menos el 90% de actividad de trombina permanece, especialmente por lo menos el 95% de actividad de trombina permanece después de estos 24 meses de almacenamiento.

Sin embargo, proporcionar una mezcla seca de trombina y un polímero biocompatible no es trivial, debido a que la mezcla tiene que elaborarse en la forma seca. Mezclar los componentes en la forma soluble (suspendida) y entonces empezar con el procedimiento de secado, tiene como resultado una degradación intolerable del material. Por ejemplo, incluso si la trombina y gelatina se mantienen a una temperatura de 4°C, es visible una degradación clara después de 24 horas.

El polímero y trombina "seco" de acuerdo con la presente invención, normalmente son provistos con tamaños de partícula de 0.1 a 5,000 µ??. Normalmente, las partículas de trombina utilizadas en la presente pueden ser más pequeñas que las partículas poliméricas; las partículas de trombina preferentemente tienen un diámetro de partícula medio ("diámetro de partícula medio" es el tamaño mediando medido por difractometría láser; "tamaño mediano (o diámetro de partícula mediano de masa) es el diámetro de partícula que divide la distribución de frecuencia por la mitad; cincuenta por ciento de las partículas de una preparación determinada tienen un diámetro más grande, y cincuenta por ciento de las partículas tienen un diámetro más pequeño) desde 1 hasta 100 pm, especialmente desde 5 hasta 50 µ??; las partículas poliméricas desde 10 hasta 1000 µ??, especialmente, de 50 a 500 pm (tamaño mediano). Aplicar partículas más grande depende principalmente de las necesidades médicas; las partículas con diámetros de partícula medios más pequeños, con frecuencia son más difíciles de manejar durante los procedimientos de producción. El polímero y la trombina secos, por consiguiente, son provistos en la forma de gránulos, especialmente en forma de polvo. Aunque los términos de polvo y gránulos (o granulados) en algunas ocasiones son utilizados para distinguir las clases separadas de material, los polvos son definidos en la presente como una sub-clase especial de materiales granulares. En particular, los polvos se refieren a aquellos materiales granulares que tienen tamaños de grano más finos, y que por consiguiente, tienen una mayor tendencia a formar aglomeraciones cuando fluyen; los polvos de trombina seca de acuerdo con la presente invención, preferentemente tienen un tamaño mediano entre 1 y 10 pm. Los gránulos incluyen materiales granulares más toscos que no tienden a formar aglomeraciones excepto cuando están mojados.

Por consiguiente, la presente invención utiliza en principio dos modalidades para llegar a esta meta. El primer principio incluye mezclar los dos componentes en el estado sólido antes de llenar el contenedor final; alternativamente, los componentes pueden ser agregados en forma sucesiva en el contenedor final. El mezclado puede lograrse por agitación del contenedor final, si así se desea. De manera específica, cuando se realiza el paso c1) en el procedimiento de la presente invención, se prefiere utilizar una preparación seca de un agente que induce la coagulación, tal como una trombina seca en forma de polvo, es decir, con un diámetro medio preferentemente de 1 a 10 µ?? (tamaño mediano). La preparación liofilizada de un agente que induce la coagulación, tal como trombina, puede comprender partículas más grandes, éstas incluso pueden ser obtenidas en la forma de una fase porosa de sólido discontinuo (también dependiendo de la técnica con la que ha sido liofilizada la trombina). Si dicho liofilizado es comprimido en partículas, las partículas obtenidas podrían tener una distribución de tamaño de partícula amplia. En dichos casos, es ventajoso contraer la distribución del tamaño de partículas moliendo el agente que induce la coagulación liofilizado, tal como trombina para obtener un polvo. Para dicha moltura, se aplican las técnicas e instrumentos de moltura aplicados normalmente para moler material liofilizado de proteína. Un rango de tamaño de partícula preferido de las partículas de un agente que induce la coagulación, tales como partículas de trombina (especialmente para partículas de trombina secadas por rocío) es de 0.1 a 500 µ? , más preferentemente de 0.5 a 100 pm, especialmente desde 1 hasta 50 µ??. De acuerdo con una modalidad especialmente preferida, el primer componente contiene la trombina obtenida mediante secado por rocío, preferentemente mediante secado por rocío anti-séptico. El secado por rocío puede ser realizado en cualquier aparato de secado por rocío, especialmente para el material de proteínas, preferentemente, los aparatos son esterilizados de inmediato antes de llevarlos a la solución de trombina para el secado por rocío. Preferentemente, el paso de secado por rocío es seguido por un paso de aglomeración, para crear un polvo de trombina.

De acuerdo con el segundo principio, uno de los componentes secos es provisto en el contenedor final y entonces se agrega el segundo componente. Esto se puede realizar colocando uno de los componentes en forma seca dentro del contenedor final y entonces agregar el segundo componente. Esto, sin embargo, también puede realizarse colocando uno de los componentes en la forma de una solución o suspensión (u otra preparación mojada) dentro del contenedor final, secando el componente, preferentemente mediante liofilización, y entonces, después de completar el procedimiento de secado (en el sitio en el contenedor final) agregar el otro componente en forma seca. Preferentemente, un agente que induce la coagulación, tal como trombina, se proporcionan en el contenedor final, secado entonces, preferentemente mediante liofilización, y entonces es combinado con el segundo componente. En una modalidad preferida de la presente invención, el paso c2) es por consiguiente, realizado mediante la liofilización de un agente que induce la coagulación acuoso que contiene la composición, tal como una composición que contiene trombina acuosa en dicho contenedor final, de manera que proporciona dicho primer componente en dicho contenedor final y agregando dicho segundo componente después de la liofilización.

Preferentemente, el procedimiento de acuerdo con la presente invención es llevado a cabo en un ambiente antiséptico, especialmente el paso de combinación en el contenedor final (paso d) o c2)) deben realizarse en forma antiséptica. También se prefiere empezar el procedimiento mediante los componentes que ya han sido esterilizados en forma adecuada y entonces realizar todos los pasos adicionales en forma antiséptica.

El paso final del método es el paso de terminado. Durante este paso, el contenedor final es sellado de manera adecuada y se deja listo para almacenamiento y/o venta. El paso de terminado puede comprender el etiquetado del contenedor final, empaque y realización (adicionalmente) de los procedimientos de esterilización (realizados, por ejemplo, sobre el contenedor final o sobre el producto empacado o equipo que comprende el contenedor final).

Preferentemente, el paso d) comprende esterilización de EO (óxido de etileno). La esterilización EO es común en el campo presente de la tecnología. El gas de óxido de etileno aniquila las bacterias (y sus endosporas), moho y hongos. La esterilización EO es utilizada para esterilizar las sustancias que podrían resultar dañadas por las técnicas que utilizan temperaturas altas tales como la pasteurización y autoclave.

Otras modalidades preferidas para la esterilización son la aplicación de irradiación ionizante, tales como irradiación ß o ?, o el uso de peróxido de hidrógeno vaporizado.

De acuerdo con una, modalidad, preferida, el contenedor final contiene adicionalmente una cantidad de un estabilizador efectiva para inhibir la modificación del polímero cuando es expuesto a radiación de esterilización, preferentemente ácido ascórbico, ascorbato de sodio, otras sales de ácido ascórbico o un antioxidante.

El contenedor final puede ser cualquier contenedor adecuado para alojamiento (y almacenamiento) de compuestos que se pueden administrar farmacéuticamente. Las jeringas, frascos, tubos, etc., pueden utilizarse; sin embargo, se prefiere de manera específica proporcionar las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención en una jeringa. Las jeringas han sido un medio de administración preferido para las composiciones hemostáticas, como se describió en la técnica anterior, debido a las ventajas de manejo de las jeringas en la práctica médica. Las composiciones pueden entonces ser aplicadas de manera preferida (después de la reconstitución) por medio de agujas específicas de la jeringa o por medio de los catéteres adecuados. Las composiciones hemostáticas reconstituidas (las cuales son reconstituidas preferentemente para formar un hidrogel) también se puede aplicar mediante otros medios diversos, por ejemplo, mediante una espátula, un cepillo, rocío, manualmente por presión, o mediante cualquier otra técnica convencional. Normalmente, las composiciones hemostáticas reconstituidas de acuerdo con la presente invención se aplicarán utilizando una jeringa o aplicador similar que tiene la capacidad de extrudir la composición reconstituida a través de un orificio, abertura, aguja, tubo u otro pasaje para formar un lecho, capa o porción similar de material. La alteración mecánica de las composiciones puede realizarse mediante extrusión a través de un orificio en la jeringa u otro aplicador, que normalmente tiene un tamaño dentro del intervalo desde 0.01 mm hasta 5.0 mm, preferentemente desde 0.5 mm hasta 2.5 mm. Preferentemente, sin embargo, la composición hemostática será preparada inicialmente a partir de una forma seca que tiene un tamaño de partícula deseado (el cual, a partir de la reconstitución, especialmente por hidratación, produce sub-unidades del tamaño de requisito (por ejemplo, sub-unidades de hidrogel)) o será alterada mecánicamente ya sea de manera parcial o total al tamaño requisito antes de un paso de extrusión final u otra aplicación. Esto es, desde luego evidente, que estos componentes mecánicos tienen que ser provistos en forma estéril (dentro y fuera) con el objeto de cumplir con los requerimientos de seguridad para uso en humanos.

Especialmente, cuando se aplica el paso c2) con un paso de secado, el diseño del contenedor final puede ser adaptado preferentemente al procedimiento de secado en el contenedor final.

Las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención son reconstituidas normalmente (re-hidratadas) antes de utilizar poniendo en contacto la composición seca con un diluyente adecuado. El diluyente de acuerdo con la presente invención puede ser cualquier medio de reconstitución adecuado para la composición hemostática seca, el cual permite el mojado adecuado de la composición seca. Preferentemente, la composición hemostática seca es reconstituida en un hidrogel como un formato "listo para utilizarse".

Los diluyentes adecuados son fluidos acuosos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, agua desionizada de grado farmacéutico (si todos los componentes iónicos o de regulador ya son provistos en la composición seca; "agua para inyección") o soluciones acuosas de grado farmacéutico que contienen iones y/o reguladores específicos. Estas soluciones acuosas pueden contener adicionalmente otros ingredientes comprendidos, tales como excipientes. Un "excipiente" es una sustancia inerte, la cual es agregada a la solución, por ejemplo, para asegurar que la trombina retiene su estabilidad química y su actividad biológica al ser almacenados (o esterilización (por ejemplo, por irradiación)), o por razones estéticas, por ejemplo, color. Los excipientes preferidos incluyen albúmina humana, manitol o acetato de sodio. Las concentraciones preferidas para la albúmina en el producto reconstituido son desde 0.1 hasta 100 mg/ml, preferentemente desde 1 hasta 10 mg/m. Las concentraciones de manitol preferidas pueden estar en el intervalo de concentración desde 0.5 hasta 500 mg/ml, especialmente desde 10 hasta 50 mg/ml. Las concentraciones de acetato de sodio preferidas están dentro del intervalo desde 1 hasta 10 mg/ml, especialmente desde 2 hasta 5 mg/ml.

Por ejemplo, un diluyente adecuado comprende agua para inyección, y -independientemente unos de los otros - NaCI (preferentemente de 50 a 150 mM, especialmente 110 nM), CaCI2 (preferentemente de 10 a 80 mM, especialmente 40 mM), albúmina de humano (preferentemente de hasta el 2% p/p, especialmente el 0.5% p/p), acetato de sodio (preferentemente de O a 50 mM, especialmente 20 mM) y manitol (preferentemente hasta el 10% p/p, especialmente el 2% p/p). Preferentemente, el diluyente también puede incluir un regulador o sistema de regulador, de manera que regule el pH de la composición seca reconstituida, preferentemente a un pH de 6.4 hasta 7.5, especialmente a un pH de 6.9 a 7.1.

En una modalidad preferida, el diluyente es provisto en un contenedor separado. Éste, preferentemente puede ser una jeringa. El diluyente en la jeringa puede entonces ser aplicado fácilmente al contenedor final para la reconstitución de las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención. Si el contenedor final también es una jeringa, ambas jeringas pueden ser terminadas juntas en un paquete. Por consiguiente, es preferido proporcionar las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención en una jeringa, la cual es terminada con una jeringa de diluyente con un diluyente farmacéuticamente aceptable para reconstituir dicha composición hemostática seca y estable.

La preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis (los "polímeros hemostáticos secos") de la presente invención puede formarse a partir de polímeros biológicos y no biológicos. Los polímeros biológicos adecuados incluyen proteínas, tales como gelatina, colágeno soluble, albúmina, hemoglobina, caseína, fibrinógeno, fibrina, fibronectina, elastina, queratina, y laminina, o derivados o combinaciones de los mismos. Es particularmente preferido el uso de gelatina o colágeno no fibrilar soluble, más preferentemente gelatina, y las formulaciones de gelatina de ejemplo son establecidas más adelante. Otros polímeros biológicos adecuados incluyen polisacáridos, tales como glicosaminoglicanos, derivados de almidón, xilano, derivados de celulosa, derivados de hemicelulosa, agarosa, alginato y quitosán; o derivados o combinaciones de los mismos. Los polímeros no biológicos adecuados serán seleccionados para poder degradarse, mediante cualquiera de dos mecanismos, es decir (1) la destrucción de la columna polimérica o (2) la degradación de las cadenas laterales, lo cual tiene como resultado la solubilidad acuosa. Los polímeros de formación de hidrogel no biológicos de ejemplos incluyen polímeros sintéticos, tales como poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilamidas, resinas de polivinilo, glicólidos poliláctidos, policaprolactonas, y polioxietilenos; o derivados o combinaciones de los mismos. También son posibles las combinaciones de clases diferentes de polímeros (por ejemplo, proteínas con polisacáridos, proteínas con polímeros de formación de hidrogel no biológicos, etc.).

Un polímero no reticulado junto con un auxiliar de nueva hidratación adecuado puede ser reticulado en cualquier forma adecuada para reconstituir, por ejemplo, para formar una base de hidrogel adecuada. Por ejemplo, las moléculas poliméricas pueden ser reticuladas utilizando agentes de reticulación bifuncionales o polifuncionales, los cuales se unen de manera covalente a dos o más cadenas de moléculas poliméricas. Los agentes de reticulación bifuncionales de ejemplo incluyen aldehidos, epóxidos, succinimidas, carbodiimidas, maleimidas, azidas, carbonatos, isocianatos, divinilsulfona, alcoholes, aminas, imidatos, anhídridos, haluros, silanos, diazoacetato, aziridinas y los similares. Alternativamente, la reticulación puede lograrse utilizando oxidantes y otros agentes, tales como periodatos, los cuales activan cadenas laterales o porciones sobre el polímero de manera que éstos pueden reaccionar con otras cadenas laterales o porciones para formar los enlaces de reticulación. Un método adicional de reticulación comprende exponer los polímeros a radiación, tal como radiación gama, para activar las cadenas poliméricas para permitir las reacciones de reticulación. También son adecuados los métodos de reticulación dehidrotérmicos. Los métodos preferidos para la reticulación de moléculas de gelatina son los que se describen a continuación.

De acuerdo con una modalidad , preferida de la presente invención, el polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis, por consiguiente, contiene un polisacárido reticulado, una proteína reticulada, o un polímero no biológico reticulado; o mezclas de los mismos.

Preferentemente, el polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis es un material granular. Este material granular puede dilatarse rápidamente cuando es expuesto a un fluido (es decir, el diluyente) y en su forma dilatada tiene la capacidad de contribuir a una pasta que puede fluir que puede aplicarse a un sitio con sangrado. El polímero biocompatible, por ejemplo, gelatina, puede ser provisto en la forma de una película, la cual puede entonces ser molida para formar un material granular. La mayor parte de las partículas contenidas en este material granular, preferentemente tienen tamaño de partículas de 100 a 1,000 µ?t?, especialmente de 300 a 500 pm (tamaño mediano).

De acuerdo con una modalidad preferida, el polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis es una gelatina reticulada. El polvo de gelatina reticulado seco puede prepararse para volverse a hidratar rápidamente si se pone en contacto con un diluyente adecuado. El polvo de gelatina, preferentemente comprenden partículas relativamente grandes, también denominadas como fragmentos o sub-unidades, como las que se describen en los documentos WO 98/08550 A y WO 2003/007845 A. Un tamaño de partícula preferido (mediano) estará dentro del rango desde 20 hasta 1,000 pm, preferentemente desde 100 hasta 750 µ??, especialmente desde 150 hasta 500 pm, aunque los tamaños de partícula fuera de este rango preferido pueden encontrarse útiles en muchas circunstancias. Las composiciones secas también desplegarán un "equilibrio de dilatación" significativo cuando son expuestas a un medio de rehidratación acuoso ( = diluyentes). Preferentemente, la dilatación estará en el rango desde el 400% hasta el 1,000%. "El equilibrio de dilatación" puede determinarse sustrayendo el peso seco del polvo de hidrogei de gelatina de su peso cuando está hidratado por completo y por consiguiente, está dilatado por completo. La diferencia es entonces dividida entre el peso y multiplicada por 100 para dar la medida de dilatación. El peso seco debe ser medido después de la exposición del material a una temperatura elevada durante un tiempo suficiente para remover substancialmente toda la humedad residual, por ejemplo, dos horas a una temperatura de 120°C. El equilibrio de hidratación del material puede lograrse sumergiendo el material seco en un diluyente adecuado, tal como solución salina acuosa, durante un período de tiempo suficiente para que el contenido de agua se vuelva constante, normalmente desde 18 hasta 24 horas a temperatura ambiente.

Una gelatina no reticulada junto con un auxiliar de rehidratación puede ser reticulada en cualquier forma adecuada, por ejemplo, para formar una base de hidrogei adecuada. Los polvos de gelatina reticulados secos de acuerdo con esta modalidad preferida, se obtienen preferentemente preparando los polvos en la presencia de determinados auxiliares de rehidratación. Dichos auxiliares de rehidratación estarán presentes durante la preparación de los polvos, aunque normalmente son removidos de los productos finales. Por ejemplo, los auxiliares de rehidratación los cuales están presente aproximadamente al 20% del contenido de sólidos total normalmente se reducirán por debajo del 1% en el producto final, con frecuencia por debajo del 0.5% por peso. Los auxiliares de rehidratación de ejemplo incluyen polietilénglicol (PEG), preferentemente que tiene un peso molecular de aproximadamente 1000; polivinilpirrolidona (PVP), preferentemente que tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 50,000; y dextrano que normalmente tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 40,000. Se prefiere emplear por lo menos dos de estos auxiliares de rehidratación cuando se preparan las composiciones de la presente invención, y más particularmente se prefiere emplear los tres.

Los métodos de ejemplo para producir gelatinas reticuladas son los siguientes. La gelatina se obtiene y es suspendida en una solución acuosa para formar un hidrogel no reticulado, que tiene normalmente un contenido de sólidos del 1% al 70% por peso, normalmente desde el 3% hasta el 10% por peso. La gelatina es reticulada, normalmente por la exposición ya sea a glutaraldehído (por ejemplo, del 0.01% al 0.05% p/p, durante la noche a una temperatura desde 0°C hasta 15°C en regulador acuoso), periodato de sodio (por ejemplo, 0.05 M, mantenido a una temperatura desde 0°C hasta 15°C durante 48 horas) o 1 -etil-3-(dimetilaminopropil)carbodiimida ("EDC") (por ejemplo, del 0.5% al 1.5% p/p durante la noche a temperatura ambiente), o mediante la exposición desde aproximadamente 0.3 hasta 3 megaradios de radiación de rayos gama o electrón. De manera alternativa, las partículas de gelatina pueden ser suspendidas en un alcohol, preferentemente alcohol metílico o alcohol etílico, a un contenido de sólidos del 1% al 70% por peso, normalmente del 3% al 10% por peso, y reticulados por exposición a un agente de reticulación, normalmente glutaraldeh ido (por ejemplo, el 0.01% al 0.1% p/p, durante la noche a temperatura ambiente). En el caso de aldehidos, el pH debe mantenerse durante aproximadamente desde 6 hasta 11, preferentemente de 7 a 10. Cuando la reticulación con glutaraldehído, las reticulaciones se forman por medio de bases Schiff, las cuales pueden ser estabilizadas mediante reducción subsiguiente, por ejemplo, mediante tratamiento con borohidruro de sodio. Después de la reticulación, los granulos resultantes pueden ser lavados en agua y opcionalmente ser enjuagados en alcohol, y se secaron. Los polvos secos resultantes pueden entonces ser provistos en el contenedor final como se describe en la presente.

Después de la reticulación, por lo menos el 50% (p/p) del auxiliar de rehidratación se removerá del hidrogel resultante. Normalmente, el auxiliar de rehidratación es removido por filtración del hidrogel, seguido por el lavado del pastel de filtro resultante. Dichos pasos de filtración/lavado pueden ser repetidos una o más veces adicionales con el objeto de limpiar el producto hasta un nivel deseado y para remover por lo menos el 50% del auxiliar de rehidratación, removiendo preferentemente por lo menos el 90% (p/p) del auxiliar de rehidratación presentes originalmente. Después de la filtración, la gelatina se seca, normalmente secando el pastel de filtro final que se produjo. El pastel de filtro seco puede entonces ser separado o molido para producir el polvo reticulado que tiene un tamaño de partícula en los rangos deseados establecidos anteriormente.

De acuerdo con una modalidad preferida, el contenedor final contiene adicionalmente una cantidad de un estabilizador efectiva para inhibir la modificación del polímero cuando es expuesto a radiación de esterilización, preferentemente ácido ascórbico, ascorbato de sodio, otras sales de ácido ascórbico o un antioxidante.

De acuerdo con otro aspecto, la presente invención también proporciona un método para administrar una composición hemostática a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención al sitio objetivo. Aunque en ciertas modalidades, también la composición seca puede ser aplicada directamente al sitio objetivo (y, opcionalmente ponerse en contacto con el diluyente en el sitio objetivo, si es necesario), se prefiere poner en contacto la composición hemostática seca con un diluyente farmacéuticamente aceptable antes de la administración al sitio objetivo, de manera que obtiene una composición hemostática en una forma mojada, especialmente una forma de hidrogel.

La presente invención, también se refiere a un contenedor final terminado obtenido mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención. Este contenedor terminado contiene los componentes combinados en una forma estéril, estable para almacenamiento y que se puede comercializar.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática producida mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención con un diluyente farmacéuticamente aceptable. La presente invención también se refiere a un equipo que comprende la composición hemostática seca y estable de acuerdo con la presente invención en forma terminada y un contenedor con un diluyente adecuado. Los componentes adicionales del equipo pueden ser las instrucciones de uso, los medios de administración, tales como jeringas, catéteres, cepillos, etc. (si las composiciones no son provistas ya en el medio de administración) u otros componentes necesarios para utilizar en la práctica médica (quirúrgica), tales como agujas substituto o catéteres, frascos adicionales o medios de cubiertas para heridas adicionales. Preferentemente, el equipo de acuerdo con la presente invención comprende un alojamiento de jeringa de la composición hemostática seca y estable y una jeringa que contiene el diluyente (o es provista para tomar el diluyente de otro contenedor de diluyente). Preferentemente, estas dos jeringas son provistas en una forma adaptada una con la otra, de manera que el diluyente puede ser administrado a la composición hemostática seca mediante otra entrada que la salida para administrar la composición reconstituida.

La presente invención se describe adicionalmente en los ejemplos que se encuentran a continuación, sin estar restringida a los mismos.

EJEMPLOS 1. Preparación de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención Materiales y Métodos Todas las variantes utilizan el mismo esquema de presentación de un equipo con una jeringa que contiene tanto la matriz de gelatina Floseal como la trombina en una forma estable, y una jeringa que contiene un medio de reconstitución líquido adecuado (por ejemplo, 0.9% de NaCI o 40 mM de CaCI2)- Ambas jeringas son esterilizadas por dentro y por fuera, de manera que la reconstitución puede ser realizada por la enfermera auxiliar en la sala de operaciones. La reconstitución se logra acoplando las dos jeringas de una manera familiar y mezclando los contenidos de las dos jeringas "moviéndolas" (es decir, la transferencia repetida de los contenidos de atrás hacia adelante entre las dos jeringas).

Variante de "Mezcla en polvo" (c1) La variante de "mezcla en polvo" se elabora mezclando gelatina seca y trombina liofilizada, y llenando ésta dentro de una jeringa única. Si se aplica, la matriz de gelatina es esterilizada por volumen mediante irradiación (igual que la que se utiliza para la esterilización final del producto ya puesto en el mercado).

Variante de "trombina en jeringa de liofilización" (c2) La "trombina en jeringa de liofilización" es elaborada liofilizando primero la solución de trombina dentro de la jeringa Floseal, y después, llenando los granulos de gelatina sobre la parte superior de la trombina liofilizada. Si se aplica, la matriz de gelatina es esterilizada por volumen mediante irradiación (igual que la que se utiliza la esterilización final del producto actual).

La solución de trombina es formulada y llenada en jeringas Floseal tapadas, lo cual permite la evacuación del interior de la jeringa para cerrar el contenedor. La solución de trombina es congelada y liofilizada utilizando un programa de liofilización adecuado.

Las jeringas no son tapadas en la parte posterior para permitir el llenado del polvo de gelatina desde atrás. La cantidad necesaria de gelatina es llenada sobre el liofilizado de trombina. El émbolo es colocado entonces dentro del cuerpo de jeringa. Las jeringas son colocadas dentro de un estante adecuado dentro de una cámara de evacuación con placas móviles para tapar las jeringas. Las placas son movidas hacia abajo sobre los émbolos de jeringa después del cierre de evacuación de las jeringas. Esto también sirve para compactar el pastel de liofilización de manera que ocupa un poco de espacio dentro de la jeringa. El producto está listo ahora para empacarse con la jeringa de diluyente, EPO, esterilización de las bolsas y almacenamiento.

Jeringa de diluyente La jeringa de diluyente contiene un medio de reconstitución adecuado para hidratar el producto. Este puede ser acoplado con la jeringa Floseal, ya sea directamente o por medio de un conector. El diluyente es transferido dentro de la jeringa Floseal, y el producto hidratado es transferido de atrás a adelante entre las jeringas acopladas en forma repetida para generar una pasta que puede fluir. La jeringa de diluyente puede ser preparada, por ejemplo, mediante un procedimiento tal como el siguiente: el medio es filtrado estéril y lleno en jeringas adecuadas (jeringas Toppac comunes, Clearshot, ...); y si es necesario, terminan esterilizadas por irradiación.

Granulado de gelatina.

La fabricación en volumen de los gránulos de gelatina se realiza de acuerdo con los método establecidos (WO 98/08550 A; WO 2003/00785 A; etc.). Los gránulos (gránulos de "Floseal"; matriz de "Floseal") son esterilizados en forma inmediata mediante irradiación gama. Para la esterilización pre-clínica, la matriz de Floseal se llena en botellas de vidrio Schott del tamaño adecuado.

La dosis de irradiación requerida en el nivel de bio-carga máxima actual (1000 cfu/muestra) es de 25 a 40 kGy para el producto en el contenedor final. El material de volumen es entonces almacenado a una temperatura de -20°C para fabricación adicional. c1: "mezcla de polvo" Preparación de trombina El polvo de trombina estéril en este ejemplo es fabricado en dos formas diferentes: moliendo la trombina liofilizada en una forma antiséptica o mediante secado por rocío antiséptico. Liofilización de volumen con moltura antiséptica subsiguiente La solución de trombina formulada con 500 lU/ml de trombina, 50 gl de HSA y 4.4 g/l de NaCI es transferida a una bandeja de liofilización estéril del tamaño adecuado en un estante de flujo laminar y la bandeja es cubierta con una hoja de aluminio estéril para transportarla a la liofilización. La bandeja de liofilización es colocada dentro del liofilizador limpio, y la liofilización es llevada a cabo con el programa adecuado. Después de que la liofilización es completada, el liofilizador es ventilado utilizando nitrógeno de grado médico, y la bandeja de liofilización es cubierta nuevamente con una hoja de aluminio estéril Para la moltura utilizando el molino Retsch MM200 de bola, los recipientes de moltura de tornillo superior de 25 mi y las bolas de moltura adecuadas (12 mm) son esterilizados ya sea por autoclave o por inmersión en alcohol, y los recipientes de moltura estériles son transportados al estante de flujo laminar. Los recipientes de moltura se llenan con una cantidad adecuada de la trombina liofilizada, y se agrega una bola de moltura estéril. Los recipientes se cierran entonces con el tornillo superior y se llevan al molino de bola para la moltura. Después de la moltura, los recipientes se llevan nuevamente al estante de flujo laminar, en donde son vaciados con espátulas estériles en un recipiente de recolección estéril (50 mi Falcon o botella de vidrio) y son llenados nuevamente para la moltura repetida.

Secado por rocío antiséptico Para la producción pre-clínica, el secado por rocío es realizado utilizando un secador de rocío Büchi, configurado con acondicionamiento de gas para el gas portador.

Polvo de trombina y gelatina antisépticos colocados en jeringas Los dos polvos esterilizados se llenan en forma secuencial dentro de la jeringa Floseal en una escala analítica. El peso de la matriz de Floseal es calculado como el peso de llenado en g = 70.4/contenido de sólidos en %, asegurando que 704 mg de la matriz Floseal seca se colocan en la jeringa. El peso del polvo de trombina, que contienen 2000 IU de trombina para 5 mi de producto final de Floseal, es 4 (mi) x 55 (mg/ml) = 220 mg. El llenado se realiza con una precisión de +/- el 5%, los límites tienen que ser calculados para cada lote de matriz Floseal.

En primer lugar, el polvo de trombina molido se coloca dentro de las jeringas Floseal esterilizadas que han sido cerradas con el tapón luer estéril adecuado y que son colocadas sobre' la escala analítica utilizando un estante pequeño. La escala se pesa, y se coloca la cantidad adecuada de polvo de trombina dentro de la jeringa utilizando ya sea una espátula manual esterilizada o una espátula de vibración con el anexo adecuado. La siguiente escala se pesa nuevamente, y se coloca la cantidad adecuada de matriz de Floseal dentro de la jeringa utilizando ya sea una espátula manual esterilizada o una espátula de vibración con el anexo adecuado. El émbolo es entonces colocado desde la parte de atrás a una posición justo en la parte superior de la matriz de Floseal, si es necesario abriendo ligeramente el tapón luer, si es necesario.

De manera alternativa, el orden de llenado puede ser invertido, dando como resultado que el polvo de trombina está en la parte posterior de la jeringa.

De manera alternativa, los dos polvos pueden ser mezclados antes de colocarse, eliminando el segundo paso de llenado. c2: "trombina en jeringa de liofilización" 4.0 mi de trombina 500/ lU/ml fueron colocados en una jeringa de liofilización, liofilizados y compactados bajo vacío. Entonces la gelatina Floseal se pesó en el interior de la jeringa llenándola sobre la parte superior de la trombina compactada. La jeringa se cerró y se compactó nuevamente bajo vacío. Todos los pasos de preparación fueron realizados bajo condiciones antisépticas. 2. Efectividad en el modelo de abrasión de hígado porcino El propósito de este estudio es comparar la efectividad de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención con un producto estándar establecido (Floseal VH S/D; Baxter Healthcare) en el modelo de abrasión de hígado porcino. Floseal VH S/D es una matriz de gelatina que administra trombina para detener el sangrado activo dentro de un período de 2 minutos de la aplicación. Este producto requiere de una preparación de 2 pasos, (1) reconstitución de trombina y (2) hidratación de las partículas de gelatina con la trombina reconstituida. El producto de acuerdo con la presente invención está diseñado para reconstituir la composición hemostática seca en 1 paso y es un mejoramiento principal para la preparación de 2 pasos, la cual es desfavorable cuando el producto se necesita rápidamente o en grandes cantidades.

Modelo de abrasión de hígado porcino.

Seis cerdos hembra domésticos, peso medio de 55.0 kg (rango de 52.4 a 58.4 kg), se obtuvieron de Oak Hill Genetics (Ewing, Illinois) y se pesaron en el momento de la cirugía. A la llegada, los animales fueron aislados en cuarentena durante 6 días. En el momento de la cirugía, los seis cerdos no mostraron señales de enfermedad clínica. Se utilizaron etiquetas de orejas para identificar a los animales y se hicieron referencias cruzadas a los números de identificación asignados. Los animales fueron agrupados en corrales. Los cerdos recibieron agua ad libitum y una dieta estándar para cerdos una vez al día.

Los cerdos son un modelo cardiovascular bien aceptado y son adecuados para este tipo de estudio. Los lóbulos grandes, múltiples del hígado dejaron lesiones múltiples para comparaciones directas de los diferentes artículos de prueba.

Anestesia y terapia de fluidos.

Los cerdos son medicados con Midazolam (0.3 mg/kg, 1M) e inducidos con máscara con Isoflurano en un portador a 2:1 de portador de nitrógeno a oxígeno. Los cerdos fueron intubados y ventilados a un índice de 10 a 15 respiraciones por minuto. La anestesia se mantuvo con Isoflurano en un portador de oxígeno.

Los cerdos recibieron una infusión de índice continuo de Solución de Ringer Lactada calentada.

Procedimiento de abrasión de hígado Se utilizó un modelo de abrasión de hígado porcino para este estudio. Seis cerdos son preparados con el objeto de que 120 lesiones (40 por grupo de tratamiento) son evaluados y suficientes para detectar una diferencia en los índices del 80 por ciento contra el 40 por ciento con a = 0.05 y potencia = 90%. Cada serie es confiada ya sea al lóbulo medial, lateral izquierdo o lateral derecho.

Cada serie de lesiones contiene tres abrasiones de hígado de 1 cm de diámetro, 3-4 de profundidad creadas utilizando un taladro de mano fijo con papel esmerilado. El sangrado es evaluado y la lesión es tratada en forma aleatoria y ciega con la referencia o el artículo de prueba. El artículo de referencia y de prueba es aleatorizado utilizando un generador de número aleatorio. Cada artículo es colocado sobre la lesión, mantenido en su lugar con una gaza húmeda durante 2 minutos y se evaluó en forma ciega para hemostasis a los 2, 5 y 10 minutos después del tratamiento. El exceso de referencia o artículo de prueba es irrigado lejos después de una evaluación de 5 minutos.

Protocolo de heparinización Se tomó un tiempo de coagulación activado en la línea de base (ACT) y cada cerdo recibe una dosis de carga de heparina, 200 lU/kg. El ACT es evaluado cada 10 minutos hasta que el ACT es por lo menos 2 veces la línea de base. Si el ACT mide menos que o casi igual a 2 veces la línea de base, el cerdo se trató con un bolo de dosis de heparina, 75 I.U./kg.

Una vez que es mayor que 2 veces la línea de base, el ACT es medido cada 20 minutos. Si el ACT mide menos que o casi igual al objetivo de 2 veces la línea de base, el cerdo recibe un bolo de dosis de heparina, 40 I.U./kg. Si el ACT mide más que el objetivo de 2 veces la línea de base, el cerdo no es tratado o recibe un bolo de dosis de mantenimiento de heparina, limitado a no más de 2,000 IU/hora.

Toda la heparina es suministrada mediante un catéter venoso periférico. Todas las muestras de sangre son tomadas de un catéter yugular. Los valores de referencia de la presión sanguínea y el ritmo cardíaco son registrados en el momento de las mediciones ACT.

Evaluación de hemostasis La hemostasis es evaluada a 0, 2, 5 y 10 minutos después de que se ha creado y tratado la serie de lesiones, en donde 0 minutos se refiere a previo al tratamiento. Las calificaciones de 0, 1, 2, 3, 4, y 5, son asignadas a no sangrado, exudado, muy suave, suave, moderado y severo, respectivamente. Las tres lesiones son tratadas aproximadamente al mismo tiempo para evitar la diferencia en ubicación y coagulación que puede ser el resultado del tratamiento de cada una en forma independiente. La sangre de la lesión es limpiada después de cada evaluación según sea necesario.

Mediciones y registros El ACT, hemostasis, presión sanguínea y ritmo cardíaco son evaluados de acuerdo con los métodos estándar.

Análisis estadístico La unidad de muestra para este estudio es el sitio de lesión del hígado con 40 lesiones por grupo de tratamiento para un total de 120 lesiones.

Se utilizó la regresión logística múltiple para evaluar el efecto del tratamiento en la clasificación de sangrado (0 = no, 1 = exudado, 2 = muy ligero, 3 = ligero, 4 = moderado y 5 = severo) a 2, 5 y 10 minutos posteriores al tratamiento. Las variables independientes incluyen grupo de tratamiento, cerdo, lóbulo del hígado (medio, derecho o izquierdo) y clasificación de sangrado inicial. Las proporciones de exudado para los efectos de FB/FS, Lyo/FS, FB/Lyo, y sus intervalos de confianza son calculadas en cada punto de tiempo después del tratamiento.

Las ubicaciones de las lesiones no son distribuidas de manera uniforme a través de los tres lóbulos y los cerdos. El efecto de lóbulo no se encontró ser significativo, y por consiguiente, los análisis son realizados nuevamente sin este efecto. Las conclusiones se basan en los análisis sin el efecto de lóbulo en el modelo.

Resultados El desempeño de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención no es significativamente diferente de Floseal VH S/D en todos los puntos de tiempo. Esto muestra que el método de producción de acuerdo con la presente invención (c1/c2) y el modo de reconstitución de 1 paso no tiene un impacto negativo sobre el desempeño de la composición, sino que proporcionan la ventaja deseada en el manejo práctico, proporcionando de esta manera la solución del objeto de la presente invención.

Experimentos animales adicionales Una evaluación pre-clínica es realizada para comparar la eficacia in vivo de "mezcla en polvo" de Floseal y "Trombina en jeringa de liofilización" Floseal con Floseal VH en un modelo muy estricto (altamente anti-coagulado). Este modelo consiste en una perforación de hígado de espesor completo de 5 mm con 4 incisiones adicionales que radian desde el defecto de perforación en una forma transversal. Se utilizaron 6 animales por grupo de estudio, estos animales fueron heparinizados a 4,000 I.U./kg. Después de realizar la lesión, el Floseal reconstituido es aplicado, y se aplica presión ligera con una gaza húmeda durante 2 minutos. Después de este tiempo, se evalúa la hemostasis primaria. Si la hemostasis primaria no es lograda, se vuelve a aplicar el producto hasta que se logra la hemostasis, o se acaba el producto (5 ml)/tiempo (15 minutos). Los puntos finales primarios son el logro de la hemostasis primaria (si/no) y el tiempo de la hemostasis (minutos).

Si se logra la hemostasis primaria, los animales fueron cerrados quirúrgicamente, y después de 24 horas, los animales son evaluados en búsqueda de nuevo sangrado.

Todas las variantes (c1/c2) produjeron resultados en términos de tiempo para hemostasis que son equivalentes o mejor que el Floseal estándar en esta sesión de laboratorio pre-clínica particular.

Claims (23)

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para elaborar una composición hemostática seca y estable, dicho procedimiento comprende: a) proporcionar un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, b) proporcionar un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis, c) proporcionar dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada en un contenedor final d) ya sea llenar dicho primer componente y dicho segundo componente en dicho contenedor final de manera que se obtiene una mezcla seca en dicho contenedor final, c2) o proporcionar dicho primer componente o dicho segundo componente en dicho contenedor final y agregar dicho segundo componente o dicho primer componente de manera que se obtiene una combinación de dicho primer componente con dicho segundo componente en dicho contenedor final, d) terminar el contenedor final para un dispositivo farmacéutico que se puede almacenar, dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada como una composición hemostática seca y estable.

2. El procedimiento tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque el paso d) o c2) se realiza bajo condiciones antisépticas.

3. El procedimiento tal y como se describe en la reivindicación 1 o 2, caracterizado además porque el paso c2) es realizado mediante la liofilización de una preparación acuosa de un agente que induce la coagulación en dicho contenedor final de manera que proporciona dicho componente en dicho contenedor final y agregando dicho segundo componente después de la liofilización.

4. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque el paso d) comprende un paso de esterilización de óxido de etileno o un tratamiento con irradiación de ionización.

5. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado además porque dicho primer componente es una preparación de trombina seca, preferentemente en forma de partículas, preferentemente en forma de polvo.

6. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque dicho primer componente contiene la trombina obtenida mediante secado por rocío, preferentemente mediante secado por rocío antiséptico.

7. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado además porque el paso c2) es realizado mezclando dicho primer componente y dicho segundo componente después de la combinación.

8. El procedimiento tal y . como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque se utiliza una jeringa como dicho contenedor final.

9. El procedimiento tal y como se describe en la reivindicación 8, caracterizado además porque dicha jeringa es una jeringa terminada junto con una jeringa de diluyente con un diluyente farmacéuticamente aceptable para reconstituir dicha composición hemostática seca y estable.

10. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque dicho primer componente comprende trombina humana.

11. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado además porque dicho primer componente comprende trombina humana recombinante.

12. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible . adecuado para utilizarse en hemostasis contiene una proteína seleccionada del grupo que consiste de gelatina, colágeno soluble, albúmina, hemoglobina, fibrinógeno, fibrina, caseína, f ibronectina , elastina, queratina, y laminina; o derivados o combinaciones de los mismos.

13. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis contiene un polisacárido seleccionado del grupo que consiste de glicosaminoglicanos, derivados de almidón, derivados de celulosa, derivados de hemicelulosa, xilano, agarosa, alginato y quitosán; o derivados o combinaciones de los mismos.

14. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis contiene un polímero seleccionado del grupo que consiste de poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilamidas, resinas de polivinilo, poliláctido-glicólidos, policaprolactonas, y polioxietilenos; y derivados y combinaciones de los mismos.

15. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis, contiene un polisacárido reticulado, una proteína reticulada, o un polímero no biológico reticulado; o mezclas de los mismos.

16. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis es un material en partículas, preferentemente un material granular.

17. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis es una gelatina reticulada.

18. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado además porque dicho contenedor final contiene adicionalmente una cantidad de un estabilizador efectiva para inhibir la modificación del polímero cuando es expuesto a radiación de esterilización, preferentemente ácido ascórbico, ascorbato de sodio, otras sales de ácido ascórbico o un antioxidante.

19. Un método para administrar una composición hemostática a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 al sitio objetivo.

20. El método tal y como se describe en la reivindicación 19, caracterizado además porque comprende adicionalmente el paso de poner en contacto dicha composición hemostática con un diluyente farmacéuticamente aceptable, de manera que se obtiene una composición hemostática en una forma de hidrogel. .

21. Un contenedor final terminado obtenido mediante el procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18.

22. Un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática producida mediante el procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, con un diluyente farmacéuticamente aceptable.

23. Un equipo para la administración de una composición hemostática que comprende el contenedor terminado tal y como se describe en la reivindicación 21 y un contenedor con un diluyente farmacéuticamente aceptable.