JPS6328398A - ヒアルロン酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は発酵法によるヒアルロン酸（以下ＨＡと省略す
る）の製造法に関し、化粧品又は医薬品用として望まれ
ている天然に存在するＨＡに近い高分子量のＨＡを製造
する方法に関する。

〔従来の技術とその問題点〕

従来、ＨＡはニワトリのトサカ、牛の眼の硝子体又は成
帯等より抽出によって得られていた。しかし生体からの
分離精製は、夾雑タンパクやコンドロイチン等のムコ多
糖類の存在により複雑な工程を必要とする上に、生体中
のヒアルロニダーゼ等により分離・精製工程中に元来高
分子量であったＨＡが分解され低分子量化され、粘度及
び保温性が低くなるという欠点があった。そこでＨＡの
分解を抑制してより高分子量のＨＡを得る方法が種々考
案されている（例えばファーマシア社製の商品名“Ｈｅ
ａｌｏｎ”には極限粘度法により算出して分子ｆｆ１２
３０万のＨＡを使用）が、十分とは言い難く、また、そ
のためにコストアンプの要因ともなっていた。これら欠
点を解決するものとしてＨＡ生産能を有するストレプト
コッカス属の微生物を培養し、培養液からＨＡを単離す
る方法が特開昭５８−５６６９２号公報、特開昭６０−
１３３８９４号公報、特開昭６１−６３２９４号公報等
に開示されている。これらの方法は抽出法に比プして単
離・精製が簡単でコストが安いという利点がある。

しかしながら一般に抽出法ＨＡに比較し、発酵法により
得られるＨＡは分子量が低く　（一般に１５０万以下）
、ＨＡの特徴である粘性・保湿効果において劣るといわ
れており、特に天然に近い高分子量が要求される眼科・
関節炎治療薬等の医薬用途への利用が制限されていた。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、これらの問題点を解決すべく検討した結
果、培養液のｐＨをコントロールすることにより、発酵
法で高分子量のＨＡを取得できることを見い出し、本発
明を完成した。

すなわち本発明は、ＨＡ産生能を有するストレプトコッ
カス属の微生物を好気的に培養するにあたり、培養液の
ｐＨを７．５以上９．０以下の範囲にコントロールする
ことにより、培養液中に高分子量のヒアルロン酸を生成
蓄積せしめることを特徴とする発酵法によるヒアルロン
酸の製造法である。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明に用いられるＨＡ生産菌としては、ストレプトコ
ッカス　エキ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｑｕｉ
）などがあげられるが、なかでもストレプトコッカス　
エキが好ましい。また、これらの菌株から誘導された変
異株も使用できる。

本発明に用いる培地は通常の微生物の培養に用いるもの
で良く、グルコース、フラクトース、ガラクトース、シ
ュークロース等の炭素源、リン酸第１カリウム、リン酸
第２カリウム、硫酸マグネシウム、亜硫酸ソーダ、ナオ
硫酸ソーダ、リン酸アンモニウム等の無機塩類、ポリペ
プトン、カザミノ酸、酵母エキス、コーンステイープリ
カー、大豆加水分解液等の有機栄養源の他必要に応じて
各種アミノ酸、ビタミン類等が好適に用いられる。

これらの培地成分は一括仕込又は分割添加いずれでも採
用可能である。

本発明の培養は通気攪拌培養等の公知の方法でよく、培
養温度は３０〜３５℃が好ましい。

培養液のｐＨは菌の生育と共に低下するため、力性ソー
ダ、力性カリ、アンモニア等のｐＨＡＪＮ整剤を添加し
ｐＨ７，５〜９．０好ましくはｐＨ８，０〜８．７にコ
ントロールすれば本発明の目的を達成することができる
。ｐＨが７．５未満だと生成ＨＡの分子量が２００万以
下となり、ｐＨが９．０を越えるとＨＡ生産菌の生育が
著しく低下し、そのためＨＡの収量が極めて低くなり好
ましくない。

このようにして培養すると、ＨＡの生成と共に培養液の
粘度が次第に上昇してくる。使用炭素源が培養液中で消
費された時点で培養を停止し、遠心分離による除菌後、
アルコール等の有機溶媒による析出、限外ろ過による脱
塩等の簡単な公知精製法により高純度・高分子量ＨＡが
得られる。

〔実施例〕

次に実施例により本発明の詳細な説明するが本発明はこ
れに限定されるものではない。

実施例１ グルコース２％、リン酸第１カリウム０．２％。

硫酸マグネシウム７水塩０．０５％、ナオ硫酸ソーダ０
．１％、ポリペプトン１．０％、酵母エキス０．５の前
培養液Ｉ　Ｑｍｊ２を接種し、通気Ｎ　１．５　ｖｖｍ
、攪拌２００回転／分、温度３３°Ｃで力性ソーダでｐ
ｌ（を８．５にコントロールしながら１５時間培養した
。

培養液を塩酸でｐＨ４に調整後、蒸留水で２倍希釈し、
遠心分離により除菌した。得られた除菌液をエチルアル
コールを加えＨＡソーダを析出せしめる。これをろ別し
た汲水に溶解し、セチルピリジニウムクロライドを加え
、生じた沈澱をろ取し、水に再溶解後再びエチルアルコ
ールによる析出をくり返す。得られたＨＡソーダを室温
で減圧乾燥して培養１２あたり１．８ｇの白色ＨＡソー
ダを得た。

このＨＡソーダを０．２　Ｍ塩化ナトリウム）容ン夜と
（−て極叩粘度法により平均分子量を算出した。分子量
は、日周一般試験法２８：粘度測定法により比粘度を測
定し、各濃度に対する還元粘度を次式で算出し、 還元粘度を縦軸に、対応する濃度（８７１００ｍ　７り
を横軸にとってグラフを書き、各点を結ぶ線の延長と回
軸の交点を掻限粘度〔η〕とし、次のＷａｎｇＯ式（Ｒ
，Ｃ１ｅｆ、Ｊ、Ｌ、Ｗａｎｇ、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ
、　９．７９９分子量Ｍ−（〔η）　１０．０００２２
８）　’・２２５により算出した。

この結果、平均分子量は３３０万であった。

比較例 培養時のｐＨをｐ）１７．０とｐ）１９．２にする以外
は実施例１と同様にした結果を比較例１．２として表１
シこ示す。

以下余白 表１ □□□− → 」 」 く生育度は６６０ｎｍでの濁度を示す。）以下余白 実施例２ 培養時のｐＨをｐ）１８．０とｐＨ９，０にする以外は
実施例１と同様に培養を開始し、培養液中の残存グルコ
ース濃度が０．５〜１％濃度になる様にグルコースを分
添しつつ４０時間培養を続け、これらの培養液を実施例
１と同様に処理しＨＡソーダを得た。

その結果を表２に示す。

以下金白 表２ Ｕ、Ｊ、下余旨 〔発明の効果］ 以上に説明したように、本発明によれば、発酵法では従
来にない高分子量のＨＡを得ることができる。

特許出願人　　電気化学工業株式会社 手続補正書 昭和６１年８月１４日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒアルロン酸産生能を有するストレプトコッカス属
   の微生物を好気的に培養するにあたり、培養液のｐＨを
   ７．５以上９．０以下の範囲にコントロールすることに
   より、培養液中に高分子量のヒアルロン酸を生成蓄積せ
   しめることを特徴とする発酵法によるヒアルロン酸の製
   造法。 ２、培養液中に生成蓄積した高分子量のヒアルロン酸が
   極限粘度法による平均分子量で２００万〜４００万の範
   囲のヒアルロン酸である特許請求の範囲第１項記載のヒ
   アルロン酸の製造法。 ３、ヒアルロン酸産生能を有するストレプトコッカス属
   の微生物がストレプトコッカス　エキ（Ｓｔｒｅｐｔｃ
   ｏｃｕｓ　ｅｑｕｉ）である特許請求の範囲第１項記載
   のヒアルロン酸の製造法。