KR20160062009A - 항―lps 011 항체 - Google Patents
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Abstract
녹농균에 대해 우수한 항균 활성을 갖는 물질, 및 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물을 제공하는 것. 녹농균의 LPS O11 항원에 특이적으로 결합하고, 우수한 항균 활성을 갖는 항체를 포함하는 의약 조성물의 제공 등.
Description
본 발명은, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방약으로서 유용한 물질, 그리고 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.
녹농균은 자연 환경 중에 존재하는 대표적인 상재균의 일종이고, 면역력이 저하한 사람에 있어서의 기회 감염증의 원인균으로서 잘 알려져 있다. 또, 의료 관련 감염증에 있어서 분리율과 사망률이 높은 점에서 가장 문제시되는 균종 중 하나이다. 분리율은 의료 관련 감염증 전체의 원인균으로서 6 번째, 기관 삽관 유래의 폐렴에 있어서는 2 번째로 고율이고, 또 사망률은 혈류 감염에서는 27.6-47.9 %, 기관 삽관 유래 폐렴에서는 42.1-87 % 라는 보고가 있다 (비특허문헌 1 내지 3). 또한, 녹농균은 소독약이나 항생 물질에 대한 저항력이 원래부터 높은 데다가, 후천적으로 약제 내성을 획득한 것도 많기 때문에, 치료에 어려움을 겪는 일이 많다. 녹농균에 대한 항균약으로서 카르바페넴계, 세펨계, 페니실린계, 퀴놀론계 등을 들 수 있지만, 이들에 대한 내성률은 각각 25.3 %, 11.2 %, 17.5 %, 30.7 % 로 고율이다 (비특허문헌 1). 특히 이들 항균약 복수에 내성을 나타내는 다제내성균에 유효한 항균약이 거의 없기 때문에, 다제내성 녹농균에도 유효성을 나타내는 새로운 항녹농균약이 요구되고 있다.
녹농균은 그람 음성균이기 때문에, 표층에 리포폴리사카라이드 (LPS) 를 갖고, 이 LPS 의 외측에 O 항원이라 불리는 당사슬 구조가 존재한다. O 항원은 항원성을 갖고, 또 다양한 점에서 균주의 분류법으로서 이용되어 왔다 (비특허문헌 4, 5). 녹농균의 LPS O 항원의 혈청형은 일반적으로 20 종 있는 것이 알려져 있지만, 최근 다제내성 녹농균에서는 O11 항원을 갖는 주 (株)(O11 주) 의 비율이 높은 것이 보고되어 있다. 일본에 있어서는 다제내성 녹농균의 99 % 혹은 약 60 % 가 O11 주였다는 보고가 있고, 또 프랑스, 벨기에, 체코 공화국 등 유럽에서도 다제내성 녹농균의 대부분이 O11 주였다는 보고가 있다 (비특허문헌 6 내지 11).
항체는 옛날부터 생체 내에 있어서 감염 방어로 기능하는 것이 알려져 있다. 녹농균의 LPS O 항원에 대한 항체는 많이 보고되어 있고, 옵소닌 활성에 의해 동물의 감염 모델에서 치료 효과를 나타내는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 12 내지 14). 이 점에서 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 항체는 다제내성 녹농균에 대한 신약이 되는 것이 기대되고, 항LPS O11 항체의 보고는 이미 몇 가지 있다 (특허문헌 1, 2).
본 발명은 O11 주의 녹농균을 타겟으로 한 치료용 및 진단용 항체이다. 치료용 및 진단용 항체로는 고활성의 것이 바람직하지만, 그 활성으로서 옵소닌 활성이 중요하다. 또, 항체는 항원 특이성이 높은 것이 알려져 있지만, 치료용 및 진단용 항체로서 O11 주를 폭넓게 망라할 수 있는 고커버율의 것이 바람직하다. 본 항체는 LPS O11 항원에 대한 항체이고, 종래 항체에 비해 옵소닌 활성이 강하고, 또 커버율도 보다 높은 점에서 보다 유용성이 높다.
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본 발명의 목적은, 녹농균에 대해 우수한 항균 활성을 갖는 물질, 및 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방제를 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 예의, 검토를 실시한 바, 녹농균의 LPS O11 항원에 특이적으로 결합하고, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방 효과를 갖는 신규 항체를 취득하는 것에 성공해, 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은, 이하의 발명을 포함한다.
(1) 녹농균의 LPS 를 인식하는 항체로서, O11 항원에 결합하고, O1, O2, O3, O4, O5, O6, O7, O8, O9, O10, O13, O14, O15, O16, O17, O18, O19, O20 항원, 및 O 항원 결손주에 결합하지 않고, O11 임상 분리주에 대한 커버율이 85 % 이상인 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(2) O11 임상 분리주에 대한 커버율이 95 % 이상인, (1) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(3) 녹농균의 LPS 를 인식하는 항체로서, O11 항원에 결합하고, O1, O2, O3, O4, O5, O6, O7, O8, O9, O10, O13, O14, O15, O16, O17, O18, O19, O20 항원 및 O 항원 결손주에 결합하지 않고, ATCC 29260 으로 특정되는 녹농균에 대한 옵소닌 활성의 50 % 증식 저해 최소 농도가 12 ng/㎖ 이하인 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(4) ATCC 29260 으로 특정되는 녹농균에 대한 옵소닌 활성의 50 % 증식 저해 최소 농도가 4.1 ng/㎖ 이하인, (3) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(5) 배열 번호 8 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 (重鎖) 가변 영역 배열, 및 배열 번호 4 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 (輕鎖) 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 배열 번호 16 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 그리고 배열 번호 24 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나와 교차 경합하는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(6) 배열 번호 8 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 4 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 배열 번호 16 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 그리고 배열 번호 24 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나가 결합하는 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는, (5) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(7) 중쇄 배열이, CDRH1, CDRH2, CDRH3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRH1 은 배열 번호 9 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH2 는 배열 번호 10 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH3 은, 배열 번호 11 에 나타내는 아미노산 배열로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것 ; 및
경쇄 배열이 CDRL1, CDRL2, CDRL3 을 갖는 가변 영역을 포함하고,
상기 CDRL1 은 배열 번호 5 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL2 는 배열 번호 6 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL3 은, 배열 번호 7 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (6) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(8) 배열 번호 8 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 4 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (7) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(9) 중쇄 배열이, CDRH1, CDRH2, CDRH3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRH1 은 배열 번호 17 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH2 는 배열 번호 18 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH3 은, 배열 번호 19 에 나타내는 아미노산 배열로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것 ; 및
경쇄 배열이 CDRL1, CDRL2, CDRL3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRL1 은 배열 번호 13 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL2 는 배열 번호 14 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL3 은, 배열 번호 15 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (6) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(10) 배열 번호 16 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (9) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(11) 중쇄 배열이, CDRH1, CDRH2, CDRH3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRH1 은 배열 번호 25 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH2 는 배열 번호 26 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH3 은, 배열 번호 27 에 나타내는 아미노산 배열로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것 ; 및
경쇄 배열이 CDRL1, CDRL2, CDRL3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRL1 은 배열 번호 13 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL2 는 배열 번호 14 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL3 은, 배열 번호 15 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (6) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(12) 배열 번호 24 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (11) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(13) Fab, F(ab')2, Fab' 및 Fv 로 이루어지는 군에서 선택되는, (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 항체의 항원 결합 단편
(14) scFv 인 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 항체
(15) 키메라 항체인 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(16) 인간화되어 있는 것을 특징으로 하는, (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(17) 중쇄가 인간 면역 글로불린 G1 중쇄의 정상 영역을 포함하고, 경쇄가 인간 면역 글로불린 κ 경쇄의 정상 영역을 포함하는, (1) 내지 (16) 중 어느 하나에 기재된 항체
(18) 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편으로서,
(a) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 중쇄 가변 영역 배열 :
a1) 배열 번호 57 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a2) 배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a3) 배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a4) 배열 번호 63 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a5) 배열 번호 65 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열 ; 및
(b) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 경쇄 가변 영역 배열 :
b1) 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b2) 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b3) 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b4) 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b5) 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(19) 배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (18) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(20) 배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (18) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(21) 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편으로서,
(a) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 중쇄 가변 영역 배열 :
a1) 배열 번호 77 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a2) 배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a3) 배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a4) 배열 번호 83 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a5) 배열 번호 85 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열 ; 및
(b) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 경쇄 가변 영역 배열 :
b1) 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b2) 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b3) 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b4) 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b5) 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(22) 배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (21) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(23) 배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 (21) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편
(24) (18) 내지 (23) 중 어느 하나에 기재된 항체에 있어서, 카르복실기 말단측의 1 내지 수개의 아미노산이 결실한 중쇄를 포함하는 항체
(25) (1) 내지 (24) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물
(26) 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방제인 것을 특징으로 하는, (25) 에 기재된 의약 조성물
(27) (1) 내지 (24) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나, 그리고 페니실린계, 세펨계, 카르바페넴계, 모노박탐계, 퀴놀론계, 아미노 배당체계, 폴리믹신계, 리팜피신, 매크롤라이드계 항균약으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
(28) 녹농균 감염증이, 다제내성 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환인 것을 특징으로 하는, (26) 또는 (27) 에 기재된 의약 조성물
(29) 녹농균 감염증이, 혈류 감염, 패혈증, 수막염, 심내막염, 중이염, 부비강염, 폐렴, 폐농양, 농흉, 만성 기도 감염증, 복막염, 수술후 감염증, 담낭염, 담관염, 안검 종양, 누낭염, 결막염, 각막 궤양, 각막 농양, 전안구염, 안와 감염, 요로 감염증, 카테터 감염증, 항문 주변 농양, 열상의 2차 감염, 욕창 감염증, 낭포성 섬유증, 림프관염, 림프절염, 골수염, 관절염, 편도염, 간농양, 피부 연부 조직 감염증, 자궁내 감염, 자궁 부속기염, 자궁방 결합직염, 악골 주변의 봉소염, 또는 악염인 것을 특징으로 하는, (26) 또는 (27) 에 기재된 의약 조성물
(30) 녹농균 감염증이, 폐렴인 것을 특징으로 하는, (26) 또는 (27) 에 기재된 의약 조성물
(31) (1) 내지 (24) 에 기재된 항체, 그 항체의 항원 결합 단편, 또는 (26) 혹은 (27) 에 기재된 의약 조성물 중 적어도 어느 하나를 투여하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방 방법
(32) (1) 내지 (24) 에 기재된 항체, 그 항체의 항원 결합 단편, 또는 (26) 에 기재된 의약 조성물 중 적어도 어느 하나, 그리고 페니실린계, 세펨계, 카르바페넴계, 모노박탐계, 퀴놀론계, 아미노 배당체계, 폴리믹신계, 리팜피신, 매크롤라이드계 항균약으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나를 동시 또는 잇따라 투여하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방 방법
(33) 녹농균 감염증이, 다제내성 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환인 것을 특징으로 하는, (31) 또는 (32) 에 기재된 치료 및/또는 예방 방법
(34) 녹농균 감염증이, 혈류 감염, 패혈증, 수막염, 심내막염, 중이염, 부비강염, 폐렴, 폐농양, 농흉, 만성 기도 감염증, 복막염, 수술후 감염증, 담낭염, 담관염, 안검 종양, 누낭염, 결막염, 각막 궤양, 각막 농양, 전안구염, 안와 감염, 요로 감염증, 카테터 감염증, 항문 주변 농양, 열상의 2차 감염, 욕창 감염증, 낭포성 섬유증, 림프관염, 림프절염, 골수염, 관절염, 편도염, 간농양, 피부 연부 조직 감염증, 자궁내 감염, 자궁 부속기염, 자궁방 결합직염, 악골 주변의 봉소염, 또는 악염인 것을 특징으로 하는, (33) 에 기재된 치료 및/또는 예방 방법
(35) 녹농균 감염증이, 폐렴인 것을 특징으로 하는 (33) 에 기재된 치료 및/또는 예방 방법
(36) (1) 내지 (24) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 진단제
(37) (1) 내지 (24) 에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 녹농균의 검출 키트
(38) (1) 내지 (24) 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드
(39) (38) 에 기재된 폴리뉴클레오티드로서,
(a) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
a1) 배열 번호 56 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a2) 배열 번호 58 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a3) 배열 번호 60 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a4) 배열 번호 62 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a5) 배열 번호 64 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
a9) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열 ; 및
(b) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
b1) 배열 번호 66 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b2) 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b3) 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b4) 배열 번호 72 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b5) 배열 번호 74 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
b9) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 뉴클레오티드가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드
(40) 배열 번호 58 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 (39) 에 기재된 폴리뉴클레오티드
(41) 배열 번호 60 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 (39) 에 기재된 폴리뉴클레오티드
(42) (38) 에 기재된 폴리뉴클레오티드로서,
(a) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
a1) 배열 번호 76 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a2) 배열 번호 78 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a3) 배열 번호 80 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a4) 배열 번호 82 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a5) 배열 번호 84 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
a9) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열 ; 및
(b) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
b1) 배열 번호 66 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b2) 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b3) 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b4) 배열 번호 72 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b5) 배열 번호 74 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
b9) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 뉴클레오티드가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드
(43) 배열 번호 78 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 (42) 에 기재된 폴리뉴클레오티드
(44) 배열 번호 80 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 (42) 에 기재된 폴리뉴클레오티드
(45) (38) 내지 (44) 에 기재된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터
(46) (38) 내지 (44) 에 기재된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 형질 전환 숙주 세포
(47) (45) 에 기재된 벡터를 포함하는 형질 전환 숙주 세포
(48) (46) 또는 (47) 에 기재된 숙주 세포를 배양하고, 배양 산물로부터 항체를 정제하는 공정을 포함하는 (1) 내지 (24) 중 어느 하나에 기재된 항체의 생산 방법.
본 발명에 의하면, 다제내성 녹농균을 포함하는 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환의 녹농균 감염증의 치료제 및/또는 예방제를 얻을 수 있다.
도 1 은 No.76 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 2 는 #1G5 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 3 은 #4C12 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 4 는 녹농균 O11 주에 대한 결합 특이성을 나타낸 그래프이다.
도 5 는 녹농균 ATCC 29260 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 6 은 녹농균 임상 분리주 No.12 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (균과 항체의 혼합 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 7 은 녹농균 임상 분리주 No.31 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (균과 항체의 혼합 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 8 은 녹농균 임상 분리주 No.12 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 9 는 h#1G5-H1 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 10 은 h#1G5-H2 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 11 은 h#1G5-H3 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 12 는 h#1G5-H4 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 13 은 h#1G5-H5 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 14 는 h#1G5-L1 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 15 는 h#1G5-L2 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 16 은 h#1G5-L3 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 17 은 h#1G5-L4 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 18 은 h#1G5-L5 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 19 는 h#4C13K-H1 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 20 은 h#4C13K-H2 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 21 은 h#4C13K-H3 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 22 는 h#4C13K-H4 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 23 은 h#4C13K-H5 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 24 는 #4C13 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 25 는 녹농균 O11 주에 대한 결합 특이성을 나타낸 그래프이다.
도 26 은 녹농균 O11 임상 분리주에 대한 결합 활성을 나타낸 그래프이다.
도 27 은 녹농균 ATCC 29260 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 28 은 No.76 mIgG2a 와의 경합 시험을 나타낸 그래프이다.
도 2 는 #1G5 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 3 은 #4C12 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 4 는 녹농균 O11 주에 대한 결합 특이성을 나타낸 그래프이다.
도 5 는 녹농균 ATCC 29260 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 6 은 녹농균 임상 분리주 No.12 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (균과 항체의 혼합 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 7 은 녹농균 임상 분리주 No.31 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (균과 항체의 혼합 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 8 은 녹농균 임상 분리주 No.12 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 9 는 h#1G5-H1 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 10 은 h#1G5-H2 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 11 은 h#1G5-H3 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 12 는 h#1G5-H4 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 13 은 h#1G5-H5 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 14 는 h#1G5-L1 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 15 는 h#1G5-L2 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 16 은 h#1G5-L3 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 17 은 h#1G5-L4 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 18 은 h#1G5-L5 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 19 는 h#4C13K-H1 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 20 은 h#4C13K-H2 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 21 은 h#4C13K-H3 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 22 는 h#4C13K-H4 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 23 은 h#4C13K-H5 의 뉴클레오티드 배열, 및 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 24 는 #4C13 항체의 각 CDR 배열의 아미노산 배열을 나타낸 도면이다.
도 25 는 녹농균 O11 주에 대한 결합 특이성을 나타낸 그래프이다.
도 26 은 녹농균 O11 임상 분리주에 대한 결합 활성을 나타낸 그래프이다.
도 27 은 녹농균 ATCC 29260 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여) 를 나타낸 그래프이다.
도 28 은 No.76 mIgG2a 와의 경합 시험을 나타낸 그래프이다.
1. 정의
본 명세서 중에 있어서, 「유전자」라고 하는 말에는, DNA 뿐만 아니라 mRNA, cDNA 및 cRNA 도 포함되는 것으로 한다.
본 명세서 중에 있어서, 「폴리뉴클레오티드」라고 하는 말은 핵산과 동일한 의미로 사용하고 있고, DNA, RNA, 프로브, 올리고뉴클레오티드, 및 프라이머도 포함되어 있다.
본 명세서 중에 있어서는, 「폴리펩티드」와「단백질」은 구별하지 않고 사용하고 있다.
본 명세서 중에 있어서, 「RNA 획분」이란, RNA 를 포함하고 있는 획분을 말한다.
본 명세서 중에 있어서, 「세포」에는, 동물 개체 내의 세포, 배양 세포도 포함하고 있다.
본 명세서 중에 있어서, 「LPS」는, 「리포 다당」또는 「리포폴리사카라이드」와 동일한 의미로 사용하고 있다.
본 명세서 중에 있어서, 「혈청형」이라는 용어는, 녹농균의 임의의 공지된 혈청형을 의미한다.
본 명세서 중에 있어서, 「다제내성」이란, 카르바페넴 (이미페넴 또는 메로페넴), 퀴놀론 (시프로플록사신 또는 레보플록사신), 아미노 배당체 (토브라마이신 또는 아미카신) 의 3 계통 모두에 내성을 나타내는 것을 의미한다. 각각의 약제의 감수성은 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 의 breakpoints 에 기초하여 판정했다.
본 명세서 중에 있어서, 「O11 임상 분리주」란, O11 항원에 특이적인 시판되는 녹농균 군별용 면역 혈청에 의해, 또는 O11 항원 특이적 프라이머를 사용한 PCR 에 의해 양성을 나타내는 주를 의미한다.
본 명세서 중에 있어서, 「의료 관련 감염 (healthcare-associated infection)」이란, 원내 감염 (nosocomial infection) 또는 병원 감염 (hospital-acquired infection) 이라고도 불리고, 의료 기관 혹은 재택 의료에 있어서 환자가 원질환과는 별도로 새롭게 이환한 감염증, 및 의료 종사자 등에 대해서도 의료 기관 혹은 재택 의료에 있어서 감염한 감염증을 의미한다.
본 명세서 중에 있어서의 「항체의 항원 결합 단편」이란, 「항체의 기능성 단편」이라고도 불리고, 항원과의 결합 활성을 갖는 항체의 부분 단편을 의미하고 있고, Fab, F(ab')2, Fv, scFv, diabody, 선상 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이성 항체 등을 포함한다. 또, F(ab')2 를 환원 조건하에서 처리한 항체의 가변 영역의 1 가의 단편인 Fab' 도 항체의 항원 결합 단편에 포함된다. 단, 항원과의 결합능을 갖고 있는 한 이들 분자에 한정되지 않는다. 또, 이들 항원 결합 단편에는, 항체 단백질의 전체 길이 분자를 적당한 효소로 처리한 것뿐만 아니라, 유전자 공학적으로 개변된 항체 유전자를 사용하여 적당한 숙주 세포에 있어서 산생된 단백질도 포함된다.
본 명세서에 있어서의, 「에피토프」란, 특정 항LPS O11 항체가 결합하는 LPS O11 항원의 부분 구조를 의미한다. O11 항원은 3 개의 당으로 이루어지는 반복 구조이기 때문에 (Microbiol. Mol. Biol. Rev. 63, 523-553 (1999)), 상이한 길이의 당사슬을 합성하고, 그것들에 대한 항체의 반응성을 검토함으로써, 에피토프를 결정할 수 있다. 또, 특정 항LPS O11 항체가 결합하는 LPS O11 항원의 부분 입체 구조인 에피토프는, X 선 결정 구조 해석에 의해 상기 항체와 인접하는 LPS O11 항원의 구조를 특정함으로써 결정할 수 있다. 제 1 항LPS O11 항체가 결합하는 부분 당사슬에 제 2 항LPS O11 항체가 결합하면, 제 1 항체와 제 2 항체가 공통의 에피토프를 갖는다고 판정할 수 있다. 또, 제 1 항LPS O11 항체의 LPS O11 항원에 대한 결합에 대해 제 2 항LPS O11 항체가 교차 경합하는 (즉, 제 2 항체가 제 1 항체와 LPS O11 항원의 결합을 방해한다) 것을 확인함으로써, 구체적인 에피토프의 배열 또는 구조가 결정되어 있지 않아도, 제 1 항체와 제 2 항체가 공통의 에피토프를 갖는다고 판정할 수 있다. 또한, 제 1 항체와 제 2 항체가 공통의 에피토프에 결합하고, 또한 제 1 항체가 항원의 중화 활성 등의 특수한 효과를 갖는 경우, 제 2 항체도 동일한 활성을 갖는 것을 기대할 수 있다.
항체 분자의 중쇄 및 경쇄에는 각각 3 지점의 상보성 결정 영역 (CDR : Complementarity determining region) 이 있는 것이 알려져 있다. 상보성 결정 영역은, 초가변 영역 (hypervariable domain) 이라고도 불리고, 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 내에 있고, 1 차 구조의 변이성이 특히 높은 부위이고, 중쇄 및 경쇄의 폴리펩티드 사슬의 1 차 구조 상에 있어서, 각각 3 개소로 분리되어 있다. 본 명세서 중에 있어서는, 항체의 상보성 결정 영역에 대해, 중쇄의 상보성 결정 영역을 중쇄 아미노산 배열의 아미노 말단측으로부터 CDRH1, CDRH2, CDRH3 이라고 표기하고, 경쇄의 상보성 결정 영역을 경쇄 아미노산 배열의 아미노 말단측으로부터 CDRL1, CDRL2, CDRL3 이라고 표기한다. 이들 부위는 입체 구조 상에서 서로 근접하고, 결합하는 항원에 대한 특이성을 결정하고 있다.
본 발명에 있어서, 「스트린젠트한 조건하에서 하이브리다이즈한다」란, 시판되는 하이브리다이제이션 용액 ExpressHyb Hybridization Solution (클론테크사 제조) 중, 68 ℃ 에서 하이브리다이즈하는 것, 또는 DNA 를 고정한 필터를 사용하여 0.7-1.0 M 의 NaCl 존재하 68 ℃ 에서 하이브리다이제이션을 실시한 후, 0.1-2 배 농도의 SSC 용액 (1 배 농도 SSC 란 150 mM NaCl, 15 mM 시트르산나트륨으로 이루어진다) 을 이용해, 68 ℃ 에서 세정함으로써 동정할 수 있는 조건 또는 그것과 동등한 조건에서 하이브리다이즈하는 것을 말한다.
본 명세서에 있어서, 「1 내지 수개」 및 「1 혹은 수개」란 기재가 있는 경우의 「수개」란, 2 내지 10 개를 나타내고 있다. 바람직하게는 10 개 이하, 보다 바람직하게는, 5 혹은 6 개 이하, 보다 더 바람직하게는 2 혹은 3 개이다.
2. LPS O11
본 발명의 항체가 결합하는 「LPS」는, 그람 음성균 세포벽 외막의 구성 성분이고, 지질 및 다당으로 구성되는 물질 (당지질) 이다. 당사슬 부분은, 코어 다당 (또는 코어 올리고당) 이라 불리는 부분과, O 항원 (O 측사슬 다당) 이라 불리는 부분으로 구성된다.
상이한 녹농균 혈청형에 대해, IATS (International Antigenic Typing System) 에 의한 형별, 및 녹농균 연구회 (Japan Pseudomonas Aeruginosa Society, JPAS) 혈청형별 검토 위원회의 군별이 있다. IATS 에 의한 형별 및 JPAS 에 의한 군별의 대응 관계를 표 1 에 나타낸다. 녹농균의 혈청형은, 시판되는 녹농균 군별용 면역 혈청을 사용하여 판별할 수 있다.
최근, 다제내성 녹농균에서는 O11 항원을 갖는 주 (O11 주) 의 비율이 높은 것이 보고되고 있다. LPS O11 혈청형의 녹농균으로는, 예를 들어 ATCC 억세션 번호 26290, 33358 등을 들 수 있다.
3. 항LPS O11 항체의 제조
본 발명의 녹농균 LPS O11 항원에 대한 항체는, 예를 들어 WO2009/091048, WO2011/027808, 또는 WO2012/133572 에 기재된 방법으로 얻을 수 있다. 즉, 비인간 동물을 목적 항원으로 면역하고, 면역 성립 후의 동물로부터 림프액, 림프 조직, 혈구 시료 또는 골수 유래의 세포를 채취하고, 목적 항원에 특이적으로 결합하는 비인간 동물의 형질세포 및/또는 형질아세포를 선택한다. 얻어진 형질세포 및/또는 형질아세포로부터 목적 항원에 대한 항체 유전자를 채취하고, 그 염기 배열을 동정하고, 동정한 유전자의 염기 배열에 기초하여 상기 항체 또는 항체의 단편을 얻을 수 있다. 또, 인간 감염 환자의 혈액으로부터 동일하게 형질세포 및/또는 형질아세포를 얻음으로써, 항체 또는 항체 단편을 얻을 수 있다. 취득된 항체는 LPS O11 항원에 대한 결합성을 시험함으로써, 인간의 질환에 적용 가능한 항체를 선별할 수 있다. 이와 같이 하여 얻어진 모노클로날 항체의 예로는, No.76, #1G5, #4C12, #4C13, #4C13K 를 들 수 있다. #4C12, #4C13, #4C13K 의 중쇄는 모두 완전히 공통이고, #4C13 은 #4C12 의 경쇄의 아미노산 번호 75 의 시스테인을 티로신으로 치환한 항체이고, #4C13K 는 #4C12 의 경쇄를 #1G5 의 경쇄로 치환한 항체이다.
또, 공지된 방법 (예를 들어, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497, Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N.Y. (1980)) 에 따라, LPS O11 항원에 대한 항체를 산생하는 항체 산생 세포와 미엘로마 세포를 융합시킴으로써 하이브리도마를 수립하고, 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다. 이와 같은 방법의 구체적인 예는, WO2009/48072 (2009년 4월 16일 공개) 및 WO2010/117011 (2010년 10월 14일 공개) 에 기재되어 있다. 그러나, 모노클로날 항체를 취득하는 방법은, 이미 확립된 분야에 해당하고, 상기 구체예에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 항체에는, 상기 LPS O11 항원에 대한 모노클로날 항체에 추가로, 인간에 대한 이종 항원성을 저하시키는 것 등을 목적으로 해 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체, 예를 들어 키메라 (Chimeric) 항체, 인간화 (Humanized) 항체, 인간 항체 등도 포함된다. 이들 항체는, 이미 알려진 방법을 사용하여 제조할 수 있다.
키메라 항체로는, 항체의 가변 영역과 정상 영역이 서로 이종인 항체, 예를 들어 마우스 또는 래트 유래 항체의 가변 영역을 인간 유래의 정상 영역에 접합한 키메라 항체를 들 수 있다 (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855, (1984) 참조). No.76 유래의 키메라 항체의 일례로서, 배열표의 배열 번호 33 의 20 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열을 갖는 중쇄, 및 배열 번호 31 의 21 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열을 갖는 경쇄로 이루어지는 항체, #1G5 유래의 키메라 항체의 일례로서, 배열표의 배열 번호 37 의 20 내지 474 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열을 갖는 중쇄, 및 배열 번호 35 의 21 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열을 갖는 경쇄로 이루어지는 항체, #4C13 유래의 키메라 항체의 일례로서, 배열표의 배열 번호 41 의 20 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열을 갖는 중쇄, 및 배열 번호 39 의 21 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열을 갖는 경쇄로 이루어지는 항체를 들 수 있다.
인간화 항체로는, CDR 만을 인간 유래의 항체에 삽입한 항체 (Nature (1986) 321, p.522-525 참조), CDR 이식법에 의해, CDR 의 배열에 추가로 일부의 프레임 워크의 아미노산 잔기도 인간 항체에 이식한 항체 (국제 공개 제 WO90/07861호 팜플렛) 를 들 수 있다.
No.76 항체 유래의 인간화 항체로는, No.76 의 6 종 모든 CDR 배열을 유지하고, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 한, 본 발명의 항체에 포함된다. 또한, No.76 항체의 중쇄 가변 영역은, 배열 번호 9 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH1 (NYWIN), 배열 번호 10 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH2 (DIYPGTSTTNYNEKFKN), 및 배열 번호 11 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH3 (IYYDYDGYYFDY) 을 보유하고 있다. 또, No.76 항체의 경쇄 가변 영역은, 배열 번호 5 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL1 (KASENVGTSVS), 배열 번호 6 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL2 (GASNRYT), 및 배열 번호 7 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL3 (GQSYSYPYT) 을 보유하고 있다. 이들 CDR 의 아미노산 배열은, 도 1 에도 기재되어 있다.
#1G5 항체 유래의 인간화 항체로는, #1G5 의 6 종 모든 CDR 배열을 유지하고, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 한, 본 발명의 항체에 포함된다. 또한, #1G5 항체의 중쇄 가변 영역은, 배열 번호 17 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH1 (SYWIN), 배열 번호 18 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH2 (NIYPGSSSINYNEKFKS), 및 배열 번호 19 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH3 (TIYNYGSSGYNYAMDY) 을 보유하고 있다. 또, #1G5 항체의 경쇄 가변 영역은, 배열 번호 13 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL1 (KASENVGNSVS), 배열 번호 14 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL2 (GASNRYT), 및 배열 번호 15 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL3 (GQSYSYPYT) 을 보유하고 있다. 이들 CDR 의 아미노산 배열은, 도 2 에도 기재되어 있다.
#4C12 항체 유래의 인간화 항체로는, #4C12 의 6 종 모든 CDR 배열을 유지하고, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 한, 본 발명의 항체에 포함된다. 또한, #4C12 항체의 중쇄 가변 영역은, 배열 번호 25 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH1 (TYWIN), 배열 번호 26 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH2 (NIYPGTRSSNYNEKFKN), 및 배열 번호 27 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH3 (VYYDHVGYYFDY) 을 보유하고 있다. 또, #4C12 항체의 경쇄 가변 영역은, 배열 번호 21 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL1 (KASENVGVSVS), 배열 번호 22 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL2 (GASNRCT), 및 배열 번호 23 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL3 (GQSYSYPYT) 을 보유하고 있다. 이들 CDR 의 아미노산 배열은, 도 3 에도 기재되어 있다.
#4C13 항체 유래의 인간화 항체로는, #4C13 의 6 종 모든 CDR 배열을 유지하고, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 한, 본 발명의 항체에 포함된다. 또한, #4C13 항체의 중쇄 가변 영역은, 배열 번호 86 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH1 (TYWIN), 배열 번호 87 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH2 (NIYPGTRSSNYNEKFKN), 및 배열 번호 88 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH3 (VYYDHVGYYFDY) 을 보유하고 있다. 또, #4C13 항체의 경쇄 가변 영역은, 배열 번호 123 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL1 (KASENVGVSVS), 배열 번호 124 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL2 (GASNRYT), 및 배열 번호 125 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL3 (GQSYSYPYT) 을 보유하고 있다. 이들 CDR 의 아미노산 배열은, 도 24 에도 기재되어 있다.
#4C13K 항체 유래의 인간화 항체로는, #4C13K 의 6 종 모든 CDR 배열을 유지하고, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 한, 본 발명의 항체에 포함된다. 또한, #4C13K 항체의 중쇄 가변 영역은, 배열 번호 86 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH1 (TYWIN), 배열 번호 87 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH2 (NIYPGTRSSNYNEKFKN), 및 배열 번호 88 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRH3 (VYYDHVGYYFDY) 을 보유하고 있다. 또, #4C13K 항체의 경쇄 가변 영역은, #1G5 항체의 경쇄 가변 영역과 완전히 공통이고, 배열 번호 13 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL1 (KASENVGNSVS), 배열 번호 14 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL2 (GASNRYT), 및 배열 번호 15 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 CDRL3 (GQSYSYPYT) 을 보유하고 있다. 이들 CDR 의 아미노산 배열은, 도 24 및 도 2 에도 기재되어 있다.
또, 추가로 각 CDR 중의 1 내지 3 개의 아미노산 잔기를 다른 아미노산 잔기로 치환한 CDR 개변 인간화 항체도, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 한, 본 발명의 항체에 포함된다.
#1G5 항체 유래의 인간화 항체의 실례로는, 배열표의 배열 번호 57 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 63 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 또는 배열 번호 65 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 및 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 또는 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄의 임의의 조합을 들 수 있다.
바람직한 조합으로는, 배열 번호 57 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 배열 번호 63 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 또는 배열 번호 65 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체를 들 수 있다.
보다 바람직한 조합으로는, 배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 또는 배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체를 들 수 있다.
#4C13K 항체 유래의 인간화 항체의 실례로는, 배열표의 배열 번호 77 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 83 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 또는 배열 번호 85 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 및 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열, 또는 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄의 임의의 조합을 들 수 있다.
바람직한 조합으로는, 배열 번호 77 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 배열 번호 83 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 또는 배열 번호 85 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체를 들 수 있다.
보다 바람직한 조합으로는, 배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체, 또는 배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열을 포함하는 중쇄 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 경쇄로 이루어지는 항체를 들 수 있다.
본 발명의 항체로는, 추가로 인간 항체를 들 수 있다. 항LPS O11 인간 항체란, 인간 염색체 유래의 항체의 유전자 배열만을 갖는 인간 항체를 의미한다. 항LPS O11 인간 항체는, 인간 항체의 중쇄와 경쇄의 유전자를 포함하는 인간 염색체 단편을 갖는 인간 항체 산생 마우스를 사용한 방법 (Tomizuka, K. et al., Nature Genetics (1997) 16, p.133-143, ; Kuroiwa, Y. et. al., Nucl. Acids Res. (1998) 26, p.3447-3448 ; Yoshida, H. et. al., Animal Cell Technology : Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999. ; Tomizuka, K. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97, p.722-727 등을 참조.) 에 의해 취득할 수 있다.
이와 같은 인간 항체 산생 마우스는, 구체적으로는, 내재성 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄의 유전자좌가 파괴되고, 대신에 효모 인공 염색체 (Yeast artificial chromosome, YAC) 벡터 등을 개재하여 인간 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄의 유전자좌가 도입된 유전자 재조합 동물을, 녹아웃 동물 및 트랜스제닉 동물의 제작, 및 이들 동물끼리를 교배시킴으로써 만들어 낼 수 있다.
또, 유전자 재조합 기술에 의해, 그러한 인간 항체의 중쇄 및 경쇄의 각각을 코드하는 cDNA, 바람직하게는 그 cDNA 를 포함하는 벡터에 의해 진핵 세포를 형질 전환하고, 유전자 재조합 인간 모노클로날 항체를 산생하는 형질 전환 세포를 배양함으로써, 이 항체를 배양 상청 중에서부터 얻을 수도 있다. 여기서, 숙주로는 예를 들어 진핵 세포, 바람직하게는 CHO 세포, 림프구나 미엘로마 등의 포유 동물 세포를 사용할 수 있다.
또, 인간 항체 라이브러리로부터 선별한 파지 디스플레이 유래의 인간 항체를 취득하는 방법 (Wormstone, I. M. et. al, Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (7), p.2301-2308 ; Carmen, S. et. al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1 (2), p.189-203 ; Siriwardena, D. et. al., Ophthalmology (2002) 109 (3), p.427-431 등 참조.) 도 알려져 있다.
예를 들어, 인간 항체의 가변 영역을 단일 사슬 항체 (scFv) 로서 파지 표면에 발현시켜, 항원에 결합하는 파지를 선택하는 파지 디스플레이법 (Nature Biotechnology (2005), 23, (9), p.1105-1116) 을 사용할 수 있다. 항원에 결합함으로써 선택된 파지의 유전자를 해석함으로써, 항원에 결합하는 인간 항체의 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 결정할 수 있다. 항원에 결합하는 scFv 의 DNA 배열이 명확해지면, 당해 배열을 갖는 발현 벡터를 제작하고, 적당한 숙주에 도입해 발현시킴으로써 인간 항체를 취득할 수 있다 (WO92/01047, WO92/20791, WO93/06213, WO93/11236, WO93/19172, WO95/01438, WO95/15388, Annu. Rev. Immunol (1994) 12, p.433-455, Nature Biotechnology (2005) 23 (9), p.1105-1116).
상기 항체는, 항원에 대한 결합성, 옵소닌 활성, 보체 의존적 살균 활성 및/또는 응집 활성을 평가하고, 바람직한 항체를 선발할 수 있다. 항원에 대한 결합성은, 실시예 3 에 나타낸 whole cell ELISA 법 등에 의해 평가할 수 있고, 이로써 당해 항체가 결합 활성을 나타내는 녹농균의 혈청형의 범위를 판정할 수 있다. 옵소닌 활성은, 식세포에 탐식된 균의 비율 혹은 양을 실시예 1 에 나타낸 생균수 측정의 방법 혹은 균을 형광 라벨로 처리하고, 플로우 사이토메트리 등으로 정량화하는 방법 등에 의해 평가할 수 있다. 보체 의존적 살균 활성은 보체와 항체에 의해 살균되는 균량을 생균수 측정에 의해 구하는 방법 등에 의해 평가할 수 있다. 또, 응집 활성은, 단계적으로 희석한 항체의 균체에 대한 응집능을 검출하고, IgG 량당의 응집가로서 평가할 수 있다. 또, 전신 감염 및 폐감염에 대한 항균 활성은, 실시예 4 에 나타낸 방법 등에 의해 평가할 수 있다.
항체의 성질을 비교할 때의 다른 지표의 일례로는, 항체의 안정성을 들 수 있다. 시차주사 칼로리메트리 (DSC) 는, 단백의 상대적 구조 안정성의 양호한 지표가 되는 열변성 중점 (Tm) 을 빠르게, 또 정확하게 측정할 수 있는 방법이다. DSC 를 사용하여 Tm 값을 측정하고, 그 값을 비교함으로써, 열안정성의 차를 비교할 수 있다. 항체의 보존 안정성은, 항체의 열안정성과 어느 정도의 상관을 나타내는 것이 알려져 있고 (Lori Burton, et. al., Pharmaceutical Development and Technology (2007) 12, p.265-273), 열안정성을 지표로, 바람직한 항체를 선발할 수 있다. 항체를 선발하기 위한 다른 지표로는, 적절한 숙주 세포에 있어서의 수량이 높은 것, 및 수용액 중에서의 응집성이 낮은 것을 들 수 있다. 예를 들어 수량이 가장 높은 항체가 가장 높은 열안정성을 나타낸다고는 한정되지 않기 때문에, 이상에 서술한 지표에 기초하여 종합적으로 판단해, 인간에 대한 투여에 가장 적합한 항체를 선발할 필요가 있다.
또, 항체의 중쇄 및 경쇄의 전체 길이 배열을 적절한 링커를 사용하여 연결하고, 단일 사슬 이뮤노글로불린 (single chain immunoglobulin) 을 취득하는 방법도 알려져 있다 (Lee, H-S, et. al., Molecular Immunology (1999) 36, p.61-71 ; Shirrmann, T. et. al., mAbs (2010), 2, (1) p.1-4). 이와 같은 단일 사슬 이뮤노글로불린은 2량체화함으로써, 본래는 4량체인 항체와 유사한 구조와 활성을 유지하는 것이 가능하다. 또, 본 발명의 항체는, 단일의 중쇄 가변 영역을 갖고, 경쇄 배열을 갖지 않는 항체여도 된다. 이와 같은 항체는, 단일 도메인 항체 (single domain antibody : sdAb) 또는 나노보디 (nanobody) 라고 불리고 있고, 실제로 낙타 또는 라마에서 관찰되고, 항원 결합능이 유지되고 있는 것이 보고되어 있다 (Muyldemans S. et. al., Protein Eng. (1994) 7(9), 1129-35, Hamers-Casterman C. et. al., Nature (1993) 363 (6428) 446-8). 상기 항체는, 본 발명에 있어서의 항체의 항원 결합 단편의 일종으로 해석할 수도 있다.
또, 본 발명의 항체에 결합하고 있는 당사슬 수식을 조절함으로써, 옵소닌 활성을 증강시킬 수 있다. 항체의 당사슬 수식의 조절 기술로는, WO99/54342, WO2000/61739, WO2002/31140 등이 알려져 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
항체 유전자를 일단 단리한 후, 적당한 숙주에 도입해 항체를 제작하는 경우에는, 적당한 숙주와 발현 벡터의 조합을 사용할 수 있다. 항체 유전자의 구체예로는, 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 배열을 코드하는 유전자, 및 경쇄 배열을 코드하는 유전자를 조합한 것을 들 수 있다. 숙주 세포를 형질 전환할 때에는, 중쇄 배열 유전자와 경쇄 배열 유전자는, 동일한 발현 벡터에 삽입되어 있을 수 있고, 또 각각의 발현 벡터에 삽입되어 있을 수도 있다. 진핵 세포를 숙주로서 사용하는 경우, 동물 세포, 식물 세포, 진핵 미생물을 사용할 수 있다. 동물 세포로는, (1) 포유류 세포, 예를 들어 원숭이의 세포인 COS 세포 (Gluzman, Y. Cell (1981) 23, p.175-182, ATCC CRL-1650), 마우스 선유아세포 NIH3T3 (ATCC No. CRL-1658) 이나 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO 세포, ATCC CCL-61) 의 디하이드로 엽산 환원 효소 결손주 (Urlaub, G. and Chasin, L. A. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1980) 77, p.4126-4220) 를 들 수 있다. 또, 원핵 세포를 사용하는 경우에는, 예를 들어 대장균, 고초균을 들 수 있다. 이들 세포에 목적으로 하는 항체 유전자를 형질 전환에 의해 도입하고, 형질 전환된 세포를 in vitro 로 배양함으로써 항체가 얻어진다. 이상의 배양법에 있어서는 항체의 배열에 따라 수량이 상이한 경우가 있고, 동등한 결합 활성을 갖는 항체 중에서 수량을 지표로 의약으로서의 생산이 용이한 것을 선별할 수 있다.
본 발명의 항체의 아이소타입으로서의 제한은 없고, 예를 들어 IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA (IgA1, IgA2), IgD 혹은 IgE 등을 들 수 있지만, 바람직하게는 IgG 또는 IgM, 더 바람직하게는 IgG1 또는 IgG3 을 들 수 있다.
또 본 발명의 항체는, 항체의 항원 결합부를 갖는 항체의 항원 결합 단편 또는 그 수식물이어도 된다. 항체를 파파인, 펩신 등의 단백질 분해 효소로 처리하거나, 혹은 항체 유전자를 유전자 공학적 수법에 의해 개변해 적당한 배양 세포에 있어서 발현시킴으로써, 그 항체의 단편을 얻을 수 있다. 이와 같은 항체 단편 중에서, 항체 전체 길이 분자가 갖는 기능의 전부 또는 일부를 유지하고 있는 단편을 항체의 항원 결합 단편이라고 부를 수 있다. 항체의 기능으로는, 일반적으로는 항원 결합 활성, 항원의 활성을 중화하는 활성, 항원의 활성을 증강하는 활성, 옵소닌 활성 및 보체 의존적 살균 활성을 들 수 있다. 본 발명에 있어서의 항체의 항원 결합 단편이 유지하는 기능은, 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성이고, 바람직하게는 녹농균 LPS O11 주에 대한 옵소닌 활성이다.
예를 들어, 항체의 단편으로는, Fab, F(ab')2, Fv, 또는 중쇄 및 경쇄의 Fv 를 적당한 링커로 연결시킨 싱글 체인 Fv (scFv), diabody (diabodies), 선상 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이성 항체 등을 들 수 있다. 또, F(ab')2 를 환원 조건하에서 처리한 항체의 가변 영역의 1 가의 단편인 Fab' 도 항체의 단편에 포함된다.
또한, 본 발명의 항체는 적어도 2 종류의 상이한 항원에 대해 특이성을 갖는 다특이성 항체여도 된다. 통상 이와 같은 분자는 2 종류의 항원에 결합하는 것이지만 (즉, 이중 특이성 항체 (bispecific antibody)), 본 발명에 있어서의 「다특이성 항체」는, 그 이상 (예를 들어, 3 종류) 의 항원에 대해 특이성을 갖는 항체를 포함하는 것이다.
본 발명의 다특이성 항체는, 전체 길이로 이루어지는 항체, 또는 그러한 항체의 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중 특이성 항체) 이어도 된다. 이중 특이성 항체는 2 종류의 항체의 중쇄와 경쇄 (HL쌍) 을 결합시켜 제작할 수도 있고, 상이한 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마를 융합시켜, 이중 특이성 항체 산생 융합 세포를 제작함으로써도, 제작할 수 있다 (Millstein et al., Nature (1983) 305, p.537-539).
본 발명의 항체는 단일 사슬 항체 (scFv 라고도 기재한다) 여도 된다. 단일 사슬 항체는, 항체의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 폴리펩티드의 링커로 연결함으로써 얻어진다 (Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 113 (Rosenberg 및 Moore 편저, Springer Verlag, NewYork, p.269-315 (1994), Nature Biotechnology (2005), 23, p.1126-1136). 또, 2 개의 scFv 를 폴리펩티드 링커로 결합시켜 제작되는 BiscFv 단편을 이중 특이성 항체로서 사용할 수도 있다.
단일 사슬 항체를 제작하는 방법은 당 기술 분야에 있어서 주지이다 (예를 들어, 미국 특허 제4,946,778호, 미국 특허 제5,260,203호, 미국 특허 제5,091,513호, 미국 특허 제5,455,030호 등을 참조). 이 scFv 에 있어서, 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은, 콘주게이트를 만들지 않는 링커, 바람직하게는 폴리펩티드 링커를 개재하여 연결된다 (Huston, J. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1988), 85, p.5879-5883). scFv 에 있어서의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은, 동일한 항체에서 유래해도 되고, 각각의 항체에서 유래해도 된다. 가변 영역을 연결하는 폴리펩티드 링커로는, 예를 들어 12 ∼ 19 잔기로 이루어지는 임의의 단일 사슬 펩티드가 사용된다.
scFv 를 코드하는 DNA 는, 상기 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA, 및 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 중, 그들의 배열 중 전부 또는 원하는 아미노산 배열을 코드하는 DNA 부분을 주형으로 하고, 그 양단을 규정하는 프라이머쌍을 사용하여 PCR 법에 의해 증폭하고, 이어서 추가로 폴리펩티드 링커 부분을 코드하는 DNA, 및 그 양단이 각각 중쇄, 경쇄와 연결되도록 규정하는 프라이머쌍을 조합하여 증폭함으로써 얻어진다.
또, 일단 scFv 를 코드하는 DNA 가 제작되면, 그것들을 함유하는 발현 벡터, 및 그 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주를 통상적인 방법에 따라 얻을 수 있고, 또 그 숙주를 사용함으로써, 통상적인 방법에 따라 scFv 를 얻을 수 있다. 이들 항체 단편은, 상기와 마찬가지로 해 유전자를 취득해 발현시키고, 숙주에 의해 산생시킬 수 있다.
본 발명의 항체는, 다량화해 항원에 대한 친화성을 높인 것이어도 된다. 다량화하는 항체로는, 1 종류의 항체여도 되고, 동일한 항원의 복수의 에피토프를 인식하는 복수의 항체여도 된다. 항체를 다량화하는 방법으로는, IgG CH3 도메인과 2 개의 scFv 의 결합, 스트렙타비딘과의 결합, 헬릭스 턴-헬릭스 모티프의 도입 등을 들 수 있다.
본 발명의 항체는, 아미노산 배열이 상이한 복수 종류의 항LPS O11 항체의 혼합물인, 폴리클로날 항체여도 된다. 폴리클로날 항체의 일례로는, CDR 이 상이한 복수 종류의 항체의 혼합물을 들 수 있다. 그러한 폴리클로날 항체로는, 상이한 항체를 산생하는 세포의 혼합물을 배양하고, 그 배양물로부터 정제된 항체를 사용할 수 있다 (WO2004/061104 참조).
본 발명의 항체는, 상기 항체의 중쇄 및/또는 경쇄와 비교해 80 % 내지 99 % 의 동일성을 갖는 항체여도 된다. 상기 중쇄 아미노산 배열 및 경쇄 아미노산 배열과 높은 상동성을 나타내는 배열을 조합함으로써, 상기 각 항체와 동등한 항원 결합능, 옵소닌 작용 및/또는 보체 의존적 살균 작용을 갖는 항체를 선택할 수 있다. 이와 같은 상동성은, 일반적으로는 80 % 이상의 상동성이고, 바람직하게는 90 % 이상의 상동성이며, 보다 바람직하게는 95 % 이상의 상동성이고, 가장 바람직하게는 99 % 이상의 상동성이다. 또, 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 및/또는 부가된 아미노산 배열을 조합함으로써도, 상기 각 항체와 동등한 각종 작용을 갖는 항체를 선택할 수 있다. 치환, 결실 및/또는 부가되는 아미노산 잔기수는, 일반적으로는 10 아미노산 잔기 이하이고, 바람직하게는 5 내지 6 아미노산 잔기 이하이며, 보다 바람직하게는 2 내지 3 아미노산 잔기 이하이고, 가장 바람직하게는 1 아미노산 잔기이다.
또한, 포유류 배양 세포에서 생산되는 항체의 중쇄의 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실하는 것이 알려져 있고 (Journal of Chromatography A, 705 : 129-134(1995)), 또 동일하게 중쇄 카르복실 말단의 글리신, 리신의 2 아미노산 잔기가 결실하고, 새롭게 카르복실 말단에 위치하는 프롤린 잔기가 아미드화되는 것이 알려져 있다 (Analytical Biochemistry, 360 : 75-83 (2007)). 그러나, 이들 중쇄 배열의 결실 및 수식은, 항체의 항원 결합능 및 이펙터 기능 (보체의 활성 화나 옵소닌 작용 등) 에는 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명에는 당해 수식을 받은 항체도 포함되고, 중쇄 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실한 결실체, 및 아미드화된 당해 결실체 (예를 들어, 카르복실 말단 부위의 프롤린 잔기가 아미드화된 중쇄) 등을 들 수 있다. 단, 항원 결합능 및 이펙터 기능이 유지되고 있는 한, 본 발명에 관련된 항체의 중쇄의 카르복실 말단의 결실체는 상기 종류에 한정되지 않는다. 본 발명에 관련된 항체를 구성하는 2 개의 중쇄는, 완전 길이 및 상기 결실체로 이루어지는 군에서 선택되는 중쇄 중 어느 1 종이어도 되고, 어느 2 종을 조합한 것이어도 된다. 각 결실체의 양비 (量比) 는 본 발명에 관련된 항체를 산생하는 포유류 배양 세포의 종류 및 배양 조건에 영향을 받을 수 있지만, 본 발명에 관련된 항체의 주성분으로는 2 개의 중쇄의 쌍방에서 카르복실 말단의 하나의 아미노산 잔기가 결실하고 있는 경우를 들 수 있다.
2 종류의 아미노산 배열 간의 상동성은, Blast algorithm version 2.2.2 (Altschul, Stephen F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997), 「Gapped BLAST and PSI-BLAST : a new generation of protein database search programs」, Nucleic Acids Res. 25 : 3389-3402) 의 디폴트 파라미터를 사용함으로써 결정할 수 있다. Blast algorithm 은, 인터넷으로 www.ncbi.nlm.nih.gov/blast 에 액세스함으로써도 사용할 수 있다. 또한, 상기 Blast algorithm 에 의해 Identity (또는 Identities) 및 Positivity (또는 Positivities) 의 2 종류의 퍼센티지의 값이 계산된다. 전자는 상동성을 구해야 할 2 종류의 아미노산 배열 간에 아미노산 잔기가 일치한 경우의 값이고, 후자는 화학 구조가 유사한 아미노산 잔기도 고려한 수치이다. 본 명세서에 있어서는, 아미노산 잔기가 일치하고 있는 경우의 Identity (동일성) 의 값을 상동성의 값으로 한다.
항체의 수식물로서, 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 등의 각종 분자와 결합한 항체를 사용할 수도 있다.
본 발명의 항체는, 추가로 이들 항체와 다른 약제가 콘주게이트를 형성하고 있는 것 (Immunoconjugate) 이어도 된다. 이와 같은 항체의 예로는, 그 항체가 방사성 물질이나 약리 작용을 갖는 화합물과 결합하고 있는 것을 들 수 있다 (Nature Biotechnology (2005) 23, p.1137-1146).
얻어진 항체는, 균일하게까지 정제할 수 있다. 항체의 분리, 정제는 통상적인 단백질에서 사용되고 있는 분리, 정제 방법을 사용하면 된다. 예를 들어 칼럼 크로마토그래피, 필터 여과, 한외 여과, 염석, 투석, 조제용 폴리아크릴아미드겔 전기 영동, 등전점 전기 영동 등을 적절히 선택, 조합하면, 항체를 분리, 정제할 수 있지만 (Strategies for Protein Purification and Characterization : A Laboratory Course Manual, Daniel R. Marshak et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996) ; Antibodies : A Laboratory Manual. Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)), 이들에 한정되는 것은 아니다.
크로마토그래피로는, 어피니티 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피 등을 들 수 있다.
이들 크로마토그래피는, HPLC 나 FPLC 등의 액체 크로마토그래피를 사용하여 실시할 수 있다.
어피니티 크로마토그래피에 사용하는 칼럼으로는, 프로테인 A 칼럼, 프로테인 G 칼럼을 들 수 있다.
예를 들어 프로테인 A 칼럼을 사용한 칼럼으로서, Hyper D, POROS, Sepharose F.F. (파르마시아) 등을 들 수 있다.
또 항원을 고정화한 담체를 사용하여, 항원에 대한 결합성을 이용해 항체를 정제할 수도 있다.
4. 항LPS O11 항체를 함유하는 의약
상기 서술한 「3. 항LPS O11 항체의 제조」의 항에 기재된 방법으로 얻어지는 항LPS O11 항체는, 옵소닌 작용 (옵소닌 식작용 상해 작용, Opsonophagocytic killing (OPK)) 및/또는 보체 의존적 살균 작용 (Complement dependent killing (CDK)) 을 나타내는 점에서, 의약으로서, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방제로서 사용할 수 있다.
항LPS O11 항체로 치료 및/또는 예방 가능한 녹농균 감염증으로는, 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환을 들 수 있고, 바람직하게는 다제내성 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환이다. 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환으로는, 예를 들어 혈류 감염, 패혈증, 수막염, 심내막염, 중이염, 부비강염, 폐렴, 폐농양, 농흉, 만성 기도 감염증, 복막염, 수술후 감염증, 담낭염, 담관염, 안검 종양, 누낭염, 결막염, 각막 궤양, 각막 농양, 전안구염, 안와 감염, 요로 감염증, 카테터 감염증, 항문 주변 농양, 열상의 2차 감염, 욕창 감염증, 낭포성 섬유증, 림프관염, 림프절염, 골수염, 관절염, 편도염, 간농양, 피부 연부 조직 감염증, 자궁내 감염, 자궁 부속기염, 자궁방 결합직염, 악골 주변의 봉소염, 악염 등을 들 수 있고, 바람직하게는 폐렴이지만, 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환이면, 이들에 한정되지 않는다.
상기 의약으로서의 항LPS O11 항체의 예로서, #1G5 항체 또는 #4C13K 항체로부터 「3. 항LPS O11 항체의 제조」에 기재된 방법에 의해 제작된 키메라 항체 또는 인간화 항체를 들 수 있다. 또, #1G5 항체 및/또는 #4C13K 항체와 동일한 에피토프를 갖는 키메라 항체, 인간화 항체 및 인간 항체도 의약으로서 사용 가능하다. 어느 항LPS O11 항체가, #1G5 항체 및/또는 #4C13K 항체와 동일한 에피토프를 갖는 것은, LPS O11 항원의 특정 당사슬에 대해 이들 항체가 공통으로 결합하는지의 여부를 관찰함으로써 확인할 수 있다. 또, 어느 항LPS O11 항체가, LPS O11 항원과의 결합에 있어서 #1G5 항체 및/또는 #4C13K 항체와 경합하는 것이라면, 이들 항체가 공통의 에피토프를 갖는다고 판정할 수 있다.
In vitro 에서의 항LPS O11 항체에 의한 항균 활성은, 예를 들어 녹농균 ATCC 29260 에 대한 옵소닌 활성 또는 보체 의존적 살균 활성을 측정함으로써 확인할 수 있다. ATCC 29260 주는 가장 유명한 O11 주의 하나이고, ATCC 로부터 취득했다. 이 주는 루이빌 대학의 P. V. Liu 에 의해 ATCC 에 기탁된 것이다 (J. Infect. Dis., 128 : 506-513 (1973)). 이 주는 Institute Pasteur 로부터 CIP 102967 로서, 혹은 The National Institute of Public Health 로부터 CNCTC 5997 로서도 입수 가능하다.
In vivo 에서의 실험 동물을 이용한 항LPS O11 항체의 녹농균 감염증에 대한 치료 또는 예방 효과는, 예를 들어 마우스 혹은 래트에 있어서의 폐감염, 전신 감염, 대퇴부 감염, 열상 감염 모델에 항LPS O11 항체를 정맥내 투여하고, 감염 부위의 생균수의 변화 혹은 생존률을 측정함으로써 확인할 수 있다.
이와 같이 하여 얻어진 항LPS O11 항체는, 의약으로서, 특히 혈류 감염, 폐렴, 만성 기도 감염증, 패혈증, 복막염, 피부 연부 조직 감염증, 열상의 2차 감염 등의 녹농균 감염증의 치료 또는 예방을 목적으로 한 의약 조성물로서, 혹은 이와 같은 질환의 면역학적 진단을 위한 항체로서 유용하다.
본 발명의 항LPS O11 항체는, 녹농균의 LPS 를 인식하는 항체로서, O11 항원에 결합하고, O1, O2, O3, O4, O5, O6, O7, O8, O9, O10, O13, O14, O15, O16, O17, O18, O19, O20 항원, 및 O 항원 결손주에 결합하지 않는다.
본 발명의 항LPS O11 항체는, O11 임상 분리주에 대한 커버율, 즉 항체가 결합할 수 있는 주의 비율이 85 % 이상이고, 바람직하게는 90 % 이상, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 가장 바람직하게는 100 % 이다.
또, 본 발명의 항LPS O11 항체는, ATCC 29260 으로 특정되는 녹농균에 대한 옵소닌 활성의 50 % 증식 저해 최소 농도가 12 ng/㎖ 이하이고, 바람직하게는 4.1 ng/㎖ 이하이며, 보다 바람직하게는 1.4 ng/㎖ 이하이다.
항LPS O11 항체는, 하나의 예로는, 녹농균 감염증의 치료 또는 예방에 대해서는 그 항체 단독으로, 혹은 적어도 하나의 다른 감염증 치료제와 병용해 투여할 수 있다. 또 하나의 예로서, 항LPS O11 항체는 치료상 유효한 양의 치료제와 병용해 투여할 수 있다. 항LPS O11 항체와 병용해 투여할 수 있는 다른 감염증 치료제로는, 페니실린계, 세펨계, 카르바페넴계, 모노박탐계, 퀴놀론계, 아미노 배당체계, 폴리믹신계, 리팜피신, 매크롤라이드계 항균약 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다.
페니실린계 항균약으로는, 피페라실린, 피페라실린/타조박탐, 티카실린, 티카실린/클라불란산 등을 들 수 있고, 바람직하게는 피페라실린 또는 피페라실린/타조박탐이다.
세펨계 항균약으로는, 세포탁심, 세프티족심, 세프트리악손, 세프타지딤, 세페핌, 세포조프란 등을 들 수 있고, 바람직하게는 세프타지딤 또는 세페핌이다.
카르바페넴계 항균약으로는, 이미페넴, 파니페넴, 메로페넴, 도리페넴 등을 들 수 있고, 바람직하게는 메로페넴 또는 도리페넴이다.
모노박탐계 항균약으로는, 아즈트레오남, 카루모남 등을 들 수 있고, 바람직하게는 아즈트레오남이다.
퀴놀론계 항균약으로는, 시프로플록사신, 레보플록사신, 오플록사신, 목시플록사신, 가티플록사신, 시타플록사신 등을 들 수 있고, 바람직하게는 시프로플록사신 또는 레보플록사신이다.
아미노 배당체계 항균약으로는, 겐타마이신, 토브라마이신, 아미카신, 아르베카신 등을 들 수 있고, 바람직하게는 토브라마이신 혹은 아미카신이다.
폴리믹신계 항균약으로는, 폴리믹신, 콜리스틴 등을 들 수 있다.
매크롤라이드계 항균약으로는, 에리트로마이신, 클라리트로마이신, 아지트로마이신 등을 들 수 있고, 바람직하게는 아지트로마이신이다.
녹농균 감염증의 상태나 어느 정도의 치료 및/또는 예방을 목표로 할지에 따라, 2, 3 혹은 그 이상의 다른 치료제를 투여할 수도 있고, 그들 다른 치료제는 동일한 제제 중에 봉입함으로써 동시에 투여할 수 있다. 다른 치료제와 항LPS O11 항체는 동일한 제제 중에 봉입함으로써 동시에 투여할 수도 있다. 또, 항LPS O11 항체와 다른 치료제를 각각의 제제에 봉입해 동시에 투여할 수도 있다. 또한, 다른 약제와 항LPS O11 항체를 잇따라 따로따로 투여할 수도 있다. 즉, 다른 치료제를 투여한 후에 항LPS O11 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편을 유효 성분으로서 함유하는 치료제를 투여하거나, 혹은 항LPS O11 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편을 유효 성분으로서 함유하는 치료제를 투여한 후에 다른 치료제를 투여해도 된다. 유전자 치료에 있어서 투여하는 경우에는, 단백질성의 감염증 치료제의 유전자와 항LPS O11 항체의 유전자는, 각각의 혹은 동일한 프로모터 영역의 하류에 삽입할 수 있고, 각각의 혹은 동일한 벡터에 도입할 수 있다.
항LPS O11 항체, 혹은 그 프래그먼트에 대해 감염증 치료제를 결합시킴으로써, M. C. Garnet 「Targeted drug conjugates : principles and progress」, Advanced Drug Delivery Reviews, (2001) 53, 171-216 기재의 표적형 약물 복합체를 제조할 수 있다. 이 목적에는, 항체 분자 외, LPS O11 항원의 인식성을 완전 소실하고 있지 않은 한, 어떤 항체 프래그먼트도 적용 가능하지만, 예를 들어 Fab, F(ab')2, Fv 등의 프래그먼트를 예로서 들 수 있고, 본 발명에 있어서도 마찬가지로, 항체 및 그 프래그먼트를 사용할 수 있다. 항LPS O11 항체 또는 그 항체의 프래그먼트와 감염증 치료제의 결합 양식은, M. C. Garnet 「Targeted drug conjugates : principles and progress」, Advanced Drug Delivery Reviews, (2001) 53, 171-216, G. T. Hermanson 「Bioconjugate Techniques」Academic Press, California (1996), Putnam and J. Kopecek 「Polymer Conjugates with Anticancer Activity」Advances in Polymer Science (1995) 122, 55-123 등에 기재된 여러 가지 형태가 있을 수 있다. 즉, 항LPS O11 항체와 감염증 치료제가 화학적으로 직접 혹은 올리고 펩티드 등의 스페이서를 개재해 결합되는 양식이나, 적당한 약물 담체를 개재해 결합되는 양식을 들 수 있다. 약물 담체의 예로는, 리포솜이나 수용성 고분자를 들 수 있다. 이들 약물 담체가 개재되는 양식으로는, 보다 구체적으로는, 감염증 치료제가 리포솜에 포함되고, 그 리포솜과 항체가 결합한 양식, 및 감염증 치료제가 수용성 고분자 (분자량 1000 내지 10만 정도의 화합물) 에 화학적으로 직접 혹은 올리고 펩티드 등의 스페이서를 개재시켜 결합되고, 그 수용성 고분자에 항체가 결합한 양식을 예로서 들 수 있다. 항체 (또는 그 프래그먼트) 와 감염증 치료제, 리포솜 및 수용성 고분자 등의 약물 담체의 결합은, G. T. Hermanson 「Bioconjugate Techniques」Academic Press, California (1996), Putnam and J. Kopecek 「Polymer Conjugates with Anticancer Activity」Advances in Polymer Science (1995) 122, 55-123 에 기재된 방법 등의 당업자 주지의 방법에 의해 실시할 수 있다. 감염증 치료제의 리포솜에의 포함은, D. D. Lasic 「Liposomes : From Physics to Applications」, Elsevier Science Publishers B. V., Amsterdam (1993) 등에 기재된 방법 등의 당업자 주지의 방법에 의해 실시할 수 있다. 감염증 치료제의 수용성 고분자에의 결합은, D. Putnam and J Kopecek 「Polymer Conjugates with Anticancer Activity」Advances in Polymer Science (1995) 122, 55-123 기재의 방법 등의 당업자 주지의 방법에 의해 실시할 수 있다. 항체 (또는 그 프래그먼트) 와 단백질성의 감염증 치료제 (또는 그 프래그먼트) 의 복합체는, 상기 방법 외, 유전자 공학적으로, 당업자 주지의 방법에 의해 제작할 수 있다.
본 발명은, 치료 및/또는 예방에 유효한 양의 항LPS O11 항체와 약학상 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제를 포함하는 의약 조성물도 제공한다.
본 발명은, 치료 및/또는 예방에 유효한 양의 항LPS O11 항체와 치료 및/또는 예방에 유효한 양의 적어도 하나의 감염증 치료제와 약학상 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제를 포함하는 의약 조성물도 제공한다.
본 발명의 의약 조성물에 있어서 허용되는 제제에 사용하는 물질로는 바람직하게는 투여량이나 투여 농도에 있어서, 의약 조성물이 투여되는 사람에 대해 비독성인 것이 바람직하다.
본 발명의 의약 조성물은, pH, 삼투압, 점도, 투명도, 색, 등장성, 무균성, 안정성, 용해율, 서방률, 흡수율, 침투율을 변경하거나, 유지하거나 하기 위한 제제용 물질을 포함할 수 있다. 제제용 물질로서 이하의 것을 들 수 있지만, 이들에 제한되지 않는다 : 글리신, 알라닌, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신 등의 아미노산류, 항균제, 아스코르브산, 황산나트륨 또는 아황산수소나트륨 등의 항산화제, 인산, 시트르산, 붕산 버퍼, 탄산수소나트륨, 트리스-염산 (Tris-Hcl) 용액 등의 완충제, 만니톨이나 글리신 등의 충전제, 에틸렌디아민4아세트산 (EDTA) 등의 킬레이트제, 카페인, 폴리비닐피롤리딘, β-시클로덱스트린이나 하이드록시프로필-β-시클로덱스트린 등의 착화제, 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린 등의 증량제, 단당류, 이당류 등의 다른 탄수화물, 착색제, 향미제, 희석제, 유화제나 폴리비닐피롤리딘 등의 친수 폴리머, 저분자량 폴리펩티드, 염 형성 카운터 이온, 염화벤즈알코늄, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소 등의 방부제, 글리세린, 프로필렌·글리콜 또는 폴리에틸렌글리콜 등의 용매, 만니톨 또는 소르비톨 등의 당알코올, 현탁제, 소르비탄에스테르, 폴리소르베이트 20 이나 폴리소르베이트 80 등의 폴리소르베이트, 트리톤 (triton), 트로메타민 (tromethamine), 레시틴 또는 콜레스테롤 등의 계면활성제, 수크로오스나 소르비톨 등의 안정화 증강제, 염화나트륨, 염화칼륨이나 만니톨·소르비톨 등의 탄성 증강제, 수송제, 부형제, 및/또는 약학상의 보조제. 이들 제제용 물질의 첨가량은, 항LPS O11 항체의 중량에 대해 0.01 ∼ 100 배, 특히 0.1 ∼ 10 배 첨가하는 것이 바람직하다. 제제 중의 바람직한 의약 조성물의 조성은 당업자에 의해, 적용 질환, 적용 투여 경로 등에 따라 적절히 결정할 수 있다.
의약 조성물 중의 부형제나 담체는 액체여도 되고 고체여도 된다. 적당한 부형제나 담체는 주사용 물이나 생리 식염수, 인공 뇌척수액이나 비경구 투여에 통상 이용되고 있는 다른 물질이어도 된다. 중성의 생리 식염수나 혈청 알부민을 포함하는 생리 식염수를 담체에 사용할 수도 있다. 의약 조성물에는 pH7.0-8.5 의 Tris 버퍼, pH4.0-5.5 의 아세트산 버퍼, pH3.0-6.2 의 시트르산 버퍼를 포함할 수 있다. 또, 이들 버퍼에 소르비톨이나 다른 화합물을 포함할 수도 있다. 본 발명의 의약 조성물에는 항LPS O11 항체를 포함하는 의약 조성물 그리고, 항LPS O11 항체 및 적어도 하나의 감염증 치료제를 포함하는 의약 조성물을 들 수 있고, 본 발명의 의약 조성물은 선택된 조성과 필요한 순도를 갖는 약제로서, 동결건조품 혹은 액체로서 준비된다. 항LPS O11 항체를 포함하는 의약 조성물 그리고, 항LPS O11 항체 및 적어도 하나의 감염증 치료제를 포함하는 의약 조성물은 수크로오스와 같은 적당한 부형제를 사용한 동결건조품으로서 성형될 수도 있다.
본 발명의 의약 조성물은 비경구 투여용으로 조제할 수도 있고, 경구에 의한 소화관 흡수용으로 조제할 수도 있다. 제제의 조성 및 농도는 투여 방법에 따라 결정할 수 있고, 본 발명의 의약 조성물에 포함되는, 항LPS O11 항체의 LPS O11 항원에 대한 친화성, 즉 LPS O11 항원에 대한 해리 정수 (Kd 값) 에 대해, 친화성이 높을 (Kd 값이 낮을) 수록, 인간에 대한 투여량을 적게 해도 약효를 발휘할 수 있기 때문에, 이 결과에 기초하여 본 발명의 의약 조성물의 인간에 대한 투여량을 결정할 수도 있다. 투여량은, 인간형 항LPS O11 항체를 인간에 대해 투여할 때에는, 약 0.1 ∼ 100 ㎎/㎏ 을 1 ∼ 180 일간에 1 회 투여하면 된다.
본 발명의 의약 조성물의 형태로는, 점적을 포함하는 주사제, 좌제, 경비제, 설하제, 경피흡수제 등을 들 수 있다.
본 발명의 항체는, 녹농균의 세포 표면에 노출되는 LPS 와 결합하는 점에서, 녹농균 감염증의 진단제로서 사용할 수도 있다.
본 발명의 항체를 진단제로서 조제하려면, 합목적의 임의의 수단을 채용해 임의의 제형으로 이것을 얻을 수 있다. 예를 들어 복수 (腹水), 목적 항체를 포함하는 배양액, 또는 정제한 항체에 대해 그 항체가를 측정하고, 적당하게 PBS (생리 식염을 포함하는 인산 완충액) 등으로 희석한 후, 0.1 % 나트륨아지드 등을 방부제로서 첨가한다. 또는 라텍스 등에 본 발명의 항체를 흡착시킨 것도 항체가를 구해 적당하게 희석하고, 방부제를 첨가해 사용한다. 이 경우의 라텍스로는, 적당한 수지 재료, 예를 들어 폴리스티렌, 폴리비닐톨루엔, 폴리부타디엔 등의 라텍스를 들 수 있다.
본 발명에 의하면, 본 발명의 항체를 사용하는 녹농균 감염의 진단 방법이 제공된다. 본 발명의 진단 방법은, 녹농균 감염의 우려가 있는 인간을 포함하는 포유 동물로부터 객담, 폐세정액, 고름, 눈물, 혈액, 요 등의 생체 시료를 채취하고, 이어서 채취한 시료와 본 발명의 항체를 접촉시키고, 항원 항체 반응이 생겼는지의 여부를 판단함으로써 실시할 수 있다.
본 발명에 의하면, 녹농균의 존재를 검출하기 위한 키트로서, 본 발명의 항체를 적어도 포함해 이루어지는 키트가 제공된다.
본 발명의 항체는, 표지한 것이어도 된다. 이 검출용 키트는 항원 항체 반응을 검출함으로써 녹농균의 존재를 검출한다.
따라서 본 발명의 검출 키트는, 원하는 바에 따라, 항원 항체 반응을 실시하기 위한 여러 가지 시약, 예를 들어 ELISA 법 등에 사용하는 2차 항체, 발색 시약, 완충액, 설명서, 및/또는 기구 등을 추가로 포함할 수 있다.
실시예
이하, 본 발명을 실시예에 의해 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 하기 실시예에 있어서 유전자 조작에 관한 각 조작은 특별히 명시가 없는 한, 「몰레큘러 클로닝 (Molecular Cloning)」(Sambrook, J., Fritsch, E. F. 및 Maniatis, T. 저, Cold Spring Harbor Laboratory Press 로부터 1989년에 발간) 에 기재된 방법에 의해 실시하거나, 또는 시판되는 시약이나 키트를 사용하는 경우에는 시판품의 지시서에 따라 사용했다.
[실시예 1] 항LPS O11 항체의 스크리닝
1)-1 면역
Mueller Hinton Agar (MHA, Becton, Dickinson and Company) 로 배양한 녹농균 ATCC 29260 를 생식에 현탁하고, ICR 마우스 (찰스 리버) 의 비복근에 10-11 일 간격으로 5 회 면역했다. 최종 면역 6 일 후에 슬하 림프절을 채취하고, 셀 스트레이너 (Becton, Dickinson and Company) 로 세포를 개개로 분리하고, RPMI1640 (Invitrogen) 으로 세정한 후, 셀 뱅커 (주지필드 주식회사) 에 현탁하여 -80 ℃ 에서 보존했다.
1)-2 모노클로날 항체의 취득
WO2009/091048, WO2011/027808, WO2012/133572, BMC Biotechnology, 11, 39 (2011), 및 BMC Biotechnology, 11, 75 (2011) 에 기재된 방법에 준해 실시했다.
1)-2-1 항체 산생 세포의 단리
면역 마우스의 림프절로부터 채취한 세포를 0.5 % BSA/2 mM EDTA/PBS 로 현탁하고, allophycocyanin 표지 항마우스 CD138 항체 (Becton, Dickinson and Company) 를 첨가해 4 ℃ 에서 15 분간 인큐베이트했다. 그 후, RPMI1640 으로 세포를 세정하고, ER-Tracker Blue-White DPX (Invitrogen) 를 첨가하고, 차광하에서 5 분간 반응시켰다. 세포를 PBS 에 현탁하고, FACS Aria (Becton, Dickinson and Company) 의 셀 소터를 사용하여 더블 포지티브가 되는 세포를 개개로 분리했다.
1)-2-2 cDNA 합성
셀 소터에 의해 개개로 분리된 세포를 올리고 dT25 가 결합한 자기 비즈 (Dynabeads mRNA DIRECT Kit, Invitrogen) 가 들어간 세포 용해액 (50 mM Tris-HCl (pH7.5), 250 mM LiCl, 5 mM EDTA (pH8), 0.5 % 도데실황산 Li (LiDS), 2.5 mM dithiothreitol (DTT)) 으로 용해하고, mRNA 를 자기 비즈에 결합시켰다. 다음으로 자기 비즈를 mRNA 세정 용액 A (10 mM Tris-HCl (pH7.5), 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA, 0.1 % LiDS, 0.1 % TritonX-100) 와 cDNA 합성용 용액 (50 mM Tris-HCl (pH8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0.5 mM dNTP, 0.2 % TritonX-100, 48 unit RNase inhibitor (Invitrogen)) 으로 1 회씩 세정한 후, 480 unit SuperScriptIII Reverse Transcriptase (Invitrogen) 를 첨가한 cDNA 합성용 용액으로 cDNA 합성을 실시했다. 계속해서 3' 테일링 반응 용액 (50 mM 인산칼륨, 4 mM MgCl2, 0.5 mM dGTP, 0.2 % TritonX-100, 48 unit RNase inhibitor (Invitrogen)) 으로 세정한 후, 480 unit Terminal Transferase, recombinant (Roche) 를 첨가한 반응 용액으로 3' 테일링 반응을 실시했다.
1)-2-3 마우스 중, 경쇄 가변 영역 유전자 단편의 증폭
자기 비즈를 TE 용액 (10 mM Tris-HCl (pH7.5), 1 mM EDTA, 0.1 % TritonX-100) 으로 세정 후, 5'-RACE PCR 법을 사용하여 마우스 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자의 증폭을 실시했다. 처음에, 자기 비즈를 PCR 반응 용액 (0.2 μM 프라이머, 0.2 mM dNTP, 0.1 unit PrimeSTAR HS DNA Polymerase (TAKARA)) 으로 옮기고, 94 ℃ 30 초-68 ℃ 90 초의 반응을 35 사이클 실시했다 (1st PCR). 다음으로 1st PCR 산물을 10 배 희석하고, 이것을 주형으로 1st PCR 과 동일한 조건으로 마우스 면역 글로불린 중쇄 유전자와 경쇄 유전자의 가변 영역을 각각 따로따로 증폭시켰다 (2nd PCR). 각 프라이머 세트는 하기와 같음.
1st PCR 프라이머 세트
5'-cggtaccgcgggcccgggatcccccccccccccdn-3'(AP3dC-S)(배열 번호 89)
5'-accytgcatttgaactccttgcc-3'(mIgγRT1 1111-AS)(배열 번호 90)
5'-actgccatcaatcttccacttgaca-3'(mIgκ 1st 589-AS)(배열 번호 91)
2nd PCR 프라이머 세트 (중쇄)
5'-cttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccggga-3'(MCS-AP3-S)(배열 번호 92)
5'-ctggacagggatccagagttcca-3'(mIgγ 3rd 656T-AS)(배열 번호 93)
2nd PCR 프라이머 세트 (경쇄)
5'-cttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccggga-3'(MCS-AP3-S)(배열 번호 92)
5'-actgaggcacctccagatgttaact-3'(mIgκ 3rd 525-AS)(배열 번호 94)
1)-2-4 마우스 IgG2a 혹은 인간 IgG1 정상 영역 유전자 연결용 이중 사슬 DNA 단편 및 마우스 경쇄 정상 영역 유전자 연결용 이중 사슬 DNA 단편의 제작
마우스 IgG2a 혹은 인간 IgG1 정상 영역 유전자 연결용 이중 사슬 DNA 단편 및 마우스 경쇄 정상 영역 유전자 연결용 이중 사슬 DNA 단편은 각각 배열 번호 1-3 에 나타내는 플라스미드 pJON mIgG2a, pJON mIgG2a-hIgG1, pJON mIgκ 를 주형으로 각각의 프라이머 세트로 PCR 을 실시해 증폭하고, DpnI (Roche) 처리해 얻었다. PCR 은 0.4 ng/㎖ pJON 을 템플릿에 0.2 mM dNTP, 0.2 μM 프라이머, 20 unit PrimeSTAR HS DNA Polymerase 의 반응 용액으로 94 ℃ 40 초-65 ℃ 40 초-72 ℃ 30 초의 반응을 25 사이클 실시했다.
pJON mIgG2a 및 pJON mIgG2a-hIgG1 용 프라이머 세트
5'-gcctggtcaagggctatttccctgag-3'(mIgG joint PCR-S)(배열 번호 95)
5'-gggggggggggggggggatcccgg-3'(polyG-AS)(배열 번호 96)
pJON mIgκ 용 프라이머 세트
5'-ctgtatccatcttcccaccatccagt-3'(mIgκ joint PCR-S)(배열 번호 97)
5'-gggggggggggggggggatcccgg-3'(polyG-AS)(배열 번호 96)
1)-2-5 마우스 혹은 인간 키메라화 면역 글로불린 선상화 발현 벡터의 제작
2nd PCR 산물에 Terminal Transferase, recombinant (Roche) 를 16 unit 첨가하고, 37 ℃ 에서 30 분 반응시키고, 그 후 94 ℃ 에서 5 분간 가열함으로써 효소 반응을 정지시켰다. 조제한 3' 말단 폴리뉴클레오티드 부가 마우스 중쇄 가변 영역 유전자 용액에, 마우스 IgG2a 혹은 인간 IgG1 정상 영역 유전자 연결용 이중 사슬 DNA 단편, 0.2 μM 프라이머, 0.2 mM dNTP 를 첨가하고, 0.1 unit PrimeSTAR HS DNA Polymerase 를 사용하여 94 ℃ 30 초-70 ℃ 4 분의 반응을 5 사이클, 계속해 94 ℃ 30 초-60 ℃ 30 초-72 ℃ 1 분의 반응을 30 사이클 실시함으로써 마우스 중쇄 혹은 인간 키메라화 중쇄 유전자 발현 유닛을 제작했다. 마찬가지로, 마우스 경쇄 가변 영역 유전자 용액에, 마우스 경쇄 정상 영역 유전자 연결용 이중 사슬 DNA 단편을 첨가해 반응을 실시해, 마우스 경쇄 유전자 발현 유닛을 제작했다. 사용한 프라이머는 하기와 같다.
연결용 프라이머 세트
5'-agagaaaccgtctatcagggcgatggc-3'(miniCMV f1-S)(배열 번호 98)
5'-agagaccctttgacgttggagtccacg-3'(miniCMV f1-AS)(배열 번호 99)
1)-2-6 항체 유전자의 발현
상기 실험에서 증폭된 전체 길이의 마우스 중쇄 또는 인간 키메라 중쇄와 마우스 경쇄 유전자 발현 유닛을 Lipofectamine2000 (Invitrogen) 을 사용하여 HEK293T 세포에 유전자 도입하고, 37 ℃, 5 % CO2 하에서 4 일간 배양함으로써 항체 배양 상청을 얻었다.
1)-3 모노클로날 항체의 스크리닝
1)-3-1 항체 농도의 측정
Mouse IgG2a ELISA Quantitation Set (Bethyl Laboratories) 또는 Human IgG ELISA Quantitation Set (Bethyl Laboratories) 를 사용하여 측정했다. 방법은 첨부된 매뉴얼에 준해 실시했다. 즉, Affinity purified Goat anti-Mouse IgG2a Coating Antibody 또는 Affinity purified Goat anti-Human IgG-Fc Coating Antibody 를 0.05 MCarbonate-Bicarbonate (pH9.6) 로 101 배 희석하고, 100 ㎕ 를 well 에 첨가해 실온에서 1 시간 고상화했다. 150 ㎕ 의 0.05 % Tween20 첨가 Tris buffered saline (TBS ; Tween20 첨가 TBS 는 TBST) 으로 3 회 세정하고, 200 ㎕ 의 1 % BSA/TBS 를 well 에 첨가해 0.5-2 시간 블로킹했다. 각 항체 배양 상청 혹은 정제 항체를, 원액 혹은 필요에 따라 1 % BSA/TBST 로 희석하고, 100 ㎕ 를 well 에 첨가하고, 실온에서 1 시간 반응시켰다. TBST 로 3 회 세정하고, 50000 배 희석한 HRP Conjugated Goat anti-Mouse IgG2a Detection Antibody 또는 100000 배 희석한 HRP Conjugated Goat anti-Human IgG-Fc Detection Antibody 를 100 ㎕/well 첨가하고, 1 시간 반응시켰다. TBST 로 3 회 세정하고, SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Substrate (Thermo Fisher Scientific K.K.) 를 첨가하고, 첨가 직후에 발광을 ARVO 1420 멀티 라벨 카운터 (Perkin Elmer) 로 측정했다. 키트 첨부의 표준품을 사용하여 검량선을 구하고, 농도를 산출했다.
1)-3-2 옵소닌 활성 측정
측정용 버퍼로서 0.1 % gelatin/1 % FBS/Hank's balanced salt solution (옵소닌 버퍼) 을 조제했다. 이펙터 세포로서 HL60 을 0.8 % N,N-Dimethylformamide 를 첨가한 10 % FBS 함유 RPMI1640 (Invitrogen) 으로 5 또는 6 일간 배양하고, 호중구 유사 분화 HL60 을 옵소닌 버퍼로 조제했다. 타겟균으로서 MHA 에서 배양한 녹농균 ATCC 29260 을 옵소닌 버퍼로 현탁하여 조제했다. 보체로서 Baby Rabbit Serum (Cederlane) 을 빙랭 증류수로 용해해 조제했다. 균액 (최종 농도 2 × 104 cells/㎖) 과 항체 배양 상청 혹은 정제 항체를 혼합하고, 4 ℃ 에서 30 분간 정치한 후, 조제한 호중구용 분화 HL60 (최종 농도 4 × 106 cells/㎖) 과 보체 (최종 농도 10 %) 를 첨가하고, 37 ℃, 5 % CO2 하에서 완만하게 교반하면서 1 시간 배양했다. 배양 후, 각 샘플을 MHA 에 도말하고, 다음날에 콜로니수를 카운트했다. 항체 비첨가의 컨트롤과 비교해, 50 % 증식 억제 효과를 나타낸 샘플을 활성 있음으로 판정했다.
1)-3-3 CDR 배열의 결정
1)-2-3 에서 얻은 마우스 중, 경쇄 가변 영역 유전자 산물을 템플릿으로 하고 하기 시퀀스 프라이머로 시퀀스를 확인했다. 시퀀스 해석은 유전자 배열 해석 장치 Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer (Life technologies) 를 사용하여 실시했다. 얻어진 배열을 기초로 Andrew C. R. Martin 등의 Abysis 데이터베이스 (http://www.bioinf.org.uk/abs/#cdrid) 에 따라, CDR 배열을 결정했다.
시퀀스 프라이머 (중쇄용)
5'-acaccgctggacagggatccagag-3'(mIgG sequence)(배열 번호 100)
시퀀스 프라이머 (경쇄용)
5'-gtagaagttgttcaagaagcacac-3'(mIgκ sequence)(배열 번호 101)
1)-3-4 모노클로날 항체의 선발
이상의 스크리닝으로부터 옵소닌 활성이 강하고, CDR 배열이 유니크한 항체 배양 상청 샘플 No.76, #1G5, #4C12 를 찾아냈다. No.76 은 pJON mIgG2a 와 pJON mIgκ 를, #1G5 와 #4C12 는 pJON mIgG2a-hIgG1 과 pJON mIgκ 를 각각 사용하여 제작한 항체이다. 각각의 중쇄와 경쇄의 가변 영역과 CDR 의 아미노산 배열을 배열 번호 4-27 에 나타냈다. 배열표의 배열 번호 20 에 나타내는 #4C12 의 경쇄는 아미노산 번호 75 에 시스테인을 포함하지만, 티로신으로 치환한 것을 「#4C13」이라고 명명했다. 또, #4C12 의 중쇄와 #1G5 의 경쇄를 조합한 것을 「#4C13K」라고 명명했다. #4C13K 는 1)-2-5 에서 제작된 #4C12 의 인간 키메라화 중쇄 유전자 발현 유닛 및 #1G5 의 마우스 경쇄 유전자 발현 유닛을 1)-2-6 의 방법에 따라, HEK293T 로 발현시켰다. #1G5 와 #4C13K 는 ProteinG (GE Healthcare) 로 정제하고, 각각 「c#1G5M」, 「c#4C13KM」이라고 명명했다. 항체 농도는 1)-3-1 의 방법으로 산출했다.
[실시예 2] 인간 키메라화 항LPS O11 항체 및 Meiji1640, Meiji1656, 인간 IgG1 타입 1BO11 (1BO11 hIgG1), 마우스 IgG2a 타입 No.76 (No.76 mIgG2a) 의 조제
2)-1 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 의 구축
플라스미드 pcDNA3.3-TOPO/LacZ (INVITROGEN 사) 를 제한 효소 XbaI 및 PmeI 로 소화해 얻어지는 약 5.4 kb 의 프래그먼트와, 배열 번호 28 에 나타내는 인간 경쇄 분비 시그널, 및 인간 경쇄 정상 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 In-Fusion Advantage PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 결합해, pcDNA3.3/LK 를 제작했다.
pcDNA3.3/LK 를 주형으로 하고, 하기 프라이머 세트로 PCR 을 실시하고, 얻어진 약 3.8 kb 의 프래그먼트를 인산화 후 셀프 라이게이션함으로써 CMV 프로모터의 하류에 시그널 배열, 클로닝 사이트, 및 인간 경쇄 정상 영역을 갖는, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 구축했다.
프라이머 세트
5'-tataccgtcgacctctagctagagcttggc-3'(3.3-F1)(배열 번호 102)
5'-gctatggcagggcctgccgccccgacgttg-3'(3.3-R1)(배열 번호 103)
2)-2 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 의 구축
pCMA-LK 를 XbaI 및 PmeI 로 소화해 경쇄 분비 시그널 및 인간 경쇄 정상 영역을 제거한 DNA 단편과, 배열 번호 29 에 나타내는 인간 중쇄 시그널 배열, 및 인간 IgG1 정상 영역의 아미노산을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 In-Fusion Advantage PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 결합하여, CMV 프로모터의 하류에 시그널 배열, 클로닝 사이트, 인간 IgG1 중쇄 정상 영역을 갖는 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 구축했다.
2)-3 인간 키메라화 항LPS O11 항체의 제작
2)-3-1 인간 키메라화 No.76 경쇄 발현 벡터의 구축
실시예 1)-2-3 에서 얻어진 No.76 경쇄의 가변 영역을 포함하는 cDNA 를 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 경쇄의 가변 영역을 코드하는 cDNA 를 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 BsiWI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써, 인간 키메라화 No.76 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/No.76」이라고 명명했다. 인간 키메라화 No.76 경쇄의 뉴클레오티드 배열을 배열표의 배열 번호 30 에 나타내고, 아미노산 배열을 배열 번호 31 에 나타냈다.
인간 키메라화 No.76 경쇄용 프라이머 세트
5'-atctccggcgcgtacggcaacattgtaatgacccaatctcccaaatc-3'(76L-F)(배열 번호 104)
5'-ggagggggcggccacagcccgttttatttccagcttggtcctccc-3'(76L-R)(배열 번호 105)
2)-3-2 인간 키메라화 No.76 중쇄 발현 벡터의 구축
실시예 1)-2-3 에서 얻어진 No.76 중쇄의 가변 영역을 포함하는 cDNA 를 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 중쇄의 가변 영역을 코드하는 cDNA 를 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써, 인간 키메라화 No.76 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/No.76」이라고 명명했다. 인간 키메라화 No.76 중쇄의 뉴클레오티드 배열을 배열표의 배열 번호 32 에 나타내고, 아미노산 배열을 배열 번호 33 에 나타냈다.
인간 키메라화 No.76 중쇄용 프라이머 세트
5'-ccagatgggtgctgagccaggtccaactgcagcagcctggtgctgag-3'(76H-F)(배열 번호 106)
5'-cttggtggaggctgagctgactgtgagagtggtgccttggccccag-3'(76H-R)(배열 번호 107)
2)-3-3 인간 키메라화 #1G5 경쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 34 에 나타내는 인간 키메라화 #1G5 경쇄를 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 인간 키메라화 #1G5 경쇄를 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 XbaI 와 PmeI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써, 인간 키메라화 #1G5 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/1G5」라고 명명했다. 인간 키메라화 #1G5 경쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 35 에 나타냈다.
인간 키메라화 #1G5 경쇄용 프라이머 세트
5'-ccagcctccggactctagagccacc-3'(CM-inf-F)(배열 번호 108)
5'-agttagcctcccccgtttaaactc-3'(CM-inf-R)(배열 번호 109)
2)-3-4 인간 키메라화 #1G5 중쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 36 에 나타내는 인간 키메라화 #1G5 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 449 에 나타내는 인간 키메라화 #1G5 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 인간 키메라화 #1G5 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 인간 키메라화 #1G5 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/1G5」라고 명명했다. 인간 키메라화 #1G5 중쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 37 에 나타냈다.
인간 키메라화 #1G5 중쇄용 프라이머 세트
5'-agctcccagatgggtgctgagc-3'(EG-Inf-F)(배열 번호 110)
5'-gggcccttggtggaggctgagc-3'(EG1-Inf-R)(배열 번호 111)
2)-3-5 인간 키메라화 #4C13 경쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 38 에 나타내는 인간 키메라화 #4C13 경쇄를 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 인간 키메라화 #4C13 경쇄를 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 XbaI 와 PmeI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써, 인간 키메라화 #4C13 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/4C13」이라고 명명했다. 인간 키메라화 #4C13 경쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 39 에 나타냈다.
인간 키메라화 #4C13 경쇄용 프라이머 세트
5'-ccagcctccggactctagagccacc-3'(CM-inf-F)(배열 번호 108)
5'-agttagcctcccccgtttaaactc-3'(CM-inf-R)(배열 번호 109)
2)-3-6 인간 키메라화 #4C13 중쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 40 에 나타내는 인간 키메라화 #4C13 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 437 에 나타내는 인간 키메라화 #4C13 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 인간 키메라화 #4C13 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 인간 키메라화 #4C13 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/4C13」이라고 명명했다. 인간 키메라화 #4C13 중쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 41 에 나타냈다.
인간 키메라화 #4C13 중쇄용 프라이머 세트
5'-agctcccagatgggtgctgagc-3'(EG-Inf-F)(배열 번호 110)
5'-gggcccttggtggaggctgagc-3'(EG1-Inf-R)(배열 번호 111)
2)-3-7 인간 키메라화 항LPS O11 항체의 조제
2)-3-7-1 인간 키메라화 항LPS O11 항체의 생산
FreeStyle 293F 세포 (INVITROGEN 사) 는 매뉴얼에 따라, 계대, 배양을 실시했다.
대수 증식기의 1.2 × 109 개의 FreeStyle 293F 세포 (INVITROGEN 사) 를 3L Fernbach Erlenmeyer Flask (CORNING 사) 에 파종하고, FreeStyle293 expression medium (INVITROGEN 사) 으로 희석해 1.0 × 106 세포/㎖ 로 조제한 후에, 37 ℃, 8% CO2 인큐베이터 내에서 90 rpm 으로 1 시간 진탕 배양했다. Polyethyleneimine (Polyscience #24765) 3.6 ㎎ 을 Opti-Pro SFM (INVITROGEN 사) 20 ㎖ 에 용해하고, 다음으로 PureLink HiPure Plasmid 키트 (INVITROGEN 사) 를 사용하여 조제한 경쇄 발현 벡터 (0.8 ㎎) 및 중쇄 발현 벡터 (0.4 ㎎) 를 20 ㎖ 의 Opti-Pro SFM (INVITROGEN 사) 에 현탁했다. Polyethyleneimine/Opti-Pro SFM 혼합액 20 ㎖ 에, 발현 벡터/Opti-Pro SFM 혼합액 20 ㎖ 를 첨가하여 완만하게 교반하고, 추가로 5 분간 방치한 후에 FreeStyle 293F 세포에 첨가했다. 37 ℃, 8 % CO2 인큐베이터로 7 일간, 90 rpm 으로 진탕 배양해 얻어진 배양 상청을 Disposable Capsule Filter (ADVANTEC #CCS-045-E1H) 로 여과했다.
pCMA-LK/No.76 과 pCMA-G1/No.76 의 조합에 의해 취득된 인간 키메라화 No.76 을 「cNo.76」, pCMA-LK/1G5 와 pCMA-G1/1G5 의 조합에 의해 취득된 인간 키메라화 #1G5 를 「c#1G5」, pCMA-LK/4C13 과 pCMA-G1/4C13 의 조합에 의해 취득된 인간 키메라화 #4C13 을 「c#4C13」이라고 명명했다.
2)-3-7-2 인간 키메라화 항LPS O11 항체의 정제
상기 2)-3-7-1 에서 얻어진 배양 상청으로부터 항체를, rProteinA 어피니티 크로마토그래피 (4-6 ℃ 하) 1 단계 공정으로 정제했다. rProteinA 어피니티 크로마토그래피 정제 후의 버퍼 치환 공정은 4-6 ℃ 하에서 실시했다. 처음으로, 배양 상청을, PBS 로 평형화한 MabSelectSuRe (GE Healthcare Bioscience 사 제조) 가 충전된 칼럼에 어플라이했다. 배양액이 칼럼에 모두 들어간 후, 칼럼 용량 2 배 이상의 PBS 로 칼럼을 세정했다. 다음으로 2M 아르기닌 염산염 용액 (pH4.0) 으로 용출하고, 항체가 포함된 획분을 모았다. 그 획분을 투석 (Thermo Scientific 사, Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette) 에 의해 HBSor (25 mM 히스티딘/5 % 소르비톨, pH6.0) 으로의 액치환을 실시했다. Centrifugal UF Filter Device VIVASPIN20 (분획 분자량 UF10K, Sartorius 사, 4 ℃ 하) 으로 농축하고, IgG 농도를 5 ㎎/㎖ 이상으로 조제했다. 마지막으로 Minisart-Plus filter (Sartorius 사) 로 여과하고, 정제 샘플로 했다.
2)-4 Meiji1640 및 Meiji1656, 인간 IgG1 타입 1BO11 (1BO11 hIgG1), 마우스 IgG2a 타입 No.76 (No.76 mIgG2a) 의 제작
2)-4-1 Meiji1640 의 제작
Meiji1640 은 WO2011/102551 에 기재되어 있는 경쇄, 및 중쇄의 아미노산 배열을 기초로 제작했다.
2)-4-1-1 Meiji1640 경쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 42 에 나타내는 Meiji1640 경쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 38 내지 408 에 나타내는 Meiji1640 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 Meiji1640 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 BsiWI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 Meiji1640 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/Meiji1640」이라고 명명했다. Meiji1640 경쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 43 에 나타냈다.
Meiji1640 경쇄용 프라이머 세트
5'-ctgtggatctccggcgcgtacggc-3'(CM-LKF)(배열 번호 112)
5'-ggagggggcggccaccgtacg-3'(KCL-Inf-R)(배열 번호 113)
2)-4-1-2 Meiji1640 중쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 44 에 나타내는 Meiji1640 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 458 에 나타내는 Meiji1640 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 Meiji1640 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 Meiji1640 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/Meiji1640」이라고 명명했다. Meiji1640 중쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 45 에 나타냈다.
Meiji1640 중쇄용 프라이머 세트
5'-agctcccagatgggtgctgagc-3'(EG-Inf-F)(배열 번호 110)
5'-gggcccttggtggaggctgagc-3'(EG1-Inf-R)(배열 번호 111)
2)-4-2 Meiji1656 의 제작
Meiji1656 은 WO2011/102551 에 기재되어 있는 경쇄, 및 중쇄의 아미노산 배열을 기초로 제작했다.
2)-4-2-1 Meiji1656 경쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 46 에 나타내는 Meiji1656 경쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 38 내지 402 에 나타내는 Meiji1656 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 Meiji1656 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 BsiWI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 Meiji1656 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/Meiji1656」이라고 명명했다. Meiji1656 경쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 47 에 나타냈다.
Meiji1656 경쇄용 프라이머 세트
5'-ctgtggatctccggcgcgtacggc-3'(CM-LKF)(배열 번호 112)
5'-ggagggggcggccaccgtacg-3'(KCL-Inf-R)(배열 번호 113)
2)-4-2-2 Meiji1656 중쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 48 에 나타내는 Meiji1656 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 467 에 나타내는 Meiji1656 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 Meiji1656 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 Meiji1656 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/Meiji1656」이라고 명명했다. Meiji1656 중쇄의 아미노산 배열을 배열표의 배열 번호 49 에 나타냈다.
Meiji1656 중쇄용 프라이머 세트
5'-agctcccagatgggtgctgagc-3'(EG-Inf-F)(배열 번호 110)
5'-gggcccttggtggaggctgagc-3'(EG1-Inf-R)(배열 번호 111)
2)-4-3 인간 IgG1 타입 1BO11 (1BO11 hIgG1) 의 제작
1BO11 hIgG1 은 WO2006/084758 의 도 2, 및 도 1 에 기재되어 있는 경쇄, 및 중쇄의 아미노산 배열을 기초로 제작했다.
2)-4-3-1 1BO11 hIgG1 경쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 50 에 나타내는 마우스 IgG2b 타입 키메라화 1BO11 경쇄를 코드하는 DNA 단편을 합성했다 (MBL 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 경쇄의 가변 영역을 코드하는 cDNA 를 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 BsiWI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써, 1BO11 hIgG1 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/1BO11」이라고 명명했다. 1BO11 hIgG1 경쇄의 뉴클레오티드 배열을 배열표의 배열 번호 51 에 나타내고, 아미노산 배열을 배열 번호 52 에 나타냈다.
1BO11 hIgG1 경쇄용 프라이머 세트
5'-atctccggcgcgtacggcgacgtggtgatgacccagagccctctgtcc-3'(h1BO-LF)(배열 번호 114)
5'-gggcggccaccgtacgcttgatctccaccttggtgcctccgccg-3'(h1BO-LR)(배열 번호 115)
2)-4-3-2 1BO11 hIgG1 중쇄 발현 벡터의 구축
배열표의 배열 번호 53 에 나타내는 마우스 IgG2b 타입 키메라화 1BO11 중쇄를 코드하는 DNA 단편을 합성했다 (MBL 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 중쇄의 가변 영역을 코드하는 cDNA 를 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써, 1BO11 hIgG1 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/1BO11」이라고 명명했다. 1BO11 hIgG1 중쇄의 뉴클레오티드 배열을 배열표의 배열 번호 54 에 나타내고, 아미노산 배열을 배열 번호 55 에 나타냈다.
1BO11 hIgG1 중쇄용 프라이머 세트
5'-ccagatgggtgctgagcgaggagcaagtggtggagagcgg-3'(h1BO-HF)(배열 번호 116)
5'-cttggtggaggctgagctcacggtcaccatggtgccttgtc-3'(h1BO-HR)(배열 번호 117)
2)-4-4 마우스 IgG2a 타입 No.76 (No.76 mIgG2a) 의 제작
2)-4-4-1 No.76 mIgG2a 경쇄 발현 벡터의 제작
배열 번호 118 에 나타내는 No.76 mIgG2a 경쇄를 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 Strings DNA Fragments). 합성한 DNA 단편을, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 XbaI 및 PmeI 로 소화해 κ 사슬 분비 시그널 및 인간 κ 사슬 정상 영역을 제거한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 No.76 mIgG2a 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA/No.76 mIgG2aL」이라고 명명했다. No.76 mIgG2a 경쇄의 아미노산 배열을 배열 번호 119 에 나타냈다.
2)-4-4-2 No.76 mIgG2a 중쇄 발현 벡터의 제작
배열 번호 120 에 나타내는 No.76 mIgG2a 중쇄를 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 No.76 mIgG2a 중쇄를 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 XbaI 및 PmeI 로 소화해 κ 사슬 분비 시그널 및 인간 κ 사슬 정상 영역을 제거한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 No.76 mIgG2a 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA/No.76 mIgG2aH」라고 명명했다. No.76 mIgG2a 중쇄의 아미노산 배열을 배열 번호 121 에 나타냈다.
No.76 mIgG2a 중쇄용 프라이머 세트
5'-ccagcctccggactctagagccacc-3'(CM-inf-F)(배열 번호 108)
5'-agttagcctcccccgtttaaactc-3'(CM-inf-R)(배열 번호 109)
2)-4-5 Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1, No.76 mIgG2a의 생산 및 정제
2)-4-5-1 Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1, No.76 mIgG2a 의 생산
실시예 2)-3-7-1 과 동일한 방법으로 생산했다.
Meiji1640 은 pCMA-LK/Meiji1640 과 pCMA-G1/Meiji1640 의 조합에 의해 취득하고, Meiji1656 은 pCMA-LK/Meiji1656 과 pCMA-G1/Meiji1656 의 조합에 의해 취득하고, 1BO11 hIgG1 은 pCMA-LK/1BO11 과 pCMA-G1/1BO11 의 조합에 의해 취득하고, No.76 mIgG2a 는 pCMA/No.76 mIgG2aL 과 pCMA/No.76 mIgG2aH 의 조합에 의해 취득했다.
2)-4-5-2 Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1, No.76 mIgG2a 의 정제
상기 2)-4-5-1 에서 얻어진 배양 상청으로부터 항체를 실시예 2)-3-7-2 와 동일한 방법으로 정제했다.
[실시예 3] 항LPS O11 항체의 in vitro 활성
3)-1 녹농균 ATCC 29260 에 대한 옵소닌 활성
1)-3-2 의 방법에 따라 ATCC 29260 에 대한 cNo.76, c#1G5M, c#1G5, c#4C13KM, c#4C13, Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1 의 옵소닌 활성을 측정했다. 옵소닌 활성은 50 % 증식 저해 최소 농도로 나타냈다. 그 결과를 표 2 에 나타낸다.
cNo.76, c#1G5M, c#1G5, c#4C13KM, c#4C13 의 옵소닌 활성은 거의 동등하고, 그것들은 Meiji1640 보다 27-81 배, Meiji1656 보다 9-27 배, 1BO11 hIgG1 보다 243-729 배 강한 활성을 나타냈다.
3)-2 녹농균 O11 주에 대한 결합 특이성
각종 O 항원 보유 녹농균에 대한 cNo.76, c#1G5, c#4C13 의 결합 특이성을 whole cell ELISA 에 의해 확인했다. 사용한 균주와 O 항원을 표 3 에 나타낸다.
MHA 에서 배양한 균을 생식으로 현탁하여 OD600=0.5-0.6 으로 조제하고, 1 시간 고상화했다. 5 % skim milk (Becton, Dickinson and Company)/TBST 로 2 시간 블로킹한 후, 1차 항체로서 0.1 ㎍/㎖ 의 cNo.76, c#1G5, c#4C13 을 첨가해 1 시간 반응시켰다. 계속해서 2차 항체로서 Anti-Human IgG, HRP-Linked WholeAb Sheep (GE Healthcare) 을 1 시간 반응시킨 후, SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent Substrate (Thermo Fisher Scientific K.K.) 를 첨가하고, 첨가 직후에 발광을 ARVO 1420 멀티 라벨 카운터 (Perkin Elmer) 로 측정했다. 각 스텝 사이는 TBST 로 2 또는 3 회 세정했다. 포지티브 컨트롤로서 녹농균 ATCC 29260 을, 네거티브 컨트롤로서 대장균 ATCC 25922 를 사용하였다. cNo.76, c#1G5, c#4C13 은 O11 주에 대해 높은 결합 활성을 나타냈다. 한편, 다른 O 항원 보유주에 결합 활성을 나타내지 않았던 점에서, O11 항원을 특이적으로 인식하는 것이 분명해졌다 (도 4).
3)-3 녹농균 O11 임상 분리주에 대한 결합 활성
다이이치산쿄 주식회사 보유의 녹농균 O11 임상 분리 31 주 및 포지티브 컨트롤로서 ATCC 29260 에 대한 결합 활성을 whole cell ELISA 에 의해 측정했다. 녹농균의 O 항원은 녹농균 군별 면역 혈청 (덴카세이켄) 20 ㎕ 와 균액 20 ㎕ 를 혼합하고, 항원 항체 반응에 의한 응집의 유무에 의해 판정했다. Whole cell ELISA 는 3)-2 와 동일하게 실시하고, 1차 항체로서 0.1 ㎍/㎖ 의 cNo.76, c#1G5M, c#4C13KM, Meiji1640, Meiji1656 과 6.4 ㎍/㎖ 의 1BO11 hIgG1 을 조제하고, 1 시간 반응시켰다. 사용한 균주의 정보를 표 4 에, 측정 결과를 표 5 에 나타낸다.
대장균에 대한 결합 활성과 비교해 4 배 이상 활성이 강한 경우, 결합 활성 있음이라고 판단한 바, cNo.76, c#1G5M, c#4C13KM 은 모든 주에 대해 결합 활성을 나타내고, Meiji1640 는 22 주, Meiji1656 은 25 주, 1BO11 hIgG1 은 21 주에만 결합 활성을 나타냈다. cNo.76, c#1G5M, c#4C13KM, Meiji1640, Meiji1656, 및 1BO11 hIgG1 의 O11 임상 분리주에 대한 커버율은, 각각 100 %, 100 %, 100 %, 71 %, 81 %, 및 68 % 였다.
3)-4 녹농균 O11 임상 분리주에 대한 옵소닌 활성
3)-3 에서 사용한 O11 주 중 No.9, 12, 18, 24, 26, 31 주에 대한 옵소닌 활성을 측정했다. 방법은 1)-3-2 와 동일한 방법으로 실시하고, 50 % 증식 저해 활성이 확인되는 최소 농도를 구했다. 그 결과를 표 6 에 나타낸다.
cNo.76, c#1G5 또는 c#1G5M, c#4C13 또는 c#4C13KM 은 모든 주에 활성을 나타냈다. 한편, Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1 은 결합 활성이 확인되지 않았던 No.9, 12, 18 주에 대해 옵소닌 활성을 나타내지 않았다. 이들 결과로부터 in vitro 에 있어서 cNo.76, c#1G5 또는 c#1G5M, c#4C13 또는 c#4C13KM 은, Meiji1640, Meiji1656, 및 1BO11 hIgG1 과 비교해 O11 주에 대한 커버율이 높은 것이 분명해졌다.
[실시예 4] 항LPS O11 항체의 in vivo 활성
4)-1 녹농균 ATCC 29260 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여)
MHA 에서 배양한 녹농균 ATCC 29260 을 OD600=0.10 로 조제한 후, Mueller Hinton Broth (Becton, Dickinson and Company) 에서 100-109 의 10 배 희석 계열을 조제하고, 35 ℃ 에서 하룻밤 배양했다. 희석 계열 중, OD600=0.10 또는 0.10 을 초과하는 최대 희석률의 균액을 사용하여 OD600=0.10 으로 조제하고, 4 배 희석해 접종 균액으로 했다. ICR 마우스 (찰스 리버) 에 접종 균액을 50 ㎕ 경비 접종하고, 접종 1 시간 후에 cNo.76, Meiji1640, Meiji1656 을 3 또는 10 ㎎/㎏ 정맥내 투여했다 (n=3). 접종 24 시간 후에 폐내 생균수를 측정하고, 치료 효과를 판정했다. 항체 비투여의 컨트롤군과 비교해 cNo.76 투여군에서 양호한 치료 효과가 확인되고, 또 그 치료 효과는 Meiji1640, Meiji1656 과 동등 이상이었다 (도 5).
4)-2 녹농균 임상 분리주에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과
4)-2-1 녹농균 임상 분리주 No.12 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (균과 항체의 혼합 투여)
MHA 에서 배양한 녹농균 임상 분리주 No.12 를 생식에 현탁하고, OD600=2.0 으로 조제했다 (10 배 희석액이 0.2 가 되는 균액을 조제). 균과 항체의 결합이 확실하게 일어나도록, 균액과 20 또는 100 ㎍/㎖ 의 cNo.76, Meiji1640, 또는 Meiji1656 을 1 : 9 의 비율로 혼합하고, 그것들을 ICR 마우스 (찰스 리버) 에 50 ㎕ 경비 접종했다 (n=3). 접종 24 시간 후에 폐내 생균수를 측정하고, 치료 효과를 판정했다. 또, 대상으로서 레보플록사신 (LVFX) 의 치료 효과도 검토했다 (No.12 주에 대한 LVFX 의 최소 발육 저지 농도 (MIC) 는 > 128 ㎍/㎖). 즉, 균액과 생식을 1 : 9 로 혼합하고, 50 ㎕ 접종한 마우스에 240 ㎎/㎏ 의 LVFX 를 접종 직후에 피하 투여했다. 항체 비투여의 컨트롤군과 비교해 cNo.76 은 양호한 치료 효과를 나타냈지만, Meiji1640, Meiji1656, LVFX 투여군에서는 치료 효과는 확인되지 않았다 (도 6).
4)-2-2 녹농균 임상 분리주 No.31 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (균과 항체의 혼합 투여)
MHA 에서 배양한 녹농균 임상 분리주 No.31 을 생식에 현탁하고, OD600=5.0 으로 조제했다 (10 배 희석액이 0.5 가 되는 균액을 조제). 균과 항체의 결합이 확실하게 일어나도록, 균액과 20 또는 100 ㎍/㎖ 의 cNo.76, Meiji1640, 또는 Meiji1656 을 1 : 9 의 비율로 혼합하고, 그것들을 ICR 마우스 (찰스 리버) 에 50 ㎕ 경비 접종했다 (n=3). 접종 24 시간 후에 폐내 생균수를 측정하고, 치료 효과를 판정했다. 또, 대상으로서 LVFX 의 치료 효과도 검토했다 (No.31 주에 대한 LVFX 의 MIC 는 32 ㎍/㎖). 즉, 균액과 생식을 1 : 9 로 혼합하고, 50 ㎕ 접종한 마우스에 240 ㎎/㎏ 의 LVFX 를 접종 직후에 피하 투여했다. 항체 비투여의 컨트롤군과 비교해 cNo.76, Meiji1640, Meiji1656 은 양호한 치료 효과를 나타냈지만, LVFX 투여군에서는 치료 효과는 확인되지 않았다 (도 7).
4)-2-3 녹농균 임상 분리주 No.12 에 의한 마우스 폐감염 모델에 있어서의 치료 효과 (정맥내 투여)
MHA 에서 배양한 녹농균 임상 분리주 No.12 를 생식에 현탁하고, OD600=0.20 으로 조제하고, 그것을 접종 균액으로 했다. ICR 마우스 (찰스 리버) 에 50 ㎕ 경비 접종하고, 접종 직후에 cNo.76, Meiji1640, Meiji1656 을 2 또는 10 ㎎/㎏ 정맥내 투여했다 (n=3). 접종 24 시간 후에 폐내 생균수를 측정하고, 치료 효과를 판정했다. 또, 대상으로서 LVFX 도 240 ㎎/㎏ 피하 투여하고, 치료 효과를 검토했다. 정맥내 투여에 있어서도 cNo.76 은 양호한 치료 효과를 나타냈지만, Meiji1640, Meiji1656, LVFX 투여군에서는 치료 효과는 확인되지 않았다 (도 8). 이상의 결과로부터, cNo.76 은 LVFX 와 같은 기존약이 무효인 다제내성 녹농균에 대해서도 유효인 가능성이 나타났다. 또, cNo.76 은 실시예 3 에서 나타낸 in vitro 에 있어서의 높은 커버율의 특장이 in vivo 에 있어서도 나타났다.
[실시예 5] #1G5, #4C13K 의 인간화 디자인
5)-1 #1G5 의 인간화 버전의 설계
5)-1-1 #1G5 의 가변 영역의 분자 모델링
#1G5 의 가변 영역의 분자 모델링은, 상동성 모델링으로서 일반적으로 공지된 방법 (Methodsin Enzymology, 203, 121-153, (1991)) 에 의해 실행되었다. ProteinData Bank (Nuc. AcidRes. 35, D301-D303 (2007)) 에 등록된 인간 면역 글로불린의 가변 영역의 1차 배열 (X 선 결정 구조로부터 유도되는 삼차원 구조가 입수 가능하다) 을, 위에서 결정된 #1G5 의 가변 영역과 비교했다. 결과적으로, 1UYW 가, #1G5 의 경쇄의 가변 영역에 대해 동일하게 프레임 워크 중에 결손이 있는 항체 중에서, 가장 높은 배열 상동성을 갖는다고 하여 선택되었다. 또, 3GI9 가, #1G5 의 중쇄의 가변 영역에 대해 가장 높은 배열 상동성을 갖는다고 하여 선택되었다. 프레임 워크 영역의 삼차원 구조는, #1G5 의 경쇄 및 중쇄에 대응하는 1UYW 및 3GI9 의 좌표를 조합하여, 「프레임 워크 모델」을 얻음으로써 제작되었다. 이어서, 각각의 CDR 에 대한 대표적인 컨포메이션이 프레임 워크 모델에 삽입되었다.
마지막으로, 에너지의 점에서 #1G5 의 가변 영역의 가능성이 있는 분자 모델을 얻기 위해서, 불리한 원자간 접촉을 제거하기 위한 에너지 계산을 실시했다. 상기 순서를, 시판되는 단백질 입체 구조 해석 프로그램 DiscoveryStudio (Accelrys, Inc.) 를 사용하여 실시했다.
5)-1-2 인간화 #1G5 에 대한 아미노산 배열의 설계
인간화 #1G5 항체의 구축을, CDR 그래프팅 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989)) 으로서 일반적으로 공지된 방법에 의해 실시했다. 억셉터 항체는, 프레임 워크 영역 내의 아미노산 상동성에 기초하여 선택되었다. #1G5 의 프레임 워크 영역의 배열을, 항체의 아미노산 배열의 Kabat 데이터베이스 (Nuc. AcidRes. 29, 205-206 (2001)) 의 모든 인간 프레임 워크와 비교해, 결과적으로, HuMc3 항체가 프레임 워크 영역에 대한 75 % 의 배열 상동성에서 기인해, 억셉터로서 선택되었다. HuMc3 에 대한 프레임 워크 영역의 아미노산 잔기를, #1G5 에 대한 아미노산 잔기와 정렬시켜, 상이한 아미노산이 사용되는 위치를 동정했다. 이들 잔기의 위치는, 위에서 구축된 #1G5 의 삼차원 모델을 사용해 분석되고, 그리고 억셉터 상에 그래프팅되어야 할 도너 잔기가, Queenet al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA86, 10029-10033 (1989)) 에 의해 주어지는 기준에 의해 선택되었다. 선택된 몇 가지 도너 잔기를 억셉터 항체에 이입함으로써, 인간화 #1G5 배열을 이하의 실시예에 기재된 바와 같이 구축했다.
5)-2 #1G5 중쇄의 인간화
5)-2-1 h#1G5-H1 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 37 에 나타내는 #1G5 중쇄의 아미노산 번호 24 (글루타민) 를 발린으로, 아미노산 번호 26 (프롤린) 을 세린으로, 아미노산 번호 30 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 57 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 59 (아르기닌) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 67 (이소류신) 을 메티오닌으로, 아미노산 번호 86 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 87 (알라닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 89 (류신) 를 이소류신으로, 아미노산 번호 91 (발린) 을 알라닌으로, 아미노산 번호 95 (세린) 를 트레오닌으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 106 (트레오닌) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 108 (아스파르트산) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 110 (세린) 을 트레오닌으로, 아미노산 번호 116 (세린) 을 알라닌으로, 아미노산 번호 139 (세린) 를 류신으로, 아미노산 번호 141 (이소류신) 을 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 중쇄를 「h#1G5-H1 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-H1 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 57 에 기재되어 있다. 배열 번호 57 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 145 내지 474 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 57 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 56 에 기재되어 있다. 배열 번호 56 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 433 내지 1422 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 56 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 57 의 아미노산 배열은, 도 9 에도 기재되어 있다.
5)-2-2 h#1G5-H2 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 37 에 나타내는 #1G5 중쇄의 아미노산 번호 24 (글루타민) 를 발린으로, 아미노산 번호 26 (프롤린) 을 세린으로, 아미노산 번호 30 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 57 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 59 (아르기닌) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 67 (이소류신) 을 메티오닌으로, 아미노산 번호 86 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 87 (알라닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 95 (세린) 를 트레오닌으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 106 (트레오닌) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 108 (아스파르트산) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 110 (세린) 을 트레오닌으로, 아미노산 번호 139 (세린) 를 류신으로, 아미노산 번호 141 (이소류신) 을 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 중쇄를 「h#1G5-H2 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-H2 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 59 에 기재되어 있다. 배열 번호 59 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 145 내지 474 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 59 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 58 에 기재되어 있다. 배열 번호 58 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 433 내지 1422 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 58 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 59 의 아미노산 배열은, 도 10 에도 기재되어 있다.
5)-2-3 h#1G5-H3 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 37 에 나타내는 #1G5 중쇄의 아미노산 번호 30 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 57 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 59 (아르기닌) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 67 (이소류신) 을 메티오닌으로, 아미노산 번호 86 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 95 (세린) 를 트레오닌으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 108 (아스파르트산) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 110 (세린) 을 트레오닌으로, 아미노산 번호 139 (세린) 를 류신으로, 아미노산 번호 141 (이소류신) 을 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 중쇄를 「h#1G5-H3 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-H3 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 61 에 기재되어 있다. 배열 번호 61 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 145 내지 474 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 61 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 60 에 기재되어 있다. 배열 번호 60 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 433 내지 1422 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 60 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 61 의 아미노산 배열은, 도 11 에도 기재되어 있다.
5)-2-4 h#1G5-H4 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 37 에 나타내는 #1G5 중쇄의 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 57 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 59 (아르기닌) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 139 (세린) 를 류신으로, 아미노산 번호 141 (이소류신) 을 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 중쇄를 「h#1G5-H4 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-H4 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 63 에 기재되어 있다. 배열 번호 63 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 145 내지 474 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 63 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 62 에 기재되어 있다. 배열 번호 62 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 433 내지 1422 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 62 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 63 의 아미노산 배열은, 도 12 에도 기재되어 있다.
5)-2-5 h#1G5-H5 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 37 에 나타내는 #1G5 중쇄의 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 중쇄를 「h#1G5-H5 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-H5 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 65 에 기재되어 있다. 배열 번호 65 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 145 내지 474 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 65 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 64 에 기재되어 있다. 배열 번호 64 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 433 내지 1422 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 64 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 65 의 아미노산 배열은, 도 13 에도 기재되어 있다.
5)-3 #1G5 경쇄의 인간화
5)-3-1 h#1G5-L1 타입 경쇄 :
배열표의 배열 번호 35 에 나타내는 #1G5 경쇄의 아미노산 번호 21 (아스파라긴) 을 아스파르트산으로, 아미노산 번호 29 (리신) 를 아스파르트산으로, 아미노산 번호 31 (메티오닌) 을 류신으로, 아미노산 번호 32 (세린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 33 (메티오닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 35 (발린) 를 류신으로, 아미노산 번호 39 (발린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 41 (류신) 을 이소류신으로, 아미노산 번호 42 (세린) 를 아스파라긴으로, 아미노산 번호 60 (알라닌) 을 프롤린으로, 아미노산 번호 61 (글루탐산) 을 글리신으로, 아미노산 번호 63 (세린) 을 프롤린으로, 아미노산 번호 66 (프롤린) 을 류신으로, 아미노산 번호 83 (트레오닌) 을 세린으로, 아미노산 번호 88 (알라닌) 을 글리신으로, 아미노산 번호 98 (발린) 을 류신으로, 아미노산 번호 103 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 105 (아스파르트산) 를 발린으로, 아미노산 번호 107 (히스티딘) 을 티로신으로, 아미노산 번호 120 (글리신) 을 글루타민으로, 아미노산 번호 124 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 129 (알라닌) 를 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 경쇄를 「h#1G5-L1 타입 경쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-L1 타입 경쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 67 에 기재되어 있다. 배열 번호 67 의 아미노산 배열의 1 내지 20 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 130 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역, 경쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 67 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 66 에 기재되어 있다. 배열 번호 66 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 60 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 388 내지 702 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역 배열, 경쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 66 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 67 의 아미노산 배열은, 도 14 에도 기재되어 있다.
5)-3-2 h#1G5-L2 타입 경쇄 :
배열표의 배열 번호 35 에 나타내는 #1G5 경쇄의 아미노산 번호 29 (리신) 를 아스파르트산으로, 아미노산 번호 31 (메티오닌) 을 류신으로, 아미노산 번호 32 (세린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 33 (메티오닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 35 (발린) 를 류신으로, 아미노산 번호 39 (발린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 41 (류신) 을 이소류신으로, 아미노산 번호 60 (알라닌) 을 프롤린으로, 아미노산 번호 61 (글루탐산) 을 글리신으로, 아미노산 번호 83 (트레오닌) 을 세린으로, 아미노산 번호 98 (발린) 을 류신으로, 아미노산 번호 103 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 105 (아스파르트산) 를 발린으로, 아미노산 번호 124 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 129 (알라닌) 를 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 경쇄를 「h#1G5-L2 타입 경쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-L2 타입 경쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 69 에 기재되어 있다. 배열 번호 69 의 아미노산 배열의 1 내지 20 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 130 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역, 경쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 69 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 68 에 기재되어 있다. 배열 번호 68 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 60 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 388 내지 702 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역 배열, 경쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 68 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 69 의 아미노산 배열은, 도 15 에도 기재되어 있다.
5)-3-3 h#1G5-L3 타입 경쇄 :
배열표의 배열 번호 35 에 나타내는 #1G5 경쇄의 아미노산 번호 29 (리신) 를 아스파르트산으로, 아미노산 번호 31 (메티오닌) 을 류신으로, 아미노산 번호 32 (세린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 33 (메티오닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 35 (발린) 를 류신으로, 아미노산 번호 39 (발린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 41 (류신) 을 이소류신으로, 아미노산 번호 60 (알라닌) 을 프롤린으로, 아미노산 번호 61 (글루탐산) 을 글리신으로, 아미노산 번호 83 (트레오닌) 을 세린으로, 아미노산 번호 98 (발린) 을 류신으로, 아미노산 번호 103 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 124 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 129 (알라닌) 를 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 경쇄를 「h#1G5-L3 타입 경쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-L3 타입 경쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 71 에 기재되어 있다. 배열 번호 71 의 아미노산 배열의 1 내지 20 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 130 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역, 경쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 71 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 70 에 기재되어 있다. 배열 번호 70 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 60 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 388 내지 702 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역 배열, 경쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 70 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 71 의 아미노산 배열은, 도 16 에도 기재되어 있다.
5)-3-4 h#1G5-L4 타입 경쇄 :
배열표의 배열 번호 35 에 나타내는 #1G5 경쇄의 아미노산 번호 29 (리신) 를 아스파르트산으로, 아미노산 번호 39 (발린) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 98 (발린) 을 류신으로, 아미노산 번호 129 (알라닌) 를 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 경쇄를 「h#1G5-L4 타입 경쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-L4 타입 경쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 73 에 기재되어 있다. 배열 번호 73 의 아미노산 배열의 1 내지 20 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 130 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역, 경쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 73 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 72 에 기재되어 있다. 배열 번호 72 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 60 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 388 내지 702 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역 배열, 경쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 72 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 73 의 아미노산 배열은, 도 17 에도 기재되어 있다.
5)-3-5 h#1G5-L5 타입 경쇄 :
배열표의 배열 번호 35 에 나타내는 #1G5 경쇄의 아미노산 번호 29 (리신) 를 아스파르트산으로, 아미노산 번호 98 (발린) 을 류신으로, 아미노산 번호 129 (알라닌) 를 트레오닌으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #1G5 경쇄를 「h#1G5-L5 타입 경쇄」이라고 명명했다.
h#1G5-L5 타입 경쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 75 에 기재되어 있다. 배열 번호 75 의 아미노산 배열의 1 내지 20 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 130 내지 234 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역, 경쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 75 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 74 에 기재되어 있다. 배열 번호 74 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 60 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 388 내지 702 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 경쇄 가변 영역 배열, 경쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 74 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 75 의 아미노산 배열은, 도 18 에도 기재되어 있다.
5)-4 #4C13K 의 인간화 버전의 설계
5)-4-1 #4C13K 의 가변 영역의 분자 모델링
#4C13K 의 가변 영역의 분자 모델링은, 상동성 모델링으로서 일반적으로 공지된 방법 (Methods in Enzymology, 203, 121-153, (1991)) 에 의해 실행되었다. ProteinData Bank (Nuc. AcidRes. 35, D301-D303 (2007)) 에 등록된 인간 면역 글로불린의 가변 영역의 1차 배열 (X 선 결정 구조로부터 유도되는 삼차원 구조가 입수 가능하다) 을, 위에서 결정된 #4C13K 의 가변 영역과 비교했다. 결과적으로, 1UYW 가, #4C13K 의 경쇄의 가변 영역에 대해 동일하게 프레임 워크 중에 결손이 있는 항체 중에서, 가장 높은 배열 상동성을 갖는다고 하여 선택되었다. 또, 1CIC 가, #4C13K 의 중쇄의 가변 영역에 대해 가장 높은 배열 상동성을 갖는다고 하여 선택되었다. 프레임 워크 영역의 삼차원 구조는, #4C13K 의 경쇄 및 중쇄에 대응하는 1UYW 및 1CIC 의 좌표를 조합하여, 「프레임 워크 모델」을 얻는 것에 의해 제작되었다. 이어서, 각각의 CDR 에 대한 대표적인 컨포메이션이 프레임 워크 모델에 삽입되었다.
마지막으로, 에너지의 점에서 #4C13K 의 가변 영역의 가능성이 있는 분자 모델을 얻기 위해서, 불리한 원자간 접촉을 제거하기 위한 에너지 계산을 실시했다. 상기 순서를, 시판되는 단백질 입체 구조 해석 프로그램 DiscoveryStudio (Accelrys, Inc.) 를 사용하여 실시했다.
5)-4-2 인간화 #4C13K 에 대한 아미노산 배열의 설계
인간화 #4C13K 항체의 구축을, CDR 그래프팅 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989)) 으로서 일반적으로 공지된 방법에 의해 실시했다. 억셉터 항체는, 프레임 워크 영역 내의 아미노산 상동성에 기초하여 선택되었다. #4C13K 의 프레임 워크 영역의 배열을, 항체의 아미노산 배열의 Kabat 데이터베이스 (Nuc. AcidRes. 29, 205-206(2001)) 의 모든 인간 프레임 워크와 비교해, 결과적으로, HuMc3 항체가 프레임 워크 영역에 대한 73 % 의 배열 상동성에서 기인해, 억셉터로서 선택되었다. HuMc3 에 대한 프레임 워크 영역의 아미노산 잔기를, #4C13K 에 대한 아미노산 잔기와 정렬시켜, 상이한 아미노산이 사용되는 위치를 동정했다. 이들 잔기의 위치는, 위에서 구축된 #4C13K 의 삼차원 모델을 사용해 분석되고, 그리고 억셉터 상에 그래프팅되어야 할 도너 잔기가, Queenet al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA86, 10029-10033 (1989)) 에 의해 주어지는 기준에 의해 선택되었다. 선택된 몇 가지 도너 잔기를 억셉터 항체에 이입함으로써, 인간화 #4C13K 배열을 이하의 실시예에 기재된 바와 같이 구축했다. 인간화 #4C13K 배열의 경쇄는, 인간화 #1G5 배열의 경쇄와 완전하게 공통의 것으로 했다.
5)-5 #4C13K 중쇄의 인간화
5)-5-1 h#4C13K-H1 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 41 에 나타내는 #4C13K 중쇄의 아미노산 번호 24 (글루타민) 를 발린으로, 아미노산 번호 26 (프롤린) 을 세린으로, 아미노산 번호 30 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 56 (메티오닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 57 (글루타민) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 59 (아르기닌) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 67 (이소류신) 을 메티오닌으로, 아미노산 번호 86 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 87 (알라닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 89 (류신) 를 이소류신으로, 아미노산 번호 91 (발린) 을 알라닌으로, 아미노산 번호 95 (세린) 를 트레오닌으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 103 (아스파라긴) 을 세린으로, 아미노산 번호 106 (트레오닌) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 108 (아스파르트산) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 110 (세린) 을 트레오닌으로, 아미노산 번호 116 (트레오닌) 을 알라닌으로, 아미노산 번호 135 (트레오닌) 를 류신으로, 아미노산 번호 136 (류신) 을 발린으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #4C13K 중쇄를 「h#4C13K-H1 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#4C13K-H1 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 77 에 기재되어 있다. 배열 번호 77 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 141 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 77 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 76 에 기재되어 있다. 배열 번호 76 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 421 내지 1410 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 76 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 77 의 아미노산 배열은, 도 19 에도 기재되어 있다.
5)-5-2 h#4C13K-H2 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 41 에 나타내는 #4C13K 중쇄의 아미노산 번호 24 (글루타민) 를 발린으로, 아미노산 번호 26 (프롤린) 을 세린으로, 아미노산 번호 30 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 56 (메티오닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 57 (글루타민) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 59 (아르기닌) 를 알라닌으로, 아미노산 번호 67 (이소류신) 을 메티오닌으로, 아미노산 번호 86 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 87 (알라닌) 을 발린으로, 아미노산 번호 95 (세린) 를 트레오닌으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 103 (아스파라긴) 을 세린으로, 아미노산 번호 106 (트레오닌) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 108 (아스파르트산) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 110 (세린) 을 트레오닌으로, 아미노산 번호 135 (트레오닌) 를 류신으로, 아미노산 번호 136 (류신) 을 발린으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #4C13K 중쇄를 「h#4C13K-H2 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#4C13K-H2 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 79 에 기재되어 있다. 배열 번호 79 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 141 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 79 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 78 에 기재되어 있다. 배열 번호 78 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 421 내지 1410 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 78 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 79 의 아미노산 배열은, 도 20 에도 기재되어 있다.
5)-5-3 h#4C13K-H3 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 41 에 나타내는 #4C13K 중쇄의 아미노산 번호 30 (류신) 을 발린으로, 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 67 (이소류신) 을 메티오닌으로, 아미노산 번호 86 (리신) 을 아르기닌으로, 아미노산 번호 95 (세린) 를 트레오닌으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 103 (아스파라긴) 을 세린으로, 아미노산 번호 108 (아스파르트산) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 110 (세린) 을 트레오닌으로, 아미노산 번호 135 (트레오닌) 를 류신으로, 아미노산 번호 136 (류신) 을 발린으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #4C13K 중쇄를 「h#4C13K-H3 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#4C13K-H3 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 81 에 기재되어 있다. 배열 번호 81 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 141 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 81 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 80 에 기재되어 있다. 배열 번호 80 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 421 내지 1410 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 80 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 81 의 아미노산 배열은, 도 21 에도 기재되어 있다.
5)-5-4 h#4C13K-H4 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 41 에 나타내는 #4C13K 중쇄의 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 101 (글루타민) 을 글루탐산으로, 아미노산 번호 103 (아스파라긴) 을 세린으로, 아미노산 번호 135 (트레오닌) 를 류신으로, 아미노산 번호 136 (류신) 을 발린으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #4C13K 중쇄를 「h#4C13K-H4 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#4C13K-H4 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 83 에 기재되어 있다. 배열 번호 83 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 141 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 83 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 82 에 기재되어 있다. 배열 번호 82 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 421 내지 1410 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 82 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 83 의 아미노산 배열은, 도 22 에도 기재되어 있다.
5)-5-5 h#4C13K-H5 타입 중쇄 :
배열표의 배열 번호 41 에 나타내는 #4C13K 중쇄의 아미노산 번호 31 (발린) 을 리신으로, 아미노산 번호 39 (류신) 를 발린으로, 아미노산 번호 135 (트레오닌) 를 류신으로, 아미노산 번호 136 (류신) 을 발린으로 치환하는 것을 따라 설계된 인간화 #4C13K 중쇄를 「h#4C13K-H5 타입 중쇄」이라고 명명했다.
h#4C13K-H5 타입 중쇄의 아미노산 배열은, 배열표의 배열 번호 85 에 기재되어 있다. 배열 번호 85 의 아미노산 배열의 1 내지 19 번째의 아미노 잔기로 이루어지는 배열, 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열, 141 내지 470 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역, 중쇄 정상 영역에 상당한다. 배열 번호 85 의 아미노산 배열을 코드하는 뉴클레오티드 배열은, 배열표의 배열 번호 84 에 기재되어 있다. 배열 번호 84 의 뉴클레오티드 배열의 1 내지 57 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열, 421 내지 1410 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 배열이, 각각 시그널 배열, 중쇄 가변 영역 배열, 중쇄 정상 영역 배열을 코드하고 있다. 배열 번호 84 의 뉴클레오티드 배열 및 배열 번호 85 의 아미노산 배열은, 도 23 에도 기재되어 있다.
[실시예 6] #1G5, #4C13K 의 인간화 항체의 제작
6)-1 #1G5 의 인간화 항체의 경쇄 발현 벡터의 구축
6)-1-1 h#1G5-L2 타입 경쇄 발현 벡터의 구축
배열 번호 68 에 나타내는 h#1G5-L2 타입 경쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 38 내지 402 에 나타내는 h#1G5-L2 타입 경쇄의 가변 영역을 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 h#1G5-L2 타입 경쇄의 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 경쇄 발현 벡터 pCMA-LK 를 제한 효소 BsiWI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 h#1G5-L2 타입 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/h#1G5-L2」라고 명명했다.
인간화 항체 경쇄용 프라이머 세트
5'-ctgtggatctccggcgcgtacggc-3'(CM-LKF)(배열 번호 112)
5'-ggagggggcggccaccgtacg-3'(KCL-Inf-R)(배열 번호 113)
6)-1-2 h#1G5-L3 타입 경쇄 발현 벡터의 구축
배열 번호 70 에 나타내는 h#1G5-L3 타입 경쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 38 내지 402 에 나타내는 h#1G5-L3 타입 경쇄의 가변 영역을 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 실시예 6)-1-1 과 동일한 방법에 의해 h#1G5-L3 타입 경쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-LK/h#1G5-L3」이라고 명명했다.
6)-2 #1G5 의 인간화 항체의 중쇄 발현 벡터의 구축
6)-2-1 h#1G5-H2 타입 중쇄 발현 벡터의 구축
배열 번호 58 에 나타내는 h#1G5-H2 타입 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 432 에 나타내는 h#1G5-H2 타입 중쇄의 가변 영역을 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 합성한 DNA 단편을 템플릿으로 하고, KOD-Plus- (TOYOBO 사) 와 하기 프라이머 세트로 h#1G5-H2 타입 중쇄의 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 키메라 및 인간화 항체 IgG1 타입 중쇄 발현 벡터 pCMA-G1 을 제한 효소 BlpI 로 절단한 지점에 In-Fusion HD PCR 클로닝 키트 (CLONTECH 사) 를 사용하여 삽입함으로써 h#1G5-H2 타입 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/h#1G5-H2」라고 명명했다.
인간화 항체 중쇄용 프라이머 세트
5'-agctcccagatgggtgctgagc-3'(EG-Inf-F)(배열 번호 110)
5'-cttggtggaggctgagctcacggtcacgagggtgccctggcc-3'(H-R)(배열 번호 122)
6)-2-2 h#1G5-H3 타입 중쇄 발현 벡터의 구축
배열 번호 60 에 나타내는 h#1G5-H3 타입 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 432 에 나타내는 h#1G5-H3 타입 중쇄의 가변 영역을 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 6)-2-1 과 동일한 방법에 의해 h#1G5-H3 타입 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/h#1G5-H3」이라고 명명했다.
6)-3 #4C13K 의 인간화 항체의 중쇄 발현 벡터의 구축
6)-3-1 h#4C13K-H2 타입 중쇄 발현 벡터의 구축
배열 번호 78 에 나타내는 h#4C13K-H2 타입 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 420 에 나타내는 h#4C13K-H2 타입 중쇄의 가변 영역을 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 6)-2-1 과 동일한 방법에 의해 h#4C13K-H2 타입 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/h#4C13K-H2」라고 명명했다.
6)-3-2 h#4C13K-H3 타입 중쇄 발현 벡터의 구축
배열 번호 80 에 나타내는 h#4C13K-H3 타입 중쇄의 뉴클레오티드 배열의 뉴클레오티드 번호 36 내지 420 에 나타내는 h#4C13K-H3 타입 중쇄의 가변 영역을 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편을 합성했다 (GENEART 사 인공 유전자 합성 서비스). 6)-2-1 과 동일한 방법에 의해 h#4C13K-H3 타입 중쇄 발현 벡터를 구축했다. 얻어진 발현 벡터를 「pCMA-G1/h#4C13K-H3」이라고 명명했다.
[실시예 7] #1G5, #4C13K 의 인간화 항체의 조제
7)-1 #1G5, #4C13K 의 인간화 항체의 생산
실시예 2)-3-7-1 과 동일한 방법으로 생산했다.
또한, 본 명세서에서는, 예를 들어 h#1G5-H1 중쇄 및 h#1G5-L1 을 갖는 항체를 「h#1G5-H1/L1」 또는 「h#1G5-H1/L1 항체」라고 호칭하고, h#4C13K-H1 중쇄 및 h#1G5-L1 을 갖는 항체를 「h#4C13K-H1/L1」 또는 「h#4C13K-H1/L1 항체」라고 호칭한다.
pCMA-G1/h#1G5-H2 와 pCMA-LK/h#1G5-L2 의 조합에 의해 h#1G5-H2/L2 를 취득하고, pCMA-G1/h#1G5-H3 과 pCMA-LK/h#1G5-L3 의 조합에 의해 h#1G5-H3/L3 을 취득하고, pCMA-G1/h#4C13K-H2 와 pCMA-LK/h#1G5-L2 의 조합에 의해 h#4C13K-H2/L2 를 취득하고, pCMA-G1/h#4C13K-H3 과 pCMA-LK/h#1G5-L3 의 조합에 의해 h#4C13K-H3/L3 을 취득했다.
7)-2 #1G5, #4C13K 의 인간화 항체의 정제
상기 7)-1 에서 얻어진 배양 상청을, 실시예 2)-3-7-2 과 동일한 방법으로 정제했다.
[실시예 8] #1G5, #4C13K 의 인간화 항체의 in vitro 활성 측정
8)-1 녹농균 ATCC 29260 에 대한 옵소닌 활성
1)-3-2 의 방법에 따라, ATCC 29260 에 대한 h#1G5-H2/L2, h#1G5-H3/L3, h#4C13K-H2/L2, 및 h#4C13K-H3/L3 의 옵소닌 활성을 측정하고, c#1G5 및 c#4C13 과 비교했다. 옵소닌 활성은 50 % 증식 저해 최소 농도로 나타냈다. 그 결과를 표 7 에 나타낸다.
인간화 4 항체는 c#1G5, c#4C13 과 동등의 활성을 나타냈다.
8)-2 녹농균 O11 주에 대한 결합 특이성
3)-2 의 방법에 따라, 각종 O 항원 보유 녹농균에 대한 h#1G5-H2/L2, h#1G5-H3/L3, h#4C13K-H2/L2, 및 h#4C13K-H3/L3 의 결합 특이성을 확인했다. 인간화 4 항체는 c#1G5, c#4C13 과 마찬가지로 O11 주에 대해서만 특이적으로 높은 결합 활성을 나타냈다 (도 25).
8)-3 녹농균 O11 임상 분리주에 대한 결합 활성
3)-3 의 방법에 따라, 다이이치산쿄 주식회사 보유의 녹농균 O11 임상 분리 31 주에 대한 h#1G5-H2/L2, h#1G5-H3/L3, h#4C13K-H2/L2, 및 h#4C13K-H3/L3 의 결합 활성을 측정했다. 인간화 4 항체는 c#1G5, c#4C13 과 마찬가지로 모든 O11 임상 분리주에 결합 활성을 나타냈다 (도 26).
[실시예 9] #1G5, #4C13K 의 인간화 항체의 in vivo 활성 측정
4)-1 의 방법에 따라, ATCC 29260 에 대한 c#1G5, c#4C13, h#1G5-H2/L2, h#1G5-H3/L3, h#4C13K-H2/L2, 및 h#4C13K-H3/L3 의 in vivo 활성을 측정했다. 항체 비투여의 컨트롤과 비교해 c#1G5, c#4C13, 인간화 4 항체는 모두 치료 효과를 나타내고, 또 그 효과는 Meiji1656 이상이었다 (도 27).
[실시예 10] 경합 시험
녹농균 ATCC 29260 을 사용하여 whole cell ELISA 에 있어서의 결합 활성을 지표로, No.76 mIgG2a 와 cNo.76, c#1G5, c#4C13, Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1 의 경합 시험을 실시했다. 3)-2 의 방법에 따라, 1차 항체로서 No.76 mIgG2a (종농도 0.01 ㎍/㎖) 와 cNo.76, c#1G5, c#4C13, Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1 중 어느 것 (종농도 0.01, 0.1, 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖) 을 각각 첨가하고, 2차 항체로서 Goat anti-Mouse IgG2a HRP conjugated (Bethyl Laboratories, Inc.) 를 사용하였다. No.76 mIgG2a 는 cNo.76, c#1G4, c#4C13 과 경합했지만, Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1 과는 경합하지 않았던 점으로부터, cNo.76, c#1G5, c#4C13 과 Meiji1640, Meiji1656, 1BO11 hIgG1 은 에피토프가 상이한 것이 분명해졌다 (도 28).
산업상 이용가능성
본 발명의 키메라 또는 인간화 항LPS O11 항체는 옵소닌 작용 (옵소닌 식작용 상해 작용) 및/또는 보체 의존적 살균 작용을 갖고, 그 항LPS O11 항체를 포함하는 의약 조성물은 녹농균 감염증의 치료 또는 예방제가 될 수 있다.
배열표 프리 텍스트
배열 번호 1 : pJON mIgG2a 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 2 : pJON mIgG2a-hIgG1 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 3 : pJON mIgκ 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 4 : No.76 의 경쇄 가변 영역의 아미노산 배열
배열 번호 5 : No.76 의 경쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 6 : No.76 의 경쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 7 : No.76 의 경쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 8 : No.76 의 중쇄 가변 영역의 아미노산 배열
배열 번호 9 : No.76 의 중쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 10 : No.76 의 중쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 11 : No.76 의 중쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 12 : #1G5 의 경쇄 가변 영역의 아미노산 배열
배열 번호 13 : #1G5 의 경쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 14 : #1G5 의 경쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 15 : #1G5 의 경쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 16 : #1G5 의 중쇄 가변 영역의 아미노산 배열
배열 번호 17 : #1G5 의 중쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 18 : #1G5 의 중쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 19 : #1G5 의 중쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 20 : #4C12 의 경쇄 가변 영역의 아미노산 배열
배열 번호 21 : #4C12 의 경쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 22 : #4C12 의 경쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 23 : #4C12 의 경쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 24 : #4C12 의 중쇄 가변 영역의 아미노산 배열
배열 번호 25 : #4C12 의 중쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 26 : #4C12 의 중쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 27 : #4C12 의 중쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 28 : 인간 경쇄 분비 시그널, 및 인간 경쇄 정상 영역의 아미노산을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편
배열 번호 29 : 인간 중쇄 시그널 배열, 및 인간 IgG1 정상 영역의 아미노산을 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편
배열 번호 30 : 인간 키메라화 No.76 경쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 31 : 인간 키메라화 No.76 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 32 : 인간 키메라화 No.76 중쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 33 : 인간 키메라화 No.76 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 34 : 인간 키메라화 #1G5 경쇄를 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 35 : 인간 키메라화 #1G5 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 36 : 인간 키메라화 #1G5 중쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 37 : 인간 키메라화 #1G5 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 38 : 인간 키메라화 #4C13 경쇄를 코드하는 DNA 배열을 포함하는 DNA 단편의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 39 : 인간 키메라화 #4C13 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 40 : 인간 키메라화 #4C13 중쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 41 : 인간 키메라화 #4C13 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 42 : Meiji1640 경쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 43 : Meiji1640 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 44 : Meiji1640 중쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 45 : Meiji1640 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 46 : Meiji1656 경쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 47 : Meiji1656 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 48 : Meiji1656 중쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 49 : Meiji1656 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 50 : 마우스 IgG2b 타입 키메라화 1BO11 경쇄를 코드하는 DNA 단편의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 51 : 인간 IgG1 타입 1BO11 경쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 52 : 인간 IgG1 타입 1BO11 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 53 : 마우스 IgG2b 타입 키메라화 1BO11 중쇄를 코드하는 DNA 단편의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 54 : 인간 IgG1 타입 1BO11 중쇄의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 55 : 인간 IgG1 타입 1BO11 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 56 : h#1G5-H1 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 57 : h#1G5-H1 의 아미노산 배열
배열 번호 58 : h#1G5-H2 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 59 : h#1G5-H2 의 아미노산 배열
배열 번호 60 : h#1G5-H3 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 61 : h#1G5-H3 의 아미노산 배열
배열 번호 62 : h#1G5-H4 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 63 : h#1G5-H4 의 아미노산 배열
배열 번호 64 : h#1G5-H5 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 65 : h#1G5-H5 의 아미노산 배열
배열 번호 66 : h#1G5-L1 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 67 : h#1G5-L1 의 아미노산 배열
배열 번호 68 : h#1G5-L2 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 69 : h#1G5-L2 의 아미노산 배열
배열 번호 70 : h#1G5-L3 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 71 : h#1G5-L3 의 아미노산 배열
배열 번호 72 : h#1G5-L4 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 73 : h#1G5-L4 의 아미노산 배열
배열 번호 74 : h#1G5-L5 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 75 : h#1G5-L5 의 아미노산 배열
배열 번호 76 : h#4C13K-H1 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 77 : h#4C13K-H1 의 아미노산 배열
배열 번호 78 : h#4C13K-H2 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 79 : h#4C13K-H2 의 아미노산 배열
배열 번호 80 : h#4C13K-H3 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 81 : h#4C13K-H3 의 아미노산 배열
배열 번호 82 : h#4C13K-H4 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 83 : h#4C13K-H4 의 아미노산 배열
배열 번호 84 : h#4C13K-H5 의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 85 : h#4C13K-H5 의 아미노산 배열
배열 번호 86 : #4C13 의 중쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 87 : #4C13 의 중쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 88 : #4C13 의 중쇄 CDR3 의 아미노산 배열
배열 번호 89 : AP3dC-S
배열 번호 90 : mIgγRT1 1111-AS
배열 번호 91 : mIgκ 1st 589-AS
배열 번호 92 : MCS-AP3-S
배열 번호 93 : mIgγ 3rd 656T-AS
배열 번호 94 : mIgκ 3rd 525-AS
배열 번호 95 : mIgG joint PCR-S
배열 번호 96 : polyG-AS
배열 번호 97 : mIgκ joint PCR-S
배열 번호 98 : miniCMV f1-S
배열 번호 99 : miniCMV f1-AS
배열 번호 100 : mIgG sequence
배열 번호 101 : mIgκ sequence
배열 번호 102 : 3.3-F1
배열 번호 103 : 3.3-R1
배열 번호 104 : 76L-F
배열 번호 105 : 76L-R
배열 번호 106 : 76H-F
배열 번호 107 : 76H-R
배열 번호 108 : CM-inf-F
배열 번호 109 : CM-inf-R
배열 번호 110 : EG-Inf-F
배열 번호 111 : EG1-Inf-R
배열 번호 112 : CM-LKF
배열 번호 113 : KCL-Inf-R
배열 번호 114 : h1BO-LF
배열 번호 115 : h1BO-LR
배열 번호 116 : h1BO-HF
배열 번호 117 : h1BO-HR
배열 번호 118 : No.76 mIgG2a 경쇄를 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 119 : No.76 mIgG2a 경쇄의 아미노산 배열
배열 번호 120 : No.76 mIgG2a 중쇄를 코드하는 배열을 포함하는 DNA 단편의 뉴클레오티드 배열
배열 번호 121 : No.76 mIgG2a 중쇄의 아미노산 배열
배열 번호 122 : H-R
배열 번호 123 : #4C13 의 경쇄 CDR1 의 아미노산 배열
배열 번호 124 : #4C13 의 경쇄 CDR2 의 아미노산 배열
배열 번호 125 : #4C13 의 경쇄 CDR3 의 아미노산 배열
SEQUENCE LISTING
<110> DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED
<120> Anti-LPS O11 antibodies
<130> FP1430
<150> JP2013-203297
<151> 2013-09-30
<160> 125
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 6007
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of pJON mIgG2a
<400> 1
tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180
atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240
aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300
catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360
catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420
atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480
ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540
acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagaattc 600
tgcagtcgac ggtaccgcgg gcccgggatc cccccccccc ccgatgggac gtccacatat 660
acctgccgtt cactattatt tagtgaaatg agatattatg atattttctg aattgtgatt 720
aaaaaggcaa ctttatgccc atgcaacaga aactataaaa aatacagaga atgaaaagaa 780
acagatagat tttttagttc tttaggcccg tagtctgcaa atccttttat gattttctat 840
caaacaaaag aggaaaatag accagttgca atccaaacga gagtctaata gaatgaggtc 900
gaaaagtaaa tcgcgcgggt ttgttactga taaagcaggc aagacctaaa atgtgtaaag 960
ggcaaagtgt atactttggc gtcacccctt acatatttta ggtctttttt tattgtgcgt 1020
aactaacttg ccatcttcaa acaggagggc tggaagaagc agaccgctaa cacagtacat 1080
aaaaaaggag acatgaacga tgaacatcaa aaagtttgca aaacaagcaa cagtattaac 1140
ctttactacc gcactgctgg caggaggcgc aactcaagcg tttgcgaaag aaacgaacca 1200
aaagccatat aaggaaacat acggcatttc ccatattaca cgccatgata tgctgcaaat 1260
ccctgaacag caaaaaaatg aaaaatatca agttcctgag ttcgattcgt ccacaattaa 1320
aaatatctct tctgcaaaag gcctggacgt ttgggacagc tggccattac aaaacgctga 1380
cggcactgtc gcaaactatc acggctacca catcgtcttt gcattagccg gagatcctaa 1440
aaatgcggat gacacatcga tttacatgtt ctatcaaaaa gtcggcgaaa cttctattga 1500
cagctggaaa aacgctggcc gcgtctttaa agacagcgac aaattcgatg caaatgattc 1560
tatcctaaaa gaccaaacac aagaatggtc aggttcagcc acatttacat ctgacggaaa 1620
aatccgttta ttctacactg atttctccgg taaacattac ggcaaacaaa cactgacaac 1680
tgcacaagtt aacgtatcag catcagacag ctctttgaac atcaacggtg tagaggatta 1740
taaatcaatc tttgacggtg acggaaaaac gtatcaaaat gtacagcagt tcatcgatga 1800
aggcaactac agctcaggcg acaaccatac gctgagagat cctcactacg tagaagataa 1860
aggccacaaa tacttagtat ttgaagcaaa cactggaact gaagatggct accaaggcga 1920
agaatcttta tttaacaaag catactatgg caaaagcaca tcattcttcc gtcaagaaag 1980
tcaaaaactt ctgcaaagcg ataaaaaacg cacggctgag ttagcaaacg gcgctctcgg 2040
tatgattgag ctaaacgatg attacacact gaaaaaagtg atgaaaccgc tgattgcatc 2100
taacacagta acagatgaaa ttgaacgcgc gaacgtcttt aaaatgaacg gcaaatggta 2160
cctgttcact gactcccgcg gatcaaaaat gacgattgac ggcattacgt ctaacgatat 2220
ttacatgctt ggttatgttt ctaattcttt aactggccca tacaagccgc tgaacaaaac 2280
tggccttgtg ttaaaaatgg atcttgatcc taacgatgta acctttactt actcacactt 2340
cgctgtacct caagcgaaag gaaacaatgt cgtgattaca agctatatga caaacagagg 2400
attctacgca gacaaacaat caacgtttgc gcctagcttc ctgctgaaca tcaaaggcaa 2460
gaaaacatct gttgtcaaag acagcatcct tgaacaagga caattaacag ttaacaaata 2520
aaaacgcaaa agaaaatgcc gatatcctat tggcattgac gtcaggtggc acttttcggg 2580
gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc 2640
tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta 2700
ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg 2760
ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg 2820
gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac 2880
gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg 2940
acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt 3000
actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg 3060
ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac 3120
cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt 3180
gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag 3240
caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc 3300
aacaattaat agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc 3360
ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta 3420
tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg 3480
ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga 3540
ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac 3600
ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa 3660
tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat 3720
cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc 3780
taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg 3840
gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc 3900
acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg 3960
ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg 4020
ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa 4080
cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg 4140
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<211> 6004
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of pJON mIgG2a-hIgG1
<400> 2
tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180
atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240
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catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360
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taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg 3840
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acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg 3960
ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg 4020
ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa 4080
cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg 4140
aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga 4200
gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct 4260
gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca 4320
gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggccc atcacgtgcg catgcctggt caagggttat 4380
ttccctgagc cagtgacctt gacctggaac tctggatccc tgtccagtgg tgtgcacacc 4440
ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac accctcagca gctcagtgac tgtaacctcg 4500
agcacctggc ccagccagtc catcacctgc aatgtggccc acccggcaag cagcaccaag 4560
gtggacaaga aaattgagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca 4620
gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 4680
ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 4740
cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 4800
ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 4860
caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 4920
cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 4980
ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa 5040
ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 5100
tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc 5160
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gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atgatccagc 5280
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tttacttgct ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc 5400
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cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact 5520
catcaatgta tcttaaggcg taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa 5580
atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata 5640
aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac 5700
tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc 5760
cactacgtga accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa 5820
atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg 5880
cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg 5940
tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag 6000
atct 6004
<210> 3
<211> 5394
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of pJON mIgkappa
<400> 3
tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180
atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240
aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300
catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360
catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420
atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480
ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540
acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagaattc 600
tgcagtcgac ggtaccgcgg gcccgggatc cccccccccc ccgatgggcc aggaaccgta 660
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atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc 780
cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt 840
ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca 900
gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg 960
accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat 1020
cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta 1080
cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct 1140
gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac 1200
aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa 1260
aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa 1320
actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt 1380
taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca 1440
gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca 1500
tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc 1560
ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa 1620
accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc 1680
agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca 1740
acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat 1800
tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag 1860
cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac 1920
tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt 1980
ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt 2040
gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc 2100
tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat 2160
ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca 2220
gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga 2280
cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg 2340
gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg 2400
ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcaa tgccaatagg atatcggcat 2460
tttcttttgc gtttttattt gttaactgtt aattgtcctt gttcaaggat gctgtctttg 2520
acaacagatg ttttcttgcc tttgatgttc agcaggaagc taggcgcaaa cgttgattgt 2580
ttgtctgcgt agaatcctct gtttgtcata tagcttgtaa tcacgacatt gtttcctttc 2640
gcttgaggta cagcgaagtg tgagtaagta aaggttacat cgttaggatc aagatccatt 2700
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gatggcaagt tagttacgca caataaaaaa agacctaaaa tatgtaaggg gtgacgccaa 4020
agtatacact ttgcccttta cacattttag gtcttgcctg ctttatcagt aacaaacccg 4080
cgcgatttac ttttcgacct cattctatta gactctcgtt tggattgcaa ctggtctatt 4140
ttcctctttt gtttgataga aaatcataaa aggatttgca gactacgggc ctaaagaact 4200
aaaaaatcta tctgtttctt ttcattctct gtatttttta tagtttctgt tgcatgggca 4260
taaagttgcc tttttaatca caattcagaa aatatcataa tatctcattt cactaaataa 4320
tagtgaacgg caggtatatg tggacgtccc atcacgtgct gtatccatct tcccaccatc 4380
cagtgagcag ttaacatctg gaggtgcctc agtcgtgtgc ttcttgaaca acttctaccc 4440
caaagacatc aatgtcaagt ggaagattga tggcagtgaa cgacaaaatg gcgtcctgaa 4500
cagttggact gatcaggaca gcaaagacag cacctacagc atgagcagca ccctcacgtt 4560
gaccaaggac gagtatgaac gacataacag ctatacctgt gaggccactc acaagacatc 4620
aacttcaccc attgtcaaga gcttcaacag gaatgagtgt tagagacagc ggccaagtcg 4680
acttggccgc gactctagat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct 4740
ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt 4800
gttaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc 4860
acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta 4920
tcttaaggcg taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta 4980
aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga 5040
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cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga 5160
accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc 5220
taaagggagc ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga 5280
agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg 5340
cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag atct 5394
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<213> Artificial Sequence
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Ala
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85 90 95
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<213> Artificial Sequence
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Asn
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Heavy chain variable of #1G5
<400> 16
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
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<400> 22
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Heavy chain variable of #4C12
<400> 24
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
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Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Thr Tyr Trp Ile Asn Trp Met Gln Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1 of #4C12
<400> 25
Thr Tyr Trp Ile Asn
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<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2 of #4C12
<400> 26
Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> CDRH3 of #4C12
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nuc of signal and constant of light chain
<400> 28
gcctccggac tctagagcca ccatggtgct gcagacccag gtgttcatct ccctgctgct 60
gtggatctcc ggcgcgtacg gcgatatcgt gatgattaaa cgtacggtgg ccgccccctc 120
cgtgttcatc ttccccccct ccgacgagca gctgaagtcc ggcaccgcct ccgtggtgtg 180
cctgctgaat aacttctacc ccagagaggc caaggtgcag tggaaggtgg acaacgccct 240
gcagtccggg aactcccagg agagcgtgac cgagcaggac agcaaggaca gcacctacag 300
cctgagcagc accctgaccc tgagcaaagc cgactacgag aagcacaagg tgtacgcctg 360
cgaggtgacc caccagggcc tgagctcccc cgtcaccaag agcttcaaca ggggggagtg 420
ttaggggccc gtttaaacgg gggaggcta 449
<210> 29
<211> 1132
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nuc of signal and constant of IgG1 chain
<400> 29
gcctccggac tctagagcca ccatgaaaca cctgtggttc ttcctcctgc tggtggcagc 60
tcccagatgg gtgctgagcc aggtgcaatt gtgcaggcgg ttagctcagc ctccaccaag 120
ggcccaagcg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggcgg cacagccgcc 180
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaacccgtga ccgtgagctg gaactcaggc 240
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gctgtcctgc agtcctcagg actctactcc 300
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 360
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac 420
aaaactcaca catgcccacc ctgcccagca cctgaactcc tggggggacc ctcagtcttc 480
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 540
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 600
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccc cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgg 660
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 720
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggc 780
cagccccggg aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 840
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 900
gagagcaatg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc ctcccgtgct ggactccgac 960
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcagggcaac 1020
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacaccca gaagagcctc 1080
tccctgtctc ccggcaaatg agatatcggg cccgtttaaa cgggggaggc ta 1132
<210> 30
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding light chain of chimeric No.76
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(702)
<400> 30
atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc atc tcc ctg ctg ctg tgg atc tcc 48
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
ggc gcg tac ggc aac att gta atg acc caa tct ccc aaa tcc atg tcc 96
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser
20 25 30
atg tca gta gga gag agg gtc acc ttg agc tgc aag gcc agt gag aat 144
Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
gtg ggt act tct gta tcc tgg tat caa gag aaa cca gag cag tct cct 192
Val Gly Thr Ser Val Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Glu Gln Ser Pro
50 55 60
aaa ctg ctg ata ttc ggg gca tcc aac cgc tac act ggg gtc ccc gat 240
Lys Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
cgc ttc aca ggc agt gga tct gca aca gat ttc act ctg acc atc agc 288
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
agt gtg cag gct gaa gac ctt gca gat tat cac tgt gga cag agt tac 336
Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
agt tat ccg tac acg ttc gga ggg agg acc aag ctg gaa ata aaa cgg 384
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Arg Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
gct gtg gcc gcc ccc tcc gtg ttc atc ttc ccc ccc tcc gac gag cag 432
Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tac 480
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc 528
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
ggg aac tcc cag gag agc gtg acc gag cag gac agc aag gac agc acc 576
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg agc aaa gcc gac tac gag aag 624
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag ggc ctg agc tcc ccc 672
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
gtc acc aag agc ttc aac agg ggg gag tgt 702
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 31
<211> 234
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 31
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser
20 25 30
Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Val Gly Thr Ser Val Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Glu Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Arg Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 32
<211> 1410
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding heavy chain of chimeric No.76
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1410)
<400> 32
atg aaa cac ctg tgg ttc ttc ctc ctg ctg gtg gca gct ccc aga tgg 48
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc cag gtc caa ctg cag cag cct ggt gct gag ctt gtg aag 96
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
cct ggg gcc tca gtg aat ctg tcc tgc aag tct tct ggc tac act ttc 144
Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
acc aac tac tgg ata aac tgg gtg aag cag agg cct gga caa ggc ctt 192
Thr Asn Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
gag tgg att gga gat att tat cct ggt act agt act act aac tac aat 240
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Thr Ser Thr Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
gag aag ttc aag aac aag gcc aca ctg act gta gac aca tcc tcc agc 288
Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
aca gcc tac atg cag ctc agc agc ctg aca tct gac gac tct gcg gtc 336
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
tat tat tgt aca aga atc tac tat gat tac gac ggg tac tac ttt gac 384
Tyr Tyr Cys Thr Arg Ile Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
tac tgg ggc caa ggc acc act ctc aca gtc agc tca gcc tcc acc aag 432
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggc 480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc 528
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc 576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg 624
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac 672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc 720
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa 768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag gag cag tac aac 960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggc cag ccc cgg gaa 1104
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac 1152
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 1200
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc 1248
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1296
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tca tgc 1344
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc cag aag agc ctc 1392
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
tcc ctg tct ccc ggc aaa 1410
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 33
<211> 470
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Thr Ser Thr Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Ile Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 34
<211> 752
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding light chain of chimeric #1G5
<220>
<221> CDS
<222> (26)..(727)
<400> 34
ccagcctccg gactctagag ccacc atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc atc 52
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile
1 5
agc ctg ctg ctg tgg atc agc ggc gcc tac ggc aac atc gtg atg acc 100
Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr
10 15 20 25
cag agc ccc aag agc atg agc atg tcc gtg ggc gag aga gtg acc ctg 148
Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu
30 35 40
agc tgc aag gcc agc gag aac gtg ggc aac agc gtg tcc tgg tat cag 196
Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln
45 50 55
cag aag gcc gag cag tcc ccc aag ccc ctg atc tac ggc gcc agc aac 244
Gln Lys Ala Glu Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn
60 65 70
aga tac acc ggc gtg ccc gat aga ttc acc ggc agc ggc agc gcc acc 292
Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr
75 80 85
gac ttc acc ctg aca atc agc agc gtg cag gcc gag gac ctg gcc gat 340
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp
90 95 100 105
tat cac tgc ggc cag agc tac agc tac ccc tac acc ttt ggc gga ggc 388
Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
110 115 120
acc aag ctg gaa atc aag cgg gct gtg gcc gct ccc tcc gtg ttc atc 436
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
125 130 135
ttt cca ccc agc gac gag cag ctg aag tcc ggc aca gct agc gtc gtg 484
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
140 145 150
tgc ctg ctg aac aac ttc tac ccc cgc gag gcc aag gtg cag tgg aag 532
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
155 160 165
gtg gac aat gcc ctg cag agc ggc aac tcc cag gaa agc gtg acc gag 580
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
170 175 180 185
cag gac agc aag gac tcc acc tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg 628
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
190 195 200
tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gaa gtg acc 676
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
205 210 215
cac cag ggc ctg tct agc ccc gtg acc aag agc ttc aac cgg ggc gag 724
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
220 225 230
tgt tgagtttaaa cgggggaggc taact 752
Cys
<210> 35
<211> 234
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser
20 25 30
Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Glu Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 36
<211> 1422
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding heavy chain of chimeric #1G5
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1422)
<400> 36
atg aaa cac ctg tgg ttc ttc ctc ctg ctg gtg gca gct ccc aga tgg 48
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc cag gtg cag ctg cag cag cct ggc gcc gaa ctc gtg aaa 96
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
cct ggc gcc tct gtg aag ctg agc tgc aag gcc agc ggc tac acc ttc 144
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
acc agc tac tgg atc aac tgg gtc aag cag cgg cca ggc cag ggc ctg 192
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
gaa tgg atc ggc aat atc tac ccc ggc agc agc agc atc aac tac aac 240
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
gag aag ttc aag agc aag gcc acc ctg acc gtg gac acc agc agc tcc 288
Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
aca gcc tac atg cag ctg tcc agc ctg acc agc gac gac agc gcc gtg 336
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
tac tac tgc agc cgg acc atc tac aac tac ggc agc tcc ggc tac aat 384
Tyr Tyr Cys Ser Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
tac gcc atg gac tac tgg ggc cag ggc acc agc gtg atc gtc agc tca 432
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser
130 135 140
gcc tcc acc aag ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag 480
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
agc acc tct ggc ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac 528
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
ttc ccc gaa ccc gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc 576
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
ggc gtg cac acc ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc 624
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc 672
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
tac atc tgc aac gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag 720
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
aga gtt gag ccc aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc 768
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca 816
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc 864
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg 912
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag 960
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
gag cag tac aac agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg 1008
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac 1056
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggc 1104
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
cag ccc cgg gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag 1152
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat 1200
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac 1248
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
aac tac aag acc acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc 1296
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac 1344
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc 1392
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
cag aag agc ctc tcc ctg tct ccc ggc aaa 1422
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ser Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
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225 230 235 240
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
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<213> Artificial Sequence
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<223> Nucleotide coding light chain of chimeric #4C13
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Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile
1 5
agc ctg ctg ctg tgg atc agc ggc gcc tac ggc aac atc gtg atg acc 100
Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr
10 15 20 25
cag agc ccc aag agc atg agc atg tcc gtg ggc gag aga gtg acc ctg 148
Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu
30 35 40
agc tgc aag gcc agc gag aac gtg ggc gtg tcc gtg tcc tgg tat cag 196
Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Val Ser Val Ser Trp Tyr Gln
45 50 55
cag aag ccc gag cag tcc ccc aag ctg ctg atc tac ggc gcc agc aac 244
Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn
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aga tac acc ggc gtg ccc gat cgg ttc acc ggc tct aga agc gcc acc 292
Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Arg Ser Ala Thr
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gac ttc acc ctg acc gtg tcc aat gtg cag gcc gag gac ctg gcc gat 340
Asp Phe Thr Leu Thr Val Ser Asn Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp
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tac cac tgt ggc cag agc tac agc tac ccc tac acc ttc ggc gga ggc 388
Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
110 115 120
acc cgg ctg gaa atc aag aga gct gtg gcc gct ccc tcc gtg ttc atc 436
Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Ala Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
125 130 135
ttc cca cct agc gac gag cag ctg aag tcc ggc aca gcc tct gtc gtg 484
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
140 145 150
tgc ctg ctg aac aac ttc tac ccc cgc gag gcc aag gtg cag tgg aag 532
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
155 160 165
gtg gac aat gcc ctg cag agc ggc aac agc cag gaa agc gtg acc gag 580
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
170 175 180 185
cag gac agc aag gac tcc acc tac agc ctg agc agc acc ctg aca ctg 628
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agc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gaa gtg acc 676
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205 210 215
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His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
220 225 230
tgt tgagtttaaa cgggggaggc taact 752
Cys
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Construct
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Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
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65 70 75 80
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180 185 190
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Nucleotide coding heavy chain of chimeric #4C13
<220>
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1 5 10 15
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Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
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acc acc tac tgg atc aac tgg atg cag cag cgg cca ggc cag ggc ctg 192
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Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn
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gag aag ttc aag aac aag gcc acc ctg acc gtg gac acc agc agc tcc 288
Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
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Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
tac tac tgc acc aga gtg tac tac gac cac gtg ggc tac tac ttc gac 384
Tyr Tyr Cys Thr Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
tac tgg ggc cag ggc aca aca ctg acc gtc agc tca gcc tcc acc aag 432
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggc 480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
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Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc 576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
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Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac 672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
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Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa 768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag gag cag tac aac 960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
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gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggc cag ccc cgg gaa 1104
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac 1152
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
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cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 1200
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
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gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc 1248
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
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acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1296
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
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ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tca tgc 1344
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc cag aag agc ctc 1392
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
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tcc ctg tct ccc ggc aaa 1410
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<223> Synthetic Construct
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Thr Thr Tyr Trp Ile Asn Trp Met Gln Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
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Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
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Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
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Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
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195 200 205
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275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
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385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Nucleotide coding light chain of Meiji1640
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atc ggc aag tac ctg aac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gcc ccc 192
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Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
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aga ttt ggc ggc agc ggc tcc ggc acc gac ttc acc ctg acc atc agc 288
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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agc ctg cag ccc gag gac tgc gcc acc tac tac tgc cag cag agc ttc 336
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Cys Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe
100 105 110
acc gcc cct cag aag tac acc ttc ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc 384
Thr Ala Pro Gln Lys Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
aag cgt acg gtg gcc gcc ccc tcc gtg ttc atc ttc ccc ccc tcc gac 432
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140
gag cag ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg ctg aat aac 480
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145 150 155 160
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Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170 175
cag tcc ggg aac tcc cag gag agc gtg acc gag cag gac agc aag gac 576
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
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agc acc tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg agc aaa gcc gac tac 624
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205
gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag ggc ctg agc 672
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding heavy chain of Meiji1640
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atg aaa cac ctg tgg ttc ttc ctc ctg ctg gtg gca gct ccc aga tgg 48
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1 5 10 15
gtg ctg agc gag gtg cag ctg gtg gaa agc ggc gga gga ctg gtg cag 96
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
cct ggc ggc agc ctg aga ctg tct tgc gcc gcc agc ggc ttc acc atc 144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile
35 40 45
ccc ttc aga aag tac tgg ctg cac tgg gtc cgc cag gcc cct ggc aag 192
Pro Phe Arg Lys Tyr Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
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gga ctc gtg tgg gtg tcc ctg atc atc ggc gac ggc agc agc acc aac 240
Gly Leu Val Trp Val Ser Leu Ile Ile Gly Asp Gly Ser Ser Thr Asn
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Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp
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aag aac acc ctg tac ctg cag atg aac agc ctg cgg gtg gaa gat acc 336
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr
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gcc gtg tac tac tgc gcc agg gac ctg ggc gag cgg acc ggc gat aat 384
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Leu Gly Glu Arg Thr Gly Asp Asn
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Trp His Ser Leu Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
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aag gac tac ttc ccc gaa ccc gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc 576
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga 624
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
acc cag acc tac atc tgc aac gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag 720
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gtg gac aag aga gtt gag ccc aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc 768
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cca ccc tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc 816
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
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gcc aaa ggc cag ccc cgg gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc 1152
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Pro Phe Arg Lys Tyr Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser
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Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly
35 40 45
atc agc aac tac ctg gcc tgg tat cag cag aag ccc ggc acc gcc ccc 192
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Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Leu Lys
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Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Asp
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agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac 1056
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Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
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aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc cct ccc gtg ctg gac 1296
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tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc 1344
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435 440 445
agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct 1392
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130 135 140
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245 250 255
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260 265 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275 280 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340 345 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355 360 365
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370 375 380
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
385 390 395 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405 410 415
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420 425 430
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450 455 460
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<210> 51
<211> 717
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding light chain of human IgG1 type 1BO11
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(717)
<400> 51
atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc atc tcc ctg ctg ctg tgg atc tcc 48
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Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
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ctt gtg tac tcc gac ggc aac acc tac ctg aac tgg ttc cag cag aga 192
Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg
50 55 60
cct ggc cag agc cct cgg aga ctt atc tac aag gtg tcc aac cgg gac 240
Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp
65 70 75 80
agc gga gtg cct gac aga ttc tcc ggc agc gga tcc ggc acc gac ttc 288
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
acc ctg aag atc agc cgg gtg gag gct gag gac gtg gga gtg tac tac 336
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
tgt atg cag ggc acc cac tgg cct ctt acc ttc ggc gga ggc acc aag 384
Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115 120 125
gtg gag atc aag cgt acg gtg gcc gcc ccc tcc gtg ttc atc ttc ccc 432
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
ccc tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg 480
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac 528
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
aac gcc ctg cag tcc ggg aac tcc cag gag agc gtg acc gag cag gac 576
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
agc aag gac agc acc tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg agc aaa 624
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag 672
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
ggc ctg agc tcc ccc gtc acc aag agc ttc aac agg ggg gag tgt 717
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 52
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro
20 25 30
Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115 120 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 53
<211> 1413
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding heavy chain of mouse IgG2b type chimeric 1BO11
<400> 53
atggccgtgc tgggccttct gttctgtctt gtgaccttcc cttcctgtgt gctgagcgag 60
gagcaagtgg tggagagcgg cggcggattc gtgcagcctg gcggctccct gcggctttcc 120
tgtgccgctt ccggattcac cttcagccct tactggatgc actgggtgag acaagcccct 180
ggcaagggcc tggtgtgggt gtcccggatc aacagcgacg gatccaccta ctacgctgac 240
agcgtgaagg gccggttcac catctccaga gacaacgccc ggaacaccct ttacctgcag 300
atgaacagcc ttagagctga ggacaccgcc gtgtactact gtgctcggga cagatactac 360
ggccctgaga tgtggggaca aggcaccatg gtgaccgtga gctcagccaa gaccacccct 420
cctagcgtgt accctctggc tcctggctgt ggcgacacca ccggctccag cgtgaccctt 480
ggctgtctgg tgaagggcta cttccctgag tccgtgaccg tgacctggaa cagcggctcc 540
cttagctcca gcgtgcacac cttccctgcc ctgcttcagt ccggcctgta caccatgagc 600
tccagcgtga ccgtgccttc cagcacctgg ccttcccaga ccgtgacctg tagcgtggct 660
caccctgcct ccagcaccac cgtggacaag aagcttgagc cttccggccc tatcagcacc 720
atcaaccctt gtcctccttg taaggagtgt cacaagtgtc ctgctcctaa cctggagggc 780
ggcccttccg tgttcatctt ccctcctaac atcaaggacg tgcttatgat cagcctgacc 840
cctaaggtga cctgtgtggt ggtggacgtg tccgaggacg accctgacgt gcagatcagc 900
tggttcgtga acaacgtgga ggtgcacacc gcccagaccc agacccaccg ggaggactac 960
aactccacca tcagagtggt gagcaccctt cctatccagc accaggactg gatgtccggc 1020
aaggagttca agtgtaaggt gaacaacaag gacctgccta gccctatcga gcggaccatc 1080
tccaagatca agggccttgt gcgggctcct caggtgtaca tcctgcctcc tcctgccgag 1140
cagctttcca gaaaggacgt gtccctgacc tgtcttgtgg tgggcttcaa ccctggcgac 1200
atcagcgtgg agtggacctc caacggccac accgaggaga actacaagga caccgctcct 1260
gtgctggaca gcgacggctc ctacttcatc tacagcaagc ttaacatgaa gacctccaag 1320
tgggagaaga ccgacagctt ctcctgtaac gtgcggcacg agggcctgaa gaactactac 1380
cttaagaaga ccatcagcag atcccctggc aag 1413
<210> 54
<211> 1395
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding heavy chain of human IgG1 type 1BO11
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1395)
<400> 54
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Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc gag gag caa gtg gtg gag agc ggc ggc gga ttc gtg cag 96
Val Leu Ser Glu Glu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln
20 25 30
cct ggc ggc tcc ctg cgg ctt tcc tgt gcc gct tcc gga ttc acc ttc 144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
agc cct tac tgg atg cac tgg gtg aga caa gcc cct ggc aag ggc ctg 192
Ser Pro Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
gtg tgg gtg tcc cgg atc aac agc gac gga tcc acc tac tac gct gac 240
Val Trp Val Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
65 70 75 80
agc gtg aag ggc cgg ttc acc atc tcc aga gac aac gcc cgg aac acc 288
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr
85 90 95
ctt tac ctg cag atg aac agc ctt aga gct gag gac acc gcc gtg tac 336
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
tac tgt gct cgg gac aga tac tac ggc cct gag atg tgg gga caa ggc 384
Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Tyr Tyr Gly Pro Glu Met Trp Gly Gln Gly
115 120 125
acc atg gtg acc gtg agc tca gcc tcc acc aag ggc cca agc gtc ttc 432
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggc ggc aca gcc gcc ctg 480
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
145 150 155 160
ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc gtg acc gtg agc tgg 528
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
165 170 175
aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc ccc gct gtc ctg 576
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
180 185 190
cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc 624
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
195 200 205
agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aat cac aag ccc 672
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
210 215 220
agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc aaa tct tgt gac aaa 720
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
225 230 235 240
act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccc 768
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
245 250 255
tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc 816
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
260 265 270
cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac 864
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
275 280 285
cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat 912
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
290 295 300
gcc aag aca aag ccc cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgg gtg 960
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
305 310 315 320
gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag 1008
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
325 330 335
tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa 1056
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
340 345 350
acc atc tcc aaa gcc aaa ggc cag ccc cgg gaa cca cag gtg tac acc 1104
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
355 360 365
ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc 1152
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
370 375 380
tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag 1200
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385 390 395 400
agc aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc cct ccc gtg ctg 1248
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
405 410 415
gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag 1296
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
420 425 430
agc agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag 1344
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
435 440 445
gct ctg cac aac cac tac acc cag aag agc ctc tcc ctg tct ccc ggc 1392
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
aaa 1395
Lys
465
<210> 55
<211> 465
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 55
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Glu Glu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Pro Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Val Trp Val Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr
85 90 95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Tyr Tyr Gly Pro Glu Met Trp Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
180 185 190
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
195 200 205
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
225 230 235 240
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
245 250 255
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
260 265 270
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
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370 375 380
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385 390 395 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
420 425 430
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
435 440 445
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
Lys
465
<210> 56
<211> 1422
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#1G5-H1
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1422)
<400> 56
atg aaa cac ctg tgg ttc ttc ctc ctg ctg gtg gca gct ccc aga tgg 48
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc cag gtg cag ctg gtg cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa 96
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
cca ggc gcc agc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc agc ggc tac acc ttt 144
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
acc agc tac tgg atc aac tgg gtg cgc cag gcc cct gga cag ggc ctg 192
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
gaa tgg atg ggc aac atc tac ccc ggc agc agc agc atc aac tac aac 240
Glu Trp Met Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
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Glu Lys Phe Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
acc gcc tac atg gaa ctg agc agc ctg cgg agc gag gac acc gcc gtg 336
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
tac tac tgc gcc cgg acc atc tac aac tac ggc agc tcc ggc tac aat 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
tac gcc atg gac tac tgg ggc cag ggc acc ctc gtg acc gtg agc tca 432
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
gcc tcc acc aag ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag 480
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
agc acc tct ggc ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac 528
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
ttc ccc gaa ccc gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc 576
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
ggc gtg cac acc ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc 624
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc 672
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
tac atc tgc aac gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag 720
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
aga gtt gag ccc aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc 768
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca 816
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc 864
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg 912
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
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tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag 960
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac 1056
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
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Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
cag ccc cgg gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag 1152
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat 1200
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac 1248
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
aac tac aag acc acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc 1296
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac 1344
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc 1392
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<211> 474
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 57
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 63
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ser Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
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<211> 1422
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#1G5-H5
<220>
<221> CDS
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<400> 64
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Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc cag gtg cag ctg cag cag cct ggc gcc gag ctg aaa aaa 96
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Lys Lys
20 25 30
cct ggc gcc tcc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc agc ggc tac acc ttt 144
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
acc agc tac tgg atc aac tgg gtc aag cag cgg cca ggc cag ggc ctg 192
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
gaa tgg atc ggc aat atc tac ccc ggc agc agc agc atc aac tac aac 240
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
gag aag ttc aag agc aag gcc acc ctg acc gtg gac acc agc agc tcc 288
Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
aca gcc tac atg cag ctg tcc agc ctg acc agc gac gac agc gcc gtg 336
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
tac tac tgc agc cgg acc atc tac aac tac ggc agc tcc ggc tac aat 384
Tyr Tyr Cys Ser Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
tac gcc atg gac tac tgg ggc cag ggc acc agc gtg atc gtg agc tca 432
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser
130 135 140
gcc tcc acc aag ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag 480
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
agc acc tct ggc ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac 528
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
ttc ccc gaa ccc gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc 576
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
ggc gtg cac acc ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc 624
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc 672
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
tac atc tgc aac gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag 720
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
aga gtt gag ccc aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc 768
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca 816
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc 864
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg 912
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag 960
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
gag cag tac aac agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg 1008
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac 1056
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggc 1104
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
cag ccc cgg gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag 1152
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat 1200
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
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ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac 1248
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
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aac tac aag acc acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc 1296
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac 1344
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
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gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc 1392
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
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cag aag agc ctc tcc ctg tct ccc ggc aaa 1422
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 65
<211> 474
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 65
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ser Arg Thr Ile Tyr Asn Tyr Gly Ser Ser Gly Tyr Asn
115 120 125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
370 375 380
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<213> Artificial Sequence
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<223> Nucleotide coding of h#1G5-L1
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<221> CDS
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Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
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ggc gcg tac ggc gac atc gtg atg acc cag agc cct gac agc ctg gcc 96
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
20 25 30
gtg tct ctg gga gag aga gcc acc atc aac tgc aag gcc agc gag aac 144
Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
gtg ggc aac agc gtg tcc tgg tat cag cag aag ccc ggc cag ccc ccc 192
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
50 55 60
aag ctg ctg atc tac ggc gcc agc aac aga tac acc ggc gtg ccc gat 240
Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
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aga ttc agc ggc agc ggc tct ggc acc gac ttc acc ctg aca atc agc 288
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr
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Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tac 480
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc 528
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
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ggg aac tcc cag gag agc gtg acc gag cag gac agc aag gac agc acc 576
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
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tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg agc aaa gcc gac tac gag aag 624
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag ggc ctg agc tcc ccc 672
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
gtc acc aag agc ttc aac agg ggg gag tgt 702
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Construct
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Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
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Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
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Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
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Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#1G5-L2
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Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
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Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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aag ccc ctg atc tac ggc gcc agc aac aga tac acc ggc gtg ccc gat 240
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50 55 60
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
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<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#1G5-L3
<220>
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Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
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agc tac ccc tac acc ttt ggc gga ggc acc aag gtg gaa atc aag cgt 384
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 71
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#1G5-L4
<220>
<221> CDS
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<400> 72
atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc atc tcc ctg ctg ctg tgg atc tcc 48
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
ggc gcg tac ggc aac atc gtg atg acc cag agc ccc gac agc atg agc 96
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Met Ser
20 25 30
atg agc gtg ggc gag aga gcc acc ctg agc tgc aag gcc tct gag aac 144
Met Ser Val Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
gtg ggc aac agc gtg tcc tgg tat cag cag aag gcc gag cag agc ccc 192
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Glu Gln Ser Pro
50 55 60
aag ccc ctg atc tac ggc gcc agc aac aga tac acc ggc gtg ccc gat 240
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
aga ttc acc ggc agc ggc agc gcc acc gac ttc acc ctg aca atc agc 288
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
tcc ctg cag gcc gag gac ctg gcc gat tat cac tgc ggc cag agc tac 336
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
agc tac ccc tac acc ttt ggc gga ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt 384
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
acg gtg gcc gcc ccc tcc gtg ttc atc ttc ccc ccc tcc gac gag cag 432
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tac 480
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc 528
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
ggg aac tcc cag gag agc gtg acc gag cag gac agc aag gac agc acc 576
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg agc aaa gcc gac tac gag aag 624
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag ggc ctg agc tcc ccc 672
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
gtc acc aag agc ttc aac agg ggg gag tgt 702
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 73
<211> 234
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 73
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Met Ser
20 25 30
Met Ser Val Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Glu Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#1G5-L5
<220>
<221> CDS
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<400> 74
atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc atc tcc ctg ctg ctg tgg atc tcc 48
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
ggc gcg tac ggc aac atc gtg atg acc cag agc ccc gac agc atg agc 96
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Met Ser
20 25 30
atg agc gtg ggc gag aga gtg acc ctg agc tgc aag gcc agc gag aac 144
Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
gtg ggc aac agc gtg tcc tgg tat cag cag aag gcc gag cag agc ccc 192
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Glu Gln Ser Pro
50 55 60
aag ccc ctg atc tac ggc gcc agc aac aga tac acc ggc gtg ccc gat 240
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
aga ttc acc ggc agc ggc agc gcc acc gac ttc acc ctg aca atc agc 288
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
tcc ctg cag gcc gag gac ctg gcc gat tat cac tgc ggc cag agc tac 336
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
agc tac ccc tac acc ttt ggc gga ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt 384
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
acg gtg gcc gcc ccc tcc gtg ttc atc ttc ccc ccc tcc gac gag cag 432
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tac 480
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc 528
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
ggg aac tcc cag gag agc gtg acc gag cag gac agc aag gac agc acc 576
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
tac agc ctg agc agc acc ctg acc ctg agc aaa gcc gac tac gag aag 624
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag ggc ctg agc tcc ccc 672
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
gtc acc aag agc ttc aac agg ggg gag tgt 702
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
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<211> 234
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 75
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Met Ser
20 25 30
Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Val Gly Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Glu Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Pro Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 1410
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#4C13K-H1
<220>
<221> CDS
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<400> 76
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Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc cag gtg cag ctg gtg cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa 96
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
cca ggc gcc agc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc agc ggc tac acc ttt 144
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
acc acc tac tgg atc aac tgg gtg cgc cag gcc cct gga cag ggc ctg 192
Thr Thr Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
gaa tgg atg ggc aac atc tac ccc ggc acc aga agc agc aac tac aac 240
Glu Trp Met Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn
65 70 75 80
gag aag ttc aag aac cgc gtg acc atc acc gcc gac acc agc acc agc 288
Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
aca gcc tac atg gaa ctg agc agc ctg cgg agc gag gac acc gcc gtg 336
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
tac tac tgc gcc aga gtg tac tac gac cac gtg ggc tac tac ttc gac 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
tac tgg ggc cag ggc acc ctc gtg acc gtg agc tca gcc tcc acc aag 432
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggc 480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc 528
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc 576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg 624
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac 672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc 720
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa 768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag gag cag tac aac 960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggc cag ccc cgg gaa 1104
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac 1152
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 1200
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc 1248
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1296
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tca tgc 1344
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc cag aag agc ctc 1392
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
tcc ctg tct ccc ggc aaa 1410
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 77
<211> 470
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 77
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Thr Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 78
<211> 1410
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding of h#4C13K-H2
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1410)
<400> 78
atg aaa cac ctg tgg ttc ttc ctc ctg ctg gtg gca gct ccc aga tgg 48
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
gtg ctg agc cag gtg cag ctg gtg cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa 96
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
cca ggc gcc agc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc agc ggc tac acc ttt 144
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
acc acc tac tgg atc aac tgg gtg cgc cag gcc cct gga cag ggc ctg 192
Thr Thr Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
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Glu Trp Met Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn
65 70 75 80
gag aag ttc aag aac cgc gtg acc ctg acc gtg gac acc agc acc agc 288
Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
aca gcc tac atg gaa ctg agc agc ctg cgg agc gag gac acc gcc gtg 336
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
tac tac tgt acc cgg gtg tac tac gac cac gtg ggc tac tac ttc gac 384
Tyr Tyr Cys Thr Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
tac tgg ggc cag ggc acc ctc gtg acc gtg agc tca gcc tcc acc aag 432
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggc 480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc 528
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc 576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg 624
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac 672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc 720
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa 768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag gag cag tac aac 960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
ggc cca agc gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggc 480
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
ggc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc 528
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
gtg acc gtg agc tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc 576
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
ttc ccc gct gtc ctg cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg 624
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac 672
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
gtg aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc 720
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
aaa tct tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa 768
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
ctc ctg ggg gga ccc tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 816
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 864
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 912
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccc cgg gag gag cag tac aac 960
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
agc acg tac cgg gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 1008
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 1056
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggc cag ccc cgg gaa 1104
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac 1152
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 1200
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
gcc gtg gag tgg gag agc aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc 1248
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
acc cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1296
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tca tgc 1344
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acc cag aag agc ctc 1392
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
tcc ctg tct ccc ggc aaa 1410
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 85
<211> 470
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 85
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Thr Tyr Trp Ile Asn Trp Met Gln Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 86
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1 of #4C13
<400> 86
Thr Tyr Trp Ile Asn
1 5
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2 of #4C13
<400> 87
Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Arg Ser Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 88
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH3 of #4C13
<400> 88
Val Tyr Tyr Asp His Val Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 89
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> AP3dC-S
<220>
<221> misc_feature
<222> (35)..(35)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 89
cggtaccgcg ggcccgggat cccccccccc cccdn 35
<210> 90
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIggamma RT1 1111-AS
<400> 90
accytgcatt tgaactcctt gcc 23
<210> 91
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIgkappa 1st 589-AS
<400> 91
actgccatca atcttccact tgaca 25
<210> 92
<211> 38
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MCS-AP3-S
<400> 92
cttcgaattc tgcagtcgac ggtaccgcgg gcccggga 38
<210> 93
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIggamma 3rd 656T-AS
<400> 93
ctggacaggg atccagagtt cca 23
<210> 94
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIgkappa 3rd 525-AS
<400> 94
actgaggcac ctccagatgt taact 25
<210> 95
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIgG joint PCR-S
<400> 95
gcctggtcaa gggctatttc cctgag 26
<210> 96
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> polyG-AS
<400> 96
gggggggggg gggggggatc ccgg 24
<210> 97
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIgkappa joint PCR-S
<400> 97
ctgtatccat cttcccacca tccagt 26
<210> 98
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> miniCMV f1-S
<400> 98
agagaaaccg tctatcaggg cgatggc 27
<210> 99
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> miniCMV f1-AS
<400> 99
agagaccctt tgacgttgga gtccacg 27
<210> 100
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIgG sequence
<400> 100
acaccgctgg acagggatcc agag 24
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mIgkappa sequence
<400> 101
gtagaagttg ttcaagaagc acac 24
<210> 102
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3.3-F1
<400> 102
tataccgtcg acctctagct agagcttggc 30
<210> 103
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3.3-R1
<400> 103
gctatggcag ggcctgccgc cccgacgttg 30
<210> 104
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 76L-F
<400> 104
atctccggcg cgtacggcaa cattgtaatg acccaatctc ccaaatc 47
<210> 105
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 76L-R
<400> 105
ggagggggcg gccacagccc gttttatttc cagcttggtc ctccc 45
<210> 106
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 76H-F
<400> 106
ccagatgggt gctgagccag gtccaactgc agcagcctgg tgctgag 47
<210> 107
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 76H-R
<400> 107
cttggtggag gctgagctga ctgtgagagt ggtgccttgg ccccag 46
<210> 108
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CM-inf-F
<400> 108
ccagcctccg gactctagag ccacc 25
<210> 109
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CM-inf-R
<400> 109
agttagcctc ccccgtttaa actc 24
<210> 110
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EG-Inf-F
<400> 110
agctcccaga tgggtgctga gc 22
<210> 111
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EG1-Inf-R
<400> 111
gggcccttgg tggaggctga gc 22
<210> 112
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CM-LKF
<400> 112
ctgtggatct ccggcgcgta cggc 24
<210> 113
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> KCL-Inf-R
<400> 113
ggagggggcg gccaccgtac g 21
<210> 114
<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> h1BO-LF
<400> 114
atctccggcg cgtacggcga cgtggtgatg acccagagcc ctctgtcc 48
<210> 115
<211> 44
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> h1BO-LR
<400> 115
gggcggccac cgtacgcttg atctccacct tggtgcctcc gccg 44
<210> 116
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> h1BO-HF
<400> 116
ccagatgggt gctgagcgag gagcaagtgg tggagagcgg 40
<210> 117
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> h1BO-HR
<400> 117
cttggtggag gctgagctca cggtcaccat ggtgccttgt c 41
<210> 118
<211> 752
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding light chain of No.76 mIgG2a
<220>
<221> CDS
<222> (26)..(727)
<400> 118
ccagcctccg gactctagag ccacc atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc atc 52
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile
1 5
agc ctg ctg ctg tgg atc agc ggc gcc tac ggc aac atc gtg atg acc 100
Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr
10 15 20 25
cag agc ccc aag agc atg agc atg tcc gtg ggc gag aga gtg acc ctg 148
Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu
30 35 40
agc tgc aag gcc agc gag aac gtg ggc aca agc gtg tcc tgg tat cag 196
Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Thr Ser Val Ser Trp Tyr Gln
45 50 55
gaa aag ccc gag cag tcc ccc aag ctg ctg atc ttc ggc gcc agc aac 244
Glu Lys Pro Glu Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Asn
60 65 70
aga tac acc ggc gtg ccc gat aga ttc acc ggc agc ggc agc gcc acc 292
Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr
75 80 85
gac ttc acc ctg aca atc agc agc gtg cag gcc gag gac ctg gcc gat 340
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp
90 95 100 105
tat cac tgc ggc cag agc tac agc tac ccc tac acc ttt ggc ggc agg 388
Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Arg
110 115 120
acc aag ctg gaa atc aag cgg gcc gat gcc gcc cct acc gtg tcc atc 436
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile
125 130 135
ttt cca ccc agc agc gag cag ctg aca agc ggc gga gct agc gtc gtg 484
Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val
140 145 150
tgc ttc ctg aac aac ttc tac ccc aag gac atc aac gtg aag tgg aag 532
Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys
155 160 165
atc gac ggc agc gag cgg cag aac ggc gtg ctg aat agc tgg acc gac 580
Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp
170 175 180 185
cag gac agc aag gac tcc acc tac agc atg tcc agc acc ctg acc ctg 628
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu
190 195 200
acc aag gac gag tac gag cgg cac aac agc tac aca tgc gag gcc acc 676
Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr
205 210 215
cac aag acc agc acc agc ccc atc gtg aag tcc ttc aac cgg aac gag 724
His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu
220 225 230
tgc tgagtttaaa cgggggaggc taact 752
Cys
<210> 119
<211> 234
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 119
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser
20 25 30
Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Val Gly Thr Ser Val Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Glu Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Arg Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
130 135 140
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
165 170 175
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
195 200 205
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
210 215 220
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230
<210> 120
<211> 1460
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide coding heavy chain of No.76 mIgG2a
<220>
<221> CDS
<222> (26)..(1435)
<400> 120
ccagcctccg gactctagag ccacc atg aag cac ctg tgg ttc ttt ctg ctg 52
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu
1 5
ctg gtg gcc gct ccc aga tgg gtg ctg tct cag gtg cag ctg cag cag 100
Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln
10 15 20 25
cct ggc gcc gag ctc gtg aaa cct ggc gcc tct gtg aac ctg agc tgc 148
Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys
30 35 40
aag agc agc ggc tac acc ttc acc aac tac tgg atc aac tgg gtc aag 196
Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys
45 50 55
cag cgg cca ggc cag ggc ctg gaa tgg atc ggc gat atc tac ccc ggc 244
Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly
60 65 70
acc agc acc acc aat tac aac gag aag ttc aag aac aag gcc acc ctg 292
Thr Ser Thr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu
75 80 85
acc gtg gac acc agc tcc agc aca gcc tac atg cag ctg tcc agc ctg 340
Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu
90 95 100 105
acc agc gac gac agc gcc gtg tac tac tgc acc cgg atc tac tac gac 388
Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Ile Tyr Tyr Asp
110 115 120
tac gac ggc tac tac ttc gac tac tgg ggc cag ggc aca acc ctg aca 436
Tyr Asp Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
125 130 135
gtg tcc agc gcc aag acc acc gcc cct agc gtg tac cct ctg gct cct 484
Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro
140 145 150
gtg tgt ggc gat acc acc ggc agc tct gtg aca ctg ggc tgc ctc gtg 532
Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val
155 160 165
aag ggc tac ttc ccc gag cct gtg acc ctg aca tgg aac agc ggc agc 580
Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser
170 175 180 185
ctg tct agc ggc gtg cac acc ttt cca gcc gtg ctg cag agc gac ctg 628
Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu
190 195 200
tac acc ctg agc agc agc gtg acc gtg acc tcc agc acc tgg ccc agc 676
Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser
205 210 215
cag agc atc acc tgt aac gtg gcc cac cct gcc agc agc acc aag gtg 724
Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val
220 225 230
gac aag aag atc gag ccc aga ggc ccc acc atc aag cct tgc ccc cct 772
Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro
235 240 245
tgc aaa tgc cct gcc ccc aat ctg ctg ggc gga ccc agc gtg ttc atc 820
Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
250 255 260 265
ttc cca ccc aag atc aag gac gtg ctg atg atc agc ctg agc ccc atc 868
Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile
270 275 280
gtg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg tcc gag gac gac ccc gat gtg cag 916
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln
285 290 295
atc agt tgg ttc gtg aac aac gtg gaa gtg cac acc gcc cag acc cag 964
Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
300 305 310
aca cac aga gag gac tac aac agc acc ctg aga gtg gtg tcc gcc ctg 1012
Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu
315 320 325
ccc atc cag cac cag gat tgg atg agc ggc aaa gaa ttc aag tgc aaa 1060
Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys
330 335 340 345
gtg aac aac aag gac ctg cca gcc ccc atc gag cgg acc atc tct aag 1108
Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
350 355 360
cct aag ggc agc gtg cgg gct ccc cag gtg tac gtg ctg cct cct cca 1156
Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro
365 370 375
gag gaa gag atg acc aag aaa caa gtg aca ctg acc tgt atg gtc acc 1204
Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr
380 385 390
gac ttc atg ccc gag gac atc tac gtg gaa tgg acc aac aac ggc aag 1252
Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys
395 400 405
acc gag ctg aac tac aag aac acc gag ccc gtg ctg gac tcc gat ggc 1300
Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
410 415 420 425
agc tac ttc atg tac agc aag ctg cgg gtg gaa aag aaa aac tgg gtg 1348
Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val
430 435 440
gaa cgg aac agc tac agc tgc tcc gtg gtg cac gag ggc ctg cac aat 1396
Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn
445 450 455
cac cac acc aca aag agc ttc agc cgg acc ccc ggc aaa tgagtttaaa 1445
His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
460 465 470
cgggggaggc taact 1460
<210> 121
<211> 470
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 121
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Thr Ser Thr Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Ile Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Tyr Tyr Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr
130 135 140
Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly
145 150 155 160
Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val
195 200 205
Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val
210 215 220
Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg
225 230 235 240
Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp
260 265 270
Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn
290 295 300
Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp
325 330 335
Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys
370 375 380
Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile
385 390 395 400
Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn
405 410 415
Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys
435 440 445
Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe
450 455 460
Ser Arg Thr Pro Gly Lys
465 470
<210> 122
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-R
<400> 122
cttggtggag gctgagctca cggtcacgag ggtgccctgg cc 42
<210> 123
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1 of #4C13
<400> 123
Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Val Ser Val Ser
1 5 10
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL2 of #4C13
<400> 124
Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL3 of #4C13
<400> 125
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
Claims (48)
- 녹농균의 LPS 를 인식하는 항체로서, O11 항원에 결합하고, O1, O2, O3, O4, O5, O6, O7, O8, O9, O10, O13, O14, O15, O16, O17, O18, O19, O20 항원, 및 O 항원 결손주에 결합하지 않고, O11 임상 분리주에 대한 커버율이 85 % 이상인 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편.
- 제 1 항에 있어서,
O11 임상 분리주에 대한 커버율이 95 % 이상인, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 녹농균의 LPS 를 인식하는 항체로서, O11 항원에 결합하고, O1, O2, O3, O4, O5, O6, O7, O8, O9, O10, O13, O14, O15, O16, O17, O18, O19, O20 항원 및 O 항원 결손주에 결합하지 않고, ATCC 29260 으로 특정되는 녹농균에 대한 옵소닌 활성의 50 % 증식 저해 최소 농도가 12 ng/㎖ 이하인 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편.
- 제 3 항에 있어서,
ATCC 29260 으로 특정되는 녹농균에 대한 옵소닌 활성의 50 % 증식 저해 최소 농도가 4.1 ng/㎖ 이하인, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 배열 번호 8 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 (重鎖) 가변 영역 배열, 및 배열 번호 4 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 (輕鎖) 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 배열 번호 16 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 그리고 배열 번호 24 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나와 교차 경합하는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편.
- 제 5 항에 있어서,
배열 번호 8 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 4 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 배열 번호 16 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체, 그리고 배열 번호 24 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열, 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나가 결합하는 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 배열이, CDRH1, CDRH2, CDRH3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRH1 은 배열 번호 9 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH2 는 배열 번호 10 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH3 은, 배열 번호 11 에 나타내는 아미노산 배열로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것 ; 및
경쇄 배열이 CDRL1, CDRL2, CDRL3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRL1 은 배열 번호 5 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL2 는 배열 번호 6 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL3 은, 배열 번호 7 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 7 항에 있어서,
배열 번호 8 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 4 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 배열이, CDRH1, CDRH2, CDRH3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRH1 은 배열 번호 17 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH2 는 배열 번호 18 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH3 은, 배열 번호 19 에 나타내는 아미노산 배열로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것 ; 및
경쇄 배열이 CDRL1, CDRL2, CDRL3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRL1 은 배열 번호 13 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL2 는 배열 번호 14 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL3 은, 배열 번호 15 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 9 항에 있어서,
배열 번호 16 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 배열이, CDRH1, CDRH2, CDRH3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRH1 은 배열 번호 25 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH2 는 배열 번호 26 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRH3 은, 배열 번호 27 에 나타내는 아미노산 배열로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것 ; 및
경쇄 배열이 CDRL1, CDRL2, CDRL3 을 갖는 가변 영역을 포함하고, 상기 CDRL1 은 배열 번호 13 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL2 는 배열 번호 14 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지고, 상기 CDRL3 은, 배열 번호 15 에 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 11 항에 있어서,
배열 번호 24 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 12 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
Fab, F(ab')2, Fab' 및 Fv 로 이루어지는 군에서 선택되는, 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
scFv 인 것을 특징으로 하는, 항체. - 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
키메라 항체인 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
인간화되어 있는 것을 특징으로 하는, 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄가 인간 면역 글로불린 G1 중쇄의 정상 영역을 포함하고, 경쇄가 인간 면역 글로불린 κ 경쇄의 정상 영역을 포함하는, 항체. - 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편으로서,
(a) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 중쇄 가변 영역 배열 :
a1) 배열 번호 57 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a2) 배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a3) 배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a4) 배열 번호 63 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a5) 배열 번호 65 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열 ; 및
(b) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 경쇄 가변 영역 배열 :
b1) 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b2) 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b3) 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b4) 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b5) 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 18 항에 있어서,
배열 번호 59 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 18 항에 있어서,
배열 번호 61 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 144 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 녹농균의 LPS O11 항원에 대한 결합 활성을 갖는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편으로서,
(a) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 중쇄 가변 영역 배열 :
a1) 배열 번호 77 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a2) 배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a3) 배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a4) 배열 번호 83 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a5) 배열 번호 85 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열 ; 및
(b) 이하의 아미노산 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 경쇄 가변 영역 배열 :
b1) 배열 번호 67 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b2) 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b3) 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b4) 배열 번호 73 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b5) 배열 번호 75 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 아미노산 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 아미노산 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 21 항에 있어서,
배열 번호 79 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 69 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 21 항에 있어서,
배열 번호 81 에 나타내는 아미노산 배열의 20 내지 140 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 중쇄 가변 영역 배열 및 배열 번호 71 에 나타내는 아미노산 배열의 21 내지 129 번째의 아미노산 잔기로 이루어지는 경쇄 가변 영역 배열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편. - 제 18 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
카르복실기 말단측의 1 내지 수개의 아미노산이 결실한 중쇄를 포함하는 항체. - 제 1 항 내지 제 24 항에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물.
- 제 25 항에 있어서,
녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방제인 것을 특징으로 하는, 의약 조성물. - 제 1 항 내지 제 24 항에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나, 그리고 페니실린계, 세펨계, 카르바페넴계, 모노박탐계, 퀴놀론계, 아미노 배당체계, 폴리믹신계, 리팜피신, 매크롤라이드계 항균약으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물.
- 제 26 항 또는 제 27 항에 있어서,
녹농균 감염증이, 다제내성 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환인 것을 특징으로 하는, 의약 조성물. - 제 26 항 또는 제 27 항에 있어서,
녹농균 감염증이, 혈류 감염, 패혈증, 수막염, 심내막염, 중이염, 부비강염, 폐렴, 폐농양, 농흉, 만성 기도 감염증, 복막염, 수술후 감염증, 담낭염, 담관염, 안검 종양, 누낭염, 결막염, 각막 궤양, 각막 농양, 전안구염, 안와 감염, 요로 감염증, 카테터 감염증, 항문 주변 농양, 열상의 2차 감염, 욕창 감염증, 낭포성 섬유증, 림프관염, 림프절염, 골수염, 관절염, 편도염, 간농양, 피부 연부 조직 감염증, 자궁내 감염, 자궁 부속기염, 자궁방 결합직염, 악골 주변의 봉소염, 또는 악염인 것을 특징으로 하는, 의약 조성물. - 제 26 항 또는 제 27 항에 있어서,
녹농균 감염증이, 폐렴인 것을 특징으로 하는, 의약 조성물. - 제 1 항 내지 제 24 항에 기재된 항체, 그 항체의 항원 결합 단편, 또는 제 26 항 또는 제 27 항에 기재된 의약 조성물 중 적어도 어느 하나를 투여하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방 방법.
- 제 1 항 내지 제 24 항에 기재된 항체, 그 항체의 항원 결합 단편, 또는 제 26 항에 기재된 의약 조성물 중 적어도 어느 하나, 그리고 페니실린계, 세펨계, 카르바페넴계, 모노박탐계, 퀴놀론계, 아미노 배당체계, 폴리믹신계, 리팜피신, 매크롤라이드계 항균약으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 어느 하나를 동시 또는 잇따라 투여하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 치료 및/또는 예방 방법.
- 제 31 항 또는 제 32 항에 있어서,
녹농균 감염증이, 다제내성 녹농균 감염에서 기인하는 전신 감염 질환인 것을 특징으로 하는, 치료 및/또는 예방 방법. - 제 33 항에 있어서,
녹농균 감염증이, 혈류 감염, 패혈증, 수막염, 심내막염, 중이염, 부비강염, 폐렴, 폐농양, 농흉, 만성 기도 감염증, 복막염, 수술후 감염증, 담낭염, 담관염, 안검 종양, 누낭염, 결막염, 각막 궤양, 각막 농양, 전안구염, 안와 감염, 요로 감염증, 카테터 감염증, 항문 주변 농양, 열상의 2차 감염, 욕창 감염증, 낭포성 섬유증, 림프관염, 림프절염, 골수염, 관절염, 편도염, 간농양, 피부 연부 조직 감염증, 자궁내 감염, 자궁 부속기염, 자궁방 결합직염, 악골 주변의 봉소염, 또는 악염인 것을 특징으로 하는, 치료 및/또는 예방 방법. - 제 33 항에 있어서,
녹농균 감염증이, 폐렴인 것을 특징으로 하는 치료 및/또는 예방 방법. - 제 1 항 내지 제 24 항에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 녹농균 감염증의 진단제.
- 제 1 항 내지 제 24 항에 기재된 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편 중 적어도 어느 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는, 녹농균의 검출 키트.
- 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 기재된 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드.
- 제 38 항에 있어서,
(a) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
a1) 배열 번호 56 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a2) 배열 번호 58 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a3) 배열 번호 60 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a4) 배열 번호 62 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a5) 배열 번호 64 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
a9) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열 ; 및
(b) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
b1) 배열 번호 66 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b2) 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b3) 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b4) 배열 번호 72 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b5) 배열 번호 74 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
b9) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 뉴클레오티드가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드. - 제 39 항에 있어서,
배열 번호 58 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드. - 제 39 항에 있어서,
배열 번호 60 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 432 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드. - 제 38 항에 있어서,
(a) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
a1) 배열 번호 76 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a2) 배열 번호 78 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a3) 배열 번호 80 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a4) 배열 번호 82 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a5) 배열 번호 84 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
a6) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a7) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
a8) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
a9) a1) 내지 a5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열 ; 및
(b) 이하의 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드 :
b1) 배열 번호 66 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b2) 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b3) 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b4) 배열 번호 72 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b5) 배열 번호 74 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열 ;
b6) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 95 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b7) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 적어도 99 % 의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 배열 ;
b8) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열과 상보적인 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드가 보유하는 뉴클레오티드 배열 ;
b9) b1) 내지 b5) 에서 선택되는 어느 하나의 뉴클레오티드 배열에 1 내지 수개의 뉴클레오티드가 치환, 결실 또는 부가된 뉴클레오티드 배열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드. - 제 42 항에 있어서,
배열 번호 78 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 68 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드. - 제 42 항에 있어서,
배열 번호 80 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 58 내지 420 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 및 배열 번호 70 에 나타내는 뉴클레오티드 배열의 61 내지 387 번째의 뉴클레오티드로 이루어지는 뉴클레오티드 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드. - 제 38 항 내지 제 44 항에 기재된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제 38 항 내지 제 44 항에 기재된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 형질 전환 숙주 세포.
- 제 45 항에 기재된 벡터를 포함하는 형질 전환 숙주 세포.
- 제 46 항 또는 제 47 항에 기재된 숙주 세포를 배양하고, 배양 산물로부터 항체를 정제하는 공정을 포함하는 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 생산 방법.
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