JPH0632628B2 - ジフルクト−スジアンヒドリド▲ｉ▼の製造法 - Google Patents
ジフルクト−スジアンヒドリド▲ｉ▼の製造法Info
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- JPH0632628B2 JPH0632628B2 JP11908786A JP11908786A JPH0632628B2 JP H0632628 B2 JPH0632628 B2 JP H0632628B2 JP 11908786 A JP11908786 A JP 11908786A JP 11908786 A JP11908786 A JP 11908786A JP H0632628 B2 JPH0632628 B2 JP H0632628B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出
液より微生物及び／またはその産生する酵素を利用して
ジフルクトース ジアンヒドリドＩ（以下ＤＦＡＩとい
う）を高収率で製造する方法に関するものである。
液より微生物及び／またはその産生する酵素を利用して
ジフルクトース ジアンヒドリドＩ（以下ＤＦＡＩとい
う）を高収率で製造する方法に関するものである。
ＤＦＡＩは1929年ジャクソンら(Bur.Stand.J.Res.,3,2
7,1929)によって単離同定された２糖類で、その構造よ
り還元基を持たず、非発酵性の糖であることなどによ
り、着色をおさえた食品への利用、発酵食品への糖甘味
付加等に有用である。
7,1929)によって単離同定された２糖類で、その構造よ
り還元基を持たず、非発酵性の糖であることなどによ
り、着色をおさえた食品への利用、発酵食品への糖甘味
付加等に有用である。
［従来の技術］ イヌリンはフラクトースを主構成糖とする多糖である。
ジャクソンらは、イヌリンを酸分解してその加水分解物
よりＤＦＡＩを単離しているが、収率は２％以下と低
く、効率的な製造法とはいえない。田中ら(Carbohydr.R
es.,75,340,1979)は1979年かびの産生する酵素を用いて
ＤＦＡＩを生成させている。
ジャクソンらは、イヌリンを酸分解してその加水分解物
よりＤＦＡＩを単離しているが、収率は２％以下と低
く、効率的な製造法とはいえない。田中ら(Carbohydr.R
es.,75,340,1979)は1979年かびの産生する酵素を用いて
ＤＦＡＩを生成させている。
［発明が解決しようとする問題点］ 近年、食文化の変遷により甘味料も多様化の傾向にあ
り、特にＤＦＡＩ等のこれまでの甘味料とは性質の異な
ったものが要求されるようになってきた。しかし、ＤＦ
ＡＩの従来の製造法を工業化することは困難であった。
そこで、ＤＦＡＩの生産には独自の高活性ＤＦＡＩ合成
酵素生産菌が必要となった。
り、特にＤＦＡＩ等のこれまでの甘味料とは性質の異な
ったものが要求されるようになってきた。しかし、ＤＦ
ＡＩの従来の製造法を工業化することは困難であった。
そこで、ＤＦＡＩの生産には独自の高活性ＤＦＡＩ合成
酵素生産菌が必要となった。
［問題点を解決するための手段］ そこで本発明者等は微生物の検索を行った結果、ある種
の微生物がイヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出
液より高活性でＤＦＡＩを合成する酵素を産生すること
を見い出した。
の微生物がイヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽出
液より高活性でＤＦＡＩを合成する酵素を産生すること
を見い出した。
本菌の産生する酵素をイヌリン及び／またはイヌリン含
有植物抽出液に作用させることにより、ＤＦＡＩを効率
的に得ることができる。
有植物抽出液に作用させることにより、ＤＦＡＩを効率
的に得ることができる。
以下、本菌株の菌学的諸性質を述べる。
１．細胞形態 形態：0.5〜1.0×1.5〜4.0の桿菌 胞子：形成しない 鞭毛：なし グラム染色：陽性 ２．培養所見 寒天集落：円形、丘状、光沢あり、不透明、白色 寒天斜面：中程度の生育、光沢あり、白色 肉汁ゼラチン：液化する ３．生理的諸性質 好気性 生育温度：30℃で良好な成育を示す 37℃で成育しない 硝酸塩の還元性：あり メチルレッド反応：陰性 硫化水素の生成：あり（システイン添加培地酢酸鉛試験
紙） クエン酸の利用：あり（クリステンセン培地） カタラーゼの生成：あり 澱粉分解性：あり カゼインの分解：あり 糖より酸の生成：グルコース、シュクロース、ラクトー
ス、マンニットのいずれの糖からも酸及びガスを生成し
ない Ｇ−Ｃ含量：63.9％ 上記の諸性質から、バージェイズ マニュアル オブ
デタミネイティブ バクテリオロジー第８版により検索
した結果、本菌株はアースロバクター属に属する。さら
に種については栄養要求性がなく澱粉を分解すること、
及びＧ−Ｃ含量などによりアースロバクター・グロビフ
ォルミスと同定される。アースロバクター・グロビフォ
ルミスと本菌株の菌学的諸性質を比較すればきわめてよ
く合致することから、本菌はアースロバクター・グロビ
フォルミスと確定され、アースロバクター・グロビフォ
ルミス Ｈ２−１と命名された。公知のアースロバクタ
ー・グロビフォルミスも、該酵素産生菌である可能性が
ある。
紙） クエン酸の利用：あり（クリステンセン培地） カタラーゼの生成：あり 澱粉分解性：あり カゼインの分解：あり 糖より酸の生成：グルコース、シュクロース、ラクトー
ス、マンニットのいずれの糖からも酸及びガスを生成し
ない Ｇ−Ｃ含量：63.9％ 上記の諸性質から、バージェイズ マニュアル オブ
デタミネイティブ バクテリオロジー第８版により検索
した結果、本菌株はアースロバクター属に属する。さら
に種については栄養要求性がなく澱粉を分解すること、
及びＧ−Ｃ含量などによりアースロバクター・グロビフ
ォルミスと同定される。アースロバクター・グロビフォ
ルミスと本菌株の菌学的諸性質を比較すればきわめてよ
く合致することから、本菌はアースロバクター・グロビ
フォルミスと確定され、アースロバクター・グロビフォ
ルミス Ｈ２−１と命名された。公知のアースロバクタ
ー・グロビフォルミスも、該酵素産生菌である可能性が
ある。
本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所にFERM P-8
749として委託されている。
749として委託されている。
本菌株をイヌリン及び／またはイヌリン含有植物の抽出
液を唯一の炭素源とした培地に培養すれば、高活性のＤ
ＦＡＩ合成酵素が得られる。培養温度範囲は20〜37℃で
あり、培養時間は12〜60時間が適当である。培養終了
後、培養液をそのまま、あるいは遠心分離等により固液
分離して得た菌体を用いてもよいが、除菌処理して得ら
れた培養上澄を、イヌリン及び／またはイヌリン含有植
物抽出液に加えて反応させると、ＤＦＡＩが合成され
る。なお、イヌリン含有植物としてはダリア、コボウ等
があり、この他微生物起源のフラクトースポリマー（フ
ラクトースの二糖類以上）も原料としての使用が考えら
れる。反応液を加熱または酸処理して酵素を失活させ、
過、脱色、脱塩等の方法を用いて精製すれば、オリゴ
糖やフラクトースを含んだＤＦＡＩの製品が得られる。
さらに高純度のＤＦＡＩを得るには、精製した糖液を活
性炭カラムクロマトグラフィ、市販の充填剤を用いたゲ
ル過カラムクロマトグラフィ、種々の膜を用いた膜分
離濃縮などを行えばよい。または、反応液に酵母を加え
てＤＦＡＩ以外の糖を発酵させ、その後精製する方法も
ＤＦＡＩの純度を高めるに有効な手段である。ゲル過
や膜分離で分画されたフラクトオリゴ糖等は、副産物と
して既存の利用を行うこともできる。
液を唯一の炭素源とした培地に培養すれば、高活性のＤ
ＦＡＩ合成酵素が得られる。培養温度範囲は20〜37℃で
あり、培養時間は12〜60時間が適当である。培養終了
後、培養液をそのまま、あるいは遠心分離等により固液
分離して得た菌体を用いてもよいが、除菌処理して得ら
れた培養上澄を、イヌリン及び／またはイヌリン含有植
物抽出液に加えて反応させると、ＤＦＡＩが合成され
る。なお、イヌリン含有植物としてはダリア、コボウ等
があり、この他微生物起源のフラクトースポリマー（フ
ラクトースの二糖類以上）も原料としての使用が考えら
れる。反応液を加熱または酸処理して酵素を失活させ、
過、脱色、脱塩等の方法を用いて精製すれば、オリゴ
糖やフラクトースを含んだＤＦＡＩの製品が得られる。
さらに高純度のＤＦＡＩを得るには、精製した糖液を活
性炭カラムクロマトグラフィ、市販の充填剤を用いたゲ
ル過カラムクロマトグラフィ、種々の膜を用いた膜分
離濃縮などを行えばよい。または、反応液に酵母を加え
てＤＦＡＩ以外の糖を発酵させ、その後精製する方法も
ＤＦＡＩの純度を高めるに有効な手段である。ゲル過
や膜分離で分画されたフラクトオリゴ糖等は、副産物と
して既存の利用を行うこともできる。
精製されたＤＦＡＩの旋光度は［α］=+27.7°、薄層ク
ロマトグラフィによると、イヌリンの酸分解により得ら
れた標準のＤＦＡＩとＲｆ値は一致した。
ロマトグラフィによると、イヌリンの酸分解により得ら
れた標準のＤＦＡＩとＲｆ値は一致した。
［実施例］ 次に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、
これらに限定されるものではない。
これらに限定されるものではない。
実施例１ 市販イヌリン0.3％、酵母エキス0.05％、リン酸２ナト
リウム0.4％、リン酸１カリウム0.1％、硫酸マグネシウ
ム0.05％、硫酸第一鉄0.001％、塩化カルシウム0.003％
を含んだ培地100mlを、pH７に調整して120℃で15分間蒸
気滅菌する。この滅菌した培地にアースロバクター・グ
ロビフォルミス Ｈ２−１(FERM P-8749)を一白金耳接
種し、30℃で24時間培養を行う。培養終了後、遠心分離
機で除菌して得た培養上澄をpH５に調整する。調整培養
上澄液５mlに10％イヌリン溶液５mlを加えて、30℃にお
いて一夜反応させる。反応液を加熱して酵素を失活後、
反応液中のＤＦＡＩの生成率を高速液体クロマトグラフ
ィを用いて求めると、ＤＦＡＩ49.7％、オリゴ糖6.2
％、フラクトース0.3％、その他43.8％であった。
リウム0.4％、リン酸１カリウム0.1％、硫酸マグネシウ
ム0.05％、硫酸第一鉄0.001％、塩化カルシウム0.003％
を含んだ培地100mlを、pH７に調整して120℃で15分間蒸
気滅菌する。この滅菌した培地にアースロバクター・グ
ロビフォルミス Ｈ２−１(FERM P-8749)を一白金耳接
種し、30℃で24時間培養を行う。培養終了後、遠心分離
機で除菌して得た培養上澄をpH５に調整する。調整培養
上澄液５mlに10％イヌリン溶液５mlを加えて、30℃にお
いて一夜反応させる。反応液を加熱して酵素を失活後、
反応液中のＤＦＡＩの生成率を高速液体クロマトグラフ
ィを用いて求めると、ＤＦＡＩ49.7％、オリゴ糖6.2
％、フラクトース0.3％、その他43.8％であった。
実施例２ 実施例１で得られた調整培養上澄液５mlを、65℃で20分
間加温してイヌリナーゼを失活させた後、10％イヌリン
溶液５mlを加えて30℃において一夜反応させる。反応液
を加熱して酵素を失活後、反応液中のＤＦＡＩの生成率
を高速液体クロマトグラフィを用いて求めると、ＤＦＡ
Ｉ51.2％、オリゴ糖5.7％、その他43.1％であった。
間加温してイヌリナーゼを失活させた後、10％イヌリン
溶液５mlを加えて30℃において一夜反応させる。反応液
を加熱して酵素を失活後、反応液中のＤＦＡＩの生成率
を高速液体クロマトグラフィを用いて求めると、ＤＦＡ
Ｉ51.2％、オリゴ糖5.7％、その他43.1％であった。
［発明の効果］ 本発明によれば、ＤＦＡＩを高収率で製造することがで
き、ＤＦＡＩはダイエット甘味料として広い分野での利
用が期待される。
き、ＤＦＡＩはダイエット甘味料として広い分野での利
用が期待される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 積 浩二 鹿児島県鹿児島市和田町924番地６ (72)発明者 永田 一志 鹿児島県鹿児島市荒田１丁目47番８号 (72)発明者 本坊 慶吉 鹿児島県鹿児島市薬師１丁目７番33号 (72)発明者 門間 充 茨城県新治郡桜村吾妻２丁目1506番地 809−307 (72)発明者 貝沼 圭二 茨城県新治郡桜村並木３−619
Claims (2)
- 【請求項１】イヌリン及び／またはイヌリン含有植物抽
出液にアースロバクター・グロビフォルミスに属する細
菌及び／またはその産生する酵素を作用させることを特
徴とするジフルクトース ジアンヒドリドＩの製造法。 - 【請求項２】アースロバクター・グロビフォルミスが、
アースロバクター・グロビフォルミス Ｈ ２−１(FER
M P-8749)である特許請求の範囲第一項に記載の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11908786A JPH0632628B2 (ja) | 1986-05-26 | 1986-05-26 | ジフルクト−スジアンヒドリド▲ｉ▼の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11908786A JPH0632628B2 (ja) | 1986-05-26 | 1986-05-26 | ジフルクト−スジアンヒドリド▲ｉ▼の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62275693A JPS62275693A (ja) | 1987-11-30 |
| JPH0632628B2 true JPH0632628B2 (ja) | 1994-05-02 |
Family
ID=14752568
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11908786A Expired - Fee Related JPH0632628B2 (ja) | 1986-05-26 | 1986-05-26 | ジフルクト−スジアンヒドリド▲ｉ▼の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0632628B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH066064B2 (ja) * | 1988-05-13 | 1994-01-26 | 農林水産省食品総合研究所長 | ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法 |
-
1986
- 1986-05-26 JP JP11908786A patent/JPH0632628B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62275693A (ja) | 1987-11-30 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |