JPS6163293A - ヒアルロン酸の製造法 - Google Patents
ヒアルロン酸の製造法Info
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- JPS6163293A JPS6163293A JP18515084A JP18515084A JPS6163293A JP S6163293 A JPS6163293 A JP S6163293A JP 18515084 A JP18515084 A JP 18515084A JP 18515084 A JP18515084 A JP 18515084A JP S6163293 A JPS6163293 A JP S6163293A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明ｆｄ：ヒアルロン岐生酸生成能する微生物（以下
、とアルｔ２／酸生産菌という。）によるヒアルロン酸
の製造法に関する。さらに詳しくは血清を添加した培養
液でヒアルロン酸生産菌を培養し、ヒアルロン酸を培養
液中に生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
るヒアルロン酸の製造法に関する。
、とアルｔ２／酸生産菌という。）によるヒアルロン酸
の製造法に関する。さらに詳しくは血清を添加した培養
液でヒアルロン酸生産菌を培養し、ヒアルロン酸を培養
液中に生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
るヒアルロン酸の製造法に関する。
を演じている。また該ヒアルロン酸は保水作用を有する
ところから、化粧品、創傷治癒薬、眼薬、関接炎治療薬
として広い需要がある。
ところから、化粧品、創傷治癒薬、眼薬、関接炎治療薬
として広い需要がある。
従来、該ヒアルロン酸に土工業的にはニワトリのトサカ
、牛の関節、ヒトの１声帯もしくはクジラの軟骨などか
ら抽出法により得られている。
、牛の関節、ヒトの１声帯もしくはクジラの軟骨などか
ら抽出法により得られている。
しかし、これら生体から抽出法により得たヒアルロン酸
は蛋白質やコンドロイチン等のムコ多糖と複合体を形成
しているので、分離精製に複雑な工程を必要とし、また
ヒアルロニダーゼが混在することが多いので、抽出工程
中で該ヒアルロン酸が分解されて分子量が低下し、保水
力が低くなるといった欠点がある。
は蛋白質やコンドロイチン等のムコ多糖と複合体を形成
しているので、分離精製に複雑な工程を必要とし、また
ヒアルロニダーゼが混在することが多いので、抽出工程
中で該ヒアルロン酸が分解されて分子量が低下し、保水
力が低くなるといった欠点がある。
これらの欠点を改良するために、ヒアルロン酸生産菌を
培養し、該培養液から直接該ヒアルロン酸を抽出し、精
製する方法が特開昭５８−５６６９２号公報に開示され
ている。
培養し、該培養液から直接該ヒアルロン酸を抽出し、精
製する方法が特開昭５８−５６６９２号公報に開示され
ている。
この方法は、ヒアルロニダーゼを含まないヒアルロン酸
生産菌を培養してヒアルロン酸を得る方法なので、前述
の生体からの抽出法のように、抽出工程で分解を受ける
ことが少なく、該ヒアルロン酸を抽出により動物組織内
から得る方法にくらべて簡単であり、経費も安いといっ
た利点がある。
生産菌を培養してヒアルロン酸を得る方法なので、前述
の生体からの抽出法のように、抽出工程で分解を受ける
ことが少なく、該ヒアルロン酸を抽出により動物組織内
から得る方法にくらべて簡単であり、経費も安いといっ
た利点がある。
しかしながら、この方法ではヒアルロン酸の生産量が培
守液１１当りせいぜい約１ｙ程度と少ないのが欠点であ
る。
守液１１当りせいぜい約１ｙ程度と少ないのが欠点であ
る。
本発明者らはヒアルロン酸の製造にかかわる上述一つ問
題点を解決するべく鋭意研究した。その結果、ヒアルロ
ン酸生産菌を血清を添加した培養液中で培養することに
よりヒアルロン酸の生産量を大巾に向上させることがで
きることを見い出し、本発明を完成した。
題点を解決するべく鋭意研究した。その結果、ヒアルロ
ン酸生産菌を血清を添加した培養液中で培養することに
よりヒアルロン酸の生産量を大巾に向上させることがで
きることを見い出し、本発明を完成した。
以上の記述から明らかなように、本発明の目的はヒアル
ロン酸生産菌を血清を添加した培養液中で培養したのち
、ヒアルロン酸を生成蓄積せしめ、これを採取すること
により大巾にヒアルロン酸の生産量を向上させることの
できる製造法を提供することである。
ロン酸生産菌を血清を添加した培養液中で培養したのち
、ヒアルロン酸を生成蓄積せしめ、これを採取すること
により大巾にヒアルロン酸の生産量を向上させることの
できる製造法を提供することである。
本発明は以下の構成を有する。
血清を添加してなる培養液にて、ヒアルロン酸生成能を
有する微生物を培養して、培養液中にヒアルロン酸を生
成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とするヒアル
ロン酸の製造法。
有する微生物を培養して、培養液中にヒアルロン酸を生
成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とするヒアル
ロン酸の製造法。
本発明に用いるヒアルロン酸生産菌としては、ストレプ
トコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐ７ｏｇｅｎｅｓ ） 、ストレプトコッカス・エクイ
（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｅｕｓ ｅｑｕｉ ）、ストレ
プトコッカス０エクイシミリス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ ）、ストレプトコッ
カス・ディスガラクチイエ（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｄｙｉｇａｌａｃｔｉａｅ ）、ストレプトコッカ
ス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚ
ｏｏｅｌ）ｉｄｅｍｉｃｕａ ）、パスツレラ−？ルト
クダ（Ｐａ５ｔｅｕｒｅｌｌａ ｒｎｕｌｔｏｃｉム）
などがあげられる。
トコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐ７ｏｇｅｎｅｓ ） 、ストレプトコッカス・エクイ
（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｅｕｓ ｅｑｕｉ ）、ストレ
プトコッカス０エクイシミリス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ ）、ストレプトコッ
カス・ディスガラクチイエ（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｄｙｉｇａｌａｃｔｉａｅ ）、ストレプトコッカ
ス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚ
ｏｏｅｌ）ｉｄｅｍｉｃｕａ ）、パスツレラ−？ルト
クダ（Ｐａ５ｔｅｕｒｅｌｌａ ｒｎｕｌｔｏｃｉム）
などがあげられる。
本発明に用いられる血清は、牛、馬、豚、山羊、羊、ニ
ワトリまたはヒトの血清のうちいずれでもよい。また牛
の血清に関しては、胎児、新生児、分生または成牛のい
ずれの血清でもよい。さらに血清のかわりＫ、牛、馬、
豚、山羊、羊、ニワトリまたはヒトの全血を用いること
もできる。また血清のかわりにこれらの動物およびヒト
の血清から分画された成分を用いてもよい、該培養液に
添加する血清の量は０．３〜５．０容禁％好ましくは１
．５容禁％である。
ワトリまたはヒトの血清のうちいずれでもよい。また牛
の血清に関しては、胎児、新生児、分生または成牛のい
ずれの血清でもよい。さらに血清のかわりＫ、牛、馬、
豚、山羊、羊、ニワトリまたはヒトの全血を用いること
もできる。また血清のかわりにこれらの動物およびヒト
の血清から分画された成分を用いてもよい、該培養液に
添加する血清の量は０．３〜５．０容禁％好ましくは１
．５容禁％である。
該培養液の血清をのぞく他の成分は、通常の培養液の成
分を用いればよく、例えばブドウ糖２．０％、リン欲１
カリウム０．３％、リン酸２カリタム０．２％、チオ硫
酸ナトリウム０．０１％、ＱＲマグネシウム７水塩０．
０１％、亜硫酸ナトリウム０．００２％、消泡剤０．５
％を含むｐＨ６，０〜８．５の成分の培養液を用いるこ
とができる。（ただし％はいずれもｆｆ１ｆ／容量％で
ある。）本発明のヒアルロン酸の製造は、まず血清を含
まない培養液を加圧蒸気波菌等でｆＩＲＷＩシたのち、
冷却し、該培養液の温度が４５°Ｃ以下になった時点で
血清を無菌的に該培養液に添加する。
分を用いればよく、例えばブドウ糖２．０％、リン欲１
カリウム０．３％、リン酸２カリタム０．２％、チオ硫
酸ナトリウム０．０１％、ＱＲマグネシウム７水塩０．
０１％、亜硫酸ナトリウム０．００２％、消泡剤０．５
％を含むｐＨ６，０〜８．５の成分の培養液を用いるこ
とができる。（ただし％はいずれもｆｆ１ｆ／容量％で
ある。）本発明のヒアルロン酸の製造は、まず血清を含
まない培養液を加圧蒸気波菌等でｆＩＲＷＩシたのち、
冷却し、該培養液の温度が４５°Ｃ以下になった時点で
血清を無菌的に該培養液に添加する。
ついでヒアルロン酸生産Ｖｉを該培養液に接種したのち
、該培養液を逃気攪拌もしくは静置して温度２５〜４０
℃、好ましくは３５°Ｃにて、ｐＨを６．５〜８．０、
好ましくは７．０に制御して培養する。上述の条件で２
〜４日間培養したのち、該培養液を遠心分離もしくは濾
過によって除菌し該炉液を限外濾過もしくは透析するこ
とに界面活性剤による分画沈殿、イオン交換クロマトグ
ラフィーおよびゲル濾過クロマトグラフィーなどの公知
の手段によって、生成したヒアルロン酸を精製する方法
により行なわれる。
、該培養液を逃気攪拌もしくは静置して温度２５〜４０
℃、好ましくは３５°Ｃにて、ｐＨを６．５〜８．０、
好ましくは７．０に制御して培養する。上述の条件で２
〜４日間培養したのち、該培養液を遠心分離もしくは濾
過によって除菌し該炉液を限外濾過もしくは透析するこ
とに界面活性剤による分画沈殿、イオン交換クロマトグ
ラフィーおよびゲル濾過クロマトグラフィーなどの公知
の手段によって、生成したヒアルロン酸を精製する方法
により行なわれる。
培養液ＶＣ添加された血清の作用の詳細は不明であるが
現在のところ次のように推測される。
現在のところ次のように推測される。
すなわち、添加される血清中には微量の溶菌酵素が含ま
れており、ヒアルロン酸生産菌は該溶菌酵素から自分自
身を守るため、自分の周囲にヒアルロン酸を多量に分泌
するのではないかと考えられる。つまり溶菌酵素によっ
て、ヒアルロン酸合成酵素活性が誘導されるためではな
いかと推測される。
れており、ヒアルロン酸生産菌は該溶菌酵素から自分自
身を守るため、自分の周囲にヒアルロン酸を多量に分泌
するのではないかと考えられる。つまり溶菌酵素によっ
て、ヒアルロン酸合成酵素活性が誘導されるためではな
いかと推測される。
以上記述した本発明の製造法を用いることにより、従来
の培養法では培養液１１あたシせいぜい１ｙ程度のヒア
ルロン酸しか生産できなかったものが、篤くべきことに
培養液１１あたり５〜６１と従来の培養法の５倍以上の
ヒアルロン酸を生産することができることが判明した。
の培養法では培養液１１あたシせいぜい１ｙ程度のヒア
ルロン酸しか生産できなかったものが、篤くべきことに
培養液１１あたり５〜６１と従来の培養法の５倍以上の
ヒアルロン酸を生産することができることが判明した。
また本発明により得られるヒアルロン酸は不純物の含有
量がきわめて少なく、高純度のヒアルロン酸であり、医
薬品、化粧品の用途に適したものであることも判明した
。
量がきわめて少なく、高純度のヒアルロン酸であり、医
薬品、化粧品の用途に適したものであることも判明した
。
さらに本発明の製造法では上述のヒアルロン酸の生産性
が５倍以上に向上するところから、若干高価な血清を用
いるにもかかわらず従来の培養法にくらベヒアルロン酸
の製造経費を大巾に節減できることも判明した。
が５倍以上に向上するところから、若干高価な血清を用
いるにもかかわらず従来の培養法にくらベヒアルロン酸
の製造経費を大巾に節減できることも判明した。
以上記述したように本発明に係るヒアルロン酸の製造法
は純度の高いとアルクン酸を高い生産性で製造できる方
法であることが確証された。
は純度の高いとアルクン酸を高い生産性で製造できる方
法であることが確証された。
以下実施例および比較例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれにより限定されるものではない。
るが、本発明はこれにより限定されるものではない。
実施例１、比較例１
ブドウ糖２．０％、リン酸１カリウム０．３％、リン酸
２カリウム０．２％、チオ硫酸ナトリウム００１１％、
硫酸マグネシウム７水塩０．０１％、亜硫酸ナトリウム
０．００２％および大豆油１．０％（ただし％はいずれ
も重量／容量％を示す。）からなるＰＨ７，０の培養液
１．５１に牛新生児血？？ ２２．５１を無菌的に加え
、ストレプトコッカス・エクイの前培養液１００ｍ１を
接種し、毎分３００回転、通気ｆ４０．７ ｖｖｍ ％
温度３５℃で、ｐＨを７．０に自動制御して４０時間培
養した。
２カリウム０．２％、チオ硫酸ナトリウム００１１％、
硫酸マグネシウム７水塩０．０１％、亜硫酸ナトリウム
０．００２％および大豆油１．０％（ただし％はいずれ
も重量／容量％を示す。）からなるＰＨ７，０の培養液
１．５１に牛新生児血？？ ２２．５１を無菌的に加え
、ストレプトコッカス・エクイの前培養液１００ｍ１を
接種し、毎分３００回転、通気ｆ４０．７ ｖｖｍ ％
温度３５℃で、ｐＨを７．０に自動制御して４０時間培
養した。
その後培養液にさらにブドウ糖２５９ｆｅ無菌的に加え
て１０時間培養したのち、該培養液にイオン交換水１．
６１を加えて遠心分離し、菌体を除去した。得られた上
澄液に希塩酸を加えてｐＨを５．５に調整し、それを中
空糸限外ｐ過器にて０．７５１ ＫＤ、＠ Ｌ、さらに
イオン交換水に対して透析した。この液を用いて、エチ
ルアルコールによる沈殿分別、塩化セチルピリジニルア
ンモニウム処理、イオン交換セルロファインによるクロ
マトグラフィー等の公知の方法にてＩＪ製し８．７ｇの
精製ヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末を得た。
て１０時間培養したのち、該培養液にイオン交換水１．
６１を加えて遠心分離し、菌体を除去した。得られた上
澄液に希塩酸を加えてｐＨを５．５に調整し、それを中
空糸限外ｐ過器にて０．７５１ ＫＤ、＠ Ｌ、さらに
イオン交換水に対して透析した。この液を用いて、エチ
ルアルコールによる沈殿分別、塩化セチルピリジニルア
ンモニウム処理、イオン交換セルロファインによるクロ
マトグラフィー等の公知の方法にてＩＪ製し８．７ｇの
精製ヒアルロン酸ナトリウムの白色粉末を得た。
培養液１１幽り５，８ノの生産量であった。
この精製ヒアルロン酸の蛋白質含有量はＯ，ＯＳ重量％
であった。またセファロース６Ｂによるゲルー過クロマ
トグラフィーで分子ｆｔ’を測定したところ２ Ｘ １
０’ダルトンであった。ウサギに本ヒアルロン酸す）
ＩＪウムの１重世％生理食塩水を静注したが発熱反応は
みられなかった。
であった。またセファロース６Ｂによるゲルー過クロマ
トグラフィーで分子ｆｔ’を測定したところ２ Ｘ １
０’ダルトンであった。ウサギに本ヒアルロン酸す）
ＩＪウムの１重世％生理食塩水を静注したが発熱反応は
みられなかった。
また比較例１として、実施列１の培、−ｉ液よシ血清成
分を除いた成分の培養液を用いるほかは実施例１と同様
の条件、方法によりヒアルロン酸生産菌を培養し、実施
例１と同様の処理、精製を行ない０．９ｇのｆ＃製ヒア
ルロン酸ナトリウムの白色粉末を得た。培養液１４当り
ｏ、６ｙの生産量であった。
分を除いた成分の培養液を用いるほかは実施例１と同様
の条件、方法によりヒアルロン酸生産菌を培養し、実施
例１と同様の処理、精製を行ない０．９ｇのｆ＃製ヒア
ルロン酸ナトリウムの白色粉末を得た。培養液１４当り
ｏ、６ｙの生産量であった。
以上
Claims (4)
- （１）血清を添加してなる培養液にて、ヒアルロン酸生
成能を有する微生物を培養して、培養液中にヒアルロン
酸を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
ヒアルロン酸の製造法。 - （２）血清として牛、馬、豚、山羊、羊、ニワトリまた
はヒト血清を用いる特許請求の範囲第（１）項に記載の
ヒアルロン酸の製造法。 - （３）血清として牛、馬、豚、山羊、羊、ニワトリまた
はヒトの全血を用いる特許請求の範囲第（１）項に記載
のヒアルロン酸の製造法。 - （４）血清として、牛、馬、豚、山羊、羊、ニワトリま
たはヒトの血清から分画された成分を用いる特許請求の
範囲第（１）項に記載のヒアルロン酸の製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18515084A JPS6163293A (ja) | 1984-09-04 | 1984-09-04 | ヒアルロン酸の製造法 |
| DE19853531612 DE3531612A1 (de) | 1984-09-04 | 1985-09-04 | Verfahren zur herstellung von hyaluronsaeure |
| FR858513137A FR2569724B1 (fr) | 1984-09-04 | 1985-09-04 | Procede pour la preparation d'acide hyaluronique |
| FR888810752A FR2616802B1 (fr) | 1984-09-04 | 1988-08-09 | Procede pour la preparation d'acide hyaluronique |
| US07/336,913 US5071751A (en) | 1984-09-04 | 1989-04-12 | Process for preparing hyaluronic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18515084A JPS6163293A (ja) | 1984-09-04 | 1984-09-04 | ヒアルロン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6163293A true JPS6163293A (ja) | 1986-04-01 |
| JPH0418839B2 JPH0418839B2 (ja) | 1992-03-27 |
Family
ID=16165732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18515084A Granted JPS6163293A (ja) | 1984-09-04 | 1984-09-04 | ヒアルロン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6163293A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6328398A (ja) * | 1986-07-22 | 1988-02-06 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ヒアルロン酸の製造法 |
| JPH0443637B2 (ja) * | 1987-09-08 | 1992-07-17 | Yakult Honsha Kk |
-
1984
- 1984-09-04 JP JP18515084A patent/JPS6163293A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6328398A (ja) * | 1986-07-22 | 1988-02-06 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ヒアルロン酸の製造法 |
| JPH0630604B2 (ja) * | 1986-07-22 | 1994-04-27 | 電気化学工業株式会社 | ヒアルロン酸の製造法 |
| JPH0443637B2 (ja) * | 1987-09-08 | 1992-07-17 | Yakult Honsha Kk |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0418839B2 (ja) | 1992-03-27 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |