JPS6251999A - ヒアルロン酸の製造法 - Google Patents
ヒアルロン酸の製造法Info
- Publication number
- JPS6251999A JPS6251999A JP19349085A JP19349085A JPS6251999A JP S6251999 A JPS6251999 A JP S6251999A JP 19349085 A JP19349085 A JP 19349085A JP 19349085 A JP19349085 A JP 19349085A JP S6251999 A JPS6251999 A JP S6251999A
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- Japan
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- hyaluronic acid
- cultivated
- culture medium
- streptococcus
- microorganism
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は微生物によるヒアルロン酸の新規製造法に関す
る。ヒアルロン酸は分子量約１００万の多糖類の一種で
あり、硝子体、へその緒、関節液皮膚などに含まれ、水
分の保持、湿潤剤的な役割、細菌類の侵入防止などに役
立っている。この物質は、最近、化粧品として、また眼
、皮膚、関節などの治療剤あるいは保護剤としての用途
が期待されている。
る。ヒアルロン酸は分子量約１００万の多糖類の一種で
あり、硝子体、へその緒、関節液皮膚などに含まれ、水
分の保持、湿潤剤的な役割、細菌類の侵入防止などに役
立っている。この物質は、最近、化粧品として、また眼
、皮膚、関節などの治療剤あるいは保護剤としての用途
が期待されている。
従来の技術
ストレプトコツカス属のある群の細菌の莢膜成分として
ヒアルロン酸が存在することは古くから知られている〔
ジャーナル・オブ・ジェネラルマイクロバイオロジイ（
Ｊ、Ｇｅｎ、 ！、ｌ１ｃｒｏｂｉｏｌ、） １５
。
ヒアルロン酸が存在することは古くから知られている〔
ジャーナル・オブ・ジェネラルマイクロバイオロジイ（
Ｊ、Ｇｅｎ、 ！、ｌ１ｃｒｏｂｉｏｌ、） １５
。
４８５〈１９５６）〕。また最近ヒアルロン酸生産能を
有する微生物を糖成分３％以上の栄養培地で通気攪拌培
養を行い、ヒアルロン酸を採取する方法が知られている
（特開昭５８−５６６９２）。
有する微生物を糖成分３％以上の栄養培地で通気攪拌培
養を行い、ヒアルロン酸を採取する方法が知られている
（特開昭５８−５６６９２）。
発明が解決しようとする問題点および解決手段微生物に
よるヒアルロン酸の製造方法では、糖成分１〜８％の範
囲で、糖１ｇ当り０．０５〜０．０７ｇのヒアルロン酸
を生成蓄積させるにすぎず、工業的に安価なヒアルロン
酸の製造が困難である。
よるヒアルロン酸の製造方法では、糖成分１〜８％の範
囲で、糖１ｇ当り０．０５〜０．０７ｇのヒアルロン酸
を生成蓄積させるにすぎず、工業的に安価なヒアルロン
酸の製造が困難である。
従って、ヒアルロン酸の新規製造法の開発が望まれてい
る。
る。
本発明者は、ヒアルロン酸生産能を有する微生物を培養
するに際し酸化還元電位を−１００−一−４００ｍＶに
なるように通気攪拌を制御して培養することにより、高
収率でヒアルロン酸を生産できることを見出した。
するに際し酸化還元電位を−１００−一−４００ｍＶに
なるように通気攪拌を制御して培養することにより、高
収率でヒアルロン酸を生産できることを見出した。
以下に、本発明の詳細な説明する。
本発明は、ヒアルロン酸を生産する能力を有する微生物
を栄養培地に培養し、該培養物からヒアルロン酸を採取
する方法において、培養液中の酸化還元電位を−１００
〜−４００ｍＶとなるように通気攪拌を制御して培養す
るヒアルロン酸の製造法を提供する。
を栄養培地に培養し、該培養物からヒアルロン酸を採取
する方法において、培養液中の酸化還元電位を−１００
〜−４００ｍＶとなるように通気攪拌を制御して培養す
るヒアルロン酸の製造法を提供する。
本発明に使用するｉｆｉ生物は、ヒアルロン酸を菌体外
に蓄積する閑株であればいずれも使用可能であるが、と
くにランセフイールド（Ｌａｎｃｅｆ １ｅｌｄ）によ
る血清学的分類〔バーシーズ・マニュアル・オブ・デタ
ミネイティブ・バタテリオロジイ（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
！Ａａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍ＋ｎａｔｌｖｅ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）４９１、１９７４’ｌのＡ群お
よび０群のストレプトコツカス属菌種が望ましい。具体
的な例としては、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ス
トレプトコッカス・エクイ、ストレプトコッカス・エク
イシミリス、ストレプトコッカス・ディスガラクチイア
工、ストレプトコッカス・ズーエビデミクスなどが用い
られる。とくに好適にはストレプトコッカス・ズーエピ
デミクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉ
ｄｅｍｉｃｕｓ）ＮＣＴＣ７０２３があげられる。
に蓄積する閑株であればいずれも使用可能であるが、と
くにランセフイールド（Ｌａｎｃｅｆ １ｅｌｄ）によ
る血清学的分類〔バーシーズ・マニュアル・オブ・デタ
ミネイティブ・バタテリオロジイ（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
！Ａａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍ＋ｎａｔｌｖｅ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）４９１、１９７４’ｌのＡ群お
よび０群のストレプトコツカス属菌種が望ましい。具体
的な例としては、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ス
トレプトコッカス・エクイ、ストレプトコッカス・エク
イシミリス、ストレプトコッカス・ディスガラクチイア
工、ストレプトコッカス・ズーエビデミクスなどが用い
られる。とくに好適にはストレプトコッカス・ズーエピ
デミクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉ
ｄｅｍｉｃｕｓ）ＮＣＴＣ７０２３があげられる。
酸化還元電位としては、−１００ｍＶ以下、好ましくは
−１００〜−４００ｍＶの範囲がよい。培養液の酸化還
元電位の測定は、白金−カロメル電極系の方法〔生物物
理化学（共立全書編） ２．３４１（１９７７） ］に
準じて行い、酸化還元電位の範囲は通気攪拌で制御する
。例えば、５１容ジャーファーメンタ−を使用する場合
は、攪拌数を１５０〜４００ｒｐｍになるように制御す
ればよい。
−１００〜−４００ｍＶの範囲がよい。培養液の酸化還
元電位の測定は、白金−カロメル電極系の方法〔生物物
理化学（共立全書編） ２．３４１（１９７７） ］に
準じて行い、酸化還元電位の範囲は通気攪拌で制御する
。例えば、５１容ジャーファーメンタ−を使用する場合
は、攪拌数を１５０〜４００ｒｐｍになるように制御す
ればよい。
本発明に使用する培地としては、炭素源、窒素源、無機
物その他の栄養物を適当に含有する培地ならば、合成培
地、天然培地いずれも使用できる。
物その他の栄養物を適当に含有する培地ならば、合成培
地、天然培地いずれも使用できる。
炭素源としては、グルコース、シュクロース、廃糖蜜、
澱粉加水分解物などが使用できる。窒素源としては、ペ
プトン、ポリペプトン、酵母エキス、コーンスチープリ
カー、カゼイン加水分解物、プレイン・ハート・インヒ
ユージョン、馬血清などの有機栄養源の添加が望ましく
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアなどを併用することもできる。無機塩
としては、例えば塩化ナトリウム、リン酸−水素カリウ
ム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、チオ硫
酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、塩化カルシ
ウム、炭酸カルシウムなどが使用できる。もちろん天然
栄１１ｍを用いたときなどに天然物中に含有する無機塩
のみで満足させるこことが可能なときもある。また必要
に応じて、各種ビタミン、例えば、チアミン、ニコチン
酸、ビオチン、パントテン酸などが使用される。
澱粉加水分解物などが使用できる。窒素源としては、ペ
プトン、ポリペプトン、酵母エキス、コーンスチープリ
カー、カゼイン加水分解物、プレイン・ハート・インヒ
ユージョン、馬血清などの有機栄養源の添加が望ましく
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアなどを併用することもできる。無機塩
としては、例えば塩化ナトリウム、リン酸−水素カリウ
ム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、チオ硫
酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、塩化カルシ
ウム、炭酸カルシウムなどが使用できる。もちろん天然
栄１１ｍを用いたときなどに天然物中に含有する無機塩
のみで満足させるこことが可能なときもある。また必要
に応じて、各種ビタミン、例えば、チアミン、ニコチン
酸、ビオチン、パントテン酸などが使用される。
培養は、振盪培養、通気攪拌培養などの好気的条件下で
行う。培養温度は２５〜４２℃、好ましくは３０〜３８
℃が適当である。培養時のｐＨは５〜９が適当である。
行う。培養温度は２５〜４２℃、好ましくは３０〜３８
℃が適当である。培養時のｐＨは５〜９が適当である。
ｐＨ調節はアンモニア水、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、炭酸カルシウムなどによって行う。
リウム、炭酸カルシウムなどによって行う。
培養期間は通常２〜４日間でヒアルロン酸は主として菌
体外に蓄積する。
体外に蓄積する。
培養物からのヒアルロン酸の単離は、従来から行われて
いる多糖類の分離採取法によって行う。
いる多糖類の分離採取法によって行う。
遠心分離により菌体を除去し、トリクロル酢酸、または
クロロホルムとイソアミルアルコールとの混液での蛋白
質除去を行った後、２倍容のエタノールを添加してヒア
ルロン酸を沈殿させる。沈殿物を水に溶解させ不溶物を
除去し、低分子物質を透析、限外濾過などにより除き、
有機溶媒による再ｌ／１１：殿を繰返してヒアルロン酸
を単離することができる。
クロロホルムとイソアミルアルコールとの混液での蛋白
質除去を行った後、２倍容のエタノールを添加してヒア
ルロン酸を沈殿させる。沈殿物を水に溶解させ不溶物を
除去し、低分子物質を透析、限外濾過などにより除き、
有機溶媒による再ｌ／１１：殿を繰返してヒアルロン酸
を単離することができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１
ストレプトコッカス・ズーエピデミクスＮＣＴＣ７０２
３をプレイン・ハート・インヒユージョン寒天培地（日
永製薬社製）で３７℃、１６時間培培養た菌体を、グル
コース１％、ペプトン１．５％、酵母エキス０．５％、
コーンスチー７’ ＩＪ カー １％、グルタミン酸ナ
トリウム０．３％、リン酸−水素カリウム０．２％、硫
酸マグネシウム０．０５％、チオ硫酸ナトリウム０．１
％、炭酸カルシウム２％からなる種培地（ｐＨ７，０）
３０ Ｑｍｌを含む２１容三角フラスコに接種し、３７
℃で１６時間振盪培養した。この種培養液１５ Ｑｍｌ
を、グルコース２，５％、ペプトン１．５％、酵母エキ
ス０．５％、コーンスチーブリ力−０，５％、リン酸−
水素カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０，０５％、
チオ硫酸ナトリウム０．１％からなる発酵培地（ｐＨ７
，２）３βを含む５１容ジャーファーメンタ−に接種し
、温度３７℃、通気！０．３ｖｖｍ 、 ｐ ）１７．
０の条件下で攪拌数を適宜変更し、酸化還元電位を第１
表に示したように制御して培養した。酸化還元電位とヒ
アルロン酸生成量の関係は第１表に示すとおりである。
３をプレイン・ハート・インヒユージョン寒天培地（日
永製薬社製）で３７℃、１６時間培培養た菌体を、グル
コース１％、ペプトン１．５％、酵母エキス０．５％、
コーンスチー７’ ＩＪ カー １％、グルタミン酸ナ
トリウム０．３％、リン酸−水素カリウム０．２％、硫
酸マグネシウム０．０５％、チオ硫酸ナトリウム０．１
％、炭酸カルシウム２％からなる種培地（ｐＨ７，０）
３０ Ｑｍｌを含む２１容三角フラスコに接種し、３７
℃で１６時間振盪培養した。この種培養液１５ Ｑｍｌ
を、グルコース２，５％、ペプトン１．５％、酵母エキ
ス０．５％、コーンスチーブリ力−０，５％、リン酸−
水素カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０，０５％、
チオ硫酸ナトリウム０．１％からなる発酵培地（ｐＨ７
，２）３βを含む５１容ジャーファーメンタ−に接種し
、温度３７℃、通気！０．３ｖｖｍ 、 ｐ ）１７．
０の条件下で攪拌数を適宜変更し、酸化還元電位を第１
表に示したように制御して培養した。酸化還元電位とヒ
アルロン酸生成量の関係は第１表に示すとおりである。
第１表
酸
−１〔
実施例２
発酵培地のグルコース濃度を６％で行った他は実施例１
と同様な方法で培養を行った。酸化還元電位とヒアルロ
ン酸生成量の関係を第２表に示す。
と同様な方法で培養を行った。酸化還元電位とヒアルロ
ン酸生成量の関係を第２表に示す。
第 ２ 表
第１．２表より明らかなようにヒアルロン酸生成量は糖
成分濃度には関係なく、培養液中の酸化還元電位を一１
００ｍＶ以下に制御して培養するときに対糖成分当りの
ヒアルロン酸生成量は著しく高い値を示す。
成分濃度には関係なく、培養液中の酸化還元電位を一１
００ｍＶ以下に制御して培養するときに対糖成分当りの
ヒアルロン酸生成量は著しく高い値を示す。
発明の効果
本発明方法によれば、ヒアルロン酸を極めて効率よく安
価に供給することができる。
価に供給することができる。
Claims (1)
- ヒアルロン酸を生産する能力を有する微生物を栄養培地
に培養し、該培養物からヒアルロン酸を採取する方法に
おいて、培養液中の酸化還元電位を−１００〜−４００
ｍＶとなるように通気攪拌を制御して培養するヒアルロ
ン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19349085A JPS6251999A (ja) | 1985-09-02 | 1985-09-02 | ヒアルロン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19349085A JPS6251999A (ja) | 1985-09-02 | 1985-09-02 | ヒアルロン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6251999A true JPS6251999A (ja) | 1987-03-06 |
Family
ID=16308903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19349085A Pending JPS6251999A (ja) | 1985-09-02 | 1985-09-02 | ヒアルロン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6251999A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63156707A (ja) * | 1986-12-19 | 1988-06-29 | Yakult Honsha Co Ltd | ヒアルロン酸含有化粧料 |
| JPH0258502A (ja) * | 1988-08-24 | 1990-02-27 | Chisso Corp | ヒアルロン酸の製造法 |
| JPH0443637B2 (ja) * | 1987-09-08 | 1992-07-17 | Yakult Honsha Kk | |
| WO1995004132A1 (en) * | 1993-07-30 | 1995-02-09 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Process for the preparation and purification of high molecular weight hyaluronic acid |
-
1985
- 1985-09-02 JP JP19349085A patent/JPS6251999A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63156707A (ja) * | 1986-12-19 | 1988-06-29 | Yakult Honsha Co Ltd | ヒアルロン酸含有化粧料 |
| JPH0443637B2 (ja) * | 1987-09-08 | 1992-07-17 | Yakult Honsha Kk | |
| JPH0258502A (ja) * | 1988-08-24 | 1990-02-27 | Chisso Corp | ヒアルロン酸の製造法 |
| WO1995004132A1 (en) * | 1993-07-30 | 1995-02-09 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Process for the preparation and purification of high molecular weight hyaluronic acid |
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