KR20150082295A

KR20150082295A - 옥사졸리딘-2-온-피리미딘 유도체

Info

Publication number: KR20150082295A
Application number: KR1020157011951A
Authority: KR
Inventors: 로빈 알렉 페어허스트; 파스칼 푸레; 프랑크 슈테판 칼토프; 안드레아스 레르히너; 하인리히 뤼에거
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2012-11-12
Filing date: 2013-11-11
Publication date: 2015-07-15
Also published as: IL238239A; JO3334B1; AU2013343022B2; DK2922848T3; CL2015001202A1; MY174239A; MA38076A1; ZA201502175B; PL2922848T3; EA027987B1; CN104718204A; EA029714B1; HRP20171425T1; TN2015000120A1; US10202371B2; PT2922848T; AU2013343022A1; MX363436B; EP2922848B1; EA201590929A1

Abstract

본 발명은 PI3K (포스파티딜이노시톨-3-키나제) 억제제로서 작용하는 옥사졸리딘-2-온 치환된 피리미딘 화합물, 뿐만 아니라 그의 제약 조성물, 그의 제조 방법, 및 PI3K에 의존적인 병태, 질환 및 장애를 치료하기 위한 용도에 관한 것이다.

Description

옥사졸리딘-2-온-피리미딘 유도체 {OXAZOLIDIN-2-ONE-PYRIMIDINE DERIVATIVES}

본 발명은 PI3K (포스파티딜이노시톨-3-키나제) 억제제로서 작용하는 옥사졸리딘-2-온 치환된 피리미딘 화합물, 뿐만 아니라 그의 제약 조성물, 그의 제조 방법, 및 PI3 키나제에 의존적인 병태, 질환 및 장애를 치료하기 위한 용도에 관한 것이다.

포스파티딜이노시톨-3-키나제 슈퍼패밀리는 4가지 상이한 PI3K 관련 지질 또는 단백질 키나제를 포함한다. 부류 I, II 및 III은 그들의 기질 특이성이 상이한 지질 키나제인 반면, PI3-키나제-관련 단백질 키나제 (PIKK)로 불리우기도 하는 부류 IV PI3K는 단백질 키나제이다. 부류 I PI3K는 포스페이트를 이노시톨 지질의 D-3' 위치로 전이시켜, 결과적으로 플렉스트린-상동성, FYVE, Phox 및 기타 인지질-결합 도메인을 함유하는 단백질을 종종 형질 막에서 각종 신호전달 복합체 내로 도킹함으로써 신호전달 캐스케이드에서 제2 메신저로서 작용하는 포스포이노시톨-3-포스페이트 (PIP), 포스포이노시톨-3,4-디포스페이트 (PIP₂) 및 포스포이노시톨-3,4,5-트리포스페이트 (PIP₃)를 생성시키는 것을 촉매하는 지질 키나제 계열을 포함한다 (Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001)). 종종 AKT 키나제의 활성화를 통하여 생존과 증식을 증가시키는, PI3K의 비정상적인 조절이 인간의 암에서 가장 흔한 현상 중의 하나이고 여러 수준에서 발생되는 것으로 밝혀졌다 (Liu et al., Nat Rev Drug Discov 8:627-644 (2009)). 예를 들어, 하류 신호전달 경로를 활성화시키는 PIK3CA에서의 체세포 과오 돌연변이가 광범위한 인간 암에서 상당히 빈번하게 발생되는 것으로 보고되었다 (Huang et al., Science 318: 1744-1748 (2007), Zhao & Vogt, Oncogene 27:5486-5496 (2008)). 이노시톨 고리의 3' 위치에서 포스포이노시티드를 탈인산화시키고, 그렇게 해서 PI3K 활성을 길항시키는 종양 억제 유전자 PTEN은 각종 종양에서 기능상 돌연변이되거나 결실된다 (Keniry & Parsons, Oncogene 27:5477-5485 (2008)). 일부 연구 결과, PTEN을 발현하지 못하면 신호전달 의존성이 PI3Kα에서 β-이소형으로 이동되는 것이 매개될 수 있는 것으로 나타났다 (Wee et al., Porc Natl Acad Sci USA 105:13057-13062 (2008)). 따라서, 부류 I PI3Kα와 β-이소형 둘 다를 억제하는 것이, PTEN 포스파타제가 결핍되는 암에서 특히 유리할 수 있다.

공개된 국제 특허 출원 WO2007/084786에는 PI3K를 억제하는 치환된 피리미딘 분자가 기재되어 있다.

Akt를 활성화시키면 라파마이신의 포유동물 표적 (mTOR)의 키나제 활성이 자극된다는 것은 널리 확립되어 있다. mTOR은 단백질 키나제이고 부류 IV PI3K의 한 구성원이다. 포유동물 세포에서, mTOR은 mTORC1 및 mTORC2로 불리우는 2가지 별개의 단백질 복합체에서 발견된다. mTORC1의 활성화는 활성 PI3K 및 Akt 키나제에 의존적이다. mTORC2 활성화를 조절하는 것은 더 복잡하다. mTORC2는 세린 잔기 473의 인산화를 통하여 Akt 키나제 활성을 증진시키는데 책임이 있다 (Sarbassov et al., Science 307:1098-1101 (2005), Bayascas & Alessi, Mol Cell 18(2):143-145 (2005)). 따라서, mTOR의 억제에 부수적으로 따르는 부류 I PI3K 이소형의 촉매적 억제는 잠재적으로 PI3K-Akt 경로에 대해 더 강력한 효과를 도입하는 추가의 이점을 나타낼 수도 있다.

피부 편평 세포 암종 (SCC)은 두 번째로 가장 자주 발생하는 인간 피부암을 나타내는데, 이에 앞서 통상적으로 광선 각화증 (AK)이 발생한다. AK 및 피부 SCC의 발병기전은 중대한 위험 인자 중 하나로서 만성 UV 노출과 연관이 있어왔다 (Salasche, J Am Acad Dermatol 42: 4-7 (2000)). PI3K/Akt/mTOR 경로의 활성을 증진시키는 것이 기존의 연구에서 제안된 바 있다 (Chen et al., Br J Dermatol; 160 (2):442-445 (2009)). 장시간 UV-B 조사로 인해, 시험관내 인간 각질세포 중의 mRNA 및 단백질 수준 하에서 PTEN 발현의 하향조절이 유발되어, 그들의 생존과 성장이 촉진되는 것으로 밝혀졌다 (Ming et al., Oncogene; 29(4):492-502 (2010)). 최근의 문헌을 기초로 하면, 만성 UV-조사와 PTEN의 하향조절 간에는 인과 관계가 존재한다 (Darido et al., Cancer Cell; 20(5):635-648 (2011)). 따라서, 피부 SCC 및 AK와 만성적으로 햇볕에 손상된 피부는 모두, PI3K/Akt/mTOR 신호전달 경로의 활성화를 초래하는 PTEN 발현의 결핍과 연관이 있을 수 있다.

본 발명은 하기 화학식 I의 옥사졸리딘-2-온 치환된 피리미딘 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물에 관한 것이다:

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹은 메틸, 에틸 또는 히드록시메틸이고;

R²는 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 페닐, 또는

치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 피리딜, 또는

치환되지 않거나 또는 D 또는 F로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기에 의해 치환되는, N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5원 모노시클릭 헤테로아릴이고;

R³은 H 또는 메틸이다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 화합물"은 화학식 I 및 그의 하위 화학식의 화합물, 상기 화합물의 염, 상기 화합물 및/또는 염의 수화물 또는 용매화물, 뿐만 아니라 모든 입체이성질체 (부분입체이성질체 및 거울상이성질체 포함), 호변이성질체 및 동위원소 표지된 화합물 (중수소 치환물 포함)을 지칭한다. 본 발명의 화합물은 추가로, 화학식 I (또는 그의 하위 화학식)의 화합물 및 그의 염의 다형체를 포함한다. 화학식 I의 화합물이 언급된 경우, 이는 화학식 I의 화합물의 호변이성질체 및 N-옥시드를 또한 포함하는 것을 의미한다.

화학식 I의 화합물은 PI3 키나제에 의존적인 질환을 치료하는데 사용하기 적합한 것으로 간주된다. 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 부류 I PI3 키나제에 의존적이거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의존적인 질환을 치료하는데 사용하기 적합한 것으로 간주된다.

본 발명은 하기 용어 해설 및 결론 예를 포함한, 하기 설명을 참조로 하여 보다 상세히 인지될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "포함한", "함유하는" 및 "포함하는"은 개방된 비-제한적 의미로 본원에 사용된다.

앞서 본원에 기재되었고 후술되는 일반적인 용어들은 바람직하게, 본 개시내용의 맥락 내에서 달리 표시되지 않는 한 다음 의미를 갖는다:

본원에 사용된 용어 "알콕시"는 -O- 연결 기를 통하여 분자의 나머지에 부착된, 완전히 포화된 분지 (단일 또는 다수 분지화 포함) 또는 비분지 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 달리 제공되지 않는 한, 알콕시는 1 내지 16개의 탄소 원자, 1 내지 10개의 탄소 원자, 1 내지 7개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 모이어티를 지칭한다. 알콕시의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소-프로폭시, n-부톡시, sec-부톡시, 이소-부톡시, tert-부톡시, n-펜톡시, 이소펜톡시, 네오펜틸, n-헥실옥시를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "피리딜"은 2-피리딜, 3-피리딜 또는 4-피리딜을 지칭한다. 메타 또는 파라 위치에서의 치환기는 피리딜의 탄소 원자에 부착된다. 대표적인 예는 3-피리딜이다.

본원에 사용된 바와 같은, N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5원 모노시클릭 헤테로아릴 상의 치환기의 경우에는, 이것이 헤테로아릴의 탄소 원자에 부착된다. N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5원 모노시클릭 헤테로아릴의 예는 티아졸릴, 옥사졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴 및 1,3,4-티아디아졸릴을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 대표직인 예는 티아졸릴이다.

본 발명의 각종 실시양태가 본원에 기재된다. 각 실시양태에 명시된 특색은 다른 명시된 특색과 조합하여 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있다는 것을 인지해야 할 것이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ia의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

<화학식 Ia>

상기 식에서, R¹ 및 R²는 상기 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ib의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

<화학식 Ib>

한 실시양태에서, 본 발명은

R²가 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 페닐

인 화학식 I, Ia 또는 Ib의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 피리딜

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 치환되지 않거나 또는 D 또는 F로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기에 의해 치환되는, N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5원 모노시클릭 헤테로아릴

한 실시양태에서, 본 발명은

R²가 페닐, 3-메톡시-페닐, 4-메톡시-페닐, 4-(3-히드록시프로폭시)-페닐, 4-(2-히드록시에톡시)-페닐 또는 4-(2-메톡시에톡시)-페닐

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 3-피리딜

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 3-피리딜

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 치환되지 않거나 또는 D 또는 F로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기에 의해 치환되는 티아졸릴

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 치환되지 않거나 또는 D 또는 F로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기에 의해 치환되는 2-티아졸릴

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R²가 2-티아졸릴

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

인 화학식 Ia 또는 Ib의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

R²가 3-피리딜

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 메틸이고;

R²가 2-티아졸릴

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

R²가 3-피리딜

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 에틸이고;

R²가 2-티아졸릴

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

한 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

R²가 3-피리딜

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

R¹이 히드록시메틸이고;

R²가 2-티아졸릴

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(3-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(티아졸-2-일)옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-에틸-5-피리딘-3-일-옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-피리딘-3-일-옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-페닐-옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(2-메톡시에톡시)페닐)옥사졸리딘-2-온,

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(4-(2-히드록시에톡시)페닐)-4-(히드록시메틸)옥사졸리딘-2-온 또는

3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(3-히드록시프로폭시)페닐)옥사졸리딘-2-온

으로부터 선택된 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온,

(4S*,5S*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시-메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,

(4S*,5R*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온,

(4R*,5R*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(3-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,

(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(티아졸-2-일)옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-페닐-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(2-메톡시에톡시)페닐)옥사졸리딘-2-온,

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(4-(2-히드록시에톡시)페닐)-4-(히드록시메틸)옥사졸리딘-2-온 또는

(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(3-히드록시프로폭시)페닐)옥사졸리딘-2-온

구체적 실시양태는 본원에 기재되고 구체적으로 예시된 화합물에 의해 제공된다.

본원에 사용된 용어 "광학 이성질체" 또는 "입체이성질체"는 본 발명의 소정의 화합물에 대해 존재할 수 있는 각종 입체이성질체 배위 중 어느 것을 지칭하고 기하 이성질체를 포함한다. 특정 치환기가 탄소 원자의 키랄 중심에 부착될 수 있는 것으로 인지된다. 용어 "키랄"은 자신의 거울상 파트너에 중첩될 수 없는 특성을 지닌 분자를 지칭하는 반면, 용어 "비키랄"은 자신의 거울상 파트너에 중첩가능한 분자를 지칭한다. 따라서, 본 발명은 상기 화합물의 거울상이성질체, 부분입체이성질체 또는 라세미체를 포함한다. "거울상이성질체"는 서로 중첩될 수 없는 거울상인 한 쌍의 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상이성질체의 1:1 혼합물이 "라세미" 혼합물이다. 이 용어는 적절한 경우에 라세미 혼합물을 지정하기 위해 사용된다.

"부분입체이성질체"는 적어도 2개의 비대칭 원자를 갖고 있지만, 서로 거울상이 아닌 입체이성질체이다. 절대 입체화학은 칸-인골드-프렐로그(Cahn-lngold-Prelog) R-S 시스템에 따라서 명시된다. 화합물이 순수한 거울상이성질체인 경우, 각 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S로써 명시될 수 있다. 그의 절대 배위가 공지되지 않은 분해 화합물은, 그들이 나트륨 D 라인의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라서 (우선성 또는 좌선성) (+) 또는 (-)로 지정될 수 있다. 본원에 기재된 특정 화합물은 1개 이상의 비대칭 중심 또는 축을 함유하므로, 절대 입체화학의 측면에서 (R)- 또는 (S)-로서 규정될 수 있는, 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 기타 입체이성질체 형태를 유발시킬 수 있다.

출발 물질 및 과정의 선택에 따라서, 본 발명의 화합물은 비대칭 탄소 원자의 수에 따라서, 가능한 이성질체 중 하나의 형태로 존재할 수 있거나 또는 그의 혼합물로서, 예를 들어 순수한 광학 이성질체로서, 또는 이성질체 혼합물로서, 예컨대 라세미체 및 부분입체이성질체 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명은 라세미 혼합물, 부분입체이성질체 혼합물 및 광학적으로 순수한 형태를 포함한 상기 가능한 모든 이성질체를 포함하는 것을 의미한다. 광학 활성 (R)- 및 (S)-이성질체는 키랄 합성단위체 또는 키랄 시약을 사용하여 제조할 수 있거나 또는 통상적인 기술을 이용하여 분해할 수 있다. 화합물이 이중 결합을 함유하는 경우, 치환기는 E 또는 Z 배위일 수 있다. 화합물이 이치환된 시클로알킬을 함유하는 경우, 이러한 시클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스-배위를 가질 수 있다. 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함된다.

본원에 사용된 용어 "염(들)"은 본 발명의 화합물의 산 부가 또는 염기 부가 염을 지칭한다. "염"은 특히 "제약상 허용되는 염"을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 유효성과 특성을 보유하고 있고 전형적으로 생물학상 또는 달리 바람직한 염을 지칭한다. 많은 경우에 있어서, 본 발명의 화합물은 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 이와 유사한 기의 존재를 통하여 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.

제약상 허용되는 산 부가 염은 무기 산 및 유기 산과 함께 형성될 수 있는데, 예를 들어 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 힙푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프토에이트, 납실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염이다.

그로부터 염이 유래될 수 있는 무기 산은, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.

그로부터 염이 유래될 수 있는 유기 산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 술포살리실산 등을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기와 함께 형성될 수 있다.

그로부터 염이 유래될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어 암모늄 염, 및 주기율표의 I족에서 XII족까지의 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연 및 구리로부터 유래되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.

그로부터 염이 유래될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1급, 2급 및 3급 아민, 치환된 아민 (자연 발생적으로 치환된 아민 포함), 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.

본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 상기 화합물의 유리 산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대 Na, Ca, Mg 또는 K 수산화물, 탄산염, 중탄산염 등)와 반응시킴으로써 또는 상기 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로, 물 또는 유기 용매 중에서 수행하거나 이 둘의 혼합물에서 수행한다. 일반적으로, 실시가능한 경우에는, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비-수성 매질을 사용하는 것이 바람직하다. 추가의 적합한 염에 관한 목록은, 예를 들어 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)]; 및 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾을 수 있다.

달리 표시되지 않는 한, 본원에 제시된 모든 화학식은 또한, 화합물의 표지되지 않은 형태를 나타낼 뿐만 아니라 화합물의 동위원소 표지된 형태를 나타내고자 한다. 동위원소 표지된 화합물은 본원에 제시된 화학식으로써 나타낸 구조를 갖지만, 단 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량 수를 갖는 원자로 대체된다. 본 발명의 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸F, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ³⁶Cl, ¹²⁵I를 각각 포함한다. 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 각종 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소, 예컨대 ³H 및 ¹⁴C가 존재하는 화합물, 또는 비-방사성 동위원소, 예컨대 ²H 및 ¹³C가 존재하는 화합물을 포함한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (¹⁴C를 이용함), 반응 동역학적 연구 (예를 들어, ²H 또는 ³H를 이용함), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT) (약물 또는 기질 조직 분포 검정 포함), 또는 환자의 방사선 치료에 유용하다. 특히, ¹⁸F 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 화학식 I의 동위원소 표지된 화합물은 일반적으로, 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 제조할 수 있거나 또는 기존에 이용된 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소 표지된 시약을 사용하여 첨부되는 실시예 및 제조에 기재된 바와 유사한 공정에 의해 제조할 수 있다.

추가로, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, ²H 또는 D)로 치환하면, 보다 큰 대사 안정성으로부터 비롯되는 특정의 치료 이점, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 요구되는 투여량 감소 또는 치료 지수 상의 개선이 제공될 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 화학식 I의 화합물의 치환기로서 간주되는 것으로 인지된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 구체적으로 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 규정될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "동위원소 농축 계수"는 동위원소 존재비와 명시된 동위원소의 자연 존재비 간의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 중의 특정 치환기가 중수소를 의미하는 경우, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3,500 (각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5% 중수소 혼입), 적어도 4,000 (60% 중수소 혼입), 적어도 4,500 (67.5% 중수소 혼입), 적어도 5,000 (75% 중수소 혼입), 적어도 5,500 (82.5% 중수소 혼입), 적어도 6,000 (90% 중수소 혼입), 적어도 6,333.3 (95% 중수소 혼입), 적어도 6,466.7 (97% 중수소 혼입), 적어도 6,600 (99% 중수소 혼입), 또는 적어도 6,633.3 (99.5% 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.

본 발명에 따르는 제약상 허용되는 용매화물은 결정화의 용매가 동위원소-치환시킬 수 있는 것, 예를 들어 D₂O, d₆-아세톤, d₆-DMSO를 포함한다.

본 발명의 화합물, 즉 수소 결합을 위한 공여자 및/또는 수용자로서 작용할 수 있는 기를 함유하는 화학식 I의 화합물은 적합한 공-결정 형성제와 함께 공-결정을 형성할 수 있다. 이들 공-결정은 공지된 공-결정 형성 과정에 의해 화학식 I의 화합물로부터 제조할 수 있다. 이러한 과정은 결정화 조건 하에 공-결정 형성제를 이용하여 화학식 I의 화합물을 분쇄하거나, 가열하거나, 공-승화시키거나, 공-용융시키거나 또는 용액 중에서 접촉시키고; 이로써 형성된 공-결정을 단리시키는 것을 포함한다. 적합한 공-결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것을 포함한다. 따라서, 본 발명은 추가로, 화학식 I의 화합물을 포함하는 공-결정을 제공한다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 담체"는 통상의 기술자에게 공지될 수 있는 바와 같은 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등 및 그의 조합물을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329] 참조). 통상적인 어떠한 담체도 활성 성분과 비상용성인 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에 그를 사용하는 것이 고려된다.

본 발명의 화합물의 용어 "치료 유효량"은 특정 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응을 유발시킬 본 발명의 화합물의 양, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 저하 또는 억제를 유발시키거나, 증상을 향상시키거나, 병태를 경감시키거나, 질환 진행을 느리게 또는 지연시키거나 또는 질환을 예방시켜 줄 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 한 비-제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 대상체에게 투여되는 경우에, (1) (i) 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나, (ii) 부류 I PI3 키나제 활성과 연관되거나 또는 (iii) 부류 I PI3 키나제의 활성 (정상적 또는 비정상적)을 특징으로 하는 병태, 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 경감, 억제, 예방 및/또는 향상시키는데 유효하거나; 또는 (2) 부류 I PI3 키나제의 활성을 저하 또는 억제시키는데 유효한 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 또 다른 비-제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 특정 세포, 조직, 비-세포성 생물학적 물질, 또는 매질에 투여되는 경우에, 부류 I PI3 키나제의 활성을 적어도 부분적으로 저하 또는 억제시키는데 유효한 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.

또 다른 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 대상체에게 투여되는 경우에, (1) (i) 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개되거나, (ii) 부류 I PI3 키나제 및 mTOR 활성과 연관되거나 또는 (iii) 부류 I PI3 키나제 및 mTOR의 활성 (정상적 또는 비정상적)을 특징으로 하는 병태, 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 경감, 억제, 예방 및/또는 향상시키는데 유효하거나; 또는 (2) 부류 I PI3 키나제 및 mTOR의 활성을 저하 또는 억제시키는데 유효한 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 또 다른 비-제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 특정 세포, 조직, 비-세포성 생물학적 물질, 또는 매질에 투여되는 경우에, 부류 I PI3 키나제 및 mTOR의 활성을 적어도 부분적으로 저하 또는 억제시키는데 유효한 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로, 이러한 동물은 포유동물이다. 대상체는 또한, 예를 들어 영장류 (예를 들어, 남성 또는 여성 인간), 암소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 또한 기타 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에 사용된 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 소정의 병태, 증상, 장애 또는 질환의 저하 또는 저해, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성에 있어서의 유의적 감소를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은, 어느 질환 또는 장애를 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 한 실시양태에서, 이러한 질환 또는 장애를 향상시키는 것 (즉, 상기 질환 또는 그의 임상 증상 중 적어도 한 가지의 발생을 느리게 하거나, 저지시키거나 또는 저하시키는 것)을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 식별될 수 없는 것을 포함한 적어도 하나의 신체적 파라미터를 경감시키거나 향상시키는 것을 지칭한다. 또한 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 상기 질환 또는 장애를 신체적으로 조절하거나 (예를 들어 식별할 수 있는 증상의 안정화), 생리학적으로 조절하거나 (예를 들어, 신체적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다로 조절하는 것을 지칭한다. 또한 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 상기 질환 또는 장애의 발병 또는 발생 또는 진행을 방지 또는 지연시키는 것을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은, 대상체가 특정 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어서 이득을 얻게 될 경우에, 이러한 대상체는 상기 치료를 "필요로" 한다.

본원에 사용된 바와 같은, 본 발명의 맥락 (특히, 청구범위의 맥락)에서 사용된 단수 형태는 본원에서 달리 표시되지 않는 한 또는 맥락에 의해 명백하게 모순되지 않는 한 단수와 복수 둘 다를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.

본원에 기재된 모든 방법은 본원에서 달리 표시하지 않는 한 또는 맥락에 의해 달리 명백하게 모순되지 않는 한은 적합한 어떠한 순서로도 수행될 수 있다. 본원에 제공된 모든 예, 또는 예시 언어 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 보다 잘 밝히기 위한 것이고, 청구된 본 발명의 범위에 대해 제한을 두지 않는다.

본 발명의 화합물(들)의 모든 비대칭 원자 (예를 들어, 탄소 등)는 라세미 또는 거울상이성질체적으로 풍부한, 예를 들어 (R)-, (S)- 또는 (R,S)-배위로 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 각 비대칭 원자는 (R)- 또는 (S)-배위의 적어도 50% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 60% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 70% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 80% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 90% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 95% 거울상이성질체 과잉률, 또는 적어도 99% 거울상이성질체 과잉률을 갖는다. 불포화 이중 결합을 수반한 원자에서의 치환기는 가능한 경우, 시스 -(Z)- 또는 트랜스-(E)-형태로 존재할 수 있다.

따라서, 본원에 사용된 바와 같은 본 발명의 화합물은 가능한 이성질체, 회전이성질체, 회전장애이성질체, 호변이성질체 또는 그의 혼합물 중 하나의 형태, 예를 들어 실질적으로 순수한 기하 (시스 또는 트랜스) 이성질체, 부분입체이성질체, 광학 이성질체 (대장체), 라세미체 또는 그의 혼합물로서 존재할 수 있다.

이로써 생성되는, 이성질체의 모든 혼합물은, 예를 들어 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해, 구성성분의 물리화학적 차이를 기준으로 하여 순수하거나 실질적으로 순수한 기하 또는 광학 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체로 분리시킬 수 있다.

이로써 생성되는, 최종 생성물 또는 중간체의 모든 라세미체는 공지된 방법, 예를 들어 광학 활성 산 또는 염기와 함께 수득된 그의 부분입체이성질체 염을 분리시키고, 이러한 광학 활성 산성 또는 염기성 화합물을 유리시킴으로써 광학 대장체로 분해시킬 수 있다. 특히, 이로써 염기성 모이어티를 이용하여 본 발명의 화합물을, 예를 들어 광학 활성 산, 예를 들어 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-술폰산과 함께 형성된 염의 분별 결정화에 의해 그들의 광학 대장체로 분해할 수 있다. 라세미 생성물은 또한, 키랄 크로마토그래피에 의해, 예를 들어 키랄 흡착제를 이용하는 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 분해시킬 수 있다.

더욱이, 본 발명의 화합물 (그의 염 포함)은 또한, 그의 수화물 형태로 수득될 수 있거나, 또는 그의 결정화에 사용된 기타 용매를 포함한다. 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 계획적으로, 제약상 허용되는 용매 (물 포함)와 용매화물을 형성할 수 있으므로, 본 발명은 용매화 형태와 용매화되지 않은 형태 둘 다를 포괄하고자 한다. 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물 (그의 제약상 허용되는 염 포함)과 하나 이상의 용매 분자의 분자 복합체를 지칭한다. 이러한 용매 분자는 수용자에게 무해한 것으로 공지되어 있는, 제약 분야에서 흔히 사용되고 있는 것, 예를 들어 물, 에탄올 등이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 상기 복합체를 지칭한다.

본 발명의 화합물 (그의 염, 수화물 및 용매화물 포함)은 본질적으로 또는 계획적으로 다형체를 형성할 수 있다.

본 발명의 화합물은 특히 본원에 함유된 기재 내용의 관점에서, 화학 분야에 널리 공지된 것과 유사한 공정을 포함하는 합성 경로에 의해 합성할 수 있다. 출발 물질은 일반적으로, 상업적 공급원으로부터 입수가능하거나 또는 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법을 이용하여 용이하게 제조된다 (예를 들어, 일반적으로 문헌 [Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, volumes 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.)], 또는 [Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin] (부록 포함) (이는 또한, 바일스타인(Beilstein) 온라인 데이터베이스를 통하여 입수가능함)에 기재된 방법에 의해 제조된다).

예시 목적상, 하기 제시된 반응식은 본 발명의 화합물, 뿐만 아니라 중요한 중간체를 합성하기 위한 잠재적 경로를 제공한다. 개별 반응 단계에 관한 보다 상세한 설명에 대해서는 하기 실시예 섹션을 참조할 수 있다. 통상의 기술자는 다른 합성 경로를 사용하여 본 발명의 화합물을 합성할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 구체적인 출발 물질과 시약이 반응식에 제시되고 하기에 논의되긴 하지만, 기타 출발 물질과 시약을 용이하게 대체하여 각종 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수 있다. 또한, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 많은 화합물은 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 화학을 이용하여 본 개시내용의 관점에서 추가로 변형시킬 수 있다.

본 발명의 화합물을 제조하는데 있어서, 중간체의 원격 관능기 (예를 들어, 히드록실 기)를 보호하는 것이 필요할 수 있다. 이러한 보호에 대한 필요성은 원격 관능기의 종류 및 제조 방법의 조건에 따라서 다양할 것이다. 적합한 히드록실 보호기는 트리알킬실릴 에테르를 포함하는데, 여기서는 알킬 기 중의 1 또는 2개가 페닐에 의해 대체될 수 있다. 이러한 보호에 대한 필요성은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정된다. 보호기 및 그들의 사용에 관한 일반적인 설명에 대해서는 문헌 [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조할 수 있다.

전형적으로, 화학식 I의 화합물은 하기 제공된 방법에 따라서 제조할 수 있다.

<반응식 1>

한 실시양태에서, 본 발명은 단계 a 및 b를 포함하는, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 단계 a에 이어 단계 b를 포함하는, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 A)에 관한 것이다.

화학식 I의 화합물은 하기 화학식 A의 화합물을 화학식 B의 화합물과 커플링시켜 화학식 C의 화합물을 형성시키는 단계 a)에 이어 화학식 C의 화합물을 화학식 D의 화합물과 커플링시키는 단계 b를 통하여 수득한다:

<화학식 A>

<화학식 B>

<화학식 C>

<화학식 D>

상기 식에서,

R¹, R² 및 R³은 상기 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같고;

-B(OR')₂는 시클릭 또는 비-시클릭 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 피나콜레이토보론을 나타낸다.

보호기가 존재하는 경우에는, 탈보호 단계를 가하여 화학식 I의 보호된 화합물을 화학식 I의 화합물로 전환시킨다.

단계 a)는 NaH와 같은 염기의 존재 하에 수행한다. 이 반응은 0 내지 80℃의 온도 하에 20 내지 30분 동안 DMF와 같은 유기 용매의 존재 하에 수행한다. 또 다른 한편, 상기 반응은 유기 용매, 예컨대 에테르, 바람직하게 디옥산 또는 THF 중에서, 염기, 예컨대 바람직하게 Cs₂CO₃ 또는 tert-BuONa의 존재 하에, 리간드, 예컨대 크산트포스(Xantphos), X-포스 또는 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐을 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd₂(dba)₃ 또는 Pd₂(dba)₃·CHCl₃ 또는 Pd(OAc)₂와 함께, 바람직하게 Pd₂(dba)₃을 크산트포스와 함께 사용하여 통상적인 부흐발트-하르트비히(Buchwald-Hartwig) 조건 하에 수행할 수 있다. 상기 반응은 바람직하게, 대략 80 내지 120℃의 온도 하에 교반시킨다. 상기 반응은 바람직하게, 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행한다. 부흐발트-하르트비히 반응에 대해 관련 기술분야에서 공지된 전형적인 반응 조건을 본 발명의 공정에 적용할 수 있다.

단계 b)는 임의로 하나 이상의 희석제, 특히 극성 용매, 예를 들어 DME의 존재 하에, 임의로 하나 이상의 반응 보조제, 예컨대 염기, 예를 들어 수성 염기, 예컨대 수성 Na₂CO₃의 존재 하에 촉매, 예컨대 Pd(0) 촉매, 예를 들어 PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂의 존재 하에 수행한다. 상기 반응은 대략 80 내지 120℃의 온도 하에 교반시킨다. 상기 반응은 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 스즈키(Suzuki) 반응에 대해 관련 기술분야에서 공지된 전형적인 반응 조건을 본 발명의 공정에 적용할 수 있다.

또 다른 한편, 화학식 I의 화합물은 단계 b)에 이어 단계 a)를 수행함으로써 합성할 수도 있다 (방법 B).

본 발명은 추가로, 본 발명의 공정의 어느 단계에서도 수득가능한 중간 생성물을 출발 물질로서 사용하고 나머지 단계를 수행하는 본 발명의 공정, 또는 출발 물질을 상기 반응 조건 하에 계내에서 형성시키는 본 발명의 공정, 또는 반응 성분을 그의 염 또는 광학적으로 순수한 물질의 형태로 사용하는 본 발명의 공정의 모든 변형을 포함한다.

본 발명의 화합물 및 중간체는 또한, 통상의 기술자에게 일반적으로 공지된 방법에 따라서 서로 전환시킬 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

제약 조성물은 특별한 투여 경로, 예컨대 국소 투여; 경장 투여, 예컨대 예를 들어 경구 또는 직장 투여; 및 비경구 투여, 예컨대 예를 들어 정맥내, 근육내 또는 피하 투여용으로 제제화할 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (캡슐, 정제, 환제, 과립, 분말 또는 좌제를 포함하지만, 이에 제한되지 않음) 또는 액체 형태 (용액, 현탁액 또는 에멀젼을 포함하지만, 이에 제한되지 않음)로 구성될 수 있다. 제약 조성물은 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라서 제조할 수 있다. 제약 조성물을 대상으로 하여 통상적인 제약 작업, 예컨대 멸균 작업을 수행할 수 있고/있거나 제약 조성물은 통상적인 불활성 희석제, 윤활제 또는 완충제, 뿐만 아니라 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.

국소 적용, 예를 들어 피부 및 눈에 적용하기 적합한 조성물은 수용액, 현탁액, 연고, 크림, 젤, 분말, 오일, 또는 예를 들어, 에어로졸에 의해 전달하기 위한 분무가능한 제제 등을 포함한다. 이러한 국소 전달 시스템은 특히, 피부 적용에 적절할 것인데, 예를 들어 크림, 로션, 분무제 등에 사용하기 적절할 것이다. 따라서, 이는 관련 기술분야에 널리 공지된 화장품을 포함한 국소 제제에 사용하기 특히 적합하다. 이는 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제 등을 함유할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 국소 적용은 또한, 예를 들어 호흡기계로의 흡입 또는 호흡기계로의 비내 적용에 관한 것일 수 있다. 이는 통상적으로, 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태 (단독으로, 혼합물로서, 예를 들어 락토스와의 건조 블렌드로서, 또는 예를 들어 인지질과의 혼합된 성분 입자로서), 또는 적합한 추진체를 사용하거나 사용하지 않는 가압 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 분무 제시 방식의 형태로 전달될 수 있다.

본 발명의 맥락에서, 적용은 바람직하게, 국소 적용, 예컨대 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 피부과용으로 허용되는 담체를 포함하는 적합한 조성물로 표피 적용하는 것을 지칭한다. 표피 적용에 적합한 조성물은 이러한 투여 경로에 정상적으로 활용되는 모든 제약 형태를 포함할 수 있고 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는데, 이는 그의 용액, 겔, 로션, 현탁액, 크림, 분말, 오일, 연고, 폼, 무스, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 밀크, 세럼, 에어로졸, 스프레이, 분산액, 마이크로캡슐, 비히클 및 마이크로입자를 포함한다. 이들 조성물은 통상적인 기술에 따라서 제제화한다.

본원에 사용된 용어 "피부과용으로 허용되는 담체"는 각질 조직에 대한 국소 적용에 적합하고, 우수한 미적 특성을 지니며, 본 발명의 활성제 및 기타 모든 성분과 상용성이고, 안전성 또는 독성에 대한 어떠한 우려도 유발시키지 않을 담체이다.

피부과용으로 허용되는 담체는 광범위한 형태일 수 있다. 예를 들어, 수중유, 유중수, 수중유중수 및 규소중수중유 에멀젼을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 에멀젼 담체가 본원에 유용하다. 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 소정의 성분이 조성물 중에서의 이러한 성분의 수용해도/분산능에 따라, 물 또는 오일/규소 상 내로 일차적으로 분산될 것이다.

필요에 따라, 표피 적용에 적합한 조성물은 각종 공지된 첨가제, 예컨대 부형제, 결합제, 윤활제 및 붕해제를 함유할 수 있다. 필요에 따라, 이는 또한, 활성 성분과 상용성인 한은, 통상의 기술자에게 공지되는 바와 같은 오일성 물질, 예컨대 각종 지방, 오일, 왁스, 탄화수소, 지방산, 고급 알콜, 에스테르 오일, 금속 비누, 동물성 또는 식물성 추출물, 친수성 또는 친지성 겔화제, 친수성 또는 친지성 활성제, 기타 성분, 예컨대 비타민, 아미노산, 계면활성제, 착색제, 염료, 안료, 방향제, 냄새 흡수제, 방부제, 보존제, 살박테리아제, 함습제, 증점제, 용매, 충전제, 항산화제, 격리제, 선스크린 등 및 그의 조합물을 함유할 수 있다.

적합한 오일의 예는 미네랄 오일, 식물성 오일, 예컨대 땅콩 오일, 참깨 오일, 대두 오일, 홍화 오일, 해바라기 오일, 동물성 오일, 예컨대 라놀린 또는 퍼히드로스쿠알렌, 합성 오일, 예컨대 퍼셀린 오일, 실리콘 오일, 예컨대 특히 시클로메티콘을 포함한다. 지방 알콜, 지방산, 예컨대 스테아르산 및 왁스, 예컨대 파라핀 왁스, 카르나우바 왁스 또는 밀랍이 지방으로서 사용될 수도 있다.

상기 조성물은 또한, 유화제, 용매, 친수성 겔화제, 친지성 겔화제, 지방산 금속 염, 친수성 작용제 또는 친지성 활성제를 함유할 수 있다.

유리 형태 또는 염 형태의 화학식 I의 화합물은 유용한 약리학적 특성을 나타내는데, 예를 들어 실험 섹션에 제공된 바와 같은 시험관내 및 생체내 시험에서 표시된 바와 같이, PI3 키나제 조절 특성, 예컨대 부류 I PI3 키나제 (부류 I PI3K의) 조절 특성, 또는 mTOR 조절 특성과 연계된 PI3K의 조절 특성을 나타내므로, 치료법에 권고되거나 또는 조사 화학물질로서, 예를 들어 도구 화합물로서 사용하도록 권고된다.

유리 형태 또는 염 형태의 화학식 I의 화합물은 부류 I PI3 키나제 의존적 질환, 특히 부류 I PI3K α 및 β-이소형 의존적 질환 뿐만 아니라 mTOR과 연계한 부류 I PI3 키나제 의존적 질환, 특히 부류 I PI3K α 및 β-이소형 의존적 질환의 치료에 유용하다.

부류 I PI3K α 및 β-이소형의 활성을 억제하는 화합물, 특히 부류 I PI3K α 및 β-이소형에 대해 실질적으로 효력이 동등하고 또한 임의로 mTOR의 활성을 억제하는 화합물이 이득을 주는 것으로 간주되는데, 이는 이러한 화합물이 독특한 특이성, 예를 들어 부류 I PI3K 계열의 하나의 구성원에 대한 특이성을 지닌 화합물과 비교해서, 다른 이소형을 통하여 재설계되는 경로로 인한 적응 기전을 피할 수 있는 능력을 지닌 것으로 간주되기 때문이다. "효력이 동등하다"는 것은 상기 화합물이, 예를 들어 본원에 기재된 효소 또는 세포 검정에서 측정된 바와 같이, 몇 가지 이소형을 거의 동등한 정도로 억제한다는 것을 의미한다.

적합하게, 화학식 I의 화합물은 발생된 분해 산물로 인한 부작용과 잠재적 조사를 최소화하기 위하여 경피 투여되는 경우에 화학식 I의 화합물의 활성을 보장하고 최대화하기 위해 충분한 광안정성을 나타낸다. 탁월한 광안정성을 지닌 화합물은 광분해 위험의 최소화로 인해 기술 개발과 공급을 간소화시킬 것이다. 적합하게, 화학식 I의 화합물은 피부 편평 세포 암종으로부터 유래된 인간 세포주를 이용하는 세포 검정에서 우수한 효력을 나타낸다. 바람직한 화합물은 피부 내로 잘 침투될 수 있는 능력을 입증해야 한다.

본 발명의 화합물은 비-흑색종 피부암, 예컨대 기저 세포 암종 및 편평 세포 암종; 그들의 전악성 단계, 예컨대 광선 각화증, 일광 각화증 및 만성적으로 햇볕에 손상된 피부; 및 피부 섬유모세포의 조절이상에 의해 유발된 기타 과증식성 피부 장애, 예컨대 피부 섬유증, 경피증, 비후성 반흔 또는 켈로이드로부터 선택되지만 이에 제한되지 않는 적응증의 치료에 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 비-흑색종 피부암으로부터 선택되지만 이에 제한되지 않는 적응증의 치료에 특히 유용할 수 있다.

본원에 기재된 모든 방법은 본원에서 달리 표시되지 않는 한 또는 맥락에 의해 달리 명백하게 모순되지 않는 한 적합한 어떠한 순서로든 수행될 수 있다. 본원에 제공된 모든 예, 또는 예시 언어 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 보다 잘 밝히기 위한 것이고, 청구된 본 발명의 범위에 대해 제한을 두지 않는다.

특정 경우에 있어서, 본 발명의 화합물을 한 가지 이상의 추가 제약 (또는 치료) 작용제 (예를 들어, 항증식제 또는 항암제, 또는 화학요법에 전형적으로 사용되는 부가 요법)와 조합해서 투여하는 것이 유리할 수 있다. 본 발명의 화합물은 한 가지 이상의 기타 치료제(들)와 동시에 투여하거나, 또는 이들 치료제 투여 전 또는 후에 투여할 수 있다. 또 다른 한편, 본 발명의 화합물은 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 별개로 투여하거나 또는 기타 작용제(들)와 동일한 제약 조성물에서 함께 투여할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명은 요법에서 동시에, 별개로 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합 제제로서, 화학식 I의 화합물과 한 가지 이상의 기타 치료제를 포함하는 생성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 이러한 요법은 PI3 키나제에 의존적인 질환 또는 병태를 치료하는 것이다. 조합 제제로서 제공된 생성물은 화학식 I의 화합물과 기타 치료제(들)를 동일한 제약 조성물 중에 함께 포함하거나, 또는 화학식 I의 화합물과 기타 치료제(들)를 별개의 형태, 예를 들어 키트의 형태로 포함하는 조성물을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물과 또 다른 치료제(들)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로, 제약 조성물은 상기 언급된 바와 같은 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명은 둘 이상의 별개의 제약 조성물 (이중 적어도 하나는 화학식 I의 화합물을 함유함)을 포함하는 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 상기 조성물을 별개로 보유하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 이러한 키트의 한 예는 정제, 캡슐 등을 패키징하는데 전형적으로 사용된 바와 같은 블리스터 팩이다.

본 발명의 키트는 별개의 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하기 위하여, 또는 별개의 조성물을 서로에 대항하여 적정시키기 위하여, 상이한 투여 형태를, 예를 들어 경구 및 비경구 투여하는데 사용될 수 있다. 치료 순응도에 도움이 되기 위해, 본 발명의 키트는 전형적으로, 투여에 대한 지시서를 포함한다.

따라서, 본 발명은 PI3 키나제에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 제공하는데, 여기서 상기 의약은 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위한 것으로 제조된다. 본 발명은 또한, PI3 키나제에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공하는데, 여기서 상기 의약은 화학식 I의 화합물과 함께 투여된다.

본 발명은 또한, 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물을 제공하는데, 여기서 화학식 I의 화합물은 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위한 것으로 제조된다. 본 발명은 또한, 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 또 다른 치료제를 제공하는데, 여기서 기타 치료제는 화학식 I의 화합물과 함께 투여하기 위한 것으로 제조된다. 본 발명은 또한, 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물을 제공하는데, 여기서 화학식 I의 화합물은 또 다른 치료제와 함께 투여된다. 본 발명은 또한, 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 또 다른 치료제를 제공하는데, 여기서 기타 치료제는 화학식 I의 화합물과 함께 투여된다.

본 발명은 또한, 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 제공하는데, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어, 24시간 이내에) 또 다른 치료제로 치료 받은 적이 있다. 본 발명은 또한, 부류 I PI3 키나제에 의해 매개되거나 또는 부류 I PI3 키나제 및 mTOR에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공하는데, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어, 24시간 이내에) 화학식 I의 화합물로 치료 받은 적이 있다.

한 실시양태에서, 기타 치료제는 비-흑색종 피부암, 예컨대 기저 세포 암종 및 편평 세포 암종; 그들의 전악성 단계, 예컨대 광선 각화증, 일광 각화증 및 만성적으로 햇볕에 손상된 피부의 치료에 적합한 치료제로부터 선택된다. 적합하게, 이들 기타 치료제는 면역자극 화합물, 예를 들어 톨(Toll)-유사 수용체 효능제, 예컨대 이미퀴모드 [알다라(Aldara)®], 또는 항염증제, 예컨대 디클로페낙 [솔라라제(Solaraze)®]으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50 내지 약 70 kg의 대상체에 대해 약 1 내지 약 1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 1 내지 약 500 mg 또는 약 1 내지 약 250 mg 또는 약 1 내지 약 150 mg 또는 약 0.5 내지 약 100 mg, 또는 약 1 내지 약 50 mg의 활성 성분(들)의 단위 투여량으로 존재할 수 있다. 단위 투여량은 또한, 약 50 내지 약 70 kg의 대상체에 대해 약 50 내지 약 1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 50 내지 약 500 mg 또는 약 50 내지 약 250 mg 또는 약 50 내지 약 150 mg 또는 약 50 내지 약 100 mg의 활성 성분일 수 있다. 투여량은 활성 성분(들)을 전달하는데 사용된 특별한 투여 형태에 좌우될 수 있다. 일반적으로, 화합물, 그의 제약 조성물 또는 조합물의 치료 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개개인의 상태, 치료하고자 하는 장애 또는 질환 또는 그의 중증도에 좌우된다. 투여량은 또한, 치료받는 종 내에서의 활성 성분의 생체이용률에 좌우될 수 있다. 통상의 기술의 의사, 약제사, 임상의 또는 수의사는 상기 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는데 필요한 활성 성분 각각의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다.

상기 인용된 투여 특성은 유리하게 포유동물, 예를 들어 마우스, 래트, 개, 원숭이, 돼지, 미니돼지, 또는 단리된 기관, 조직 및 그의 제제를 이용하여 시험관내 및 생체내 시험에서 입증가능하다. 본 발명의 화합물은 시험관내에서 용액의 형태, 예를 들어 10 mM DMSO 원액으로부터 제조된 수용액 중에 적용될 수 있고, 장내, 비경구, 유리하게는 정맥내 또는 국소적으로, 예를 들어 현탁액으로서, 수용액 또는 기타 용액 중에, 예컨대 예를 들어 프로필렌 글리콜 기재 용액 중에서 생체내 적용될 수 있다. 시험관내에서의 투여량은 약 10^-3 몰 내지 약 10^-9 몰 농도의 범위일 수 있다. 생체내에서의 치료 유효량은 투여 경로에 따라서, 약 0.1 내지 약 500 mg/kg, 또는 약 1 내지 약 100 mg/kg의 범위일 수 있다.

실시예

하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이고 이로써 제한되는 것으로 간주되지 않는다. 온도는 ℃로 제공된다. 달리 언급되지 않은 경우, 모든 증발은 감압 하에, 전형적으로 약 15 mm Hg 내지 100 mm Hg (= 20 내지 133 mbar) 하에 수행된다. 최종 생성물, 중간체 및 출발 물질의 구조는 표준 분석 방법, 예를 들어 미량분석 및 분광학적 특징, 예를 들어 MS, IR, NMR에 의해 확인된다. 사용된 약어는 관련 기술분야에서 통상적인 것이다.

본 발명의 화합물을 합성하기 위하 활용된 모든 출발 물질, 구성 단위, 시약, 산, 염기, 탈수화제, 용매 및 촉매는 상업적으로 입수가능하거나 또는 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 생성될 수 있다 (Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21). 추가로, 본 발명의 화합물은 하기 실시예에 제시된 바와 같은 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 생성될 수 있다.

달리 명시되지 않는 한, 출발 물질은 일반적으로, 상업적 공급원, 예컨대 알드리치 케미칼스 캄파니(Aldrich Chemicals Co.; 미국 위스콘신주 밀워키), 랭커스터 신테시스, 인크.(Lancaster Synthesis, Inc.; 미국 뉴햄프셔주 윈덤), 아크로스 오가닉스(Acros Organics; 미국 뉴저지주 페어론), 메이브리지 케미칼 캄파니, 리미티드(Maybridge Chemical Company, Ltd.; 영국 콘월주), 타이거 사이언티픽(Tyger Scientific; 미국 뉴저지주 프린스턴), 켐-임펙스 인터내셔날, 인크.(Chem-Impex International, Inc.; 미국 일리노이주 우드 데일), 및 아스트라제네카 파마슈티칼스(AstraZeneca Pharmaceuticals; 영국 런던)로부터 입수가능하다.

약어

하기 실시예에 사용된 약어는 다음에 열거된 상응하는 의미를 갖는다.

AcOH 아세트산

aq 수성

ax 축방향

Boc tert-부톡시카르보닐

염수 (RT에서) 포화된 염화나트륨 용액

brs 넓은 단일선

CDCl₃ 중수소화 클로로포름

CHCl₃-d 중수소화 클로로포름

CH₂Cl₂ 디클로로메탄

CH₃CN 아세토니트릴

conc. 진한

CsF 플루오린화세슘

CuSO₄ 황산구리

d 이중선

DIPEA 디-이소프로필에틸 아민

DME 디메톡시에탄

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸술폭시드

DMSO-d₆ 중수소화 디메틸술폭시드

dppf 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센

eq 적도

ESI-MS 전기분무 질량 분광측정법

Et₂O 디에틸 에테르

EtOH 에탄올

EtOAc 에틸 아세테이트

h 시간

Hyflo 하이플로 슈퍼 셀(Hyflo Super Cel)®

¹HNMR 양성자 핵 자기 공명

KOAc 아세트산칼륨

KHSO₄ 황산수소칼륨

K₂CO₃ 탄산칼륨

LC-MS 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법

LDA 리튬디이소프로필아민

MeOH 메탄올

MgSO₄ 황산마그네슘

M 몰

m 다중선

MS 질량 분광측정법

min 분

mL 밀리리터

m.p. 융점

MgSO₄ 황산마그네슘

MHz 메가헤르츠

N 노르말

NaHMDS 소듐 헥사메틸디실라잔

NMR 핵 자기 공명

NEt₃ 트리에틸아민

Na₂S₂O₃ 티오황산나트륨

Na₂SO₄ 황산나트륨

Pd₂(dba)₃ 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)

PdCl₂(dppf) 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드

PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 착물

PPh₃ 트리페닐 포스핀

Pd(PPh₃)₄ 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐

Pd 팔라듐

qt 오중선

Raney-Ni 라니-니켈

RT 실온

R_f TLC 체류 인자

Rt 체류 시간

s 단일선

SiO₂ 실리카 겔

t 삼중선

TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드

TBDPSCl tert-부틸디페닐실릴 클로라이드

TBME tert-부틸메틸에테르

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

t_R 체류 시간

UV 자외선

UPLC 초성능 액체 크로마토그래피.

일반적 방법

1H-NMR 측정은 내부 표준으로서 트리메틸실란을 사용하거나 사용하지 않으면서 브루커 울트라쉴드(Bruker Ultrashield)™ 400 (400 MHz), 브루커 울트라쉴드™ 600 (600 MHz) 또는 500 MHz DRX 브루커 크리오프로브(Bruker CryoProbe) (500 MHz) 분광계 상에서 수행하였다. 화학적 이동 (d-값)은 테트라메틸실란으로부터 다운필드로 ppm으로 보고되고, 커플링 상수 (J)는 Hz로 제공되며, 스펙트럼 분리 패턴은 단일선 (s), 이중선 (d), 이중선 이중선 (dd), 삼중선 (t), 사중선 (q), 다중선 또는 보다 중첩된 신호 (m), 넓은 신호 (br)로서 지정된다. 용매는 괄호 안에 제공된다.

TLC는 명명된 각각의 용매 시스템을 이용하여 미리 코팅된 실리카 겔 60 F₂₅₄ 유리 판 [머크(Merck; 독일 다름슈타트)]으로 수행하였다. 가시화는 일반적으로 UV 광 (254 nm)에 의해 이루어졌다.

LC-MS:

LC-MS-방법 1

칼럼: 액퀴티(Acquity) HSS T3, 1.8 ㎛, 2.1 x 50 mm;

용리액: 물 (+ 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄):아세토니트릴 (+ 0.04% 포름산), 1.4 min 내에 95:5 내지 2:98, 0.75 min 동안 98%를 유지함;

유량/온도: 60℃에서 1.0 mL/min.

LC-MS-방법 2

칼럼: 액퀴티 HSS T3, 1.8 ㎛, 2.1 x 50 mm;

용리액: 물 (+ 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄):아세토니트릴 (+ 0.04% 포름산), 1.4 min 내에 98:2 내지 2:98, 0.75 min 동안 98%를 유지함;

유량/온도: 50℃에서 1.2 mL/min.

UPLC 1

칼럼: 액퀴티 UPLC HSS T3 C18, 1.7 ㎛ 2.1 x 50 mm, 유량: 1.0 mL/min. 구배: 1.5 min 내에 5% 내지 100% B, 1 min 동안 100% B, A = 물 + 0.1% TFA, B = 아세토니트릴 + 0.1% TFA

검출: 218 nm 또는 254 nm.

보론산 에스테르 중간체의 합성

본 발명의 화합물을 제조하는데 사용된 보론산 에스테르 중간체는 상업적으로 입수가능하거나, 또는 관련 기술분야의 문헌에 기재된 바와 같이 또는 유사한 방식으로 제조할 수 있거나, 또는 후술되는 바와 같이 또는 유사한 방식으로 제조할 수 있다.

중간체 1: 5 -(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)-4- 트리플루오로 메틸)피리미딘-2-아민

a) 5- 브로모 -4- 트리플루오로메틸 -피리미딘-2- 일아민

CH₃CN (600 mL) 중의 2-아미노-4-트리플루오로메틸피리미딘 (25 g, 0.15 mol)의 용액에 아세토니트릴 (200 mL) 중의 N-브로모숙신이미드 (34.8 g, 195 mmol)의 용액을 암실 하에 2.5 h의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 RT에서 4.5 h 동안 교반시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc 및 H₂O에 용해시키고, 유기 용매를 분리시키고, H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음, 농축시켰다. 잔류물을 10% 내지 40%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 베이지색 고체 (31.2 g, 85%)로서 얻었다. LC-MS: Rt 0.82 min; (LCMS 방법 2).

b) 5-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)-4-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2-아민

아르곤 하에 디옥산 (300 mL) 중의 5-브로모-4-트리플루오로메틸-피리미딘-2-일아민 (16.2 g, 66.3 mmol), 비스-피나콜레이토디보론 (18.5 g, 72.9 mmol) 및 KOAc (19.5 g, 199 mmol)의 현탁액에 PdCl₂(dppf)·CH₂Cl₂ 부가물 (2.44 g, 2.98 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 115℃에서 4 h 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 50℃로 냉각시키고, EtOAc로 처리하였다. 이로써 생성되는 현탁액을 Hyflo 상으로 여과시키고, EtOAc로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 2 M NaOH에 현탁시키고, RT에서 5 min 동안 교반시킨 다음, Et₂O 및 H₂O를 첨가하였다. 이원 혼합물을 Hyflo를 통하여 다시 여과시키고, 상을 분리하였다. 이로써 생성되는 수성 층의 pH를 4 M 수성 HCl로 5 내지 6이 되게 조정하였고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 Et₂O/헥산에서 연화처리하고, 여과 제거한 다음 건조시켜 표제 화합물을 연황색 고체 (8.33 g, 42%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 290.2; Rt 1.00 min; (LCMS 방법 2).

옥사졸리딘온 중간체의 합성

중간체 2: (4S*,5S*)-4-에틸-5-(4- 메톡시페닐 ) 옥사졸리딘 -2-온

a) (1S*,2S*)-1-(4- 메톡시페닐 )-2- 니트로부탄 -1-올

0℃에서 30 min 동안 교반시킨, 건조 THF (100 mL) 중의 LiAlH₄ (THF 중 2 M) (1.84 mL, 3.67 mmol)의 용액에 1-니트로프로판 (16.3 mL, 184 mmol)을 아르곤 하에 첨가하였다. 30 min 후, 4-메톡시벤즈알데히드 (4.45 mL, 36.7 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 6시간 동안 교반시킨 다음, 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 HCl (H₂O 중 1 M)로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 CH₂Cl₂를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물 (1.4 g, 34%)을 얻었다.

b) (1S*,2S*)-2-아미노-1-(4- 메톡시페닐 )부탄-1-올

에탄올 (20 mL) 중의 (1S*,2S*)-1-(4-메톡시페닐)-2-니트로부탄-1-올 (1.0 g, 4.44 mmol)의 용액을 아르곤으로 퍼징하고, Pd/C (100 mg, 0.094 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 이어서, 밀봉된 용기를 퍼징하고, H₂로 재충전시키고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 상으로 여과하고, 에탄올로 세척한 다음 농축시켰다. 잔류물을 100:0:0 내지 80:20:1의 CH₂Cl₂/MeOH/(H₂O 중 NH₄OH)를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (450 mg, 51.4%)로서 얻었다. LC-MS: [M+H] 196.1; Rt 0.44 min; (LCMS 방법 2).

c) (4S*,5S*)-4-에틸-5-(4- 메톡시페닐 ) 옥사졸리딘 -2-온

CH₂Cl₂ (15 mL) 중의 (1S*,2S*)-2-아미노-1-(4-메톡시페닐)부탄-1-올 (440 mg, 2.25 mmol)의 용액에 NEt₃ (0.78 mL, 5.63 mmol)을 0℃에서 아르곤 하에 첨가하였다. 이어서, 디포스겐을 5분의 기간에 걸쳐 첨가하고, 온도를 30분 동안 0℃로 유지시켰다. 반응 혼합물을 빙수 및 Na₂CO₃의 2 M 수용액으로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 TBME로 연화처리하고, 여과시킨 다음 건조시켜 중간체 2 [(4S*,5S*)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온]를 백색 분말 (220 mg, 44%)로서 얻었다. LC-MS: [M+H] 222.2; Rt 0.77 min; (LCMS 방법 2).

중간체 3: (4S*,5S*)-4-에틸-5-(3- 메톡시페닐 ) 옥사졸리딘 -2-온

표제 화합물은 중간체 2 [(4R*,5R*)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온]에 대해 기재된 절차에 따라 제조하여 중간체 3을 무색 오일로서 얻었다. LC-MS: [M+H] 222.1; Rt 0.79 min; (LCMS 방법 2).

중간체 4: (4S*,5R*)-4-에틸-5- 페닐옥사졸리딘 -2-온

표제 화합물은 중간체 2 [(4R*,5R*)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온]에 대해 기재된 절차에 따라 제조하여 중간체 4를 백색 고체로서 얻었다. LC-MS: [M+H] 192.1; Rt 0.77 min; (LCMS 방법 2).

중간체 5: (4S, 5S)-4- 메틸 -5- 페닐옥사졸리딘 -2-온

CH₂Cl₂ (60 mL) 중의 (1S,2S)-(+)-노르슈도에페드린 (2.00 g, 13.2 mmol)의 용액에 Et₃N (4.61 mL, 33.1 mmol)을 0℃에서 아르곤 하에 첨가하였다. 이어서, 20 mL의 CH₂Cl₂에 용해시킨 트리포스겐 (1.57 g, 5.29 mmol)을 서서히 첨가하고, 온도를 0℃에서 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 이어서, 수성 NH₄Cl을 첨가함으로써 반응 혼합물을 켄칭하였다. 유기 층을 분리시키고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 목적 생성물 (2.10 g, 89%)을 얻었다. LC-MS: [M+H] 178.1; Rt 0.67 min; (LCMS 방법 2).

중간체 6: ( 4S,5R )-4-에틸-5-(티아졸-2-일) 옥사졸리딘 -2-온

a) (S)-2-((( 벤질옥시 )카르보닐)아미노)부탄산

THF (200 mL) 및 2 M 수성 탄산나트륨 용액 (65.2 ml, 130 mmol) 중의 (S)-2-아미노부탄산 (11.2 g, 109 mmol)의 용액에 벤질 카르보노클로리데이트 (17.06 mL, 119 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 H₂O/TBME로 추출하고, 수성 층을 pH = 2로 될 때까지 HCl (H₂O 중 2 M)로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (22.8 g, 77%)을 무색 오일로서 수득하였다. 이 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LC-MS: [M-H] 236.2; Rt 0.76 min; (LCMS 방법 1).

b) (S)- 메틸 2-((( 벤질옥시 )카르보닐)아미노) 부타노에이트

메탄올 (100 mL) 및 톨루엔 (300 mL) 중의 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄산 (10.0 g, 42.1 mmol)의 용액에 트리메틸실릴디아조메탄 (23.2 mL, 46.4 mmol)을 아르곤 하에 실온에서 적가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 EtOAc 및 염수의 용액으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 30%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (120 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물 (5.2 g, 48%)을 무색 오일로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 252.1; Rt 0.93 min; (LCMS 방법 1).

c) (S)- 벤질 (1- 옥소부탄 -2-일) 카르바메이트

톨루엔 (50 mL) 중의 (S)-메틸 2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부타노에이트 (2.0 g, 7.96 mmol)의 용액에 DIBAL-H (톨루엔 중 1 M) (15.9 mL, 15.9 mmol)를 20분의 기간에 걸쳐 아르곤 하에 -78℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 -78℃에서 수성 1.5 M 포타슘 소듐 타르트레이트 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 염수의 용액으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 30%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (24 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물 (1.18 g, 64%)을 무색 오일로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 222.2; Rt 1.01 min; (LCMS 방법 1).

d) 벤질 (( 1R,2S )-1-히드록시-1-(티아졸-2-일)부탄-2-일) 카르바메이트

디클로로메탄 (30 mL) 중의 (S)-벤질 (1-옥소부탄-2-일)카르바메이트(1.1 g, 4.97 mmol)의 용액에 2-(트리메틸실릴)티아졸 (939 ㎕, 5.97 mmol)을 10 min의 기간에 걸쳐 아르곤 하에 -30℃에서 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 -30℃에서 20분 동안 교반시키고, 실온으로 가온시키고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 30℃에서 농축시키고, THF (30 mL)에 용해시켰다. TBAF (THF 중 1 M) (5.97 mL, 5.97 mmol)를 0℃에서 아르곤 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 수성 탄산나트륨, 물 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 30%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (24 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물 (1.18 g, 64%)을 무색 오일로서 수득하였다. 잔류물을 0% 내지 4%의 CH₂Cl₂ 헥산 중의 MeOH를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (24 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물 (340 mg, 43%)을 무색 오일로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 307.5; Rt 0.86 min; (LCMS 방법 1).

e) ( 1R,2S )-2-아미노-1-(티아졸-2-일)부탄-1-올

0℃에서 아르곤 하에 아세토니트릴 (25 mL) 중의 벤질 ((1R,2S)-1-히드록시-1-(티아졸-2-일)부탄-2-일)카르바메이트 (330 mg, 1.077 mmol)의 용액에 피페리딘 (0.213 mL, 2.154 mmol)을 첨가하고, 아이오도트리메틸실란 (293 ㎕, 2.15 mmol)을 5분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이 반응 혼합물에 0℃에서 티오황산나트륨 (500 mg)을 가한 다음, 물 (0.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 격렬하게 교반시켰다. 500 mg의 티오황산나트륨을 더 첨가하고, 이 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 연화처리하고, 여과시키고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (250 mg, 67%)을 황색 오일로서 수득하였다.

f) ( 4S,5R )-4-에틸-5-(티아졸-2-일) 옥사졸리딘 -2-온

표제 화합물은 중간체 2에 대해 기재된 절차에 따라 (1R,2S)-2-아미노-1-(티아졸-2-일)부탄-1-올로부터 제조하여 중간체 6 (410 mg, 95%)을 갈색 오일로서 얻었다. 이 생성물을 추가의 정제 없이 다음 반응 단계에 사용하였다.

중간체 7: 4 -에틸-5-피리딘-3-일- 옥사졸리딘 -2-온

a) 2-니트로-1-피리딘-3-일-부탄-1-올

0℃에서 건조 THF (80 mL) 중의 LiAlH₄ (THF 중 2 M) (0.93 mL, 1.87 mmol)의 용액에 1-니트로프로판 (8.30 mL, 93 mmol)을 아르곤 하에 서서히 첨가하였다. 60 min 후, 니코틴알데히드 (2.00 g, 18.7 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 이 혼합물을 16시간 동안 교반시키면서, 온도를 0℃에서 실온으로 상승시켰다. 1 mL의 2 M 수성 HCl을 가한 다음, 4 그램의 Na₂SO₄를 가함으로써 반응 혼합물을 켄칭하였다. 이로써 생성되는 현탁액을 15분 동안 교반시킨 다음 여과시켰다. 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (40 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 A와 B의 혼합물로서의 백색 고체 (2.6 g, 71%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 197.1; Rt 0.52 min; (LCMS 방법 1).

b) 2-아미노-1-피리딘-3-일-부탄-1-올

에탄올 (20 mL) 중의 2-니트로-1-피리딘-3-일-부탄-1-올 (1.0 g, 4.44 mmol)의 용액을 아르곤으로 퍼징하고, 100 mg의 라니-니켈을 실온에서 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 3회 탈기시키고, 수소로 재충전시켰다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 이어서, 라니-니켈을 Hyflo 상으로 여과시키고, Hyflo를 EtOH로 세척하였다. 이어서, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 CH₂Cl₂ 중의 MeOH를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (40 g의 SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (180 mg, 21%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 167.1; Rt 0.21 min; (LCMS 방법 1).

c) 4-에틸-5-피리딘-3-일- 옥사졸리딘 -2-온

CH₂Cl₂ (5 mL) 중의 2-아미노-1-피리딘-3-일-부탄-1-올 (150 mg, 0.90 mmol)의 용액에 NEt₃ (314 ㎕, 5.63 mmol)을 0℃에서 아르곤 하에 첨가하였다. 이어서, 디포스겐을 5분의 기간에 걸쳐 첨가하고, 온도를 2시간 이내에 0℃에서 실온으로 가온시켰다. 이 반응 혼합물을 빙수 및 Na₂CO₃의 2 M 용액으로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 58%)을 부분입체이성질체 A와 B의 혼합물로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 193.1; Rt 0.43 min; (LCMS 방법 1).

중간체 8: 4 - 메틸 -5-피리딘-3-일- 옥사졸리딘 -2-온

a) 2-니트로-1-피리딘-3-일-프로판-1-올

0℃에서 건조 THF (110 mL) 중의 LiAlH₄ (THF 중 2 M) (1.4 mL, 2.8 mmol)의 용액에 1-니트로에탄 (2.00 mL, 28 mmol)을 아르곤 하에 서서히 첨가하였다. 0℃에서 20 min 후, 니코틴알데히드 (2.64 mL, 28 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 이 혼합물을 16시간 동안 교반시키면서, 온도를 0℃에서 실온으로 상승시켰다. 5 mL의 1 M HCl을 가한 다음, CH₂Cl₂ 및 Na₂SO₄를 가함으로써 반응 혼합물을 켄칭하였다. 이로써 생성되는 현탁액을 15분 동안 교반시킨 다음 여과시켰다. 여과물을 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (40 g SiO₂)함으로써 정제하여 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서의 오일 (3.2 g, 63%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 183.4; Rt 0.41 min; (LCMS 방법 1).

b) 4- 메틸 -5-피리딘-3-일- 옥사졸리딘 -2-온

에탄올 (90 mL) 중의 2-니트로-1-피리딘-3-일-부탄-1-올 (3.20 g, 17.6 mmol)의 용액을 아르곤으로 퍼징하고, 200 mg의 라니-니켈을 실온에서 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 3회 탈기시키고, 수소로 재충전시켰다. 반응물을 실온에서 H2 하에 16시간 동안 교반시켰다. 이어서, 라니-니켈을 Hyflo 상으로 여과시키고, Hyflo를 EtOH로 세척하였다. 이어서, 여과물을 농축시켜 2-아미노-1-피리딘-3-일-프로판-1-올을 생성물 (2.35 g, 88%)로서 수득하였는데, 이는 추가의 정제 없이 다음 반응 단계에 사용하였다. CH₂Cl₂ (20 mL) 중의 2-아미노-1-피리딘-3-일-프로판-1-올 (700 mg, 4.60 mmol)의 용액에 Et₃N (1.60 mL, 11.5 mmol)을 0℃에서 아르곤 하에 가한 다음, 트리포스겐 (819 mg, 2.76 mmol; 5 mL의 CH₂Cl₂에 용해시킴)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 이내에 0℃에서 실온으로 가온시켰다. 이어서, 이 반응 혼합물을 빙수 및 Na₂CO₃의 2 M 용액으로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 생성물 (160 mg, 20%)을 수득하였다. LC-MS: [M+H] 179.1; Rt 0.31 min; (LCMS 방법 1).

중간체 9: ( 4S,5S )-4-(( tert - 부틸디페닐실릴옥시 ) 메틸 )-5- 페닐옥사졸리딘 -2-온

a) ( 4S,5S )-4- 히드록시메틸 -5-페닐- 옥사졸리딘 -2-온

(1S,2S)-2-아미노-1-페닐프로판-1,3-디올 (20.0 g, 120 mmol), 디에틸 카르보네이트 (29.7 mL, 245 mmol), 및 K₂CO₃ (1.65 g, 12.0 mmol)를 기계적 교반기와 비그럭스(vigreux)-칼럼을 수반한 플라스크 내로 채운다. 이 현탁액을 135℃ 하의 오일 조에서 가열하여 황색 용액을 수득하였다. 누적된 EtOH를 상기 비그럭스 칼럼 상으로 증류 제거하였다. 더 이상의 EtOH가 증류 제거될 수 없을 때까지 상기 반응물을 3 h의 기간에 걸쳐 교반시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃로 냉각시키고, EtOAc 및 수성 NaHCO₃로 희석시켰다. 유기 층을 분리시키고, 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 33% 내지 100%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (550 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물을 베이지색 오일 (7.50 g, 33%)로서 수득하였다.

b) ( 4S,5S )-4-(( tert - 부틸디페닐실릴옥시 ) 메틸 )-5- 페닐옥사졸리딘 -2-온

DMF (20 mL) 중의 (4S,5S)-4-히드록시메틸-5-페닐-옥사졸리딘-2-온 (3.50 g, 17.2 mmol), NEt₃ (4.80 mL, 34.4 mmol), 및 DMAP (105 mg, 861 μmol)의 용액에 TBDPSCl (4.86 mL, 18.9 mmol)을 실온에서 적가하였다. 이 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시키고, TBME로 희석시키고, 유기 층을 분리시키고, 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 60%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (120 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (4.28 g, 57%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 432.2; Rt 1.36 min; (LCMS 방법 2).

중간체 10: ( 4S,5S )-4-((( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-5-(4- 메톡시페닐 )옥사졸리딘-2-온

DMF (10 mL) 중의 (4S,5S)-4-(히드록시메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온 [545435-91-4] (0.68 g, 3.05 mmol) 및 이미다졸 (0.249 g, 3.66 mmol)의 용액에 TBDPSCl (0.97 mL, 3.66 mmol)을 0 내지 5℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 RT로 가온시키고, RT에서 밤새 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류 오일을 TBME에 용해시키고, 10% 수성 KHSO₄, H₂O, 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 5% 내지 50%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 백색 발포체 (1.62 g, 55%)로서 수득하였다. TLC (헵탄/EtOAc 1:1) Rf =0.44; LC-MS: [M+H] 462; Rt 1.36 min; (LCMS 방법 2).

중간체 11: ( 4S,5S )-4-((( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-5-(4-(2- 메톡시에톡시 )페닐)옥사졸리딘-2-온

a) (R)- 메틸 2-(( tert - 부톡시카르보닐 )아미노)-3-(4-(2- 에톡시에톡시 )페닐)프로파노에이트

아세토니트릴 (100 mL) 중의 (R)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-히드록시페닐)-프로파노에이트 (4.43 g, 15.00 mmol), K₂CO₃ (4.15 g, 30.0 mmol) 및 아이오딘화나트륨 (112 mg, 750 μmol)의 현탁액에 1-브로모-2-메톡시에탄 (5.64 mL, 60.0 mmol)을 첨가하고, 이로써 생성되는 혼합물을 환류 하에 2일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 TBME로 희석시키고, H₂O 및 염수로 세척하였다. 합한 추출물을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켜 표제 화합물을 황색 오일 (5.3 g, 95%)로서 얻었다. TLC (톨루엔/TBME 2:1) R_f =0.44; t_R = 1.084 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 354; Rt 1.02 min; (LCMS 방법 2);

b) ( 4R,5S )- 메틸 5-(4-(2- 메톡시에톡시 )페닐)-2- 옥소옥사졸리딘 -4- 카르복실레이트

아세토니트릴 (260 mL) 중의 (R)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-히드록시페닐)-프로파노에이트 (5.34 g, 14.35 mmol)의 용액에, H₂O (190 mL) 중의 과황산칼륨 (7.76 g, 28.7 mmol)의 용액 및 H₂O (70 mL)에 용해된 CuSO₄ (0.458 g, 2.87 mmol)의 용액을 아르곤 하에 첨가하였다. 이로써 생성된 혼합물을 70℃에서 3 h 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 20% 내지 100%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (2.33 g, 52%)로서 수득하였다. TLC (헵탄/EtOAc 1:2) R_f = 0.19; t_R = 0.680 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 296; Rt 0.68 min; (LCMS 방법 2);

c) ( 4S,5S )-4-( 히드록시메틸 )-5-(4-(2- 메톡시에톡시 )페닐) 옥사졸리딘 -2-온

EtOH (45 mL) 중의 (4R,5S)-메틸 5-(4-(2-메톡시에톡시)페닐)-2-옥소옥사졸리딘-4-카르복실레이트 (2.30 g, 7.79 mmol)의 현탁액에 수소화붕소나트륨 (648 mg, 17.1 mmol)을 0 내지 5℃에서 여러 번 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 0.5 h 동안 교반시킨 다음, 0 내지 5℃에서 4 M 수성 HCl (10 mL)로 산성화시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켜 표제 화합물을 베이지색 발포체 (1.80 g, 81%)로서 수득하였다. t_R = 0.498 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 268; Rt 0.55 min; (LCMS 방법 2);

d) ( 4S,5S )-4-((( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-5-(4-(2- 메톡시에톡시 )페닐)-옥사졸리딘-2-온

표제 화합물은 (4S,5S)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(2-메톡시에톡시)페닐)옥사졸리딘-2-온 및 TBDMS-Cl로부터 중간체 10 [(4S,5S)-4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온]에 대해 기재된 절차와 유사하게 제조하였는데, 이를 칼럼 크로마토그래피 (5% 내지 50%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용함)함으로써 정제한 후, 중간체 11을 연황색 오일로서 수득하였다. TLC (헵탄/EtOAc 1:1) R_f =0.26; t_R = 1.28 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 382.2; Rt 1.17 min; (LCMS 방법 2);

중간체 12: ( 4S,5S )-5-(4-(2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 에톡시 )페닐)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)옥사졸리딘-2-온

표제 화합물은 (R)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트 및 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란으로 출발하여 중간체 11에 대해 기재된 절차와 유사하게 제조하였다. TLC (헵탄/EtOAc 1:1) R_f =0.51; t_R = 1.764 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 482; Rt 1.57 min; (LCMS 방법 1);

중간체 13: ( 4S,5S )-4-((( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-5-(4-(3-(( tert -부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)페닐)옥사졸리딘-2-온

표제 화합물은 (R)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트 및 (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란으로 출발하여 중간체 12에 대해 기재된 절차와 유사하게 제조하였다. TLC (헵탄/EtOAc 1:1) R_f =0.49; t_R = 1.832 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 496; Rt 1.62 min (LC-MS 방법 1);

중간체 14: ( 4S,5R )-4- 메틸 -5-티아졸-2-일- 옥사졸리딘 -2-온

a) (2-히드록시-1- 메틸 -2-티아졸-2-일-에틸)-카르밤산 tert -부틸 에스테르

Boc-L-알라날 (9.99 g, 57.7 mmol)을 200 mL의 CH₂Cl₂에 용해시켰다. 70 mL의 CH₂Cl₂에 용해시킨 2-(트리메틸실릴)-티아졸 (9.90 g, 62.9 mmol)을 아르곤 하에 -20℃에서 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. -20℃에서 21시간 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 180 mL의 THF에 용해시키고, 이때 TBAF (THF 중 1 M; 63.4 mL, 63.4 mmol)을 첨가하였고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (120 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 혼합물 (14.0 g, 93%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 259.2; Rt 0.78 min; (LCMS 방법 1).

b) 2-아미노-1-티아졸-2-일-프로판-1-올

2-히드록시-1-메틸-2-티아졸-2-일-에틸)-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (13.8 g, 53.4 mmol)를 50 mL의 디옥산에 용해시켰다. 디옥산 중의 134 mL (534 mmol)의 4 M HCl을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 희석시키고, 여과시켜 표제 화합물을 부분입체이성질체 혼합물로서의 백색 염 (11.5 g, 92%)으로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 159.1; Rt 0.22 min; (LCMS 방법 1).

c) (4S, 5R)-4- 메틸 -5-티아졸-2- 일 - 옥사졸리딘 -2-온

2-아미노-1-티아졸-2-일-프로판-1-올의 부분입체이성질체의 혼합물 (4.20 g, 18.2 mmol)을 160 mL의 CH₂Cl₂에 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민 (11.1 mL, 63.6 mmol)을 0℃에서 가한 다음, 40 mL의 CH₂Cl₂에 용해시킨 트리포스겐 (2.70 g, 9.09 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시킨 다음, CH₂Cl₂로 희석시켰다. 유기 용매를 분리시키고, 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (80 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물을 단일 거울상이성질체 (2.16 g, 64%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 185.3; Rt 0.45 min; (LCMS 방법 1).

중간체 15: ( 4S,5S )-4- 메틸 -5-티아졸-2-일- 옥사졸리딘 -2-온

CH₂Cl₂ (40 mL) 중의 (1S,2S)-2-아미노-1-티아졸-2-일-프로판-1-올과 (1R,2S)-2-아미노-1-티아졸-2-일-프로판-1-올의 혼합물 (2.9 g, 12.5 mmol)에 NEt₃ (10.5 mL, 75 mmol)을 0℃에서 아르곤 하에 첨가하였다. 이어서, 40 mL의 CH₂Cl₂에 용해시킨 트리포스겐 (1.86 g, 6.27 mmol)을 서서히 첨가하고, 온도를 0℃에서 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 이어서, 수성 NaHCO₃를 가함으로써 상기 반응 혼합물을 켄칭하였다. 유기 층을 분리시키고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 목적 생성물 (330 mg, 13%)을 수득하였다. LC-MS: [M+H] 185.0; Rt 0.48 min; (LCMS 방법 1).

실시예 화합물의 합성

실시예 1: ( 4S,5R )-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'- 트리플루오로메틸 -[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온

a) ( 4S,5R )-3-(6- 클로로 -2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-4- 메틸 -5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온

(4S,5R)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온 (중간체 14) (4.70 g, 20.1 mmol)을 70 mL의 DMF에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. NaH (964 mg, 오일 중 60%, 24.1 mmol)를 아르곤 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 30 mL의 DMF에 용해시킨 4-(4,6-디클로로피리미딘-2-일)모르폴린 (3.70 g, 20.1 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시킨 다음, RT에서 2시간 동안 교반시켰다. 이어서, 수성 NH₄Cl을 가한 다음, EtOAc로 희석시킴으로써 상기 반응물을 켄칭하고; 유기 용매를 분리시키고, 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (80 g SiO₂)함으로써 정제하여 표제 화합물 (3.64 g, 48%)을 수득하였다. LC-MS: [M+H] 382.2, 384.1; Rt 1.10 min; (LCMS 방법 1).

b) ( 4S,5R )-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'- 트리플루오로메틸 -[4,5'] 비피리미디닐 -6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온

20 mL의 디메톡시에탄 중의 단계 a)에서 수득된 (4S,5R)-3-(6-클로로-2-모르폴린-4-일-피리미딘-4-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온 (1.30 g, 3.40 mmol)의 용액에 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-4-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-아민 (1.08 g, 3.75 mmol), PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ (214 mg, 262 μmol), 및 2 M 수성 탄산나트륨 (5.11 mL, 10.2 mmol)을 아르곤 하에 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 80℃에서 30분 동안 교반시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고, 80 mL의 EtOAc로 희석시키고, 유기 용매를 수성 NH₄Cl 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 100%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피 (80 g SiO₂)함으로써 정제하여 실시예 1을 무정형 고체 (1.20 g, 69%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 509.0; Rt 0.99 min; (LCMS 방법 1).

실시예 2: (4S*,5S*)-3-(2'-아미노-2- 모르폴리노 -4'-( 트리플루오로메틸 )-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온

a) (4S*,5S*)-3-(6- 클로로 -2- 모르폴리노피리미딘 -4-일)-4-에틸-5-(4- 메톡시페닐 ) 옥사졸리딘 -2-온

DMF (2 mL) 중의 (4R*,5R*)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온 (중간체 2) (217 mg, 0.98 mmol)의 용액에 NaH (51.4 mg, 1.18 mmol)를 실온에서 아르곤 하에 첨가하였다. 20분 후, DMF (1 mL) 중의 4-(4,6-디클로로피리미딘-2-일)모르폴린 (230 mg, 0.98 mmol)의 현탁액을 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃에서 20분 동안 교반시켰다. 용액을 0℃에서 수성 NH₄Cl로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 조 생성물을 0% 내지 20%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (375 mg, 91%)로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 419.1; Rt 1.26 min; (LCMS 방법 1).

b) (4S*,5S*)-3-(2'-아미노-2- 모르폴리노 -4'-( 트리플루오로메틸 )-[4,5'- 비피리미딘 ]-6-일)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온

DME (2 mL) 중의 단계 a)에서 수득된 (4R*,5R*)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐) 옥사졸리딘-2-온의 용액에 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-4-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-아민 (76 mg, 0.26 mmol), 2 M 수성 Na₂CO₃ (0.36 mL, 0.72 mmol)의 용액 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (27.6 mg, 24 μmol)을 실온에서 아르곤 하에 첨가하였다. 이 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시키고, RT로 냉각시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 20%의 헥산 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물 (125 mg, 95%)을 황색 오일로서 수득하였다. LC-MS: [M+H] 546.2; Rt 1.17 min; (LCMS 방법 1).

실시예 3: ( 4S,5S )-3-(2'-아미노-2- 모르폴리노 -4'-( 트리플루오로메틸 )-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온

a) ( 4S,5S )-4-((( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-3-(6- 클로로 -2- 모르폴리노피리미딘 -4-일)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온

디옥산 (20 mL) 중의 (4S,5S)-4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-(4-메톡시페닐)-옥사졸리딘-2-온 (중간체 10) (1.65 g, 3.57 mmol), 4-(4,6-디클로로피리미딘-2-일)-모르폴린 (920 mg, 3.93 mmol) 및 Cs₂CO₃ (1.75 g, 5.36 mmol)의 용액에, 아르곤으로 퍼징한 후, 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (145 mg, 250 μmol) 및 Pd₂(dba)₃ (65 mg, 0.071 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 5 h 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 10% 수성 NaHCO₃ 용액에 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 50%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (2.33 g, 94%)로서 수득하였다. TLC (헵탄/EtOAc 1:1) R_f =0.52; LC-MS: [M+H] 659,661; Rt 1.58 min; (LCMS 방법 2).

b) (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온

아르곤 하에 DME (2 mL) 중의 단계 a)에서 수득된 (4S,5S)-4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-3-(6-클로로-2-모르폴리노피리미딘-4-일)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온 (150 mg, 228 μmol), 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-4-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-아민 (108 mg, 364 μmol), 20% 수성 Na₂CO₃ (0.24 mL, 2.28 mmol), 및 PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ (18.6 mg, 23 μmol)의 용액을 80℃에서 8 h 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 포화 NaHCO₃ 용액, H₂O 및 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과시킨 다음 농축시켰다. 잔류물을 0% 내지 33%의 헵탄 중의 EtOAc를 이용하여 칼럼 크로마토그래피함으로써 정제하여 표제 화합물을 연황색 발포체 (68 mg, 28%)로서 수득하였다: TLC (헵탄/EtOAc 1:1) R_f =0.32; t_R = 1.663 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 786; Rt 1.48 min; (LCMS 방법 2).

c) ( 4S,5S )-3-(2'-아미노-2- 모르폴리노 -4'-( 트리플루오로메틸 )-[4,5'- 비피리미딘 ]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온

THF (2 mL) 중의 단계 b)에서 수득된 (4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온 (68 mg, 65 μmol)의 용액에 THF 중의 1 M TBAF (0.05 ml, 0.05 mmol)을 0℃에서 적가하고, 이로써 생성되는 혼합물을 0℃에서 30 min 동안 교반시키고, RT에서 1 h 동안 교반시켰다. 이 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 100:100:5 내지 0:100:5의 헥산/CH₂Cl₂/MeOH의 비를 이용하여 칼럼 크로마토그래피한 다음, 정제용 HPLC [워터스 선 파이어(Waters Sun Fire) C18, 30 x 100 mm, 5 ㎛; 0.1% TFA-물/아세토니트릴; 구배 아세토니트릴 30-50%, 20 min]함으로써 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (18 mg, 50%)로서 수득하였다; TLC (CH₂Cl₂/MeOH 19:1) R_f =0.40; t_R = 0.998 min (UPLC 1); LC-MS: [M+H] 548; Rt 0.96 min; (LCMS 방법 2).

실시예 4 내지 14

하기 표 1의 실시예 4 내지 14는 적절한 보론산 에스테르 중간체 및 옥사졸리딘온을 사용하여, 실시예 1 내지 3에 기재된 바와 유사한 절차를 사용하여 제조할 수 있다.

<표 1>

생물학적 활성

본 발명에 따르는 화합물의 활성을 다음 시험관내 및 생체내 방법에 의해 평가할 수 있다.

화합물 희석액의 제조 (384-웰)

시험 화합물을 DMSO (10 mM)에 용해시키고, 개개의 노파르티스(Novartis) 화합물 허브에 의해 독특한 2D 매트릭스 칩을 수반하는 1.4 mL용 편평 바닥 또는 V자형 매트릭스 튜브 내로 옮겼다. 이들 칩의 번호는 독특하게 노파르티스 파르마(Novartis Pharma) 번호와 관련되어 있었다. 원액은 즉시 사용되지 않을 경우에 -20℃에서 저장하였다. 시험 과정을 위해, 바이알을 해동시키고, 스캐너에 의해 확인함으로써 후속 작업 단계를 안내하는 작업 시트를 만들었다.

화합물은 다음에 기재된 바와 같이 개개의 실험을 위해 DMSO에 수동으로 희석시키거나 [8가지 (단일 점) 농도의 10개 화합물을 작동가능하게 해주는 96웰] 또는 384-웰에서 프로파일링하기 위해 시험된 경우에는 다음에 기재된 바와 같이 제조된다. 이러한 포맷으로, 4개의 참조 화합물을 포함한 8가지 농도 (단일 점)에서 최대 40개의 개개의 시험 화합물을 검정할 수 있게 되었다. 희석 프로토콜은 "예비-희석 판", "마스터 판" 및 "검정 판"의 생성을 포함하였다.

예비-희석 판: 96 폴리프로필렌 웰 판을 예비-희석 판으로서 사용하였다. 판 위치 A1 내지 A10 위에 각각 10개의 시험 화합물을 포함하고, A11에 하나의 표준 화합물을 포함하며 A12에 하나의 DMSO 대조군을 포함하는 총 4개의 예비-희석 판을 준비하였다. 희석 단계의 패턴이 표 1'에 요약되어 있다. 프로그램은 해밀톤STAR 로봇(HamiltonSTAR robot) 상에서 이들 피펫팅 단계를 실행하도록 작성되었다.

<표 1'>

예비-희석 판에 대한 희석 패턴

DMSO는 H₂O로 포화시켜 10%의 농도가 되도록 하였다. Vol: 부피, Conc: 농도, Dil. ratio: 희석 비, Fin. c: 최종 농도.

마스터 판 : 상기 4개의 "예비-희석 판"의 표준 화합물 및 대조군을 포함한 개개의 화합물 희석액 100 ㎕을, 90% DMSO에 각각 다음 농도 1,820, 564, 182, 54.6, 18.2, 5.46, 1.82 및 0.546 μM을 포함한 384 "마스터 판"으로 옮겼다.

검정 판: 이어서, "마스터 판"의 각각의 화합물 희석액 50 nL을 384-웰 "검정 판" 내로 피펫팅함으로써 동일한 "검정 판"을 제조하였다. 이 화합물을 각각 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.03, 0.01 및 0.003 μM의 최종 농도를 가능하게 해주는 1:181 희석도에 상응하는 4.5 ㎕ 효소 + 검정 성분 4.5 ㎕와 혼합하였다. "마스터 판"의 제조는 매트릭스 플레이트메이트 플러스(Matrix PlateMate Plus) 로봇에 의해 조작되었고, 허밍버드(HummingBird) 로봇에 의한 "검정 판"의 복제였다.

발현 구축물을 생성시키는 방법

촉매적 활성 인간 PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ, 및 mTOR은 다음 문헌에 기재된 바와 같이 클로닝, 발현 및 정제하였다 ([Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chene P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W, Garcia-Echeverria C (2008), Mol Cancer Ther . 7:1851-63] 및 [Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M, Brachmann S, Dorsch M, Chene P, Schoemaker K, De Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W, Garcia-Echeverria C, Voliva CF (2011), Mol. Cancer Ther. 인가판]).

PI3K알파 , PI3K베타에 대한 생화학적 검정

발광에 의거한 ATP 검출 시약 키나제글로(KinaseGlo)는 카탈리스(Catalys; 스위스 발리셀렌)을 통하여 프로메가(Promega) (Cat. No. V6714, Lot No. 236161)로부터 입수하였다. (L-알파-포스파티딜이노시톨 (PI), 소의 간)은 애반티 폴라 리퀴드(Avanti Polar Lipid) (Cat. No. 840042C, Lot#LPI-274)로부터 입수하였고, 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 (PIP(4,5)2) (애반티, Cat. No. 840046X) 또는 L-α-포스파티딜이노시톨 (PI)은 애반티 폴라 리퀴드 (Cat. No. 840042C, Lot#LPI-274)로부터 입수하였다. L-α-포스파티딜세린 (PS)은 애반티 폴리 리퀴드 (Cat. No. 840032C)로부터 입수하였고, n-옥틸글루코시드는 애반티 폴리 리퀴드 (Cat. No. 10634425001)로부터 입수하였다. 발광은 ATP 농도를 결정하기 위한 잘 정립된 판독정보이므로, 이를 사용하여 그들의 기질에 상관없이 많은 키나제의 활성을 추적할 수 있다. 키나제 글로 발광 키나제 검정 (프로메가; 미국 위스콘신주 매디슨)은 키나제 반응 후 용액에 남아있는 ATP의 양을 정량화함으로써 키나제 활성을 측정하는 동질적 HTS 방법이다.

50 nL의 화합물 희석액을 섹션 8.2에 기재된 바와 같은 흑색 384-웰 저 부피 비 결합 스티렌 (NBS) 판 [코스타르(Costar) Cat. No. NBS#3676)] 상으로 분배하였다. 메탄올 중 10 mg/ml 용액으로서 제공된 L-α-포스파티딜이노시톨 (PI)을 유리 관 내로 옮기고, 질소 빔 하에 건조시켰다. 이어서, 이를 와동시킴으로써 3% 옥틸글루코시드에 재현탁시키고, 4℃에서 저장하였다. PI/OG와 PI3Ka 및 PI3Kb 아유형의 혼합물 5 ㎕를 첨가하였다. 최종 부피 10 ㎕에 10 mM TRIS-HCl pH 7.5, 3 mM MgCl₂, 50 mM NaCl, 0.05% CHAPS, 1 mM DTT 및 1 μM ATP를 함유하는 5 ㎕의 ATP-혼합물을 첨가함으로써 키나제 반응을 개시하였고, 이러한 반응은 실온에서 일어났다. 10 ㎕의 키나제글로를 이용하여 반응을 중지시키고, 웰당 0.1초의 통합 시간을 이용하여 시너지2(Synergy2) 판독기에서 10분 후에 판을 판독하였다. 2.5 μM의 NVP-BGT226 (표준물)을 검정 판에 첨가하여 상기 키나제 반응의 100% 억제를 발생시켰고, 용매 비히클 (수중 90% DMSO)에 의해 0% 억제를 얻었다. NVP-BGT226이 참조 화합물로서 사용되었고, 이는 두 번 되풀이하여 16개 희석 점의 형태로 모든 검정 판에 포함되었다.

8가지 농도 (통상적으로, 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM) n=2에서 각 화합물의 % 억제의 IC₅₀ 값은 S자 모양의 용량-반응 곡선을 기재된 바와 같은 억제제 농도 전반에 걸친 검정 판독정보의 플롯에 피팅함으로써 유도시켰다. 모든 피트는 프로그램 XL피트4 [ID 비지니스 솔루션(ID Business Solutions; 영국 길퍼드)]를 이용하여 수행하였다.

PI3K델타 , PI3K감마에 대한 생화학적 검정

TR-FRET 아답타(Adapta)™ 유니버셜 키나제 검정 키트는 인비트로젠 코포레이션(Invitrogen Corporation; 미국 캘리포니아주 칼스배드)로부터 입수하였다 (Cat. No. PV5099). 이러한 키트는 다음 시약을 함유하고 있다: 아답타 Eu-항-ADP 항체 (HEPES 완충 식염수 중의 유로퓸 표지된 항-ADP 항체; Cat. No. PV5097), 알렉사 플루오르(Alexa Fluor)® 647-표지된 ADP 추적자 (HEPES 완충 식염수 중의 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자; Cat. No. PV5098), 전매 TR-FRET 희석 완충제 pH 7.5 (Cat. No. PV3574).

PIK3CD 기질 포스파티딜이노시톨은 인비트로젠으로부터 입수하였다 (50 mM HEPES pH 7.5 중의 2 mM PI로 이루어진 소포; Cat. No. PV5371). PIK3CG 기질 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 (PIP(4,5)2)는 인비트로젠으로부터 입수하였다 (50 mM HEPES pH 7.5, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA 중의 1 mM PIP2:19 mM PS로 이루어진 PIP2:PS 대형 단층 소포; Cat. No. PV5100).

시간-분해 형광 공명 에너지 전달 (TR-FRET)은 하나의 염료 (공여자) 중의 여기된 전자로로부터 공명을 통하여 인접한 염료 (수용자)의 전자 (이어서, 양성자로서 방출된다)까지의 2개의 인접한 염료 간의 에너지 전이에 기초를 둔 기술이다. 이러한 에너지 전이는 수용자의 형광 방출 상의 증가, 및 공여자의 형광 방출 상의 감소로써 검출된다. 단백질 키나제에 대한 TR-FRET 검정은 플래쉬램프 여기 공급원에 의해 여기시킨 후 지연을 도입함으로써, 침전된 화합물로부터의 화합물 자가형광 또는 광 산란에 의한 간섭을 극복해 주는 공여자 종으로서 수명이 긴 란탄 계열 테르븀 또는 유로퓸 킬레이트를 이용한다. 결과는 종종, 수용자 및 공여자 형광단의 세기의 비로서 표현된다. 이러한 값의 비율적 성질은 웰들 간의 검정 부피 상의 차이를 교정해줄 뿐만 아니라 착색된 화합물로 인한 켄칭 효과를 교정해준다. 아답타™ 검정은 2가지 단계로 나누어질 수 있다: 키나제 반응 단계 및 ADP 검출 단계. 키나제 반응 단계에서는, 모든 키나제 반응 성분을 웰에 첨가하고, 각 키나제에 대해 특이적인 일련의 시간 동안 상기 반응물을 인큐베이션한다. 이러한 반응 후, Eu-표지된 항-ADP 항체, 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자, 및 EDTA (키나제 반응을 중지시키기 위함)의 검출 용액을 상기 검정 웰에 가한다. 키나제 반응에 의해 형성된 ADP가 상기 항체로부터의 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자를 대체하면, TR-FRET 신호가 감소될 것이다. 억제제의 존재 하에, 키나제 반응에 의해 형성된 ADP의 양은 감소되고, 이로써 생성되는 온전한 항체-추적자 상호 작용은 높은 TR-FRET 신호를 유지시켜 준다. 아답타™ 검정에서는, 공여자 (유로퓸-항-ADP 항체)를 340 nm 하에 여기시키고, 그의 에너지를 수용자 (알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자)로 전이시킬 것이다. 알렉사 플루오르® 647로부터의 방출은 665 nm 하에 중심을 둔 필터로 모니터링할 수 있는데, 이는 그것이 615/620 nm 하에 측정되는 공여자의 방출 피크들 사이에 위치하기 때문이다.

50 nL의 화합물 희석액을 섹션 2.2에 기재된 바와 같은 백색 384-웰 소 부피 폴리스티렌 판 상으로 분배하였다. 이어서, 5 ㎕의 PI3Kg 및 PI3Kd 및 지질 기질 (PI 또는 PIP2:PS)에 이어 5 ㎕의 ATP (최종 검정 부피 10 ㎕)를 RT에서 인큐베이션한다. 아답타™ TR-FRET 검정에 대한 표준 반응 완충제는 10 mM 트리스(Tris)-HCl pH 7.5, 3 mM MgCl₂, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.05% CHAPS를 함유하였다. TR-FRET 희석 완충제 중의 Eu-표지된 항-ADP 항체 및 알렉사 플루오르® 647-표지된 ADP 추적자를 함유하는 EDTA의 혼합물 (IVG에 소유권이 있다) 5 ㎕을 이용하여 반응을 중지시켰다. 0.4초의 통합 시간과 0.05초의 지연을 이용하여 시너지2 판독기에서 15 내지 60분 후에 판을 판독한다. 키나제 반응의 100% 억제에 대한 대조군은 PI3K를 표준 반응 완충제로 대체시킴으로써 수행하였다. 0% 억제에 대한 대조군은 화합물의 용매 비히클 (H₂O 중 90% DMSO)에 의해 제공되었다. 표준 화합물 NVP-BGT226이 참조 화합물로서 사용되었고, 이는 두 번 되풀이하여 16개 희석 점의 형태로 모든 검정 판에 포함되었다.

엑셀 피트 소프트웨어 또는 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)을 이용하여 데이터를 분석한다. EC₅₀ 값은 S자 모양의 용량-반응 곡선을 억제제 농도 전반에 걸쳐 검정 판독정보의 플롯에 피팅함으로써 유도시켰다. 모든 피트는 프로그램 XL피트4 (ID 비지니스 솔루션; 영국 길퍼드)를 이용하여 수행하였다. 8가지 농도 (통상적으로, 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM) n=2에서 각 화합물의 % 억제의 EC₅₀ 값의 결정은 S자 모양의 용량-반응 곡선을 억제제 농도 전반에 걸쳐 검정 판독정보의 플롯에 피팅함으로써 유도시켰다. 모든 피트는 프로그램 XL피트4 (ID 비지니스 솔루션; 영국 길퍼드)를 이용하여 수행하였다.

mTOR에 대한 생화학적 검정

단백질 키나제에 대한 TR-FRET 검정은 플래쉬램프 여기 공급원에 의해 여기시킨 후 지연을 도입함으로써, 침전된 화합물로부터의 화합물 자가형광 또는 광 산란에 의한 간섭을 극복해 주는 공여자 종으로서 수명이 긴 란탄 계열 테르븀 또는 유로퓸 킬레이트를 이용한다. 결과는 종종, 수용자 및 공여자 형광단의 세기의 비로서 표현된다. 이러한 값의 비율적 성질은 웰들 간의 검정 부피 상의 차이를 교정해줄 뿐만 아니라 착색된 화합물로 인한 켄칭 효과를 교정해준다.

결합 검정은 알렉사 플루오르® 647-표지된, ATP-경쟁적 키나제 억제제를 관심 억제제에 결합시키고 변위시키는 것에 기초한다. 인비트로젠의 "키나제 추적자"는 광범위한 키나제 표적에 역점을 두도록 개발되었고, 이는 ATP-경쟁적 키나제 억제제에 기초하므로, ATP 부위와 결합하거나 또는 ATP 부위의 입체 형태를 변경시키는 알로스테릭 부위와 결합하는 모든 화합물을 검출하는데 적합하다. ATP 부위와 결합하는 억제제는 이러한 ATP 부위와만 결합하는 유형 I 키나제 억제제와, ATP 부위와 DFG-아웃 (비-활성) 입체 형태에 노출된 소수성 부위 둘 다와 결합하는 유형 II 억제제 [예를 들어, 글리벡(Gleevec)®/이마티닙(Imatinib), 소라페닙(Sorafenib), BIRB-796] 둘 다를 포함한다. 유형 III 억제제는 ATP와 경쟁하지 않는 화합물이고, 막연히 알로스테릭 억제제로서 지칭된다. 15개의 다양한 유형 III 억제제에 관한 연구 결과, 1개를 제외한 모든 화합물이 활성 검정에 대해 등가의 효력을 지니면서 결합 검정에서 검출되었다는 사실이 입증되었다. 유일한 예외는 기질-경쟁적 화합물이었고, 따라서 이는 진정한 알로스테릭 억제제가 아니다.

형광에 의거한 대부분의 키나제 활성 검정과는 달리, 느린 결합 동역학을 나타내는 화합물의 평가를 촉진시켜 주는 란타스크린(LanthaScreen)® Eu³ ⁺ 키나제 결합 검정을 연속적으로 판독할 수 있다. 또한, 대부분의 활성 검정과는 달리, 결합 검정은 비-활성화 키나제와 우선적으로 결합하는 화합물의 특징을 확인시켜 줄 수 있는 활성 또는 비-활성화 키나제 제제, 예컨대 글리벡®/이마티닙 및 일부 알로스테릭 억제제를 이용하여 수행할 수 있다.

란타스크린™ 키나제 결합 검정에서는, 공여자 (Eu³ ⁺-항-GST 항체)를 340 nm 하에 여기시키고, 그의 에너지를 수용자 (알렉사 플루오르® 647-표지된 ATP-경쟁적 키나제 억제제 = 추적자-314)로 전이시킬 것이다. 추적자-314 (알렉사 플루오르® 647 억제제)로부터의 방출은 665 nm 하에 중심을 둔 필터로 모니터링할 수 있는데, 이는 그것이 615/620 nm 하에 측정되는 공여자의 방출 피크들 사이에 위치하기 때문이다. 추적자-314와 Eu³ ⁺-항-GST 항체 둘 다가 키나제와 결합하면, 이러한 추적자-314 상의 Eu³ ⁺-공여자 형광단으로부터 알렉사 플루오르® 647-수용자 형광단까지 고도의 FRET가 생성된다. 억제제가 키나제와 결합하는 것은 추적자와의 결합을 놓고 경쟁하므로, 이로 인해 FRET가 상실된다.

50 nL의 화합물 희석액을 섹션 2.2에 기재된 바와 같은 백색 384-웰 소 부피 폴리스티렌 판 상으로 분배하였다. 이어서, 5 ㎕의 GST-mTOR 및 유로퓸-항-GST 항체에 이어 5 ㎕의 추적자-314 (최종 검정 부피 10 ㎕)를 RT에서 인큐베이션한다. 란타스크린™ 키나제 결합 검정에 대한 표준 반응 완충제는 50 mM HEPES pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 0.01% 플루로닉(Pluronic) F-127을 함유하였다. 0.2마이크로초의 통합 시간과 0.1마이크로초의 지연을 이용하여 시너지2 판독기에서 60분 후에 판을 판독한다.

발광 비를 계산하기 위하여, 수용자 (알렉사 플루오르® 647-표지된 추적자-314)로부터 665 nm 하에 방출된 신호를 공여자 (Eu³ ⁺-항-GST 항체)로부터 620 nm 하에 방출된 신호로 나눈다.

0% 억제에 대한 대조군은 화합물의 용매 비히클 (H₂O 중 90% DMSO)에 의해 제공되었다. 상대적 100% 억제에 대한 대조군은 GST-mTOR 및 유로퓸 항-GST 항체를 함유하는 혼합물 중의 10 μM을 가함으로써 수행하였다. 절대적 0% 억제에 대한 추가의 대조군은 GST-mTOR를 수반하지 않는 Eu³ ⁺-항-GST 항체에 의해 제공된다.

PI3K알파 , 베타 및 델타에 대한 세포 검정

알파스크린(AlphaScreen) [증폭된 발광 근접 동질적 검정, ALPHA, 퍼킨 엘머(Perkin Elmer)]은 동질적 미세역가 판 포맷으로 생체 분자 상호작용을 연구하는 비-방사성 비드-기반 근접 검정 기술이다. 브랜드명 슈어파이어(SureFire)는 항-포스포-키나제와 항-키나제 항체로 이루어지는 매칭된 항체 쌍을 이용함으로써, 세포 용해물 중의 내인성 세포 단백질의 인산화를 정량화하기 위해 적응되는 알파스크린 검정을 의미한다. 이러한 검정으로, 세포 중의 키나제 신호전달을 명확히 규명할 수 있을 뿐만 아니라 키나제 억제제 효과를 측정할 수 있다. 알파스크린 기술은 ELISA와 같은 표준 검정 기술에 비해 몇 가지 이점을 제공하는데, 이는 시간-소모적인 세척 과정을 피하고 판 조작을 감소시키기 때문이다. 더욱이, 이는 적어도 384-웰 포맷으로 소형화할 수 있고, 개개의 알파스크린 슈어파이어 검정 키트 내에 포함된 항체의 친화도에 따라서 펨토몰 범위 아래의 민감도를 제공한다. 고 민감도는 단일선 산소 분자의 생성에 관여하는 고유 증폭 기전에 의해 도달된다. 슈어파이어 검정 키트는 특이적 표적에 대해 상업적으로 입수가능하고 검증된 항체 쌍 (퍼킨 엘머)을 포함한다. 이 보고서에는 세포에 의거한 검정에서 통상적인 키나제 억제제 프로파일링에 대한 각각의 반-자동화 단계 및 알파스크린 슈어파이어 검정에 대해 적용된 통상의 과정이 기재되어 있다.

활성화 PI3K 부류 I 이소형 Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110 델타 (Rat-1_PI3K델타) 및 Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110알파 (Rat-1_PI3K알파) 및 Rat-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110베타 (Rat-1_PI3베타)를 안정적으로 과발현하는 Rat-1 세포주를 다음 문헌에 기재된 바와 같이 제조하였다 ([Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chene P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W, Garcia-Echeverria C (2008), Mol Cancer Ther. 7:1851-63] 및 [Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M, Brachmann S, Dorsch M, Chene P, Schoemaker K, De Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W, Garcia-Echeverria C, Voliva CF (2011), Mol . Cancer Ther .] 인가판). 모든 세포주를 완전 성장 배지 [DMEM 고 글루코스, 10% (v/v) 태아 소 혈청, 1% (v/v) MEM NEAA, 10 mM HEPES, 2 mM L-글루타민, 퓨로마이신 (Rat-1_PI3K델타 및 Rat-1_PI3K알파에 대해서는 10 ㎍/mL이고, Rat-1_PI3베타에 대해서는 4 ㎍/mL이다), 1% (v/v) Pen/Strep]에서 보습 CO₂ 인큐베이터 내에서 37℃/5% CO₂/90% 습도 하에 90% 밀집도가 되도록 배양하고, 1주에 2회 분열시켰다.

Rat-1 세포 용해물에서 p-AKT(S473) 검출을 위해 다음 물질을 사용하였다: 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium) (DMEM) 고 글루코스 [깁코 인비트로젠(Gibco Invitrogen; 스위스 바젤), Cat. No. 41965)], 공인된 열 불활성화 태아 소 혈청 [HI FBS; 깁코 인비트로젠 (스위스 바젤), Lot. No. 16140], MEM 비필수 아미노산 [NEAA; 깁코 인비트로젠 (스위스 바젤), Cat.No. 11140], HEPES [깁코 인비트로젠 (스위스 바젤), Cat.No. 15630], 페니실린/스트렙토마이신 [Pen/Strep, 100x; 깁코 인비트로젠 (스위스 바젤), Cat.No. 15140-122], L-글루타민 [깁코 인비트로젠 (스위스 바젤), Cat.No. 25030], 퓨로마이신 [시그마 알드리치(Sigma Aldrich; 스위스 부흐), Cat. No. P9620], DMSO [머크 (MERCK; 스위스 디티콘), Cat. No. 8.02912.2500], H₂O, 달리 언급되지 않는 한 밀리Q(MilliQ)-H₂O [MILLIPORE QGARDOOR1, 밀리포어(Millipore; 스위스 추크주)], 소 혈청 알부민 [BSA; 시그마 알드리치 (스위스 부흐), Cat. No. A8412], 슈어파이어 p-Akt 1/2 (Ser473) 검정 키트 [퍼킨 엘머 (스위스 슈베르첸바흐), Cat. No. TGRAS50K].

p-Akt(S473) 슈어파이어 검정은 세포 용해물 중의 Ser473에서 내인성 세포성 Akt 1/2의 인산화를 측정한다. 인간 PI3K델타, PI3K알파, 또는 PI3K베타 p110 촉매적 소단위 이소형의 myr-HA-태그부착 버전을 안정적으로 발현하는 Rat-1 세포를 이용하여, 상기 검정을 384-웰 포맷의 2-판 프로토콜로서 개발하였다.

화합물 시험을 위해, 상기 세포를 20 ㎕ 완전 성장 배지 중의 4,000개 (Rat-1_PI3K델타), 7,500개 (Rat-1_PI3K알파), 또는 6,200개 (Rat-1_PI3K베타) 세포 밀도로 세포 배양 처리된 384-웰 판 내로 시딩하고, 24 h 동안 37℃/5% CO₂/90% 습도 하에 성장시켰다. 화합물을 옮기기 직전에, 상기 완전 배지를 꺼내고, 30 ㎕ 검정 완충액 (DMEM 고 글루코스, 1x MEM NEAA, 10 mM HEPES, 2 mM L-글루타민, 0.1% (w/v) BSA)을 첨가하고, 화합물 예비-희석액 10 ㎕를 상기 세포로 옮겼다. 2010년 2월 이후에 시험하기 위하여, 완전 성장 배지를 검정 완충액으로 대체하였는데, 유사한 결과가 나타났다 (데이터는 제시되지 않음). 1 h 동안 화합물로 처리한 후, 0.24% (w/v) BSA로 보충시킨 20 ㎕ 용해 완충액을 첨가함으로써 세포를 용해시켰다. 12 ㎕의 총 검출 부피로 5 ㎕의 세포 용해물을 이용하여 제조업자의 지시에 따라서 슈어파이어 p-Akt 1/2 (Ser473) 검정 키트로 p-AKT(Ser473)의 검출을 수행하였다.

8가지 농도 (통상적으로, 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM) n=2에서 각 화합물의 % 억제의 IC₅₀ 값은 S자 모양의 용량-반응 곡선을, 기재된 바와 같은 억제제 농도 전반에 걸쳐 검정 판독정보의 플롯에 피팅함으로써 유도시켰다. 모든 피트는 프로그램 XL피트4 (ID 비지니스 솔루션; 영국 길퍼드)를 이용하여 수행하였다.

mTOR에 대한 세포 검정

mTOR 활성의 강력한 억제인 TSC1 (결절성 경화증 복합체 1)이 결여된 마우스로부터 유래된 MEF (마우스 배아 섬유모세포) 세포에서 세포성 mTOR 활성에 대한 화합물 효과를 결정하기 위하여, 세포에 의거한 검정 (384-웰 포맷)을 개발하였다. TSC1의 결여로 인해, mTOR은 구성적으로 활성화되어, mTOR의 하류 표적 중의 하나인 S6 키나제 1 (S6K1)의 Thr 389가 영구적으로 인산화된다.

S6K1 상의 Thr389의 인산화를 결정할 수 있게 해주는 슈어파이어 키트를 이용하여, 세포 용해물에서 S6K1의 포스포-T389를 정량적으로 결정할 수 있게 해주는 알파-스크린 포맷의 검정을 개발, 검증 및 이행하였다. MEF TSC1-/- 세포를 mTOR 특이적 (또는 mTOR 경로 특이적) 억제제로 처리하면, S6K1 상의 포스포-T389의 수준 (이는 IC50 값의 계산을 허용해준다)이 용량-의존적으로 감소되었다. 이들 결과는 mTOR 억제제의 효력을 정량적으로 비교할 수 있게 해주는 생화학적 mTOR ATP-결합 검정을 이용하여 수득된 값과 일치하였다.

TSC1-/- MEF 세포 (문헌 [Kwiatkowski, D. J., Zhang, H., Bandura, J. L., Heiberger, K. M., Glogauer, M., el-Hashemite, N., and Onda, H. (2002) Hum. Mol. Genet. 11, 525-534])를 37℃, 5% CO₂ 하에 10% FBS (인비트로젠), 2 mM 글루타민 및 1% (w/v) 페니실린/스트렙토마이신으로 보충시킨 DMEM 고 글루코스 배지에서 배양하였다.

P70S6키나제 인산화를 결정하기 위한 슈어파이어 키트는 퍼킨 엘머로부터 구입하였고 (p70S6K p-T389, #TGR70S50K), 공급업자의 지시에 따라서 그리고 슈어파이어 검정에 대한 일반적 방법에 따라서 상기 검정을 수행하였다. 간략하게 언급하면, 웰당 5 ㎕ 세포 용해물을 384-웰 백색 프록시-판으로 옮기고 (발광 정보판독을 위함), 7 ㎕ A 및 5 ㎕ B (최종 부피: 12 ㎕)와 혼합하였다. RT에서 암실에서 3 h 인큐베이션한 후, 엔비젼(Envision) 판독기 (퍼킨 엘머)를 이용하여 발광을 판독하였다. 처리되지 않은 세포를 대조군 (고 대조군)으로서 사용하였고, 3 μM BEZ235로 처리된 세포를 저 대조군으로서 사용하였다. 고 대조군에 대해 수득된 신호와 저 대조군에 대해 수득된 신호 간의 검정 윈도우(window)를 100%로서 정의하였고 화합물 효과를 % 억제로서 표현하였다. 그래픽 외삽법에 의해 용량 반응 곡선으로부터 IC50 값을 계산하였다.

상기 언급된 검정을 이용하여 수득된 결과가 다음 표에 제공된다.

생화학적 PI3K알파

생화학적 PI3K베타

생화학적 PI3K델타

생화학적 PI3K감마

결합 검정 mTor

세포 검정 PI3K알파

세포 검정 PI3K베타

세포 검정 PI3K델타

세포 검정 mTOR

광안정성

광 안정성에 관하여 연구한 샘플은 광 안정성 챔버 [아틀라스(Atlas) CPS+, 일련 번호 0704013]에서 처리하였다. 각 분자에 대해 에탄올 중 1.0 mg/ml의 용액을 준비하고, 0.5 mL의 분취액을 적합한 마이크로 튜브 내로 분배하였다. 모든 측정을 두 번 되풀이하여 수행하였고, 이를 광 노출 동안 알루미늄 호일로 둘러싼 참조물과 비교하였다. 용액을 13 h에 걸쳐 19620 kJ/㎡에 노출시켰다. 이 실험 동안 샘플을 15℃로 유지시켰다. 광 챔버에서 처리한 후, 상기 용액을 254 nm 하에 UPLC (UPLC 1, 실험 파트)에 의해 분석하였다. 피크 면적을 자동으로 통합하였고, 분해 %는 참조 샘플의 상응하는 피크 면적 %와 노출된 샘플의 평균 피크 면적 % 간의 차이로서 계산되었다 (두 번 되풀이함).

이러한 방법을 이용하여 수득된 데이터가 다음 표에 제시되어 있다:

세포주의 증식에 대한 항증식성 억제

화합물 프로파일링에 사용된 세포 및 세포 배양물

SCL-1 및 SCC12B2는 자연 발생적이고 불충분하게 분화된 SCC로부터 유래된 인간 피부 편평 세포 암종 (SCC) 세포주이다. SCL-1 세포주는 하이델베르크에 있는 암 리서치 센터의 엔. 푸제니그(N. Fusenig) 실험실에서 최초로 확립되었고, 정상적인 각질세포와 비교한 그의 시험관내에서의 성장 특징이 앞서 보고되었다 (Neely et al. 1991). SCC12B2 세포주는 7년 동안 면역억제 요법을 받은 남성 이식 환자의 얼굴 피부로부터 앞서 보고된 바와 같이 확립되었다 (Rheinwald & Beckett 1981). 인간 SCC 세포주 디트로이트(Detroit)562는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)으로부터 입수하였다. 디트로이트562는 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)으로서 지칭되고, 인두 SCC 종양으로부터 유래되었다. 디트로이트562 세포주는 PIK3CA 유전자의 활성화 돌연변이 H1047R을 보유하고 있다. 이러한 돌연변이는 p110α-쇄를 구성적으로 활성이 되도록 만들어주고 성장 인자 수용체 활성화와 독립적으로 Akt/mTOR 경로를 자극하는, 상기 키나제 이소형의 "핫스팟(hotspot)" 돌연변이 중 하나로서 공지되어 있다. 모든 SCC 세포주는 5% FCS (깁코; #16000-044), 100 μM 피루브산나트륨 (깁코; #11360-039), 10 mM HEPES (깁코; #91002-066), 50 U/ml 페니실린과 50 ㎍/ml 스트렙토마이신의 혼합물 (깁코; #15070-063), 및 2 mM L-글루타민 (깁코; #25030-024)으로 추가로 보충시킨 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM) (깁코; 카탈로그 번호: #10938)에서 유지시키고 배양하였다. 모든 농도는 최종 농도로서 제공된다. 세포는 75 ㎠ [코닝(Corning); #430641], 또는 150 ㎠ (코닝, #430825) 성장 면적을 지닌 2개의 플라스크 크기를 이용하여, 환기 캡이 장착된 코닝 코스타르(Corning Costar) 플라스크에서 증식시켰다. 이 세포 배양물을 5% CO₂ 및 80% 상대 습도를 함유하는 대기 하에 37℃에서 통상적으로 유지시켰다 [헤라우스(Heraeus) 유형].

세포 증식의 측정

SCC의 세포 또는 각질세포주 (디트로이트562, SCC12B2, SCL1, HaCaT)가 약 80% 내지 90% 밀집도에 도달하게 되면 이들을 증식 검정에 사용하였다. 이어서, 배양 플라스크로부터 트립신-매개 강제 이전 후 세포를 채취하고, 10% FCS를 함유하는 배양 배지에서 세척하고, 혈구 계산기에서 계수하고, 완전 배양 배지를 5% FCS로 희석시켜 5x10⁴개 세포/ml의 세포 밀도를 수득하였다. 이러한 세포 현탁액 100 ㎕ (예를 들어, 5,000개 세포)를 96-웰 백색 벽이 있는 조직 배양 판 (코닝-코스타르 제품 #3917)의 각 웰로 옮겼다. 이어서, 이들을 CO₂ 인큐베이터에 45 내지 60분 동안 놓아둠으로써 세포를 침강시킬 수 있었다. 연속해서, 시험 화합물의 목적하는 최종 농도를 두 배로 함유하는 100 ㎕ 부피의 배양 배지를 4겹 웰의 각 웰에 첨가하였다. 4겹 중 하나에는 대조군 (x-축에 약어 no cpd로 데이터 도면에 표시된다)으로서 시험 제품을 수반하지 않는 100 ㎕ 배양 배지를 얻었다. 그 다음, 세포 배양물을 시험 화합물의 존재 또는 부재 하에 총 26 내지 28시간 동안 인큐베이션하였다. 화학발광성 브로모데속시-우리딘 (BrdU) 세포 증식 ELISA [로슈(Roche) 제품 #11 669 915 001]를 이용하여 BrdU를 세포성 DNA 내로 혼입시키는 것을 기준으로 하여 세포 증식을 결정하였다. 간략하게 언급하면, 상기 BrdU 시약을 완전 배양 배지로 1:100 희석시켜 100μM BrdU의 농도를 수득하였다. 이 용액으로부터, 20 ㎕을 각 웰에 첨가하고, 세포 배양물을 5% CO₂ 하 37℃에서 16 내지 18시간 동안 추가로 인큐베이션하였다. 배양 배지를 완전히 제거하고 실온에서 30분 동안 200 ㎕ 고정 용액 (ELISA 키트로 공급됨)을 첨가함으로써 44 내지 46시간 후에 증식 검정을 중지시켰다. 모든 추가의 인큐베이션, 세척 및 검정 개발 과정은 제조업자 (로슈)에 의해 공급된 ELISA 검정 매뉴얼에 바로 기재된 바와 같이 수행하였다. BrdU를 상기 DNA 내로 혼입시키는 것은 BrdU-특이적 항체에 의해 검출하였고, 항체-커플링된 루시퍼라제 매개된 신호 발생을 기준으로 하여 정량화하였다. 발광 방출을 빅터(Victor) 광 1420 발광 계수기 (퍼킨 엘머)에서 측정하였고 초당 상대적 발광 단위 (예를 들어, RLU/s로서 제공된 데이터 포인트)로서 표현하였다. 평균 및 표준 편차 값을 계산하기 위하여 각 웰의 데이터 포인트를 윈도® 엑셀 스프레드시트에 옮겼다. 이들 값은 오리진(Origin) 7.5® 소프트웨어로 입수가능한 S자 모양의 곡선 피팅 함수를 이용하여 플롯팅하였다.

SCC 세포주에서 측정된 화합물의 항-증식 효력

이들 SCC 및 각질세포 세포주를 이용하여 수득된 데이터가 다음 표에 제시되어 있다. 항-증식 효력을 표시하는 모든 값은 SCC 세포주 SCL-1, SCC12B2, 디트로이트562, 또는 HaCaT 각질세포 세포주를 이용하여 2가지 독립적인 검정에서 수득된 나노몰 IC₅₀ 농도를 나타낸다:

모든 값은 나노몰 IC₅₀ 농도이다.

피부 침투

본 발명의 하나의 대표적인 화합물의 피부 침투/투과 특성을 다음과 같이 시험하였다:

피부 침투 및 투과 특성을 결정하기 위한 시험관내 시험

상기 화합물을 에탄올 또는 올레일알콜과 혼합된 프로필렌 글리콜 중의 0.5% 용액으로서 정적 프란츠(Franz)-유형 확산 세포에 고정시킨 돼지 피부에 적용하였다. 48시간의 노출 시간이 끝날 무렵, 약물 농도를 피부 (각질층을 제거한 후) 및 수용자에게서 측정하였다. 수용자 용액은 2 부피부의 인산염 완충 식염수 (PBS)와 1 부피부의 태아 송아지 혈청 (FCS)의 혼합물이다.

시험관내에서의 피부 침투 및 투과

피부 농도는 네 번 되풀이 하여 결정한 값의 평균 ± 표준 편차로서 제공된다.

(a): 피부는 4개월생 농장 돼지 [랜드레이스종(Landrace) X 도이치 에델슈바인(Deutsches Edelschwein)]로부터 유래되었다.

(b): 3 부피부의 에탄올과 혼합된 7 부피부의 프로필렌 글리콜 (PG).

(c): 1 부피부의 올레일알콜 (OA)과 혼합된 9 부피부의 PG.

실시예 1의 화합물은 시험관내에서 돼지 피부 내로 잘 침투되는 반면, 돼지 피부를 통한 투과율은 낮은데, 이는 낮은 전신 노출을 표시한다. 돼지 피부는 장벽 기능 및 구조와 관련해서 인간 피부와 유사하다.

국소적으로 처리된 돼지의 진피 내로의 침투를 결정하기 위한 생체내 시험

어린 애완용 돼지의 등과 옆 부분 상의 작은 면적 (4 ㎠)의 피부를, 약물 수준 결정 이전에 상이한 시간 간격 (2 및 24 h)으로 0.5% 용액 또는 현탁액으로 국소 처리하였다. 이러한 실험에서는, 4마리의 돼지를 처리하였고, 4개의 상이한 부위에 각각의 제제 중의 화합물을 투여하였다. 중심에 처리된 부위를 수반한 피부 플랩을 절개하고 제거하였다. 이러한 피부 플랩을 펼치고, 가열된 금속 블록을 시험 부위 위에 1분 동안 놓아두어 표피가 진피로부터 분리되도록 하였다. 헐겁게 된 표피 시트를 제거한 후, 피부 채취기를 이용하여 상기 처리된 탈표피화 피부로부터 1 mm 두께의 진피 시트를 제조하였다. 이들 시트로부터 6 mm 펀치 샘플 (6 mm Ø)을 수집하고, LC/MS에 의해 시험 화합물 농도에 대해 분석하였다. 이와 같이 기재된 과정은 진피 샘플이 표피에 표면적으로 부착된 화합물로 오염되는 것을 조심스럽게 피하면서 수행하였다.

다음 표는 확인된 제제 중에서 경피적으로 적용되는 경우에, 돼지 진피 중의 실시예 1의 화합물의 진피 농도를 제공한다. 데이터 표는 8회 결정 값 (예를 들어, 각 시점에 대해 분석된 8개의 피부 샘플)의 평균 ± 평균의 표준 오차를 제공한다.

돼지에서 생체내 피부 PK

8회 결정 값의 평균 ± 평균의 표준 오차가 제공된다.

트윈®80: 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노올레에이트

OA: 올레일알콜

PG: 프로필렌 글리콜

EtOH: 에탄올

HPMC: 히드록시프로필메틸셀룰로스.

실시예 1의 화합물은 돼지 피부 내로 잘 침투되어, 단일 적용 후 생체내에서 진피에 도달한다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물.
<화학식 I>

상기 식에서,
R¹은 메틸, 에틸 또는 히드록시메틸이고;
R²는 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 페닐, 또는
치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 피리딜, 또는
치환되지 않거나 또는 D 또는 F로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기에 의해 치환되는, N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5원 모노시클릭 헤테로아릴이고;
R³은 H 또는 메틸이다.
제1항에 있어서, 하기 화학식 Ib의 화합물.
<화학식 Ib>
제1항 또는 제2항에 있어서, R²가 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 페닐인 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, R²가 치환되지 않거나 또는 메타 위치에 대해 D, F 또는 메톡시로부터 및 파라 위치에 대해 D, F, 메톡시, C₁-C₅-알콕시, 히드록시-C₂-C₄-알콕시 또는 C₁-C₂-알콕시-C₂-C₄-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기에 의해 메타 및/또는 파라 위치에서 치환되는 피리딜인 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, R²가 치환되지 않거나 또는 D 또는 F로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환기에 의해 치환되는, N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5원 모노시클릭 헤테로아릴인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 메틸인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 에틸인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 히드록시메틸인 화합물.
제1항에 있어서,
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온,
(4S*,5S*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,
(4S*,5R*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온,
(4R*,5R*)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(3-메톡시페닐)옥사졸리딘-2-온,
(4S,5R)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-에틸-5-(티아졸-2-일)옥사졸리딘-2-온,
3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-에틸-5-피리딘-3-일-옥사졸리딘-2-온,
3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-피리딘-3-일-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-히드록시메틸-5-페닐-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴린-4-일-4'-트리플루오로메틸-[4,5']비피리미디닐-6-일)-4-메틸-5-티아졸-2-일-옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(2-메톡시에톡시)페닐)옥사졸리딘-2-온,
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-5-(4-(2-히드록시에톡시)페닐)-4-(히드록시메틸)옥사졸리딘-2-온 또는
(4S,5S)-3-(2'-아미노-2-모르폴리노-4'-(트리플루오로메틸)-[4,5'-비피리미딘]-6-일)-4-(히드록시메틸)-5-(4-(3-히드록시프로폭시)페닐)옥사졸리딘-2-온
으로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 하나 이상의 치료 활성 보조작용제를 포함하는 조합물.
대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 대상체를 치료하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 비-흑색종 피부암, 비-흑색종 피부암의 전악성 단계, 또는 피부 섬유모세포의 조절이상에 의해 유발된 기타 과증식성 피부 장애를 치료하는데 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
비-흑색종 피부암, 비-흑색종 피부암의 전악성 단계, 또는 피부 섬유모세포의 조절이상에 의해 유발된 기타 과증식성 피부 장애를 치료하기 위한 의약을 제조하는데 있어서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.