KR20110029492A

KR20110029492A - 히알루론산의 분자량을 조절하는 방법

Info

Publication number: KR20110029492A
Application number: KR1020090087185A
Authority: KR
Inventors: 강대중; 송정민; 임종혁; 강재훈
Original assignee: 일동제약주식회사
Priority date: 2009-09-15
Filing date: 2009-09-15
Publication date: 2011-03-23
Also published as: WO2011034341A3; ES2535625T3; EP2479194B1; KR101132114B1; JP2013504679A; CN102630231B; BR112012005816A2; EP2479194A2; JP5750442B2; EP2479194A4; WO2011034341A2; US20120232261A1; CN102630231A; EP2479194B2; BR112012005816B1; ES2535625T5

Abstract

본 발명은 고분자 히알루론산을 저분자 히알루론산으로 만드는 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본발명은 고분자 히알루론산과 활성탄을 일정 분해 조건 하에서 반응시켜 히알루론산 고유의 특성은 유지하고 히알루론산 분자량은 일정하게 줄이는 방법에 관한 것이다.

히알루론산, 저분자, 스트렙토코커스 속 ID9102, 활성탄

Description

히알루론산의 분자량을 조절하는 방법 {Method of molecular weight control of hyaluronic acid}

본 발명은 고분자의 히알루론산을 점도와 탄성 그리고 수분 흡수 등의 고유의 특성을 유지한 채 저분자 히알루론산으로 제조하는 방법에 관한 것으로서 히알루론산과 반응하는 분해 매개체 종류와 효율적인 저분자 생성 조건을 통한 산업적으로 적용 용이한 고품질의 저분자 히알루론산 생산 방법에 관한 것이다.

히알루론산(Hyaluronic acid(HA), Hyaluronan, (C₁₄H₂₀NNaO₁₁)n (n>1000))은 생체 전반에 존재하는 고분자로써 glycosaminoglycan이라는 다당류이다. [도 1]과 같은 구조로써 β-1,3 결합의 D-glucuronic acid와 N-acetylglucosamine이 one unit으로 β-1,4 결합이 반복적으로 연결된 구조이다. 수용성 물질이며 유용한 분자량은 1,000~10,000,000 daltons에 이르는 광범위한 직쇄의 구조이다.

히알루론산은 1934년 Meyer와 Palmer에 의해서 소눈의 초자액으로부터 처음으로 발견되었고 피부, 눈의 초자체, 관절액, 근육, 탯줄, 닭벼슬 등에 많이 분포 되어 있기 때문에 이들의 기관에서 분리 추출 등을 통해서 얻어지기도 한다. 특히 태반이나 관절 내에 많이 분포하고 있는 것으로 알려져 있으며 대부분의 생산은 닭벼슬에서 추출한다. 그러나 생체 조직에서 히알루론산을 생산하는 것은 콘드로이틴 등의 고분자를 분리하기 어렵고 동물 유래의 병원성 물질에 대한 부담감이 많은 것으로 알려져 있다.

히알루론산은 염 구조로써 우수한 효능 효과를 보여 주고 있으며 보습효과가 강하여 물리적 마찰 상태에서 강력한 윤활 작용으로써 기능이 매우 우수하며 세균 등의 침입에 대한 보호 효과 등의 효능과 물성에 있어서 매우 바람직한 장점을 갖기 때문에 최근에는 히알루론산을 응용한 많은 제품 개발이 유행하고 있다. 이 같은 장점은 의약품이나 화장품으로서의 역할뿐만 아니라 의약부외품과 바이오 소재 그리고 식품에까지 적용될 수 있으며 히알루론산을 기반으로 하는 새로운 분야의 개발이 계속 되고 있다.

고분자 히알루론산의 기능적인 면은 점도 상승이나 관절 윤활 작용 그리고 수분 흡수 및 탄성 능력 등이 어우러져 의약품으로써 안과용 및 슬관절 주사제나 점안제 등으로 영역을 넓혀 왔으며 최근 세계적으로 폭발적인 히알루론산 시장 증대 현상을 감안하면 유도체 개발에 대한 가능성도 엿볼 수 있다.

고분자 히알루론산의 역할에 비해 저분자의 가능성은 이에 미치지 못했던 것 은 사실이다. 그러나 최근 저분자의 체내 흡수 능력에 대한 재조명으로 인해서 저분자 히알루론산은 조직내 흡수 능력이 요구되는 화장품이나 식품 등의 용도로써 관심이 높아지고 있는 상황이다. 이에 따라, 저분자 히알루론산의 개발이 요구되는 상황이며 히알루론산의 고유 기능은 유지한 채 분자량을 낮추는 기술이 필요하게 되었다.

고분자 히알루론산의 분자량을 저하시키는 방법은 논문이나 특허를 통해서 많이 보고된 바 있다. 먼저 산과 염기에 의한 가수분해 방법(일본특허공개 소 63-57602, 특허 공개 평 1-266102, Y. Tokita et al., Polymer Degradation and Stability, 48, 269-273, 1995)이 있다. 이는 새로운 공정의 추가 이외에도 처리 후 pH를 규격 내의 값으로 증가 혹은 감소시켜야 하는 불편함이 있다. 히알루론산의 농도에 따른 pH의 변화 속도가 달라질 것은 물론 실제 생산 공장에서는 사용하기 어려운 방법이다. 또한 pH 조정에 따른 불순물의 증가 현상이 발생할 수 있어 분리 정제 공정이 추가되는 비용 증가의 측면도 있다. 적절한 pH에서 고온으로 가열하거나 초음파를 이용한 분해 방법은 새로운 장비의 도입이 필요하며 역시 분리 정제 공정에서 불필요한 비용 추가가 발생한다는 것을 알 수 있다. 또한 차아염소산같은 산화제를 이용하는 방법(일본특허공개 평 2-245193), 과산화수소에 의한 방법(일본특허공개 평 2-22301), 과황산암모늄의 분해 능력을 이용하는 방법(한국특허등록 10-0369517) 또한 가수분해 능력을 인정받을 수 있지만 투여된 분해 재료의 제거가 필요하고 엔도톡신이나 새로운 불순물의 형성에 따른 품질 저하가 예측된 다.

상기의 고분자 히알루론산을 저분자화시키는 방법들은 분리 정제 공정 도중에 분자량을 조정하기 위해서 새로이 투입되는 분해 촉진제 때문에 분해 작용 만이 존재하게 된다. 분리공정상의 원료의 품질을 개선하는 프로세스는 멈추고 분자량 조절을 위한 새로운 장비의 도입이나 비용의 추가가 감안되어야 하기 때문에 비효율적이며, 결국 처리 과정이 더 복잡해지고 공정의 추가로 소요시간이 길어져 이는 비용상승으로 나타나기 때문에 대량 생산의 산업적인 측면에서는 극히 비경제적인 요인이 된다는 것을 알 수 있다.

이에, 본 발명자들은 고분자 히알루론산을 저분자화 시키는 방법에 있어서, 불순물 제거와 분자량 조절의 두 가지 요인을 한꺼번에 해결할 수 있는 방법을 연구하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 고분자 히알루론산을 저분자화 시킴에 있어서, 공지 방법의 문제점인 불순물 생성에 따른 품질저하와 복잡한 공정 추가에 따른 비용증가 등의 비효율성을 해결하여 고품질의 저분자 히알루론산을 경제적으로 생산하는 방법을 제공하고자 한다.

본 발명은 미생물 배양이나 닭벼슬에서 추출 또는 여타의 방법으로 획득한 고분자 히알루론산을 일정한 분자량 수준의 저분자 히알루론산으로 만드는 방법에 있어서 활성탄을 반응 매개체로 사용하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 고분자 히알루론산을 일정한 분자량 수준의 저분자 히알루론산으로 만드는 공정에 있어서, 반응 조건의 변화에 따라 저분자 히알루론산의 분자량을 조절하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 고분자 히알루론산의 저분자화 방법은 pH 처리의 조건이나 각 종 반응 촉매 그리고 가열 등의 복잡한 추가 처리 조건을 필요로 하는 공지의 방법에 비하여 공정이 편리하고 투입된 재료의 제거를 위한 재처리의 불편함이 없으며 동시에 오히려 불순물을 제거하는 효과까지 동반하는 것이기 때문에 간편하고 경제적이며 고순도로 저분자 히알루론산을 생산할 수 있다.

본 발명에 따른 저분자화 방법은 활성탄을 이용한 반응 조건의 변경에 따라 저분자 히알루론산의 분자량을 다양하게 조절할 수 있는 장점이 있다.

본발명에 따라 생산되는 저분자 히알루론산은 히알루론산 고유의 특성은 유지한 채 의약품 규격에 적합하게 제조될 수 있으며, 또한 화장품이나 식품용으로 사용되는 규격으로 적합하게 제조 될 수 있다.

본 발명에서는 미생물 배양이나 닭벼슬에서 추출 또는 여타의 방법으로 획득한 고분자 히알루론산을 일정한 분자량 수준의 저분자 히알루론산으로 만들기 위하여 활성탄을 반응 매개체로 사용 한다.

본 발명에서 사용되는 고분자 히알루론산은 미생물 배양이나 닭벼슬에서 추출 또는 여타의 방법으로부터 취득될 수 있다. 미생물 배양에 따른 고분자 히알루론산의 취득방법의 일례를 다음과 같이 소개한다.

스트렙토코크스 속 ID9102 (KCTC11395BP)를 히알루론산 생산 균주로 채택하고 글루코스 40-100g/L, 효모엑스 2-5g/L, 케제인펩톤 10-20g/L, 황산마그네슘 0.5-1g/L, 인산일수소칼륨 1-5g/L, 염화나트륨 2-10g/L, 글루탐산 0.1-1g/L, pH6.0-7.0, 32-37℃, 0.1-1vvm의 호기 조건으로 75L 발효조에서 배양하면 4-6g/L 범위 내에서 히알루론산 생산성이 유지되고 평균 분자량 200만-400만 Da의 히알루론산이 생산 된다.

히알루론산이 함유된 배양물은 공지된 방법인 원심분리나 필터 프레스, 뎁스 필터, 멤브레인 여과 등으로 균체를 제거하고 그 여액을 본 발명의 고분자 히알루론산으로 사용한다.

본 발명에서, 고분자 히알루론산은 활성탄과 기타 저분자화 반응 조건에 따라 특정 범위의 평균분자량을 가진 저분자 히알루론산으로 분해 된다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서 용액 내에 존재하는 히알루론산 농도는 카바졸 방법(T. Bitter, Anal. Biochem., 1962, 4, 330-334)에 의해 확인하였다. 히알루론산의 평균 분자량은 겔 여과 크로마토그라피 방법(Narlin B. Beaty et al, Anal . Biochem ., 1985, 147, 387-395)으로 구하였다. 분석 조건은 다음과 같다. 칼럼은 Toyo Soda TSK gel G6000PWXL을 사용하였으며 이동상은 150mM NaCl, 3mM Na2HPO4(pH7.0), 0.02% NaN2이다. Detection은 refrative index detector(Shodex)를 사용하였고 표준물질은 polyethylene oxide를 2 ㎎/㎖ 농도로 조제하여 사용하였다. 엔도톡신은 찰스리버엔도세이프코리아사에서 판매하는 LAL reagent를 사용해서 정량하였다. 최대 유효희석 배수를 넘지 않는 범위에서 희석배수를 3 point로 정해 희석하였다. 음성대조군에서 엔도톡신이 검출되지 않음을 확인하였으며, positive product control을 통해 반응간섭인자가 없음을 확인하였다.

이하의 실시 예에서는 미생물에서 추출한 고분자 히알루론산과 닭벼슬에서 추출 제조된 고분자 히알루론산을 이용하여 고순도의 저분자 히알루론산으로 만드는 방법 및 저분자화 반응 매개체인 활성탄과 반응 조건의 변화에 따른 저분자 히알루론산의 평균분자량 변화에 대하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다.

단 하기의 실시 예들은 본 발명을 예시하는 것으로 본 발명의 범위가 실시 예로 한정되는 것은 아니다.

<실시 예 1> CA1 활성탄을 이용하여 저분자 히알루론산을 만드는 방법

본 실시 예에서는 고분자 히알루론산 원료로 스트렙토코크스 속 ID9102 (KCTC11395BP)를 상기의 조건으로 배양하여 얻은 배양물에서 분리정제한 조정물을 이용하였으며 원료의 평균분자량은 350만 Da이며 엔도톡신의 농도가 0.5EU/mg을 훨씬 상회한다.

반응의 기본적인 조건은 다음과 같다.

한외여과를 통과하여 조정제된 히알루론산과 Norit ® CA1(이하 CA1이라 함) 활성탄이 적절한 교반력과 반응성을 갖기 위해서 히알루론산을 2.5g HA/L의 농도로 일괄적으로 조정하여 1L 유리 비커에 300㎖씩 분주하였으며 CA1 활성탄은 히알루론산 농도 대비 2배, 4배, 6배 농도로 유리 비커 내에 투입 후 테프론 재질의 임펠러(직경 5㎝)를 300rpm 속도로 회전하여 일정한 반응 조건을 유지하였으며 반응 종료시까지 불순물의 혼입이나 반응액의 증발 등을 최대한 방지하기 위해서 임펠러 회전 부분을 제외한 나머지는 뚜껑으로 덮어서 밀봉하였다. 반응 온도는 각각 25℃, 35℃, 45℃의 조건으로 실시하였다.

샘플 수거 시간은 3시간, 6시간, 18시간 반응 후에 각 샘플당 채취하여 엔도톡신, 히알루론산 농도, 평균 분자량을 상기의 분석 방법에 따라서 분석하였으며 [표 1]과 같은 결과를 획득하였다. 반응 온도가 증가함에 따라서 CA1 활성탄의 분해 능력이 증가하여 히알루론산이 저분자화되는 속도가 빨라지는 것을 확인할 수 있었다. 25℃, CA1 2X 조건에서 6시간에 200만 Da의 히알루론산을 획득할 수 있었고 18시간에 150만 Da의 분자량을 얻었다. 25℃, CA1 4X에서는 18시간 만에 약 100 만 Da의 분자량을 얻었으며 CA1 6X에서는 6시간에 약 100만 Da, 18시간에 50만 Da의 분자량으로 분해할 수 있었다. 35℃의 경우에는 25℃에 비해 반응성이 2X씩 낮은 농도에서 25℃와 동등한 수준의 분자량 분해 능력을 보여 주었다. 35℃, 6X의 경우에는 18시간에 13만 Da의 분자량까지 만드는 것을 확인하였다. 45℃의 경우에도 37℃에 비해 반응성이 2X씩 낮은 농도에서 동등한 수준의 분자량 분해 능력을 보여 주었다. 6X의 경우에는 1.5만 Da의 분자량까지 만드는 것을 확인하였다. 모든 반응 조건 내에서 엔도톡신이 0.5EU/㎎ 이하임이 확인되었으며 반응온도의 증가는 엔도톡신을 더 많이 줄이는 데 효과적인 것을 확인하였다. 또한 히알루론산의 농도는 전체 반응 조건에서 92% 이상의 농도는 유지하는 것으로 확인되었기 때문에 소실의 위험이 없음을 확인하였다.

CA1 활성탄과 히알루론산 용액의 반응 후 결과

반응 온도	활성탄 농도	분자량, kDa			엔도톡신,EU/mg			g HA/L
반응 온도	활성탄 농도	3h	6h	18h	3h	6h	18h	3h	6h	18h
25℃	2X	3519	2089	1485	<0.5	<0.5	<0.5	2.51	2.48	2.34
25℃	4X	3519	1485	994	<0.5	<0.5	<0.5	2.52	2.46	2.44
25℃	6X	3519	975	523	<0.5	<0.5	<0.5	2.50	2.43	2.41
35℃	2X	3449	1485	975	<0.05	<0.05	<0.05	2.50	2.47	2.31
35℃	4X	3519	975	513	<0.05	<0.05	<0.05	2.50	2.45	2.42
35℃	6X	3519	503	134	<0.05	<0.05	<0.05	2.47	2.41	2.39
45℃	2X	3519	955	523	<0.005	<0.005	<0.005	2.49	2.45	2.32
45℃	4X	3519	473	129	<0.005	<0.005	<0.005	2.51	2.44	2.42
45℃	6X	3519	16	15	<0.005	<0.005	<0.005	2.47	2.41	2.38

<실시 예 2> CGSP 활성탄을 이용하여 저분자 히알루론산을 만드는 방법

실시 예 1에서 사용한 히알루론산 시료와 반응 조건을 동일하게 사용하였으며 다만 CA1 활성탄 대신에 Norit ® CGSP(이하 CGSP이라 함) 활성탄을 가수분해 매개체로 사용하여 저분자 히알루론산 생산 능력을 비교분석하였다.

샘플 수거 시간은 3시간, 6시간, 18시간 반응 후에 각 샘플당 채취하여 엔도톡신, 히알루론산 농도, 평균 분자량을 상기의 분석 방법에 따라서 분석하였으며 [표 2]와 같은 결과를 획득하였다. CA1 활성탄과 비슷하게 반응 온도가 증가함에 따라서 CGSP 활성탄의 분해 능력이 증가하여 저분자화되는 속도가 빨라지는 것을 확인할 수 있었다. 25℃, CGSP 4X 조건에서 18시간 만에 100만 Da의 히알루론산을 획득할 수 있었으며 6X의 경우에는 18시간에 50만 Da의 히알루론산을 얻을 수 있었다. 35℃의 경우에는 25℃에 비해 반응성이 2X씩 낮은 농도에서 동등한 수준의 분자량 분해 능력을 보여 주었다. 특히 45℃의 경우에는 6X에서 1만 Da의 수준까지 가수분해되는 결과를 얻었다. 이때 엔도톡신 농도는 0.5EU/㎎ 이내로 줄어드는 것을 확인하였으며 CA1의 결과처럼 반응온도의 증가는 엔도톡신을 더 많이 줄이는 데 효과적인 것을 확인하였다. 또한 히알루론산의 농도는 전체 반응 조건에서 최소한 93% 이상의 농도는 유지하는 것으로 확인되었으며 히알루론산의 안정성과 CGSP 활성탄 효과를 확인하였다.

CGSP 활성탄과 히알루론산 용액의 반응 후 결과

반응 온도	활성탄 농도	분자량, kDa			엔도톡신,EU/mg			g HA/L
반응 온도	활성탄 농도	3h	6h	18h	3h	6h	18h	3h	6h	18h
25℃	2X	3590	2553	1515	<0.5	<0.5	<0.5	2.52	2.59	2.47
25℃	4X	3449	2263	1015	<0.5	<0.5	<0.5	2.52	2.49	2.50
25℃	6X	3449	1456	513	<0.5	<0.5	<0.5	2.48	2.45	2.40
35℃	2X	3449	2047	936	<0.05	<0.05	<0.05	2.52	2.45	2.39
35℃	4X	3449	1515	503	<0.05	<0.05	<0.05	2.51	2.50	2.41
35℃	6X	3519	975	134	<0.05	<0.05	<0.05	2.50	2.48	2.41
45℃	2X	3449	814	534	<0.005	<0.005	<0.005	2.48	2.42	2.39
45℃	4X	3449	437	139	<0.005	<0.005	<0.005	2.47	2.45	2.34
45℃	6X	3449	18	12	<0.005	<0.005	<0.005	2.45	2.40	2.32

<실시 예 3> CASP 활성탄을 이용하여 저분자 히알루론산을 만드는 방법

실시 예 1에서 사용한 조건을 동일하게 사용하였다. CA1 활성탄 대신에 Norit ® CASP(이하 CASP이라 함) 활성탄으로 대체하여 비교분석하였다.

샘플 수거 시간은 3시간, 6시간, 18시간 반응 후에 각 샘플당 채취하여 엔도톡신, 히알루론산 농도, 평균 분자량을 상기의 분석 방법에 따라서 분석하였으며 [표 3]과 같은 결과를 얻었다. CA1, CGSP 활성탄과 비슷하게 반응 온도가 증가함에 따라서 CASP 활성탄 또한 분해력이 증가하여 저분자화되는 속도가 빨라지는 것을 확인할 수 있었다. 25℃, CASP 4X 조건에서 18시간 만에 100만 Da의 히알루론산을 획득할 수 있었으며 35℃의 경우에는 25℃에 비해 반응성이 2X씩 낮은 농도에서 동등한 수준의 분자량 분해 능력을 보여 주었다. 45℃의 경우에는 가수분해 능력이 매우 높아져서 CASP 2X 조건에서 6시간에 100만 Da, 18시간에 50만 Da의 히알루론산을 얻을 수 있으며 CASP 4X의 경우에는 6시간에 50만 Da, 18시간에 약 10만 Da의 원료를 얻을 수 있는 것을 알 수 있었다. 6X의 경우에는 가장 가수분해력이 뛰어나서 6시간에 1.5만 Da, 18시간에는 1만 Da의 수준까지 만들 수 있는 것을 확인하였다. 엔도톡신 농도는 0.5EU/㎎ 이하에서 유지되는 것을 확인하였으며 CA1, CGSP의 결과와 동일하게 반응온도의 증가가 엔도톡신의 양을 줄이는 데 훨씬 효과적인 것을 확인하였다. 또한 히알루론산의 농도는 CASP 전체 반응 조건에서 최소한 93% 이상의 농도는 유지하는 것을 확인하였다.

CASP 활성탄과 히알루론산 용액의 반응 후 결과

반응 온도	활성탄 농도	분자량, kDa			엔도톡신,EU/mg			g HA/L
반응 온도	활성탄 농도	3h	6h	18h	3h	6h	18h	3h	6h	18h
25℃	2X	3449	2605	1515	<0.5	<0.5	<0.5	2.53	2.50	2.35
25℃	4X	3519	2218	994	<0.5	<0.5	<0.5	2.51	2.48	2.43
25℃	6X	3449	1456	428	<0.5	<0.5	<0.5	2.55	2.42	2.42
35℃	2X	3449	2007	955	<0.05	<0.05	<0.05	2.52	2.47	2.33
35℃	4X	3519	1515	483	<0.05	<0.05	<0.05	2.48	2.46	2.42
35℃	6X	3449	1015	129	<0.05	<0.05	<0.05	2.54	2.40	2.41
45℃	2X	3449	918	513	<0.005	<0.005	<0.005	2.50	2.47	2.32
45℃	4X	3519	483	126	<0.005	<0.005	<0.005	2.50	2.44	2.42
45℃	6X	3449	16	10	<0.005	<0.005	<0.005	2.49	2.42	2.38

<실시 예 4> 닭벼슬 유래 저분자 히알루론산을 만드는 방법

본 실시 예에서 사용한 고분자 히알루론산 원료는 닭벼슬에서 추출 정제한 원료를 사용하였으며 평균분자량은 350만 Da이다.

시험의 일례로써 CA1 활성탄을 분자량 조절제로 선택하여 닭벼슬 유래의 히알루론산의 결과와 미생물 유래의 히알루론산의 기존 결과를 비교하고자 하였으며 구체적인 방법은 다음과 같다.

닭벼슬 유래의 히알루론산 원료를 2.5g HA/L 농도로 조제하여 1L 유리 비커에 300㎖씩 분주하였으며 CA1 활성탄은 히알루론산 농도 대비 2배, 4배, 6배 농도로 투여하여 테프론 재질의 임펠러(직경 5㎝)로 300rpm 속도에서 혼합하였으며 반응 기간 내 불순물의 혼입이나 반응액의 증발 등을 최대한 방지하기 위해서 임펠러 회전 부분을 제외한 나머지는 밀봉 처리하였다. 반응 온도는 25℃의 조건으로 실시하였다.

대조군으로 실시 예 1의 CA1 결과를 인용하여 닭벼슬 유래 하알루론산의 반응 결과를 비교하였으며 샘플 수거 시간은 3시간, 6시간, 18시간 반응 후에 각 샘플당 반응 시료를 채취하여 변화를 분석하였으며 [표 4]에 닭벼슬 유래 히알루론산 평균 분자량의 변화를 표기하였다.

상기 실시 예 1의 미생물 유래 히알루론산의 반응과 동일하게 닭벼슬 유래 히알루론산도 CA1 활성탄에 의해 분해되는 반응이 나타나는 것을 확인하였으며 이는 미생물 유래의 원료나 닭벼슬 유래의 원료는 저분자로 만드는 제조과정에서 특별한 차이가 없다는 것을 의미한다.

CA1 활성탄에 의한 닭벼슬 유래 히알루론산의 분자량 변화

히알루론산 Origin	활성탄 농도	분자량, kDa
히알루론산 Origin	활성탄 농도	3h	6h	18h
미생물	CA1 2X	3519	2089	1485
미생물	CA1 4X	3519	1485	994
미생물	CA1 6X	3519	975	523
닭벼슬	CA1 2X	3381	1371	1015
닭벼슬	CA1 4X	3519	994	751
닭벼슬	CA1 6X	3314	653	455

도1은 D-glucuronic acid와 N-acetylglucosamine이 β-1,3과 β-1,4 결합을 이루는 히알루론산의 반복 단위를 보여주는 그림이다.

도2는 25℃에서 각종 활성탄의 종류와 각각의 농도에 따라서 히알루론산의 분자량이 다양하게 변하는 것을 보여 주는 그래프이다.

도3은 35℃에서 각종 활성탄의 종류와 각각의 농도에 따라서 히알루론산의 분자량이 다양하게 변하는 것을 보여 주는 그래프이다.

도4는 45℃에서 각종 활성탄의 종류와 각각의 농도에 따라서 히알루론산의 분자량이 다양하게 변하는 것을 보여 주는 그래프이다.

Claims

히알루론산을 저분자화함에 있어서, 활성탄을 반응 매개체로 사용하는 것을 특징으로 하는 방법
제1항에 있어서, 활성탄이 CA1, CGSP, CASP중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 저분자화 방법
제1항 또는 제2항에 있어서, 히알루론산에 대한 활성탄의 농도, 반응 온도 및 반응 시간의 선택적 조절을 통해 목적하는 범위의 평균 분자량을 갖는 히알루론산을 제조하는 것을 특징으로 하는 저분자화 방법
제3항에 있어서, 활성탄의 농도가 히알루론산 대비 2배 내지 6배, 반응 온도가 25℃ 내지 45℃, 반응 시간이 3시간 내지 18시간 중에서 각각 선택되는 것을 특징으로 하는 저분자화 방법