KR920012442A - 피치아 파스토리스 산성 인산효소 유전자의 dna 단편 및 이를 사용하는 방법 - Google Patents

피치아 파스토리스 산성 인산효소 유전자의 dna 단편 및 이를 사용하는 방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

피치아 파스토리스 산성 인산효소 유전자의 DNA 단편 및 이를 사용하는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 피치아 파스토리스(Pichia Pastoris)의 산성 인산효소 유전자(SEQ ID NO :1)의 제한지도를 제공한다.

Claims (36)

  1. 피치아 파스토리스 산성 인산효소 유전자(SEQ ID NO :1)를 포함하는 분리된 DNA 단편.
  2. 제1항에 있어서, 제1도에 타나낸 바와 같은 제한지도(SEQ ID NO :1)를 갖는 DNA 단편.
  3. 제1항에 있어서, 하기의 뉴클레오티드 서열(SEQ ID NO :1)을 갖는 DNA 단편:
  4. 피치아 파스토리스 산성 인산효소 5´조절영역(SEQ ID NO :2)을 포함하는 분리된 DNA 단편.
  5. 제4항에 있어서, 제1도에 나타낸 바와 같은 제한지도(SEQ ID NO :2)를 갖는 DNA 단편.
  6. 제4항에 있어서, 하기의 뉴클레오티드 서열(SEQ ID NO :2)을 갖는 DNA 단편:
  7. 제4항, 5항 또는 6항에 있어서, 적어도 하나의 폴리펩티드를 암호하는 이종 DNA 서열에 작동가능하게 연결된 DNA 단편.
  8. 제7항에 있어서, 상기 이종 DNA 서열은 조직의 플라스미노겐 활성제를 암호하는 분리된 DNA 단편.
  9. 피치아 파스토리스 산성인산효소 신호서열(SEQ ID NO :3)을 포함하는 분리된 DNA단편.
  10. 제9항에 있어서, 제1도에 나타낸 바화 같은 제한지도(SEQ ID NO :3)를 갖는 DNA 단편.
  11. 제9항에 있어서, 하기의 뉴클레오티드 서열(SEQ ID NO :3)을 갖는 DNA 단편:
    ATGTTTTCTCCTATTCTAAGT
    PHO 신호 서열 → MetpheserProlleLeuSer
    30 50
  12. 제9항, 10항 또는 11항에 있어서, 적어도 하나의 폴리펩티드를 암호하는 이중 DNA 서열에 작동가능하게 연결된 DNA 단편.
  13. 제12항에 있어서, 상기 이종 DNA 서열은 조직의 폴라스미노겐 활성제를 암호하는 DNA 단편.
  14. 피치아 파스토리스 산성 인산효소 유전자로부터의 신호서열(SEQ ID NO :3)의 존재에 의해 조작되는, 진핵생 물의 세포로 부터 단백질을 분비시키는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 진핵생물 세포는 효모세포인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 효모는 피치아 파스토리스인 방법.
  17. 제14항, 15항 및 16항 중 한항에 있어서, 상기 단백질은 조직의 플라스미노겐 활성제인 방법.
  18. 피치아 파스토리스 산성 인산효소 구조 유전자(SEQ ID NO :4)를 포함하는 분리된 DNA 단편.
  19. 제18항에 있어서, 제1도에 나타낸 바와 같은 제한지도(SEQ ID NO :4)를 갖는 DNA 단편.
  20. 제18항에 있어서, 하기의 뉴클레오티드 서열(SEQ ID NO :4)을 갖는 DNA 단편:
  21. 피치아 파스토리스의 산성 인산효소 3′전사 종료서열(SEQ ID NO :5)을 포함하는 분리된 DNA 단편.
  22. 제21항에 있어서, 제1도에 나타낸 바와같은 제한지도(SEQ ID NO :5)를 갖는 DNA 단편.
  23. 제21항에 있어서, 하기의 뉴클레오티드 서열(SEQ ID NO :5)을 갖는 DNA 단편:
  24. 플라스미드 pLP24.
  25. 플라스미드 pT37.
  26. 이종 폴리펩티드를 암호하는 DNA 서열에 작동가능하게 연결된 피치아 파스토리스로부터 유래된 산성 인산효소 5′조절영역 또는 그와 동일한 것으로 형질전환된 적당한 숙주세포를, 인산염의 농도가 발현에 영향을 미칠 배지와 접촉시킴으로 구성되는, 숙주세포로부터 폴리펩티드를 발현시키는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 숙주세포는 피치아 파스토리스인 방법.
  28. 제26항 또는 27항에 있어서, 상기 이종 DNA는 거기에 작동가능하게 연결된 신호서열을 부기적으로 함유하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 신호서열은 피치아 파스토리스 산성 인산효소 신호서열(SEQ ID NO :3)인 방법.
  30. 5′조절영역에 작동가능하게 연결된 피치아 파스토리스 산성 인산효소 신호서열(SEQ ID NO :3)을 포함하는 분리된 DNA단편.
  31. 제30항에 있어서, 상기5′조절영역은 피치아 파스토리스 산성 인산효소5′조절영역(SEQ ID NO :2)인 DNA 단편.
  32. 제30항에 있어서, 상기5′조절영역은 피치아 파스토리스 알코올 옥시다제(AOX 1)5′ 조절영역인 DNA 단편.
  33. 제30항, 31항 또는 32항에 있어서, 적어도 하나의 폴리펩티를 암호하는 이종 DNA 서열에 작동가능하게 연결된 DNA 단편.
  34. 제33항에 있어서, 상기 이종 DNA는 조직의 폴리스미노겐 활성제를 암호하는 DNA 단편.
  35. 피치아 파스토리스PHO1 유전자의5′및3′측면 서열을 포함하는, 통합성 벡터를 사용하여 피치아 파스토리스 PHO1좌에서 통합을 조작하는 방법.
  36. 형질전환된 피치아 파스토리스를 저농도 인산염 지시 평판상에서 배양하고, 하룻밤동안 증식시키고, 결과 생성된 집락을 백색에 대해 선별하는, PHO1 좌에서 통합된 발현벡터를 함유하는 피치아 파스토리스 형질전환체를 확인하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개되는 것임.
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