KR101598329B1 - 히알루론산의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물 - Google Patents

히알루론산의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 체내 저분해 속도를 갖는 히알루론산의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물에 대한 것으로, 더욱 상세하게는 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(KCTC11818BP)를 탄소원 및 질소원이 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 체내 저분해 속도를 가지는 히알루론산의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물을 제공한다. 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산은 400만 Da 내지 1000만 Da의 고분자 히알루론산으로, 체내 분해 속도가 느려 유착 방지효과가 탁월하다. 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 본 발명의 유착방지용 조성물은 가교하지 않은 히알루론산을 사용하므로써, 기존의 가교제 및 화합물을 포함하는 유착방지용 조성물이 가진 문제점 및 기존의 히알루론산이 가진 문제점을 개선할 수 있다.

Description

히알루론산의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물{Method for manufacturing of hyaluronic acid and the composition for anti adhesion comprising the hyaluronic acid by the same method}
본 발명은 체내 저분해 속도를 갖는 히알루론산의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물에 대한 것으로, 상세하게는 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(KCTC11818BP)를 탄소원 및 질소원이 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 체내 저분해 속도를 가지는 히알루론산의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물에 대한 것이다.
히알루론산(Hyaluronic acid(HA), Hyaluronan, (C14H20NNaO11)n (n>1000))은 생체에 존재하는 고분자로써 glycosaminoglycan이라는 다당류이다. 그 구조는 D-glucuronic acid와 N-acetylglucosamine이 β-1,3 과 β-1,4 결합으로 반복적으로 연결된 구조를 띠고 있다. 수용성 물질이며 점도가 매우 높고 고탄성의 특성을 가지고 있으며 분자량은 1,000~10,000,000 Da(daltons)에 이르는 광범위한 직쇄의 다당류이다.
히알루론산은 보습효과가 강하여 물리적 마찰 상태에서 강력한 윤활 작용 기능이 매우 우수하고 세균 등의 침입에 대한 보호 효과 등의 효능과 물성에 있어서 매우 바람직한 장점을 보유하고 있기 때문에 치료 영역에 필요한 적용증이 매우 많다. 이러한 히알루론산을 개발하기 위해서는 기본적으로 생체 조직 추출법이나 미생물 배양법이 사용되지만 최근에는 바이러스 침입, 불순물, 염증 반응 등 많은 단점으로 인해서 닭 벼슬 추출법보다는 분자량과 생산성을 조절할 수 있고 고품질의 원료 수득이 가능한 미생물 배양생산법이 대세를 이루고 있다. 특히 미생물 배양에 의해 조절되어 생산된 히알루론산의 분자량 범위에 따라서 개발 용도가 결정되는 것이 최근의 추세이다. 10만 Da 이하의 초저분자 히알루론산은 주로 식품이나 화장품의 용도로 사용되며 평균분자량 100만 Da의 저분자 히알루론산은 점안제 원료나 유도체 개발 대상으로 활용되기도 하며 평균분자량 300만~400만 Da의 히알루론산은 슬관절 주사제 원료로 활용 가치가 높은 편이다. 그 외에도 안과수술보조제로써의 사용도 증가하고 있으며, 신체 내의 초고분자로써 유착방지제의 원료로 각광받고 있다.
유착(adhesion)은 보통 염증의 치유 과정에서 볼 수 있는 것으로, 육아조직이나 반흔(scar)을 형성할 때 서로 엉겨 붙거나, 다량으로 석출(析出)되는 섬유소가 엉겨 이 같은 현상을 일으킨다. 일반적으로, 개복수술 후 67~93%정도의 빈도로 유착이 발생하며 이 중 일부는 자발적으로 분해되기도 하지만, 대부분의 경우 상처 치유 후에도 유착이 존재하여 각종 후유증을 유발하기도 한다(Eur. J. Surg 1997, Suppl 577, 32-39). 이를 방지하기 위하여 수술 후의 상처 부위를 감싸 덮어주거나 약물학적 작용 등으로 주변조직과의 유착 발생을 물리, 화학적으로 차단하는 유착방지제에 대한 개발이 세계적으로 진행되고 있다. 이러한 유착방지제는 여러 고분자 물질들을 이용하여 만들어지고 있는데, 알긴산, CMC 및 히알루론산이 주로 사용되며, 히알루론산은 저분자 히알루론산을 이용하여 분자량이나 점도 또는 탄성 등을 증대시킨 히알루론산 가교 물질이 사용되고 있다. 일반적으로 유착방지제는 필름 형태의 제품으로 판매되고 있으나 얇은 필름을 펴는 것이 쉽지 않고 한 개의 제품을 다른 부위에 나누어 사용하는 것이 어려웠다. 이에 따라 개발된 것이 젤 형태의 제품이며 수술부위에 주사기로 짜서 사용하도록 되어 있다. 젤 제품의 특성상 흘러내릴 수 있기 때문에 고분자 물질이 사용되어지며, 히알루론산의 경우 가교된 것을 대부분 사용하였다. 상기와 같이 가교된 히알루론산을 유착방지제의 원료로 사용함에 있어서 가장 문제가 될 수 있는 것이 가교에 사용되는 화합물이며, 히알루론산이 생체 내 물질로써 분해가 된 후에도 가교에 사용된 화합물이 체내에 체류하여 부작용을 일으킬 수 있는 가능성이 있다.
히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물에 대한 국내 주요 특허 내용들을 보면, 대한민국 등록특허 제10-1074467호는 L-아르기닌과 히알루론산을 혼합하여 유착 방지제를 제조하였고, 대한민국 등록특허 제10-0374666호 및 대한민국 공개특허 제10-2011-0114810호에서는 히알루론산 염의 일종인 히알루론산 나트륨을 사용하여 유착방지용 히알루론산 겔을 만들었다. 또한 대한민국 공개특허 제10-2009-0012439호에서는 히알루론산과 가교제를 혼합하여 가교된 히알루론산을 사용하였으며, 외국의 경우, US6630167은 히알루론산 수용액을 가교제 수용액에 혼합하여 유착방지제를 제조하였다. 따라서 국내외 종래의 기술에서 가교하지 않거나 구조를 변형하지 않은 히알루론산을 단독으로 사용한 것은 발견되지 않았으며, 히알루론산을 사용하는 것에 대하여 국내외 종래 기술에서는 대부분 히알루론산이 체내에서 분해가 쉬워 체류시간이 짧아 가교하지 않은 히알루론산만을 이용하는 것에 대하여 부정적인 시각이 대부분이었다.
따라서, 가교하지 않고 체내에서 체류기간이 긴 히알루론산의 개발 및 상기 히알루론산을 사용해 제조한 유착 방지용 조성물의 개발이 시급한 실정이다.
이에 본 발명자들은 체내 체류기간이 길며, 유착방지에 효과적인 히알루론산을 개발하는 방법을 탐색하던 중 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주를 이용해 제조한 히알루론산이 체내 분해 속도가 느려 유착방지효과가 뛰어난 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(KCTC11818BP)를 탄소원 및 질소원이 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 체내 저분해 속도를 가지는 히알루론산의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명의 히알루론산 제조방법으로 제조되고, 가교되지 않은 히알루론산을 유효성분으로 하는 유착방지용 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(KCTC11818BP)를 탄소원 및 질소원이 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 체내 저분해 속도를 가지는 히알루론산의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 히알루론산 제조방법으로 제조되고, 가교되지 않은 히알루론산을 유효성분으로 하는 유착방지용 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(KCTC11818BP)를 탄소원 및 질소원이 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 체내 저분해 속도를 가지는 히알루론산의 제조방법을 제공한다.
상기 본 발명의 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(기탁번호 : KCTC-11818BP, 출원번호:10-2011-0100364)는 소의 분변으로부터 분리된 미생물 중 히알루론산을 생산하는 균주를 분리한 후, 돌연변이를 유발하여 히알루론산 분해효소를 생산하지 않으며 비용혈성인 것을 선별한 미생물이다.
본 발명의 스트렙토코커스 디스갈락티애 ID9103 균주는 통상적인 스트렙토코커스 속 미생물의 배양법에 의해 배양할 수 있다.
상기 배지는 탄소원 및 질소원을 포함하는 배지일 수 있으며, 아미노산 또는 금속이온이 추가로 포함될 수 있다.
본 발명의 탄소원은 공지의 미생물 배양에 사용되는 탄소원이면 어떠한 것이든 가능하며, 바람직하게는 포도당, 과당, 엿당, 유단, 갈락토스, 글리세롤 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 더욱 바람직하게는 엿당일 수 있다.
본 발명의 질소원은 공지의 미생물 배양에 사용되는 질소원이면 어떠한 것이든 가능하며, 바람직하게는 효모엑스, 카제인펩톤, 카제인 산 분해물, 카제인 효소 분해물, 박토펩톤, 카지톤, 네오펩톤 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 더욱 바람직하게는 카제인 효소 분해물일 수 있다.
상기 카제인 효소 분해물은 카제인을 효소 분해한 것을 말하며, 예를 들어 트립톤, 트립톤티, 트립톤엑스, 비비엘바이오세이트펩톤, 디프코카제인다이제스트, 빅토카지톤, 비비엘트립티카아제펩톤, 박토트립톤, 바이텍트립톤, 엔지아민에이, 엔지아민에이에스, 엔지아민이케이씨, 엔지아민엘컨센트레이션, 엔지케이스, 엔지케이스엠, 엔지케이스엠이, 엔지케이스플러스, 엔지케이스티티, 펩티카아제, 트립톤유에스피, 췌액분해카제인코덱스, 췌액분해카제인, 효소분해카제인코셔, 트립톤브이일 수 있다.
본 발명의 배지는 아미노산 또는 금속이온을 추가로 포함할 수 있다.
상기 아미노산은 그 종류에 제한이 없으며, 바람직하게는 글루타민, 리신, 시스텐인, 아르기닌, 메치오닌, 아스파르트산, 글리신 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다. 더욱 바람직하게는 아르기닌 일 수 있다.
또한 상기 금속이온은 그 종류에 제한이 없으나 바람직하게는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 망간 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 아연일 수 있다.
더욱 바람직하게는 본 발명의 배지 조성물은 질소원으로서 카제인 효소 분해물 및 아미노산으로서 아르기닌, 금속이온으로서 아연을 포함하는 것일 수 있다. 카제인 효소 분해물과 아르기닌 및 아연을 함께 첨가한 배양 배지에서 배양하는 경우 본 발명 균주에 의한 히알루론산 생산은 분자량을 한정할 수 있으며 이 분자량에서 가장 좋은 유착방지 효능을 나타내는 특징이 있다.
상기 카제인 효소 분해물 및 아르기닌 및 아연의 농도는 특별히 제한되지 아니하며, 카제인 효소 분해물은 0.5%(w/v) 내지 3%(w/v)의 농도로 포함되며, 아르기닌은 (0.01)%(w/v) 내지 0.6%(w/v), 아연은 (0.01)%(w/v) 내지 0.1%(w/v)의 농도로 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 배양 방법은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 회분식, 유가식, 연속식 배양일 수 있다. 본 발명의 배양 방법은 바람직하게는 유가식 배양 방법일 수 있다. 상기 유가식 배양에서 유가식으로 공급되는 배지 구성성분은 질소원 또는 질소원 및 탄소원일 수 있으며, 상기 질소원은 카제인 효소 분해물이고, 상기 탄소원은 엿당인 것이 더욱 바람직할 수 있다.
또한 본 발명의 히알루론산 제조방법으로 제조된 히알루론산은 이에 한정되지는 않으나, 바람직하게는 350만 Da 내지 1000만 Da의 평균분자량을 가지는 고분자 히알루론산일 수 있다. 더욱 바람직하게는 400만 Da 내지 600만 Da의 평균 분자량, 400만 Da 내지 800만 Da의 평균 분자량 및 400만 Da 내지 1000만 Da의 평균분자량으로 이루어진 평균 분자량 범위군에서 선택된 하나의 범위를 갖는 고분자 히알루론산 일 수 있다. 또한 본 발명에 기재된 평균분자량은 모두 중량 평균 분자량(weight average molecular weight)이다.
또한 본 발명의 제조방법은 평균분자량을 한정한 고분자의 히알루론산을 높은 수율로 생산할 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는 본 발명의 제조방법으로 분자량이 432만 Da 내지 598만 Da이고 생산량이 8.07g/L 내지 9.42g/L인 히알루론산을 제조하여 생산량과 분자량이 높은 히알루론산을 얻었다(표 1 참조).
한편 본 발명의 체내 저분해 속도는 히알루론산이 체내에 투여된 후 분해되는 속도가 느린 것을 말한다.
본 발명의 일실시예에서는 본 발명의 제조 방법으로 생산된 히알루론산의 체내 분해 속도 비교 실험을 하였다. 체내 분해 속도 비교를 위해 체내에서 히알루론산을 분해하는 히알루로니다아제(hyaluronidase) 효소를 히알루론산에 처리하여 시간 경과에 따른 분자량 별(300만 Da, 400만 Da, 600만 Da) 점도 측정값(cP)을 측정하였다. 그 결과 400만 Da 및 600만 Da의 분자량을 가진 히알루론산이 300만 Da의 히알루론산에 비해 시간 경과에 따른 점도 감소율이 낮은 것으로 나타났다. 점도 감소율이 낮은 것은 체내에서 히알루론산의 분해가 느리게 진행되어 히알루론산의 점도를 일정 수준으로 유지할 수 있는 것을 말한다. 이에 따라 본 발명의 제조방법으로 제조된 400만 Da 이상의 분자량을 가진 히알루론산은 체내 저분해 속도를 가질 수 있으며, 바람직하게는 400만 Da 내지 600만 Da의 분자량을 갖는 히알루론산이 유착방지 효과가 뛰어난 것일 수 있다.
본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산은 분자량이 350만 Da 내지 1000만 Da일 수 있는데, 350만 Da 이하의 분자량을 갖는 히알루론산은 체내 분해 속도가 빨라 유착방지효과를 기대하기 어려우며, 1000만 Da 이상의 분자량을 갖는 히알루론산은 제조가 어렵다.
따라서 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산은 체내 저분해 속도를 갖는다.
또한 상기 히알루론산을 유효성분으로 포함하는 유착방지용 조성물은 체내에서 분해되는 속도가 느리므로, 유착 방지효과가 탁월하다.
본 발명은 본 발명의 제조방법으로 제조되고, 가교되지 않은 히알루론산을 유효성분으로 포함하는 유착방지용 조성물을 제공한다.
상기 가교되지 않은 히알루론산은 화학적 가교제, 화학적 변성제 및 히알루론산과 착물을 형성하는 양이온성 고분자가 포함되지 않는 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산을 말한다.
상기 화학적 가교제는 히알루론산과 반응하여 3 차원 네트워크 구조를 형성하는 화합물로, 폴리글리시딜 에테르 등의 다가 에폭시 화합물, 디비닐 술폰, 포름알데히드, 옥시염화인, 카르보디이미드 화합물과 아미노산 에스테르의 배합물, 및 카르보디이미드 화합물과 디히드라지드 화합물의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 화합물일 수 있다.
상기 화학적 변성제는, 히알루론산의 카르복실기, 히드록실기 또는 세트아미도기와 반응하여 공유 결합을 형성하는 화합물로, 무수 아세트산과 진한 황산의 배합물, 무수 트리플루오로아세트산과 유기산의 배합물 및 알킬 요오드 화합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 화합물일 수 있다.
상기 히알루론산과 착물을 형성하는 양이온성 고분자는, 히알루론산의 카르복실기와 고분자 화합물의 아미노기 또는 이미노기의 사이에서 이온 결합을 통해 착물을 형성하는 고분자로, 키토산, 폴리라이신, 폴리비닐피리딘, 폴리에틸렌이민 및 폴리디메틸아미노에틸메타크릴레이트으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 양이온성 고분자일 수 있다.
본 발명의 유착방지용 조성물은 신체 내 어느 곳에나 투여될 수 있으나, 개복술, 부인과 수술 및 개흉술에서 복강 및 흉강 내의 각종 자기, 건외막, 두개골, 신경 및 안구, 정형외과 수술에서 건과 인대 및 신경 외과 수술에서 경막에 투여될 수 있다.
또한 본 발명의 유착방지용 조성물은 이에 제한되지는 않으나, 겔, 필름 및 막의 형태로 사용될 수 있다.
따라서 본 발명은 체내 저분해 속도를 갖는 히알루론산의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물을 제공한다. 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산은 400만 Da 내지 1000만 Da의 고분자 히알루론산으로, 체내 분해 속도가 느려 유착 방지효과가 탁월하다. 따라서 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 본 발명의 유착방지용 조성물은 유착방지 효과가 탁월하며, 가교하지 않은 히알루론산을 사용하므로써, 기존의 가교제 및 화합물을 포함한 유착방지용 조성물이 가진 문제점 및 기존의 히알루론산이 가진 문제점을 개선할 수 있어 효과적이다.
도 1은 분자량에 따른 유착방지 효능 차이를 보기 위하여 개복을 한 상태의 사진이다.
도 2는 시간의 경과에 따른 히알루론산의 분해 속도 비교를 나타낸 도면이다.(Y축: 점도(cP), X축: 분(min))
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1>
분자량에 따른 유착방지 효과 실험
SD 랫트(female, SPF, (주)오리엔트바이오)를 흡입식으로 마취를 하고, 수술하는 동안 계속해서 마취가 되도록 하였다. 사지를 수술대 위에 잘 고정해 주고 복부의 털을 면도기로 잘 제거한 후 소독약을 바른 후 가위를 이용하여 복부를 열어 주었다. 맹장을 꺼내 거친 거즈를 이용하여 혈흔이 거즈에 묻어날 정도로 상처를 내어 주고, 맹장이 자리한 위치의 복벽 또한 같은 방법으로 맹장과 내복막벽과 유착이 일어나는 조건을 만들어 주었다. 시료를 처리하고 봉합하고 2주간 사육한 후 개복하여 유착여부를 확인하였다. 시료는 평균분자량 300만 Da의 히알루론산과 400만 Da 및 600만 Da의 히알루론산을 인산 나트륨 완충용액에 녹여 사용하였고 무균상태를 유지하였다.
300만 Da의 히알루론산을 이용하여 유착방지 효능을 확인한 결과 장과 복벽 사이에 유착이 발생함을 확인할 수 있었고, 400만 Da 이상에서는 유착을 발견할 수 없었다. 따라서 400만 Da 내지 600만 Da의 히알루론산에서 유착방지 효능이 있음을 확인하였다(도 1).
< 실시예 2>
고분자 히알루론산 생산을 위한 기본 배양 조건
-72℃의 냉동기에서 보관된 스트렙토코커스 디스갈락티애 ID9103 균주 배양액 4ml을 급속 해동시켜서 5.2% 브레인하트인퓨전 고체배지에 도말하여 37℃로 24시간 동안 배양한 후 가로×세로 1cm2의 면적으로 생육된 콜로니를 잘라 내어 3% 토드휴이트 브로스(Todd-Hewitt broth) 멸균 액체배지(heart, infusion 0.31%, neopeptone 2%, dextropse 0.2%, NaCl 0.2%, Disodium phosphate 0.04%, sodium carbonate 0.25%; BD 사, 미국) 40ml에 접종하였다.
37℃, 150rpm에서 진탕 배양한 40ml을 1차 종균배양액으로 사용하였다. 대수 증식기 단계인 6시간 배양 상태에서 무균적으로 1차 종균액을 3% 토드휴이트 브로스 멸균 액체배지(40ml, pH 7.8) 3개에 접종하였다. 배양 조건은 37℃, 150rpm으로 20시간 이상 무균적으로 배양함으로써 2차 종균배양액으로 사용하였다. 이때 종료된 2차 종균 배양액은 6.4±0.2의 pH 상태를 유지하고 있으며 OD(600㎚)는 0.35±0.05이어야 한다. 2차 종균배양액 80ml을 본배양 배지에 접종하여 40시간 이상 배양함으로써 배지조성에 따른 히알루론산의 생산성의 차이를 관찰하였고 추후 히알루론산 생산성 증대를 위한 조건을 결정하였다. 이상의 배양공정은 모든 실시예에서 동일하게 적용되었다.
히알루론산을 최적으로 생산하기 위한 본 배양 배지 결정 시험은 7.5L 발효조에서 3.5L 배양액 조건으로 실시하였다. 배지 조성은 포도당 6%(w/v), 효모엑스 0.5%(w/v), 카제인 펩톤 2%(w/v), 글루타민 0.06%(w/v), 글루콘산나트륨 0.1%(w/v), 수산 0.02%(w/v), 황산마그네슘 0.15%(w/v), 인산일수소이칼륨 0.25%(w/v), 염화나트륨 0.5%(w/v), 아세트산나트륨 0.5%(w/v), 염화이철 0.007 %(w/v), 암모늄몰리브덴 0.05 %(w/v), 배양조건은 pH 7.0, 34℃의 조건을 기본으로 하였다.
본 발명에서 배양액 내에 존재하는 히알루론산 농도는 카바졸 방법(T. Bitter, Anal. Biochem., 1962, 4, 330-334)과 탁도 분석법(S. Jung-Min, Carbohyd. Polym., 2009, 78, 633-634)으로 이중으로 확인하였다.
히알루론산의 평균 분자량은 겔 여과 크로마토그라피 방법(Narlin B. Beaty et al,Anal. Biochem., 1985, 147, 387-395)으로 구하였다. 분석 조건은 다음과 같다. 칼럼은 Toyo Soda TSK gelG6000PWXL을 사용하였으며 이동상은 150mM NaCl, 3mM Na2HPO4(pH7.0), 0.02% NaN2이다. Detection은 refrative index detector(Shodex; Showa Denko K.K. 일본)를 사용하였고 표준물질은 polyethylene oxide를 분자량별로 2mg/ml 농도로 조제하여 사용하였다.
상기 배양 조건으로 생산된 히알루론산의 농도는 7g/L이며, 분자량은 300만 Da인 것으로 측정되었다.
< 실시예 3>
고분자 히알루론산 생산성 및 분자량
질소원은 미생물의 대사에 있어서 중요한 역할을 하고, 히알루론산의 생산에도 영향을 주는 것으로 알려져 있다. 따라서 기본적으로 사용되는 질소원인 펩톤류를 포함하여 아미노산 종류의 변경을 통하여 얻고자 하는 400만 내지 600만 Da의 히알루론산의 생산에 기여할 수 있을 것이라 판단되었다.
각 펩톤류에 따라 히알루론산의 생산량과 분자량에 차이가 있음을 확인하였고, 여러 펩톤류 중 기본 배지원인 카제인(효소 가수분해물)이 8g/L를 상회하는 생산량과 432만 Da의 분자량을 보이면서 가장 좋은 결과를 보여주었기에 이하 실시예의 시험에서 카제인(효소 가수분해물)을 동일하게 사용하였다.
기본 배지인 글루타민을 대신하여 아르기닌을 첨가한 군의 경우 히알루론산의 생산량과 분자량에서 8.53g/L 이상, 약483만 Da의 우수한 결과를 보여준다.
탄소원 역시 미생물 생장과 대사에서 중요한 역할을 할 뿐 아니라, 히알루론산의 전구체로써 사용되고 있다. 따라서 탄소원의 종류를 변경하여 400만 내지 600만 Da 히알루론산의 생산에 영향을 줄 수 있을 것이라 판단되었다.
기본 배지인 포도당을 대신해 엿당을 첨가한 군의 경우 8.72g/L의 생산량과 약552만 Da의 분자량 히알루론산을 생산하여 우수한 결과를 보여준다.
금속이온은 미생물의 세포내에서 DNA의 발현이나 효소의 활성 등에서 다양한 역할들을 수행하고 있다고 알려져 있다. 따라서 히알루론산을 생산함에 있어서 관여하고 있는 효소나 DNA의 활성화 및 발현에 영향을 줄 것으로 기대하여 다양한 금속 이온들을 시험하였다.
아연을 첨가한 군의 경우 9.42g/L의 생산량과 약598만 Da의 분자량 히알루론산을 생산하여 우수한 결과를 보여준다.
펩톤류 배지원 종류에 따른 히알루론산 생산성 및 분자량 차이
펩톤류 배지원 종류 히알루론산 농도(g/L) 분자량(X1,000)
카제인 펩톤 → 카제인(효소 가수분해물) 8.07 4,321
글루타민 → 아르기닌 8.53 4,829
포도당 → 엿당 8.72 5,523
아연(추가) 9.42 5,981
< 실시예 4>
히알루론산의 체내 분해 속도 비교 실험
체내에서 히알루론산을 분해하는 효소인 히알루로니다아제(hyaluronidase)를 이용해 300만 Da, 400만 Da 및 600만 Da의 히알루론산에 대한 분해 속도 비교 실험을 실시하였다. 분해 속도 비교 실험은 점도 측정값(cP)을 이용하여 히알루로니다아제 혼합 전후의 점도 측정값 차이를 통해 히알루론산의 분해정도를 비교하였다. 점도측정은 Brookfield Digital Viscometer LVDV-l+ (Brookfield, USA)를 가지고 실시하였으며 spindle 31, 0.3RPM, 25℃에서 측정하였고, 그 결과는 각각 표 2와 도 2와 같다.
히알루론산의 분자량별 체내 분해속도 비교실험
히알루로니다아제 처리 후 경과시간(분) 3 million Da 4 million Da 6 million Da
0 72100 124800 153200
5 70700 123900 152300
10 69100 122700 151200
15 67300 121400 150100
20 65400 120100 149300
25 63600 119300 148100
30 61200 118200 147000
40 58700 117100 145700
50 55600 115300 144100
60 52300 113200 143000
점도 감소율 27.5% 9.3% 6.7%
표 2 및 도 2에서 300만 Da의 히알루론산은 점도 감소율(27.5%)은 400만 Da 및 600만 Da의 히알루론산과 비교하여 크게 나타났다. 반면에 400만 Da 및 600만 Da 히알루론산은 300만 Da의 히알루론산에 비교하여 점도 감소율이 약 3배 내지 4배 낮아 체내 분해속도가 더 느린 것을 알 수 있고, 이에 따라 체내에서 점도를 일정 수준 유지하는 것으로 확인되었다. 따라서 본 발명의 제조 방법으로 제조된 400만 Da 이상의 분자량을 가진 히알루론산은 체내 저분해 속도를 가지며, 바람직하게는 400만 Da 내지 600만 Da의 분자량을 가진 히알루론산이 유착방지 효과가 뛰어난 것으로 나타났다.
본 발명은 체내 저분해 속도를 갖는 히알루론산의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 유착방지용 조성물을 제공한다. 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산은 400만 Da 내지 1000만 Da의 고분자 히알루론산으로, 체내 분해 속도가 느려 유착 방지효과가 탁월하다. 따라서 본 발명의 제조방법으로 제조된 히알루론산을 포함하는 본 발명의 유착방지용 조성물은 유착방지 효과가 탁월하며, 가교하지 않은 히알루론산을 사용하므로써, 기존의 가교제 및 화합물을 포함하는 유착방지용 조성물이 가진 문제점 및 기존의 히알루론산이 가진 문제점을 개선할 수 있어 산업상 이용 가능성이 높다.

Claims (6)

  1. 스트렙토코커스 디스갈락티애 ＩＤ9103 균주(KCTC11818BP)를 탄소원 및 질소원이 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 체내 저분해 속도를 가지는 분자량이 400만 Da 내지 1000만 Da인 히알루론산의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 탄소원은 엿당이고, 질소원은 카제인 효소 분해물인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 배지에 아미노산 또는 금속이온을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 아미노산은 아르기닌이고, 상기 금속이온은 아연이온인 것으로 특징으로 하는 방법.
  5. 삭제
  6. 제1항 내지 제4항 중에서 선택된 어느 한 항의 방법으로 제조되고, 가교되지 않은 히알루론산을 유효성분으로 하는 유착방지용 조성물.



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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200048312A (ko) * 2018-10-29 2020-05-08 마이크로바이오주식회사 신규한 스트렙토코커스 속 ubc-u46 균주 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITUA20164153A1 (it) 2016-06-07 2017-12-07 Jointherapeutics S R L Composizioni polisaccaridiche impiegabili nella riparazione tissutale
WO2018106924A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Cummins Inc. Spark plug for an internal combustion engine having a combustion pre-chamber
EP3797800A1 (en) * 2019-05-02 2021-03-31 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale - Inserm Hyaluronic acid hydrogels with prolonged antimicrobial activity
KR102546437B1 (ko) * 2021-03-15 2023-06-21 금오공과대학교 산학협력단 생체적합성 고분자를 포함하는 파우더형 유착방지제 및 그의 제조방법

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4141973A (en) * 1975-10-17 1979-02-27 Biotrics, Inc. Ultrapure hyaluronic acid and the use thereof
US5496726A (en) * 1993-04-16 1996-03-05 Lucky Limited Streptococcus zooepidemicus medium and process for preparing hyaluronic acid
JP3632197B2 (ja) * 1996-10-15 2005-03-23 チッソ株式会社 高分子量ヒアルロン酸もしくはその塩の製造法
WO1999010385A1 (fr) * 1997-08-22 1999-03-04 Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Gel d'acide hyaluronique, son procede de production et substance therapeutique le contenant
AU780363B2 (en) 1999-07-28 2005-03-17 United States Surgical Corporation Hyaluronic acid anti-adhesion barrier
ATE543899T1 (de) * 2002-08-19 2012-02-15 Kolon Life Science Inc Hyaluronsäure produzierender mikroorganismus und reinigungsverfahren für hyaluronsäure
KR20090012439A (ko) 2007-07-30 2009-02-04 주식회사 핸슨바이오텍 기관 유착 방지 특성을 갖는 히알루론산 및카르복시메칠셀룰로즈 복합체 유도체 필름 및 겔 및 그제조방법
EP2031053A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-04 The University Of Queensland Production of HA
JP5356388B2 (ja) * 2008-07-25 2013-12-04 電気化学工業株式会社 ヒアルロン酸の製造方法
KR101087969B1 (ko) * 2008-10-31 2011-12-01 일동제약주식회사 미생물 배양에 의한 히알우론산을 생산하는 방법
KR101062068B1 (ko) * 2008-12-01 2011-09-02 포항공과대학교 산학협력단 유착방지용 조성물
WO2010125069A1 (en) * 2009-04-28 2010-11-04 Pharmasurgics In Sweden Ab Hyaluronic acid for preventing post surgical adhesions
KR101074467B1 (ko) 2009-05-08 2011-10-17 주식회사 휴메딕스 히알루론산 및 ｌ-아르기닌을 함유하는 유착방지제
KR101132114B1 (ko) * 2009-09-15 2012-04-05 일동제약주식회사 히알루론산의 분자량을 조절하는 방법
WO2011109130A1 (en) * 2010-03-01 2011-09-09 Tautona Group Lp Threads of hyaluronic acid and methods of use thereof
KR101091072B1 (ko) 2010-03-04 2011-12-08 신효산업 주식회사 2단 빨대
KR101227248B1 (ko) 2010-04-14 2013-01-28 원제돈 다용도 압력 조리장치
CN101912633A (zh) * 2010-08-03 2010-12-15 孙伟庆 一种透明质酸海绵及其制备方法
CN103189078A (zh) * 2010-10-29 2013-07-03 汇美迪斯有限公司 含有透明质酸和l-精氨酸的抗粘连剂
TW201313261A (zh) * 2011-08-26 2013-04-01 Lg Life Sciences Ltd 防沾黏劑及使用該防沾黏劑之預防沾黏之方法
KR101322227B1 (ko) * 2011-09-30 2013-10-28 일동제약주식회사 스트렙토코커스 디스갈락티애 ｉｄ9103 균주 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200048312A (ko) * 2018-10-29 2020-05-08 마이크로바이오주식회사 신규한 스트렙토코커스 속 ubc-u46 균주 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법
KR102489403B1 (ko) 2018-10-29 2023-01-17 엠앤에이치바이오 주식회사 신규한 스트렙토코커스 속 ubc-u46 균주 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법

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