FI79346C - Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur. - Google Patents

Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur. Download PDF

Info

Publication number
FI79346C
FI79346C FI844091A FI844091A FI79346C FI 79346 C FI79346 C FI 79346C FI 844091 A FI844091 A FI 844091A FI 844091 A FI844091 A FI 844091A FI 79346 C FI79346 C FI 79346C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
hyaluronic acid
culture
acid
medium
broth
Prior art date
Application number
FI844091A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI844091L (fi
FI844091A0 (fi
FI79346B (fi
Inventor
James W Bracke
Kipling Thacker
Original Assignee
Lifecore Biomedical
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lifecore Biomedical filed Critical Lifecore Biomedical
Publication of FI844091L publication Critical patent/FI844091L/fi
Publication of FI844091A0 publication Critical patent/FI844091A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI79346B publication Critical patent/FI79346B/fi
Publication of FI79346C publication Critical patent/FI79346C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/801—Anerobic cultivation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/885—Streptococcus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)

Description

79346 HYALURONIHAPON VALMISTAMINEN BAKTEERIVILJELMÄLLÄ
Hyaluronihappo on limamainen (mukoidi) eloperäinen polysakkaridi. Sen natriumsuolalla, natriumhyaluronaatilla, on havaittu fysiologisessa suolaliuospuskurissa olevan merkittävää käyttöä lasiaisen korvikkeena (vitreous replacement) silmä-kirurgiassa ja muissa lääketieteellisissä sovellutuksissa. Joitakin näistä sovellutuksista on esitetty U.S. patenteissa 4 141 973 ja 4 328 803* Tällaisiin lääketieteellisiin tarkoituksiin on tähän asti käytetty pyrogeenitöntä, erittäin tarkoin puhdistettua natriumhyaluronaattia, jonka mole-kyylipaino on yli 750 000. HEALON ® niminen kaupallinen valmiste, jota valmistaa Pharmacia, Inc., Piscataway, N.J. USA on natriumhyaluronaatin yksiprosenttinen liuos, jota myydään tällaisiin tarkoituksiin. Esimerkiksi laimennetun HEALON ®-liuoksen (0,1 - 0,2# natriumhyaluronaattia) on esitetty olevan hyödyllinen silmätippoina keratitis sicca -syndrooma-potilaiden hoidossa.
Hyaluronihappoa on käytetty viljeltäessä leprabasillia in vitro ja kosmeettisten aineiden komponentteina. Kosmeettiset seokset, joita kuvataan U.S. patentissa 4 303 676, sisältävät sekä molekyylipainoltaan matalan fraktion (n. 10 -50 000) että molekyylipainoltaan korkean fraktion ( yli 1 x 106).
Hyaluronihapon lähteenä kaikkiin edellämainittuihin käyttöihin ovat olleet kukonharjat, ihmisen napanuorat tai muut selkärankaisten kudokset. Hyaluronihapon erottaminen ja puhdistaminen tällaisista kudoksista on verraten monimutkainen prosessi, josta seuraa hyvin kallis tuote.
Hyaluronihappoa voidaan valmistaa Streptococcus-suvun ryhmä A ja C-bakteerikannoista. Yksi esitetty käyttötarkoitus bakteerituotteelle on sen käyttö reagenssina osoitettaessa anti-streptococcus-hyaluronidaasia ihmisen seeruminäytteistä, Kjeras ja Lebech, Acta Path, microbiol. Scand., Section B, 84: 162 - 164, (1976). Tässä julkaisussa kirjoittajat 2 79346 esittävät tarkasti määritellyt välineet ryhmän A streptokokkien kasvattamiseksi ja hyaluronihapon eristämiseksi sekä ilmoittavat, että saanto on 0,3 g litraa lihaliemialustaa kohti. Kuitenkaan bakteerien tuottamalle hyaluronihapolle ei ole löydetty konkreettista käyttöä koska sillä on matala molekyylipainoalue.
Keksinnön lyhyt kuvaus
Kyseessä olevan keksinnön avulla saadaan bakteerilähteitä hyväksi käyttäen hyaluronihappoa, jolla on korkeampi molekyylipainoalue kuin aiemmin bakteerilähteistä saadulla hyal-uronihapolla on esitetty. Keksinnössä kuvataan myös menetelmää hyaluronihapon valmistamiseksi bakteerilähteistä paljon suuremmalla saannolla kuin aiemmin on esitetty. Lisäksi menetelmällä valmistetaan hyaluronihappoa, jonka puhtaus on verrattavissa mihin hyvänsä nykyisin lääketieteellisessä käytössä olevaan tai on suurempi. Vaikka keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetulla hyaluronihapolla on tyypillisesti molekyylipaino n. 55 000, on sillä mahdollisesti merkittävää käyttöä silmätippojen valmistusaineena ja kosmeettisten aineiden ainesosana. Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetun hyaluronihapon suuri saanto, korkea puhtaus-aste ja halpa hinta mahdollistavat myös sen käytön tavoilla joita ei ole aiemmin kuvattu tai suunniteltu nisäkkäistä tai matalan saannon bakteerilähteistä saatavaa hyaluronihappoa varten. Esimerkiksi hyaluronihappoa voitaisiin käyttää ruoka-aineissa kostuttajana, muissa sovellutuksissa voiteluaineena ja leikkauksen jälkitiloissa vähentämään sidekudoksen muodos-tumisvasteesta ja/tai adheesiosta aiheutuvia komplikaatioita. Ainetta voitaisiin myös käyttää tertiäärisessä öljyn uudelleenkäytössä polyakryyliamidin, samanlaisten synteettisten polymeerien tai biologisesti valmistettujen polymeerien substituenttina.
Keksinnön mukainen menetelmä suositeltavimmassa muodossaan käsittää hyaluronihappoa tuottavan Streptococcus-kannan kas-
II
3 /9346 vattamisen anaerobisissa olosuhteissa C02-rikastetussa kasvatusalustassa, joka sisältää ne raaka-ainemateriaalit, joita tarvitaan hyaluronihapon valmistamiseksi bakteerien avulla, kuitenkin mieluiten tappamatta bakteereita, baktee-relden erottamisen kasvatusalustasta ja hyaluronihapon eristämisen. Mieluiten kasvu tapahtuu fermentoimalla lihaliemi-alustalla. Muita kasvatusmenetelmiä ja -alustoja voidaan myös käyttää. Esimerkiksi agar-viljelmää voidaan käyttää. Edelleen termiä "kasvatusalusta" on tässä käsitetty laajasti tarkoittaen nestemäisiä tai kiinteitä alustoja tai niiden yhdistelmiä Ja muita fermentaatioon perustuvia kasvutapoja kuten hyvin tunnetaan.
Vaikka keksinnön suositeltavin muoto käsittää bakteerien kasvatuksen suoraan viljelmäalustassa, jossa hyaluronihappo muodostuu, on myös mahdollista kasvattaa bakteerit toisella kasvatusalustalla, erottaa bakteerit kasvatusalustasta liettää bakteerit puskuroituun väliaineeseen tai tislattuun veteen ja lisätä liuokseen sopivat aineet hyaluronihapon valmistamiseksi valmiiksi kasvaneilla bakteereilla. Tämän on katsottu olevan yhdenveroinen suositeltavimman menetelmän kanssa ja se ainoastaan aiheuttaa leposolususpension (resting cell suspension) käytön. Edelleen tässä esimerkiksi termi "viljelmän kasvattaminen" ja muut sen kaltaiset on tarkoitettu sisältämään molemmat tavat käyttöalueellaan.
Toisin kuin aiemmin tunnetuissa hyaluronihapon valmistusmenetelmissä endotoksiinit voidaan sulkea pois systeemistä suodattamalla alussa kaikki valmistusaineet ]0 000 (10 K) nimel-llsmolekyylipaino-cutoff-suotimen, kuten esim. Millipore R Pellicon R tangentiaalivirtaussuodatuskasettisysteemin läpi ennen siirrostusta ja säilyttää myöhemmin pyrogeenittömät anaerobiset kasvuolosuhteet.
* 79346
Suorltusesimerkki
Keksinnön suositeltavassa suoritusmuodossa käytetään puoliksi määriteltyä (semi-defined) kasvatusalustaa, jollainen esitetään seuraavassa: 1. Kaseiinihydrolysaatti, entsymaattinen 20,0 g 2. Kaliumkloridi 3,0 g 3. Natriumfosfaatti, kaksiemäksinen 2,8 g 4. Magnesiumsulfaatti (7H2O) 0,5 g 5. Kalsiumkloridi (2H2O) 10,0 mg 6. Glukoosi 20,0 g 7. Vitamiiniliuokset: a) d-biotiini 1,0 mg b) d-kalsiumpantotenaatti 1,0 mg c) koliinikloridi 1,0 mg d) foolihappo 1,0 mg e) i-inositoli 2,0 mg f) nikotiiniamidi 1,0 mg g) pyridoksaali-HCl 1,0 mg h) riboflaviini 0,1 mg i) tiamiini-HCl 1,0 mg
Kasvatusalusta valmistetaan käänteisosmoosilla yhteen litraan pyrogeenltöntä vettä. Tietenkin muitakin tähän tarkoitukseen sopivia kasvatusalustoja voidaan käyttää.
100 ml Streptococcus pyogenes tyyppi 18 -viljelmää, ATCC 12357, kasvatetaan anaerobisesti kuuden tunnin ajan kasvatusalustassa lämpötilassa 37 ί 1 C°. Muitakin hyaluronihappoa tuottavia bakteereja kuin yllämainittu voidaan käyttää mutta tyyppi 18 on suositeltavin. Tämä 6 tuntia kasvatettu viljelmä siirros-tetaan viiteen litraan samaa kasvatusalustaa Ja kasvatetaan suureen näkyvään tiheyteen, mieluimmin vähintään 2 x 10^ solua/ml ja tyypillisesti 5 x 10^ solua/ml. Tällä 5 litran viljelmällä siirrostetaan sitten 160 litraa kasvatusalustaa 200 litran fermentorissa ja aloitetaan tuotanto.
11 5 79346 Tämän tuotantoajon aikana viljelmä kasvaa jatkuvan sekoituksen alaisena Ja siihen johdetaan CC>2-kaasua virtausnopeuden ollessa sopiva pitämään liuenneen CC>2:n pitoisuuden sellaisena kuin on kuvattu CC>2-monitorointikokeessa. Suositeltavin liuenneen CC>2:n taso on 5 - 10 %. Kaasu infusoidaan mieluimmin N2/C02-seoksena. Suhde 85/15 on suositeltava mutta ei kriittinen. Kaasu steriloidaan suodattaen, kun sitä lasketaan kasvukammioon. Lämpötila säädetään mieluiten arvoon 37 + 1 C°. pH säädetään mieluiten oleellisesti vakioarvoon ± 0,1, alueella n. 6,5 - 7,5 pH-kontrollerilla, Joka lisää tarvittaessa K0H:a. Käymisen voidaan katsoa olevan täydellistä, kun viljelmän pH ei enää putoa (ei enää tarvita KOHta ylläpitämään asetettua pH:ta) tai kun solutiheys saavuttaa suuren näkyvän tiheyden, tyypillisimmin 1 - 5 x 1θ9 solua/ml. Tässä vaiheessa käyminen pysäytetään lisäämällä trikloorietikkahapon 100 % kyllästettyä vesiliuosta niin että käymisliuoksen lopullinen trikloorietikkahappo-konsentraatio on n. 5 %· Tämä voi vaihdella.
Trikloorietikkahapon lisääminen käymislihaliemeen ei vain päätä kasvua tappamalla bakteerit vaan myös helpottaa solujen erottelemisen lihaliemestä oleellisti höytälöittämällä solut. Ilman trikloorietikkahappolisäystä on seosta hyvin vaikea separoida ilman että molempien komponenttien eheys vakavasti kärsii. Mikro-organismit ja polysakkaridit, mm. hyaluronihappo eivät suoraan separoidu sentrifugoiden tai suodattamalla ilman että on lisätty trikloorietikkahappoa. Vaikka onkin mahdollista lopettaa viljelmän kasvu muilla menetelmillä, esim. lämpökäsittelyllä, on trikloorietikka-happokäsittelyllä etuna se, että se helpottaa hyaluronihapon myöhempää erottamista.
Käymisseos pumpataan fermenttorista 0,22 um reikäkoon Dura-pore R suodatuskasetin läpi käyttäen edellämainittua Millipore R tangentlaallvirtaussuodatussysteemiä. Tämä vaihe 6 79346 tiivistää solut 160 litrasta n. 5 l:aan. Tämä suodos otetaan käyttöön Ja diasuodatetaan (diafiltered) vastaan yli 10 MOhmin käänteisosmoosiliuosta käyttäen hyväksi 30,000 nimellis (nominal) molekyylipaino "cut-off" Millipore^ Pellican^ kasettisysteemiä kunnes suodos, Jota on Jatkuvasti erotettu (discarded) saavuttaa n. 0,5 MOhmin Johtavuuden.
Diafiltraatio on voimistettu dialyysiteknilkka, Jollaista on kuvattu luettelonumerossa OM029, maaliskuu 1981, otsikoituna Pelllcon H kasettlsysteeml. julkaisijana Millipore Corp. Bedford, Mass. 01730 USA, verrattuna tavanomaisiin passiivisiin dialyysimenetelmiin. Hyaluronihappo väkevöidään sitten Jatkamalla suodatusta lisäämättä enää vettä.
Konsentraattia käsitellään sitten analyysilaatua olevalla etanolilla, suhteen ollessa mieluimmin 3:1· Muita alkoholeja, asetonia, kloroformia Ja muita orgaanisia liuottimia kuin myös tiettyjä orgaanisia suoloja, kuten CETAB:ia, tri-metyyliammoniumbromidiseosta, voidaan myös käyttää sakkaut-tamaan hyaluronihappo tai natriumhyaluronaatti vesiliuoksesta. Tämä pitää tehdä ilman minkäänlaista muuta sekoittamista, kuin mitä tapahtuu pumpattaessa hyaluronihappoa liuot-timeen. Alkoholikäsittelyn aikana sekoittamisen on havaittu alentavan hyaluronihapon saantoa prosessissa. Tässä vaiheessa sakka voidaan varastoida rajoittamattoman ajan pimeässä ^ o n
Ctssa.
Kuten selostuksesta ilmenee, on löydetty ainutlaatuinen tapa eristää hyaluronihappoa lihaliemestä kaksivaiheisella menetelmällä, jossa molekyylipainon mukaan erotteleva valhe on toteutettu diafiltraatiolla erottaen happo oleellisesti kaikesta molekyylipainoltaan kevyemmistä lihaliemen komponenteista, minkä jälkeen happo erotetaan jäljellejääneistä liha-liemen osasista sakkauttamalla.
Sakkautuneesta hyaluronihaposta voidaan poistaa vesi (poistamalla bulkki vesi/alkoholiseoksesta) monellakin tavanomai-
II
7 79346 sella tavalla ja sitten liettää käänteisosmoosiveteen tai 0,15 M NaCl-liuokseen. Lietetty aine lyofilisoldaan (pakaste-kuivataan), sumutuskulvataan, tyhjökuivataan tai diasuodate-taan että saadaan poistetuksi viimeiset alkoholijäämät. Edelleen puhdistaminen tapahtuu valmistamalla 0,5 M boraatti-puskuriliuos, pH 8,0, noin 10 mg/ml natriumhyaluroaatti-konsentraatioon. 0,32 % CETAB:a lisätään sitten liuokseen ja seosta sekoitetaan 4 °C:ssa yli yön jolloin saadaan natrium-hyaluraattisakka. Voidaan käyttää myös muita sakkauttavia aineita kuten setyylipyridlumklorldia tai sen sukuisia suoloja. Sakka otetaan talteen (recovered) suodattamalla (coarse filtration) ja liettämällä käänteisosmoosiliuoksella tehtyyn IM NaCl-liuokseen. Lietetty hyaluronihappo diasuoda-tetaan ja väkevöidään kuten yllä. Lopputuloksena oleva hyaluronihappo voidaan steriloida suodattamalla ja käyttää tai muuttaa natriumhyaluronaatiksi, steriloida suodattamalla Ja sitten käyttää.
Tavanomaisiin vedenpoistomenetelmiin kuuluvat puristus, sentrifugointi, kemiallinen additio ym. Käytetyn menetelmän valinta riippuu sakan käyttötarkoituksesta.
Jos halutaan pyrogeenltön lääketieteellistä laatua oleva tuote, käytetään pyrogeenittömäksi suodatettua kasvatus-alustaa ja kaikki menetelmän operaatiot, mukaanluettuna hyal-uronihapon/natriumhyaluronaatin erottaminen ja valmistaminen, tapahtuvat luokan 100 puhtaassa huoneessa (conditions of a class 100 clean room) käyttäen pyrogeenittömiä astioita. Mikäli halutaan vain kemiallisen tason tuote, huoneen ja astioiden puhtaus ei ole kriittinen pyrogeenien suhteen.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä, Jossa käytetään solujen kasvatusta ilmattomassa tilassa, estetään streptokokkeja valmistamasta normaaleja lopputuotteitaan, ensisijaisesti pyro-geenisiä eksotoksiineja, joista tämä mikrobi on hyvin tunnettu. Kuvatunlaiset kasvuolosuhteet antavat myös paljon suu- 8 79346 remman hyaluronihapposaannon kuin mitä on aiemmin raportoitu. Kun käytetään edelläkuvattuja suositeltavia solukasva-tus- Ja eristysmenetelmiä saadaan vähintään 5 g hyaluronihap-poa per litra kasvatuslihalientä. Ilmattoman tilan suuri saanto on odottamatonta/koska on oletettu, että yksi hyaluronihäpon funktioista on toimia solun happiesteenä.
Näin ollen voitiin vain olettaa sen tuotannon maksimoimisen perustuvan happiylimäärän käyttämiseen.
0*5 - 1,5 % liuosta keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettua pyrogeenitöntä natriumhyaluronaattia voidaan käyttää silmätipoissa kukonharjoista erotetun molekyylipainoltaan suuren hyaluronihapon vahvasti laimennetun liuoksen, jota nykyisin käytetään keratitis sicca-syndrooman hoitoon, tilalla.
li

Claims (9)

  1. 9 7 9 3 4 6
  2. 1. Menetelmä hyaluronihapon tuottamiseksi, tunnettu siitä, että hyaluronihappoa tuottavan bakteerin, Streptococcus pyogenes tyyppi 18-kannan lihaliemiviljelmää fermentoidaan kasvatusalustassa, joka on tehty pyrogeeni-vapaaksi suodattamalla se ennen siirrostusta molekyylipainon 10.000 "cut-off"-suodattimen läpi, fermentoinnin tapahtuessa C02:Ha rikastetuissa anaerobisissa olosuhteissa, tai että muodostetaan bakteerista ja sen sivutuotteista nestesuspensio tapauksessa, jolloin suspensiota ei luonnostaan ole käytetyssä kasvatusmenetelmässä ja -alustassa; erotetaan bakteeri-solut saadusta suspensiosta tai lihaliemiviljelmästä lisäämällä lihaliemeen trikloorietikkahappoa; ja hyaluronihappo eristetään eristämällä happo ja ne ainekset, joiden molekyylipaino on sama tai suurempi ja erottamalla happo jäljelle jäävästä, molekyylipainoltaan samanlaisesta, aineksesta. saostuksella, joka suoritetaan lisäämällä hyaluronihappo :j.a jäljelle jäävät ainekset etanoliin oleellisesti sekoittamatta, ja eristetty hyaluronihappo puhdistetaan liuottamalla se lievästi emäksiseksi puskuroituun liuokseen, saostamalla natriumhyaluronaatti sekoittamalla alkyylitrime-tyyliammoniumbromidin kanssa, suspendoimalla saostuma uudelleen laimeaan natriumkloridiliuokseen ja saostamalla se happona lisäämällä se etanoliin sekoittamatta.
  3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trikloorietikkahappoa lisätään fermentointiliuok-seen siten, että sen lopullinen konsentraatio on 5-6 %.
  4. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että bakteerikasvu päätetään trikloorietikkahapon lisäyksellä.
  5. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fermentointivaihe käsittää pH:n kontrolloimisen oleellisesti vakioarvoon +0,1 alueelle 6,5-7,5 ja lämpötilan vakioimisen arvoon 37+l°C läpi koko fermentoinnin. 10 79346
  6. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että dissosioituneen C02:n konsentraatio pidetään arvossa n. 5-10 %.
  7. 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että bakteerin annetaan kasvaa kunnes sen tiheys on yli 2 x 108 solu millilitrassa ennenkuin kasvu pysäytetään.
  8. 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kasvatusalusta suodatetaan läpi 10.000 molekyyli-paino ("cut-off") -suotimen ennen bakteerin siirrostamista viljelmään ja suorittamalla loppuvaiheet "100 clean room"-oloissa käyttäen pyrogeenivapaita säiliöitä.
  9. 1. Förfarande för att producera hyaluronsyra, kanne-t e c k n a d därav, att man fermenterar köttbuljongen av en hyaluronsyra producerande bakter, Streptococcus pyogenes typ 18-stam, i ett tillväxtmedium, som är gjort pyrogenfritt före ympningen genom filtering genom ett 10.000 molekylvikts "cut-off"-filter, säledes att fermentering sker under C02-herikade anaeroba förhallanden, eller att utgörsen vätskesuspension av bakterien och dess biprodukter i det fallet, da suspensionen inte av sin natur finns i tillväxt-förfarandet och -mediet; baktericeller isoleras ur suspension eller köttbuljongkultur genom att tillsätta triklorättiksyra i köttbuljongen; och hyaluronsyran isoleras genom separering av syran och de komponenterna, vilkas molekylvikt är samma eller större och genom separering av syran frän resterande komponenter med samma molekylvikt genom utfällning, som utförs genom att tillsätta hyaluronsyran och de resterande komponenterna i etanol huvudsakligen utan omblandning, och den isolerade hyaluronsyran rengöres genom att lösa i en lösning, som buffrerats tili svagt basisk, genom utfällning
FI844091A 1983-02-18 1984-10-17 Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur. FI79346C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US46792583 1983-02-18
US06/467,925 US4517295A (en) 1983-02-18 1983-02-18 Hyaluronic acid from bacterial culture
PCT/US1983/001428 WO1984003302A1 (en) 1983-02-18 1983-09-16 Hyaluronic acid from bacterial culture
US8301428 1983-09-16

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI844091L FI844091L (fi) 1984-10-17
FI844091A0 FI844091A0 (fi) 1984-10-17
FI79346B FI79346B (fi) 1989-08-31
FI79346C true FI79346C (fi) 1989-12-11

Family

ID=23857716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI844091A FI79346C (fi) 1983-02-18 1984-10-17 Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur.

Country Status (14)

Country Link
US (1) US4517295A (fi)
EP (1) EP0137786B1 (fi)
JP (1) JPS60500597A (fi)
CN (1) CN85103674A (fi)
AT (1) ATE40407T1 (fi)
AU (1) AU556730B2 (fi)
CA (1) CA1212645A (fi)
DE (1) DE3379056D1 (fi)
DK (1) DK173681B1 (fi)
FI (1) FI79346C (fi)
IL (1) IL69900A (fi)
IT (1) IT1172379B (fi)
NO (1) NO160146C (fi)
WO (1) WO1984003302A1 (fi)

Families Citing this family (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5166331A (en) * 1983-10-10 1992-11-24 Fidia, S.P.A. Hyaluronics acid fractions, methods for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing same
IT1212892B (it) * 1983-10-11 1989-11-30 Della Valle Francesco Acido ialuronico ottenuto per mezzodi filtrazione molecolare sprovvisto di attivita' infiammatoria e sua utilizzazione terapeutica
US4638056A (en) * 1983-07-22 1987-01-20 Cilco, Inc. Opthalmic wafer
NO161573C (no) * 1983-11-25 1989-08-30 Miles Inc Fremgangsmaate til fremstilling av hyaluronsyre.
US5093487A (en) * 1986-01-06 1992-03-03 Mobay Corporation Low viscosity high molecular weight filter sterilizable hyaluronic acid
US5316926A (en) * 1983-11-25 1994-05-31 Miles Inc. Method for the microbiological production of non-antigenic hyaluronic acid
JPS60251898A (ja) * 1984-05-25 1985-12-12 Shiseido Co Ltd 醗酵法によるヒアルロン酸の製造方法
US4780414A (en) * 1985-01-18 1988-10-25 Bio-Technology General Corp. Method of producing high molecular weight sodium hyallronate by fermentation of streptococcus
US4713448A (en) * 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US5099013A (en) * 1985-03-12 1992-03-24 Biomatrix, Inc, Hylan preparation and method of recovery thereof from animal tissues
SE8501723L (sv) * 1985-04-09 1986-10-10 Pharmacia Ab Preparation att anvendas vid behandling av ledinflammation
EP0221167A4 (en) * 1985-05-09 1988-08-24 David Cullis-Hill PRODUCTION OF HYALURONIC ACID.
US4851521A (en) * 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
US5202431A (en) * 1985-07-08 1993-04-13 Fidia, S.P.A. Partial esters of hyaluronic acid
IN166447B (fi) * 1985-11-27 1990-05-12 Ethicon Inc
US4808576A (en) * 1986-04-28 1989-02-28 Mobay Corporation Remote administration of hyaluronic acid to mammals
JPH072117B2 (ja) * 1986-10-09 1995-01-18 三菱レイヨン株式会社 ヒアルロン酸の製造法
US5079236A (en) * 1987-05-27 1992-01-07 Hyal Pharmaceutical Corporation Pure, sterile, pyrogen-free hyaluronic acid formulations their methods of preparation and methods of use
US4946780A (en) * 1988-10-12 1990-08-07 Denkl Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Method for producing sodium hyaluronate by fermentation method
US4897349A (en) * 1989-04-28 1990-01-30 Medchem Products, Inc. Biosynthesis of hyaluronic acid
US6271216B1 (en) 1989-07-24 2001-08-07 Allergan Stable solution of hyaluronate in a balanced salt medium
US5015577A (en) * 1989-08-29 1991-05-14 Board Of Regents, The University Of Texas System DNA encoding hyaluronate synthase
US5990096A (en) * 1990-09-18 1999-11-23 Hyal Pharmaceutical Corporation Formulations containing hyaluronic acid
US5824658A (en) * 1990-09-18 1998-10-20 Hyal Pharmaceutical Corporation Topical composition containing hyaluronic acid and NSAIDS
US5910489A (en) * 1990-09-18 1999-06-08 Hyal Pharmaceutical Corporation Topical composition containing hyaluronic acid and NSAIDS
CA2061703C (en) * 1992-02-20 2002-07-02 Rudolf E. Falk Formulations containing hyaluronic acid
GB9024223D0 (en) * 1990-11-07 1990-12-19 Fermentech Ltd Production of hyaluronic acid
US5492936A (en) * 1990-11-30 1996-02-20 Allergan, Inc. Bimodal molecular weight hyaluronate formulations and methods for using same
US5605938A (en) * 1991-05-31 1997-02-25 Gliatech, Inc. Methods and compositions for inhibition of cell invasion and fibrosis using dextran sulfate
US5705178A (en) * 1991-05-31 1998-01-06 Gliatech, Inc. Methods and compositions based on inhibition of cell invasion and fibrosis by anionic polymers
US5234914A (en) * 1991-06-11 1993-08-10 Patent Biopharmaceutics, Inc. Methods of treating hemorrhoids and anorecial disease
US6103704A (en) * 1991-07-03 2000-08-15 Hyal Pharmaceutical Corporation Therapeutic methods using hyaluronic acid
US5977088A (en) * 1991-07-03 1999-11-02 Hyal Pharmaceutical Corporation Formulations containing hyaluronic acid
US5792753A (en) * 1991-07-03 1998-08-11 Hyal Pharmaceutical Corporation Compositions comprising hyaluronic acid and prostaglandin-synthesis-inhibiting drugs
US6218373B1 (en) 1992-02-20 2001-04-17 Hyal Pharmaceutical Corporation Formulations containing hyaluronic acid
US5767106A (en) * 1992-02-21 1998-06-16 Hyal Pharmaceutical Corporation Treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration
US5226359A (en) * 1992-03-10 1993-07-13 Vermeer Manufacturing Company Bale size indicator
US5550112A (en) * 1992-12-30 1996-08-27 Patent Biopharmaceutics, Inc. Hyaluronic acid-urea pharmaceutical compositions and uses
US5681825A (en) * 1993-03-15 1997-10-28 Lindqvist; Bengt Surgical method
IT1263393B (it) * 1993-07-30 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione e purificazione di acido ialuronico ad alto peso molecolare
US6551618B2 (en) * 1994-03-15 2003-04-22 University Of Birmingham Compositions and methods for delivery of agents for neuronal regeneration and survival
US6190691B1 (en) 1994-04-12 2001-02-20 Adolor Corporation Methods for treating inflammatory conditions
US5962477A (en) * 1994-04-12 1999-10-05 Adolor Corporation Screening methods for cytokine inhibitors
SE9401806D0 (sv) * 1994-05-26 1994-05-26 Pharmacia Ab Method and means for the production of hyaluronic acid
US6951743B2 (en) 1997-10-31 2005-10-04 University Of Oklahoma Board Of Regents Hyaluronan synthase genes and expression thereof in bacillus hosts
US7091008B1 (en) * 1994-07-01 2006-08-15 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthase genes and expression thereof in Bacillus hosts
US6455304B1 (en) * 1994-07-01 2002-09-24 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronate synthase gene and uses thereof
IT1274984B (it) * 1994-12-09 1997-07-29 Technopharma Sa Soluzioni viscosizzate con ialuronato di sodio per l'uso come fluido maschera nella fotocheratectomia terapeutica mediante laser a accimeri
US5849761A (en) * 1995-09-12 1998-12-15 Regents Of The University Of California Peripherally active anti-hyperalgesic opiates
US6573282B1 (en) 1995-09-12 2003-06-03 Adolor Corporation Peripherally active anti-hyperalgesic opiates
WO1998013024A2 (en) * 1996-09-27 1998-04-02 Hyal Pharmaceutical Corporation Hyaluronic drug delivery system
US5866165A (en) * 1997-01-15 1999-02-02 Orquest, Inc. Collagen-polysaccharide matrix for bone and cartilage repair
US6309670B1 (en) 1997-01-15 2001-10-30 Orquest, Inc. Collagen-polysaccharide matrix for treatment of bone tumors
US6869938B1 (en) 1997-06-17 2005-03-22 Fziomed, Inc. Compositions of polyacids and polyethers and methods for their use in reducing adhesions
US5906997A (en) * 1997-06-17 1999-05-25 Fzio Med, Inc. Bioresorbable compositions of carboxypolysaccharide polyether intermacromolecular complexes and methods for their use in reducing surgical adhesions
US7192984B2 (en) 1997-06-17 2007-03-20 Fziomed, Inc. Compositions of polyacids and polyethers and methods for their use as dermal fillers
CN101113436B (zh) * 1997-10-31 2013-02-06 俄克拉何马大学董事会 透明质酸合酶基因及其应用
EP1025211B1 (en) * 1997-10-31 2004-12-15 The Board of Regents of The University of Oklahoma Hyaluronan synthase gene and uses thereof
US6987023B2 (en) * 1998-04-02 2006-01-17 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma DNA encoding hyaluronan synthase from Pasteurella multocida and methods of use
US7223571B2 (en) * 1998-04-02 2007-05-29 The Board Of Regents Of The Universtiy Of Oklahoma Targeted glycosaminoglycan polymers by polymer grafting and methods of making and using same
US20080108110A1 (en) * 1998-04-02 2008-05-08 Deangelis Paul L Targeted glycosaminoglycan polymers by polymer grafting and methods of making and using same
US20060188966A1 (en) * 1998-04-02 2006-08-24 Deangelis Paul L Natural, chimeric and hybrid glycosaminoglycan polymers and methods of making and using same
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US7094581B2 (en) * 1998-10-26 2006-08-22 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthases and methods of making and using same
CH692919A5 (fr) * 1999-01-28 2002-12-13 Trb Chemedica S A Procédé de purification de l'acide hyaluronique à poids moléculaire élevé.
ES2223583T3 (es) 1999-07-28 2005-03-01 United States Surgical Corporation Barrera antiadherente de acido hialuronico.
US6566345B2 (en) 2000-04-28 2003-05-20 Fziomed, Inc. Polyacid/polyalkylene oxide foams and gels and methods for their delivery
US20050287638A1 (en) * 2000-04-25 2005-12-29 Weigel Paul H Hyaluronan receptor for endocytosis, variants thereof, and methods of making and using same
RU2297425C2 (ru) 2001-02-23 2007-04-20 Дзе Скриппс Рисерч Инститьют Полипептиды, происходящие из триптофанил-трнк-синтетазы, и их применение для регуляции развития кровеносных сосудов
US20070020737A1 (en) * 2001-12-03 2007-01-25 Pummill Philip E Hyaluronan synthases and methods of making and using same
US20040126853A1 (en) * 2002-06-20 2004-07-01 Novozymes A/S Flocculation with divalent salt
AU2003240432B2 (en) * 2002-06-20 2008-10-02 Novozymes Biopharma Dk A/S Flocculation with divalent salt
EP1539193A4 (en) * 2002-07-03 2010-05-05 Pericor Science Inc HYALURONIC ACID COMPOSITIONS AND METHODS OF USE
KR100472007B1 (ko) * 2002-08-19 2005-03-10 주식회사 코오롱 히아루론산 생산 균주 및 상기 균주를 이용한 히아루론산 생산방법
KR100829086B1 (ko) * 2002-08-19 2008-05-16 코오롱생명과학 주식회사 히아루론산 및 그의 염 정제방법
WO2004016771A1 (en) * 2002-08-19 2004-02-26 Kolon Ind. Inc. Microorganism producing hyaluronic acid and purification method of hyaluronic acid
US20080063677A1 (en) * 2004-03-10 2008-03-13 New Life Resources, Llc Therapeutic, nutraceutical and cosmetic applications for eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
US6946551B2 (en) * 2003-03-12 2005-09-20 New Life Resources, Llc Preparation of hyaluronic acid from eggshell membrane
US20040180025A1 (en) * 2003-03-12 2004-09-16 New Life Resources, Llc Therapeutic, nutraceutical and cosmetic applications for eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
AU2005212339B2 (en) 2004-02-06 2010-11-25 Georgia Tech Research Corporation Load bearing biocompatible device
CA2558623C (en) 2004-02-06 2013-04-16 Georgia Tech Research Corporation Surface directed cellular attachment
US8580315B2 (en) * 2004-03-10 2013-11-12 Esm Technologies, Llc Anti-inflammatory activity of eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
US7002007B2 (en) * 2004-05-28 2006-02-21 Calcigen Corporation Production of high molecular weight hyaluronates
US20060040895A1 (en) * 2004-08-19 2006-02-23 Kipling Thacker Aesthetic use of hyaluronan
US9439755B2 (en) 2008-11-26 2016-09-13 Anew Iol Technologies, Inc. Haptic devices for intraocular lens
US8377125B2 (en) 2006-04-05 2013-02-19 Anew Optics, Inc. Intraocular lens with accommodation
ITMI20061668A1 (it) * 2006-09-01 2008-03-02 Schiena Michele Giuseppe Di Composizione a base di acido ialuronico e suoi sali per il trattamento di lesioni epiteliali
AU2008210557B2 (en) 2007-01-30 2013-08-01 Cypress Pharmaceutical, Inc. Hyaluronate compositions
FR2919185B1 (fr) * 2007-07-23 2010-09-10 Ard Sa Utilisation d'acide hyaluronique pour la preparation de compositions destinees a l'amelioration notamment de l'etat des muqueuses
CA2702366C (en) * 2007-10-12 2016-06-07 London Health Sciences Centre Research Inc. Compositions affecting hyaluronic acid mediated activity
EP2209814B1 (en) * 2007-11-13 2017-01-25 Bio-Technology General (Israel) Ltd. Dilute filtration sterilization process for viscoelastic biopolymers
US8480734B2 (en) 2007-12-27 2013-07-09 Anew Optics, Inc. Intraocular lens with accommodation
CA2739243C (en) 2008-10-02 2017-08-22 L.R.R.& D. Ltd. Wound dressing comprising polymeric foam matrix and a hydrophilic polysaccharide disposed therein
US10010405B2 (en) 2008-11-26 2018-07-03 Anew Aol Technologies, Inc. Haptic devices for intraocular lens
WO2010062972A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-03 Anew Optics, Inc. Intraocular lens optic
US20110191086A1 (en) * 2010-02-04 2011-08-04 Anew Optics, Inc. Model of accommodative intraocular lens
CN102533902A (zh) * 2010-12-22 2012-07-04 桐乡恒基生物有限公司 一种非动物蛋白源透明质酸钠制备方法
ITMI20110033A1 (it) 2011-01-17 2012-07-18 Biofarmitalia Spa Composizione terapeutica mucoadesiva a base di acido ialuronico per la prevenzione e terapia di lesioni epiteliali, delle mucose del corpo umano
WO2012162552A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Cartiva, Inc. Tapered joint implant and related tools
CN102495053A (zh) * 2011-12-06 2012-06-13 上海景峰制药有限公司 一种玻璃酸钠中蛋白质的检测方法
WO2013119880A1 (en) 2012-02-07 2013-08-15 Global Bio Therapeutics Usa, Inc. Compartmentalized method of nucleic acid delivery and compositions and uses thereof
PL3019177T3 (pl) 2013-07-10 2021-04-19 Matrix Biology Institute Kompozycje hialuronianu o dużej sprężystości i ich zastosowania
US11364032B2 (en) 2013-08-08 2022-06-21 Global Bio Therapeutics, Inc. Clamp device for minimally invasive procedures and uses thereof
ITMI20131654A1 (it) * 2013-10-07 2015-04-08 Rosa Mario De Downstream di purificazione di acido ialuronico da brodi di coltura microbici
WO2016161026A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Cartiva, Inc. Carpometacarpal (cmc) implants and methods
WO2016161025A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Cartiva, Inc. Hydrogel implants with porous materials and methods
AU2016248062B2 (en) 2015-04-14 2020-01-23 Cartiva, Inc. Tooling for creating tapered opening in tissue and related methods
CA2896038C (en) 2015-07-03 2022-08-09 Glycobiosciences Inc. Polymer matrix compositions comprising a high concentration of bio-fermented sodium hyaluronate and uses thereof
CN108135926A (zh) 2015-09-24 2018-06-08 基质生物研究所 高弹性透明质酸组合物及其使用方法
WO2019158541A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Frieslandcampina Nederland B.V. Nutritional compositions for musculoskeletal support for athletes
KR102249438B1 (ko) * 2020-09-25 2021-05-07 주식회사 칸젠 히알루론산 생산 균주 및 이를 이용한 히알루론산의 생산방법
RU2765951C1 (ru) * 2021-05-14 2022-02-07 Общество с ограниченной ответственностью "АВЕО" Способ очистки гиалуроната от эндотоксинов
CN113854451A (zh) * 2021-09-07 2021-12-31 蓝海细胞(北京)生物科技有限公司 一种改善肤质的透明质酸钠复合肽饮品的加工工艺

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2975104A (en) * 1959-05-21 1961-03-14 American Home Prod Medium and method for producing and isolating hyaluronic acid
US4141973A (en) * 1975-10-17 1979-02-27 Biotrics, Inc. Ultrapure hyaluronic acid and the use thereof
JPS53113090A (en) * 1977-03-09 1978-10-03 Cpc International Inc Production of high viscous acidic polysaccharide by microorganism
US4303676A (en) * 1980-03-21 1981-12-01 Balazs Endre A Hyaluronate based compositions and cosmetic formulations containing same
CA1177003A (en) * 1980-07-08 1984-10-30 Peter S.J. Cheetham Bacterial ethanol production
US4328803B1 (en) * 1980-10-20 1994-01-11 Opthalmic Systems, Inc. Opthalmological procedures
SU950735A1 (ru) * 1980-10-28 1982-08-15 Саратовский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.Н.Г.Чернышевского Способ получени гиалуроновой кислоты
JPS57183707A (en) * 1981-05-02 1982-11-12 Shiseido Co Ltd Cosmetic
JPS57212300A (en) * 1981-06-22 1982-12-27 Pola Kasei Kogyo Kk Detergent composition
JPS5856692A (ja) * 1981-09-26 1983-04-04 Shiseido Co Ltd ヒアルロン酸の製造方法
JPS5857319A (ja) * 1981-09-30 1983-04-05 Green Cross Corp:The 高粘性ヒアルロン酸製剤

Also Published As

Publication number Publication date
IT1172379B (it) 1987-06-18
EP0137786B1 (en) 1989-01-25
IT8349510A0 (it) 1983-12-15
NO160146C (no) 1989-03-15
EP0137786A1 (en) 1985-04-24
DK499284D0 (da) 1984-10-18
FI844091L (fi) 1984-10-17
JPS60500597A (ja) 1985-05-02
AU556730B2 (en) 1986-11-13
IL69900A (en) 1987-02-27
CN85103674A (zh) 1986-11-12
US4517295A (en) 1985-05-14
NO160146B (no) 1988-12-05
DK499284A (da) 1984-10-18
AU2076883A (en) 1984-09-10
DE3379056D1 (en) 1989-03-02
FI844091A0 (fi) 1984-10-17
CA1212645A (en) 1986-10-14
EP0137786A4 (en) 1986-01-07
WO1984003302A1 (en) 1984-08-30
IL69900A0 (en) 1984-01-31
NO844112L (no) 1984-10-15
FI79346B (fi) 1989-08-31
ATE40407T1 (de) 1989-02-15
DK173681B1 (da) 2001-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI79346B (fi) Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur.
EP0556213B1 (en) Production of hyaluronic acid
CA2879538C (en) Production of highly purified sodium hyaluronate (hana) with controlled molecular weight
CN102459625B (zh) 生物技术生产软骨素
JPS60251898A (ja) 醗酵法によるヒアルロン酸の製造方法
EP0694616A2 (en) Process for the preparation of hyaluronic acid by fermentation with streptococcus
CA2360343C (en) Process for purifying high molecular weight hyaluronic acid
WO2010058427A2 (en) Process for production and purification of polymyxin b sulfate
JPH0549491A (ja) 微細藻類から多糖類を生産する方法
JPH0630604B2 (ja) ヒアルロン酸の製造法
JPH0823992A (ja) ヒアルロン酸の製造方法
JPH0342070B2 (fi)
JPH046356B2 (fi)
RU2089215C1 (ru) Способ получения менингококкового серогруппы в липоолигосахарида
JPH0378998B2 (fi)
JPH05276972A (ja) ヒアルロン酸の製造法
JPS63273471A (ja) Ａｔ−２５菌
JPH0746992A (ja) ヒアルロン酸の製造方法
MXPA01007523A (en) Process for purifying high molecular weight hyaluronic acid

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: LIFECORE BIOMEDICAL, INC.