JPS63141594A - ヒアルロン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、発酵法によるヒアルロン酸の製造方法にｉ関
する。更に詳しくは、Ｌ−アルイニンを添加した培４！
液中にヒアルロン酸産生能を有する微生物を培養して、
発酵法により高収敬でヒアルロン酸を得る方法に関する
。

〔従来の技術〕

従来、ヒアルロン酸な動物の組織−例えばニワトリのト
サカ等から抽出法によって！！！ｉ遺されていたが１極
めて高価であることが問題点であった。

そこでヒアルロン酸産生能を有する微生物を培養してヒ
アルロン酸を製造する方法が開示されている（特開昭５
８−５６６９２号公報）。

本発明者らも発酵法によるヒアルロン酸製造の研究を行
ない、培養液のＰＨを７．５以上９，０以下Ｏ範囲にコ
ントロールすることにより培ｉ！液中に高分子歇のヒア
ルロンｒＩＲを生成せしめる方法について提案した（詩
願昭６１−１７０９４５号明釉書）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、発酵法において効率良くヒアルロン酸生
産を行なわせるためには有機栄養源の添加が必要である
。

ところが、ヒアルロン酸産生Ｔｇ＠を有する微生物は一
般に培地中の栄養源の影１１を敏感に受けるため一安唾
な工業用グレードの有機栄養源を用いた培地でに、この
微生物の増ａｔ−阻害するものもありそのためヒアルロ
ン酸生産性も低下する＠そこで前記従来法でも用＾られ
ているように、阻害性の少ないものを使用せざるを得な
いがこれらは高価であり製造コストが高くなるという欠
点があった。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、この間ＩＩＩを解決すべく鋭意検討を行
な＾、培地含有各成分の培養中の消費教について測定し
た結果、アミノ酸の一種であるＬ−アルギニンが他の成
分に比べ消費速度が著しく大きく一他成分は存在してい
るにもかかわらずほとんど培養途中で消費しつくされて
おり、それに伴いヒアルロン酸生産速度も低下してくる
ことが判明した。

そこで、ヒアルロン酸産生能を有する微生物をＬ−フル
イニンが常に培地中に存在するよう制御し培養すること
により、ヒアルロン酸生産性が著しく向上することを見
出し＼本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、ヒアルロン酸産生能を有する微生
物を、培養液中にＬ−アルギニンを添加して一培養する
ことを′待機とする発酵法によるヒアルロン酸の製造方
法である。

以下、本発明の詳細な説明する。

本発明に用いられる微生物としてな、 およびこれらの変異株などがあげられるが、なかでもス
トレプトコッカスエキが好ましい。

本発明に用いる培地はグルコース、７ラクトース、がラ
クトース、シュークロース停の砿成分からなる炭Ｘ＃、
リン酸第１カリウム、リン酸、！２カリウム、ｔｉＩｔ
ｒＲマグネシウム、亜硫酸ソーダ、チステイープリカー
、大豆加水分解液等の有機栄養源、他必要に応じて各種
ビタミン類等が好適に用いられる。この際、ヒアルロン
酸生産歇を高めるためにＬ−アルギニンを添加する。通
常に＼１！ｆ５１ｕする完成分１％濃度当り０．５１１
７を以上が好ましく、０．３〜２９／ｌが特によ＾。こ
の殴より少いと効果少なく、多過ぎると阻害性が現われ
る可能性がある。これらの培地成分は一括仕込みまたは
分割添加いずれでも採用可能である。

本発明の培養は通気攪件培養等の公知の方法でよく、培
養温度は３０〜５５℃が好まし＾。培養液の−に菌の生
育と共に低下するため力性ソーダ、力性カリ、アンモニ
ア専のＰ８．１１整剤を添加し…６．０〜９．０にコン
トロールする。

このようにして培養すると、ヒアルロン酸の生成と共に
培＃液の粘度が次第に上昇してくる。使用炭素源が培養
液中で消費された時点で培養を停止し、逮心分心による
除菌後アルコール等の有機溶剤による析出、限外濾過に
よる脱塩等の簡単な公知精製法により高純度ヒアルロン
酸が得られる。

〔実施例〕

次に実施例により本発明の詳細な説明するが本発明はこ
れに限定されるものではない。

実施例１ グルコース２％、リン酸第１カリウム０．２％、硫酸マ
グネシウム７水塩０．０５％、チオ＠酸ソーダ０．１％
、ポリペプトン０．７％、酵母エキス０．２５％からな
る培地１ｔにＬ−アル＝ｒニン１．０〜４．０１／／ｌ
ｔ−添加し、同一培地からなるストレプトコッカスエキ
（ＡＴＣＣ９５２７）の前培養液１Ｑｍを！−櫨し一通
気ｉＪ１２ｖｖｍ、［拌２００回転／分、温度３６℃で
力性ソーダでｐ）Ｉｔ−８，５にコントロールしながら
２０時間培養した。

培養液を塩酸で−４に調整後、蒸留水で２倍希択し４心
分離により除園した。得られた除菌液をと エチルアルコールを加え、ヒアルロン酸ンータ参析出せ
しめる。これｔ−１１別し九後、水に１８７％レセチル
ビリゾニウムクロライげを加え生じた沈殿を濾宜し一水
に再溶解後再びエチルアルコールによる析出をＪＩｋり
返す。得られたヒアルロン酸ソーダを室温で減圧乾燥し
て白色ヒアルロン酸ソーダを得た。

結果を表１に示す。

表　　　１ 実施例２ 実施例１と同様に培養を開始し、培養液中の残存グルコ
ースが０．５〜１％磯度になるようにグルコースを分割
添加し、それと同時に分割ｆＡ１）；Ｊするグルコース
１％須ｆ当Ｆ）Ｌ　−フルギニンｔ　Ｏ，５９ずつ分割
添加しながら３６時間培養を継続し培養液を実施例１と
同様に処理しヒアルロン酸ソーダを得た。比較としてＬ
−アルギニンを全く添加しない場合について同様に培＊
１ｆｔ行なった。その結果’を表２に示す。

表　　　２ 〔効果］ 本発明方法により、ヒアルロン酸を高収ｌでかつ安価に
生産することができる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒアルロン酸産生能を有する微生物を、培養液中
   にＬ−アルギニンを添加して、培養することを特徴とす
   る発酵法によるヒアルロン酸の製造方法。
2. （２）Ｌ−アルギニンが、添加糖成分１％濃度当り０．
   ３ｇ／ｌ以上添加される特許請求の範囲第１項記載のヒ
   アルロン酸の製造方法。
3. （３）ヒアルロン酸産生能を有する微生物が、ストレプ
   トコツカスエキである特許請求の範囲第１項記載のヒア
   ルロン酸の製造方法。