EA029714B1 - Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные - Google Patents

Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные Download PDF

Info

Publication number
EA029714B1
EA029714B1 EA201790289A EA201790289A EA029714B1 EA 029714 B1 EA029714 B1 EA 029714B1 EA 201790289 A EA201790289 A EA 201790289A EA 201790289 A EA201790289 A EA 201790289A EA 029714 B1 EA029714 B1 EA 029714B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
text
sub
amino
compound
trifluoromethyl
Prior art date
Application number
EA201790289A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790289A1 (ru
Inventor
Робин Алек Фэрхерст
Паскаль Фюре
Франк Штефан Кальтхофф
Андреас Лерхнер
Хайнрих Рюэгер
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of EA201790289A1 publication Critical patent/EA201790289A1/ru
Publication of EA029714B1 publication Critical patent/EA029714B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к применению соединения формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли:где Rи Rимеют значения, описанные в формуле изобретения, при получении лекарственного средства для лечения гиперпролиферативных заболеваний кожи, вызванных нарушенной регуляцией фибробластов кожи.

Description

Изобретение относится к применению соединения формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли:
029714 Β1
где К1 и К2 имеют значения, описанные в формуле изобретения, при получении лекарственного средства для лечения гиперпролиферативных заболеваний кожи, вызванных нарушенной регуляцией фибробластов кожи.
029714
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к оксазолидин-2-оновым замещенным пиримидиновым соединениям, которые действуют как ингибиторы ΡΣ3Κ (фосфатидилинозитол-3-киназы), и применению в лечении состояний, заболеваний и расстройств, зависящих от ΡΙ3 киназ.
Уровень техники настоящего изобретения
Суперсемейство фосфатидилинозитол-3-киназ включает 4 различных родственных ΡΙ3Κ липидных или протеинкиназ. Классы I, II и III представляют собой липидные киназы, которые отличаются по их субстратной специфичности, тогда как ΡΒΚ класса IV, также называемые родственными ΡΒ-киназе протеинкиназы (ΙΗΚΚ), представляют собой протеинкиназы. ΡΒΚ класса I включают семейство липидных киназ, которые катализируют перенос фосфата в ΌΒ'-положение инозитоллипидов, давая фосфоинозитол-3-фосфат (Ρ№), фосфоинозитол-3,4-дифосфат (Ρ№2) и фосфоинозитол-3,4,5-трифосфат (Ρ№3), которые, в свою очередь, действуют как вторичные мессенджеры в сигнальных каскадах стыковкой с белками, содержащими плекстриновую гомологию, ΡΥνΕ, ΡΗοχ и другие связывающие фосфолипиды домены, в ряде сигнальных комплексов, часто в плазматической мембране ^апйаезеЪгоеск е! а1., Аппи. Кеу. Вюейеш 70:535 (2001)). Нарушенная регуляция ΡΒΚ, которая часто улучшает выживаемость и пролиферацию за счет активации Ак! киназы, представляет собой одно из самых распространенных событий при человеческом раке, и показано, что она возникает на множестве уровней (Ыи е! а1., Να!. Кеу. Огид. П1§соу. 8:627-644 (2009)). Например, соматические миссенс-мутации в ГП^СА, которые активируют последующие сигнальные пути, описаны при значительных частотах для широкого разнообразия раковых заболеваний человека (Ниапд е! а1., Зшепсе, 318: 1744-1748 (2007), /Као & νο§!, Опсодепе, 27:54865496 (2008)). Ген-супрессор опухолевого роста ΡΤΕΝ, который дефосфорилирует фосфоинозитиды в 3'-положении инозитольного кольца и, таким образом, вызывает антагонизм активности ΡΒΚ, функционально мутирован или делетирован при ряде опухолей & Ρа^8οη8, Опсодепе, 27:5477-5485 (2008)).
Некоторые исследования показывают, что неспособность экспрессировать ΡΤΕΝ может содействовать сдвигу сигнальной зависимости с ΡΒΚα к β-изоформе (Аее е! а1., Ρ^οс. №!1. Асаб. 8сГ иЗА, 105:1305713062 (2008)). Следовательно, ингибирование и ΡΒΚα и β-изоформ I класса может быть особенно полезным при раковых заболеваниях, которые лишены ΡΤΕΝ фосфатазы.
Опубликованная международная патентная заявка АО2007/084786 описывает замещенные пиримидиновые молекулы, которые ингибируют ΡΒΚ.
Точно установлено, что активация Ак! приводит в результате к стимуляции киназной активности мишени рапамицина в клетках (тТОК). тТОК представляет собой протеинкиназу и член ΡΒΚ IV класса. В клетках млекопитающих тТОК обнаруживают в двух отличных белковых комплексах, называемых тТОКС1 и тТОКС2. Активация тТОКС1 зависит от активных ΡΒΚ и Ак! киназ. Регуляция тТОКС2 активации является более сложной. тТОКС2 отвечает за усиление киназной активности Ак! за счет фосфорилирования серинового остатка 473 (ЗагЪ১оу е! а1., Зшепсе, 307:1098-1101 (2005), Вауа§са§ & А1姧1, Мо1. Се11. 18(2):143-145 (2005)). Каталитическое ингибирование изоформ ΡΒΚ I класса одновременно с ингибированием тТОК может, следовательно, давать дополнительную пользу, потенциально оказывая более сильный эффект на ΡΒΚ-Ак! путь.
Плоскоклеточный рак кожи (ЗСС) представляет собой второй самый частый тип рака кожи человека, которому обычно предшествует актинический кератоз (АК). Патогенез АК и кожного ЗСС связан с постоянным воздействием УФ в качестве одного из основных факторов риска (За1а§сйе, 1. Ат. Асаб. 1)егта1о1. 42:4-7 (2000)). Повышенную активность ΡΒΚ/АкСтТОК пути рассматривали в предыдущем исследовании (Сйеп е! а1., Вг. 1. Оегта!о1.; 160(2):442-445 (2009)). Было показано, что длительное облучение УФ-В вызывает снижение ΡΤΕN экспрессии на уровне мРНК и белка в кератиноцитах человека ш уйго, способствуя их выживаемости и росту (Мтд е! а1., Опсодепе; 29(4):492-502 (2010)). На основе недавней литературы имеется причинная связь между постоянным УФ-облучением и снижением ΡΤΕN (1)апбо е! а1., Сапсег Се11; 20(5):635-648 (2011)). Следовательно, все кожные ЗСС и АК и постоянные повреждения кожи, вызванные солнечными лучами, связаны с недостатком ΡΤΕN экспрессии, приводя в результате к активации ΡΒΚ/АкГтТОК сигнального пути.
Сущность настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к применению оксазолидин-2-оновых замещенных пиримидиновых соединений формулы (I) и/или их фармацевтически приемлемым солям:
где К1 представляет собой метил, этил или гидроксиметил;
- 1 029714
К2 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для метаположения и С1-С5-алкокси, гидрокси-С2-С4-алкокси или С1-С2-алкокси-С2-С4-алкокси для параположения, или пиридил, или 5-членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 3;
при получении лекарственного средства для лечения гиперпролиферативных заболеваний кожи, вызванных нарушенной регуляцией фибробластов кожи.
Если не указано иначе, термин "соединения настоящего изобретения" относится к соединениям формулы (I) и ее подформул, солям соединения.
Соединения формулы (I) считают подходящими для применения в лечении заболеваний, зависящих от ΡΙ3 киназ. Соединения формулы (I) считают подходящими, например, для применения в лечении заболеваний, зависящих от ΡΙ3 киназы I класса или зависящих от ΡΙ3 киназы I класса и тТОК.
Подробное описание настоящего изобретения
Настоящее изобретение можно более полно понять, ссылаясь на следующее описание, включая следующий словарь терминов и заключительные примеры. Как применяют в настоящем изобретении, термины "включающий", "содержащий" и "состоящий" применяют в настоящем изобретении в их открытом, неограничивающем смысле.
Общие термины, применяемые в настоящем изобретении выше и ниже, предпочтительно имеют в контексте настоящего описания следующие значения, если не указано иначе.
Как применяют в настоящем изобретении, термин "алкокси" относится к полностью насыщенной разветвленной, содержащей одно или несколько разветвлений, или неразветвленной углеводородной группе, присоединенной к остатку молекулы через -О- линкерную группу. Если не указано иначе, алкокси относится к группам, содержащим 1-16 атомов углерода, 1-10 атомов углерода, 1-7 атомов углерода или 1-4 атома углерода. Примеры алкокси включают, но не ограничиваются, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, изобутокси, трет-бутокси, н-пентокси, изопентокси, неопентокси, н-гексилокси.
Как применяют в настоящем изобретении, термин "пиридил" относится к 2-пиридилу, 3-пиридилу или 4-пиридилу.
Репрезентативный пример представляет собой 3-пиридил.
Как применяют в настоящем изобретении, заместители в 5-членном моноциклическом гетероариле, содержащем два гетероатома, выбранных из N или 3, присоединены к атому углерода гетероарила. Примеры 5-членного моноциклического гетероарила, содержащего два гетероатома, выбранных из N или 3, включают, но не ограничиваются, тиазолил. Репрезентативный пример представляет собой тиазолил.
Различные варианты осуществления настоящего изобретения описаны в настоящем изобретении. Ясно, что признаки, указанные в каждом варианте осуществления, можно комбинировать с другими указанными признаками, получая дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из соединения формулы (4)
(16)
где К1 и К2 такие же, как определено для соединения формулы (I) выше.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или >Ъ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для мета-положения и из С1-С5-алкокси, гидрокси-С2-С4-алкокси или С1-С2-алкокси-С2-С4-алкокси для пара-положения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или >Ъ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или >Ъ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой 5-членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 3.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или >Ъ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой фенил, 3-метоксифенил,
- 2 029714
4-метоксифенил, 4-(3-гидроксипропокси)фенил, 4-(2-гидроксиэтокси)фенил или 4-(2-метоксиэтокси)фенил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой 3-пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой 3-пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой 2-тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (ГЬ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К2 представляет собой 2-тиазолил.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К1 представляет собой метил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К1 представляет собой этил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где К1 представляет собой гидроксиметил.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для метаположения и из С1-С5-алкокси, гидрокси-С2-С4-алкокси или С1-С2-алкокси-С2-С4-алкокси для параположения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой 5-членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 8.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой фенил, 3-метоксифенил, 4-метоксифенил, 4-(3-гидроксипропокси)фенил, 4-(2-гидроксиэтокси)фенил или 4-(2-метоксиэтокси)фенил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой 3-пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой 3-пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой 2-тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой метил;
К2 представляет собой 2-тиазолил.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
- 3 029714
К2 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для метаположения и из С1-С5-алкокси, гидрокси-С2-С4-алкокси или С1-С2-алкокси-С2-С4-алкокси для параположения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой 5-членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 8.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой фенил, 3-метоксифенил, 4-метоксифенил, 4-(3-гидроксипропокси)фенил, 4-(2-гидроксиэтокси)фенил или 4-(2-метоксиэтокси)фенил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой 3-пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (ГЬ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой 3-пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой 2-тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой этил;
К2 представляет собой 2-тиазолил.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой фенил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для метаположения и из С1-С5-алкокси, гидрокси-С2-С4-алкокси или С1-С2-алкокси-С2-С4-алкокси для параположения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой пиридил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для метаположения и из С1-С5-алкокси, гидрокси-С2-С4-алкокси или С1-С2-алкокси-С2-С4-алкокси для параположения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой 5-членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 8.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (Ю) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой фенил, 3-метоксифенил, 4-метоксифенил, 4-(3-гидроксипропокси)фенил, 4-(2-гидроксиэтокси)фенил или 4-(2-метоксиэтокси)фенил.
- 4 029714
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой 3 -пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой 3 -пиридил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (1Ь) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой 2-тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формул (I) или (ГЬ) и/или его фармацевтически приемлемой соли, где
К1 представляет собой гидроксиметил;
К2 представляет собой 2-тиазолил.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол-2илоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-фенилоксазолидин2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-метил-5фенилоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(3метоксифенил)оксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(тиазол-2ил)оксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-этил-5-пиридин-3илоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-пиридин-3илоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-гидроксиметил-5фенилоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол-2илоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5-(4-(2метоксиэтокси)фенил)оксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-5-(4-(2гидроксиэтокси)фенил)-4-(гидроксиметил)оксазолидин-2-она или
3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5-(4-(3гидроксипропокси)фенил)оксазолидин-2-она.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению и/или его фармацевтически приемлемой соли, выбранному из
(4§,5К)-3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол2-илоксазолидин-2-она,
(4§*,5§*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-она,
(4§,5§)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она,
(4§*,5К*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5фенилоксазолидин-2-она,
(4δ,5δ)-3-(2' -амино -2 -морфолино -4' -(трифторметил) -[4,5 '-бипиримидин] -6 -ил) -4-метил-5фенилоксазолидин-2-она,
- 5 029714
(4К*,5К*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(3метоксифенил)оксазолидин-2-она,
(48,5К)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(тиазол-2ил)оксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-этил-5-пиридин-3илоксазолидин-2-она,
3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-пиридин-3илоксазолидин-2-она,
(48.58) -3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-гидроксиметил5 -фенилоксазолидин-2 -она,
(4§,5§)-3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол2 -илоксазолидин-2 -о на,
(48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5(4-(2-метоксиэтокси)фенил)оксазолидин-2-она,
(48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-5-(4-(2гидроксиэтокси)фенил)-4-(гидроксиметил)оксазолидин-2-она или
(48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5(4-(3-гидроксипропокси)фенил)оксазолидин-2-она.
Конкретные варианты осуществления обеспечивают конкретными примерными соединениями, описанными в настоящем изобретении.
Как применяют в настоящем изобретении, термин "оптический изомер" или "стереоизомер" относится к любому из различных стереоизомерных конфигураций, которые могут существовать для указанного соединения настоящего изобретения, и они включают геометрические изомеры. Ясно, что заместитель может быть присоединен к хиральному центру атома углерода. Термин "хиральный" относится к молекулам, которые обладают свойством неналожимости на партнера, являющегося их зеркальным отображением, тогда как термин "ахиральный" относится к молекулам, которые являются наложимыми на партнера, являющегося их зеркальным отображением. Следовательно, настоящее изобретение включает энантиомеры, диастереомеры или рацематы соединения. "Энантиомеры" представляют собой пару стереоизомеров, которые являются неналожимыми зеркальными отображениями друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой "рацемическую" смесь. Термин применяют для обозначения рацемической смеси, при необходимости.
"Диастереоизомеры" представляют собой стереоизомеры, которые содержат по меньшей мере два асимметрических атома, но которые не являются зеркальными отображениями друг друга. Абсолютная стереохимия указана согласно К-8-системе Кана-Ингольда-Прелога. Когда соединение представляет собой чистый энантиомер, стереохимию при каждом хиральном центре можно указать или как К, или как 8. Выделенные соединения, чья абсолютная конфигурация является неизвестной, можно обозначить (+) или (-), в зависимости от направления (право- или левовращающее), в котором они вращают плоскополяризованный свет при длине волны линии Ό натрия. Определенные соединения, описанные в настоящем изобретении, содержат один или более асимметрических центров или осей и могут, таким образом, давать энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные формы, которые можно определить в терминах абсолютной стереохимии как (К)- или (§)-.
В зависимости от выбора исходных соединений и способов, соединения могут присутствовать в виде одного из возможных изомеров или в виде их смесей, например, в виде чистых оптических изомеров или в виде изомерных смесей, таких как рацематы и диастереоизомерные смеси, в зависимости от количества асимметрических атомов углерода. Предполагается, что настоящее изобретение включает все данные возможные изомеры, включая рацемические смеси, диастереомерные смеси и оптически чистые формы. Оптически активные (К)- и (8)-изомеры можно получить, применяя хиральные синтоны или хиральные реагенты, или разделять, применяя общепринятые способы. Если соединение содержит двойную связь, заместитель может иметь Е- или Ζ-конфигурацию. Если соединение содержит дизамещенный циклоаклил, циклоалкильный заместитель может иметь цис- или трансконфигурацию. Все таутомерные формы также предполагаются включенными.
Как применяют в настоящем изобретении, термины "соль" или "соли" относится к соли присоединения кислоты или основания соединения настоящего изобретения. "Соли" включают, в частности, "фармацевтически приемлемые соли". Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений настоящего изобретения и которые обычно не являются биологически или иначе нежелательными. Во многих случаях соединения настоящего изобретения способны образовывать кислые и/или основные соли за счет наличия аминои/или карбоксильной групп или аналогичных им групп.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты можно получить с неорганическими и органическими кислотами, например ацетатную, аспартатную, бензоатную, безилатную, бромидную/гидробромидную, бикарбонатную/карбонатную, бисульфатную/сульфатную, камфорсульфонатную, хлоридную/гидрохлоридную, хлортеофиллонатную, цитратную, этандисульфонатную, фумаратную,
- 6 029714
глюцептатную, глюконатную, глюкуронатную, гиппуратную, гидроиодидную/иодидную, изотионатную, лактатную, лактобионатную, лаурилсульфатную, малатную, малеатную, малонатную, манделатную, мезилатную, метилсульфатную, нафтоатную, напсилатную, никотинатную, нитратную, октадеканоатную, олеатную, оксалатную, пальмитатную, памоатную, фосфатную/гидрофосфатную/дигидрофосфатную, полигалактуронатную, пропионатную, стеаратную, сукцинатную, сульфосалицилата, тартратную, тозилатную и трифторацетаную соли.
Неорганические кислоты, из которых можно получить соли, включают, например, хлористоводородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и подобные.
Органические кислоты, из которых можно получить соли, включают, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, сульфосалициловую кислоту и подобные. Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания можно получить с неорганическими и органическими основаниями.
Неорганические основания, из которых можно получить соли, включают, например, аммониевые соли и соли металлов из групп Ι-ΧΙΙ Периодической таблицы. В некоторых вариантах осуществления соли получают из натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, серебра, цинка и меди; в частности, подходящие соли включают соли аммония, калия, натрия, кальция и магния.
Органические основания, из которых можно получить соли, включают, например, первичные, вторичные и третичные амины, замещенные амины, включая природные замещенные амины, циклические амины, основные ионообменные смолы и подобные. Некоторые органические амины включают изопропиламин, бензатин, холинат, диэтаноламин, диэтиламин, лизин, пиперазин, меглумин и трометамин.
Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения можно получить из основной или кислой группы общепринятыми химическими способами. Обычно данные соли можно получить реакцией свободных кислых форм данных соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания (такого как гидроксид, карбонат, бикарбонат Ыа, Са, Мд или К или подобные) или реакцией свободных основных форм данных соединений со стехиометрическим количеством подходящей кислоты. Данные реакции обычно проводят в воде или в органическом растворителе или в смеси двух. Обычно применение неводной среды, подобной эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу, является желательным, при наличии возможности.
Список дополнительных подходящих солей можно найти, например, в "КеттдХоп'к РЬагтасеи11са1 8с1спсс5". 2011' ей., Маск РиЪНкЫпд Сотрапу, ЕаЧоп. Ра., (1985); и в "НапйЪоок оГ Рйагтасеи1юа1 8а118: РгореШек, 8е1есйоп, апй Ике" Ъу 81ай1 апй АегтШй (Айеу-УСН, Ае1пйе1т, Оегтапу, 2002).
Если не указано иначе, предполагается, что любая формула, указанная в настоящем изобретении, также представляет немеченные формы, а также изотопно меченые формы соединений. Изотопно меченые соединения имеют структуры, изображенные формулами, указанными в настоящем изобретении, за исключением того, что один или более атомов замещены атомом, имеющим указанную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые можно вводить в соединения настоящего изобретения, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как 2Н, 3Н, 11С, С, С, Ν, Р Р, Р, 8, С1, I соответственно. Настоящее изобретение включает различные изотопно меченые соединения, как определено в настоящем изобретении, например изотопно меченые соединения, в которых присутствуют радиоактивные изотопы, такие как 3Н и 14С, или изотопно меченые соединения, в которых присутствуют нерадиоактивные изотопы, такие как 2Н и 13С. Данные изотопно меченые соединения являются пригодными в исследованиях метаболизма (с 14С), исследованиях кинетики реакций (например, с 2Н или 3Н), способах детекции или получения изображения, таких как позитронно-эмиссионная томография (РЕТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (8РЕСТ), включая анализы распределения лекарственных средств или субстратов в тканях, или в радиоактивном лечении пациентов. В частности, 18Р-меченое соединение может быть особенно желательным для РЕТ или 8РЕСТ исследований. Изотопно меченые соединения формулы (I) можно обычно получить общепринятыми способами, известными специалистам в данной области техники, или способами, аналогичными способам, описанным в сопроводительных примерах и способах получения, применяя подходящие изотопно меченые реагенты вместо ранее применяемых немеченых реагентов.
Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, в частности дейтерием (т.е. 2Н или Ό), может давать определенные терапевтические преимущества, являющиеся результатом большей метаболической стабильности, например повышенный период полураспада ш νί\Ό или сниженные требуемые дозы или улучшение терапевтического индекса. Ясно, что дейтерий в данном контексте считают заместителем соединения формулы (I). Концентрацию данного более тяжелого изотопа, особенно дейтерия, можно определить коэффициентом изотопного обогащения. Термин "коэффициент изотопного обогащения", как применяют в настоящем изобретении, обозначает отношение между распространенностью изотопа и распространенностью изотопа в природе указанного изотопа. Если заместитель в соединении настоящего изобретения обозначен как дейтерий, данное соединение имеет коэффициент изотопного обогащения для
- 7 029714
каждого указанного атома дейтерия по меньшей мере 3500 (52,5% включение дейтерия для каждого указанного атома дейтерия), по меньшей мере 4000 (60% включение дейтерия), по меньшей мере 4500 (67,5% включение дейтерия), по меньшей мере 5000 (75% включение дейтерия), по меньшей мере 5500 (82,5% включение дейтерия), по меньшей мере 6000 (90% включение дейтерия), по меньшей мере 6333,3 (95% включение дейтерия), по меньшей мере 6466,7 (97% включение дейтерия), по меньшей мере 6600 (99% включение дейтерия) или по меньшей мере 6633,3 (99,5% включение дейтерия).
Соединения настоящего изобретения, т.е. соединения формулы (I), которые содержат группы, способные действовать в качестве доноров и/или акцепторов водородных связей, могут быть способны образовывать со кристаллы с подходящими агентами, образующими сокристаллы. Данные сокристаллы можно получить из соединений формулы (I) известными способами получения сокристаллов. Данные способы включают измельчение, нагревание, совместную возгонку, совместное плавление или контакт в растворе соединений формулы (I) с агентом, образующим сокристаллы. в условиях кристаллизации и выделение таким образом образовавшихся кристаллов. Подходящие агенты, образующие сокристаллы, включают агенты, описанные в АО 2004/078163. Следовательно, настоящее изобретение дополнительно относится к сокристаллам, содержащим соединение формулы (I).
Как применяют в настоящем изобретении, термин "ингибировать" или "ингибирование" относится к снижению или подавлению указанного состояния, симптома или расстройства, или заболевания, или значительному снижению исходной активности биологической активности или процесса.
Как применяют в настоящем изобретении, термин "лечить" или "лечение" любого заболевания или расстройства относится в одном варианте осуществления к облегчению заболевания или расстройства (т.е. замедлению или остановке или ослаблению развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом варианте осуществления "лечить" или "лечение" относится к облегчению или ослаблению по меньшей мере одного физического параметра, включая параметры, которые могут быть не заметны пациенту. В еще другом варианте осуществления "лечить" или "лечение" относится к регулированию заболевания или расстройства, или физически (например, стабилизация видимого симптома), физиологически (например, стабилизация физического параметра), или обоими. В еще другом варианте осуществления "лечить" или "лечение" относится к предотвращению или задержке возникновения или развития или прогрессирования заболевания или расстройства.
Как применяют в настоящем изобретении субъект является "нуждающимся" в лечении, если субъект будет получать пользу биологически, медицински или в качестве жизни из данного лечения.
Как применяют в настоящем изобретении, термины, упоминаемые в единственном числе, применяемые в контексте настоящего изобретения (особенно в контексте формулы изобретения), подразумевают включение и единичных и множественных форм, если не указано иначе в настоящем изобретении или явно не противоречит контексту.
Все способы, описанные в настоящем изобретении, можно осуществлять в подходящем порядке, если не указано иначе в настоящем изобретении или явно не противоречит контексту. Применение любого и всех примеров или языка примеров (например "такой как"), относящихся к настоящему изобретению, предполагается единственно с целью лучшего освещения настоящего изобретения и не накладывает ограничения на иначе заявленный объем настоящего изобретения.
Любой асимметрический атом (например, углерод или подобный) соединения (соединений) настоящего изобретения может присутствовать в рацемической или энантиомерно обогащенной, например, (К)-, (§)- или (К,8)-конфигурации. В определенных вариантах осуществления каждый асимметрический атом имеет по меньшей мере 50% энантиомерный избыток, по меньшей мере 60% энантиомерный избыток, по меньшей мере 70% энантиомерный избыток, по меньшей мере 80% энантиомерный избыток, по меньшей мере 90% энантиомерный избыток, по меньшей мере 95% энантиомерный избыток или по меньшей мере 99% энантиомерный избыток (К)- или (^(-конфигурации. Заместители при атомах с ненасыщенными двойными связями могут, при возможности, присутствовать в цис-(2)- или транс-(Е)-форме.
Соответственно, как применяют в настоящем изобретении, соединение настоящего изобретения может быть в виде одного из возможных изомеров, ротамеров, атропизомеров, таутомеров или их смесей, например, в виде по существу чистых геометрических (цис- или транс-)изомеров, диастереомеров, оптических изомеров (антиподов), рацематов или их смесей.
Любые полученные в результате смеси изомеров можно разделить на основе физико-химических различий составляющих, на чистые или по существу чистые геометрические или оптические изомеры, диастереомеры, рацематы, например, хроматографией и/или фракционной кристаллизацией.
Любые полученные в результате рацематы конечных продуктов или промежуточных соединений можно разделить на оптические антиподы известными способами, например разделением их диастереомерных солей, полученных с оптически активной кислотой или основанием, и высвобождением оптически активного кислого или основного соединения. В частности, основную группу можно, таким образом, применять для разделения соединений настоящего изобретения на их оптические антиподы, например, фракционной кристаллизацией соли, полученной с оптически активной кислотой, например винной кислотой, дибензоилвинной кислотой, диацетилвинной кислотой, ди-О,О'-п-толуолвинной кислотой, миндальной кислотой, яблочной кислотой или камфор-10-сульфокислотой. Рацемические продукты можно
- 8 029714
также разделить хиральной хроматографией, например жидкостной хроматографией высокого давления (ВЭЖХ), применяя хиральный адсорбент.
Соединения настоящего изобретения можно получить синтетическими способами, которые включают способы, аналогичные способам, хорошо известным в химической области техники, в частности в свете описания, содержащегося в настоящем изобретении. Исходные соединения обычно являются доступными из коммерческих источников или их легко получить, применяя способы, хорошо известные специалистам в данной области техники (например, полученные способами, описанными, в общем, в Ьошз Р. Р1езег апй Магу Р1езег, Кеадеп1з £ог Огдаше 5уп1йез1з, тома 1-19, \\'Пеу, \е\у Уогк (1967-1999 ей.), или ВеЙ81е1П8 НапйЪисН йег огдашзейеп СНеипе, 4, Лий. ей. 5рппдег-Уег1ад, Вегйп, включая вспомогательные материалы (также доступные через электронную систему базы данных Бельштейна)).
Для иллюстративных целей схема реакций, показанная ниже, обеспечивает потенциальные пути получения соединений настоящего изобретения, а также ключевых промежуточных соединений. Что касается более подробного описания отдельных реакционных стадий, смотрите параграф примеров ниже. Специалистам в данной области техники ясно, что другие способы получения можно применять для получения соединений настоящего изобретения. Хотя конкретные исходные соединения и реагенты показаны на схемах и обсуждаются ниже, их можно легко заменять на другие исходные соединения и реагенты, обеспечивая ряд производных и/или реакционных условий. Кроме того, многие соединения, полученные способами, известными ниже, можно дополнительно модифицировать в свете данного описания, применяя общепринятую химию, хорошо известную специалистам в данной области техники.
При получении соединений настоящего изобретения, может требоваться защита вынесенных функциональных группировок (например, гидроксильных групп) промежуточных соединений. Необходимость в данной защите будет изменяться в зависимости от свойств вынесенных функциональных группировок и условий способов получения. Подходящие защитные группы для гидроксила включают триалкилсилильные эфиры, в которых одну или две алкильные группы можно заменять на фенил. Специалист в данной области техники легко определит необходимость в данной защите. Что касается общего описания защитных групп и их применения, смотрите Т.^. Огеепе, РпЧесПте Огоирз ΐη Огдаше 5уп1йез13, .1оНп \\'Пеу & 8опз, \е\у Уогк, 1991.
Обычно соединения формулы (I) можно получить согласно способам, приведенным ниже.
где К3 представляет собой атом водорода.
Соединения формулы (I) в свободной форме или в виде соли обладают ценными фармакологически свойствами, например свойствами, регулирующими ΡΙ3 киназу, такими как свойства, регулирующие ΡΙ3 киназу I класса (ΡΙ3Κ I класса), или свойствами, регулирующими ΡΙ3, в сочетании со свойствами, регулирующими тТОК, например, как показано в испытаниях ΐη νίΐΐΌ и ΐη νί\Ό, как приведено в экспериментальной части, и, следовательно, они показаны для терапии или для применения в качестве химических
- 9 029714
соединений для исследований, например, в качестве соединений, являющихся инструментами.
Соединения формулы (I) в свободной форме или солевой форме являются пригодными в лечении заболеваний, зависящих от ΡΙ3 киназы I класса, особенно заболеваний, зависящих от ΡΙ3Κ α I класса и β-изоформ, а также заболеваний, зависящих от ΡΙ3 киназ I класса, особенно заболеваний, зависящих от ΡΙ3Κ I класса α- и β-изоформ, в сочетании с тТОК.
Соединения, которые ингибируют активность ΡΓ3Κ I класса α- и β-изоформ, в частности соединения, которые являются, по существу, равноэффективными относительно ΡΓ3Κ I класса α- и β-изоформ и необязательно также ингибируют активность тТОК, считают предпочтительными, поскольку считают, что данные соединения обладают способностью избегать адаптационные механизмы, связанные с путем, осуществляемым через другие изоформы, по сравнению с соединениями с уникальной специфичностью, например специфичностью к одному члену семейства ΡΓ3Κ I класса. Под "равноэффективными" подразумевают то, что соединения ингибируют несколько изоформ со сравнимой степенью, например, как измерено в ферментативном или клеточном анализе, описанном в настоящем изобретении.
Требуется, чтобы соединения формулы (I) обладали достаточной светостабильностью для того, чтобы обеспечить и достичь максимальной активности соединений формулы (I) при введении накожно, минимизируя потенциальное раздражение и побочные эффекты, связанные с образующимися продуктами разрушения. Соединения с превосходной светостабильностью будут облегчать техническую разработку и обеспечение благодаря минимальным рискам разрушения на свету. Требуется, чтобы соединения формулы (I) обладали хорошей активностью в клеточных анализах, применяя линии человеческих клеток, полученные из плоскоклеточного рака кожи. Предпочтительные соединения должны обладать способностью хорошо проникать в кожу.
Соединения настоящего изобретения могут быть пригодными в лечении заболеваний, выбранных из, но не ограничиваясь, немеланомного рака кожи, такого как базальная клеточная карцинома и плоскоклеточный рак; их предраковых стадий, таких как светочувствительный кератоз, солнечный кератоз и хроническое повреждение кожи солнцем; и других гиперпролиферативных расстройств кожи, вызванных нарушением регуляции фибробластов кожи, таких как фиброз кожи, склеродермия, гипертрофированные рубцы или келоиды. Соединения настоящего изобретения могут быть в частности пригодными в лечении заболеваний, выбранных из, но не ограничиваясь, немеланомного рака кожи.
Все способы, описанные в настоящем изобретении, можно осуществлять в любом порядке, если не указано иначе в настоящем изобретении или явно не противоречит контексту. Применение любого и всех примеров или примерного языка (например "такой как"), относящихся к настоящему изобретению, предполагается только для лучшей иллюстрации настоящего изобретения и не накладывает ограничение на объем иначе заявленного настоящего изобретения.
В определенных случаях может быть предпочтительно вводить соединение настоящего изобретения в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным фармацевтическим (или терапевтическим) агентом (например, антипролиферативным или противораковым агентом или вспомогательной терапией, обычно применяемой при химиотерапии). Соединение настоящего изобретения можно вводить или одновременно с, или перед, или после одного или более других терапевтических агентов. Альтернативно, соединение настоящего изобретения можно вводить отдельно, тем же или отличным путем введения, или вместе в одной фармацевтической композиции, как другой агент (агенты).
Примеры
Следующие примеры предполагаются для иллюстрации настоящего изобретение и не предполагаются ограничивающими его. Температуры приведены в градусах Цельсия. Если не указано иначе, все упаривания проводят при пониженном давлении, обычно от приблизительно 15 до 100 мм рт. ст. (20-133 мбар). Структуру конечных продуктов, промежуточных соединений и исходных соединений подтверждали стандартными аналитическими способами, например микроанализом и спектроскопическим характеристиками, например МС, ИК, ЯМР. Применяемые сокращения представляют собой сокращения, стандартные в данной области техники.
Все исходные соединения, составные элементы, реагенты, кислоты, основания, дегидратирующие агенты, растворители и катализаторы, применяемые в получении соединений настоящего изобретения, являются или имеющимися в продаже, или их можно получить методами органического синтеза, известными специалисту в данной области техники (НоиЬсп-\Усу1 4'1' Εά. 1952, МеШоЙ8 οί Отдашс 8уШНс515. Т1иете, Уо1ите 21). Кроме того, соединения настоящего изобретения можно получить методами органического синтеза, известными специалистам в данной области техники, как показано в следующих примерах.
Если не указано иначе, исходные соединения являются обычно доступными из коммерческих источников, таких как Л1йпсН Сйетюак Со. (Мйтаикее, ^18.), Ьаиса81ег §уиШе8к, Шс. (ЛУтййат, Ν.Η.), Асго8 Огдатс8 (Таийцуп, Ν.Ι), Мауйййде Сйетюа1 Сотрапу, Ий. (Согитай, Еид1аий), Тудег §аеиййс (Ρ^^исеΐοη, Ν.Ε), СйетЯтрех ШюгпаОопак Шс. (ЛУоой Оа1е, !Ш) и ЛхШйепеса Ρйа^тасеийса18 (Ьопйоп, Еид1аий).
- 10 029714
Сокращения.
Сокращения, применяемые в следующих примерах, имеют соответствующие значения, перечисленные ниже.
АсОН
водн.
ах
Вое
соляной раствор
ушир.с
СОС13
СНС13-а
СН2С12
СН3СЫ
конц.
СзЕ
СиЗО4
Д
ΏΙΡΕΑ
ΏΜΕ
ДМФА
ДМСО
дмсо-а6
бррД
ец
Е51-МС
ЕД2О
ЕДОН
ЕДОАс
ч
НуДДо
Щ-ЯМР
КОАс
КНЗО4
К2СО3
ЖХ/МС
ЬОА
МеОН
МдЗО4
М
м
уксусная кислота
водный
аксиальный
трет-бутоксикарбонил
насыщенный (при комнатной температуре)
раствор хлорида натрия
уширенный синглет
дейтерированный хлороформ
дейтерированный хлороформ
дихлорметан
ацетонитрил
концентрированный
фторид цезия
сульфат меди
дублет
диизопропилэтиламин
диметоксиэтан
Ν,Ν-диметилформамид
диметилсульфоксид
дейтерированный диметилсульфоксид
1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен
экваториальный
электроспрей масс-спектрометрия
диэтиловый эфир
этанол
этилацетат
час (часы)
НуД1о Зирег Се1®
протонный ядерный магнитный резонанс
ацетат калия
гидросульфат калия
карбонат калия
жидкостная хроматография-масс-спектрометрия литийдиизопропиламин
метанол
сульфат магния
молярный
мультиплет
- 11 029714
МС
мин
мл
Т. пл.
МдЗО4
МГц
н.
ЫаНМБЗ
ЯМР
ΝΕί3
Ыа2320з
Ыа2ЗО4
Ρά2 (с1Ъа) з
РбС12 (брр£)
Р0С12 (брр£) -СН2С12
РРЬз
Рс1(РРЬз)4
Ρά
квинт.
Напеу-Νί
НТ
И£
Н£
с
3ίΟ2
т
ТВАР
ТВБРЗС1
ТВМЕ
ТЕА
ТГФ
ТСХ
Ч
УФ
сэжх
масс-спектрометрия
минута (минуты)
миллилитр (миллилитры)
температура плавления
сульфат магния
мегагерц
нормальный
гексаметилдисилазан натрия
ядерный магнитный резонанс
триэтиламин
тиосульфат натрия
сульфнат натрия
трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) дихлорид 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладия (II)
дихлорметановый комплекс дихлорида 1,1'бис(дифенилфосфино)ферроцен-палладия(II) трифенилфосфин
тетракис(трифенилфосфин)палладий
палладий
квинтет
никель Ренея
комнатная температура
фактор удерживания на ТСХ
время удерживания
синглет
силикагель
триплет
фторид тетрабутиламмония
трет-бутилдифенилсилилхлорид
трет-бутилметиловый эфир
трифторуксусная кислота
тетрагидрофуран
тонкослойная хроматография
время удерживания
ультрафиолетовый
сверхэффективная жидкостная хроматография
Общие способы.
1Н-ЯМР измерения осуществляли на спектрометре Вгикег ийгазЫеШ™ 400 (400 МГц), Вгикег ийгазЫеШ™ 600 (600 МГц) или 500 ΜΗζ ΏΚΧ Вгикег СтуоРгоЪе (500 МГц), применяя или не применяя триметилсилан в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ-величины) приводили в м.д. в сторону слабого поля от тетраметилсилана, константы связывания (!) указаны в герцах (Гц), структура расщепления спектра обозначена как синглет (с), дублет (д), дублет дублетов (дд), триплет (т), квадруплет (кв), мультиплет или более перекрывающиеся сигналы (м), уширенный сиглет (ушир.). Растворители указаны в скобках.
ТСХ проводили с предварительно покрытыми силикагелем 60 Р254 стеклянными пластинками (Мегск, Оагт§1аб1, Оегтапу), применяя соответственно названные системы растворителей. Визуализа- 12 029714
цию обычно осуществляют в УФ свете (254 нм).
ЖХ/МС.
ЖХ/МС-способ 1.
Колонка: Асцш1у И88 Т3, 1,8 мкм, 2,1x50 мм;
элюент: вода (+ 0,05% муравьиная кислота + 3,75 мМ ацетат аммония):ацетонитрил (+ 0,04% муравьиная кислота), от 95:5 до 2:98 в течение 1,4 мин, выдерживание 98% в течение 0,75 мин;
скорость потока/температура: 1,0 мл/мин при 60°С.
ЖХ/МС-способ 2.
Колонка: Асцш1у И88 Т3, 1,8 мкм, 2,1x50 мм;
элюент: вода (+ 0,05% муравьиная кислота + 3,75 мМ ацетат аммония):ацетонитрил (+ 0,04% муравьиная кислота), от 98:2 до 2:98 в течение 1,4 мин, выдерживание 98% в течение 0,75 мин;
скорость потока/температура: 1,2 мл/мин при 50°С.
СЭЖХ 1.
Колонка: Асцш1у СЭЖХ И88 Т3 С18, 1,7 мкм 2,1x50 мм, поток: 1,0 мл/мин; градиент: 5-100% В в течение 1,5 мин, 100% В в течение 1 мин, А = вода + 0,1% ТРА, В = ацетонитрил + 0,1% ТРА;
детекция: 218 или 254 нм.
Получение промежуточного боронового эфира.
Промежуточный бороновый эфир, применяемый в получении соединений настоящего изобретения, является или имеющимся в продаже, или его можно получить, как описано в литературе или аналогичным способом, или его можно получить, как описано в настоящем изобретении ниже или аналогичным способом.
Промежуточное соединение 1. 5-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4трифторметил)пиримидин-2-амин
a) 5-Бром-4-трифторметилпиримидин-2-иламин.
К раствору 2-амино-4-трифторметилпиримидина (25 г, 0,15 моль) в СН3СИ (600 мл) добавляли в темноте раствор Ν-бромсукцинимида (34,8 г, 195 ммоль) в ацетонитриле (200 мл) в течение 2,5 ч. Реакционную смесь перемешивали в течение 4,5 ч при комнатной температуре и затем упаривали. Остаток растворяли в Е1ОАс и Н2О, органические растворители отделяли, промывали Н2О и соляным раствором, сушили над №28О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя Е1ОАс в гексане от 10 до 40%, получая указанное в заголовке соединение в виде бежевого твердого остатка (31,2 г, 85%).
Х/МС: Κί 0,82 мин; (ЖХ/МС способ 2).
b) 5-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4-(трифторметил)пиримидин-2-амин.
К суспензии 5-бром-4-трифторметилпиримидин-2-иламина (16,2 г, 6 6,3 ммоль), биспинаколатодибора (18,5 г, 72,9 ммоль) и КОАс (19,5 г, 199 ммоль) в диоксане (300 мл) в атмосфере аргона добавляли аддукт РбС12(брр1)-СН2С12 (2,44 г, 2,98 ммоль), и смесь перемешивали в течение 4 ч при 115°С. Реакционную смесь охлаждали до 50°С и обрабатывали Е1ОАс. Полученную в результате суспензию фильтровали через Нуйо и промывали Е1ОАс. Объединенный фильтрат концентрировали. Остаток суспендировали в 2 М №ОН, перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и затем добавляли Е12О и Н2О. Двойную смесь снова фильтровали через Нуйо и фазы разделяли. рН полученного в результате водного слоя доводили до 5-64 М водной НС1 и продукт экстрагировали Е1ОАс. Объединенные экстракты промывали Н2О и соляным раствором, сушили над №28О4, фильтровали и концентрировали. Остаток растирали в смеси Е12О/гексан, отфильтровывали и сушили, получая указанное в заголовке соединение в виде светло-желтого твердого остатка (8,33 г, 42%).
ЖХ/МС: [М+Н] 290,2; Κί 1,00 мин; (ЖХ/МС способ 2).
Получение оксазолидиноновых промежуточных соединений.
Промежуточное соединение 2. (48*,58*)-4-Этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он
а) (18*,28*)-1 -(4-Метоксифенил)-2-нитробутан- 1-ол.
К раствору Ι,ίΆΙΙ I., (2 М в ТГФ) (1,84 мл, 3,67 ммоль) в сухом ТГФ (100 мл), который перемешивали в течение 30 мин при 0°С, добавляли 1-нитропропан (16,3 мл, 184 ммоль) в атмосфере аргона. Через
- 13 029714
30 мин добавляли одной порцией 4-метоксибензальдегид (4,45 мл, 36,7 ммоль). Смесь перемешивали в течение 6 ч при 0°С и 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили НС1 (1 М в Н2О) и экстрагировали СН2С12. Органические слои промывали соляным раствором, сушили над Мд804, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя СН2С12 в гексане от 0 до 100%, получая указанное в заголовке соединение (1,4 г, 34%).
1Н-ЯМР (600 МГц, ДМСО-б6): δ 7,35 (д, 2Н), 6,94 (д, 2Н), 5,94 (д, 1 Н), 4,80 (дд, 1Н), 4,68-4,52 (м, 1Н), 3,76 (с, 3Н), 1,75-1,69 (м, 1Н), 1,25-1,20 (м, 1Н), 0,74 (т, 3Н).
b) (18*,28*)-2-Амино-1 -(4-метоксифенил)бутан-1 -ол.
Раствор (18*,28*)-1-(4-метоксифенил)-2-нитробутан-1-ола (1,0 г, 4,44 ммоль) в этаноле (20 мл) продували аргоном и добавляли при комнатной температуре Рб/С (100 мг, 0,094 ммоль). Затем герметичный сосуд продували и заполняли Н2 и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывали этанолом и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя СН2С12/Ме0Н/(КН40Н в Н2О) от 100:0:0 до 80:20:1, получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (450 мг, 51,4%).
ЖХ/МС: [М+Н] 196,1; Κΐ 0,44 мин; (ЖХ/МС способ 2).
c) (48*,58*)-4-Этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он.
К раствору (18*,28*)-2-амино-1-(4-метоксифенил)бутан-1-ола (440 мг, 2,25 ммоль) в СН2С12 (15 мл) добавляли в атмосфере аргона ΝΕΐ3 (0,78 мл, 5,63 ммоль) при 0°С. Затем добавляли дифосген в течение 5 мин и температуру поддерживали равной 0°С в течение 30 мин. Реакционную смесь гасили ледяной водой и 2 М водным раствором №2С03, экстрагировали СН2С12, сушили над Να2804, фильтровали и концентрировали. Остаток растирали с ТВМЕ, фильтровали и сушили, получая промежуточное соединение 2, [(48*,58*)-4-этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он], в виде белого порошка (220 мг, 44%).
ЖХ/МС: [М+Н] 222,2; Κΐ 0,77 мин; (ЖХ/МС способ 2).
ХН-ЯМР (600 МГц, ДМСО-б6): δ 7,94 (ушир.с, 1Н), 7,32 (д, 2Н), 6,96 (д, 2Н), 5,06 (д, 1Н), 3,74 (с, 3Н), 3,51 (кв., 1Н), 1,53 (кв.т, 2Н), 0,85 (т, 3Н).
Промежуточное соединение 3. (48*,58*)-4-Этил-5-(3-метоксифенил)оксазолидин-2-он
Указанное в заголовке соединение получали согласно способу, описанному для промежуточного соединения 2, [(4К*,5К*)-4-этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она], получая промежуточное соединение 3 в виде бесцветного масла.
ЖХ/МС: [М+Н] 222,1; Κΐ 0,79 мин; (ЖХ/МС способ 2).
ХН-ЯМР (600 МГц, ДМСО-б6): δ 7,98 (ушир.с, 1Н), 7,35-7,29 (м, 1Н), 6,83-6,96 (м, 3Н), 5,10 (д, 1Н), 3,72-3,78 (м, 3Н), 3,36-3,29 (м, 1Н), 1,49-1,63 (м, 2Н), 0,88 (т, 3Н).
Промежуточное соединение 4. (48*,5К*)-4-Этил-5-фенилоксазолидин-2-он
Указанное в заголовке соединение получали согласно способу, описанному для промежуточного соединения 2, [(4К*,5К*)-4-этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она], получая промежуточное соединение 4 в виде белого твердого остатка.
ЖХ/МС: [М+Н] 192,1; Κΐ 0,77 мин; (ЖХ/МС способ 2).
Промежуточное соединение 5. (48,58)-4-Метил-5-фенилоксазолидин-2-он
К раствору (18, 28)-(+)-норпсевдоэфедрина (2,00 г, 13,2 ммоль) в СН2С12 (60 мл) добавляли в атмосфере аргона Εΐ3Ν (4,61 мл, 33,1 ммоль) при 0°С. Затем медленно добавляли трифосген (1,57 г, 5,29 ммоль), растворенный в 20 мл СН2С12, и температуру повышали от 0°С до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили добавлением водного ХН4С1. Органические слои отделяли, сушили над Мд804, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гептане от 0 до
- 14 029714
100% для того, чтобы получить требуемый продукт (2,10 г, 89%).
ЖХ/МС: [М+Н] 178,1; Κΐ 0,67 мин; (ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) 7,88 (ушир.с, 1Н), 7,50-7,32 (м, 5Н), 5,09 (д, 1Н), 3,78-3,62 (м, 1Н), 1,26 (д, 3Н).
Промежуточное соединение 6. (4§,5К)-4-Этил-5-(тиазол-2-ил)оксазолидин-2-он
a) (8)-2-(((Бензилокси)карбонил)амино)бутановая кислота.
К раствору (8)-2-аминобутановой кислоты (11,2 г, 109 ммоль) в ТГФ (200 мл) и 2 М водного раствора карбоната натрия (65,2 мл, 130 ммоль) добавляли по каплям при 0°С бензилхлорформиат (17,06 мл, 119 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 16 ч реакционную смесь экстрагировали Н2О/ТВМЕ, водный слой подкисляли НС1 (2 М в Н2О) до рН 2 и экстрагировали ЕЮАс. Органический слой сушили над Ыа28О4, фильтровали, и фильтрат концентрировали, получая указанное в заголовке соединение (22,8 г, 77%) в виде бесцветного масла. Продукт применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЖХ/МС: [М-Н] 2 3 6,2; Κΐ 0,76 мин; (ЖХ/МС способ 1).
b) (8)-Метил-2-(((бензилокси)карбонил)амино)бутаноат.
К раствору (8)-2-(((бензилокси)карбонил)амино)бутановой кислоты (10,0 г, 42,1 ммоль) в метаноле (100 мл) и толуоле (300 мл) добавляли по каплям при комнатной температуре в атмосфере аргона триметилсилилдиазометан (23,2 мл, 46,4 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение
1 ч реакционную смесь концентрировали и остаток экстрагировали раствором ЕЮАс и соляным раствором. Объединенные органические слои сушили над Ыа28О4, фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (120 г 8Ю2), применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 30% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (5,2 г, 48%) в виде бесцветного масла.
ЖХ/МС: [М+Н] 252,1; Κΐ 0,93 мин; (ЖХ/МС способ 1).
c) (8)-Бензил-( 1 -оксобутан-2-ил)карбамат.
К раствору (8)-метил-2-(((бензилокси)карбонил)амино)бутаноата (2,0 г, 7,96 ммоль) в толуоле (50 мл) добавляли по каплям при -78°С в атмосфере аргона О1ВАЬ-Н (1 М в толуоле) (15,9 мл, 15,9 ммоль) в течение 20 мин и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили при -78°С водным 1,5 М раствором тартрата калия (20 мл) и температуру повышали до комнатной температуры. Реакционную смесь экстрагировали раствором ЕЮАс и соляным раствором. Объединенные органические слои сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (24 г 8Ю2), применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 30% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (1,18 г, 64%) в виде бесцветного масла.
ЖХ/МС: [М+Н] 222,2; Κΐ 1,01 мин; (ЖХ/МС способ 1).
’Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-б): δ 9,61 (с, 1Н), 7,27-7,43 (м, 5Н), 5,39 (ушир.с, 1Н), 5,15 (м, 2Н), 4,15 (кв., 1Н), 1,96-2,11 (м, 1Н), 1,64-1,82 (м, 1Н), 1,01-0,79 (м, 3Н).
б) Бензил-((1К,28)-1-гидрокси-1-(тиазол-2-ил)бутан-2-ил)карбамат.
К раствору (8)-бензил-(1-оксобутан-2-ил)карбамата (1,1 г, 4,97 ммоль) в дихлорметане (30 мл) добавляли по каплям при -30°С в атмосфере аргона 2-(триметилсилил)тиазол (939 мкл, 5,97 ммоль) в течение 10 мин. Затем реакционную смесь перемешивали при -30°С в течение 20 мин, нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь упаривали при 30°С и растворяли в ТГФ (30 мл). Добавляли при 0°С в атмосфере аргона ТВАР (1 М в ТГФ) (5,97 мл, 5,97 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение
2 ч. Реакционную смесь концентрировали и остаток экстрагировали ЕЮАс. Объединенные органические слои промывали водным карбонатом натрия, водой и соляным раствором, сушили над Ыа28О4, фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (24 г 8Ю2), применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 30% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (1,18 г, 64%) в виде бесцветного масла. Остаток очищали колоночной хроматографией (24 г 8Ю2), применяя МеОН в СН2С12 гексан от 0 до 4% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (340 мг, 43%) в виде бесцветного масла.
ЖХ/МС: [М+Н] 307,5; Κΐ 0,86 мин; (ЖХ/МС способ 1). е) (Ш^^-АминоН-Стиазол^-ил^утан-1 -ол.
К раствору бензил-((1Κ,28)-1-гидрокси-1-(тиазол-2-ил)бутан-2-ил)карбамата (330 мг, 1,077 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) при 0°С в атмосфере аргона добавляли пиперидин (0,213 мл, 2,154 ммоль) и по каплям йодтриметилсилан (293 мкл, 2,15 ммоль) в течение 5 мин. Затем температуру реакционной смеси повышали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли при 0°С тиосульфат натрия (500 мг) с последующим добавлением воды
- 15 029714
(0,5 мл) и реакционную смесь энергично перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Добавляли дополнительные 500 мг тиосульфата натрия и смесь разбавляли ЕЮАс (50 мл), сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали. Остаток растирали ЕЮАс, фильтровали и фильтрат концентрировали, получая указанное в заголовке соединение (250 мг, 67%) в виде желтого масла.
ί) (4§,5К)-4-Этил-5-(тиаэод-2-ил)оксазолидин-2-он.
Указанное в заголовке соединение получали из (1К,2§)-2-амино-1-(тиазол-2-ил)бутан-1-ола согласно способу, описанному для промежуточного соединения 2, получая промежуточное соединение 6 (410 мг, 95%) в виде коричневого масла. Данный продукт применяли на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 7. 4-Этил-5-пиридин-3-илоксазолидин-2-он
a) 2-Нитро-1 -пиридин-3 -илбутан-1 -ол.
К раствору ЫА1Н4 (2 М в ТГФ) (0,93 мл, 1,87 ммоль) в сухом ТГФ (80 мл) при 0°С медленно добавляли 1-нитропропан (8,30 мл, 93 ммоль) в атмосфере аргона. Через 60 мин добавляли одной порцией никотинальдегид (2,00 г, 18,7 ммоль). Смесь перемешивали в течение 16 ч, повышая температуру от 0°С до комнатной температуры. Реакционную смесь гасили добавлением 1 мл 2 М водной НС1 с последующим добавлением 4 г Ыа28О4. Полученную в результате суспензию перемешивали в течение 15 мин и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (40 г §Ю2), применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (2,6 г, 71%) в виде смеси диастереоизомеров А и В.
ЖХ/МС: [М+Н] 197,1; Κΐ 0,52 мин; (ЖХ/МС способ 1).
A) ’Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-й): δ 8,70-8,60 (м, 2Н), 7,80-7,74 (м, 1Н), 7,42-7,32 (м, 1Н), 5,28 (дд, 1Н), 4,70-4,58 (м, 1Н), 2,97 (д, 1Н), 2,29-2,12 (м, 1Н), 1,65-1,42 (м, 1Н), 0,99 (т, 3Н).
B) ’Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-й): δ 8,70-8,60 (м, 2Н), 7,80-7,74 (м, 1Н), 7,42-7,32 (м, 1Н), 5,15 (дд, 1Н), 4,70-4,58 (м, 1Н), 2,81 (д, 1Н), 1,99-1,85 (м, 1Н), 1,65-1,42 (м, 1Н), 0,94 (т, 3Н).
b) 2-Амино-1 -пиридин-3 -илбутан-1 -ол.
Раствор 2-нитро-1-пиридин-3-илбутан-1-ола (1,0 г, 4,44 ммоль) в этаноле (20 мл) продували аргоном и добавляли при комнатной температуре 100 мг никеля Ренея. Реакционную смесь три раза вакуумировали и заполняли водородом. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем никель Ренея отфильтровывали через Нуйо и Нуйо промывали ЕЮН. Затем фильтрат упаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией (40 г §Ю2), применяя МеОН в СН2С12 от 0 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде желтого масла (180 мг, 21%).
ЖХ/МС: [М+Н] 167,1; Κΐ 0,21 мин; (ЖХ/МС способ 1).
c) 4-Этил-5 -пиридин-3 -илоксазолидин-2 -он.
К раствору 2-амино-1-пиридин-3-илбутан-1-ола (150 мг, 0,90 ммоль) в СН2С12 (5 мл) добавляли в атмосфере аргона ХЕ13 (314 мкл, 5,63 ммоль) при 0°С. Затем добавляли в течение 5 мин дифосген и температуру повышали от 0°С до комнатной температуры в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили ледяной водой и 2 М раствором Ыа2СО3, экстрагировали СН2С12, сушили над Мд§О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гептане от 0 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (100 мг, 58%) в виде смеси диастереоизомеров А и В.
ЖХ/МС: [М+Н] 193,1; Κΐ 0,43 мин; (ЖХ/МС способ 1).
A) ’Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-й): δ 8,70-8,62 (м, 1Н), 8,60-8,56 (м, 1Н), 7,76-7,71 (м, 1Н), 7,42-7,35 (м, 1Н), 5,78 (д, 1Н), 4,08-3,98 (м, 1Н), 1,21-1,05 (м, 2Н), 0,84 (т, 3Н).
B) ’Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-й): δ 8,70-8,62 (м, 2Н), 7,80-7,76 (м, 1Н), 7,42-7,35 (м, 1Н), 5,21 (д, 1Н), 3,75-3,68 (м, 1Н), 1,89-1,69 (м, 2Н), 1,05 (т, 3Н).
Промежуточное соединение 8. 4-Метил-5-пиридин-3-илоксазолидин-2-он
К раствору ЫА1Н4 (2 М в ТГФ) (1,4 мл, 2,8 ммоль) в сухом ТГФ (110 мл) при 0°С медленно добавляли 1-нитроэтан (2,00 мл, 28 ммоль) в атмосфере аргона. Через 20 мин при 0°С добавляли одной порцией никотинальдегид (2,64 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивали в течение 16 ч, повышая температуру от 0°С до комнатной температуры. Реакционную смесь гасили добавлением 5 мл 1 М НС1 с последующим
- 16 029714
добавлением СН2С12 и Να28Ο4. Полученную в результате суспензию перемешивали в течение 15 мин и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали. Затем остаток очищали колоночной хроматографией (40 г 8ΐΟ2), применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 100% для того, чтобы получить продукт в виде масла (3,2 г, 63%) в виде смеси диастереоизомеров.
ЖХ/МС: [М+Н] 183,4; Κι 0,41 мин; (ЖХ/МС способ 1).
A) 1Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-б): δ 8,58-8,48 (м, 2Н), 7,68 (д, 1Н) 7,33-7,23 (м, 1Н) 5,42-5,38 (м, 1Н),
4,70-4,60 (м, 1Н), 3,30-2,90 (ушир.с, 1Н), 1,46 (д, 3Н).
B) 2Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-ф: δ 8,58-8,48 (м, 2Н), 7,68 (д, 1Н) 7,33-7,23 (м, 1Н) 5,04 (д, 1Н), 4,764,69 (м, 1Н), 3,30-2,90 (ушир.с, 1Н), 1,31 (д, 3Н).
Ь) 4-Метил-5-пиридин-3-илоксазолидин-2-он.
Раствор 2-нитро-1-пиридин-3-илбутан-1-ола (3,20 г, 17,6 ммоль) в этаноле (90 мл) продували аргоном и добавляли при комнатной температуре 200 мг никеля Ренея. Реакционную смесь три раза вакуумировали и заполняли водородом. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч в атмосфере Н2 при комнатной температуре. Затем никель Ренея отфильтровывали через НуПо и НуПо промывали ЕЮН. Затем фильтрат упаривали для того, чтобы получить 2-амино-1-пиридин-3-илпропан-1-ол в качестве продукта (2,35 г, 88%), который применяли на следующей реакционной стадии без очистки. К раствору 2-амино-1-пиридин-3-илпропан-1-ола (700 мг, 4,60 ммоль) в СН2С12 (20 мл) добавляли в атмосфере аргона Εΐ3Ν (1,60 мл, 11,5 ммоль) при 0°С с последующим добавлением трифосгена (819 мг, 2,76 ммоль, растворенные в 5 мл СН2С12). Реакционную температуру повышали от 0°С до комнатной температуры в течение 1 ч. Затем реакционную смесь гасили ледяной водой и 2 М раствором №2СО3, экстрагировали СН2С12, сушили над М§8О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 100% для того, чтобы получить продукт (160 мг, 20%).
ЖХ/МС: [М+Н] 179,1; Κι 0,31 мин; (ЖХ/МС способ 1).
Промежуточное соединение 9. (48,58)-4-((трет-бутилдифенилсилилокси)метил)-5фенилоксазолидин-2-он
a) (48,58)-4-Гидроксиметил-5-фенилоксазолидин-2-он.
(18,28)-2-Амино-1-фенилпропан-1,3-диол (20,0 г, 120 ммоль), диэтилкарбонат (29,7 мл, 245 ммоль) и К2СО3 (1,65 г, 12,0 ммоль) загружали в колбу с магнитной мешалкой и колонкой вигре. Данную суспензию нагревали в масляной бане при 135°С, получая желтый раствор. Накопленный ЕЮН отгоняли через колонку вигре. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч, до того как нельзя было отогнать ЕЮН. Затем реакционную смесь охлаждали до 50°С, разбавляли ЕЮАс и водным ΝαΙ 1СО3. Органические слои отделяли, промывали соляным раствором, сушили над М§8О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (550 г ЗЮ2), применяя ЕЮАс в гептане от 33 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде бежевого масла (7,50 г, 33%).
2Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 7,87 (ушир.с, 1Н), 7,50-7,30 (м, 5Н), 5,37 (д, 1Н), 5,23-5,17 (м, 1Н),
3,70-3,60 (м, 1Н), 3,60-3,50 (м, 2Н).
b) (48,58)-4-((трет-Бутилдифенилсилилокси)метил)-5-фенилоксазолидин-2-он.
К раствору (48,58)-4-гидроксиметил-5-фенилоксазолидин-2-она (3,50 г, 17,2 ммоль), КЕ13 (4,80 мл, 34,4 ммоль) и ОМАР (105 мг, 861 мкмоль) в ДМФА (20 мл) добавляли по каплям ТВОР8С1 (4,86 мл, 18,9 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь упаривали и разбавляли ТВМЕ, Органические слои отделяли, промывали водным ΝαΙ 1С(О и соляным раствором, сушили над М§8О4 и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (120 г 31О2), применяя ЕЮАс в гептане от 0 до 60% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (4,28 г, 57%).
ЖХ/МС: [М+Н] 432,2; Κι 1,36 мин; (ЖХ/МС способ 2).
Промежуточное соединение 10. (48,58)-4-(((трет-Бутилдифенилсилил)окси)метил)-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-он
- 17 029714
К раствору (48,58)-4-(гидроксиметил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она [545435-91-4] (0,68 г, 3,05 ммоль) и имидазола (0,249 г, 3,66 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавляли по каплям ТВОР8С1 (0,97 мл, 3,66 ммоль) при 0-5°С. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и оставшееся масло растворяли в ТВМЕ и промывали 10% водным КН8О4, Н2О, насыщенным раствором ЧаНСО3 и соляным раствором, сушили над Мд8О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гептане от 5 до 50% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белой пены (1,62 г, 55%).
ТСХ (гептан/ЕЮАс 1:1) Щ=0,44; ЖХ/МС: [М+Н] 462; Κΐ 1,36 мин; (ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 7,65 (д, 4Н), 7,35-7,60 (м, 6Н), 7,24 (д, 2Н), 6,92 (д, 2Н), 5,24 (д, 1Н), 5,20 (ушир.с, 1Н), 3,84 (м, 4Н), 3,77 (м, 2Н), 1,09 (с, 9Н).
Промежуточное соединение 11. (48,58)-4-(((трет-Бутилдиметилсилил)окси)метил)-5-(4-(2-
a) (К)-Метил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-(4-(2-этоксиэтокси)фенил)пропаноат.
К суспензии (К)-метил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-(4-гидроксифенил)пропаноата (4,43 г, 15,00 ммоль), К2СО3 (4,15 г, 30,0 ммоль) и йодида натрия (112 мг, 750 мкмоль) в ацетонитриле (100 мл) добавляли 1-бром-2-метоксиэтан (5,64 мл, 60,0 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 2 дней. Реакционную смесь разбавляли ТВМЕ и промывали Н2О и соляным раствором. Объединенные экстракты сушили над Мд8О4, фильтровали и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение в виде желтого масла (5,3 г, 95%).
ТСХ (толуол/ТВМЕ 2:1) Κ=0,44; 4=1,084 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 354; Κΐ 1,02 мин; (ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 7,05 (д, 2Н), 6,88 (д, 2Н), 4,96 (Ьг 6, 1Н), 4,58 (м, 1Н), 4,12 (дд, 2Н), 3,76 (дд, 2Н), 3,73 (с, 3Н), 3,47 (с, 3Н), 3,05 (м, 2Н), 1,44 (с, 9Н).
b) (4К,58)-Метил-5-(4-(2-метоксиэтокси)фенил)-2-оксооксазолидин-4-карбоксилат.
К раствору (К)-метил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-(4-гидроксифенил)пропаноата (5,34 г, 14,35 ммоль) в ацетонитриле (260 мл) добавляли в атмосфере аргона раствор персульфата калия (7,76 г, 28,7 ммоль) в Н2О (190 мл) и раствор Си8О4 (0,458 г, 2,87 ммоль), растворенного в Н2О (70 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 3 ч при 70°С. Реакционную смесь экстрагировали ЕЮАс. Объединенные экстракты промывали соляным раствором, сушили над Мд8О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гептане от 20 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде желтого масла (2,33 г, 52%).
ТСХ (гептан/ЕЮАс 1:2) Κ=0,19; ΐΚ=0,680 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 296; Κΐ 0,68 мин; (ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 7,36 (д, 2Н), 6,99 (д, 2Н), 5,86 (ушир.д, 1Н), 5,62 (д, 1Н), 4,30 (д, 1Н),
4,16 (дд, 2Н), 3,88 (с, 3Н), 3,79 (дд, 2Н), 3,48 (с, 3Н).
c) (48,58)-4-(Гидроксиметил)-5-(4-(2-метоксиэтокси)фенил)оксазолидин-2-он.
К суспензии (4К,58)-метил-5-(4-(2-метоксиэтокси)фенил)-2-оксооксазолидин-4-карбоксилата (2,30 г, 7,79 ммоль) в ЕЮН (45 мл) добавляли порциями при 0-5°С боргидрид натрия (648 мг,
17,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре и затем подкисляли 4 М водной НС1 (10 мл) при 0-5°С. Реакционную смесь концентрировали и продукт экстрагировали ЕЮАс. Объединенные экстракты промывали соляным раствором, сушили над Мд8О4, фильтровали и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение в виде бежевой пены (1,80 г, 81%).
4=0,498 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 268; Κΐ 0,55 мин; (ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, СВОД: δ 7,31 (д, 2Н), 6,96 (д, 2Н), 6,45 (ушир.с, 1Н), 5,33 (д, 1Н), 5,30 (ушир.с, 1Н), 3,75-4,30 (м, 7Н), 3,47 (с, 3Н).
6) (48,58)-4-(((трет-Бутилдиметилсилил)окси)метил)-5-(4-(2-метоксиэтокси)фенил)оксазолидин-2он.
Указанное в заголовке соединение получали аналогично способу, описанному для промежуточного соединения 10, [(48,58)-4-(((трет-бутилдифенилсилил)окси)метил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2она], из (48,58)-4-(гидроксиметил)-5-(4-(2-метоксиэтокси)фенил)оксазолидин-2-она и ТВОМ8-С1, получая после очистки колоночной хроматографией (применяя ЕЮАс в гептане от 5 до 50%) промежуточное соединение 11 в виде светло-желтого масла.
ТСХ (гептан/ЕЮАс 1:1) Κ^0,26; 4=1,28 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 382,2; Κΐ 1,17 мин;
- 18 029714
(ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, СВС13): δ 7,30 (д, 2Н), 6,97 (д, 2Н), 5,44 (ушир.с, 1Н), 5,23 (д, 1Н), 4,18 (дд, 2Н),
3,70-3,85 (м, 5Н), 3,48 (с, 3Н), 0,91 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).
Промежуточное соединение 12. (43,53)-5-(4-(2-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)этокси)фенил)-4(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)оксазолидин-2-он
Указанное в заголовке соединение получали аналогично способу, описанному для промежуточного соединения 11, исходя из (К)-метил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-(4-гидроксифенил)пропаноата и (2-бромэтокси)(трет-бутил)диметилсилана.
ТСХ (гептан/ЕЮАс 1:1) К£=0,51; 4=1,764 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 482; К 1,57 мин; (ЖХ/МС способ 1).
1Н-ЯМР (400 МГц, СВС13): δ 7,31 (д, 2Н), 6,96 (д, 2Н), 5,26 (ушир.с, 1Н), 5,22 (д, 1Н), 4,13 (м, 2Н), 4,00 (м, 2Н), 3,79 (м, 1Н), 3,67 (м, 2Н), 0,93 (с, 9Н), 0,92 (с, 9Н), 0,11 (м, 12Н).
Промежуточное соединение 13. (43,53)-4-(((трет-Бутилдиметилсилил)окси)метил)-5-(4-(3-((третбутилдиметилсилил)окси)пропокси)фенил)оксазолидин-2-он
Указанное в заголовке соединение получали аналогично способу, описанному для промежуточного соединения 12, исходя из (К)-метил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-(4-гидроксифенил)пропаноата и (3-бромпропокси)(трет-бутил)диметилсилана.
ТСХ (гептан/ЕЮЛс 1:1) К^0,49; 4=1,832 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 496; К 1,62 мин (ЖХ/МС способ 1).
1Н-ЯМР (400 МГц, СВС13): δ 7,30 (д, 2Н), 6,95 (д, 2Н), 5,27 (ушир.с, 1Н), 5,22 (д, 1Н), 4,13 (дд, 2Н), 4,00 (м, 2Н), 3,80 (м, 3Н), 3,74 (м, 2Н), 2,01 (м, 2Н), 0,93 (с, 9н), 0,91 (с, 9Н), 0,10 (с, 6Н), 0,06 (с, 6Н).
Промежуточное соединение 14. (43,5К)-4-Метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он
a) трет-Бутиловый эфир (2-гидрокси-1-метил-2-тиазол-2-илэтил)карбаминовой кислоты.
Вос-Е-аланаль (9,99 г, 57,7 ммоль) растворяли в 200 мл СН2С12. Добавляли к реакционной смеси
при -20°С в атмосфере аргона 2-(триметилсилил)тиазол (9,90 г, 62,9 ммоль), растворенный в 70 мл СН2С12. Через 21 ч при -20°С реакционную смесь концентрировали. Затем остаток растворяли в 180 мл ТГФ при добавлении ТВАР (1 М в ТГФ, 63,4 мл, 63,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь упаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией (120 г 3ΐΟ2), применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде диастереомерной смеси (14,0 г, 93%).
ЖХ/МС: [М+Н] 259,2; К 0,78 мин; (ЖХ/МС способ 1).
b) 2-Амино-1 -тиазол-2-ил-пропан-1 -ол.
трет-Бутиловый эфир 2-гидрокси-1-метил-2-тиазол-2-илэтил)карбаминовой кислоты (13,8 г, 53,4 ммоль) растворяли в 50 мл диоксана. Добавляли 134 мл (534 ммоль) 4 М НС1 в диоксане и реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь упаривали и остаток разбавляли диэтиловым эфиром и фильтровали для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белой соли в виде диастереомерной смеси (11,5 г, 92%).
ЖХ/МС: [М+Н] 159,1; К 0,22 мин; (ЖХ/МС способ 1).
c) (43,5К)-4-Метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он.
Смесь диастереоизомеров 2-амино-1-тиазол-2-илпропан-1-ола (4,20 г, 18,2 ммоль) растворяли в 160 мл СН2С12. Добавляли при 0°С диизопропилэтиламин (11,1 мл, 63,6 ммоль) с последующим добавле- 19 029714
нием трифосгена (2,70 г, 9,09 ммоль), растворенного в 40 мл СН2С12. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем разбавляли СН2С12. Органические растворители отделяли, промывали водным №НС03 и соляным раствором, сушили над М§804, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (80 г δΐ02), применяя ЕЮЛс в гексане от 0 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде одного энантиомера (2,16 г, 64%).
ЖХ/МС: [М+Н] 185,3; К! 0,45 мин; (ЖХ/МС способ 1).
Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-ф: δ 7,75 (д, 1Н), 7,35 (д, 1Н), 5,60 (ушир.с, 1Н), 5,32 (д, 1Н), 4,18-4,09 (м, 1Н), 1,45 (д, 3Н).
Промежуточное соединение 15. (48,58)-4-Метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он
К смеси (18,28)-2-амино-1-тиазол-2-илпропан-1-ола и (1К,28)-2-амино-1-тиазол-2-илпропан-1-ола (2,9 г, 12,5 ммоль) в СН2С12 (40 мл) добавляли в атмосфере аргона ΝΕ!3 (10,5 мл, 75 ммоль) при 0°С. Затем медленно добавляли трифосген (1,86 г, 6,27 ммоль), растворенный в 40 мл СН2С12, и температуру повышали от 0°С до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили добавлением водного ΝαΙ 1СО3. Органические слои отделяли, сушили над М§804, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮЛс в гептане от 0 до 100% для того, чтобы получить требуемый продукт (330 мг, 13%).
ЖХ/МС: [М+Н] 185,0; К! 0,48 мин; (ЖХ/МС способ 1).
‘Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-а): δ 7,79 (д, 1Н), 7,34 (д, 1Н), 5,91 (д, 1Н), 5,71 (ушир.с, 1Н), 4,48-4,38 (м, 1Н), 0,89 (д, 3Н).
Получение примерных соединений
Пример 1. (48,5К)-3-(2'-Амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он
a) (48,5К)-3-(6-Хлор-2-морфолин-4-ил-пиримидин-4-ил)-4-метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он.
(48,5К)-4-Метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он (промежуточное соединение 14) (4,70 г,
20.1 ммоль) растворяли в 70 мл ДМФА и охлаждали до 0°С. Добавляли в атмосфере аргона №Н (964 мг, 60% в масле, 24,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при 0°С. Добавляли 4-(4,6-дихлорпиримидин-2-ил)морфолин (3,70 г, 20,1 ммоль), растворенный в 30 мл ДМФА, и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при 0°С с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакцию гасили добавлением водного Ν^Ο с последующим разбавлением ЕЮЛс; органические растворители разделяли, промывали соляным раствором, сушили над М§804, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (80 г δΐ02), применяя ЕЮЛс в гексане от 0 до 100% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (3,64 г, 48%).
ЖХ/МС: [М+Н] 382,2, 384,1; К! 1,10 мин; (ЖХ/МС способ 1).
'Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-ф: δ 7,77 (д, 1Н), 7,38-7,33 (м, 2Н), 5,39 (д, 1Н), 5,07-4,98 (м, 1Н), 3,753,55 (м, 8Н), 1,64 (д, 3Н).
b) (48,5К)-3-(2'-Амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметид-[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5тиазол-2-илоксазолидин-2-он.
К раствору (48,5К)-3-(6-хлор-2-морфолин-4-ил-пиримидин-4-ил)-4-метил-5-тиазол-2илоксазолидин-2-она, полученного на стадии а) (1,30 г, 3,40 ммоль), в 20 мл диметоксиэтана добавляли в атмосфере аргона 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4-(трифторметил)пиримидин-2-амин (1,08 г, 3,75 ммоль), Р0С12(0ррГ)-СН2С12 (214 мг, 262 мкмоль) и 2 М водным карбонат натрия (5,11 мл,
10.2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 30 мин. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли 80 мл Е!0Ас, органические растворители промывали водным Ν^Ο и соляным раствором, сушили над М§804, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией (80 г δΐ02), применяя Е!0Ас в гексане от 0 до 100% для того, что- 20 029714
бы получить пример 1 в виде аморфного твердого остатка (1,20 г, 69%).
ЖХ/МС: [М+Н] 509,0; К1 0,99 мин; (ЖХ/МС способ 1).
'Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб): δ 8,58 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,87 (д, 1Н), 7,64 (ушир.с, 2Н), 7,41 (с, 1Н), 5,89 (д, 1Н), 5,10-5,04 (м, 1Н), 3,75-3,55 (м, 8Н), 1,62 (д, 3Н).
Пример 2. (48*,58*)-3-(2'-Амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он
a) (48*,58*)-3-(6-Хлор-2-морфолинопиримидин-4-ил)-4-этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он.
К раствору (4К*,5К*)-4-этил-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она (промежуточное соединение 2)
(217 мг, 0,98 ммоль) в ДМФА (2 мл) добавляли при комнатной температуре в атмосфере аргона ΝαΙΙ (51,4 мг, 1,18 ммоль). Через 20 мин добавляли суспензию 4-(4,6-дихлорпиримидин-2-ил)морфолина (230 мг, 0,98 ммоль в ДМФА (1 мл) и реакционную смесь перемешивали при 85°С в течение 20 мин. Раствор гасили при 0°С водным N114С1, экстрагировали этилацетатом и органические слои сушили над Να28Ο4, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 20% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (375 мг, 91%).
ЖХ/МС: [М+Н] 419,1; К1 1,26 мин; (ЖХ/МС способ 1).
b) (48*,58*)-3-(2'-Амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-он.
К раствору (4К*,5К*)-3-(6-хлор-2-морфолинопиримидин-4-ил)-4-этил-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-она, полученного на стадии а), в ΌΜΕ (2 мл) добавляли при комнатной температуре в атмосфере аргона 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4(трифторметил)пиримидин-2-амин (76 мг, 0,26 ммоль), раствор 2 М водного №2СО3 (0,36 мл, 0,72 ммоль) и тетракис-(трифенилфосфин)палладий (27,6 мг, 24 мкмоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гексане от 0 до 20% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение (125 мг, 95%) в виде желтого масла.
ЖХ/МС: [М+Н] 54 6,2; К1 1,17 мин; (ЖХ/МС способ 1).
'Н-ЯМР (400 МГц, СНС13-0): δ 8,63 (с, 1Н), 7,68 (с, 1Н), 7,31 (д, 2Н), 6,96 (д, 2Н), 5,49 (ушир.с, 2Н), 5,27 (д, 1Н), 4,66-4,61 (м, 1Н), 3,84 (с, 3Н), 3,80-3,73 (м, 8Н), 2,30-2,00 (м, 2Н), 1,08 (т, 3Н).
Пример 3. (48,58)-3-(2'-Амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4(гидроксиметил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он
а) (48,58)-4-(((трет-Бутилдифенилсилил)окси)метил)-3-(6-хлор-2-морфолинопиримидин-4-ил)-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-он.
К раствору (48,58)-4-(((трет-бутилдифенилсилил)окси)метил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2она (промежуточное соединение 10) (1,65 г, 3,57 ммоль), 4-(4,6-дихлорпиримидин-2-ил)морфолина (920 мг, 3,93 ммоль) и С§2СО3 (1,75 г, 5,36 ммоль) в диоксане (20 мл) добавляли после продувания аргоном 4,5-бис-(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен (145 мг, 250 мкмоль) и РЬ2(ЬЬа)3 (65 мг, 0,071 ммоль) и реакционную смесь нагревали в течение 5 ч при 100°С. Реакционную смесь добавляли к 10% водному раствору ΝαΙ 1СО3 и экстрагировали ЕЮАс. Объединенные экстракты промывали соляным раствором, сушили над Мд8О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гептане от 0 до 50% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (2,33 г, 94%).
ТСХ (гептан/ЕЮАс 1:1) К^0,52; ЖХ/МС: [М+Н] 659,661; К1 1,58 мин; (ЖХ/МС способ 2).
1Н-ЯМР (400 МГц, СЮСЬ): δ 7,64 (м, 4Н), 7,54 (с, 1Н), 7,55-7,35 (м, 6Н), 7,26 (м, 2Н), 6,95 (д, 2Н), 5,21 (д, 1Н), 4,56 (м, 1Н), 4,22 (дд, 1Н), 3,96 (дд, 1Н), 3,84 (с, 3Н), 3,60-3,40 (м, 8Н), 1,09 (с, 9Н).
- 21 029714
b) (48,58)-3-(2'-Амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(((третбутилдифенилсилил)окси)метил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он.
Раствор (48,58)-4-(((трет-бутилдифенилсилил)окси)метил)-3-(6-хлор-2-морфолинопиримидин-4ил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она, полученного на стадии а) (150 мг, 228 мкмоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4-(трифторметил)пиримидин-2-амина (108 мг, 364 мкмоль), 20% водного Ж2СО3 (0,24 мл, 2,28 ммоль) и РйС12(йррГ)-СН2С12 (18,6 мг, 23 мкмоль) в ΏΜΕ (2 мл) в атмосфере аргона перемешивали при 80°С в течение 8 ч. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс и промывали насыщенным раствором ЖНСО3, Н2О и соляным раствором, сушили над Мд8О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией, применяя ЕЮАс в гептане от 0 до 33% для того, чтобы получить указанное в заголовке соединение в виде светло-желтой пены (68 мг, 28%).
ТСХ (гептан/ЕЮАс 1:1) К^0,32; £К=1,663 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 786; К 1,48 мин; (ЖХ/МС способ 2).
c) (48,58)-3-(2'-Амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4(гидроксиметил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-он.
К раствору (48,58)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(((третбутилдифенилсилил)окси)метил)-5-(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она, полученного на стадии Ь) (68 мг, 65 мкмоль), в ТГФ (2 мл) добавляли по каплям при 0°С 1 М ТВАР в ТГФ (0,05 мл, 0,05 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали в течение 30 мин при 0°С и в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией, применяя соотношение гексан/СН2С12/МеОН от 100:100:5 до 0:100:5 с последующей препаративной ВЭЖХ (^а£ег5 8ип Иге С18, 30x100 мм, 5 мкм; 0,1% ТРА-вода/ацетонитрил; градиент ацетонитрила 3050% в течение 20 мин), получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (18 мг, 50%).
ТСХ (СН2С12/МеОН 19:1) К^0,40; £К=0,998 мин (СЭЖХ 1); ЖХ/МС: [М+Н] 548; К 0,96 мин; (ЖХ/МС способ 2).
'Н-ЯМР (600 МГц, ДМСО-а6): δ 8,60 (с, 1Н), 7,64 (ушир.с, 2Н), 7,53 (с, 1Н), 7,34 (д, 2Н), 7,00 (д, 2Н), 5,58 (д, 1Н), 5,32 (т, 1Н), 4,59 (м, 1Н), 4,00 (м, 1Н), 3,82 (м, 1Н), 3,76 (с, 3Н), 3,75-3,55 (м, 8Н).
Примеры 4-14.
Примеры 4-14 в табл. 1 ниже можно получить, применяя способы, аналогичные способам, описанным в примерах 1-3, применяя подходящее промежуточное соединение, являющееся бороновым эфиром, и оксазолидинон.
Таблица 1
Номер примера Структура и название Щ-ЯМР ЖХ/МС
О Щ-ЯМР (400 МГц, СНС13-Ф) : δ
РЧ^Р Ν^Ν 8,64 (с, 1Н) , 7,69 (с, 1Н) , 7,39-7,50 (м, 5Н), 5,82 (д, ЖХ/МС (способ 2):
Η2Ν^Ν о 1Н) , 5,46 (ушир.с, 2Н) , время удерживания:
4 5,02-4,96 (м, 1Н), 3,87-3,73 1,19 мин;
(45* , 5Н*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'- (м, 8Н), 1,84-1,72 (м, 1Н), масс [М+Н]: 516,2
1,59-1, 66 (м, 1Н) , 0,52 (т,
(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)- ЗН)
4-этил-5-фенилоксазолидин-2-он
0
рХр ν^ν . Щ-ЯМР (600 МГц, ДМСО-а6) : δ
8,61 (с, 1Н), 7,64 (ушир.с, 2Н), 7,51-7,35 (м, 6Н), 5,45 ЖХ/МС (способ 2):
N ν Д. # время удерживания:
5 и 1 Г Л Н21\Г N О (д, 1Н), 4,73-4,52 (м, 1Н), 1,11 мин;
3,78-3,54 (м, 8Н), 1,61 (д, масс (Е5+): 502,2
(45,55)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'- ЗН)
(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-
4-метил-5-фенилоксазолидин-2-он
- 22 029714
- 23 029714
ΗοΝ
(45,55)-3-(2’-амино-2-морфолин-4-ил-4’трифторметил-[4,5’]бипиримидинил-б-ил) 4-гидроксиметил-5-фенилоксазолидин-2-он
Щ-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6) : δ
8, 61 (С, 1Н), 7,61 (ушир.с,
2Н) , 7,53 (с, 1Н), 7,50-7,31
(м, 5Н) , 5,65 (д, 1Н), 5,34
(т, 1Н) , 4, 66-4,59 (м, 1Н) ,
4, 08- -3, 96 (м, 1Н), 3,92-3,83
(м, 1Н) , 3,73-3,57 (м, 8Н)
ЖХ/МС (способ 2):
время удерживания:
0,97 мин; масс [М+Н]: 518,1
Η2Ν N о"'
(45, 55)-3-(2’-амино-2-морфолин-4-ил-4’трифторметил-[4,5’]бипиримидинил-б-ил)4-метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он
С/
-У Ак н\
аУТЗ......о' -А - X 1 ' ’+.·/. /· V у,+ .у; ~у,у; " с: у ‘ “п - - +, ( 1 -“У":-; уууууД С/
,А..
он
-уу:; -
Η2Ν' ΊΨ о'"
(45, 55)-3- (2’-амино-2-морфолино-4’(трифторметил)-[4,5’-бипиримидин]-6-ил)4-(гидроксиметил)-5-(4-(3гидроксипропокси)фенил)оксазолидин-2-он
Щ-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά): δ 8,60 (с, 1Н), 7,98 (д, 1Н), 7,89 (д, 1Н), 7,64 (ушир.с, 2Н), 7,44 (с, 1Н), 6,28 (д, 1Н), 5, 30-5, 20 (м, 1Н) , 3,78-3,61 (м, 8Н), 1,05 (д,
ЗН)
ЖХ/МС (способ 1) :
время удерживания:
1,01 мин; масс [М+Н]: 509,2
.. · · : : δ
. . ~ X. г ',
, , , ЖХ XX .-- + 3.--=
, /,!“ оу УУ’-Д ууугуу ~ ·";
, , У г _ , т/ УУ.™..,’
, у. У У, Χ-ΖΧ : ~
, , - ’ -м -
• 3
'7; δ
63 (уИ1Ир. о.
Ж/ЖЛяжаЖ
---и - у г -уу
Ь 4,87 [чу : . “ ‘ усу;
XX Н' :
-Н-ЯМР (400 МГц, дмсо-а+ : δ
8, 60 (С, 1Н) , 7,62 (ушир • с,
2Н) , 7,53 (с, 1Н) , 7,31 (д,
2Н) , 7,00 (Д, 2Н) , 5, 57 (Д,
1Н), 5, 30 (Т, 1Н) , 4,60 (м,
1Н), 4,53 (т, 1Н) , 4,04 (м,
2Н) , 3, 99 (м, 1Н) , 3, 81 (м,
1Н), 3, 63 (м, 8Н) , 3,55 (м,
2Н) , 1, 85 (м, 2Н)
ЖХ/МС (способ 1):
время удерживания:
0,84 мин; масс [М+Н] : 592, 3
Биологическая активность.
Активность соединения согласно настоящему изобретению можно оценить следующими способами ίη νΐίΓο и ίη νίνο.
Получение разбавлений соединений (384-луночные).
Испытуемые соединения растворяли в ДМСО (10 мМ) и переносили в 1,4-мл стандартные калибровочные кюветы с плоским дном или клинообразные стандартные калибровочные кюветы, содержащие уникальный двухмерный матриксный чип индивидуальными хабами соединений компании Новартис. Количество данных чипов четко связано с ΝοναΓίίδ РБагша ШтЪеяз. Исходные растворы хранили при 20°С, если не применяли непосредственно. Для способа испытания пробирки размораживали и идентифицировали сканером, посредством этого генерируя рабочий лист, который направлял последующие рабочие стадии.
Соединения или разбавляли вручную в ДМСО для отдельных экспериментов (96-луночные, обеспечивающие 10 соединений при 8 (одноточечные) концентрациях), как описано, или получали, как описано
- 24 029714
ниже, при испытании в 384-луночных. Данный формат обеспечивает максимум 40 отдельных испытуемых соединений при 8 концентрациях (одноточечные), включая 4 эталонных соединения. Протокол разбавления включал получение "планшетов предварительного разбавления", "эталонных планшетов" и "аналитических планшетов".
Планшеты предварительного разбавления: полипропиленовые 96-луночные планшеты применяли в качестве планшетов предразбавления. Суммарно получали 4 планшета предварительного разбавления, содержащие 10 испытуемых соединений, каждое с положениями на планшете А1-А10, одно стандартное соединение в А11 и один контроль ДМСО в А12. Схема стадий разбавления суммирована в табл. 2. Программы записаны, чтобы проводить данные стадии отбора пипеткой на роботах НашШопЗТАК.
Таблица 2
Схема разбавления для планшетов предварительного разбавления
с Объем (мкл) Концентрация, (мкМ) Объем (мкл) ДМСО Объем (мкл) Концентрация, (мкМ) Степень разбавления Конечная концентрация (мкМ)
А 30 10000 + 135 165 1820 1:5,5 10
В 50 1820 + 116 166 546 1:3,33 3
С 50 546 + 100 150 182 1: 3 1
ϋ 50 182 + 116 166 54, 6 1:3,33 0,3
Е 50 54, 6 + 100 150 18,2 1: 3 о, 1
Е 50 18,2 + 116 166 5,46 1:3,33 0, 03
С 50 5,46 + 100 -> 150 1, 82 1: 3 0, 01
Н 50 1, 82 + 116 -> 166 0,546 1:3,33 0, 003
ДМСО насыщали Н2О до концентрации 10%.
Эталонные планшеты: 100 мкл разбавления отдельных соединений, включая стандартное соединение и контроли 4 "планшетов предразбавления", переносили в 384-луночный "эталонный планшет", содержащий следующие концентрации: 1820, 564, 182, 54,6, 18,2, 5,46, 1,82 и 0,546 мкМ соответственно в 90% ДМСО.
Аналитические планшеты: затем идентичные "аналитические планшеты" получали отбором пипеткой 50 нл каждого из разбавлений соединения "эталонных планшетов" в 384-луночные "аналитические планшеты". Соединения смешивали с 4,5 мкл компонентов для анализа плюс 4,5 мкл фермента, соответствующие 1:181 разбавлению, обеспечивая конечную концентрацию 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01 и 0,003 мкМ соответственно. Приготовление "эталонных планшетов" осуществляли роботом МаНзх Р1а1еМа1е Р1из и репликацию "аналитических планшетов" роботом НишштдВйй.
Способ получения экспрессионных конструктов.
Каталитически активные человеческие ΡΙ3Κα, ΡΙ3Κβ, ΡΙ3Κδ и тТОК клонировали, экспрессировали и очищали, как описано (Мана 8.М., 81аи1£ег Р., Вгиеддеп 1., Риге! Р., 8сНпе11 С., РгйзсН С., ВгасНтапп 8., СНепе Р., Йе Роуег А., 8сНоетакег Κ., РаЬЬго Ό., ВаЬпе1 Ό., 81топеп М., МигрНу Р., Ртап Р., 8е11ег5 А., Вагта-ЕсНеуегпа С. (2008), Мо1. Сапсег ТНег. 7:1851-63 и Мана 8.М., РессЫ 8., Вгиеддеп 1., НиН Κ., 8сНпе11 С., РгйзсН С., Жде1 Т., А1езтапп М., ВгасНтапп 8., ЭогзсН М., СНепе Р., 8сНоетакег Κ., Эе Роуег А., Мепе/ез Ό., РаЬЬго Ό., 8е11егз А., Вагта-ЕсНеуета С., УоНуа С.Р. (2011), Мо1. Сапсег ТНег. принята в печать).
Биохимические анализы для РВ^, РВ^.
АТФ агент для детекции на основе люминесценции ^пазеВ^ получали у Рготеда (каталожный № У6714, партия № 236161) через Са1а1уз, АаШзеПеп, 8\\Л/ег1апй. (Р-альфа-фосфатидилинозитол (Р1), Р1уег, Воуте) получали у АуапН Ро1аг Ρΐρΐύ (каталожный № 840042С, партия № РР1-274), фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат (Р1Р(4,5)2 (АуапН, каталожный № 840046Х) или Ρ-α-фосфатидилинозитол (Р1) получали у АуапН Ро1аг Ρΐρΐύ (каталожный № 840042С, партия № РР1-274). Ρ-α-Фосфатидилсерин (Р8) получали у АуапН Ро1аг Ρΐρΐύ (каталожный № 840032С), н-октилгликозид у АуапН Ро1аг Ρΐρΐύ (каталожный № 10634425001). Люминесценция представляет собой хорошо разработанный способ получения данных, определяя концентрации АТФ, его можно, таким образом, применять для отслеживания активности многих киназ, независимо от их субстрата. Юпазе В1о Риттезсеп! Итаке Аззау (Рготеда, МаЙ1зоп/А1, и8А) представляет собой гомогенный НТ8 способ измерения киназной активности оценкой количества АТФ, оставшегося в растворе после киназной реакции.
50 нл разбавлений соединений распределяли на черные 384-луночные мелкообъемные несвязывающие стирольные (ХВ8) планшеты (Соз1аг каталожный № ХВ8 3676), как описано в параграфе 8.2. Ρ-α-фосфатидилинозитол (Р1), обеспечиваемый в виде 10 мг/мл раствора в метаноле, переносили в стеклянную пробирку и сушили в потоке азота. Затем его повторно суспендировали в 3% октилглюкозиде перемешиванием и хранили при 4°С. Добавляли 5 мкл смеси Р1/ОВ с подтипами Р131<а. и РВ^. Киназные реакции начинали добавлением 5 мкл АТФ-смеси, содержащей конечный объем 10 мкл 10 мМ
- 25 029714
ТМ8-НС1 рН 7,5, 3 мМ МдС12, 50 мМ ЫаС1, 0,05% СНЛР8, 1 мМ ИТТ и 1 мкМ АТФ, и осуществляли при комнатной температуре. Реакции прекращали 10 мкл Кша8еО1о и планшеты считывали через 10 мин в ридере 8упегду2, применяя время интегрирования 0,1 с/лунку. 2,5 мкМ ΝνΡ-ΒΟΤ226 (стандарт) добавляли к аналитическим планшетам, вызывая 100% ингибирование киназной реакции, и 0% ингибирование получали в случае растворителя (90% ДМСО в воде). ΝνΡ-ΒΟΤ226 применяли в качестве эталонного соединения и включали во все анализы в виде 16 точек разбавления в двух экземплярах.
Величины ингибирования 1С50 в процентах каждого соединения при 8 концентрациях (обычно 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,030, 0,010 и 0,003 мкМ) п=2 получали подгонкой сигмоидальной кривой зависимости ответа от дозы к графику данных анализа относительно концентрации ингибитора, как описано. Все приближения осуществляли программой ХЬй14 (ГО Викшекк 8о1ийопк, СиббГогб, ИК).
Биохимические анализы для ΡΙ3Κδ, ΡΙ3Κγ.
Универсальный набор реактивов для киназных реакций ТК-РКЕТ Абар1а™ приобретали у 1пуйгодеп Согрогайоп (Саг1кЬаб/СА, И8А) (каталожный № Ρν5099). Набор содержит следующие реагенты: Абар1а Еи-анти-АДФ антитело (меченное европием анти-АДФ антитело в забуференном ΗΕΡΕ8 соляном растворе, каталожный № Ρν5097), А1еха Р1иог® 647-меченая АДФ метка (А1еха Р1иог® 647-меченая АДФ метка в забуференном ΗΕΡΕ8 соляном растворе, каталожный № Ρν5098), запатентованный ТК-РКЕТ буфер для разбавления рН 7,5 (каталожный № Ρν3574).
Субстрат ΡΚ/^Ό, фосфатидилинозитол, получали у Шубгодеп (везикулы, состоящие из 2 мМ ΡΙ в 50 мМ ΗΕΡΕ8 рН 7,5; каталожный № Ρν5371). Субстрат ΡΙΚ3^, фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат (ΡΙΡ(4,5)2, получали у Шубгодеп (ΡΙΡ2:Ρ8 большие однослойные везикулы, состоящие из 1 мМ ΡΙΡ2: 19 мМ Ρ8 в 50 мМ ΗΕΡΕ8 рН 7,5, 3 мМ МдС12, 1 мМ ΕΟΓΑ; каталожный № Ρν5100).
Резонансный перенос энергии флуоресценции с временным разрешением (ТК-РКРТ) представляет собой способ, основанный на переносе энергии между двумя соседними красителями, от возбужденного электрона в одном красителе (донор) на электрон в соседнем красителе (акцептор) посредством резонанса, затем высвобождаемой в виде фотона. Данный перенос энергии обнаруживают увеличением флуоресценции акцептора, и снижением флуоресценции донора. В ТК-РКРТ анализах для протеинкиназ применяют долгоживущие лантанидные хелаты тербия или европия в качестве доноров, которые преодолевают помехи, связанные с автофлуоресценцией соединения или рассеянием света осажденным соединением, введением задержки после возбуждения источником возбуждения импульсной лампы. Результаты часто выражают в виде отношения интенсивностей флуорофоров акцептора и донора. Логометрический характер данной величины вводит поправку на различия анализируемых объемов между лунками, а также вводит поправку на эффекты тушения окрашенными соединениями. Абар1а™ анализ можно разделить на две фазы: фаза киназной реакции и фаза ДЦФ детекции. В фазе киназной реакции все компоненты киназной реакции добавляют в лунку и реакционную смесь выдерживают в течение установленного периода времени, конкретного для каждой киназы. После реакции, раствор для детекции Ευ-меченого антиДЦФ антитела, А1еха Р1иог® 647-меченной ДЦФ метки и ЭДТА (для прекращения киназной реакции) добавляют к лунке для анализа. АДФ, образовавшийся в результате киназной реакции, будет замещать А1еха Р1иог® 647-меченную АДФ метку из антитела, приводя в результате к снижению ΤК-РКΕΤ сигнала. В присутствии ингибитора количество АДФ, образовавшееся в результате киназной реакции, снижается, и полученное в результате интактное взаимодействие антитела с меткой сохраняет сильный ТКРВДТ сигнал. В Абар1а™ анализе, донор (европий-анти-АДФ антитело) возбуждается при 340 нм и будет переносить свою энергию к акцептору (А1еха Р1иог® 647-меченная АДФ метка). Излучение А1еха Р1иог® 647 можно отслеживать фильтром с центром при 665 нм, поскольку оно располагается между пиками излучения донора, который измеряют при 615/620 нм.
50 нл разбавлений соединений наносили на белый 384-луночный малообъемный полистирольный планшет, как описано в параграфе 2.2. Затем 5 мкл ΡΙ3Κγ и ΡΙ3Κδ и липидного субстрата (ΡΙ или ΡΙΡ2:Ρ8) с последующими 5 мкл АТФ (конечный объем для анализа 10 мкл) выдерживали при комнатной температуре. Стандартный реакционный буфер для Абар1а™ ΤК-РКΕΤ анализа содержал 10 мМ Тпк-НС1 рН 7,5, 3мМ МдС12, 50 мМ №С1, 1 мМ ИТТ, 0,05% ΟΗΑΡ8. Реакции прекращали 5 мкл смеси ЭДТА, содержащего Εи-меченное анти-АДФ антитело и А1еха Р1иог® 647-меченную АДФ метку, в ΤК-РКΕΤ буфере для разбавления (собственность ΙνΟ). Планшеты считывали через 15-60 мин в 8упегду2 ридере, применяя время интегрирования 0,4 с и задержку 0,05 с. Контроль для 100% ингибирования киназной реакции осуществляли заменой ΡΙ3Κ стандартным реакционным буфером. Контроль для 0% ингибирования получали с помощью плацебо соединений (90% ДМСО в Н2О). Стандартное соединение ΝνΡВСТ226 применяли в качестве эталонного соединения и выдерживали во всех планшетах для анализа в виде 16 точек разбавления в двух экземплярах.
Данные анализировали, применяя программное обеспечение для аппроксимации Εxсе1 или Сгарйраб Ρπκιη. Величины ЕС50 получали подгонкой сигмоидальной кривой зависимости эффекта от дозы к графику результатов анализа относительно концентрации ингибитора. Подгонку осуществляли программой ХЬй14 (ГО Викшекк 8о1ийопк, СиббГогб, υΚ). Определение ЕС50 величин процентного ингибирования для каждого соединения при 8 концентрациях (обычно 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,030, 0,010 и
- 26 029714
0,003 мкМ) п=2 осуществляли подгонкой сигмоидальной кривой зависимости эффекта от дозы к графику результатов анализа относительно концентрации ингибитора. Подгонку осуществляли программой ХЬй14 (ΙΌ Ви8ше88 8о1ийоп8, СийбГогб, иК).
Биохимический анализ для тТОК.
В ТК-БКЕТ анализах для протеинкиназ применяют долгоживущие лантанидные тербиевые или европиевые хелаты в качестве доноров, которые преодолевают помехи, вязанные с автофлуоресценцией соединения или рассеянием света осажденным соединением, введением задержки после возбуждения источником возбуждения импульсной лампы. Результаты часто выражают в виде отношения интенсивностей флуорофоров акцептора и донора. Логометрический характер данной величины вводит поправку на различия анализируемых объемов между лунками, а также вводит поправку на эффекты тушения окрашенными соединениями.
Анализы на связывание основаны на связывании и вытеснении А1еха Р1иог® 647-меченных, АТФконкурентных киназных ингибиторов исследуемой киназы. "Киназные метки" компании НкПгодеп разработаны, чтобы соответствовать широкому диапазону киназных мишеней, и основаны на АТФконкурентных киназных ингибиторах, делающих их пригодными для детекции любых соединений, которые связываются с АТФ сайтом или с аллостерическим сайтом, изменяющим конформацию АТФ сайта. Ингибиторы, которые связываются с АТФ сайтом, включают и киназные ингибиторы I типа, которые связываются только с АТФ сайтом, и ингибиторы II типа (например, С1ееуес®/иматиниб, сорафениб, В1КВ-796), которые связываются и с АТФ сайтом, и с гидрофобным сайтом, экспонированным в ЭРС-аут (неактивной) конформации. Ингибиторы III типа представляют собой соединения, которые не конкурируют с АТФ, расплывчато называемые аллостерическими ингибиторами. Исследование 15 различных ингибиторов III типа показало, что все, кроме одного соединения, детектировали в анализе на связывание с эффективностью, эквивалентной анализам на активность. Одним исключением было конкурирующее за субстрат соединение, и, таким образом, оно не являлось настоящим аллостерическим ингибитором.
В отличие от большинства анализов киназной активности, основанных на флуоресценции, Ьап1ка8егееп® Ей3' анализы на киназное связывание можно отслеживать непрерывно, что облегчает оценку соединений с медленной кинетикой связывания. Кроме того, в отличие от большинства анализов на активность, анализы на связывание можно осуществлять, применяя или активные или неактивированные киназные препараты, которые обеспечивают получение характеристик соединений, которые связываются предпочтительно с неактивированными киназами, таких как С1ееуее®/иматиниб и некоторые аллостерические ингибиторы.
В анализе на связывание киназы Ьап1ка8сгееп™ донор (Еи3+-анти-С8Т антитело) возбуждают при 340 нм, и оно будет передавать свою энергию акцептору (А1еха Р1иог® 647-меченный АТФконкурентный киназный ингибитор = Тгасег-314). Излучение Тгасег-314 (ингибитор А1еха Р1иог® 647) можно отслеживать фильтром с центром при 665 нм, поскольку оно расположено между пиками излучения донора, который измеряют при 615/620 нм. Связывание и Тгасег-314 и Еи3+-анти-С8Т антитела с киназой приводит в результате к высокой степени РКЕТ от Еи3+-донорного флуорофора к А1еха-Р1иог® 647-акцепторному флуорофору на Тгапсег-314. Связывание ингибитора с киназой конкурирует за связывание с меткой, приводя в результате к потере РКЕТ.
50 нл разбавлений соединений наносили на белый 384-луночный мелкообъемный полистирольный планшет, как описано в параграфе 2.2. Затем 5 мкл СЗТ-тТОК и европий-анти-СЗТ антитела с последующими 5 мкл Тгапсег-314 (конечный объем для анализа 10 мкл) выдерживали при комнатной температуре. Стандартный реакционный буфер для Ьап1Ьа8сгееп™ анализа на связывание киназы содержал 50 мМ НЕРЕЗ рН 7,5, 5 мМ М§С12, 1 мМ ЕСТА, 0,01% Р1игошс Р-127. Планшеты считывали через 60 мин в 8упегду2 ридере, применяя время интегрирования 0,2 мкс и задержку 0,1 мкс.
Для расчета излучательного соотношения, сигнал, испускаемый при 665 нм акцептором (А1еха Р1иог® 647-меченная Тгасег-314) делят на сигнал, испускаемый при 620 нм донором (Еи3+анти-С8Т антитело).
Контроль для 0% ингибирования обеспечивает плацебо соединений (90% ДМСО в Н2О). Контроль для относительного 100% ингибирования осуществляют добавлением 10 мкМ в смеси, содержащей СЗТ-тТОК и европий анти-СЗТ антитело. Дополнительный контроль для абсолютного 0% ингибирования обеспечивают Еи3+анти-С8Т антителом без СЗТ-тТОК.
Клеточные анализы для ΡΟΚα, -β и -δ.
А1рйа8сгееп (гомогенный анализ, усиленной за счет эффекта близости люминесценции, АЛЬФА, Регкт Е1тег) представляет собой нерадиоактивный способ анализа близости, основанный на изучении цепочек гранул, для исследования биомолекулярных взаимодействий в формате гомогенного микротитрационного планшета. Торговое название ЗигеРйе обозначает А1рка8сгееп анализы, которые приспособлены для количественной оценки фосфорилирования эндогенных клеточных белков в клеточных лизатах, применяя подобранные пары антител, которые состоят из антифосфокиназного и антикиназного антитела. Анализ обеспечивает получение характеристик киназной сигнализации в клетках, а также изме- 27 029714
рение эффектов киназных ингибиторов. А1рка§сгееп способ обеспечивает несколько преимуществ по сравнению со стандартными способами анализа, такими как ЕЫ§Л, поскольку он избегает требующих много времени процедур промывки и облегчает обработку планшета. Кроме того, его можно миниатюризировать по меньшей мере до 384-луночного формата и обеспечить чувствительность до фемтомолярного диапазона, в зависимости от сродства антител, включенных в отдельный А1рка§сгееп §игеРпе набор для анализа. Высокую чувствительность достигают внутренним амплификационным механизмом, который включает получение молекул синглетного кислорода. §игеР1ге наборы для анализа являются имеющимися в продаже для конкретных мишеней и включают пары проверенных антител (ТегктЕкпег). Данное сообщение описывает общие способы, применяемые для А1рка§сгееп §игеРпе анализов и соответствующие полуавтоматизированные стадии для стандартного анализа киназных ингибиторов в клеточных анализах.
Клеточные линии Ка1-1. стабильно сверхэкспрессирующие активированные изоформы ΡΚΚ класса I Ка1-1 рВЛВЕриго Муг-НА-кр110 дельта (Ка1-1 ΡΒΚδ) и Ка1-1 рВЛВЕриго Муг-НА-кр110 альфа (Ка1-1 ΡΒΚα) и Ка1-1 рВЛВЕриго Муг-НА-кр110 бета (Каΐ-1_ΡI3бета) получали, как описано (Мата §.М., §1аийег Р., Вгиеддеп 1., Риге!: Ρ., §скпе11 С., Ргкзск С., Вгасктапп §., Скепе Ρ., йе Ρоνе^ А., §скоетакег Κ., РаЪЪго Ό., СаЪпе1 Ό., §таопеп М., Мигрку Ь., Ршап Ρ., §е11егз Оагс1а-Еске\'егпа С.
(2008), Мо1. Сапсег Ткег. 7:1851-63 и Мата §.М., Ьесскг §., Вгиеддеп 1., Ник Κ., §скпе11 С., Ргкзск С., Ыаде1 Т., СТезтапп М., Вгасктапп §., Эогзск М., Скепе Ρ., §скоетакег Κ., Эе Ео\'ег А., Мепе/ез Ό., РаЪЪго Ό., §е11егз Сагаа-Еске\'егпа С., Уо1Ла С.Р. (2011), Мо1. Сапсег Ткег., принято в печать). Все
клеточные линии выращивали в готовой питательной среде (ЭМЕМ с большим содержанием глюкозы, 10% (об./об.) фетальная бычья сыворотка, 1% (об./об.) МЕМ ЫЕАА, 10 мМ НЕЕЕ§, 2 мМ Ь-глутамин, пиромицин (10 мкг/мл для Ка!-1 ΡΕ3ΙΚ3 и Ка!-1 ΡΒΚα, 4 мкг/мл для Ка!-1 ΡΒΚβ), 1% (об./об.) пенициллин/стрептомицин) до 90% конфлюентности при 37°С/5% СО2/90% влажности во влажной СО2 камере и разделяли дважды в неделю.
Следующие материалы применяли для р-Ак! (§473) детекции в клеточных лизатах Ка!-1: модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (ЭМЕМ) с высоким содержанием глюкозы (О1Ъсо Iηνк^одеη. Вазе1, §ук/ег1апй, каталожный № 41965), фетальная бычья сыворотка, инактивированная нагреванием, ОнаНПей (НЧ РВ§; Ойсо ^кгодеп, Вазе1, §^11хег1апй, партия № 16140), МЕМ заменимые аминокислоты (ЫЕАА; Ойсо ^кгодеп, Вазе1, §ук/ег1апй, каталожный № 11140), НЕЬЕЗ (Ойсо Iην^ι^одеп, Вазе1, §ук/ег1апй, каталожный № 15630), пенициллин/стрептомицин ^+§1^, 100х; ОЛсо ТпиКодеп, Вазе1, §ук2ег1апй, каталожный № 15140-122), Ь-глутамин (ОЛсо ^кгодеп, Вазе1, §ук2ег1апй, каталожный № 25030), пиромицин (§1дта А1йпск, Вискз, §ук2ег1апй, каталожный № Ρ9620), ДМСО (МЕКСО, Огеккоп, §ук/ег1апй, каталожный № 8,02912,2500), Н2О, МПНО-НСТ если не указано иначе (МГОЕГООКЕ ООАРЭООРЕ МПкроге, 2ид, §ук/ег1апй), бычий сывороточный альбумин (В§А; §1дта А1йпск, Вискз, §\\Кхег1апй каталожный № А8412), §игеР1ге р-Ак! 1/2 (§ег473) набор для анализа (ТегктЕкпег §ск\уег/епЬас1т §ук/ег1апй, каталожный № ТОКА§50Κ).
В р-Ак! (§473) §игеР1ге анализе измеряют фосфорилирование эндогенного клеточного Ак! 1/2 по §ег473 в клеточных лизатах. Применяя клетки Ка!-1, стабильно экспрессирующие туг-НА-меченные варианты изоформ р110 каталитической субъединицы человеческих ΡΕ3Κ<\ ΡΕ3ΙΚ/. или ΡΒΚβ, анализ разрабатывали в виде способа с двумя планшетами в 384-луночном формате.
Для испытания соединений, клетки высевали при плотности 4000 (Ка!-1 ΡΒΚδ), 7500 (Ка1-1 ΡΕ3Ι<α) или 6200 (Ка!-1 ΡΕ3Κβ) клеток в 20 мкл готовой питательной среды в 384-луночных планшетах, обработанных клеточными культурами и выращивали при 37°С/5% СО2/90% влажности в течение 24 ч. Незадолго до переноса соединений, готовую среду удаляли, добавляли 30 мкл буфера для анализа (ЭМЕМ с высоким содержанием глюкозы, 1х МЕМ ЫЕАА, 10 мМ НЕЕЕ§, 2 мМ Ь-глутамин, 0,1% (мас./об.) В§А) и 10 мкл предварительных разбавлений соединений переносили к клеткам. Для испытания после февраля 2010 г., готовую питательную среду заменяли на буфер для анализа, который показал аналогичные результаты (данные не показаны). После обработки соединением в течение 1 ч, клетки лизировали добавлением 20 мкл лизисного буфера, дополненного 0,24% (мас./об.) В§А. Детекцию р-Ак! (§ег473) осуществляли §игеР1ге р-Ак! 1/2 (§ег473) набором для анализа согласно инструкциям производителя, применяя 5 мкл клеточного лизата в суммарном объеме детекции 12 мкл.
Величины ингибирования Κ%0 в процентах для каждого соединения при 8 концентрациях (обычно 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,030, 0,010 и 0,003 мкМ) п=2 получали подгонкой сигмоидальной кривой зависимости эффекта от дозы к графику результатов анализа относительно концентрации ингибитора, как описано. Все приближения осуществляли программой ХЬЕк4 (Ю Визшезз §о1икопз, ОикйЕогй, υΚ).
Клеточный анализ для тТОК.
Клеточный анализ (384-луночный формат) разрабатывали для определения эффектов соединений на клеточную активность тТОК в МЕР (фибробласты эмбриона мыши) клетках, полученных из мышей, не содержащих Т§С1 (комплекс туберозного склероза 1), эффективного супрессора активности тТОК. Изза отсутствия Т§С1, тТОК констуитивно активируется, приводя в результате к постоянному фосфорилированию Ткг 389 §6 киназы 1 (§6Κ1), которая является одной из последующих мишеней тТОК.
- 28 029714
Применяя набор 8игеРпе, который позволяет определить фосфорилирование ТЬг389 в 86К1, анализ разрабатывали, проверяли и осуществляли в А1рка8сгееп формате, который обеспечивает количественное определение фосфо-Т389 86К1 в клеточных лизатах. Обработка МЕР Т8С1-/- клеток тТ0К специфическими (или специфическими для тТ0К пути) ингибиторами зависящим от дозы способом снижала концентрации фосфо-Т389 в 86К1, позволяя рассчитать величины 1С50. Это согласовывалось с величинами, полученными биохимическим тТ0К АТФ-связывающим анализом, обеспечивая количественное сравнение эффективности тТ0К ингибиторов.
Т8С1-/- МЕР клетки (1<\\ла1ко\унк1, Ό.Ι., /Напу, Н., Вапбига, РЬ., НеШегдег, К.М., О1одаиег, М., е1-На§йетйе, Ν. и 0пба, Н. (2002), Нит. Мо1. Оепек 11, 525-534) выращивали в среде БМЕМ с высоким содержанием глюкозы, дополненной 10% РВ8 (1пуйгодеп), 2 мМ глутамином и 1% (мас./об.) пенициллином/стрептомицином, при 37°С, 5% СО2.
Набор ЗигеРпе для определения фосфорилирования Р7086 киназы приобретали у Регкт Е1тег (р7086К р-Т389, #Т0К70850К), и анализ осуществляли согласно инструкции поставщика и согласно общему способу для 8игеРпе анализов. Вкратце, 5 мкл клеточного лизата на лунку переносили в 384луночные белые проксипланшеты (для получения данных по люминесценции) и смешивали с 7 мкл А и 5 мкл В (конечный объем: 12 мкл). После 3-часового выдерживания в темноте при комнатной температуре люминесценцию регистрировали Епу1§юп ридером (Регкт Е1тег). Необработанные клетки применяли в качестве контроля (верхний контроль) и в качестве нижнего контроля применяли клетки, обработанные 3 мкМ ВЕ2235. Аналитическое окно между сигналами, полученными для верхнего и нижнего контролей, определяли как 100%, и эффекты соединений выражали в виде ингибирования в процентах. Величины 1С50 рассчитывали из кривых зависимости эффекта от дозы графическим экстраполированием.
Результаты, полученные с применением описанных выше анализов, приведены в следующих таблицах.
Биохимический Р13Ка
Пример № Р13Ка/1С50 [мкмоль-л т]
1 0, 006
2 0, 078
3 0, 005
4 5 6 7 8 9 0, 047 0, 023 0, 071 0, 061 0, 057 0, 010
10 0,009
11 0,017
12 0,008
13 0,006
14 0,007
1602007/084786 пример 17 0,094
1602007/084786 пример 18 0,091
1602007/084786 пример 85 0,016
1602007/084786 пример 324 0,327
1602 007/0847 8 6 пример 34 3 0,015
- 29 029714
Биохимический ΡΙ3Κβ
Пример № Р13КЬ/1С50 [мкмоль-л Ч
1 0, 009
2 0, 096
3 0, 007
4 0, 159
5 0, 031
б 0,460
7 0, 110
8 0, 067
9 0, 015
10 0, 005
11 0, 010
12 0, 007
13 0, 011
14 0, 006
ИО2007/084786 пример 17 0,237
ИО2007/084786 пример 18 0,236
ИО2007/084786 пример 85 0, 015
ИО2007/084786 пример 324 1, 067
ИО2007/084786 пример 343
0, 027
- 30 029714
Биохимический ΡΙ3Κδ
Пример № ΡΙ3Κά/ΙΟ50 [мкмоль-л У
1 0, 003
2 0, 027
3 0, 004
4 0, 066
5 0, 147
6 0, 079
7 0, 041
8 0, 026
9 0, 010
10 0, 031
11 0, 014
12 0, 004
13 0, 003
14 0, 016
ИО2007/084786 пример 17 0, 848
ИО2007/084786 пример 18 1,978
ИО2007/084786 Пример 85 0, 024
ИО2007/084786 пример 324 1,219
ИО2007/084786 пример 343 0, 110
- 31 029714
Биохимический ΡΠΚγ
Пример № Р13Кд/1С5о [мкмоль-л +
1 0, 092
2 5, 8
3 0, 110
4 4,5
5 3,5
6 7
7 3
8 0,580
9 0,230
10 0,343
11 0, 102
12 0, 135
13 0, 100
14 0, 027
ИО2007/084786 пример 17 3,36
ИО2007/084786 пример 18 7,35
ИО2007/084786 пример 85 0,315
ИО2007/084786 пример 324 4,46
ИО2007/084786 пример 343 0, 170
Анализ связывания тТОК
Пример № тТог/1С50 [мкмоль-л +
1 0,251
2 2,8
3 0, 850
4 >9, 7
5 2,25
6 4,7
7 2,7
8 0, 960
9
10 1,01
11 0, 870
12 0, 750
13 0,230
14 0,490
- 32 029714
№02007/084786 пример 17 5,06
ИО2007/08478б пример 18 3,3
№02007/084786 пример 85 2,35
№02007/084786 пример 324 >9, 55
№02007/084786 пример 343 >10
Клеточный анализ Ρ!3Κα
Пример № КаП-ПЭКа/Юбо [мкмоль-л +
1 0, 031
2 1, 07
3 0, 074
4 0,597
5 0,434
б 0, 930
7 0,452
8 0, 173
9 0, 029
10 0, 085
11 0, 032
12 0, 063
13 0, 126
14 0, 046
№02007/084786 пример 17 0,369
№02007/084786 пример 18 0, 606
№02007/084786 пример 85 0, 127
№02007/084786 пример 324 1,730
№02007/084786 пример 343 >10
- 33 029714
2
Клеточный анализ ΡΙ3Κβ
10
11
12
13
14
№02007/084786 пример 17 №02007/084786 пример 18 №02007/084786 пример 85 №02007/084786 пример 324 №02007/084786 пример 343
0,751
0, 033
0,757
0,201
0,420
0,430
О, 026
0,254
О, 023
О, 026
О, 064
<0,003
О, 007
1,54
1,58
О, 156
5, 31
>10
Клеточный анализ ΡΙ3Κδ
Пример № Η3ί1-ΡΙ3Κά/Ι05ο [мкмоль-л Ч
1 0,0113
2 0, 105
3 0, 006
4 0,298
5 0, 119
6 0, 144
7 0, 123
8 0, 028
9 0, 011
10 0, 022
- 34 029714
11 0, 020
12 0, 004
13 <0,003
14 0, 004
ИО2007/08478 б пример 17 1,04
ИО2007/084786 пример 18 1,47
ИО2007/084786 пример 85 0, 139
ИО2007/084786 пример 324 б, 54
ИО2007/084786 пример 343 0, 105
Клеточный анализ тТОК
Пример № тТОН 36К(Т389) ТЗС1ко/1С50 [мкмоль-л-1 ]
1 0, 243
2 >2,27
3 0, 159
4 >2,27
5 0, 371
6 >2,27
7 >2,27
8 >4,55
9
10 0,221
11 0, 747
12 0 . 274
13 1, 07
14 0, 724
ИО2007/084786 пример 17 2, 12
ИО2007/084786 пример 18 >2,27
ИО2007/084786 пример 85 1, 03
ИО2007/084786 пример 324 >2,27
ИО2007/084786 пример 343 >2,27
Светостабильность.
Образцы, исследуемые на стабильность к воздействию света, обрабатывали в камере для исследования светостабильности (АЙаз СР8+, серийный номер 0704013). Растворы 1,0 мг/мл в этаноле получали для каждой молекулы и аликвоты 0,5 мл распределяли в подходящие микропробирки. Все измерения осуществляли в двух экземплярах и сравнивали со стандартом, обернутым в алюминиевую фольгу в процессе облучения светом. Растворы подвергали воздействию 19620 кДж/м2 в течение 13 ч. Образцы выдерживали при 15°С в процессе эксперимента. После обработки в световой камере растворы анализировали СЭЖХ (СЭЖХ 1, экспериментальная часть) при 254 нм. Площади пиков автоматически интегрировали и процент разрушения рассчитывали в виде разницы площади соответствующего пика в процентах эталонного образца и средней площади пика в процентах образцов, подвергнутых воздействию света
- 35 029714
(в двух экземплярах).
Данные, полученные с применением данного способа, показаны в следующей таблице.
Антипролиферативное ингибирование пролиферации клеточных линий.
Клетки и клеточные культуры, применяемые для исследования соединений 8СЬ-1 и 8СС12В2, представляют собой клеточные линии плоскоклеточного рака кожи (8СС) человека, полученные из природных, плохо дифференцированных 8СС. Клеточная линия 8СЬ-1 первоначально была разработана в лаборатории Ν. Ризешд в центре по исследованию рака в Гейдельберге, и характеристики ее роста т уйго по сравнению с нормальными кератиноцитами описаны ранее (Ыее1у е! а1., 1991). Клеточная линия 8СС12В2 была разработана, как описано ранее (ГИепта#) & ВескеП, 1981), и получена из кожи лица пациентов мужского пола с трансплантатами, которые проходили иммуносупрессивную терапию в течение 7 лет. Клеточную линию Пе1гой562 8СС человека получали в американской коллекции клеточных культур (АТСС). Пе1гой562 называют плоскоклеточным раком головы и шеи (НЫ8СС), и ее получали из фарингеальной 8СС опухоли. Клеточная линия Пейой562 содержит активирующую мутацию Н1047К Р1К3СА гена. Данная мутация известна как одна из "горячих" мутаций р110а-цепи, делающая данную киназную изоформу констуитивно активной и стимулирующей Ак/тТОК. путь, независимо от активации рецептора фактора роста. Все клеточные линии 8СС хранили и выращивали в модифицированной Дульбекко среде Игла (ЭМЕМ) (ОгЪсо; каталожный № 10938), которую дополнительно снабжали 5%РС8 (ОзЬсо; каталожный № 16000-044), 100 мкМ пируватом натрия (ОтЬсо; каталожный № 11360-039), 10 мМ НЕРЕ8 (ОзЬсо; каталожный № 91002-066), смесью 50 ед./мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (ОзЬсо; каталожный № 15070-063) и 2 мМ Ь-глутамином (ОтЬсо; каталожный № 25030-024). Все концентрации указаны в виде конечных концентраций. Клетки размножали в колбах Согшпд Соз1аг с выпускными крышками, применяя один из двух размеров колбы, область наращивания 75 см2 (Согшпд; каталожный № 430641) или 150 см2 (Согшпд, каталожный № 430825). Клеточные культуры стандартно выдерживали при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2, и 80% относительной влажности (тип Негаеиз).
Измерение клеточной пролиферации.
Клетки 8СС или кератиноцитных линий (Пейой562, 8СС12В2, 8СЬ1, НаСаТ) применяли для анализов пролиферации, когда они достигали приблизительно 80-90% конфлюентности. Затем клетки собирали после опосредованного трипсином выделения из колб для культур, промывали культуральной средой, содержащей 10% РС8, считали в гемоцитометре и разбавляли полной культуральной средой с 5% РС8, получая плотность клеток 5х104 клеток/мл. 100 мкл данной клеточной суспензии (например, 5000 клеток) переносили в каждую лунку 96-луночного планшета для тканевых культур с белыми стенками (Сο^и^ид-Сοзΐа^ агйс1е #3917). Затем клеткам позволяли осесть, помещая их в СО2 инкубатор на 45-60 мин. Затем объем 100 мкл культуральной среды, содержащей двукратную требуемую конечную концентрацию испытуемого соединения, добавляли к каждой лунки из четырех одинаковых лунок. В одну из четырех одинаковых лунок помещали 100 мкл культуральной среды без испытуемого соедине- 36 029714
ния в качестве контроля (показано на фигурах с данными с сокращением по срб на х-оси). Затем клеточные культуры выдерживали в присутствии или отсутствии испытуемых соединений в течение в сумме 26-28 ч. Клеточную пролиферацию определяли на основе включения бромдезоксиуридина (Вгби) в клеточную ДНК, применяя хемилюминесцентный Вгби Се11 РгоЫегайоп ЕЬ^А (КосЬе агЪс1е #11669915001). Вкратце, Вгби реагент разбавляли 1:100 готовой культуральной средой, получая концентрацию 100 мкМ Вгби. Из данного раствора 20 мкл добавляли к каждой лунке и клеточную культуру дополнительно выдерживали в течение 16-18 ч при 37°С при 5% СО2. Анализ на пролиферацию прекращали через 44-46 ч полным удалением культуральной среды и добавлением 200 мкл раствора для фиксации (обеспечиваемым ЕЬ^А набором) в течение 30 мин при комнатной температуре. После дополнительного выдерживания, промывки и способы проявления осуществляли точно, как описано в руководстве для ЕЬ^А анализа, предоставляемом производителем (КосЬе). Включение ВгбИ в ДНК определяли Вгби-специфическими антителами и количественно определяли на основе генерирования сигнала, опосредованного люциферазой, сопряженной с антителом. Испускание люминесценции измеряли в \лс1ог ϋμΐιΐ 1420 люминесцентном счетчике (Регкт Е1тег) и выражали в виде относительных единиц люминесценции (например, экспериментальные точки, указанные как КЬи/с) в секунду. Экспериментальные точки для каждой лунки переносили в \\лпс.1о\уз® Ехсе1 электронные таблицы для расчета средних величин и величин стандартного отклонения. По данным величинам строили графики, применяя функцию подгонки к сигмоидальной кривой, имеющуюся в 0η§ΐη 7.5® программном обеспечении.
Антипролиферативная активность соединений, измеренная на клеточных линиях δСС.
Данные, полученные с применением данных δ(Ά и кератиноцитных клеточных линий, показаны в
следующей таблице. Все величины, указывающие на антипролиферативную активность, представляют собой наномолярные ^50 концентрации, полученные в двух независимых анализах, применяя или δСС клеточные линии δΟΕ-1, δСС12В2, 1)е1гоП562. или НаСаТ кератиноцитную клеточную линию:
Пример № ЗСС12В2 ЗСЪ-1 ΟθίΓθί5562 НаСаТ
измерение #1 #2 #1 #2 #1 #2 #1 #2
пример 1 1289 703 351 268 598 440 282 298
И02007/08478 б пример 17 5823 4938 4891 3302 3084 4408 2796 3961
И02007/08478 6 пример 18 5737 5250 4267 3267 2813 4550 1655 3078
И02007/08478 6 пример 8 5 1645 1144 1025 636 1905 1448 1057 1017
И02007/08478 6 пример 324 6296 6040 3304 3700
И02007/08478 б пример 343 4861 2471 2624 1683 2393 1371 1616 1490
Все величины представляют собой наномолярные концентрации Κ'\0.
Проникновение через кожу.
Проникновение через кожу/проникающую способность одного репрезентативного соединения настоящего изобретения испытывали следующим способом.
Πι νίΐΐΌ испытание для определения проникновения через кожу и проникающей способности. Соединение наносили в виде 0,5% растворов в пропиленгликоле, смешанном или с этанолом, или с
олеиловым спиртом, на кожу свиньи, помещенную в статические диффузионные ячейки Франца. В конце 48-часового периода воздействия концентрации лекарственного средства измеряли в коже (после удаления рогового слоя) и в приемнике. Раствор приемника представляет собой смесь 2 объемных частей физиологического раствора с фосфатным буфером (РВδ) и 1 объемной части фетальной телячьей сыворотки (ΡСδ).
- 37 029714
Проникновение через кожу и проникновение ш νίΐΐΌ.
При мер Источник кожи (а) Состав Концентрация [%]соединения Концентрация в коже [мкг/г] Скорость проникновения [нг/см2/ч]
1 свинья РСг + этанол (7+3) 0,5 10,8+1,7 1,0+0,3
1 свинья РО/ОА (9+1) (С) 0,5 107,6+31,4 301,1+129,5
Концентрации в коже указаны в виде средней величины ± стандартное отклонение четырех определений:
(a) : кожу получали из 4-месячных фермерских свиней (Ьаийгасе X Веи1§сЬе§ ЕйеЬсЬ^ет);
(b) : 7 объемных частей пропиленгликоля (ΡΟ), смешанные с 3 объемными частями этанола;
(c) : 9 объемных частей ΡΟ, смешанные с 1 объемной частью олеилового спирта (ОА).
Соединения примера 1 хорошо проникают в кожу свиньи ш νίΐΐΌ, тогда как скорость проникновения через кожу свиньи является низкой, указывая на слабое системное воздействие. Кожа свиньи является аналогичной человеческой коже в отношении защитной функции и структуры.
Испытания 1и у1уо для определения проникновения в дерму обработанных местно свиней.
Небольшие участки кожи (4 см2) на дорсолатеральной стороне молодых домашних свиней обрабатывали местно 0,5% растворами или суспензиями через различные интервалы времени (2 и 24 ч) перед определением количества лекарственного средства. В данном эксперименте обрабатывали 4 свиней и соединение вводили в соответствующей композиции в 4 различных места. Кожные лоскуты с обработанными местами в центре вырезали и удаляли. Кожные лоскуты расстилали и нагретые металлические блоки помещали на испытуемые места на 1 мин, вызывая отделение эпидермиса от дермы. После удаления отделенных эпидермальных слоев дермальные слои толщиной 1 мм получали из обработанной кожи с удаленным эпидермисом дерматомом. Из данных слоев собирали вырезанные 6 мм образцы (0 6 мм) и анализировали их на концентрацию испытуемого соединения ЖХ/МС. Описанный способ осуществляли, осторожно избегая загрязнения дермальных образцов соединением, присоединенным к поверхности эпидермиса.
В следующей таблице представлены дермальные концентрации соединения примера 1 в дермисе свиней при нанесении накожно в виде указанных составов. Данные в таблице приведены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего значения 8 определений (например, восемь образцов кожи анализировали для каждого момента времени).
Кожная ΡΚ 1и у!уо у свиней
Пример Состав композиции с соединением, добавленным до 0,5% Кожная концентрация [мкг/г], измеренная через 2 часа Кожная концентрация [мкг/г], измеренная через 24 часа
1 1% Тмееп®80, 98% вода, 1% НРМС 0,95+0,42 1,29+0,54
1 10% ОА, 89% вода, 1% Зергпео 2,58+0,48 0,37+0,13
1 10% ЕРОН, 89% воды, 1% НРМС 1,57+0,52 0,66+0,38
1 10% ЕРОН, 10% РС, 79% вода, 1% НРМС 0,68+0,2 0,52+0,24
Указано среднее значение ± стандартная ошибка среднего значения восьми определений.
Т\уееп®80: моноолеат полиоксиэтиленсорбитана.
ОА: олеиловый спирт.
ΡΟ: пропиленгликоль.
Е1ОН: этанол.
НРМС: гидроксипропилметилцеллюлоза.
Соединение примера 1 хорошо проникает в кожу свиньи, достигая дермиса ш у1уо после единичного нанесения.
- 38 029714

Claims (3)

  1. <claim-text>ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ</claim-text> <claim-text>1. Применение соединения формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли:</claim-text> <claim-text>Κ<sup</claim-text>
  2. <claim-text>>2</sup> представляет собой фенил, который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для метаположения и из С<sub>г</sub>С<sub>5</sub>-алкокси, гидрокси-С<sub>2</sub>-С<sub>4</sub>-алкокси или С<sub>г</sub>С<sub>2</sub>-алкокси-С<sub>2</sub>-С<sub>4</sub>-алкокси для параположения, или пиридил, или 5-членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 8,</claim-text> <claim-text>при получении лекарственного средства для лечения гиперпролиферативных заболеваний кожи, вызванных нарушенной регуляцией фибробластов кожи.</claim-text> <claim-text>который является незамещенным или замещенным в мета- и/или пара-положениях одним или двумя заместителями, независимо выбранными из метокси для мета-положения и из С1-С<sub>5</sub>-алкокси, гидрокси-С<sub>2</sub>С<sub>4</sub>-алкокси или С<sub>г</sub>С<sub>2</sub>-алкокси-С<sub>2</sub>-С<sub>4</sub>-алкокси для пара-положения.</claim-text> <claim-text>4. Применение по п.1 или 2, где в соединении формулы (I) или (1Ь) Κ<sup>2</sup> представляет собой пиридил.</claim-text> <claim-text>5. Применение по п.1 или 2, где в соединении формулы (I) или (1Ь) Κ<sup>2</sup> представляет собой 5членный моноциклический гетероарил, содержащий два гетероатома, выбранных из N или 8.</claim-text> <claim-text>6. Применение по пп.1-5, где в соединении формулы (I) или (1Ь) Κ<sup>1</sup> представляет собой метил.</claim-text> <claim-text>7. Применение по пп.1-5, где в соединении формулы (I) или (Ш) Κ<sup>1</sup> представляет собой этил.</claim-text> <claim-text>8. Применение по пп.1-5, где в соединении формулы (I) или (ГЬ) Κ<sup>1</sup> представляет собой гидроксиметил.</claim-text> <claim-text>9. Применение по п.1, где соединение выбрано из</claim-text> <claim-text>(48,5Κ)-3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол2-илоксазолидин-2-она,</claim-text> <claim-text>(48*,58*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(4метоксифенил)оксазолидин-2-она,</claim-text> <claim-text>(48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5(4-метоксифенил)оксазолидин-2-она,</claim-text> <claim-text>(48*,5Κ*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5фенилоксазолидин-2-она,</claim-text> <claim-text>(48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-метил-5фенилоксазолидин-2-она,</claim-text> <claim-text>(4Κ*,5Κ*)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(3метоксифенил)оксазолидин-2-она,</claim-text> <claim-text>(48,5Κ)-3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-этил-5-(тиазол-2ил)оксазолидин-2-она,</claim-text>
  3. 3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-этил-5-пиридин-3илоксазолидин-2-она,
    3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-пиридин-3илоксазолидин-2-она,
    (48.58) -3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)гидроксиметил-5фенилоксазолидин-2-она,
    - 39 029714
    (48.58) -3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'-трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол2-илоксазолидин-2-она,
    (48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5(4-(2-метоксиэтокси)фенил)оксазолидин-2-она,
    (48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-5-(4-(2гидроксиэтокси)фенил)-4-(гидроксиметил)оксазолидин-2-она или
    (48.58) -3-(2'-амино-2-морфолино-4'-(трифторметил)-[4,5'-бипиримидин]-6-ил)-4-(гидроксиметил)-5(4-(3-гидроксипропокси)фенил)оксазолидин-2-она.
    10. Применение по п.1, где соединение представляет собой (48,5Κ)-3-(2'-амино-2-морфолин-4-ил-4'трифторметил[4,5']бипиримидинил-6-ил)-4-метил-5-тиазол-2-илоксазолидин-2-он.
    11. Применение по любому из пп.1-10, где гиперпролиферативное заболевание кожи, вызванное нарушенной регуляцией фибробластов, представляет собой келоиды.
EA201790289A 2012-11-12 2013-11-11 Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные EA029714B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261725113P 2012-11-12 2012-11-12

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790289A1 EA201790289A1 (ru) 2017-06-30
EA029714B1 true EA029714B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=49667527

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790289A EA029714B1 (ru) 2012-11-12 2013-11-11 Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные
EA201590929A EA027987B1 (ru) 2012-11-12 2013-11-11 Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201590929A EA027987B1 (ru) 2012-11-12 2013-11-11 Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные

Country Status (43)

Country Link
US (3) US9296733B2 (ru)
EP (2) EP2922848B1 (ru)
JP (1) JP6262245B2 (ru)
KR (1) KR102153763B1 (ru)
CN (1) CN104718204B (ru)
AP (1) AP2015008347A0 (ru)
AR (1) AR093408A1 (ru)
AU (1) AU2013343022B2 (ru)
BR (1) BR112015010136A2 (ru)
CA (1) CA2890942C (ru)
CL (1) CL2015001202A1 (ru)
CO (1) CO7380758A2 (ru)
CR (1) CR20150248A (ru)
CU (1) CU24365B1 (ru)
CY (1) CY1119391T1 (ru)
DK (1) DK2922848T5 (ru)
EA (2) EA029714B1 (ru)
EC (1) ECSP15025093A (ru)
ES (1) ES2641820T3 (ru)
HK (1) HK1209108A1 (ru)
HR (1) HRP20171425T1 (ru)
HU (1) HUE034492T2 (ru)
IL (1) IL238239A (ru)
IN (1) IN2015DN02912A (ru)
JO (1) JO3334B1 (ru)
LT (1) LT2922848T (ru)
MA (1) MA38076A1 (ru)
MX (1) MX363436B (ru)
MY (1) MY174239A (ru)
NZ (1) NZ706591A (ru)
PE (1) PE20151006A1 (ru)
PH (1) PH12015501053B1 (ru)
PL (1) PL2922848T3 (ru)
PT (1) PT2922848T (ru)
RS (1) RS56336B1 (ru)
SG (1) SG11201503447QA (ru)
SI (1) SI2922848T1 (ru)
TN (1) TN2015000120A1 (ru)
TW (1) TWI608005B (ru)
UA (1) UA114001C2 (ru)
UY (1) UY35128A (ru)
WO (1) WO2014072956A1 (ru)
ZA (1) ZA201502175B (ru)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20140069235A (ko) 2011-09-27 2014-06-09 노파르티스 아게 돌연변이체 idh의 억제제로서의 3-피리미딘-4-일-옥사졸리딘-2-온
UY34632A (es) 2012-02-24 2013-05-31 Novartis Ag Compuestos de oxazolidin- 2- ona y usos de los mismos
US9296733B2 (en) 2012-11-12 2016-03-29 Novartis Ag Oxazolidin-2-one-pyrimidine derivative and use thereof for the treatment of conditions, diseases and disorders dependent upon PI3 kinases
MX355945B (es) 2013-03-14 2018-05-07 Novartis Ag 3-pirimidin-4-il-oxazolidin-2-onas como inhibidoras de idh mutante.
JP2018528236A (ja) 2015-09-24 2018-09-27 ドレクセル ユニバーシティ 真皮障害を治療または予防するための新規組成物および方法
MX2018014167A (es) 2016-05-18 2019-08-16 Piqur Therapeutics Ag Tratamiento de lesiones de la piel.
TW201929861A (zh) 2017-11-06 2019-08-01 瑞士商諾華公司 包含㗁唑啶-2-酮-嘧啶衍生物之調配物
EP4211171A2 (en) 2020-09-10 2023-07-19 Precirix N.V. Antibody fragment against fap
WO2023203135A1 (en) 2022-04-22 2023-10-26 Precirix N.V. Improved radiolabelled antibody
WO2023213801A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Precirix N.V. Pre-targeting

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007084786A1 (en) * 2006-01-20 2007-07-26 Novartis Ag Pyrimidine derivatives used as pi-3 kinase inhibitors

Family Cites Families (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB581334A (en) 1943-09-29 1946-10-09 Francis Henry Swinden Curd New pyrimidine compounds
JPS4921149B1 (ru) 1970-12-28 1974-05-30
JPS4921148B1 (ru) 1970-12-28 1974-05-30
DE2341925A1 (de) 1973-08-20 1975-03-06 Thomae Gmbh Dr K Neue pyrimidinderivate und verfahren zu ihrer herstellung
AT340933B (de) 1973-08-20 1978-01-10 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur herstellung neuer pyrimidinderivate und ihrer saureadditionssalze
US4994386A (en) 1987-07-13 1991-02-19 Pharmacia Diagnostics, Inc. Production of HBLV virus in the HSB-2 cell line
US4929726A (en) 1988-02-09 1990-05-29 Georgia State University Foundation, Inc. Novel diazines and their method of preparation
EP0330263A1 (en) 1988-02-25 1989-08-30 Merck & Co. Inc. Piperazinylalkylpyrimidines as hypoglycemic agents
GB9012311D0 (en) 1990-06-01 1990-07-18 Wellcome Found Pharmacologically active cns compounds
WO1992000970A1 (fr) 1990-07-03 1992-01-23 Mitsui Petrochemical Industries, Limited Compose de pyrimidine et sel pharmaceutiquement acceptable de ce compose
KR100275300B1 (ko) 1995-04-13 2000-12-15 고바야시 유키오 신규 4,6-디아릴피리미딘 유도체 및 그 염(novel 4,6-diarylpyrimidine derivatives and salts thereof)
JP3734907B2 (ja) 1996-12-19 2006-01-11 富士写真フイルム株式会社 現像処理方法
DK1020462T3 (da) 1997-07-24 2004-04-26 Zenyaku Kogyo Kk Heterocykliske forbindelser og antitumormiddel indeholdende disse som aktiv ingrediens
JPH11158073A (ja) 1997-09-26 1999-06-15 Takeda Chem Ind Ltd アデノシンａ３拮抗剤
US6440965B1 (en) 1997-10-15 2002-08-27 Krenitsky Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrimidine derivatives, their preparation and their use in the treatment of neurodegenerative or neurological disorders of the central nervous system
US6150362A (en) 1997-12-12 2000-11-21 Henkin; Jack Triazine angiogenesis inhibitors
DE69906397T2 (de) 1998-01-16 2004-02-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Benzosulfonderivate
US6489344B1 (en) 1998-06-19 2002-12-03 Chiron Corporation Inhibitors of glycogen synthase kinase 3
US7045519B2 (en) 1998-06-19 2006-05-16 Chiron Corporation Inhibitors of glycogen synthase kinase 3
JP2002535318A (ja) 1999-01-22 2002-10-22 アムジエン・インコーポレーテツド キナーゼ阻害薬
US6495558B1 (en) 1999-01-22 2002-12-17 Amgen Inc. Kinase inhibitors
JP2003503354A (ja) 1999-06-30 2003-01-28 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド Ｓｒｃキナーゼ阻害剤化合物
ATE253915T1 (de) 1999-06-30 2003-11-15 Merck & Co Inc Src-kinase hemmende verbindungen
AU6605200A (en) 1999-06-30 2001-01-31 Merck & Co., Inc. Src kinase inhibitor compounds
WO2001005783A1 (en) 1999-07-15 2001-01-25 Pharmacopeia, Inc. Bradykinin b1 receptor antagonists
JP2001089452A (ja) 1999-09-22 2001-04-03 Sankyo Co Ltd ピリミジン誘導体
CN1429222A (zh) 2000-02-17 2003-07-09 安姆根有限公司 激酶抑制剂
CN100355751C (zh) 2000-03-29 2007-12-19 西克拉塞尔有限公司 2－取代的4－杂芳基－嘧啶、其组合物及其用途
AU5261001A (en) 2000-04-27 2001-11-12 Imperial Cancer Research Technology Ltd Condensed heteroaryl derivatives
AU4114201A (en) 2000-04-28 2001-11-12 Tanabe Seiyaku Co Cyclic compounds
WO2002000647A1 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Heteroaryl-phenyl substituted factor xa inhibitors
AU9502601A (en) 2000-09-06 2002-03-22 Chiron Corp Inhibitors of glycogen synthase kinase 3
CA2422367C (en) 2000-09-15 2010-05-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
SE0004053D0 (sv) 2000-11-06 2000-11-06 Astrazeneca Ab N-type calcium channel antagonists for the treatment of pain
KR100947185B1 (ko) 2000-12-21 2010-03-15 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 단백질 키나제 억제제로서 유용한 피라졸 화합물 및 이를 포함하는 조성물
WO2002062766A2 (en) 2001-02-07 2002-08-15 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Melanocortin-4 receptor binding compounds and methods of use thereof
AU2002258400A1 (en) 2001-02-16 2002-08-28 Tularik Inc. Methods of using pyrimidine-based antiviral agents
EP1395561A1 (en) 2001-05-25 2004-03-10 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Carbamate and oxamide compounds as inhibitors of cytokine production
CA2450934A1 (en) 2001-06-19 2002-12-27 Marco Dodier Pyrimidine inhibitors of phosphodiesterase (pde) 7
US6603000B2 (en) 2001-07-11 2003-08-05 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Synthesis for heteroarylamine compounds
WO2003030909A1 (en) 2001-09-25 2003-04-17 Bayer Pharmaceuticals Corporation 2- and 4-aminopyrimidines n-substtituded by a bicyclic ring for use as kinase inhibitors in the treatment of cancer
WO2004078163A2 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
ATE466580T1 (de) 2002-03-15 2010-05-15 Vertex Pharma Azolylaminoazine als proteinkinasehemmer
DE60314603T2 (de) 2002-03-15 2008-02-28 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Zusammensetzungen brauchbar als protein-kinase-inhibitoren
EP1485380B1 (en) 2002-03-15 2010-05-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Azolylaminoazines as inhibitors of protein kinases
EP1485381B8 (en) 2002-03-15 2010-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Azolylaminoazine as inhibitors of protein kinases
WO2004000820A2 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Cellular Genomics, Inc. Certain aromatic monocycles as kinase modulators
EP1546115A4 (en) 2002-09-27 2010-08-04 Merck Sharp & Dohme SUBSTITUTED PYRIMIDINES
JP2006515274A (ja) 2002-10-08 2006-05-25 マサチューセッツ・インスティテュート・オブ・テクノロジー コレステロール輸送の調節のための化合物
US7223870B2 (en) 2002-11-01 2007-05-29 Pfizer Inc. Methods for preparing N-arylated oxazolidinones via a copper catalyzed cross coupling reaction
CA2507100C (en) 2002-11-21 2012-10-09 Chiron Corporation 2,4,6-trisubstituted pyrimidines as phosphotidylinositol (pi) 3-kinase inhibitors and their use in the treatment of cancer
CA2519677A1 (en) 2003-03-24 2004-10-07 Merck & Co., Inc. Biaryl substituted 6-membered heterocycles as sodium channel blockers
US20050014753A1 (en) 2003-04-04 2005-01-20 Irm Llc Novel compounds and compositions as protein kinase inhibitors
US7763627B2 (en) 2003-04-09 2010-07-27 Exelixis, Inc. Tie-2 modulators and methods of use
JP2007523875A (ja) 2003-07-15 2007-08-23 ニューロジェン・コーポレーション バニロイド受容体リガンドとしての置換ピリミジン−４−イルアミン類縁体
AU2004257289A1 (en) 2003-07-16 2005-01-27 Neurogen Corporation Biaryl piperazinyl-pyridine analogues
AR045944A1 (es) * 2003-09-24 2005-11-16 Novartis Ag Derivados de isoquinolina 1.4-disustituidas
WO2005099711A1 (en) 2004-04-13 2005-10-27 Icagen, Inc. Polycyclic pyrimidines as potassium ion channel modulators
GB0415365D0 (en) 2004-07-09 2004-08-11 Astrazeneca Ab Pyrimidine derivatives
GB0415364D0 (en) 2004-07-09 2004-08-11 Astrazeneca Ab Pyrimidine derivatives
MY145822A (en) 2004-08-13 2012-04-30 Neurogen Corp Substituted biaryl piperazinyl-pyridine analogues
MX2007006230A (es) * 2004-11-30 2007-07-25 Amgen Inc Quinolinas y analogos de quinazolinas y su uso como medicamentos para tratar cancer.
AU2005317176A1 (en) 2004-12-13 2006-06-22 Neurogen Corporation Piperazinyl-pyridine analogues
CN101080401A (zh) 2004-12-13 2007-11-28 神经能质公司 经取代的二芳基类似物
EP1836169B9 (en) 2004-12-28 2012-07-04 Kinex Pharmaceuticals, LLC Compositions and methods of treating cell proliferation disorders
CA2595205A1 (en) 2005-01-19 2006-07-27 Neurogen Corporation Heteroaryl substituted piperazinyl-pyridine analogues
CA2599320A1 (en) 2005-02-25 2006-08-31 Kudos Pharmaceuticals Limited Hydrazinomethyl, hydr zonomethyl and 5-membered heterocylic compounds which act as mtor inhibitors and their use as anti cancer agents
WO2006113704A2 (en) 2005-04-18 2006-10-26 Neurogen Corporation Subtituted heteroaryl cb1 antagonists
GB2431156A (en) 2005-10-11 2007-04-18 Piramed Ltd 1-cyclyl-3-substituted- -benzenes and -azines as inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
KR20080083188A (ko) 2006-01-11 2008-09-16 아스트라제네카 아베 모르폴리노 피리미딘 유도체 및 요법에서의 그 유도체의용도
WO2007120897A2 (en) * 2006-04-13 2007-10-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and intraluminal devices for inhibiting vascular stenosis
CL2007003847A1 (es) 2006-12-28 2008-04-18 Basf Ag Compuestos derivados de pirimidinas 2,4,5 tri-sustituidas; composicion farmaceutica que comprende a dichos compuestos; y su uso para el tratamiento del cancer.
US8173647B2 (en) 2007-02-06 2012-05-08 Gordana Atallah PI 3-kinase inhibitors and methods of their use
US7957951B2 (en) 2007-03-16 2011-06-07 Robert Bosch Gmbh Address translation system for use in a simulation environment
AU2008273889B2 (en) 2007-07-09 2012-03-08 Astrazeneca Ab Trisubstituted pyrimidine derivatives for the treatment of proliferative diseases
WO2009066084A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 F. Hoffmann-La Roche Ag 2 -morpholinopyrimidines and their use as pi3 kinase inhibitors
WO2009109605A1 (en) 2008-03-05 2009-09-11 Novartis Ag Use of pyrimidine derivatives for the treatment of egfr dependent diseases or diseases that have acquired resistance to agents that target egfr family members
AU2009228797B2 (en) 2008-03-26 2012-07-19 Novartis Ag 5imidazoquinolines and pyrimidine derivatives as potent modulators of VEGF-driven angiogenic processes
EP2276750A2 (en) 2008-03-27 2011-01-26 Auckland Uniservices Limited Substituted pyrimidines and triazines and their use in cancer therapy
US8575338B2 (en) 2008-04-09 2013-11-05 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Pyrimidine, pyridine and triazine derivatives as maxi-K channel openers
GB0815369D0 (en) 2008-08-22 2008-10-01 Summit Corp Plc Compounds for treatment of duchenne muscular dystrophy
CA2736361C (en) 2008-10-31 2017-10-10 Novartis Ag Combination of a phosphatidylinositol-3-kinase (pi3k) inhibitor and a mtor inhibitor
GB2465405A (en) 2008-11-10 2010-05-19 Univ Basel Triazine, pyrimidine and pyridine analogues and their use in therapy
WO2010068863A2 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Cystic Fibrosis Foundation Therapeutics, Inc. Pyrimidine compounds and methods of making and using same
JP5747440B2 (ja) 2009-02-06 2015-07-15 住友化学株式会社 ヒドラジド化合物及びその有害生物防除用途
EP2394999B1 (en) 2009-02-06 2014-01-29 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Aminopyrazine derivative and medicine
WO2010105243A1 (en) 2009-03-13 2010-09-16 Agios Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for cell-proliferation-related disorders
WO2010120994A2 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Wyeth Llc Ureidoaryl-and carbamoylaryl-morpholino- pyrimidine compounds, their use as mtor kinase and pi3 kinase inhibitors, and their synthesis
PL2432767T3 (pl) 2009-05-19 2013-11-29 Dow Agrosciences Llc Związki i sposoby zwalczania grzybów
TW201105662A (en) 2009-07-07 2011-02-16 Pathway Therapeutics Ltd Pyrimidinyl and 1,3,5-triazinyl benzimidazoles and their use in cancer therapy
WO2011017296A1 (en) 2009-08-04 2011-02-10 Schering Corporation 4, 5, 6-trisubstituted pyrimidine derivatives as factor ixa inhibitors
AR077999A1 (es) 2009-09-02 2011-10-05 Vifor Int Ag Antagonistas de pirimidin y triazin-hepcidina
SG179085A1 (en) 2009-09-09 2012-04-27 Avila Therapeutics Inc Pi3 kinase inhibitors and uses thereof
WO2011072174A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapeutically active compounds for use in the treatment of cancer characterized as having an idh mutation
GB201004200D0 (en) 2010-03-15 2010-04-28 Univ Basel Spirocyclic compounds and their use as therapeutic agents and diagnostic probes
EP2560488B1 (en) 2010-04-23 2015-10-28 Cytokinetics, Inc. Certain amino-pyridines and amino-triazines, compositions thereof, and methods for their use
AR081626A1 (es) 2010-04-23 2012-10-10 Cytokinetics Inc Compuestos amino-piridazinicos, composiciones farmaceuticas que los contienen y uso de los mismos para tratar trastornos musculares cardiacos y esqueleticos
AR081331A1 (es) 2010-04-23 2012-08-08 Cytokinetics Inc Amino- pirimidinas composiciones de las mismas y metodos para el uso de los mismos
US20130109643A1 (en) 2010-05-10 2013-05-02 The Johns Hopkins University Metabolic inhibitor against tumors having an idh mutation
EP2593425B1 (en) 2010-07-16 2018-10-17 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapeutically active compositions and their method of use
WO2012044727A2 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Novartis Ag Manufacturing process for pyrimidine derivatives
MX337179B (es) 2010-10-18 2016-02-15 Cerenis Therapeutics Holding Sa Compuestos, composiciones y metodos utiles para la movilizacion de colesterol.
GB201106829D0 (en) 2011-04-21 2011-06-01 Proximagen Ltd Heterocyclic compounds
JP2014505107A (ja) 2011-02-11 2014-02-27 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 過誤腫性腫瘍細胞を阻害する方法
CN102827073A (zh) 2011-06-17 2012-12-19 安吉奥斯医药品有限公司 治疗活性组合物和它们的使用方法
CN103764130A (zh) 2011-09-01 2014-04-30 诺华股份有限公司 用于治疗骨癌或者预防原发性癌细胞转移性播散入骨中的pi3k抑制剂
KR20140069235A (ko) 2011-09-27 2014-06-09 노파르티스 아게 돌연변이체 idh의 억제제로서의 3-피리미딘-4-일-옥사졸리딘-2-온
WO2013052395A1 (en) 2011-10-06 2013-04-11 Merck Sharp & Dohme Corp. 1,3-substituted azetidine pde10 inhibitors
UY34632A (es) 2012-02-24 2013-05-31 Novartis Ag Compuestos de oxazolidin- 2- ona y usos de los mismos
RU2630975C2 (ru) * 2012-05-16 2017-09-15 Новартис Аг Режим дозирования pi-3 киназы
RU2014154009A (ru) 2012-06-06 2016-08-10 Новартис Аг Комбинация ингибитора 17-альфа-гидроксилазы (с17,20-лиазы) и специфического ингибитора pi-3k для лечения онкологического заболевания
RU2705095C2 (ru) 2012-08-16 2019-11-05 Новартис Аг Комбинация ингибитора pik3 и ингибитора с-мет
RU2646760C2 (ru) 2012-10-23 2018-03-07 Новартис Аг Усовершенствованный способ получения 5-(2,6-ди-4-морфолинил-4-пиримидинил)-4-трифторметилпиридин-2-амина
US9296733B2 (en) 2012-11-12 2016-03-29 Novartis Ag Oxazolidin-2-one-pyrimidine derivative and use thereof for the treatment of conditions, diseases and disorders dependent upon PI3 kinases
EP2970242B1 (en) 2013-03-14 2017-09-06 Novartis AG 3-pyrimidin-4-yl-oxazolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
MX355945B (es) 2013-03-14 2018-05-07 Novartis Ag 3-pirimidin-4-il-oxazolidin-2-onas como inhibidoras de idh mutante.
CN103483345B (zh) 2013-09-25 2016-07-06 中山大学 Pi3k激酶抑制剂、包含其的药物组合物及其应用
CN103694218B (zh) 2013-12-05 2016-04-27 中山大学 嘧啶化合物、pi3k抑制剂、包含pi3k抑制剂的药物组合物及应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007084786A1 (en) * 2006-01-20 2007-07-26 Novartis Ag Pyrimidine derivatives used as pi-3 kinase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
ES2641820T3 (es) 2017-11-14
TWI608005B (zh) 2017-12-11
BR112015010136A2 (pt) 2017-07-11
KR102153763B1 (ko) 2020-09-09
JP2015536974A (ja) 2015-12-24
MX2015005914A (es) 2015-09-08
CN104718204B (zh) 2017-11-28
CO7380758A2 (es) 2015-09-10
TW201427974A (zh) 2014-07-16
EA027987B1 (ru) 2017-09-29
AU2013343022B2 (en) 2015-08-20
NZ706591A (en) 2016-03-31
SG11201503447QA (en) 2015-05-28
MX363436B (es) 2019-03-22
ZA201502175B (en) 2018-05-30
MY174239A (en) 2020-04-01
AR093408A1 (es) 2015-06-03
CN104718204A (zh) 2015-06-17
EP2922848B1 (en) 2017-06-28
LT2922848T (lt) 2017-09-25
JO3334B1 (ar) 2019-03-13
MA38076A1 (fr) 2018-02-28
US20140135330A1 (en) 2014-05-15
WO2014072956A1 (en) 2014-05-15
EA201590929A1 (ru) 2015-08-31
CR20150248A (es) 2015-07-01
DK2922848T5 (en) 2017-10-30
US9296733B2 (en) 2016-03-29
UA114001C2 (xx) 2017-04-10
JP6262245B2 (ja) 2018-01-17
HUE034492T2 (en) 2018-02-28
ECSP15025093A (es) 2019-03-29
HK1209108A1 (en) 2016-03-24
HRP20171425T1 (hr) 2017-11-17
CU20150050A7 (es) 2015-11-27
EP3199158A1 (en) 2017-08-02
EP3199158B1 (en) 2019-04-17
CU24365B1 (es) 2018-10-04
IN2015DN02912A (ru) 2015-09-11
CA2890942A1 (en) 2014-05-15
US20160168145A1 (en) 2016-06-16
IL238239A (en) 2017-05-29
TN2015000120A1 (en) 2016-06-29
RS56336B1 (sr) 2017-12-29
SI2922848T1 (sl) 2017-10-30
CL2015001202A1 (es) 2015-07-03
EP2922848A1 (en) 2015-09-30
AP2015008347A0 (en) 2015-04-30
CY1119391T1 (el) 2018-02-14
DK2922848T3 (da) 2017-10-09
PT2922848T (pt) 2017-10-05
UY35128A (es) 2014-06-30
EA201790289A1 (ru) 2017-06-30
PH12015501053A1 (en) 2015-07-27
AU2013343022A1 (en) 2015-04-23
US10202371B2 (en) 2019-02-12
KR20150082295A (ko) 2015-07-15
US20190382399A1 (en) 2019-12-19
PE20151006A1 (es) 2015-07-04
PL2922848T3 (pl) 2017-12-29
CA2890942C (en) 2021-01-12
PH12015501053B1 (en) 2015-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029714B1 (ru) Оксазолидин-2-онпиримидиновые производные
JP6064079B2 (ja) Ｃｄｃ７阻害剤
US11028074B2 (en) CD73 inhibitors
WO2017129116A1 (zh) 吡咯嘧啶五元氮杂环衍生物及其应用
US20220153766A1 (en) Condensed tricyclic compound used as kinase inhibitor
EA032102B1 (ru) Ингибитор киназы aurora a
US20220185815A1 (en) Pyrrolopyrazole derivative
US11465986B2 (en) Crystal form of c-MET inhibitor and salt form thereof and preparation method therefor
EA021241B1 (ru) ОКСАЗОЛО[5,4-b]ПИРИДИН-5-ИЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
US10556872B2 (en) Fatty acid synthase inhibitors and methods of use
CN115667275A (zh) 含硼化合物及其应用
AU2017203184A1 (en) Carbonic anhydrase inhibitors
US10550114B2 (en) Kinase inhibitors and their use in cancer therapy
WO2022150681A1 (en) Methods and compositions relating to clbp inhibition
NZ727108B2 (en) Ezh2 inhibitors for treating lymphoma

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU