JPH072116B2 - ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲ｉｉｉ▼の製造法 - Google Patents
ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲ｉｉｉ▼の製造法Info
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- JPH072116B2 JPH072116B2 JP61119088A JP11908886A JPH072116B2 JP H072116 B2 JPH072116 B2 JP H072116B2 JP 61119088 A JP61119088 A JP 61119088A JP 11908886 A JP11908886 A JP 11908886A JP H072116 B2 JPH072116 B2 JP H072116B2
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- Japan
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- inulin
- dfaiii
- difructose
- iii
- producing
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出
液より微生物及び／またはその産生する酵素を利用して
ジフルクトース ジアンヒドリドIII（以下DFAIIIとい
う）を高収率で製造する方法に関するものである。
液より微生物及び／またはその産生する酵素を利用して
ジフルクトース ジアンヒドリドIII（以下DFAIIIとい
う）を高収率で製造する方法に関するものである。
DFAIIIは1931年ジャクソンら（Bur.Stand.J.Res.,６,70
9,1931）によって単離同定された２糖類で、その構造よ
り還元基を持たず、非発酵性の糖であることなどによ
り、着色をおさえた食品への利用、発酵食品への糖甘味
付加等に有用である。
9,1931）によって単離同定された２糖類で、その構造よ
り還元基を持たず、非発酵性の糖であることなどによ
り、着色をおさえた食品への利用、発酵食品への糖甘味
付加等に有用である。
［従来の技術］ イヌリンはフラクトースを主構成糖とする多糖である。
ジャクソンらは、イヌリンを酸分解してその加水分解物
よりDFAIIIを単離しているが、収率は約２％と低く、効
率的な製造法とはいえない。田中ら（Biochim.Biopys.A
cta,284,248,1972）は1972年アースロバクター・ウレア
ファシエンスの産生する酵素を用いてDFAIIIを生成させ
ている。
ジャクソンらは、イヌリンを酸分解してその加水分解物
よりDFAIIIを単離しているが、収率は約２％と低く、効
率的な製造法とはいえない。田中ら（Biochim.Biopys.A
cta,284,248,1972）は1972年アースロバクター・ウレア
ファシエンスの産生する酵素を用いてDFAIIIを生成させ
ている。
［発明が解決しようとする問題点］ 近年、食文化の変遷により甘味料も多様化の傾向にあ
り、特にDFAIII等のこれまでの甘味料とは性質の異なっ
たものが要求されるようになってきた。しかし、DFAIII
の従来の製造法を工業化することは困難であった。そこ
で、DFAIIIの生産には独自の高活性DFAIIIの合成酵素生
産菌が必要となった。
り、特にDFAIII等のこれまでの甘味料とは性質の異なっ
たものが要求されるようになってきた。しかし、DFAIII
の従来の製造法を工業化することは困難であった。そこ
で、DFAIIIの生産には独自の高活性DFAIIIの合成酵素生
産菌が必要となった。
［問題点を解決するための手段］ そこで本発明者等は微生物の検索を行った結果、ある種
の微生物がイヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出
液より高活性でDFAIIIを合成する酵素を産生することを
見い出した。
の微生物がイヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出
液より高活性でDFAIIIを合成する酵素を産生することを
見い出した。
本発明は、この知見により完成したものである。本発明
は、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出液にア
ースロバクター・グロビフォルミスC11−１株（FERM P-
8748）及び／または該微生物の産生する酵素を作用させ
ることを特徴とするジフルクトース ジアンヒドリドII
Iの製造法である。
は、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出液にア
ースロバクター・グロビフォルミスC11−１株（FERM P-
8748）及び／または該微生物の産生する酵素を作用させ
ることを特徴とするジフルクトース ジアンヒドリドII
Iの製造法である。
本菌の産生する酵素をイヌリン及び／またはイヌリン含
有植物抽出液に作用させることにより、DFAIIIを効率的
に得ることができる。
有植物抽出液に作用させることにより、DFAIIIを効率的
に得ることができる。
以下、本菌株の菌学的諸性質を述べる。
1.細胞形態 形態:0.5〜1.0×1.5〜4.0の桿菌 胞子：形成しない 鞭毛：なし 2.培養所見 寒天集落：円形、丘状、光沢あり、不透明、白色 寒天斜面：中程度の生育、光沢あり、白色 肉汁ゼラチン：液化する 3.生理的諸性質 好気性 生育温度:30℃で良好な生育を示す 37℃で生育しない 硝酸塩の還元性：あり メチルレッド反応：陰性 硫化水素の生成：あり（システイン添加倍地酢酸鉛試験 紙） クエン酸の利用：あり（クリステンセン倍地） カタラーゼの生成：あり 澱粉分解性：あり カゼインの分解：あり 糖より酸の生成：グルコース、シュクロース、ラクトー ス、マンニットのいずれの糖からも酸 及びガスを生成しない Ｇ−Ｃ含量:62.0％ 上記の諸性質から、バージェイズ マニュアル オブ
デタミネイティブ バクテリオロジー第８版により検索
した結果、本菌株はアースロバクター属に属する。さら
に種については栄養要求性がなく澱粉を分解すること、
及びＧ−Ｃ含量などによりアースロバクター・グロビフ
ォルミスと同定される。アースロバクター・グロビフォ
ルミスと本菌株の菌学的諸性質を比較すればきわめてよ
く合致することから、本菌はアースロバクター・グロビ
フォルミスと確定され、アースロバクター・グロビフォ
ルミス C11−１と命名された。さらに同書第７版によ
れば、ノンクロモゲニックで澱粉を分解することなどか
ら、これまでにDFAIII合成酵素産生菌として知られてい
るアースロバクター・ウレアファシエンスとは異なった
種であるといえる。
デタミネイティブ バクテリオロジー第８版により検索
した結果、本菌株はアースロバクター属に属する。さら
に種については栄養要求性がなく澱粉を分解すること、
及びＧ−Ｃ含量などによりアースロバクター・グロビフ
ォルミスと同定される。アースロバクター・グロビフォ
ルミスと本菌株の菌学的諸性質を比較すればきわめてよ
く合致することから、本菌はアースロバクター・グロビ
フォルミスと確定され、アースロバクター・グロビフォ
ルミス C11−１と命名された。さらに同書第７版によ
れば、ノンクロモゲニックで澱粉を分解することなどか
ら、これまでにDFAIII合成酵素産生菌として知られてい
るアースロバクター・ウレアファシエンスとは異なった
種であるといえる。
本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所にFERM P-8
748として寄託されている。
748として寄託されている。
本菌株をイヌリン及び／またはイヌリン含有植物の抽出
液を唯一の炭素源とした倍地に培養すれば、高活性のDF
AIIIの合成酵素が得られる。培養温度範囲は20〜37℃で
あり、培養時間は12〜60時間が適当である。培養終了
後、培養液をそのままあるいは遠心分離等により固液分
離して得た菌体を用いてもよいが、除菌処理して得られ
た培養上澄を、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物
抽出液に加えて反応させると、DFAIIIが合成される。な
お、イヌリン含有植物としてはダリア、ゴボウ等があ
り、この他微生物起源のフラクトースポリマー（フラク
トースの二糖類以上）も原料としての利用が考えられ
る。反応液を加熱または酸処理して酵素を失活させ、
過、脱色、脱塩等の方法を用いて精製すれば、オリゴ糖
やフラクトースを含んだDFAIIIの製品が得られる。さら
に高純度のDFAIIIを得るには、精製した糖液を活性炭カ
ラムクロマトグラフィ、市販の充填剤を用いたゲル過
カラムクロルトグラフィ、種々の膜を用いた膜分離濃縮
などを行えばよい。または、反応液に酵母を加えてDFAI
II以外の糖を発酵させ、その後精製する方法もDFAIIIの
純度を高めるに有効な手段である。ゲル過や膜分離で
分画されたフラクトオリゴ糖等は、副産物として既存の
利用を行うこともできる。
液を唯一の炭素源とした倍地に培養すれば、高活性のDF
AIIIの合成酵素が得られる。培養温度範囲は20〜37℃で
あり、培養時間は12〜60時間が適当である。培養終了
後、培養液をそのままあるいは遠心分離等により固液分
離して得た菌体を用いてもよいが、除菌処理して得られ
た培養上澄を、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物
抽出液に加えて反応させると、DFAIIIが合成される。な
お、イヌリン含有植物としてはダリア、ゴボウ等があ
り、この他微生物起源のフラクトースポリマー（フラク
トースの二糖類以上）も原料としての利用が考えられ
る。反応液を加熱または酸処理して酵素を失活させ、
過、脱色、脱塩等の方法を用いて精製すれば、オリゴ糖
やフラクトースを含んだDFAIIIの製品が得られる。さら
に高純度のDFAIIIを得るには、精製した糖液を活性炭カ
ラムクロマトグラフィ、市販の充填剤を用いたゲル過
カラムクロルトグラフィ、種々の膜を用いた膜分離濃縮
などを行えばよい。または、反応液に酵母を加えてDFAI
II以外の糖を発酵させ、その後精製する方法もDFAIIIの
純度を高めるに有効な手段である。ゲル過や膜分離で
分画されたフラクトオリゴ糖等は、副産物として既存の
利用を行うこともできる。
精製されたDFAIIIの旋光度は「α」＝＋135.1°、薄層
クロルトグラフィによると、イヌリンの酸分解により得
られた標準のDFAIIIとRf値は一致した。
クロルトグラフィによると、イヌリンの酸分解により得
られた標準のDFAIIIとRf値は一致した。
［実施例］ 次に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、
これらに限定されるものではない。
これらに限定されるものではない。
実施例１ 市販イヌリン0.3％、酵母エキス0.05％、リン酸２ナト
リウム0.4％、リン酸１カリウム0.1％、硫酸マグネシウ
ム0.05％、硫酸第一鉄0.001％、塩化カルシウム0.003％
を含んだ倍地100mlを、pH7に調整して120℃で15分間蒸
気滅菌する。この滅菌した倍地にアースロバクター・グ
ロビフォルミス C11−１（FERM P-8748）を一白金耳接
種し、30℃で24時間培養を行う。培養終了後、遠心分離
機で除菌して得た培養上澄をpH5に調整する。地鵜製培
養上澄液5mlに10％イヌリン溶液5mlを加えて、30℃にお
いて一夜反応させる。反応液を加熱して酵素を失活後、
反応液中のDFAIIIの生成率を高速液体クロマトグラフィ
を用いて求めると、DFAIII80.2％、フラクトース15.4
％、オリゴ糖4.4％であった。
リウム0.4％、リン酸１カリウム0.1％、硫酸マグネシウ
ム0.05％、硫酸第一鉄0.001％、塩化カルシウム0.003％
を含んだ倍地100mlを、pH7に調整して120℃で15分間蒸
気滅菌する。この滅菌した倍地にアースロバクター・グ
ロビフォルミス C11−１（FERM P-8748）を一白金耳接
種し、30℃で24時間培養を行う。培養終了後、遠心分離
機で除菌して得た培養上澄をpH5に調整する。地鵜製培
養上澄液5mlに10％イヌリン溶液5mlを加えて、30℃にお
いて一夜反応させる。反応液を加熱して酵素を失活後、
反応液中のDFAIIIの生成率を高速液体クロマトグラフィ
を用いて求めると、DFAIII80.2％、フラクトース15.4
％、オリゴ糖4.4％であった。
実施例２ 実施例１で得られた調整培養上澄液5mlを、65℃で20分
間加温してイヌリナーゼを失活させた後、10％イヌリン
溶液5mlを加えて30℃において一夜反応させる。反応液
を加熱して酵素を失活後、反応液中のDFAIIIの生成率を
高速液体クロマトグラフィを用いて求めると、DFAIII8
5.5％、オリゴ糖14.5％であった。
間加温してイヌリナーゼを失活させた後、10％イヌリン
溶液5mlを加えて30℃において一夜反応させる。反応液
を加熱して酵素を失活後、反応液中のDFAIIIの生成率を
高速液体クロマトグラフィを用いて求めると、DFAIII8
5.5％、オリゴ糖14.5％であった。
［発明の効果］ 本発明によれば、DFAIIIを高収率で製造することがで
き、DFAIIIはダイエット甘味料として広い分野での利用
が期待される。
き、DFAIIIはダイエット甘味料として広い分野での利用
が期待される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 積 浩二 鹿児島県鹿児島市和田町924番地６ (72)発明者 永田 一志 鹿児島県鹿児島市荒田１丁目47番８号 (72)発明者 本坊 慶吉 鹿児島県鹿児島市薬師１丁目７番33号 (72)発明者 門間 充 茨城県新治郡桜村吾妻２丁目1506番地 809−307 (72)発明者 貝沼 圭二 茨城県新治郡桜村並木３−619
Claims (1)
- 【請求項１】イヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽
出液にアースロバクター・グロビフォルミスC11−１株
（FERM P-8748）及び／または該微生物の産生する酵素
を作用させることを特徴とするジフルクトース ジアン
ヒドリドIIIの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61119088A JPH072116B2 (ja) | 1986-05-26 | 1986-05-26 | ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲ｉｉｉ▼の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61119088A JPH072116B2 (ja) | 1986-05-26 | 1986-05-26 | ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲ｉｉｉ▼の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62275694A JPS62275694A (ja) | 1987-11-30 |
| JPH072116B2 true JPH072116B2 (ja) | 1995-01-18 |
Family
ID=14752594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61119088A Expired - Fee Related JPH072116B2 (ja) | 1986-05-26 | 1986-05-26 | ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲ｉｉｉ▼の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH072116B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01225492A (ja) * | 1988-03-07 | 1989-09-08 | Mitsubishi Kasei Corp | ジフルクトース・ジアンヒドリド３の製造法 |
| JPH066064B2 (ja) * | 1988-05-13 | 1994-01-26 | 農林水産省食品総合研究所長 | ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法 |
| JP4617077B2 (ja) * | 2003-10-30 | 2011-01-19 | 日本甜菜製糖株式会社 | ジフルクトース・ジアンヒドリドｉｉｉの精製方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5626400A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Mitsuo Watanabe | Device for discharging movable charger |
-
1986
- 1986-05-26 JP JP61119088A patent/JPH072116B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5626400A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Mitsuo Watanabe | Device for discharging movable charger |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62275694A (ja) | 1987-11-30 |
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