JPS6394988A - ヒアルロン酸の製造法 - Google Patents
ヒアルロン酸の製造法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の利用分野
本発明は、ヒアルロン酸（ｌｌｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａ
ｃｉｄ）の高収率製造法に関する。
ｃｉｄ）の高収率製造法に関する。
従来の技術
ヒアルロン酸の製造法としては、ホルムストレーム（Ｂ
、ｌ１ｏｌ＋ａｓｔｒｏｍ＋ １５． Ｎｏ６．
１４０９−１４１３ 八１１１１１゜Ｍｉｃｒｏｂｉ
ａｌ １９（３７）、ジェー・ビー・ウル）７り（Ｊ。
、ｌ１ｏｌ＋ａｓｔｒｏｍ＋ １５． Ｎｏ６．
１４０９−１４１３ 八１１１１１゜Ｍｉｃｒｏｂｉ
ａｌ １９（３７）、ジェー・ビー・ウル）７り（Ｊ。
１３、Ｗｏｏｌｃｏｏｋ ８５．３５２ ３７３ Ｊ、
Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｌ）ｉａ１１９５７）、イー・キ
ュム（Ｅ、Ｋｊｅ＋ｏ 八ｃｔａ、 Ｐａｔｌ＋ｏｌ
、 ＨｉｃｒｏＬ＋ｉａｌ、 ５ｃａｎｄ、 ５ｅｅｔ
８４．１６２−１６４．１９７６）らによって、主た
特開昭５６−５２３５５．特開昭５８−５６６９２゜特
開昭６１−６３２９３．特開昭６１−６３２９４などが
知られている。
Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｌ）ｉａ１１９５７）、イー・キ
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、 ＨｉｃｒｏＬ＋ｉａｌ、 ５ｃａｎｄ、 ５ｅｅｔ
８４．１６２−１６４．１９７６）らによって、主た
特開昭５６−５２３５５．特開昭５８−５６６９２゜特
開昭６１−６３２９３．特開昭６１−６３２９４などが
知られている。
発明が解決しようとする問題点
ストレプトコッカス属のヒアルロン酸を生成する能力を
有する微生物を通気攪拌培養して、培養液にヒアルロン
酸を蓄積せしめる場合、醗醇の経過につれて培養液の粘
度は著しく高まる。高粘度の培養液は酸素移動速度を底
下させ、また基質および酸・アルカリの分散が均一とな
らず培養の制御を困難にせしめ生成量の増収が得られな
い。
有する微生物を通気攪拌培養して、培養液にヒアルロン
酸を蓄積せしめる場合、醗醇の経過につれて培養液の粘
度は著しく高まる。高粘度の培養液は酸素移動速度を底
下させ、また基質および酸・アルカリの分散が均一とな
らず培養の制御を困難にせしめ生成量の増収が得られな
い。
問題点を解決するための手段
本発明は前記現状に鑑みてなされたちので、その目的は
培養液中の粘度を適正に制御することにより、生産物（
ヒアルロン酸）の増収を可能にする方法を提供するもの
である。培養液の粘度を制御するには温度の変更、 、
Ｉ＋の変更また希溶剤の添加および水の添加などいずれ
でもよいが、培養液の粘度を効率よく制御するには、培
養液の粘度に応じて滅菌水を供給する方法は最も効果が
大きく。
培養液中の粘度を適正に制御することにより、生産物（
ヒアルロン酸）の増収を可能にする方法を提供するもの
である。培養液の粘度を制御するには温度の変更、 、
Ｉ＋の変更また希溶剤の添加および水の添加などいずれ
でもよいが、培養液の粘度を効率よく制御するには、培
養液の粘度に応じて滅菌水を供給する方法は最も効果が
大きく。
水以外にも糖など栄養基を含んだ水溶液、酸またはアル
カリなどを含んだ水溶液などいずれでも良い。水または
水溶液の添加に関しては一時的１間歇的または連続的の
いずれの供給でも良いが、一時的に大量の水を投入する
と菌体への環境を大きく変化させ好ましくない場合もあ
り、好ましくは培養液の粘度を指標にして水または水溶
液を間歇的または連続的に供給し、培養液を希釈するこ
とにより粘度を着しく１氏下させ物質移動速度を高める
方法がよい。具体的には粘度１００〜８００センチボイ
ズ好ましくは２００〜６００センチポイズまで希釈する
。
カリなどを含んだ水溶液などいずれでも良い。水または
水溶液の添加に関しては一時的１間歇的または連続的の
いずれの供給でも良いが、一時的に大量の水を投入する
と菌体への環境を大きく変化させ好ましくない場合もあ
り、好ましくは培養液の粘度を指標にして水または水溶
液を間歇的または連続的に供給し、培養液を希釈するこ
とにより粘度を着しく１氏下させ物質移動速度を高める
方法がよい。具体的には粘度１００〜８００センチボイ
ズ好ましくは２００〜６００センチポイズまで希釈する
。
本発明に用いるヒアルロン酸生産菌としては。
ストレプトコッカス０ピオデネス（ＳＬｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ−ｐｙＯｇｅｌｌｅＳ） ｊストレプトコッカ
ス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔ−ＯｅＯＣＣｕＳ ｅｑｕｉ
）ｓストレプトフッカス・エクイシミリス（ＳＬｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、ストレ
プトコッカス・ディスガラクチイエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）＋ストレプトフ
ッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）、パスツレラ・マル
トジグ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ＋ｎｕｌｔｏｃｉｄ
ａ）などがあげられる。
ｃｃｕｓ−ｐｙＯｇｅｌｌｅＳ） ｊストレプトコッカ
ス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔ−ＯｅＯＣＣｕＳ ｅｑｕｉ
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ｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）、パスツレラ・マル
トジグ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ＋ｎｕｌｔｏｃｉｄ
ａ）などがあげられる。
培養に用いる培地組成成分は９通常の培養液の成分を用
いればよく、主た該培養液の１成分として、血清、硫酸
マグネシウムを添加してもよい。
いればよく、主た該培養液の１成分として、血清、硫酸
マグネシウムを添加してもよい。
該培養液を具体的に示すと１例えば液糖（澱粉をアミラ
ーゼで分解したもの）１５，０％、酵母エキス０．２％
、ペプトン２．５％、 ＫＩＩ２ＰＯ，０，３％、チオ
硫酸ソーダ０．２％、亜硫酸ソーダ０．０３％を含むｐ
ｌ＋５．５〜８．５の成分の培養液を用いることができ
る。（ただし以上の％は重量／容量％である。） 本発明のヒアルロン酸製造は、まず培養液を加圧蒸気滅
菌等で滅菌後、ついでヒアルロン酸生産菌な培養液に接
種したのち９通気攪拌し、温度２５〜４０℃、好ましく
は３０〜３５°Ｃにて１ ｐＨを６．５〜８．０゜好ま
しくは６．８に自動制御して培養する。
ーゼで分解したもの）１５，０％、酵母エキス０．２％
、ペプトン２．５％、 ＫＩＩ２ＰＯ，０，３％、チオ
硫酸ソーダ０．２％、亜硫酸ソーダ０．０３％を含むｐ
ｌ＋５．５〜８．５の成分の培養液を用いることができ
る。（ただし以上の％は重量／容量％である。） 本発明のヒアルロン酸製造は、まず培養液を加圧蒸気滅
菌等で滅菌後、ついでヒアルロン酸生産菌な培養液に接
種したのち９通気攪拌し、温度２５〜４０℃、好ましく
は３０〜３５°Ｃにて１ ｐＨを６．５〜８．０゜好ま
しくは６．８に自動制御して培養する。
上述の条件で２〜４日問培養したのち、該培養液を遠心
分離もしくは濾過によって除菌し該濾液を限外濾過もし
くは透析することにより低分子量物質を除去する。つい
で低分子量物質を除去した濾液をエタノールによる沈澱
、界面活性剤による分画、沈澱、イオン交換クロマトグ
ラフィーおよびデル濾過クロマトグラフィーなどの公知
の手段によって生成したヒアルロン酸を精製する。
分離もしくは濾過によって除菌し該濾液を限外濾過もし
くは透析することにより低分子量物質を除去する。つい
で低分子量物質を除去した濾液をエタノールによる沈澱
、界面活性剤による分画、沈澱、イオン交換クロマトグ
ラフィーおよびデル濾過クロマトグラフィーなどの公知
の手段によって生成したヒアルロン酸を精製する。
次に９本発明を実施例により詳細に説明するが。
本発明はこれによりなんら限定されるものではない。
実施例１
液糖１５．０％（コーンスターチに１００’Ｃで５分ス
ピターゼを反応させ更に６０°Ｃで２日間アミログルコ
シグーゼを反応させたもの）、酵母エキス０．２％。
ピターゼを反応させ更に６０°Ｃで２日間アミログルコ
シグーゼを反応させたもの）、酵母エキス０．２％。
ペプトン２．５％、 Ｋｌｌ□ＰＯ４０，３％、チオ硫
酸ソーダ０．２％、亜硫酸ソーダ０．００３％を含むｐ
Ｈ７，４の液体培地２１を３Ｌ容ジヤーフ７メンターに
分注し。
酸ソーダ０．２％、亜硫酸ソーダ０．００３％を含むｐ
Ｈ７，４の液体培地２１を３Ｌ容ジヤーフ７メンターに
分注し。
１２０℃、 １５分間滅菌処理後、前培養したストレプ
トコッカス・ズーエピデミカスＭ−８２５４を２０ｍＮ
接種し、 ｐＨ６，８，３２°Ｃで４日間通気攪拌（通
気量２１７ｍ１ｎ、回転数２００〜６５０ｒｐｍ）培養
した。
トコッカス・ズーエピデミカスＭ−８２５４を２０ｍＮ
接種し、 ｐＨ６，８，３２°Ｃで４日間通気攪拌（通
気量２１７ｍ１ｎ、回転数２００〜６５０ｒｐｍ）培養
した。
培養終了後の培養液より、菌体およびその他のきょう雑
物を除去、得られた上澄液に希塩酸を加えてｐＨを４．
０に調整し、中空糸限外濾過器にて濃縮し、さらにイオ
ン交換水にて透析した。ついでエチルアルコールによる
沈澱分別、界面活性剤による分画沈澱、イオン交換クロ
マトグラフィー等の公知の方法にて精製し、溶液を凍結
乾燥して培養液１１！より５．６ｇのヒアルロン酸ナト
リウムの白色粉末を得た。培養終了時の全培養液（２Ｎ
）からは１１．２ｇ（５，６ｇ／ＬＸ ２Ｎ）の収量で
あった。この場合の培養液の粘度は最高１７５０センチ
ボイズまで増大した。−力培養１２時開以降滅菌水を連
続的に供給し粘度の増大を２００〜６００センチボイズ
の範囲に制御した培養の場合には培養液１１より５．８
ｇのヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末を得、培養終了
時の全培養液（２，５２４りからは１４，６２８（５，
８ｇ／βＸ２．５２β）の収量であった。
物を除去、得られた上澄液に希塩酸を加えてｐＨを４．
０に調整し、中空糸限外濾過器にて濃縮し、さらにイオ
ン交換水にて透析した。ついでエチルアルコールによる
沈澱分別、界面活性剤による分画沈澱、イオン交換クロ
マトグラフィー等の公知の方法にて精製し、溶液を凍結
乾燥して培養液１１！より５．６ｇのヒアルロン酸ナト
リウムの白色粉末を得た。培養終了時の全培養液（２Ｎ
）からは１１．２ｇ（５，６ｇ／ＬＸ ２Ｎ）の収量で
あった。この場合の培養液の粘度は最高１７５０センチ
ボイズまで増大した。−力培養１２時開以降滅菌水を連
続的に供給し粘度の増大を２００〜６００センチボイズ
の範囲に制御した培養の場合には培養液１１より５．８
ｇのヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末を得、培養終了
時の全培養液（２，５２４りからは１４，６２８（５，
８ｇ／βＸ２．５２β）の収量であった。
実施例２
実施例１に於いて使用した培地中の液糖量を７．５％に
おきかえた培地を用いてストレプトコッカス・ズーエピ
デミカスＭ−８２５４を実施例１と同様の方法で培養し
た場合は４．０２ｇ／Ｌｔ全培養液（２゜０５２）から
は８．２４ｇ（４，０２ｇ／ＬＸ２，０５＆）であった
。この場合の培養液の粘度は最高１３５０センチボイズ
まで増大した。一方、培養１２ｈｒ以降滅菌水を連続的
に供給し粘度の増大を２００〜６００ｃｐの範囲に制御
した場合には実施例１と同様の処理精製を行い培養液１
Ｎより４．３６ｇのヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末
を得、全培養液（２，３Ｎ）からは１０．０ｇ（４，３
６ｇ／ＮＸ２．３ｆｌ）の収量であった。また、培養１
２ｈｒ以降滅菌水の代わりに４０％液糖溶液におきかえ
て連続的供給方法で培養液の粘度の増大を２５０〜６５
０センチポイズの範囲に制御した場合には培養液１りよ
’）６．３２ｇのヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末を
得た。全培養液（２，６５Ｎ）からは１６．７ｇ（６，
３２ｇ＃Ｘ２．６５Ｎ）の収量であった。
おきかえた培地を用いてストレプトコッカス・ズーエピ
デミカスＭ−８２５４を実施例１と同様の方法で培養し
た場合は４．０２ｇ／Ｌｔ全培養液（２゜０５２）から
は８．２４ｇ（４，０２ｇ／ＬＸ２，０５＆）であった
。この場合の培養液の粘度は最高１３５０センチボイズ
まで増大した。一方、培養１２ｈｒ以降滅菌水を連続的
に供給し粘度の増大を２００〜６００ｃｐの範囲に制御
した場合には実施例１と同様の処理精製を行い培養液１
Ｎより４．３６ｇのヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末
を得、全培養液（２，３Ｎ）からは１０．０ｇ（４，３
６ｇ／ＮＸ２．３ｆｌ）の収量であった。また、培養１
２ｈｒ以降滅菌水の代わりに４０％液糖溶液におきかえ
て連続的供給方法で培養液の粘度の増大を２５０〜６５
０センチポイズの範囲に制御した場合には培養液１りよ
’）６．３２ｇのヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末を
得た。全培養液（２，６５Ｎ）からは１６．７ｇ（６，
３２ｇ＃Ｘ２．６５Ｎ）の収量であった。
発明の効果
本発明によれば、ヒアルロン酸を効率よく生産すること
ができる。
ができる。
Claims (1)
- ストレプトコッカス属のヒアルロン酸を生成する能力を
有する微生物を通気撹拌培養し、培養中培養液の粘度を
１００〜８００センチポイズに制御することによりヒア
ルロン酸生成量を増大せしめることを特徴とする微生物
によるヒアルロン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23786186A JPS6394988A (ja) | 1986-10-08 | 1986-10-08 | ヒアルロン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23786186A JPS6394988A (ja) | 1986-10-08 | 1986-10-08 | ヒアルロン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6394988A true JPS6394988A (ja) | 1988-04-26 |
Family
ID=17021502
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23786186A Pending JPS6394988A (ja) | 1986-10-08 | 1986-10-08 | ヒアルロン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6394988A (ja) |
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