KR102354558B1 - 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 트랜스티레틴(TTR) 유전자를 표적화하는 이본쇄 리보핵산(dsRNA), 및 TTR의 발현을 억제하기 위해 dsRNA를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법{Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin}
본 발명은 트랜스티레틴(transthyretin: TTR) 유전자를 표적화하는 이본쇄 리보핵산(dsRNA), 및 TTR의 발현을 억제하기 위해 dsRNA를 사용하는 방법에 관한 것이다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 2008년 10월 20일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/106,956호; 2008년 11월 18일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/115,738호; 2009년 3월 2일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/156,670호; 2009년 6월 9일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/185,545호; 2009년 9월 15일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/242,783호; 및 2009년 9월 22일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/244,794호에 대해 우선권을 주장하며, 이들 모두는 모든 목적을 위해 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
서열 목록에 대한 참조
본원은 _________ 바이트의 크기로, 2009년 ____________자로 생성한 ______.txt라는 명칭의 텍스트 파일로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. 당해 서열 목록은 참조로 인용된다.
트랜스티레틴(TTR)은 분비되는 갑상선 호르몬-결합 단백질이다. TTR은 레티놀 결합 단백질(RBP)/비타민 A, 및 혈장과 뇌척수액 속의 혈청 티록신(T4)에 결합하여 이를 수송한다.
정상-서열 TTR 및 변이체-서열 TTR은 둘다 아밀로이드증을 유발한다. 정상-서열 TTR은 노인인 사람들에서 심장 아밀로이드증(cardiac amyloidosis)을 유발하며 노인성 전신아밀로이드증(senile systemic amyloidosis: SSA)[또한 노인성 심장 아밀로이드증(senile cardiac amyloidosis: SCA)으로 명명됨]으로 명명된다. SSA는 흔히 많은 다른 기관에서 현미경적 침착물을 동반한다. TTR 돌연변이는 TTR 아밀로이드 형성의 공정을 가속화하며 임상적으로 중요한 TTR 아밀로이드증[또한 ATTR(아밀로이드증-트랜스티레틴 유형)으로 명명됨]의 발전에 대한 가장 중요한 위험 인자이다. 85개 이상의 아밀로이드생성 TTR 변이체가 전신계적 가족성 아밀로이드증을 유발하는 것으로 공지되어 있다. 발현의 다른 중요한 부위는 맥락막층, 망막 및 췌장을 포함한다.
TTR 아밀로이드증은 다양한 형태로 나타난다. 말초 신경계가 보다 우세하게 영향을 받는 경우, 질병은 가족성 아밀로이드 다발신경병증(FAP)으로 명명된다. 심장이 주로 포함되나 신경계가 포함되지 않는 경우, 당해 질병은 가족성 아밀로이드 심근병증(FAC)으로 명명된다. TTR 아밀로이드증의 3번째 주요 유형은 연수막/CNS(중추 신경계) 아밀로이드증으로 명명된다.
이본쇄 RNA 분자(dsRNA)가 RNA 간섭(RNAi)으로 공지된 고도로 보존된 조절 메카니즘에서 유전자 발현을 차단하는 것으로 밝혀졌다. 제WO 99/32619호(Fire et al.)는, 길이가 적어도 25개 뉴클레오타이드인 dsRNA를 사용하여 씨. 엘레간스(C. elegans)에서 유전자의 발현을 억제함을 기재하였다. dsRNA는 또한 식물(참조: 예를 들면, 제WO 99/53050호, Waterhouse et al.; 및 제WO 99/61631호, Heifetz et al.), 드로소필라(Drosophila)[참조: 예를 들면, Yang, D., et al., Curr. Biol. (2000) 10:1191-1200], 및 포유동물(참조: WO 00/44895, Limmer; 및 제DE 101 00 586.5호, Kreutzer et al.)을 포함하는 다른 유기체에서 표적 RNA를 분해하는 것으로 밝혀졌다.
미국 특허원 제20070207974호는 작용성 및 초작용성 siRNA를 기술하고 있다. 미국 특허원 제20090082300호는 TTR에 대해 지시된 안티센스 분자를 기술하고 있다. 미국 특허원 7,250,496은 TTR에 대해 지시된 마이크로RNA를 기술하고 있다.
하나의 양태에서, 본 발명은 트랜스티레틴(TTR)의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA)을 제공하며, 여기서, 상기 dsRNA는 센스 쇄 및 안티센스 쇄를 포함하고, 상기 안티센스 쇄는 트랜스티레틴(TTR)을 암호화하는 mRNA의 부분에 상보성인 영역을 포함하고, 상기 상보성 영역은 길이가 30개 뉴클레오타이드 미만이고, 상기 안티센스 쇄는 서열번호 170, 서열번호 450, 서열번호 730 또는 서열번호 1010의 15개 이상의 연속적인 뉴클레오타이드를 포함한다. 관련 양태에서, 센스 쇄는 서열번호 169, 서열번호 449, 서열번호 729, 또는 서열번호 1009의 15개 이상의 연속적인 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 관련 양태에서, 센스 쇄는 서열번호 449로 이루어지고 안티센스 쇄는 서열번호 450으로 이루어진다. 또 다른 관련 양태에서, 센스 쇄는 서열번호 729로 이루어지고 안티센스 쇄는 서열번호 730으로 이루어진다. 또 다른 관련 양태에서, 센스 쇄는 서열번호 1009로 이루어지고 안티센스 쇄는 서열번호 1010으로 이루어진다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 7 및 16으로부터 선택된 센스 쇄 및 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 7 및 16으로부터 선택된 안티센스 쇄를 포함한다.
특정 양태에서, 트랜스티레틴을 암호화하는 dsRNA의 안티센스 쇄와 트랜스티레틴을 암호화하는 mRNA 사이의 상보성 영역은, 길이가 19개 뉴클레오타이드이다. 다른 양태에서, 상보성 영역은 서열번호 169로 이루어진다. 다른 양태에서, dsRNA의 각각의 쇄는, 길이가 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 뉴클레오타이드이다. 또 다른 양태에서, 각각의 쇄는, 길이가 21개 뉴클레오타이드이다.
특정 양태에서, 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 dsRNA는 서열번호 1331의 637번 위치에서의 아데닌 뉴클레오타이드와 서열번호 1331의 638번 위치의 구아닌 뉴클레오타이드 사이에서 TTR mRNA를 절단하지 않는다. 다른 양태에서, dsRNA는 서열번호 1331의 636번 위치에서의 구아닌 뉴클레오타이드와 서열번호 1331의 637번 위치에서의 아데닌 뉴클레오타이드 사이에서 TTR mRNA를 절단한다. 특정 양태에서, dsRNA는 서열번호 1331의 628번 위치의 구아닌 뉴클레오타이드와 서열번호 1331의 646번 위치에서의 우라실 뉴클레오타이드 사이에서 TTR mRNA에 어닐링한다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명은 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 위에서 기술한 바와 같은 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 dsRNA를 제공한다. 관련 양태에서, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드들)은 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드, 5'-포스포로티오에이트 그룹을 포함하는 뉴클레오타이드, 및 콜레스테릴 유도체 또는 도데칸산 비스데실아미드 그룹에 연결된 말단 뉴클레오타이드로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다른 관련 양태에서, 변형된 뉴클레오타이드는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형된 뉴클레오타이드, 2'-데옥시-변형된 뉴클레오타이드, 고정된(locked) 뉴클레오타이드, 무염기(abasic) 뉴클레오타이드, 2'-아미노-변형된 뉴클레오타이드, 2'-알킬-변형된 뉴클레오타이드, 모르폴리노 뉴클레오타이드, 포스포르아미데이트, 및 뉴클레오타이드를 포함하는 비-천연 염기의 그룹 중에서 선택된다. 특정 양태에서, dsRNA는 적어도 하나의 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다.
다른 양태에서, 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 위에서 기술한 바와 같은 dsRNA는 리간드에 접합되거나, 지질 제형으로 제형화된다. 특정 양태에서, 지질 제형은 LNP 제형, LNP01 제형, XTC-SNALP 제형, 또는 SNALP 제형일 수 있다. 관련 양태에서, XTC-SNALP 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란(XTC)을 57.1/7.1/34.4/1.4의 비의 XTC/DPPC/콜레스테롤/PEG-cDMA로 사용하여 지질:siRNA 비가 약 7이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 센스 쇄는 서열번호 1009로 이루어지고 안티센스 쇄는 서열번호 1010으로 이루어지며, dsRNA는 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란(XTC)을 57.1/7.1/34.4/1.4의 비의 XTC/DPPC/콜레스테롤/PEG-cDMA로 사용하여 지질:siRNA 비가 약 7인 XTC-SNALP 제형으로 제형화된다. 달리는, 위에서 기술된 것들과 같은 dsRNA는 XTC/DSPC/Chol/PEG2000-C14를 50/10/38.5/1.5 몰%의 비로 사용하여 지질:siRNA 비가 약 11:1인 LNP09 제형으로 제형화될 수 있다. 다른 변형에서, dsRNA는 MC3/DSPC/Chol/PEG2000-C14를 50/10/38.5/1.5 몰%의 비로 사용하여 지질:siRNA의 비가 약 11:1인 LNP11 제형으로 제형화된다. 또 다른 양태에서, dsRNA는 LNP09 제형 또는 LNP11 제형으로 제형화되어 PBS 대조군 그룹에 비해 TTR mRNA 수준을 0.3mg/kg의 투여량에서 약 85 내지 90%로 감소시킨다. 또 다른 양태에서, dsRNA는 LNP09 제형 또는 LNP11 제형으로 제형화되어 TTR mRNA 수준을 PBS 대조군 그룹과 비교하여, 0.1 mg/kg의 투여량에서 약 50% 감소시킨다. 또 다른 양태에서, dsRNA는 LNP09 제형 또는 LNP11 제형으로 제형화되며 TTR 단백질 수준을 웨스턴 블롯에 의해 측정한 것으로 PBS 대조군 그룹에 대하여 투여량-의존적 방식으로 감소시킨다. 또 다른 양태에서, dsRNA는 DlinDMA를 57.1/7.1/34.4/1.4의 비의 DLinDMA/DPPC/콜레스테롤/PEG2000-cDMA로 사용하여 지질:siRNA 비가 약 7인 SNALP 제형으로 제형화된다.
특정 양태에서, 본 발명은 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한, 위에서 기술한 것들과 같은 dsRNA를 제공하며, 여기서, 세포에 dsRNA를 투여하면 실시간 PCR 검정으로 측정한 TTR mRNA 발현을 약 95% 억제하며, 여기서, 세포는 HepG2 세포 또는 Hep3B 세포이고, 여기서, dsRNA의 농도는 10nM이다. 관련 양태에서, 세포에 dsRNA를 투여하면 측쇄 DNA 검정으로 측정한 TTR mRNA 발현을 약 74% 억제하며, 여기서, 세포는 HepG2 세포 또는 Hep3B 세포이고, 여기서, dsRNA의 농도는 10nM이다. 다른 관련 양태에서, dsRNA는, HepG2 세포에서 IC50 값이 10pM 미만이고, 여기서, dsRNA의 농도는 10nM이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는, ED50 값이 약 1 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 TTR mRNA를 사이노몰거스 원숭이 간에서 약 80%까지 감소시키며, 여기서, dsRNA의 농도는 3 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 IFN-알파 및 TNF-알파 ELISA 검정에 의해 측정한 바에 의하면 사람 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 면역자극 활성을 생성하지 않는다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 간 TTR mRNA 수준을 약 97% 감소시키거나 또는 혈청 TTR 단백질 수준을 약 90% 감소시키며, 여기서 dsRNA의 농도는 6 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 간 TTR mRNA 수준 및/또는 혈청 TTR 단백질 수준을 22일까지 감소시키며, 여기서 dsRNA의 농도는 6 mg/kg 또는 3 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 이를 필요로 하는 대상체에게 1 mg/kg 또는 3 mg/kg으로 투여하는 경우, 치료 후 14일까지 혈청 TTR 단백질 수준을 억제한다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 실시간 PCR로 측정한 바에 의하면 0.1nM의 농도에서 Hep3B 세포에서 TTR 발현을 98.9%까지 감소시킨다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 실시간 PCR로 측정한 바에 의하면 10nM의 농도에서 Hep3B 세포에서 TTR 발현을 99.4%까지 감소시킨다.
다른 양태에서, 본 발명은 트랜스티레틴(TTR)의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA)을 제공하며, 여기서, dsRNA는 센스 쇄 및, 트랜스티레틴(TTR)을 암호화하는 mRNA의 부분에 상보성인 영역을 포함하는 안티센스 쇄를 포함하며, 여기서, 상기 상보성 영역은, 길이가 30개 미만의 뉴클레오타이드이고 여기서, dsRNA는 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 7 및 16 중에서 선택된 센스 쇄, 및 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 7 및 16 중에서 선택된 안티센스 쇄를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 트랜스티레틴(TTR)의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA)를 제공하며, 여기서, 당해 dsRNA는 서열번호 1331의 618 내지 648번 뉴클레오타이드의 15 내지 30개 뉴클레오타이드에 대해 상보성인 영역을 포함하는 안티센스 쇄를 포함하며, 여기서 상기 안티센스 쇄는 서열번호 1331의 628번 위치에서 구아닌과 염기쌍을 이룬다.
특정 양태에서, 본 발명은 상기 [발명의 내용] 부분에서 기술한 임의의 dsRNA를 함유하는 세포를 제공한다. 특정의 다른 양태에서, 본 발명은 상기 [발명의 내용] 부분에서 기술한 임의의 dsRNA중 적어도 하나의 쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터를 제공한다. 특정 양태에서, 벡터는 세포내에 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 상기 [발명의 내용] 부분에서 기술한 dsRNA 중 어느 것을 포함하는 TTR 유전자의 발현을 억제하기 위한 약제학적 조성물, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 제공한다. 관련 양태에서, 본 발명은 dsRNA 및 SNALP 제형을 포함하는 TTR 유전자의 발현을 억제하기 위한 약제학적 조성물을 제공하며, 여기서 dsRNA는, 길이가 30개 미만의 뉴클레오타이드이고 서열번호 170, 서열번호 450, 서열번호 730, 또는 서열번호 1010의 15개 이상의 연속 뉴클레오타이드를 포함하는 안티센스 쇄를 포함하고, 여기서 SNALP 제형은 DlinDMA, DPPC, 콜레스테롤 및 PEG2000-cDMA를 각각 57.1/7.1/34.4/1.4의 비로 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 (a) 세포를 상기 [발명의 내용]에서 기술한 dsRNA 중 어느 것과 접촉시키는 단계; 및 (b) TTR 유전자의 mRNA 전사의 분해를 수득하기에 충분한 시간 동안 (a) 단계에서 생산된 세포를 유지시킴으로써 세포내에서 TTR 유전자의 발현을 억제함을 포함하여, 세포내에서 TTR 발현을 억제하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TTR 발현에 의해 매개되는 질환의 치료가 요구되는 사람에게 치료학적 유효량의 상기 [발명의 내용]에서 기술한 dsRNA 중의 어느 하나를 투여함을 포함하여, TTR 발현에 의해 매개된 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 관련 양태에서, dsRNA는 사람에게 약 0.01, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 또는 5.0 mg/kg으로 투여된다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 사람에게 약 1.0 mg/kg으로 투여된다. 또 다른 관련된 양태에서, 치료받는 사람은 트랜스티레틴 아밀로이드증 및/또는 간 질환을 가지고 있다. 관련 양태에서, 사람에게 추가로 간 이식이 제공된다. 또 다른 양태에서, dsRNA의 투여는 사람 간에서 TTR mRNA를 약 80%까지 감소시키며, 여기서, dsRNA의 농도는 3 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 IFN-알파 및 TNF-알파 ELISA 검정에서 측정한 바에 의하면 사람에서 면역자극 활성을 일으키지 않는다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 간 TTR mRNA 수준을 약 97%까지 감소시키거나 또는 혈청 TTR 단백질 수준을 약 90%까지 감소시키며, 여기서, dsRNA의 농도는 6 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA의 투여는 간 TTR mRNA 수준 및/또는 혈청 TTR 단백질 수준을 22일까지 감소시키며, 여기서, dsRNA의 농도는 6 mg/kg 또는 3 mg/kg이다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 XTC/DSPC/Chol/PEG2000-C14을 50/10/38.5/1.5 몰%의 비로 사용하여 지질:siRNA의 비가 약 11:1인 LNP09 제형으로 제형화된다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 MC3/DSPC/Chol/PEG2000-C14를 50/10/38.5/1.5 몰%의 비로 사용하여 지질:siRNA 비가 약 11:1인 LNP11 제형으로 제형화된다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 LNP09 제형 또는 LNP11 제형으로 제형화되며 TTR mRNA 수준을 PBC 대조군 그룹에 대해 0.3mg/kg의 투여량에서 약 85 내지 90%까지 감소시킨다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 LNP09 제형 또는 LNP11 제형으로 제형화되며 TTR mRNA 수준을 PBC 대조군 그룹에 대해 0.1 mg/kg의 투여량에서 약 50%까지 감소시킨다. 또 다른 관련 양태에서, dsRNA는 LNP09 제형 또는 LNP11 제형으로 제형화되고 TTR 단백질 수준을 웨스턴 블롯에 의해 측정한 바에 의하면 PBC 대조 그룹에 대해 투여량-의존적인 방식으로 TTR 단백질 수준을 감소시킨다. 또 다른 관련된 양태에서, dsRNA의 투여는 TTR 사람에게 1 mg/kg 또는 3 mg/kg으로 투여하는 경우, 치료 후 14일까지 혈청 TTR 단백질 수준을 억제한다. 또 다른 관련된 양태에서, dsRNA는 DlinDMA를 57.1/7.1/34.4/1.4의 비의 DLinDMA/DPPC/콜레스테롤/PEG2000-cDMA로 사용하여 지질:siRNA의 비가 약 7인 SNALP 제형으로 제형화된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TTR 발현에 의해 매개된 질환의 치료가 요구되는 사람에게 치료학적 유효량의 상기 [발명의 내용]에서 기술한 dsRNA 중의 어느 하나를 투여함을 포함하여, TTR 발현에 의해 매개된 질환을 치료하기 위한 dsRNA의 용도를 제공한다. 관련 양태에서, dsRNA는 사람에게 약 0.01, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5 또는 5.0 mg/kg으로 투여된다. 특별한 관련 양태에서, dsRNA는 사람에게 약 1.0 mg/kg으로 투여된다. 또 다른 관련 양태에서, 사람은 트랜스티레틴 아밀로이드증 및/또는 간 질환을 가지고 있다. 본 발명에 의해 제공된 용도의 또 다른 양태에서, 치료받는 사람에게 간 이식을 추가로 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 (a) 세포를 상기 [발명의 내용]에서 기술한 dsRNA와 접촉시키는 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 생산한 세포를 TTR 유전자의 mRNA 전사체의 분해를 수득하기에 충분한 시간 동안 유지시킴으로써 세포내에서 TTR 유전자의 발현을 억제함을 포함하여, 세포내에 TTR 발현을 억제하기 위한 dsRNA의 용도를 제공한다.
본 발명의 하나 이상의 양태의 세부사항은 하기 설명에서 제공된다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 장점은 설명 및 도면, 및 특허청구범위로부터 명백해질 것이다.
본 발명은 dsRNA 및 세포 또는 포유동물에서 TTR 유전자의 발현을 억제하기 위한, TTR 유전자를 표적화하는 dsRNA의 사용 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 TTR 유전자의 발현에 의해 유발된 포유동물에서 TTR 아밀로이드증과 같은 병리학적 상태 및 질병을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. dsRNA는 RNA 간섭(RNAi)으로 공지된 과정을 통해 mRNA의 서열-특이적인 분해를 지시한다.
본원에서 특징화된 조성물의 dsRNA는, 길이가 30개 미만의 뉴클레오타이드, 일반적으로 길이가 19 내지 24개 뉴클레오타이드인 영역을 가진 RNA 쇄(안티센스 쇄)를 포함하며 TTR 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부에 대해 실질적으로 상보성이다. 이들 dsRNA의 사용은 포유동물에서 TTR 발현과 관련된 병리학에 연관된 유전자의 mRNA의 표적화된 분해를 가능하도록 한다. 특히, TTR dSRNA의 매우 낮은 용량은 RNAi를 특이적으로 및 효율적으로 매개하여, TTR 유전자의 발현을 현저히 억제한다. 세포-계 검정을 사용하여, 본 발명자들은, dsRNA 표적화 TTR이 특이적으로 및 효율적으로 RNAi를 매개하여, TTR 유전자의 발현을 현저히 억제함을 입증하였다. 따라서, 이들 dsRNA를 포함하는 방법 및 조성물은 간 질환 또는 TTR 아밀로이드증, 예를 들면, FAP의 치료에서와 같이, TTR을 하향 조절함으로써 매개될 수 있는 병리학적 과정을 치료하는데 유용하다.
TTR dsRNA를 함유하는 방법 및 조성물은 TTR 아밀로이드증과 같은, TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정을 치료하는데 유용하다. 하나의 양태에서, TTR 발현에 의해 매개된 질환을 치료하는 방법은 이러한 치료가 요구되는 사람에게, TTR에 대해 표적화된 치료학적 유효량의 dsRNA를 투여함을 포함한다. 하나의 양태에서, dsRNA는 사람에게 약 0.01, 0.1, 0.5, 1.0, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25 mg/kg으로 투여된다.
다음의 상세한 설명은 TTR 유전자의 발현을 억제하기 위한 dsRNA를 함유하는 조성물의 제조 및 사용 방법, 및 또한 당해 유전자의 발현에 의해 유발된 질병 및 질환을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 기재한다. 본 발명에서 특징화된 약제학적 조성물은, 길이가 30개 미만의 뉴클레오타이드, 일반적으로 길이가 19 내지 24개의 뉴클레오타이드이고, TTR 유전자의 RNA 전사체의 적어도 일부에 대해 실질적으로 상보성인 상보성 영역을 포함하는 안티센스 쇄를 갖는 dsRNA와 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명에서 특징화된 조성물은 또한, 길이가 30개 미만의 뉴클레오타이드, 일반적으로 길이가 19 내지 24개의 뉴클레오타이드이고, TTR 유전자의 RNA 전사체의 적어도 일부에 대해 실질적으로 상보성인 상보성 영역을 갖는 안티센스 쇄를 갖는 dsRNA를 포함한다.
dsRNA의 센스 쇄는 서열번호 169, 서열번호 449, 서열번호 729, 또는 서열번호 1009의 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21개 또는 그 이상의 연속된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. dsRNA의 안티센스 쇄는 서열번호 170, 서열번호 450, 서열번호 730, 또는 서열번호 1010의 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21개 또는 그 이상의 연속된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, dsRNA의 센스 쇄는 서열번호 449 또는 이의 단편으로 이루어질 수 있으며 안티센스 쇄는 서열번호 450 또는 이의 단편으로 이루어질 수 있다. 하나의 양태에서, dsRNA의 센스 쇄는 서열번호 729 또는 이의 단편으로 이루어질 수 있으며 안티센스 쇄는 서열번호 730 또는 이의 단편으로 이루어질 수 있다. 하나의 양태에서, dsRNA의 센스 쇄는 서열번호 1009 또는 이의 단편으로 이루어질 수 있으며 안티센스 쇄는 서열번호 1010 또는 이의 단편으로 이루어질 수 있다.
하나의 양태에서, dsRNA는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 그 이상의 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, 변형된 뉴클레오타이드는 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드, 5'-포스포로티오에이트 그룹을 포함하는 뉴클레오타이드, 및/또는 콜레스테릴 유도체 또는 도데칸산 비스데실아미드 그룹에 연결된 말단 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, 변형된 뉴클레오타이드는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형된 뉴클레오타이드, 2'-데옥시-변형된 뉴클레오타이드, 고정된 뉴클레오타이드, 무염기 뉴클레오타이드, 2'-아미노-변형된 뉴클레오타이드, 2'-알킬-변형된 뉴클레오타이드, 모르폴리노 뉴클레오타이드, 포스포르아미데이트, 및/또는 뉴클레오타이드를 포함하는 비-천연 염기를 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, dsRNA의 상보성 영역은, 길이가 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21개, 또는 그 이상의 뉴클레오타이드이다. 하나의 양태에서, 상보성 영역은 서열번호 169의 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21개, 또는 그 이상의 연속된 뉴클레오타이드를 포함한다.
하나의 양태에서, dsRNA의 각각의 쇄는, 길이가 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드이다. 하나의 양태에서, dsRNA는 센스 쇄, 또는 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 7, 및 16 중에서 선택된, 이의 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개 뉴클레오타이드 단편, 및 안티센스 쇄, 또는 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 7, 및 16 중에서 선택된 이의 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개 뉴클레오타이드 단편을 포함한다.
하나의 양태에서, 세포에 dsRNA를 투여하면 실시간 PCR 검정에 의해 측정한 바에 의하면 TTR mRNA 발현을 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 억제한다. 하나의 양태에서, 세포에 dsRNA를 투여하면 실시간 PCR에 의해 측정한 바에 의하면 TTR mRNA 발현을 약 40% 내지 45%, 45% 내지 50%, 50% 내지 55%, 55% 내지 60%, 60% 내지 65%, 65% 내지 70%, 70% 내지 75%, 75% 내지 80%, 80% 내지 85%, 85% 내지 90%, 90% 내지 95% 또는 그 이상 억제한다. 하나의 양태에서, 세포에 dsRNA를 투여하면 측쇄 DNA 검정에 의해 측정한 바에 의하면 TTR mRNA 발현을 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 억제한다. 하나의 양태에서, 세포에 dsRNA를 투여하면 측쇄 DNA 검정에 의해 측정한 바에 의하면 TTR mRNA 발현을 약 40% 내지 45%, 45% 내지 50%, 50% 내지 55%, 55% 내지 60%, 60% 내지 65%, 65% 내지 70%, 70% 내지 75%, 75% 내지 80%, 80% 내지 85%, 85% 내지 90%, 90% 내지 95% 또는 그 이상 억제한다.
하나의 양태에서, dsRNA는, IC50 값이 0.01pM, 0.1pM, 1pM, 5pM, 10pM, 100pM, 또는 1000pM 미만이다. 하나의 양태에서, dsRNA는, ED50 값이 약 0.01, 0.1, 1, 5, 또는 10 mg/kg이다.
하나의 양태에서, dsRNA의 투여는 사이노몰거스 원숭이에서 TTR mRNA를 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 감소시킬 수 있다. 하나의 양태에서, dsRNA의 투여는 간 TTR mRNA 수준을 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 또는 혈청 TTR 단백질 수준을 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 감소시킨다. 하나의 양태에서, dsRNA의 투여는 간 TTR mRNA 수준 및/또는 혈청 TTR 단백질 수준을 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25일, 또는 그 이상의 일까지 감소시킨다.
하나의 양태에서, dsRNA는 LNP 제형으로 제형화되어 TTR mRNA 수준을 PBC 대조군 그룹에 대해 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1 mg/kg의 투여량에서 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상까지 감소시킨다. 하나의 양태에서, dsRNA는 LNP 제형으로 제형화되며 TTR 단백질 수준을 웨스턴 블롯에 의해 측정한 바에 의하면 PBC 대조군 그룹에 대해 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상까지 감소시킨다. 하나의 양태에서, dsRNA는 혈청 TTR 단백질 수준을 억제할 필요가 있는 대상체에게 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25 mg/kg으로 투여되는 경우 치료 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25일까지 억제한다.
따라서, 일부 측면에서, TTR dsRNA 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적 조성물, TTR 유전자의 발현을 억제하기 위해 조성물을 사용하는 방법, 및 TTR 유전자의 발현으로 유발되는 질병을 치료하기 위해 약제학적 조성물을 사용하는 방법이 본 발명에서 특징화된다.
I. 정의
편의를 위해, 본원의 명세서, 실시예 및 첨부된 특허청구범위에서 사용된 특정 용어 및 어절의 의미를 하기에 제공한다. 본 명세서의 다른 부분에서의 용어의 사용과 이 부분에서 제공된 정의 사이에 명백한 불일치가 존재하는 경우, 이 부분에서의 정의가 우선한다.
"G," "C," "A" 및 "U" 각각은 일반적으로 각각 염기로서 구아닌, 사이토신, 아데닌 및 우라실을 함유하는 뉴클레오타이드를 나타낸다. "T" 및 "dT"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 뉴클레오염기가 티민인 데옥시리보뉴클레오타이드, 예를 들면, 데옥시리보티민을 말한다. 그러나, 용어 "리보뉴클레오타이드" 또는 "뉴클레오타이드" 또는 "데옥시리보뉴클레오타이드"는 또한 하기 추가로 상세히 설명하는 바와 같이, 변형된 뉴클레오타이드, 또는 대체 교체 잔기를 의미할 수 있다. 당해 분야의 숙련가들은, 구아닌, 사이토신, 아데노신 및 우라실이 이러한 치환 잔기를 지닌 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드의 염기쌍 형성 특성을 실질적으로 변경시키지 않으면서 다른 잔기에 의해 치환될 수 있음을 잘 알고 있다. 예를 들면, 제한하지 않고, 염기로서 이노신을 포함하는 뉴클레오타이드는 아데닌, 사이토신 또는 우라실을 함유하는 뉴클레오타이드와 염기쌍을 형성할 수 있다. 따라서, 우라실, 구아닌 또는 아데닌을 함유하는 뉴클레오타이드는 본 발명의 뉴클레오타이드 서열내에서, 예를 들면, 이노신을 함유하는 뉴클레오타이드에 의해 치환될 수 있다. 이러한 치환 잔기를 포함하는 서열은 본 발명의 양태에 있다.
본원에 사용되는 "트랜스티레틴"("TTR")은 세포내 유전자를 나타낸다. TTR은 또한 ATTR, HsT2651, PALB, 프리알부민, TBPA, 및 트랜스티레틴(프리알부민, 아밀로이드증 제I형)으로 공지되어 있다. 사람 TTR mRNA 전사체의 서열은 NM_000371에서 찾을 수 있다. 마우스 TTR mRNA의 서열은 NM_013697.2에서 찾을 수 있으며, 래트 TTR mRNA의 서열은 NM_012681.1에서 찾을 수 있다.
본원에 사용되는 "표적 서열"은 1차 전사 생성물의 RNA 프로세싱의 생성물인 mRNA를 포함하는, TTR 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오타이드 서열의 연속되는 일부를 나타낸다.
본원에 사용되는 용어 "서열을 포함하는 쇄"는 표준 뉴클레오타이드 명명법을 사용하여 언급된 서열로 기술되는 뉴클레오타이드의 쇄를 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 나타낸다.
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용되는 용어 "상보성"은, 제2 뉴클레오타이드 서열과 관련하여 제1 뉴클레오타이드 서열을 기술하기 위해 사용된 경우, 당해 분야의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 제2 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드와 함께 특정 조건하에서 하이브리드화하여 듀플렉스(duplex) 구조를 형성하기 위한 제1 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 능력을 말한다. 이러한 조건은, 예를 들면, 엄격한 조건(stringent condition)일 수 있으며, 여기서, 엄격한 조건은 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6.4, 1 mM EDTA, 50℃ 또는 70℃에서 12 내지 16시간에 이은 세척을 포함할 수 있다. 유기체의 내부에서 직면할 수 있는, 생리학적으로 관련된 조건과 같은 기타 조건을 적용할 수 있다. 당해 분야의 숙련가들은 하이브리드화된 뉴클레오타이드의 궁극적인 적용에 따라 2개 서열의 상보성을 시험하기에 가장 적절한 조건의 세트를 결정할 수 있을 것이다.
이는 제1 및 제2 뉴클레오타이드 서열의 전체 길이에 걸쳐 제2 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고뉴클레오타이드에 대한 제1 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 염기쌍 형성을 포함한다. 이러한 서열은 본원에서 서로와 관련하여 "완전하게 상보성인"으로 언급될 수 있다. 그러나, 제1 서열이 본원에서 제2 서열과 관련하여 "실질적으로 상보성인"으로 언급되는 경우, 2개 서열들은 완전히 상보성일 수 있거나, 이들은 하나 이상, 그러나 일반적으로 하이브리드화시 4, 3 또는 2개 이하의 미스매치된(mismatched) 염기 쌍을 형성하면서 이들의 궁극적인 적용과 가장 관련된 조건하에서 하이브리드화하는 능력을 보유할 수 있다. 그러나, 2개의 올리고뉴클레오타이드가 하이브리드화시, 하나 이상의 일본쇄 오버행(overhang)을 형성하도록 설계된 경우, 이러한 오버행은 상보성의 결정과 관련하여 미스매치로서 고려되지 않는다. 예를 들어, 길이가 21개 뉴클레오타이드인 하나의 올리고뉴클레오타이드 및 길이가 23개 뉴클레오타이드인 다른 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 dsRNA(여기서, 보다 긴 올리고뉴클레오타이드는 보다 짧은 올리고뉴클레오타이드에 대해 완전히 상보성인 21개 뉴클레오타이드의 서열을 포함한다)는 여전히 본원에 기술된 목적을 위해 "완전히 상보성"으로 언급될 수 있다.
본원에 사용되는 "상보성" 서열은, 하이브리드화하는 이들의 능력과 관련하여 상기 요건들이 충족하는 한, 비-천연 및 변형된 뉴클레오타이드로부터 형성된 염기 쌍 및/또는 비-왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기 쌍을 포함하거나 이들로부터 전적으로 형성될 수 있다. 이러한 비-왓슨-크릭 염기 쌍은 G:U 워블(Wobble) 또는 호그슈타인(Hoogstein) 염기쌍 형성을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에서 용어 "상보성", "완전히 상보성" 및 "실질적으로 상보성"은 이들의 용도 문맥으로부터 잘 이해될 바와 같이, dsRNA의 센스 쇄와 안티센스 쇄 사이, 또는 dsRNA의 안티센스 쇄와 표적 서열 사이의 염기 매칭과 관련하여 사용될 수 있다.
본원에 사용되는 전령 RNA(mRNA)의 "적어도 일부분에 대해 실질적으로 상보성인" 폴리뉴클레오타이드는 5' UTR, 개방 판독 프레임(ORF) 또는 3' UTR을 포함하는 목적 mRNA(예: TTR을 암호화하는 mRNA)의 연속된 일부에 대해 실질적으로 상보성인 폴리뉴클레오타이드를 말한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는, 서열이 실질적으로 TTR을 암호화하는 mRNA의 차단되지 않은 일부분에 대해 실질적으로 상보성인 경우 TTR mRNA의 적어도 일부분에 대해 상보성이다.
본원에 사용되는 용어 "이본쇄 RNA" 또는 "dsRNA"는 위에서 정의한 바와 같이 2개의 평행하지 않고 실질적으로 상보성인 핵산 쇄를 포함하는 이본쇄 구조를 갖는 리보핵산 분자의 복합체를 말한다. 일반적으로, 각각의 쇄의 뉴클레오타이드의 대부분은 리보뉴클레오타이드이지만, 본원에 상세히 기술된 바와 같이 쇄 각각 또는 둘다는 또한 적어도 하나의 비-리보뉴클레오타이드, 예를 들면, 데옥시리보뉴클레오타이드 및/또는 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 "dsRNA"는 다중 뉴클레오타이드에서 실질적인 변형을 포함하고 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 모든 유형의 변형을 포함하는, 리보뉴클레오타이드에 대한 화학적 변형을 포함할 수 있다. siRNA 유형의 분자에 사용되는 특정의 이러한 변형은 본 명세서 및 특허청구범위의 목적을 위해 "dsRNA"에 포함된다.
이본쇄 구조를 형성하는 2개 쇄는 하나의 보다 큰 RNA 분자의 상이한 일부분일 수 있거나, 별개의 RNA 분자일 수 있다. 2개의 쇄가 하나의 보다 큰 분자의 일부분이어서, 이본쇄 구조를 형성하는 하나의 쇄의 3'-말단과 각각의 다른 쇄의 5'-말단 사이의 뉴클레오타이드의 차단되지 않은 쇄에 의해 연결되는 경우, 연결되는 RNA 쇄는 "헤어핀 루프(hairpin loop)"로 언급된다. 2개의 쇄가 이본쇄 구조를 형성하는 하나의 쇄의 3'-말단과 각각의 다른 쇄의 5'-말단 사이의 뉴클레오타이드의 차단되지 않은 쇄 이외의 수단으로 공유결합에 의해 연결된 경우, 연결하는 구조는 "링커"로 언급된다. RNA 쇄는 동일하거나 상이한 수의 뉴클레오타이드를 가질 수 있다. 염기 쌍의 최대 수는 dsRNA의 가장 짧은 쇄에서의 뉴클레오타이드에서 듀플렉스내에 존재하는 특정한 오버행을 감한 수이다. 듀플렉스 구조 외에, dsRNA는 하나 이상의 뉴클레오타이드 오버행을 포함할 수 있다. 용어 "siRNA"는 또한 상기 기술한 바와 같이 dsRNA로 언급된다.
본원에 사용되는 "뉴클레오타이드 오버행"은, dsRNA의 하나의 쇄의 3'-말단이 다른 쇄의 5'-말단을 초과하여 연장되거나 또는 그 반대인 경우 dsRNA의 듀플렉스 구조로부터 돌출되는 쌍을 이루지 않은 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드들을 말한다. "평활(blunt)" 또는 "평활 말단"은, dsRNA의 말단에 쌍을 이루지 않은 뉴클레오타이드가 없음을, 즉 뉴클레오타이드 오버행이 없음을 의미한다. "평활 말단화된" dsRNA는 이의 전체 길이에 걸쳐 이본쇄된, 즉, 분자의 어떠한 말단에도 뉴클레오타이드 오버행이 없는 dsRNA이다.
용어 "안티센스 쇄"는 표적 서열에 대해 실질적으로 상보성인 영역을 포함하는 dsRNA의 쇄를 말한다. 본원에 사용되는 용어 "상보성 영역"은 본원에 정의된 바와 같이, 서열, 예를 들면, 표적 서열에 대해 실질적으로 상보성인 안티센스 쇄상의 영역을 말한다. 상보성 영역이 표적 서열에 대해 완전히 상보성이 아닌 경우, 미스매치는 말단 영역내에서 대부분 허용되며, 존재할 경우, 일반적으로 말단 영역 또는 영역들, 예를 들면, 5' 및/또는 3' 말단의 6, 5, 4, 3 또는 2개 뉴클레오타이드내에 있다.
본원에 사용되는 용어 "센스 쇄"는 안티센스 쇄의 영역에 대해 실질적으로 상보성인 영역을 포함하는 dsRNA의 쇄를 말한다.
본원에 사용되는 용어 "SNALP"는 안정한 핵산-지질 입자를 말한다. SNALP는 dsRNA와 같은 핵산 또는 dsRNA가 전사되는 플라스미드를 포함하는 감소된 수성 내부를 도포하는 지질의 소낭을 나타낸다. SNALP는, 예를 들면, 미국 특허원 공보 제20060240093호, 제20070135372호, 및 2008년 4월 15일자로 출원된 USSN 제61/045,228호에 기술되어 있다. 이들 출원들은 본원에 참조로 인용된다.
dsRNA를 언급하는 경우, "세포내로의 도입"은 당해 분야의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 세포내로의 흡수 또는 흡착을 촉진하는 것을 의미한다. dsRNA의 흡착 또는 흡수는 보조되지 않은 확산성 또는 활성 세포 과정을 통해서, 또는 보조제 또는 장치에 의해서 발생할 수 있다. 이러한 용어의 의미는 시험관내 세포로 한정되지 않으며; dsRNA는 또한, 세포가 살아있는 유기체의 부분인 경우, "세포내로 도입될" 수 있다. 이러한 예에서, 세포내로의 도입은 유기체로의 전달을 포함할 것이다. 예를 들어, 생체내 전달을 위해, dsRNA는 조직 부위내로 주입될 수 있거나 전신계적으로 투여될 수 있다. 세포내로의 시험관내 도입은 전기천공(electroporation) 및 지질감염과 같이 당해 분야에 공지된 방법을 포함한다. 추가의 시도는 본원에 기술되어 있거나 당해 분야에 공지되어 있다.
용어 "사일런스(silence)", "~의 발현을 억제하는", "~의 발현을 하향-조절하는", "~의 발현을 억제하는" 등은, 이들이 TTR 유전자를 언급하는 한, 본원에서 TTR 유전자가 전사되는 제1 세포 또는 세포의 그룹으로부터 분리될 수 있고, 제1 세포 또는 세포의 그룹과 실질적으로 동일하지만 이렇게 처리되지 않은 제2 세포 또는 세포의 그룹(대조군 세포)과 비교하여, TTR 유전자의 발현이 억제되도록 처리된 제1 세포 또는 세포의 그룹으로부터 분리될 수 있는 mRNA의 양의 감소에 의해 나타내어는 것으로서, TTR 유전자의 발현의 적어도 부분적인 억제를 말한다. 억제 정도는 일반적으로 하기 식으로 표현된다.
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달리는, 억제 정도는 TTR 유전자 발현에 작용적으로 연결된 매개변수의 감소, 예를 들면, 세포에 의해 분비된 TTR 유전자에 의해 암호화된 단백질의 양, 또는 특정 표현형, 예를 들면, 아폽토시스를 나타내는 세포의 수의 측면에서 제공될 수 있다. 원칙적으로, TTR 유전자 사일런싱은 구성적으로 또는 게놈 가공에 의해, 및 임의의 적절한 검정에 의해 표적을 발현하는 특정 세포에서 측정할 수 있다. 그러나, 제공된 dsRNA가 특정 정도로 TTR 유전자의 발현을 억제함으로써 본 발명에 포함되는지를 측정하기 위해 참조가 필요한 경우, 하기 실시예에서 제공된 검정을 이러한 참조로서 제공할 것이다.
예를 들어, 특정 예에서, TTR 유전자의 발현은 본 발명에서 특징화된 이본쇄 올리고뉴클레오타이드의 투여에 의해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50%까지 억제된다. 일부 양태에서, TTR 유전자는 본 발명에서 특징화된 이본쇄 올리고뉴클레오타이드의 투여에 의해 적어도 약 60%, 70%, 또는 80% 까지 억제된다. 일부 양태에서, TTR 유전자는 본 발명에서 특징화된 이본쇄 올리고뉴클레오타이드의 투여에 의해 적어도 약 85%, 90%, 또는 95%까지 억제된다.
TTR 발현의 문맥에서 본원에 사용되는 용어 "치료하다", "치료" 등은 TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정으로부터의 완화 또는 이의 경감을 말한다. 본 발명의 내용에서, 이것이 하기 본원에서 인용된 다른 조건들(TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정 외의 조건들에) 중의 어느 것에 관한 것인 한, 용어 "치료하다", "치료" 등은 이러한 상태와 관련된 적어도 하나의 증상을 완화시키거나 경감시키거나, 또는 FAP와 같은 TTR 아밀로이드증의 진행을 지연시키는 것과 같이, 이러한 상태의 진행을 지연시키거나 역전시키는 것을 의미한다. TTR 아밀로이드증의 증상은 감각성 신경병(예: 감각이상, 사지에서의 감각저하), 자율신경병(예: 위궤양과 같은 위장 기능장애, 또는 기립 저혈압), 운동 신경병증, 발작, 치매, 척수병증, 다발신경병증, 손목터널증후군, 자율신경부전, 심근병증, 유리체 혼탁, 신기능부전, 신장병증, 실질적으로 감소된 mBMI(변형된 체질량지수), 뇌신경 기능장애, 및 격자각막이상증을 포함한다.
본원에 사용되는 어구 "치료학적 유효량" 및 "예방학적 유효량"은 TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정 또는 TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정의 과잉 증상의 치료, 예방 또는 유지에 있어 치료학적 이점을 제공하는 양을 말한다. 치료학적으로 유효한 구체적인 양은 통상의 의학 숙련의에 의해 용이하게 측정될 수 있으며, 예를 들면, TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정의 유형, 환자의 병력 및 연령, TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정의 단계, 및 TTR 발현제에 의해 매개된 다른 항-병리학적 과정의 투여와 같은 당해 분야에 공지된 인자에 따라 변할 수 있다.
본원에 사용되는 "약제학적 조성물"은 약리학적 유효량의 dsRNA 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본원에 사용되는 "약리학적 유효량", "치료학적 유효량" 또는 단순히 "유효량"은 의도된 약리학적, 치료학적 또는 예방학적 결과를 생산하기에 효과적인 RNA의 양을 말한다. 예를 들어, 질병 또는 질환과 관련된 측정가능한 매개변수에 있어서 적어도 25% 감소가 존재할 때 제공된 임상 치료가 효과적인 것으로 고려되는 경우, 이러한 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약물의 치료학적 유효량은 이러한 매개변수에 있어서 적어도 25% 감소를 달성하는데 필수적인 양이다. 예를 들어, TTR을 표적화하는 dsRNA의 치료학적 유효량은 TTR 혈청 수준을 적어도 25%까지 감소시킬 수 있다. 다른 예에서, TTR을 표적화하는 dsRNA의 치료학적 유효량은 간 기능 또는 신장 기능을 적어도 25%까지 증진시킬 수 있다.
용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 치료제를 투여하기 위한 담체를 말한다. 이러한 담체는 염수, 완충된 염수, 덱스트로즈, 물, 글리세롤, 에탄올 및 이의 배합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당해 용어는 구체적으로 세포 배양 배지를 배제한다. 경구 투여된 약물의 경우, 약제학적으로 허용되는 담체는 불활성 희석제, 붕해제, 결합제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 착색제 및 방부제와 같은 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 불활성 희석제는 탄산나트륨, 탄산칼슘, 인산나트륨, 인산칼슘, 및 락토즈를 포함하는 한편, 옥수수 전분 및 알긴산은 적합한 붕해제이다. 결합제는 전분 및 젤라틴을 포함할 수 있는 반면, 윤활제는, 존재할 경우, 일반적으로 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석일 것이다. 경우에 따라, 정제를 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 피복하여 위장관내에서 흡수를 지연시킬 수 있다.
본원에 사용되는 "형질전환된 세포"는 벡터가 도입되어 이로부터 dsRNA 분자가 발현될 수 있는 세포이다.
II . 이본쇄 리보핵산( dsRNA )
본원에 보다 상세히 기술되어 있는 바와 같이, 본 발명은 세포 또는 포유동물, 예를 들면, TTR 아밀로이드증을 가진 사람에서 TTR 유전자의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA)을 제공하며, 여기서, dsRNA는 TTR 유전자의 발현시 형성된 mRNA의 적어도 일부분에 상보성인 상보성 영역을 갖는 안티센스 쇄를 포함하고, 여기서 상보성 영역은, 길이가 30개 미만의 뉴클레오타이드, 일반적으로 길이가 19 내지 24개 뉴클레오타이드이며, 여기서 상기 dsRNA는, 상기 TTR 유전자를 발현하는 세포와 접촉시, 예를 들면, PCR 또는 측쇄 DNA(bDNA)-계 방법, 또는 웨스턴 블롯(Western blot)과 같은 단백질-계 방법에 의해 검정된 것으로서 적어도 30%까지 상기 TTR 유전자의 발현을 억제한다. TTR 유전자의 발현은, 하기 실시예에 기술된 바와 같은 검정으로 측정하는 경우 적어도 30%까지 감소될 수 있다. 예를 들어, Hep3B 세포에서와 같은 세포 배양물에서 TTR 유전자의 발현은 bDNA 또는 TaqMan 검정에 의해서와 같은 TTR mRNA 수준을 측정함으로써, 또는 ELISA 검정과 같은, 단백질 수준을 측정함으로써 검정할 수 있다. 본 발명의 dsRNA는 하나 이상의 일본쇄 뉴클레오타이드 오버행을 추가로 포함할 수 있다.
dsRNA는 하기에 추가로 논의된 바와 같이, 예를 들면, 바이오서치(Biosearch), 어플라이드 바이오시스템스, 인코포레이티드(Applied Biosystems, Inc.)로부터 시판되는 것과 같은, 예를 들면, 자동화된 DNA 합성기를 사용함으로써 당해 분야에 공지된 표준 방법으로 합성할 수 있다. dsRNA는 하이브리드화하기에 충분히 상보성이어서 듀플렉스 구조를 형성하는 2개의 RNA 쇄를 포함한다. dsRNA의 하나의 쇄(안티센스 쇄)는 TTR 유전자의 발현 동안 형성된 mRNA의 서열로부터 기원한, 표적 서열에 대해 실질적으로 상보성이고, 일반적으로 완전히 상보성인 상보성 영역을 포함하며, 또 다른 쇄(센스 쇄)는 안티센스 쇄에 대해 상보성인 영역을 포함함으로써, 적합한 조건하에서 결합되는 경우 2개의 쇄는 하이브리드화하여 듀플렉스 구조를 형성한다. 일반적으로, 듀플렉스 구조는, 길이가 15 내지 30개, 또는 25 내지 30개, 또는 18 내지 25개, 또는 19 내지 24개, 또는 19 내지 21개, 또는 19, 20 또는 21개 염기 쌍이다. 하나의 양태에서, 듀플렉스는, 길이가 19개 염기쌍이다. 다른 양태에서, 듀플렉스는, 길이가 21개 염기쌍이다. 2개의 상이한 siRNA가 함께 사용되는 경우, 듀플렉스 길이는 동일하거나 상이할 수 있다.
본 발명의 dsRNA의 각각의 쇄는, 길이가 길반적으로 15 내지 30, 또는 18 내지 25, 또는 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개 뉴클레오타이드이다. 다른 양태에서, 각각의 쇄는, 길이가 25 내지 30개 뉴클레오타이드이다. 듀플렉스의 각각의 쇄는 동일한 길이이거나 상이한 길이일 수 있다. 2개의 상이한 siRNA가 함께 사용되는 경우, 각각의 siRNA의 각각의 쇄의 길이는 동일하거나 상이할 수 있다.
본 발명의 dsRNA는 하나 이상의 뉴클레오타이드의 하나 이상의 일본쇄 오버행(들)을 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, dsRNA의 적어도 하나의 말단은 1 내지 4개, 일반적으로 1 또는 2개의 뉴클레오타이드의 일본쇄 뉴클레오타이드 오버행을 갖는다. 다른 양태에서, dsRNA의 안티센스 쇄는 센스 쇄에 걸쳐 3' 말단 및 5' 말단에서 각각 1 내지 10개의 뉴클레오타이드 오버행을 갖는다. 추가의 양태에서, dsRNA의 센스 쇄는 안티센스 쇄에 걸쳐 3' 말단 및 5' 말단에서 각각 1 내지 10개의 뉴클레오타이드 오버행을 갖는다.
적어도 하나의 뉴클레오타이드 오버행을 갖는 dsRNA는 평활 말단 대응물보다 예상치 않은 우수한 억제 특성을 가질 수 있다. 일부 양태에서, 단지 하나의 뉴클레오타이드 오버행의 존재는 이의 전체 안정성에 영향을 미치지 않으면서, dsRNA의 간섭 활성을 강화시킨다. 단지 하나의 오버행을 가진 dsRNA는 생체내에서, 및 또한 각종 세포, 세포 배양 배지, 혈액 및 혈청에서 특히 안정하며 효과적임이 입증되어 있다. 일반적으로, 일본쇄 오버행은 안티센스 쇄의 3'-말단, 또는 달리는 센스 쇄의 3'-말단에 위치한다. dsRNA는 또한 일반적으로 안티센스 쇄의 5'-말단에 위치하는 평활 말단을 가질 수 있다. 이러한 dsRNA는 증진된 안정성 및 억제 활성을 가질 수 있으므로 낮은 용량, 즉, 1일당 수용체의 체중 kg당 5mg 미만으로 투여할 수 있다. 일반적으로, dsRNA의 안티센스 쇄는 3'-말단에 뉴클레오타이드 오버행을 가지며 5'-말단은 평활말단(blunt end)이다. 또 다른 양태에서, 오버행내 뉴클레오타이드 중의 하나 이상은 뉴클레오사이드 티오포스페이트로 치환된다.
하나의 양태에서, TTR 유전자는 사람 TTR 유전자이다. 특정한 양태에서, dsRNA의 센스 쇄는 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 또는 7로부터의 센스 서열들 중 하나이고 안티센스 쇄는 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 또는 7의 안티센스 서열들 중 하나이다. 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 또는 7에 제공된 표적 서열내 어디든 표적화하는 대체 안티센스제는 표적 서열 및 플랭킹(flanking) TTR 서열을 사용하여 용이하게 결정할 수 있다.
당해 분야의 숙련가는, 20 내지 23개, 그러나 상세하게는 21개 염기 쌍의 듀플렉스 구조를 갖는 dsRNA가 RNA 간섭을 유도하는데 있어 특히 효과적인 것으로 묘사되어 있음을 잘 인지하고 있다(참조: Elbashir et al., EMBO 2001, 20:6877-6888). 그러나, 다른 연구자들은 보다 짧거나 긴 dsRNA가 또한 효과적일 수 있음을 발견하였다. 상기 기술된 양태에서, 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 및 7에 제공된 올리고뉴클레오타이드 서열의 특성에 의해, 본 발명에서 특징화된 dsRNA는 본원에 기술된 길이의 적어도 하나의 쇄를 포함할 수 있다. 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 또는 7의 서열 중 하나를 갖는 보다 짧은 dsRNA에서 하나 또는 양쪽 말단의 단지 수개의 뉴클레오타이드를 감한 것은 위에서 기술한 dsRNA와 비교하여 유사하게 효과적일 수 있음이 충분히 예측될 수 있다. 따라서, 표 3, 4, 6 또는 7의 서열 중 하나로부터의 적어도 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 연속된 뉴클레오타이드 중 일부 서열을 가지며 본원에서 하기 기술한 검정에서 TTR 유전자의 발현을 억제하는 이들의 능력에 있어 완전한 서열을 포함하는 dsRNA로부터 5, 10, 15, 20, 25 또는 30% 이하의 억제까지 상이한 dsRNA가 본 발명에 의해 고려된다. 또한, 바람직한 TTR 표적 서열내에서 분해하는 dsRNA를 상응하는 TTR 안티센스 서열 및 상보성 센스 서열을 사용하여 용이하게 제조할 수 있다.
또한, 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 또는 7에서 제공된 dsRNA는 RNAi 계 절단되기 쉬운 TTR내 부위를 확인한다. 이와 같이, 본 발명은 또한 본 발명의 제제들 중의 하나에 의해 표적화된 서열내에서 표적화하는 dsRNA를 특징으로 한다. 본원에서 사용되는 제2 dsRNA가 제1 dsRNA의 안티센스 쇄에 상보성인 mRNA내 어디에서도 전령을 분해하는 경우 제2 dsRNA는 제1 dsRNA의 서열내에서 표적화된다고 일컬어진다. 이러한 제2 dsRNA는 일반적으로 TTR 유전자내 선택된 서열에 대해 연속적인 영역으로부터 취해진 추가의 뉴클레오타이드 서열과 커플링된 표 3a, 3b, 4, 6a, 6b, 또는 7에 제공된 서열 중 하나로부터의 적어도 15개의 연속된 뉴클레오타이드로 일반적으로 이루어질 것이다.
본 발명에서 특징화된 dsRNA는 표적 서열에 대해 하나 이상의 미스매치를 함유할 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명에서 특징화된 dsRNA는 3개 이하의 미스매치를 함유한다. dsRNA의 안티센스 쇄가 표적 서열에 대해 미스매치를 함유하는 경우, 미스매치 부위가 상보성 영역의 중심에 위치하지 않는 것이 바람직하다. dsRNA의 안티센스 쇄가 표적 서열에 대한 미스매치를 함유하는 경우, 미스매치는 한쪽 말단으로부터 5개 뉴클레오타이드, 예를 들면, 상보성 영역의 5' 또는 3' 말단으로부터 5, 4, 3, 2 또는 1개 뉴클레오타이드에 제한되는 것이 바람직하다. 예를 들어, TTR 유전자의 영역에 대해 상보성인 23개 뉴클레오타이드 dsRNA 쇄의 경우, dsRNA는 일반적으로 중심의 13개 뉴클레오타이드내에 어떠한 미스매치도 함유하지 않는다. 본 발명에 기술된 방법을 사용하여 표적 서열에 대해 미스매치를 함유하는 dsRNA가 TTR 유전자의 발현을 억제하는데 효과적인지를 측정할 수 있다. TTR 유전자의 발현을 억제하는데 있어서 미스매치를 가진 dsRNA의 효능을 고려하는 것은 특히 TTR 유전자내 특정 상보성 영역이 집단내 다형성 서열 변이를 가지는 것으로 공지된 경우 중요하다.
변형
또 다른 양태에서, dsRNA를 화학적으로 변형시켜 안정성을 향상시킨다. 본 발명에서 특징으로 하는 핵산은 본원에서 참조로 인용된 문헌[참조: "Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. et al. (Eds.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA]에 기술된 것과 같이, 당해 분야에 잘 확립된 방법에 의해 합성하고/하거나 변형시킬 수 있다. 본 발명에 유용한 dsRNA 화합물의 구체적인 예는 변형된 골격을 함유하거나 천연의 뉴클레오사이드간 연결을 갖지 않는 dsRNA를 포함한다. 본 명세서에 정의된, 변형된 골격을 갖는 dsRNA는, 골격내에 인 원자를 보유하는 것들 및 골격내에 인 원자를 갖지 않는 것들을 포함한다. 본 명세서의 목적을 위해, 및 당해 분야에서 때때로 참조된 것으로서, 이들의 뉴클레오사이드간 골격내에 인 원자를 갖지 않는 변형된 dsRNA는 또한 올리고뉴클레오사이드인 것으로 고려될 수 있다.
변형된 dsRNA 골격은, 예를 들면, 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함하는 메틸 및 기타 알킬 포스포네이트, 포스피네이트, 3'-아미노 포스포르아미데이트 및 아미노알킬포스포르아미데이트를 포함하는 포스포르아미데이트, 티오노포스포르아미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 및 정상의 3'-5' 연결을 갖는 보라노포스페이트, 이들의 유사체, 및 뉴클레오사이드 단위의 인접한 쌍이 3'-5' → 5'-3' 또는 2'-5' → 5'-2'로 연결된 역전된 극성을 갖는 것들의 2'-5' 연결된 유사체를 포함한다.
상기한 인-함유 연결의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는, 각각 본원에 참조로 인용된, 미국 특허 제3,687,808호; 제4,469,863호; 제4,476,301호; 제5,023,243호; 제5,177,195호; 제5,188,897호; 제5,264,423호; 제5,276,019호; 제5,278,302호; 제5,286,717호; 제5,321,131호; 제5,399,676호; 제5,405,939호; 제5,453,496호; 제5,455,233호; 제5,466,677호; 제5,476,925호; 제5,519,126호; 제5,536,821호; 제5,541,316호; 제5,550,111호; 제5,563,253호; 제5,571,799호; 제5,587,361호; 및 제5,625,050호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
골격내에 인 원자를 포함하지 않는 변형된 dsRNA 골격은 단쇄 알킬 또는 사이클로알킬 뉴클레오사이드간 연결, 혼합된 헤테로원자 및 알킬 또는 사이클로알킬 뉴클레오사이드간 연결, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로원자 또는 헤테로사이클릭 뉴클레오타이드간 연결에 의해 형성된 골격을 갖는다. 이들은 모르폴리노 연결(부분적으로 뉴클레오사이드의 당 부위로부터 형성됨); 실록산 골격; 설파이드, 설폭사이드 및 설폰 골격; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 알켄 함유 골격; 설파메이트 골격; 메틸렌이미노 및 메틸렌하이드라지노 골격; 설포네이트 및 설폰아미드 골격; 아미드 골격을 갖는 것들; 및 혼합된 N, O, S 및 CH2 성분 부분을 갖는 기타의 것들을 포함한다.
상기 올리고뉴클레오사이드의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는, 각각 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제5,034,506호; 제5,166,315호; 제5,185,444호; 제5,214,134호; 제5,216,141호; 제5,235,033호; 제5,64,562호; 제5,264,564호; 제5,405,938호; 제5,434,257호; 제5,466,677호; 제5,470,967호; 제5,489,677호; 제5,541,307호; 제5,561,225호; 제5,596,086호; 제5,602,240호; 제5,608,046호; 제5,610,289호; 제5,618,704호; 제5,623,070호; 제5,663,312호; 제5,633,360호; 제5,677,437호; 및 제5,677,439호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 적합한 dsRNA 모사체에서, 뉴클레오타이드 단위의 당 및 뉴클레오사이드간 연결, 즉 골격은 신규 그룹으로 치환된다. 염기 단위는 적절한 핵산 표적 화합물과의 하이브리드화를 위해 유지된다. 하나의 이러한 올리고머성 화합물인, 탁월한 하이브리드화 특성을 가진 것으로 밝혀진 dsRNA 모사체는 펩타이드 핵산(PNA)으로 언급된다. PNA 화합물에서, dsRNA의 당 골격은 아미드 함유 골격, 특히, 아미노에틸글리신 골격으로 치환된다. 뉴클레오염기는 유지되며 골격의 아미드 부위의 아자 질소 원자에 직접 또는 간접적으로 결합된다. PNA 화합물의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는, 각각 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제5,539,082호; 제5,714,331호; 및 제5,719,262호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. PNA 화합물의 추가의 교시는 문헌(참조: Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500)에서 찾을 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 포스포로티오에이트 골격을 갖는 dsRNA 및 헤테로원자 골격을 갖는 올리고뉴클레오타이드, 및 특히 위에서 언급된 미국 특허 제5,489,677호의 --CH2--NH--CH2--, --CH2--N(CH3)--O--CH2--[메틸렌(메틸이미노) 또는 MMI 골격으로 공지됨], --CH2--O--N(CH3)--CH2--, --CH2--N(CH3)--N(CH3)--CH2-- 및 --N(CH3)--CH2--CH2--[여기서, 천연 포스포디에스테르 골격은 --O--P--O--CH2--으로 나타낸다], 및 위에서 언급된 미국 특허 제5,602,240호의 아미드 골격이다. 또한, 위에서 언급된 미국 특허 제5,034,506호의 모르폴리노 골격 구조를 갖는 dsRNA가 바람직하다.
변형된 dsRNA는 또한 하나 이상의 치환된 당 잔기를 함유할 수 있다. 바람직한 dsRNA는 2' 위치에서 다음 중 하나를 포함한다: OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S-, 또는 N-알케닐; O-, S- 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬(여기서, 알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환되거나 치환되지 않은 C1 내지 C10 알킬 또는 C2 내지 C10 알케닐 및 알키닐일 수 있다). O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nONH2, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2(여기서, n 및 m은 1 내지 약 10이다)가 특히 바람직하다. 다른 바람직한 dsRNA는 2' 위치에서 다음 중 하나를 포함한다: C1 내지 C10 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알카릴, 아르알킬, O-알카릴 또는 O-아르알킬, SH, SCH3 , OCN, Cl, Br, CN, CF3 , OCF3 , SOCH3 , SO2CH3 , ONO2 , NO2 , N3 , NH2 , 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알카릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단 그룹, 리포터 그룹, 인터컬레이터, dsRNA의 약력학적 특성을 개선시키기 위한 그룹, 또는 dsRNA의 약력학적 특성을 개선시키기 위한 그룹, 및 유사한 특성을 지닌 다른 치환체. 바람직한 변형은 또한 2'-메톡시에톡시(2'-O--CH2CH2OCH3, 또한 2'-O-(2-메톡시에틸) 또는 2'-MOE로 공지됨)(참조: Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504), 즉, 알콕시-알콕시 그룹을 포함한다. 추가의 바람직한 변형은 본원의 하기 실시예에서 기술된 바와 같이, 2'-DMAOE로 또한 공지된, 2'-디메틸아미노옥시에톡시, 즉, O(CH2)2ON(CH3)2 그룹, 및 본원의 하기 실시예에 기술된 2'-디메틸아미노에톡시에톡시(또한 당해 분야에서 2'-O-디메틸아미노에톡시에틸 또는 2'-DMAEOE로서 공지됨), 즉, 2'-O--CH2--O--CH2--N(CH2)2를 포함한다.
다른 바람직한 변형은 2'-메톡시(2'-OCH3), 2'-아미노프로폭시 (2'-OCH2CH2CH2NH2) 및 2'-플루오로(2'-F)를 포함한다. 유사한 변형은 또한 dsRNA 상의 다른 위치, 특히 3' 말단 뉴클레오타이드 또는 2'-5' 연결된 dsRNA내의 당의 3' 위치 및 5' 말단 뉴클레오타이드의 5' 위치에서 이루어질 수 있다. dsRNA는 또한 펜토푸라노실 당 대신에 사이클로부틸 잔기와 같은 당 모사체를 가질 수 있다. 이러한 변형된 당 구조의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는, 이중 특정의 것이 본 출원과 공동 소유이고 이의 각각의 전문이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제4,981,957호; 제5,118,800호; 제5,319,080호; 제5,359,044호; 제5,393,878호; 제5,446,137호; 제5,466,786호; 제5,514,785호; 제5,519,134호; 제5,567,811호; 제5,576,427호; 제5,591,722호; 제5,597,909호; 제5,610,300호; 제5,627,053호; 제5,639,873호; 제5,646,265호; 제5,658,873호; 제5,670,633호; 및 제5,700,920호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
dsRNA는 또한 뉴클레오염기(종종 당해분야에서 단순히 "염기"로 언급됨) 변형 또는 치환을 포함할 수 있다. 본원에 사용되는 "변형되지 않은" 또는 "천연의" 뉴클레오염기는 퓨린 염기 아데닌(A) 및 구아닌(G), 및 피리미딘 염기 티민(T), 사이토신(C) 및 우라실(U)을 포함한다. 변형된 뉴클레오염기는 5-메틸사이토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 사이토신, 크산틴, 하이폭산틴, 2-아미노아데닌, 6-메틸 및, 아데닌 및 구아닌의 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티미딘 및 2-티오사이토신, 5-할로우라실 및 사이토신, 5-프로피닐 우라실 및 사이토신, 6-아조 우라실, 사이토신 및 티미딘, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 사이토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함한다. 추가의 뉴클레오염기는 미국 특허 제3,687,808호에 기술된 것들, 문헌(참조: The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990)에 기술된 것들, 문헌(참조: Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613)에 기술된 것들, 및 문헌(참조: Sanghvi, Y S., Chapter 15, DsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993)에 기술된 것들을 포함한다. 특정의 이들 뉴클레오염기는 본 발명에서 특징화된 올리고머 화합물의 결합 친화성을 증가시키는데 특히 유용하다. 이들은 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐사이토신을 포함하는, 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 0-6 치환된 퓨린을 포함한다. 5-메틸사이토신 치환체는 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6 내지 1.2℃까지 증가시키는 것으로 밝혀졌으며(참조: Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., DsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278), 심지어 보다 특히 2'-O-메톡시에틸 당 변형과 결합되는 경우 예시적인 염기 치환이다.
특정의 위에서 언급한 변형된 뉴클레오염기 및 또한 다른 변형된 뉴클레오염기의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는, 이의 각각이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제3,687,808호, 및 미국 특허 제4,845,205호; 제5,130,30호; 제5,134,066호; 제5,175,273호; 제5,367,066호; 제5,432,272호; 제5,457,187호; 제5,459,255호; 제5,484,908호; 제5,502,177호; 제5,525,711호; 제5,552,540호; 제5,587,469호; 제5,594,121호, 제5,596,091호; 제5,614,617호; 및 제5,681,941호, 및 본원에 참조로 또한 인용된 미국 특허 제5,750,692호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
접합체
본 발명의 dsRNA의 다른 변형은 dsRNA에 dsRNA의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 잔기 또는 접합체의 화학적 연결을 포함한다. 이러한 잔기는 콜레스테롤 잔기(참조: Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556), 콜산(참조: Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060), 티오에테르, 예를 들면, 베릴-S-트리틸티올(참조: Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770), 티오콜레스테롤(참조: Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538), 지방족 쇄, 예를 들면, 도데칸디올 또는 운데실 잔기(참조: Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10:1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49-54), 인지질, 예를 들면, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸-암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3H-포스포네이트(참조: Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783), 폴리아미드 또는 폴리에틸렌 글리콜 쇄(참조: Manoharan et al., 뉴클레오사이드 & nucleotides, 1995, 14:969-973), 또는 아다만탄 아세트산(참조: Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654), 팔미틸 잔기(참조: Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐옥시콜레스테롤 잔기(참조: Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
이러한 dsRNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는, 이의 각각이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제4,828,979호; 제4,948,882호; 제5,218,105호; 제5,525,465호; 재5,541,313호; 제5,545,730호; 제5,552,538호; 제5,578,717호, 제5,580,731호; 제5,591,584호; 제5,109,124호; 제5,118,802호; 제5,138,045호; 제5,414,077호; 제5,486,603호; 제5,512,439호; 제5,578,718호; 제5,608,046호; 제4,587,044호; 제4,605,735호; 제4,667,025호; 제4,762,779호; 제4,789,737호; 제4,824,941호; 제4,835,263호; 제4,876,335호; 제4,904,582호; 제4,958,013호; 제5,082,830호; 제5,112,963호; 제5,214,136호; 제5,082,830호; 제5,112,963호; 제5,214,136호; 제5,245,022호; 제5,254,469호; 제5,258,506호; 제5,262,536호; 제5,272,250호; 제5,292,873호; 제5,317,098호; 제5,371,241호, 제5,391,723호; 제5,416,203호, 제5,451,463호; 제5,510,475호; 제5,512,667호; 제5,514,785호; 제5,565,552호; 제5,567,810호; 제5,574,142호; 제5,585,481호; 제5,587,371호; 제5,595,726호; 제5,597,696호; 제5,599,923호; 제5,599,928호 및 제5,688,941호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
제공된 화합물에서 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없으며, 실제로 위에서 언급한 변형 중 하나 이상이 단일 화합물내에 혼입되거나 심지어 dsRNA내에 단일 뉴클레오사이드에서 혼입될 수 있다. 본 발명은 또한 키메라 화합물인 dsRNA 화합물을 포함한다. 본 발명의 내용에서 "키메라" dsRNA 화합물 또는 "키메라"는 dsRNA 화합물, 특히, 각각 적어도 하나의 단량체 단위, 즉, dsRNA의 경우에 뉴클레오타이드로 구성된, 2개 이상의 화학적으로 구별되는 영역을 함유하는 dsRNA이다. 이들 dsRNA는 통상적으로, dsRNA가 변형됨으로써 dsRNA에 대해 뉴클레아제 분해에 대해 증가된 내성, 증가된 세포 흡수 및/또는 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화성을 부여하는 적어도 하나의 영역을 함유한다. dsRNA의 추가의 영역은 RNA:DNA 또는 RNA:RNA 하이브리드를 분해할 수 있는 효소에 대한 기질로서 제공될 수 있다. 예를 들면, RNase H는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 쇄를 분해하는 세포 엔도뉴클레아제이다. 따라서, RNase H의 활성화는 RNA 표적의 절단을 일으킴으로써 유전자 발현의 dsRNA 억제의 효능을 현저히 향상시킨다. 결과적으로, 키메라 dsRNA가 사용되는 경우, 동일한 표적 영역에 대해 하이브리드화하는 포스포로티오에이트 데옥시dsRNA와 비교하여, 필적하는 결과가 흔히 보다 짧은 dsRNA를 사용하여 수득될 수 있다.
RNA 표적의 절단은 일상적으로 겔 전기영동 및 필요에 따라, 당해 분야에 공지된 관련 핵산 하이브리드화 기술에 의해 검출될 수 있다. dsRNA의 표적 mRNA 상의 절단 위치는 당해 분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 공지된 방법, 예를 들면, 모든 목적을 위해 본원에서 참조로 인용된 문헌(참조: Soutschek et al., Nature; 2004, Vol. 432, pp. 173-178)에 기술된 5'-RACE 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 하나의 양태에서, 사우츠쉐크(Soutschek) 등에 의해 기술된 5'-RACE 방법을 사용하여 서열번호 1331(NM_000371.3)의 636번 위치에서 구아닌 뉴클레오타이드와 서열번호 1331의 637번 위치에서 아데닌 뉴클레오타이드 사이에서 TTR mRNA를 절단하는 것을 측정하였다. 하나의 양태에서, ALN-18328은 서열번호 1331의 637번 위치에서의 아데닌 뉴클레오타이드와 서열번호 1331의 638번 위치의 구아닌 뉴클레오타이드 사이에서 TTR mRNA를 절단하지 않음이 측정되었다.
특정 예에서, dsRNA는 비-리간드 그룹에 의해 변형될 수 있다. 다수의 비-리간드 분자는 dsRNA의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키기 위해 dsRNA에 접합되며, 이러한 접합을 수행하기 위한 과정은 과학 문헌에서 이용가능한다. 이러한 비-리간드 잔기는 지질 잔기, 예를 들면, 콜레스테롤(참조: Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), 콜산(참조:Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), 티오에테르, 예를 들면, 헥실-S-트리틸티올(참조: Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), 티오콜레스테롤(참조: Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), 지방족 쇄, 예를 들면, 도데칸디올 또는 운데실 잔기(참조: Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49), 인지질, 예를 들면, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-H-포스포네이트(참조; Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 쇄(참조: Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969), 또는 아다만탄 아세트산(참조: Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651), 팔미틸 잔기(참조: Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐-옥시콜레스테롤 잔기(참조: Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923)를 포함한다. 이러한 dsRNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 상기 열거되어 있다. 대표적인 접합 프로토콜은 서열의 하나 이상의 위치에서 아미노링커(aminolinker)를 지닌 dsRNA의 합성을 포함한다. 이후에, 아미노 그룹을 적절한 커플링 또는 활성화 시약을 사용하여 접합될 분자와 반응시킨다. 접합 반응은 여전히 고체 지지에체 결합된 dsRNA를 사용하거나 용액 상 속에서 dsRNA의 분해에 따라 수행할 수 있다. HPLC에 의한 dsRNA 접합체의 정제는 통상적으로 순수한 접합체를 제공한다.
dsRNA 를 암호화한 벡터
다른 측면에서, TTR dsRNA 분자는 DNA 또는 RNA 벡터내로 삽입된 전사 단위로부터 발현된다[참조: 예를 들면, Couture, A, et al., TIG . (1996), 12:5-10; Skillern, A., et al., International PCT Publication No. WO 00/22113, Conrad, International PCT Publication No. WO 00/22114, 및 Conrad, 미국 특허 제6,054,299호]. 이들 도입유전자는 선형 작제물, 환형 플라스미드 또는 바이러스 벡터로서 도입될 수 있으며, 이들은 숙주 게놈내로 통합된 도입유전자로서 혼입되어 유전될 수 있다. 도입유전자는 또한 이것이 염색체외 플라스미드로서 유전되도록 작제될 수 있다[참조: Gassmann, et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA (1995) 92:1292].
dsRNA의 개개의 쇄는 2개의 별도의 발현 벡터상에서 프로모터에 의해 전사되어 표적 세포내로 공동-형질감염될 수 있다. 달리는, dsRNA의 각각의 개개 쇄는 프로모터에 의해 전사될 수 있으며 이들 둘다는 동일한 발현 플라스미드상에 위치한다. 하나의 양태에서, dsRNA는 링커 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 결합된 역전된 반복물(inverted repeat)로서 발현됨으로써 dsRNA는 스템(stem) 및 루프(loop) 구조를 갖는다.
재조합 dsRNA 발현 벡터는 일반적으로 DNA 플라스미드 또는 바이러스 벡터이다. dsRNA 발현 바이러스 벡터는 아데노-관련 바이러스[검토를 위한 참조: Muzyczka, et al., Curr . Topics Micro . Immunol . (1992) 158:97-129)]; 아데노바이러스[참조: 예를 들면, Berkner, et al., BioTechniques (1998) 6:616), Rosenfeld et al. (1991, Science 252:431-434), 및 Rosenfeld et al. (1992), Cell 68:143-155)]; 또는 알파바이러스 및 당해 분야에 공지된 기타의 것들을 기준으로하여 작제할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 레트로바이러스는 내피 세포를 포함하는 많은 상이한 세포 유형내로 각종 유전자를 시험관내 및/또는 생체내에서 도입시키는데 사용하여 왔다[참조: 예를 들면, Eglitis, et al., Science (1985) 230:1395-1398; Danos and Mulligan, Proc . NatI . Acad . Sci . USA (1998) 85:6460-6464; Wilson et al., 1988, Proc. NatI. Acad. Sci. USA 85:3014-3018; Armentano et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:61416145; Huber et al., 1991, Proc. NatI. Acad. Sci. USA 88:8039-8043; Ferry et al., 1991, Proc. NatI. Acad. Sci. USA 88:8377-8381; Chowdhury et al., 1991, Science 254:1802-1805; van Beusechem. et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7640-19; Kay et al., 1992, Human Gene Therapy 3:641-647; Dai et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10892-10895; Hwu et al., 1993, J. Immunol. 150:4104-4115; 미국 특허 제4,868,116호; 미국 특허 제4,980,286호; PCT 출원 제WO 89/07136호; PCT 출원 제WO 89/02468호; PCT 출원 제WO 89/05345호; 및 PCT 출원 제WO 92/07573호]. 세포의 게놈내로 삽입된 유전자를 형질유도하여 발현할 수 있는 재조합 레트로바이러스 벡터는 재조합 레트로바이러스 게놈을 PA317 및 Psi-CRIP와 같은 적합한 패키징 세포주내로 형질감염시켜 생산할 수 있다[참조: Comette et al., 1991, Human Gene Therapy 2:5-10; Cone et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6349]. 재조합 아데노바이러스 벡터를 사용하여 민감한 숙주(예: 래트, 햄스터, 개 및 침팬지)에서 광범위한 세포 및 조직을 감염시키는데 사용할 수 있고(참조: Hsu et al., 1992, J. Infectious Disease, 166:769), 또한 감염을 위해 유사분열적으로 활성인 세포가 요구되지 않는다는 장점을 지닌다.
발현될 dsRNA 분자(들)에 대한 암호화 서열을 허용할 수 있는 어떠한 바이러스 벡터, 예를 들면, 아데노바이러스(AV)로부터 기원한 벡터; 아데노-관련 바이러스(AAV); 레트로바이러스[예: 렌티바이러스(LV), 라브도바이러스, 쥐 백혈병 바이러스]; 헤르페스 바이러스 등으로부터 기원한 벡터를 사용할 수 있다. 바이러스 벡터의 향성(tropism)은 엔벨로프(envelope) 단백질, 또는 다른 바이러스로부터의 다른 표면 항원으로 슈도타이핑(pseudotyping)하거나, 경우에 따라 상이한 바이러스 캡시드 단백질을 치환함으로써 변형시킬 수 있다.
본 발명에서 특징화된 렌티바이러스 벡터는 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus: VSV), 래비스, 에볼라, 모콜라 등으로부터의 표면 단백질로 슈도타이핑할 수 있다. 본 발명에서 특징화된 AAV 벡터는 벡터를 가공하여 상이한 캡시드 단백질 혈청형을 발현하도록 함으로써 상이한 세포를 표적화하도록 제조할 수 있다. 예를 들어, 혈청형 2 게놈상에서 혈청형 2 캡시드를 발현하는 AAV 벡터는 AAV 2/2로 명명된다. AAV 2/2 벡터내 이러한 혈청형 2 캡시드 유전자는 혈청형 5 캡시드 유전자에 의해 치환되어 AAV 2/5 벡터를 생산할 수 있다. 상이한 캡시드 단백질 혈청형을 발현하는 AAV 벡터를 작제하기 위한 기술은, 이의 전체 기재내용이 본원에 참조로 인용된, 당해 분야의 기술[참조: 예를 들면, Rabinowitz J E et al. (2002), J Virol 76:791-801]내에 있다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 재조합 바이러스 벡터의 선택, dsRNA를 발현시키기 위한 핵산 서열의 벡터내로의 삽입 방법, 및 바이러스 벡터를 목적 세포내로 전달하는 방법은 당해 분야의 기술내에 있다[참조: 예를 들면, 이의 전체 기재내용이 본원에 참조로 인용된, Dornburg R (1995), Gene Therap. 2: 301-310; Eglitis M (1988), Biotechniques 6: 608-614; Miller A D (1990), Hum Gene Therap. 1: 5-14; Anderson W F (1998), Nature 392: 25-30; 및 Rubinson D et al., Nat. Genet. 33: 401-406].
바이러스 벡터는 AV 및 AAV로부터 기원할 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명에서 특징화된 dsRNA는, 예를 들면, U6 또는 H1 RNA 프로모터, 또는 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터를 갖는 재조합 AAV 벡터로부터의 2개의 별개의, 상보성 일본쇄 RNA 분자로서 발현된다.
본 발명에서 특징화된 dsRNA를 발현하기에 적합한 AV 벡터, 재조합 AV 벡터를 작제하는 방법, 및 당해 벡터를 표적 세포내로 전달하는 방법은 문헌[참조: Xia H et al. (2002), Nat . Biotech. 20: 1006-1010]에 기술되어 있다.
본 발명에서 특징화된 dsRNA를 발현하기에 적합한 AAV 벡터, 재조합 AV 벡터를 작제하는 방법, 및 당해 벡터를 표적 세포내로 전달하는 방법은, 이의 전체 기재내용이 본원에 참조로 인용된 문헌[참조: Samulski R et al. (1987), J. Virol. 61: 3096-3101; Fisher K J et al. (1996), J. Virol, 70: 520-532; Samulski R et al. (1989), J. Virol. 63: 3822-3826; 미국 특허 제5,252,479호; 미국 특허 제5,139,941호; 국제 특허원 제WO 94/13788호; 및 국제 특허원 제WO 93/24641호]에 기술되어 있다.
본 발명에서 특징화된 DNA 플라스미드 또는 바이러스 벡터내에서 dsRNA 발현을 구동시키는 프로모터는 진핵세포 RNA 폴리머라제 I(예: 리보솜 RNA 프로모터), RNA 폴리머라제 II(예: CMV 초기 프로모터 또는 액틴 프로모터 또는 U1 snRNA 프로모터) 또는 일반적으로 RNA 폴리머라제 III 프로모터(예: U6 snRNA 또는 7SK RNA 프로모터) 또는 원핵세포 프로모터, 예를 들면, T7 프로모터일 수 있으며, 단, 발현 플라스미드는 또한 T7 프로모터로부터 전사에 요구된 T7 RNA 폴리머라제를 암호화한다. 프로모터는 또한 췌장으로 도입유전자 발현을 지시할 수 있다[참조: 예를 들면, 췌장용 인슐린 조절 서열(Bucchini et al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:2511-2515)].
또한, 도입유전자의 발현은, 예를 들면, 유도성 조절 서열 및, 특정의 생리학적 조절인자, 예를 들면, 혈행 글루코즈 농도, 또는 호르몬(참조: Docherty et al., 1994, FASEB J. 8:20-24)에 대해 민감성인 조절 서열과 같은 발현 시스템을 사용함으로써 정확하게 조절할 수 있다. 세포 또는 포유동물에서 도입유전자 발현의 조절에 적합한 이러한 유도성 발현 시스템은 엑다이손에 의한, 에스트로겐, 프로게스테론, 테트라사이클린, 이량체화의 화학적 유도인자 및 이소프로필-베타-D1-티오갈락토피라노시드(EPTG)에 의한 조절을 포함한다. 당해 분야의 숙련가는 dsRNA 도입유전자의 의도된 사용을 기초로 하는 적절한 조절/프로모터 서열을 선택할 수 있을 것이다.
일반적으로, dsRNA 분자를 발현할 수 있는 재조합 벡터는 하기 기술한 바와 같이 전달되며, 표적 세포에서 지속된다. 달리는, dsRNA 분자의 일시적인 발현을 위해 제공되는 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 벡터는 경우에 따라 반복적으로 투여될 수 있다. 일단 발현되면, dsRNA는 표적 RNA에 결합하여 이의 기능 또는 발현을 조절한다. dsRNA 발현 벡터의 전달은 정맥내 또는 근육내 투여, 환자로부터 체외-이식된 표적 세포로의 투여에 이은 환자내로의 재도입에 의해, 또는 바람직한 표적 세포내로의 도입을 허용하는 어떠한 다른 수단에 의해서와 같이 전신계적일 수 있다.
dsRNA 발현 DNA 플라스미드는 양이온성 지질 담체(예: 올리고펙타민) 또는 비-양이온성 지질계 담체(예: Transit-TKOTM)와의 복합체로서 표적 세포내로 통상적으로 형질감염된다. 단일 TTR 유전자 또는 다중 TTR 유전자의 상이한 영역을 수주 이상의 기간에 걸쳐 표적화하는 dsRNA-매개된 녹다운(knockdown)을 위한 다중 지질 형질감염이 본 발명에 의해 또한 고려된다. 벡터의 숙주 세포내로의 성공적인 도입은 각종 공지된 방법을 사용하여 모니터링할 수 있다. 예를 들면, 일시적인 형질감염을 녹색 형광성 단백질(GFP)과 같은 형광성 마커와 같은 리포터로 시그널링할 수 있다. 생체외에서 세포의 안정한 형질감염은 하이그로마이신 B 내성과 같은 특정 환경 인자(예: 항생제 및 약물)에 대해 내성을 갖는 형질감염된 세포를 제공하는 마커를 사용하여 보증할 수 있다.
TTR 특이적인 dsRNA 분자는 또한 벡터내로 삽입하여 사람 환자용 유전자 치료요법 벡터로서 사용될 수 있다. 유전자 치료요법 벡터는 대상체에게, 예를 들면, 정맥내 주사, 국소 투여(참조: 미국 특허 제5,328,470호)에 의해 또는 정위 주사(참조: 예를 들면, Chen et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3054-3057)에 의해 전달될 수 있다. 유전자 치료요법 벡터의 약제학적 제제는 허용되는 희석제내 유전자 치료요법 벡터를 포함할 수 있거나, 유전자 전달 비히클이 봉매(embedding)된 서방출 매트릭스를 포함할 수 있다. 달리는, 완전한 유전자 전달 벡터가, 재조합 세포, 예를 들면, 레트로바이러스 벡터로부터 완전하게 생산될 수 있는 경우, 약제학적 제제는 유전자 전달 시스템을 생산하는 하나 이상의 세포를 포함할 수 있다.
III . dsRNA 를 함유하는 약제학적 조성물
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은, dsRNA, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다. dsRNA를 함유하는 약제학적 조성물은 TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정과 같은, TTR 유전자의 발현 또는 활성과 관련된 질병 또는 질환을 치료하는데 유용하다. 이러한 약제학적 조성물은 전달 방식을 기준으로 하여 제형화된다. 하나의 예는 비경구 전달을 통해, 예를 들면, 정맥내(IV) 전달에 의한 전신계적 투여용으로 제형화된 조성물이다. 다른 예는, 예를 들면, 연속 펌프 주입과 같은 뇌 속으로의 주입에 의한 뇌 실질(parenchyma)내로의 직접적인 전달을 위해 제형화된 조성물이다.
본원에서 특징화된 약제학적 조성물은 TTR 유전자의 발현을 억제하기에 충분한 용량으로 투여된다.
일반적으로, dsRNA의 적합한 투여량은 1일당 수용체의 체중 kg당 0.01 내지 200.0mg의 범위, 일반적으로 1일당 체중 kg당 1 내지 50 mg의 범위일 것이다. 예를 들어, dsRNA는 단일 투여량 당 0.0059 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.0295 mg/kg, 0.05　mg/kg, 0.0590 mg/kg, 0.163 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.5　mg/kg, 0.543 mg/kg, 0.5900 mg/kg, 0.6 mg/kg, 0.7 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.9 mg/kg, 1 mg/kg, 1.1 mg/kg, 1.2 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.4 mg/kg, 1.5 mg/kg, 1.628 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 5.0 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg, 30　mg/kg, 40 mg/kg, 또는 50 mg/kg으로 투여될 수 있다.
하나의 양태에서, 용량은 0.01 내지 0.2 mg/kg이다. 예를 들어, dsRNA는 0.01 mg/kg, 0.02 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.04 mg/kg, 0.05 mg/kg, 0.06 mg/kg, 0.07 mg/kg 0.08 mg/kg 0.09 mg/kg , 0.10 mg/kg, 0.11 mg/kg, 0.12 mg/kg, 0.13 mg/kg, 0.14 mg/kg, 0.15 mg/kg, 0.16 mg/kg, 0.17 mg/kg, 0.18 mg/kg, 0.19 mg/kg, 또는 0.20 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다.
하나의 양태에서, 용량은 0.005 mg/kg 내지 1.628 mg/kg이다. 예를 들어, dsRNA는 0.0059 mg/kg, 0.0295 mg/kg, 0.0590 mg/kg, 0.163 mg/kg, 0.543 mg/kg, 0.5900 mg/kg, 또는 1.628 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다.
하나의 양태에서, 용량은 0.2 mg/kg 내지 1.5 mg/kg이다. 예를 들면, dsRNA는 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.5　mg/kg, 0.6 mg/kg, 0.7 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.9 mg/kg, 1 mg/kg, 1.1 mg/kg, 1.2 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.4 mg/kg, 또는 1.5 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다.
약제학적 조성물은 매일 1회 투여할 수 있거나, dsRNA는 하루에 걸쳐 적절한 간격으로 2, 3회 이상의 분할 투여량으로 투여될 수 있거나, 심지어 제어 방출 제형을 통한 연속 주입 또는 전달을 사용하여 투여할 수 있다. 이 경우, 각각의 분할 투여량 속에 함유된 dsRNA는 총 1일 용량을 달성하기 위해 상응하게 더 적어야 한다. 용량 단위는 또한, 예를 들면, 수일 기간에 걸쳐 dsRNA의 지연 방출을 제공하는 편리한 지연 방출 제형을 사용하여 수일에 걸친 전달을 위해 합성될 수 있다. 지연 방출 제형은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 본 발명의 제제와 함께 사용될 수 있는 것과 같이 특정 부위에서 제제를 전달하기에 특히 유용하다. 당해 양태에서, 용량 단위는 상응하는 다수의 1일 투여량을 함유한다.
TTR 수준에 있어서 단일 투여량의 효과는 길게 지속되므로, 후속적인 투여량은 3, 4 또는 5일 이하의 간격, 또는 1, 2, 3 또는 4주 이하의 간격, 또는 5, 6, 7, 8, 9 또는 10주 이하의 간격으로 투여된다.
당해 분야의 숙련가들은, 질병 또는 질환의 중증도, 선행 치료, 대상체의 일반적인 건강 및/또는 연령, 및 존재하는 다른 질병을 포함하나 이에 한정되지 않는 특정 인자가 대상체를 효과적으로 치료하는데 요구되는 용량 및 시간에 영향을 미칠 수 있음을 인지할 것이다. 또한, 치료학적 유효량의 조성물을 사용한 대상체의 치료는 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다. 본 발명에 포함된 개개의 dsRNA에 대한 유효 용량 및 생체내 반감기의 추정은 통상의 방법을 사용하거나 본원의 특정 부분에서 기술된 바와 같이, 적절한 동물 모델을 사용한 생체내 시험을 기초로 하여 달성할 수 있다.
마우스 유전학에 있어서의 발전은 TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정과 같은 각종 사람 질병의 연구를 위한 다수의 마우스 모델을 생성하여 왔다. 이러한 모델은 dsRNA의 생체내 시험, 및 치료학적 유효 투여량을 측정하는데 사용된다. 적합한 마우스 모델은, 예를 들면, 사람 TTR을 발현하는 플라스미드를 함유하는 마우스이다. 또 다른 적합한 마우스 모델은 사람 TTR을 발현하는 도입유전자를 수반하는 유전자도입 마우스이다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터를 사람에서 사용하기 위한 용량 범위를 제형화하는데 사용할 수 있다. 본 발명에서 특징화된 조성물의 용량은 일반적으로, 독성이 거의 없거나 없는 ED50을 포함하는 순환하는 농도의 범위내에 있다. 용량은 사용된 용량형 및 이용한 투여 경로에 따라 당해 범위내에서 변할 수 있다. 본 발명에서 특징화된 방법에 사용된 임의의 화합물의 경우, 치료학적 유효 투여량은 세포 배양 검정으로부터 초기에 추정할 수 있다. 투여량은 동물 모델에서 제형화되어 화합물 또는 경우에 따라, 세포 배양물 속에서 측정한 바에 의하면 IC50(즉, 증상의 최대 억제의 1/2을 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 표적 서열의 폴리펩타이드 생성물의 순환하는 혈장 농도 범위(예를 들면, 폴리펩타이드의 감소된 농도를 달성하는 범위)를 달성하기 위해 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 이러한 정보는 사람에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 측정하기 위해 사용될 수 있다. 혈장에서의 수준은, 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피로 측정할 수 있다.
본 발명에서 특징화된 dsRNA는 표적 유전자 발현에 의해 매개된 병리학적 과정을 치료하는데 있어 효과적인 다른 공지된 제제와 함께 투여될 수 있다. 어떠한 상황에서도, 투여하는 주치의는 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 효능의 표준 척도를 사용하여 관찰한 결과를 토대로 하여 dsRNA 투여량 및 투여 시간을 조절할 수 있다.
투여
본 발명은 또한 본 발명에서 특징화된 dsRNA 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 제형을 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물은, 국소 또는 전신계적 치료가 바람직한지에 따라서 및 치료될 부위에 따라서 다수의 방법으로 투여될 수 있다. 투여는 국소, 폐, 예를 들면, 분무기에 의한 것을 포함하는 에어로졸제 또는 산제의 흡입 또는 통기; 기관내, 비강내, 피하 및 경피, 경구 또는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사 또는 주입; 또는 두개내, 예를 들면, 실질내, 척추강내 또는 심실내 투여를 포함한다.
dsRNA는 간(예를 들면, 간의 간세포)과 같은 특정 조직을 표적화하는 방식으로 전달될 수 있다.
본 발명은 뇌로 직접 주사함으로써 전달할 수 있는 약제학적 조성물을 포함한다. 이러한 주사는 뇌의 특정 영역(예: 흑색질, 피질, 해마, 선조체, 또는 창백핵)내로 정위 주사하여 달성하거나, dsRNA를 중추신경계의 다수 영역(예: 뇌의 다수 영역 및/또는 척수)내로 전달할 수 있다. dsRNA는 또한 뇌의 확산 영역내로 전달(예: 뇌의 피질내로의 확산 전달)할 수 있다.
하나의 양태에서, TTR을 표적화하는 dsRNA는 조직, 예를 들면, 뇌, 예를 들면, 뇌의 흑색질, 피질, 해마, 선조체, 뇌들보 또는 창백핵에 이식된 한쪽 말단을 갖는 캐뉼라 또는 기타 전달 장치의 수단에 의해 전달할 수 있다. 캐뉼라는 dsRNA 조성물의 저장기에 연결될 수 있다. 유동 또는 전달은 펌프, 예를 들면, 알제트 펌프(Alzet pump)[제조원: 두렉트(Durect), 캘리포니아 쿠퍼티노 소재]와 같은 삼투압 펌프 또는 미니펌프에 의해 매개될 수 있다. 하나의 양태에서, 펌프 및 저장기는 조직으로부터 떨어진 부위, 예를 들면, 복부에 이식되며, 전달은 펌프 또는 저장기로부터 방출 부위로 도관 연결에 의해 수행된다. 뇌내로 dsRNA 조성물의 주입은 수시간 또는 수일, 예를 들면, 1, 2, 3, 5, 또는 7일 이상 동안에 걸쳐 이루어질 수 있다. 뇌로의 전달을 위한 장치는, 예를 들면, 미국 특허 제6,093,180호 및 제5,814,014호에 기술되어 있다.
국소 투여용 약제학적 조성물 및 제형은 경피 패치제, 연고제, 로션제, 크림제, 겔제, 점적제, 좌제, 스프레이제, 액제 및 산제를 포함할 수 있다. 통상적인 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 유성 기재, 증점제 등이 필수적이거나 바람직할 수 있다. 도포된 콘돔, 장갑 등이 또한 유용할 수 있다. 적합한 국소 제형은, 본 발명에서 특징화된 dsRNA가 지질, 리포좀, 지방산, 지방산 에스테르, 스테로이드, 킬레이트제 및 표면활성제와 같은 국소 전달제와 혼합된 것들을 포함한다. 적합한 지질 및 리포좀은 중성(예: 디올레오일포스파티딜 DOPE 에탄올아민, 디미리스토일포스파티딜 콜린 DMPC, 디스테아로일포스파티딜 콜린), 음성(예: 디미리스토일포스파티딜 글리세롤 DMPG) 및 양이온성(예: 디올레오일테트라메틸아미노프로필 DOTAP 및 디올레오일포스파티딜 에탄올아민 DOTMA)을 포함한다. 본 발명에서 특징화된 dsRNA는 리포좀내에 봉입될 수 있거나 이에 대해, 특히 양이온성 리포좀에 대해 복합체를 형성할 수 있다. 달리는, dsRNA는 지질, 특히 양이온성 지질과 복합체화될 수 있다. 적합한 지방산 및 에스테르는 아라키돈산, 올레산, 에이코산산, 라우르산, 카프릴산, 카프르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 디카프레이트, 트리카프레이트, 모노올레인, 디라우린, 글리세릴 1-모노카프레이트, 1-도데실아자사이클로헵탄-2-온, 아실카르니틴, 아실콜린 또는 C1 -10 알킬 에스테르(예: 이소프로필미리스테이트 IPM), 모노글리세라이드, 디글리세라이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 국소 제형은 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제6,747,014호에 기술되어 있다.
리포좀 제형
약물의 제형화를 위해 연구 및 사용되어 왔던 미세유제 외에 많은 구조화된 표면 구조물이 존재한다. 이들은 단층, 마이셀(micelle), 이중층 및 소낭을 포함한다. 리포좀과 같은 소낭은, 이들이 약물 전달 관점으로부터 제공하는 이들의 특이성 및 작용 기간으로 인하여 크게 관심이 집중되고 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "리포좀"은 구형 이중층 또는 이중층내에 배열된 양친매성 지질로 구성된 소낭을 의미한다.
리포좀은 친지성 물질 및 수성 내부로부터 형성된 막을 갖는 단일라멜라 또는 다중라멜라 소낭이다. 수성 부위는 전달될 조성물을 함유한다. 양이온성 리포좀은 세포벽에 융합될 수 있는 장점을 지닌다. 비-양이온성 리포좀은, 세포벽과 효율적으로 융합할 수 없지만, 생체내에서 대식구에 의해 흡수된다.
온전한 포유동물 피부를 통과하기 위하여, 액체 소낭은, 각각 직경이 50nm 미만인 일련의 미세 공극을 적합한 경피 구배의 영향하에서 통과하여야 한다. 따라서, 고도로 변형가능하고 이러한 미세 공극을 통과할 수 있는 리포좀을 사용하는 것이 바람직하다.
리포좀의 추가의 장점은 천연 인지질로부터 수득된 리포좀이 생적합성이고 생분해성이며; 리포좀이 광범위한 물 및 지질 가용성 약물을 혼입시킬 수 있고; 리포좀이 이들의 내부 구획내 봉입된 약물을 대사 및 분해로부터 보호할 수 있다는 것이다[참조: Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245]. 리포좀 제형의 제조시 주요한 고려대상은 지질 표면 전하, 소낭 크기 및 리포좀의 수성 용적이다.
리포좀은 활성 성분을 작용 부위로 이전 및 전달하는데 유용하다. 리포좀 막은 생물학적 막과 구조적으로 유사하기 때문에, 리포좀이 조직에 적용되는 경우, 리포좀은 세포 막과 합쳐지기 시작하고 리포좀과 세포의 합쳐짐이 진행되면서, 리포좀 성분들은, 활성제가 작용할 수 있는 세포내로 비워지게 된다.
리포좀 제형은 많은 약물에 대한 전달 방식으로서 집중적인 연구 대상이 되어 왔다. 국소 투여를 위해, 리포좀은 다른 제형보다 몇가지 장점이 존재한다는 증거가 커지고 있다. 이러한 장점은 투여된 약물의 높은 전신계적 흡수와 관련된 감소된 부작용, 바람직한 표적에서 투여된 약물의 증가된 축적, 및 친수성 및 소수성 둘다인 광범위한 약물의 피부내로의 투여능을 포함한다.
몇가지 보고는 고분자량 DNA를 포함하는 제제를 피부내로 전달하기 위한 리포좀의 능력을 상세히 기술하여 왔다. 진통제, 항체, 호르몬 및 고-분자량 DNA를 포함하는 화합물은 피부에 투여되어 왔다. 대부분의 적용은 상부 표피의 표적화를 일으켰다.
리포좀은 2개의 광범위한 부류에 속한다. 양이온성 리포좀은 음으로 하전된 DNA 분자와 상호작용하여 안정한 복합체를 형성하는 양으로 하전된 리포좀이다. 양으로 하전된 DNA/리포좀 복합체는 음으로 하전된 세포 표면에 결합하여 엔도솜(endosome)내에서 내부화된다. 엔도솜내에서의 산성 pH로 인하여, 리포좀은 파괴되어 이들의 성분들을 세포 세포질내로 방출한다(참조: Wang et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1987, 147, 980-985).
pH-민감성이거나 음으로 하전된 리포좀은 이와 복합체를 형성하기 보다는 DNA를 포착(entrap)한다. DNA 및 지질 둘다는 유사하게 하전되어 있으므로, 복합체 형성보다는 반발이 발생한다. 그럼에도 불구하고, 일부 DNA는 이들 리포좀의 수성 내부에 포착된다. pH-민감성 리포좀을 사용하여 티미딘 키나제 유전자를 암호화하는 DNA를 배양물내 세포 단층으로 전달하여 왔다. 외인성 유전자의 발현은 표적 세포에서 검출되었다(참조: Zhou et al., Journal of Controlled Release, 1992, 19, 269-274).
하나의 주요 유형의 리포좀 조성물은 천연적으로 기원하는 포스파티딜콜린 외에 인지질을 포함한다. 예를 들어, 천연 리포좀 조성물은 디미리스토일 포스파티딜콜린(DMPC) 또는 디팔미토일 포스파티딜콜린(DPPC)으로부터 형성될 수 있다. 음이온성 리포좀 조성물은 일반적으로 디미리스토일 포스파티딜글리세롤로부터 형성되는 반면, 음이온성 융합생성 리포좀은 주로 디올레오일 포스파티딜에탄올아민(DOPE)으로부터 형성된다. 또 다른 유형의 리포좀 조성물은 대두 포스파티딜콜린(PC), 및 난황 PC와 같은 포스파티딜콜린(PC)로부터 형성된다. 또 다른 유형은 인지질 및/또는 포스파티딜콜린 및/또는 콜레스테롤의 혼합물로부터 형성된다.
몇가지 연구에서 피부에 대한 리포좀 약물 제형의 국소 전달을 평가하였다. 인터페론을 함유하는 리포좀의 기니아 피그 피부로의 적용은 피부 헤르페스 궤양의 감소를 일으킨 반면 다른 수단(예: 액제 또는 유제로서)을 통한 인터페론의 전달은 효과적이지 않았다(참조: Weiner et al., Journal of Drug Targeting, 1992, 2, 405-410). 또한, 추가의 연구에서 리포좀 제형의 일부로서 투여된 인터페론의 효능을 수성 시스템을 사용한 인터페론의 투여에 대해 시험하고, 리포좀 제형이 수성 투여보다 우수하다고 결론지었다(참조: du Plessis et al., Antiviral Research, 1992, 18, 259-265).
비-이온성 리포좀 시스템, 특히 비-이온성 표면활성제 및 콜레스테롤을 포함하는 시스템을 또한 시험하여 피부로의 약물의 전달시 이들의 유용성을 측정하였다. NovasomeTM I(글리세릴 디라우레이트/콜레스테롤/폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에테르) 및 NovasomeTM II(글리세릴 디스테아레이트/콜레스테롤/폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에테르)를 사용하여 사이클로스포린-A를 마우스 피부의 표피로 전달하였다. 결과는, 이러한 비-이온성 리포좀 시스템이 사이클로스포린-A를 피부의 상이한 층으로 침착시키는 것을 촉진하는데 효과적임을 나타내었다(참조: Hu et al. S.T.P.Pharma. Sci., 1994, 4, 6, 466).
리포좀은 또한 "입체적으로 안정한" 리포좀을 포함하며, 본원에 사용되는 당해 용어는, 리포좀내로 혼입되는 경우, 이러한 특정 지질을 결여한 리포좀과 비교하여 향상된 순환 생애를 일으키는 하나 이상의 특정 지질을 포함하는 리포좀을 말한다. 입체적으로 안정화된 리포좀의 예는, 리포좀(A)의 소낭-형성 지질 부위의 일부분이 모노시알로강글리오사이드 GM1과 같은 하나 이상의 당지질을 포함하거나, (B) 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 잔기와 같은 하나 이상의 친수성 중합체로 유도체화된 것들이다. 어떠한 이론에도 얽매이는 것을 원치 않으며, 당해 분야에서, 강글리오사이드, 스핑고마이엘린 또는 PEG-유도체화된 지질을 함유하는 적어도 입체적으로 안정화된 리포좀의 경우, 이들 입체적으로 안정화된 리포좀의 향상된 순환 반감기는 세망내피계(RES)의 세포내로 감소된 흡수로부터 기원하는 것으로 고려된다(참조; Allen et al., FEBS Letters, 1987, 223, 42; Wu et al., Cancer Research, 1993, 53, 3765).
하나 이상의 당지질을 포함하는 각종 리포좀이 당해 분야에 공지되어 있다. 문헌(참조: Papahadjopoulos et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1987, 507, 64)은 리포좀의 혈액 반감기를 개선시키는 모노시알로강그리오사이드 GM1, 갈락토세레브로사이드 설페이트 및 포스파티딜이노시톨의 능력을 보고하였다. 이들 발견은 가비즌(Gabizon) 등의 문헌(참조: Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1988, 85, 6949)에 의해 상세히 설명되었다. 둘다 알렌(Allen) 등의 소유인 미국 특허 제4,837,028호 및 제WO 88/04924호는 (1) 스핑고마이엘린 및 (2) 강글리오사이드 GM1 또는 갈락토세레브로사이드 설페이트 에스테르를 포함하는 리포좀을 기재하고 있다. 미국 특허 제5,543,152호(Webb et al.)는 스핑고마이엘린을 포함하는 리포좀을 기재하고 있다. 1,2-sn-디미리스토일포스파티딜콜린을 포함하는 리포좀은 제WO 97/13499호(Lim et al)에 기재되어 있다.
하나 이상의 친수성 중합체로 유도체화된 지질을 포함하는 많은 리포좀 및 이의 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 스나모토(Sunamoto) 등은 문헌(참조: Bull. Chem. Soc. Jpn., 1980, 53, 2778)에서 비이온성 세제, PEG 잔기를 함유하는 2C1215G을 포함하는 리포좀을 기술하였다. 일룸(Illum) 등은 문헌(참조: FEBS Lett., 1984, 167, 79)에서 중합체성 글리콜을 갖는 폴리스티렌 입자의 친수성 피복물이 현저히 향상된 혈액 반감기를 일으킴을 나타내었다. 폴리알킬렌 글리콜(예: PEG)의 카복실 그룹의 부착으로 변형된 합성 인지질은 시어스(Sears)(미국 특허 제4,426,330호 및 제4,534,899호)에 의해 기술되어 있다. 클리바노브(Klibanov) 등은 문헌(참조: FEBS Lett., 1990, 268, 235)에서 PEG 또는 PEG 스테아레이트로 유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PE)을 포함하는 리포좀이 혈액 순환 반감기에 있어 현저한 증가를 가짐을 입증하는 실험을 기술하였다. 블룸(Blume) 등은 문헌(참조: Biochimica et Biophysica Acta, 1990, 1029, 91)에서 이러한 관찰을 다른 PEG-유도체화된 인지질, 예를 들면, 디스테아로일포스파티딜에탄올아민(DSPE) 및 PEG의 조합물로부터 형성된 DSPE-PEG로 확장시켰다. 이들의 외부 표면에 공유결합된 PEG 잔기를 갖는 리포좀은 피셔(Fisher)에게 허여된 유럽 특허 제EP 0 445 131 B1호 및 제WO 90/04384호에 기술되어 있다. PEG로 유도체화된 PE 1 내지 20몰%를 함유하는 리포좀 조성물 및 이의 사용 방법은 우들(Woodle) 등(참조: 미국 특허 제5,013,556호 및 제5,356,633호) 및 마틴(Martin) 등(참조: 미국 특허 제5,213,804호 및 유럽 특허 제EP 0 496 813 B1호)에 의해 기술되어 있다. 다수의 다른 지질-중합체 접합체를 포함하는 리포좀은 제WO 91/05545호 및 미국 특허 제5,225,212호(둘다 마틴에게 허여됨) 및 제WO 94/20073호[잘립스키(Zalipsky) 등]에 기재되어 있다. PEG-변형된 세라미드 지질을 포함하는 리포좀은 제WO 96/10391호[최(Choi) 등]에 기술되어 있다. 미국 특허 제5,540,935호[미야자키(Miyazaki) 등] 및 미국 특허 제 5,556,948호[다가와(Tagawa) 등]은 이들의 표면에 작용성 잔기로 추가로 유도체화될 수 있는 PEG-함유 리포좀을 기술하고 있다.
핵산을 포함하는 다수의 리포좀이 당해 분야에 공지되어 있다. 제WO 96/40062호[티에리(Thierry) 등]는 리포좀내에서 고분자량 핵산을 캡슐화하는 방법을 기재하고 있다. 다가와(Tagawa) 등에게 허여된 미국 특허 제5,264,221호는 단백질-결합된 리포좀을 기재하고 있으며, 이러한 리포좀의 성분이 dsRNA를 포함할 수 있음을 주장하고 있다. 미국 특허 제 5,665,710호[라만(Rahman) 등]는 리포좀 속에 올리고데옥시뉴클레오타이드를 캡슐화하는 특정 방법을 기술하고 있다. 제WO 97/04787호[로브(Love) 등]는 raf 유전자에 표적화된 dsRNA를 포함하는 리포좀을 기재하고 있다.
트랜스퍼솜(transfersome)은 또 다른 유형의 리포좀이며, 약물 전달 비히클용의 매력적인 후보물인 고도로 변형가능한 지질 응집체이다. 트랜스퍼솜은 고도로 변형가능해서 이들이 액적보다 더 작은 공극을 용이하게 침투할 수 있는 지질 액적으로 기술될 수 있다. 트랜스퍼솜은, 이들이 사용되는 환경에 적응할 수 있는데, 예를 들어, 이들은 자가-최적화(피부내 공극 형태에 적응), 자가-보수되며, 흔히 단편화되지 않고 이들의 표적에 흔히 도달하며, 종종 자가-로딩(self-loading)된다. 트랜스퍼솜을 제조하기 위해서는, 표면 가장자리-활성인자, 일반적으로 표면활성제를 표준 리포좀 조성물에 가하는 것이 가능하다. 트랜스퍼솜은 혈청 알부민을 피부에 전달하기 위해 사용되어 왔다. 혈청 알부민의 트랜스퍼솜-매개된 전달은 혈청 알부민을 함유하는 용액의 피하 주사에 효과적인 것으로 밝혀졌다.
표면활성제는 유제(미세유제 포함) 및 리포좀과 같은 제형에서 광범위한 적용이 발견된다. 천연 및 합성 둘다에서, 많은 상이한 유형의 표면활성제의 특성을 분류하고 서열을 매기는 가장 일반적인 방법은 친수성/소수성 균형(HLB)을 사용하는 것이다. 친수성 그룹(또한 "헤드"로 공지됨)의 특성은 제형에 사용된 상이한 표면활성제를 범주화하기 위한 가장 유용한 수단을 제공한다(참조: Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).
표면활성제 분자가 이온화되지 않는 경우, 이는 비이온성 표면활성제로 분류된다. 비이온성 표면활성제는 약제 및 화장품에서 광범위한 적용이 발견되어 있으며 광범위한 pH 값에 걸쳐 유용하다. 일반적으로 이들의 HLB 값은 이들의 구조에 따라 2 내지 약 18의 범위이다. 비이온성 표면활성제는 에틸렌 글리콜 에스테르, 프로필렌 글리콜 에스테르, 글리세릴 에스테르, 폴리글리세릴 에스테르, 소르비탄 에스테르, 슈크로즈 에스테르, 및 에톡실화된 에스테르와 같은 비이온성 에스테르를 포함한다. 지방 알코올 에톡실레이트, 프로폭실화된 알코올 및 에톡실화된/프로폭실화된 블록 중합체와 같은 비이온성 알칸올아미드 및 에테르 또한 당해 부류에 포함된다. 폴리옥시에틸렌 표면활성제는 비이온성 표면활성제 부류의 가장 인기있는 구성원이다.
표면활성제 분자가 물 속에 용해되거나 분산되는 경우 음성 전하를 수반할 때, 당해 표면활성제는 음이온성으로 분류된다. 음이온성 표면활성제는 비누, 아실 락틸레이트, 아미노산의 아실 아미드, 알킬 설페이트 및 에톡실화된 알킬 설페이트와 같은 황산의 에스테르, 알킬 벤젠 설포네이트, 아실 이세티오네이트, 아실 타우레이트 및 설포석시네이트와 같은 설포네이트, 및 포스페이트를 포함한다. 음이온성 표면활성제 부류의 가장 중요한 구성원은 알킬 설페이트 및 비누이다.
표면활성제 분자가 물 속에 용해되거나 분산되는 경우 양성 전하를 수반할 때, 당해 표면활성제는 양이온성으로 분류된다. 양이온성 표면활성제는 4급 암모늄 염 및 에톡실화된 아민을 포함한다. 4급 암모윰 염은 당해 부류의 가장 흔히 사용된 구성원이다.
표면활성제 분자가 양성 또는 음성 전하를 수반하는 능력을 갖는 경우, 당해 표면활성제는 양쪽성으로 분류된다. 양쪽성 표면활성제는 아크릴산 유도체, 치환된 알킬아미드, N-알킬베타인 및 포스파티드를 포함한다.
약물 제품, 제형 및 유제에서 표면활성제의 용도는 검토되어 있다(참조: Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).
핵산 지질 입자
하나의 양태에서, 본 발명에서 특징화된 TTR dsRNA는 지질 제형에서 완전히 캡슐화되어, 예를 들면, SPLP, pSPLP, SNALP, 또는 다른 핵산-지질 입자를 형성한다. 본원에 사용되는 용어 "SNALP"는 SPLP를 포함하는, 안정한 핵산-지질 입자를 말한다. 본원에 사용되는 용어 "SPLP"는 지질 소낭내에 캡슐화된 플라스미드 DNA를 포함하는 핵산-지질 입자를 말한다. SNALP 및 SPLP는 통상적으로 양이온성 지질, 비-양이온성 지질, 및 입자의 응집을 방지하는 지질(예: PEG-지질 접합체)를 함유한다. SNALP 및 SPLP는 정맥내(i.v.) 주사에 이어 연장된 순환 생애를 나타내며 먼 부위(예: 투여 부위로부터 물리적으로 떨어진 부위)에 축적되므로, 전신계적 투여에 매우 유용하다. SPLP는 PCT 공보 제WO 00/03683호에 제시된 것으로서 캡슐화된 축합제-핵산 복합체를 포함하는 "pSPLP"를 포함한다. 본 발명의 입자들은 통상적으로, 평균 직경이 약 50　nm 내지 약 150 nm, 보다 통상적으로 약 60 nm 내지 약 130 nm, 보다 통상적으로 약 70　nm 내지 약 110 nm, 가장 통상적으로 약 70 nm 내지 약 90 nm이고, 실질적으로 무독성이다. 또한, 본 발명의 핵산-지질 입자내에 존재하는 경우 핵산은 뉴클레아제를 사용한 분해에 대해 수용액 속에서 내성이다. 핵산-지질 입자 및 이들의 제조방법은 미국 특허 제5,976,567호; 제5,981,501호; 제6,534,484호; 제6,586,410호; 제6,815,432호; 및 PCT 공보 제WO 96/40964호에 기재되어 있다.
하나의 양태에서, 지질 대 약물 비(질량/질량 비)(예: 지질 대 dsRNA 비)는 약 1:1 내지 약 50:1, 약 1:1 내지 약 25:1, 약 3:1 내지 약 15:1, 약　4:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 9:1, 또는 약 6:1 내지 약 9:1의 범위일 것이다.
양이온성 지질은, 예를 들면, N,N-디올레일-N,N-디메틸암모늄 클로라이드(DODAC), N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄 브로마이드(DDAB), N-(I-(2,3-디올레오일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTAP), N-(I-(2,3- 디올레일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTMA), N,N-디메틸-2,3-디올레일옥시)프로필아민(DODMA), 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판 (DLinDMA), l,2-디리놀레닐옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLenDMA), 1,2-디리놀레일카바모일옥시-3-디메틸아미노프로판(DLin-C-DAP), 1,2-디리놀레일옥시-3-(디메틸아미노)아세톡시프로판(DLin-DAC), 1,2-디리놀레일옥시-3-모르폴리노프로판 (DLin-MA), 1,2-디리놀레오일-3-디메틸아미노프로판(DLinDAP), 1,2-디리놀레일티오-3-디메틸아미노프로판(DLin-S-DMA), 1-리놀레오일-2-리놀레일옥시-3-디메틸아미노프로판(DLin-2-DMAP), 1,2-디리놀레일옥시-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염(DLin-TMA.Cl), 1,2-디리놀레오일-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염(DLin-TAP.Cl), 1,2-디리놀레일옥시-3-(N-메틸피페라지노)프로판 (DLin-MPZ), 또는 3-(N,N-디리놀레일아미노)-1,2-프로판디올(DLinAP), 3-(N,N-디올레일아미노)-1,2-프로판디올(DOAP), 1,2-디리놀레일옥소-3-(2-N,N-디메틸아미노)에톡시프로판(DLin-EG-DMA), 1,2-디리놀레닐옥시-N,N-디메틸아미노프로판 (DLinDMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA) 또는 이의 유사체, (3aR,5s,6aS)-N,N-디메틸-2,2-디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐)테트라하이드로-3aH-사이클로펜타[d][1,3]디옥솔-5-아민(ALN100), (6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(디메틸아미노)부타노에이트(MC3), 1,1'-(2-(4-(2-((2-(비스(2-하이드록시도데실)아미노)에틸)(2-하이드록시도데실)아미노)에틸)피페라진-1-일)에틸아잔디일)디도데칸-2-올(Tech G1), 또는 이의 혼합물일 수 있다. 양이온성 지질은 입자내에 존재하는 총 지질의 약 20 몰% 내지 약 50 몰% 또는 약 40 몰%를 구성할 수 있다.
또 다른 양태에서, 화합물 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란을 사용하여 지질-siRNA 나노입자를 제조할 수 있다. 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란의 합성은 본원이 참조로 인용된, 2008년 10월 23일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/107,998호에 기술되어 있다.
하나의 양태에서, 지질-siRNA 입자는, 입자 크기가 63.0 ± 20nm이고 siRNA/지질 비가 0.027인 40%의 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란: 10%의 DSPC: 40%의 콜레스테롤: 10%의 PEG-C-DOMG(몰%)를 포함한다.
비-양이온성 지질은 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일올레오일포스파티딜에탄올아민(POPE), 디올레오일- 포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-l-카복실레이트(DOPE-mal), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민(DMPE), 디스테아로일-포스파티딜-에탄올아민(DSPE), 16-O-모노메틸 PE, 16-O-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜에탄올아민(SOPE), 콜레스테롤, 또는 이의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는 음이온성 지질 또는 천연 지질일 수 있다. 비-양이온성 지질은, 콜레스테롤이 포함되는 경우, 입자내에 존재하는 총 지질 중의 약 5 몰% 내지 약 90 몰%, 약 10 몰%, 또는 약 58 몰%일 수 있다.
입자의 응집을 억제하는 접합된 지질은, 예를 들면, 폴리에틸렌글리콜(PEG)-디아실글리세롤(DAG), PEG-디알킬옥시프로필(DAA), PEG-인지질, PEG-세라미드(Cer), 또는 이의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 PEG-지질일 수 있다. PEG-DAA 접합체는, 예를 들면, PEG-디라우릴옥시프로필(Ci2), PEG-디미리스틸옥시프로필(Ci4), PEG-디팔미토일옥시프로필(Ci6), 또는 PEG-디스테아릴옥시프로필(Ci8)일 수 있다. 입자의 응집을 방지하는 접합된 지질은 입자내에 존재하는 총 지질의 0 몰% 내지 약 20 몰% 또는 약 2 몰%일 수 있다.
일부 양태에서, 핵산-지질 입자는 또한 콜레스테롤을, 예를 들면, 입자내 존재하는 총 지질의 약 10 몰% 내지 약 60 몰% 또는 약 48 몰%를 추가로 포함한다.
LNP01
하나의 양태에서, 리피도이드 ND98·HCl(MW 1487)(화학식 1), 콜레스테롤[제조원: 시그마-알드리히(Sigma-Aldrich)], 및 PEG-세라미드 C16[제조원: 아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids)]를 사용하여 지질-siRNA 나노입자(즉, LNP01 입자)를 제조할 수 있다. 에탄올 중의 각각의 스톡 용액은 다음과 같이 제조할 수 있다: ND98, 133 mg/ml; 콜레스테롤, 25 mg/ml, PEG-세라미드 C16, 100 mg/ml. 이후에, ND98, 콜레스테롤, 및 PEG-세라미드 C16 스톡 용액을, 예를 들면, 42:48:10의 몰 비로 합할 수 있다. 합해진 지질 용액은 수성 siRNA(예를 들면, 나트륨 아세테이트 속에서, pH 5)와 합하여 최종 에탄올 농도가 약 35 내지 45%이 되도록 하고 최종 나트륨 아세테이트 농도가 약 100 내지 300 mM이 되도록 한다. 지질-siRNA 나노입자는 통상적으로 혼합시 자발적으로 형성된다. 바람직한 입자 크기 분포에 따라서, 수득되는 나노입자 혼합물을 폴리카보네이트 막(예를 들면, 100 nm 컷-오프)을 통해 예를 들면, 리펙스 압출기(Lipex Extruder)[제조원: 노던 리피즈, 인코포레이티드(Northern Lipids, Inc)]와 같은 열배럴(thermobarrel) 압출기를 사용하여 압출시킬 수 있다. 일부 경우에, 압출 단계는 생락할 수 있다. 에탄올 제거 및 동시 완충액 교환은 예를 들면, 투석 또는 접선 유동 여과에 의해 달성할 수 있다. 완충액은 예를 들면, 인산염 완충된 염수(PBS)를 사용하여 약 pH 7, 예를 들면, 약 pH 6.9, 약 pH　7.0, 약 pH 7.1, 약 pH 7.2, 약 pH 7.3, 또는 약 pH 7.4에서 교환할 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112019100859120-pat00002
LNP01 제형은 예를 들면, 본원에 참조로 인용된 국제 특허 공보 제WO　2008/042973호에 기술되어 있다.
추가의 예시적인 지질-siRNA 제형은 다음과 같다:
Figure 112019100859120-pat00003
LNP09 제형 및 XTC 함유 제형은 예를 들면, 본원에 참조로 인용된, 2009년 9월 3일자로 출원된 미국 임시특허원 제61/239,686호에 기술되어 있다. LNP11 제형 및 MC3 함유 제형은 예를 들면, 본원에 참조로 인용된, 2009년 9월 22일로 출원된 미국 임시특허원 제61/244,834호에 기술되어 있다.
표준 또는 압출이 없는 방법에 의해 제조된 제형은 유사한 방식으로 특징화할 수 있다. 예를 들어, 제형은 통상적으로 가시적 관측으로 특징화된다. 이들은 응집물 또는 침강물이 없는 백색의 반투명 용액이어야 한다. 지질-나노입자의 입자 크기 및 입자 크기 분포는 예를 들면, 맬버른 제타사이저 나노(Malvern Zetasizer Nano) ZS[제조원: 맬버른(Malvern), 미국 소재]을 사용하여 광 산란에 의해 측정할 수 있다. 입자는, 크기가 약 20 내지 300 nm, 예를 들면, 40 내지 100 nm이어야 한다. 입자 크기 분포는 단봉형(unimodal)이어야 한다. 제형 중 총 siRNA 농도 및 포착된 분획은 염료 배제 검정을 사용하여 평가한다. 제형화된 siRNA의 시료는 리보그린(Ribogreen)[제조원: 몰레큘러 프로브스(Molecular Probes)]과 같은 RNA-결합 염료와 함께 제형 파괴 표면활성제, 예를 들면, 0.5% 트리톤-X100의 존재 또는 부재하에서 항온처리할 수 있다. 제형 중 총 siRNA는 표준 곡선에 대해, 표면활성제를 함유하는 시료로부터의 시그널로 측정할 수 있다. 포착된 분획은 총 siRNA 함량으로부터 "유리된" siRNA 함량(표면활성제의 부재하에서 시그널에 의해 측정됨)을 감하여 측정한다. 포착된 siRNA의 비율은 통상적으로 >85%이다. SNALP 제형의 경우, 입자 크기는 적어도 30 nm, 적어도 40 nm, 적어도 50 nm, 적어도 60 nm, 적어도 70 nm, 적어도 80 nm, 적어도 90 nm, 적어도 100 nm, 적어도 110 nm, 및 적어도 120 nm이다. 적합한 범위는 통상적으로 약 적어도 50 nm 내지 약 적어도 110 nm, 약 적어도 60 nm 내지 약 적어도 100 nm, 또는 약 적어도 80　nm 내지 약 적어도 90 nm이다.
경구 투여용 조성물 및 제형은 수 또는 비-수성 매질, 캅셀, 겔 캅셀, 사쉐(sachet), 정제 또는 미니정제 중의 분말 또는 과립, 미립자, 나노입자, 현탁액 또는 용액을 포함한다. 증점제, 풍미제, 희석제, 유화제, 분산 보조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다. 일부 양태에서, 경구 제형은, 본 발명에서 특징화된 dsRNA가 하나 이상의 침투 증진제 표면활성제 및 킬레이트제와 함께 투여되는 것들이다. 적합한 표면활성제는 지방산 및/또는 이의 에스테르 또는 염, 담즙산 및/또는 이의 염을 포함한다. 적합한 담즙산/염은 케노데옥시콜산(CDCA) 및 우르소데옥시케노데옥시콜산 (UDCA), 콜산, 데하이드로콜산, 데옥시콜산, 글루콜산, 글리콜산, 글리코데옥시콜산, 타우로콜산, 타우로데옥시콜산, 나트륨 타우로-24,25-디하이드로-푸시데이트 및 나트륨 글리코디하이드로푸시데이트를 포함한다. 적합한 지방산은 아라키돈산, 운데칸산, 올레산, 라우르산, 카프릴산, 카프르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 디카프레이트, 트리카프레이트, 모노올레인, 딜라우린, 글리세릴 1-모노카프레이트, 1-도데실아자사이클로헵탄-2-온, 아실카르니틴, 아실콜린 또는 모노클리세라이드, 디글리세라이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염(예를 들면, 나트륨)을 포함한다. 일부 양태에서, 침투 증진제의 배합물, 예를 들면, 담즙산/염과 배합된 지방산/염이 사용된다. 하나의 예시적인 배합물은 올레산, 카프르산 및 UDCA의 나트륨 염이다. 추가의 침투 증진제는 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-20-세틸 에테르를 포함한다. 본 발명에서 특징화된 dsRNA는 분무 건조된 입자를 포함하는 과립 형태로 경구 전달되거나 착화되어 마이크로 또는 나노입자를 형성할 수 있다. dsRNA 복합화제는 폴리-아미노산; 폴리아민; 폴리아크릴레이트; 폴리알킬아크릴레이트, 폴리옥세탄, 폴리알킬시아노아크릴레이트; 양이온화된 젤라틴, 알부민, 전분, 아크릴레이트, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 전분; 폴리알킬시아노아크릴레이트; DEAE-유도체화된 폴리아민, 폴룰란, 셀룰로즈 및 전분을 포함한다. 적합한 착화제는 키토산, N-트리메틸키토산, 폴리-L-라이신, 폴리히스티딘, 폴리오르니틴, 폴리스페르민, 프로타민, 폴리비닐피리딘, 폴리티오디에틸아미노메틸에틸렌 P(TDAE), 폴리아미노스티렌 (예를 들면, p-아미노), 폴리(메틸시아노아크릴레이트), 폴리(에틸시아노아크릴레이트), 폴리(부틸시아노아크릴레이트), 폴리(이소부틸시아노아크릴레이트), 폴리(이소헥실시아노아크릴레이트), DEAE-메타크릴레이트, DEAE-헥실아크릴레이트, DEAE-아크릴아미드, DEAE-알부민 및 DEAE-덱스트란, 폴리메틸아크릴레이트, 폴리헥실아크릴레이트, 폴리(D,L-락트산), 폴리(DL-락트-코-글리콜산(PLGA), 알기네이트, 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 포함한다. dsRNA용 경구 제형 및 이들의 제제는, 각각이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제6,887,906호, 미국 공보 제20030027780호, 및 미국 특허 제6,747,014호에 기술되어 있다.
비경구, 실질내(뇌내), 경막내, 심실내 또는 간내 투여용 조성물 및 제형은 완충제, 희석제 및 침투 증진제, 담체 화합물 및 기타 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하나, 이에 한정되지 않는 다른 적합한 첨가제를 함유할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 액제, 유제, 및 리포좀-함유 제형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이들 조성물은 수행된 액체, 자가-유화 고체 및 자가-유화 반고체를 포함하나, 이에 한정되지 않는 각종 성분들로부터 생성될 수 있다. 간암과 같은 간 질환을 치료하는 경우 간을 표적화하는 제형이 특히 바람직하다.
단위 용량형으로 편리하게 제공할 수 있는, 본 발명의 약제학적 제형은 제약 산업에 잘 공지된 통상의 기술에 따라 제조할 수 있다. 이러한 기술은 활성 성분을 약제학적 담체(들) 또는 부형제(들)과 연합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 이들 둘다와 균일하게 및 긴밀하게 연합시킨 다음, 필요에 따라, 생성물로 성형하여 제조한다.
본 발명의 조성물은 정제, 캅셀제, 겔 캅셀제, 액체 시럽제, 연질 겔제, 좌제 및 관장제를 포함하나, 이에 한정되지 않는 어떠한 많은 가능한 용량형으로 제형화될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 수성, 비-수성 또는 혼합된 매질 속에서 현탁액으로 제형화될 수 있다. 수성 현탁액은 또한 예를 들면, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 포함하는 좌제의 점도를 증가시키는 물질을 추가로 함유할 수 있다. 현탁제는 또한 안정화제를 함유할 수 있다.
유제
본 발명의 조성물은 유제로 제조하여 제형화할 수 있다. 유제는 통상적으로 다른 액체 속에 일반적으로 직경이 0.1μm를 초과하는 액적의 형태로 분산된 하나의 액체의 이종 시스템이다[참조: Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301]. 유제는 종종 긴밀하게 혼합되고 서로 분산된 2개의 혼합되지 않는 액체 상을 포함하는 이상 시스템(biphasic system)이다. 일반적으로, 유제는 유중수(w/o) 또는 수중유(o/w) 다양성일 수 있다. 수성 상을 다량의 오일 상내로 극미한 액적으로 미분하거나 분산시키는 경우, 수득되는 조성물은 유중수(w/o) 유제로 불리운다. 달리는, 유성 상을 다량의 수성 상내로 극미한 액적으로 미분하거나 분산시키는 경우, 수득되는 조성물을 수중유(o/w)라고 칭한다. 유제는 분산된 상 외에 추가의 성분, 및 수성 상, 유성 상 또는 별개의 상으로서 자체 속에 용액으로 존재할 수 있는 활성 약물을 함유할 수 있다. 유화제, 안정화제, 염료 및 항-산화제와 같은 약제학적 부형제는 또한 필요에 따라 유제로 존재할 수 있다. 약제학적 유제는 또한 예를 들면, 유중수중유(oil-in-water-in-oil: o/w/o) 및 수중유중수(water-in-oil-in-water: w/o/w) 유제의 경우에서와 같이 2개 이상의 상으로 이루어진 다중 유제일 수 있다. 이러한 복합체 제형은 종종 단순한 2원 유제가 제공하지 않는 특정의 장점을 제공한다. o/w 유제의 개개 오일 액적이 작은 수 액적을 포함하는 다중 유제는 w/o/w 유제를 구성한다. 유사하게, 오일성 연속 상 속에 안정화된 수의 소구체에 포함된 유성 액적의 시스템은 o/w/o 유제를 제공한다.
유제는 거의 없거나 없는 열역학적 안정성으로 특징화된다. 종종, 유제의 분산된 상 또는 불연속 상은 외부 또는 연속 상으로 분산되며 유화제의 수단 또는 제형의 점도를 통해 당해 형태를 유지한다. 유제의 상들 중 어느 것은 유제-형 연고 기재 및 크림제의 경우에서와 같이, 반고체 또는 고체일 수 있다. 유제를 안정화하는 다른 수단은 유제의 상내로 혼입될 수 있는 유화제의 사용을 포함한다. 유화제는 4개의 범주로 광범위하게 분류될 수 있다: 합성 표면활성제, 천연적으로 존재하는 유화제, 흡수 기재 및 미세분산된 고체[참조: Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199].
표면 활성제로 또한 공지된 합성 표면활성제는 유제의 제형에서 광범위한 적용기능성이 있는 것으로 밝혀졌으며 문헌[참조: Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199]에 고찰되어 있다. 표면활성제는 통상적으로 양쪽성이며 친수성 및 소수성 부위를 포함한다. 표면활성제의 친수성 특성 대 소수성 특성의 비는 친수성/소수성 균형(HLB)으로 명명되며 제형의 제조시 표면활성제를 분류하고 선택하는 가치있는 도구이다. 표면활성제는 친수성 그룹의 특성을 기준으로 상이한 그룹으로 분류될 수 있다: 비이온성, 음이온성, 양이온성 및 양쪽성[참조: Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285].
유제 제형에서 사용된 천연적으로 존재하는 유화제는 라놀린, 밀랍, 포스파티드, 레시틴 및 아카시아를 포함한다. 흡수 기재는 친수성 특성을 보유함으로써 이들은 물을 흡수하여 무수 라놀린 및 친수성 바셀린과 같은 이들의 반고체 특성을 여전히 유지하는 w/o 유제를 형성할 수 있다. 미분된 고체는 또한 특히 표면활성제와 함께 및 점성 제제 속에서 우수한 유화제로 사용되어 왔다. 이들은 중금속 수산화물, 벤토나이트, 점토, 헥토라이트, 카올린, 몬트모릴로나이트, 콜로이드성 알루미늄 실리케이트 및 콜로이드성 마그네슘 알루미늄 실리케이트와 같은 비팽윤 점토, 안료 및, 탄소 또는 글리세릴 트리스테아레이트와 같은 비극성 고체를 포함한다.
매우 다양한 비-유화 물질이 또한 유화 제형에 포함되며 유제의 특성에 기여한다. 이들은 지방, 오일, 왁스, 지방산, 지방 알코올, 지방 에스테르, 보습제, 친수성 콜로이드, 방부제 및 항산화제를 포함한다[참조: Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199].
친수성 콜로이드 또는 하이드로콜로이드는 천연적으로 존재하는 검 및 폴리사카라이드(예를 들면, 아카시아, 한천, 알긴산, 카라기난, 구아검, 카라야 검 및 트라가칸트), 셀룰로즈 유도체(예를 들면, 카복시메틸셀룰로즈 및 카복시프로필셀룰로즈), 및 합성 중합체(예를 들면, 카보머, 셀룰로즈 에테르 및 카복시비닐 중합체)를 포함한다. 이들은 수중에서 분산 또는 팽윤되어 분산된 상 액적 주변에 강력한 계면 필름을 형성하여 외부 상의 점도를 증가시킴으로써 유제를 안정화시키는 콜로이드성 용액을 형성한다.
유제는 종종 미생물의 성장을 용이하게 지지할 수 있는 탄수화물, 단백질, 스테롤 및 포스파티드와 같은 다수의 성분들을 함유할 수 있으므로, 이들 제형에는 흔히 방부제가 혼입된다. 유제 제형 속에 포함된 일반적으로 사용된 방부제는 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 4급 암모늄 염, 벤즈알코늄 클로라이드, p-하이드록시벤조산의 에스테르 및 붕산을 포함한다. 항산화제는 또한 유제 제형에 일반적으로 가해져서 제형의 변질을 방지한다. 사용된 항산화제는 토코페롤, 알킬 갈레이트, 부틸화된 하이드록시아니솔, 부틸화된 하이드록시톨루엔과 같은 유리 라디칼 스캐빈저, 또는 아스코르브산 및 나트륨 메타비설파이트와 같은 환원제, 및 시트르산, 타르타르산 및 레시틴과 같은 항산화제 상승제일 수 있다.
경피, 경구 및 비경구 경로를 통한 유제 제형의 적용 및 이들의 제조 방법은 문헌[참조: Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199]에 고찰되어 있다. 경구 전달용 유제 제형은 제형의 용이성, 및 또한 흡수 및 생이용성 관점으로부터의 효능으로 인하여 매우 광범위하게 사용되어 왔다[참조: Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199]. 광-오일 기재 완화제, 지용성 비타민 및 고 지방 영양물 제제는 o/w 유제로서 일반적으로 경구 투여되고 있는 물질내에 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, dsRNA 및 핵산의 조성물은 미세유제로 제형화된다. 미세유제는 단일의 임의로 등방성 및 열역학적으로 안정한 액체 용액인, 물, 오일 및 양친매성 물질의 시스템으로 정의될 수 있다[참조: Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245]. 통상적으로, 미세유제는 수성 표면활성제 용액 속에 오일을 우선 분산시킨 후 충분한 양의 제4 성분, 일반적으로 중간쇄-길이의 알코올을 가하여 투명한 시스템을 형성시킨다. 따라서, 미세유제는 또한 표면-활성 분자의 계면 필름에 의해 안정화된 2개의 비혼화성 액체의 열역학적으로 안정한, 등방성적으로 투명한 분산액으로 기술되어 왔다(참조: Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215]. 미세유제는 일반적으로 오일, 물, 표면활성제, 공-표면활성제 및 전해질을 포함하는 3 내지 5개의 성분의 배합을 통해 제조된다. 미세유제가 유중수(w/o) 또는 수중유(o/w) 유형인지의 여부는 사용된 오일 및 표면활성제 및, 표면활성제 분자의 극성 헤드 및 탄화수소 테일의 기하학적 패킹(packing)의 특성에 따른다(참조: Schott, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).
상 다이아그램을 이용하는 현상론적 시도가 집중적으로 연구되어 왔으며 당해 분야의 숙련가에게 미세유제를 제형화하는 방법의 총괄적인 지식을 제공하여 왔다[참조: Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335]. 통상의 유제와 비교하여, 미세유제는 자발적으로 형성된 열역학적으로 안정한 액적의 제형에서 수불용성 약물을 가용화시키는 장점을 제공한다.
미세유제의 제조에 사용된 표면활성제는 음이온성 표면활성제, 비-이온성 표면활성제, Brij 96, 폴리옥시에틸렌 올레일 에테르, 폴리글리세롤 지방산 에스테르, 테트라글리세롤 모노라우레이트(ML310), 테트라글리세롤 모노올레이트(MO310), 헥사글리세롤 모노올레이트(PO310), 헥사글리세롤 펜타올레이트(PO500), 데카글리세롤 모노카프레이트(MCA750), 데카글리세롤 모노올레이트(MO750), 데카글리세롤 세퀴올레이트(SO750), 데카글리세롤 데카올레이트(DAO750), 단독으로 또는 공표면활성제와의 혼합물로 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 공-표면활성제, 일반적으로 에탄올, 1-프로판올 및 1-부탄올과 같은 단쇄 알코올은 표면활성제 필름내로 침투하여 결과적으로 표면활성제 분자중에 생성된 공극 공간으로 인해 무질서한 필름을 생성함으로써 계면 유동성을 증가시키도록 제공된다. 그러나, 미세유제는 공-표면활성제의 사용없이 제조될 수 있으며 알코올-미함유 자가-유화 미세유제 시스템은 당해 분야에 공지되어 있다. 수성 상은 통상적으로 물, 약물의 수용액, 글리세롤, PEG300, PEG400, 폴리글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 에틸렌 글리콜의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 오일 상은 Captex 300, Captex 355, Capmul MCM, 지방산 에스테르, 중간 쇄(C8-C12) 모노, 디, 및 트리-글리세라이드, 폴리옥시에틸화된 글리세릴 지방산 에스테르, 지방 알코올, 폴리글리콜화된 글리세리드, 포화된 폴리글리콜화된 C8-C10 글리세라이드, 식물성 오일 및 실리콘 오일을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
미세유제는 약물 가용화 및 약물의 향상된 흡수의 관점에서 특히 흥미있다. 지질계 미세유제(o/w 및 w/o 둘다)는 펩타이드를 포함하는 약물의 경구 생이용성을 향상시키는 것으로 제안되어 왔다(참조: Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205). 미세유제는 개선된 약물 가용성, 효소적 가수분해로부터 약물의 보호, 막 유동성 및 침투성에 있어서 표면활성제-유도된 변형, 침투 용이성, 고체 용량형보다 우수한 경구 투여 용이성, 개선된 임상 효능, 및 감소된 독성의 장점들을 제공한다(참조: Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143). 종종, 미세유제는, 이들 성분들이 함께 주위 온도에 있는 경우 자발적으로 형성될 수 있다. 이들은 열분해성 약물, 펩타이드 또는 dsRNA를 제형화하는 경우 특히 유리하다. 미세유제는 또한 화장품 및 약제 적용 둘다에서 활성 성분들의 경피 전달시 효과적이다. 본 발명의 미세유제 조성물 및 제형은 dsRNA 및 핵산의 위장관으로부터의 증가된 전신계적 흡수를 촉진할 뿐만 아니라, dsRNA 및 핵산의 국소적 세포 흡수를 개선시킬 것이다.
본 발명의 미세유제는 또한 소르비탄 모노스테아레이트(Grill 3), 라브라솔 및 침투 증진제와 같은 추가의 성분 및 첨가제를 함유함으로써 제형의 특성을 개선시키고 본 발명의 dsRNA 및 핵산의 흡수를 향상시킬 수 있다. 본 발명의 미세유제에서 사용된 침투 증진제는 5개의 광범위한 범주-표면활성제, 지방산, 담즙 염, 킬레이트제, 및 비-킬레이트화 비-표면활성제 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). 이들 그룹 각각은 상기 논의되어 있다.
침투 증진제
하나의 양태에서, 본 발명은 각종의 침투 증진제를 사용하여 핵산, 특히 dsRNA의 동물 피부로의 효율적인 전달을 수행한다. 대부분의 약물은 이온화된 형태 및 비이온화된 형태로 용액 속에 존재한다. 그러나, 일반적으로 단지 지질 가용성 또는 친지성 약물이 세포 막을 용이하게 통과한다. 비-친수성 약물이라도 통과할 막을 침투 증진제로 처리하는 경우 세포 막을 통과할 수 있다는 것이 발견되어 있다. 비-친수성 약물이 세포 막을 통과하여 확산하는 것을 보조하는 것 외에도, 침투 증진제는 또한 친지성 약물의 침투능을 향상시킨다.
침투 증진제는 5개의 광범위한 범주, 즉, 표면활성제, 지방산, 담즙 염, 킬레이트제, 및 비-킬레이트 비-표면활성제 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92). 침투 증진제의 상술한 부류 각각은 하기에 보다 상세하게 기술되어 있다.
표면활성제: 본 발명과 관련하여, 표면활성제(또는 "표면-활성제")는 수용액 속에 용해되는 경우 수용액과 다른 액체 사이에 계면 장력 또는 용액의 표면 장력을 감소시켜, 점막을 통한 dsRNA의 흡수가 향상되는 결과를 일으키는 화학적 실체이다. 담즙 염 및 지방산 외에도, 이들 침투 증진제는 예를 들면, 나트륨 라우릴 설페이트, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 및 폴리옥시에틸렌-20-세틸 에테르)(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); 및 퍼플루오로화학적 유제, 예를 들면, FC-43(참조: Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252)을 포함한다.
지방산: 침투 증진제로서 작용하는 각종 지방산 및 이들의 유도체는 예를 들면, 올레산, 라우르산, 카프르산(n-데칸산), 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 디카프레이트, 트리카프레이트, 모노올레인(1-모노올레일-rac-글리세롤), 디라우린, 카프릴산, 아라키돈산, 글리세롤 1-모노카프레이트, 1-도데실아자사이클로헵탄-2-온, 아실카르니틴, 아실콜린, 이의 C1 -10 알킬 에스테르(예를 들면, 메틸, 이소프로필 및 t-부틸), 및 이의 모노- 및 디-글리세라이드(즉, 올레이트, 라우레이트, 카프레이트, 미리스테이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 리놀레이트 등)을 포함한다(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654).
담즙 염: 담즙의 생리학적 역할은 지질 및 지방-가용성 비타민의 분산 및 흡수의 촉진을 포함한다(참조: Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935). 각종의 천연 담즙 염, 및 이들의 합성 유도체는 침투 증진제로서 작용한다. 따라서, "담즙 염"은 담즙의 천연적으로 존재하는 특정 성분 및 임의의 이들의 합성 유도체를 포함한다. 접합한 담즙 염은 예를 들면, 콜산(또는 이의 약제학적으로 허용되는 나트륨 염, 나트륨 콜레이트), 데하이드로콜산(나트륨 데하이드로콜레이트), 데옥시콜산(나트륨 데옥시콜레이트), 글루콘산(나트륨 글루콜레이트), 글리콜산(나트륨 글리코콜레이트), 글리코데옥시콜산(나트륨 글리코데옥시콜레이트), 타우로콜산(나트륨 타우로콜레이트), 타우로데옥시콜산(나트륨 타우로데옥시콜레이트), 체노데옥시콜산(나트륨 체노데옥시콜레이트), 우르소데옥시콜산(UDCA), 나트륨 타우로-24,25-디하이드로-푸시데이트(STDHF), 나트륨 글리코디하이드로푸시데이트 및 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르(POE)를 포함한다(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583).
킬레이트제: 본 발명과 관련하여 사용된 킬레이트제는 용액으로부터의 금속성 이온과 착물을 형성함으로써 용액으로부터의 금속성 이온을 제거하여, 점막을 통한 dsRNA의 흡수를 향상시키는 결과를 일으키는 화합물로 정의될 수 있다. 본 발명에서 침투 증진제로서의 이들의 용도와 관련하여, 킬레이트제는 DNase 억제제로서 작용하는 추가된 이점을 갖는데, 이는 대부분의 특성화된 DNA 뉴클레아제가 촉매용 2가 금속 이온을 필요로 함으로써 킬레이트제에 의해 억제되기 때문이다(참조: Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339). 적합한 킬레이트제는 이나트륨 에틸렌디아민테트라아세테이트(EDTA), 시트르산, 살리실레이트(예를 들면, 나트륨 살리실레이트, 5-메톡시살리실레이트 및 호모바닐레이트), 콜라겐의 N-아실 유도체, 베타-디케톤의 라우레쓰-9 및 N-아미노 아실 유도체(엔아민)을 포함하나 이에 한정되지 않는다(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al., J. Control Rel., 1990, 14, 43-51).
비-킬레이트 비-표면활성제: 본원에 사용되는 비-킬레이트 비-표면활성제 침투 증진 화합물은 킬레이트제 또는 표면활성제로서 현저한 활성을 입증하나 그럼에도 불구하고 소화 점막을 통한 dsRNA의 흡수를 향상시키는 화합물로 정의될 수 있다(참조: Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). 이러한 부류의 침투 증진제는 예를 들면, 불포화된 사이클릭 우레아, 1-알킬- 및 1-알케닐아자사이클로-알카논 유도체(참조: Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92); 및 디클로페낙 나트륨, 인도메타신 및 페닐부타존과 같은 비-스테로이드성 소염제(참조: Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626)를 포함한다.
담체
본 발명의 특정의 조성물은 또한 제형 속에 담체 화합물을 혼입한다. 본원에 사용되는 "담체 화합물" 또는 "담체"는 불활성(즉, 생물학적 활성 그 자체를 보유하지 않는)이지만 예를 들면, 생물학적으로 활성인 핵산을 분해하거나 순환으로부터 이의 제거를 촉진함으로써 생물학적 활성을 갖는 핵산의 생이용성을 감소시키는 생체내 과정에 의해 핵산으로서 인지되는 핵산 또는 이의 유사체를 말할 수 있다. 핵산 및 담체 화합물과 통상적으로 과량의 후자 물질의 공동투여는, 아마도 담체 화합물과 핵산 사이의 공통된 수용체에 대한 경쟁으로 인하여, 간, 신장 또는 다른 순환외 저장기에서 회수된 핵산의 양을 실질적으로 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 간 조직내에서 부분적인 포스포로티오에이트 dsRNA의 회수는, 이를 폴리이노신산, 덱스트란 설페이트, 폴리사이티드산 또는 4-아세트아미도-4'-이소티오시아노-스틸벤-2,2'-디설폰산과 공투여하는 경우 감소시킬 수 있다(참조: Miyao et al., DsRNA Res. Dev., 1995, 5, 115-121; Takakura et al., DsRNA & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177-183).
부형제
담체 화합물과는 대조적으로, "약제학적 담체" 또는 "부형제"는 하나 이상의 핵산을 동물에게 전달하기 위한 약제학적으로 허용되는 용매, 현탁화제 또는 임의의 다른 약리학적으로 불활성인 비히클이다. 부형제는 액체 또는 고체일 수 있고, 계획된 투여 방식으로 선택하여 핵산 및, 제공된 약제학적 조성물의 다른 성분들과 합하는 경우 바람직한 용적, 점조도를 제공할 수 있다. 대표적인 약제학적 담체는 결합제(예를 들면, 예비젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로즈 등); 충전제(예를 들면, 락토즈 및 다른 당, 미세결정성 셀룰로즈, 펙틴, 젤라틴, 칼슘 설페이트, 에틸 셀룰로즈, 폴리아크릴레이트 또는 인산수소칼슘 등); 윤활제(예를 들면, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 실리카, 콜로이드성 이산화규소, 스테아르산, 금속성 스테아레이트, 수소화된 식물성 오일, 옥수수 전분, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 아세테이트 등); 붕해제(예: 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트 등); 및 습윤제(예를 들면, 나트륨 라우릴 설페이트 등)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
핵산과 유해하게 반응하지 않는 비-비경구 투여에 적합한 약제학적으로 허용되는 유기 또는 무기 부형제를 또한 사용하여 본 발명의 조성물을 제형화할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토즈, 아밀로즈, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 규산, 점성 파라핀, 하이드록시메틸셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
핵산의 국소 투여용 제형은 멸균 및 비-멸균 수용액, 알코올과 같은 일반적인 용매중 비-수용액, 또는 액체 또는 고체 오일 기재 중 핵산의 용액을 포함할 수 있다. 용액은 또한 완충제, 희석제 및 기타 적합한 첨가제를 함유할 수 있다. 핵산과 유해하게 반응하지 않는 비-비경구 투여에 적합한 약제학적으로 허용되는 유기 또는 무기 부형제가 사용될 수 있다.
적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토즈, 아밀로즈, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 규산, 점성 파라핀, 하이드록시메틸셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 성분
본 발명의 조성물은 이들의 당해 분야에서 확립된 사용 수준에서, 약제학적 조성물 속에서 통상적으로 발견된 다른 보조 성분들을 추가로 함유할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 조성물은 예를 들면, 항가려움제, 수렴제, 국소 마취제 또는 소염제와 같은 추가의, 혼화성의, 약제학적으로 활성인 물질을 함유할 수 있거나, 염료, 풍미제, 방부제, 항산화제, 유백화제, 증점제 및 안정화제와 같은, 본 발명의 조성물의 각종 용량형을 물리학적으로 제형화하는데 유용한 추가의 물질을 함유할 수 있다. 그러나, 이러한 물질은, 첨가되는 경우, 본 발명의 조성물의 성분의 생물학적 활성을 과도하게 방해하지 않아야 한다. 제형은 멸균될 수 있고, 경우에 따라, 제형의 핵산과 유해하게 상호작용하지 않는 보조제, 예를 들면, 윤활제, 방부제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치는 염, 완충제, 착색제, 풍미제 및/또는 방향성 물질 등과 혼합될 수 있다.
수성 현탁제는 예를 들면, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 포함하는 현탁제의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 현탁제는 또한 안정화제를 함유할 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명에서 특징화된 약제학적 조성물은 (a) 하나 이상의 dsRNA 화합물 및 (b) 비-RNAi 메카니즘에 의해 작용하는 하나 이상의 항-사이토킨 생물제를 포함한다. 이러한 생물제의 예는 IL1β(예를 들면, 아나킨라), IL6(토실리주마브), 또는 TNF(에타네르셉트, 인플릭시마브, 아들리무마브 또는 세르톨리주마브)를 포함한다.
이러한 화합물의 독성 및 치료학적 효능은 예를 들면, LD50(집단의 50%까지 치명적인 투여량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 효과적인 투여량)을 측정하기 위한 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 과정에 의해 측정할 수 있다. 독성과 치료학적 효과 사이의 투여량 비는 치료학적 지표이며 이는 LD50/ED50 비로서 나타낼 수 있다. 고 치료학적 지표를 나타내는 화합물이 바람직하다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 사람에서 사용하기 위한 용량 범위를 제형화하는데 사용될 수 있다. 본 발명에서 특징화된 조성물의 용량은 일반적으로 독성의 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 순환하는 농도의 범위내에 있다. 용량은 사용된 용량형 및 이용된 투여 경로에 따라 당해 범위내에서 변할 수 있다. 본 발명에서 특징화된 방법에 사용된 임의의 화합물의 경우, 치료학적 유효 투여량은 세포 배양 검정으로부터 초기에 평가할 수 있다. 투여량은 동물 모델에서 화합물 또는 경우에 따라, 세포 배양물에서 측정한 바에 의하면 IC50(즉, 증상의 최대 억제의 1/2을 달성하는 시험 화합물의 농도)를 포함하는 표적 서열의 폴리펩타이드 생성물의 순환하는 혈장 농도 범위를 달성(예를 들면, 폴리펩타이드의 감소된 농도를 달성)하기 위해 제형화될 수 있다. 이러한 정보를 사용하여 사람에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정할 수 있다. 혈장내 수준은 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피로 측정할 수 있다.
위에서 논의한 바와 같이, 이들의 투여 외에, 본 발명에서 특징화된 dsRNA는 TTR 발현에 의해 매개된 병리학적 과정의 치료시 효과적인 다른 공지된 제제와 함께 투여될 수 있다. 어떠한 경우에서도, 투여하는 주치의는 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 효능의 표준 척도를 사용하여 관찰된 결과를 기준으로 하여 dsRNA 투여량 및 투여시기를 조절할 수 있다.
TTR 유전자의 발현에 의해 유발된 질병을 치료하는 방법
본 발명은 특히 TTR을 표적화하는 dsRNA의 용도 및, TTR-매개된 질환 또는 질병의 치료를 위한 적어도 하나의 이러한 dsRNA를 함유하는 조성물에 관한 것이다. 예를 들면, TTR 유전자를 표적화하는 dsRNA는 가족성 아밀로이드 다발신경병증(FAP), 가족성 아밀로이드 심근병증(FAC), 연수막/CNS 아밀로이드증, 아밀로이드증　제VII 형(연수막 또는 수막뇌혈관 아밀로이드증으로도 공지됨), 고티록신혈증, 및 심장 아밀로이드증[노인 전신계적 아밀로이드증(SSA) 및 노인 심장 아밀로이드증(SCA)이라고도 함]의 치료에 유용할 수 있다.
도 15는 가족성 아밀로이드성 신경병증, 가족성 아밀로이드성 심근병증 및 CNS 아밀로이드증과 관련된 TTR에 있어서의 증상 및 돌연변이를 나타낸다. 본 발명은 이들 질병 및 증상을 치료의 위한 조성물 및 방법을 포함하며, TTR의 이러한 돌연변이체 버전에 관한 것이다.
TTR 유전자를 표적화하는 dsRNA는 또한 TTR 아밀로이드증과 같은 증상 및 질환의 치료에 사용된다. 이러한 아밀로이드증과 관련된 증상은 예를 들면, 발작, 치매, 척수병, 다발신경병증, 손목터널증후군, 자율신경부전, 심근병증, 위장기능장애(예를 들면, 위궤양, 설사, 변비, 흡수장애), 체중감소, 간비대, 림프절병, 갑상선종, 유리체 혼탁, 신부전(단백뇨 및 신장 기능상실), 신장병, 뇌신경 기능장애, 격자각막이상증, 및 일반화된 약화 및 과잉 액체 잔류로부터의 호흡 곤란을 지닌 울혈성 심장기능상실을 포함한다.
TTR 발현에 있어 억제 효과로 인하여, 본 발명에 따른 조성물 또는 이로부터 제조된 약제학적 조성물은 삶의 질을 향상시킬 수 있다.
본 발명은 또한 다른 약제 및/또는 다른 치료학적 방법, 예를 들면, 이들 질환을 치료하는데 현재 사용되는 것들과 같은 공지된 약제 및/또는 공지된 치료 방법과 함께, 예를 들면, TTR 아밀로이드증을 치료하기 위한 dsRNA 또는 이의 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다. 하나의 예에서, TTR을 표적화하는 dsRNA는 예를 들면, 간 이식과 함께 투여할 수 있다. 기타 예에서, TTR을 표적화하는 dsRNA는, 예를 들면, 신장 기능을 유지하기 위한, 이뇨제, ACE(안지오텐신 전환 효소) 억제제, 안지오텐신 수용체 차단제(ARB), 또는 투석과 같은, TTR 질병의 증상을 치료하기 위한 약제 또는 치료학적 방법과 함께 투여될 수 있다.
dsRNA 및 추가의 치료제는 동일한 조합, 예를 들면 비경구적으로 투여될 수 있으며, 추가의 치료제는 별도의 조성물의 일부로서 또는 본원에 기술된 다른 방법으로 투여할 수 있다.
본 발명은 TTR 아밀로이드증, 예를 들면, FAP와 같은, TTR 발현에 의해 매개된 질병 또는 질환을 가진 환자에게 TTR을 표적화하는 dsRNA를 투여하는 방법을 특징으로 한다. dsRNA의 투여는 예를 들면, FAP를 가진 환자에서 말초 신경 기능을 안정화시키고 증진시킬 수 있다. 환자는 0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.5　mg/kg, 1.0　mg/kg, 1.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 또는 2.5 mg/kg의 dsRNA와 같은 치료량의 dsRNA를 투여받을 수 있다. dsRNA는 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 60분, 120분 또는 180분의 기간과 같은 기간에 걸쳐 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 규칙적으로, 예를 들면, 격주로(즉, 매 2주마다) 1개월, 2개월, 3개월, 4개월 이상 동안 반복된다. 초기 치료 요법 후, 치료를 더 낮은 빈도 기준으로 투여할 수 있다. 예를 들면, 격주로 3개월 동안 투여한 후, 투여를 1개월당 1회로 6개월 또는 1년 이상 동안 반복할 수 있다. dsRNA의 투여는 환자의 혈액 또는 뇨에서 TTR 수준을 적어도 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80 % 또는 90% 이상까지 감소시킬 수 있다.
완전한 투여량의 dsRNA를 투여하기 전에, 환자에게 완전한 투여량의 5%인 투여량과 같이 보다 적은 투여량으로 투여하고, 알레르기 반응 또는 간 기능에 있어서의 변화와 같은 부작용에 대해 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 간 기능에 있어서의 변화에 대해 모니터링된 환자에서, LFT(간 기능 시험) 변화의 낮은 발생(예를 들면, LFT의 10 내지 20% 발생)은 허용가능하다[예를 들면, ALT(알라닌 아미노트랜스퍼라제)에 있어서 가역성의 3배 증가 및/또는 AST(아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제) 수준].
많은 TTR-관련 질병 및 질환은 유전성이다. 따라서, TTR dsRNA가 요구되는 환자는 가족 병력을 취함으로써 확인할 수 있다. 의사, 간호사 또는 가족 구성원과 같은 건강관리 제공자는 TTR dsRNA를 처방하거나 투여하기 전에 가족력을 고려할 수 있다. DNA 검사를 또한 환자에게서 수행하여, TTR dsRNA를 환자에게 투여하기 전에, TTR 유전자내 돌연변이를 확인할 수 있다.
환자는 TTR dsRNA를 제공받기 전에 생검을 실시할 수 있다. 생검은 예를 들면, 위 점막, 말초 신경, 피부, 복부 지방, 간, 또는 신장과 같은 조직에서 이루어질 수 있으며, 생검은 TTR-매개된 질환의 지표인, 아밀로이드 플라크를 나타낼 수 있다. 아밀로이드 플라크의 확인시, 환자에게 TTR dsRNA를 투여한다.
TTR 유전자의 발현을 억제하는 방법
또 다른 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 TTR 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 본 발명에서 특징화된 조성물을 포유동물에게 투여하여 표적 TTR 유전자의 발현이 사일런스 상태로 되도록 함을 포함한다.
치료될 유기체가 사람과 같은 포유동물인 경우, 조성물은 두개내(예를 들면, 심실내, 실질내 및 경막내), 정맥내, 근육내, 피하, 경피, 기도(에어로졸), 비강, 직장 및 국소(볼내 및 설하 포함) 투여를 포함하는 경구 또는 비경구 경로를 포함하나, 이에 한정되지 않는 당해 분야에 공지된 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 특정 양태에서, 조성물은 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다.
달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 당해 분야의 통상의 기술을 가진 자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동일한 방법 및 물질을 본 발명에서 특징화된 dsRNA 및 방법을 실시하거나 시험하는데 사용할 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 하기 기술되어 있다. 본원에서 언급된 모든 공보, 특허원, 특허 및 다른 참고문헌은 이들 전문이 참조로 인용된다. 대립이 있는 경우, 정의를 포함하는, 본 명세서가 통제할 것이다. 또한, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시하는 것이며 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본원 발명은 지질 제형으로 제형화된, 트랜스티레틴(TTR)의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA)을 제공한다.
도 1은 TTR siRNA로 형질감염시킨 후 배양된 사람 PBMC에서 TNF알파 및 IFN알파 수준의 그래프이다.
도 2a 및 2b는 HepG2 세포에서 AD-18324 및 AD-18328 각각에 대한 투여량 반응 곡선이다.
도 3은 HepG2 세포에서 AD-18246에 대한 투여량 반응 곡선이다.
도 4a 및 도 4b는 LNP01으로 제형화된 TTR-dsRNA(AD-18324, AD-18328 및 AD-18246)의 정맥내 일시 투여에 의해 유전자도입 H129-mTTR-KO/iNOS-KO/hTTR 마우스에서 간 mRNA 및 혈장 단백질 수준 각각의 억제를 나타낸다.
도 5는 SNALP로 제형화된 TTR-dsRNA(AD-18324 및 AD-18328)의 15분 정맥내 주입 후 비-사람 영장류의 간에서 TTR mRNA 수준의 측정을 요약하는 그래프이다.
도 6a 및 도 6b는 SNALP-18328의 정맥내 일시 투여에 의한 유전자도입 마우스에서 사람 V30M TTR 간 mRNA 및 혈청 단백질 수준 각각의 억제를 나타낸다. 그룹 평균을 측정하여, PBS 대조군 그룹에 대해 표준화한 후 플롯팅하였다. 오차 막대(error bar)는 표준 편차를 나타낸다. PBS에 대한, 그룹 평균의 감소율(%)은 SNALP-1955 및 SNALP-18328 그룹에 대해 나타낸다. [*** p< 0.001, 던스 사후검정(Dunn's post-hoc test)을 사용한 1원 ANOVA].
도 7a 및 도 7b는 SNALP-18328의 단일 정맥내 일시 투여에 이어 22일에 걸쳐 유전자도입 마우스에서 사람 V30M TTR 간 mRNA 및 혈청 단백질 수준 각각의 감소의 지속력을 나타낸다. 그룹 평균을 측정하였다. TTR/GAPDH mRNA 수준을 0일째 수준에 대해 표준화하고 플롯팅하였다. 각각의 시점에서 SNALP-1955에 대한 표준화된 TTR mRNA 수준의 감소율(%)을 계산하였으며 SNALP-18328 그룹에 대해 나타낸다. (*** p< 0.001, 던스 사후검정을 사용한 1원 ANOVA).
도 8은 SNALP-18328의 단일 15분 정맥내 주입에 이은 14일에 걸친 비-사람 영장류에서 TTR 혈청 단백질 수준의 시간변화를 나타낸다.
도 9는 SNALP-18328의 정맥내 일시 투여에 이은 사람 V30M TTR/HSF-1 녹-아웃 마우스의 각종 조직에서 TTR-면역반응성의 감소를 나타낸다. E, 식도; S, 위; I1, 장/회장; I4, 장/결장; N, 신경; D, 후근절.
도 10은 XTC-SNALP-18328의 15분 정맥내 주입에 이은 비-사람 영장류의 간에서 TTR mRNA 수준의 측정을 나타낸다.
도 11a 및 11b는 LNP09-18328 또는 LNP11-18328의 15분 정맥내 주입에 이은 비-사람 영장류의 간에서 TTR mRNA 및 혈청 단백질 수준 각각의 측정을 나타낸다. 도 11c는 PBS 대조군 그룹과 비교한 것으로서, 0.3mg/kg의 LNP09-18328의 15분 정맥내 주입에 이는 28일에 걸친 TTR 혈청 단백질 수준의 시간변화를 나타낸다.
도 12는 사람 TTR mRNA의 서열(참조 서열 NM_000371.3, 서열번호 1331)을 나타낸다.
도 13a 및 도 13b는 사람 및 래트 TTR mRNA 각각의 서열이다. 도 13a는 사람 TTR mRNA의 서열(참조 서열 NM_000371.2, 서열번호 1329)이다. 도 13b는 래트 TTR mRNA의 서열(참조 서열 NM_012681.1, 서열번호 1330)이다.
도 14는 NM_000371.3, NM_000371.2, 및 AD-18328의 뉴클레오타이드 정렬을 나타낸다.
도 15는 가족성 아밀로이드 신경병증, 가족성 아밀로이드 심근경색 및 CNS 아밀로이드증과 관련된 TTR에서 증상 및 돌연변이를 나타낸다.
도 16은 상이한 주입 기간으로 SNALP-18534를 사용한 간에서 TTR mRNA 수준의 감소를 나타낸다. 동물 그룹(n=4/그룹)에게 1 mg/kg의 SNALP-18534를 15분, 또는 1, 2, 또는 3시간 주입으로 투여한다. 48시간 후, 래트를 안락사시키고 간을 수거한다. TTR 및 GAPDH mRNA 수준을 간 용해물로부터 Quantigene bDNA 검정을 사용하여 측정하였다. GAPDH mRNA 수준에 대한 TTR의 비는 각각의 동물에 대해 계산하였다. 그룹 평균을 측정하고 PBS 대조군 그룹에 대해 표준화한 후 플롯팅하였다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. [*** p < 0.001, PBS에 대한 본페로니 사후검정(Bonferroni post- hoc test)을 사용한 1원 ANOVA].
도 17은 LNP07-18534 또는 LNP08-18534의 15분 정맥내 주입에 이은 래트의 간에서 TTR mRNA 수준의 측정을 나타낸다.
도 18은 LNP09-18534 또는 LNP11-18534의 15분 정맥내 주입에 이는 스프라그-다울리 래트(Sprague-Dawley Rat)의 간에서 내인성 TTR mRNA 수준의 생체내 억제를 나타낸다. 동물의 그룹(n=4/그룹)에게 0.01, 0.03, 0.1, 또는 0.3 mg/kg의 LNP09-18534, LNP-11-18534; 또는 PBS를 15분 주입을 통해 정맥내 투여하였다. 48시간 후, 동물을 안락사시키고 간을 수거하였다. TTR 및 GAPDH mRNA 수준을 간 생검 용해물로부터 Quantigene bDNA 검정을 사용하여 측정하였다. GAPDH mRNA 수준에 대한 TTR의 비를 각각의 동물에 대해 계산하였다. 그룹 평균을 측정하고 PBS 대조군 그룹에 대해 표준화한 후, 플롯팅하였다.
실시예
실시예 1. dsRNA 합성
시약 공급원
시약의 공급원이 본원에 상세히 제공되지 않은 경우, 이러한 시약은 분자 생물학에서 적용을 위한 품질/순도 표준에서 분자 생물학용 시약의 어떠한 공급업자로부터도 구입할 수 있다.
siRNA 합성
일본쇄 RNA를 Expedite 8909 합성기[제조원: 어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems), 아플레라 도이칠란드 게엠베하(Applera Deutschland GmbH), 독일 다름슈타트 소재] 및 고체 지지체로서 조절된 공극 유리[CPG, 500Å, 제조원: 프롤리고 바이오케미 게엠베하(Proligo Biochemie GmbH), 독일 함브르크 소재]를 사용하여 1μmole의 규모로 고체상 합성에 의해 생산하였다. RNA 및 2'-O-메틸 뉴클레오타이드를 함유하는 RNA를 상응하는 포스포르아미다이트 및 2'-O-메틸 포스포르아미다이트(제조원: 프롤리고 바이오케미 게엠베하, 독일 함브르크 소재)를 각각 사용하여 고체상 합성으로 생성하였다. 이들 빌딩 블록(building block)을 문헌[참조: Current protocols in nucleic acid chemistry, Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA]에 기술된 바와 같은 표준 뉴클레오사이드 포스포르아미다이트 화학을 사용하여 올리고리보뉴클레오타이드 쇄의 서열내 선택된 부위에 혼입하였다. 포스포로티오에이트 연결을 요오드 산화제 용액을 아세토니트릴(1%) 중 뷰케이지 시약(Beaucage reagent)[제조원: 크루아켐 리미티드(Chruachem Ltd), 영국 글라스고우 소재]의 용액으로 치환시켜 도입시켰다. 추가의 보조 시약은 말린크로트 바커(Mallinckrodt Baker: 독일 그리스하임 소재)로부터 수득하였다.
음이온 교환 HPLC에 의한 조 올리고리보뉴클레오타이드의 탈보호 및 정제는 확립된 공정에 따라 수행하였다. 수율 및 농도는 260nm의 파장에서 스펙트럼 광도계[DU 640B, 제조원: 벡크만 코울터 게엠베하(Beckman Coulter GmbH), 독일 운테르슐라이쓰하임 소재]를 사용하여 각각의 RNA의 용액의 UV 흡수로 측정하였다. 이본쇄 RNA는 어닐링 완충액(20　mM 인산나트륨, pH 6.8; 100 mM 염화나트륨) 중에서 상보성 쇄의 등몰 용액을 혼합함으로써 생성시키고, 수 욕 속에서 85 내지 90℃로 3분 동안 가열하고 실온으로 3 내지 4시간에 걸쳐 냉각시켰다. 어닐링된 RNA 용액을 사용할 때까지 -20℃에서 저장하였다.
3'-콜레스테롤-접합된 siRNA(본원에서 -Chol-3'로 언급됨)의 합성을 위해, 적절히 변형된 고체 지지체를 RNA 합성을 위해 사용하였다. 변형된 고체 지지체는 다음과 같이 제조하였다:
디에틸-2-아자부탄-1,4-디카복실레이트 AA
[화학식 AA]
Figure 112019100859120-pat00004
수산화나트륨(50 mL)의 4.7M 수용액을 물(50mL) 중 에틸 글리시네이트 하이드로클로라이드(32.19 g, 0.23 mole)의 교반되고 빙냉시킨 용액내로 가하였다. 이후에, 에틸 아크릴레이트(23.1 g, 0.23 mole)를 가하고 혼합물을 반응의 완료가 TLC에 의해 확인될 때까지 실온에서 교반하였다. 19시간 후, 용액을 디클로로메탄(3 x 100 mL)으로 분배하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며 증발시켰다. 잔사를 증류시켜 화합물 AA(28.8 g, 61%)를 수득하였다.
3-{에톡시카보닐메틸-[6-(9H-플루오렌-9-일메톡시시카보닐-아미노)-헥사노일]-아미노}-프로피온산 에틸 에스테르 AB
[화학식 AB]
Figure 112019100859120-pat00005
Fmoc-6-아미노-헥산산(9.12 g, 25.83 mmol)을 디클로로메탄(50 mL) 중에 용해하고 얼음으로 냉각하였다. 디이소프로필카보디이미드(3.25 g, 3.99 mL, 25.83 mmol)를 상기 용액에 0℃에서 가하였다. 이후에, 여기에 디에틸-아자부탄-1,4-디카복실레이트 (5 g, 24.6 mmol) 및 디메틸아미노 피리딘(0.305 g, 2.5 mmol)을 가하였다. 당해 용액을 실온으로 되도록 하고 추가로 6시간 동안 교반하였다. 반응의 완료를 TLC로 확인하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고 에틸 아세테이트를 가하여 디이소프로필 우레아를 침전시켰다. 현탁액을 여과하였다. 여액을 5% 수성 염산, 5% 중탄산나트륨 및 물로 세척하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축시켜 조 생성물을 수득하고 이를 컬럼 크로마토그래피(50 % EtOAC/헥산)로 정제하여 11.87 g(88%)의 화합물 AB를 수득하였다.
3-[(6-아미노-헥사노일)-에톡시카보닐메틸-아미노]-프로피온산 에틸 에스테르 AC
[화학식 AC]
Figure 112019100859120-pat00006
3-{에톡시카보닐메틸-[6-(9H-플루오렌-9-일메톡시시카보닐아미노)-헥사노일]-아미노}-프로피온산 에틸 에스테르 AB(11.5 g, 21.3 mmol)를 디메틸포름아미드 중 20% 피페리딘 중에 0℃에서 용해하였다. 용액을 1시간 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고, 물을 잔사에 가하고, 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조 생성물을 이의 염산염으로 전환시켜 정제하였다.
3-({6-[17-(1,5-디메틸-헥실)-10,13-디메틸-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-테트라데카하이드로-1H-사이클로펜타[a]페난트렌-3-일옥시카보닐아미노]-헥사노일}에톡시카보닐메틸-아미노)-프로피온산 에틸 에스테르 AD
[화학식 AD]
Figure 112019100859120-pat00007
3-[(6-아미노-헥사노일)-에톡시카보닐메틸-아미노]-프로피온산 에틸 에스테르 AC (4.7 g, 14.8 mmol)의 하이드로클로라이드 염을 디클로로메탄에 용해시켰다. 당해 현탁액을 빙상에서 0℃로 냉각시켰다. 당해 현탁액에 디이소프로필에틸아민(3.87 g, 5.2 mL, 30 mmol)을 가하였다. 수득되는 용액에 콜레스테릴 클로로포르메이트(6.675　g, 14.8 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고 10% 염산으로 세척하였다. 생성물을 플래시 크로마토그래피(10.3 g, 92%)로 정제하였다.
1-{6-[17-(1,5-디메틸-헥실)-10,13-디메틸-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-테트라데카하이드로-1H-사이클로펜타[a] 페난트렌-3-일옥시카보닐아미노]-헥사노일}-4-옥소-피롤리딘-3-카복실산 에틸 에스테르 AE
[화학식 AE]
Figure 112019100859120-pat00008
칼륨 t-부톡사이드(1.1 g, 9.8 mmol)를 30 mL의 무수 톨루엔 중에 슬러리화하였다. 당해 혼합물을 빙상에서 0℃로 냉각시키고 5 g(6.6 mmol)의 디에스테르 AD를 20분내에서 교반하면서 서서히 가하였다. 온도를 첨가 동안 5℃ 이하로 유지하였다. 교반을 0℃에서 30분 동안 지속하고 1mL의 빙초산을 가하고, 이어서 즉시 40mL의 물 중 4 g의 NaH2PO4·H2O를 가하였다. 수득되는 혼합물을 100 mL의 디클로로메탄으로 각각 2회 추출하고 합한 유기 추출물을 10 mL의 인산염 완충액으로 각각 2회 세척하고, 건조시키고, 증발 건조시켰다. 잔사를 60mL의 톨루엔에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고 냉 pH 9.5 카보네이트 완충액의 3개의 50mL 부분으로 추출하였다. 수성 추출물을 인산을 사용하여 pH 3으로 조절하고, 4개의 40 mL 클로로포름의 부분으로 추출하고 이를 합하고, 건조시키고 증발 건조시켰다. 잔사를 25% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 1.9 g의 b-케토에스테르(39%)를 수득하였다.
[6-(3-하이드록시-4-하이드록시메틸-피롤리딘-1-일)-6-옥소-헥실]-카밤산 17-(1,5-디메틸-헥실)-10,13-디메틸-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-테트라데카하이드로-1H-사이클로펜타[a]페난트렌-3-일 에스테르 AF
[화학식 AF]
Figure 112019100859120-pat00009
메탄올(2 mL)을 1시간의 기간에 걸쳐 테트라하이드로푸란(10 mL) 중 b-케토에스테르 AE (1.5 g, 2.2 mmol) 및 수소화붕소산나트륨(0.226 g, 6 mmol)의 환류하는 혼합물에 적가하였다. 교반을 1시간 동안 환류 온도에서 지속하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 1N HCl(12.5 mL)을 가하고, 혼합물을 에틸아세테이트(3 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 에틸아세테이트 층을 무수 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켜 생성물을 수득하고 이를 컬럼 크로마토그래피(10% MeOH/CHCl3) (89%)로 정제하였다.
(6-{3-[비스-(4-메톡시-페닐)-페닐-메톡시시메틸]-4-하이드록시-피롤리딘-1-일}-6-옥소-헥실)-카밤산 17-(1,5-디메틸-헥실)-10,13-디메틸-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-테트라데카하이드로-1H-사이클로펜타[a]페난트렌-3-일 에스테르 AG
[화학식 AG]
Figure 112019100859120-pat00010
디올 AF(1.25 gm 1.994 mmol)을 진공하에 피리딘(2 x 5　mL)과 함께 증발시켜 건조시켰다. 무수 피리딘(10 mL) 및 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드(0.724 g, 2.13 mmol)를 교반하면서 가하였다. 반응을 실온에서 밤새 수행하였다. 반응물을 메탄올을 첨가하여 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고 잔사에 디클로로메탄(50 mL)을 가하였다. 유기 층을 1M 수성 중탄산나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과하며 농축시켰다. 잔사 피리딘을 톨루엔과 함께 증발시켜 제거하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(2% MeOH/클로로포름, 5% MeOH/CHCl3 중 Rf = 0.5)로 정제하였다(1.75 g, 95%).
석신산 모노-(4-[비스-(4-메톡시-페닐)-페닐-메톡시시메틸]-1-{6-[17-(1,5-디메틸-헥실)-10,13-디메틸 2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-테트라데카하이드로-1H 사이클로펜타[a]페난트렌-3-일옥시카보닐아미노]-헥사노일}-피롤리딘-3-일) 에스테르 AH
[화학식 AH]
Figure 112019100859120-pat00011
화합물 AG (1.0 g, 1.05 mmol)를 석신산 무수물(0.150 g, 1.5 mmol) 및 DMAP (0.073 g, 0.6 mmol)와 혼합하고 진공하에 40℃에서 밤새 건조시켰다. 혼합물을 무수 디클로로에탄(3 mL) 중에 용해하고, 트리에틸아민(0.318 g, 0.440　mL, 3.15 mmol)을 가하고 용액을 실온에서 아르곤 대기하에 16시간 동안 교반하였다. 이후에, 이를 디클로로메탄(40 mL)으로 희석시키고 빙냉 수성 시트르산(5 중량%, 30 mL) 및 물(2 X 20 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 위에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 잔사를 다음 단계에서 그 자체로 사용하였다.
콜레스테롤 유도체화된 CPG AI
[화학식 AI]
Figure 112019100859120-pat00012
석시네이트 AH(0.254 g, 0.242 mmol)를 디클로로메탄/아세토니트릴(3:2, 3 mL)의 혼합물 중에 용해하였다. 아세토니트릴(1.25 mL) 중 DMAP (0.0296 g, 0.242 mmol)의 용액에, 아세토니트릴/디클로로에탄(3:1, 1.25 mL) 중 2,2'-디티오-비스(5-니트로피리딘)(0.075 g, 0.242 mmol)을 연속해서 가하였다. 수득되는 용액에 아세토니트릴(0.6 ml) 중 트리페닐포스핀(0.064 g, 0.242 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물은 오렌지 색으로 변하였다. 당해 용액을 리스트 액션 진탕기(wrist-action shaker)를 사용하여 진탕시켰다(5 분). 장쇄 알킬 아민-CPG(LCAA-CPG)(1.5 g, 61　mM)을 가하였다. 현탁액을 2시간 동안 교반시켰다. CPG를 소결된 깔대기를 통해 여과하고 아세토니트릴, 디클로로메탄 및 에테르로 연속해서 세척하였다. 반응하지 않은 아미노 그룹을 아세트산 무수물/피리딘을 사용하여 차폐하였다. CPG의 달성된 로딩을 UV 측정(37 mM/g)하여 측정하였다.
5'-12-도데칸산 비스데실아미드 그룹(본원에서 "5'-C32-"로서 언급) 또는 5'-콜레스테릴 유도체 그룹(본원에서 "5'-Chol-"로 언급)을 지닌 siRNA의 합성은, 콜레스테릴 유도체의 경우, 산화 단계를 뷰케이지 시약을 사용하여 수행함으로써 핵산 올리고머의 5'-말단에 포스포로티오에이트 연결을 도입하는 것을 제외하고는, 제WO 2004/065601호에 기술된 바와 같이 수행하였다.
핵산 서열은 표준 명명법, 및 구체적으로 표 1의 약어를 사용하여 다음에 나타낸다.
핵산 서열 표시에 사용된 뉴클레오타이드 단량체의 약어. 이들 단량체는, 올리고뉴클레오타이드에 존재하는 경우, 5'-3'-포스포디에스테르 결합에 의해 상호간에 연결되는 것으로 이해된다.
약어 뉴클레오타이드 (들)
A 아데노신-3'-포스페이트
C 시티딘-3'-포스페이트
G 구아노신-3'-포스페이트
T 5-메틸우리딘-3'-포스페이트
U 우리딘-3'-포스페이트
N 임의의 뉴클레오타이드 (G, A, C, 또는 T)
a 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트
c 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트
g 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트
u 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트
dT 2'-데옥시티미딘-3'-포스페이트
sT; sdT 2'-데옥시-티미딘-5'포스페이트-포스포로티오에이트
실시예 2A. TTR siRNA 설계
전사체
siRNA 설계를 수행하여 사람(기호 TTR) 및 래트(기호 Ttr)로부터 유전자 트랜스티레틴을 표적화하는 siRNA를 확인하였다. 설계는 NCBI Refseq 컬렉션으로부터 TTR 전사체 NM_000371.2(서열번호 1329) (사람) 및 NM_012681.1(서열번호 1330)(래트)를 사용하였다. siRNA 듀플렉스를 이들 각각의 유전자와 100% 동일성으로 설계하였다.
siRNA 설계 및 특이성 예측
모든 가능한 19량체의 예측된 특이성을 각각의 서열에 대해 측정하였다. TTR siRNA를 FASTA 알고리즘을 사용하여 사람 및 래트 전사체(NCBI Refseq 세트내 NM_ 및 XM_ 기록 세트로 정의)에 대한 총괄적인 조사에 사용하였다. 이후에, Python 스크립트 'offtargetFasta.py'를 사용하여 정렬을 분석하고 siRNA와 임의의 가능한 '오프-표적' 전사체 사이의 미스매치의 수 및 위치를 기준으로 점수를 생성하였다. 오프-표적 점수를 가중하여 분자의 5' 말단으로부터 2 내지 9번 위치내 siRNA의 '시드(seed)' 영역내 차이를 강조한다. 오프-표적 점수는 다음과 같이 계산한다: 올리고와 전사체 사이의 미스매치에는 패널티를 제공한다. 올리고의 2 내지 9번 위치내 시드 영역에서의 미스매치에는 2.8의 패널티를 제공하고; 10 및 11번의 추정된 절단 부위에서의 미스매치에는 1.2의 패널티를 제공하며, 12 내지 19번 위치내 미스매치에는 1의 패널티를 제공한다. 1번 위치내 미스매치는 고려되지 않는다. 이후에, 각각의 올리고-전사체 쌍에 대한 오프-표적 점수는 미스매치 패널티를 합함으로써 계산한다. 모든 올리고-전사체 쌍으로부터의 최저 오프-표적 점수를 측정하고 올리고의 후속적인 분류에 사용한다. siRNA 쇄 둘다를 계산된 점수에 따라 특이성의 범주로 지정하였다: 3을 초과하는 점수는 고도로 특이적인 것으로 취급하고, 3과 동일한 것은 특이적인 것으로, 그리고 2.2 내지 2.8 사이의 점수는 중간 정도로 특이적인 것으로 취급하였다. 합성하기 위한 올리고를 선택함에 있어서, 안티센스 쇄의 오프-표적 점수를 고에서 저로 분류하고, 사람으로부터 144개의 최고의(최저 오프-표적 점수) 올리고 쌍, 및 래트로부터 최고의 26개 쌍을 선택하였다.
siRNA 서열 선택
siRNA 올리고로부터 기원한 140개 센스 및 140개 안티센스 사람 TTR 전체를 합성하여 듀플렉스로 형성시켰다. siRNA 올리고로부터 기원한 26개 센스 및 26개 안티센스 래트 TTR의 전체를 합성하여 듀플렉스로 형성시켰다. 올리고를 포함한 듀플렉스는 표 2 내지 4(사람 TTR) 및 표 5 내지 7(래트 TTR)에 나타낸다.
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Figure 112019100859120-pat00015
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[표 3a]
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[표 3b]
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[표 6a]
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Figure 112019100859120-pat00037
[표 6b]
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TTR 서열의 합성
TTR 서열을 MerMade 192 합성기상에서 1μmol의 규모로 합성하였다. 목록내의 모든 서열에 대해, '엔도라이트(endolight)' 화학을 하기와 같이 적용하였다.
● 센스 쇄내 모든 피리미딘(사이토신 및 우리딘)을 상응하는 2'-O-메틸 염기(2' O-메틸 C 및 2'-O-메틸 U)로 대체하였다.
● 안티센스 쇄에서, 리보 A 뉴클레오사이드에 인접한(5' 위치를 향해) 피리미딘을 이들의 상응하는 2-O-메틸 뉴클레오사이드로 대체하였다.
● 센스 및 안티센스 서열 둘다의 3' 말단에서 2개 염기 dTdT 연장을 도입하였다.
● 서열 파일을 텍스트 파일로 변환하여 이것이 MerMade 192 합성 소프트웨어에서의 로딩에 적합하도록 하였다.
TTR 서열의 합성은 포스포르아미다이트 화학을 사용하는 고체 지지된 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하였다. 상기 서열의 합성은 1μm 규모로 96 웰 플레이트에서 수행하였다. 아미다이트 용액을 0.1M 농도로 제조하고 에틸 티오 테트라졸(아세토니트릴 중 0.6M)을 활성화제로서 사용하였다.
합성된 서열을 절단하고 96 웰 플레이트에서 제1 단계에서 메틸아민을 사용하고 제2 단계에서 트리에틸아민·3HF를 사용하여 탈보호시켰다. 이렇게 수득된 조 서열을 아세톤: 에탄올 혼합물을 사용하여 침전시키고 펠릿을 0.5M 나트륨 아세테이트 완충액 중에 재-현탁시켰다. 각각의 서열로부터의 시료를 LC-MS로 분석하고 수득되는 질량 데이터는 서열의 동일성을 확인하였다. 선택된 시료 세트를 또한 IEX 크로마토그래피로 분석하였다.
과정의 다음 단계는 정제이었다. 모든 서열을 AKTA 익스플로러 정제 시스템(explorer purification system) 상에서 Source 15Q 컬럼을 사용하여 정제하였다. 완전한 길이의 서열에 상응하는 단일 피크를 용출물에서 수집하고 후속적으로 이온 교환 크로마토그래피에 의해 순도를 분석하였다.
정제된 서열을 세파덱스(Sephadex) G25 컬럼 상에서 AKTA 정제기를 사용하여 탈염시켰다. 탈염된 TTR 서열을 농도 및 순도에 대해 분석하였다. 이후에, 일본쇄를 어닐링하여 TTR-dsRNA를 형성하였다.
실시예 2B: mRNA 억제를 위한 TTR siRNA 의 시험관내 스크리닝
사람 TTR 표적화 dsRNA(표 2)를 HepG2 및 Hep3B 세포내에서 내인성 TTR 발현의 억제에 대해 qPCR(실시간 PCR) 및 bDNA(측쇄 DNA) 검정을 사용하여 검정하여 TTR mRNA를 정량하였다. 설치류 TTR 표적화 dsRNA(표 5)를 합성하고 내인성 TTR 발현의 억제에 대해 bDNA 검정을 사용하여 H.4.II.E 세포내에서 분석하였다. 단일 투여량 검정으로부터의 결과를 사용하여 투여량 반응 실험에 대한 TTR dsRNA 듀플렉스의 서브세트를 선택함으로써 IC50을 계산하였다. IC50 결과를 사용하여 추가의 시험을 위한 TTR dsRNA를 선택하였다.
세포 배양 및 형질감염
간세포 세포주 HepG2, Hep3B 및 H.4.II.E 세포(ATCC, 버지니아 마나사스 소재)를 10% FBS, 스트렙토마이신 및 글루타민(ATCC)이 보충된 둘베코 변형된 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium)(ATCC) 중에서 5% CO2의 대기하에 37℃에서 컨플루언스(confluence) 상태 근처까지 성장시킨 후 트립신처리함으로써 플레이트로부터 방출하였다. H.4.II.E 세포를 또한 이글 최소 필수 배지(Eagle's minimal essential medium) 중에서 성장시켰다. 역 형질감염은 웰당 5μl의 siRNA 듀플렉스에 대해 5μl의 Opti-MEM을 96-웰 플레이트내로 10μl의 Opti-MEM 및 0.2μl의 리포펙타민 RNAiMax/웰[제조원: 인비트로겐(Invitrogen), 캘리포니아 칼스바드 소재, 제품번호 13778-150]과 함께 가하여 수행하였고 실온에서 15분 동안 항온처리하였다. 이어서, 4x104(HepG2), 2x104(Hep3B) 또는 2x104 (H.4.II.E) 세포를 함유하는 항생제가 들어있지 않은 80μl의 완전 성장 배지를 가하였다. 세포를 24시간 동안 배양한 후 RNA를 정제하였다. 단일 투여량 실험을 10 nM의 최종 듀플렉스 농도에서 수행하고 투여량 반응 실험을 10, 1, 0.5, 0.1, 0.05, 0.01, 0.005, 0.001, 0.0005, 0.0001, 0.00005, 0.00001 nM에서 수행하였다.
MagMAX -96 전체 RNA 분리 키트[제조원: 어플라이드 바이오시스템스( Applied Biosystems), 캘리포니아 포스터 시티 소재, 부품 번호: AM1830]를 사용한 전체 RNA 분리:
세포를 수거하고 140μl의 용해/결합 용액 중에서 용해한 후 1분 동안 850rpm에서 에펜도르프 써모믹서(Eppendorf Thermomixer)(혼합 속도는 전 과정에서 동일하였다)를 사용하여 혼합하였다. 20μl의 자기 비드를 세포-용해물에 가하고 5분 동안 혼합하였다. 자기 비드를 자기 스탠드를 사용하여 포획하고 상청액을 비드를 교란하지 않으면서 제거하였다. 상청액을 제거한 후, 자기 비드를 세척 용액 1(이소프로판올 첨가됨)로 세척하고 1분 동안 혼합하였다. 비드를 다시 포획하고 상청액을 제거하였다. 이후에, 비드를 150μl의 세척 용액 2(에탄올 첨가됨)로 세척하고, 포획하고 상청액을 제거하였다. 이후에, 50μl의 DNase 혼합물(MagMax turbo DNase 완충액 및 Turbo DNase)을 비드에 가하고 이를 10 내지 15분 동안 혼합하였다. 혼합한 후, 100μl의 RNA 재결합 용액을 가하고 3분 동안 혼합하였다. 상청액을 제거하고 자기 비드를 다시 150μl의 세척 용액 2로 세척하고 1분 동안 혼합하고 상청액을 완전히 제거하였다. 자기 비드를 2분 동안 혼합하여 건조시킨 후 RNA를 50μl의 물로 용출하였다.
ABI 고 용량 cDNA 역 전사 키트(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 , 캘리포니아주 포스터 시티 소재, 제품 번호 #4368813)를 사용한 cDNA 합성:
반응물당 2μl의 10X 완충액, 0.8μl의 25X dNTPs, 2μl의 무작위 프라이머, 1μl의 역전사효소, 1μl의 RNase 억제제 및 3.2μl의 H2O의 마스터 혼합물을 10μl의 총 RNA내로 가하였다. cDNA를 Bio-Rad C-1000 또는 S-1000 열 순환기[제조원: 헤르쿨스(Hercules), 캘리포니아 소재]를 사용하여 다음 단계를 통해 생성시켰다: 25℃에서 10분, 37℃에서 120분, 85℃에서 5초, 4℃에서 유지.
실시간 PCR :
2μl의 cDNA를 웰당 1μl의 18S 태크만 프로브(TaqMan Probe)(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 제품 번호 #4319413E), 1μl의 TTR 태크만 프로브(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 제품 번호 #HS00174914 M1) 및 10μl의 태크만 유니버설(Universal) PCR 마스터 혼합물(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 제품 번호 #4324018)의 마스터 혼합물에 MicroAmp Optical 96 웰 플레이트(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 제품 번호 #4326659)에 가하였다. 실시간 PCR을 ABI 7000 프리즘(Prism) 또는 ABI 7900HT 실시간 PCR 시스템(제조원: 어플라이드 바이오시스템스)에서 △△ Ct(RQ) 검정을 사용하여 가하였다. 모든 반응을 3회 수행하였다.
실시간 데이터를 △△ Ct 방법을 사용하여 분석하고 10nM BlockIT 형광성 올리고[제조원: 인비트로겐(Invitrogen) 제품 번호 #2013] 또는 10nM AD-1955(비-포유동물 루시퍼라제 유전자를 표적화하는 대조군 듀플렉스)로 형질감염된 세포로부터 수행된 검정에 대해 표준화함으로써 배수 변화(fold change)를 계산하였다.
측쇄 DNA 검정- QuantiGene 1.0[제조원: 파노믹스 ( Panomics ), 캘리포니아 프레몬트 소재, 제품 번호 #: QG0004 ]- 설치류 특이적인 듀플렉스를 스크리닝하기 위해 사용
H.4.II.E 세포(ATCC)를 10 nM의 siRNA로 형질감염시켰다.　 배지를 제거한 후, H.4.II.E를 100μl의 희석된 용해 혼합물(20mg/ml의 최종 농도에 대해 ml당 1 용적의 용해 혼합물, 2 용적의 뉴클레아제-미함유 물 및 10μl의 프로테이나제-K의 혼합물)을 65℃에서 35분 동안 배양하였다. 이후에, 80μl의 작업 프로브 세트(TTR 또는 GAPDH 프로브의 혼합물) 및 20μl의 세포-용해물을 포획 플레이트내로 가하였다. 포획 플레이트를 53℃±1℃에서 밤새(대략 16 내지 20시간) 배양하였다. 포획 플레이트를 1X 세척 완충액(뉴클레아제를 함유하지 않는 물, 완충액 성분 1 및 세척 완충액 성분 2의 혼합물)로 3회 세척한 후, 1분 동안 1000rpm에서 원심분리하여 건조시켰다. 100μl의 증폭기 작업 시약(Amplifier Working Reagent)을 포획 플레이트에 가한 후, 이를 밀봉하고 1시간 동안 46℃±1℃에서 배양하였다. 세척 및 건조 단계를 배양 1시간 후 반복하고 100μl의 표지 용액 시약을 가하였다. 이후에, 플레이트를 세척하고, 건조시키며 100μl의 기질(리튬 라우릴 설페이트 및 기질 용액의 혼합물)을 가하였다. 포획 플레이트를 배양기에 46 ± 1℃에서 30분 동안 위치시켰다. 이후에, 포획 플레이트를 배양기로부터 제거하고 실온에서 30분 동안 배양하였다. 최종적으로, 포획 플레이트를 빅터 루미노미터(Victor Luminometer)[제조원: 퍼킨 엘머(Perkin Elmer), 매사추세츠주 왈탐 소재]로 판독하였다.
측쇄 DNA 검정- QuantiGene 2.0[제조원: 파노믹스 ( Panomics ) 제품 번호 #: QS0011): 모든 다른 듀플렉스를 스크리닝하기 위해 사용
기술된 투여량에서 24시간 배양한 후, 배지를 제거하고 세포를 100μl의 용해 혼합물(20mg/ml의 최종 농도에 대해 1 용적의 용해 혼합물, 2 용적의 뉴클레아제를 함유하지 않는 물 및 10μl의 프로테이나제-K/ml) 중에서 용해한 후 65℃에서 35분 동안 배양하였다. 20μl의 작업 프로브 세트(유전자 표적의 경우 TTR 프로브 및 내인성 대조군의 경우 GAPDH) 및 80μl의 세포-용해물을 포획 플레이트에 가하였다. 포획 플레이트를 55℃±1℃(대략 16 내지 20시간)에서 배양하였다. 다음날, 포획 플레이트를 1X 세척 완충액(뉴클레아제를 함유하지 않는 물, 완충액 성분 1 및 세척 완충액 성분 2)으로 3회 세척한 후, 1분 동안 240g에서 원심분리하여 건조시켰다. 100μl의 예비-증폭기 작업 시약을 포획 플레이트에 가하고, 이를 알루미늄 호일로 밀봉하며 1시간 동안 55℃±1℃에서 배양하였다. 1시간 배양한 후, 세척 단계를 반복한 후, 100μl의 증폭기 작업 시약을 가하였다. 1시간 후, 세척 및 건조 단계를 반복하고, 100μl의 표지 프로브를 가하였다. 포획 플레이트를 50℃±1℃에서 1시간 동안 배양하였다. 이후에, 플레이트를 1X 세척 완충액으로 세척하고, 건조시킨 후, 100μl의 기질을 포획 플레이트에 가하였다. 포획 플레이트를 스펙트라맥스 루미노미터(SpectraMax Luminometer)[제조원: 몰레큘러 디바이스(Molecular Devices), 캘리포니아주 서니베일 소재]를 사용하여 판독한 후 5 내지 15분 배양하였다.
bDNA 데이터 분석:
bDNA 데이터는 (i) 3개의 시료 각각으로부터의 평균 배경을 감하고, (ii) 수득되는 3개의 GAPDH(대조군 프로브) 및 TTR(실험 프로브) 값을 평균을 낸 후, (iii) 비율: (실험 프로브 - 배경)/(대조군 프로브 - 배경)를 취함으로써 분석하였다.
결과
TTR-dsRNA(TTR siRNA)에 대한 단일 투여량 및 IC50 결과의 요약을 하기 표 8에서 나타낸다. 단일 투여량 결과는 HepG2 세포에서 분석한, 대조군에 대한 TTR mRNA%로 나타낸다. 나타낸 바와 같이, IC50을 HepG2 및/또는 Hep3B 세포에서 측정하였다.
Figure 112019100859120-pat00042
Figure 112019100859120-pat00043
Figure 112019100859120-pat00044
Figure 112019100859120-pat00045
5개의 TTR-dsRNA(AD-18258, AD-18274, AD-18324, AD-18328, 및 AD-18339)에 대한 IC50을 확인하기 위해 사용된 투여량 반응 데이터를 하기 표 9에서 상세히 나타낸다. 모든 5개의 siRNA는 pM의 IC50을 가지는 것으로 측정되었다. 표 8에서 dsRNA에 대한 IC50 데이터는 하기 표 9에 나타낸 데이터의 요약이다.
Figure 112019100859120-pat00046
설치류 특이적인 TTR-dsRNA(TTR siRNA)에 대한 단일 투여량 결과의 요약을 하기 표 10에서 나타낸다. 단일 투여량 결과는 설치류 특이적인 TTR siRNA를 10nM에서 형질전환한 후, 래트 H.4.II.E 세포내에서 검정한, 대조군에 대한 TTR mRNA %로 나타낸다. 이들 결과는, 일부 설치류 특이적인 TTR siRNA가 시험관내에서 내인성 래트 TTR mRNA를 억제하는데 효과적임을 나타낸다.
Figure 112019100859120-pat00047
실시예 3. TNF -α 및 IFN -α 분비의 유도를 위한 TTR siRNA 의 시험관내 검정
면역자극에 대한 가능성을 평가하기 위하여, TTR siRNA를 TNF-α 및 IFN-α 분비의 유도에 대해 시험관내에서 검정하였다.
사람 PBMC를 건강한 공여자로부터 수득한 새로이 수집한 백혈구 연층[구입처: 리서치 블러드 컴포넌츠, 인코포레이티드(Research Blood Components, Inc.), 매사추세츠주 보스톤 소재]으로부터 표준 피콜-하이파크 밀도 원심분리(standard Ficoll-Hypaque density centrifugation)에 의해 분리하였다. 새로이 분리한 세포(1x105/웰/100μl)를 96-웰 플레이트에 종균하고 10% 열-불활성화된 태아 소 혈청 및 1% 항생제/항진균제(제조원: 인비트로겐)가 보충된 RPMI 1640 GlutaMax 배지(제조원: 인비트로겐) 중에서 배양하였다.
siRNA를 PBMC내로 DOTAP 형질감염 시약[제조원: 로슈 어플라이드 사이언스(Roche Applied Science)]을 사용하여 형질감염시켰다. DOTAP를 우선 Opti-MEM(제조원: 인비트로겐) 중에서 5분 동안 희석시킨 후 동 용적의 siRNA를 함유하는 Opti-MEM과 혼합하였다. siRNA/DOTAP 복합체를 제조업자의 지시에 의해 명시된 바와 같이 배양하고 후속적으로 PBMC(50μl/웰)에 가한 후 24시간 동안 배양하였다. 양성 및 음성 대조군 siRNA를 모든 검정에 포함시켰다. AD-5048을 양성 대조군 siRNA로서 사용하였다. AD-5048은 사람 아포지단백질 B를 표적화하는 서열에 상응하며(참조: Soutschek et al., 2004), 당해 검정에서 IFN-α 및 TNF-α 둘 다의 분비를 유발하였다. 당해 검정에서 IFN-α 및 TNF-α 분비를 유발하지 않는 AD-1955를 음성 대조군 siRNA로 사용하였다. 모든 siRNA를 133 nM의 최종 농도에서 사용하였다. 형질감염 시약에 대한 RNA의 비는 DOTAP ㎍당 16.5 pmole이었다.
사이토킨을 검출하고 IFN-α(BMS216INST) 및 TNF-α(BMS223INST)[둘다 벤더 메드시스템스(Bender MedSystems)(오스트리아 비엔나 소재)로부터 입수]에 대한 시판되는 ELISA를 사용하여 배양 상청액 중에서 정량하였다. TTR siRNA 사이토킨 유도를 양성 대조군 siRNA AD-5048에 대해 생산된 IFN-α 및 TNF-α의 %로서 나타낸다.
다수의 TTR siRNA에 대한 IFN-α 및 TNF-α자극 결과는 도 1(4개 웰의 평균 ± SD)에 나타내고 하기 표 11(AD-5048과 비교한 %)에 나타낸다. 평가된 TTR siRNA 중 어느 것도 배양된 사람 PBMC에 의한 현저한 TNF-α 또는 IFN-α 분비를 유도하지 않았다.
Figure 112019100859120-pat00048
5개의 리드(lead) TTR 표적화 dsRNA(TTR siRNA)를 사람 간세포 세포주 HepG2 및 Hep3B에서 pM 범위의 IC50을 기준으로, 및 면역자극 활성의 부재하에 선택하였다. 어떠한 미스매치도 없는 듀플렉스는 올리고와 mRNA 사이의 미스매치를 가진 듀플렉스보다 더 표적 전사체의 현저한 녹다운을 달성하는 것으로 여겨진다. 교차-종 독성 데이터의 해석을 보다 더 가능하게 하고 사람 환자에게 가장 광범위하게 적용시키기 위하여, 래트, 사이노몰거스 원숭이 및 사람으로부터의 이종상염색체 유전자에 있어 100% 동일성을 갖고 공지된 다형성을 지닌 영역을 표적화하지 않는 듀플렉스가 일반적으로 바람직하다. 5개의 리드 화합물을 간세포 세포주에서 pM 범위의 IC50, 면역자극 활성, 사람 TTR 전사체에 대한 특이성 및 듀플렉스에 의해 표적화된 mRNA의 영역내 공지된 다형성(돌연변이)의 부재를 기준으로 선택하였다. TTR의 경우에, 19개 염기 올리고는 사람, 래트 및 사이노몰거스 원숭이에서 완전한 동일성이 발견되지 않았다. 이들 데이터의 요약을 표 12에 나타내며, 당해 표는 듀플렉스 및 교차-종 반응성에 의해 표적화된 영역내 공지된 TTR 돌연변이에 있어서의 정보를 또한 포함한다.
Figure 112019100859120-pat00049
실시예 4. 유전자도입 마우스에서 LNP01 -18324, LNP01 -18328 및 LNP01 -18246에 의한 간 TTR mRNA 및 혈장 TTR 단백질의 생체내 감소
2개의 TTR siRNA, AD-18324 및 AD-18328을 생체내 평가를 위해 선택하였다. 이들 듀플렉스는 간세포 세포주(예를 들면, HepG2)에서 시험관내 강력한 투여량-의존성 사일런싱을 나타내었다. 도 2a 및 도 2b는 AD-18324(도 2a) 또는 AD-18328(도 2b)에 의한 형질감염 후 HepG2 세포내에서 투여량 반응을 나타내며, 여기서, 투여량은 x-축에서 nM으로 나타내고 반응은 y-축에서 대조군과 비교하여 잔류하는 일부 TTR mRNA로서 나타낸다. HepG2 세포에서, AD-18324 및 AD-18328의 IC50은 각각 2 pM 및 3 pM인 것으로 측정되었다. 리드 dsRNA 후보물 둘다에 대한 TTR 표적 부위는, 문헌에서 보고된 돌연변이가 없는 영역내 TTR mRNA의 3' 미해독 영역내에 있다.
2개의 리드 후보물의 각각의 쇄의 서열을 표로부터 하기에 재생한다. 쇄: s= 센스; as= 안티센스; 위치: 전사체 NM_000371.2 상에서 5' 염기의 위치.
Figure 112019100859120-pat00050
또한, 설치류 교차-반응성 TTR dsRNA, AD-18246을 생체내에서 추가로 평가하기 위해 선택하였다. AD-18246은 개방 판독 프레임의 88번 위치에서 개시하는 서열을 표적화하며, 여기에는 문헌에 보고된 3개의 돌연변이가 존재한다. HepG2 세포에서 AD-18246에 대한 투여량 반응 곡선을 표 3에 나타낸다. AD-18246은 실질적으로 AD-18324 및 AD-18328보다 덜 강력하며; AD-18246의 IC50은 265 pM인 것으로 측정되었다.
AD-18324, AD-18328, 및 AD-18246을 LNP01로 제형화 후 유전자도입 마우스에게 투여하였다. 3 내지 5월령의 H129-mTTR-KO/iNOS-KO/hTTR 유전자도입 마우스(마우스 트랜스티레틴 녹-아웃/유도성 산화질소 신타제 녹-아웃/사람 트랜스티레틴 유전자도입)에게 200μl의 LNP01-제형화된 트랜스티레틴-특이적인 siRNA (AD-18324, AD-18328, 또는 AD-18246), 비-포유동물 루시퍼라제 유전자(AD-1955)를 표적화하는 LNP01-제형화된 대조군 siRNA 또는 PBS를 꼬리 정맥을 통해 siRNA AD-18324 및 AD-18328의 경우 1.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 또는 6.0 mg/kg, siRNA AD-18246의 경우 3.0 mg/kg, 및 siRNA AD-1955의 경우 6.0 mg/kg의 농도에서 정맥내(IV) 투여하였다. LNP01은 ND98, 콜레스테롤, 및 PEG-세라미드 C16으로 구성된 리피도이드 제형이다.
대략 40시간 후, 마우스를 200μl의 케타민으로 마취한 후, 우측 이자 동맥을 꺼내어 방혈하였다. 백혈구를 분리하고 혈장을 분리하여 검정할 때까지 -80℃에 저장하였다. 간 조직을 수집하고, 급속 동결시키고 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다.
치료 효능을 (i) 투여 후 48시간째에 간에서 TTR mRNA의 측정, 및 (ii) 사전 채혈시 및 투여 후 48시간째에 혈장내 TTR 단백질의 측정으로 평가하였다. TTR 간 mRNA 수준을 측쇄 DNA 검정 - QuantiGene 2.0[제조원: 파노믹스(Panomics) 제품 번호: QS0011]을 이용하여 검정하였다. 요약하면, 마우스 간 시료를 분쇄하고 조직 용해물을 제조하였다. 간 용해 혼합물(20mg/ml의 최종 농도에 대해 1 용적의 용해 혼합물, 2 용적의 뉴클레아제가 없는 물 및 10μl의 프로테이나제-K/ml의 혼합물)을 65℃에서 35분 동안 항온처리하였다. 이어서, 20μl의 작업 프로브 세트(유전자 표적에 대해 TTR 프로브 및 내인성 대조군에 대해 GAPDH) 및 80μl의 조직-용해물을 포획 플레이트에 가하였다. 포획 플레이트를 55℃±1℃(대략 16 내지 20시간)에서 항온처리하였다. 다음 날, 포획 플레이트를 1X 세척 완충액(뉴클레아제가 없는 물, 완충액 성분 1 및 세척 완충액 성분 2)으로 3회 세척한 후, 1분 동안 240g에서 원심분리하여 건조시켰다. 100μl의 예비-증폭기 작업 시약을 포획 플레이트에 가하고, 이를 알루미늄 호일로 밀봉하여 1시간 동안 55℃±1℃에서 항온처리하였다. 1시간 항온처리한 후, 세척 단계를 반복한 후, 100μl의 증폭기 작업 시약을 가하였다. 1시간 후, 세척 및 건조 단계를 반복하고, 100μl의 표지 프로브를 가하였다. 포획 플레이트를 50℃±1℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이후에, 플레이트를 1X 세척 완충액으로 세척하고, 건조시키고 100μl의 기질을 포획 플레이트에 가하였다. 포획 플레이트를 5 내지 15분 항온처리한 후 스펙트라맥스 루미노미터를 사용하여 판독하였다. bDNA 데이터는 각각의 3개 시료로부터의 평균 배경을 감하고, 수득되는 3개의 GAPDH(대조군 프로브) 및 TTR(실험 프로브) 값을 평균을 낸 후, 비율: (실험 프로브 - 배경)/(대조군 프로브 - 배경)을 계산하였다.
TTR 혈장 수준을 시판되는 키트 "AssayMax Human Prealbumin ELISA Kit"[제조원: 어세이프로(AssayPro), 미주리주 세인트 찰스 소재, 제품 번호 EP3010-1]를 이용하여 제조업자의 안내에 따라 검정하였다. 요약하면, 마우스 혈장을 1X 혼합 희석물 중에 1:10,000으로 희석하고 예비-피복된 플레이트에 키트 표준물과 함께 가하고, 2시간 동안 실온에서 항온처리한 후 키트 세척 완충액으로 5회 세척하였다. 50 μl의 바이오티닐화된 예비알부민 항체를 각각의 웰에 가하고 1시간 동안 실온에서 항온처리한 후 세척 완충액으로 5X 세척하였다. 50μl의 스트렙타비딘-퍼옥시다제 접합체를 각각의 웰에 가하고 플레이트를 실온에서 30분 동안 항온처리한 후 앞서 기술한 바와 같이 세척하였다. 반응을 50μl/웰의 색소원 기질을 첨가하고 50μl/웰의 정지 용액을 첨가함으로써 반응을 정지시키면서 실온에서 10분 동안 항온처리하여 진행시켰다. 450nm에서의 흡광도는 베르사맥스 마이크로플레이트 판독기(Versamax microplate reader)(제조원: 몰레큘러 디바이스, 캘리포니아주 서니베일 소재) 상에서 판독하고 데이터를 Softmax 4.6 소프트웨어 패키지(제조원: 몰레큘러 디바이스)를 사용하여 분석하였다.
LNP01-18324 및 LNP01-18328은 간 TTR mRNA(도 4a) 및 혈장 TTR 단백질(도 4b) 수준을 IV 일시 투여에 의해 투여량-의존적 방식으로 감소하는 것으로 밝혀졌다. LNP01-18328의 mRNA ED50은 약 1 mg/kg으로 측정된 반면, LNP01-18324의 ED50은 약 2 mg/kg인 것으로 측정되었다. 6 mg/kg에서 대조군, LNP01-1955는 PBS 그룹과 비교하여, 간 TTR mRNA 수준에 현저히 영향을 미치지 않았으므로, LNP01-18324 및 LNP01-18328의 효과는 특이적이었다. LNP01-18324 및 LNP01-18328은 PBS 그룹과 비교하여 혈장 TTR 단백질 수준을 TTR mRNA 수준에서와 유사한 효능으로 감소시켰다. 3 mg/kg에서, LNP01-18246은 간 TTR mRNA 수준을 3 mg/kg의 LNP01-18324 또는 LNP01-18328보다 훨씬 적은 수준으로 감소시켰다.
이들 결과는, 정맥내 일시주사에 의해 투여된, LNP01-18324 및 LNP01-18328이 유전자도입 마우스 간에 의해 발현된 사람 TTR mRNA를 실질적으로 감소시키며, 이는 순환시 사람 TTR 단백질의 감소를 일으킴을 입증한다.
실시예 5. SNALP -18324 및 SNALP -18328에 의한 비-사람 영장류 간에서 야생형 TTR mRNA 의 생체내 감소
간 TTR mRNA 수준에 있어서 비-사람 영장류내 TTR siRNA AD-18324 및 AD-18328의 효능을 평가하기 위해서, siRNA를 SNALP로 제형화하고 15분 정맥내 주입으로 투여하였다. 사이노몰거스 원숭이[마카카 파스키쿨라리스(Macaca fascicularis)(2 내지 5 kg, 그룹당 3 마리)에게 SNALP-18324 (0.3, 1.0 또는 3.0 mg/kg), SNALP-18328(0.3, 1 또는 3 mg/kg), 또는 SNALP-1955(3 mg/kg, 비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955 사용)를 15분 정맥내 주입으로 투여하였다. 투여 후 48시간째에, 원숭이를 나트륨 펜토바르비탈로 마취시키고 방혈하였다. TTR mRNA 측정을 위한 간 조직을 수집하고, 급속동결시키고 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다.
간에서의 TTR mRNA 수준을 통상의 설계된 측쇄 DNA 검정을 사용하고, QuantiGene1.0 기술을 이용하여 검정하였다. 요약하면, 원숭이 간 시료를 분쇄하고 조직 용해물을 제조하였다. 간 용해 혼합물(20mg/ml의 최종 농도에 대해 1 용적의 분해 화합물, 2 용적의 뉴클레아제가 없는 물, 및 10μl의 프로테이나제-K/ml)을 65℃에서 35분 동안 항온처리하였다. 이후에, 20μl의 작업 프로브 세트(유전자 표적의 경우 TTR 프로브 및 내인성 대조군의 경우 GAPDH) 및 80μl의 조직-용해물을 포획 플레이트내로 가하였다. 포획 플레이트를 55℃±1℃(대략 16 내지 20시간)에서 항온처리하였다. 다음 날, 포획 플레이트를 1X 세척 완충액(뉴클레아제가 없는 물, 완충액 성분 1 및 세척 완충액 성분 2)으로 3회 세척한 후, 1분 동안 240g에서 원심분리하여 건조시켰다. 100μl의 예비-증폭기 작업 시약을 포획 플레이트에 가하고, 이를 알루미늄 포일로 밀봉하고 1시간 동안 55℃±1℃에서 항온처리하였다. 1시간 항온처리한 후, 세척 단계를 반복한 후, 100μl의 증폭기 작업 시약을 가하였다. 1시간 후, 세척 및 건조 단계를 반복하고, 100μl의 표지 프로브를 가하였다. 포획 플레이트를 50℃±1℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이후에, 플레이트를 1X 세척 완충액으로 세척하고 건조시킨 후, 100μl의 기질을 포획 플레이트내로 가하였다. 포획 플레이트를 5 내지 15분 항온처리한 후 스펙트라맥스 루미노미터를 사용하여 판독하였다. bDNA 데이터는 (i) 3중 시료 각각으로부터의 평균 배경을 감하고, (ii) 수득되는 GAPDH(대조군 프로브) 및 TTR(실험 프로브) 값을 평균을 낸 후, (iii) 비율: (실험 프로브 - 배경)/(대조군 프로브 - 배경)를 취함으로써 분석하였다.
결과는 도 5에 나타낸다. SNALP-18324 및 SNALP-18328은 음성 대조군 SNALP-1955와 비교하여, 간에서 TTR mRNA 수준을 투여량-의존적 방식으로 감소시켰다. SNALP-18328 및 SNALP-18324의 mRNA ED50은 각각 약 0.3 및 약 1 mg/kg인 것으로 측정되었다.
이들 결과는, SNALP-18324 및 SNALP-18328이 정맥내 주입에 의해 투여되는 경우 비-사람 영장류 간에서 야생형 TTR mRNA를 억제하는데 효과적임을 입증한다.
실시예 6. 유전자도입 마우스에서 SNALP -18328에 의한 돌연변이( V30M ) TTR mRNA 및 단백질의 생체내 감소
간에서 돌연변이(V30M) TTR mRNA에 대한 TTR siRNA AD-18328 및 혈청에서 돌연변이(V30M) TTR 단백질의 효능을 평가하기 위하여, AD-18328을 SNALP로 제형화하여 정맥내 일시주사에 의해 V30M hTTR 유전자도입 마우스에 투여하였다. 8 내지 12주령 V30M hTTR 유전자도입 마우스(5마리 동물/그룹)에 200μl의 SNALP-18328(0.03, 0.3 또는 3 mg/kg), SNALP-1955 (3 mg/kg, 비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955 함유), 또는 PBS를 정맥내(IV) 투여하였다. 사용된 마우스는 무스 무스쿨루스(Mus musculus) 계통 H129-hTTR KO[공급원: 인스티튜트 오브 몰레큘러 앤드 셀룰러 바이올로지(Institute of Molecular and Cellular Biology), 포르투갈 포토 소재]이었다. 요약하면, hTTR H129 유전자도입 마우스를 H129 내인성 TTR KO 마우스와 교배하였다[널(null) 마우스 TTR 배경에서, H129-hTTR 유전자도입 마우스를 생성하기 위한 널 마우스(참조: Maeda, S., (2003), Use of genetically altered mice to study the role of serum amyloid P component in amyloid deposition. Amyloid Suppl. 1, 17-20.)].
주사한 후 48시간 째에, 모든 5개의 처리 그룹내 동물에게 치사 투여량의 케타민/크실라진을 제공하였다. 혈청 시료를 수집하고 분석할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직을 수집하고, 급속동결시키고 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다.
TTR mRNA 정량은, 동결된 간 조직을 분말로 분쇄하여, 용해물을 제조하였다. GAPDH mRNA의 수준에 대한 TTR mRNA 수준을 용해물 중에서 측쇄 DNA 검정[제조원: 퀀티젠 리에이전트 시스템(QuantiGene Reagent System), 캘리포니아주 프레몬트 파노믹스 소재]을 사용하여 측정하였다. 요약하면, Quantigene 검정[제조원: 지노스펙트라(Genospectra)]을 사용하여 제조업자의 지시에 따라 조직 시료 용해물 중 mRNA 수준을 정량하였다. TTR mRNA의 평균 수준을 각각의 시료에 대해 GAPDH mRNA의 평균 수준에 대해 표준화하였다. 이후에, 표준화된 값의 그룹 평균을 PBS 처리된 그룹에 대한 평균값에 대해 추가로 표준화하여, TTR mRNA 발현의 상대 수준을 수득하였다.
TTR 단백질 정량을 위해, 혈청을 어세이프로(AssayPro)(미주리주 세인트 찰스 소재) 어세이맥스 프리알부민 ELISA 키트를 사용하여 제조업자의 프로토콜에 따라 검정하였다.
결과를 mRNA 및 혈청 단백질 각각에 대해 도 6a 및 도 6b에 나타낸다. SNALP-18328 처리된 V30M hTTR 유전자도입 마우스는 PBS 대조군 그룹과 비교하여 간 TTR mRNA 수준에서 투여량-의존적 및 중요한 감소를 가졌으며, 3 mg/kg SNALP-18328에서 97% (p < 0.001)의 최대 감소, 및 약 0.15 mg/kg SNALP-18328에서 50% 감소 (ED50)에 도달하였다. 혈청 TTR 단백질은 또한 투여량-의존적 방식으로, 3 mg/kg의 SNALP-18328에서 TTR mRNA 수준에 있어서의 감소와 일치하게 99%(p < 0.01)(예비-투여량 수준과 비교하여)의 혈청 TTR 단백질의 최대 감소로 억제하였다. 3 mg/kg에서 SNALP-1955는 PBS와 비교하여, TTR mRNA 또는 단백질 수준에 통계학적으로 중요한 효과를 가지지 않았다.
이들 결과는, SNALP-18328이 정맥내 투여되는 경우 유전자도입 마우스 간에서 돌연변이 V30M TTR mRNA를 억제하는데 있어 활성이며, 이는 순환시 돌연변이 V30M TTR 단백질의 감소를 일으킴을 입증한다.
실시예 7. 유전자도입 마우스에서 SNALP -18328에 의한 TTR mRNA 및 단백질 억제의 지속성
SNALP-18328에 의한 TTR mRNA 단백질 억제의 지속성을 평가하기 위해서, AD-18328을 SNALP로 제형화하여 V30M hTTR 유전자도입 마우스에 정맥내 일시주사에 의해 투여하였다. 투여 후 다양한 시점에서, 간 TTR mRNA 수준 및 혈청 TTR 단백질 수준을 정량하였다. 8 내지 12주령의 V30M hTTR 유전자도입 마우스(4마리 동물/그룹)에게 200 ml의 SNALP-18328(1 mg/kg) 또는 SNALP-1955(1 mg/kg, 비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955 함유)을 정맥(IV)내 투여하였다. 사용된 마우스는 무스 무스쿨루스 계통 H129-hTTR KO[공급원: 인스티튜트 오브 몰레큘러 앤드 셀룰러 바이올로지, 포르투갈 포르토 소재)이었다. 요약하면, hTTR H129 유전자도입 마우스를 H129 내인성 TTR KO 마우스[널 마우스 TTR 배경(참조: Maeda, S., (2003), Use of genetically altered mice to study the role of serum amyloid P component in amyloid deposition. Amyloid Suppl. 1, 17-20)에서, H129-hTTR 유전자도입 마우스를 생성하기 위한 널 마우스]와 교배하였다. 투여 후 3, 8, 15 또는 22일째에, 치료 그룹 둘다의 동물에게 치사 투여량의 케타민/크실라진을 제공하였다. 혈청 시료를 수집하고 분석할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직을 수집하고, 급속동결시키고 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다.
TTR mRNA 정량을 위해, 동결된 간 조직을 분말로 분쇄하고, 용해물을 제조하였다. GAPDH mRNA의 수준과 비교하여 TTR mRNA 수준을 용해물에서 측쇄 DNA 검정(공급원: 퀀티젠 리에이전트 시스템, 캘리포니아주 프레몬트 파노믹스 소재)을 사용함으로써 측정하였다. 요약하면, QuantiGene 검정(공급원: 제노스펙트라)를 사용하여 조직 시료 용해물내 mRNA 수준을 제조업자의 지시에 따라 정량하였다. TTR mRNA의 평균 수준을 각각의 시료에 대해 GAPDH mRNA의 평균 수준으로 표준화하였다. 이어서, 표준화된 값의 그룹 평균을 PBS 처리된 그룹에 대한 평균 값에 대해 추가로 표준화하여, TTR mRNA 발현의 상대적인 수준을 수득하였다.
TTR 단백질 정량을 위해, 혈청을 어세이프로(미주리주 세인트 찰스 소재) 어세이맥스 프리알부민 ELISA 키트를 사용하여 제조업자의 프로토콜에 따라 검정하였다.
결과를 간 mRNA 및 혈청 단백질 각각에 대해 도 7a 및 도 7b에 나타낸다. hTTR V30M 유전자도입 마우스에서 SNALP-18328의 단일 정맥내 일시 투여는 간에서 TTR mRNA 수준 및 혈청에서 TTR 단백질 수준의 장기간 억제를 일으켰다. 대조군 그룹(1mg/ml SNALP-1955)과 비교하여, 1mg/kg에서 SNALP-18328의 단일 정맥내 투여는 투여 후 3, 8, 15 및 22일째에 상대적인 TTR mRNA 수준을 각각 96% (p < 0.001), 90%(p < 0.001), 82%(p < 0.001) 및 73%(p < 0.001)까지 상당히 감소시켰고, 연구 말기(투여 후 22일째)에 기본선 수준으로 회복되지 않았다. 단백질 수준은 또한 투여 후 3일째에 97%(p < 0.001)(SNALP-1955와 비교하여)의 혈청 TTR의 최대 감소로 감소하였다. 투여 후 8, 15, 및 22일째에, TTR 단백질 수준은 SNALP-1955와 비교하여 각각 72%(p < 0.05), 32%(p < 0.05), 및 40%(p < 0.001)까지 억제되었다.
이들 결과는, SNALP-18328의 단일 정맥내 투여가 투여 후 22일째에 간 TTR mRNA 및 혈청 TTR 단백질 둘다에 있어서 상당한 감소와 함께, V30M hTTR 유전자도입 마우스에서 표적 간 mRNA 및 혈청 단백질 수준을 지속적으로 억제함을 입증한다.
실시예 8. 비-사람 영장류에서 SNALP -18328에 의한 혈청 TTR 단백질 억제의 지속성
SNALP-18328에 의한 혈청 TTR 단백질 억제의 지속성을 평가하기 위하여, AD-18328을 SNALP로 제형화하고 비-사람 영장류에게 정맥내 주사로 투여하였다. 투여 후 다양한 시점에서, 혈청 TTR 단백질 수준을 정량하였다.
사이노몰거스 원숭이[마카카 파스키쿨라리스(Macaca fascicularis)](SNALP-18328 그룹의 경우 n= 5마리 동물/그룹 및 SNALP-1955 및 PBS 그룹의 경우 n = 3마리 동물/그룹)에게 SNALP-18328 (0.3, 1 또는 3 mg/kg), SNALP-1955 (3　mg/kg)의 15분 정맥내 주입을 비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955, 또는 PBS와 함께 투여하였다. 투여 단계의 0, 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 및 14일째에, 혈청 시료를 수집하여 분석할 때까지 -80℃에서 저장하였다.
웨스턴 블롯 검정을 사용하여 혈청 시료중 TTR 단백질 수준을 평가하였다. 각각의 그룹으로부터의 혈청 시료를 혼주하고 램믈리 시료 완충액(Laemmli sample buffer)(β-머캅토에탄올을 1:20 희석으로 가하였다)으로 1:1 희석하였다. 시료를 95℃에서 10분 동안 가열하였다. 12.5μl의 각각의 시료를 10 내지 20%의 크리테리온(Criterion)[제조원: 바이오라드(Biorad), 캘리포니아주 헤르쿨레스 소재] 제조 겔의 각각의 레인에서 로딩하고 SDS-PAGE에 의해 120V에서 1.5시간 동안 분리한 다음, 15V에서 1시간 동안 반-건조 시스템을 사용하여 니트로셀룰로즈 막에 이전하였다. 막을 밤새 4℃에서 1X PBS로 1:1 희석된 LiCOR[제조원: 링컨(Lincoln), 네바다주 소재] 차단 완충액 중에서 밤새 차단하였다. 블롯을 우선 제1 항체[염소 항-TTR(공급원: 산타 크루즈(Santa Cruz), 캘리포니아주 산타 크루즈 소재]를 사용하여 LiCOR 차단 완충액/PBS 중에서 희석시킨 1:1000의 희석에서 로커(rocker) 상에서 1시간 동안 실온으로 프로브하였다. 블롯을 PBS + 0.2% 트윈 20(10분/세척)으로 4회 세척하였다. 형광성 표지된 제2 항체(항-염소 680nm, 공급원: 인비트로겐(캘리포니아주 칼스바드 소재)를 LiCOR 차단 완충액/PBS 중에 1:10,000의 희석에서 가하고 블롯을 1시간 동안 실온에서 항온처리하였다. 항온처리 후, 블롯을 PBS + 0.2% 트윈 20으로 4회에 이어서 1X PBS로 1회 세척하였다. Li-COR의 오디세이 적외선 영상 시스템(Odyssey Infrared Imaging System)을 사용하여 단백질 밴드를 검출하였다. TTR 단량체는 15 kDa에서 이동한다.
결과는 도 8에 나타낸다. 혈청 TTR 단백질 수준은 예비-투여량(0일째) 수준과 비교하여 1 또는 3 mg/kg의 SNALP-18328의 투여량-의존적인 감소를 나타내었다. SNALP-18328의 단일 정맥내 투여에 이은 억제 지속기간은 1 또는 3 mg/kg의 SNALP-18328 처리 후 적어도 14일이다.
이들 결과는, SNALP-18328의 단일 정맥내 투여가 투여 후 14일째에 TTR 단백질의 현저한 감소와 함께, 비-사람 영장류(마카카 파스키쿨라리스)에서 순환시 TTR 단백질의 지속적인 억제를 일으킴을 입증한다.
실시예 9: 유전자도입 마우스에서 SNALP -18328에 의한 말초 조직내 돌연변이 (V30M) TTR 의 생체내 감소
말초 조직에서 TTR을 감소시키는데 있어서 SNALP-18328의 효능을 평가하기 위해서, hTTR V30M/HSF-1 녹-아웃 마우스를 TTR에 대한 면역조직화학 염색으로 평가하였다. 2월령 hTTR V30M/HSF-1 녹-아웃 마우스[참조: Maeda, S., (2003), Use of genetically altered mice to study the role of serum amyloid P component in amyloid deposition. Amyloid Suppl. 1, 17-20]에 3 mg/kg SNALP-18328(12마리의 동물), 3 mg/kg SNALP-1955(비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955, 4마리 동물), 또는 PBS(4마리 동물)의 정맥내 일시주입을 총 4회의 투여량에 대해 매 2주에 1회씩 0, 14, 28, 및 42일째에 투여하였다. 다수의 말초 조직내 TTR 간 mRNA 수준 및 TTR-면역반응성을 56일째에 처음 투여 후 8주에 평가하였다.
마우스를 1 mg/kg의 메데토미딘으로 마취시키고, 치사 투여량의 케타민을 제공하였다. 목적한 조직 및 기관을 수집하였다. 면역조직화학을 위해, 식도(E), 위(S), 장[회장(I1) 및 결장(I4)], 신경(N) 및 후근절(D)을 중성의 완충된 포르말린 중에 고정시키고 파라핀에 봉매(embedding)하였다. TTR 검출을 위해, 토끼 항-사람 TTR 1차 항체[1:1000, 제조원: 다코(DAKO), 덴마크 소재], 및 항-토끼 바이오틴-접합된 제2 항체[1:20, 제조원: 시그마(Sigma), 미국 소재]를 엑스트라비딘 표지(1:20, 제조원: 시그마, 미국 소재)에 의해 수행하여 TTR 단백질을 염색하였다. 반응물을 3-아미노-9-에틸 카박솔, AEC(제조원: 시그마, 미국 소재)로 발색시켰다. 면역조직화학 슬라이드의 반-정량적 분석을 기질 반응 색상에 의해 점유된 부위를 측정하고 이 값을 총 영상 부위에 대해 표준화하는 스키온 영상 콴트 프로그램(Scion image quant program)을 사용하여 수행하였다. 점유된 부위%의 평균 값을 상응하는 표준 편차와 함께 나타낸다. 각각의 동물 조직을 4개의 상이한 부위에서 평가하였다. 위 및 장의 부교감신경절내 사람 TTR의 존재를 토끼 항-사람 TTR(1:1000, 제조원: 다코, 덴마크 소재) 및 마우스 항-PGP9.5[1:40, 제조원: 세로텍(Serotec), 미국 소재]를 1차 항체로서; 및 각각 항-토끼 Alexa Fluor 488(제조원: 몰레큘러 프로브스, 영국 소재) 및 염소 항-마우스 Alexa Fluor 568(제조원: 몰레큘러 프로브스, 영국 소재)인 제2 항체를 사용하여 이중 면역형광성 염색으로 연구하였다. 슬라이드를 벡타쉴드(vectashield)[제조원: 벡터(Vector)] 위에 놓고 FITC 및 로다민용 여과기가 장착된 차이스 셀 관찰자 시스템 현미경(Zeiss Cell Observer System microscope)[제조원: 칼 차이스(Carl Zeiss), 독일 소재]에서 가시화하였다.
결과는 도 9에 그래프로 표시한다. PBS 및 SNALP-1955 처리된 동물과 대조적으로, SNALP-18328 처리된 동물은 시험한 모든 조직[식도(E), 위(S), 장(회장(I1) 및 결장(I4)), 신경(N) 및 후근절(D)]에서 TTR-면역반응성이 상당히 감소되었다.
이들 결과는, hTTR V30M/HSF-1 녹-아웃 마우스에 SNALP-18328 투여가 식도, 위, 장(회장 및 결장), 신경 및 후근절을 포함하는 말초 조직 및 기관에서 TTR 단백질을 상당히 감소시킴을 입증한다.
실시예 10. XTC - SNALP -18328에 의한 비-사람 영장류 간에서 야생형 TTR mRNA 의 생체내 감소
비-사람 영장류에서 siRNA의 전달을 위한 신규한 지질 나노입자 제형 XTC-SNALP의 효능을 평가하기 위하여, TTR siRNA AD-18328을 XTC-SNALP (XTC-SNALP-18328)로 제형화하고 15분 정맥내 주입에 의해 투여하고 간 TTR mRNA를 정량하였다. 사이노몰거스 원숭이(마카카 파스키쿨라리스)에게 XTC-SNALP-18328(0.03, 0.1, 0.3 또는 1 mg/kg) 또는 XTC-SNALP-1955(1 mg/kg, 비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955 함유)의 15분 정맥내 주입을 투여하였다. 투여 후 48시간 때에, 원숭이를 나트륨 펜토바르키탈로 마취시키고 방혈하였다. TTR mRNA 측정을 위한 간 조직을 수집하고, 급속 동결시키고, 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직에서 TTR mRNA 정량에 사용된 방법은 상기 실시예 5에 기술된 것과 유사하다.
결과는 도 10에 나타낸다. XTC-SNALP-18328은 간에서 TTR mRNA 수준을, 음성 대조군 XTC-SNALP-1955와 비교하여, 투여량-의존적 방식으로 감소시켰다. mRNA ED50은 약 0.1 mg/kg XTC-SNALP-18328인 것으로 측정되었다.
이들 결과는, XTC-SNALP-18328이 정맥내 주입으로 투여된 경우 비-사람 영장류 간에서 야생형 TTR mRNA를 억제하는데 효과적임을 입증한다.
실시예 11: LNP09 -18328 및 LNP11 -18328에 의한 비-사람 영장류 간에서 야생형 TTR mRNA 의 생체내 감소
비-사람 영장류에서 siRNA의 전달을 위한 2개의 신규한 지질 나노입자 제형, LNP09 및 LNP11의 효능을 평가하기 위하여, TTR siRNA AD-18328을 LNP09 (LNP09-18328) 또는 LNP11(LNP11-18328)로 제형화하고, 15분 정맥내 주입으로 투여하며, 간 TTR mRNA 및 혈청 TTR 단백질 수준을 검정하였다. 사이노몰거스 원숭이(마카카 파스키쿨라리스)에게 LNP09-18328(0.03, 0.1, 또는 0.3 mg/kg), LNP11-18328(0.03, 0.1, 또는 0.3 mg/kg), 또는 PBS를 15분 정맥내 주입으로 투여하였다. 간 생검 시료를 투여 후 48시간째에 수집하고 급속 동결하고 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 혈청을 투여 전(사전 채혈) 및 투여 후 1, 2, 4, 7, 14, 21 및 28일째에 수집하고 가공할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직에서 TTR mRNA 정량 및 혈청 TTR 단백질 평가를 위해 사용된 방법은 상기 실시예 5 및 8에 기술된 것과 유사하였다.
결과는 mRNA의 경우 도 11a에, 및 단백질의 경우 도 11b 및 도 11c에 나타낸다. LNP09-18328 및 LNP11-18328 처리된 동물은 간에서 TTR mRNA 수준의 투여량-의존적인 감소를 나타내었으며 PBS 대조군과 비교하여, 0.3 mg/kg에서 약 85%(LNP09-18328) 및 약 90%(LNP11-18328) mRNA의 최대 감소에 도달하였다. mRNA ED50은 LNP09-18328 및 LNP11-18328 둘다에 대해 약 0.02 mg/kg인 것으로 측정되었다. 투여 후 7일째에, 혈청 시료는 또한 PBS 대조군 수준과 비교하여, 0.1 및 0.3 mg/kg LNP09-18328 및 LNP11-18328에 대해 TTR 단백질의 투여량-의존적 감소를 나타내었다. 도 11c는 PBS 대조군 그룹과 비교하고 사전 채혈 시료와 비교할 때, 투여 후 적어도 28일에 걸쳐 지속되는 LNP09-18328의 TTR 단백질 수준에 있어 0.3mg/kg 투여량의 감소를 나타낸다.
이들 결과는, 정맥내 주입으로 투여하는 경우, LNP09-18328 및 LNP11-18328이 비-사람 영장류 간에서 야행형 TTR mRNA 및 순환시 야생형 TTR 단백질을 억제하는데 효과적임을 입증한다. 또한, LN09-18328을 사용한 억제는 정맥내 주입에 이어 적어도 28일 동안 지속하는 지속성이 있다.
실시예 12. TTR 타일드 ( tiled ) 서열의 합성
NM_000371.3의 628번 뉴클레오타이드에서 출발하는 사람 TTR 유전자를 표적화하는, AD-18328의 표적 영역 근처의 TTR 유전자를 표적화한 TTR 듀플렉스["타일드 듀플렉스(tiled duplex)"]의 세트를 설계하였다.
하기 실시예에서, 전사체 상의 siRNA의 5' 염기의 위치를 나타내는 번호매김은 NM_000371.3(도 12; 서열번호 1331)을 기초로 한다. 상기 나타낸 실시예에서, 사람 siRNA를 표적화하는 siRNA에 대한 번호매김은 NM_000371.2(도 13a)을 기초로 하였다. NM_000371.3은 도 14에 나타낸 바와 같이, NM_000371.2와 비교하여 5' UTR의 서열을 110개 염기까지 연장한다. 따라서, 예로서, AD-18328의 출발 위치는 NM_000371.3에서 628번 및 NM_000371.2에서 518번이다(도 14).
TTR 타일드 서열을 머메이드(MerMade) 192 합성기 상에서 1μmol 규모로 합성하였다. 목록의 모든 서열에 대해, '엔도라이트(endolight)' 화학을 하기 상세한 바와 같이 적용하였다.
● 센스 쇄내 모든 피리미딘(사이토신 및 우리딘)은 2'-O-메틸 염기(2' O-메틸 C 및 2'-O-메틸 U)를 함유하였다.
● 안티센스 쇄에서, 리보 A 뉴클레오사이드에 (5' 위치를 향해) 인접한 피리미딘을 이들의 상응하는 2-O-메틸 뉴클레오사이드로 대체하였다.
● 센스 및 안티센스 서열 둘다의 3' 말단에서 2개의 염기 dTdT 연장부를 도입하였다.
● 서열 파일을 텍스트 파일로 변환시켜 이것이 머메이드 192 합성 소프트웨어에서의 로딩에 적합하도록 하였다.
합성, 절단 및 탈보호 :
TTR 서열의 합성은 포스포르아미다이트 화학을 사용하는 고체 지지된 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하였다. 서열의 합성은 96 웰 플레이트에서 1μm 규모로 수행하였다. 아미다이트 용액을 0.1M 농도로 제조하고 에틸 티오 테트라졸(아세토니트릴 중 0.6M)을 활성화제로 사용하였다. 합성된 서열을 절단하고 96웰 플레이트에서 제1 단계에서 메틸아민을 사용하고 제2 단계에서 플루오라이드 시약을 사용하여 탈보호하였다. 조 서열을 아세톤:에탄올(80:20) 혼합물을 사용하여 침전시키고 펠릿을 0.2M 아세트산나트륨 완충액 중에 재현탁시켰다. 각각의 서열로부터의 시료를 LC-MS로 분석하여 동일성을 확인하고 UV로 정량을 분석하며, 선택된 시료 세트를 IEX 크로마토그래피하여 순도를 측정하였다.
정제 및 탈염 :
TTR 타일드 서열을 소스(Source) 15Q 컬럼을 사용하는 AKTA 익스플로러 정제 시스템상에서 정제하였다. 65℃의 컬럼 온도를 정제 동안 유지하였다. 시료 주사 및 수집은 96 웰(1.8mL-깊이 웰) 플레이트에서 수행하였다. 완전한 길이의 서열에 상응하는 단일 피크를 용출물 중에 수집하였다. 정제된 서열을 AKTA 정제기를 사용하여 세파덱스 G25 컬럼상에서 탈염시켰다. 탈염된 TTR 서열을 농도(A260에서 UV 측정에 의해) 및 순도(이온 교환 HPLC에 의해)에 대해 분석하였다. 이후에, 일본쇄를 어닐링을 위해 제출하였다.
TTR 일본쇄 및 듀플렉스 :
TTR 타일드 듀플렉스 및 상응하는 일본쇄(센스 및 안티센스)의 상세한 목록은 하기 표에 나타낸다(표 13).
Figure 112019100859120-pat00051
Figure 112019100859120-pat00052
실시예 13. TTR 타일드 siRNA 의 시험관내 스크리닝
타일드 TTR 듀플렉스를 실시간 PCR 검정을 사용하여 내인성 TTR 발현의 억제에 대해 Hep3B 세포에서 분석하였다.
세포 배양 및 형질감염: Hep3B 세포(ATCC, 버지니아주 마나사스 소재)를 37℃에서 5% CO2의 대기 중에서 10% FBS, 스트렙토마이신 및 글루타민(ATCC)이 보충된 이글스 최소 필수 배지(Eagle's Minimum Essential Medium: EMEM, ATCC) 중에서 컨플루언스 근처까지 성장시킨 후 트립신처리하여 플레이트로부터 방출시켰다. 역 형질감염은 5μl의 Opti-MEM을 96-웰 플레이트의 개개 웰 중 5μl의 각각의 siRNA에 가하여 수행하였다. 여기에 10μl의 Opti-MEM 및 0.2μl의 리포펙타민 RNAiMax를 웰(제조원: 인비트로겐, 캘리포니아주 칼스바드 소재, 제품 번호: 13778-150)당으로 가하고 혼합물을 실온에서 15분 동안 항온처리하였다. 위에서 기술한 바와 같으나 2.0 x104 Hep3B 세포를 함유하는 항생제가 함유되지 않은 80μl의 완전 성장 배지를 이후에 가하였다. 세포를 24시간 동안 항온처리한 후 RNA 정제하였다. 실험을 0.1 또는 10nM의 최종 듀플렉스 농도에서 수행하였다.
MagMAX-96 총 RNA 분리 키트(제조원: 어플라이드 바이오시스템스, 캘리포니아주 포스터 시티 소재, 부품 번호: AM1830)를 사용한 총 RNA 분리: 세포를 수거하여 140μl의 용해/결합 용액 중에 용해한 후 1분 동안 850rpm에서 에펜도르프 열혼합기(Eppendorf Thermomixer)(혼합 속도는 과정 전체에서 동일하였다)를 사용하여 혼합하였다. 20μl의 자기 비드 및 용해/결합 증진제 혼합물을 세포-용해물에 가하고 5분 동안 혼합하였다. 자기 비드를 자기 스탠드를 사용하여 포획하고 상청액을 비드를 교란하지 않으면서 제거하였다. 상청액을 제거한 후, 자기 비드를 세척 용액 1(이소프로판올 첨가됨)로 세척하고 1분 동안 혼합하였다. 비드를 다시 포획하고 상청액을 제거하였다. 이후에, 비드를 150μl의 세척 용액 2(에탄올 첨가됨)로 세척하고, 포획하고 상청액을 제거하였다. 이후에, 50μl의 DNase 혼합물[맥맥스 터보 DNase 완충액(MagMax turbo DNase Buffer) 및 터보 DNase(Turbo DNase)]를 비드에 가하고 이들을 10분 내지 15분 동안 혼합하였다. 혼합한 후, 100μl의 RNA 재결합 용액을 가하고 3분 동안 혼합하였다. 상청액을 제거하고 자기 비드를 150μl의 세척 용액 2로 다시 세척하고 1분 동안 혼합하고 상청액을 완전히 제거하였다. 자기 비드를 2분 동안 혼합하여 건조시킨 후 RNA를 50μl의 물로 용출시켰다.
ABI 고 용량 cDNA 역 전사 키트(High capacity cDNA reverse transcription kit)(제조원: 어플라이드 바이오시스템스, 캘리포니아주 포스터 시티 소재, 제품번호 4368813)를 사용한 cDNA 합성: 반응물 당 2μl의 10X 완충액, 0.8μl의 25X dNTP, 2μl의 무작위적인 프라이머, 1μl의 역전사효소, 1μl의 RNase 억제제 및 3.2μl의 H2O의 마스터 혼합물을 10μl의 총 RNA에 가하였다. cDNA를 바이오-라드(Bio-Rad) C-1000 또는 S-1000 열 순환기[제조원: 헤르쿨스(Hercules), 캘리포니아주 소재]를 사용하여 다음 단계를 통해 생성시켰다: 25℃에서 10분, 37℃에서 120분, 85℃에서 5초, 4℃에서 유지.
실시간 PCR: 2μl의 cDNA를 웰당 0.5μl의 GAPDH 태크만 프로브(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 제품번호 4326317E), 0.5μl의 TTR 태그만 프로브(제조원: 어플라이드 바이오시스템스 제품번호 HS00174914 M1) 및 10μl의 로슈 프로브 마스터 믹스(Roche Probes Master Mix)[제조원: 로슈(Roche) 제품 번호 04887301001]를 함유하는 마스터 혼합물에 라이트사이클러(LightCycler) 480 384 웰 플레이트(로슈 제품 번호 0472974001)에서 가하였다. 실시간 PCR을 라이트사이클러 480 실시간 PCR 기계(제조원: 로슈)에서 수행하였다. 각각의 듀플렉스를 2개의 독립된 형질감염에서 시험하고 각각의 형질감염을 2회 검정하였다.
실시간 데이터를 △△Ct 방법을 사용하여 분석하였다. 각각의 시료를 GAPDH 발현에 대해 표준화하고 녹다운을 비-표적화된 듀플렉스 AD-1955로 형질감염시킨 세포에 대해 평가하였다. 표 14는 siRNA를 사용한 TTR의 녹다운을 나타낸다. 데이터는 AD-1955로 표적화시킨 세포에 대해 잔류하는 전령의 비율로 나타낸다.
AD-18328의 표적 근처의 TTR을 표적화하는, 많지만 전부는 아닌 타일드 TTR-dsRNA는 0.1nM에서 Hep3B 세포내로 형질감염되는 경우, TTR mRNA를 적어도 70%까지 감소시켰다.
Figure 112019100859120-pat00053
실시예 14. 스프라그 - 다울리 래트에서 SNALP -18534의 단일 정맥내 투여의 효능에 있어서 주입 지속성의 평가
목적
당해 실시예의 목적은 스프라그-다울리 래트의 간 TTR mRNA 수준에서 SNALP-18534의 단일 정맥내 주입의 효능에 있어서의 주입 지속성의 효과를 평가하기 위한 것이다.
사용된 약어 및 정의
SNALP-18534 SNALP로 제형화된 설치류 트랜스티레틴 특이적인 siRNA
SNALP-1955 SNALP로 제형화된 비-포유동물 루시퍼라제 특이적인 siRNA
AD-18534의 센스 및 안티센스 쇄의 서열을 상기 표로부터 하기에 다시 나타낸다:
Figure 112019100859120-pat00054
연구 재료
시험 제품(들)
SNALP-18534는 표적 조직으로 전달하기 위한 안정한 핵산 지질 입자(SNALP)로 제형화된 설치류 TTR mRNA(AD-18534)를 표적화하는 siRNA로 구성된다. SNALP 제형(지질 입자)는 신규 아미노지질(DLinDMA), 페길화된 지질(mPEG2000-C-DMA), 중성 지질(DPPC) 및 콜레스테롤로 이루어져 있다. SNALP 제형에서 지질:핵산의 비는 대략 5.8:1(w:w)이다. SNALP-1955는 비-포유동물 루시퍼라제 mRNA를 표적화하는 siRNA를 함유하며, SNALP-18534와 동일한 지질 입자와 함께 제형화되고, 비-약리학적 활성 대조군으로서 제공된다. 투여량 수준은 siRNA 성분의 중량을 기준으로 mg/kg으로 표현된다.
연구 설계 및 과정
동물 및 시험 제품 투여:
연구는 스프라그-다울리 래트(4마리의 수컷/그룹)의 9개 그룹을 포함한다. 동물에게 연구 전에 적어도 2일간 순응 기간을 갖도록 하며 모든 동물은 투여 개시시에 7주령이었다. 투여되는 투여량은 1일째에 투여 전 수집된 체중 데이터를 근거로 계산하였다. 시험 및 대조군 제품을 1회 15분, 1시간, 2시간 또는 3시간 정맥내 주입으로 꼬리 정맥을 통해 27G 테루모 버터플라이 바늘(Terumo butterfly needle)을 통해 박스터(Baxter) AS40A 주사기 펌프에 연결된 박스터 주사 부위 사이막(Baxter Injuction Site septum)으로 밀봉된 24G¾" 캐뉼라를 사용하여 투여하였다. 투여량 용적은 3 ml/kg이고, 주입 속도는 12 ml/kg/시간이며, 동물은 투여동안 우리 안에서 자유로이 이동하도록 하였다. 래트를 9개 처리 그룹으로 나누고 표 16에 나타낸 바와 같이 SNALP-18534, SNALP-1955, 또는 PBS의 단일 정맥내 주입을 투여하였다:
Figure 112019100859120-pat00055
조직 수집 및 RNA 분리:
0일째에, 동물을 이소플루오란 흡입으로 마취시키고 투여전 혈액 시료를 혈청 분리기 관에 레트로-오비탈 채혈(retro-orbital bleed)에 의해 수집하였다. 혈액 시료가 실온에서 대략 30분 동안 응고되도록 한 후 4℃에서 원심분리하였다. 이후에, 혈청 시료를 분석을 수행할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 3일째에, 모든 9개 처리 그룹의 동물에게 치사 투여량의 케타민/크실라진을 제공하였다. 혈액을 꼬리 상대정맥을 통해 혈청 분리 관에 수집한 후 실온에서 대략 30분 동안 응고되도록 한 후 4℃에서 원심분리하였다. 혈청 시료를 분석을 수행할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직을 수거하고 드라이아이스 상에서 급속 동결시켰다. 동결된 간 조직을 분쇄하고 조직 용해물을 간 mRNA 정량을 위해 제조하였다.
TTR mRNA 정량:
GAPDH mRNA의 수준에 대한 TTR mRNA 수준을 용해물 중에서 측쇄 DNA 검정[공급원: 퀀티젠 리에이전트 시스템(QuantiGene Reagent System), 캘리포니아주 프레몬트, 파노믹스 소재]을 사용하여 측정하였다. 요약하면, QuantiGene 검정(공급원: 제노스펙트라)을 사용하여 조직 시료 용해물 중에서 mRNA 수준을 제조업자의 지시에 따라 정량하였다. TTR mRNA의 평균 수준을 각각의 시료에 대해 GAPDH mRNA의 평균 수준으로 표준화하였다.
TTR mRNA 발현의 상대적인 수준을 수득하기 위해, 이후에, 15분, 1시간 및 2시간 주입 기간을 가진 SNALP-1955 및 SNALP-18534 처리 그룹에 대한 그룹 평균 값을 15분 주입으로 PBS 처리된 그룹에 대한 평균 값에 대해 표준화한 반면, 이후에, 3시간 주입 기간으로 SNALP-1955 및 SNALP-18534 처리된 그룹에 대한 그룹 평균 값을 3시간 주입 기간으로 PBS 처리한 그룹에 대한 평균 값에 대해 표준화하였다.
결과
도 16에 나타낸 바와 같이, 15분 내지 3시간의 상이한 주입 기간을 사용한 1 mg/kg의 SNALP-18534의 단일 정맥내 주입은 투여 후 2일째 측정한 간 TTR mRNA 수준의 상당한 억제를 일으켰다. 1 mg/kg의 SNALP-18534의 단일 정맥내 주입은 또한 SNALP-1955 대조군과 비교하여, 단일 15분 정맥내 주입 후 29일에 걸쳐 지속적인 TTR 하향 조절을 나타내었다(데이터는 나타내지 않음). PBS-처리된 그룹과 비교하여, 1mg/kg에서 SNALP-18534의 단일 15분, 1시간, 2시간 또는 3시간 정맥내 주입은 상대적인 TTR mRNA 발현 수준을 각각 94%( p<0.001), 94%(p < 0.001), 92%(p < 0.001) 및 93%(p < 0.001)까지 상당히 감소시켰다. SNALP-18534 활성의 특이성은 동일한 투여량 수준에서 1시간, 2시간, 또는 3시간 정맥내 주입을 통한 SNALP-1955 투여에 의해 상당한 표적 억제의 결여로 입증된다.
결론
당해 연구는, 15분 내지 3시간 이하의 주입 기간의 변화가, 간내 TTR mRNA 수준의 감소에 의해 평가한 바에 의하면, 래트에서 1mg/kg의 SNALP-18534의 단일 정맥내 투여의 효능에 영향을 미치지 않음을 입증한다.
실시예 15. LNP07 -18534 및 LNP08 -18534에 의한 래트 간에서 야생형 TTR mRNA의 생체내 감소
래트에서 siRNA의 전달을 위한 2개의 신규 지질 나노입자 제형, LNP07 및 LNP08의 효능을 평가하기 위해, 설치류 특이적인 TTR siRNA, AD-18534를 LNP07(LNP07-18534) 또는 LNP08(LNP08-18534)로 제형화하고, 15분 정맥내 주입으로 투여하며 간 TTR mRNA를 정량하였다. 스프라그-다울리 래트(4마리/그룹)에 LNP07-18534(0.03, 0.1, 0.3 또는 1 mg/kg), LNP08-18534(0.01, 0.03 또는 0.1 mg/kg), 또는 비-포유동물 유전자 루시퍼라제를 표적화하는 음성 대조군 siRNA AD-1955를 함유하는 LNP07-1955 (1 mg/kg) 또는 LNP08-1955 (0.1 mg/kg)의 15분 정맥내 주입으로 투여하였다. 48시간 후, 동물을 안락사시키고, 간 조직을 수집하고, 급속 동결시키고 가공할 때까지 -80℃에 저장하였다.
TTR mRNA 정량을 위해, 동결된 간 조직을 분말로 분쇄하고, 용해물을 제조하였다. GAPDH mRNA의 수준에 대한 TTR mRNA 수준을 용해물 중에서 측쇄 DNA 검정(공급원: 퀀티젠 리에이전트 시스템, 캘리포니아주 프레몬트 파노믹스 소재)을 사용하여 측정하였다. 요약하면, QuantiGene 검정(공급원: 제노스펙트라)을 사용하여 조직 시료 용해물 중에서 mRNA 수준을 제조업자의 지시에 따라 정량하였다. TTR mRNA의 평균 수준은 각각의 시료에 대한 GAPDH mRNA의 평균 수준에 대해 표준화하였다. 이후에, 표준화된 값의 그룹 평균을 PBS 처리된 그룹에 대한 평균 값에 대해 추가로 표준화하여, TTR mRNA 발현의 상대적인 수준을 수득하였다.
결과는 표 17에 나타낸다. LNP07-18534는 간에서 TTR mRNA 수준을 투여량 의존적인 방식으로 1mg/kg에서 TTR mRNA의 94% 억제로 감소시켰다. 음성 대조군 LNP07-1955가 1 mg/kg에서 PBS 대조군과 비교하여 TTR mRNA 수준에 영향을 미치지 않았으므로, 당해 효과는 특이적이었다. mRNA ED50은 약 0.05 mg/kg의 LNP07-18534로 측정되었다. LNP08-18534은 간에서 TTR mRNA 수준을 투여량 의존적인 방식으로 0.1mg/kg에서 TTR mRNA를 86% 억제로 감소시켰다. 음성 대조군 LNP08-1955가 0.1 mg/kg에서 PBS 대조군과 비교하여 TTR mRNA 수준에 상당한 영향을 미치지 않았으므로, 당해 효과는 특이적이었다. mRNA ED50은 약 0.02 mg/kg의 LNP08-18534인 것으로 측정되었다.
이들 결과는, LNP07-18534 및 LNP08-18534가 정맥내 주입에 의해 투여되는 경우 래트 간에서 야생형 TTR mRNA를 억제하는데 효과적이며 LNP07 및 LNP08은 간으로 siRNA를 전달하기 위한 효과적인 제형임을 입증한다.
실시예 16: 스프라그 - 다울리 래트에서 LNP09 -18534 또는 LNP11 -18534의 단일 정맥내 투여에 의한 TTR 간 mRNA 의 감소
목적:
당해 실시예는, 내인성(야생형) 간 TTR mRNA 수준을 감소시키기 위해 스프라그-다울리 래트에서 설치류 TTR-특이적인 siRNA, AD-18534의 전달을 위한 2개의 신규 지질 나노입자(LNP) 제형의 효능을 평가하기 위한 것이다. 래트에게 0.01, 0.03, 0.1, 또는 0.3 mg/kg LNP09-18534, LNP11-18534, 또는 인산염 완충된 염수(PBS)를 사용하여 15분 주입을 통해 정맥내 투여하고 TTR 간 mRNA 수준을 처리 후 48시간째에 검정하였다.
재료 및 방법:
LNP09 제형: (XTC/DSPC/Chol/PEG2000-C14) = 50/10/38.5/1.5 몰%; 지질:siRNA 약 11:1. LNP11 제형: (MC3/DSPC/Chol/PEG2000-C14) = 50/10/38.5/1.5 몰%; 지질:siRNA 약 11.1
조직 수집 및 RNA 분리: 3일째에, 모든 처리 그룹의 동물에게 치사 투여량의 케타민/크실라진을 제공하였다. 혈액을 꼬리 대정맥을 통해 혈청 분리 관에 수집한 후, 실온에서 대략 30분 동안 응고되도록 한 후, 4℃에서 원심분리하였다. 혈청 시료를 이후의 분석까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직을 수거하고 드라이아이스 상에서 급속 동결시켰다. 동결된 간 조직을 분쇄하고 조직 용해물을 간 mRNA 정량을 위해 제조하였다.
TTR mRNA 정량: GAPDH mRNA의 수준에 대한 TTR mRNA 수준을 용해물 중에서 측쇄 DNA 검정(공급원: 퀀티젠 리에이전트 시스템, 캘리포니아주 프레몬드 파노믹스 소재)을 사용하여 측정하였다. 요약하면, QuantiGene 검정(공급원: 제노스펙트라)을 사용하여 조직 시료 용해물내 mRNA 수준을 제조업자의 지시에 따라 정량하였다. TTR mRNA의 평균 수준을 각각의 시료에 대해 GAPDH mRNA의 평균 수준에 대해 표준화하였다. 이후에, 그룹 평균 값을 PBS 처리된 그룹에 대한 평균 값에 대해 표준화하여 TTR mRNA 발현의 상대적 수준을 수득하였다.
결과:
도 18에 나타낸 바와 같이, PBS 처리된 동물과는 대조적으로, LNP09-18534 및 LNP11-18534 처리된 동물은 간내 TTR mRNA 수준에 있어서 상당히 투여량-의존적인 감소를 가졌으며 0.3mg/kg에서 PBS 대조군 그룹에 비해, LNP09 및 LNP11 제형화된 그룹 둘다의 경우 약 90% mRNA 감소의 최대 감소에 도달하였으며, 50% 감소를 달성하는 투여량(ED50)은 LNP11-18534의 경우 < 0.03 mg/kg 및 LNP09-18534의 경우 < 0.1 mg/kg이었다.
결론
당해 연구는, 스프라그-다울리 래트에서 LNP09-18534 또는 LNP11-18534의 단일 15분 정맥내 주입이 간 TTR mRNA의 투여량 의존적인 감소를 일으킴을 입증한다. 이들 데이터는, 내인성으로 발현된(야생형) TTR mRNA를 LNP11-18534 및 LNP09-18534 각각에 대해 <0.03 및 <0.1 mg/kg의 ED50 수준으로 감소시키는데 있어서 LNP09-18328 및 LNP11-18328의 효능을 입증한다.
실시예 17: 사람에서 TTR 의 억제
사람 피검자를 TTR 유전자에 대해 표적화된 dsRNA로 처치하여 TTR 유전자의 발현을 억제함으로써 상태를 치료한다.
치료가 요구되는 피검자를 선택하거나 확인한다. 피검자는 간 질환, 트랜스티레틴 아밀로이드증 및/또는 이식된 간을 가질 수 있다.
피검자의 확인은 임상 셋팅에서, 또는 다른 곳에서, 예를 들면, 피검자의 가정에서 피검자 자신이 자가-시험 키트를 사용하여 수행할 수 있다.
0시간에, 적합한 제1 투여량의 항-TTR siRNA를 피검자에게 투여한다. dsRNA는 본원에 기술한 바와 같이 제형화한다. 제1 투여 후 일정 시간, 예를 들면, 7일, 14일 및 21일 후에, 피검자의 상태를, 예를 들면, 간 기능을 측정함으로써 평가한다. 당해 측정은 상기 피검자에서 TTR 발현의 측정, 및/또는 TTR mRNA의 성공적인 siRNA-표적화의 생성물을 측정하는 것을 동반할 수 있다. 다른 관련 기준을 또한 측정할 수 있다. 투여의 횟수 및 강도는 피검자의 필요에 따라 조절한다.
치료 후, 피검자의 종양 성장률은 치료 전에 존재하는 성장률에 비해, 또는 치료받지 않은 유사한 상태의 피검자에서 측정한 성장률에 비해 저하된다.
<110> Alnylam Pharmaceuticals, Inc. <120> Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin <130> 26421-16126 PCT <150> US 61/106,956 <151> 2008-10-20 <150> US 61/115,738 <151> 2008-11-18 <150> US 61/156,670 <151> 2009-03-02 <150> US 61/185,545 <151> 2009-06-09 <150> US 61/242,783 <151> 2009-09-15 <150> US 61/244,794 <151> 2009-09-22 <160> 1410 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1 ccggugaauc caagugucc 19 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2 ggacacuugg auucaccgg 19 <210> 3 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 3 acucauucuu ggcaggaug 19 <210> 4 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 4 cauccugcca agaaugagu 19 <210> 5 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 5 aaguguccuc ugaugguca 19 <210> 6 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 6 ugaccaucag aggacacuu 19 <210> 7 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 7 ucauucuugg caggauggc 19 <210> 8 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 8 gccauccugc 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<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1329 acagaagtcc actcattctt ggcaggatgg cttctcatcg tctgctcctc ctctgccttg 60 ctggactggt atttgtgtct gaggctggcc ctacgggcac cggtgaatcc aagtgtcctc 120 tgatggtcaa agttctagat gctgtccgag gcagtcctgc catcaatgtg gccgtgcatg 180 tgttcagaaa ggctgctgat gacacctggg agccatttgc ctctgggaaa accagtgagt 240 ctggagagct gcatgggctc acaactgagg aggaatttgt agaagggata tacaaagtgg 300 aaatagacac caaatcttac tggaaggcac ttggcatctc cccattccat gagcatgcag 360 aggtggtatt cacagccaac gactccggcc cccgccgcta caccattgcc gccctgctga 420 gcccctactc ctattccacc acggctgtcg tcaccaatcc caaggaatga gggacttctc 480 ctccagtgga cctgaaggac gagggatggg atttcatgta accaagagta ttccattttt 540 actaaagcag tgttttcacc tcatatgcta tgttagaagt ccaggcagag acaataaaac 600 attcctgtga aaggcacttt tcattccaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 650 <210> 1330 <211> 595 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 1330 cctgacagga tggcttccct tcgcctgttc ctcctctgcc tcgctggact gatatttgcg 60 tctgaagctg gccctggggg tgctggagaa tccaagtgtc ctctgatggt caaagtcctg 120 gatgctgtcc gaggcagccc tgctgtcgat gtggccgtga aagtgttcaa aaggactgca 180 gacggaagct gggagccgtt tgcctctggg aagaccgccg agtctggaga gctgcacggg 240 ctcaccacag atgagaagtt cacggaaggg gtgtacaggg tagaactgga caccaaatca 300 tactggaagg ctcttggcat ttccccattc catgaatacg cagaggtggt tttcacagcc 360 aatgactctg gtcatcgcca ctacaccatc gcagccctgc tcagcccgta ctcctacagc 420 accactgctg tcgtcagtaa cccccagaac tgagggaccc agcccacgag gaccaagatc 480 ttgccaaagc agtagctccc atttgtactg aaacagtgtt cttgctctat aaaccgtgtt 540 agcaactcgg gaagatgccg tgaaacgttc ttattaaacc acctttattt cattc 595 <210> 1331 <211> 938 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1331 gttgactaag tcaataatca gaatcagcag gtttgcagtc agattggcag ggataagcag 60 cctagctcag gagaagtgag tataaaagcc ccaggctggg agcagccatc acagaagtcc 120 actcattctt ggcaggatgg cttctcatcg tctgctcctc ctctgccttg ctggactggt 180 atttgtgtct gaggctggcc ctacgggcac cggtgaatcc aagtgtcctc tgatggtcaa 240 agttctagat gctgtccgag gcagtcctgc catcaatgtg gccgtgcatg tgttcagaaa 300 ggctgctgat gacacctggg agccatttgc ctctgggaaa accagtgagt ctggagagct 360 gcatgggctc acaactgagg aggaatttgt agaagggata tacaaagtgg aaatagacac 420 caaatcttac tggaaggcac ttggcatctc cccattccat gagcatgcag aggtggtatt 480 cacagccaac gactccggcc cccgccgcta caccattgcc gccctgctga gcccctactc 540 ctattccacc acggctgtcg tcaccaatcc caaggaatga gggacttctc ctccagtgga 600 cctgaaggac gagggatggg atttcatgta accaagagta ttccattttt actaaagcag 660 tgttttcacc tcatatgcta tgttagaagt ccaggcagag acaataaaac attcctgtga 720 aaggcacttt tcattccact ttaacttgat tttttaaatt cccttattgt cccttccaaa 780 aaaaagagaa tcaaaatttt acaaagaatc aaaggaattc tagaaagtat ctgggcagaa 840 cgctaggaga gatccaaatt tccattgtct tgcaagcaaa gcacgtatta aatatgatct 900 gcagccatta aaaagacaca ttctgtaaaa aaaaaaaa 938 <210> 1332 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1332 gggauuucau guaaccaagt t 21 <210> 1333 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1333 cuugguuaca ugaaauccct t 21 <210> 1334 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1334 ggauuucaug uaaccaagat t 21 <210> 1335 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1335 ucuugguuac augaaaucct t 21 <210> 1336 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1336 gauuucaugu aaccaagagt t 21 <210> 1337 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1337 cucuugguua caugaaauct t 21 <210> 1338 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1338 auuucaugua accaagagut t 21 <210> 1339 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1339 acucuugguu acaugaaaut t 21 <210> 1340 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1340 uuucauguaa ccaagaguat t 21 <210> 1341 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1341 uacucuuggu uacaugaaat t 21 <210> 1342 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1342 uucauguaac caagaguaut t 21 <210> 1343 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1343 auacucuugg uuacaugaat t 21 <210> 1344 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1344 ucauguaacc 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DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1350 uguaaccaag aguauuccat t 21 <210> 1351 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1351 uggaauacuc uugguuacat t 21 <210> 1352 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1352 uaaccaagag uauuccauut t 21 <210> 1353 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1353 aauggaauac ucuugguuat t 21 <210> 1354 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1354 aaccaagagu auuccauuut t 21 <210> 1355 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1355 aaauggaaua cucuugguut t 21 <210> 1356 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> 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sapiens" <400> 1367 uaguaaaaau ggaauacuct t 21 <210> 1368 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1368 aguauuccau uuuuacuaat t 21 <210> 1369 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1369 uuaguaaaaa uggaauacut t 21 <210> 1370 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1370 guauuccauu uuuacuaaat t 21 <210> 1371 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1371 uuuaguaaaa auggaauact t 21 <210> 1372 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1372 uauuccauuu uuacuaaagt t 21 <210> 1373 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> 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1384 auuuuuacua aagcagugut t 21 <210> 1385 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1385 acacugcuuu aguaaaaaut t 21 <210> 1386 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1386 uuuuuacuaa agcaguguut t 21 <210> 1387 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1387 aacacugcuu uaguaaaaat t 21 <210> 1388 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1388 uuuuacuaaa gcaguguuut t 21 <210> 1389 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1389 aaacacugcu uuaguaaaat t 21 <210> 1390 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1390 uuuacuaaag caguguuuut t 21 <210> 1391 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1391 aaaacacugc uuuaguaaat t 21 <210> 1392 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1392 uuacuaaagc aguguuuuct t 21 <210> 1393 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1393 gaaaacacug cuuuaguaat t 21 <210> 1394 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1394 uacuaaagca guguuuucat t 21 <210> 1395 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1395 ugaaaacacu gcuuuaguat t 21 <210> 1396 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1396 acuaaagcag uguuuucact t 21 <210> 1397 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1397 gugaaaacac ugcuuuagut t 21 <210> 1398 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1398 cuaaagcagu guuuucacct t 21 <210> 1399 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1399 ggugaaaaca cugcuuuagt t 21 <210> 1400 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1400 uaaagcagug uuuucaccut t 21 <210> 1401 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1401 aggugaaaac acugcuuuat t 21 <210> 1402 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1402 aaagcagugu uuucaccuct t 21 <210> 1403 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1403 gaggugaaaa cacugcuuut t 21 <210> 1404 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1404 aagcaguguu uucaccucat t 21 <210> 1405 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1405 ugaggugaaa acacugcuut t 21 <210> 1406 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1406 agcaguguuu ucaccucaut t 21 <210> 1407 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1407 augaggugaa aacacugcut t 21 <210> 1408 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1408 guaaccaaga guauuccaut t 21 <210> 1409 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Description of Combined DNA/RNA Molecule: Homo sapiens" <400> 1409 auggaauacu cuugguuact t 21 <210> 1410 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> source <223> /note=" Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide" <400> 1410 gtaaccaa gagtattccat 19

Claims (71)

  1. 트랜스티레틴(TTR)의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA)으로서, 상기 dsRNA는 센스 쇄 및 안티센스 쇄를 포함하고,
    (a) 상기 안티센스 쇄는 AAuACcACCUCUGcAUGCUdTdT (서열번호 936)의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 상기 센스 쇄는 AGcAuGcAGAGGuGGuAuudTdT (서열번호 935)의 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나;
    (b) 상기 안티센스 쇄는 UGAAuACcACCUCUGcAUGdTdT (서열번호 938)의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 상기 센스 쇄는 cAuGcAGAGGuGGuAuucAdTdT (서열번호 937)의 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나;
    (c) 상기 안티센스 쇄는 GUGAAuACcACCUCUGcAUdTdT (서열번호 940)의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 상기 센스 쇄는 AuGcAGAGGuGGuAuucAcdTdT (서열번호 939)의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고;
    상기 뉴클레오타이드 서열에서, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, dT는 2'데옥시티미딘-3'포스페이트인, 트랜스티레틴(TTR)의 발현을 억제하기 위한 이본쇄 리보핵산(dsRNA).
  2. 제1항에 있어서, 상기 dsRNA가 리간드에 접합되는 것인, dsRNA.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 dsRNA가 지질 제형으로 제형화되는 것인, dsRNA.
  4. 제3항에 있어서, 상기 dsRNA가 지질 나노입자 (LNP) 제형으로 제형화되는 것인, dsRNA.
  5. 제4항에 있어서, 상기 LNP 제형이 (6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일-4-(디메틸아미노)부타노에이트(MC3)을 포함하는 것인, dsRNA.
  6. 제5항에 있어서, 상기 LNP 제형이 (6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일-4-(디메틸아미노)부타노에이트(MC3), 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 콜레스테롤, 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-디미리스토일 글리세롤(DMG)을 포함하는 것인, dsRNA.
  7. 제6항에 있어서, 상기 LNP 제형이 (6Z,9Z,28Z,31Z)-헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일-4-(디메틸아미노)부타노에이트(MC3)/DSPC/콜레스테롤/PEG-DMG을 50/10/38.5/1.5 몰%의 비로 포함하는 것인, dsRNA.
  8. 제1항 또는 제2항에 따르는 dsRNA를 함유하는 시험관내 세포.
  9. 제1항 또는 제2항에 따르는 dsRNA 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 트랜스티레틴 아밀로이드증을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
  10. 세포 내에서 TTR 발현을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은
    (a) 상기 세포를, 제1항 또는 제2항의 dsRNA와 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 단계 (a)에서 생산된 세포를 TTR 유전자의 mRNA 전사체를 분해시키기에 충분한 시간 동안 유지시켜, 상기 세포 내에서 상기 TTR 유전자의 발현을 억제하는 단계를 포함하며,
    단, 사람 또는 동물 신체의 치료 방법은 배제되는, 세포 내에서 TTR 발현을 억제하는 방법.
  11. 사람에서 트랜스티레틴 아밀로이드증의 치료 방법에 사용하기 위한 제1항 또는 제2항에 따르는 dsRNA.
  12. 제11항에 있어서, 상기 트랜스티레틴 아밀로이드증이 가족성 아밀로이드 다발신경병증(FAP), 가족성 아밀로이드 심근병증(FAC), 연수막/CNS(중추 신경계) 아밀로이드증, 노인성 전신아밀로이드증(SSA) 및 노인성 심장 아밀로이드증(SCA)로 이루어진 군으로부터 부터 선택되는 것인, dsRNA.
  13. 제11항에 있어서, 상기 트랜스티레틴 아밀로이드증이 가족성 아밀로이드 다발신경병증(FAP)인, dsRNA.
  14. 제11항에 있어서, 상기 dsRNA가 사람에게 0.01, 0.1, 0.3, 0.5, 1.0, 2.5 또는 5.0 mg/kg으로 투여되는 것인, dsRNA.
  15. 제11항에 있어서, 상기 dsRNA가 사람에게 0.1 내지 1 mg/kg으로 투여되는 것인, dsRNA.
  16. 제11항에 있어서, TTR 아밀로이드증을 치료하기 위한 다른 약제, 다른 치료방법, 또는 이 둘 모두와 병용되는 것인, dsRNA.
  17. 제16항에 있어서, 상기 다른 약제, 다른 치료방법, 또는 이 둘 모두가 이뇨제, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 안지오텐신 수용체 차단제, 투석 및 간 이식으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, dsRNA.
  18. 제13항에 있어서, 상기 dsRNA가 사람에게 1주 이하, 2주 이하, 3주 이하 또는 4주 이하의 간격으로 투여되는 것인, dsRNA.
  19. 제13항에 있어서, 상기 dsRNA가 정맥내로 또는 정맥내 주입으로 투여되는 것인, dsRNA.
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Families Citing this family (91)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
NZ572666A (en) 2006-05-11 2010-11-26 Alnylam Pharmaceuticals Inc Compositions comprising double stranded rna and methods for inhibiting expression of the pcsk9 gene
PL2279254T3 (pl) 2008-04-15 2017-11-30 Protiva Biotherapeutics Inc. Nowe preparaty lipidowe do dostarczania kwasów nukleinowych
NO2937418T3 (ko) * 2008-10-20 2018-03-17
CA2746514C (en) * 2008-12-10 2018-11-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
EP3243504A1 (en) * 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
HUE056773T2 (hu) * 2009-06-10 2022-03-28 Arbutus Biopharma Corp Továbbfejlesztett lipid készítmény
MX2011013421A (es) * 2009-06-15 2012-03-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Arnds formulado con lipido de direccionamiento del gen pcsk9.
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
EP2449114B9 (en) 2009-07-01 2017-04-19 Protiva Biotherapeutics Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
AP3574A (en) * 2009-08-14 2016-02-08 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus
JP5723378B2 (ja) * 2009-11-03 2015-05-27 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． トランスサイレチン（ｔｔｒ）を阻害する脂質製剤化組成物及び方法
AU2011235276B2 (en) * 2010-03-29 2015-09-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA therapy for transthyretin (TTR) related ocular amyloidosis
BR112012027547B1 (pt) * 2010-04-29 2022-06-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc Oligonucleotídeo modificado de fita simples, composição, e seus usos para tratar amiloidose transtirretina, reduzir os seus sintomas e para reduzir a expressão de mrna ou de proteína de transtirretina
CA2799091A1 (en) * 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use thereof
EP2576579B1 (en) * 2010-06-02 2018-08-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods directed to treating liver fibrosis
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
JP2013545727A (ja) 2010-10-21 2013-12-26 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション オリゴヌクレオチド送達用の新規低分子量カチオン性脂質
CN113214102A (zh) 2010-11-15 2021-08-06 生命技术公司 含胺的转染试剂及其制备和使用方法
WO2012079046A2 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of klf-1 and bcl11a genes
EP2525223A1 (en) * 2011-05-19 2012-11-21 Universiteit Maastricht In vitro method for predicting in vivo genotoxicity of chemical compounds.
AU2012272908A1 (en) * 2011-06-21 2013-12-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Assays and methods for determining activity of a therapeutic agent in a subject
SG10201800715PA (en) 2011-06-21 2018-02-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof
EP2723861A4 (en) * 2011-06-21 2014-12-10 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING HEPCIDINE ANTIMICROBIAL PEPTIDE (HAMP) OR THE ASSOCIATED GENE EXPRESSION
SG11201402392QA (en) * 2011-11-18 2014-06-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
DK3988537T1 (da) 2011-12-07 2022-05-23 Alnylam Pharmaceuticals Inc Bionedbrydelige lipider til afgivelse af aktive midler
US9035039B2 (en) * 2011-12-22 2015-05-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing SMAD4
PT2922554T (pt) * 2012-11-26 2022-06-28 Modernatx Inc Arn modificado nas porções terminais
JP2016504050A (ja) 2013-01-17 2016-02-12 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 細胞表現型の改変のためのシグナルセンサーポリヌクレオチド
JP2016514091A (ja) 2013-02-08 2016-05-19 ミスフォールディング ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド トランスサイレチン抗体およびその使用
CN115261411A (zh) 2013-04-04 2022-11-01 哈佛学院校长同事会 利用CRISPR/Cas系统的基因组编辑的治疗性用途
EP3633039A1 (en) 2013-05-01 2020-04-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods
BR112015031608A2 (pt) * 2013-06-17 2017-08-22 Massachusetts Inst Technology Aplicação e uso dos sistemas crispr-cas, vetores e composições para direcionamento e terapia hepáticos
JP2016528890A (ja) * 2013-07-09 2016-09-23 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を用いるゲノム編集の治療用の使用
TW201610151A (zh) * 2013-09-23 2016-03-16 阿尼拉製藥公司 治療或預防與甲狀腺素運載蛋白相關疾病之方法
EP3052626A1 (en) * 2013-10-02 2016-08-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
AU2014360314B2 (en) * 2013-12-06 2018-04-26 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA
WO2015148582A1 (en) * 2014-03-25 2015-10-01 Arcturus Therapeutics, Inc. Transthyretin allele selective una oligomers for gene silencing
CN106460025A (zh) 2014-03-25 2017-02-22 阿克丘勒斯治疗公司 在基因沉默中具有降低的脱靶效应的una寡聚物
US9856475B2 (en) 2014-03-25 2018-01-02 Arcturus Therapeutics, Inc. Formulations for treating amyloidosis
PE20170010A1 (es) 2014-05-01 2017-03-04 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del factor b del complemento
EP3185957B1 (en) 2014-08-29 2022-06-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patisiran for use in treating transthyretin mediated amyloidosis
JP6830441B2 (ja) * 2015-04-01 2021-02-17 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 治療上のｕｎａオリゴマーおよびその使用
US10745702B2 (en) 2015-04-08 2020-08-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the LECT2 gene
MX2017013102A (es) 2015-04-13 2018-02-23 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de ácido ribonucleico de interferencia (arni) de angiopoyetina-tipo 3 (angptl3) y método de uso de las mismas.
WO2017015671A1 (en) * 2015-07-23 2017-01-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions for treating amyloidosis
ES2842300T3 (es) 2015-07-31 2021-07-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de ARNi de transtiretina (TTR) y métodos para su uso para el tratamiento o la prevención de enfermedades asociadas con TTR
TWI783434B (zh) 2016-03-07 2022-11-11 美商愛羅海德製藥公司 治療性化合物之標靶性配體
TW202320855A (zh) 2016-09-02 2023-06-01 美商愛羅海德製藥公司 標靶性配體
EP3522898A4 (en) 2016-10-06 2020-05-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. METHOD FOR CONJUGATING OLIGOMERIC COMPOUNDS
CN110177544A (zh) 2016-11-29 2019-08-27 普尔泰克健康有限公司 用于递送治疗剂的外泌体
NZ755597A (en) 2017-02-17 2023-06-30 Eidos Therapeutics Inc Processes for preparing ag-10, its intermediates, and salts thereof
KR20200089656A (ko) 2017-09-19 2020-07-27 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스타이레틴(ttr) 매개 아밀로이드증을 치료하기 위한 조성물 및 방법
IL311170A (en) 2017-09-29 2024-04-01 Intellia Therapeutics Inc Compositions and methods for editing TTR genes and treating ATTR type amyloidosis
MA52137A (fr) * 2018-03-23 2021-01-27 Eidos Therapeutics Inc Méthodes de traitement de l'amylose ttr à l'aide d'ag10
US20220118112A1 (en) 2018-10-09 2022-04-21 The University Of British Columbia Compositions and systems comprising transfection-competent vesicles free of organic-solvents and detergents and methods related thereto
WO2020128816A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Pfizer Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising a combination of a benzoxazole transthyretin stabilizer and an additional therapeutic agent
JP2022534867A (ja) 2019-06-04 2022-08-04 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ベータスリップ変異を有するヒト化ｔｔｒ遺伝子座を含む非ヒト動物と使用方法
CN114423869A (zh) 2019-07-19 2022-04-29 旗舰先锋创新Vi有限责任公司 重组酶组合物和使用方法
WO2021041884A1 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy
CA3174473A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (ttr)
TW202208629A (zh) 2020-05-20 2022-03-01 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 免疫原性組成物及其用途
WO2021236980A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Coronavirus antigen compositions and their uses
KR20230029685A (ko) 2020-05-29 2023-03-03 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이아이, 엘엘씨 Trem 조성물 및 이에 관련된 방법
CA3182026A1 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc. Trem compositions and methods relating thereto
AU2021336976A1 (en) 2020-09-03 2023-03-23 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and uses thereof
CA3200234A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Daryl C. Drummond Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
WO2022112919A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Pfizer Inc. (aza)benzothiazolyl substituted pyrazole compounds
JP2024501288A (ja) 2020-12-23 2024-01-11 フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ シックス，エルエルシー 修飾ｔｒｅｍの組成物及びその使用
EP4294409A1 (en) * 2021-02-22 2023-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Folliculin irna compositions and methods thereof
BR112023017737A2 (pt) 2021-03-04 2023-10-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de irna de angiopoietina-semelhantes 3 (angptl3) e métodos de uso das mesmas
KR20230165276A (ko) 2021-03-31 2023-12-05 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 타노트랜스미션 폴리펩티드 및 암의 치료에서의 이의 용도
WO2022235537A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating transthyretin (ttr) mediated amyloidosis
AR126070A1 (es) 2021-06-08 2023-09-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones y métodos para tratar o prevenir la enfermedad de stargardt y/o trastornos asociados con la proteína transportadora de retinol 4 (rbp4)
WO2023009547A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and uses thereof
AU2022323090A1 (en) 2021-08-03 2024-02-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof
CA3232635A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for producing circular polyribonucleotides
WO2023069397A1 (en) 2021-10-18 2023-04-27 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
CN114058636A (zh) * 2021-11-16 2022-02-18 大连润生康泰医学检验实验室有限公司 一种转甲状腺素蛋白基因的克隆、表达与纯化方法
WO2023096963A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Varicella-zoster virus immunogen compositions and their uses
WO2023096990A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Flagship Pioneering Innovation Vi, Llc Coronavirus immunogen compositions and their uses
WO2023097003A2 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and their uses
WO2023122745A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
WO2023122789A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Circular polyribonucleotides encoding antifusogenic polypeptides
WO2023196634A2 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Vaccines and related methods
WO2023220083A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and methods of use for treating proliferative disorders
WO2023220729A2 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Double stranded dna compositions and related methods
WO2023250112A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions of modified trems and uses thereof
US20240042021A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunomodulatory proteins and related methods
WO2024035952A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 Remix Therapeutics Inc. Methods and compositions for modulating splicing at alternative splice sites
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101624869B1 (ko) * 2008-10-20 2016-05-30 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법

Family Cites Families (217)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US513030A (en) 1894-01-16 Machine for waxing or coating paper
US564562A (en) 1896-07-21 Joseph p
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4522808A (en) 1980-08-15 1985-06-11 Societe Anonyme Dite: L'oreal Anti-sunburn compositions containing 2-phenyl-indole derivatives
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4426330A (en) 1981-07-20 1984-01-17 Lipid Specialties, Inc. Synthetic phospholipid compounds
US4534899A (en) 1981-07-20 1985-08-13 Lipid Specialties, Inc. Synthetic phospholipid compounds
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
EP0228458B2 (en) 1985-07-05 1997-10-22 Whitehead Institute For Biomedical Research Epithelial cells expressing foreign genetic material
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
ATE113059T1 (de) 1987-06-24 1994-11-15 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
DE3852823T2 (de) 1987-09-11 1995-05-24 Whitehead Biomedical Inst Transduktionsveränderte fibroblasten und ihre anwendung.
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
DE3851153T2 (de) 1987-12-11 1995-01-05 Whitehead Biomedical Inst Genetische modifizierung von endothelialen zellen.
EP0732397A3 (en) 1988-02-05 1996-10-23 Whitehead Institute For Biomedical Research Modified hepatocytes and uses therefor
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
GB8824593D0 (en) 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Liposomes
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5356633A (en) 1989-10-20 1994-10-18 Liposome Technology, Inc. Method of treatment of inflamed tissues
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
ATE269870T1 (de) 1989-10-24 2004-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc 2'-modifizierte oligonukleotide
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
WO1991013080A1 (en) 1990-02-20 1991-09-05 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
US5665710A (en) 1990-04-30 1997-09-09 Georgetown University Method of making liposomal oligodeoxynucleotide compositions
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DK0455905T3 (da) 1990-05-11 1998-12-07 Microprobe Corp Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
EP0544824B1 (en) 1990-07-27 1997-06-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
PT98562B (pt) 1990-08-03 1999-01-29 Sanofi Sa Processo para a preparacao de composicoes que compreendem sequencias de nucleo-sidos com cerca de 6 a cerca de 200 bases resistentes a nucleases
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
WO1992005186A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 Gilead Sciences Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
EP0556345B2 (en) 1990-10-31 2005-10-12 Cell Genesys, Inc. Retroviral vectors useful for gene therapy
ATE198598T1 (de) 1990-11-08 2001-01-15 Hybridon Inc Verbindung von mehrfachreportergruppen auf synthetischen oligonukleotiden
GB9100304D0 (en) 1991-01-08 1991-02-20 Ici Plc Compound
JP3220180B2 (ja) 1991-05-23 2001-10-22 三菱化学株式会社 薬剤含有タンパク質結合リポソーム
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
DE4203923A1 (de) 1992-02-11 1993-08-12 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von polycarboxylaten auf polysaccharid-basis
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
JP3351476B2 (ja) 1993-01-22 2002-11-25 三菱化学株式会社 リン脂質誘導体及びそれを含有するリポソーム
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
WO1994022864A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
HU9501974D0 (en) 1993-03-31 1995-09-28 Sterling Winthrop Inc Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5540935A (en) 1993-12-06 1996-07-30 Nof Corporation Reactive vesicle and functional substance-fixed vesicle
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US6054299A (en) 1994-04-29 2000-04-25 Conrad; Charles A. Stem-loop cloning vector and method
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5543152A (en) 1994-06-20 1996-08-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Sphingosomes for enhanced drug delivery
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
AU5545596A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Medtronic, Inc. Intraparenchymal infusion catheter system
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5756122A (en) 1995-06-07 1998-05-26 Georgetown University Liposomally encapsulated nucleic acids having high entrapment efficiencies, method of manufacturer and use thereof for transfection of targeted cells
EP1489184A1 (en) 1995-06-07 2004-12-22 Inex Pharmaceutical Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US6096720A (en) 1995-08-01 2000-08-01 Novartis Ag Liposomal oligonucleotide compositions
US5858397A (en) 1995-10-11 1999-01-12 University Of British Columbia Liposomal formulations of mitoxantrone
US5735814A (en) 1996-04-30 1998-04-07 Medtronic, Inc. Techniques of treating neurodegenerative disorders by brain infusion
DE69834038D1 (de) 1997-07-01 2006-05-18 Isis Pharmaceutical Inc Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von oligonukleotiden über die speiseröhre
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
JP5015373B2 (ja) 1998-04-08 2012-08-29 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション 改良表現型を得るための方法及び手段
AR020078A1 (es) 1998-05-26 2002-04-10 Syngenta Participations Ag Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta
ATE237312T1 (de) 1998-07-20 2003-05-15 Protiva Biotherapeutics Inc In liposomen verkapselte nukleinsäurekomplexe
BR9914773A (pt) 1998-10-09 2002-02-05 Ingene Inc Conjunto de elementos genéricos, método para a produção de dna de cordão único, transcrição de mrna, construção de ácido nucléico, transcrição de ssdna, vetor, sistema vetor, célula hospedeira, conjunto para a produção de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, método para a produção in vivo ou in vitro de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, transcrição de cdna de cordão único, ácido nucléico inibidor, molécula heteroduplex, e composição farmacêutica
AU6430599A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Cytogenix, Inc. Enzymatic synthesis of ssdna
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
EP1156812A4 (en) 1999-02-23 2004-09-29 Isis Pharmaceuticals Inc MULTIPARTICULAR FORMULATION
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US20030229037A1 (en) 2000-02-07 2003-12-11 Ulrich Massing Novel cationic amphiphiles
US20070026394A1 (en) 2000-02-11 2007-02-01 Lawrence Blatt Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies
US20030072794A1 (en) 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
BRPI0115814B8 (pt) 2000-12-01 2021-05-25 Europaeisches Laboratorium Fuer Molekularbiologie Embl moléculas de rna de filamento duplo, seu método de preparação e composição farmacêutica compreendendo as mesmas
US20030170891A1 (en) 2001-06-06 2003-09-11 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7956176B2 (en) 2002-09-05 2011-06-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
JP2006507841A (ja) 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
DE10302421A1 (de) 2003-01-21 2004-07-29 Ribopharma Ag Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit
ATE479752T1 (de) 2003-03-07 2010-09-15 Alnylam Pharmaceuticals Inc Therapeutische zusammensetzungen
WO2004090108A2 (en) 2003-04-03 2004-10-21 Alnylam Pharmaceuticals Irna conjugates
WO2005007196A2 (en) 2003-07-16 2005-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
US20050244869A1 (en) * 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
WO2005121348A1 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
CA2569645C (en) 2004-06-07 2014-10-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
US7838561B2 (en) 2004-06-14 2010-11-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for preventing or treating cardiac hypertrophy
ES2246715B1 (es) * 2004-08-04 2007-05-01 Consejo Superior Investig. Cientificas Modelo animal de enfermedades neurodegenerativas, procedimiento de obtencion y aplicaciones.
CN101189343B (zh) * 2004-08-23 2011-11-16 阿尔尼拉姆药物公司 多rna聚合酶ⅲ启动子表达构建体
WO2007086883A2 (en) 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
EP1866414B9 (en) 2005-03-31 2012-10-03 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
US7915230B2 (en) 2005-05-17 2011-03-29 Molecular Transfer, Inc. Reagents for transfection of eukaryotic cells
WO2007008652A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions directed to dj-1 as regulator of the anti-oxidant transcription factor nrf2
EP1937213B1 (en) 2005-07-27 2017-10-25 Protiva Biotherapeutics Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
EP2395012B8 (en) 2005-11-02 2018-06-06 Arbutus Biopharma Corporation Modified siRNA molecules and uses thereof
WO2007115168A2 (en) 2006-03-31 2007-10-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 gene
US8598333B2 (en) 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
AU2007303205A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipid containing formulations
CA2708153C (en) 2007-12-04 2017-09-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
EP2238251B1 (en) 2007-12-27 2015-02-11 Protiva Biotherapeutics Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna
EP3100718B1 (en) 2008-01-02 2019-11-27 Arbutus Biopharma Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
PL2279254T3 (pl) 2008-04-15 2017-11-30 Protiva Biotherapeutics Inc. Nowe preparaty lipidowe do dostarczania kwasów nukleinowych
EP2323667A4 (en) 2008-08-07 2012-07-25 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF TRANSTHYRETIN EXPRESSION BY TREATMENT OF CNS DISEASES
US9139554B2 (en) * 2008-10-09 2015-09-22 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
AU2009311667B2 (en) 2008-11-07 2016-04-14 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
EP4241767A3 (en) 2008-11-10 2023-11-01 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
NZ621981A (en) 2009-05-05 2015-09-25 Tekmira Pharmaceuticals Corp Lipid compositions
HUE056773T2 (hu) 2009-06-10 2022-03-28 Arbutus Biopharma Corp Továbbfejlesztett lipid készítmény
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
JP5723378B2 (ja) 2009-11-03 2015-05-27 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． トランスサイレチン（ｔｔｒ）を阻害する脂質製剤化組成物及び方法
BR112012027547B1 (pt) 2010-04-29 2022-06-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc Oligonucleotídeo modificado de fita simples, composição, e seus usos para tratar amiloidose transtirretina, reduzir os seus sintomas e para reduzir a expressão de mrna ou de proteína de transtirretina
KR102005337B1 (ko) * 2014-01-09 2019-07-30 에스케이하이닉스 주식회사 전압 변환 장치
US10799808B2 (en) 2018-09-13 2020-10-13 Nina Davis Interactive storytelling kit

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101624869B1 (ko) * 2008-10-20 2016-05-30 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법

Also Published As

Publication number Publication date
CA2739895C (en) 2018-09-25
ES2543004T3 (es) 2015-08-13
WO2010048228A2 (en) 2010-04-29
EP2937418B1 (en) 2017-10-18
KR20160079921A (ko) 2016-07-06
AU2009307677A1 (en) 2010-04-29
KR20220012422A (ko) 2022-02-03
US9234196B2 (en) 2016-01-12
BRPI0919732A2 (pt) 2015-12-08
KR20180017245A (ko) 2018-02-20
NL300965I1 (nl) 2019-02-06
ZA201102876B (en) 2015-06-24
JP2015062420A (ja) 2015-04-09
NO2937418T3 (ko) 2018-03-17
JP6371446B2 (ja) 2018-08-08
KR20110073592A (ko) 2011-06-29
EA029762B1 (ru) 2018-05-31
CY2019005I1 (el) 2019-11-27
CY1116944T1 (el) 2017-04-05
JP2018171072A (ja) 2018-11-08
DK2344639T3 (en) 2015-07-27
IL302142A (en) 2023-06-01
EP2937418A1 (en) 2015-10-28
CN103937793A (zh) 2014-07-23
SG10201809460SA (en) 2018-11-29
HUS1900004I1 (hu) 2019-03-28
DK2937418T3 (en) 2018-01-22
IL281434B2 (en) 2023-09-01
EA020312B1 (ru) 2014-10-30
KR101624869B1 (ko) 2016-05-30
KR20150007359A (ko) 2015-01-20
US20140194493A1 (en) 2014-07-10
PL2937418T3 (pl) 2018-04-30
IL281434B1 (en) 2023-05-01
JP5791505B2 (ja) 2015-10-07
MX2018013398A (es) 2023-01-05
US20170321213A1 (en) 2017-11-09
CN106834291B (zh) 2020-09-29
EA201400170A1 (ru) 2015-03-31
HRP20150796T1 (hr) 2015-09-11
US20230257740A1 (en) 2023-08-17
CN106834291A (zh) 2017-06-13
SG10201912276XA (en) 2020-02-27
EP2344639A2 (en) 2011-07-20
IL281434A (en) 2021-04-29
NO2019004I1 (no) 2019-01-29
ES2656516T3 (es) 2018-02-27
LTPA2019501I1 (lt) 2019-02-25
LUC00098I2 (ko) 2019-12-24
EA201792626A1 (ru) 2018-08-31
CY2019005I2 (el) 2019-11-27
HRP20180093T1 (hr) 2018-02-23
IL243178B (en) 2021-03-25
KR20190116553A (ko) 2019-10-14
US8168775B2 (en) 2012-05-01
CA2739895A1 (en) 2010-04-29
US10240152B2 (en) 2019-03-26
MX344354B (es) 2016-12-14
US8741866B2 (en) 2014-06-03
IL302142B1 (en) 2024-03-01
LUC00098I1 (ko) 2019-01-31
SI2344639T1 (sl) 2015-09-30
CN102186978A (zh) 2011-09-14
HUE037875T2 (hu) 2018-09-28
AU2009307677C1 (en) 2022-09-22
JP2012506254A (ja) 2012-03-15
LT2937418T (lt) 2018-02-12
IL212428A0 (en) 2011-06-30
NZ602404A (en) 2014-04-30
JP2018007666A (ja) 2018-01-18
US20190309293A1 (en) 2019-10-10
EP2344639B1 (en) 2015-04-22
NZ592867A (en) 2013-05-31
PL2344639T3 (pl) 2015-10-30
NL300965I2 (nl) 2020-07-28
KR102578331B1 (ko) 2023-09-15
EP3848461A1 (en) 2021-07-14
CA3018487A1 (en) 2010-04-29
IL310600A (en) 2024-04-01
CN102186978B (zh) 2014-03-12
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