EA036772B1 - Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина - Google Patents

Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина Download PDF

Info

Publication number
EA036772B1
EA036772B1 EA201792626A EA201792626A EA036772B1 EA 036772 B1 EA036772 B1 EA 036772B1 EA 201792626 A EA201792626 A EA 201792626A EA 201792626 A EA201792626 A EA 201792626A EA 036772 B1 EA036772 B1 EA 036772B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
dsrna
ttr
acid
expression
nucleotide
Prior art date
Application number
EA201792626A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201792626A1 (ru
Inventor
Динах Вен-Йи Сах
Грегори Хинкл
Рене Альварес
Стюарт Милстейн
Цинминь Чэнь
Original Assignee
Элнилэм Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Элнилэм Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201792626A1 publication Critical patent/EA201792626A1/ru
Publication of EA036772B1 publication Critical patent/EA036772B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6527—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6533—Six-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/335—Modified T or U
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Cardiology (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), поражающей ген транстиретина (TTR), и способам применения этой дцРНК для ингибирования TTR.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Это изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), поражающей ген транстиретина (TTR), и к способам применения этой дцРНК для ингибирования экспрессии TTR.
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Эта заявка заявляет приоритет Предварительной заявки США с порядковым номером 61/106956, поданной 20 октября 2008 года; Предварительной заявки США с порядковым номером 61/156670, поданной 2 марта 2009 года; Предварительной заявки США с порядковым номером 61/185545, поданной 9 июня 2009 года; Предварительной заявки США с порядковым номером 61/242783, поданной 15 сентября 2009 года; и Предварительной заявки США с порядковым номером 61/244,794, поданной 22 сентября 2009 года, все из которых включены здесь посредством ссылки в их полном виде, для всех целей.
Ссылка на список последовательностей
Эта заявка включает в себя Список последовательностей, представленный в конце описания..
Уровень техники
Транстиретин (TTR) является секретируемым связывающим тиреоидный гормон белком. TTR связывает и транспортирует ретинолсвязывающий белок (RBP)/Витамин А и сывороточный тироксин (Т4) в плазме и цереброспинальной жидкости.
Как TTR с нормальной последовательностью, так и TTR с вариантной последовательностью вызывают амилоидоз. TTR с нормальной последовательностью вызывает амилоидоз сердца у людей, которые являются пожилыми, и амилоидоз этого типа называют сенильным системным амилоидозом (SSA) (также называемым сенильным сердечным амилоидозом (SCA)). SSA часто сопровождается микроскопическими отложениями во многих других органах. Мутации TTR ускоряют процесс образования TTRамилоида и являются наиболее важным фактором риска для развития клинически значимого TTRамилоидоза (также называемого ATTR (амилоидозом транстиретинового типа)). Известно, что более 85 амилоидогенных вариантов TTR вызывают системный наследственный амилоидоз. Главным местом экспрессии TTR является печень. Другие существенные места экспрессии включают в себя сосудистое сплетение, сетчатку и поджелудочную железу.
TTR-амилоидоз проявляется в различных формах. При более сильном поражении периферической нервной системы это заболевание называют наследственной амилоидной невропатией (FAP).
Когда первично вовлечено сердце, но не нервная система, это заболевание называют наследственной амилоидной кардиомиопатией (FAC). Третий основной тип TTR-амилоидоза называют лептоменингеальным амилоидозом/амилоидозом ЦНС (центральной нервной системы).
Было показано, что двухцепочечные молекулы РНК (дцРНК) блокируют экспрессию генов в высоко консервативном механизме, известном как интерференция РНК (RNAi). WO 99/32619 (Fire et al) описал применение дцРНК, состоящей по меньшей мере из 25 нуклеотидов, для ингибирования экспрессии генов в С. elegans. Было также показано, что дцРНК деградирует РНК-мишень в других организмах (см., например, WO 99/53050, Waterhouse et al.; и WO 99/61631, Heifetz et al.), Drosophila (см., например, Yang, D., et al., Curr. Biol. (2000) 10:1191-1200) и млекопитающих (см., например, WO 00/44895, Limmer; и DE 101 00 586.5, Kreutzer et al).
U.S. 20070207974 описывает функциональные и гиперфункциональные siRNA. U.S. 20090082300 описывает антисмысловые молекулы, направленные против TTR. U.S. Pat. No. 7250496 описывает микроРНК, направленные против TTR.
Сущность изобретения
В одном варианте осуществления, это изобретение обеспечивает двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК) для ингибирования экспрессии транстиретина, причем указанная дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, причем эта антисмысловая цепь содержит участок, комплементарный части мРНК, кодирующей транстиретин (TTR), где указанный участок комплементарности имеет длину менее 30 нуклеотидов, и эта антисмысловая цепь содержит 15 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:450, SEQ ID NO:730 или SEQ ID NO:1010. В родственном варианте осуществления, эта смысловая цепь содержит 15 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:449, SEQ ID NO:729 или SEQ ID NO:1009. Еще в одном варианте осуществления, эта смысловая цепь состоит из SEQ ID NO:449, а антисмысловая цепь состоит из SEQ ID NO:450. В другом родственном варианте осуществления, эта смысловая цепь состоит из SEQ ID NO:729, а эта антисмысловая цепь состоит из SEQ ID NO:730. Еще в одном родственном варианте осуществления, смысловая цепь состоит из SEQ ID NO:1009, а антисмысловая цепь состоит из SEQ ID NO:1010. В другом родственном варианте осуществления, эта дцРНК содержит смысловую цепь, выбранную из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В, 7 и 16, и антисмысловую цепь, выбранную из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В, 7 и 16.
В некоторых вариантах осуществления, участок комплементарности между антисмысловой цепью этой дцРНК и мРНК, кодирующей транстиретин, имеет длину 19 нуклеотидов. В другом варианте осуществления, этот участок комплементарности состоит из SEQ ID NO:169. В других вариантах осуществления, каждая цепь дцРНК имеет длину 19, 20, 21, 22, 23 или 24 нуклеотидов. Еще в одном варианте осуществления, каждая цепь имеет длину 21 нуклеотид.
В некоторых вариантах осуществления, дцРНК для ингибирования экспрессии транстиретина не
- 1 036772 расщепляет мРНК TTR между нуклеотидом аденином в положении 637 SEQ ID NO:1331 и нуклеотидом гуанином в положении 638 of SEQ ID NO:1331. В других вариантах осуществления, эта дцРНК расщепляет мРНК TTR между нуклеотидом гуанином в положении 636 SEQ ID NO:1331 и нуклеотидом аденином в положении 637 SEQ ID NO:1331. В некоторых вариантах осуществления, эта дцРНК отжигается с мРНК TTR между нуклеотидом гуанином в положении 628 SEQ ID NO:1331 и нуклеотидом урацилом в положении 646 SEQ ID NO:1331.
В других родственных вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает дцРНК, описанную выше, для ингибирования экспрессии транстиретина, причем эта дцРНК содержит по меньшей мере один или несколько модифицированных нуклеотидов. В родственных вариантах осуществления, по меньшей мере один модифицированный нуклеотид (или нуклеотиды) выбран (выбраны) из группы, состоящей из: 2'-О-метилмодифицированного нуклеотида, нуклеотида, содержащего 5'-фосфоротиоатную группу, и конечного нуклеотида, связанного с холестерил-производным или группой бисдециламида додекановой кислоты. В другом родственном варианте осуществления, модифицированный нуклеотид выбран из группы, состоящей из: 2'-дезокси-2'-фтор-модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, замкнутого нуклеотида, лишенного азотистого основания нуклеотида, 2'аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и содержащего неприродное основание нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления, эта дцРНК содержит по меньшей мере один 2'-метилмодифицированный нуклеотид.
В других вариантах осуществления, вышеописанная дцРНК для ингибирования экспрессии транстиретина конъюгирована с лигандом или приготовлена в липидной готовой форме. В некоторых вариантах осуществления, эта липидная готовая форма может быть готовой LNP-формой, готовой LNPO1формой, готовой XTC-SNALP-формой или готовой SNALP-формой. В родственных вариантах осуществления, готовая XTC-SNALP-форма является следующей: использующей 2,2-дилинолеил-4диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолан (ХТС) с ХТС/ОРРС/холестерин/PEG-cDMA в соотношении 57,1/7,1/34,4/1,4 и отношение липид:siRNA приблизительно 7. В других родственных вариантах осуществления, смысловая цепь этой дцРНК состоит из SEQ ID NO: 1009 и антисмысловая цепь состоит из SEQ ID NO:1010, и эта дцРНК приготовлена в готовой форме ХТС-SNALP следующим образом: с использованием 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолана (ХТС) с ХТС/ВРРС/холестерин/PEGcDMA в соотношении 57,1/7,1/34,4/1,4 и отношения липид:siRNA. приблизительно 7. Альтернативно, дцРНК, такая как дцРНК, описанные выше, может быть приготовлена в готовой LNP09-форме следующим образом: с использованием XTC/DSPC/Chol/PEG20oo-C14 в соотношении 50/10/38,5/1,5 мол.% и отношения липид:siRNA. приблизительно 11:1. В другой вариации, эту дцРНК готовят в готовой LNP11форме следующим образом: с использованием MC3/DSPC/Chol/PEG2000-C14 в соотношении 50/10/38,5/1,5 мол.% и соотношения липид:siRNA. приблизительно 11:1. В другом варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена в готовой LNP09-форме или LNPH-форме и уменьшает уровни мРНК TTR приблизительно на 85-90% при дозе 0,3 мг/кг относительно группы ЗФР-контроля. Еще в одном варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена в готовой LNP09-форме или готовой LNPH-форме и уменьшает уровни мРНК TTR при дозе 0,1 мг/кг относительно группы ЗФР-контроля. В еще одном варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена в готовой LNP09-форме или готовой LNPH-форме и уменьшает уровни белка TTR, как измерено при помощи Вестерн-блоттинга. Еще в одном варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена следующим образом: с использованием DlinDMA с DLinDMA/DPPC/холестерин/PEG2000-cDMA в соотношении 57,1/7,1/34,4/1,4 и отношения липид:siRNA приблизительно 7.
В некоторых вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает дцРНК, такую как описанные выше дцРНК, для ингибирования экспрессии транстиретина, где введение этой дцРНК в клетку приводит приблизительно к 95% ингибированию экспрессии мРНК TTR, как измерено ПЦР-анализом реального времени, где этой клеткой является клетка HepG2 или клетка Нер3В и где концентрация дцРНК равна 10 нМ. В родственных вариантах осуществления, введение этой дцРНК в клетку приводит приблизительно к 74% ингибированию экспрессии мРНК TTR, как измерено анализом разветвленной ДНК, где этой клеткой является клетка HepG2 или клетка Нер3В и где концентрация дцРНК равна 10 нМ. В других родственных вариантах осуществления, эта дцРНК имеет IC50 менее 10 пМ в клетке HepG2, где концентрация дцРНК равна 10 нМ. В других родственных вариантах осуществления, эта дцРНК имеет ED50 приблизительно 1 мг/кг. В других родственных вариантах осуществления, введение этой дцРНК уменьшает мРНК TTR приблизительно на 80% в печени собакоподобной обезьяны, где концентрация этой дцРНК равна 3 мг/кг. В других родственных вариантах осуществления, введение этой дцРНК не приводит к иммуностимулирующей активности в мононуклеарных клетках периферической крови (РВМС), как измерено при помощи ELISA-анализов на IFN-α и TNF-α. В других родственных вариантах осуществления, введение дцРНК уменьшает уровни мРНК TTR печени приблизительно на 97% или сывороточные уровни белка TTR приблизительно на 90%, при концентрации дцРНК 6 мг/кг. В других родственных вариантах осуществления, введение дцРНК уменьшает уровни мРНК TTR печени и/или сывороточные уровни белка TTR до 22 дней, где концентрация дцРНК равна 6 мг/кг или 3 мг/кг. В других родственных вариантах осуществления, эта дцРНК подавляет сывороточные уровни белка TTR до дня 14
- 2 036772 после обработки при введении субъекту, нуждающемуся в этом, при 1 мг/кг или 3 мг/кг. В других родственных вариантах осуществления, эта дцРНК уменьшает экспрессию TTR на 98,9% в клетке Нер3В при концентрации 0,1 нМ, как измерено ПЦР реального времени. В других родственных вариантах осуществления, эта дцРНК уменьшает экспрессию TTR на 99,4% в клетке Нер3В при концентрации 10 нМ, как измерено ПЦР реального времени.
В других вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК) для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), где указанная дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, где эта антисмысловая цепь содержит участок, комплементарный части мРНК, кодирующей транстиретин (TTR), причем указанный участок комплементарности имеет длину менее 30 нуклеотидов, и где эта дцРНК содержит смысловую цепь, выбранную из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В, 7 и 16, и антисмысловую цепь, выбранную из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В, 7 и 16.
В другом варианте осуществления, это изобретение обеспечивает двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК) для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), где указанная дцРНК содержит антисмысловую цепь, содержащую участок, комплементарный 15-30 нуклеотидам из нуклеотидов 618-648 SEQ ID NO:1331 и где указанная антисмысловая цепь спаривается с гуанином в положении 628 SEQ ID NO:1331.
В некоторых вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает клетку, содержащую любую из дцРНК, описанных в разделе Сущность изобретения выше. В некоторых других вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере одну цепь любой из дцРНК;, описанных в разделе Сущность изобретения выше. В некоторых вариантах осуществления, этот вектор находится в клетке.
В других вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для ингибирования экспрессии гена TTR, содержащую дцРНК, описанную в разделе Сущность изобретения выше, и фармацевтически приемлемый носитель. В родственных вариантах осуществления, это изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для ингибирования экспрессии гена TTR, содержащую дцРНК и готовую SNALP-форму, где эта дцРНК содержит антисмысловую цепь, которая имеет длину менее 30 нуклеотидов и содержит 15 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:450, SEQ ID NO:730 или SEQ ID NO:1010, и где эта готовая SNALP-форма содержит DlinDMA, DPPC, холестерин и PEG2000-cDMA в соотношении 57,1/7,1/34,4/1,4, соответственно.
Еще в одном варианте осуществления, это изобретение обеспечивает способ ингибирования экспрессии TTR, предусматривающий: (а) контактирование клетки с любой из дцРНК, описанных в разделе Сущность изобретения выше; и (b) поддержание клетки, полученной в стадии (а), в течение времени, достаточного для деградации мРНК-транскрипта гена TTR, с ингибированием посредством этого экспрессии гена TTR в этой клетке.
Еще в одном варианте осуществления, это изобретение обеспечивает способ лечения нарушения, опосредованного экспрессией TTR, предусматривающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества любой из дцРНК, описанных в разделе Сущность изобретения выше. В родственных вариантах осуществления, эту дцРНК вводят человеку при приблизительно 0,01, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5 или 5,0 мг/кг. Еще в одном родственном варианте осуществления, человек, получающий лечение, имеет транстиретиновый амилоидоз и/или нарушение печени. В родственном варианте осуществления, этот человек дополнительно имеет трансплантат печени. Еще в одном варианте осуществления, введение дцРНК уменьшает мРНК TTR приблизительно на 80% в печени человека, когда концентрация дцРНК равна 3 мг/кг. Еще в одном родственном варианте осуществления, дцРНК не приводит к иммуностимулирующей активности в человеке, как измерено ELISA-анализами на IFN-α и TNF-α. В другом родственном варианте осуществления, введение дцРНК уменьшает уровни мРНК TTR печени приблизительно на 97% или сывороточные уровни белка TTR приблизительно на 90%, когда концентрация дцРНК равна 6 мг/кг. В другом родственном варианте осуществления, введение дцРНК уменьшает уровни мРНК TTR печени и/или уровни белка TTR сыворотки до 22 дней, когда концентрация дцРНК равна 6 мг/кг или 3 мг/кг. Еще в одном родственном варианте осуществления, дцРНК готовят в готовой LNP09-форме следующим образом: с использованием XTC/DSPC/Chol/PEG2000-C14 в соотношении 50/10/38,5/1,5 мол.% и отношения липид:siRNA приблизительно 11:1. Еще в одном родственном варианте осуществления, дцРНК готовят в готовой LNPH-форме следующим образом: с использованием MC3/DSPC/Chol/PEG2000-C14 в соотношении 50/10/38,5/1,5 мол.% и отношения липид:siRNA приблизительно 11:1. Еще в одном родственном варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена в готовой LNP09-форме или готовой LNPH-форме и уменьшает уровни мРНК TTR приблизительно на 85-90% при дозе 0,3 мг/кг относительно группы ЗФР-контроля. Еще в одном родственном варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена в готовой LNP09-форме или готовой LNPH-форме и уменьшает уровни белка TTR зависимым от дозы образом относительно группы ЗФР-контроля, как измерено Вестернблоттингом. Еще в одном родственном варианте осуществления, введение дцРНК подавляет уровни белка TTR в сыворотке до дня 14 после обработки при введении человеку 1 мг/кг или 3 мг/кг. Еще в одном родственном варианте осуществления, эта дцРНК приготовлена в готовой SNALP-форме следующим образом: с использованием DlinDMA с соотношением DLinDMA/DPPC/холестерин/PEG2000-cDMA
- 3 036772
57,1/7,1/34,4/1,4 и отношения лиnид:siRNA. приблизительно 7.
В другом варианте осуществления, это изобретение обеспечивает применение дцРНК для лечения нарушения, опосредованного экспрессией TTR, предусматривающее введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества любой из дцРНК, описанных в разделе Сущность изобретения выше. В родственных вариантах осуществления, эту дцРНК вводят человеку при приблизительно 0,01, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5 или 5,0 мг/кг. В другом конкретном родственном варианте осуществления, дцРНК вводят человеку при приблизительно 1,0 мг/кг. В другом родственном варианте осуществления, этот человек имеет транстиретиновый амилоидоз и/или нарушение печени. В другом варианте осуществления, этот человек дополнительно имеет трансплантат печени.
В другом варианте осуществления, это изобретение обеспечивает применение дцРНК в способе ингибирования экспрессии TTR в клетке, где этот способ предусматривает (а) контактирование клетки с дцРНК, описанной в разделе Сущность изобретения выше; и (b) поддержание клетки, полученной в стадии (а), в течение времени, достаточного для деградации мРНК-транскрипта гена TTR, с ингибированием посредством этого экспрессии гена TTR в этой клетке.
Подробности одного или нескольких вариантов осуществления этого изобретения представлены в приведенном ниже описании. Другие признаки, цели и преимущества этого изобретения будут очевидными из описания и фигур и из формулы изобретения.
Описание фигур
Фиг. 1 является диаграммой уровней TNF-α и IFN-α в культивируемых РВМС человека после трансфекции siRNA TTR.
Фиг. 2А и 2В являются кривыми доза-ответ для AD-18324 и AD-18328, соответственно, в клетках HepG2.
Фиг. 3 является кривой доза-ответ для AD-18246 в клетках HepG2.
Фиг. 4А и Фиг. 4В показывают ингибирование уровней мРНК печени и уровней белка плазмы, соответственно, в трансгенных мышах H129-mTTR-KO/iNOS-KO/hTTR посредством внутривенного болюсного введения TTR-dsRNA (AD-18324, AD-18328 и AD-18246), приготовленного в LNP01.
Фиг. 5 является диаграммой, суммирующей измерения уровней мРНК TTR в печени приматов (не человека) после 15-минутной внутривенной инфузии TTR-dsRNA (AD-18324 и AD-18328), приготовленных в SNALP.
Фиг. 6А и 6В показывают ингибирование мРНК V30M-TTR печени человека и уровней белка в сыворотке, соответственно, в трансгенных мышах посредством внутривенного болюсного введения SNALP-18328. Средние величины групп определяли, нормализовали относительно группы ЗФР-контроля и затем строили диаграмму. Стержни ошибок представляют стандартные отклонения. Процентное уменьшение средней величины группы, относительно ЗФР, показано для групп SNALP-1955 и SNALP18328. (*** р<0,001, однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным (post-hoc) критерием Дунна)).
Фиг. 7А и 7В показывают продолжительность уменьшения мРНК V30M-TTR печени человека, соответственно, в трансгенных мышах на протяжении 22 дней после однократного внутривенного болюсного введения SNALP-18328. Определяли средние величины групп. Уровни мРНК TTR/GAPDH нормализовали относительно уровней дня 0 и строили диаграмму. Рассчитывали процентное уменьшение нормализованных уровней мРНК TTR относительно SNALP-1955 для каждой временной точки, и они показаны для групп SNALP-18328. (*** р<0,001, однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным (post-hoc) критерием Дунна).
Фиг. 8 показывает временной ход уровней белка TTR в сыворотке в приматах (не человеке) на протяжении 14 дней после однократной 15-минутной инфузии SNALP-18328.
Фиг. 9 показывает уменьшение TTR-иммунореактивности в различных тканях мышей с нокаутом V30M TTR/HSF-1 человека после внутривенного болюсного введения SNALP-18328. E, пищевод; S, желудок; II, кишечник/двенадцатиперстная кишка; 14, кишечник/ободочная кишка; N, нерв; D, дорсальные ганглии блуждающего нерва.
Фиг. 10 показывает измерения мРНК TTR и уровни белка в сыворотке, соответственно, в печени приматов (не человека) после 15-минутной внутривенной инфузии XTC-SNALP-18328.
Фиг. 11А и 11В показывают измерения мРНК TTR и уровней белка в сыворотке, соответственно, в печени приматов (не человека) после 15-минутной внутривенной инфузии LNP09-18328 или LNP1118328. Фиг. 11С показывает временной ход уровней белка TTR в сыворотке на протяжении 28 дней после 15-минутной внутривенной инфузии 0,3 мг/кг LNP09-18328, в сравнении с группой ЗФР-контроля.
Фиг. 12 показывает последовательность мРНК TTR человека (Ref. Seq. NM_000371.3, SEQ ID NO:1331).
Фиг. 13А и 13В являются последовательностями мРНК TTR человека и крысы, соответственно.
Фиг. 13А является последовательностью мРНК TTR человека (Ref. Seq. NM_000371.2, SEQ ID NO: 1329).
Фиг. 13В является мРНК TTR крысы (Ref. Seq. NM_012681.1, SEQ ID NO:1330).
Фиг. 14 показывает сопоставление нуклеотидов NM_000371.3, NM_000371.2 и AD-18328.
- 4 036772
Фиг. 15 иллюстрирует симптомы и мутации в TTR, ассоциированные с наследственной амилоидной невропатией, наследственной амилоидной кардиомиопатией и амилоидозом ЦНС.
Фиг. 16 показывает уменьшение уровней мРНК TTR в печени с использованием SNALP-18534 с различными продолжительностями инфузии. Группам животных (n=4/группа) вводили 1 мг/кг SNALP18534 посредством 15-минутной или 1-, 2- или 3-часовой инфузии.
Спустя сорок восемь часов, крыс эвтанизировали и печени извлекали. Измеряли уровни мРНК TTR и GAPDH из лизатов печени с использованием Quantigene bDNA-анализа. Для каждого животного рассчитывали отношение уровней мРНК TTR к мРНК GAPDH. Определяли средние величины групп и нормализовали их относительно группы ЗФР-контроля и затем строили диаграммы. Стержни ошибок представляют стандартные отклонения. (*** р<0,001, однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным (post-hoc) критерием Бонферрони, относительно ЗФР).
Фиг. 17 показывает измерения уровней мРНК TTR в печени крыс после 15-минутной внутривенной инфузией LNP07-18534 или LNP08-18534.
Фиг. 18 показывает in vivo ингибирование эндогенных уровней мРНК TTR в печенях крыс SpragueDawley после 15-минутной IV-инфузии LNP09-18534 или LNP11-18534. Группам животных (n=4/группа) вводили внутривенно 0,01, 0,03, 0,1 или 0,3 мг/кг LNP09-18534, LNP11-18534; или ЗФР посредством 15минутной инфузии. Спустя сорок восемь часов, крыс эвтанизировали и печени извлекали. Измеряли уровни мРНК TTR и GAPDH из лизатов биопсии печени с использованием Quantigene bDNA-анализа. Для каждого животного рассчитывали отношение уровней мРНК TTR к мРНК GAPDH. Определяли средние величины групп и нормализовали их относительно группы ЗФР-контроля и затем строили диаграммы. Стержни ошибок представляют стандартные отклонения.
Подробное описание изобретения
Это изобретение обеспечивает дцРНК (dsRNA) и способы применения этих дцРНК для ингибирования экспрессии гена TTR в клетке или млекопитающем, где эта дцРНК поражает (деградирует) ген TTR. Это изобретение обеспечивает также композиции и способы для лечения патологических состояний и заболеваний, таких как TTR-амилоидоз, в млекопитающем, вызываемых экспрессией гена TTR. дцРНК управляет последовательность-специфической деградацией мРНК посредством процесса, известного как интерференция РНК (RNAi).
дцРНК (dsRNA) описанных здесь композиций включают в себя цепь РНК (антисмысловую цепь), имеющую участок, который имеет длину 30 нуклеотидов, обычно длину 19-24 нуклеотидов, и является по существу комплементарным по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена TTR Применение этих дцРНК делает возможной нацеленную деградацию мРНК генов, которые предположительно участвуют в патологиях, ассоциированных с экспрессией TTR в млекопитающих. Очень низкие дозы дцРНК TTR, в частности, могут специфически и эффективно опосредовать RNAi, приводя к значимому ингибированию экспрессии гена TTR. С использованием анализов на основе клеток авторы этого изобретения продемонстрировали, что дцРНК, поражающие TTR, могут специфически и эффективно опосредовать RNAi, приводя к значимому ингибированию экспрессии гена TTR. Таким образом, способы и композиции, включающие в себя эти дцРНК, применимы для лечения патологических процессов, которые могут опосредоваться даун-регуляцией (понижающей регуляцией) TTR, например, в лечении нарушения печени или TTR-амилоидоза, например, FAP.
Способы и композиции, содержащие дцРНК TTR, применимы для лечения патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR, таких как TTR-амилоидоз. В одном варианте осуществления, способ лечения нарушения, опосредуемого экспрессией TTR, предусматривает введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества дцРНК, поражающей (ген) TTR. В одном варианте осуществления, дцРНК вводят этому человеку при приблизительно 0,01, 0,1, 0,5, 1,0, 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 мг/кг.
Следующее подробное описание описывает, как можно готовить и применять композиции, содержащие дцРНК, для ингибирования экспрессии гена TTR, а также композиции и способы для лечения заболеваний и нарушений, вызываемых экспрессией этого гена. Фармацевтические композиции, описанные в этом изобретении, включают в себя дцРНК, имеющую антисмысловую цепь, содержащую участок комплементарности, который имеет длину менее 30 нуклеотидов, обычно длину 19-24 нуклеотидов, и является по существу комплементарным по меньшей мере части РНК-транскрипта гена TTR, вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Композиции, представленные в этом изобретении, включают в себя также дцРНК, имеющую антисмысловую цепь, имеющую участок комплементарности, который имеет длину менее 30 нуклеотидов, обычно длину 19-24 нуклеотидов, и является по существу комплементарным по меньшей мере части РНК-транскрипта гена TTR.
Смысловая цепь дцРНК может включать в себя 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:449, SEQ ID NO:729 или SEQ ID NO:1009. Антисмысловая цепь дцРНК может включать в себя 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:450, SEQ ID NO:730 или SEQ ID NO:1010. В одном варианте осуществления, смысловая цепь дцРНК может состоять из SEQ ID NO:449 или ее фрагментов и антисмысловая цепь может состоять из SEQ ID NO:450 или ее фрагментов. В одном варианте осуществления, смысловая цепь дцРНК может со
- 5 036772 стоять из SEQ ID NO:729 или ее фрагментов и антисмысловая цепь может состоять из SEQ ID NO:730 или ее фрагментов. В одном варианте осуществления, смысловая цепь дцРНК может состоять из SEQ ID NO:1009 или ее фрагментов и антисмысловая цепь может состоять из SEQ ID NO:1010 или ее фрагментов.
В одном варианте осуществления, дцРНК может включать в себя по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более модифицированных нуклеотидов. В одном варианте осуществления, модифицированный нуклеотид может включать в себя 2'-O-метилмодифицированный нуклеотид, нуклеотид, содержащий 5'-фосфоротиоатную группу и/или концевой нуклеотид, связанный с холестерилпроизводным или группой бисдециламида додекановой кислоты. В одном варианте осуществления, модифицированный нуклеотид может включать в себя 2'-дезокси-2'-фтормодифицированный нуклеотид, 2'-дезоксимодифицированный нуклеотид, замкнутый нуклеотид, лишенный азотистого основания нуклеотид, 2'аминомодифицированный нуклеотид, 2'-алкилмодифицированный нуклеотид, морфолинонуклеотид, фосфорамидат и/или содержащий неприродное основание нуклеотид.
В одном варианте осуществления, участок комплементарности дцРНК имеет длину по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или более нуклеотидов. В одном варианте осуществления, участок комплементарности дцРНК имеет длину по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO: 169.
В одном варианте осуществления, каждая цепь дцРНК имеет длину 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более нуклеотидов. В одном варианте осуществления, дцРНК включает в себя смысловую цепь или ее состоящий из 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 нуклеотидов или 21 нуклеотида фрагмент, выбранный из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В, 7 и 16, и антисмысловую цепь или ее состоящий из 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 нуклеотидов или 21 нуклеотида фрагмент, выбранный из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В, 7 и 16.
В одном варианте осуществления, введение дцРНК в клетку приводит приблизительно к 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или большему ингибированию экспрессии мРНК TTR, как измерено при помощи ПЦР-анализа реального времени. В одном варианте осуществления, введение дцРНК в клетку приводит приблизительно к 40%-45%, 45%-50%, 50%-55%, 55%-60%, 60%-65%, 65%70%, 70%-75%, 75%-80%, 80%-85%, 85%-90%, 90%-95% или большему ингибированию экспрессии мРНК TTR, как измерено при помощи ПЦР-анализа реального времени. В одном варианте осуществления, введение дцРНК в клетку приводит приблизительно к 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или большему ингибированию экспрессии мРНК TTR, как измерено при помощи анализа разветвленной ДНК. В одном варианте осуществления, введение дцРНК в клетку приводит приблизительно к 40%-45%, 45%-50%, 50%-55%, 55%-60%, 60%-65%, 65%-70%, 70%-75%, 75%-80%, 80%-85%, 85%-90%, 90%-95% или большему ингибированию экспрессии мРНК TTR, как измерено при помощи анализа разветвленной ДНК.
В одном варианте осуществления, дцРНК имеет IC50 менее 0,01 пМ, 0,1 пМ, 1 пМ, 5 пМ, 10 пМ, 100 пМ или 1000 пМ. В одном варианте осуществления, дцРНК имеет ED50 приблизительно 0,01, 0,1, 1, 5 или 10 мг/кг.
В одном варианте осуществления, дцРНК может уменьшать мРНК TTR приблизительно на 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или более в собакоподобных обезьянах. В одном варианте осуществления, введение дцРНК уменьшает уровни мРНК TTR печени приблизительно на 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или более или уровни белка TTR сыворотки приблизительно на 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или более. В одном варианте осуществления, введение дцРНК уменьшает уровни мРНК TTR печени и/или уровни белка TTR сыворотки до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более дней.
В одном варианте осуществления, дцРНК приготовлена в готовой LNP-форме и уменьшает уровни мРНК TTR приблизительно на 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или более при дозе 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или 1 мг/кг, относительно группы ЗФР-контроля. В одном варианте осуществления, дцРНК приготовлена в готовой LNP-форме и уменьшает уровни белка TTR приблизительно на 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или более относительно группы ЗФР-контроля, как измерено при помощи Вестерн-блоттинга. В одном варианте осуществления, дцРНК подавляет уровни белка TTR в сыворотке до дня 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 после лечения при введении субъекту, нуждающемуся в этом, при 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 мг/кг.
Таким образом, в некоторых аспектах, в этом изобретении представлены фармацевтические композиции, содержащие дцРНК TTR и фармацевтически приемлемый носитель, способы применения этих композиций для ингибирования гена TTR и способы применения этих фармацевтических композиций для лечения заболеваний, вызываемых экспрессией гена TTR.
I. Определения
Для удобства, ниже обеспечено значение определенных терминов и фраз, используемых в этом описании, примерах и прилагаемой формуле изобретения. Если имеется явное разногласие между применением термина в других частях этого описания и его определением, даваемым в этом разделе, должно
- 6 036772 превалировать определение, приведенное в этом разделе.
G, С, А и U обычно обозначают, каждый, нуклеотид, который содержит гуанин, цитозин, аденин и урацил в качестве основания, соответственно. Т и dT используются здесь взаимозаменяемо и относятся к дезоксирибонуклеотиду, в котором нуклеооснованием является тимин, например дезоксириботимин. Однако, должно быть понятно, что термин рибонуклеотид или нуклеотид или дезоксирибонуклеотид может также относиться к модифицированному нуклеотиду, как более детально описано ниже, или суррогатной замененной части молекулы. Квалифицированному в данной области специалисту хорошо известно, что гуанин, цитозин, аденин и урацил могут быть заменены другими частями молекул по существу без изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, содержащего нуклеотид, несущий такую замененную часть. Например, без ограничения, нуклеотид, содержащий инозин в качестве его основания, может участвовать в спаривании оснований с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил. Таким образом, нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть заменены в нуклеотидных последовательностях этого изобретения нуклеотидом, содержащим, например, инозин. Последовательности, содержащие такие замененные части, являются вариантами этого изобретения.
В данном контексте, термин транстиретин (TTR) относится к гену в клетке. TTR известен также как ATTR, HsT2651, PALB, пре(д)альбумин, ТВРА и транстиретин ((пре(д)альбумин, амилоидоз типа I). Последовательность мРНК-транскрипта TTR человека может быть найдена в NM 000371. Последовательность мРНК TTR мыши может быть найдена в NM_013697.2 и последовательность мРНК TTR крысы может быть найдена в NM_012 681.1.
В данном контексте, последовательность-мишень относится к смежной части нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованной во время транскрипции гена TTR, в том числе мРНК, которая является продуктом процессинга РНК первичного продукта транскрипции.
В данном контексте, термин цепь, содержащая последовательность, относится к олигонуклеотиду, содержащему цепь нуклеотидов, которая описывается последовательностью, ссылающейся на использование стандартной номенклатуры нуклеотидов.
В данном контексте, если нет другого указания, термин комплементарная, при использовании для описания первой нуклеотидной последовательности относительно второй нуклеотидной последовательности, относится к способности олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру при определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как будет понятно квалифицированному в данной области лицу. Такие условия могут быть, например, строгими условиями, где строгие условия могут включать в себя: 400 мМ NaCl, 40 мМ PIPES рН 6,4, 1 мМ ЭДТА, 50°С или 70°С в течение 12-16 ч с последующим промыванием. Могут использоваться другие условия, например, физиологически релевантные условия, которые могут встречаться внутри организма. Квалифицированный в данной области специалист будет способен определить набор условий, наиболее подходящих для тестирования комплементарности двух последовательностей в соответствии с конечным применением гибридизуемых нуклеотидов.
Этот тест включает в себя спаривание оснований олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, на протяжении полной длины этой первой и второй нуклеотидной последовательности. Такие последовательности могут называться здесь полностью комплементарными относительно друг друга. Однако, когда первую последовательность называют здесь по существу комплементарной относительно второй последовательности, эти две последовательности могут быть полностью комплементарными, или они могут образовывать одну или несколько, но обычно не более 4, 3 или 2 ошибочно спаренных пар оснований после гибридизации, с сохранением способности гибридизоваться при условиях, наиболее релевантных относительно их конечного применения. Однако, когда два олигонуклеотида конструируют для образования, после гибридизации, одного или нескольких одноцепочечных выступов, такие выступы не должны рассматриваться как ошибочные спаривания в связи с определением комплементарности. Например, дцРНК, содержащая один олигонуклеотид с длиной 21 нуклеотида и другой олигонуклеотид с длиной 23 нуклеотида, причем этот более длинный олигонуклеотид содержит последовательность из 21 нуклеотида, которая полностью комплементарна более короткой последовательности, может все еще называться полностью комплементарной для описанных здесь целей.
Комплементарные последовательности в данном контексте могут также включать в себя, или быть полностью образованы из них, пары оснований не Уотсона-Крика и/или пары оснований, образованные из неприродных и модифицированных нуклеотидов, пока удовлетворяются вышеуказанные требования в отношении их способности гибридизоваться. Такие пары оснований не Уотсона-Крика включают в себя, но не ограничиваются ими, спаривание G:U Уоббла или спаривание оснований по Хугстину.
Термины комплементарные, полностью комплементарные и по существу комплементарные могут использоваться в данном контексте в отношении спаривания оснований между смысловой цепью и антисмысловой цепью dsRNA, или между антисмысловой цепью дцРНК и последовательностью
- 7 036772 мишенью, как будет понятно из контекста их применения.
В данном контексте, полинуклеотид, который является по существу комплементарным по меньшей мере части мессенджер РНК (мРНК), обозначает полинуклеотид, который является по существу комплементарным смежной (непрерываемой) части представляющей интерес мРНК (например, мРНК, кодирующей TTR), включающей в себя 5'-UTR, открытую рамку считывания (ORF), или 3'-UTR. Например, полинуклеотид является комплементарным по меньшей мере части мРНК TTR, если эта последовательность является по существу комплементарной непрерываемой части мРНК, кодирующей TTR.
Термин двухцепочечная РНК или дцРНК, относится в данном контексте к комплексу молекул рибонуклеиноых кислот, имеющему дуплексную структуру, содержащую две антипараллельных и по существу комплементарных, как определено выше, цепи нуклеиновых кислот. Обычно, большинство нуклеотидов каждой цепи являются рибонуклеотидами, но, как описано подробно здесь, каждая цепь или обе цепи могут также включать в себя по меньшей мере один нерибонуклеотид, например дезоксирибонуклеотид, и/или модифицированный нуклеотид. Кроме того, в контексте этого описания, дцРНК может включать в себя химические модификации во множественных нуклеотидах, включающие в себя существенные модификации во многих нуклеотидах, и включающие в себя все типы модификаций, описанные здесь или известные в данной области. Любые такие модификации, используемые в молекуле типа siRNA, охватываются термином дцРНК для целей этого описания и формулы изобретения.
Две цепи, образующие дуплексную структуру, могут быть различными частями одной большей молекулы РНК, или они могут быть отдельными молекулами РНК. Когда эти две цепи являются частью одной большей молекулы, и, следовательно, соединены непрерываемой цепью нуклеотидов между 3'концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи с образованием дуплексной структуры, эту соединяющую РНК-цепь называют шпилечной петлей. Когда эти две цепи соединены ковалентно другим способом, чем непрерываемая цепь нуклеотидов, между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи с образованием дуплексной структуры, эту соединяющую структуру называют линкером. Эти цепи РНК могут иметь одинаковое или разное число нуклеотидов. Максимальное число пар оснований равно числу нуклеотидов в самой короткой цепи дцРНК минус любые выступы, которые присутствуют в этом дуплексе. Наряду с этой дуплексной структурой, дцРНК может содержать один или несколько нуклеотидных выступов. Термин siRNA здесь также относится к дцРНК, описанной выше.
В данном контексте, термин нуклеотидный выступ относится к неспаренному нуклеотиду или неспаренным нуклеотидам, которые выступают из дуплексной структуры дцРНК, когда 3'-конец одной цепи этой дцРНК простирается за пределы 5'-конца другой цепи, или наоборот. Тупой или тупой конец обозначает, что на конце этой дцРНК не имеются неспаренные нуклеотиды, т.е. ни на одном конце этой молекулы нет нуклеотидного выступа.
Термин антисмысловая цепь относится к цепи дцРНК, которая включает в себя участок, который является по существу комплементарным последовательности-мишени. В данном контексте, термин участок комплементарности относится к участку на антисмысловой цепи, который является по существу комплементарным последовательности, например, последовательности-мишени, определенной здесь. Когда этот участок комплементарности является не полностью комплементарным этой последовательности-мишени, эти ошибочные спаривания являются наиболее приемлемыми в концевых участках и, если присутствуют, находятся обычно в концевом участке или в концевых участках, например, в пределах 6, 5, 4, 3 или 2 нуклеотидов 5'- и/или 3'-конца.
Термин смысловая цепь относится в данном контексте к цепи дцРНК, которая включает в себя участок, который является по существу комплементарным участку антисмысловой цепи.
В данном контексте, термин SNALP относится к стабильной частице нуклеиновая кислота-липид. SNALP представляет пузырек из липидов, покрывающий уменьшенное водное пространство, содержащее нуклеиновую кислоту, такую как дцРНК или плазмиду, из которой транскрибируется дцРНК. SNALP описаны, например, в Публикациях заявок на патент США с номерами 20060240093, 20070135372 и USSN 61/045228, поданными 15 апреля 2008 года. Эти заявки включены здесь посредством ссылки.
Введение в клетку в контексте с дцРНК обозначает облегчение поглощения или абсорбции в эту клетку, как понятно квалифицированным в данной области специалистам. Абсорбция или поглощение дцРНК может осуществляться без посторонней помощи диффузионными или активными клеточными процессами, или при помощи вспомогательных агентов или устройств. Значение этого термина не ограничивается клетками in vitro; дцРНК может также быть введенной в клетку, где эта клетка является частью живого организма. В таком случае, введение в эту клетку будет включать в себя доставку этому организму. Например, для доставки in vivo дцРНК может быть инъецирована в участок ткани или введена системно. Введение in vitro в клетку включает в себя способы, известные в данной области, такие как электропорация и липофекция. Дополнительные подходы описаны здесь или известны в данной области.
Термины сайленсинг, ингибирование экспрессии, даун-регуляция (понижающая регуляция) экспрессии, супрессия экспрессии и т.п., когда они относятся к гену TTR, относятся здесь по меньшей мере к частичной супрессии экспрессии гена TTR, которая проявляется уменьшением количества мРНК, которое может быть выделено из первой клетки или группы клеток, в которых транскрибируется ген
- 8 036772
TTR и которые были обработаны таким образом, что ген TTR является ингибированным, в сравнении со второй клеткой или группой клеток, по существу идентичных первой клетке или группе клеток, но которые не были обработаны таким образом (контрольных клеток). Степень ингибирования обычно выражают в виде (мРНК в контрольных клетках) - (мРНК в обработанных клетках ---------------------------------------------------------------------------------· 100/о {мРНК в контрольных клетках)
Альтернативно, степень ингибирования может выражаться в виде уменьшения параметра, который функционально связан с экспрессией гена TTR, например, в виде количества белка, кодируемого геном TTR, который секретируется клеткой, или количества клеток, проявляющих определенный фенотип, например, апоптоз. В принципе сайленсинг гена TTR может быть определен в любой клетке, экспрессирующей эту мишень, или конститутивно, или генной инженерией, или любым подходящим анализом. Однако, при необходимости ссылки для определения, ингибирует ли конкретная дцРНК экспрессию гена TTR в определенной степени и, следовательно, может быть включена в это изобретение, анализы, обеспеченные в примерах ниже, будут обеспечивать такую ссылку.
Например, в некоторых случаях, экспрессия гена TTR подавляется по меньшей мере приблизительно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% или 50% введением двухцепочечного олигонуклеотида, описанного в этом изобретении. В некоторых вариантах осуществления, ген TTR подавляется по меньшей мере приблизительно на 60%, 70% или 80% введением двухцепочечного олигонуклеотида, описанного в этом изобретении. В некоторых вариантах осуществления, ген TTR подавляется по меньшей мере приблизительно на 85%, 90% или 95% введением двухцепочечного олигонуклеотида, описанного в этом изобретении.
При использовании здесь в контексте экспрессии TTR, термины лечить, лечение и т.п. относятся к облегчению или ослаблению патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR. В контексте данного изобретения, когда речь идет о любом из состояний, цитируемых здесь ниже (других, чем патологические процессы, опосредуемые экспрессией TTR), термины лечить, лечение и т.п. обозначают облегчение или ослабление по меньшей мере одного симптома, ассоциированного с таким состоянием, или замедление или обращение прогрессирования такого состояния, например, замедление прогрессирования TTR-амилоидоза, такого как FAP. Симптомы TTR-амилоидоза включают в себя сенсорную невропатию (например, парестезию, гипестезию в дистальных участках конечностей), вегетативную невропатию (например, желудочно-кишечную дисфункцию, такую как язва желудка, или ортостатическую гипотензию), моторную невропатию, припадки, деменцию, миелопатию, полиневропатию, синдром канала запястья, вегетативную недостаточность, кардиомиопатию, помутнения стекловидного тела, почечную недостаточность, нефропатию, существенно пониженный mBMI (модифицированный индекс массы тела), дисфункцию черепных нервов и дистрофию корнеальной решетки.
В данном контексте, фразы терапевтически эффективное количество и профилактически эффективное количество относятся к количеству, которое обеспечивает терапевтическую пользу в лечении, предупреждении или излечивании патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR, или хорошо видимого симптома патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR. Конкретное количество, которое является терапевтически эффективным, может быть легко определено медицинским работником с обычной квалификацией в данной области и может варьироваться в зависимости от факторов, известных в данной области, таких как, например, тип патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR, история болезни и возраст пациента, стадия патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR, и введение других антипатологических агентов процессов, опосредуемых экспрессией TTR.
В данном контексте, фармацевтическая композиция содержит фармакологически эффективное количество дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель. В данном контексте, термины фармакологически эффективное количество, терапевтически эффективное количество или просто эффективное количество относятся к количеству РНК, эффективному для получения предполагаемого фармакологического, терапевтического или превентивного результата. Например, если конкретное клиническое лечение считается эффективным, когда имеется по меньшей мере 2 5% уменьшение в измеримом параметре, ассоциированном с заболеванием или нарушением, терапевтически эффективное количество лекарственного средства для лечения этого заболевания или нарушения является количеством, необходимым для осуществления по меньшей мере 25% уменьшения в этом параметре. Например, терапевтически эффективное количество дцРНК, поражающей TTR, может уменьшать уровни TTR в сыворотке по меньшей мере на 25%. В другом примере, терапевтически эффективное количество дцРНК, поражающей TTR, может улучшать функцию печени или почечную функцию по меньшей мере на 25%.
Термин фармацевтически приемлемый носитель относится к носителю для введения терапевтического агента. Такие носители включают в себя, но не ограничиваются ими, солевой раствор, забуференный раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации. Этот термин специфически исключает среду культуры клеток. Для лекарственных средств, вводимых перорально, фармацевтически приемлемые носители включают в себя, но не ограничиваются ими, фармацевтически приемлемые эксципиенты,
- 9 036772 такие как инертные разбавители, дезинтегрирующие агенты, связывающие агенты, смазывающие агенты, подслащивающие агенты, ароматизирующие агенты, красящие агенты и консерванты. Подходящие инертные разбавители включают в себя карбонат натрия и кальция, фосфат натрия и кальция, и лактозу, тогда как кукурузный крахмал и альгиновая кислота являются подходящими дезинтегрирующими агентами. Связывающие агенты могут включать в себя крахмал и желатин, тогда как смазывающими агентами, если они присутствуют, будут обычно стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Если желательно, таблетки могут быть покрыты материалом, таким как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, для задержки абсорбции в желудочно-кишечном тракте.
В данном контексте, трансформированной клеткой является клетка, в которую был введен вектор, из которого может быть экспрессирована молекула дцРНК.
II. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота
Как описано более подробно здесь, это изобретение обеспечивает молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена TTR в клетке или млекопитающем, например в человеке, имеющем TTR-амилоидоз, где эта молекула дцРНК включает в себя антисмысловую цепь, имеющую участок комплементарности, который является комплементарным по меньшей мере части мРНК, образуемой в экспрессии гена TTR, и где этот участок комплементарности имеет длину менее 30 нуклеотидов, обычно длину 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК, после контакта с клеткой, экспрессирующей указанный ген TTR, ингибирует экспрессию указанного гена TTR по меньшей мере на 30%, как анализировано, например, при помощи ПЦР или способа на основе разветвленной ДНК (bDNA), или способа на основе белка, такого как Вестерн-блоттинг. Экспрессия гена TTR может уменьшаться по меньшей мере на 30% при измерении с использованием анализа, описанного в примерах ниже. Например, экспрессия гена TTR в культуре клеток, таких как клетки Нер3В, может анализироваться измерением уровней мРНК TTR, например, с использованием bDNA- или TaqMan-анализа, или измерением уровней белка, например, с использованием ELISA-анализа. дцРНК этого изобретения может дополнительно включать в себя один или несколько одноцепочечных нуклеотидных выступов.
дцРНК может быть синтезирована стандартными способами, известными в данной области, дополнительно обсуждаемыми ниже, например, с использованием автоматического ДНК-синтезатора, такого как ДНК-синтезаторы, коммерчески доступные, например, из Biosearch, Applied Biosystems, Inc. Эта дцРНК включает в себя две цепи РНК, которые являются достаточно комплементарными, чтобы гибридизоваться с образованием дуплексной структуры. Одна цепь этой дцРНК (антисмысловая цепь) включает в себя участок комплементарности, который является по существу комплементарным, и обычно полностью комплементарным, последовательности-мишени, полученной из последовательности мРНК, образованной во время экспрессии гена TTR, другая цепь (смысловая цепь) включает в себя участок, который является комплементарным этой антисмысловой цепи, так что эти две цепи гибридизуются и образуют дуплексную структуру при объединении при подходящих условиях. Обычно, эта дуплексная структура имеет длину между 15 и 30, или между 25 и 30, или между 18 и 25, или между 19 и 24, или между 19 и 21, или 19, 20 пар оснований или 21 пару оснований. В одном варианте осуществления дуплекс имеет длину 19 пар оснований. В другом варианте осуществления дуплекс имеет длину 21 пару оснований. При использовании двух разных siRNA в комбинации, длины этого дуплекса могут быть одинаковыми или могут различаться.
Каждая цепь дцРНК эти имеет обычно длину между 15 и 30 или между 18 и 25, или 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов. В других вариантах осуществления, каждая цепь имеет длину 25-30 нуклеотидов. Каждая цепь этого дуплекса может иметь одну и ту же длину или эти цепи могут иметь разную длину.
При использовании двух различных siRNA в комбинации, длины каждой цепи каждой siRNA могут быть одинаковыми или могут различаться.
дцРНК этого изобретения может включать в себя один или несколько одноцепочечных выступов из одного или нескольких нуклеотидов. В одном варианте осуществления, по меньшей мере один конец этой дцРНК имеет одноцепочечный нуклеотидный выступ из 1-4, обычно 1 или 2 нуклеотидов. В другом варианте осуществления, антисмысловая цепь дцРНК имеет содержащие 1-10 нуклеотидов выступы за 3'-концом и 5'-концом смысловой цепи. В других вариантах осуществления, смысловая цепь этой дцРНК имеет содержащие 1-10 нуклеотидов выступы за 3'-концом и 5'-концом антисмысловой цепи.
дцРНК, имеющая содержащий по меньшей мере один нуклеотид выступ, может иметь неожиданно лучшие ингибирующие свойства, чем ее имеющая тупые концы копия. В некоторых вариантах осуществления, присутствие только одного выступа нуклеотидов усиливает активность интерференции этой дцРНК, без влияния на ее общую стабильность. Было показано, что дцРНК, имеющая только один выступ, была особенно стабильной и эффективной in vivo, a также в различных клетках, средах для культуры клеток, крови и сыворотке. Обычно, одноцепочечный выступ локализован на 3'-конце антисмысловой цепи или, альтернативно, на 3'-конце смысловой цепи. Эта дцРНК может также иметь тупой конец, обычно расположенный на 5'-конце антисмысловой цепи. Такая дцРНК может иметь улучшенную стабильность и улучшенную ингибирующую активность, что позволяет введение в низких дозах, т.е. менее 5 мг/кг массы тела реципиента в день. Обычно, антисмысловая цепь дцРНК имеет выступ нуклеотидов на 3'-конце, а 5'-конец является тупым. В другом варианте осуществления, один или несколько нуклео
- 10 036772 тидов в этом выступе заменены нуклеозидтиофосфатом.
В одном варианте осуществления, геном TTR является ген TTR человека. В конкретных вариантах осуществления, смысловая цепь этой дцРНК является одной из смысловых последовательностей из таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В или 7, и антисмысловая цепь является одной из антисмысловых последовательностей таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В или 7. Альтернативные антисмысловые агенты, которые действуют в другом месте в последовательности-мишени, обеспеченной в таблицах 3А, 3В, 4, 6А, 6В или 7, могут быть легко определены с использованием последовательности-мишени и фланкирующей последовательности TTR.
Квалифицированному в данной области специалисту хорошо известно, что дцРНК, имеющая дуплексную структуру из 20-23, но особенно из 21, пар оснований, приветствовались в качестве особенно эффективных в индуцировании интерференции РНК (Elbashir et al, EMBO 2001, 20:6877-6888). Однако другие авторы нашли, что более короткие или более длинные дцРНК могут быть также эффективными. В вышеописанных вариантах осуществления, благодаря природе олигонуклеотидных последовательностей, обеспеченных в таблицах 3А, 3В, 4, 6А, 6В и 7, дцРНК, описанные в этом изобретении, могут включать в себя по меньшей мере одну цепь с описанной здесь длиной. Не без оснований можно ожидать, что более короткие дцРНК, имеющие одну из последовательностей таблиц 3А, 3В, 4, 6А, 6В или 7, минус только несколько нуклеотидов на одном или на обоих концах, могут быть сходным образом эффективными в сравнении с вышеописанными дцРНК. Таким образом, данное изобретение рассматривает также дцРНК, имеющие частичную последовательность по меньшей мере 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных (непрерываемых) нуклеотидов из одной из последовательностей таблиц 3, 4, 6 или 7 и отличающиеся по их способности ингибировать экспрессию гена TTR в анализе, описанном здесь ниже, не более чем на 5, 10, 15, 20, 25 или 30% ингибирования от дцРНК, содержащей полную последовательность. Кроме того, дцРНК, которая расщепляет в желаемой последовательности-мишени TTR, может быть легко получена с использованием соответствующей антисмысловой последовательности TTR и комплементарной смысловой последовательности.
Кроме того, дцРНК, обеспеченные в таблицах 3А, 3В, 4, 6А, 6В или 7, идентифицируют сайт в TTR, который является чувствительным к расщеплению, основанному на RNAi. Вследствие этого, данное изобретение дополнительно описывает дцРНК, которые поражают в пределах последовательности, являющейся мишенью одного из агентов данного изобретения. В данном контексте, считается, что вторая дцРНК наносит удар в пределах последовательности первой дцРНК, если эта вторая дцРНК расщепляет мРНК в любом месте в пределах мРНК, которая является комплементарной антисмысловой цепи первой дцРНК. Такая вторая дцРНК будет обычно состоять по меньшей мере из 15 смежных нуклеотидов из одной из последовательностей, обеспеченных в таблицах 3А, 3В, 4, 6А, 6В или 7, связанных с дополнительными нуклеотидными последовательностями, взятыми из участока, смежного с выбранной последовательностью в гене TTR.
дцРНК, описанная в этом изобретении, может содержать одно или несколько ошибочных спариваний с последовательностью-мишенью. В одном варианте осуществления, дцРНК, описанная в этом изобретении, содержит не более 3 ошибочных спариваний. Если антисмысловая цепь этой дцРНК содержит ошибочные спаривания с последовательностью-мишенью, предпочтительно, чтобы зона ошибочного спаривания не была расположена в центре участка комплементарности. Если антисмысловая цепь этой дцРНК содержит ошибочные спаривания с последовательностью-мишенью, предпочтительно, чтобы это ошибочное спаривание было ограничено 5 нуклеотидами от любого конца, например, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидами из любого 5'- или 3'-конца участка комплементарности. Например, для цепи дцРНК из 23 нуклеотидов, которая является комплементарной участку гена TTR, эта дцРНК не содержит никакого ошибочного спаривания в пределах 13 центральных нуклеотидов. Способы, описанные в этом изобретении, могут быть использованы для определения, является ли дцРНК, содержащая ошибочное спаривание с последовательностью-мишенью, эффективной в ингибировании экспрессии гена TTR. Рассмотрение эффективности дцРНК с ошибочными спариваниями в ингибировании экспрессии TTR является важным, особенно, если известно, что этот конкретный участок комплементарности в гене TTR имеет полиморфную вариацию последовательности в этой популяции.
Модификации
Еще в одном варианте осуществления, дцРНК модифицируют химически для увеличения стабильности. Нуклеиновые кислоты, описанные в этом изобретении, могут быть синтезированы и/или модифицированы способами, хорошо установившимися в данной области, такими как описанные в Current protocols in nucleic acid chemistry, Beaucage, S. L. et al. (Eds.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA, которые включены здесь посредством ссылки. Конкретные примеры соединений дцРНК, применимых в этом изобретении, включают в себя дцРНК, содержащие модифицированные скелеты молекул или не природно-встречающиеся межнуклеозидные связи. Как определено в этом описании, дцРНК, имеющие модифицированные скелеты молекул, включают в себя дцРНК, которые сохраняют атом фосфора в этом скелете и которые не имеют атома фосфора в этом скелете. Для целей этого описания, и, как иногда указывается в данной области, модифицированные дцРНК, которые не имеют атома фосфора в их межнуклеозидном скелете, могут также рассматриваться как олигонуклеозиды.
- 11 036772
Модифицированные молекулярные скелеты дцРНК включают в себя, например, фосфоротиоаты, хиральные фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, фосфоротриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метил- и другой алкилфосфонаты, включающие в себя 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включающие в себя 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, имеющие нормальные 3'-5'-связи, их 2'-5'-связанные аналоги, и имеющие обращенную полярность, при которой смежные пары нуклеозидных звеньев связаны 3'-5' - 5'-3' или 2'-5' - 5'-2'. В изобретение включены также смешанные соли и формы свободных кислот.
Репрезентативные патенты США, которые описывают получение вышеуказанных фосфорсодержащих связей, включают в себя, но не ограничиваются ими, патенты США с номерами 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,195; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,316; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361 и 5,625,050, каждый из которых включен здесь посредством ссылки.
Модифицированные скелеты дцРНК, которые не содержат атома фосфора, имеют скелеты, которые образованы алкильными (с короткой цепью) или циклоалкильными межнуклеозидными связями, смешанными гетероатомами и алкильными или циклоалкильными межнуклеозидными связями или одной или несколькими имеющими короткие цепи гетероатомными или гетероциклическими межнуклеозидными связями. Они включают в себя скелеты, имеющие морфолино-связи (образованные частично из сахарной части нуклеозида); силоксановые скелеты; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые скелеты; формацетил- и тиоформацетил-скелеты; метиленформацетил- и тиоформацетил-скелеты; алкенсодержащие скелеты; сульфаматные скелеты; метиленимино- и метиленгидразино-скелеты; сульфонатные и сульфонамидные скелеты; амидные скелеты и другие, имеющие смешанные части N-, О-, S- и СН2компонентов.
Репрезентативные патенты США, которые описывают получение вышеуказанных олигонуклеозидов, включают в себя, но не ограничиваются ими, п агенты США с номерами 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,64,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; и 5,677,439, каждый из которых включен здесь посредством ссылки.
В других подходящих миметиках дцРНК, как сахар, так и межнуклеозидная связь, т.е. скелет, нуклеотидных звеньев заменены новыми группами. Звенья оснований сохраняются для гибридизации с подходящим соединением-мишенью нуклеиновой кислоты. Одно такое олигомерное соединение, миметик дцРНК, который, как было показано, имеет превосходные свойства гибридизации, называют пептиднуклеиновой кислотой (ПНК). В соединениях ПНК, сахарный скелет дцРНК заменен амидсодержащим скелетом, в частности, аминоэтилглициновым скелетом.
Нуклеооснования сохраняются и связываются прямо или опосредованно с атомами азогруппы амидной части этого скелета. Репрезентативные патенты США, которые описывают получение соединений ПНК, включают в себя, но не ограничиваются ими, патенты США с номерами 5,539,082; 5,714,331 и 5,719,262, каждый из которых включен здесь посредством ссылки. Дополнительное описание соединений ПНК может быть найдено в Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500.
Другими вариантами этого изобретения являются дцРНК с фосфоротиоатными скелетами и олигонуклеозидами с гетероатомными скелетами, и, в частности, -CH2-NH-CH2-, -CH2-N(СНз)-О-СН2[известными как метилен- (метиламино-) или MMI-скелет], -СН2-О-N(CHз)-CH2-, -CH2-N(CH3)-N(CH3)СН2- и -N (СН3) -СН2-СН2- [где природный фосфодиэфирный скелет представлен как -О-Р-О-СН2-] цитируемого выше патента США № 5489677, и амидные скелеты цитируемого выше патента США № 5602240. Предпочтительными также являются дцРНК, имеющие структуры морфолино-скелета, цитируемого выше патента США № 5034506.
Модифицированные дцРНК могут также содержать одну или несколько замененных сахарных частей. Предпочтительные дцРНК содержат одну из следующих групп в 2'-положении: ОН; F; O-, S- или Nалкил; О-, S- или N-алкенил; О-, S- или N-алкинил; или O-алкил-О-алкил, где эти алкил, алкенил и алкинил могут быть замещенными или незамещенными С1-С10-алкилом или С2-С10-алкенилом или -алкинилом. Особенно предпочтительными являются O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nONH2 и О(СН2)nON[(CH2)nCHз)]2, где n и m являются 1 - приблизительно 10. Другие предпочтительные дцРНК содержат одну из следующих групп в 2'-положении: низший С1-С10-алкил, замещенный низший алкил, алкарил, аралкил, О-алкарил или О-аралкил, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, РНК-расщепляющую группу, репортерную группу, интеркалят, группу для улучшения фармакокинетических свойств дцРНК или группу для улучшения фармакодинамических свойств дцРНК и другие заместители, имеющие сходные свойства. Одна предпочтительная модификация включает в себя 2'-метоксиэтокси (2'-О-СН2СН2ОСН3, также известную как 2'-O-(2метоксиэтил) или 2'-МОЕ) (Martin et al, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504), т.е. алкоксиалкоксигруппу. Одна дополнительная предпочтительная модификация включает в себя 2'-диметиламинооксиэтокси, т.е. группу О(СН2)2ON(СНз)2, также известную как 2'-DMAOE, описанную здесь в примерах ниже, и 2'
- 12 036772 диметиламиноэтоксиэтокси (также известную в данной области как 2'-О-диметиламиноэтоксиэтил или 2'-DMAEOE), т.е. 2'-О-СН2-О-СН2-К(СН2)2. также описанную здесь в примерах ниже.
Другие предпочтительные модификации включают в себя 2'-метокси (2'-ОСН3), 2'-аминопропокси (2'-OCH2CH2CH2NH2) и 2'-фтор (2'-F). Сходные модификации могут быть также произведены в других положениях на дцРНК, в частности, 3'-положении сахара на 3'-концевом нуклеотиде или в 2'-5'связанных дцРНК и 5'-положении 5'-концевого нуклеотида. дцРНК могут также иметь сахарные миметики, такие как циклобутильные группы вместо пентофуранозильного сахара. Репрезентативные патенты США, которые описывают получение таких модифицированных сахарных структур, включают в себя, но не ограничиваются ими, патенты США с номерами 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633 и 5,700,920, некоторые из которых находятся в общем владении с данной заявкой и каждый из которых включен здесь посредством ссылки в его полном объеме.
дцРНК могут также включать в себя модификации и замены нуклеооснования (часто называемого в данной области просто основанием). В данном контексте, немодифицированные или природные нуклеооснования включают в себя пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G) и пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U). Модифицированные нуклеооснования включают в себя другие синтетические и природные нуклеооснования, такие как 5-метилцитозин (5-me-С), 5гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метилпроизводное и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2-пропилпроизводное и другие алкилпроизводные аденина и гуанина, 2тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и -цитозин, 5-пропинилурацил и -цитозин, 6азоурацил, -цитозин и -тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген-, 8-амино-, 8-тиол-, 8тиоалкил-, 8-гидроксил- и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген-, в частности 5-бром-, 5трифторметил- и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 8азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин и 3-деазагуанин и 3-деазааденин. Дополнительные нуклеооснования включают в себя нуклеооснования, описанные в патенте США №3,687,808, нуклеооснования, описанные в Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990, нуклеооснования, описанные Englisch et al, Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613, и нуклеооснования, описанные Sanghvi, Y S., Chapter 15, DsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, В., Ed., CRC Press, 1993. Некоторые из этих нуклеооснований являются особенно применимыми для увеличения аффинности связывания олигомерных соединений, описанных в этом изобретении. Они включают в себя 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2, N-6 и О-6 замещенные пурины, включающие в себя 2аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. Было показано, что замены 5метилцитозином увеличивают стабильность дуплекса нуклеиновых кислот на 0,6-1,2°С. (Sanghvi, Y. S., Crooke, S. Т. and Lebleu, В., Eds., DsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 27 6278) и являются примерами замен оснований, даже более предпочтительными при объединении с 2'-Ометоксиэтильными модификациями сахара.
Репрезентативные патенты США, которые описывают получение некоторых из вышеуказанных модифицированных нуклеооснований, а также других модифицированных нуклеооснований, включают в себя, но не ограничиваются ими, вышеупомянутый Патент США № 3687808, а также патенты США с номерами 4845205; 513030; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121, 5596091; 5614617 и 5,681,941, каждый из которых включен здесь посредством ссылки, и патент США № 5750692, также включенный здесь посредством ссылки.
Конъюгаты
Другая модификация дцРНК этого изобретения включает в себя химическое связывание с дцРНК одной или нескольких частиц или конъюгатов, которые усиливают их активность, клеточное распределение или клеточное поглощение дцРНК. Такие частицы включают в себя, но не ограничиваются ими, липидные частицы, такие как частица холестерина (Letsinger et al, Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556), холевую кислоту (Manoharan et al, Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060), простой тиоэфир, например, гексил-S-тритилтиол (Manoharan et al, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al, Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770), тиохолестерин (Oberhauser et al, Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538), алифатическую цепь, например, додекандиол или ундецильные остатки (SaisonBehmoaras et al, EMBO J, 1991, 10:1111-1118; Kabanov et al, FEBS Lett., 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75:49-54), фосфолипид, например, дигексадецил-rac-глицерин или 1,2-ди-Огексадецил-rac-глицеро-3-Н-фосфонат триэтиламмония (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:36513654; Shea et al, Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783), цепь полиамина или полиэтиленгликоля (Manoharan et al, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969-973) или адамантануксусную кислоту (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654), пальмитильную группу (Mishra et al, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237) или октадециламин или гексиламино-карбонилоксихолинстериновую группу (Crooke et al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937).
Репрезентативные патенты США, которые описывают получение таких конъюгатов дцРНК, включают в себя, но не ограничиваются ими, патенты США с номерами 4,828,97 9; 4,948,8 82; 5,218,105;
- 13 036772
5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045;
5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737;
4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963;
5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723;
5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371;
5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 и 5,688,941, каждый из которых включен здесь посредством ссылки.
Необязательно, чтобы все положения в конкретном соединении были однородно модифицированы, и фактически более одной из вышеупомянутых модификаций могут быть включены в отдельном соединении или даже в отдельном нуклеозиде в дцРНК. Данное изобретение включает в себя также дцНКсоединения, которые являются химерными соединениями. Химерные дцРНК-соединения, или химеры, являются в контексте этого изобретения дцРНК-соединениями, в частности, дцРНК, которые содержат два или более химически различных участков, каждый из которых построен по меньшей мере из одного мономерного звена, т.е. нуклеотида, в случае дцРНК-соединения. Эти дцРНК обычно содержат по меньшей мере один участок, в котором эта дцРНК является модифицированной для придания этой дцРНК устойчивости к нуклеазной деградации, увеличенного клеточного поглощения и/или увеличенной аффинности связывания в отношении нуклеиновой кислоты-мишени. Дополнительный участок этой дцРНК может служить в качестве субстрата для ферментов, способных расщеплять гибриды РНК-ДНК или РНК-РНК. В качестве примера, РНКаза Н является клеточной эндонуклеазой, которая расщепляет РНК-цепь дуплекса РНК-ДНК. Таким образом, активация РНКазы Н приводит к расщеплению РНКмишени, увеличивая посредством этого в значительной степени эффективность ингибирования дцРНК экспрессии генов. В результате, сравнимые результаты могут быть часто получены с более короткими дцРНК при использовании химерных дцРНК, в сравнении с фосфоротиоатными деокси-дцРНК, гибридизующимися с тем же самым участком-мишенью.
Расщепление РНК-мишени может быть детектировано рутинным образом при помощи гельэлектрофореза и, если необходимо, ассоциированными способами гибридизации, известными в данной области. Сайт расщепления на мРНК-мишени дцРНК может быть определен с использованием способов, обычно известных специалисту с обычной квалификацией в данной области, например, способ 5'-RACE, описанный в статье Soutschek et al., Nature; 2004, Vol. 432, pp. 173-178 (которая включена здесь посредством ссылки для всех целей). В одном варианте осуществления, с использованием способа 5'-RACE, описанного Soutschek et al., было определено, что ALN-18 32 8 расщепляет мРНК TTR между нуклеотидом гуанином в положении 636 SEQ ID NO:1331 (NM_000371.3) и нуклеотидом аденином в положении 637 SEQ ID NO:1331. В одном варианте осуществления, было определено, что ALN-18328 действительно расщепляет мРНК TTR между нуклеотидом аденином в положении 637 SEQ ID NO:1331 и нуклеотидом гуанином в положении 638 SEQ ID NO: 1331.
В некоторых случаях, дцРНК может быть модифицирована не являющейся лигандом группой. Некоторое число не-лигандных молекул конъюгировали с дцРНК для усиления активности, клеточного распределения и клеточного поглощения этой дцРНК, и процедуры для выполнения таких конъюгации доступны в научной литературе. Такие не-лигандные части молекулы включали в себя липидные частицы, такие как холестерин (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), холевую кислоту (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), простой тиоэфир, например, гексил-Sтритилтиол (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306; Manoharan et al. , Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), тиохолестерин (Oberhauser et al. , Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), алифатическую цепь, например, додекандиол или ундецильные остатки (Saison-Behmoaras et al, EMBO J, 1991, 10:1111-1118; Kabanov et al, FEBS Lett., 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75:49-54), фосфолипид, например, дигексадецил-rac-глицерин или 1,2-ди-О-гексадецил-rac-глицеро-3-Н-фосфонат триэтиламмония (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654; Shea et al, Nucl. Acids Res., 1990, 18:37773783), цепь полиамина или полиэтиленгликоля (Manoharan et al, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969973) или адамантануксусную кислоту (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654), пальмитильную группу (Mishra et al, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237) или октадециламин или гексиламинокарбонилоксихолестериновую группу (Crooke et al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937). Репрезентативные Патенты США, которые описывают получение таких конъюгатов дцРНК, были перечислены выше. Типичные протоколы конъюгации включают в себя синтез дцРНК, несущих аминолинкер в одном или нескольких положениях этой последовательности. Затем эта аминогруппа реагирует с молекулой, конъюгированной с использованием подходящих реагентов связывания или активации. Эта реакция конъюгации может проводиться или с дцРНК, все еще связанной с твердой подложкой, или после отщепления этой дцРНК в фазу раствора. Очистка этого дцРНК-конъюгата при помощи ВЖХ обычно дает чистый конъюгат.
Кодируемые вектором дцРНК
В другом аспекте, молекулы дцРНК TTR экспрессируются из транскрипционных единиц, инсертированных в ДНК- или РНК-векторы (см., например, Couture, A, et al, TIG. (1996), 12:5-10; Skillern, A., et al, International PCT Publication No. WO 00/22113, Conrad, International PCT Publication No. WO 00/22114,
- 14 036772 и Conrad, U.S. Pat. No. 6,054,299). Эти трансгены могут быть введены в виде линейной конструкции, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, которые могут быть включены и унаследованы в виде трансгена, интегрированного в геном хозяина. Этот трансген может быть также сконструирован таким образом, что он может наследоваться в виде внехромосомной плазмиды. (Gassmann, et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292).
Отдельные цепи дцРНК могут транскрибироваться промоторами на двух отдельных экспрессионных (экспрессирующих) векторах и котрансфицироваться в клетку-мишень. Альтернативно, каждая отдельная цепь дцРНК может быть экспрессирована промоторами, оба из которых расположены на одной и той же экспрессионной плазмиде. В одном варианте осуществления, дцРНК экспрессируется в виде инвертированного повтора, присоединенного линкерной полинуклеотидной последовательностью, так что эта дцРНК имеет структуру стебля и петли.
Рекомбинантные экспрессионные векторы дцРНК являются обычно ДНК-плазмидами или вирусными векторами. Экспрессирующие дцРНК вирусные векторы, может быть сконструированы на основе аденоассоциированного вируса (но не только) (в отношении обзора см. Muzyczka, et al, Curr. Topics Micro. Immunol. (1992) 158:97-129)); аденовируса (см., например, for example, Berkner, et al, BioTechniques (1998) 6:616), Rosenfeld et al (1991, Science 252:431-434) и Rosenfeld et al (1992), Cell 68:143-155)); или альфавируса, а также других вирусов, известных в данной области. Ретровирусы использовали для введения различных генов во многие различные типы клеток, в том числе эпителиальных клеток, in vitro и/или in vivo (см., например, Eglitis, et al, Science (1985) 230: 1395-1398; Danos and Mulligan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1998) 85:6460-6464; Wilson et al, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:3014-3018; Armentano et al, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:61416145; Huber et al, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8039-8043; Ferry et al, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8377-8381; Chowdhury et al, 1991, Science 254:1802-1805; van Beusechem. et al, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7640-19; Kay et al, 1992, Human Gene Therapy 3:641-647; Dai et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10892-10895; Hwu et al., 1993, J. Immunol. 150:4104-4115; Патент США № 4868116; Патент США № 4980286; РСТ Заявка WO 89/07136; РСТ Заявка WO 89/02468; РСТ Заявка WO 89/05345 и РСТ Заявка WO 92/07573). Рекомбинантные аденовирусные векторы, способные трансдуцировать и экспрессировать гены, инсертированные в геном клетки, могут быть получены трансфекцией рекомбинантного ретровирусного генома в подходящие упаковывающие клеточные линии, такие как РА317 и Psi-CRIP (Comette et al., 1991, Human Gene Therapy 2:510; Cone et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 :6349). Рекомбинантные аденовирусные векторы могут быть использованы для инфицирования большого разнообразия клеток и тканей в восприимчивых хозяевах (например, крысе, хомячке, собаке и шимпанзе) (Hsu et al., 1992, J. Infectious Disease, 166:769), a также имеют преимущество, заключающееся в том, что для инфицирования не требуются митотически активные клетки.
Может быть использован любой вирусный вектор, способный акцептировать кодирующие последовательности для молекулы (молекул) дцРНК, подлежащие экспрессии, например, векторы, произведенные из аденовируса (AV); аденоассоциированного вируса (AAV); ретровируса (например, лентивирусов (LV), рабдовирусов, вируса мышиного лейкоза); герпес-вируса и т.п. Тропизм вирусных векторов может быть модифицирован псевдотипированием (упаковкой) этих векторов белками оболочки или другими поверхностными антигенами из других вирусов или заменой различных белков вирусного капсида, соответственно.
Например, лентивирусные векторы, описанные в этом изобретении, могут быть псевдотипированы поверхностными белками из вируса везикулярного стоматита (VSV), вируса бешенства, вируса Эбола, вируса Мокола и т.п. AAV-векторы, описанные в этом изобретении, могут быть нацелены на различные клетки-мишени конструированием векторов для экспрессии различных серотипов капсидных белков. Например, ААМ-вектор, экспрессирующий капсид серотипа 2 на геноме серотипа 2, назван AAV 2/2. Этот ген капсида серотипа 2 в векторе AAV 2/2 может быть заменен геном капсида серотипа 5 с получением вектора AAV 2/5. Способы конструирования векторов AAV, которые экспрессируют различные серотипы капсидных белков, находятся в пределах квалификации в данной области; см., например, статью Rabinowitz J E et al. (2002), J Virol 76:791-801, все описание которой включено здесь посредством ссылки.
Селекция (отбор) рекомбинантных вирусных векторов, подходящих для применения в этом изобретении, способы для инсертирования последовательностей нуклеиновых кислот для экспрессии дцРНК в вектор и способы доставки вирусного вектора в представляющие интерес клетки находятся в рамках квалификации в данной области. См., например, Dornburg R (1995), Gene Therap. 2: 301-310; Eglitis M A (1988), Biotechniques 6: 608-614; Miller A D (1990), Hum Gene Therap. 1: 5-14; Anderson W F (1998), Nature 392: 25-30; и Rubinson D A et al. , Nat. Genet. 33: 401-406, полные описания которых включены здесь посредством ссылки.
Вирусные векторы могут быть получены из AV и AAV. В одном варианте осуществления, дцРНК, описанная в этом изобретении, экспрессируется в виде двух отдельных, комплементарных одноцепочечных молекул РНК из рекомбинантного AAV-вектора, имеющего, например, промоторы РНК U6 или HI или промотор цитомегаловируса (CMV).
- 15 036772
Подходящий AV-вектор для экспрессии дцРНК, описанной в этом изобретении, способ конструирования рекомбинантного AV-вектора и способ доставки этого вектора в клетки-мишени описаны в Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20: 1006-1010.
Подходящие AAV-векторы для экспрессии дцРНК, описанной в этом изобретении, способы конструирования рекомбинантного AAV-вектора и способ доставки этого вектора в клетки-мишени описаны в Samulski R et al. (1987), J. Virol. 61: 3096-3101; Fisher K J et al. (1996), J. Virol, 70: 520-532; Samulski R et al. (1989), J. Virol. 63: 3822-3826; патенте США № 5,252,479; патенте США № 5,139,941; Международной заявке на патент № WO 94/13788 и Международной заявке на патент № WO 93/24641, полные описания которых включены здесь посредством ссылки.
Промотор, запускающий экспрессию дцРНК либо в ДНК-плазмиде, либо в вирусном векторе, описанных в этом изобретении, может быть эукариотическим промотором РНК-полимеразы I (например, промотором рибосомной РНК), РНК-полимеразы II (например, ранним промотором CMV или промотором актина или промотором U1 snRNA) или обычно промотором РНК-полимеразы III (например, промотором РНК U6 snRNA или 7SK РНК) или прокариотическим промотором; например, промотор Т7, обеспечиваемый экспрессионной плазмидой, кодирует также РНК-полимеразу Т7, необходимую для транскрипции от промотора Т7. Этот промотор может также управлять экспрессией трансгена в поджелудочную железу (см., например, регуляторную последовательность инсулина для поджелудочной железы (Bucchini et al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:2511-2515)).
Кроме того, экспрессия трансгена может точно регулироваться, например, с использованием индуцируемой регуляторной последовательности и экспрессионных систем, таких как регуляторная последовательность, которая чувствительна к некоторым физиологическим регуляторам, например, уровням циркуляции глюкозы или гормонам (Docherty et al. , 1994, FASEB J. 8:20-24) . Такие индуцируемые экспрессионные системы, подходящие для регуляции экспрессии трансгенов в клетках или в млекопитающих, включают в себя регуляцию экдизоном, эстрогеном, прогестероном, тетрациклином, химическими индукторами димеризации и изопропил-бета-О1-тиогалактопиранозидом (EPTG). Специалист с квалиификацией в данной области будет способен выбрать подходящую регуляторную/промоторную последовательность на основе предполагаемого применения трансгена дцРНК.
Обычно рекомбинантные векторы, способные экспрессировать молекулы дцРНК, доставляются, как описано ниже, и продолжают существовать в клетках-мишенях. Альтернативно, могут быть использованы вирусные векторы, которые обеспечивают транзиторную экспрессию молекул дцРНК. Такие векторы могут вводиться повторно в случае необходимости. После экспрессии, эти дцРНК связываются с РНКмишенью и модулируют ее функцию или экспрессию. Доставка дцРНК-экспрессирующих векторов может быть системной, например, внутривенным или внутримышечным введением, введением в клеткимишени, эксплантируемые из пациента, с последующим повторным введением в этого пациента, или любым другим способом, который позволяет введение в желаемую клетку-мишень.
Экспрессирующие дцРНК ДНК-плазмиды обычно трансфицируют в клетки-мишени в виде комплекса с катионоактивными липидными носителями (например, олигофектамином) или носителями на основе некатионоактивного липида (например, Transit-TKO™).
Множественные липидные трансфекции для дцРНК-опосредованных нокдаунов, поражающих различные участки единственного гена TTR или множественных генов TTR, на протяжении периода одной недели или более также рассматриваются этим изобретением. Успешное введение векторов в клеткихозяева может подвергаться мониторингу с использованием различных известных способов. Например, транзиторная трансфекция может сигнализироваться репортером, таким как флуоресцентный маркер, такой как зеленый флуоресцентный белок (GFP). Стабильная трансфекция клеток ех vivo может обеспечиваться с использованием маркеров, которые обеспечивает трансфицированная клетка, с устойчивостью к конкретным факторам окружающей среды (например, антибиотикам и лекарственным средствам), такой как устойчивость к гигромицину В.
TTR-специфические молекулы дцРНК могут быть также инсертированы в векторы и использованы в качестве векторов генной терапии для пациентов-людей. Векторы генной терапии могут доставляться субъекту, например, внутривенной инъекцией, локальным введением (см. Патент США № 5328470) или стереотаксической инъекцией (см., например, Chen et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3054-3057). Фармацевтический препарат вектора генной терапии может включать в себя вектор генной терапии в приемлемом растворителе или может включать в себя матрикс медленного высвобождения, в который заделан носитель доставки гена. Альтернативно, когда вектор доставки полного гена может быть получен интактным из рекомбинантных клеток, например, ретровирусных клеток, этот фармацевтический препарат может включать в себя одну или несколько клеток, которые продуцируют эту систему доставки генов.
III. Фармацевтические композиции, содержащие дцРНК
В одном варианте осуществления, это изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие дцРНК, описанные здесь, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция, содержащая дцРНК, применима для лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с экспрессией или активностью гена TTR, например, патологических процессов, опосредованных экс
- 16 036772 прессией TTR. Такие фармацевтические композиции готовят на основе способа доставки. Одним примером являются композиции, которые готовят для системного введения посредством парентеральной доставки, например, внутривенной (IV) доставки. Другим примером являются композиции, которые готовят для прямой доставки в паренхиму головного мозга, например, инфузией в головной мозг, например, непрерывной нагнетательной инфузией.
Описанные здесь фармацевтические композиции вводят в дозах, достаточных для ингибирования экспрессии генов TTR.
Обычно, подходящая доза дцРНК будет находиться в диапазоне 0,01-200,0 миллиграммов на килограмм массы тела реципиента в день, обычно в диапазоне 1-50 мг на килограмм массы тела в день. Например, дцРНК может вводиться при 0,0059 мг/кг, 0,01 мг/кг, 0,0295 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,0590 мг/кг, 0,163 мг/кг, 0,2 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,5 мг/кг, 0,54 3 мг/кг, 0,590 мг/кг, 0,6 мг/кг, 0,7 мг/кг, 0,8 мг/кг, 0,9 мг/кг, 1 мг/кг, 1,1 мг/кг, 1,2 мг/кг, 1,3 мг/кг, 1,4 мг/кг, 1,5 мг/кг, 1,628 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 5,0 мг/кг, 10 мг/кг, 2 0 мг/кг, 3 0 мг/кг, 4 0 мг/кг или 50 мг/кг на однократную дозу.
В одном варианте осуществления, эта доза находится между 0,01 и 0,2 мг/кг. Например, дцРНК может вводиться в дозе 0,01 мг/кг, 0,02 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,04 мг/кг, 0,05 мг/кг, 0,06 мг/кг, 0,07 мг/кг, 0,08 мг/кг, 0,09 мг/кг, 0,10 мг/кг, 0,11 мг/кг, 0,12 мг/кг, 0,13 мг/кг, 0,14 мг/кг, 0,15 мг/кг, 0,16 мг/кг, 0,17 мг/кг, 0,18 мг/кг, 0,19 мг/кг или 0,2 0 мг/кг.
В одном варианте осуществления, эта доза находится в диапазоне 0,005 мг/кг - 1,628 мг/кг. Например, дцРНК может вводиться в дозе 0,0059 мг/кг, 0,0295 мг/кг, 0,0590 мг/кг, 0,163 мг/кг, 0,543 мг/кг, 0,5900 мг/кг или 1,628 мг/кг.
В одном варианте осуществления, эта доза находится в диапазоне 0,2 мг/кг - 1,5 мг/кг. Например, дцРНК может вводиться в дозе 0,2 мг/кг, 0,3 мг/кг, 0,4 мг/кг, 0,5 мг/кг, 0,6 мг/кг, 0,7 мг/кг, 0,8 мг/кг, 0,9 мг/кг, 1 мг/кг, 1,1 мг/кг, 1,2 мг/кг, 1,3 мг/кг, 1,4 мг/кг или 1,5 мг/кг.
Эта фармацевтическая композиция может вводиться один раз в день, или дцРНК может вводиться в виде двух, трех или более субдоз при подходящих интервалах на протяжении дня или даже с использованием непрерывной инфузии или доставки с использованием формы пролонгированного высвобождения. В этом случае дцРНК, содержащаяся в каждой субдозе, должна быть соответственно в меньшем количестве для достижения общей суточной дозы. Единица дозы может быть также компаундирована для доставки на протяжении нескольких дней, например, с использованием общепринятой формы пролонгированного высвобождения, которая обеспечивает поддерживаемое высвобождение дцРНК на протяжении периода нескольких дней. Готовые формы пролонгированного высвобождения хорошо известны в данной области и особенно применимы для доставки агентов в конкретном месте, так чтобы их можно было использовать с агентами данного изобретения. В этом варианте осуществления, унифицированная лекарственная форма содержит соответствующее множество суточных доз.
Действие однократной дозы на уровни TTR является продолжительным, так что последующие дозы вводят с интервалами не более 3, 4 или 5 дней, или с интервалами не более 1, 2, 3 или 4 недель или с интервалами не более 5, 6, 7, 8, 9 или 10 недель.
Квалифицированному в данной области специалисту будет понятно, что некоторые факторы могут влиять на дозу и тайминг, необходимые для эффективного лечения субъекта, включающие в себя, но не ограничивающиеся ими, тяжесть заболевания или нарушения, предшествующее лечение, общее здоровье и/или возраст субъекта и другие присутствующие заболевания. Кроме того, лечение субъекта терапевтически эффективным количеством композиции может включать в себя однократный курс лечения или ряд курсов лечения. Оценивания эффективных доз и времени полужизни in vivo для отдельных дцРНК, рассматриваемых данным изобретением, могут быть выполнены с использованием общепринятых методологий или на основе тестирования in vivo с применением подходящей модели животного, как описано здесь в другом месте.
Успехи в области генетики мышей позволили создать ряд мышиных моделей для исследования различных заболеваний человека, таких как патологические процессы, опосредуемые экспрессией TTR, а также для определения терапевтически эффективной дозы. Подходящей мышиной моделью является, например, мышь, содержащая плазмиду, экспрессирующую TTR человека. Другой подходящей мышиной моделью является трансгенная мышь, несущая трансген, который экспрессирует TTR человека.
Данные, полученные из анализов культур клеток и исследований на животных, могут быть использованы в приготовлении диапазона доз для применения в людях. Доза композиций, описанных в этом изобретении, обычно находится в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают в себя ED50 с малой токсичностью или с отсутствием токсичности. Доза может варьироваться в этом диапазоне в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого способа введения. Для любого соединения, используемого в описанных в данном изобретении способах, терапевтически эффективная доза может быть приближенно определена сначала из анализов культуры клеток. Доза может быть приготовлена с использованием моделей животных для получения диапазона циркулирующей в плазме концентрации этого соединения или, при необходимости, полипептидного продукта последовательностимишени (например, получением уменьшенной концентрации этого полипептида), который включает в себя IC50 (т.е. концентрацию тест-соединения, которая дает полумаксимальное ингибирование симпто
- 17 036772 мов), определенную в культуре клеток. Такая информация может быть использована для более точного определения доз, применимых в людях. Могут быть измерены уровни в плазме, например, с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Описанные в этом изобретении дцРНК могут вводиться в комбинации с другими известными агентами, эффективными в лечении патологических процессов, опосредуемых экспрессией гена-мишени. В любом случае, осуществляющий введение врач может корректировать количество и тайминг введения дцРНК на основании результатов, наблюдаемых с использованием стандартных измерений эффективности, известных в данной области или описанных здесь.
Введение
Данное изобретение включает в себя также фармацевтические композиции и готовые формы, которые включают в себя дцРНК-соединения, описанные в этом изобретении. Фармацевтические композиции данного изобретения могут вводиться различными способами в зависимости от того, является ли желательным местное или системное лечение, и от подлежащей обработке зоны. Введение может быть локальным, легочным, например, с использованием ингаляции или инсуффляции порошков или аэрозолей, в том числе при помощи распылителя; интратрахеальным, интраназальным, эпидермальным и трансдермальным, пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает в себя внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию или инфузию; или интракраниальное, например, внутрипаренхимное, внутриоболочечное или внутрижелудочковое введение.
Эти дцРНК могут доставляться таким образом, чтобы поражать конкретную ткань, такую как печень (например, гепатоциты печени).
Данное изобретение включает в себя фармацевтические композиции, которые могут доставляться инъекцией непосредственно в головной мозг. Эта инъекция может выполняться стереотаксической инъекцией в конкретный участок головного мозга (например, черное вещество, кору, гиппокамп, полосатое тело или бледный шар), или дцРНК может доставляться во множественные участки центральной нервной системы (например, во множественные участки головного мозга и/или в спинной мозг). дцРНК могут также доставляться в диффузные участки головного мозга (например, диффузной доставкой в кору головного мозга).
В одном варианте осуществления, дцРНК, поражающая TTR, может доставляться посредством канюли или другого устройства доставки, имеющего один конец, имплантированный в ткань, например, головной мозг, например, черное вещество, кору, гиппокамп, полосатое тело, мозолистое тело или бледный шар головного мозга. Эта канюля может быть соединена с резервуаром композиции дцРНК. Поток или доставка может быть опосредована насосом, например, осмотическим насосом или мининасосом, таким как насос Alzet (Durect, Cupertino, CA) . В одном варианте осуществления, эти насос и резервуар имплантированы в зоне, удаленной от этой ткани, например, в брюшной полости, и доставка осуществляется посредством канала, идущего от насоса или резервуара к участку высвобождения. Инфузия композиции дцРНК в головной мозг может осуществляться на протяжении нескольких часов или в течение нескольких дней, например, в течение 1, 2, 3, 5 или 7 дней или более. Устройства для доставки в головной мозг описаны, например, в патентах США с номерами 6093180 и 5814014.
Фармацевтические композиции и готовые формы для локального введения могут включать в себя трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Могут быть необходимыми или желательными общепринятые фармацевтические носители, водные, порошкообразные или масляные основы, загущающие агенты и т.п. Могут быть также применимы имеющие покрытия презервативы, перчатки и т.п. Подходящие локальные готовые формы включают в себя формы, в которых дцРНК, описанные в этом изобретении, находятся в смеси с агентом локальной доставки, таким как липиды, липосомы, жирные кислоты, эфиры жирных кислот, стероиды, хелатообразующие агенты и поверхностно-активные вещества. Подходящие липиды и липосомы включают в себя нейтральные (например, диолеоилфосфатидилэтаноламин DOPE, димиристоилфосфатидилхолин DMPC, дистеароилфосфатидилхолин), отрицательные (например, димиристоилфосфатидилглицерин DMPG) и катионоактивные (например, диолеилтетраметиламинопропил DOTAP и диолеоилфосфатидилэтаноламин DOTMA). дцРНК, описанные в этом изобретении, могут быть инкапсулированы в липосомах или могут образовывать комплексы с ними, в частности с катионоактивными липосомами. Альтернативно, дцРНК могут образовывать комплексы с липидами, в частности, с катионоактивными липидами. Подходящие жирные кислоты и эфиры включают в себя, но не ограничиваются ими, арахидоновую кислоту, олеиновую кислоту, эйкозановую кислоту, лауриновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин, дилаурин, глицерил-1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, акрилкарнитин, ацилхолин или Ci-ю-алкиловый эфир (например, изопропилмиристат IPM), моноглицерат, диглицерид или их фармацевтически приемлемая соль. Г отовые формы для локального введения описаны подробно в Патенте США № 6747 014, который включен здесь посредством ссылки.
Липосомные готовые формы
Имеются многие организованные структуры поверхностно-активных веществ, наряду с микро
- 18 036772 эмульсиями, которые были исследованы и использованы для приготовления лекарственных средств. Они включают в себя монослои, мицеллы, бислои и пузырьки (везикулы). Везикулы, такие как липосомы, привлекают большой интерес вследствие их специфичности и длительности действия, которые они предоставляют с точки зрения доставки лекарственных средств. В контексте данного изобретения, термин липосома обозначает везикулу (пузырек), состоящий из амфифильных липидов, аранжированных в сферический бислой или бислои.
Липосомы являются однослойными или многослойными пузырьками (везикулами), которые имеют мембрану, образованную из липофильного материала и водной внутренней части. Эта водная часть содержит подлежащую доставке композицию. Катионоактивные липосомы имеют то преимущество, что они способны сливаться с клеточной стенкой. Некатионоактивные липосомы, хотя они и неспособны эффективно сливаться с клеточной стенкой, поглощаются макрофагами in vivo.
Для прохождения интактной кожи млекопитающего, липидные пузырьки должны проходить через ряд тонких пор, каждая из которых имеет диаметр менее 50 нм, под влиянием подходящего трансдермального градиента. Таким образом, желательно использовать липосому, которая является высокодеформируемой и способна проходить через эти тонкие поры.
Следующие преимущества липосом включают в себя следующее: липосомы, полученные из природных фосфолипидов, являются биосовместимыми и биодеградируемыми; липосомы могут включать в себя широкий диапазон водорастворимых и растворимых в липидах лекарственных средств; липосомы могут защищать инкапсулированные лекарственные средства в их внутренних компартментах от метаболизма и деградации (Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245). Важными условиями в приготовлении липосомных готовых форм являются заряд липидной поверхности, размер пузырьков и водный объем липосом.
Липосомы применимы для транспорта и доставки активных ингредиентов к участку действия. Поскольку липосомная мембрана является структурно сходной с биологическими мембранами, при нанесении липосом на ткань, липосомы начинают сливаться с клеточными мембранами, и по мере прогрессирования слияния липосомы и клетки, содержимое липосомы опустошается в эту клетку, где может действовать активный агент.
Липосомные готовые формы были центром интенсивного исследования в качестве способа доставки для многих лекарственных средств. Существует растущее доказательство того, что для локального применения липосомы предоставляют несколько преимуществ над другими готовыми формами. Такие преимущества включают в себя уменьшенные побочные действия, связанные с высокой системной абсорбцией вводимого лекарственного средства, увеличенное накапливание введенного лекарственного средства ви желаемой мишени и способность к введению большого разнообразия лекарственных средств, как гидрофильных, так и гидрофобных, в кожу.
Несколько сообщений подробно описали способность липосом к доставке агентов, в том числе ДНК с высокой молекулярной массой, в кожу. В кожу вводили соединения, включающие в себя аналгезирующие вещества, антитела, гормоны и ДНК с высокой молекулярной массой. Большинство применений приводили к достижению верхнего эпидермиса.
Липосомы подразделяются на два широких класса. Катионоактивные липосомы являются положительно заряженными липосомами, которые взаимодействуют с отрицательно заряженными молекулами ДНК с образованием стабильного комплекса. Положительно заряженный комплекс ДНК/липосома связывается с отрицательно заряженной клеточной поверхностью и интернализуется в эндосоме. Вследствие кислого рН в этой эндосоме, эти липосомы разрываются с высвобождением их содержимого в цитоплазму клетки (Wang et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1987, 147, 980-985).
Липосомы, которые являются рН-чувствительными или отрицательно заряженными, захватывают скорее ДНК, чем комплекс с ней. Поскольку как ДНК, так и липид являются сходным образом заряженными, происходит скорее отталкивание, чем образование комплекса. Тем не менее, некоторая часть ДНК захватывается в водной внутренней части этих липосом. рН-чувствительные липосомы использовали для доставки ДНК, кодирующей ген тимидинкиназы к монослоям клеток в культуре. Экспрессию этого экзогенного гена детектировали в клетках-мишенях (Zhou et al, Journal of Controlled Release, 1992, 19, 269274).
Основной тип липосомной композиции включает в себя фосфолипиды, другие чем природно производимый фосфатидилхолин. Нейтральные липосомные композиции могут быть, например, образованы из димиристоилфосфатидилхолина (DMPC) или дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC). Анионогенные липосомные композиции обычно образуются из димиристоилфосфатидилглицерина, тогда как анионогенные вызывающие слияние (фузогенные) липосомы образуются прежде всего из диолеоилфосфатидилэтанолходина (DOPE). Другой тип липосомной композиции образуется из фосфатидилхолина (PC), такого как, например, PC сои и PC яйца. Другой тип образуется из смесей фосфолипида и/или фосфатидилхолина и/или холестерина.
Несколько исследований оценивали локальную доставку липосомных готовых форм лекарственных средств в кожу. Нанесение липосом, содержащих интерферон, на кожу морской свинки приводила к уменьшению кожных язв, вызываемых герпес-вирусом, тогда как доставка интерферона посредством
- 19 036772 другого способа (например, в виде раствора или в виде эмульсии) была неэффективной (Weiner et al, Journal of Drug Targeting, 1992, 2, 405-410). Кроме того, дополнительное исследование тестировало эффективность интерферона, вводимого в виде части липосомной готовой формы, относительно введения интерферона с использованием водной системы, и был сделан вывод, что эта липосомная готовая форма была лучшей, чем водное введение (du Plessis et al. , Antiviral Research, 1992, 18, 259-265).
Неионные липосомные системы также испытывались для определения их применимости в доставке лекарственных средств в кожу, в частности, системы, содержащие неионогенное поверхностно-активное вещество и холестерин. Неионогенные липосомные готовые формы, содержащие Novasome™ I (глицерилдилаурат/холестерин/простой стеариловый эфир полиоксиэтилена-10 и Novasome™ II (глицерилдистеарат/холестерин простой стеариловый эфир полиоксиэтилена-10) использовали для доставки циклоспорина-А в дерму кожи мыши. Результаты показали, что такие неионные липосомные системы были эффективны в облегчении депонирования циклоспорина-А в различных слоях кожи (Hu et al. S.T.P.Pharma. ScL, 1994, 4, 6, 466).
Липосомы включают в себя также стерически стабилизированные липосомы, этот термин относится в данном контексте к липосомам, содержащим один или несколько специализированных липидов, которые при включении в липосомы, приводят к увеличенным периодам полужизни в кровотоке относительно липосом, лишенных таких специализированных липидов. Примерами стерически стабилизированных липосом являются липосомы, в которых часть образующей пузырьки липидной части липосомы (А) содержит один или несколько гликолипидов, таких как моносиалоганглиозид GM1, или (В) дериватизована одним или несколькими гидрофильными полимерами, такими как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Хотя и без связывания с какой-либо конкретной теорией, в данной области считается, что по меньшей мере для стерически стабилизированных липосом, содержащих ганглиозиды, сфингомиелин или ПЭГдериватизованные липиды, увеличенный период полужизни в кровотоке этих стерически стабилизированных липосом происходит вследствие уменьшенного поглощения в клетки ретикулоэндотелиальной системы (RES) (Allen et al, FEBS Letters, 1987, 223, 42; Wu et al, Cancer Research, 1993, 53, 3765).
В данной области известны различные липосомы, содержащие один или несколько гликолипидов. Papahadjopoulos et al (Ann. N.Y. Acad. Sci, 1987, 507, 64) сообщал о способности моносиалоганглиозида GM1, сульфата галактоцереброзида и фосфатидилинозита улучшать периоды полужизни липосом в крови. Эти открытия были изложены Gabizon et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1988, 85, 6949). Патент США № 4837028 и WO 88/04924, оба, выданные Allen et al., описывают липосомы, содержащие (1) сфингомиелин и (2) ганглиозид GMI ИЛИ сульфатный эфир галактоцереброзида. Патент США № 5543152 (Webb et al.) описывает липосомы, содержащие сфингомиелин. Липосомы, содержащие 1,2-sn-димиристоилфосфатидилхолин, описаны в WO 97/13499 (Lim et al).
Многие липосомы, содержащие липиды, дериватизованные одним или несколькими гидрофильными полимерами, и способы их получения известны в данной области. Sunamoto et al. (Bull. Chem. Soc. Jpn., 1980, 53, 2778) описывали липосомы, содержащие неионогенное поверхностно-активное вещество, 2C1215G, которое содержит ПЭГ-часть. Ilium et al. (FEBS Lett., 1984, 167, 79) отмечал, что гидрофильное покрытие частиц из полистирола полимерными гликолями приводит к значимо увеличенным периодам полужизни в крови. Синтетические фосфолипиды, модифицированные присоединением карбоксильных групп полиалкиленгликолей (например, ПЭГ), описаны Sears (патенты США с номерами 4,426,330 and 4,534,899). Klibanov et al. (FEBS Lett., 1990, 268, 235) описывал эксперименты, демонстрирующие, что липосомы, содержащие фосфатилилэтаноламин (РЕ), дериватизованный ПЭГ или ПЭГ-стеаратом, имели значимые увеличения периодов полужизни в кровотоке. Blume et al. (Biochimica et Biophysica Acta, 1990, 1029, 91) распространили такие наблюдения на другие ПЭГ-дериватизованные фосфолипиды, например, DSPE-PEG, образованный из объединения дистеароилфосфатидилэтаноламина (DSPE) и ПЭГ. Липосомы, имеющие ковалентно связанные ПЭГ-части на их наружной поверхности, описаны в Европейском патенте № ЕР 0445131 В1 и WO 90/04384, выданном Fisher. Липосомные композиции, содержащие 1-20 мол.% РЕ, дериватизованные ПЭГ, и способы их применения, описаны Woodle et al. (патенты США с номерами 5013556 и 5356633) и Martin et al. (патент США с номером 5213804 и Европейский патент № ЕР 0496813 В1). Липосомы, содержащие ряд других конъюгатов липид-полимер, описаны в WO 91/05545 и Патенте США № 5225212 (оба, выданные Martin et al) и в WO 94/20073 (Zalipsky et al.). Липосомы, содержащие ПЭГ-модифицированные церамид-липиды, описаны в WO 96/10391 (Choi et al). Патент США № 5540935 (Miyazaki et al. ) и Патент США № 5556948 (Tagawa et al.) описывают ПЭГсодержащие липосомы, которые могут быть дополнительно дериватизованы функциональными частями на их поверхностях.
В данной области известен ряд липосом, содержащих нуклеиновые кислоты. WO 96/4 00 62, выданный Thierry et al. , описывает способы инкапсулирования высокомолекулярных нуклеиновых кислот в липосомах. Патент США № 52 64221, выданный Tagawa et al., описывает белок-связанные липосомы и доказывает, что содержимое таких липосом может включать в себя дцРНК. Патент США № 5665710, выданный Rahman et al., описывает некоторые способы инкапсулирования олигодезоксинуклеотидов в липосомах. WO 97/04787, выданный Love et al. , описывает липосомы, содержащие дцРНК, нацеленные
- 20 036772 на ген raf.
Трансферсомы являются еще одним типом липосом и представляют собой высокодеформируемые липидные агрегаты, которые являются привлекательными кандидатами для носителей доставки лекарственных средств. Трансферсомы могут быть описаны как липидные капельки, которые являются настолько высокодеформируемыми, что они способны легко проникать через поры, которые являются меньшими, чем эта капелька. Трансферсомы являются адаптируемыми к среде, в которой их используют, например, они являются самооптимизирующимися (адаптивными к форме пор в коже), саморепарирующимися, часто достигающими их мишени без фрагментации и часто самозагружающимися. Для получения трансферсом можно добавлять активаторы краев поверхности, обычно поверхностно-активные вещества, к стандартной липосомной композиции. Трансферсомы использовали для доставки сывороточного альбумина в кожу. Было показано, что опосредуемая трансферсомами доставка сывороточного альбумина является эффективной в виде подкожной инъекции раствора, содержащего сывороточный альбумин.
Сурфактанты (поверхностно активные вещества) находят широкое применение в таких готовых формах, как эмульсии (в том числе микроэмульсии) и липосомы. Наиболее обычным способом классификации и ранжирования свойств многих различных типов поверхностно-активных веществ, как природных, так и синтетических, является применение гидрофильного/липофильного баланса (HLB). Природа гидрофильной группы (также известной как головка) обеспечивает наиболее полезное свойство для классификации различных поверхностно-активных веществ, используемых в готовых формах (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).
Если молекула поверхностно-активного вещества является неионизированной, она классифицируется как неионогенное поверхностно-активное вещество. Неионогенные поверхностно-активные вещества находят широкое применение в фармацевтических и косметических продуктах и применимы в широком диапазоне величин рН. Обычно их величины HLB находятся в диапазоне 2-18 в зависимости от их структуры. Неионогенные поверхностно-активные вещества включают в себя неионогенные сложные эфиры, такие как сложные эфиры этиленгликоля, эфиры пропиленгликоля, глицериловые эфиры, полиглицериловые эфиры, эфиры сорбитана, эфиры сахарозы и этоксилированные сложные эфиры. Неионогенные алканоламиды и простые эфиры, такие как этоксилаты жирных спиртов, пропоксилированные спирты и этоксилированные/пропоксилированные блоксополимеры, также включены в этот класс. Полиоксиэтиленовые поверхностно-активные вещества являются наиболее популярными членами класса неионогенных поверхностно-активных веществ.
Если молекула поверхностно-активного вещества несет отрицательный заряд при ее растворении или диспергировании в воде, это поверхностно-активное вещество классифицируется как анионогенное поверхностно-активное вещество. Анионогенные поверхностно-активные вещества включают в себя карбоксилаты, такие как мыла, ациллактилаты, ациламиды аминокислот, эфиры серной кислоты, такие как алкилсульфаты и этоксилированные алкилсульфаты, сульфонаты, такие как алкилбензолсульфонаты, ацилизетионаты, ацилтаураты и сульфосукцинаты, и фосфаты. Наиболее важными членами класса анионогенных поверхностно-активных веществ являются алкилсульфаты и мыла.
Если молекула поверхностно-активного вещества несет положительный заряд при ее растворении или диспергировании в воде, это поверхностно-активное вещество классифицируется как катионогенное поверхностно-активное вещество. Катионогенные поверхностно-активные вещества включают в себя соли четвертичного аммония и этоксилированные амины. Соли четвертичного аммония являются наиболее используемыми членами этого класса.
Если молекула поверхностно-активного вещества способна нести или положительный, или отрицательный заряд, это поверхностно-активное вещество классифицируется как амфотерное поверхностноактивное вещество. Амфотерные поверхностно-активные вещества включают в себя производные акриловой кислоты, замещенные алкиламиды, N-алкилбетаины и фосфатиды.
Применение поверхностно-активных веществ в лекарственных продуктах, готовых формах и в эмульсиях обсуждается в обзоре (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).
Частицы нуклеиновая кислота-липид
В одном варианте осуществления, описанная в этом изобретении дцРНК TTR полностью инкапсулирована в липидной готовой форме, например, с образованием SPLP, pSPLP, SNALP или другой частицы нуклеиновая кислота-липид. В данном контексте, термин SNALP относится к стабильной частице нуклеиновая кислота-липид, включающей в себя SPLP. В данном контексте, термин SPLP относится к частице нуклеиновая кислота-липид, содержащей плазмидную ДНК, инкапсулированную в липидном пузырьке. SNALP и SPLP обычно содержат катионоактивный липид, некатионоактивный липид и липид, который препятствует агрегации этой частицы (например, конъюгата ПЭГ-липид). SNALP и SPLP чрезвычайно полезны для системных применений, так как они проявляют увеличенные периоды полужизни в кровотоке после внутривенной (i.v.) инъекции и накапливаются в дистальных участках (например, в местах, физически отделенных от места введения). SPLP включают в себя pSPLP, которые включают в себя инкапсулированный комплекс конденсирующий агент-нуклеиновая кислота, представленный в Публикации РСТ № WO 00/03683. Частицы данного изобретения обычно имеют средний диаметр при
- 21 036772 близительно 50 нм - приблизительно 150 нм, более часто приблизительно 60 нм - приблизительно 130 нм, более часто приблизительно 70 нм - приблизительно 110 нм, наиболее часто приблизительно 70 нм приблизительно 90 нм, и являются по существу нетоксичными. Кроме того, когда эти нуклеиновые кислоты присутствуют в частицах нуклеиновая кислота-липид данного изобретения, являются устойчивыми в водном растворе к деградации нуклеазой. Частицы нуклеиновая кислота-липид и способы их получения описаны, например, в патентах США с номерами 5,976,567; 5,981,501; 6,534,484; 6,586,410; 6,815,432; и Публикации РСТ № WO 96/40964.
В одном варианте осуществления, отношение липид-лекарственное средство (отношение масса/масса) (например, отношение липида к дцРНК) находится в диапазоне от приблизительно 1:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 25:1, от приблизительно 3:1 до приблизительно 15:1, от приблизительно 4:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 9:1 или от приблизительно 6:1 до приблизительно 9:1.
Катионоактивным липидом может быть, например, N,N-дuолеил-N,N-диметиламмонийхлорид (DODAC), N,N-дистеарил-N,N-диметиламмонийбромид (DDAB), N-(1-(2,3-диолеоилокси)пропил)N,N,N-триметиламмонийхлорид (DOTAP), N-(1-(2,3-диолеилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмонийхлорид (DOTMA), N,N-диметил-2,3-диолеилоксипропиламин (DODMA), 1,2-дилинолеилокси-N,Nдиметиламинопропан (DLinDMA), 1,2-дилиноленилокси-N,N-диметиламинопропан (DLenDMA), 1,2дилинолеилкарбамоилокси-3-диметиламинопропан (DLin-C-DAP), 1,2-дилинолеилокси-3-(диметиламино)ацеоксипропан (DLin-DAC), 1,2-дилинолеилокси-3-морфолинопропан (DLin-MA), 1,2-дилинолеил-3-диметиламинопропан (DLinDAP), 1,2-дилинолеилтио-3-диметиламинопропан (DLin-S-DMA), 1линолеоил-2-линолеилокси-3-диметиламинопропан (DLin-2-DMAP), хлоридная соль 1,2-дилинолеилокси-3-триметиламинопропана (DLin-ТМА.С1), хлоридная соль 1,2-дилинолеил-3-триметиламинопропана (DLin-TAP.Cl), 1,2-дилинолеилокси-3-(N-метилпиперазино)пропан (DLin-MPZ) или 3-(N,Nдилинолеиламино)-1,2-пропандиол (DLinAP), 3-(N,N-диолеиламино)-1,2-пропандиол (DOAP), 1,2дилинолеилоксо-3-(2-N,N-диметиламино)этоксипропан (DLin-EG-DMA), 1,2-дилиноленилокси-N,Nдиметиламинопропан (DLinDMA), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил-[1,3]-диоксолан (DLin-KDMA) или его аналоги, (3aR,5s,6aS)-N,N-диметил-2,2-ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диенил)тетрагидро-3аНциклопента[d][1,3]диоксол-5-амин (ALN100), (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4(диметиламино)бутаноат (МСЗ), 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидодецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазандиил)дидодекан-2-ол (Tech G1) или их смесь. Этот катионоактивный липид может содержать от приблизительно 20 мол.% до приблизительно 50 мол.% или приблизительно 40 мол.% общего содержания липида, присутствующего в этой частице.
В другом варианте осуществления, соединение 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил-[1,3]диоксолан может быть использовано для получения наночастиц липид-siRNA. Синтез 2,2-дилинолеил-4диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолана описан в Предварительной заявке на патент США с номером 61/107,998, поданной 23 октября 2008 года, которая включена здесь посредством ссылки.
В одном варианте осуществления, частица липид-siRNA включает в себя 40% 2,2-дилинолеил-4диметиламиноэтил-[1,3]-диоксолан: 10% DSPC: 40% холестерин: 10% PEG-C-DOMG (мол.%) с размером частицы 63,0 ± 20 нм и отношением 0,027 siRNA/липид.
Некатионоактивный липид может быть анионоактивным липидом или нейтральным липидом, включающим в себя, но не ограничивающимся ими, дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), диолеилфосфатидилхолин (DOPC), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), диолеоилфосфатидилглицерин (DOPG), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG), диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE), пальмитоилолеоилфосфатидилхолин (РОРС), пальмитоилолеоилфосфатидилэтаноламин (POPE), диолеилфосфатидилэтанол-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбокислат диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE-mal), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (DPPE), димиристоилфосфоэтаноламин (DMPE), дистеароилфосфатидилэтаноламин (DSPE), 16-O-монометил РЕ, 16-O-диметил РЕ, 18-1-транс РЕ, 1-стеароил-2-олеоилфосфатидилэтаноламин (SOPE), холестерин или их смесь. Этот некатионоактивный липид может составлять от приблизительно 5 мол.% до приблизительно 90 мол.%, приблизительно 10 мол.% или приблизительно 58 мол.%, если включен холестерин, общего содержания липида, присутствующего в этой частице.
Конъюгированным липидом, который ингибирует агрегацию частиц, может быть, например, полиэтиленгликоль (PEG)-липид, в том числе, без ограничения, PEG-диацилглицерин (DAG), PEGдиалкилоксипропил (DAA), PEG-фосфолипид, PEG-церамид (Cer) или их смесь. Конъюгатом PEG-DAA может быть, например, PEG-дилаурилоксипропил (С12), PEG-димиристилоксипропил (С14), PEGдипальмитилоксипропил (C16) или PEG-дистеарилоксипропил (C18). Конъюгированный липид, который предотвращает агрегацию частиц, может составлять от 0 мол.% до приблизительно 20 мол.% или приблизительно 2 мол.% общего содержания липида, присутствующего в этой частице.
В некоторых вариантах осуществления, частица нуклеиновая кислота-липид дополнительно включает в себя холестерин в количестве, например, приблизительно 10 мол.% - приблизительно 60 мол.% или приблизительно 48 мол.% общего содержания липида в этой частице.
LNP01
- 22 036772
В одном варианте осуществления, липидоид ND984HC1 (MW 1487) (формула 1), холестерин (Sigma-Aldrich) и PEG-Церамид С16 (Avanti Polar Lipids) могут быть использованы для приготовления наночастиц липид-siRNA (т.е., частиц LNP01). Исходные растворы каждого из них в этаноле могут быть получены следующим образом: ND98, 133 мг/мл; Холестерин, 25 мг/мл, PEG-Церамид С16, 100 мг/мл. Затем эти исходные растворы ND98, Холестерина и PEG-Церамида С16 могут быть объединены, например, в молярном соотношении 42:48:10. Этот объединенный раствор липидов может быть смешан с водной siRNA (например, в ацетате натрия с рН 5), так что конечная концентрация этанола равна приблизительно 35-45% и конечная концентрация ацетата натрия равна приблизительно 100-300 мМ. Наночастицы липид-siRNA обычно образуются самопроизвольно после смешивания. В зависимости от желаемого распределения размеров частиц, полученная смесь наночастиц может быть экструдирована через поликарбонатную мембрану (например, с заданным пределом 100 нм) с использованием, например, термобаррельного экструдера, такого как Lipex Extruder (Northern Lipids, Inc). В некоторых случаях, эта стадия экструзии может быть опущена. Удаление этанола и одновременная замена буфера может выполняться, например, диализом или фильтрованием с тангенциальным потоком. Буфер может быть заменен, например, забуференным фосфатом солевым раствором (ЗФР) при приблизительно рН 7, например, приблизительно рН 6,9, приблизительно рН 7,0, приблизительно рН 7,1, приблизительно рН 7,2, приблизительно рН 7,3 или приблизительно рН 7,4.
Готовые формы LNP01 описаны, например, в Публикации Международной заявки на патент № WO 2008/042973, включенной здесь посредством ссылки.
Другие примерные готовые формы дипид-siRNA являются следующими:
Катионоактивный липид Конъюгат катионоактивный липид/не-катионоактивный липид/холестерин/PEG-липид Отношение липид:siRNA Процесс
SNALP 1,2-дилиноленил-Ы,Nдиметиламинопропан (DLinDMA) DLinDMA/DPPC/XonecTepnn/PEGcDMA) (57,1/7,1/34,4/1,4) липид siRNA ~ 7:1
SNALP- XTS 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС) ХТС/ОРРС/Холестерин/PEG-cDMA (57,1/7,1/34,4/1,4) липид siRNA ~ 7:1
LNP05 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС) XTC/DSPC/XonecTepnn/PEG-DMG (57,5/7,5/31,5/3,5) липид siRNA ~ 6:1 Экструзия
LNP0 6 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС) XTC/DSPC/XonecTepnn/PEG-DMG (57,5/7,5/31,5/3,5) липид siRNA ~ 11:1 Экструзия
LNP07 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил- [1,3]-диоксолан (ХТС) XTC/DSPC/XonecTepnn/PEG-DMG (60/7,5/31,5/1,5) липид siRNA ~ 6:1 Совмещенное смешивание
- 23 036772
LNP0 8 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил[ 1,3]-диоксолан (ХТС) XTC/DSPC/XonecTepnH/PEG-DMG (60/7,5/31/1,5) липид siRNA ~ 11:1 Совмещенное смешивание
LNP0 9 2,2-дилинолеил-4-диметиламиноэтил[ 1,3]-диоксолан (ХТС) XTC/DSPC/XonecTepnH/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид siRNA ~ 10:1
LNP10 (3aR, 5s,6aS)-N,N-диметил-2,2ди((9Z,12Z)-октадека-9,12диенил) тетрагидро-ЗаНциклопента[d][1,3]диоксол-5-амин (ALNI 00) ALNlOO/DSPC/XonecTepnn/PEG- DMG (50/10/38,5/1,5) липид siRNA ~ 10:1 Совмещенное смешивание
LNP11 (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриаконта6,9,28,31-тетраен-19-ил-4- (диметиламино)бутаноат (МСЗ) MC-3/DSPC/XonecTepnn/PEG-DMG (50/10/38,5/1,5) липид siRNA ~ 10:1 Совмещенное смешивание
LNP12 1,1'-(2-(4- (2- ( (2- гидроксидодецил)амино)этил)(2гидроксидодецил)амино)этил)пиперазин1-ил)этилазанедил)дидодекан-2-ол (Tech G1) Tech Gl/DSPC/XonecTepnn/PEG- DMG (50/10/38,5/1,5) липид siRNA ~ 10:1 Совмещенное смешивание
Готовые формы LNP09 и ХТС-содержащие готовые формы описаны, например, в Предварительной заявке на патент США с порядковым номером 61/239686, поданной 2 сентября 2009 года, включенной здесь посредством ссылки. Готовые формы LNP11 МС3-содержащие готовые формы описаны, например, в Предварительной заявке на патент США с порядковым номером 61/244834, поданной 22 сентября 2009 года, включенной здесь посредством ссылки.
Готовые формы, полученные стандартным или не предусматривающим экструзию способом, могут быть охарактеризованы сходным образом. Например, готовые формы обычно характеризуют посредством визуального исследования. Они должны быть беловатыми полупрозрачными растворами, не содержащими агрегатов или осадка. Размер частиц и распределение размеров частиц могут быть измерены по светорассеянию с использованием, например, Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern, USA). Частицы должны иметь размер приблизительно 20-300 нм, например, 40-100 нм. Распределение размеров частиц должно быть унимодальным. Общую концентрацию siRNA в готовой форме, а также в захваченной фракции оценивают приближенно с использованием анализа вытеснения красителя. Проба приготовленной siRNA может инкубироваться с РНК-связывающим красителем, таким как Ribogreen (Molecular Probes) в присутствии или в отсутствие разрушающего готовую форму сурфактанта, например, 0,5% Тритона-Х100. Тотальная siRNA в этой готовой форме может быть определена по сигналу из этой пробы, содержащей сурфактант, относительно калибровочной кривой. Захваченную фракцию определяют вычитанием содержания свободной siRNA (измеренного по этому сигналу в отсутствие сурфактанта) из содержания тотальной siRNA. Процент захваченной siRNA обычно равен >85%. Для готовой формы SNALP, размер частиц равен по меньшей мере 30 нм, по меньшей мере 40 нм, по меньшей мере 50 нм, по меньшей мере 60 нм, по меньшей мере 70 нм, по меньшей мере 80 нм, по меньшей мере 90 нм, по меньшей мере 100 нм, по меньшей мере 110 нм и по меньшей мере 120 нм. Подходящим диапазоном является обычно приблизительно по меньшей мере 50 нм - приблизительно по меньшей мере 110 нм, приблизительно по меньшей мере 60 нм - приблизительно по меньшей мере 100 нм или приблизительно по меньшей мере 80 нм приблизительно по меньшей мере 90 нм.
Композиции и готовые формы для перорального введения включают в себя порошки или гранулы, микрочастицы, наночастицы, суспензии или растворы в водных или неводных средах, капсулы, гелевые капсулы, подушечки, таблетки или минитаблетки. Могут быть желательными загустители, ароматизирующие агенты, разбавители, эмульгаторы, диспергирующие добавки или связывающие агенты. В некоторых вариантах осуществления, пероральными готовыми формами являются формы, в которых siRNA, описанные в этом изобретении, вводят вместе с одним или несколькими усилителями проникновения, поверхностно-активными веществами (сурфактантами) и хелаторами. Подходящие поверхностноактивные вещества включают в себя жирные кислоты и/или их эфиры и соли, желчные кислоты и/или из соли. Подходящие желчные кислоты/соли включают в себя хенодезоксихолевую кислоту (CDCA) и урсодезоксихенодезоксихолевую кислоту (UDCA), холевую кислоту, дегидрохолевую кислоту, дезоксихолевую кислоту, глюхолевую кислоту, глихолевую кислоту, гликодезоксихолевую кислоту, таурохолевую кислоту, тауродезоксихолевую кислоту, натрий-тауро-24,25-дигидрофузидат и натрий-гликодигидрофузидат.
Подходящие жирные кислоты включают в себя арахидоновую кислоту, ундекановую кислоту, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту, каприловую кислоту, каприновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин, дилаурин, глицерил-1-монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитин,
- 24 036772 ацилхолин или моноглицерид, диглицерид или их фармацевтически приемлемую соль (например, соль натрия). В некоторых вариантах осуществления, используют комбинации усилителей проникновения, например, жирные кислоты/соли в комбинации с желчными кислотами/солями. Одной примерной комбинацией является натриевая соль лауриновой кислоты, каприновая кислота и UDCA. Дополнительные усилители проникновения включают в себя лауриловый эфир полиоксиэтилена-9, цетиловый эфир полиоксиэтилена-20. дцРНК, описанная в этом изобретении, может доставляться перорально, в гранулярной форме, включающей в себя распыленные высушенные частицы, или в комплексе для образования микроили наночастиц. Образующие комплексы дцРНК агенты включают в себя полиаминокислоты; полиимины; полиакрилаты; полиалкилакрилаты; полиоксетаны; полиалкилцианоакрилаты; катионизированные желатины, альбумины, крахмалы, акрилаты, полиэтиленгликоли (ПЭГ) и крахмалы; полиалкилцианоакрилаты; ДЭАЭ-дериватизованные полиимины, пуллуланы, целлюлозы и крахмалы. Подходящие комплексообразующие агенты включают в себя хитозан, N-триметилхитозан, поли-Ь-лизин, полигистидин, полиорнитин, полиспермины, протамин, поливинилпиридин, политиодиэтиламинометилэтилен Р P(TDAE), полиаминостирол (например, п-амино), поли(метилцианоакрилат), поли(этилцианоакрилат), поли(бутилцианоакрилат), поли(изобутилцианоакрилат), поли(изогексилцианоакрилат), ДЭАЭметакрилат, ДЭАЭ-гексилакрилат, ДЭАЭ-акриламид, ДЭАЭ-альбумин и ДЭАЭ-декстран, полиметилакрилат, полигексилакрилат, поли(D,L-молочную кислоту), поли(сополимер DL-молочной и гликолевой кислот (PLGA), альгинат и полиэтиленгликоль (PEG). Пероральные готовые формы для дцРНК и их приготовление описаны подробно в Патенте США № 6887906, Публикации США № 20030027780, и Патенте США № 6747 014, каждый из которых включен здесь посредством ссылки.
Композиции и готовые формы для парентерального, интрапаренхимного (в головной мозг), внутриоболочечного, внутрижелудочкового или внутрипеченочного введения могут включать в себя стерильные водные растворы, которые могут содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки, такие как, но не ограничивающиеся ими, усилители проникновения, соединения-носители и другие фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты.
Фармацевтические композиции данного изобретения включают в себя, но не ограничиваются ими, растворы, эмульсии и содержащие липосомы готовые формы. Эти композиции могут быть созданы из различных компонентов, которые включают в себя, но не ограничиваются ими, предварительно приготовленные жидкости, самоэмульгирующиеся твердые вещества и самоэмульгирующиеся полутвердые вещества. Особенно предпочтительными являются готовые формы, которые нацелены на печень, при лечении нарушений печени, таких как рак печени.
Фармацевтические готовые формы данного изобретения, которые могут удобным образом продоставляться в стандартной лекарственной форме, могут быть приготовлены в соответствии с общепринятыми способами, хорошо известными в фармацевтической промышленности. Такие способы включают в себя стадию приведения в контакт активных ингредиентов с фармацевтическим носителем (фармацевтическими носителями) или эксципиентом (эксципиентами). Обычно эти готовые формы готовят однородным и тонким приведением в контакт активных ингредиентов с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями или и теми, и другими, с последующим формованием этого продукта, если необходимо.
Композиции данного изобретения могут быть приготовлены в виде любой из многих лекарственных форм, таких как, но не ограничивающихся ими, таблетки, капсулы, гелевые капсулы, жидкие сиропы, мягкие гели, суппозитории и клизмы. Композиции данного изобретения могут быть также приготовлены в виде суспензий в водных, неводных или смешанных средах. Водные суспензии могут дополнительно содержать вещества, которые увеличивают вязкость этой суспензии, включающие в себя, например, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Эта суспензия может также содержать стабилизаторы.
Эмульсии
Композиции данного изобретения могут быть получены и приготовлены в виде эмульсий. Эмульсии являются обычно гетерогенными системами одной жидкости, диспергированной в другой в форме капелек, обычно превышающих 0,1 мкм в диаметре (Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.)/ 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301). Эмульсии являются часто двухфазными системами, содержащими две не смешивающиеся жидкие фазы, тонко смешанные и диспергированные друг с другом. Обычно, эмульсии могут быть или эмульсиями типа вода-в-масле (в/м) , или эмульсиями типа масло-в-воде (м/в). Когда водная фаза мелко разделена и диспергирована в виде мельчайших капелек в объемную масляную фазу, полученную композицию называют эмульсией вода-в-масле (в/м). Альтернативно, когда масляная фаза мелко разделена и диспергирована в виде мельчайших капелек в объемную водную фазу, полученную композицию называют эмульсией масло-в-воде (м/в). Эмульсии могут содержать дополнительные компоненты, наряду с диспергированными фазами, и активное лекарственное средство, которое может при
- 25 036772 сутствовать в виде раствора или в водной фазе, или в масляной фазе, или может само быть отдельной фазой. Если необходимо, фармацевтические эксципиенты, такие как эмульгаторы, стабилизаторы, красители и антиоксиданты, могут также присутствовать в эмульсиях. Фармацевтические эмульсии могут быть также множественными эмульсиями, которые содержат более двух фаз, например, в случае эмульсий масло-в-воде-в-масле (м/в/м) и вода-в-масле-в-воде (в/м/в). Такие комплексные готовые формы часто обеспечивают определенные преимущества, которые не обеспечивают простые бинарные (двойные) эмульсии. Множественные эмульсии, в которых индивидуальные капельки масла м/в-эмульсии заключают в себя малые капельки воды, составляют в/м/в-эмульсию. Подобным образом, система капелек масла, заключенных в глобулы воды, стабилизированных в масляной непрерывной фазе, обеспечивают эмульсию м/в/м.
Эмульсии характеризуются низкой термодинамической стабильностью или отсутствием термодинамической стабильности. Часто диспергированная или прерывистая фаза эмульсии хорошо диспергируется в наружную или непрерывную фазу и сохраняется в этой форме посредством эмульгаторов или вязкости этой готовой формы. Любая из этих фаз эмульсии может быть полутвердым или твердым веществом, как в случае основ и кремов мазей эмульсионного типа. Другие способы стабилизации эмульсий влекут за собой применение эмульгаторов, которые могут быть включены в любую фазу этой эмульсии. Другие средства стабилизации эмульсий влекут за собой применение эмульгаторов, которые могут быть включены в любую фазу этой эмульсии. Эмульгаторы могут быть в общих чертах классифицированы на четыре категории: синтетические сурфактанты (поверхностно-активные вещества), природновстречающиеся эмульгаторы, абсорбционные основы и тонкоизмельченные твердые вещества. (Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
Синтетические сурфактанты, также известные как поверхностно-активные вещества, нашли широкую применимость в приготовлении эмульсий и обсуждались в виде обзоров в литературе (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199) . Сурфактанты являются обычно амфифильными и содержат гидрофильную и гидрофобную часть. Отношение гидрофильной природы к гидрофобной природе сурфактанта было названо гидрофильным/липофильным балансом (HLB), и оно является ценным инструментом в классификации и выборе сурфактантов в приготовлении готовых форм. Сурфактанты могут быть классифицированы в различные классы на основе природы гидрофильной группы: неионогенные, анионогенные, катионогенные и амфотерные (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 285).
Природно встречающиеся эмульгаторы, используемые в эмульсионных готовых формах, включают в себя ланолин, пчелиный воск, фосфатиды, лецитин и аравийскую камедь. Абсорбционные основы обладают гидрофильными свойствами, так что они могут впитывать воду с образованием в/м-эмульсий с сохранением все еще их полутвердой консистенции, например, в случае безводного ланолина и гидрофильного вазелина. Тонкоизмельченные твердые вещества также использовали в качестве хороших эмульгаторов, особенно в комбинации с сурфактантами и в вязких препаратах. Они включают в себя полярные неорганические твердые вещества, такие как гидроксиды тяжелых металлов, ненабухаемые глины, такие как бентонит, аттапульгит, гекторит, каолин, монтомориллонит, коллоидный силикат алюминия и коллоидный силикат магния-алюминия, пигменты и неполярные твердые вещества, такие как углерод или глицерилтристеарат.
Большое разнообразие неэмульгирующих веществ также включают в эмульсионные готовые формы, и они вносят вклад в свойства эмульсий. Они включают в себя жиры, масла, воски и антиоксиданты (Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
Гидрофильные коллоиды или гидроколлоиды включают в себя природно-встречающиеся камеди и синтетические полимеры, такие как полисахариды (например, аравийская камедь, агар, альгиновая кислота, каррагенан, гуаровая камедь, камедь карайи и трагакантовая камедь), производные целлюлозы (например, карбоксиметилцеллюлозу и карбоксипропилцеллюлозу) и синтетические полимеры (например, карбомеры, простые эфиры целлюлозы и карбоксивиниловые полимеры). Они диспергируются или набухают в воде с образованием коллоидных растворов, которые стабилизируют эмульсии образованием сильных межфазных пленок вокруг капелек диспергированной фазы и увеличением вязкости наружной фазы.
Поскольку эмульсии часто содержат ряд ингредиентов, таких как углеводы, белки, стеролы и фосфатиды, которые могут легко поддерживать рост микробов, эти готовые формы часто включают в себя консерванты. Обычно применяемыми консервантами, включаемыми в эмульсионные готовые формы, включают в себя метилпарабен, пропилпарабен, соли четвертичного азота, хлорид бензалкония, эфиры пгидроксибензойной кислоты и борную кислоту. Антиоксиданты также добавляют обычно в эмульсионные готовые формы для предотвращения ухудшения качества этой готовой формы. Используемыми ан
- 26 036772 тиоксидантами могут быть акцепторы свободных радикалов, такие как токоферолы, алкилгаллаты, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, или восстанавливающие агенты, такие как аскорбиновая кислота и метабисульфит натрия, и синергисты антиоксидантов, такие как лимонная кислота, винная кислота и лецитин.
Применение эмульсионных готовых форм посредством дерматологических, пероральных и парентеральных способов и способы их приготовления обсуждались в обзорах в литературе (Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 199) . Эмульсионные готовые формы для пероральной доставки широко использовались вследствие их легкого приготовления, а также эффективности с точки зрения абсорбции и биодоступности (Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). Слабительные вещества на основе минерального масла, растворимые в масле витамины и питательные препараты с высоким содержанием жира находятся среди веществ, которые обычно вводят перорально в виде м/в-эмульсий.
В одном варианте осуществления данного изобретения, композиции дцРНК и нуклеиновых кислот готовят в виде микроэмульсий. Микроэмульсия может быть определена как система из воды, масла и амфифильного соединения, которая является единым оптически изотропным и термодинамически стабильным жидким раствором (Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245). Обычно микроэмульсии являются системами, которые готовят сначала диспергированием масла в водном растворе сурфактанта с добавлением затем достаточного количества четвертого компонента, обычно спирта со средней длиной цепи, с получением прозрачной системы. Таким образом, микроэмульсии описывали также как термодинамически стабильные, изотропически прозрачные дисперсии двух несмешиваемых жидкостей, которые стабилизированы межфазными пленками поверхностно-активных молекул (Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215). Микроэмульсии готовят обычно посредством объединения трех-пяти компонентов, которые включают в себя масло, воду, сурфактант и электролит. Является ли эта микроэмульсия эмульсией типа вода-в-масле (в/м) или типа масло-в-воде (м/в), зависит от свойств используемых масла и сурфактанта и от структуры и геометрической упаковки полярных головок и углеводородных хвостов молекулы сурфактанта (Schott, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).
Интенсивно исследовался феноменологический подход, использующий фазовые диаграммы (диаграммы фазового равновесия, или диаграммы состояния), которые предоставили квалифицированным в данной области специалистам всеобъемлющие сведения о том, как следует готовить микроэмульсии (Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y., volume 1, p. 335). В сравнении с общепринятыми эмульсиями, микроэмульсии предоставляют преимущество солюбилизации водонерастворимых лекарственных средств в готовой форме термодинамических стабильных капелек, которые образуются спонтанно.
Сурфактанты, используемые в приготовлении микроэмульсий, включают в себя, но не ограничиваются ими, ионогенные сурфактанты, неионогенные сурфактанты, Brij 96, олеиловые эфиры полиоксиэтилена, эфиры полиглицерина и жирных кислот, монолаурат тетраглицерина (ML310), моноолеат тетраглицерина (МО310), моноолеат гексаглицерина (РО310), пентаолеат гексаглицерина (РО500), монокапрат декаглицерина (МСА750), моноолеат декаглицерина (МО750), секвиолеат декаглицерина (SO750), декаолеат декаглицерина (DAO750), отдельно или в комбинации с вторичными сурфактантами. Вторичный сурфактант, обычно спирт с короткой цепью, такой как этанол, 1-пропанол и 1-бутанол, служит для увеличения межфазной текучести проникновением в пленку сурфактанта и создания вследствие этого пустого пространства, генерируемого среди молекул сурфактанта. Однако микроэмульсии могут быть приготовлены без применения вторичных сурфактантов, и в данной области известны не содержащие спирта самоэмульгирующиеся микроэмульсионные системы. Водной фазой может быть обычно, но без ограничения ими, вода, водный раствор лекарственных средств, глицерин, PEG300, PEG400, полиглицерины, пропиленгликоли и производные этиленгликоля. Масляная фаза может включать в себя, но не ограничивается ими, такие вещества, как Captex 300, Captex 355, Capmul MCM, эфиры жирных кислот, моно-, ди- и триглицериды со средней цепью (С8-С12), полиоксиэтилированные глицериловые эфиры жирных кислот, жирные спирты, полигликолизированные глицериды, насыщенные полигликолизированные С8-С10 глицериды, растительные масла и силиконовое масло.
Микроэмульсии представляют особый интерес с точки зрения солюбилизации лекарственных средств и увеличенной абсорбции лекарственных средств. Микроэмульсии на основе липидов (как м/в, так и в/м) были предложены для увеличения пероральной биодоступности лекарственных средств, в том числе пептидов (Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol, 1993, 13, 205). Микроэмульсии предоставляют преимущества улучшенной солюбилизации лекарственных средств, защиты лекарственного средства от ферментативного гидролиза, возможного усиления абсорбции лекарственных средств вследствие индуцируемых сурфактантом измене
- 27 036772 ний в текучести и проницаемости мембран, легкости приготовления, легкости перорального введения в сравнении с твердыми лекарственными формами, улучшенной клинической эффективности и уменьшенной токсичности (Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci, 1996, 85, 138-143). Часто микроэмульсии могут образовываться спонтанно при сведении их компонентов вместе при комнатной температуре. Это может быть особенно выгодным при приготовлении термолабильных лекарственных средств, пептидов или дцРНК. Микроэмульсии были также эффективны в чрескожной доставке активных компонентов как в косметических, так и фармацевтических применениях. Ожидается, что микроэмульсионные композиции и готовые формы данного изобретения будут способствовать увеличенной системной абсорбции дцРНК и нуклеиновых кислот из желудочно-кишечного тракта, а также улучшать локальное клеточное поглощение дцРНК и нуклеиновых кислот.
Микроэмульсии данного изобретения могут также содержать дополнительные компоненты и добавки, такие как моностеарат сорбитана (Grill 3), Лабразол и усливающие проникновение агенты, для улучшения свойств готовой формы и усиления абсорбции дцРНК и нуклеиновых кислот данного изобретения. Усиливающие проникновение агенты, используемые в микроэмульсиях данного изобретения, могут быть классифицированы как принадлежащие к одной из пяти широких категорий: сурфактанты, жирные кислоты, желчные кислоты, хелатообразующие агенты и не-хелатообразующие неповерхностно-активные вещества (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Каждый из этих классов обсуждался выше.
Усиливающие проникновение агенты
В одном варианте осуществления, данное изобретение использует различные усиливающие проникновение агенты для выполнения эффективной доставки нуклеиновых кислот, в частности, дцРНК, в кожу животных. Большинство лекарственных средств присутствуют в растворе как в ионизированной, так и неионизированной формах. Однако обычно только растворимые в липидах или липофильные лекарственные средства легко пересекают клеточные мембраны. Было обнаружено, что даже нелипофильные лекарственные средства могут пересекать клеточные мембраны, если мембрана, которая должна быть пересечена, обработана усиливающим проникновение агентом. Кроме содействия диффузии нелипофильных лекарственных средств через клеточные мембраны, усиливающие проникновение агенты усиливают также проникаемость липофильных лекарственных средств.
Усиливающие проникновение агенты могут быть классифицированы как принадлежащие к одной из пяти широких категорий: сурфактанты, жирные кислоты, желчные кислоты, хелатообразующие агенты и не-хелатообразующие не-поверхностно-активные вещества (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92) . Каждый из этих классов усиливающих проникновение агентов описан ниже более подробно.
Сурфактанты: В связи с данным изобретением, сурфактанты (или поверхностно-активные агенты) являются химическими частицами, которые, при растворении в водном растворе уменьшают поверхностное натяжение этого раствора или межфазное натяжение между водным раствором и другой жидкостью, результатом чего является усиление абсорбции дцРНК через слизистую оболочку. Кроме желчных кислот и жирных кислот, эти усиливающие проникновение агенты включают в себя, например, лаурилсульфат натрия, лауриловый эфир полиоксиэтилена-9 и цетиловый эфир полиоксиэтилен-20) (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); и перфторхимические эмульсии, такие как FC-43. Takahashi et al. , J. Pharm. Pharmacol, 1988, 40, 252).
Жирные кислоты: Различные жирные кислоты и их производные, которые действуют как усиливающие проникновение агенты, включают в себя, например, олеиновую кислоту, лауриновую кислоту, каприновую кислоту (н-декановую кислоту), миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, дикапрат, трикапрат, моноолеин (1моноолеоил-ras-глицерин), дилаурин, каприловую кислоту, арахидоновую кислоту, глицерол-1монокапрат, 1-додецилазациклогептан-2-он, ацилкарнитины, ацилхолины, их Ci-ю-алкиловые эфиры (например, метиловый, изопропиловый и трет-бутиловый) и их моно- и диглицериды (т.е. олеат, лаурат, капрат, миристат, пальмитат, стеарат, линолеат и т.д.) (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al, J. Pharm. Pharmacol, 1992, 44, 651-654).
Соли желчных кислот: Физиологическая роль желчи включает в себя облегчение диспергирования и абсорбции липидов и жирорастворимых витаминов (Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934935). Различные природные соли желчных кислот и их синтетические производные действуют в качестве усиливающих проникновение агентов. Таким образом, термин соли желчных кислот включает в себя любой из природно-встречающихся компонентов желчи, а также их синтетические производные. Подходящие соли желчных кислот включают в себя, например, холевую кислоту (или ее фармацевтически приемлемую натриевую соль, холат натрия), дегидрохолевую кислоту (дегидрохолат натрия), дезоксихолевую кислоту (дезоксихолат натрия), глюхолевую кислоту (глюхолат натрия), гликохолевую кислоту (гликохолат натрия), гликодезоксихолевую кислоту (гликодезоксихолат натрия), таурохолевую кислоту (таурохолат натрия), тауродезоксихолевую кислоту (тауродезоксихолат натрия), хенодезоксихолевую
- 28 036772 кислоту (хенодезоксихолат натрия), урсодезоксихолевую кислоту (UDCA), тауро-24,25-дигидрофузидат натрия (STDHF), гликодигидрофузидат натрия и лауриловый эфир полиоксиэтилена-9 (РОЕ) (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci, 1990, 79, 579-583).
Хелатообразующие агенты: Хелатообразующие агенты, при использовании в связи с данном изобретением, могут быть определены как соединения, которые удаляют ионы металлов из раствора образованием с ними комплексов, в результате чего усиливается абсорбция дцРНК через слизистую оболочку. Что касается их применения в качестве усиливающих проникновение агентов в данном изобретении, хелатообразующие агенты имеют дополнительное преимущество, служа в качестве ингибиторов ДНКазы, так как наиболее охарактеризованные ДНКазы требуют двухвалентного иона металла для катализа и, следовательно, ингибируются хелатообразующими агентами (Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339). Подходящие хелатообразующие агенты включают в себя, но не ограничиваются ими, динатрийэтилендиаминтетраацетат (EDTA), лимонную кислоту, салицилаты (например, салицилат натрия, 5метоксисалицилат и гомованилат), N-ацилпроизводные коллагена, лаурет-9 и N-аминоацилпроизводные бета-дикетонов (енамины) (Lee et al, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al, J. Control ReL, 1990, 14, 43-51).
Не-хелатообразующие не-сурфактанты: В данном контексте, не-хелатообразующие несурфактанты, усиливающие проникновение соединения, могут быть определены как соединения, которые демонстрируют незначительную активность в качестве хелатообразующих агентов или в качестве сурфактантов, но тем не менее усиливают абсорбцию дцРНК через алиментарную слизистую оболочку (Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). Этот класс усиливающих проникновение агентов включают в себя, например, ненасыщенные циклические мочевины, производные 1-алкил- и 1-алкенилазациклоалканона (Lee et al, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92); и нестероидные противовоспалительные агенты, такие как диклофенак-натрий, индометацин и фенилбутазон (Yamashita et al, J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626).
Носители
Некоторые композиции данного изобретения включают в себя также соединения-носители в готовой форме. В данном контексте, соединение-носитель или носитель могут относиться к нуклеиновой кислоте или ее аналогу, которые являются инертными (т.е. не имеют сами по себе биологической активности), но узнается в качестве нуклеиновой кислоты процессами in vivo, которые уменьшают биодоступность нуклеиновой кислоты, имеющей биологическую активность, например, деградацией этой биологически активной нуклеиновой кислоты или стимулированием ее удаления из кровотока. Совместное введение нуклеиновой кислоты и соединения-носителя, обычно с избытком последнего вещества, может приводить к существенному уменьшению количества нуклеиновой кислоты, улавливаемой в печени, почке или других резервуарах вне кровотока, предположительно вследствие конкуренции между соединением-носителем и нуклеиновой кислотой за общий рецептор. Например, улавливание частично фосфоротиоатной дцРНК в ткани печени может уменьшаться при совместном введении полиинозиновой кислоты, декстрансульфата, полицитидиновой кислоты или 4-ацетамидо-4'-изотиоцианостильбен-2,2'дисульфоновой кислоты (Miyao et al, DsRNA Res. Dev., 1995, 5, 115-121; Takakura et al., DsRNA & Nucl. Acid Drug Dev., 1996, 6, 177-183.
Эксципиенты
В отличие от соединения-носителя, фармацевтический носитель или эксципиент является фармацевтически приемлемым растворителем, суспендирующим агентом или любым другим фармакологически инертным носителем для доставки одной или нескольких нуклеиновых кислот животному. Этот эксципиент может быть жидкостью или твердым веществом, и его выбирают, имея в виду запланированный способ введения, таким образом, чтобы обеспечить желаемый объем, консистенцию и т.д., при объединении с нуклеиновой кислотой и другими компонентами конкретной фармацевтической композиции. Обычные фармацевтические носители включают в себя, но не ограничиваются ими, связывающие агенты (например, желатинированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлозу и т.д.); наполнители (например, лактозу и другие сахара, микрокристаллическую целлюлозу, пектин, желатин, сульфат кальция, этилцеллюлозу, полиакрилаты или гидрофосфат кальция и т.д.); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк, диоксид кремния, коллоидный диоксид кремния, стеариновую кислоту, стеараты металлов, гидрогенизированные растительные масла, кукурузный крахмал, полиэтиленгликоли, бензоат натрия, ацетат натрия и т.д.); дезинтегрирующие агенты (например, крахмал, гликолат натрий-крахмала и т.д.) и увлажняющие агенты (например, лаурилсульфат натрия и т.д.).
Фармацевтически приемлемые органические или неорганические эксципиенты, подходящие для непарентерального введения, которые не реагируют вредным образом с нуклеиновыми кислотами, могут быть также использованы для приготовления композиций данного изобретения. Подходящие фармацев- 29 036772 тически приемлемые носители включают в себя, но не ограничиваются ими, воду, солевые растворы, спирты, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и т.п.
Готовые формы для местного (локального) введения нуклеиновых кислот могут включать в себя стерильные и нестерильные водные растворы, неводные растворы в обычных растворителях, таких как спирты, или растворы нуклеиновых кислот в жидких или твердых масляных основах. Эти растворы могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Могут быть использованы фармацевтически приемлемые органические или неорганические эксципиенты, подходящие для непарентерального введения, которые не реагируют вредным образом с нуклеиновыми кислотами.
Подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты включают в себя, но не ограничиваются ими, воду, солевые растворы, спирт, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и т.п.
Другие компоненты
Композиции данного изобретения могут дополнительно содержать вспомогательные компоненты, обнаруживаемые в фармацевтических композициях, при их установленных в данной области уровнях. Так, например, эти композиции могут содержать дополнительные, совместимые, фармацевтически активные вещества, такие как, например, противозудные средства, останавливающие кровотечение средства, местные анестезирующие средства или противовоспалительные агенты, или могут содержать дополнительные вещества, применимые в физическом приготовлении различных лекарственных форм композиций данного изобретения, такие как красители, ароматизирующие агенты, консерванты, антиоксиданты, глушители (делающие материал непрозрачным), загущающие агенты и стабилизаторы. Однако, такие вещества при добавлении должны чрезмерно препятствовать биологическим активностям компонентов композиций данного изобретения. Эти готовые формы могут быть стерилизованы и, если желательно, смешаны со вспомогательными агентами, например, смазывающими веществами, консервантами, стабилизаторами, увлажняющими агентами, эмульгаторами, солями для влияния на осмотическое давление, буферами, красящими агентами, отдушками и/или ароматическими веществами и т.п., которые не взаимодействуют вредным образом с нуклеиновой кислотой (нуклеиновыми кислотами) этой готовой формы.
Водные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость этой суспензии, в том числе, например, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Эта суспензия может также содержать стабилизаторы. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтические композиции, описанные в этом изобретении, включают в себя (а) одно или несколько дцРНК-соединений и (b) один или несколько антицитокиновых биологических агентов, которые функционируют посредством другого, чем RNAi, механизма. Примеры таких биологических веществ включают в себя биологические вещества, которые нацелены на IL-1e (например, анакинра), IL6 (тоцилицунаб) или TNF (этанерцепт, инфликсимаб, адлимумаб или цертолицумаб).
Токсичность и терапевтическая эффективность таких соединений может быть определена стандартными фармацевтическими процедурами в культурах клеток или в экспериментальных животных, например, для определения LD50 (дозы, летальной для 50% этой популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной в 50% этой популяции). Дозовое отношение между токсическим и терапевтическим эффектами называют терапевтическим индексом, и он может быть выражен в виде отношения LD50/ED50. Предпочтительными являются соединения, которые обнаруживают высокие терапевтические индексы.
Данные, полученные из анализов культур клеток и исследований на животных, могут быть использованы в приготовлении диапазона доз для применения в людях. Доза композиций, описанных в этом изобретении, лежит обычно в диапазоне циркулирующих в кровотоке концентраций, которые включают в себя ED50 с низкой токсичностью или с отсутствием токсичности. Эта доза может варьироваться в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого способа введения. Для любого соединения, используемого в описанных в этом изобретении способах, терапевтически эффективная доза может быть приближенно оценена сначала из анализов культур клеток. Доза может быть определена в моделях животных для получения диапазона, циркулирующих в плазме концентраций соединения, или, соответственно, полипептидного продукта последовательности-мишени (например, с получением уменьшенной концентрации этого полипептида), который включает в себя IC50 (т.е. концентрацию тест-соединения, которая дает полумаксимальное ингибирование симптомов), при определении в культуре ткани. Такая информация может быть использована для более точного определения применимых доз в людях. Уровни в плазме могут быть измерены, например, высокоэффективной жидкостной хроматографией.
Кроме их обсуждаемого выше введения, дцРНК описанные в этом изобретении, могут вводиться в комбинации с другими известными агентами, эффективными в лечении патологических процессов, опосредуемых экспрессией TTR. В любом случае, производящий введения врач может корректировать количество и тайминг введения дцРНК на основании наблюдаемых результатов, с использованием стандартных критериев эффективности, известных в данной области или описанных здесь.
Способы лечения заболеваний, вызываемых экспрессией гена TTR
Это изобретение относится к применению дцРНК, поражающей TTR, и композициям, содержащим
- 30 036772 по меньшей мере одну такую дцРНК, для лечения TTR-опосредуемого нарушения или заболевания. Например, дцРНК, поражающая ген TTR, может быть использована для лечения TTR-амилоидоза, такого как наследственная амилоидная полиневропатия (FAP), наследственная амилоидная кардиомиопатия (FAC), лептоменингеальный амилоидоз/амилоидоз ЦНС (центральной нервной системы), форма VII амилоидоза (также называемая лептоменингеальным или менингоцереброваскулярным амилоидозом), гипертироксинемия и амилоидоз сердца (также называемый сенильным системным амилоидозом (SSA) и сенильным амилоидозом сердца (SCA)).
Фиг. 15 иллюстрирует симптомы и мутации в TTR, ассоциированные с наследственной амилоидной невропатией, наследственной амилоидной карбиомиопатией и амилоидозом ЦНС. Это изобретение включает в себя композиции и способы для лечения этих заболеваний и симптомов и направлено на мутантные версии TTR.
дцРНК, поражающая ген TTR, используется также для лечения симптомов и нарушений, таких как TTR-амилоидоз. Симптомы, ассоциированные с таким амилоидозом, включают в себя, например, припадки, деменцию, миелопатию, полиневропатию, синдром канала запястья, вегетативную недостаточность, кардиомиопатию, желудочно-кишечную дисфункцию (например, язвы желудка, диарею, констипацию, малабсорбцию (синдром недостаточности всасывания)), потерю массы, гепатомегалию, лимфаденопатию, зоб, помутнения стекловидного тела, почечную недостаточность (в том числе протеинурию и почечную недостаточность), нефропатию, дисфункцию черепных нервов и дистрофию корнеальной решетки и застойную сердечную недостаточность с генерализованной слабостью и трудностью дыхания из-за задержки жидкости.
Благодаря ингибирующим действиям на экспрессию TTR, композиция согласно этому изобретению или приготовленная из нее фармацевтическая композиция может улучшать качество жизни.
Это изобретение относится также к применению дцРНК или содержащей ее фармацевтической композиции, например, для лечения TTR-амилоидоза, в комбинации с другими фармацевтическими веществами и/или другими терапевтическими способами, например, с известными фармацевтическими веществами и/или известными терапевтическими способами, такими как, например, вещества и/или способы, котроые используются в настоящее время для лечения этих нарушений. В одном примере, дцРНК, поражающая TTR, может вводиться в комбинации с фармацевтическим или терапевтическим способом для лечения симптома TTR-заболевания, например, диуретическими средствами, ингибиторами АСЕ (ангиотензин-превращающего фермента), блокаторами рецептора ангиотензина (ARB) , или диализом, например, для лечения почечной функции.
дцРНК и дополнительный терапевтический агент могут вводиться в одной и той же комбинации, например, парентерально, или может вводиться дополнительный терапевтический агент в виде части композиции или другим описанным здесь способом.
Это изобретение описывает способ введения дцРНК, поражающей TTR, пациенту, имеющему заболевание или нарушение, опосредуемое экспрессией TTR, такое как TTR-амилоидоз, например, FAP. Введение этой дцРНК может стабилизировать и улучшать периферическую неврологическую функцию, например, в пациенте с FAP. Пациентам может вводиться терапевтическое количество дцРНК, например, 0,1 мг/кг, 0,2 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1,0 мг/кг, 1,5 мг/кг, 2,0 мг/кг или 2,5 мг/кг dsRNA. Эта дцРНК может вводиться внутривенной инфузией на протяжении периода времени, такого как 5-минутный, 10-минутный, 15-минутный, 20-минутный, 25-минутный, 60-минутный, 120-минутный или 180-минутный период. Это введение повторяют, например, на регулярной основе, например, один раз в две недели (т.е. каждую вторую неделю) в течение одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев или дольше. После начальной схемы введения, эти обработки могут выполняться на менее частой основе. Например, после введения каждые две недели в течение трех месяцев введение может повторяться один раз в месяц в течение шести месяцев или года или дольше. Введение дцРНК может уменьшать уровни TTR в крови или моче пациента по меньшей мере на 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80 % или 90% или более.
Перед введением полной дозы дцРНК, пациентам может вводиться более низкая доза, например, доза, которая является 5% полной дозы, и может проводиться мониторинг на вредные действия, такие как аллергическая реакция или изменение функции печени. Например, в пациентах, подвергаемых мониторингу на изменения функции печени, приемлемой является низкая частота изменения LFT (теста функции печени) (например, 10-20% частота LFT) (например, обратимое 3-кратное увеличение уровней ALT (аланинаминотрансферазы) и/или AST (аспартатаминотрансферазы).
Многие TTR-ассоциированные заболевания и нарушения являются наследственными. Таким образом, пациент, нуждающийся в дцРНК TTR, может быть идентифицирован просматриванием семейного анамнеза. Наблюдающее за здоровьем лицо, например, доктор, медсестра или член семьи, может использовать историю болезни (анамнез) перед прописыванием или введением дцРНК TTR. На пациенте может быть также выполнен ДНК-тест для идентификации мутации в гене TTR, перед введением дцРНК TTR этому пациенту.
Пациент может иметь биопсию, выполненную перед получением дцРНК TTR. Эта биопсия может быть выполнена на ткани, например, слизистой оболочке желудка, периферическом нерве, коже, жире живота, печени или почке, и эта биопсия может выявить амилоидные бляшки, которые являются показа
- 31 036772 телями TTR-опосредованного нарушения. После идентификации амилоидных бляшек пациенту вводят дцРНК TTR.
Способы идентификации экспрессии гена TTR
Еще в одном аспекте, это изобретение обеспечивает способ ингибирования экспрессии гена TTR в млекопитающем. Этот способ включает в себя введение композиции, описанной в этом изобретении, млекопитающему таким образом, что происходит сайленсинг экспрессии гена-мишени TTR.
Когда подлежащим лечению организмом является человек, эта композиция может вводиться любым способом, известным в данной области, включающим в себя, но не ограничивающимся ими, пероральный или парентеральный способы, включающие в себя интракраниальное (например, интравентрикулярное, интрапаренхимное и внутриоболочечное) , внутривенное, внутримышечное, подкожное, чрескожное, введение через дыхательные пути (аэроназальное), ректальное и местное (локальное) (в том числе буккальное и сублингвальное) введение. В некоторых вариантах осуществления, эти композиции вводят внутривенной инфузией или инъекцией.
Если нет другого определения, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют значение, обычно понимаемое лицом, имеющим обычную квалификацию в области, к которой принадлежит это изобретение. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным здесь способам и материалам, могут быть использованы в практике или испытании дцРНК и способов, описанных в этом изобретении, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, заявки на патент, патенты и другие ссылки, упомянутые здесь, включены посредством ссылки в полном объеме. В случае противоречия, превалирующим должно быть данное описание, в том числе определения. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Синтез дцРНК
Источник реагентов
Если источник реагента не приведен здесь конкретно, такой реагент может быть получен от любого поставщика реагентов для молекулярной биологии в качестве/чистоте, стандартных для применения в молекулярной биологии.
Синтез siRNA (миРНК)
Одноцепочечные РНК получали твердофазным синтезом в масштабе 1 мкмоль с использованием синтезатора Expedite 8909 (Applied Biosystems, Applera Deutschland GmbH, Darmstadt, Germany) и стекла с контролируемыми порами (CPG, 500A, Proligo Biochemie GmbH, Hamburg, Germany) в качестве твердого носителя. РНК и РНК, содержащую 2'-О-метилнуклеотиды, генерировали твердофазным синтезом, использующим соответствующие фосфорамидиты и 2'-О-метилфосфорамидиты, соответственно (Proligo Biochemie GmbH, Hamburg, Germany). Эти элементарные звенья включали в выбранных сайтах в последовательности олигорибонуклеотидной цепи с использованием способа стандартной химии нуклеозидфосфорамидитов, такого как способ, описанный в Current protocols in nucleic acid chemistry, Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA. Фосфоротиоатные связи вводили заменой раствора йодного окислителя раствором реагента Beaucage (Chruachem Ltd, Glasgow, UK) в ацетонитриле (1%). Другие вспомогательные реагенты получали из Mallinckrodt Baker (Griesheim, Germany).
Удаление защитных групп и очистку неочищенных олигорибонуклеотидов анионообменной ВЖХ проводили в соответствии с установленными процедурами. Выходы и концентрации определяли по УФпоглощению раствора соответствующей РНК при длине волны 260 нм с использованием спектрального фотометра (DU 640В, Beckman Coulter GmbH, UnterschleiBheim, Germany). Двухцепочечную РНК генерировали смешиванием эквимолярного раствора комплементарных цепей в буфере для отжига (20 мМ фосфат натрия, рН 6,8; 100 мМ хлорид натрия), нагревали на водяной бане при 85-90°С в течение 3 мин и охлаждали при комнатной температуре на протяжении периода 3-4 ч. Раствор отожженной РНК хранили при -20°С до использования.
Для синтеза 3-холестерин-конъюгированных siRNA (здесь называемых как -Chol-3'), использовали подходящим образом модифицированный твердый носитель для синтеза РНК. Этот модифицированный твердый носитель получали следующим образом:
Диэтил-2-азабутан-1,4-дикарбоксилат АА
АА
4,7 М водный раствор гидроксида натрия (50 мл) добавляли в перемешиваемый охлажденный на льду раствор гидрохлорида этилглицината (50 мл) (32,19 г, 0,23 моль) в воде (50 мл). Затем, добавляли этилакрилат (23,1 г, 0,23 моль) и эту смесь перемешивали при комнатной температуре, пока не определяли завершение реакции с использованием ТСХ. Спустя 19 ч этот раствор распределяли дихлорметаном (3x100 мл). Органический слой сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали. Остаток
- 32 036772 дистиллировали с получением АА (28,8 г, 61%) .
Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-3-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино}пропионовой кислоты АВ
О
N FmocHN^-x^^Ai.Q О
АВ
Fmoc-6-аминогексановую кислоту (9,12 г, 25,83 ммоль) растворяли в дихлорметане (50 мл) и охлаждали на льду. Диизопропилкарбодиимид (3,25 г, 3,99 мл, 25,83 ммоль) добавляли к этому раствору при 0°С. Затем добавляли диэтилазабутан-1,4-дикарбоксилат (5 г, 24,6 ммоль) и диметиламинопиридин (0,305 г, 2,5 ммоль). Этот раствор доводили до комнатной температуры и перемешивали дополнительно в течение 6 часов. Завершение реакции устанавливали при помощи ТСХ. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и добавляли этилацетат для осаждения диизопропилмочевины. Суспензию фильтровали. Фильтрат промывали 5% водной хлористоводородной кислотой, 5% бикарбонатом натрия и водой. Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией (50% EtOAC/гексаны) с получением 11,87 г (88%) АВ.
Этиловый эфир 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбониламино]пропионовой кислоты АС
О
AC
Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино}пропионовой кислоты АВ (11,5 г, 21,3 ммоль) растворяли в 20% пиперидине в диметилформамиде при 0°С. Этот раствор продолжали перемешивать в течение 1 ч. Эту реакционную смесь концентрировали в вакууме, к остатку добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Неочищенный продукт очищали превращением его в гидрохлоридную соль.
Этиловый эфир 3-({6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}этоксикарбонилметиламино)пропионовой кислоты AD
О
П II / J о
АР
Хлористоводородную соль этилового эфира 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС (4,7 г, 14,8 ммоль) помещали в дихлорметан. Эту суспензию охлаждали до 0°С на льду. К суспензии добавляли диизопропилэтиламин (3,87 г, 5,2 мл, 30 ммоль). К полученному раствору добавляли холестерилхлорформиат (6,675 г, 14,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали 2 0% хлористоводородной кислотой. Продукт очищали флеш-хроматографией (10,3 г, 92%).
Этиловый эфир 1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексанил}-4-оксопирролидин-3карбоновой кислоты АЕ
- 33 036772
Трет-бутоксид калия (1,1 г, 9,8 ммоль) суспендировали в 30 мл сухого толуола. Эту смесь охлаждали до 0°С на льду и 5 мг (6,6 ммоль) диэфира AD добавляли медленно при перемешивании в течение 20 мин. Во время этого добавления температуру поддерживали ниже 5°С. Перемешивание продолжали в течение 30 мин при 0°С и добавляли 1 мл ледяной уксусной кислоты с последующим немедленным добавлением 4 г NaH2PO4.Н2О в 40 мл воды. Полученную смесь экстрагировали дважды 100 мл дихлорметана каждый раз и объединенные органические экстракты промывали дважды 10 мл фосфатного буфера каждый раз, сушили и упаривали досуха. Остаток растворяли в 60 мл толуола, охлаждали до 0°С и экстрагировали тремя порциями по 50 мл холодного карбонатного буфера 9,5 рН. Водные экстракты доводили до рН 3 фосфорной кислотой и экстрагировали пятью порциями по 40 мл хлороформа, которые затем объединяли, сушили и упаривали досуха. Остаток очищали колоночной хроматографией с использованием 25% смеси этилацетат/гексан с получением 1,9 г бета-кетоэфира (39%).
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-Шциклопента[а]фенантрен-3-иловый эфир [6-(3-гидрокси-4-гидроксиметилпирролидин-1-ил)-6-оксогексил]карбаминовой кислоты AF
Метанол (2 мл) добавляли по каплям на протяжении периода 1 ч к нагреваемой в колбе с обратным холодильником смеси бета-кетоэфира АЕ (1,5 г, 2,2 ммоль) и боргидрида натрия (0,226 г, б ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл). Перемешивание продолжали при температуре дефлегмации в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 1 н HCl (12,5 мл) и эту смесь экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Объединенный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением продукта, который очищали колоночной хроматографией (10% МеОН/СНС1з) (89%).
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-иловый эфир (6-{3-[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-4-гидроксипирродидин-1-ил}-6-оксогексил)карбаминовой кислоты AG
Диол AF (1,25 г, 1,994 моль) сушили упариванием с пиридином (2x5 мл) в вакууме. Добавляли безводный пиридин (10 мл) и 4,4'-диметокситритилхлорид (0,724 г, 2,13 ммоль) при перемешивании. Эту реакцию проводили при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию гасили добавлением метанола.
- 34 036772
Реакционную смесь концентрировали в вакууме и к остатку добавляли дихлорметан (50 мл). Органический слой промывали 1 М водным бикарбонатом натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Оставшийся пиридин удаляли упариванием с толуолом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (2% МеОН/хлороформ, Rf=0,5 в 5% МеОН/CHClз) (1,75 г, 95%).
Моно-(4-[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-1 - {6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}пирролидин-3-иловый) эфир янтарной кислоты АН .0 СН2О
АН
Соединение AG (1,0 г, 1,05 ммоль) смешивали с янтарным ангидридом (0,150 г, 1,5 ммоль) и DMAP (0,073 г, 0,6 ммоль) и сушили в вакууме при 40°С в течение ночи. Эту смесь растворяли в безводном дихлорэтане (3 мл), добавляли триэтиламин (0,318 г, 0,440 мл, 3,15 ммоль) и этот раствор перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 16 ч. Затем его разбавляли дихлорметаном (40 мл) и промывали охлажденной на льду водной лимонной кислотой (5 мас.%, 30 мл) и водой (2x20 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали досуха. Остаток использовали в таком виде для следующей стадии.
Дериватизованный холестерином CPG AI .о сн2о
Сукцинат АН (0,254 г, 0,242 ммоль) растворяли в смеси дихлорметан/ацетонитрил (3:2,3 мл). К этому раствору добавляли последовательно DMAP (0,0296 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (1,25 мл), 2,2'дитио-бис-(5-нитропиридин) (0,075 г, 0,242 ммоль) в смеси ацетонитрил/дихлорэтан (3:1, 1,25 мл). К полученному раствору добавляли трифенилфосфин (0,064 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (0,6 мл). Реакционная смесь приобретала яркую оранжевую окраску. Этот раствор кратковременно встряхивали с использованием ручного шейкера (5 мин). Добавляли алкиламин-CPG с длинной цепью (LCAA-CPG) (1,5 г, 61 мМ). Эту суспензию встряхивали в течение 2 часов. CPG фильтровали через воронку с фильтром из спекшегося стекла и промывали последовательно ацетонитрилом, дихлорметаном и эфиром. Непрореагировавшие аминогруппы маскировали с использованием смеси уксусный ангидрид/пиридин. Полученную нагрузку CPG измеряли с использованием измерения УФ-поглощения (37 мМ/г).
Синтез siRNA, несущих группу бисдециламида 5'-12-додекановой кислоты (здесь называемую 5'С32-) или группу 5'-холестерин-производного (здесь называемую 5'-Хол-), выполняли, как описано в WO 2004/065601, за исключением того, что, для холестерин-производного, стадию окисления выполняли с использованием реагента Beaucage для введения фосфоротиоатной связи при 5'-конце олигомера нуклеиновой кислоты.
Последовательности нуклеиновых кислот представлены ниже с использованием стандартной номенклатуры и, конкретно, аббревиатур табл. 1.
- 35 036772
Таблица 1.
Аббревиатуры нуклеотидных мономеров, используемые в представлении последовательностей нуклеиновых кислот. Должно быть понятно, что эти мономеры, когда они присутствуют в олигонуклеотиде, взаимосвязаны 5'-3'-фосфодиэфирными связями
Аббревиатура Нуклеотид (нуклеотиды)
А аденозин-3'-фосфат
С цитидин-3'-фосфат
G гуанозин-3' -фосфат
Т 5-метилуридин-З'-фосфат
и уридин-3'-фосфат
N любой нуклеотид (G, А, С или Т)
а 2'-0-метиладенозин-З'-фосфат
с 2'-О-метилцитидин-3'-фосфат
д 2'-0-метилгуанозин-З'-фосфат
U 2'-О-метилуридин-3'-фосфат
ат 2'-0-дезокситимидин-З'-фосфат
sT; sdT 2'-дезокситимидин-5'-фосфат-фосфоротиоат
Пример 2А. Конструирование siRNA TTR
Транскрипты
Конструирование siRNA (короткой интерферирующей РНК) проводили для идентификации siRNA, поражающих ген транстиретина из человека (символ TTR) и крысы (символ Ttr) . Это конструирование использовало TTR-транскрипты NM_000371.2 (SEQ ID NO:1329) (человека) и NM_012681.1 (SEQ ID NO:1330) (крысы) из NCBI Refseq collection. Эти siRNA-дуплексы конструировали с 100% идентичностью относительно их соответствующих генов TTR.
Конструирование и предсказание специфичности siRNA
Предсказанную специфичность всех возможных 19-меров определяли для каждой последовательности. Эти siRNA TTR использовали в обширном поиске против транскриптом человека и крысы (определяемых как набор NM и ХМ записей в NCBI Refseq set) с использованием алгоритма FASTA. Затем использовали Python script OfftargetFasta.py' для подвергания лексическому анализу этих сопоставлений и генерирования оценки (балла) на основании положения и количества ошибочных спариваний между этой siRNA и любым потенциальным находящимся 'вне мишени' транскриптом. Эту оценку 'вне мишени' взвешивают для подчеркивания различий в 'затравочном' участоке этих siRNA, в положениях 2-9 от 5'конца этой молекулы. Оценку 'вне мишени' рассчитывают следующим образом: ошибочным спариваниям между олиго (олигонуклеотидом) и транскриптом присваивают штрафы. Ошибочному спариванию в затравочном участке в положениях 2-9 этого олиго назначается штраф 2,8; ошибочным спариваниям в предположительных сайтах расщепления 10 и 11 назначается штраф 1,2, а ошибочным спариваниям в положениях 12-19 штраф 1. Ошибочные спаривания в положении 1 не учитываются. Затем оценку 'вне мишени' для каждой пары олиго-транскрипт рассчитывают суммированием штрафов за ошибочные спаривания. Затем определяют самую низкую оценку 'вне мишени' из всех пар олиго-транскрипт и используют ее в последующем сортинге олиго. Обе цепи siRNA относят к категории специфичности в соответствии с рассчитанными оценками: оценка выше 3 характеризует их как высоко специфические, оценка 3 как специфические и между 2,2 и 2,8 как умеренно специфические (среднеспецифические). При выборе, какие олигонуклеотиды (олиго) синтезировать, оценки вне мишени антисмысловой цепи классифицировали от высокой к низкой и отобрали 144 наилучших (с наименьшей оценкой вне мишени) пар олиго из человека и 26 наилучших пар из крысы.
Выбор siRNA-последовательности
В целом, синтезировали 140 смысловых и 140 антисмысловых произведенных из TTR человека siRNA-олиго и образовывали из них дуплексы. В целом, синтезировали 26 смысловых и 26 антисмысловых произведенных из TTR крысы siRNA-олиго и образовывали из них дуплексы. Дуплексы, включающие в себя эти олиго, представлены в таблицах 2-4 (TTR человека) и табл.5-7 (TTR крысы).
- 36 036772
Таблица 2.
Идентификационные номера для дцРНК TTR человека Смотрите таблицу 4 в отношении последовательностей и модификаций олигонуклеотидов (олиго).
Номер дуплекса Номер смыслового олиго Номер антисмыслового олиго
AD-18243 А-32153 А-32154
AD-18244 А-32155 А-32156
AD-18245 А-32157 А-32158
AD-18246 А-32159 А-32160
AD-18247 А-32163 А-32164
AD-18248 А-32165 А-32166
AD-18249 А-32167 А-32168
AD-18250 А-32169 А-32170
AD-18251 А-32171 А-32172
AD-18252 А-32175 А-32176
AD-18253 А-32177 А-32178
AD-18254 А-32179 А-32180
AD-18255 А-32181 А-32182
AD-18256 А-32183 А-32184
AD-18257 А-32187 А-32188
AD-18258 А-32189 А-32190
AD-18259 А-32191 А-32192
AD-18260 А-32193 А-32194
AD-18261 А-32195 А-32196
AD-18262 А-32199 А-32200
AD-18263 А-32201 А-32202
AD-18264 А-32203 А-32204
AD-18265 А-32205 А-32206
AD-18266 А-32207 А-32208
AD-18267 А-32211 А-32212
AD-18268 А-32213 А-32214
AD-18269 А-32215 А-32216
AD-18270 А-32217 А-32218
AD-18271 А-32219 А-32220
AD-18272 А-32221 А-32222
AD-18273 А-32223 А-32224
AD-18274 А-32225 А-32226
AD-18275 А-32227 А-32228
AD-18276 А-32229 А-32230
AD-18277 А-32231 А-32232
AD-18278 А-32233 А-32234
AD-18279 А-32235 А-32236
AD-18280 А-32237 А-32238
AD-18281 А-32239 А-32240
AD-18282 А-32241 А-32242
AD-18283 А-32243 А-32244
- 37 036772
AD-18284 A-32247 A-32248
AD-18285 A-32249 A-32250
AD-18286 A-32251 A-32252
AD-18287 A-32253 A-32254
AD-18288 A-32255 A-32256
AD-18289 A-32259 A-32260
AD-18290 A-32261 A-32262
AD-18291 A-32263 A-32264
AD-18292 A-32265 A-32266
AD-18293 A-32267 A-32268
AD-18294 A-32269 A-32270
AD-18295 A-32271 A-32272
AD-18296 A-32273 A-32274
AD-18297 A-32275 A-32276
AD-18298 A-32277 A-32278
AD-18299 A-32279 A-32280
AD-183 00 A-32281 A-32282
AD-18301 A-32283 A-32284
AD-183 02 A-32285 A-32286
AD-183 03 A-32287 A-32288
AD-183 04 A-32289 A-32290
AD-183 05 A-32291 A-32292
AD-183 06 A-32295 A-32296
AD-183 07 A-32297 A-32298
AD-18308 A-32299 A-32300
AD-183 09 A-32301 A-32302
AD-18310 A-32303 A-32304
AD-18311 A-32307 A-32308
AD-18312 A-32309 A-32310
AD-18313 A-32311 A-32312
AD-18314 A-32313 A-32314
AD-18315 A-32315 A-32316
AD-18316 A-32319 A-32320
AD-18317 A-32321 A-32322
AD-18318 A-32323 A-32324
AD-18319 A-32325 A-32326
AD-18320 A-32327 A-32328
AD-18321 A-32331 A-32332
AD-18322 A-32333 A-32334
AD-18323 A-32335 A-32336
AD-18324 A-32337 A-32338
AD-18325 A-32339 A-32340
AD-18326 A-32341 A-32342
AD-18327 A-32343 A-32344
- 38 036772
AD-18328 A-32345 A-32346
AD-18329 A-32347 A-32348
AD-18330 A-32349 A-32350
AD-18331 A-32351 A-32352
AD-18332 A-32353 A-32354
AD-18333 A-32355 A-32356
AD-18334 A-32357 A-32358
AD-18335 A-32359 A-32360
AD-18336 A-32363 A-32364
AD-18337 A-32367 A-32368
AD-18338 A-32369 A-32370
AD-18339 A-32371 A-32372
AD-18340 A-32373 A-32374
AD-18341 A-32375 A-32376
AD-18342 A-32379 A-32380
AD-18343 A-32381 A-32382
AD-18344 A-32383 A-32384
AD-18345 A-32385 A-32386
AD-18346 A-32387 A-32388
AD-18347 A-32391 A-32392
AD-18348 A-32393 A-32394
AD-18349 A-32395 A-32396
AD-18350 A-32397 A-32398
AD-18351 A-32399 A-32400
AD-183 52 A-32401 A-32402
AD-18353 A-32403 A-32404
AD-183 54 A-32405 A-32406
AD-18355 A-32407 A-32408
AD-18356 A-32409 A-32410
AD-18357 A-32411 A-32412
AD-18358 A-32415 A-32416
AD-183 59 A-32417 A-32418
AD-183 60 A-32419 A-32420
AD-18361 A-32421 A-32422
AD-183 62 A-32423 A-32424
AD-183 63 A-32427 A-32428
AD-183 64 A-32429 A-32430
AD-18446 A-32161 A-32162
AD-18447 A-32173 A-32174
AD-18448 A-32185 A-32186
AD-18449 A-32197 A-32198
AD-18450 A-32209 A-32210
AD-18451 A-32245 A-32246
AD-18452 A-32257 A-32258
- 39 036772
AD-18453 A-32293 A-32294
AD-18454 A-32305 A-32306
AD-1845 5 A-32317 A-32318
AD-1845 6 A-32329 A-32330
AD-1845 7 A-32361 A-32362
AD-1845 8 A-32365 A-32366
AD-18459 A-32377 A-32378
AD-18460 A-32389 A-32390
AD-18461 A-32401 A-32402
AD-18462 A-32413 A-32414
AD-18463 A-32425 A-32426
Таблица 3А.
Последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК TTR человека Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая;
Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM_ 000371.2, SEQ ID NO:1329)
Цепь Положение Последовательность (5’-3’) SEQ ID NO: Последовательность c З’-динуклеотидным выступом (5’-3’) SEQ ID NO:
s 100 CCGGUGAAUCCAAGUGUCC 1 CCGGUGAAUCCAAGUGUCCNN 281
as 118 GGACACUUGGAUUCACCGG 2 GGACACUUGGAUUCACCGGNN 282
s 11 ACUCAUUCUUGGCAGGAUG 3 ACUCAUUCUUGGCAGGAUGNN 283
as 29 CAUCCUGCCAAGAAUGAGU 4 CAUCCUGCCAAGAAUGAGUNN 284
s 111 AAGUGUCCUCUGAUGGUCA 5 AAGUGUCCUCUGAUGGUCANN 285
as 129 UGACCAUCAGAGGACACUU 6 UGACCAUCAGAGGACACUUNN 286
s 13 UCAUUCUUGGCAGGAUGGC 7 UCAUUCUUGGCAGGAUGGCNN 287
as 31 GCCAUCCUGCCAAGAAUGA 8 GCCAUCCUGCCAAGAAUGANN 288
s 130 AAGUUCUAGAUGCUGUCCG 9 AAGUUCUAGAUGCUGUCCGNN 289
as 148 CGGACAGCAUCUAGAACUU 10 CGGACAGCAUCUAGAACUUNN 290
s 132 GUUCUAGAUGCUGUCCGAG 11 GUUCUAGAUGCUGUCCGAGNN 291
as 150 CUCGGACAGCAUCUAGAAC 12 CUCGGACAGCAUCUAGAACNN 292
s 135 CUAGAUGCUGUCCGAGGCA 13 CUAGAUGCUGUCCGAGGCANN 293
as 153 UGCCUCGGACAGCAUCUAG 14 UGCCUCGGACAGCAUCUAGNN 294
s 138 GAUGCUGUCCGAGGCAGUC 15 GAUGCUGUCCGAGGCAGUCNN 295
as 156 GACUGCCUCGGACAGCAUC 16 GACUGCCUCGGACAGCAUCNN 296
s 14 CAUUCUUGGCAGGAUGGCU 17 CAUUCUUGGCAGGAUGGCUNN 297
as 32 AGCCAUCCUGCCAAGAAUG 18 AGCCAUCCUGCCAAGAAUGNN 298
s 140 UGCUGUCCGAGGCAGUCCU 19 UGCUGUCCGAGGCAGUCCUNN 299
as 158 AGGACUGCCUCGGACAGCA 20 AGGACUGCCUCGGACAGCANN 300
s 146 CCGAGGCAGUCCUGCCAUC 21 CCGAGGCAGUCCUGCCAUCNN 301
as 164 GAUGGCAGGACUGCCUCGG 22 GAUGGCAGGACUGCCUCGGNN 302
s 152 CAGUCCUGCCAUCAAUGUG 23 CAGUCCUGCCAUCAAUGUGNN 303
as 170 CACAUUGAUGGCAGGACUG 24 CACAUUGAUGGCAGGACUGNN 304
s 164 CAAUGUGGCCGUGCAUGUG 25 CAAUGUGGCCGUGCAUGUGNN 305
as 182 CACAUGCACGGCCACAUUG 26 CACAUGCACGGCCACAUUGNN 306
s 178 AUGUGUUCAGAAAGGCUGC 27 AUGUGUUCAGAAAGGCUGCNN 307
as 196 GCAGCCUUUCUGAACACAU 28 GCAGCCUUUCUGAACACAUNN 308
s 2 CAGAAGUCCACUCAUUCUU 29 CAGAAGUCCACUCAUUCUUNN 309
- 40 036772
as 20 AAGAAUGAGUGGACUUCUG 30 AAGAAUGAGUGGACUUCUGNN 310
s 21 GGCAGGAUGGCUUCUCAUC 31 GGCAGGAUGGCUUCUCAUCNN 311
as 39 GAUGAGAAGCCAUCCUGCC 32 GAUGAGAAGCCAUCCUGCCNN 312
s 210 GAGCCAUUUGCCUCUGGGA 33 GAGCCAUUUGCCUCUGGGANN 313
as 228 UCCCAGAGGCAAAUGGCUC 34 UCCCAGAGGCAAAUGGCUCNN 314
s 23 CAGGAUGGCUUCUCAUCGU 35 CAGGAUGGCUUCUCAUCGUNN 315
as 41 ACGAUGAGAAGCCAUCCUG 36 ACGAUGAGAAGCCAUCCUGNN 316
s 24 AGGAUGGCUUCUCAUCGUC 37 AGGAUGGCUUCUCAUCGUCNN 317
as 42 GACGAUGAGAAGCCAUCCU 38 GACGAUGAGAAGCCAUCCUNN 318
s 245 AGAGCUGCAUGGGCUCACA 39 AGAGCUGCAUGGGCUCACANN 319
as 263 UGUGAGCCCAUGCAGCUCU 40 UGUGAGCCCAUGCAGCUCUNN 320
s 248 GCUGCAUGGGCUCACAACU 41 GCUGCAUGGGCUCACAACUNN 321
as 266 AGUUGUGAGCCCAUGCAGC 42 AGUUGUGAGCCCAUGCAGCNN 322
s 25 GGAUGGCUUCUCAUCGUCU 43 GGAUGGCUUCUCAUCGUCUNN 323
as 43 AGAC GAUGAGAAGC CAUC C 44 AGAC GAUGAGAAGC CAUC CNN 324
s 251 GCAUGGGCUCACAACUGAG 45 GCAUGGGCUCACAACUGAGNN 325
as 269 CUCAGUUGUGAGCCCAUGC 4 6 CUCAGUUGUGAGCCCAUGCNN 326
s 253 AUGGGCUCACAACUGAGGA 47 AUGGGCUCACAACUGAGGANN 327
as 271 UCCUCAGUUGUGAGCCCAU 48 UCCUCAGUUGUGAGCCCAUNN 328
s 254 UGGGCUCACAACUGAGGAG 49 UGGGCUCACAACUGAGGAGNN 329
as 272 CUCCUCAGUUGUGAGCCCA 50 CUCCUCAGUUGUGAGCCCANN 330
s 270 GAGGAAUUUGUAGAAGGGA 51 GAGGAAUUUGUAGAAGGGANN 331
as 288 UCCCUUCUACAAAUUCCUC 52 UCCCUUCUACAAAUUCCUCNN 332
s 276 UUUGUAGAAGGGAUAUACA 53 UUUGUAGAAGGGAUAUACANN 333
as 294 UGUAUAUCCCUUCUACAAA 54 UGUAUAUCCCUUCUACAAANN 334
s 277 UUGUAGAAGGGAUAUACAA 55 UUGUAGAAGGGAUAUACAANN 335
as 295 UUGUAUAUCCCUUCUACAA 56 UUGUAUAUCCCUUCUACAANN 336
s 278 UGUAGAAGGGAUAUACAAA 57 UGUAGAAGGGAUAUACAAANN 337
as 296 UUUGUAUAUCCCUUCUACA 58 UUUGUAUAUCCCUUCUACANN 338
s 281 AGAAGGGAUAUACAAAGUG 59 AGAAGGGAUAUACAAAGUGNN 339
as 299 CACUUUGUAUAUCCCUUCU 60 CACUUUGUAUAUCCCUUCUNN 340
s 295 AAGUGGAAAUAGACACCAA 61 AAGUGGAAAUAGACACCAANN 341
as 313 UUGGUGUCUAUUUCCACUU 62 UUGGUGUCUAUUUCCACUUNN 342
s 299 GGAAAUAGACAC CAAAUC U 63 GGAAAUAGACAC CAAAUC UNN 343
as 317 AGAUUUGGUGUCUAUUUCC 64 AGAUUUGGUGUCUAUUUCCNN 344
s 300 GAAAUAGACACCAAAUCUU 65 GAAAUAGACACCAAAUCUUNN 345
as 318 AAGAUUUGGUGUCUAUUUC 66 AAGAUUUGGUGUCUAUUUCNN 346
s 303 AU AGAC AC CAAAUC UUAC U 67 AUAGACAC CAAAUC UUAC UNN 347
as 321 AGUAAGAUUUGGUGUCUAU 68 AGUAAGAUUUGGUGUCUAUNN 348
s 304 UAGACACCAAAUCUUACUG 69 UAGACACCAAAUCUUACUGNN 349
as 322 CAGUAAGAUUUGGUGUCUA 70 CAGUAAGAUUUGGUGUCUANN 350
s 305 AGACAC CAAAUC UUAC UGG 71 AGACAC CAAAUC UUAC UGGNN 351
as 323 CCAGUAAGAUUUGGUGUCU 72 CCAGUAAGAUUUGGUGUCUNN 352
s 317 UUACUGGAAGGCACUUGGC 73 UUACUGGAAGGCACUUGGCNN 353
as 335 GCCAAGUGCCUUCCAGUAA 74 GCCAAGUGCCUUCCAGUAANN 354
s 32 UUCUCAUCGUCUGCUCCUC 75 UUCUCAUCGUCUGCUCCUCNN 355
as 50 GAGGAGCAGACGAUGAGAA 76 GAGGAGCAGACGAUGAGAANN 356
s 322 GGAAGGCACUUGGCAUCUC 77 GGAAGGCACUUGGCAUCUCNN 357
as 340 GAGAUGCCAAGUGCCUUCC 78 GAGAUGCCAAGUGCCUUCCNN 358
- 41 036772
s 326 GGCACUUGGCAUCUCCCCA 79 GGCACUUGGCAUCUCCCCANN 359
as 344 UGGGGAGAUGCCAAGUGCC 80 UGGGGAGAUGCCAAGUGCCNN 360
s 333 GGCAUCUCCCCAUUCCAUG 81 GGCAUCUCCCCAUUCCAUGNN 361
as 351 AUGGAAUGGGGAGAUGCCTT 82 AUGGAAUGGGGAGAUGCCTTNN 362
s 334 GCAUCUCCCCAUUCCAUGA 83 GCAUCUCCCCAUUCCAUGANN 363
as 352 UCAUGGAAUGGGGAGAUGC 84 UCAUGGAAUGGGGAGAUGCNN 364
s 335 CAUCUCCCCAUUCCAUGAG 85 CAUCUCCCCAUUCCAUGAGNN 365
as 353 CUCAUGGAAUGGGGAGAUG 86 CUCAUGGAAUGGGGAGAUGNN 366
s 336 AUCUCCCCAUUCCAUGAGC 87 AUCUCCCCAUUCCAUGAGCNN 367
as 354 GCUCAUGGAAUGGGGAGAU 88 GCUCAUGGAAUGGGGAGAUNN 368
s 338 CUCCCCAUUCCAUGAGCAU 89 CUCCCCAUUCCAUGAGCAUNN 369
as 356 AUGCUCAUGGAAUGGGGAG 90 AUGC UCAUGGAAUGGGGAGNN 370
s 341 CCCAUUCCAUGAGCAUGCA 91 CCCAUUCCAUGAGCAUGCANN 371
as 359 UGCAUGCUCAUGGAAUGGG 92 UGCAUGCUCAUGGAAUGGGNN 372
s 347 CCAUGAGCAUGCAGAGGUG 93 CCAUGAGCAUGCAGAGGUGNN 373
as 365 CACCUCUGCAUGCUCAUGG 94 CACCUCUGCAUGCUCAUGGNN 374
s 352 AGCAUGCAGAGGUGGUAUU 95 AGCAUGCAGAGGUGGUAUUNN 375
as 370 AAUACCACCUCUGCAUGCU 96 AAUACCACCUCUGCAUGCUNN 376
s 354 CAUGCAGAGGUGGUAUUCA 97 CAUGCAGAGGUGGUAUUCANN 377
as 372 UGAAUACCACCUCUGCAUG 98 UGAAUACCACCUCUGCAUGNN 378
s 355 AUGCAGAGGUGGUAUUCAC 99 AUGCAGAGGUGGUAUUCACNN 379
as 373 GUGAAUACCACCUCUGCAU 100 GUGAAUACCACCUCUGCAUNN 380
s 362 GGUGGUAUUCACAGCCAAC 101 GGUGGUAUUCACAGCCAACNN 381
as 380 GUUGGCUGUGAAUACCACC 102 GUUGGCUGUGAAUACCACCNN 382
s 363 GUGGUAUUCACAGCCAACG 103 GUGGUAUUCACAGCCAACGNN 383
as 381 CGUUGGCUGUGAAUACCAC 104 CGUUGGCUGUGAAUACCACNN 384
s 364 UGGUAUUCACAGCCAACGA 105 UGGUAUUCACAGCCAACGANN 385
as 382 UCGUUGGCUGUGAAUACCA 106 UCGUUGGCUGUGAAUACCANN 386
s 365 GGUAUUCACAGCCAACGAC 107 GGUAUUCACAGCCAACGACNN 387
as 383 GUCGUUGGCUGUGAAUACC 108 GUCGUUGGCUGUGAAUACCNN 388
s 366 GUAUUCACAGCCAACGACU 109 GUAUUCACAGCCAACGACUNN 389
as 384 AGUCGUUGGCUGUGAAUAC 110 AGUCGUUGGCUGUGAAUACNN 390
s 367 UAUUCACAGCCAACGACUC 111 UAUUCACAGCCAACGACUCNN 391
as 385 GAGUCGUUGGCUGUGAAUA 112 GAGUCGUUGGCUGUGAAUANN 392
s 370 UCACAGCCAACGACUCCGG 113 UCACAGCCAACGACUCCGGNN 393
as 388 CCGGAGUCGUUGGCUGUGA 114 CCGGAGUCGUUGGCUGUGANN 394
s 390 CCCCGCCGCUACACCAUUG 115 CCCCGCCGCUACACCAUUGNN 395
as 408 CAAUGGUGUAGCGGCGGGG 116 CAAUGGUGUAGCGGCGGGGNN 396
s 4 GAAGUCCACUCAUUCUUGG 117 GAAGUCCACUCAUUCUUGGNN 397
as 22 CCAAGAAUGAGUGGACUUC 118 CCAAGAAUGAGUGGACUUCNN 398
s 412 CCCUGCUGAGCCCCUACUC 119 CCCUGCUGAGCCCCUACUCNN 399
as 430 GAGUAGGGGCUCAGCAGGG 120 GAGUAGGGGCUCAGCAGGGNN 400
s 417 CUGAGCCCCUACUCCUAUU 121 CUGAGCCCCUACUCCUAUUNN 401
as 435 AAUAGGAGUAGGGGCUCAG 122 AAUAGGAGUAGGGGCUCAGNN 402
s 418 UGAGCCCCUACUCCUAUUC 123 UGAGCCCCUACUCCUAUUCNN 403
as 436 GAAUAGGAGUAGGGGCUCA 124 GAAUAGGAGUAGGGGCUCANN 404
s 422 CCCCUACUCCUAUUCCACC 125 CCCCUACUCCUAUUCCACCNN 405
as 440 GGUGGAAUAGGAGUAGGGG 126 GGUGGAAUAGGAGUAGGGGNN 406
s 425 CUACUCCUAUUCCACCACG 127 CUACUCCUAUUCCACCACGNN 407
- 42 036772
as 443 CGUGGUGGAAUAGGAGUAG 128 CGUGGUGGAAUAGGAGUAGNN 408
s 426 UACUCCUAUUCCACCACGG 129 UACUCCUAUUCCACCACGGNN 409
as 444 CCGUGGUGGAAUAGGAGUA 130 CCGUGGUGGAAUAGGAGUANN 410
s 427 ACUCCUAUUCCACCACGGC 131 ACUCCUAUUCCACCACGGCNN 411
as 445 GCCGUGGUGGAAUAGGAGU 132 GCCGUGGUGGAAUAGGAGUNN 412
s 429 UCCUAUUCCACCACGGCUG 133 UCCUAUUCCACCACGGCUGNN 413
as 447 CAGCCGUGGUGGAAUAGGA 134 CAGCCGUGGUGGAAUAGGANN 414
s 432 UAUUCCACCACGGCUGUCG 135 UAUUCCACCACGGCUGUCGNN 415
as 450 CGACAGCCGUGGUGGAAUA 136 CGACAGCCGUGGUGGAAUANN 416
s 433 AUUCCACCACGGCUGUCGU 137 AUUCCACCACGGCUGUCGUNN 417
as 451 ACGACAGCCGUGGUGGAAU 138 ACGACAGCCGUGGUGGAAUNN 418
s 437 CACCACGGCUGUCGUCACC 139 CACCACGGCUGUCGUCACCNN 419
as 455 GGUGACGACAGCCGUGGUG 140 GGUGACGACAGCCGUGGUGNN 420
s 438 ACCACGGCUGUCGUCACCA 141 ACCACGGCUGUCGUCACCANN 421
as 456 UGGUGACGACAGCCGUGGU 142 UGGUGACGACAGCCGUGGUNN 422
s 439 CCACGGCUGUCGUCACCAA 143 CCACGGCUGUCGUCACCAANN 423
as 457 UUGGUGACGACAGCCGUGG 144 UUGGUGACGACAGCCGUGGNN 424
s 441 ACGGCUGUCGUCACCAAUC 145 ACGGCUGUCGUCACCAAUCNN 425
as 459 GAUUGGUGACGACAGCCGU 146 GAUUGGUGACGACAGCCGUNN 426
s 442 CGGCUGUCGUCACCAAUCC 147 CGGCUGUCGUCACCAAUCCNN 427
as 460 GGAUUGGUGACGACAGCCG 148 GGAUUGGUGACGACAGCCGNN 428
s 449 CGUCACCAAUCCCAAGGAA 149 CGUCACCAAUCCCAAGGAANN 429
as 467 UUCCUUGGGAUUGGUGACG 150 UUCCUUGGGAUUGGUGACGNN 430
s 455 CAAUCCCAAGGAAUGAGGG 151 CAAUCCCAAGGAAUGAGGGNN 431
as 473 CCCUCAUUCCUUGGGAUUG 152 CCCUCAUUCCUUGGGAUUGNN 432
s 491 CCUGAAGGACGAGGGAUGG 153 CCUGAAGGACGAGGGAUGGNN 433
as 509 CCAUCCCUCGUCCUUCAGG 154 CCAUCCCUCGUCCUUCAGGNN 434
s 497 GGACGAGGGAUGGGAUUUC 155 GGACGAGGGAUGGGAUUUCNN 435
as 515 GAAAUCCCAUCCCUCGUCC 156 GAAAUCCCAUCCCUCGUCCNN 436
s 5 AAGUCCACUCAUUCUUGGC 157 AAGUCCACUCAUUCUUGGCNN 437
as 23 GCCAAGAAUGAGUGGACUU 158 GCCAAGAAUGAGUGGACUUNN 438
s 508 GGGAUUUCAUGUAACCAAG 159 GGGAUUUCAUGUAACCAAGNN 439
as 526 CUUGGUUACAUGAAAUCCC 160 CUUGGUUACAUGAAAUCCCNN 440
s 509 GGAUUUCAUGUAACCAAGA 161 GGAUUUCAUGUAACCAAGANN 441
as 527 UCUUGGUUACAUGAAAUCC 162 UCUUGGUUACAUGAAAUCCNN 442
s 514 UCAUGUAACCAAGAGUAUU 163 UCAUGUAACCAAGAGUAUUNN 443
as 532 AAUACUCUUGGUUACAUGA 164 AAUACUCUUGGUUACAUGANN 444
s 516 AUGUAACCAAGAGUAUUCC 165 AUGUAACCAAGAGUAUUCCNN 445
as 534 GGAAUACUCUUGGUUACAU 16 6 GGAAUACUCUUGGUUACAUNN 446
s 517 UGUAACCAAGAGUAUUCCA 167 UGUAACCAAGAGUAUUCCANN 447
as 535 UGGAAUACUCUUGGUUACA 168 UGGAAUACUCUUGGUUACANN 448
s 518 GUAACCAAGAGUAUUCCAU 169 GUAACCAAGAGUAUUCCAUNN 449
as 536 AUGGAAUACUCUUGGUUAC 170 AUGGAAUACUCUUGGUUACNN 450
s 54 UGCCUUGCUGGACUGGUAU 171 UGCCUUGCUGGACUGGUAUNN 451
as 72 AUACCAGUCCAGCAAGGCA 172 AUACCAGUCCAGCAAGGCANN 452
s 543 UAAAGCAGUGUUUUCACCU 173 UAAAGCAGUGUUUUCACCUNN 453
as 561 AGGUGAAAACACUGCUUUA 174 AGGUGAAAACACUGCUUUANN 454
s 55 GCCUUGCUGGACUGGUAUU 175 GCCUUGCUGGACUGGUAUUNN 455
as 73 AAUACCAGUCCAGCAAGGC 176 AAUACCAGUCCAGCAAGGCNN 456
- 43 036772
s 551 UGUUUUCACCUCAUAUGCU 177 UGUUUUCACCUCAUAUGCUNN 457
as 569 AGCAUAUGAGGUGAAAACA 178 AGCAUAUGAGGUGAAAACANN 458
s 552 GUUUUCACCUCAUAUGCUA 179 GUUUUCACCUCAUAUGCUANN 459
as 570 UAGCAUAUGAGGUGAAAAC 180 UAGCAUAUGAGGUGAAAACNN 460
s 553 UUUUCACCUCAUAUGCUAU 181 UUUUCACCUCAUAUGCUAUNN 461
as 571 AUAGCAUAUGAGGUGAAAA 182 AUAGCAUAUGAGGUGAAAANN 462
s 555 UUCACCUCAUAUGCUAUGU 183 UUCACCUCAUAUGCUAUGUNN 463
as 573 ACAUAGCAUAUGAGGUGAA 184 ACAUAGCAUAUGAGGUGAANN 464
s 557 CACCUCAUAUGCUAUGUUA 185 CACCUCAUAUGCUAUGUUANN 465
as 575 UAACAUAGCAUAUGAGGUG 186 UAACAUAGCAUAUGAGGUGNN 4 6 6
s 56 CCUUGCUGGACUGGUAUUU 187 CCUUGCUGGACUGGUAUUUNN 467
as 74 AAAUACCAGUCCAGCAAGG 188 AAAUACCAGUCCAGCAAGGNN 468
s 563 AUAUGCUAUGUUAGAAGUC 189 AUAUGCUAUGUUAGAAGUCNN 469
as 581 GACUUCUAACAUAGCAUAU 190 GACUUCUAACAUAGCAUAUNN 470
s 564 UAUGCUAUGUUAGAAGUCC 191 UAUGCUAUGUUAGAAGUCCNN 471
as 582 GGACUUCUAACAUAGCAUA 192 GGACUUCUAACAUAGCAUANN 472
s 566 UGCUAUGUUAGAAGUCCAG 193 UGCUAUGUUAGAAGUCCAGNN 473
as 584 CUGGACUUCUAACAUAGCA 194 CUGGACUUCUAACAUAGCANN 474
s 57 CUUGCUGGACUGGUAUUUG 195 CUUGCUGGACUGGUAUUUGNN 475
as 75 CAAAUACCAGUCCAGCAAG 196 CAAAUACCAGUCCAGCAAGNN 476
s 578 AGUCCAGGCAGAGACAAUA 197 AGUCCAGGCAGAGACAAUANN 477
as 596 AUUGUCUCUGCCUGGACUTT 198 AUUGUCUCUGCCUGGACUTTNN 478
s 580 UCCAGGCAGAGACAAUAAA 199 UCCAGGCAGAGACAAUAAANN 479
as 598 UUUAUUGUCUCUGCCUGGA 200 UUUAUUGUCUCUGCCUGGANN 480
s 607 GUGAAAGGCACUUUUCAUU 201 GUGAAAGGCACUUUUCAUUNN 481
as 625 AAUGAAAAGUGCCUUUCAC 202 AAUGAAAAGUGCCUUUCACNN 482
s 62 UGGACUGGUAUUUGUGUCU 203 UGGACUGGUAUUUGUGUCUNN 483
as 80 AGACACAAAUACCAGUCCA 204 AGACACAAAUACCAGUCCANN 484
s 77 GUCUGAGGCUGGCCCUACG 205 GUCUGAGGCUGGCCCUACGNN 485
as 95 CGUAGGGCCAGCCUCAGAC 206 CGUAGGGCCAGCCUCAGACNN 486
s 79 CUGAGGCUGGCCCUACGGG 207 CUGAGGCUGGCCCUACGGGNN 487
as 97 CCCGUAGGGCCAGCCUCAG 208 CCCGUAGGGCCAGCCUCAGNN 488
s 81 GAGGCUGGCCCUACGGGCA 209 GAGGCUGGCCCUACGGGCANN 489
as 99 UGCCCGUAGGGCCAGCCUC 210 UGCCCGUAGGGCCAGCCUCNN 490
s 82 AGGCUGGCCCUACGGGCAC 211 AGGCUGGCCCUACGGGCACNN 491
as 100 GUGCCCGUAGGGCCAGCCU 212 GUGCCCGUAGGGCCAGCCUNN 492
s 84 GCUGGCCCUACGGGCACCG 213 GCUGGCCCUACGGGCACCGNN 493
as 102 CGGUGCCCGUAGGGCCAGC 214 CGGUGCCCGUAGGGCCAGCNN 494
s 85 CUGGCCCUACGGGCACCGG 215 CUGGCCCUACGGGCACCGGNN 495
as 103 CCGGUGCCCGUAGGGCCAG 216 CCGGUGCCCGUAGGGCCAGNN 4 9 6
s 87 GGCCCUACGGGCACCGGUG 217 GGCCCUACGGGCACCGGUGNN 497
as 105 CACCGGUGCCCGUAGGGCC 218 CACCGGUGCCCGUAGGGCCNN 498
s 9 CCACUCAUUCUUGGCAGGA 219 CCACUCAUUCUUGGCAGGANN 499
as 27 UCCUGCCAAGAAUGAGUGG 220 UCCUGCCAAGAAUGAGUGGNN 500
s 90 CCUACGGGCACCGGUGAAU 221 CCUACGGGCACCGGUGAAUNN 501
as 108 AUUCACCGGUGCCCGUAGG 222 AUUCACCGGUGCCCGUAGGNN 502
s 91 CUACGGGCACCGGUGAAUC 223 CUACGGGCACCGGUGAAUCNN 503
as 109 GAUUCACCGGUGCCCGUAG 224 GAUUCACCGGUGCCCGUAGNN 504
s 92 UACGGGCACCGGUGAAUCC 225 UACGGGCACCGGUGAAUCCNN 505
- 44 036772
as 110 GGAUUCACCGGUGCCCGUA 226 GGAUUCACCGGUGCCCGUANN 506
s 93 ACGGGCACCGGUGAAUCCA 227 ACGGGCACCGGUGAAUCCANN 507
as 111 UGGAUUCACCGGUGCCCGU 228 UGGAUUCACCGGUGCCCGUNN 508
s 97 GCACCGGUGAAUCCAAGUG 229 GCACCGGUGAAUCCAAGUGNN 509
as 115 CACUUGGAUUCACCGGUGC 230 CACUUGGAUUCACCGGUGCNN 510
s 98 CACCGGUGAAUCCAAGUGU 231 CACCGGUGAAUCCAAGUGUNN 511
as 116 ACACUUGGAUUCACCGGUG 232 ACACUUGGAUUCACCGGUGNN 512
s 167 UGUGGCCAUGCAUGUGUUC 233 UGUGGCCAUGCAUGUGUUCNN 513
as 185 GAACACAUGCAUGGCCACA 234 GAACACAUGCAUGGCCACANN 514
s 168 GUGGCCAUGCAUGUGUUCA 235 GUGGCCAUGCAUGUGUUCANN 515
as 186 UGAACACAUGCAUGGC CAC 236 UGAACACAUGCAUGGCCACNN 516
s 171 GC CAUGCAUGUGUUCAGAA 237 GCCAUGCAUGUGUUCAGAANN 517
as 189 UUCUGAACACAUGCAUGGC 238 UUCUGAACACAUGCAUGGCNN 518
s 432 UAUUCCACCACGGCUGUCA 239 UAUUCCACCACGGCUGUCANN 519
as 449 UGACAGCCGUGGUGGAAUA 240 UGACAGCCGUGGUGGAAUANN 520
s 447 GUCAUCACCAAUCCCAAGG 241 GUCAUCACCAAUCCCAAGGNN 521
as 465 CCUUGGGAUUGGUGAUGAC 242 CCUUGGGAUUGGUGAUGACNN 522
s 115 GUCCUCUGAUGGUCAAAGU 243 GUCCUCUGAUGGUCAAAGUNN 523
as 133 AC UUUGAC CAUCAGAG GAC 244 ACUUUGACCAUCAGAGGACNN 524
s 122 GAUGGUCAAAGUUCUAGAU 245 GAUGGUCAAAGUUCUAGAUNN 525
as 140 AUCUAGAACUUUGACCAUC 246 AUCUAGAACUUUGACCAUCNN 526
s 139 AUGCUGUCCGAGGCAGUCC 247 AUGCUGUCCGAGGCAGUCCNN 527
as 157 GGACUGCCUCGGACAGCAU 248 GGACUGCCUCGGACAGCAUNN 528
s 172 CCGUGCAUGUGUUCAGAAA 249 CCGUGCAUGUGUUCAGAAANN 529
as 190 UUUCUGAACACAUGCACGG 250 UUUCUGAACACAUGCACGGNN 530
s 238 AGUCUGGAGAGCUGCAUGG 251 AGUCUGGAGAGCUGCAUGGNN 531
as 256 CCAUGCAGCUCUCCAGACU 252 CCAUGCAGCUCUCCAGACUNN 532
s 252 CAUGGGCUCACAACUGAGG 253 CAUGGGCUCACAACUGAGGNN 533
as 270 CCUCAGUUGUGAGCCCAUG 254 CCUCAGUUGUGAGCCCAUGNN 534
s 33 UCUCAUCGUCUGCUCCUCC 255 UCUCAUCGUCUGCUCCUCCNN 535
as 51 GGAGGAGCAGACGAUGAGA 256 GGAGGAGCAGACGAUGAGANN 536
s 340 CCCCAUUCCAUGAGCAUGC 257 CCCCAUUCCAUGAGCAUGCNN 537
as 358 GCAUGCUCAUGGAAUGGGG 258 GCAUGCUCAUGGAAUGGGGNN 538
s 421 GCCCCUACUCCUAUUCCAC 259 GCCCCUACUCCUAUUCCACNN 539
as 439 GUGGAAUAGGAGUAGGGGC 260 GUGGAAUAGGAGUAGGGGCNN 540
s 431 CUAUUCCACCACGGCUGUC 261 CUAUUCCACCACGGCUGUCNN 541
as 449 GACAGCCGUGGUGGAAUAG 262 GACAGCCGUGGUGGAAUAGNN 542
s 440 CACGGCUGUCGUCACCAAU 263 CACGGCUGUCGUCACCAAUNN 543
as 458 AUUGGUGACGACAGCCGUG 264 AUUGGUGACGACAGCCGUGNN 544
s 496 AGGACGAGGGAUGGGAUUU 265 AGGACGAGGGAUGGGAUUUNN 545
as 514 AAAUCCCAUCCCUCGUCCU 266 AAAUCCCAUCCCUCGUCCUNN 546
s 556 UCACCUCAUAUGCUAUGUU 267 UCACCUCAUAUGCUAUGUUNN 547
as 574 AACAUAGCAUAUGAGGUGA 268 AACAUAGCAUAUGAGGUGANN 548
s 559 CCUCAUAUGCUAUGUUAGA 269 CCUCAUAUGCUAUGUUAGANN 549
as 577 UC UAACAUAGCAUAUGAGG 270 UCUAACAUAGCAUAUGAGGNN 550
s 570 AUGUUAGAAGUCCAGGCAG 271 AUGUUAGAAGUCCAGGCAGNN 551
as 588 CUGCCUGGACUUCUAACAU 272 CUGCCUGGACUUCUAACAUNN 552
s 78 UCUGAGGCUGGCCCUACGG 273 UCUGAGGCUGGCCCUACGGNN 553
as 96 CCGUAGGGCCAGCCUCAGA 274 CCGUAGGGCCAGCCUCAGANN 554
s 87 GGCCCUACGGGCACCGGUG 275 GGCCCUACGGGCACCGGUGNN 555
as 105 CACCGGUGCCCGUAGGGCC 276 CACCGGUGCCCGUAGGGCCNN 556
s 95 GGGCACCGGUGAAUCCAAG 277 GGGCACCGGUGAAUCCAAGNN 557
as 113 CUUGGAUUCACCGGUGCCC 278 CUUGGAUUCACCGGUGCCCNN 558
s 167 CCAUGCAUGUGUUCAGAAA 279 CCAUGCAUGUGUUCAGAAANN 559
as 185 UUUCUGAACACAUGCAUGG 280 UUUCUGAACACAUGCAUGGNN 560
- 45 036772
Таблица 3В.
Последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК TTR человека Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая;
Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM_000371.2, SEQ ID NO:1329)
Цепь Положение Последовательность с З’-дезокситимидиновым выступом (5’-3’) SEQ ID NO:
s 100 CCGGUGAAUCCAAGUGUCCdTdT 561
as 118 GGACACUUGGAUUCACCGGdTdT 562
s 11 ACUCAUUCUUGGCAGGAUGdTdT 563
as 29 CAUCCUGCCAAGAAUGAGUdTdT 564
s 111 AAGUGUCCUCUGAUGGUCAdTdT 565
as 129 UGACCAUCAGAGGACACUUdTdT 566
s 13 UCAUUCUUGGCAGGAUGGCdTdT 567
as 31 GCCAUCCUGCCAAGAAUGAdTdT 568
s 130 AAGUUCUAGAUGCUGUCCGdTdT 569
as 148 C GGACAGCAUC UAGAAC UUdT dT 570
s 132 GUUCUAGAUGCUGUCCGAGdTdT 571
as 150 CUC GGACAGCAUC UAGAAC dT dT 572
s 135 CUAGAUGCUGUCCGAGGCAdTdT 573
as 153 UGCCUCGGACAGCAUCUAGdTdT 574
s 138 GAUGCUGUCCGAGGCAGUCdTdT 575
as 156 GACUGCCUCGGACAGCAUCdTdT 576
s 14 CAUUCUUGGCAGGAUGGCUdTdT 577
as 32 AGCCAUCCUGCCAAGAAUGdTdT 578
s 140 UGCUGUCCGAGGCAGUCCUdTdT 579
as 158 AGGACUGCCUCGGACAGCAdTdT 580
s 146 CCGAGGCAGUCCUGCCAUCdTdT 581
as 164 GAUGGCAGGACUGCCUCGGdTdT 582
s 152 CAGUCCUGCCAUCAAUGUGdTdT 583
as 170 CACAUUGAUGGCAGGACUGdTdT 584
s 164 CAAUGUGGCCGUGCAUGUGdTdT 585
as 182 CACAUGCACGGCCACAUUGdTdT 586
s 178 AUGUGUUCAGAAAGGCUGCdTdT 587
as 196 GCAGCCUUUCUGAACACAUdTdT 588
s 2 CAGAAGUCCACUCAUUCUUdTdT 589
as 20 AAGAAUGAGUGGACUUCUGdTdT 590
s 21 GGCAGGAUGGCUUCUCAUCdTdT 591
as 39 GAUGAGAAGCCAUCCUGCCdTdT 592
s 210 GAGCCAUUUGCCUCUGGGAdTdT 593
as 228 UCCCAGAGGCAAAUGGCUCdTdT 594
s 23 CAGGAUGGCUUCUCAUCGUdTdT 595
as 41 ACGAUGAGAAGCCAUCCUGdTdT 596
s 24 AGGAUGGCUUCUCAUCGUCdTdT 597
as 42 GAC GAUGAGAAGC CAUC CUdT dT 598
s 245 AGAGCUGCAUGGGCUCACAdTdT 599
as 263 UGUGAGCCCAUGCAGCUCUdTdT 600
s 248 GCUGCAUGGGCUCACAACUdTdT 601
- 46 036772
as 266 AGUUGUGAGCCCAUGCAGCdTdT 602
s 25 GGAUGGCUUCUCAUCGUCUdTdT 603
as 43 AGACGAUGAGAAGCCAUCCdTdT 604
s 251 GCAUGGGCUCACAACUGAGdTdT 605
as 269 CUCAGUUGUGAGCCCAUGCdTdT 606
s 253 AUGGGCUCACAACUGAGGAdTdT 607
as 271 UCCUCAGUUGUGAGCCCAUdTdT 608
s 254 UGGGCUCACAACUGAGGAGdTdT 609
as 272 CUCCUCAGUUGUGAGCCCAdTdT 610
s 270 GAGGAAUUUGUAGAAGGGAdTdT 611
as 288 UCCCUUCUACAAAUUCCUCdTdT 612
s 276 UUUGUAGAAGGGAUAUACAdTdT 613
as 294 UGUAUAUCCCUUCUACAAAdTdT 614
s 277 UUGUAGAAGGGAUAUACAAdTdT 615
as 295 UUGUAUAUCCCUUCUACAAdTdT 616
s 278 UGUAGAAGGGAUAUACAAAdTdT 617
as 296 UUUGUAUAUCCCUUCUACAdTdT 618
s 281 AGAAGGGAUAUACAAAGUGdTdT 619
as 299 CACUUUGUAUAUCCCUUCUdTdT 620
s 295 AAGUGGAAAUAGACACCAAdTdT 621
as 313 UUGGUGUCUAUUUCCACUUdTdT 622
s 299 GGAAAUAGACACCAAAUCUdTdT 623
as 317 AGAUUUGGUGUCUAUUUCCdTdT 624
s 300 GAAAUAGACACCAAAUC UUdT dT 625
as 318 AAGAUUUGGUGUCUAUUUCdTdT 626
s 303 AUAGACACCAAAUCUUACUdTdT 627
as 321 AGUAAGAUUUGGUGUCUAUdTdT 628
s 304 UAGACAC CAAAUC UUAC UGdT dT 629
as 322 CAGUAAGAUUUGGUGUCUAdTdT 630
s 305 AGACACCAAAUCUUACUGGdTdT 631
as 323 CCAGUAAGAUUUGGUGUCUdTdT 632
s 317 UUACUGGAAGGCACUUGGCdTdT 633
as 335 GCCAAGUGCCUUCCAGUAAdTdT 634
s 32 UUCUCAUCGUCUGCUCCUCdTdT 635
as 50 GAGGAGCAGAC GAUGAGAAdT dT 636
s 322 GGAAGGCACUUGGCAUCUCdTdT 637
as 340 GAGAUGCCAAGUGCCUUCCdTdT 638
s 326 GGCACUUGGCAUCUCCCCAdTdT 639
as 344 UGGGGAGAUGCCAAGUGCCdTdT 640
s 333 GGCAUCUCCCCAUUCCAUGdTdT 641
as 351 AUGGAAUGGGGAGAUGCCTTdTdT 642
s 334 GCAUCUCCCCAUUCCAUGAdTdT 643
as 352 UCAUGGAAUGGGGAGAUGCdTdT 644
s 335 CAUCUCCCCAUUCCAUGAGdTdT 645
as 353 CUCAUGGAAUGGGGAGAUGdTdT 64 6
s 336 AUCUCCCCAUUCCAUGAGCdTdT 647
as 354 GCUCAUGGAAUGGGGAGAUdTdT 648
s 338 CUCCCCAUUCCAUGAGCAUdTdT 649
as 356 AUGCUCAUGGAAUGGGGAGdTdT 650
s 341 CCCAUUCCAUGAGCAUGCAdTdT 651
as 359 UGCAUGCUCAUGGAAUGGGdTdT 652
s 347 CCAUGAGCAUGCAGAGGUGdTdT 653
as 365 CACCUCUGCAUGCUCAUGGdTdT 654
s 352 AGCAUGCAGAGGUGGUAUUdTdT 655
as 370 AAUACCACCUCUGCAUGCUdTdT 65 6
s 354 CAUGCAGAGGUGGUAUUCAdTdT 657
as 372 UGAAUACCACCUCUGCAUGdTdT 658
- 47 036772
s 355 AUGCAGAGGUGGUAUUCACdTdT 659
as 373 GUGAAUACCACCUCUGCAUdTdT 660
s 362 GGUGGUAUUCACAGCCAACdTdT 661
as 380 GUUGGCUGUGAAUACCACCdTdT 662
s 363 GUGGUAUUCACAGCCAACGdTdT 663
as 381 CGUUGGCUGUGAAUACCACdTdT 664
s 364 UGGUAUUCACAGCCAACGAdTdT 665
as 382 UCGUUGGCUGUGAAUACCAdTdT 66 6
s 365 GGUAUUCACAGCCAACGACdTdT 667
as 383 GUCGUUGGCUGUGAAUACCdTdT 668
s 366 GUAUUCACAGCCAACGACUdTdT 669
as 384 AGUCGUUGGCUGUGAAUACdTdT 670
s 367 UAUUCACAGCCAACGACUCdTdT 671
as 385 GAGUCGUUGGCUGUGAAUAdTdT 672
s 370 UCACAGCCAACGACUCCGGdTdT 673
as 388 CCGGAGUCGUUGGCUGUGAdTdT 674
s 390 CCCCGCCGCUACACCAUUGdTdT 675
as 408 CAAUGGUGUAGCGGCGGGGdTdT 67 6
s 4 GAAGUCCACUCAUUCUUGGdTdT 677
as 22 CCAAGAAUGAGUGGACUUCdTdT 678
s 412 CCCUGCUGAGCCCCUACUCdTdT 679
as 430 GAGUAGGGGCUCAGCAGGGdTdT 680
s 417 CUGAGCCCCUACUCCUAUUdTdT 681
as 435 AAUAGGAGUAGGGGCUCAGdTdT 682
s 418 UGAGCCCCUACUCCUAUUCdTdT 683
as 436 GAAUAGGAGUAGGGGCUCAdTdT 684
s 422 CCCCUACUCCUAUUCCACCdTdT 685
as 440 GGUGGAAUAGGAGUAGGGGdTdT 686
s 425 CUACUCCUAUUCCACCACGdTdT 687
as 443 CGUGGUGGAAUAGGAGUAGdTdT 688
s 426 UACUCCUAUUCCACCACGGdTdT 689
as 444 CCGUGGUGGAAUAGGAGUAdTdT 690
s 427 ACUCCUAUUCCACCACGGCdTdT 691
as 445 GCCGUGGUGGAAUAGGAGUdTdT 692
s 429 UCCUAUUCCACCACGGCUGdTdT 693
as 447 CAGCCGUGGUGGAAUAGGAdTdT 694
s 432 UAUUCCACCACGGCUGUCGdTdT 695
as 450 CGACAGCCGUGGUGGAAUAdTdT 696
s 433 AUUCCACCACGGCUGUCGUdTdT 697
as 451 ACGACAGCCGUGGUGGAAUdTdT 698
s 437 CACCACGGCUGUCGUCACCdTdT 699
as 455 GGUGACGACAGCCGUGGUGdTdT 700
s 438 ACCACGGCUGUCGUCACCAdTdT 701
as 456 UGGUGACGACAGCCGUGGUdTdT 702
s 439 CCACGGCUGUCGUCACCAAdTdT 703
as 457 UUGGUGACGACAGCCGUGGdTdT 704
s 441 ACGGCUGUCGUCACCAAUCdTdT 705
as 459 GAUUGGUGACGACAGCCGUdTdT 706
s 442 CGGCUGUCGUCACCAAUCCdTdT 707
as 460 GGAUUGGUGACGACAGCCGdTdT 708
s 449 CGUCACCAAUCCCAAGGAAdTdT 709
as 467 UUCCUUGGGAUUGGUGACGdTdT 710
s 455 CAAUCCCAAGGAAUGAGGGdTdT 711
as 473 CCCUCAUUCCUUGGGAUUGdTdT 712
s 491 CCUGAAGGACGAGGGAUGGdTdT 713
as 509 CCAUCCCUCGUCCUUCAGGdTdT 714
s 497 GGACGAGGGAUGGGAUUUCdTdT 715
- 48 036772
as 515 GAAAUCCCAUCCCUCGUCCdTdT 716
s 5 AAGUCCACUCAUUCUUGGCdTdT 717
as 23 GCCAAGAAUGAGUGGACUUdTdT 718
s 508 GGGAUUUCAUGUAACCAAGdTdT 719
as 526 CUUGGUUACAUGAAAUCCCdTdT 720
s 509 GGAUUUCAUGUAACCAAGAdTdT 721
as 527 UCUUGGUUACAUGAAAUCCdTdT 722
s 514 UCAUGUAACCAAGAGUAUUdTdT 723
as 532 AAUACUCUUGGUUACAUGAdTdT 724
s 516 AUGUAACCAAGAGUAUUCCdTdT 725
as 534 GGAAUACUCUUGGUUACAUdTdT 726
s 517 UGUAACCAAGAGUAUUCCAdTdT 727
as 535 UGGAAUACUCUUGGUUACAdTdT 728
s 518 GUAACCAAGAGUAUUCCAUdTdT 729
as 536 AUGGAAUACUCUUGGUUACdTdT 730
s 54 UGCCUUGCUGGACUGGUAUdTdT 731
as 72 AUACCAGUCCAGCAAGGCAdTdT 732
s 543 UAAAGCAGUGUUUUCACCUdTdT 733
as 561 AGGUGAAAACACUGCUUUAdTdT 734
s 55 GCCUUGCUGGACUGGUAUUdTdT 735
as 73 AAUACCAGUCCAGCAAGGCdTdT 736
s 551 UGUUUUCACCUCAUAUGCUdTdT 737
as 569 AGCAUAUGAGGUGAAAACAdTdT 738
s 552 GUUUUCACCUCAUAUGCUAdTdT 739
as 570 UAGCAUAUGAGGUGAAAACdTdT 740
s 553 UUUUCACCUCAUAUGCUAUdTdT 741
as 571 AUAGCAUAUGAGGUGAAAAdTdT 742
s 555 UUCACCUCAUAUGCUAUGUdTdT 743
as 573 ACAUAGCAUAUGAGGUGAAdTdT 744
s 557 CACCUCAUAUGCUAUGUUAdTdT 745
as 575 UAACAUAGCAUAUGAGGUGdTdT 746
s 56 CCUUGCUGGACUGGUAUUUdTdT 747
as 74 AAAUACCAGUCCAGCAAGGdTdT 748
s 563 AUAUGCUAUGUUAGAAGUCdTdT 749
as 581 GACUUCUAACAUAGCAUAUdTdT 750
s 564 UAUGCUAUGUUAGAAGUCCdTdT 751
as 582 GGACUUCUAACAUAGCAUAdTdT 752
s 5 6 6 UGCUAUGUUAGAAGUCCAGdTdT 753
as 584 CUGGACUUCUAACAUAGCAdTdT 754
s 57 CUUGCUGGACUGGUAUUUGdTdT 755
as 75 CAAAUACCAGUCCAGCAAGdTdT 756
s 578 AGUCCAGGCAGAGACAAUAdTdT 757
as 596 AUUGUCUCUGCCUGGACUTTdTdT 758
s 580 UCCAGGCAGAGACAAUAAAdTdT 759
as 598 UUUAUUGUCUCUGCCUGGAdTdT 760
s 607 GUGAAAGGCACUUUUCAUUdTdT 761
as 625 AAUGAAAAGUGCCUUUCACdTdT 762
s 62 UGGACUGGUAUUUGUGUCUdTdT 763
as 80 AGACACAAAUACCAGUCCAdTdT 764
s 77 GUCUGAGGCUGGCCCUACGdTdT 765
as 95 CGUAGGGCCAGCCUCAGACdTdT 7 6 6
s 79 CUGAGGCUGGCCCUACGGGdTdT 767
as 97 CCCGUAGGGCCAGCCUCAGdTdT 768
s 81 GAGGCUGGCCCUACGGGCAdTdT 769
as 99 UGCCCGUAGGGCCAGCCUCdTdT 770
s 82 AGGCUGGCCCUACGGGCACdTdT 771
as 100 GUGCCCGUAGGGCCAGCCUdTdT 772
- 49 036772
s 84 GCUGGCCCUACGGGCACCGdTdT 773
as 102 CGGUGCCCGUAGGGCCAGCdTdT 774
s 85 CUGGCCCUACGGGCACCGGdTdT 775
as 103 CCGGUGCCCGUAGGGCCAGdTdT 776
s 87 GGCCCUACGGGCACCGGUGdTdT 777
as 105 CACCGGUGCCCGUAGGGCCdTdT 778
s 9 CCACUCAUUCUUGGCAGGAdTdT 779
as 27 UCCUGCCAAGAAUGAGUGGdTdT 780
s 90 CCUACGGGCACCGGUGAAUdTdT 781
as 108 AUUCACCGGUGCCCGUAGGdTdT 782
s 91 CUACGGGCACCGGUGAAUCdTdT 783
as 109 GAUUCACCGGUGCCCGUAGdTdT 784
s 92 UACGGGCACCGGUGAAUCCdTdT 785
as 110 GGAUUCACCGGUGCCCGUAdTdT 786
s 93 ACGGGCACCGGUGAAUCCAdTdT 787
as 111 UGGAUUCACCGGUGCCCGUdTdT 788
s 97 GCACCGGUGAAUCCAAGUGdTdT 789
as 115 CACUUGGAUUCACCGGUGCdTdT 790
s 98 CACCGGUGAAUCCAAGUGUdTdT 791
as 116 ACACUUGGAUUCACCGGUGdTdT 792
s 167 UGUGGCCAUGCAUGUGUUCdTdT 793
as 185 GAACACAUGCAUGGCCACAdTdT 794
s 168 GUGGCCAUGCAUGUGUUCAdTdT 795
as 186 UGAACACAUGCAUGGCCACdTdT 796
s 171 GCCAUGCAUGUGUUCAGAAdTdT 797
as 189 UUCUGAACACAUGCAUGGCdTdT 798
s 432 UAUUCCACCACGGCUGUCAdTdT 799
as 449 UGACAGCCGUGGUGGAAUAdTdT 800
s 447 GUCAUCACCAAUCCCAAGGdTdT 801
as 465 CCUUGGGAUUGGUGAUGACdTdT 802
s 115 GUCCUCUGAUGGUCAAAGUdTdT 803
as 133 ACUUUGACCAUCAGAGGACdTdT 804
s 122 GAUGGUCAAAGUUCUAGAUdTdT 805
as 140 AUC UAGAAC UUUGAC CAUC dT dT 806
s 139 AUGCUGUCCGAGGCAGUCCdTdT 807
as 157 GGACUGCCUCGGACAGCAUdTdT 808
s 172 CCGUGCAUGUGUUCAGAAAdTdT 809
as 190 UUUCUGAACACAUGCACGGdTdT 810
s 238 AGUCUGGAGAGCUGCAUGGdTdT 811
as 256 CCAUGCAGCUCUCCAGACUdTdT 812
s 252 CAUGGGCUCACAACUGAGGdTdT 813
as 270 CCUCAGUUGUGAGCCCAUGdTdT 814
s 33 UCUCAUCGUCUGCUCCUCCdTdT 815
as 51 GGAGGAGCAGACGAUGAGAdTdT 816
s 340 CCCCAUUCCAUGAGCAUGCdTdT 817
as 358 GCAUGCUCAUGGAAUGGGGdTdT 818
s 421 GCCCCUACUCCUAUUCCACdTdT 819
as 439 GUGGAAUAGGAGUAGGGGCdTdT 820
s 431 CUAUUCCACCACGGCUGUCdTdT 821
as 449 GACAGCCGUGGUGGAAUAGdTdT 822
s 440 CACGGCUGUCGUCACCAAUdTdT 823
as 458 AUUGGUGACGACAGCCGUGdTdT 824
s 496 AGGACGAGGGAUGGGAUUUdTdT 825
as 514 AAAUCCCAUCCCUCGUCCUdTdT 826
s 556 UCACCUCAUAUGCUAUGUUdTdT 827
as 574 AACAUAGCAUAUGAGGUGAdTdT 828
s 559 CCUCAUAUGCUAUGUUAGAdTdT 829
- 50 036772
as 577 UCUAACAUAGCAUAUGAGGdTdT 830
s 570 AUGUUAGAAGUCCAGGCAGdTdT 831
as 588 CUGCCUGGACUUCUAACAUdTdT 832
s 78 UCUGAGGCUGGCCCUACGGdTdT 833
as 96 CCGUAGGGCCAGCCUCAGAdTdT 834
s 87 GGCCCUACGGGCACCGGUGdTdT 835
as 105 CACCGGUGCCCGUAGGGCCdTdT 836
s 95 GGGCACCGGUGAAUCCAAGdTdT 837
as 113 CUUGGAUUCACCGGUGCCCdTdT 838
s 167 CCAUGCAUGUGUUCAGAAAdTdT 839
as 185 UUUCUGAACACAUGCAUGGdTdT 840
Таблица 4.
Химически модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК TTR человека
Смотрите табл. 2 в отношении номера дуплекса. Цепь: s=смысловαя; as=антисмысловαя; Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM_000371.2, SEQ ID NO:1329)
Цепь Номер олиго Положение Последовательность (5’-3’) SEQ ID NO:
s A-32153 100 ccGGuGAAuccAAGuGuccdTdT 841
as A-32154 118 GGAcACUUGGAUUcACCGGdTdT 842
s A-32155 11 AcucAuucuuGGcAGGAuGdTdT 843
as A-32156 29 CAUCCUGCCAAGAAUGAGUdTdT 844
s A-32157 111 AAGuGuccucuGAuGGucAdTdT 845
as A-32158 129 UGACcAUcAGAGGAcACUUdTdT 846
s A-32163 13 ucAuucuuGGcAGGAuGGcdTdT 847
as A-32164 31 GCcAUCCUGCcAAGAAUGAdTdT 848
s A-32165 130 AAGuucuAGAuGcuGuccGdTdT 849
as A-32166 148 CGGAcAGcAUCuAGAACUUdTdT 850
s A-32167 132 GuucuAGAuGcuGuccGAGdTdT 851
as A-32168 150 CUCGGAcAGcAUCuAGAACdTdT 852
s A-32169 135 cuAGAuGcuGuccGAGGcAdTdT 853
as A-32170 153 UGCCUCGGAcAGcAUCuAGdTdT 854
s A-32171 138 GAuGcuGuccGAGGcAGucdTdT 855
as A-32172 156 GACUGCCUCGGAcAGcAUCdTdT 856
s A-32175 14 cAuucuuGGcAGGAuGGcudTdT 857
as A-32176 32 AGCcAUCCUGCcAAGAAUGdTdT 858
s A-32177 140 uGcuGuccGAGGcAGuccudTdT 859
as A-32178 158 AGGACUGCCUCGGAcAGcAdTdT 860
s A-32179 146 ccGAGGcAGuccuGccAucdTdT 861
as A-32180 164 GAUGGcAGGACUGCCUCGGdTdT 862
s A-32181 152 cAGuccuGccAucAAuGuGdTdT 863
as A-32182 170 cAcAUUGAUGGcAGGACUGdTdT 864
s A-32183 164 cAAuGuGGccGuGcAuGuGdTdT 865
as A-32184 182 cAcAUGcACGGCcAcAUUGdTdT 866
s A-32187 178 AuGuGuucAGAAAGGcuGcdTdT 867
as A-32188 196 GcAGCCUUUCUGAAcAcAUdTdT 868
s A-32189 2 cAGAAGuccAcucAuucuudTdT 869
as A-32190 20 AAGAAUGAGUGGACUUCUGdTdT 870
s A-32191 21 GGcAGGAuGGcuucucAucdTdT 871
as A-32192 39 GAUGAGAAGCcAUCCUGCCdTdT 872
s A-32193 210 GAGccAuuuGccucuGGGAdTdT 873
as A-32194 228 UCCcAGAGGcAAAUGGCUCdTdT 874
s A-32195 23 cAGGAuGGcuucucAucGudTdT 875
as A-32196 41 ACGAUGAGAAGCcAUCCUGdTdT 876
- 51 036772
s A-32199 24 AGGAuGGcuucucAucGucdTdT 877
as A-32200 42 GACGAUGAGAAGCcAUCCUdTdT 878
s A-32201 245 AGAGcuGcAuGGGcucAcAdTdT 879
as A-32202 263 UGUGAGCCcAUGcAGCUCUdTdT 880
s A-32203 248 GcuGcAuGGGcucAcAAcudTdT 881
as A-32204 266 AGUUGUGAGCCcAUGcAGCdTdT 882
s A-32205 25 GGAuGGcuucucAucGucudTdT 883
as A-32206 43 AGACGAUGAGAAGCcAUCCdTdT 884
s A-32207 251 GcAuGGGcucAcAAcuGAGdTdT 885
as A-32208 269 CUcAGUUGUGAGCCcAUGCdTdT 886
s A-32211 253 AuGGGcucAcAAcuGAGGAdTdT 887
as A-32212 271 UCCUcAGUUGUGAGCCcAUdTdT 888
s A-32213 254 uGGGcucAcAAcuGAGGAGdTdT 889
as A-32214 272 CUCCUcAGUUGUGAGCCcAdTdT 890
s A-32215 270 GAGGAAuuuGuAGAAGGGAdTdT 891
as A-32216 288 UCCCUUCuAcAAAUUCCUCdTdT 892
s A-32217 276 u u u G uAGAAG GGAuAuAcAdTdT 893
as A-32218 294 UGuAuAUCCCUUCuAcAAAdTdT 894
s A-32219 277 u u G uAGAAG G GAuAuAcAAd T d T 895
as A-32220 295 UUGuAuAUCCCUUCuAcAAdTdT 896
s A-32221 278 u G uAGAAG G GAuAuAcAAAdT dT 897
as A-32222 296 UUUGuAuAUCCCUUCuAcAdTdT 898
s A-32223 281 AGAAGGGAuAuAcAAAGuGdTdT 899
as A-32224 299 cACUUUGuAuAUCCCUUCUdTdT 900
s A-32225 295 AAGuGGAAAuAGAcAccAAdTdT 901
as A-32226 313 UUGGUGUCuAUUUCcACUUdTdT 902
s A-32227 299 GGAAAuAGAcAccAAAucudTdT 903
as A-32228 317 AGAUUUGGUGUCuAUUUCCdTdT 904
s A-32229 300 GAAAuAGAcAccAAAucuudTdT 905
as A-32230 318 AAGAUUUGGUGUCuAUUUCdTdT 906
s A-32231 303 AuAGAcAccAAAucuuAcudTdT 907
as A-32232 321 AGuAAGAUUUGGUGUCuAUdTdT 908
s A-32233 304 uAGAcAccAAAucuuAcuGdTdT 909
as A-32234 322 cAGuAAGAUUUGGUGUCuAdTdT 910
s A-32235 305 AGAcAccAAAucuuAcuGGdTdT 911
as A-32236 323 CcAGuAAGAUUUGGUGUCUdTdT 912
s A-32237 317 uuAcuGGAAGGcAcuuGGcdTdT 913
as A-32238 335 GCcAAGUGCCUUCcAGuAAdTdT 914
s A-32239 32 uucucAucGucuGcuccucdTdT 915
as A-32240 50 GAGGAGcAGACGAUGAGAAdTdT 916
s A-32241 322 GGAAGGcAcuuGGcAucucdTdT 917
as A-32242 340 GAGAUGCcAAGUGCCUUCCdTdT 918
s A-32243 326 GGcAcuuGGcAucuccccAdTdT 919
as A-32244 344 UGGGGAGAUGCcAAGUGCCdTdT 920
s A-32247 333 GGcAucuccccAuuccAuGdTdT 921
as A-32248 351 cAUGGAAUGGGGAGAUGCCdTdT 922
s A-32249 334 GcAucuccccAuuccAuGAdTdT 923
as A-32250 352 UcAUGGAAUGGGGAGAUGCdTdT 924
s A-32251 335 cAucuccccAuuccAuGAGdTdT 925
as A-32252 353 CUcAUGGAAUGGGGAGAUGdTdT 926
s A-32253 336 AucuccccAuuccAuGAGcdTdT 927
as A-32254 354 GCUcAUGGAAUGGGGAGAUdTdT 928
s A-32255 338 cuccccAuuccAuGAGcAudTdT 929
as A-32256 356 AUGCUcAUGGAAUGGGGAGdTdT 930
s A-32259 341 cccAuuccAuGAGcAuGcAdTdT 931
as A-32260 359 UGcAUGCUcAUGGAAUGGGdTdT 932
s A-32261 347 ccAuGAGcAuGcAGAGGuGdTdT 933
as A-32262 365 cACCUCUGcAUGCUcAUGGdTdT 934
- 52 036772
s A-32263 352 AGcAuGcAGAGGuGGuAuudTdT 935
as A-32264 370 AAuACcACCUCUGcAUGCUdTdT 936
s A-32265 354 cAuGcAGAGGuGGuAuucAdTdT 937
as A-32266 372 UGAAuACcACCUCUGcAUGdTdT 938
s A-32267 355 AuGcAGAGGuGGuAuucAcdTdT 939
as A-32268 373 GUGAAuACcACCUCUGcAUdTdT 940
s A-32269 362 GGuGGuAuucAcAGccAAcdTdT 941
as A-32270 380 GUUGGCUGUGAAuACcACCdTdT 942
s A-32271 363 GuGGuAuucAcAGccAAcGdTdT 943
as A-32272 381 CGUUGGCUGUGAAuACcACdTdT 944
s A-32273 364 uGGuAuucAcAGccAAcGAdTdT 945
as A-32274 382 UCGUUGGCUGUGAAuACcAdTdT 946
s A-32275 365 GGuAuucAcAGccAAcGAcdTdT 947
as A-32276 383 GUCGUUGGCUGUGAAuACCdTdT 948
s A-32277 366 GuAuucAcAGccAAcGAcudTdT 949
as A-32278 384 AGUCGUUGGCUGUGAAuACdTdT 950
s A-32279 367 uAuucAcAGccAAcGAcucdTdT 951
as A-32280 385 GAGUCGUUGGCUGUGAAuAdTdT 952
s A-32281 370 ucAcAGccAAcGAcuccGGdTdT 953
as A-32282 388 CCGGAGUCGUUGGCUGUGAdTdT 954
s A-32283 390 ccccGccGcuAcAccAuuGdTdT 955
as A-32284 408 cAAUGGUGuAGCGGCGGGGdTdT 956
s A-32285 4 GAAGuccAcucAuucuuGGdTdT 957
as A-32286 22 CcAAGAAUGAGUGGACUUCdTdT 958
s A-32287 412 cccuGcuGAGccccuAcucdTdT 959
as A-32288 430 GAGuAGGGGCUcAGcAGGGdTdT 960
s A-32289 417 cuGAGсссcuAcuсcuAuudTdT 961
as A-32290 435 AAuAGGAGuAGGGGCUcAGdTdT 962
s A-32291 418 uGAGccccuAcuccuAuucdTdT 963
as A-32292 436 GAAuAGGAGuAGGGGCUcAdTdT 964
s A-32295 422 ccccuAcuccuAuuccAccdTdT 965
as A-32296 440 GGUGGAAuAGGAGuAGGGGdTdT 966
s A-32297 425 cuAcuccuAuuccAccAcGdTdT 967
as A-32298 443 CGUGGUGGAAuAGGAGuAGdTdT 968
s A-32299 426 uAcuccuAuuccAccAcGGdTdT 969
as A-32300 444 CCGUGGUGGAAuAGGAGuAdTdT 970
s A-32301 427 AcuccuAuuccAccAcGGcdTdT 971
as A-32302 445 GCCGUGGUGGAAuAGGAGUdTdT 972
s A-32303 429 uccuAuuccAccAcGGcuGdTdT 973
as A-32304 447 cAGCCGUGGUGGAAuAGGAdTdT 974
s A-32307 432 uAuuccAccAcGGcuGucGdTdT 975
as A-32308 450 CGAcAGCCGUGGUGGAAuAdTdT 976
s A-32309 433 AuuccAccAcGGcuGucGudTdT 977
as A-32310 451 ACGAcAGCCGUGGUGGAAUdTdT 978
s A-32311 437 cAccAcGGcuGucGucAccdTdT 979
as A-32312 455 GGUGACGAcAGCCGUGGUGdTdT 980
s A-32313 438 AccAcGGcuGucGucAccAdTdT 981
as A-32314 456 UGGUGACGAcAGCCGUGGUdTdT 982
s A-32315 439 ccAcGGcuGucGucAccAAdTdT 983
as A-32316 457 UUGGUGACGAcAGCCGUGGdTdT 984
s A-32319 441 AcGGcuGucGucAccAAucdTdT 985
as A-32320 459 GAUUGGUGACGAcAGCCGUdTdT 986
s A-32321 442 cGGcuGucGucAccAAuccdTdT 987
as A-32322 460 GGAUUGGUGACGAcAGCCGdTdT 988
s A-32323 449 cGucAccAAucccAAGGAAdTdT 989
as A-32324 467 UUCCUUGGGAUUGGUGACGdTdT 990
s A-32325 455 cAAuссcAAGGAAuGAGGGdTdT 991
as A-32326 473 CCCUcAUUCCUUGGGAUUGdTdT 992
- 53 036772
s A-32327 491 ccuGAAGGAcGAGGGAuGGdTdT 993
as A-32328 509 CcAUCCCUCGUCCUUcAGGdTdT 994
s A-32331 497 GGAcGAGGGAuGGGAuuucdT dT 995
as A-32332 515 GAAAUCCcAUCCCUCGUCCdTdT 996
s A-32333 5 AAGuccAcucAuucuuGGcdTdT 997
as A-32334 23 GCcAAGAAUGAGUGGACUUdTdT 998
s A-32335 508 GGGAuuucAuGuAAccAAGdTdT 999
as A-32336 526 CUUGGUuAcAUGAAAUCCCdTdT 1000
s A-32337 509 GGAuuucAuGuAAccAAGAdTdT 1001
as A-32338 527 UCUUGGUuAcAUGAAAUCCdTdT 1002
s A-32339 514 ucAuGuAAccAAGAGuAuudTdT 1003
as A-32340 532 AAuACUCUUGGUuAcAUGAdTdT 1004
s A-32341 516 Au G uAAc cAAGAG uAuuccdTdT 1005
as A-32342 534 GGAAuACUCUUGGUuAcAUdTdT 1006
s A-32343 517 uGuAAccAAGAGuAuuccAdTdT 1007
as A-32344 535 UGGAAuACUCUUGGUuAcAdTdT 1008
s A-32345 518 GuAAccAAGAGuAuuccAudTdT 1009
as A-32346 536 AUGGAAuACUCUUGGUuACdTdT 1010
s A-32347 54 uGccuuGcuGGAcuGGuAudTdT 1011
as A-32348 72 AuACcAGUCcAGcAAGGcAdTdT 1012
s A-32349 543 uAAAGcAGuGuuuucAccudTdT 1013
as A-32350 561 AGGUGAAAAcACUGCUUuAdTdT 1014
s A-32351 55 GccuuGcuGGAcuGGuAuudTdT 1015
as A-32352 73 AAuACcAGUCcAGcAAGGCdTdT 1016
s A-32353 551 uGuuuucAccucAuAuGcudTdT 1017
as A-32354 569 AGcAuAUGAGGUGAAAAcAdTdT 1018
s A-32355 552 GuuuucAccucAuAuGcuAdTdT 1019
as A-32356 570 uAGcAuAUGAGGUGAAAACdTdT 1020
s A-32357 553 uuuucAccucAuAuGcuAudTdT 1021
as A-32358 571 AuAGcAuAUGAGGUGAAAAdTdT 1022
s A-32359 555 uucAccucAuAuGcuAuGudTdT 1023
as A-32360 573 AcAuAGcAuAUGAGGUGAAdTdT 1024
s A-32363 557 cAccucAuAuGcuAuGuuAdTdT 1025
as A-32364 575 uAAcAuAGcAuAUGAGGUGdTdT 1026
s A-32367 56 ccuuGcuGGAcuGGuAuuudTdT 1027
as A-32368 74 AAAuACcAGUCcAGcAAGGdTdT 1028
s A-32369 563 AuAuGcuAuGu uAGAAG u c d T d T 1029
as A-32370 581 GACUUCuAAcAuAGcAuAUdTdT 1030
s A-32371 564 uAuGcuAuGuuAGAAGuccdTdT 1031
as A-32372 582 GGACUUCuAAcAuAGcAuAdTdT 1032
s A-32373 566 uGcuAuGuuAGAAGuccAGdTdT 1033
as A-32374 584 CUGGACUUCuAAcAuAGcAdTdT 1034
s A-32375 57 cuuGcuGGAcuGGuAuuuGdTdT 1035
as A-32376 75 cAAAuACcAGUCcAGcAAGdTdT 1036
s A-32379 578 AGuccAGGcAGAGAcAAuAdTdT 1037
as A-32380 596 uAUUGUCUCUGCCUGGACUdTdT 1038
s A-32381 580 uccAGGcAGAGAcAAuAAAdTdT 1039
as A-32382 598 UUuAUUGUCUCUGCCUGGAdTdT 1040
s A-32383 607 GuGAAAGGcAcuuuucAuudTdT 1041
as A-32384 625 AAUGAAAAGUGCCUUUcACdTdT 1042
s A-32385 62 uGGAcuGGuAuuuGuGucudTdT 1043
as A-32386 80 AGAcAcAAAuAC cAGUC cAdTdT 1044
s A-32387 77 GucuGAGGcuGGcccuAcGdTdT 1045
as A-32388 95 CGuAGGGCcAGCCUcAGACdTdT 1046
s A-32391 79 cuGAGGcuGGcccuAcGGGdTdT 1047
as A-32392 97 CCCGuAGGGCcAGCCUcAGdTdT 1048
s A-32393 81 GAGGcuGGcccuAcGGGcAdTdT 1049
as A-32394 99 UGCCCGuAGGGCcAGCCUCdTdT 1050
- 54 036772
s A-32395 82 AGGcuGGcccuAcGGGcAcdTdT 1051
as A-32396 100 GUGCCCGuAGGGCcAGCCUdTdT 1052
s A-32397 84 GcuGGcccuAcGGGcAccGdTdT 1053
as A-32398 102 CGGUGCCCGuAGGGCcAGCdTdT 1054
s A-32399 85 cuGGcccuAcGGGcAccGGdTdT 1055
as A-32400 103 CCGGUGCCCGuAGGGCcAGdTdT 1056
s A-32401 87 GGcccuAcGGGcAccGGuGdTdT 1057
as A-32402 105 cACCGGUGCCCGuAGGGCCdTdT 1058
s A-32403 9 ccAcucAuucuuGGcAGGAdTdT 1059
as A-32404 27 UCCUGCcAAGAAUGAGUGGdTdT 1060
s A-32405 90 ccuAcGGGcAccGGuGAAudTdT 1061
as A-32406 108 AUUcACCGGUGCCCGuAGGdTdT 1062
s A-32407 91 cuAcGGGcAccGGuGAAucdTdT 1063
as A-32408 109 GAUUcACCGGUGCCCGuAGdTdT 1064
s A-32409 92 uAcGGGcAccGGuGAAuccdTdT 1065
as A-32410 110 GGAUUcACCGGUGCCCGuAdTdT 1066
s A-32411 93 AcGGGcAccGGuGAAuccAdTdT 1067
as A-32412 111 UGGAUUcACCGGUGCCCGUdTdT 1068
s A-32415 97 GcAccGGuGAAuccAAGuGdTdT 1069
as A-32416 115 cACUUGGAUUcACCGGUGCdTdT 1070
s A-32417 98 cAccGGuGAAuccAAGuGudTdT 1071
as A-32418 116 AcACUUGGAUUcACCGGUGdTdT 1072
s A-32419 167 uGuGGccAuGcAuGuGuucdTdT 1073
as A-32420 185 GAAcAcAUGcAUGGCcAcAdTdT 1074
s A-32421 168 GuGGccAuGcAuGuGuucAdTdT 1075
as A-32422 186 UGAAcAcAUGcAUGGCcACdTdT 1076
s A-32423 171 GccAuGcAuGuGuucAGAAdTdT 1077
as A-32424 189 UUCUGAAcAcAUGcAUGGCdTdT 1078
s A-32427 432 uAuuccAccAcGGcuGucAdTdT 1079
as A-32428 449 UGAcAGCCGUGGUGGAAuAdTdT 1080
s A-32429 447 GucAucAccAAucccAAGGdTdT 1081
as A-32430 465 CCUUGGGAUUGGUGAUGACdTdT 1082
s A-32159 115 GuccucuGAuGGucAAAGudTdT 1083
as A-32160 133 ACUUUGACcAUcAGAGGACdTdT 1084
s A-32161 122 GAuGGucAAAGuucuAGAudTdT 1085
as A-32162 140 AUCuAGAACUUUGACcAUCdTdT 1086
s A-32173 139 AuGcuGuccGAGGcAGuccdTdT 1087
as A-32174 157 GGACUGCCUCGGAcAGcAUdTdT 1088
s A-32185 172 ccGuGcAuGuGuucAGAAAdTdT 1089
as A-32186 190 UUUCUGAAcAcAUGcACGGdTdT 1090
s A-32197 238 AGucuGGAGAGcuGcAuGGdTdT 1091
as A-32198 256 CcAUGcAGCUCUCcAGACUdTdT 1092
s A-32209 252 cAuGGGcucAcAAcuGAGGdTdT 1093
as A-32210 270 CCUcAGUUGUGAGCCcAUGdTdT 1094
s A-32245 33 ucucAucGucuGcuccuccdTdT 1095
as A-32246 51 GGAGGAGcAGACGAUGAGAdTdT 1096
s A-32257 340 ccccAuuccAuGAGcAuGcdTdT 1097
as A-32258 358 GcAUGCUcAUGGAAUGGGGdTdT 1098
s A-32293 421 GccccuAcuccuAuuccAcdTdT 1099
as A-32294 439 GUGGAAuAGGAGuAGGGGCdTdT 1100
s A-32305 431 cuAuuccAccAcGGcuGucdTdT 1101
as A-32306 449 GAcAGCCGUGGUGGAAuAGdTdT 1102
s A-32317 440 cAcGGcuGucGucAccAAudTdT 1103
as A-32318 458 AUUGGUGACGAcAGCCGUGdTdT 1104
s A-32329 496 AGGAcGAGGGAuGGGAuuuclT dT 1105
as A-32330 514 AAAUCCcAUCCCUCGUCCUdTdT 1106
s A-32361 556 ucAccucAuAuGcuAuGuudTdT 1107
as A-32362 574 AAcAuAGcAuAUGAGGUGAdTdT 1108
- 55 036772
S A-32365 559 ccucAuAuGcuAuGuuAGAdTdT 1109
as A-32366 577 UCuAAcAuAGcAuAUGAGGdTdT 1110
S A-32377 570 AuGuuAGAAGuccAGGcAGdTdT 1111
as A-32378 588 CUGCCUGGACUUCuAAcAUdTdT 1112
s A-32389 78 ucuGAGGcuGGcccuAcGGdTdT 1113
as A-32390 96 CCGuAGGGCcAGCCUcAGAdTdT 1114
s A-32401 87 GGcccuAcGGGcAccGGuGdTdT 1115
as A-32402 105 cACCGGUGCCCGuAGGGCCdTdT 1116
s A-32413 95 GGGcAccGGuGAAuccAAGdTdT 1117
as A-32414 113 CUUGGAUUcACCGGUGCCCdTdT 1118
s A-32425 167 ccAuGcAuGuGuucAGAAAdTdT 1119
as A-32426 185 UUUCUGAAcAcAUGcAUGGdTdT 1120
Таблица 5.
Идентификационные номера для дцРНК TTR крысы Смотрите таблицу 7 в отношении последовательностей.
Номер дуплекса Номер смыслового олиго Номер антисмыслового олиго
AD-18529 A-32745 A-32746
AD-18530 A-32747 A-32748
AD-18531 A-32749 A-32750
AD-18532 A-32751 A-32752
AD-18533 A-32753 A-32754
AD-18534 A-32755 A-32756
AD-18535 A-32757 A-32758
AD-18536 A-32759 A-32760
AD-18537 A-32761 A-32762
AD-1853 8 A-32763 A-32764
AD-18539 A-32159 A-32160
AD-18540 A-32765 A-32766
AD-18541 A-32767 A-32768
AD-18542 A-32769 A-32770
AD-18543 A-32771 A-32772
AD-18544 A-32773 A-32774
AD-18545 A-32775 A-32776
AD-18546 A-32777 A-32778
AD-18547 A-32779 A-32780
AD-18548 A-32781 A-32782
AD-18549 A-32783 A-32784
AD-18550 A-32785 A-32786
AD-18551 A-32787 A-32788
AD-18552 A-32791 A-32792
AD-18553 A-32793 A-32794
AD-18554 A-32795 A-32796
- 56 036772
Т аблица 6А.
Последовательности смысловых и антисмысловых цепей для дцРНК TTR крысы. Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая; Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM_012671.1, SEQ ID NO:1330)
Цепь Положение Последовательность (5’-3’) SEQ ID NO: Последовательность c З’-динуклеотидным выступом (5’-3’) SEQ ID NO:
s 115 GUCCUCUGAUGGUCAAAGU 1121 GUCCUCUGAUGGUCAAAGUNN 1173
as 133 ACUUUGACCAUCAGAGGAC 1122 ACUUUGACCAUCAGAGGACNN 1174
s 537 UUCUUGCUCUAUAAACCGU 1123 UUCUUGCUCUAUAAACCGUNN 1175
as 555 ACGGUUUAUAGAGCAAGAA 1124 ACGGUUUAUAGAGCAAGAANN 1176
s 543 CUCUAUAAACCGUGUUAGC 1125 CUCUAUAAACCGUGUUAGCNN 1177
as 561 GCUAACACGGUUUAUAGAG 1126 GCUAACACGGUUUAUAGAGNN 1178
s 392 UCGCCACUACACCAUCGCA 1127 UCGCCACUACACCAUCGCANN 1179
as 410 UGCGAUGGUGUAGUGGCGA 1128 UGCGAUGGUGUAGUGGCGANN 1180
s 538 UCUUGCUCUAUAAACCGUG 1129 UCUUGCUCUAUAAACCGUGNN 1181
as 556 CACGGUUUAUAGAGCAAGA 1130 CACGGUUUAUAGAGCAAGANN 1182
s 541 UGCUCUAUAAACCGUGUUA 1131 UGCUCUAUAAACCGUGUUANN 1183
as 559 UAACACGGUUUAUAGAGCA 1132 UAACACGGUUUAUAGAGCANN 1184
s 532 CAGUGUUCUUGCUCUAUAA 1133 CAGUGUUCUUGCUCUAUAANN 1185
as 550 UUAUAGAGCAAGAACACUG 1134 UUAUAGAGCAAGAACACUGNN 1186
s 542 GCUCUAUAAACCGUGUUAG 1135 GCUCUAUAAACCGUGUUAGNN 1187
as 560 CUAACACGGUUUAUAGAGC 1136 CUAACACGGUUUAUAGAGCNN 1188
s 134 CCUGGAUGCUGUCCGAGGC 1137 CCUGGAUGCUGUCCGAGGCNN 1189
as 152 GCCUCGGACAGCAUCCAGG 1138 GCCUCGGACAGCAUCCAGGNN 1190
s 119 UCUGAUGGUCAAAGUCCUG 1139 UCUGAUGGUCAAAGUCCUGNN 1191
as 137 CAGGAC UUUGAC CAUCAGA 1140 CAGGACUUUGACCAUCAGANN 1192
s 241 CUGGAGAGCUGCACGGGCU 1141 CUGGAGAGCUGCACGGGCUNN 1193
as 259 AGCCCGUGCAGCUCUCCAG 1142 AGCCCGUGCAGCUCUCCAGNN 1194
s 544 UCUAUAAACCGUGUUAGCA 1143 UCUAUAAACCGUGUUAGCANN 1195
as 562 UGCUAACACGGUUUAUAGA 1144 UGCUAACACGGUUUAUAGANN 1196
s 530 AACAGUGUUCUUGCUCUAU 1145 AACAGUGUUCUUGCUCUAUNN 1197
as 548 AUAGAGCAAGAACACUGUU 1146 AUAGAGCAAGAACACUGUUNN 1198
s 118 CUCUGAUGGUCAAAGUCCU 1147 CUCUGAUGGUCAAAGUCCUNN 1199
as 136 AGGACUUUGACCAUCAGAG 1148 AGGAC UUUGAC CAUCAGAGNN 1200
s 140 UGCUGUCCGAGGCAGCCCU 1149 UGCUGUCCGAGGCAGCCCUNN 1201
as 158 AGGGCUGCCUCGGACAGCA 1150 AGGGCUGCCUCGGACAGCANN 1202
s 239 GUCUGGAGAGCUGCACGGG 1151 GUCUGGAGAGCUGCACGGGNN 1203
as 257 CCCGUGCAGCUCUCCAGAC 1152 CCCGUGCAGCUCUCCAGACNN 1204
s 531 ACAGUGUUCUUGCUCUAUA 1153 ACAGUGUUCUUGCUCUAUANN 1205
as 549 UAUAGAGCAAGAACACUGU 1154 UAUAGAGCAAGAACACUGUNN 1206
s 117 CCUCUGAUGGUCAAAGUCC 1155 CCUCUGAUGGUCAAAGUCCNN 1207
as 135 GGACUUUGACCAUCAGAGG 1156 GGACUUUGACCAUCAGAGGNN 1208
s 131 AGUCCUGGAUGCUGUCCGA 1157 AGUCCUGGAUGCUGUCCGANN 1209
as 149 UC GGACAGCAUC CAGGAC U 1158 UCGGACAGCAUCCAGGACUNN 1210
s 217 UUGCCUCUGGGAAGACCGC 1159 UUGCCUCUGGGAAGACCGCNN 1211
as 235 GCGGUCUUCCCAGAGGCAA 1160 GCGGUCUUCCCAGAGGCAANN 1212
s 242 UGGAGAGCUGCACGGGCUC 1161 UGGAGAGCUGCACGGGCUCNN 1213
as 260 GAGCCCGUGCAGCUCUCCA 1162 GAGCCCGUGCAGCUCUCCANN 1214
s 244 GAGAGCUGCACGGGCUCAC 1163 GAGAGCUGCACGGGCUCACNN 1215
as 262 GUGAGCCCGUGCAGCUCUC 1164 GUGAGCCCGUGCAGCUCUCNN 1216
s 246 GAGCUGCACGGGCUCACCA 1165 GAGCUGCACGGGCUCACCANN 1217
as 264 UGGUGAGCCCGUGCAGCUC 1166 UGGUGAGCCCGUGCAGCUCNN 1218
s 399 UACACCAUCGCAGCCCUGC 1167 UACACCAUCGCAGCCCUGCNN 1219
as 417 GCAGGGCUGCGAUGGUGUA 1168 GCAGGGCUGCGAUGGUGUANN 1220
s 132 GUCCUGGAUGCUGUCCGAG 1169 GUCCUGGAUGCUGUCCGAGNN 1221
as 150 CUCGGACAGCAUCCAGGAC 1170 CUC GGACAGCAUC CAGGACNN 1222
s 245 AGAGCUGCACGGGCUCACC 1171 AGAGCUGCACGGGCUCACCNN 1223
as 263 GGUGAGCCCGUGCAGCUCU 1172 GGUGAGCCCGUGCAGCUCUNN 1224
- 57 036772
Таблица 6В.
Последовательности смысловых и антисмысловых цепей для дцРНК TTR крысы Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая; Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM_012681.1, SEQ ID NO:1330)
Цепь Положение Последовательность с З’-дезокситимидиновым выступом (5’-3’) SEQ ID NO:
s 115 GUCCUCUGAUGGUCAAAGUdTdT 1225
as 133 ACUUUGACCAUCAGAGGACdTdT 1226
s 537 UUCUUGCUCUAUAAACCGUdTdT 1227
as 555 ACGGUUUAUAGAGCAAGAAdTdT 1228
s 543 CUCUAUAAACCGUGUUAGCdTdT 1229
as 561 GCUAACACGGUUUAUAGAGdTdT 1230
s 392 UCGCCACUACACCAUCGCAdTdT 1231
as 410 UGCGAUGGUGUAGUGGCGAdTdT 1232
s 538 UCUUGCUCUAUAAACCGUGdTdT 1233
as 556 CACGGUUUAUAGAGCAAGAdTdT 1234
s 541 UGCUCUAUAAACCGUGUUAdTdT 1235
as 559 UAACACGGUUUAUAGAGCAdTdT 1236
s 532 CAGUGUUCUUGCUCUAUAAdTdT 1237
as 550 UUAUAGAGCAAGAACACUGdTdT 1238
s 542 GCUCUAUAAACCGUGUUAGdTdT 1239
as 560 C UAACAC GGUUUAUAGAGC dT dT 1240
s 134 CCUGGAUGCUGUCCGAGGCdTdT 1241
as 152 GCCUCGGACAGCAUCCAGGdTdT 1242
s 119 UCUGAUGGUCAAAGUCCUGdTdT 1243
as 137 CAGGACUUUGACCAUCAGAdTdT 1244
s 241 CUGGAGAGCUGCACGGGCUdTdT 1245
as 259 AGCCCGUGCAGCUCUCCAGdTdT 1246
s 544 UCUAUAAACCGUGUUAGCAdTdT 1247
as 562 UGCUAACACGGUUUAUAGAdTdT 1248
s 530 AACAGUGUUCUUGCUCUAUdTdT 1249
as 548 AUAGAGCAAGAACACUGUUdTdT 1250
s 118 CUCUGAUGGUCAAAGUCCUdTdT 1251
as 136 AGGAC UUUGAC CAUCAGAGdT dT 1252
s 140 UGCUGUCCGAGGCAGCCCUdTdT 1253
as 158 AGGGCUGCCUCGGACAGCAdTdT 1254
s 239 GUCUGGAGAGCUGCACGGGdTdT 1255
as 257 CCCGUGCAGCUCUCCAGACdTdT 1256
s 531 ACAGUGUUCUUGCUCUAUAdTdT 1257
as 549 UAUAGAGCAAGAACACUGUdTdT 1258
s 117 CCUCUGAUGGUCAAAGUCCdTdT 1259
as 135 GGACUUUGACCAUCAGAGGdTdT 1260
s 131 AGUCCUGGAUGCUGUCCGAdTdT 1261
as 149 UCGGACAGCAUCCAGGACUdTdT 1262
s 217 UUGCCUCUGGGAAGACCGCdTdT 1263
as 235 GCGGUCUUCCCAGAGGCAAdTdT 1264
s 242 UGGAGAGCUGCACGGGCUCdTdT 1265
as 260 GAGCCCGUGCAGCUCUCCAdTdT 1266
s 244 GAGAGCUGCACGGGCUCACdTdT 1267
as 262 GUGAGCCCGUGCAGCUCUCdTdT 1268
s 246 GAGCUGCACGGGCUCACCAdTdT 1269
as 264 UGGUGAGCCCGUGCAGCUCdTdT 1270
s 399 UACACCAUCGCAGCCCUGCdTdT 1271
as 417 GCAGGGCUGCGAUGGUGUAdTdT 1272
s 132 GUCCUGGAUGCUGUCCGAGdTdT 1273
as 150 CUC GGACAGCAUC CAGGAC dT dT 1274
s 245 AGAGCUGCACGGGCUCACCdTdT 1275
as 263 GGUGAGCCCGUGCAGCUCUdTdT 1276
- 58 036772
Таблица 7
Химически модифицированные последовательности смысловых и антисмысловых цепей дцРНК TTR крысы
См. табл. 5 в отношении номера дуплекса. Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая;
Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM 012681.1, SEQ ID NO:1330)
Цепь Номер олиго Положение Последовательность (5’-3’) SEQ ID NO:
S A-32159 115 GuccucuGAuGGucAAAGudTdT 1277
as A-32160 133 ACUUUGACcAUcAGAGGACdTdT 1278
s A-32745 537 uucuuGcucuAuAAAccGudTdT 1279
as A-32746 555 ACGGUUuAuAGAGcAAGAAdTdT 1280
s A-32747 543 cucuAuAAAccGuGuuAGcdTdT 1281
as A-32748 561 GCuAAcACGGUUuAuAGAGdTdT 1282
s A-32749 392 ucGccAcuAcAccAucGcAdTdT 1283
as A-32750 410 UGCGAUGGUGuAGUGGCGAdTdT 1284
s A-32751 538 ucuuGcucuAuAAAccGuGdTdT 1285
as A-32752 556 cACGGUUuAuAGAGcAAGAdTdT 1286
s A-32753 541 uGcucuAuAAAccGuGuuAdTdT 1287
as A-32754 559 uAAcACGGUUuAuAGAGcAdTdT 1288
s A-32755 532 cAGuGuucuuGcucuAuAAdTdT 1289
as A-32756 550 UuAuAGAGcAAGAAcACUGdTdT 1290
s A-32757 542 GcucuAuAAAccGuGuuAGdTdT 1291
as A-32758 560 CuAAcACGGUUuAuAGAGCdTdT 1292
s A-32759 134 ccuGGAuGcuGuccGAGGcdTdT 1293
as A-32760 152 GCCUCGGAcAGcAUCcAGGdTdT 1294
s A-32761 119 ucuGAuGGucAAAGuccuGdTdT 1295
as A-32762 137 cAGGACUUUGACcAUcAGAdTdT 1296
s A-32763 241 cuGGAGAGcuGcAcGGGcudTdT 1297
as A-32764 259 AGCCCGUGcAGCUCUCcAGdTdT 1298
s A-32765 544 ucuAuAAAccGuGuuAGcAdTdT 1299
as A-32766 562 UGCuAAcACGGUUuAuAGAdTdT 1300
s A-32767 530 AAcAGuGuucuuGcucuAudTdT 1301
as A-32768 548 AuAGAGcAAGAAcACUGUUdTdT 1302
s A-32769 118 cucuGAuGGucAAAGuccudTdT 1303
as A-32770 136 AGGACUUUGACcAUcAGAGdTdT 1304
s A-32771 140 uGcuGuccGAGGcAGcccudTdT 1305
as A-32772 158 AGGGCUGCCUCGGAcAGcAdTdT 1306
s A-32773 239 GucuGGAGAGcuGcAcGGGdTdT 1307
as A-32774 257 CCCGUGcAGCUCUCcAGACdTdT 1308
s A-32775 531 AcAGuGuucuuGcucuAuAdTdT 1309
as A-32776 549 uAuAGAGcAAGAAcACUGUdTdT 1310
s A-32777 117 ccucuGAuGGucAAAGuccdTdT 1311
as A-32778 135 GGACUUUGACcAUcAGAGGdTdT 1312
s A-32779 131 AGuccuGGAuGcuGuccGAdTdT 1313
as A-32780 149 UCGGAcAGcAUCcAGGACUdTdT 1314
s A-32781 217 uuGccucuGGGAAGAccGcdTdT 1315
as A-32782 235 GCGGUCUUCCcAGAGGcAAdTdT 1316
s A-32783 242 uGGAGAGcuGcAcGGGcucdTdT 1317
as A-32784 260 GAGCCCGUGcAGCUCUCcAdTdT 1318
s A-32785 244 GAGAGcuGcAcGGGcucAcdTdT 1319
as A-32786 262 GUGAGCCCGUGcAGCUCUCdTdT 1320
s A-32787 246 GAGcuGcAcGGGcucAccAdTdT 1321
as A-32788 264 UGGUGAGCCCGUGcAGCUCdTdT 1322
s A-32791 399 uAcAccAucGcAGcccuGcdTdT 1323
as A-32792 417 GcAGGGCUGCGAUGGUGuAdTdT 1324
s A-32793 132 GuccuGGAuGcuGuccGAGdTdT 1325
as A-32794 150 CUCGGAcAGcAUCcAGGACdTdT 1326
s A-32795 245 AGAGcuGcAcGGGcucAccdTdT 1327
as A-32796 263 GGUGAGCCCGUGcAGCUCUdTdT 1328
- 59 036772
Синтез последовательностей TTR
Последовательности TTR синтезировали на синтезаторе MerMade 192 в масштабе 1 мкмоль. Для всех последовательностей в этом списке использовали 'endolight'-химию, описанную подробно ниже.
Все пиримидины (цитозин и уридин) в смысловой цепи заменяли соответствующими 2'-О-Метилоснованиями (2'-O-Метил С и 2'-О-Метил U).
В антисмысловой цепи, пиримидины, соседние (в направлении 5') относительно рибо-Ануклеозида, заменяли их соответствующими 2'-О-Метил-нуклеозидами.
На 3'-конце как смысловой, так и антисмысловой последовательностей вводили удлинение из двух оснований dTdT.
Этот файл последовательностей преобразовывали в текстовой файл, чтобы он был совместимым для ввода в программу синтеза MerMade 192.
Синтез последовательностей TTR использовал синтез олигонуклеотидов на твердом носителе с применением фосфорамидитной химии. Синтез вышеуказанных последовательностей выполняли в масштабе 1 мкМ в 96-луночных планшетах. Растворы амидита готовили в концентрации 0,1 М и в качестве активатора использовали этилтиотетразол (0,6 М в ацетонитриле).
Синтезированные последовательности расщепляли и освобождали от защитных групп в 96луночных планшетах с использованием метиламина в первой стадии и триэтилαмина.3HF во второй стадии. Неочищенные последовательности, полученные таким образом, осаждали с использованием смеси ацетон:этанол и осадок ресуспендировали в 0,5 М натрий-ацетатном буфере. Пробы из каждой последовательности анализировали при помощи LC-MS, и полученные данные масс подтверждали идентичность этих последовательностей. Отобранный набор проб анализировали также IEX-хроматографией.
Следующей стадией в этом процессе была очистка. Все последовательности очищали на системе очистки АКТА explorer с использованием колонки Source 15Q. Единственный пик, соответствующий полноразмерной последовательности, собирали в элюенте и затем анализировали на чистоту ионообменной хроматографией.
Очищенные последовательности обессоливали на колонке Sephadex G25 с использованием очищающего агента (АКТА purifier). Эти обессоленные последовательности TTR анализировали на концентрацию и чистоту. Затем одиночные цепи отжигали с получением TTR-dsRNA (TTR-дцРНК).
Пример 2В. In vitro скрининг siRNA TTR на супрессию мРНК
Поражающие TTR дцРНК человека (табл. 2) анализировали на ингибирование эндогенной экспрессии TTR в клетках HepG2 и Нер3В, с использованием анализов qPCR (ПЦР реального времени) и bDNA (разветвленной DNA) для количественного определения мРНК TTR. Поражающие TTR грызуна дцРНК (таблица 5) синтезировали и анализировали на ингибирование эндогенной экспрессии TTR с использованием анализов bDNA в клетках Н.4.11.Е. Результаты из анализов с однократными дозами использовали для выбора субпопуляции дцРНК-дуплексов TTR для экспериментов доза-ответ для расчета IC50. Результаты IC50 использовали для отбора дцРНК TTR для дальнейшего тестирования.
Культивирование клеток и трансфекции:
Линии гепатоцитов HepG2, Нер3В и клеток H.4.II.E (АТСС, Manassas, VA) выращивали почти до конфлюэнтности при 37°С в атмосфере 5% СО2 в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (АТСС), дополненной 10% ФТС, стрептомицином и глутамином (АТСС) перед высвобождением из планшета трипсинизацией. Клетки H.4.II.E выращивали также в минимальной поддерживающей среде Игла. Обратную транскрипцию проводили добавлением 3 мкл Opti-МЕМ к 5 мкл siRNA-дуплексов на лунку в 96-луночном планшете вместе с 10 мкл Opti-MEM плюс 0,2 мкл Липофектамина RNAiMax на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150) и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли 80 мкл полной среды для выращивания без антибиотиков, содержащей 4х104 (HepG2), 2х104 (Нер3В) или 2х104 (H.4.II.E)-клеток. Клетки инкубировали в течение 24 часов перед очисткой РНК. Эксперименты с однократными дозами выполняли с 10, 1, 0,5, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005, 0,00001 нМ.
Выделение тотальной РНК с использованием набора для выделения РНК MagMAX-96 (Applied Biosystems, Foster City CA. part #: AMI 830):
Клетки собирали и лизировали в 140 мкл раствора для лизиса/связывания, затем перемешивали в течение 1 минут при 850 об/мин с использованием Термомиксера Эппендорфа (скорость смешивания была одной и той же на протяжении этого процесса). Двадцать микролитров магнитных гранул добавляли в лизат клеток и смешивали в течение 5 мин. Магнитные гранулы извлекали при помощи магнитного устройства и супернатант удаляли без нарушения этих гранул. После удаления супернатанта магнитные гранулы промывали Промывочным раствором 1 (дополненным изопропанолом) и смешивали в течение 1 минуты. Гранулы опять собирали и супернатант удаляли. Затем гранулы промывали 150 мкл Промывочного раствора 2 (дополненного этанолом), собирали и супернатант удаляли. Затем к этим гранулам добавляли 50 мкл ДНКазной смеси (МадМах turbo-буфер для ДНКазы и ДНКаза Turbo) и их перемешивали в течение 10-15 мин. После перемешивания, добавляли 100 мкл раствора для повторного связывания РНК и перемешивали в течение 3 мин. Супернатант удаляли и магнитные гранулы опять промывали 150
- 60 036772 мкл Промывочного раствора 2 и смешивали в течение 1 мин и супернатант удаляли полностью. Эти магнитные гранулы смешивали в течение 2 мин для высыхания перед элюцией РНК 50 мкл воды.
Синтез кДНК с использованием набора для высокоэффективной обратной транскрипции кДНК ABI (Applied Biosvstems. Foster City. cA. Cat #4368813):
Основную смесь 2 мкл 10Х буфера, 0,8 мкл 25х dNTP, 2 мкл случайных праймеров, 1 мкл обратной транскриптазы, 1 мкл ингибитора РНКаз и 3,2 мкл Н2О на одну реакцию добавляли в 10 мкл тотальной РНК. кДНК генерировали с использованием термоциклера Bio-Rad С-1000 или S-1000 (Hercules, CA) посредством следующих стадий: 25°С 10 мин, 37°С 120 мин, 85°С 5 с, 4°С выдерживание.
ПЦР реального времени:
мкл кДНК добавляли к основной смеси 1 мкл зонда 18S TaqMan (Applied Biosystems Cat # 4319413E), 1 мкл зонда TTR TaqMan (Applied Biosystems cat # HSOO 174914 Ml) и 10 мкл основной смеси TaqMan для универсальной ПЦР (Applied Biosystems Cat #4324018) на лунку в 96-луночном планшете MicroAmp Optical (Applied Biosystems cat # 4326659). ПЦР реального времени выполняли в системе ПЦР реального времени ABI 7000 Prism или ABI 7900HT (Applied Biosystems) с использованием ΔΔ Ct(RQ)анализа. Все реакции выполняли в трех повторностях.
Данные ПЦР реального времени анализировали с использованием этого ДД Ct-способа и нормализовали относительно анализов, выполненных на клетках, трансфицированных 10 нМ BlockIT fluorescent Oligo (Invitrogen Cat # 2013) или 10 нМ AD-1955 (контрольным дуплексом, который поражает ген люциферазы немлекопитающих) для расчета изменения укладки.
Анализы с разветвленной ДНК - QuantiGene 1.0 (Panomics. Fremont. CA. cat #: QG0004) - используемые для скрининга специфических дуплексов грызунов
Клетки H.4.II.E (АТСС) трансфицировали 10 нМ siRNA. После удаления среды, H.4.II.E лизировали в 100 мкл Разбавленной лизисной смеси (смеси 1 объема Лизисной смеси, 2 объемов не содержащей нуклеаз воды и 10 мкл Протеиназы-К на мл для конечной концентрации 20 мг/мл), затем инкубировали при 65°С в течение 35 мин. Затем, в этот захватывающий планшет добавляли 80 мкл Рабочего Набора Зондов (смеси TTR- или GAPDH-зонда) и 20 мкл клеточного лизата. Захватывающие планшеты инкубировали при 53°С±1°С в течение ночи (приблизительно 16-20 ч). Захватывающие планшеты промывали 3 раза IX Промывочным буфером (смесью не содержащей нуклеаз воды, Буферного Компонента 1 и Промывочного Буферного Компонента 2), затем сушили центрифугированием в течение 1 мин при 1000 об/мин. В захватывающий планшет добавляли Рабочий амплификаторный реагент добавляли в этот захватывающий планшет, который затем герметично заделывали и инкубировали в течение 1 ч при 46±1°С. Стадии промывания и сушки повторяли после 1 ч инкубирования и добавляли 100 мкл Реагента раствора метки. Затем этот планшет промывали, сушили и добавляли 100 мкл Субстрата (смеси лаурилсульфата лития и раствора субстрата). Захватывающие планшеты помещали в термостат на 30 мин при 46±1°С. Затем захватывающие планшеты вынимали из термостата и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин. Наконец, Захватывающие планшеты считывали с использованием люминометра (Victor Luminometer, Perkin Elmer, Waltham, MA).
Анализы разветвленной ДНК - QuantiGene 2.0 (Panomics cat #: QS001 1): используемые для скрининга всех других дуплексов
После 24 ч инкубации при установленной дозе или при установленных дозах, среду удаляли и клетки лизировали в 100 мкл Лизисной смеси (1 объем лизисной смеси, 2 объема не содержащей нуклеаз воды и 10 мкл Протеиназы-К/мл для конечной концентрации 20 мг/мл), затем инкубировали при 65°С в течение 35 мин. Затем, в этот захватывающий планшет добавляли 20 мкл Рабочего Набора зондов (TTRзонд для гена-мишени и GAPDH для эндогенного контроля) и 80 мкл клеточного лизата. Захватывающие планшеты инкубировали при 55±1°С (приблизительно 16-20 ч). На следующий день, Захватывающие планшеты промывали 3 раза IX Промывочным буфером (не содержащей нуклеаз воды, Буферного Компонента 1 и Промывочного Буферного Компонента 2), затем сушили центрифугированием в течение 1 минуты при 240 g. Добавляли 100 мкл Рабочего пре-амплификаторного реагента в эти Захватывающие планшеты, которые заделывали алюминиевой фольгой и инкубировали в течение 1 ч при 55±1°С. После 1 ч, стадию промывания повторяли, затем добавляли 100 мкл рабочего амплификаторного реагента. После 1 ч, стадии промывания и сушки повторяли и добавляли 100 мкл зонда метки. Захватывающие планшеты инкубировали при 50°С±1°С в течение 1 часа. Затем эти планшеты промывали IX Промывочным буфером и сушили и затем добавляли к этим Захватывающим планшетам 100 мкл Субстрата. Захватывающие планшеты считывали с использованием люминометра SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) с последующей инкубацией в течение 5-15 мин.
Анализ данных bDNA:
Данные bDNA анализировали (i) вычитанием среднего фона из каждой из трех повторностей пробы, (ii) усреднением величин полученных трех повторностей GAPDH (контрольного зонда) и TTR (экспериментального зонда), и затем получением (вычислением) отношения: (фон экспериментального зонда)/фон контрольного зонда).
- 61 036772
Результаты
Суммирование результатов однократных доз и IC50 для TTR-dsRNA (TTR siRNA) представлены ниже в табл.8. Результаты однократных доз выражены в виде % мРНК TTR относительно контроля, при анализе в клетках HepG2. IC50 определяли в клетках HepG2 и/или Нер3В, как указано.
Таблица 8.
Результаты отдельных доз и IC50 in vitro скринингов siRNATTR ND: нет данных;
* указывает на результат, который представляет среднее из двух экспериментов.
Однократная доза при 10 нМ, % относительно контроля 1С50(нМ)
Номер дуплекса HepG2 HepG2 He p3B
qPCR bDNA qPCR bDNA qPCR bDNA
AD-18243 50.35 141.53 ND ND ND ND
AD-18244 64.26 158.55 ND ND ND ND
AD-18245 56.89 107.22 ND ND ND ND
AD-18246 10.53 32.51* 0.265 0.086 ND ND
AD-18247 125.56 69.57 ND ND ND ND
AD-18248 127.78 66.97 ND ND ND ND
AD-18249 48.77 48.76 ND ND ND ND
AD-18250 96.94 86.42 ND ND ND ND
AD-18251 170.41 129.15 ND ND ND ND
AD-18252 73.52 81.90 ND ND ND ND
AD-18253 25.25 61.25 ND ND ND ND
- 62 036772
AD-18254 95.13 103.96 ND ND ND ND
AD-18255 119.46 ND ND ND ND ND
AD-18256 42.64 95.67 ND ND ND ND
AD-18257 146.25 141.75 ND ND ND ND
AD-1825 8 10.20 13.41* 0.007 0.005 0.004 0.005
AD-18259 9.30 20.91* 0.102 0.005 ND ND
AD-18260 125.37 81.36 ND ND ND ND
AD-18261 14.27 19.40* 0.210 ND ND ND
AD-18262 84.95 104.05 ND ND ND ND
AD-18263 16.32 23.25* 0.110 ND ND ND
AD-18264 104.18 83.69 ND ND ND ND
AD-18265 41.62 64.87 ND ND ND ND
AD-18266 39.98 110.53 ND ND ND ND
AD-18267 149.64 ND ND ND ND ND
AD-18268 152.93 174.04 ND ND ND ND
AD-18269 37.27 92.28 ND ND ND ND
AD-18270 99.44 164.75 ND ND ND ND
AD-18271 18.89 28.33* 0.503 0.004 ND ND
AD-18272 128.32 132.58 ND ND ND ND
AD-18273 115.78 201.95 ND ND ND ND
AD-18274 8.97 20.04* 0.009 0.176 0.036 0.012
AD-18275 4.09 22.25* 0.026 0.118 ND ND
AD-18276 19.73 45.22* 0.198 0.677 ND ND
AD-18277 10.55 26.31* 0.121 0.426 ND ND
AD-18278 108.86 116.26 ND ND ND ND
AD-18279 66.59 ND ND ND ND ND
AD-18280 103.26 170.52 ND ND ND ND
AD-18281 87.98 123.88 ND ND ND ND
AD-18282 82.47 140.32 ND ND ND ND
AD-18283 106.54 182.78 ND ND ND ND
AD-18284 106.93 151.78 ND ND ND ND
AD-18285 26.58 60.05* ND 0.089 ND ND
AD-18286 109.95 173.66 ND ND ND ND
AD-18287 54.23 155.45 ND ND ND ND
AD-18288 73.52 174.09 ND ND ND ND
AD-18289 103.36 174.76 ND ND ND ND
AD-18290 17.06 52.04* 1.253 0.181 ND ND
AD-18291 7.71 169.29* 1.304 0.019 ND ND
AD-18292 7.51 210.03* 0.604 0.005 ND ND
AD-18293 3.61 62.53* 0.078 0.003 ND ND
AD-18294 111.53 107.56 ND ND ND ND
AD-18295 115.88 105.37 ND ND ND ND
AD-18296 57.03 38.03 ND ND ND ND
AD-18297 87.69 73.87 ND ND ND ND
- 63 036772
AD-18298 10.39 7.25* 0.455 0.008 ND ND
AD-18299 18.79 18.06* 0.895 0.014 ND ND
AD-183 00 108.70 ND ND ND ND ND
AD-18301 114.22 70.50 ND ND ND ND
AD-183 02 116.19 122.40 ND ND ND ND
AD-183 03 124.89 ND ND ND ND ND
AD-183 04 132.99 89.54 ND ND ND ND
AD-183 05 153.10 ND ND ND ND ND
AD-183 06 159.22 ND ND ND ND ND
AD-183 07 116.83 84.57 ND ND ND ND
AD-18308 156.72 87.80 ND ND ND ND
AD-183 09 113.22 101.97 ND ND ND ND
AD-18310 132.33 ND ND ND ND ND
AD-18311 161.68 92.92 ND ND ND ND
AD-18312 103.01 71.17 ND ND ND ND
AD-18313 120.65 53.26 ND ND ND ND
AD-18314 116.33 ND ND ND ND ND
AD-18315 115.13 ND ND ND ND ND
AD-18316 118.73 122.34 ND ND ND ND
AD-18317 114.03 121.10 ND ND ND ND
AD-18318 80.85 122.57 ND ND ND ND
AD-18319 119.14 148.87 ND ND ND ND
AD-18320 22.86 55.43* ND 0.023 0.403 ND
AD-18321 6.44 31.56* 0.001 0.033 ND ND
AD-18322 54.21 100.46 ND ND ND ND
AD-18323 6.37 28.71* 0.005 0.023 ND ND
AD-18324 2.53 15.98* 0.002 0.006 0.005 0.014
AD-18325 2.52 11.96* 0.001 0.016 ND ND
AD-18326 18.34 43.16* 0.025 0.186 ND ND
AD-18327 18.28 13.90* 0.044 0.215 ND ND
AD-18328 4.53 26.04* 0.003 0.004 0.006 0.006
AD-18329 96.93 131.54 ND ND ND ND
AD-18330 11.80 45.18* 0.0004 0.010 0.020 ND
AD-18331 117.77 163.07 ND ND ND ND
AD-18332 11.53 35.09* 0.001 0.076 0.065 ND
AD-18333 12.24 46.94* 0.001 0.115 0.075 ND
AD-18334 16.27 55.28* 0.0004 0.181 1.071 ND
AD-18335 53.52 112.80 ND ND ND ND
AD-18336 6.39 33.00* 0.001 0.112 0.081 ND
AD-18337 51.77 105.33 ND ND ND ND
AD-18338 48.21 102.86 ND ND ND ND
AD-18339 6.48 26.56* 0.004 0.002 0.018 0.029
AD-18340 4.53 30.76* 0.002 0.002 ND ND
AD-18341 31.27 100.41 ND ND ND ND
AD-18342 7,60 42,89* ND 0,016 0,076 ND
- 64 036772
AD-18343 3.42 17.45* ND 0.001 ND ND
AD-18344 75.08 134.31 ND ND ND ND
AD-18345 13.62 42.75* 0.002 0.013 ND ND
AD-18346 59.25 121.10 ND ND ND ND
AD-18347 91.23 139.54 ND ND ND ND
AD-18348 89.95 159.29 ND ND ND ND
AD-18349 108.01 144.96 ND ND ND ND
AD-18350 123.65 125.87 ND ND ND ND
AD-18351 108.36 104.02 ND ND ND ND
AD-18352 87.82 128.72 ND ND ND ND
AD-18353 14.40 65.77 0.012 0.027 ND ND
AD-18354 99.27 123.53 ND ND ND ND
AD-18355 135.04 150.88 ND ND ND ND
AD-18356 100.76 178.96 ND ND ND ND
AD-18357 125.30 162.85 ND ND ND ND
AD-18358 103.15 136.01 ND ND ND ND
AD-18359 34.74 140.48 ND ND ND ND
AD-18360 103.86 146.86 ND ND ND ND
AD-18361 105.74 152.74 ND ND ND ND
AD-18362 106.96 188.22 ND ND ND ND
AD-18363 124.22 58.46 ND ND ND ND
AD-18364 113.75 66.87 ND ND ND ND
AD-18446 29.73 13.30 ND ND ND ND
AD-18447 109.74 53.63 ND ND ND ND
AD-18448 22.96 8.81 ND ND ND ND
AD-18449 112.59 50.11 ND ND ND ND
AD-18450 89.41 34.89 ND ND ND ND
AD-18451 74.35 23.88 ND ND ND ND
AD-18452 125.25 54.86 ND ND ND ND
AD-18453 126.98 56.31 ND ND ND ND
AD-18454 113.88 52.48 ND ND ND ND
AD-18455 163.00 48.89 ND ND ND ND
AD-18456 15.70 10.52 ND ND ND ND
AD-18457 12.86 8.22 ND ND ND ND
AD-18458 13.00 7.00 ND ND ND ND
AD-18459 14.41 10.72 ND ND ND ND
AD-18460 121.16 74.87 ND ND ND ND
AD-18461 100.53 71.87 ND ND ND ND
AD-18462 47.75 29.35 ND ND ND ND
AD-18463 58.98 44.79 ND ND ND ND
Данные доза-ответ, используемые для идентификации IC50 для 5 TTR-дцРНК (AD-18258, AD-18274, AD-18324, AD-18328 и AD-18339), представлены подробно ниже в табл.9. Было определено, что все 5 siRNA имеют IC50, выраженные в пМ. Данные IC50 для дцРНК в табл.8 являются суммированием данных, представленных в табл.9 ниже.
- 65 036772
Таблица 9.
Данные доза-ответ для 5 TTR-дцРНК
1 % ингибирования относительно контроля AD-1955
Дуплекс AD-18258 Доза дуплекса (нМ)
Тип клеток Способ детектирования 10 1 0.5 0.1 0.05 0.01 0.005 0.001 0.0005 0.0001 0.00005 0.00001 IC50 (нМ)
HepG2 qPCR 14.4 14.1 16.2 23.9 27.26 40.19 68.46 78.1 74.48 104.37 98.28 113.68 0.007
HepG2 bDNA 14.3 14.5 11.1 12.8 18.82 19.77 51.21 56.03 63.63 58.35 43.64 51.05 0.005
НерЗВ qPCR 11.9 8.62 12.4 16.4 28.35 30.49 58.36 54.57 81.26 89.43 81.85 101.87 0.004
НерЗВ bDNA 7.65 7.5 11.3 12.6 28.85 27.89 64.57 73.48 72.03 91.44 86.71 89.31 0.005
| % ингибирования относительно контроля AD-1955
Дуплекс AD-18274 Доза дуплекса (нМ)
Тип клеток Способ детектирования 10 1 0.5 0.1 0.05 0.01 0.005 0.001 0.0005 0.0001 0.00005 0.00001 IC50 (нМ)
HepG2 qPCR 6.68 8.45 11.7 24.2 42.08 49.89 56.95 62.99 64.47 54.92 67.39 72.67 0.009
HepG2 bDNA 27.5 69 25.2 34.2 73.03 103.4 121.57 97.31 154.93 156.7 Nd 152.25 0.176
НерЗВ qPCR 7.58 17 15.6 43.9 42.22 60.55 78.8 77.81 79.97 85.84 86.13 83.99 0.036
НерЗВ bDNA 3.77 4.92 7.51 15 35.21 51.66 72.45 70.12 78.31 77.52 90.72 83.01 0.012
| % ингибирования относительно контроля AD-1955
Дуплекс AD-18324 Доза дуплекса (нМ)
Тип клеток Способ детектирования 10 1 0.5 0.1 0.05 0.01 0.005 0.001 0.0005 0.0001 0.00005 0.00001 IC50 (нМ)
HepG2 qPCR 2.07 2.27 2.74 6.36 8.18 15.23 28.82 52.79 90.86 94.72 116.07 98.97 0.002
HepG2 bDNA 14.5 7.88 11.8 15.9 17.2 46.44 40.4 91.86 0 95.57 0 52.15 0.006
НерЗВ qPCR 2.07 3.48 5.76 16.2 18.73 44.54 49.77 68.88 63.48 76.61 74.7 77.83 0.005
НерЗВ bDNA 3.48 3.8 5.15 15.2 30.84 55.36 74.75 99.39 88.89 110.83 96.55 110.26 0.014
1 % ингибирования относительно контроля AD-1955
Дуплекс AD-18328 Доза дуплекса (нМ)
Тип клеток Способ детектирования 10 1 0.5 0.1 0.05 0.01 0.005 0.001 0.0005 0.0001 0.00005 0.00001 IC50 (нМ)
HepG2 qPCR 5.85 3.97 3.32 5.62 8 16.75 55.01 39.76 122.41 102.37 114.02 124.09 0.003
HepG2 bDNA 12.3 10.7 10.7 11.9 20.06 25 69.52 57.29 112.28 98.14 142.26 148.92 0.004
НерЗВ qPCR 3.17 5.52 11.7 13.8 27.68 39.58 61.21 61.87 90.51 87.56 106.03 108.72 0.006
НерЗВ bDNA 3.08 3.66 4.19 7.25 21.05 22.1 73.74 63.19 105.55 96.27 105.97 96.46 0.006
| % ингибирования относительно контроля AD-1955
Дуплекс AD-18339 Доза дуплекса (нМ)
Тип клеток Способ детектирования 10 1 0.5 0.1 0.05 0.01 0.005 0.001 0.0005 0.0001 0.00005 0.00001 IC50 (нМ)
HepG2 qPCR 6.27 7.28 Nd 11 15.25 38.69 38.78 71.7 84.09 62.2 75.61 85.46 0.004
HepG2 bDNA 15.1 8.14 5.13 6.89 12.17 32.14 42.98 64.01 60.76 79.95 81.97 95.43 0.002
НерЗВ qPCR 8.3 9.47 13.2 34.5 44.54 77.38 81.04 81.41 93.95 81.04 75.61 78.28 0.018
НерЗВ bDNA 10.5 9.43 11.7 27.1 44.88 72.32 79.88 79.6 87.46 96.53 95.13 89.88 0.029
Суммирование результатов однократных доз для специфических для грызунов TTR-дцРНК (siRNA TTR) представлены ниже в табл. 10. Результаты однократных доз выражены в виде % siRNA TTR при 10 нМ. Эти результаты показывают, что некоторые специфические для грызунов siRNA TTR являются эффективными в супрессии эндогенной мРНК TTR крысы in vitro.
Таблица 10
Результаты однократных доз in vitro скрининга специфических для грызунов TTR-дцРНК (siRNA TTR)
Номер дуплекса % относительно контроля при 10 нМ Номер дуплекса % относительно контроля при 10 нМ
AD-18529 19.83 AD-18542 6.3
AD-18530 44.49 AD-18543 16.46
AD-18531 6.01 AD-18544 17.55
AD-18532 24.06 AD-18545 3.53
AD-18533 37.78 AD-18546 2.75
AD-18534 8.19 AD-18547 7.01
AD-18535 10.18 AD-18548 5.02
AD-18536 16.13 AD-18549 1.61
AD-18537 15.88 AD-18550 9.58
AD-18538 19.93 AD-18551 7.74
AD-18539 49.24 AD-18552 3.74
AD-18540 2.99 AD-18553 50.39
AD-18541 1.32 AD-18554 111.06
- 66 036772
Пример 3. In vitro анализ siRNA TTR для индукции секреции TNF-α и IFN-α
Для оценивания потенциала в отношении иммуностимуляции, siRNA TTR анализировали на индукцию секреции TNF-α и IFN-α.
РВМС человека выделяли из свежесобранных лейкоцитных пленок, полученных из здоровых доноров (Research Blood Components, Inc., Boston, MA) стандартным центрифугированием с использованием градиента плотности Ficoll-Hypaque. Свежевыделенные клетки (1х105/лунка/100 мкл) высевали в 96луночные планшеты и культивировали в среде RPMI 1640 GlutaMax (Invitrogen), дополненной 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сывороткой и 1% смесью антибиотиков/фунгицидов (Invitrogen).
siRNA трансфицировали в РВМС с использованием реагента трансфекции DOTAP (Roche Applied Science). DOTAP сначала разбавляли в Opti-MEM (Invitrogen) в течение 5 мин перед смешиванием с равным объемом Opti-MEM, содержащим siRNA. Комплексы siRNA/DOTAP инкубировали, как указано инструкциями изготовителя, и затем добавляли к РВМС (50 мкл на лунку), которые затем культивировали в течение 24 ч. siRNA положительного и отрицательного контроля включали во все анализы. AD-5048 использовали в качестве siRNA положительного контроля. AD-5048 соответствует последовательности, которая поражает Аполипопротеин В человека (Soutschek et al., 2004) и индуцирует секрецию как IFN-α, так и TNF-α в этом анализе. AD-1955, который не индуцирует секрецию IFN-α и TNF-α в этом анализе, использовали в качестве siRNA отрицательного контроля. Все siRNA использовали в конечной концентрации 133 нМ. Отношение РНК к реагенту трансфекции было равно 16,5 пмоль на мкг DOTAP.
Цитокины детектировали и определяли количественно в культуральных супернатантах с использованием коммерчески доступного набора ELISA для IFN-α (BMS216INST) и TNF-α (BMS223INST), оба из Bender MedSystems (Vienna, Austria). siRNA TTR индукция цитокинов выражена в виде процента продуцированных IFN-α или TNF-α относительно положительного контроля siRNA AD-5048.
Результаты стимуляции IFN-α и TNF-α количества siRNA TTR представлены на фиг. 1 (среднее из четырех повторностей лунок ± SD) и ниже в табл.11 (проценты в сравнении с AD-5048). Ни одна из оцениваемых siRNA TTR не индуцировала значимо секрецию TNF-α или IFN-α культивируемыми РВМС человека.
Таблица 11
Результаты стимуляции IFN-α и TNF-α siRNA TTR
Номер дуплекса IFN-α (% AD-5048) TNF-a (% AD-5048)
AD-18246 0 4
AD-18258 0 0
AD-18259 0 0
AD-18261 0 0
AD-18263 0 0
AD-18271 0 0
AD-18274 2 1
AD-18275 0 0
AD-18276 0 0
AD-18277 0 0
AD-18285 0 0
AD-18290 0 0
AD-18291 0 0
AD-18292 0 0
AD-18293 0 0
AD-18298 0 0
AD-18299 0 0
AD-18320 0 0
AD-18321 0 0
- 67 036772
AD-18323 0 0
AD-18324 0 0
AD-18325 0 0
AD-18326 0 0
AD-18327 0 0
AD-18328 0 0
AD-18330 0 0
AD-18332 1 0
AD-18333 0 1
AD-18334 0 1
AD-18336 1 0
AD-18339 0 0
AD-18340 0 0
AD-18342 0 0
AD-18343 0 0
AD-18345 0 0
AD-18353 0 0
AD-18448 0 0
AD-18456 0 0
AD-18457 0 0
AD-18458 0 0
AD-18459 0 0
Пять основных поражающих TTR дцРНК (TTR-siRNA) выбирали на основании IC50 в пМ-диапазоне в линиях печеночных клеток человека HepG2 и Нер3В и отсутствия иммуностимуляторной активности. Дуплексы без каких-либо ошибочных спариваний с большей вероятностью достигают значимого нокдауна транскрипта-мишени, чем дуплексы с ошибочными спариваниями между этим олиго и мРНК. Для возможности лучшей интерпретации данных перекрестно-видовой токсикологии и для получения наиболее широкой применимости к пациентам-людям, обычно предпочтительными являются дуплексы, которые имеют 10 0% идентичность в ортологических генах из крысы, собакоподобной обезьяны и человека, которые, кроме того, не имеют участоков-мишеней с известными полиморфизмами. Пять основных соединений отбирали на основании IC50 в линиях печеночных клеток в пМ-диапазоне, отсутствия иммуностимуляторной активности, специфичности в отношении TTR-транскриптов человек и отсутствия известных полиморфизмов (мутаций) в участоке мРНК, являющемся мишенью этого дуплекса. В случае TTR, не были обнаружены состоящие из 19 оснований олигонуклеотиды (олиго) с полной идентичностью в человеке, крысе и собакоподобной обезьяне.
Суммирование этих данных представлено в табл. 12, которая также включает в себя информацию об известных мутациях TTR в участоке, являющемся мишенью этого дуплекса и перекрестно-видовой реактивности.
- 68 036772
Таблица 12.
Суммирование данных для пяти наиболее сильнодействующих дцРНК TTR
Номер дуплекса IC50 (qPCR): нМ HepG2 IC50 (bDNA): нМ HepG2 IFNa/TNFa Мутации, не покрываемые Перекрестно-видовая реактивность
AD-18258 0.007 0.005 Отрицательные Ни одной мутации (некодирующий участок) Собакоподобная обезьяна: 1 ошибочное спаривание в положении 14 A—·· G Крыса: нет гомологии ни в одном положении
AD-18274 0.009 0.176 Отрицательные Lys70Asn; Val71Ala; Ile73Val; Asp74His Собакоподобная обезьяна: нет ошибочных спариваний Крыса: нет гомологии ни в одном положении
AD-18324 0.002 0.006 Отрицательные Ни одной мутации (некодирующий участок) Собакоподобная обезьяна: нет ошибочных спариваний Крыса: нет гомологии ни в одном положении
AD-18328 0.003 0.004 Отрицательные Ни одной мутации (некодирующий участок) Собакоподобная обезьяна: нет ошибочных спариваний Крыса: 7 ошибочных спариваний
AD-183 39 0.004 0.002 Отрицательные Ни одной мутации (некодирующий участок) Отсутствует
Пример 4. In vivo уменьшение мРНК TTR печени и белка TTR плазмы LNP01-18324, LNP0118328 и LNP01-18246 в трансгенных мышах
Две TTR-siRNA, AD-18324 и AD-18328, были выбраны для оценивания in vivo. Эти дуплексы проявляли сильный зависимый от дозы сайленсинг in vitro в линиях печеночных клеток (например, HepG2). Фиг. 2А и фиг. 2В показывают зависимости реакции от дозы в клетках HepG2 после трансфекции с использованием AD-18324 (фиг. 2А) или AD-18328 (фиг. 2В), где эти дозы выражены в нМ на х-оси и реакции выражены в виде остающейся фракции мРНК TTR относительно контроля, на у-оси. Было определено, что в клетках HepG2, IC50 AD-18324 и AD-18328 были равны 2 пМ и 3 пМ, соответственно. Сайтымишени TTR для обоих основных кандидатов дцРНК находятся в 3'-нетранслируемом участоке мРНК TTR, в участоке, где отсутствуют сообщенные мутации в литературе.
Последовательности каждой цепи этих двух основных кандидатов воспроизведены ниже из этих таблиц. Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая; Положение: положение 5'-основания на трансрипте NM 000371.2.
Номер дуплекса Цепь Номер олиго Положение Последовательность 5’-3’ SEQ ID NO :
AD-18324 S А-32337 509 GGAuuucAuGuAAccAAGAdTdT 1001
AD-18324 as А-32338 527 UCUUGGUuAcAUGAAAUCCdTdT 1002
AD-18328 s А-32345 518 GuAAccAAGAGuAuuccAudTdT 1009
AD-18328 as А-32346 536 AUGGAAuACUCUUGGUuACdTdT 1010
Кроме того, перекрестно-реактивная дцРНК TTR грызуна, AD-18246, была выбрана для дополнительного оценивания in vivo. AD-18246 поражает последовательность, начинающуюся в положении 88 открытой рамки считывания, где имеются три мутации, сообщенные в литературе. Кривая доза-ответ для AD-18246 в клетках HepG2 показана на Фиг. 3. AD-18246 является существенно менее сильной, чем AD18324 и AD-18328; было определено, что IC50 AD-18246 равна 265 пМ.
AD-18324, AD-18328 и AD-18246 вводили трансгенным мышам после приготовления в LNP01. 3-5месячным трансгенным мышам H129-mTTR-KO/iNOS-KO/hTTR (мышам с нокаутом транстиретина/ мышам с индуцированным нокаутом синтазы оксида азота/трансгенным мышам с транстиретином человека) вводили внутривенно (IV) 200 мкл LNP01-nриготовленную транстиретин-специфическую siRNA (AD-18324, AD-18328 или AD-18246), LNP01-приготовленную контрольную siRNA нацеленную на ген люциферазы не-человека (AD-1955) или ЗФР через хвостовую вену при концентрациях 1,0 мг/кг, 3,0 мг/кг или 6,0 мг/кг для siRNA AD-18324 и AD-18328, 3,0 мг/кг для siRNA AD-18246 и 6,0 мг/кг для siRNA AD-1955. LNP01 является липидоидной готовой формой, состоящей из ND98, холестерина и ПЭГцерамида С16.
Спустя приблизительно сорок часов, мышей анестезировали 200 мкл кетамина и затем обескровливали перерезанием правой хвостовой (каудальной) артерии. Выделяли цельную кровь и выделяли плазму и хранили при -80°С до анализа. Ткань печени собирали, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки.
Эффективность лечения оценивали посредством (i) измерения мРНК TTR в печени при 48 часах после введения дозы и (ii) измерения белка TTR в плазме перед кровопусканием и при 48 часах после введения дозы. Уровни мРНК TTR анализировали с использованием анализов разветвленной ДНК
- 69 036772
QuantiGene 2.0 (Panomics cat #: QS0011). Вкратце, пробы печени мыши измельчали и готовили лизаты ткани. Лизисную смесь печени (смесь из 1 объема лизисной смеси, 2 объемов не содержащей нуклеаз воды и 10 мкл Протеиназы-К/мл для конечной концентрации 20 мг/мл) инкубировали при 65°С в течение 35 мин. Затем, в этот захватывающий планшет добавляли 20 мкл Рабочего Набора зондов (TTR-зонд для гена-мишени и GAPDH для эндогенного контроля) и 80 мкл клеточного лизата. Захватывающие планшеты инкубировали при 55±1°С (приблизительно 16-20 ч). На следующий день, Захватывающие планшеты промывали 3 раза IX Промывочным буфером (не содержащей нуклеаз воды, Буферного Компонента 1 и Промывочного Буферного Компонента 2), затем сушили центрифугированием в течение 1 мин при 249g. Добавляли 100 мкл Рабочего пре-амплификаторного реагента в Захватывающий планшет, который заделывали алюминиевой фольгой и инкубировали в течение 1 ч при 55°С±1°С. После 1 ч стадию промывания повторяли, затем добавляли 100 мкл рабочего амплификаторного реагента. После 1 ч, стадии промывания и сушки повторяли и добавляли 100 мкл зонда метки. Затем эти планшеты промывали IX Промывочным буфером и сушили и затем добавляли к этим Захватывающим планшетам 100 мкл Субстрата. Захватывающие планшеты считывали с использованием люминометра SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) с последующей инкубацией в течение 5-15 мин. Данные bDNA анализировали вычитанием среднего фона из каждой из трех повторностей, усреднением величин полученных трех повторностей GAPDH (контрольного зонда) и TTR (экспериментального зонда), и затем вычислением отношения: (фон экспериментального зонда)/фон контрольного зонда).
Уровни TTR плазмы анализировали с использованием коммерчески доступного набора AssayMax Human Prealbumin ELISA Kit (AssayPro, St. Charles, MO, Catalog # EP3010-1) в соответствии с указаниями изготовителя. Вкратце, плазму мыши разбавляли 1:10000 в IX смеси разбавителей и добавляли в предварительно покрытые планшеты вместе со стандартами набора и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре с последующими 5Х промываниями промывочным буфером набора. Пятьдесят микролитров биотинилированного антитела преальбумина добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, с последующими 5Х промываниями промывочным буфером. Пятьдесят микролитров конъюгата стрептавидин-пероксидаза добавляли в каждую лунку и планшеты инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре с последующим промыванием, описанным выше. Эту реакцию проявляли добавлением 50 мкг на лунку хромогенного субстрата и инкубированием в течение 10 мин при комнатной температуре с остановкой реакции добавлением 50 мкл на лунку стопраствора. Поглощение при 450 нм считывали не микропланшет-ридере Versamax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) и данные анализировали с использованием пакета программного обеспечения Softmax 4.6 (Molecular Devices).
Было обнаружено, что LNP01-18324 и LNP01-18328 уменьшают уровни мРНК TTR печени (Фиг. 4А) и белка TTR плазмы (Фиг. 4В) зависимым от дозы образом при болюсном IV-введении. Было определено, что ED50 мРНК LNP01-18328 равна ~1 мг/кг, тогда как ED50 LNP01-18324 равна ~2 мг/кг. Действия LNP01-18324 и LNP01-18328 были специфическими, так как контроль, LNP01-1955 при б мг/кг, не влиял значимо на уровни мРНК TTR печени, в сравнении с группой ЗФР. LNP01-18324 и LNP01-18328 уменьшали уровни белка TTR плазмы относительно группы ЗФР, с эффективностями, которые были сходными с эффективностями на уровнях мРНК TTR. При 3 мг/кг LNP01-18246 уменьшал уровни мРНК TTR печени в меньшей степени, чем 3 мг/кг LNP01-18324 или LNP01-18328.
Эти результаты демонстрируют, что LNP01-18324 и LNP01-18 328, вводимые IV-болюсом, существенно уменьшают мРНК TTR человека, экспрессируемую печенью трансгенной мыши, что приводит к уменьшению белка TTR человека в кровотоке.
Пример 5. In vivo уменьшение мРНК TTR дикого типа в печени примата (не человека) посредством SNALP-18324 и SNALP-18328
Для оценивания эффективности TTR-siRNA AD-18324 и AD-18328 в приматах (не человеке) на уровнях мРНК TTR печени, эти siRNA готовили в SNALP и вводили 15-минутной IV-инфузией. Обезьянам Cynomolgus (Macaca fascicularis) (2-5 кг, 3 животных на группу) вводили 15-минутные IV-инфузии SNALP-18324 (0,3, 1,0 или 3,0 мг/кг), SNALP-18328 (0,3, 1 или 3 мг/кг) или SNALP-1955 (3 мг/кг, с отрицательным контролем, siRNA AD-1955, мишенью которой является ген люциферазы (немлекопитающего). При сорока восьми часах после введения доз, обезьян анестезировали натрийпентобарбиталом и проводили кровоизвлечение. Ткань печени для определения мРНК TTR собирали, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки.
Уровни мРНК TTR в печени анализировали при помощи специально разработанного анализа разветвленной ДНК, использующего технологию QuantiGene1,0. Вкратце, пробы печени обезьяны измельчали и готовили лизаты ткани. Лизисную смесь печени (смесь из 1 объема лизисной смеси, 2 объемов не содержащей нуклеаз воды и 10 мкл Протеиназы-К/мл для конечной концентрации 20 мг/мл) инкубировали при 65°С в течение 35 мин. Затем, в этот захватывающий планшет добавляли 20 мкл Рабочего Набора зондов (TTR-зонд для гена-мишени и GAPDH для эндогенного контроля) и 80 мкл клеточного лизата. Захватывающие планшеты инкубировали при 55±1°С (приблизительно 16-20 ч). На следующий день, Захватывающие планшеты промывали 3 раза IX Промывочным буфером (не содержащей нуклеаз воды,
- 70 036772
Буферного Компонента 1 и Промывочного Буферного Компонента 2), затем сушили центрифугированием в течение 1 минуты при 249g. Добавляли 100 мкл Рабочего пре-амплификаторного реагента в Захватывающий планшет, который заделывали алюминиевой фольгой и инкубировали в течение 1 ч при 55±1°С. После 1 ч стадию промывания повторяли и затем добавляли 100 мкл Рабочего амплификаторного реагента. После 1 ч стадии промывания и сушки повторяли и добавляли 100 мкл зонда метки. Захватывающие планшеты инкубировали при 55±1°С в течение 1 ч. Затем эти планшеты промывали IX Промывочным буфером и сушили и затем добавляли к этим Захватывающим планшетам 100 мкл Субстрата.
Захватывающие планшеты считывали с использованием люминометра SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) с последующей инкубацией в течение 5-15 мин. Данные bDNA анализировали (i) вычитанием среднего фона из каждой из трех повторностей, (ii) усреднением величин полученных трех повторностей GAPDH (контрольного зонда) и TTR (экспериментального зонда), и затем (iii) вычислением отношения: (фон экспериментального зонда)/фон контрольного зонда).
Эти результаты показаны на фиг. 5. SNALP-18324 и SNALP-18328 уменьшали уровни мРНК TTR в печени зависимым от дозы образом, в сравнении с отрицательным контролем SNALP-1955. Было определено, что ED50 SNALP-18328 и SNALP-18324 были равны -0,3 и ~1 мг/кг, соответственно.
Эти результаты демонстрируют, что SNALP-18324 и SNALP-18328 являются эффективными в супрессии мРНК TTR дикого типа в печени примата (не человека) при введении IV-инфузией.
Пример 6. In vivo уменьшение мутантной мРНК и мутантного белка (V30M)-TTR посредством SNALP-18328 в трансгенной мыши
Для оценивания эффективности TTR-siRNA AD-18328 на мутантной мРНК (V30M) TTR в печени и мутантном белке (V30M) TTR в сыворотке, AD-18328 готовили в SNALP и вводили посредством IVболюса в V30M hTTR-трансгенную мышь. 8-12-недельным V30M hTTR-трансгенным мышам (5 животных на группу) внутривенно (IV) вводили 200 мкл SNALP-18328 (0,03, 0,3 или 3 мг/кг), SNALP-1955 (3 мг/кг с отрицательным контролем siRNA AD-1955, мишенью которой является ген люциферазы (немлекопитающего)), или ЗФР. Используемые мыши были штаммом Mus musculus H129-hTTR KO из Института молекулярной и клеточной биологии, Porto, Portugal. Вкратце, трансгенных мышей hTTR H129 скрещивали с мышами Н129 эндогенный TTR KO (нуль-мышами для генерирования H129-hTTR трансгенных мышей в генетическом фоне нуль-мышей TTR (Maeda, S., (2003), Use of genetically altered mice to study the role of serum amyloid P component in amyloid deposition. Amyloid Suppl. 1, 17-20).
При 48 ч после инъекции, животным во всех пяти группах обработки вводили летальную дозу кетамина/ксилазина. Пробы сыворотки собирали и хранили при -80°С до анализа. Ткань печени собирали, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки.
Для количественного определения мРНК TTR, замороженную ткань печени измельчали в порошок и готовили лизаты. Уровни мРНК TTR относительно уровней мРНК GAPDH определяли в этих лизатах с использованием анализа разветвленных ДНК (QuantiGene Reagent System, Panomics, Fremont, CA). Вкратце, анализ QuantiGene (Genospectra) использовали для количественного определения уровней мРНК в лизатах проб ткани в соответствии с инструкциями изготовителя. Средний уровень мРНК TTR нормализовали относительно среднего уровня мРНК GAPDH для каждой пробы. Средние значения нормализованных величин групп затем дополнительно нормализовали относительно средней величины для обработанной ЗФР группы для получения относительного уровня экспрессии мРНК TTR.
Для количественного определения белка TTR, сыворотку анализировали с использованием набора AssayPro (St. Charles, МО) Assaymax PreAlbumin ELISA, в соответствии с протоколом изготовителя.
Эти результаты показаны на фиг. 6А и фиг. 6В для мРНК печени и белка сыворотки, соответственно. Обработанные SNALP-18 328 V30M hTTR-трансгенные мыши имели зависимое от дозы и значимое уменьшение уровней мРНК TTR печени относительно группы ЗФР-контроля, достигая максимального уменьшения 97% (р<0,001) при 3 мг/кг SNALP-18328, и 50% уменьшения (ED50) при ~0,15 мг/кг SNALP-18328. Белок TTR сыворотки также подавлялся зависимым от дозы образом, с максимальным уменьшением белка TTR сыворотки 99% (р<0,01) (относительно уровней перед введением дозы) при 3 мг/кг SNALP-18328, что согласовалось с уменьшением уровней мРНК TTR. SNALP-1955 при 3 мг/кг не имел статистически значимого действия ни на уровни мРНК TTR, ни на уровни белка, в сравнении с ЗФР.
Эти результаты демонстрируют, что SNALP-18328, при введении IV, является активным в супрессии мутантной мРНК V30M TTR в печени трансгенной мыши, что приводит к уменьшению мутантного белка V30M TTR в кровотоке.
Пример 7. Продолжительность супрессии мРНК и белка TTR посредством SNALP-18328 в трансгенной мыши
Для оценивания продолжительности супрессии мРНК и белка TTR посредством SNALP-18328, AD18328 готовили в SNALP и вводили в виде IV-болюса V30M hTTR-трансгенным мышам. В различных временных точках после введения дозы определяли количественно уровни мРНК TTR в печени и уровни белка TTR сыворотки. 8-12-недельным V30M hTTR-трансгенным мышам (4 животных на группу) вводили внутривенно (IV) 200 мкл SNALP-18328 (1 мг/кг) или SNALP-1955 (1 мг/кг, с отрицательным контро
- 71 036772 лем siRNA AD-1955, мишенью которой является ген люциферазы (не млекопитающего). Используемые мыши были штаммом Mus musculus H129-hTTR KO из Института молекулярной и клеточной биологии, Porto, Portugal. Вкратце, трансгенных мышей hTTR H129 скрещивали с мышами H129 эндогенный TTR КО (нуль-мышами для генерирования H129-hTTR трансгенных мышей в генетическом фоне нуль-мышей TTR (Maeda, S., (2003), Use of genetically altered mice to study the role of serum amyloid P component in amyloid deposition. Amyloid Suppl. 1, 17-20). В дни 3, 8, 15 или 22 после введения дозы, животным обеиз групп давали леальную дозу кетамина/ксилазина. Пробы сыворотки собирали и хранили при -80°С до анализа. Ткань печени собирали, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки.
Для количественного определения мРНК TTR замороженную ткань печени измельчали в порошок и готовили лизаты. Уровни мРНК TTR относительно уровней мРНК GAPDH определяли в этих лизатах с использованием анализа разветвленных ДНК (QuantiGene Reagent System, Panomics, Fremont, CA). Вкратце, анализ QuantiGene (Genospectra) использовали для количественного определения уровней мРНК в лизатах проб ткани в соответствии с инструкциями изготовителя. Средний уровень мРНК TTR нормализовали относительно среднего уровня мРНК GAPDH для каждой пробы. Средние значения нормализованных величин групп затем дополнительно нормализовали относительно средней величины для обработанной ЗФР группы для получения относительного уровня экспрессии мРНК TTR.
Для количественного определения белка TTR, сыворотку анализировали с использованием набора AssayPro (St. Charles, МО) Assaymax PreAlbumin ELISA, в соответствии с протоколом изготовителя.
Эти результаты показаны на фиг. 7А и фиг. 7В для мРНК печени и белка сыворотки, соответственно. Единственное IV-болюсное введение SNALP-18328 в hTTR V30М-трансгенную мышь приводило к продолжительному ингибированию уровней мРНК TTR в печени и уровней белка TTR в сыворотке. В сравнении с контрольной группой (1 мг/мл SNALP-1955), однократное IV-введение SNALP-18328 при 1 мг/кг значимо уменьшало относительные уровни мРНК TTR в дни 3, 8, 15 и 22 после введения дозы на 96% (р<0,001), 90% (р<0,001), 82% (р<0,001) и 73% (р<0,001), соответственно, и не возвращало к уровням фона в конце этого исследования (день 22 после введения дозы). Уровни белка также уменьшались с максимальным уменьшением TTR сыворотки 97% (р<0,001) (относительно SNALP-1955) в день 3 после введения дозы. В дни 8, 15 и 22 после введения дозы, уровни белка TTR были подавлены на 72% (р<0,05), 32% (р<0,05) и 40% (р<0,001), соответственно, относительно SNALP-1955.
Эти результаты демонстрируют, что единственное IV-введение SNALP-18328 производит продолжительную супрессию мРНК печени-мишени и уровней белка сыворотки в V30M hTTR-трансгенной мыши, со значимыми уменьшениями как мРНК TTR печени, так и белка TTR сыворотки при 22 днях после введения дозы.
Пример 8. Продолжительность супрессии белка TTR сыворотки посредством SNALP-18328 в примате (не человеке)
Для оценивания продолжительности супрессии белка TTR сыворотки посредством SNALP-18328, AD-18328 готовили в SNALP и вводили IV-инфузией приматам (не человеку). В различных временных точках после введения дозы определяли количественно уровни белка.
Обезьянам Cynomolgus (Macaca fascicularis) (n=5 животных на группу для групп SNALP-18 32 8 и n=3 животных на группу для SNALP-1955- и ЗФР-групп) вводили 15-минутную инфузию SNALP-18328 (0,3, 1 или 3 мг/кг), SNALP-1955 (3 мг/кг) с отрицательным контролем siRNA AD-1955, который поражает ген люциферазы не-человека) или ЗФР. В дни 0, 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10 и 14 фазы введения доз собирали пробы сыворотки и хранили при -80°С до анализа.
Для анализа уровней белка TTR в пробах сыворотки использовали Вестерн-блот-анализ. Пробы сыворотки из каждой группы объединяли и разбавляли 1:1 буфером Леммли для проб (β-меркаптоэтанол добавляли в разведении 1:20). Эти пробы нагревали при 95°С в течение 10 мин. 12,5 мкл каждой пробы наносили в каждую дорожку 10-20% преп-геля Criterion (Biorad, Hercules, СА) и разделяли электрофорезом на ДСН-ПААГ при 120 В в течение 1,5 ч, затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану с использованием полусухой системы при 15 В в течение 1 ч. Эту мембрану блокировали в течение ночи при 4°С в блокирующем буфере LiCOR (Lincoln, NE), разведенном 1:1 1X ЗФР. Этот блот зондировали сначала первичными антителами (козьими анти-TTR-антителами из Santa Cruz (Santa Cruz, CA) при разведении 1:1000 в блокирующем буфере LiCOR/ЗФР на качалке в течение 1 ч при комнатной температуре. Блоты промывали 4Х ЗФР + 0,2% Твин 20 (10 мин на одну промывку). Добавляли флуоресцентные меченые вторичные антитела (антитела против козьих антител 680 нМ из Invitrogen (Carlsbad, CA) при разведении 1:10000 в блокирующем буфере LiCOR/ЗФР и этот блот инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. После инкубирования, блоты промывали 4х ЗФР+0,2% Твин 20, с последующей одной промывкой IX ЗФР. Для детектирования белковых полос использовали систему визуализации Odyssey Infrared LiCOR. Мономер TTR мигрирует при 15 кДа.
Эти результаты показаны на фиг. 8. Уровни белка TTR сыворотки обнаруживали зависимое от дозы уменьшение с 1 или 3 мг/кг SNALP-18328, в сравнении с уровнями перед введением дозы (в день 0). Продолжительность супрессии после однократного IV-введения SNALP-18 328 равна по меньшей мере 14 дням после обработки 1 или 3 мг/кг SNALP-18328.
- 72 036772
Эти результаты демонстрируют, что однократное IV-введение SNALP-18 32 8 производит продолжительную супрессию белка TTR в кровотоке в примате (не человеке) (Масаса fascicularis), со значимым уменьшением белка TTR при 14 днях после введения дозы.
Пример 9. In vivo уменьшение мутантного (V30M) TTR в периферических тканях посредством SNALP-18328 в трансгенной мыши
Для оценивания эффективности SNALP-18328 в уменьшении TTR в периферических тканях, мышей с нокаутом hTTR V30M/HSF-1 оценивали при помощи иммуногистохимического окрашивания на TTR. Двухмесячным мышам с нокаутом hTTR V30M/HSF-1 (Maeda, S., (2003), Use of genetically altered mice to study the role of serum amyloid P component in amyloid deposition. Amyloid Suppl. 1, 17-20) вводили IV-болюс 3 мг/кг SNALP-18328 (12 животных), З мг/кг SNALP-1955 (с отрицательным контролем siRNA AD-1955, мишенью которого является ген люциферазы (не млекопитающего), 4 животных) или ЗФР (4 животных) один раз каждые две недели в виде четырех доз в целом в дни 0, 14, 28 и 42. Уровни мРНК TTR печени и TTR-иммунореактивность во множественных периферических тканях оценивали при 8 неделях после введения первой дозы в день 56.
Мышей анестезировали 1 мг/кг медетомидина и вводили летальную дозу кетамина. Собирали представляющие интерес ткани и органы. Для иммуногистохимии пищевод (Е), желудок (S), кишечник (двенадцатиперстную кишку (II) и ободочную кишку (14)), нерв (N) и дорсальные ганглии блуждающего нерва (D) фиксировали в нейтральном забуференном формалине и заливали в парафин. Для детектирования TTR кроличье первичное антитело против TTR человека (1:1000, DAKO, Denmark) и антикроличье биотин-конъюгированное вторичное антитело (1:20 Sigma, USA) исследовали мечением экстравидином для окрашивания белка TTR. Эту реакцию проявляли 3-амино-9-этилкарбаксолом, АЕС (Sigma, USA) . Полуколичественный анализ иммуногистохимических предметных стекол выполняли с использованием программы Scion image quant, которая измеряет площадь, занимаемую цветом субстратной реакции, и нормализует эту величину относительно общей площади изображения. Средние величины % занимаемой площади изображены с соответствующим стандартным отклонением. Каждую ткань животного оценивали в четырех различных зонах. Присутствие TTR человека в парасимпатических ганглиях желудка и кишечника исследовали двойным иммунофлуоресцентным окрашиванием кроличьими антителами против TTR человека (1:1000, DAKO, Denmark) и мышиным анти-PGP9.5-αнтителом (1:40, Serotec, USA) в качестве первичных антител; вторичными антителами были, соответственно: антикроличье антитело Alexa Fluor 488 (Molecular probes, UK) и козье антимышиное антитело Alexa Fluor 568 (Molecular probes, UK). Предметные стекла готовили с vectashield (Vector) и визуализировали в микроскопе Zeiss Cell Observer System (Carl Zeiss, Germany), оборудованном фильтрами для FITC и родамина.
Эти результаты построены в виде диаграмм на фиг. 9. В отличие от обработанных ЗФР и SNALP1955 животных, обработанные SNALP-18328 животные имели значимое уменьшение TTRиммунореактивности во всех исследованных тканях (пищеводе (Е), желудке (S), кишечнике (двенадцатиперстной кишке (II) и ободочной кишке (14)), нерве (N) и дорсальных ганглиях блуждающего нерва (D).
Эти результаты демонстрируют, что введение SNALP-18328 мышам с нокаутом hTTR V30M/HSF-1 вызывает значимое уменьшение белка TTR в периферических тканях и органах, включающих в себя пищевод, желудок, кишечник (двенадцатиперстную кишку и ободочную кишку), нерв и дорсальный ганглий блуждающего нерва.
Пример 10. In vivo уменьшение мРНК TTR дикого типа в печени примата (не человека) посредством XTC-SNALP-18328
Для оценивания эффективности новой состоящей из липидных наночастиц готовой формы XTCSNALP для доставки siRNA в примата (не человека) siRNA TTR AD-18328 готовили в XTC-SNALP (XTC-SNALP-18328) и вводили 15-минутной IV-инфузией и определяли количественно мРНК TTR печени. Обезьянам Cynomolgus (Macaca fascicularis) вводили 15-минутными IV-инфузиями XTC-SNALP18328 (0,03, 0,1, 0,3 или 1 мг/кг) или XTC-SNALP-1955 (1 мг/кг, с отрицательным контролем siRNA AD1955, мишенью которой является ген люциферазы (не млекопитающего). При сорока восьми часах после введения доз, обезьян анестезировали натрий-пентобарбиталом и выполняли кровоизвлечение. Ткань печени для определения мРНК собирали, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки. Способы, использованные для количественного определения мРНК TTR в ткани печени, были сходными со способами, описанными в примере 5 выше.
Эти результаты показаны на фиг. 10. XTC-SNALP-18328 уменьшал уровни мРНК TTR в печени зависимым от дозы образом, в сравнении с отрицательным контролем XTC-SNALP-1955. Было определено, что ЕС50 мРНК была равна ~0,1 мг/кг XTC-SNALP-18328.
Эти результаты демонстрируют, что XTC-SNALP-18328 является эффективным в супрессии мРНК TTR дикого типа в печени примата (не человека) при введении IV-инфузией.
Пример 11. In vivo уменьшение мРНК TTR дикого типа в печени примата (не человека) посредством LNP09-18328 и LNP11-18328
Для оценивания эффективности двух новых состоящих из липидных наночастиц готовых форм, LNP09 и LNP11, для доставки siRNA в примата не человека, TTR siRNA AD-18328 готовили в LNP09
- 73 036772 (LNP09-18328) или LNP11 (LNP11-18328) и вводили 15-минутной IV-инфузией и анализировали уровни мРНК TTR печени и уровни белка TTR в сыворотке. Обезьянам Cynomolgus monkeys {Масаса fascicularis) вводили 15-минутные IV-инфузии LNP09-18328 (0,03, 0,1 или 0,3 мг/кг), LNP11-18328 (0,03, 0,1 или 0,3 мг/кг) или ЗФР. Пробы биопсии печени собирали при 48 ч после введения доз, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки. Сыворотку собирали перед введением доз (перед кровопусканием) и в дни 1, 2, 4, 7, 14, 21 и 28 после введения доз и хранили при -80°С до обработки. Способы, использованные для количественного определения мРНК TTR в ткани печени и оценивания белка TTR в сыворотке, были сходными со способами, описанными в примерах 5 и 8 выше.
Эти результаты показаны на фиг. 11А для мРНК и на фиг. 11В для белка. Обработанные LNP0918328 и LNP11-18328 животные обнаруживали зависимое от дозы уменьшение уровней мРНК TTR в печени с достижением максимального уменьшения при 0,3 мг/кг ~85% (LNP09-18328) и ~90% (LNP1118328) мРНК относительно ЗФР-контроля. Было определено, что ЕС50 мРНК была равна ~0,02 мг/кг как для LNP09-18328, так и для LNP11-18328. В день 7 после введения доз пробы сыворотки обнаруживали зависимое от дозы уменьшение белка TTR для 0,1 и 0,3 мг/кг LNP09-18328 и LNP11-18328, в сравнении с уровнями ЗФР-контроля. Фиг. 11С показывает уменьшение уровней белка TTR дозой 0,3 мг/кг LNP0918328, которое удерживалось на протяжении по меньшей мере 28 дней после введения доз, в сравнении с группой ЗФР-контроля и в сравнении с пробами перед кровопусканием.
Эти результаты демонстрируют, что LNP09-18328 и LNP11-18328 являются эффективными в супрессии мРНК TTR в печени примата не человека и белка TTR дикого типа в кровотоке при введении IVинфузией. Кроме того, супрессия с использованием LN09-18328 является продолжительной, сохраняющейся в течение по меньшей мере 2 8 дней после IV-инфузии.
Пример 12. Синтез черепичных (tiled) последовательностей TTR
Конструировали набор TTR-дуплексов (черепичных дуплексов), которые поражали ген TTR вблизи участка-мишени AD-18328, который поражает ген TTR человека начиная с нуклеотида 628 NM_000371.3.
В приведенных ниже примерах, нумерация, представляющая положение 5'-основания siRNA на транскрипте, основана на NM_000371.3 (FIG. 12; SEQ ID NO:1331). В показанных выше примерах, эта нумерация для siRNA, поражающей siRNA человека, была основана на NM_000371.2 (Фиг. 13А). NM_000371.3 удлиняет последовательность 5'UTR на 110 оснований в сравнении с NM 000371.2, как показано на фиг. 14. Таким образом, в качестве примера, исходным положением AD-18328 является 628 на NM_000371.3 и 518 на NM_000371.2 (фиг. 14). Черепичные последовательности TTR синтезировали на синтезаторе MerMade 192 в 1 мкмоль-масштабе. Для всех последовательностей в этом списке применяли химию 'endolight', подробно описанную ниже.
Все пиримидины (цитозин и уридин_ в смысловой цепи содержали 2'-О-Метил-основания (2'-OМетил С и 2'-O-Метил U).
В антисмысловой цепи, пиримидины, смежные (непрерываемые) (в направлении 5') с рибо-Ануклеозидом, заменяли их соответствующими 2-O-Метилнуклеозuдами.
Вводили удлинение из двух оснований dTdT на 3'-конце как смысловых, так и антисмысловых последовательностей.
Этот файл последовательностей превращали в текстовой файл, чтобы сделать его совместимым с вводом в программное обеспечение (программу) синтеза MerMade 192.
Синтез, расщепление и удаление защитных групп:
Этот синтез последовательностей TTR использовал синтез олигонуклеотидов на твердой подложке при помощи фосфороамидитной химии. Этот синтез последовательностей выполняли в 1 мкм-масштабе в 96-луночных планшетах. Амидитные растворы готовили в концентрации 0,1 М и в качестве активатора использовали этилтиотетразол (0,6 М в ацетонитриле). Синтезированные последовательности отщепляли и освобождали от защитных групп в 96-луночных планшетах с использованием метиламина в первой стадии и фторидного реагента во второй стадии. Эти неочищенные последовательности осаждали с использованием смеси ацетон:этанол (80:20) и осадок ресуспендировали в 0,1 М натрий-ацетатном буфере. Пробы из каждой последовательности анализировали при помощи LC-MS для подтверждения идентичности, UV для количественного определения и с использованием выбранного набора проб при помощи IEX-хроматографии для определения чистоты.
Очистка и обессоливание:
Черепичные последовательности TTR очищали на системе очистки АКТА explorer с использованием колонки Source 15Q. Во время очистки температуру колонки поддерживали при 65°С. Инжекцию и сбор проб выполняли в 96-луночных планшетах (с глубиной лунок 1,8 мл). В этом элюенте собирали единственный пик, соответствующий полноразмерной последовательности.
Очищенные последовательности обессоливали на колонке Sephadex
G25 с использованием очищающего агента АКТА. Обессоленные последовательности TTR анализировали на концентрацию (УФ-измерением при А260) и чистоту (ионообменной ВЖХ). Затем эти одиночные цепи представляли для отжига.
- 74 036772
Одиночные цепи и дуплексы TTR:
Подробный список черепичных дуплексов и соответствующих одиночных цепей TTR (смысловых и антисмысловых) показан в таблице ниже (табл.13).
Таблица 13.
Черепичные дуплексы и соответствующие одиночные цепи TTR
Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая; Положение: положение 5'-основания на транскрипте (NM_000371.3, SEQ ID NO:1331).
Номер дуплекса Положение Номер олиго Цепь Последовательность (5’-3’) SEQ ID NO:
AD-18323 618 A-32335 S GGGAuuucAuGuAAccAAGdTdT 1332
A-32336 AS CUUGGUuAcAUGAAAUCCCdTdT 1333
AD-18324 619 A-32337 S GGAuuucAuGuAAccAAGAdTdT 1334
A-32338 AS UCUUGGUuAcAUGAAAUCCdTdT 1335
AD-23000 620 A-42927 S GAuuucAuGuAAccAAGAGdTdT 1336
A-42928 AS CUCUUGGUuAcAUGAAAUCdTdT 1337
AD-23001 621 A-42929 S AuuucAuGuAAccAAGAGudTdT 1338
A-42930 AS ACUCUUGGUuAcAUGAAAUdTdT 1339
AD-23002 622 A-42931 S u u u c Au G u AAccAAG AG u AdT dT 1340
A-42932 AS uACUCUUGGUuAcAUGAAAdTdT 1341
AD-23003 623 A-42933 S uucAuGuAAccAAGAGuAudTdT 1342
A-42934 AS AuACUCUUGGUuAcAUGAAdTdT 1343
AD-18325 624 A-32339 S u c Au G u AAccAAG AG u Au u dTdT 1344
A-32340 AS AAuACUCUUGGUuAcAUGAdTdT 1345
AD-23004 625 A-42935 S cAuGuAAccAAGAGuAuucdTdT 1346
A-42936 AS GAAuACUCUUGGUuAcAUGdTdT 1347
AD-18326 626 A-32341 S AuGuAAccAAGAGuAuuccdTdT 1348
A-32342 AS GGAAuACUCUUGGUuAcAUdTdT 1349
AD-18327 627 A-32343 S uGuAAccAAGAGuAuuccAdTdT 1350
A-32344 AS UGGAAuACUCUUGGUuAcAdTdT 1351
AD-23005 628 A-42937 S uAAccAAGAGuAuuccAuudTdT 1352
A-42938 AS AAUGGAAuACUCUUGGUuAdTdT 1353
AD-23006 629 A-42939 S AAccAAGAGuAuuccAuuudTdT 1354
A-42940 AS AAAUGGAAuACUCUUGGUUdTdT 1355
AD-23007 631 A-42941 S AccAAGAGuAuuccAuuuudTdT 1356
A-42942 AS AAAAUGGAAuACUCUUGGUdTdT 1357
AD-23008 632 A-42943 S ccAAGAGuAuuccAuuuuudTdT 1358
- 75 036772
А-42944 AS AAAAAUGGAAuACUCUUGGdTdT 1359
AD-23009 633 А-42945 S cAAGAGuAuuccAuuuuuAdTdT 1360
А-42946 AS uAAAAAUGGAAuACUCUUGdTdT 1361
AD-23010 634 А-42947 S AAG AG u Au u ccAu uuuuAcdTdT 1362
А-42948 AS GuAAAAAUGGAAuACUCUUdTdT 1363
AD-23011 635 А-42949 S AGAGuAuuccAuuuuuAcudTdT 1364
А-42950 AS AGuAAAAAUGGAAuACUCUdTdT 1365
AD-23012 636 А-42951 S GAGuAuuccAuuuuuAcuAdTdT 1366
А-42952 AS uAGuAAAAAUGGAAuACUCdTdT 1367
AD-23013 637 А-42953 S AGuAuuccAuuuuuAcuAAdTdT 1368
А-42954 AS UuAGuAAAAAUGGAAuACUdTdT 1369
AD-23014 638 А-42955 S GuAuuccAuuuuuAcuAAAdTdT 1370
А-42956 AS UUuAGuAAAAAUGGAAuACdTdT 1371
AD-23015 639 А-42957 S uAuuccAuuuuuAcuAAAGdTdT 1372
А-42958 AS CUUuAGuAAAAAUGGAAuAdTdT 1373
AD-23016 640 А-42959 S AuuccAuuuuuAcuAAAGcdTdT 1374
А-42960 AS GCUUuAGuAAAAAUGGAAUdTdT 1375
AD-23017 641 А-42961 S uuccAuuuuuAcuAAAGcAdTdT 1376
А-42962 AS UGCUUuAGuAAAAAUGGAAdTdT 1377
AD-23018 642 А-42963 S uccAuuuuuAcuAAAGcAGdTdT 1378
А-42964 AS CUGCUUuAGuAAAAAUGGAdTdT 1379
AD-23019 643 А-42965 S ccAuuuuuAcuAAAGcAGudTdT 1380
А-42966 AS ACUGCUUuAGuAAAAAUGGdTdT 1381
AD-23020 644 А-42967 S cAuuuuuAcuAAAGcAGuGdTdT 1382
А-42968 AS cACUGCUUuAGuAAAAAUGdTdT 1383
AD-23021 645 А-42969 S AuuuuuAcuAAAGcAGuGudTdT 1384
А-42970 AS AcACUGCUUuAGuAAAAAUdTdT 1385
AD-23022 646 А-42971 S uuuuuAcuAAAGcAGuGuudTdT 1386
А-42972 AS AAcACUGCUUuAGuAAAAAdTdT 1387
AD-23023 647 А-42973 S uuuuAcuAAAGcAGuGuuudTdT 1388
А-42974 AS AAAcACUGCUUuAGuAAAAdTdT 1389
AD-23024 648 А-42975 S uuuAcuAAAGcAGuGuuuudTdT 1390
А-42976 AS AAAAcACUGCUUuAGuAAAdTdT 1391
AD-23025 649 А-42977 S uuAcuAAAGcAGuGuuuucdTdT 1392
А-42978 AS GAAAAcACUGCUUuAGuAAdTdT 1393
AD-23026 650 А-42979 S uAcuAAAGcAGuGuuuucAdTdT 1394
А-42980 AS UGAAAAcACUGCUUuAGuAdTdT 1395
AD-23027 651 А-42981 S AcuAAAGcAGuGuuuucAcdTdT 1396
А-42982 AS GUGAAAAcACUGCUUuAGUdTdT 1397
AD-23028 652 А-42983 S cuAAAGcAGuGuuuucAccdTdT 1398
А-42984 AS GGUGAAAAcACUGCUUuAGdTdT 1399
AD-18330 653 А-32349 S uAAAGcAGuGuuuucAccudTdT 1400
А-32350 AS AGGUGAAAAcACUGCUUuAdTdT 1401
AD-23029 654 А-42985 S AAAGcAGuGuuuucAccucdTdT 1402
А-42986 AS GAGGUGAAAAcACUGCUUUdTdT 1403
AD-23030 655 А-42987 S AAG cAGuGuuuucAccucAdTdT 1404
А-42988 AS UGAGGUGAAAAcACUGCUUdTdT 1405
AD-23031 656 А-42989 S AGcAGuGuuuucAccucAudTdT 1406
А-42990 AS AUGAGGUGAAAAcACUGCUdTdT 1407
AD-18328 628 А-32345 S GuAAccAAGAGuAuuccAudTdT 1408
А-32346 AS AUGGAAuACUCUUGGUuACdTdT 1409
Пример 13. In vitro скрининг черепичных (tiled) siRNA TTR
Черепичные дуплексы TTR анализировали в клетках Нер3В на ингибирование эндогенной экспрессии TTR с использованием ПЦР-анализов реального времени.
Культивирование клеток и трансфекция:
Клетки Нер3В (АТСС, Manassas, VA) выращивали почти до конфлюэнтности при 37°С в атмосфере
- 76 036772
5% СО2 в минимальной питательной среде Игла (ЕМЕМ, АТСС), дополненной 10% ФТС, стрептомицином и глутамином (АТСС), перед высвобождением из планшета трипсинизацией. Обратную транскрипцию проводили добавлением 5 мкл Opti-MEM к 5 мкл каждой из siRNA в индивидуальных лунках 96луночного планшета. Добавляли 10 мкл Opti-MEM плюс 0,2 мкл Липофектамина RNAiMax на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150) и эту смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли 80 мкл полной среды для выращивания, описанной выше, но без антибиотиков, содержащей 2,0х104 клеток Нер3В. Клетки инкубировали в течение 24 ч перед очисткой РНК. Эксперименты с отдельными дозами выполняли при конечной концентрации дуплекса 0,1 или 10 нМ.
Выделение тотальной РНК с использованием набора для выделения РНК MagMAX-96 (Applied Biosystems, Foster City CA. part #: AM 1830):
Клетки собирали и лизировали в 140 мкл раствора для лизиса/связывания, затем перемешивали в течение 1 минуты при 850 об/мин с использованием Термомиксера Эппендорфа (скорость смешивания была одной и той же на протяжении этого процесса). Двадцать микролитров магнитных гранул и смеси для усиления лизиса/связывания добавляли в лизат клеток и смешивали в течение 5 мин. Магнитные гранулы извлекали при помощи магнитного устройства и супернатант удаляли без нарушения этих гранул. После удаления супернатанта магнитные гранулы промывали Промывочным раствором 1 (дополненным изопропанолом) и смешивали в течение 1 мин. Гранулы опять собирали и супернатант удаляли. Затем гранулы промывали 150 мкл Промывочного раствора 2 (дополненного этанолом), собирали и супернатант удаляли. Затем к этим гранулам добавляли 50 мкл ДНКазной смеси (МадМах turbo-буфер для ДНКазы и ДНКаза Turbo) и перемешивали в течение 10-15 мин. После перемешивания, добавляли 100 мкл раствора для повторного связывания РНК и перемешивали в течение 3 мин. Супернатант удаляли и магнитные гранулы опять промывали 150 мкл Промывочного раствора 2 и смешивали в течение 1 мин и супернатант удаляли полностью. Эти магнитные гранулы смешивали в течение 2 мин для высыхания перед элюцией РНК 50 мкл воды.
Синтез кДНК с использованием набора для высокоэффективной обратной транскрипции кДНК ABI (Applied Biosvstems. Foster City. CA. Cat #4368813):
Основную смесь 2 мкл 10Х буфера, 0,8 мкл 25х dNTP, 2 мкл случайных праймеров, 1 мкл обратной транскриптазы, 1 мкл ингибитора РНКаз и 3,2 мкл Н2О на одну реакцию добавляли в 10 мкл тотальной РНК. кДНК генерировали с использованием термоциклера Bio-Rad С-1000 или S-1000 (Hercules, CA) посредством следующих стадий: 25°С 10 мин, 37°С 120 мин, 85°С 5 с, 4°С выдерживание.
ПЦР реального времени:
мкл кДНК добавляли к основной смеси, содержащей 0,5 мкл зонда GAPDH TaqMan (Applied Biosystems Cat # 43263173E), 0,5 мкл зонда TTR TaqMan (Applied Biosystems cat # HS00174914 Ml) и 10 мкл основной смеси Roche-зондов (Roche Cat # 04887301001) на лунку в 384-луночном планшете LightCycler 480 (Roche cat # 0472974001). ПЦР реального времени выполняли в установке LightCycler 480 Real Time PCR (Roche). Каждый дуплекс испытывали в двух независимых трансфекциях и каждую трансфекцию анализировали в двух повторностях.
Данные реального времени анализировали с использованием ΔΔCt-способа. Каждую пробу нормализовали относительно экспрессии и нокдаун оценивали относительно клеток, трансфицированных ненацеливающим дуплексом AD-1955.
Таблица 14 показывает нокдаун TTR с использованием siRNA. Данные выражены в виде процента оставшегося транскрипта относительно клеток, являющихся мишенью AD-1955.
Многие, но не все, черепичные TTR-дцРНК, поражающие TTR вблизи мишени AD-18328, уменьшали мРНК TTR по меньшей мере на 70% при трансфекции в клетки Нер3В при 0,1 нМ.
- 77 036772
Таблица 14.
Ингибирование TTR черепичной дцРНК, поражающей TTR вблизи мишени AD-18328
Номер дуплекса % остающегося транскрипта 0,1 нМ % SD 0,1 нМ % транскрипта 10 нМ % SD 10нМ
A D-18323 6.7 1.90 1.7 0.02
A D-18324 1.8 0.58 0.9 0.10
AD-23OOO 5.5 0.93 2.1 0.87
AD-23OO1 15.2 4.89 4.9 1.74
AD-23OO2 3.1 1.12 1.4 0.55
AD-23OO3 17.3 3.13 1.7 0.06
A D-18325 1.5 0.27 1.4 0.66
AD-23004 9.0 0.15 10.5 0.96
A D-18326 22.0 1.85 7.6 0.78
AD-18327 11.6 2.64 9.6 1.67
A D-18328 1.1 0.70 0.6 0.16
AD-23OO5 0.8 0.31 0.6 0.21
AD-23OO6 1.5 0.46 1.2 0.43
AD-23OO7 2.4 0.91 1.9 0.46
AD-23008 0.6 0.10 0.8 0.26
AD-23OO9 1.0 0.13 0.9 0.22
AD-23O1O 60.1 15.66 66.2 22.71
AD-23O11 56.5 16.99 53.6 4.70
AD-23O12 7.7 2.36 7.7 3.25
AD-23013 7.0 0.64 8.0 1.06
AD-23O14 0.7 0.01 0.6 0.10
AD-23015 15.4 0.25 16.5 7.07
AD-23O16 27.1 0.37 6.7 1.80
AD-23017 4.5 1.26 1.4 0.40
AD-23O18 44.6 9.45 7.5 1.09
AD-23019 2.2 0.68 0.8 0.10
AD-23020 52.7 6.45 29.7 1.17
AD-23021 95.4 16.16 45.0 3.00
AD-23O22 70.1 3.01 60.8 12.11
AD-23O23 2.7 1.12 1.8 0.07
AD-23O24 1.7 0.30 1.8 0.33
AD-23O25 64.2 13.21 10.5 1.34
AD-23O26 1.9 0.15 1.9 0.78
AD-23O27 2.5 0.21 1.6 0.49
AD-23O28 6.7 4.41 1.2 0.50
AD-18330 6.0 0.56 5.7 1.15
AD-23029 4.5 0.47 1.6 0.10
AD-23030 3.9 0.25 3.3 0.84
AD-23031 3.4 0.78 1.7 0.02
Пример 14. Оценивание действия продолжительности инфузии на эффективность однократного внутривенного введения SNALP-18534 в крысах Sprague-Dawley
Цели
Для определения действия продолжительности инфузии на эффективность однократной IVинфузии SNALP-18534 на уровнях мРНК TTR печени в крысах Sprague-Dawley.
- 78 036772
Таблица 15.
Используемые аббревиатуры и определения
SNALP-18534 Специфическая для транстиретина siRNA, приготовленная в SNALP
SNALP-1955 Специфическая для люциферазы не млекопитающего siRNA, приготовленная в SNALP
Последовательности смысловых и антисмысловых цепей AD-18534 воспроизведены ниже на основании представленных выше таблиц:
Цепь Номер олиго Положение Последовательность 5’-3' SEQ ID NO:
S А-32755 532 cAGuGuucuuGcucuAuAAdTdT 1289
as А-32756 550 UuAuAGAGcAAGAAcACUGdTdT 1290
Материалы исследования
Изделие (изделия)
SNALP-18534 состоит из siRNA, поражающей мРНК TTR грызуна (AD-18534), приготовленной в стабильных частицах нуклеиновая кислота-липид (SNALP), для доставки в ткани-мишени. Готовая форма SNALP (липидная частица) состоит из нового амино-липида (DLinDMA), ПЭГ-илированного липида (mPEG2000-C-DMA), нейтрального липида (DPPC) и холестерина. Отношение липид:нуклеиновая кислота в готовой форме является приближенно 5,8:1 (м:м). SNALP-1955 содержит siRNA, поражающую мРНК люциферазы (не млекопитающего), приготовлена с той же липидной частицей с которой приготовлена SNALP-18534, и служит в качестве нефармакологического активного контроля. Уровни доз выражены в виде мг/кг на основе массы содержимого siRNA.
План исследования и процедуры
Животные и введение тест-изделий:
Это исследование содержит 9 групп крыс Sprague-Dawley (4 самца на группу). Этим животным предоставляли по меньшей мере 2-дневный период акклиматизации перед этим исследованием, и все животные были 7-недельного возраста в начале введения доз. Вводимую дозу рассчитывали на основе данных массы тела, собранных перед введением доз в день 1. Тест-изделия и контрольные изделия вводили в виде однократной 15-минутной, 1-часовой, 2-часовой или 3-часовой IV-инфузии через хвостовую вену с использованием 24G 3/4 дюймовой канюли, герметизируемой при помощи Baxter Injection Site septum, присоединенной через иглу 27G Terumo butterfly к шприцу-насосу Baxter AS40A. Объем дозы был 3 мл/кг, скорость инфузии была 12 мл/кг/ч и животные свободно перемещались в клетках во время введения доз. Крыс делили на девять групп обработки и им вводили однократную IV-инфузию SNALP-18534, SNALP-1955 или ЗФР, как показано в табл. 16:
Таблица 16.
Группы доз тестируемых животных
Группа N Изделие Продолжительность инфузии Доза
A 4 PBS 15 минут -
В 4 PBS 3 часа -
С 4 SNALP-1955 1 час 1 мг/кг
D 4 SNALP-1955 2 часа 1 мг/кг
E 4 SNALP-1955 3 часа 1 мг/кг
F 4 SNALP-18534 15 минут 1 мг/кг
G 4 SNALP-18534 1 час 1 мг/кг
H 4 SNALP-18534 2 часа 1 мг/кг
I 4 SNALP-18534 3 часа 1 мг/кг
Сбор ткани и выделение РНК:
В день 0, животных анестезировали ингаляцией изофлуорана и собирали пробы крови перед введением доз в пробирки для отделения сыворотки ретробульбарным кровоизвлечением. Пробам крови давали свертываться при комнатной температуре в течение приблизительно 30 мин перед центрифугированием при 4°С. Затем пробы сыворотки хранили при -80°С до выполнения анализа. В день 3, животным во всех группах обработки давали летальную дозу кетамина/ксилазина. Кровь собирали через хвостовую вену в пробирки для отделения сыворотки и затем давали свертываться при комнатной температуре в течение приблизительно 30 мин перед центрифугированием при 4°С. Пробы сыворотки хранили при 80°С до выполнения анализа. Ткань печени собирали и быстро замораживали на сухом льду. Замороженную ткань печени измельчали и готовили лизаты ткани для количественного определения мРНК печени.
- 79 036772
Количественное определение мРНК TTR:
Уровни мРНК TTR относительно уровней мРНК GAPDH определяли в лизатах с использованием анализа разветвленных ДНК (QuantiGene Reagent System, Panomics, Fremont, CA) . Вкратце, использовали анализ QuantiGene (Genospectra) для количественного определения уровней мРНК в лизатах проб ткани в соответствии с инструкциями изготовителя. Средний уровень мРНК TTR нормализовали относительно среднего уровня мРНК GAPDH для каждой пробы.
Для получения относительного уровня экспрессии мРНК TTR, средние величины группы для каждой из обработанных SNALP-1955 и SNALP-18534 групп с 15-минутной, 1-часовой и 2-часовой продолжительностями нормализовали затем относительно средней величины для ЗФР-обработанной группы с 15-минутной инфузией, в то время как средние величины групп для обработанных SNALP-1955 и SNALP-18534 с 3-часовой продолжительностью инфузии нормализовали затем относительно средней величины для ЗФР-обработанной группы с 3-часовой продолжительностью.
Результаты
Как показано на фиг. 16, однократная IV-инфузия 1 мг/кг SNALP-18534 с разными продолжительностями инфузии от 15 минут до 3 часов приводит к сравнимому ингибированию уровней мРНК TTR печени, измеренному спустя два дня после введения доз. Однократная IV-инфузия 1 мг/кг SNALP-18534 показала также продолжительную понижающую регуляцию TTR на протяжении 29 дней после однократной 15-минутной IV-инфузии, в сравнении с контролем SNALP-1955 (данные не показаны). В сравнении с ЗФР-обработанной группой, однократная 15-минутная, 1-часовая, 2-часовая или 3-часовая IVинфузия SNALP-18534 при 1 мг/кг значимо уменьшала относительные уровни экспрессии мРНК TTR на 94% (р<0,001), 94% (р<0,001), 92% (р<0,001) и 93% (р<0,001), соответственно. Специфичность активности SNALP-18534 демонстрируется отсутствием значимого ингибирования мишени введением SNALP1955 через 1-часовую, 2-часовую или 3-часовую инфузию при том же самом уровне доз.
Выводы
Это исследование демонстрирует, что варьирование продолжительности инфузии от 15 минут до 3 часов не влияет на эффективность однократного IV-введения 1 мг/кг SNALP-18534 в крысах, как оценено по уменьшению уровней мРНК TTR в печени.
Пример 15. In vivo уменьшение мРНК TTR дикого типа в печени крысы с использованием LNP07-18534 и LNP08-18534
Для оценивания эффективности 2 новых готовых форм липидных наночастиц, LNP07 и LNP08, для доставки siRNA в крысе, специфическую для грызунов siRNA TTR, AD-18534, готовили в LNP07 (LNP07-18534) или LNP08 (LNP08-18534) и вводили 15-минутной IV-инфузией и определяли количественно мРНК TTR печени. Крысам Sprague-Dawley (4 животных на группу) вводили 15-минутную IVинфузию LNP07-18534 (0,03, 0,1, 0,3 или 1 мг/кг), LNP08-18534 (0,01, 0,03 или 0,1 мг/кг) или LNP07-1955 (1 мг/кг) или LNP08-1955 (0,1 мг/кг), содержащую отрицательную контрольную siRNA AD-1955, мишенью которой является ген люциферазы не млекопитающего. Спустя сорок восемь часов, животных эвтанизировали и собирали ткань печени, быстро замораживали и хранили при -80°С до обработки.
Для количественного определения мРНК TTR, замороженную ткань печени измельчали в порошок и готовили лизаты. Уровни мРНК TTR относительно уровней мРНК GAPDH определяли в этих лизатах с использованием анализа разветвленных ДНК (QuantiGene Reagent System, Panomics, Fremont, CA). Вкратце, анализ QuantiGene (Genospectra) использовали для количественного определения уровней мРНК в лизатах проб ткани в соответствии с инструкциями изготовителя. Средний уровень мРНК TTR нормализовали относительно среднего уровня мРНК GAPDH для каждой пробы. Средние значения нормализованных величин групп затем дополнительно нормализовали относительно средней величины для обработанной ЗФР группы для получения относительного уровня экспрессии мРНК TTR.
Эти результаты показаны на Фиг. 17. LNP07-18534 уменьшала уровни мРНК TTR в печени зависимым от дозы образом с 94% супрессией мРНК TTR при 1 мг/кг. Это действие было специфическим, так как отрицательный контроль LNP07-1955 при 1 мг/кг не влияла значимо на уровни мРНК TTR в сравнении с ЗФР-контролем. Было определено, что ЕС50 мРНК была равна ~0,05 мг/кг LNP07-18534. LNP0818534 уменьшала уровни мРНК TTR в печени заисимым от дозы образом с 86% супрессией мРНК TTR при 0,1 мг/кг. Это действие было специфическим, так как отрицательный контроль LNP08-1955 при 0,1 мг/кг не влиял значимо на уровни мРНК TTR в сравнении с ЗФР-контролем. Было определено, что ЕС50 мРНК была равна ~0,02 мг/кг LNP08-18534.
Эти результаты демонстрируют, что LNP07-18534 и LNP08-18534 являются эффективными в супрессии мРНК TTR дикого типа в печени крысы при введении IV-инфузией и что LNP07 и LNP08 являются эффективными готовыми формами для доставки siRNA в печень.
Пример 16. Уменьшение мРНК TTR печени однократным внутривенным введением LNP0918534 или LNP11-18534 в крыс Sprague-Dawley
Цель:
Для оценивания эффективности двух новых готовых форм липидных наночастиц (LNP) для доставки специфической для TTR грызунов siRNA, AD-18534 в крысу Sprague-Dawley для уменьшения уровней мРНК печени эндогенного (дикого типа) TTR. Крысам внутривенно вводили дозы посредством 15
- 80 036772 минутной инфузии 0,01, 0,03, 0,1 или 0,3 мг/кг LNP09-18534, LNP11-18534 или забуференного фосфатом солевого раствора (ЗФР) и уровни мРНК TTR анализировали при 48 ч после обработки.
Материал и способы:
Готовая форма LNP09: (XTC/DSPC/Chol/PEG2000-C14) 50/10/38,5/1,5 мол.%; Липид:siRNA ~11:1. Готовая форма LNP11: (MC3/DSPC/Chol/PEG2000-C14) = 50/10/38,5/1,5 мол.%; Липид:siRNA ~11: 1
Сбор ткани и выделение РНК:
В день 3, животным во всех группах обработки давали летальную дозу кетамина/ксилазина. Кровь собирали через каудальную полую вену в пробирки для отделения сыворотки и затем давали свертываться при комнатной температуре в течение приблизительно 30 мин перед центрифугированием при 4°С. Пробы сыворотки хранили при -80 °С до последующего анализа. Ткани печени собирали, быстро замораживали на сухом льду. Замороженную ткань печени измельчали и готовили лизаты ткани для количественного определения мРНК печени.
Количественное определение мРНК TTR: Уровни мРНК TTR относительно уровней мРНК GAPDH определяли в этих лизатах с использованием анализа разветвленных ДНК (QuantiGene Reagent System, Panomics, Fremont, CA). Вкратце, анализ QuantiGene (Genospectra) использовали для количественного определения уровней мРНК в лизатах проб ткани в соответствии с инструкциями изготовителя. Средний уровень мРНК TTR нормализовали относительно среднего уровня мРНК GAPDH для каждой пробы. Средние значения нормализованных величин групп затем дополнительно нормализовали относительно средней величины для обработанной ЗФР группы для получения относительного уровня экспрессии мРНК TTR.
Результаты:
Как показано на фиг. 18, в отличие от ЗФР-обработанныеых животных, обработанные LNP09-18534 и LNP111-18534 животные имели значимое зависимое от дозы уменьшение уровней мРНК TTR в печени, с достижением максимального уменьшения ~90% мРНК как для LNP09-nриготовленных, так и для LNP11-приготовленных групп относительно группы ЗФР-контроля при 0,3 мг/кг, и доза, вызывающая 50% уменьшение (ED50) , была равна<0,03 мг/кг для LNP11-18534 и <0,1 мг/кг для LNP09-18534.
Выводы
Это исследование демонстрирует, что однократная 15-минутная IV-инфузия LNP09-18534 или LNP11-1853 в крыс Sprague-Dawley приводит к зависимому от дозы уменьшению мРНК TTR печени. Эти данные демонстрируют эффективность LNP0 9-18328 и LNP11-18328 в уменьшении эндогенно экспрессируемой (дикого типа) мРНК TTR с уровнями ED50 <0,03 и <0,1 мг/кг для LNP11-18534 и LNP0918534, соответственно.
Пример 17. Ингибирование TTR в людях
Субъекта-человека обрабатывают дцРНК, поражающей ген TTR, для ингибирования экспрессии гена TTR для лечения какого-либо состояния.
Субъекта, нуждающегося в лечении, отбирают или идентифицируют. Этот субъект может иметь нарушение печени, транстиретиновый амилоидоз и/или трансплантированную печень.
Идентификация этого субъекта может выполняться в клинической обстановке или где-то еще, например в доме этого субъекта, посредством самостоятельного использования субъектом самотестирующего набора.
В момент 0 подходящую первую дозу анти-TTR-siRNA вводят этому субъекту. дцРНК готовят, как описано здесь. После некоторого периода времени после первой дозы, например, 7 дней, 14 дней и 21 дня, оценивают состояние этого субъекта, например, измерением функции печени. Это измерение может сопровождаться измерением экспрессии TTR в указанном субъекте, и/или продуктов успешного siRNAпоражения мРНК TTR. Могут быть также измерены другие релевантные критерии. Количество и эффективность доз корректируются в соответствии с потребностями этого субъекта.
После лечения скорость роста опухоли субъекта понижается относительно скорости, существующей перед этим лечением или относительно скорости, измеренной в подобном образом страдающем, но не получавшем этого лечения субъекте.
- 81 036772
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ЭЛНИЛЭМ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК.
<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ТРАНСТИРЕТИНА <130> 26421-16126 РСТ <140> PCT/US2009/061381 <141> 2009-10-20 <150> 61/244,794 <151> 2009-09-22 <150> 61/242,783 <151> 2009-09-15 <150> 61/185,545 <151> 2009-06-09 <150> 61/156,670 <151> 2009-03-02 <150> 61/115,738 <151> 2008-11-18 <150> 61/106,956 <151> 2008-10-20 <160> 1410 <170> Patentin version 3.5 <210> 1 <211> 19 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 1 ccggugaauc caagugucc 19 <210> 2 <211> 19 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 2 ggacacuugg auucaccgg 19 <210> 3 <211> 19 <212> РНК <213> Homo sapiens
- 82 036772 <400> 3 acucauucuu ggcaggaug <210> 4 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 4 cauccugcca agaaugagu <210> 5 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 5 aaguguccuc ugaugguca <210> 6 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 6 ugaccaucag aggacacuu <210> 7 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 7 ucauucuugg caggauggc <210> 8 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 8 gccauccugc caagaauga <210> 9 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 9 aaguucuaga ugcuguccg
- 83 036772 <210> 10 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 10 cggacagcau cuagaacuu <210> 11 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 11 guucuagaug cuguccgag <210> 12 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 12 cucggacagc aucuagaac <210> 13 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 13 cuagaugcug uccgaggca <210> 14 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 14 ugccucggac agcaucuag <210> 15 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 15 gaugcugucc gaggcaguc <210> 16 <211> 19
- 84 036772 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 16 gacugccucg gacagcauc <210> 17 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 17 cauucuuggc aggauggcu <210> 18 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 18 agccauccug ccaagaaug <210> 19 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 19 ugcuguccga ggcaguccu <210> 20 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 20 aggacugccu cggacagca <210> 21 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 21 ccgaggcagu ccugccauc <210> 22 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 85 036772 <400> 22 gauggcagga cugccucgg <210> 23 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 23 caguccugcc aucaaugug <210> 24 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 24 cacauugaug gcaggacug <210> 25 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 25 caauguggcc gugcaugug <210> 26 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 26 cacaugcacg gccacauug <210> 27 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 27 auguguucag aaaggcugc <210> 28 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 28 gcagccuuuc ugaacacau
- 86 036772 <210> 29 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 29 cagaagucca cucauucuu <210> 30 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 30 aagaaugagu ggacuucug <210> 31 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 31 ggcaggaugg cuucucauc <210> 32 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 32 gaugagaagc cauccugcc <210> 33 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 33 gagccauuug ccucuggga <210> 34 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 34 ucccagaggc aaauggcuc <210> 35 <211> 19
- 87 036772 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 35 caggauggcu ucucaucgu <210> 36 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 36 acgaugagaa gccauccug <210> 37 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 37 aggauggcuu cucaucguc <210> 38 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 38 gacgaugaga agccauccu <210> 39 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 39 agagcugcau gggcucaca <210> 40 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 40 ugugagccca ugcagcucu <210> 41 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 88 036772 <400> 41 gcugcauggg cucacaacu <210> 42 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 42 aguugugagc ccaugcagc <210> 43 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 43 ggauggcuuc ucaucgucu <210> 44 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 44 agacgaugag aagccaucc <210> 45 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 45 gcaugggcuc acaacugag <210> 46 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 46 cucaguugug agcccaugc <210> 47 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 47 augggcucac aacugagga
- 89 036772 <210> 48 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 48 uccucaguug ugagcccau <210> 49 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 49 ugggcucaca acugaggag <210> 50 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 50 cuccucaguu gugagccca <210> 51 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 51 gaggaauuug uagaaggga <210> 52 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 52 ucccuucuac aaauuccuc <210> 53 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 53 uuuguagaag ggauauaca <210> 54 <211> 19
- 90 036772 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 54 uguauauccc uucuacaaa <210> 55 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 55 uuguagaagg gauauacaa <210> 56 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 56 uuguauaucc cuucuacaa <210> 57 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 57 uguagaaggg auauacaaa <210> 58 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 58 uuuguauauc ccuucuaca <210> 59 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 59 agaagggaua uacaaagug <210> 60 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 91 036772 <400> 60 cacuuuguau aucccuucu <210> 61 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 61 aaguggaaau agacaccaa <210> 62 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 62 uuggugucua uuuccacuu <210> 63 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 63 ggaaauagac accaaaucu <210> 64 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 64 agauuuggug ucuauuucc <210> 65 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 65 gaaauagaca ccaaaucuu <210> 66 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 66 aagauuuggu gucuauuuc
- 92 036772 <210> 67 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 67 auagacacca aaucuuacu <210> 68 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 68 aguaagauuu ggugucuau <210> 69 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 69 uagacaccaa aucuuacug <210> 70 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 70 caguaagauu uggugucua <210> 71 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 71 agacaccaaa ucuuacugg <210> 72 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 72 ccaguaagau uuggugucu <210> 73 <211> 19
- 93 036772 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 73 uuacuggaag gcacuuggc <210> 74 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 74 gccaagugcc uuccaguaa <210> 75 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 75 uucucaucgu cugcuccuc <210> 76 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 76 gaggagcaga cgaugagaa <210> 77 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 77 ggaaggcacu uggcaucuc <210> 78 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 78 gagaugccaa gugccuucc <210> 79 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 94 036772 <400> 79 ggcacuuggc aucucccca 19 <210> 80 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 80 uggggagaug ccaagugcc 19 <210> 81 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 81 ggcaucuccc cauuccaug 19 <210> 82 <211> 20 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 82 auggaauggg gagaugcctt 20 <210> 83 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 83 gcaucucccc auuccauga 19 <210> 84 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 84 ucauggaaug gggagaugc 19 <210> 85 <211> 19 <212> PHK
- 95 036772 <213> Homo sapiens <400> 85 caucucccca uuccaugag <210> 86 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 86 cucauggaau ggggagaug <210> 87 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 87 aucuccccau uccaugagc <210> 88 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 88 gcucauggaa uggggagau <210> 89 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 89 cuccccauuc caugagcau <210> 90 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 90 augcucaugg aauggggag <210> 91 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 91
- 96 036772 cccauuccau gagcaugca <210> 92 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 92 ugcaugcuca uggaauggg <210> 93 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 93 ccaugagcau gcagaggug <210> 94 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 94 caccucugca ugcucaugg <210> 95 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 95 agcaugcaga ggugguauu <210> 96 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 96 aauaccaccu cugcaugcu <210> 97 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 97 caugcagagg ugguauuca
- 97 036772 <210> 98 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 98 ugaauaccac cucugcaug <210> 99 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 99 augcagaggu gguauucac <210> 100 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 100 gugaauacca ccucugcau <210> 101 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 101 ggugguauuc acagccaac <210> 102 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 102 guuggcugug aauaccacc <210> 103 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 103 gugguauuca cagccaacg <210> 104 <211> 19 <212> ΡΗΚ
- 98 036772 <213> Homo sapiens <400> 104 cguuggcugu gaauaccac <210> 105 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 105 ugguauucac agccaacga <210> 106 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 106 ucguuggcug ugaauacca <210> 107 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 107 gguauucaca gccaacgac <210> 108 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 108 gucguuggcu gugaauacc <210> 109 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 109 guauucacag ccaacgacu <210> 110 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 110
- 99 036772 agucguuggc ugugaauac <210> 111 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 111 uauucacagc caacgacuc <210> 112 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 112 gagucguugg cugugaaua <210> 113 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 113 ucacagccaa cgacuccgg <210> 114 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 114 ccggagucgu uggcuguga <210> 115 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 115 ccccgccgcu acaccauug <210> 116 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 116 caauggugua 9c99c9999
- 100 036772 <210> 117 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 117 gaaguccacu cauucuugg <210> 118 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 118 ccaagaauga guggacuuc <210> 119 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 119 cccugcugag ccccuacuc <210> 120 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 120 gaguaggggc ucagcaggg <210> 121 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 121 cugagccccu acuccuauu <210> 122 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 122 aauaggagua ggggcucag <210> 123 <211> 19 <212> ΡΗΚ
- 101 036772 <213> Homo sapiens <400> 123 ugagccccua cuccuauuc <210> 124 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 124 gaauaggagu aggggcuca <210> 125 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 125 ccccuacucc uauuccacc <210> 126 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 126 gguggaauag gaguagggg <210> 127 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 127 cuacuccuau uccaccacg <210> 128 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 128 cgugguggaa uaggaguag <210> 129 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 129
- 102 036772 uacuccuauu ccaccacgg <210> 130 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 130 ccguggugga auaggagua <210> 131 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 131 acuccuauuc caccacggc <210> 132 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 132 gccguggugg aauaggagu <210> 133 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 133 uccuauucca ccacggcug <210> 134 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 134 cagccguggu ggaauagga <210> 135 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 135 uauuccacca cggcugucg
- 103 036772 <210> 136 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 136 cgacagccgu gguggaaua <210> 137 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 137 auuccaccac ggcugucgu <210> 138 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 138 acgacagccg ugguggaau <210> 139 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 139 caccacggcu gucgucacc <210> 140 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 140 ggugacgaca gccguggug <210> 141 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 141 accacggcug ucgucacca <210> 142 <211> 19 <212> ΡΗΚ
- 104 036772 <213> Homo <400> 142 uggugacgac sapiens agccguggu <210> 143 <211> 19 <212> PHK <213> Homo <400> 143 ccacggcugu sapiens cgucaccaa <210> 144 <211> 19 <212> PHK <213> Homo <400> 144 uuggugacga sapiens cagccgugg <210> 145 <211> 19 <212> PHK <213> Homo <400> 145 acggcugucg sapiens ucaccaauc <210> 146 <211> 19 <212> PHK <213> Homo <400> 146 gauuggugac sapiens gacagccgu <210> 147 <211> 19 <212> PHK <213> Homo <400> 147 cggcugucgu sapiens caccaaucc <210> 148 <211> 19 <212> PHK <213> Homo <400> 148 sapiens
- 105 036772 ggauugguga cgacagccg <210> 149 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 149 cgucaccaau cccaaggaa <210> 150 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 150 uuccuuggga uuggugacg <210> 151 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 151 caaucccaag gaaugaggg <210> 152 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 152 cccucauucc uugggauug <210> 153 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 153 ccugaaggac gagggaugg <210> 154 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 154 ccaucccucg uccuucagg
- 106 036772 <210> 155 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 155 ggacgaggga ugggauuuc <210> 156 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 156 gaaaucccau cccucgucc <210> 157 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 157 aaguccacuc auucuuggc <210> 158 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 158 gccaagaaug aguggacuu <210> 159 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 159 gggauuucau guaaccaag <210> 160 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 160 cuugguuaca ugaaauccc <210> 161 <211> 19 <212> ΡΗΚ
- 107 036772 <213> Homo sapiens <400> 161 ggauuucaug uaaccaaga <210> 162 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 162 ucuugguuac augaaaucc <210> 163 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 163 ucauguaacc aagaguauu <210> 164 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 164 aauacucuug guuacauga <210> 165 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 165 auguaaccaa gaguauucc <210> 166 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 166 ggaauacucu ugguuacau <210> 167 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 167
- 108 036772 uguaaccaag aguauucca <210> 168 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 168 uggaauacuc uugguuaca <210> 169 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 169 guaaccaaga guauuccau <210> 170 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 170 auggaauacu cuugguuac <210> 171 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 171 ugccuugcug gacugguau <210> 172 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 172 auaccagucc agcaaggca <210> 173 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 173 uaaagcagug uuuucaccu
- 109 036772 <210> 174 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 174 aggugaaaac acugcuuua <210> 175 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 175 gccuugcugg acugguauu <210> 176 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 176 aauaccaguc cagcaaggc <210> 177 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 177 uguuuucacc ucauaugcu <210> 178 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 178 agcauaugag gugaaaaca <210> 179 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 179 guuuucaccu cauaugcua <210> 180 <211> 19 <212> ΡΗΚ
- 110 036772 <213> Homo sapiens <400> 180 uagcauauga ggugaaaac <210> 181 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 181 uuuucaccuc auaugcuau <210> 182 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 182 auagcauaug aggugaaaa <210> 183 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 183 uucaccucau augcuaugu <210> 184 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 184 acauagcaua ugaggugaa <210> 185 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 185 caccucauau gcuauguua <210> 186 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 186
- 111 036772 uaacauagca uaugaggug <210> 187 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 187 ccuugcugga cugguauuu <210> 188 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 188 aaauaccagu ccagcaagg <210> 189 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 189 auaugcuaug uuagaaguc <210> 190 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 190 gacuucuaac auagcauau <210> 191 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 191 uaugcuaugu uagaagucc <210> 192 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 192 ggacuucuaa cauagcaua
- 112 036772 <210> 193 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 193 ugcuauguua gaaguccag <210> 194 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 194 cuggacuucu aacauagca <210> 195 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 195 cuugcuggac ugguauuug <210> 196 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 196 caaauaccag uccagcaag <210> 197 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 197 aguccaggca gagacaaua 19 <210> 198 <211> 20 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 198 auugucucug ccuggacutt 20
- 113 036772 <210> 199 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 199 uccaggcaga gacaauaaa <210> 200 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 200 uuuauugucu cugccugga <210> 201 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 201 gugaaaggca cuuuucauu <210> 202 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 202 aaugaaaagu gccuuucac <210> 203 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 203 uggacuggua uuugugucu <210> 204 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 204 agacacaaau accagucca <210> 205
- 114 036772 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 205 gucugaggcu ggcccuacg <210> 206 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 206 cguagggcca gccucagac <210> 207 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 207 cugaggcugg cccuacggg <210> 208 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 208 cccguagggc cagccucag <210> 209 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 209 gaggcuggcc cuacgggca <210> 210 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 210 ugcccguagg gccagccuc <210> 211 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 115 036772 <400> 211 aggcuggccc uacgggcac <210> 212 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 212 gugcccguag ggccagccu <210> 213 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 213 gcuggcccua cgggcaccg <210> 214 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 214 cggugcccgu agggccagc <210> 215 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 215 cuggcccuac gggcaccgg <210> 216 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 216 ccggugcccg uagggccag <210> 217 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 217 ggcccuacgg gcaccggug
- 116 036772 <210> 218 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 218 caccggugcc cguagggcc <210> 219 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 219 ccacucauuc uuggcagga <210> 220 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 220 uccugccaag aaugagugg <210> 221 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 221 ccuacgggca ccggugaau <210> 222 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 222 auucaccggu gcccguagg <210> 223 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 223 cuacgggcac cggugaauc <210> 224
- 117 036772 <211> 19 <212> РНК <213> Homo sapiens <400> 224 gauucaccgg ugcccguag <210> 225 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 225 uacgggcacc ggugaaucc <210> 226 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 226 ggauucaccg gugcccgua <210> 227 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 227 acgggcaccg gugaaucca <210> 228 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 228 uggauucacc ggugcccgu <210> 229 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 229 gcaccgguga auccaagug <210> 230 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 118 036772 <400> 230 cacuuggauu caccggugc <210> 231 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 231 caccggugaa uccaagugu <210> 232 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 232 acacuuggau ucaccggug <210> 233 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 233 uguggccaug cauguguuc <210> 234 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 234 gaacacaugc auggccaca <210> 235 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 235 guggccaugc auguguuca <210> 236 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 236 ugaacacaug cauggccac
- 119 036772 <210> 237 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 237 gccaugcaug uguucagaa <210> 238 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 238 uucugaacac augcauggc <210> 239 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 239 uauuccacca cggcuguca <210> 240 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 240 ugacagccgu gguggaaua <210> 241 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 241 gucaucacca aucccaagg <210> 242 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 242 ccuugggauu ggugaugac <210> 243
- 120 036772 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 243 guccucugau ggucaaagu <210> 244 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 244 acuuugacca ucagaggac <210> 245 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 245 gauggucaaa guucuagau <210> 246 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 246 aucuagaacu uugaccauc <210> 247 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 247 augcuguccg aggcagucc <210> 248 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 248 ggacugccuc ggacagcau <210> 249 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 121 036772 <400> 249 ccgugcaugu guucagaaa <210> 250 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 250 uuucugaaca caugcacgg <210> 251 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 251 agucuggaga gcugcaugg <210> 252 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 252 ccaugcagcu cuccagacu <210> 253 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 253 caugggcuca caacugagg <210> 254 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 254 ccucaguugu gagcccaug <210> 255 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 255 ucucaucguc ugcuccucc
- 122 036772 <210> 256 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 256 ggaggagcag acgaugaga <210> 257 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 257 ccccauucca ugagcaugc <210> 258 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 258 gcaugcucau ggaaugggg <210> 259 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 259 gccccuacuc cuauuccac <210> 260 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 260 guggaauagg aguaggggc <210> 261 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 261 cuauuccacc acggcuguc <210> 262
- 123 036772 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 262 gacagccgug guggaauag <210> 263 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 263 cacggcuguc gucaccaau <210> 264 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 264 auuggugacg acagccgug <210> 265 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 265 aggacgaggg augggauuu <210> 266 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 266 aaaucccauc ccucguccu <210> 267 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 267 ucaccucaua ugcuauguu <210> 268 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens
- 124 036772 <400> 268 aacauagcau augagguga <210> 269 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 269 ccucauaugc uauguuaga <210> 270 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 270 ucuaacauag cauaugagg <210> 271 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 271 auguuagaag uccaggcag <210> 272 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 272 cugccuggac uucuaacau <210> 273 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 273 ucugaggcug gcccuacgg <210> 274 <211> 19 <212> PHK <213> Homo sapiens <400> 274 ccguagggcc agccucaga
- 125 036772 <210> 275 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 275 ggcccuacgg gcaccggug <210> 276 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 276 caccggugcc cguagggcc <210> 277 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 277 gggcaccggu gaauccaag <210> 278 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 278 cuuggauuca ccggugccc <210> 279 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 279 ccaugcaugu guucagaaa <210> 280 <211> 19 <212> ΡΗΚ <213> Homo sapiens <400> 280 uuucugaaca caugcaugg <210> 281
- 126 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 281 ccggugaauc caaguguccn n 21 <210> 282 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 282 ggacacuugg auucaccggn n 21 <210> 283 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 283 acucauucuu ggcaggaugn n 21
- 127 036772 <210> 284 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 284 cauccugcca agaaugagun n 21 <210> 285 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 285 aaguguccuc ugauggucan n 21 <210> 286 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 128 036772 <400> 286 ugaccaucag aggacacuun η 21 <210> 287 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 287 ucauucuugg caggauggcn n 21 <210> 288 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 288 gccauccugc caagaaugan n 21 <210> 289 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
- 129 036772 <221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 289 aaguucuaga ugcuguccgn η 21 <210> 290 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 290 cggacagcau cuagaacuun η 21 <210> 291 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 291 guucuagaug cuguccgagn η 21 <210> 292 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 130 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 292 cucggacagc aucuagaacn η 21 <210> 293 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 293 cuagaugcug uccgaggcan n 21 <210> 294 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 294 ugccucggac agcaucuagn n 21 <210> 295 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 131 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 295 gaugcugucc gaggcagucn η 21 <210> 296 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 296 gacugccucg gacagcaucn η 21 <210> 297 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 297 cauucuuggc aggauggcun η 21 <210> 298 <211> 21 <212> ДНК
- 132 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 298 agccauccug ccaagaaugn n 21 <210> 299 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 299 ugcuguccga ggcaguccun n <210> 300 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 300 aggacugccu cggacagcan n 21
- 133 036772 <210> 301 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 301 ccgaggcagu ccugccaucn n 21 <210> 302 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 302 gauggcagga cugccucggn n 21 <210> 303 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 303
- 134 036772 caguccugcc aucaaugugn n 21 <210> 304 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 304 cacauugaug gcaggacugn n 21 <210> 305 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 305 caauguggcc gugcaugugn n 21 <210> 306 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21)
- 135 036772 <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 306 cacaugcacg gccacauugn n 21 <210> 307 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 307 auguguucag aaaggcugcn n 21 <210> 308 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 308 gcagccuuuc ugaacacaun n 21 <210> 309 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 136 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 309 cagaagucca cucauucuun η 21 <210> 310 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 310 aagaaugagu ggacuucugn n 21 <210> 311 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 311 ggcaggaugg cuucucaucn n 21 <210> 312 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 137 036772
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 312 gaugagaagc cauccugccn n 21 <210> 313 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 313 gagccauuug ccucugggan n 21 <210> 314 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 314 ucccagaggc aaauggcucn n 21 <210> 315 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 138 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 315 caggauggcu ucucaucgun η 21 <210> 316 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 316 acgaugagaa gccauccugn η <210> 317 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 317 aggauggcuu cucaucgucn η 21 <210> 318 <211> 21
- 139 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 318 gacgaugaga agccauccun n 21 <210> 319 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 319 agagcugcau gggcucacan n 21 <210> 320 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 320 ugugagccca ugcagcucun n 21
- 140 036772 <210> 321 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 321 gcugcauggg cucacaacun n <210> 322 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 322 aguugugagc ccaugcagcn n 21 <210> 323 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 141 036772 <400> 323 ggauggcuuc ucaucgucun n <210> 324 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 324 agacgaugag aagccauccn n 21 <210> 325 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 325 gcaugggcuc acaacugagn n <210> 326 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание
- 142 036772 <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 326 cucaguugug agcccaugcn n 21 <210> 327 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 327 augggcucac aacugaggan n 21 <210> 328 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 328 uccucaguug ugagcccaun n 21 <210> 329 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 143 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 329 ugggcucaca acugaggagn η 21 <210> 330 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 330 cuccucaguu gugagcccan n 21 <210> 331 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 331 gaggaauuug uagaagggan n 21 <210> 332 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 144 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 332 ucccuucuac aaauuccucn η 21 <210> 333 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 333 uuuguagaag ggauauacan η <210> 334 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 334 uguauauccc uucuacaaan η 21 <210> 335 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 145 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 335 uuguagaagg gauauacaan η 21 <210> 336 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 336 uuguauaucc cuucuacaan η <210> 337 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 337 uguagaaggg auauacaaan η 21 <210> 338
- 146 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 338 uuuguauauc ccuucuacan n 21 <210> 339 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 339 agaagggaua uacaaagugn n 21 <210> 340 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 340 cacuuuguau aucccuucun n 21
- 147 036772 <210> 341 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 341 aaguggaaau agacaccaan n 21 <210> 342 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 342 uuggugucua uuuccacuun n <210> 343 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 148 036772 <400> 343 ggaaauagac accaaaucun η 21 <210> 344 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 344 agauuuggug ucuauuuccn n 21 <210> 345 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 345 gaaauagaca ccaaaucuun n 21 <210> 346 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
- 149 036772 <221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 346 aagauuuggu gucuauuucn η 21 <210> 347 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 347 auagacacca aaucuuacun η 21 <210> 348 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 348 aguaagauuu ggugucuaun η 21 <210> 349 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 150 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 349 uagacaccaa aucuuacugn η 21 <210> 350 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 350 caguaagauu uggugucuan n 21 <210> 351 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 351 agacaccaaa ucuuacuggn n 21 <210> 352 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 151 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 352 ccaguaagau uuggugucun η 21 <210> 353 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 353 uuacuggaag gcacuuggcn η <210> 354 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 354 gccaagugcc uuccaguaan η 21 <210> 355 <211> 21 <212> ДНК
- 152 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 355 uucucaucgu cugcuccucn n 21 <210> 356 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 356 gaggagcaga cgaugagaan n <210> 357 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 357 ggaaggcacu uggcaucucn n 21
- 153 036772 <210> 358 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 358 gagaugccaa gugccuuccn n 21 <210> 359 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 359 ggcacuuggc aucuccccan n 21 <210> 360 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 360
- 154 036772 uggggagaug ccaagugccn n <210> 361 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 361 ggcaucuccc cauuccaugn n 21 <210> 362 <211> 22 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (21)..(22) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 362 auggaauggg gagaugcctt nn <210> 363 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21)
- 155 036772 <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 363 gcaucucccc auuccaugan n <210> 364 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 364 ucauggaaug gggagaugcn n 21 <210> 365 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 365 caucucccca uuccaugagn n <210> 366 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 156 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 366 cucauggaau ggggagaugn η 21 <210> 367 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 367 aucuccccau uccaugagcn n 21 <210> 368 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 368 gcucauggaa uggggagaun n 21 <210> 369 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 157 036772
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 369 cuccccauuc caugagcaun n 21 <210> 370 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 370 augcucaugg aauggggagn n 21 <210> 371 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 371 cccauuccau gagcaugcan n 21 <210> 372 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 158 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 372 ugcaugcuca uggaaugggn η 21 <210> 373 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 373 ccaugagcau gcagaggugn η <210> 374 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 374 caccucugca ugcucauggn η 21 <210> 375 <211> 21
- 159 036772 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 375 agcaugcaga ggugguauun n 21 <210> 376 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 376 aauaccaccu cugcaugcun n 21 <210> 377 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 377 caugcagagg ugguauucan n
- 160 036772 <210> 378 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 378 ugaauaccac cucugcaugn n 21 <210> 379 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 379 augcagaggu gguauucacn n <210> 380 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 161 036772 <400> 380 gugaauacca ccucugcaun η <210> 381 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 381 ggugguauuc acagccaacn n 21 <210> 382 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 382 guuggcugug aauaccaccn n <210> 383 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание
- 162 036772 <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 383 gugguauuca cagccaacgn n 21 <210> 384 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 384 cguuggcugu gaauaccacn n 21 <210> 385 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 385 ugguauucac agccaacgan n 21 <210> 386 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 163 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 386 ucguuggcug ugaauaccan n 21 <210> 387 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 387 gguauucaca gccaacgacn n 21 <210> 388 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 388 gucguuggcu gugaauaccn n 21 <210> 389 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 164 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) . . (21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 389 guauucacag ccaacgacun η 21 <210> 390 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20) . . (21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 390 agucguuggc ugugaauacn η <210> 391 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20) . . (21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 391 uauucacagc caacgacucn η 21 <210> 392 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 165 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 392 gagucguugg cugugaauan η 21 <210> 393 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 393 ucacagccaa cgacuccggn η <210> 394 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 394 ccggagucgu uggcugugan η 21 <210> 395
- 166 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 395 ccccgccgcu acaccauugn n 21 <210> 396 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 396 caauggugua gcggcggggn n 21 <210> 397 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 397 gaaguccacu cauucuuggn n 21
- 167 036772 <210> 398 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 398 ccaagaauga guggacuucn n 21 <210> 399 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 399 cccugcugag ccccuacucn n 21 <210> 400 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 168 036772 <400> 400 gaguaggggc ucagcagggn η <210> 401 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 401 cugagccccu acuccuauun n 21 <210> 402 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 402 aauaggagua ggggcucagn n <210> 403 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
- 169 036772 <221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 403 ugagccccua cuccuauucn η 21 <210> 404 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 404 gaauaggagu aggggcucan η 21 <210> 405 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 405 ccccuacucc uauuccaccn η 21 <210> 406 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 170 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 406 gguggaauag gaguaggggn η 21 <210> 407 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 407 cuacuccuau uccaccacgn n 21 <210> 408 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 408 cgugguggaa uaggaguagn n 21 <210> 409 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 171 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 409 uacuccuauu ccaccacggn η 21 <210> 410 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 410 ccguggugga auaggaguan η <210> 411 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 411 acuccuauuc caccacggcn η 21 <210> 412 <211> 21 <212> ДНК
- 172 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 412 gccguggugg aauaggagun n 21 <210> 413 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 413 uccuauucca ccacggcugn n <210> 414 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 414 cagccguggu ggaauaggan n 21
- 173 036772 <210> 415 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 415 uauuccacca cggcugucgn n 21 <210> 416 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 416 cgacagccgu gguggaauan n <210> 417 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 417
- 174 036772 auuccaccac ggcugucgun n 21 <210> 418 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 418 acgacagccg ugguggaaun n 21 <210> 419 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 419 caccacggcu gucgucaccn n 21 <210> 420 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21)
- 175 036772 <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 420 ggugacgaca gccguggugn n 21 <210> 421 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 421 accacggcug ucgucaccan n 21 <210> 422 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 422 uggugacgac agccguggun n 21 <210> 423 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 176 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 423 ccacggcugu cgucaccaan η 21 <210> 424 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 424 uuggugacga cagccguggn n 21 <210> 425 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 425 acggcugucg ucaccaaucn n 21 <210> 426 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 177 036772
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 426 gauuggugac gacagccgun n 21 <210> 427 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 427 cggcugucgu caccaauccn n 21 <210> 428 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 428 ggauugguga cgacagccgn n 21
210> 429
211> 21
212> ДНК
213> Homo sapiens
- 178 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 429 cgucaccaau cccaaggaan η 21 <210> 430 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 430 uuccuuggga uuggugacgn η <210> 431 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 431 caaucccaag gaaugagggn η 21 <210> 432 <211> 21
- 179 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 432 cccucauucc uugggauugn n 21 <210> 433 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 433 ccugaaggac gagggauggn n 21 <210> 434 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 434 ccaucccucg uccuucaggn n 21
- 180 036772 <210> 435 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 435 ggacgaggga ugggauuucn n 21 <210> 436 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 436 gaaaucccau cccucguccn n <210> 437 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 181 036772 <400> 437 aaguccacuc auucuuggcn η 21 <210> 438 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 438 gccaagaaug aguggacuun n 21 <210> 439 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 439 gggauuucau guaaccaagn n 21 <210> 440 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание
- 182 036772 <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 440 cuugguuaca ugaaaucccn n <210> 441 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 441 ggauuucaug uaaccaagan n 21 <210> 442 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 442 ucuugguuac augaaauccn n <210> 443 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 183 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 443 ucauguaacc aagaguauun η 21 <210> 444 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 444 aauacucuug guuacaugan n 21 <210> 445 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 445 auguaaccaa gaguauuccn n 21 <210> 446 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 184 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 446 ggaauacucu ugguuacaun η 21 <210> 447 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 447 uguaaccaag aguauuccan η <210> 448 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 448 uggaauacuc uugguuacan η 21 <210> 449 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 185 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 449 guaaccaaga guauuccaun η 21 <210> 450 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 450 auggaauacu cuugguuacn η <210> 451 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 451 ugccuugcug gacugguaun η 21 <210> 452
- 186 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 452 auaccagucc agcaaggcan n 21 <210> 453 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 453 uaaagcagug uuuucaccun n 21 <210> 454 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 454 aggugaaaac acugcuuuan n 21
- 187 036772 <210> 455 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 455 gccuugcugg acugguauun n 21 <210> 456 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 456 aauaccaguc cagcaaggcn n <210> 457 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 188 036772 <400> 457 uguuuucacc ucauaugcun η <210> 458 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 458 agcauaugag gugaaaacan n 21 <210> 459 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 459 guuuucaccu cauaugcuan n <210> 460 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
- 189 036772 <221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 460 uagcauauga ggugaaaacn η <210> 461 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 461 uuuucaccuc auaugcuaun η 21 <210> 462 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 462 auagcauaug aggugaaaan η <210> 463 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 190 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 463 uucaccucau augcuaugun η 21 <210> 464 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 464 acauagcaua ugaggugaan n 21 <210> 465 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 465 caccucauau gcuauguuan n 21 <210> 466 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 191 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 466 uaacauagca uaugaggugn η 21 <210> 467 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 467 ccuugcugga cugguauuun η <210> 468 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 468 aaauaccagu ccagcaaggn η 21 <210> 469 <211> 21 <212> ДНК
- 192 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 469 auaugcuaug uuagaagucn n 21 <210> 470 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 470 gacuucuaac auagcauaun n <210> 471 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 471 uaugcuaugu uagaaguccn n 21
- 193 036772 <210> 472 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 472 ggacuucuaa cauagcauan n 21 <210> 473 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 473 ugcuauguua gaaguccagn n <210> 474 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 474
- 194 036772 cuggacuucu aacauagcan n <210> 475 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 475 cuugcuggac ugguauuugn n 21 <210> 476 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 476 caaauaccag uccagcaagn n <210> 477 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21)
- 195 036772 <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 477 aguccaggca gagacaauan n 21 <210> 478 <211> 22 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (21)..(22) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 478 auugucucug ccuggacutt nn 22 <210> 479 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 479 uccaggcaga gacaauaaan n 21 <210> 480 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 196 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 480 uuuauugucu cugccuggan η 21 <210> 481 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 481 gugaaaggca cuuuucauun n 21 <210> 482 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 482 aaugaaaagu gccuuucacn n 21 <210> 483 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 197 036772
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 483 uggacuggua uuugugucun n 21 <210> 484 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 484 agacacaaau accaguccan n 21 <210> 485 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 485 gucugaggcu ggcccuacgn n 21
210> 486
211> 21
212> ДНК
213> Homo sapiens
- 198 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 486 cguagggcca gccucagacn η 21 <210> 487 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 487 cugaggcugg cccuacgggn η <210> 488 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 488 cccguagggc cagccucagn η 21 <210> 489 <211> 21
- 199 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 489 gaggcuggcc cuacgggcan n 21 <210> 490 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 490 ugcccguagg gccagccucn n 21 <210> 491 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 491 aggcuggccc uacgggcacn n 21
- 200 036772 <210> 492 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 492 gugcccguag ggccagccun n 21 <210> 493 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 493 gcuggcccua cgggcaccgn n <210> 494 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 201 036772 <400> 494 cggugcccgu agggccagcn η <210> 495 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 495 cuggcccuac gggcaccggn n 21 <210> 496 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 496 ccggugcccg uagggccagn n <210> 497 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание
- 202 036772 <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 497 ggcccuacgg gcaccggugn n 21 <210> 498 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 498 caccggugcc cguagggccn n 21 <210> 499 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 499 ccacucauuc uuggcaggan n 21 <210> 500 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 203 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 500 uccugccaag aaugaguggn η 21 <210> 501 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 501 ccuacgggca ccggugaaun n 21 <210> 502 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 502 auucaccggu gcccguaggn n 21 <210> 503 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 204 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 503 cuacgggcac cggugaaucn η 21 <210> 504 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 504 gauucaccgg ugcccguagn η <210> 505 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 505 uacgggcacc ggugaauccn η 21 <210> 506 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 205 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 506 ggauucaccg gugcccguan η 21 <210> 507 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 507 acgggcaccg gugaauccan η <210> 508 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 508 uggauucacc ggugcccgun η 21 <210> 509
- 206 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 509 gcaccgguga auccaagugn n 21 <210> 510 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 510 cacuuggauu caccggugcn n 21 <210> 511 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 511 caccggugaa uccaagugun n 21
- 207 036772 <210> 512 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 512 acacuuggau ucaccggugn n 21 <210> 513 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 513 uguggccaug cauguguucn n <210> 514 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 208 036772 <400> 514 gaacacaugc auggccacan η <210> 515 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 515 guggccaugc auguguucan n 21 <210> 516 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 516 ugaacacaug cauggccacn n <210> 517 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
- 209 036772 <221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 517 gccaugcaug uguucagaan η 21 <210> 518 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 518 uucugaacac augcauggcn η 21 <210> 519 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 519 uauuccacca cggcugucan η 21 <210> 520 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 210 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 520 ugacagccgu gguggaauan η 21 <210> 521 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 521 gucaucacca aucccaaggn n 21 <210> 522 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 522 ccuugggauu ggugaugacn n 21 <210> 523 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 211 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 523 guccucugau ggucaaagun η 21 <210> 524 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 524 acuuugacca ucagaggacn η 21 <210> 525 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 525 gauggucaaa guucuagaun η 21 <210> 526 <211> 21 <212> ДНК
- 212 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 526 aucuagaacu uugaccaucn n 21 <210> 527 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 527 augcuguccg aggcaguccn n <210> 528 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 528 ggacugccuc ggacagcaun n 21
- 213 036772 <210> 529 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 529 ccgugcaugu guucagaaan n 21 <210> 530 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 530 uuucugaaca caugcacggn n <210> 531 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 531
- 214 036772 agucuggaga gcugcauggn n 21 <210> 532 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 532 ccaugcagcu cuccagacun n 21 <210> 533 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 533 caugggcuca caacugaggn n 21 <210> 534 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21)
- 215 036772 <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 534 ccucaguugu gagcccaugn n 21 <210> 535 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 535 ucucaucguc ugcuccuccn n 21 <210> 536 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 536 ggaggagcag acgaugagan n 21 <210> 537 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 216 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 537 ccccauucca ugagcaugcn n 21 <210> 538 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 538 gcaugcucau ggaauggggn n 21 <210> 539 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 539 gccccuacuc cuauuccacn n 21 <210> 540 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 217 036772
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 540 guggaauagg aguaggggcn n 21 <210> 541 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 541 cuauuccacc acggcugucn n 21 <210> 542 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 542 gacagccgug guggaauagn n 21 <210> 543 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 218 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 543 cacggcuguc gucaccaaun η 21 <210> 544 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 544 auuggugacg acagccgugn η <210> 545 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) < 223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 545 aggacgaggg augggauuun η 21 <210> 546 <211> 21
- 219 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 546 aaaucccauc ccucguccun n 21 <210> 547 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 547 ucaccucaua ugcuauguun n 21 <210> 548 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 548 aacauagcau augaggugan n 21
- 220 036772 <210> 549 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 549 ccucauaugc uauguuagan n 21 <210> 550 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 550 ucuaacauag cauaugaggn n <210> 551 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 221 036772 <400> 551 auguuagaag uccaggcagn η 21 <210> 552 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 552 cugccuggac uucuaacaun n 21 <210> 553 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 553 ucugaggcug gcccuacggn n 21 <210> 554 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание
- 222 036772 <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 554 ccguagggcc agccucagan n <210> 555 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
< 221> модифицированное основание < 222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 555 ggcccuacgg gcaccggugn n 21 <210> 556 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 556 caccggugcc cguagggccn n <210> 557 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 223 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 557 gggcaccggu gaauccaagn η 21 <210> 558 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 558 cuuggauuca ccggugcccn n 21 <210> 559 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 559 ccaugcaugu guucagaaan n 21 <210> 560 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 224 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 560 uuucugaaca caugcauggn η 21 <210> 561 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 561 ccggugaauc caagugucct t 21 <210> 562 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 562 ggacacuugg auucaccggt t 21 <210> 563 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 563 acucauucuu ggcaggaugt t 21 <210> 564 <211> 21
- 225 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 564 cauccugcca agaaugagut t 21 <210> 565 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 565 aaguguccuc ugauggucat t 21 <210> 566 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 566 ugaccaucag aggacacuut t <210> 567 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 567 ucauucuugg caggauggct t 21 <210> 568 <211> 21 <212> ДНК
- 226 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 568 gccauccugc caagaaugat t <210> 569 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 569 aaguucuaga ugcuguccgt t 21 <210> 570 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 570 cggacagcau cuagaacuut t <210> 571 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 571 guucuagaug cuguccgagt t 21 <210> 572 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 227 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 572 cucggacagc aucuagaact t 21 <210> 573 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 573 cuagaugcug uccgaggcat t 21 <210> 574 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 574 ugccucggac agcaucuagt t 21 <210> 575 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 575 gaugcugucc gaggcaguct t 21 <210> 576 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 228 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 576 gacugccucg gacagcauct t 21 <210> 577 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 577 cauucuuggc aggauggcut t 21 <210> 578 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 578 agccauccug ccaagaaugt t 21 <210> 579 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 579 ugcuguccga ggcaguccut t 21 <210> 580 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 229 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 580 aggacugccu cggacagcat t <210> 581 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 581 ccgaggcagu ccugccauct t 21 <210> 582 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 582 gauggcagga cugccucggt t <210> 583 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 583 caguccugcc aucaaugugt t 21 <210> 584 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 230 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 584 cacauugaug gcaggacugt t 21 <210> 585 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 585 caauguggcc gugcaugugt t 21 <210> 586 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 586 cacaugcacg gccacauugt t 21 <210> 587 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 587 auguguucag aaaggcugct t 21 <210> 588 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 231 036772
Homo sapiens» <400> 588 gcagccuuuc ugaacacaut t 21 <210> 589 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 589 cagaagucca cucauucuut t 21 <210> 590 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 590 aagaaugagu ggacuucugt t 21 <210> 591 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 591 ggcaggaugg cuucucauct t 21 <210> 592 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 232 036772 <400> 592 gaugagaagc cauccugcct t 21 <210> 593 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 593 gagccauuug ccucugggat t 21 <210> 594 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 594 ucccagaggc aaauggcuct t 21 <210> 595 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 595 caggauggcu ucucaucgut t 21 <210> 596 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 233 036772 <400> 596 acgaugagaa gccauccugt t 21 <210> 597 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 597 aggauggcuu cucaucguct t 21 <210> 598 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 598 gacgaugaga agccauccut t 21 <210> 599 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 599 agagcugcau gggcucacat t 21 <210> 600 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 600
- 234 036772 ugugagccca ugcagcucut t 21 <210> 601 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 601 gcugcauggg cucacaacut t 21 <210> 602 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 602 aguugugagc ccaugcagct t 21 <210> 603 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 603 ggauggcuuc ucaucgucut t 21 <210> 604 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 604 agacgaugag aagccaucct t 21
- 235 036772 <210> 605 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 605 gcaugggcuc acaacugagt t 21 <210> 606 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 606 cucaguugug agcccaugct t 21 <210> 607 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 607 augggcucac aacugaggat t 21 <210> 608 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 608 uccucaguug ugagcccaut t 21
- 236 036772 <210> 609 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 609 ugggcucaca acugaggagt t 21 <210> 610 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 610 cuccucaguu gugagcccat t <210> 611 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 611 gaggaauuug uagaagggat t 21 <210> 612 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 612 ucccuucuac aaauuccuct t
- 237 036772 <210> 613 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 613 uuuguagaag ggauauacat t 21 <210> 614 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 614 uguauauccc uucuacaaat t 21 <210> 615 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 615 uuguagaagg gauauacaat t 21 <210> 616 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 616 uuguauaucc cuucuacaat t 21 <210> 617
- 238 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 617 uguagaaggg auauacaaat t 21 <210> 618 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 618 uuuguauauc ccuucuacat t 21 <210> 619 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 619 agaagggaua uacaaagugt t 21 <210> 620 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 620 cacuuuguau aucccuucut t 21 <210> 621 <211> 21
- 239 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 621 aaguggaaau agacaccaat t 21 <210> 622 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 622 uuggugucua uuuccacuut t 21 <210> 623 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 623 ggaaauagac accaaaucut t 21 <210> 624 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 624 agauuuggug ucuauuucct t 21 <210> 625 <211> 21 <212> ДНК
- 240 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 625 gaaauagaca ccaaaucuut t <210> 626 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 626 aagauuuggu gucuauuuct t 21 <210> 627 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 627 auagacacca aaucuuacut t <210> 628 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 628 aguaagauuu ggugucuaut t 21 <210> 629 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 241 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 629 uagacaccaa aucuuacugt t 21 <210> 630 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 630 caguaagauu uggugucuat t 21 <210> 631 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 631 agacaccaaa ucuuacuggt t 21 <210> 632 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 632 ccaguaagau uuggugucut t 21 <210> 633 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 242 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 633 uuacuggaag gcacuuggct t 21 <210> 634 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 634 gccaagugcc uuccaguaat t 21 <210> 635 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 635 uucucaucgu cugcuccuct t 21 <210> 636 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 636 gaggagcaga cgaugagaat t 21 <210> 637 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 243 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 637 ggaaggcacu uggcaucuct t <210> 638 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 638 gagaugccaa gugccuucct t 21 <210> 639 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 639 ggcacuuggc aucuccccat t <210> 640 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 640 uggggagaug ccaagugcct t 21 <210> 641 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 244 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 641 ggcaucuccc cauuccaugt t 21 <210> 642 <211> 22 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 642 auggaauggg gagaugcctt tt 22 <210> 643 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 643 gcaucucccc auuccaugat t 21 <210> 644 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 644 ucauggaaug gggagaugct t 21 <210> 645 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 245 036772
Homo sapiens» <400> 645 caucucccca uuccaugagt t 21 <210> 646 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 646 cucauggaau ggggagaugt t 21 <210> 647 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 647 aucuccccau uccaugagct t 21 <210> 648 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 648 gcucauggaa uggggagaut t 21 <210> 649 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 246 036772 <400> 649 cuccccauuc caugagcaut t <210> 650 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 650 augcucaugg aauggggagt t 21 <210> 651 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 651 cccauuccau gagcaugcat t <210> 652 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 652 ugcaugcuca uggaaugggt t 21 <210> 653 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 247 036772 <400> 653 ccaugagcau gcagaggugt t <210> 654 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 654 caccucugca ugcucauggt t 21 <210> 655 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 655 agcaugcaga ggugguauut t <210> 656 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 656 aauaccaccu cugcaugcut t 21 <210> 657 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 657
- 248 036772 caugcagagg ugguauucat t <210> 658 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 658 ugaauaccac cucugcaugt t 21 <210> 659 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 659 augcagaggu gguauucact t <210> 660 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 660 gugaauacca ccucugcaut t 21 <210> 661 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 661 ggugguauuc acagccaact t
- 249 036772 <210> 662 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 662 guuggcugug aauaccacct t 21 <210> 663 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 663 gugguauuca cagccaacgt t <210> 664 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 664 cguuggcugu gaauaccact t 21 <210> 665 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 665 ugguauucac agccaacgat t
- 250 036772 <210> 666 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 666 ucguuggcug ugaauaccat t 21 <210> 667 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 667 gguauucaca gccaacgact t <210> 668 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 668 gucguuggcu gugaauacct t 21 <210> 669 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 669 guauucacag ccaacgacut t
- 251 036772 <210> 670 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 670 agucguuggc ugugaauact t 21 <210> 671 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 671 uauucacagc caacgacuct t <210> 672 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 672 gagucguugg cugugaauat t 21 <210> 673 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 673 ucacagccaa cgacuccggt t <210> 674
- 252 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 674 ccggagucgu uggcugugat t 21 <210> 675 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 675 ccccgccgcu acaccauugt t 21 <210> 676 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 676 caauggugua gcggcggggt t 21 <210> 677 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 677 gaaguccacu cauucuuggt t 21 <210> 678 <211> 21
- 253 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 678 ccaagaauga guggacuuct t 21 <210> 679 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 679 cccugcugag ccccuacuct t 21 <210> 680 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 680 gaguaggggc ucagcagggt t <210> 681 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 681 cugagccccu acuccuauut t 21 <210> 682 <211> 21 <212> ДНК
- 254 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 682 aauaggagua ggggcucagt t 21 <210> 683 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 683 ugagccccua cuccuauuct t 21 <210> 684 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 684 gaauaggagu aggggcucat t 21 <210> 685 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 685 ccccuacucc uauuccacct t 21 <210> 686 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 255 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 686 gguggaauag gaguaggggt t 21 <210> 687 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 687 cuacuccuau uccaccacgt t 21 <210> 688 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 688 cgugguggaa uaggaguagt t 21 <210> 689 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 689 uacuccuauu ccaccacggt t 21 <210> 690 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 256 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 690 ccguggugga auaggaguat t 21 <210> 691 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 691 acuccuauuc caccacggct t 21 <210> 692 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 692 gccguggugg aauaggagut t 21 <210> 693 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 693 uccuauucca ccacggcugt t 21 <210> 694 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 257 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 694 cagccguggu ggaauaggat t 21 <210> 695 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 695 uauuccacca cggcugucgt t 21 <210> 696 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 696 cgacagccgu gguggaauat t 21 <210> 697 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 697 auuccaccac ggcugucgut t 21 <210> 698 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 258 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 698 acgacagccg ugguggaaut t <210> 699 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 699 caccacggcu gucgucacct t 21 <210> 700 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 700 ggugacgaca gccguggugt t <210> 701 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 701 accacggcug ucgucaccat t 21 <210> 702 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 259 036772
Homo sapiens» <400> 702 uggugacgac agccguggut t 21 <210> 703 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 703 ccacggcugu cgucaccaat t 21 <210> 704 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 704 uuggugacga cagccguggt t 21 <210> 705 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 705 acggcugucg ucaccaauct t 21 <210> 706 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 260 036772 <400> 706 gauuggugac gacagccgut t 21 <210> 707 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 707 cggcugucgu caccaaucct t 21 <210> 708 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 708 ggauugguga cgacagccgt t 21 <210> 709 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 709 cgucaccaau cccaaggaat t 21 <210> 710 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 261 036772 <400> 710 uuccuuggga uuggugacgt t <210> 711 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 711 caaucccaag gaaugagggt t 21 <210> 712 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 712 cccucauucc uugggauugt t <210> 713 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 713 ccugaaggac gagggauggt t 21 <210> 714 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 714
- 262 036772 ccaucccucg uccuucaggt t 21 <210> 715 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 715 ggacgaggga ugggauuuct t 21 <210> 716 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 716 gaaaucccau cccucgucct t 21 <210> 717 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 717 aaguccacuc auucuuggct t 21 <210> 718 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 718 gccaagaaug aguggacuut t 21
- 263 036772 <210> 719 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 719 gggauuucau guaaccaagt t 21 <210> 720 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 720 cuugguuaca ugaaauccct t <210> 721 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 721 ggauuucaug uaaccaagat t 21 <210> 722 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 722 ucuugguuac augaaaucct t
- 264 036772 <210> 723 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 723 ucauguaacc aagaguauut t 21 <210> 724 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 724 aauacucuug guuacaugat t 21 <210> 725 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 725 auguaaccaa gaguauucct t 21 <210> 726 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 726 ggaauacucu ugguuacaut t 21
- 265 036772 <210> 727 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 727 uguaaccaag aguauuccat t 21 <210> 728 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 728 uggaauacuc uugguuacat t <210> 729 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 729 guaaccaaga guauuccaut t 21 <210> 730 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 730 auggaauacu cuugguuact t <210> 731
- 266 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 731 ugccuugcug gacugguaut t 21 <210> 732 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 732 auaccagucc agcaaggcat t 21 <210> 733 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 733 uaaagcagug uuuucaccut t 21 <210> 734 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 734 aggugaaaac acugcuuuat t 21 <210> 735 <211> 21
- 267 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 735 gccuugcugg acugguauut t 21 <210> 736 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 736 aauaccaguc cagcaaggct t 21 <210> 737 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 737 uguuuucacc ucauaugcut t 21 <210> 738 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 738 agcauaugag gugaaaacat t 21 <210> 739 <211> 21 <212> ДНК
- 268 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 739 guuuucaccu cauaugcuat t 21 <210> 740 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 740 uagcauauga ggugaaaact t 21 <210> 741 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 741 uuuucaccuc auaugcuaut t 21 <210> 742 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 742 auagcauaug aggugaaaat t 21 <210> 743 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 269 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 743 uucaccucau augcuaugut t 21 <210> 744 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 744 acauagcaua ugaggugaat t 21 <210> 745 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 745 caccucauau gcuauguuat t 21 <210> 746 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 746 uaacauagca uaugaggugt t 21 <210> 747 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 270 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 747 ccuugcugga cugguauuut t <210> 748 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 748 aaauaccagu ccagcaaggt t 21 <210> 749 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 749 auaugcuaug uuagaaguct t <210> 750 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 750 gacuucuaac auagcauaut t 21 <210> 751 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 271 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 751 uaugcuaugu uagaagucct t 21 <210> 752 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 752 ggacuucuaa cauagcauat t 21 <210> 753 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 753 ugcuauguua gaaguccagt t 21 <210> 754 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 754 cuggacuucu aacauagcat t 21 <210> 755 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 272 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 755 cuugcuggac ugguauuugt t 21 <210> 756 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 756 caaauaccag uccagcaagt t 21 <210> 757 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 757 aguccaggca gagacaauat t 21 <210> 758 <211> 22 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 758 auugucucug ccuggacutt tt 22 <210> 759 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 273 036772
Homo sapiens» <400> 759 uccaggcaga gacaauaaat t <210> 760 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 760 uuuauugucu cugccuggat t 21 <210> 761 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 761 gugaaaggca cuuuucauut t <210> 762 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 762 aaugaaaagu gccuuucact t 21 <210> 763 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 274 036772 <400> 763 uggacuggua uuugugucut t 21 <210> 764 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 764 agacacaaau accaguccat t 21 <210> 765 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 765 gucugaggcu ggcccuacgt t 21 <210> 766 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 766 cguagggcca gccucagact t 21 <210> 767 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 275 036772 <400> 767 cugaggcugg cccuacgggt t 21 <210> 768 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 768 cccguagggc cagccucagt t 21 <210> 769 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 769 gaggcuggcc cuacgggcat t 21 <210> 770 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 770 ugcccguagg gccagccuct t 21 <210> 771 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 771
- 276 036772 aggcuggccc uacgggcact t <210> 772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 772 gugcccguag ggccagccut t 21 <210> 773 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 773 gcuggcccua cgggcaccgt t <210> 774 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 774 cggugcccgu agggccagct t 21 <210> 775 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 775 cuggcccuac gggcaccggt t
- 277 036772 <210> 776 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 776 ccggugcccg uagggccagt t 21 <210> 777 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 777 ggcccuacgg gcaccggugt t 21 <210> 778 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 778 caccggugcc cguagggcct t 21 <210> 779 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 779 ccacucauuc uuggcaggat t 21
- 278 036772 <210> 780 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 780 uccugccaag aaugaguggt t 21 <210> 781 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 781 ccuacgggca ccggugaaut t 21 <210> 782 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 782 auucaccggu gcccguaggt t 21 <210> 783 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 783 cuacgggcac cggugaauct t 21
- 279 036772 <210> 784 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 784 gauucaccgg ugcccguagt t 21 <210> 785 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 785 uacgggcacc ggugaaucct t 21 <210> 786 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 786 ggauucaccg gugcccguat t 21 <210> 787 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 787 acgggcaccg gugaauccat t 21 <210> 788
- 280 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 788 uggauucacc ggugcccgut t 21 <210> 789 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 789 gcaccgguga auccaagugt t <210> 790 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 790 cacuuggauu caccggugct t 21 <210> 791 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 791 caccggugaa uccaagugut t <210> 792 <211> 21
- 281 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 792 acacuuggau ucaccggugt t 21 <210> 793 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 793 uguggccaug cauguguuct t 21 <210> 794 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 794 gaacacaugc auggccacat t <210> 795 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 795 guggccaugc auguguucat t 21 <210> 796 <211> 21 <212> ДНК
- 282 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 796 ugaacacaug cauggccact t 21 <210> 797 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 797 gccaugcaug uguucagaat t 21 <210> 798 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 798 uucugaacac augcauggct t 21 <210> 799 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 799 uauuccacca cggcugucat t 21 <210> 800 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 283 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 800 ugacagccgu gguggaauat t 21 <210> 801 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 801 gucaucacca aucccaaggt t 21 <210> 802 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 802 ccuugggauu ggugaugact t 21 <210> 803 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 803 guccucugau ggucaaagut t 21 <210> 804 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 284 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 804 acuuugacca ucagaggact t 21 <210> 805 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 805 gauggucaaa guucuagaut t 21 <210> 806 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 806 aucuagaacu uugaccauct t 21 <210> 807 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 807 augcuguccg aggcagucct t 21 <210> 808 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 285 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 808 ggacugccuc ggacagcaut t 21 <210> 809 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 809 ccgugcaugu guucagaaat t 21 <210> 810 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 810 uuucugaaca caugcacggt t 21 <210> 811 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 811 agucuggaga gcugcauggt t 21 <210> 812 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 286 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 812 ccaugcagcu cuccagacut t <210> 813 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 813 caugggcuca caacugaggt t 21 <210> 814 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 814 ccucaguugu gagcccaugt t <210> 815 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 815 ucucaucguc ugcuccucct t 21 <210> 816 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 287 036772
Homo sapiens» <400> 816 ggaggagcag acgaugagat t <210> 817 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 817 ccccauucca ugagcaugct t 21 <210> 818 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 818 gcaugcucau ggaauggggt t <210> 819 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 819 gccccuacuc cuauuccact t 21 <210> 820 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 288 036772 <400> 820 guggaauagg aguaggggct t <210> 821 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 821 cuauuccacc acggcuguct t 21 <210> 822 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 822 gacagccgug guggaauagt t <210> 823 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 823 cacggcuguc gucaccaaut t 21 <210> 824 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 289 036772 <400> 824 auuggugacg acagccgugt t 21 <210> 825 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 825 aggacgaggg augggauuut t 21 <210> 826 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 826 aaaucccauc ccucguccut t 21 <210> 827 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 827 ucaccucaua ugcuauguut t 21 <210> 828 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 828
- 290 036772 aacauagcau augaggugat t 21 <210> 829 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 829 ccucauaugc uauguuagat t 21 <210> 830 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 830 ucuaacauag cauaugaggt t 21 <210> 831 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 831 auguuagaag uccaggcagt t 21 <210> 832 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 832 cugccuggac uucuaacaut t 21
- 291 036772 <210> 833 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 833 ucugaggcug gcccuacggt t 21 <210> 834 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 834 ccguagggcc agccucagat t 21 <210> 835 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 835 ggcccuacgg gcaccggugt t 21 <210> 836 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 836 caccggugcc cguagggcct t 21
- 292 036772 <210> 837 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 837 gggcaccggu gaauccaagt t 21 <210> 838 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 838 cuuggauuca ccggugccct t 21 <210> 839 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 839 ccaugcaugu guucagaaat t 21 <210> 840 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 840 uuucugaaca caugcauggt t 21
- 293 036772 <210> 841 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 841 ccggugaauc caagugucct t 21 <210> 842 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 842 ggacacuugg auucaccggt t <210> 843 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 843 acucauucuu ggcaggaugt t 21 <210> 844 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 844 cauccugcca agaaugagut t <210> 845
- 294 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 845 aaguguccuc ugauggucat t 21 <210> 846 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 846 ugaccaucag aggacacuut t 21 <210> 847 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 847 ucauucuugg caggauggct t 21 <210> 848 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 848 gccauccugc caagaaugat t 21 <210> 849 <211> 21
- 295 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 849 aaguucuaga ugcuguccgt t 21 <210> 850 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 850 cggacagcau cuagaacuut t 21 <210> 851 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 851 guucuagaug cuguccgagt t <210> 852 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 852 cucggacagc aucuagaact t 21 <210> 853 <211> 21 <212> ДНК
- 296 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 853 cuagaugcug uccgaggcat t 21 <210> 854 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 854 ugccucggac agcaucuagt t 21 <210> 855 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 855 gaugcugucc gaggcaguct t 21 <210> 856 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 856 gacugccucg gacagcauct t 21 <210> 857 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 297 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 857 cauucuuggc aggauggcut t 21 <210> 858 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 858 agccauccug ccaagaaugt t 21 <210> 859 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 859 ugcuguccga ggcaguccut t 21 <210> 860 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 860 aggacugccu cggacagcat t 21 <210> 861 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 298 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 861 ccgaggcagu ccugccauct t 21 <210> 862 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 862 gauggcagga cugccucggt t 21 <210> 863 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 863 caguccugcc aucaaugugt t 21 <210> 864 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 864 cacauugaug gcaggacugt t 21 <210> 865 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 299 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 865 caauguggcc gugcaugugt t 21 <210> 866 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 866 cacaugcacg gccacauugt t 21 <210> 867 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 867 auguguucag aaaggcugct t 21 <210> 868 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 868 gcagccuuuc ugaacacaut t 21 <210> 869 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 300 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 869 cagaagucca cucauucuut t 21 <210> 870 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 870 aagaaugagu ggacuucugt t 21 <210> 871 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 871 ggcaggaugg cuucucauct t 21 <210> 872 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 872 gaugagaagc cauccugcct t 21 <210> 873 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 301 036772
Homo sapiens» <400> 873 gagccauuug ccucugggat t 21 <210> 874 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 874 ucccagaggc aaauggcuct t 21 <210> 875 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 875 caggauggcu ucucaucgut t 21 <210> 876 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 876 acgaugagaa gccauccugt t 21 <210> 877 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 302 036772 <400> 877 aggauggcuu cucaucguct t 21 <210> 878 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 878 gacgaugaga agccauccut t 21 <210> 879 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 879 agagcugcau gggcucacat t 21 <210> 880 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 880 ugugagccca ugcagcucut t 21 <210> 881 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 303 036772 <400> 881 gcugcauggg cucacaacut t 21 <210> 882 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 882 aguugugagc ccaugcagct t 21 <210> 883 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 883 ggauggcuuc ucaucgucut t 21 <210> 884 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 884 agacgaugag aagccaucct t 21 <210> 885 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 885
- 304 036772 gcaugggcuc acaacugagt t 21 <210> 886 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 886 cucaguugug agcccaugct t 21 <210> 887 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 887 augggcucac aacugaggat t 21 <210> 888 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 888 uccucaguug ugagcccaut t 21 <210> 889 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 889 ugggcucaca acugaggagt t 21
- 305 036772 <210> 890 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 890 cuccucaguu gugagcccat t 21 <210> 891 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 891 gaggaauuug uagaagggat t 21 <210> 892 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 892 ucccuucuac aaauuccuct t 21 <210> 893 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 893 uuuguagaag ggauauacat t 21
- 306 036772 <210> 894 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 894 uguauauccc uucuacaaat t 21 <210> 895 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 895 uuguagaagg gauauacaat t <210> 896 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 896 uuguauaucc cuucuacaat t 21 <210> 897 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 897 uguagaaggg auauacaaat t
- 307 036772 <210> 898 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 898 uuuguauauc ccuucuacat t 21 <210> 899 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 899 agaagggaua uacaaagugt t 21 <210> 900 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 900 cacuuuguau aucccuucut t 21 <210> 901 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 901 aaguggaaau agacaccaat t 21 <210> 902
- 308 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 902 uuggugucua uuuccacuut t 21 <210> 903 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 903 ggaaauagac accaaaucut t <210> 904 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 904 agauuuggug ucuauuucct t 21 <210> 905 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 905 gaaauagaca ccaaaucuut t <210> 906 <211> 21
- 309 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 906 aagauuuggu gucuauuuct t 21 <210> 907 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 907 auagacacca aaucuuacut t 21 <210> 908 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 908 aguaagauuu ggugucuaut t <210> 909 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 909 uagacaccaa aucuuacugt t 21 <210> 910 <211> 21 <212> ДНК
- 310 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 910 caguaagauu uggugucuat t 21 <210> 911 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 911 agacaccaaa ucuuacuggt t 21 <210> 912 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 912 ccaguaagau uuggugucut t 21 <210> 913 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 913 uuacuggaag gcacuuggct t 21 <210> 914 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 311 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 914 gccaagugcc uuccaguaat t 21 <210> 915 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 915 uucucaucgu cugcuccuct t 21 <210> 916 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 916 gaggagcaga cgaugagaat t 21 <210> 917 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 917 ggaaggcacu uggcaucuct t 21 <210> 918 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 312 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 918 gagaugccaa gugccuucct t 21 <210> 919 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 919 ggcacuuggc aucuccccat t 21 <210> 920 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 920 uggggagaug ccaagugcct t 21 <210> 921 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 921 ggcaucuccc cauuccaugt t 21 <210> 922 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 313 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 922 cauggaaugg ggagaugcct t <210> 923 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 923 gcaucucccc auuccaugat t 21 <210> 924 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 924 ucauggaaug gggagaugct t <210> 925 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 925 caucucccca uuccaugagt t 21 <210> 926 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 314 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 926 cucauggaau ggggagaugt t <210> 927 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 927 aucuccccau uccaugagct t 21 <210> 928 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 928 gcucauggaa uggggagaut t <210> 929 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 929 cuccccauuc caugagcaut t 21 <210> 930 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 315 036772
Homo sapiens» <400> 930 augcucaugg aauggggagt t <210> 931 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 931 cccauuccau gagcaugcat t 21 <210> 932 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 932 ugcaugcuca uggaaugggt t <210> 933 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 933 ccaugagcau gcagaggugt t 21 <210> 934 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 316 036772 <400> 934 caccucugca ugcucauggt t 21 <210> 935 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 935 agcaugcaga ggugguauut t 21 <210> 936 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 936 aauaccaccu cugcaugcut t 21 <210> 937 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 937 caugcagagg ugguauucat t 21 <210> 938 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 317 036772 <400> 938 ugaauaccac cucugcaugt t 21 <210> 939 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 939 augcagaggu gguauucact t 21 <210> 940 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 940 gugaauacca ccucugcaut t 21 <210> 941 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 941 ggugguauuc acagccaact t 21 <210> 942 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 942
- 318 036772 guuggcugug aauaccacct t <210> 943 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 943 gugguauuca cagccaacgt t 21 <210> 944 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 944 cguuggcugu gaauaccact t <210> 945 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 945 ugguauucac agccaacgat t 21 <210> 946 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 946 ucguuggcug ugaauaccat t
- 319 036772 <210> 947 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 947 gguauucaca gccaacgact t 21 <210> 948 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 948 gucguuggcu gugaauacct t 21 <210> 949 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 949 guauucacag ccaacgacut t 21 <210> 950 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 950 agucguuggc ugugaauact t 21
- 320 036772 <210> 951 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 951 uauucacagc caacgacuct t 21 <210> 952 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 952 gagucguugg cugugaauat t <210> 953 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 953 ucacagccaa cgacuccggt t 21 <210> 954 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 954 ccggagucgu uggcugugat t
- 321 036772 <210> 955 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 955 ccccgccgcu acaccauugt t 21 <210> 956 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 956 caauggugua gcggcggggt t 21 <210> 957 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 957 gaaguccacu cauucuuggt t 21 <210> 958 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 958 ccaagaauga guggacuuct t 21 <210> 959
- 322 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 959 cccugcugag ccccuacuct t 21 <210> 960 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 960 gaguaggggc ucagcagggt t 21 <210> 961 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 961 cugagccccu acuccuauut t 21 <210> 962 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 962 aauaggagua ggggcucagt t 21 <210> 963 <211> 21
- 323 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 963 ugagccccua cuccuauuct t 21 <210> 964 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 964 gaauaggagu aggggcucat t <210> 965 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 965 ccccuacucc uauuccacct t 21 <210> 966 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 966 gguggaauag gaguaggggt t <210> 967 <211> 21 <212> ДНК
- 324 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 967 cuacuccuau uccaccacgt t 21 <210> 968 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 968 cgugguggaa uaggaguagt t 21 <210> 969 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 969 uacuccuauu ccaccacggt t 21 <210> 970 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 970 ccguggugga auaggaguat t 21 <210> 971 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 325 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 971 acuccuauuc caccacggct t 21 <210> 972 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 972 gccguggugg aauaggagut t 21 <210> 973 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 973 uccuauucca ccacggcugt t 21 <210> 974 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 974 cagccguggu ggaauaggat t 21 <210> 975 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 326 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 975 uauuccacca cggcugucgt t 21 <210> 976 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 976 cgacagccgu gguggaauat t 21 <210> 977 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 977 auuccaccac ggcugucgut t 21 <210> 978 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 978 acgacagccg ugguggaaut t 21
<210> 979
<211> 21
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<220>
- 327 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 979 caccacggcu gucgucacct t 21 <210> 980 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 980 ggugacgaca gccguggugt t 21 <210> 981 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 981 accacggcug ucgucaccat t 21 <210> 982 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 982 uggugacgac agccguggut t 21 <210> 983 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 328 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 983 ccacggcugu cgucaccaat t 21 <210> 984 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 984 uuggugacga cagccguggt t 21 <210> 985 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 985 acggcugucg ucaccaauct t 21 <210> 986 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 986 gauuggugac gacagccgut t 21 <210> 987 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 329 036772
Homo sapiens» <400> 987 cggcugucgu caccaaucct t <210> 988 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 988 ggauugguga cgacagccgt t 21 <210> 989 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 989 cgucaccaau cccaaggaat t <210> 990 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 990 uuccuuggga uuggugacgt t 21 <210> 991 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 330 036772 <400> 991 caaucccaag gaaugagggt t <210> 992 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 992 cccucauucc uugggauugt t 21 <210> 993 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 993 ccugaaggac gagggauggt t <210> 994 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 994 ccaucccucg uccuucaggt t 21 <210> 995 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 331 036772 <400> 995 ggacgaggga ugggauuuct t 21 <210> 996 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 996 gaaaucccau cccucgucct t 21 <210> 997 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 997 aaguccacuc auucuuggct t 21 <210> 998 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 998 gccaagaaug aguggacuut t 21 <210> 999 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 999
- 332 036772 gggauuucau guaaccaagt t 21 <210> 1000 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1000 cuugguuaca ugaaauccct t 21 <210> 1001 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1001 ggauuucaug uaaccaagat t 21 <210> 1002 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1002 ucuugguuac augaaaucct t 21 <210> 1003 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1003 ucauguaacc aagaguauut t 21
- 333 036772 <210> 1004 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1004 aauacucuug guuacaugat t 21 <210> 1005 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1005 auguaaccaa gaguauucct t <210> 1006 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1006 ggaauacucu ugguuacaut t 21 <210> 1007 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1007 uguaaccaag aguauuccat t
- 334 036772 <210> 1008 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1008 uggaauacuc uugguuacat t 21 <210> 1009 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1009 guaaccaaga guauuccaut t <210> 1010 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1010 auggaauacu cuugguuact t 21 <210> 1011 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1011 ugccuugcug gacugguaut t
- 335 036772 <210> 1012 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1012 auaccagucc agcaaggcat t 21 <210> 1013 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1013 uaaagcagug uuuucaccut t 21 <210> 1014 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1014 aggugaaaac acugcuuuat t 21 <210> 1015 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1015 gccuugcugg acugguauut t <210> 1016
- 336 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1016 aauaccaguc cagcaaggct t 21 <210> 1017 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1017 uguuuucacc ucauaugcut t 21 <210> 1018 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1018 agcauaugag gugaaaacat t 21 <210> 1019 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1019 guuuucaccu cauaugcuat t 21 <210> 1020 <211> 21
- 337 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1020 uagcauauga ggugaaaact t 21 <210> 1021 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1021 uuuucaccuc auaugcuaut t 21 <210> 1022 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1022 auagcauaug aggugaaaat t 21 <210> 1023 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1023 uucaccucau augcuaugut t 21 <210> 1024 <211> 21 <212> ДНК
- 338 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1024 acauagcaua ugaggugaat t <210> 1025 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1025 caccucauau gcuauguuat t 21 <210> 1026 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1026 uaacauagca uaugaggugt t <210> 1027 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1027 ccuugcugga cugguauuut t 21 <210> 1028 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 339 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1028 aaauaccagu ccagcaaggt t 21 <210> 1029 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1029 auaugcuaug uuagaaguct t 21 <210> 1030 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1030 gacuucuaac auagcauaut t 21 <210> 1031 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1031 uaugcuaugu uagaagucct t 21 <210> 1032 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 340 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1032 ggacuucuaa cauagcauat t 21 <210> 1033 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1033 ugcuauguua gaaguccagt t 21 <210> 1034 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1034 cuggacuucu aacauagcat t 21 <210> 1035 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1035 cuugcuggac ugguauuugt t 21 <210> 1036 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 341 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1036 caaauaccag uccagcaagt t <210> 1037 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1037 aguccaggca gagacaauat t 21 <210> 1038 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1038 uauugucucu gccuggacut t <210> 1039 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1039 uccaggcaga gacaauaaat t 21 <210> 1040 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 342 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1040 uuuauugucu cugccuggat t 21 <210> 1041 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1041 gugaaaggca cuuuucauut t 21 <210> 1042 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1042 aaugaaaagu gccuuucact t 21 <210> 1043 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1043 uggacuggua uuugugucut t 21 <210> 1044 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 343 036772
Homo sapiens» <400> 1044 agacacaaau accaguccat t 21 <210> 1045 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1045 gucugaggcu ggcccuacgt t 21 <210> 1046 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1046 cguagggcca gccucagact t 21 <210> 1047 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1047 cugaggcugg cccuacgggt t 21
<210> 1048
<211> 21
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<220>
<221> источник
<223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК
Homo sapiens»
- 344 036772 <400> 1048 cccguagggc cagccucagt t 21 <210> 1049 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1049 gaggcuggcc cuacgggcat t 21 <210> 1050 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1050 ugcccguagg gccagccuct t 21 <210> 1051 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1051 aggcuggccc uacgggcact t 21 <210> 1052 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 345 036772 <400> 1052 gugcccguag ggccagccut t <210> 1053 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1053 gcuggcccua cgggcaccgt t 21 <210> 1054 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1054 cggugcccgu agggccagct t <210> 1055 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1055 cuggcccuac gggcaccggt t 21 <210> 1056 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1056
- 346 036772 ccggugcccg uagggccagt t <210> 1057 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1057 ggcccuacgg gcaccggugt t 21 <210> 1058 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1058 caccggugcc cguagggcct t <210> 1059 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1059 ccacucauuc uuggcaggat t 21 <210> 1060 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1060 uccugccaag aaugaguggt t
- 347 036772 <210> 1061 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1061 ccuacgggca ccggugaaut t 21 <210> 1062 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1062 auucaccggu gcccguaggt t <210> 1063 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1063 cuacgggcac cggugaauct t 21 <210> 1064 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1064 gauucaccgg ugcccguagt t
- 348 036772 <210> 1065 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1065 uacgggcacc ggugaaucct t 21 <210> 1066 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1066 ggauucaccg gugcccguat t <210> 1067 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1067 acgggcaccg gugaauccat t 21 <210> 1068 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1068 uggauucacc ggugcccgut t
- 349 036772 <210> 1069 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1069 gcaccgguga auccaagugt t 21 <210> 1070 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1070 cacuuggauu caccggugct t <210> 1071 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1071 caccggugaa uccaagugut t 21 <210> 1072 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1072 acacuuggau ucaccggugt t <210> 1073
- 350 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1073 uguggccaug cauguguuct t 21 <210> 1074 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1074 gaacacaugc auggccacat t <210> 1075 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1075 guggccaugc auguguucat t 21 <210> 1076 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1076 ugaacacaug cauggccact t 21 <210> 1077 <211> 21
- 351 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1077 gccaugcaug uguucagaat t 21 <210> 1078 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1078 uucugaacac augcauggct t 21 <210> 1079 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1079 uauuccacca cggcugucat t 21 <210> 1080 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1080 ugacagccgu gguggaauat t 21 <210> 1081 <211> 21 <212> ДНК
- 352 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1081 gucaucacca aucccaaggt t <210> 1082 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1082 ccuugggauu ggugaugact t 21 <210> 1083 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1083 guccucugau ggucaaagut t <210> 1084 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1084 acuuugacca ucagaggact t 21 <210> 1085 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 353 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1085 gauggucaaa guucuagaut t 21 <210> 1086 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1086 aucuagaacu uugaccauct t 21 <210> 1087 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1087 augcuguccg aggcagucct t 21 <210> 1088 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1088 ggacugccuc ggacagcaut t 21 <210> 1089 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 354 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1089 ccgugcaugu guucagaaat t 21 <210> 1090 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1090 uuucugaaca caugcacggt t 21 <210> 1091 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1091 agucuggaga gcugcauggt t 21 <210> 1092 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1092 ccaugcagcu cuccagacut t 21 <210> 1093 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 355 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1093 caugggcuca caacugaggt t 21 <210> 1094 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1094 ccucaguugu gagcccaugt t 21 <210> 1095 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1095 ucucaucguc ugcuccucct t 21 <210> 1096 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1096 ggaggagcag acgaugagat t 21 <210> 1097 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 356 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1097 ccccauucca ugagcaugct t <210> 1098 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1098 gcaugcucau ggaauggggt t 21 <210> 1099 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1099 gccccuacuc cuauuccact t <210> 1100 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1100 guggaauagg aguaggggct t 21 <210> 1101 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 357 036772
Homo sapiens» <400> 1101 cuauuccacc acggcuguct t 21 <210> 1102 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1102 gacagccgug guggaauagt t 21 <210> 1103 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1103 cacggcuguc gucaccaaut t 21 <210> 1104 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1104 auuggugacg acagccgugt t 21 <210> 1105 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 358 036772 <400> 1105 aggacgaggg augggauuut t 21 <210> 1106 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1106 aaaucccauc ccucguccut t 21 <210> 1107 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1107 ucaccucaua ugcuauguut t 21 <210> 1108 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1108 aacauagcau augaggugat t 21 <210> 1109 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 359 036772 <400> 1109 ccucauaugc uauguuagat t 21 <210> 1110 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1110 ucuaacauag cauaugaggt t 21 <210> 1111 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1111 auguuagaag uccaggcagt t 21 <210> 1112 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1112 cugccuggac uucuaacaut t 21 <210> 1113 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1113
- 360 036772 ucugaggcug gcccuacggt t <210> 1114 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1114 ccguagggcc agccucagat t 21 <210> 1115 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1115 ggcccuacgg gcaccggugt t <210> 1116 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1116 caccggugcc cguagggcct t 21 <210> 1117 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1117 gggcaccggu gaauccaagt t
- 361 036772 <210> 1118 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1118 cuuggauuca ccggugccct t 21 <210> 1119 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1119 ccaugcaugu guucagaaat t 21 <210> 1120 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1120 uuucugaaca caugcauggt t 21 <210> 1121 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1121 guccucugau ggucaaagu 19 <210> 1122 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus
- 362 036772 <400> 1122 acuuugacca ucagaggac 19 <210> 1123 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1123 uucuugcucu auaaaccgu 19 <210> 1124 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1124 acgguuuaua gagcaagaa 19 <210> 1125 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1125 cucuauaaac cguguuagc 19 <210> 1126 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1126 gcuaacacgg uuuauagag 19 <210> 1127 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1127 ucgccacuac accaucgca 19 <210> 1128 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1128 ugcgauggug uaguggcga 19
- 363 036772 <210> 1129 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1129 ucuugcucua uaaaccgug <210> 1130 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1130 cacgguuuau agagcaaga 19 <210> 1131 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1131 ugcucuauaa accguguua <210> 1132 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1132 uaacacgguu uauagagca <210> 1133 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1133 caguguucuu gcucuauaa <210> 1134 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1134 uuauagagca agaacacug 19 <210> 1135
- 364 036772 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1135 gcucuauaaa ccguguuag <210> 1136 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1136 cuaacacggu uuauagagc 19 <210> 1137 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1137 ccuggaugcu guccgaggc 19 <210> 1138 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1138 gccucggaca gcauccagg 19 <210> 1139 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1139 ucugaugguc aaaguccug 19 <210> 1140 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1140 caggacuuug accaucaga 19 <210> 1141 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus
- 365 036772 <400> 1141 cuggagagcu gcacgggcu <210> 1142 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1142 agcccgugca gcucuccag <210> 1143 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1143 ucuauaaacc guguuagca <210> 1144 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1144 ugcuaacacg guuuauaga <210> 1145 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1145 aacaguguuc uugcucuau <210> 1146 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1146 auagagcaag aacacuguu <210> 1147 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1147 cucugauggu caaaguccu
- 366 036772 <210> 1148 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1148 aggacuuuga ccaucagag 19 <210> 1149 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1149 ugcuguccga ggcagcccu 19 <210> 1150 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1150 agggcugccu cggacagca 19 <210> 1151 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1151 gucuggagag cugcacggg 19 <210> 1152 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1152 cccgugcagc ucuccagac 19 <210> 1153 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1153 acaguguucu ugcucuaua 19 <210> 1154
- 367 036772 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1154 uauagagcaa gaacacugu <210> 1155 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1155 ccucugaugg ucaaagucc 19 <210> 1156 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1156 ggacuuugac caucagagg 19 <210> 1157 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1157 aguccuggau gcuguccga 19 <210> 1158 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1158 ucggacagca uccaggacu 19 <210> 1159 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1159 uugccucugg gaagaccgc 19 <210> 1160 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus
- 368 036772 <400> 1160 gcggucuucc cagaggcaa 19 <210> 1161 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1161 uggagagcug cacgggcuc 19 <210> 1162 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1162 gagcccgugc agcucucca 19 <210> 1163 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1163 gagagcugca cgggcucac 19 <210> 1164 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1164 gugagcccgu gcagcucuc 19 <210> 1165 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1165 gagcugcacg ggcucacca 19 <210> 1166 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1166 uggugagccc gugcagcuc 19
- 369 036772 <210> 1167 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1167 uacaccaucg cagcccugc <210> 1168 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1168 gcagggcugc gauggugua 19 <210> 1169 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1169 guccuggaug cuguccgag 19 <210> 1170 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1170 cucggacagc auccaggac 19 <210> 1171 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1171 agagcugcac gggcucacc 19 <210> 1172 <211> 19 <212> PHK <213> Rattus norvegicus <400> 1172 ggugagcccg ugcagcucu 19 <210> 1173
- 370 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1173 guccucugau ggucaaagun n 21 <210> 1174 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1174 acuuugacca ucagaggacn n 21 <210> 1175 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1175 uucuugcucu auaaaccgun n 21
- 371 036772 <210> 1176 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1176 acgguuuaua gagcaagaan n 21 <210> 1177 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1177 cucuauaaac cguguuagcn n 21 <210> 1178 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 372 036772 <400> 1178 gcuaacacgg uuuauagagn η 21 <210> 1179 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1179 ucgccacuac accaucgcan n 21 <210> 1180 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20) .. (21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1180 ugcgauggug uaguggcgan n 21 <210> 1181 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
- 373 036772 <221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1181 ucuugcucua uaaaccgugn η <210> 1182 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1182 cacgguuuau agagcaagan η 21 <210> 1183 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1183 ugcucuauaa accguguuan η 21 <210> 1184 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus»
- 374 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1184 uaacacgguu uauagagcan η 21 <210> 1185 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1185 caguguucuu gcucuauaan n 21 <210> 1186 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1186 uuauagagca agaacacugn n 21 <210> 1187 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
- 375 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1187 gcucuauaaa ccguguuagn η 21 <210> 1188 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1188 cuaacacggu uuauagagcn η 21 <210> 1189 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1189 ccuggaugcu guccgaggcn η 21 <210> 1190 <211> 21 <212> ДНК
- 376 036772 <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1190 gccucggaca gcauccaggn n 21 <210> 1191 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1191 ucugaugguc aaaguccugn n 21 <210> 1192 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1192 caggacuuug accaucagan n 21
- 377 036772 <210> 1193 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1193 cuggagagcu gcacgggcun n 21 <210> 1194 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1194 agcccgugca gcucuccagn n 21 <210> 1195 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1195
- 378 036772 ucuauaaacc guguuagcan n 21 <210> 1196 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1196 ugcuaacacg guuuauagan n 21 <210> 1197 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1197 aacaguguuc uugcucuaun n 21 <210> 1198 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21)
- 379 036772 <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1198 auagagcaag aacacuguun n 21 <210> 1199 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1199 cucugauggu caaaguccun n 21 <210> 1200 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1200 aggacuuuga ccaucagagn n 21 <210> 1201 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus»
- 380 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1201 ugcuguccga ggcagcccun η 21 <210> 1202 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1202 agggcugccu cggacagcan n 21 <210> 1203 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1203 gucuggagag cugcacgggn n 21 <210> 1204 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 381 036772
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1204 cccgugcagc ucuccagacn n 21 <210> 1205 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1205 acaguguucu ugcucuauan n 21 <210> 1206 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1206 uauagagcaa gaacacugun n 21 <210> 1207 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus
- 382 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1207 ccucugaugg ucaaaguccn η 21 <210> 1208 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1208 ggacuuugac caucagaggn η 21 <210> 1209 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1209 aguccuggau gcuguccgan η 21 <210> 1210 <211> 21
- 383 036772 <210> 1213 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1213 uggagagcug cacgggcucn n 21 <210> 1214 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1214 gagcccgugc agcucuccan n 21 <210> 1215 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое
- 384 036772 <400> 1215 gagagcugca cgggcucacn η 21 <210> 1216 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1216 gugagcccgu gcagcucucn n 21 <210> 1217 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1217 gagcugcacg ggcucaccan n 21 <210> 1218 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание
- 385 036772 <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1218 uggugagccc gugcagcucn n <210> 1219 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1219 uacaccaucg cagcccugcn n 21 <210> 1220 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1220 gcagggcugc gaugguguan n 21 <210> 1221 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus»
- 386 036772 <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1221 guccuggaug cuguccgagn η 21 <210> 1222 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1222 cucggacagc auccaggacn n 21 <210> 1223 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> a, c, t, g, неизвестное или другое <400> 1223 agagcugcac gggcucaccn n 21 <210> 1224 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник
- 387 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <220>
<221> модифицированное основание <222> (20)..(21) <223> а, с, t, g, неизвестное или другое <400> 1224 ggugagcccg ugcagcucun η 21 <210> 1225 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1225 guccucugau ggucaaagut t 21 <210> 1226 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1226 acuuugacca ucagaggact t <210> 1227 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1227 uucuugcucu auaaaccgut t 21 <210> 1228 <211> 21
- 388 036772 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1228 acgguuuaua gagcaagaat t 21 <210> 1229 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1229 cucuauaaac cguguuagct t 21 <210> 1230 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1230 gcuaacacgg uuuauagagt t 21 <210> 1231 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1231 ucgccacuac accaucgcat t 21 <210> 1232 <211> 21 <212> ДНК
- 389 036772 <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1232 ugcgauggug uaguggcgat t 21 <210> 1233 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1233 ucuugcucua uaaaccgugt t 21 <210> 1234 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1234 cacgguuuau agagcaagat t 21 <210> 1235 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1235 ugcucuauaa accguguuat t 21 <210> 1236 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus
- 390 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1236 uaacacgguu uauagagcat t 21 <210> 1237 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1237 caguguucuu gcucuauaat t 21 <210> 1238 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1238 uuauagagca agaacacugt t 21 <210> 1239 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1239 gcucuauaaa ccguguuagt t 21 <210> 1240 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus
- 391 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1240 cuaacacggu uuauagagct t 21 <210> 1241 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1241 ccuggaugcu guccgaggct t 21 <210> 1242 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1242 gccucggaca gcauccaggt t 21 <210> 1243 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1243 ucugaugguc aaaguccugt t 21 <210> 1244 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
- 392 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1244 caggacuuug accaucagat t <210> 1245 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1245 cuggagagcu gcacgggcut t 21 <210> 1246 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1246 agcccgugca gcucuccagt t 21 <210> 1247 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1247 ucuauaaacc guguuagcat t 21 <210> 1248 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник
- 393 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1248 ugcuaacacg guuuauagat t <210> 1249 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1249 aacaguguuc uugcucuaut t 21 <210> 1250 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1250 auagagcaag aacacuguut t <210> 1251 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1251 cucugauggu caaaguccut t 21 <210> 1252 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 394 036772
Rattus norvegicus» <400> 1252 aggacuuuga ccaucagagt t <210> 1253 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1253 ugcuguccga ggcagcccut t 21 <210> 1254 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1254 agggcugccu cggacagcat t <210> 1255 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1255 gucuggagag cugcacgggt t 21 <210> 1256 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus»
- 395 036772 <400> 1256 cccgugcagc ucuccagact t 21 <210> 1257 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1257 acaguguucu ugcucuauat t 21 <210> 1258 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1258 uauagagcaa gaacacugut t 21 <210> 1259 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1259 ccucugaugg ucaaagucct t 21 <210> 1260 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus»
- 396 036772 <400> 1260 ggacuuugac caucagaggt t <210> 1261 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1261 aguccuggau gcuguccgat t 21 <210> 1262 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1262 ucggacagca uccaggacut t <210> 1263 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1263 uugccucugg gaagaccgct t 21 <210> 1264 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1264
- 397 036772 gcggucuucc cagaggcaat t 21 <210> 1265 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1265 uggagagcug cacgggcuct t 21 <210> 1266 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1266 gagcccgugc agcucuccat t 21 <210> 1267 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1267 gagagcugca cgggcucact t 21 <210> 1268 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1268 gugagcccgu gcagcucuct t 21
- 398 036772 <210> 1269 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1269 gagcugcacg ggcucaccat t 21 <210> 1270 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1270 uggugagccc gugcagcuct t <210> 1271 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1271 uacaccaucg cagcccugct t 21 <210> 1272 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1272 gcagggcugc gaugguguat t
- 399 036772 <210> 1273 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1273 guccuggaug cuguccgagt t 21 <210> 1274 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1274 cucggacagc auccaggact t 21 <210> 1275 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1275 agagcugcac gggcucacct t 21 <210> 1276 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1276 ggugagcccg ugcagcucut t 21
- 400 036772 <210> 1277 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1277 guccucugau ggucaaagut t 21 <210> 1278 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1278 acuuugacca ucagaggact t <210> 1279 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1279 uucuugcucu auaaaccgut t 21 <210> 1280 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1280 acgguuuaua gagcaagaat t <210> 1281
- 401 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1281 cucuauaaac cguguuagct t 21 <210> 1282 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1282 gcuaacacgg uuuauagagt t 21 <210> 1283 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1283 ucgccacuac accaucgcat t 21 <210> 1284 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1284 ugcgauggug uaguggcgat t 21 <210> 1285 <211> 21
- 402 036772 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1285 ucuugcucua uaaaccgugt t 21 <210> 1286 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1286 cacgguuuau agagcaagat t 21 <210> 1287 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1287 ugcucuauaa accguguuat t 21 <210> 1288 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1288 uaacacgguu uauagagcat t 21 <210> 1289 <211> 21 <212> ДНК
- 403 036772 <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1289 caguguucuu gcucuauaat t <210> 1290 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1290 uuauagagca agaacacugt t 21 <210> 1291 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1291 gcucuauaaa ccguguuagt t <210> 1292 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1292 cuaacacggu uuauagagct t 21 <210> 1293 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus
- 404 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1293 ccuggaugcu guccgaggct t <210> 1294 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1294 gccucggaca gcauccaggt t 21 <210> 1295 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1295 ucugaugguc aaaguccugt t <210> 1296 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1296 caggacuuug accaucagat t 21 <210> 1297 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus
- 405 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1297 cuggagagcu gcacgggcut t <210> 1298 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1298 agcccgugca gcucuccagt t 21 <210> 1299 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1299 ucuauaaacc guguuagcat t <210> 1300 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1300 ugcuaacacg guuuauagat t 21 <210> 1301 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
- 406 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1301 aacaguguuc uugcucuaut t <210> 1302 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1302 auagagcaag aacacuguut t 21 <210> 1303 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1303 cucugauggu caaaguccut t <210> 1304 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1304 aggacuuuga ccaucagagt t 21 <210> 1305 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник
- 407 036772
<223> /примечание=«Описание Rattus norvegicus» объединенной молекулы ДНК/РНК:
<400> 1305 ugcuguccga ggcagcccut t <210> 1306 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220> <221> источник 21
<223> /примечание=«Описание Rattus norvegicus» <400> 1306 agggcugccu cggacagcat t объединенной молекулы ДНК/РНК: 21
<210> 1307
<211> 21
<212> ДНК
<213> Rattus norvegicus
<220>
<221> источник объединенной молекулы ДНК/РНК:
<223> /примечание=«Описание
Rattus norvegicus»
<400> 1307 gucuggagag cugcacgggt t <210> 1308 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220> <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: 21
Rattus norvegicus» <400> 1308 cccgugcagc ucuccagact t <210> 1309 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220> <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: 21
- 408 036772
Rattus norvegicus» <400> 1309 acaguguucu ugcucuauat t <210> 1310 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1310 uauagagcaa gaacacugut t 21 <210> 1311 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1311 ccucugaugg ucaaagucct t <210> 1312 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1312 ggacuuugac caucagaggt t 21 <210> 1313 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus»
- 409 036772 <400> 1313 aguccuggau gcuguccgat t 21 <210> 1314 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1314 ucggacagca uccaggacut t 21 <210> 1315 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1315 uugccucugg gaagaccgct t 21 <210> 1316 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1316 gcggucuucc cagaggcaat t 21 <210> 1317 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus»
- 410 036772 <400> 1317 uggagagcug cacgggcuct t <210> 1318 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1318 gagcccgugc agcucuccat t 21 <210> 1319 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1319 gagagcugca cgggcucact t <210> 1320 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1320 gugagcccgu gcagcucuct t 21 <210> 1321 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1321
- 411 036772 gagcugcacg ggcucaccat t <210> 1322 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1322 uggugagccc gugcagcuct t 21 <210> 1323 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1323 uacaccaucg cagcccugct t <210> 1324 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1324 gcagggcugc gaugguguat t 21 <210> 1325 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Rattus norvegicus» <400> 1325 guccuggaug cuguccgagt t
- 412 036772 <210> 1326 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1326 cucggacagc auccaggact t 21 <210> 1327 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1327 agagcugcac gggcucacct t 21 <210> 1328 <211> 21 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Rattus norvegicus» <400> 1328 ggugagcccg ugcagcucut t 21 <210> 1329 <211> 650 <212> ДНК <213> Homo sapiens <400> 1329
acagaagtcc actcattctt ggcaggatgg cttctcatcg tctgctcctc ctctgccttg 60
ctggactggt atttgtgtct gaggctggcc ctacgggcac cggtgaatcc aagtgtcctc 120
tgatggtcaa agttctagat gctgtccgag gcagtcctgc catcaatgtg gccgtgcatg 180
tgttcagaaa ggctgctgat gacacctggg agccatttgc ctctgggaaa accagtgagt 240
- 413 036772
ctggagagct gcatgggctc acaactgagg aggaatttgt agaagggata tacaaagtgg 300
aaatagacac caaatcttac tggaaggcac ttggcatctc cccattccat gagcatgcag 360
aggtggtatt cacagccaac gactccggcc cccgccgcta caccattgcc gccctgctga 420
gcccctactc ctattccacc acggctgtcg tcaccaatcc caaggaatga gggacttctc 480
ctccagtgga cctgaaggac gagggatggg atttcatgta accaagagta ttccattttt 540
actaaagcag tgttttcacc tcatatgcta tgttagaagt ccaggcagag acaataaaac 600
attcctgtga aaggcacttt tcattccaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 650
<210> 1330 <211> 595 <212> ДНК <213> Rattus norvegicus
<400> 1330 cctgacagga tggcttccct tcgcctgttc ctcctctgcc tcgctggact gatatttgcg 60
tctgaagctg gccctggggg tgctggagaa tccaagtgtc ctctgatggt caaagtcctg 120
gatgctgtcc gaggcagccc tgctgtcgat gtggccgtga aagtgttcaa aaggactgca 180
gacggaagct gggagccgtt tgcctctggg aagaccgccg agtctggaga gctgcacggg 240
ctcaccacag atgagaagtt cacggaaggg gtgtacaggg tagaactgga caccaaatca 300
tactggaagg ctcttggcat ttccccattc catgaatacg cagaggtggt tttcacagcc 360
aatgactctg gtcatcgcca ctacaccatc gcagccctgc tcagcccgta ctcctacagc 420
accactgctg tcgtcagtaa cccccagaac tgagggaccc agcccacgag gaccaagatc 480
ttgccaaagc agtagctccc atttgtactg aaacagtgtt cttgctctat aaaccgtgtt 540
agcaactcgg gaagatgccg tgaaacgttc ttattaaacc acctttattt cattc 595
<210> 1331 <211> 938 <212> ДНК <213> Homo <400> 1331 gttgactaag sapiens tcaataatca gaatcagcag gtttgcagtc agattggcag ggataagcag 60
cctagctcag gagaagtgag tataaaagcc ccaggctggg agcagccatc acagaagtcc 120
actcattctt ggcaggatgg cttctcatcg tctgctcctc ctctgccttg ctggactggt 180
atttgtgtct gaggctggcc ctacgggcac cggtgaatcc aagtgtcctc tgatggtcaa 240
- 414 036772
agttctagat gctgtccgag gcagtcctgc catcaatgtg gccgtgcatg tgttcagaaa 300
ggctgctgat gacacctggg agccatttgc ctctgggaaa accagtgagt ctggagagct 360
gcatgggctc acaactgagg aggaatttgt agaagggata tacaaagtgg aaatagacac 420
caaatcttac tggaaggcac ttggcatctc cccattccat gagcatgcag aggtggtatt 480
cacagccaac gactccggcc cccgccgcta caccattgcc gccctgctga gcccctactc 540
ctattccacc acggctgtcg tcaccaatcc caaggaatga gggacttctc ctccagtgga 600
cctgaaggac gagggatggg atttcatgta accaagagta ttccattttt actaaagcag 660
tgttttcacc tcatatgcta tgttagaagt ccaggcagag acaataaaac attcctgtga 720
aaggcacttt tcattccact ttaacttgat tttttaaatt cccttattgt cccttccaaa 780
aaaaagagaa tcaaaatttt acaaagaatc aaaggaattc tagaaagtat ctgggcagaa 840
cgctaggaga gatccaaatt tccattgtct tgcaagcaaa gcacgtatta aatatgatct 900
gcagccatta aaaagacaca ttctgtaaaa aaaaaaaa 938
<210> 1332 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1332 gggauuucau guaaccaagt t 21 <210> 1333 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1333 cuugguuaca ugaaauccct t 21 <210> 1334 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 415 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1334 ggauuucaug uaaccaagat t 21 <210> 1335 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1335 ucuugguuac augaaaucct t 21 <210> 1336 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1336 gauuucaugu aaccaagagt t 21 <210> 1337 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1337 cucuugguua caugaaauct t 21 <210> 1338 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 416 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1338 auuucaugua accaagagut t 21 <210> 1339 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1339 acucuugguu acaugaaaut t 21 <210> 1340 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1340 uuucauguaa ccaagaguat t 21 <210> 1341 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1341 uacucuuggu uacaugaaat t 21 <210> 1342 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 417 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1342 uucauguaac caagaguaut t 21 <210> 1343 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1343 auacucuugg uuacaugaat t 21 <210> 1344 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1344 ucauguaacc aagaguauut t 21 <210> 1345 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1345 aauacucuug guuacaugat t 21 <210> 1346 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 418 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1346 cauguaacca agaguauuct t 21 <210> 1347 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1347 gaauacucuu gguuacaugt t 21 <210> 1348 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1348 auguaaccaa gaguauucct t 21 <210> 1349 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1349 ggaauacucu ugguuacaut t 21 <210> 1350 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 419 036772
Homo sapiens» <400> 1350 uguaaccaag aguauuccat t 21 <210> 1351 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1351 uggaauacuc uugguuacat t 21 <210> 1352 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1352 uaaccaagag uauuccauut t 21 <210> 1353 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1353 aauggaauac ucuugguuat t 21 <210> 1354 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens»
- 420 036772 <400> 1354 aaccaagagu auuccauuut t <210> 1355 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1355 aaauggaaua cucuugguut t 21 <210> 1356 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1356 accaagagua uuccauuuut t <210> 1357 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1357 aaaauggaau acucuuggut t 21 <210> 1358 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens»
- 421 036772 <400> 1358 ccaagaguau uccauuuuut t <210> 1359 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1359 aaaaauggaa uacucuuggt t 21 <210> 1360 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400
1360 caagaguauu ccauuuuuat t <210> 1361 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1361 uaaaaaugga auacucuugt t 21 <210> 1362 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1362
- 422 036772 aagaguauuc cauuuuuact t <210> 1363 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1363 guaaaaaugg aauacucuut t 21 <210> 1364 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1364 agaguauucc auuuuuacut t <210> 1365 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1365 aguaaaaaug gaauacucut t 21 <210> 1366 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1366 gaguauucca uuuuuacuat t
- 423 036772 <210> 1367 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1367 uaguaaaaau ggaauacuct t 21 <210> 1368 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1368 aguauuccau uuuuacuaat t <210> 1369 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1369 uuaguaaaaa uggaauacut t 21 <210> 1370 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1370 guauuccauu uuuacuaaat t
- 424 036772 <210> 1371 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1371 uuuaguaaaa auggaauact t 21 <210> 1372 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1372 uauuccauuu uuacuaaagt t <210> 1373 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1373 cuuuaguaaa aauggaauat t 21 <210> 1374 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1374 auuccauuuu uacuaaagct t
- 425 036772 <210> 1375 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1375 gcuuuaguaa aaauggaaut t 21 <210> 1376 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1376 uuccauuuuu acuaaagcat t 21 <210> 1377 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1377 ugcuuuagua aaaauggaat t 21 <210> 1378 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1378 uccauuuuua cuaaagcagt t 21 <210> 1379
- 426 036772 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1379 cugcuuuagu aaaaauggat t 21 <210> 1380 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1380 ccauuuuuac uaaagcagut t 21 <210> 1381 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1381 acugcuuuag uaaaaauggt t 21 <210> 1382 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1382 cauuuuuacu aaagcagugt t 21 <210> 1383 <211> 21
- 427 036772 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1383 cacugcuuua guaaaaaugt t 21 <210> 1384 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1384 auuuuuacua aagcagugut t 21 <210> 1385 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1385 acacugcuuu aguaaaaaut t 21 <210> 1386 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1386 uuuuuacuaa agcaguguut t 21 <210> 1387 <211> 21 <212> ДНК
- 428 036772 <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1387 aacacugcuu uaguaaaaat t 21 <210> 1388 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1388 uuuuacuaaa gcaguguuut t 21 <210> 1389 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1389 aaacacugcu uuaguaaaat t 21 <210> 1390 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1390 uuuacuaaag caguguuuut t 21 <210> 1391 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 429 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1391 aaaacacugc uuuaguaaat t 21 <210> 1392 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1392 uuacuaaagc aguguuuuct t 21 <210> 1393 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1393 gaaaacacug cuuuaguaat t 21 <210> 1394 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1394 uacuaaagca guguuuucat t 21 <210> 1395 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens
- 430 036772 <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1395 ugaaaacacu gcuuuaguat t 21 <210> 1396 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1396 acuaaagcag uguuuucact t 21 <210> 1397 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1397 gugaaaacac ugcuuuagut t 21 <210> 1398 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1398 cuaaagcagu guuuucacct t 21 <210> 1399 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 431 036772 <221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1399 ggugaaaaca cugcuuuagt t <210> 1400 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1400 uaaagcagug uuuucaccut t 21 <210> 1401 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1401 aggugaaaac acugcuuuat t <210> 1402 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1402 aaagcagugu uuucaccuct t 21 <210> 1403 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник
- 432 036772 <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1403 gaggugaaaa cacugcuuut t <210> 1404 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1404 aagcaguguu uucaccucat t 21 <210> 1405 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
Homo sapiens» <400> 1405 ugaggugaaa acacugcuut t <210> 1406 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1406 agcaguguuu ucaccucaut t 21 <210> 1407 <211> 21 <212> ДНК < 213> Homo sapiens <220>
< 221> источник < 223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК:
- 433 036772
Homo sapiens» <400> 1407 augaggugaa aacacugcut t 21 <210> 1408 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1408 guaaccaaga guauuccaut t 21 <210> 1409 <211> 21 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: Homo sapiens» <400> 1409 auggaauacu cuugguuact t 21 <210> 1410 <211> 19 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание искусственной последовательности: синтетический олигонуклеотид» <220>
<221> источник <223> /примечание=«Описание объединенной молекулы ДНК/РНК: синтетический олигонуклеотид» <400> 1410 gtaaccaa gagtattccat 19

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК) для ингибирования транстиретина (TTR), где указанная дцРНК содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь, причем антисмысловая цепь содержит участок, комплементарный части мРНК, кодирующей транстиретин (TTR), где указанный участок комплементарности имеет длину менее 30 нуклеотидов и антисмысловая цепь содержит 15 или более смежных нуклеотидов SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:450, SEQ ID NO:730 или SEQ ID NO:1010.
EA201792626A 2008-10-20 2009-10-20 Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина EA036772B1 (ru)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10695608P 2008-10-20 2008-10-20
US11573808P 2008-11-18 2008-11-18
US15667009P 2009-03-02 2009-03-02
US18554509P 2009-06-09 2009-06-09
US24278309P 2009-09-15 2009-09-15
US24479409P 2009-09-22 2009-09-22

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201792626A1 EA201792626A1 (ru) 2018-08-31
EA036772B1 true EA036772B1 (ru) 2020-12-18

Family

ID=42062316

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400170A EA029762B1 (ru) 2008-10-20 2009-10-20 Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
EA201792626A EA036772B1 (ru) 2008-10-20 2009-10-20 Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
EA201170591A EA020312B1 (ru) 2008-10-20 2009-10-20 Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400170A EA029762B1 (ru) 2008-10-20 2009-10-20 Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170591A EA020312B1 (ru) 2008-10-20 2009-10-20 Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина

Country Status (28)

Country Link
US (8) US8168775B2 (ru)
EP (4) EP3848461A1 (ru)
JP (7) JP5791505B2 (ru)
KR (6) KR102354558B1 (ru)
CN (3) CN103937793B (ru)
AU (1) AU2009307677C1 (ru)
CA (3) CA3222620A1 (ru)
CY (3) CY1116944T1 (ru)
DK (2) DK2937418T3 (ru)
EA (3) EA029762B1 (ru)
ES (2) ES2656516T3 (ru)
HK (3) HK1156348A1 (ru)
HR (2) HRP20150796T1 (ru)
HU (3) HUE026604T2 (ru)
IL (5) IL302142B2 (ru)
LT (2) LT2937418T (ru)
LU (1) LUC00098I2 (ru)
MX (4) MX360460B (ru)
NL (1) NL300965I2 (ru)
NO (2) NO2937418T3 (ru)
NZ (2) NZ602404A (ru)
PL (2) PL2937418T3 (ru)
PT (2) PT2344639E (ru)
SG (3) SG10201703242XA (ru)
SI (2) SI2344639T1 (ru)
SM (1) SMT201500176B (ru)
WO (1) WO2010048228A2 (ru)
ZA (1) ZA201102876B (ru)

Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US20050244869A1 (en) * 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
AU2007249329C1 (en) 2006-05-11 2011-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the PCSK9 gene
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
CN103937793B (zh) 2008-10-20 2017-08-11 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制运甲状腺素蛋白表达的组合物和方法
EP3225281A1 (en) * 2008-12-10 2017-10-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
CA3036963A1 (en) * 2009-01-29 2010-08-05 Arbutus Biopharma Corporation Lipid formulations comprising cationic lipid and a targeting lipid comprising n-acetyl galactosamine for delivery of nucleic acid
PL3431076T3 (pl) 2009-06-10 2022-01-31 Arbutus Biopharma Corporation Ulepszona formulacja lipidowa
KR20120050429A (ko) * 2009-06-15 2012-05-18 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｐｃｓｋ9 유전자를 표적으로 하는 지질 제형된 ｄｓｒｎａ
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
JP5766188B2 (ja) 2009-07-01 2015-08-19 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 固形腫瘍に治療剤を送達するための脂質製剤
WO2011020023A2 (en) * 2009-08-14 2011-02-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus
EP2496238A4 (en) * 2009-11-03 2013-10-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc FORMULATED LIPID COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING TRANSTHYRETIN EXPRESSION (TTR)
CA2792291A1 (en) * 2010-03-29 2011-10-06 Kumamoto University Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis
US20230340473A1 (en) * 2010-03-29 2023-10-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis
PT2563920T (pt) 2010-04-29 2017-05-26 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulação da expressão de transtirretina
EP2569276B1 (en) * 2010-05-12 2021-02-24 Arbutus Biopharma Corporation Novel cationic lipids and methods of use thereof
CA3102008A1 (en) * 2010-06-02 2011-12-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods directed to treating liver fibrosis
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
US9029590B2 (en) * 2010-10-21 2015-05-12 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
EP2640700B1 (en) 2010-11-15 2018-10-31 Life Technologies Corporation Amine-containing transfection reagents and methods for making and using same
WO2012079046A2 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of klf-1 and bcl11a genes
EP2525223A1 (en) * 2011-05-19 2012-11-21 Universiteit Maastricht In vitro method for predicting in vivo genotoxicity of chemical compounds.
WO2012177921A2 (en) * 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Compositions and methods for inhibiting hepcidin antimicrobial peptide (hamp) or hamp-related gene expression
WO2012177906A1 (en) * 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Assays and methods for determining activity of a therapeutic agent in a subject
EP2723758B1 (en) 2011-06-21 2018-06-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof
DK3301177T3 (da) * 2011-11-18 2020-06-15 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai-midler, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf til behandling af transthyretin (ttr)-forbundne sygdomme
WO2013086354A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
US9035039B2 (en) * 2011-12-22 2015-05-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing SMAD4
HRP20220607T1 (hr) * 2012-11-26 2022-06-24 Modernatx, Inc. Terminalno modificirana rna
WO2014113089A2 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
JP2016514091A (ja) 2013-02-08 2016-05-19 ミスフォールディング ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド トランスサイレチン抗体およびその使用
CN115261411A (zh) 2013-04-04 2022-11-01 哈佛学院校长同事会 利用CRISPR/Cas系统的基因组编辑的治疗性用途
EP2992098B1 (en) * 2013-05-01 2019-03-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression
RU2716420C2 (ru) * 2013-06-17 2020-03-11 Те Брод Инститьют Инк. Доставка и применение систем crispr-cas, векторов и композиций для целенаправленного воздействия и терапии в печени
WO2015006498A2 (en) * 2013-07-09 2015-01-15 President And Fellows Of Harvard College Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems
WO2015042564A1 (en) * 2013-09-23 2015-03-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating or preventing transthyretin (ttr) associated diseases
EP3052626A1 (en) * 2013-10-02 2016-08-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
US10150965B2 (en) 2013-12-06 2018-12-11 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA
AU2015236215B2 (en) 2014-03-25 2020-03-19 Arcturus Therapeutics, Inc. UNA oligomers having reduced off-target effects in gene silencing
JP6771387B2 (ja) * 2014-03-25 2020-10-21 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的ｕｎａオリゴマー
US9856475B2 (en) 2014-03-25 2018-01-02 Arcturus Therapeutics, Inc. Formulations for treating amyloidosis
KR102369736B1 (ko) 2014-05-01 2022-03-02 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 보체 인자 b 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법
KR102631505B1 (ko) * 2014-08-29 2024-02-01 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스타이레틴(ttr) 매개 아밀로이드증의 치료 방법
US10519447B2 (en) 2015-04-01 2019-12-31 Arcturus Therapeutics, Inc. Therapeutic UNA oligomers and uses thereof
WO2016164746A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
EP3283631A1 (en) 2015-04-13 2018-02-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
US10968426B2 (en) 2015-05-08 2021-04-06 President And Fellows Of Harvard College Universal donor stem cells and related methods
WO2017015671A1 (en) * 2015-07-23 2017-01-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions for treating amyloidosis
JP6896703B2 (ja) 2015-07-31 2021-06-30 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ＴＴＲ関連疾患を治療または予防するためのトランスサイレチン（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
EP3426261A4 (en) 2016-03-07 2020-03-25 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. TARGETED LIGANDS FOR THERAPEUTIC CONNECTIONS
AU2017320582B2 (en) 2016-09-02 2023-11-16 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc Targeting ligands
WO2018067900A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method of conjugating oligomeric compounds
JP2019535839A (ja) 2016-11-29 2019-12-12 ピュアテック ヘルス エルエルシー 治療剤の送達のためのエクソソーム
IL268683B2 (en) 2017-02-17 2023-04-01 Eidos Therapeutics Inc Processes for the preparation of ag-10, its intermediates and salts
AU2018336806A1 (en) 2017-09-19 2020-05-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating transthyretin (TTR) mediated amyloidosis
US20190098879A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-Human Animals Comprising A Humanized TTR Locus And Methods Of Use
WO2019067872A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Intellia Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR EDITING THE TTR GENE AND TREATING AMYLOID DOSE ATTR
JP2021518381A (ja) * 2018-03-23 2021-08-02 エイドス セラピューティクス，インコーポレイティド Ａｇ１０を使用するｔｔｒアミロイドーシスの治療方法
KR20210046708A (ko) 2018-08-17 2021-04-28 에이도스 테라퓨틱스, 인코포레이티드 Ag10의 제형
PT3864163T (pt) 2018-10-09 2024-04-30 Univ British Columbia Composições e sistemas que compreendem vesículas competentes para transfeção isentas de solventes orgânicos e detergentes e métodos relacionados com as mesmas
US20220071965A1 (en) 2018-12-20 2022-03-10 Pfizer Inc. Pharmaceutical Compositions and Methods Comprising A Combination of a Benzoxazole Transthyretin Stabilizer and an Additional Therapeutic Agent
CA3137761A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use
CN114423869A (zh) 2019-07-19 2022-04-29 旗舰先锋创新Vi有限责任公司 重组酶组合物和使用方法
EP4022062A1 (en) 2019-08-30 2022-07-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy
CN114945669A (zh) * 2019-11-06 2022-08-26 阿尔尼拉姆医药品有限公司 肝外递送
CN115461460A (zh) 2020-03-06 2022-12-09 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于抑制转甲状腺素蛋白(ttr)的表达的组合物和方法
WO2021236980A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Coronavirus antigen compositions and their uses
TW202208629A (zh) 2020-05-20 2022-03-01 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 免疫原性組成物及其用途
US20230203510A1 (en) 2020-05-29 2023-06-29 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and methods relating thereto
WO2021243301A2 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc. Trem compositions and methods relating thereto
AU2021336976A1 (en) 2020-09-03 2023-03-23 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and uses thereof
EP4251170A1 (en) 2020-11-25 2023-10-04 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
WO2022112919A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Pfizer Inc. (aza)benzothiazolyl substituted pyrazole compounds
WO2022140702A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Flagship Pioneering, Inc. Compositions of modified trems and uses thereof
EP4294409A1 (en) * 2021-02-22 2023-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Folliculin irna compositions and methods thereof
WO2022187435A1 (en) 2021-03-04 2022-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
AU2022246895A1 (en) 2021-03-31 2023-10-19 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer
WO2022235537A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating transthyretin (ttr) mediated amyloidosis
EP4351541A2 (en) 2021-06-08 2024-04-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating or preventing stargardt's disease and/or retinal binding protein 4 (rbp4)-associated disorders
WO2023009547A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and uses thereof
CN117795074A (zh) 2021-08-03 2024-03-29 阿尔尼拉姆医药品有限公司 转甲状腺素蛋白（TTR）iRNA组合物和其使用方法
EP4399292A2 (en) 2021-09-08 2024-07-17 Flagship Pioneering Innovations VI, LLC Methods and compositions for modulating a genome
CN118234867A (zh) 2021-09-17 2024-06-21 旗舰创业创新六公司 用于产生环状多核糖核苷酸的组合物和方法
CN118382705A (zh) 2021-10-18 2024-07-23 旗舰创业创新六公司 用于纯化多核糖核苷酸的组合物和方法
CN114058636A (zh) * 2021-11-16 2022-02-18 大连润生康泰医学检验实验室有限公司 一种转甲状腺素蛋白基因的克隆、表达与纯化方法
AU2022397300A1 (en) 2021-11-24 2024-06-27 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and their uses
AU2022398478A1 (en) 2021-11-24 2024-06-13 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Coronavirus immunogen compositions and their uses
AU2022397292A1 (en) 2021-11-24 2024-05-30 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Varicella-zoster virus immunogen compositions and their uses
TW202340461A (zh) 2021-12-22 2023-10-16 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 用於純化多核糖核苷酸之組成物和方法
TW202342064A (zh) 2021-12-23 2023-11-01 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 編碼抗融合多肽之環狀多核糖核苷酸
WO2023196634A2 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Vaccines and related methods
WO2023220083A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and methods of use for treating proliferative disorders
WO2023220729A2 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Double stranded dna compositions and related methods
US12064479B2 (en) 2022-05-25 2024-08-20 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and methods of use thereof
WO2023250112A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions of modified trems and uses thereof
WO2024030856A2 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunomodulatory proteins and related methods
WO2024035952A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 Remix Therapeutics Inc. Methods and compositions for modulating splicing at alternative splice sites
US20240174732A1 (en) 2022-10-05 2024-05-30 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additional polypeptides and their use in treating cancer
WO2024097664A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
WO2024098061A2 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Genkardia Inc. Oligonucleotide-based therapeutics targeting cyclin d2 for the treatment of heart failure
WO2024102799A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for producing circular polyribonucleotides
WO2024108217A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
WO2024129874A1 (en) * 2022-12-13 2024-06-20 Sirnaomics, Inc. Products and compositions
WO2024129988A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Compositions and methods for delivery of therapeutic agents to bone
US20240238473A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Recombinant nucleic acid molecules and their use in wound healing
WO2024151687A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer
WO2024151685A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Recombinant nucleic acid molecules and their use in wound healing
US20240293318A1 (en) 2023-02-13 2024-09-05 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Cleavable linker-containing ionizable lipids and lipid carriers for therapeutic compositions
US20240293582A1 (en) 2023-02-17 2024-09-05 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Dna compositions comprising modified cytosine
US20240285805A1 (en) 2023-02-17 2024-08-29 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Dna compositions comprising modified uracil

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007008652A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions directed to dj-1 as regulator of the anti-oxidant transcription factor nrf2
EP1808070A1 (en) * 2004-08-04 2007-07-18 Institut Pasteur Animal model of neurodegenerative diseases, method of obtaining same and uses thereof

Family Cites Families (216)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US564562A (en) 1896-07-21 Joseph p
US513030A (en) 1894-01-16 Machine for waxing or coating paper
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4522808A (en) 1980-08-15 1985-06-11 Societe Anonyme Dite: L'oreal Anti-sunburn compositions containing 2-phenyl-indole derivatives
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4534899A (en) 1981-07-20 1985-08-13 Lipid Specialties, Inc. Synthetic phospholipid compounds
US4426330A (en) 1981-07-20 1984-01-17 Lipid Specialties, Inc. Synthetic phospholipid compounds
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
EP0228458B2 (en) 1985-07-05 1997-10-22 Whitehead Institute For Biomedical Research Epithelial cells expressing foreign genetic material
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
WO1988010264A1 (en) 1987-06-24 1988-12-29 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology Nucleoside derivatives
EP0378576B1 (en) 1987-09-11 1995-01-18 Whitehead Institute For Biomedical Research Transduced fibroblasts and uses therefor
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
WO1989005345A1 (en) 1987-12-11 1989-06-15 Whitehead Institute For Biomedical Research Genetic modification of endothelial cells
JP2917998B2 (ja) 1988-02-05 1999-07-12 ホワイトヘッド・インスティチュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ 修飾された肝細胞およびその用途
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
WO1989009221A1 (en) 1988-03-25 1989-10-05 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
GB8824593D0 (en) 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Liposomes
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5356633A (en) 1989-10-20 1994-10-18 Liposome Technology, Inc. Method of treatment of inflamed tissues
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0942000B1 (en) 1989-10-24 2004-06-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-Modified oligonucleotides
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
AU7579991A (en) 1990-02-20 1991-09-18 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
US5665710A (en) 1990-04-30 1997-09-09 Georgetown University Method of making liposomal oligodeoxynucleotide compositions
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
ES2116977T3 (es) 1990-05-11 1998-08-01 Microprobe Corp Soportes solidos para ensayos de hibridacion de acidos nucleicos y metodos para inmovilizar oligonucleotidos de modo covalente.
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
ES2083593T3 (es) 1990-08-03 1996-04-16 Sterling Winthrop Inc Compuestos y metodos para inhibir la expresion de genes.
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
WO1992005186A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 Gilead Sciences Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
AU656544B2 (en) 1990-10-31 1995-02-09 Brigham And Women's Hospital Genetic modification of endothelial cells
CA2095212A1 (en) 1990-11-08 1992-05-09 Sudhir Agrawal Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
GB9100304D0 (en) 1991-01-08 1991-02-20 Ici Plc Compound
JP3220180B2 (ja) 1991-05-23 2001-10-22 三菱化学株式会社 薬剤含有タンパク質結合リポソーム
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
ES2103918T3 (es) 1991-10-17 1997-10-01 Ciba Geigy Ag Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios.
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
DE4203923A1 (de) 1992-02-11 1993-08-12 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von polycarboxylaten auf polysaccharid-basis
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
JP3351476B2 (ja) 1993-01-22 2002-11-25 三菱化学株式会社 リン脂質誘導体及びそれを含有するリポソーム
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
DK0691968T3 (da) 1993-03-30 1998-02-23 Sanofi Sa Acykliske nukleosid-analoge og oligonukleotidsekvenser indeholdende disse
AU6412794A (en) 1993-03-31 1994-10-24 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5540935A (en) 1993-12-06 1996-07-30 Nof Corporation Reactive vesicle and functional substance-fixed vesicle
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US6054299A (en) 1994-04-29 2000-04-25 Conrad; Charles A. Stem-loop cloning vector and method
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5543152A (en) 1994-06-20 1996-08-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Sphingosomes for enhanced drug delivery
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
AU5545596A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Medtronic, Inc. Intraparenchymal infusion catheter system
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
IL122290A0 (en) 1995-06-07 1998-04-05 Inex Pharmaceuticals Corp Lipid-nucleic acid complex its preparation and use
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US5756122A (en) 1995-06-07 1998-05-26 Georgetown University Liposomally encapsulated nucleic acids having high entrapment efficiencies, method of manufacturer and use thereof for transfection of targeted cells
HUP9802445A3 (en) 1995-08-01 1999-03-29 Novartis Ag Liposomal oligonucleotide compositions and process for inhibiting the human raf
US5858397A (en) 1995-10-11 1999-01-12 University Of British Columbia Liposomal formulations of mitoxantrone
US5735814A (en) 1996-04-30 1998-04-07 Medtronic, Inc. Techniques of treating neurodegenerative disorders by brain infusion
AU731909B2 (en) 1997-07-01 2001-04-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the delivery of oligonucleotides via the alimentary canal
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
WO1999053050A1 (en) 1998-04-08 1999-10-21 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Methods and means for obtaining modified phenotypes
AR020078A1 (es) 1998-05-26 2002-04-10 Syngenta Participations Ag Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta
WO2000003683A2 (en) 1998-07-20 2000-01-27 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal encapsulated nucleic acid-complexes
MXPA01003643A (es) 1998-10-09 2003-07-21 Ingene Inc Produccion de adnss in vivo.
IL142490A0 (en) 1998-10-09 2002-03-10 Ingene Inc ENZYMATIC SYNTHESIS OF ssDNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
AU3243300A (en) 1999-02-23 2000-09-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Multiparticulate formulation
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
WO2001057064A2 (en) * 2000-02-07 2001-08-09 Roche Diagnostics Corporation Cationic amphiphiles for use in nucleic acid transfection
WO2002081628A2 (en) * 2001-04-05 2002-10-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth, using nucleic acid based technologies
US20030072794A1 (en) * 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
WO2002044321A2 (en) * 2000-12-01 2002-06-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
US20030170891A1 (en) 2001-06-06 2003-09-11 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7514099B2 (en) * 2005-02-14 2009-04-07 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
US7956176B2 (en) * 2002-09-05 2011-06-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
DK2284266T3 (da) * 2002-11-14 2014-01-13 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53
DE10302421A1 (de) 2003-01-21 2004-07-29 Ribopharma Ag Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit
CA2518475C (en) 2003-03-07 2014-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna agents comprising asymmetrical modifications
AU2004227414A1 (en) 2003-04-03 2004-10-21 Alnylam Pharmaceuticals iRNA conjugates
JP4951338B2 (ja) 2003-07-16 2012-06-13 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 脂質に封入された干渉ｒｎａ
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
JP4764426B2 (ja) 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
CA2569664C (en) 2004-06-07 2013-07-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
US7838561B2 (en) * 2004-06-14 2010-11-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for preventing or treating cardiac hypertrophy
CN101189343B (zh) * 2004-08-23 2011-11-16 阿尔尼拉姆药物公司 多rna聚合酶ⅲ启动子表达构建体
AU2006230436B2 (en) 2005-03-31 2011-11-24 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
US7915230B2 (en) * 2005-05-17 2011-03-29 Molecular Transfer, Inc. Reagents for transfection of eukaryotic cells
EP1937213B1 (en) 2005-07-27 2017-10-25 Protiva Biotherapeutics Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
WO2007051303A1 (en) * 2005-11-02 2007-05-10 Protiva Biotherapeutics, Inc. MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF
JP5704741B2 (ja) 2006-03-31 2015-04-22 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｅｇ５遺伝子発現の抑制のための組成物および方法
US8598333B2 (en) 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
WO2008042973A2 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid containing formulations
EP4074344A1 (en) * 2007-12-04 2022-10-19 Arbutus Biopharma Corporation Targeting lipids
CA2710713C (en) * 2007-12-27 2017-09-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna
EP3100718B1 (en) 2008-01-02 2019-11-27 Arbutus Biopharma Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
CA2721333C (en) * 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
EP2323667A4 (en) 2008-08-07 2012-07-25 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF TRANSTHYRETIN EXPRESSION BY TREATMENT OF CNS DISEASES
PL2350043T3 (pl) * 2008-10-09 2014-09-30 Tekmira Pharmaceuticals Corp Ulepszone aminolipidy i sposoby dostarczania kwasów nukleinowych
CN103937793B (zh) * 2008-10-20 2017-08-11 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制运甲状腺素蛋白表达的组合物和方法
CA3006395C (en) 2008-11-07 2022-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
EP3808177A1 (en) 2008-11-10 2021-04-21 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
CA3036963A1 (en) 2009-01-29 2010-08-05 Arbutus Biopharma Corporation Lipid formulations comprising cationic lipid and a targeting lipid comprising n-acetyl galactosamine for delivery of nucleic acid
EP2416760A4 (en) 2009-05-05 2014-01-22 Tekmira Pharmaceuticals Corp LIPID COMPOSITIONS
PL3431076T3 (pl) * 2009-06-10 2022-01-31 Arbutus Biopharma Corporation Ulepszona formulacja lipidowa
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
EP2496238A4 (en) 2009-11-03 2013-10-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc FORMULATED LIPID COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING TRANSTHYRETIN EXPRESSION (TTR)
PT2563920T (pt) 2010-04-29 2017-05-26 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulação da expressão de transtirretina
KR102005337B1 (ko) * 2014-01-09 2019-07-30 에스케이하이닉스 주식회사 전압 변환 장치
US10799808B2 (en) 2018-09-13 2020-10-13 Nina Davis Interactive storytelling kit

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1808070A1 (en) * 2004-08-04 2007-07-18 Institut Pasteur Animal model of neurodegenerative diseases, method of obtaining same and uses thereof
WO2007008652A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions directed to dj-1 as regulator of the anti-oxidant transcription factor nrf2

Also Published As

Publication number Publication date
SG10201912276XA (en) 2020-02-27
HUS1900004I1 (hu) 2019-03-28
KR102354558B1 (ko) 2022-01-25
JP2024116226A (ja) 2024-08-27
SG10201703242XA (en) 2017-06-29
US10240152B2 (en) 2019-03-26
SG10201809460SA (en) 2018-11-29
EP2937418B1 (en) 2017-10-18
NO2937418T3 (ru) 2018-03-17
JP2012506254A (ja) 2012-03-15
IL212428A0 (en) 2011-06-30
US8168775B2 (en) 2012-05-01
EA020312B1 (ru) 2014-10-30
WO2010048228A3 (en) 2010-09-16
LT2937418T (lt) 2018-02-12
SI2344639T1 (sl) 2015-09-30
HK1258859A1 (zh) 2019-11-22
EP2344639A2 (en) 2011-07-20
EA029762B1 (ru) 2018-05-31
NZ592867A (en) 2013-05-31
PL2344639T3 (pl) 2015-10-30
AU2009307677B2 (en) 2015-07-30
JP5791505B2 (ja) 2015-10-07
NO2019004I1 (no) 2019-01-29
HUE026604T2 (hu) 2016-06-28
CA3222620A1 (en) 2010-04-29
PT2344639E (pt) 2015-09-07
KR101635436B1 (ko) 2016-07-01
CY2019005I2 (el) 2019-11-27
JP2019205442A (ja) 2019-12-05
PL2937418T3 (pl) 2018-04-30
MX2018013398A (es) 2023-01-05
ES2543004T3 (es) 2015-08-13
EA201400170A1 (ru) 2015-03-31
MX360460B (es) 2018-11-05
AU2009307677A1 (en) 2010-04-29
IL281434B2 (en) 2023-09-01
IL302142B1 (en) 2024-03-01
KR20110073592A (ko) 2011-06-29
EA201792626A1 (ru) 2018-08-31
US20200283766A1 (en) 2020-09-10
MX2011004268A (es) 2011-06-01
JP7500658B2 (ja) 2024-06-17
CN103937793B (zh) 2017-08-11
US9234196B2 (en) 2016-01-12
KR20160079921A (ko) 2016-07-06
JP2018007666A (ja) 2018-01-18
CY1116944T1 (el) 2017-04-05
KR20150007359A (ko) 2015-01-20
NL300965I2 (nl) 2020-07-28
US20100120893A1 (en) 2010-05-13
CN102186978B (zh) 2014-03-12
IL302142B2 (en) 2024-07-01
HK1156348A1 (en) 2012-06-08
CN103937793A (zh) 2014-07-23
HK1216652A1 (zh) 2016-11-25
MX344354B (es) 2016-12-14
JP2015062420A (ja) 2015-04-09
EA201170591A1 (ru) 2011-12-30
IL310600A (en) 2024-04-01
US20140194493A1 (en) 2014-07-10
PT2937418T (pt) 2018-01-23
SI2937418T1 (en) 2018-02-28
LUC00098I2 (ru) 2019-12-24
JP6371446B2 (ja) 2018-08-08
LUC00098I1 (ru) 2019-01-31
EP2937418A1 (en) 2015-10-28
EP3354733A1 (en) 2018-08-01
KR20190116553A (ko) 2019-10-14
US20170321213A1 (en) 2017-11-09
JP2022160408A (ja) 2022-10-19
CY2019005I1 (el) 2019-11-27
WO2010048228A2 (en) 2010-04-29
AU2009307677C1 (en) 2022-09-22
JP2018171072A (ja) 2018-11-08
EP3848461A1 (en) 2021-07-14
LTPA2019501I1 (lt) 2019-02-25
US20190309293A1 (en) 2019-10-10
US20120225927A1 (en) 2012-09-06
IL243178A0 (en) 2016-02-29
HUE037875T2 (hu) 2018-09-28
KR101624869B1 (ko) 2016-05-30
EP2344639B1 (en) 2015-04-22
KR102578331B1 (ko) 2023-09-15
CN106834291A (zh) 2017-06-13
KR20220012422A (ko) 2022-02-03
CA2739895C (en) 2018-09-25
DK2344639T3 (en) 2015-07-27
CY1120174T1 (el) 2018-12-12
US20160264963A1 (en) 2016-09-15
IL281434A (en) 2021-04-29
JP6553780B2 (ja) 2019-07-31
DK2937418T3 (en) 2018-01-22
HRP20150796T1 (hr) 2015-09-11
IL281434B1 (en) 2023-05-01
CN102186978A (zh) 2011-09-14
ES2656516T3 (es) 2018-02-27
KR102031027B1 (ko) 2019-10-14
BRPI0919732A2 (pt) 2015-12-08
US8741866B2 (en) 2014-06-03
US20230257740A1 (en) 2023-08-17
ZA201102876B (en) 2015-06-24
KR20180017245A (ko) 2018-02-20
NL300965I1 (nl) 2019-02-06
CA2739895A1 (en) 2010-04-29
CA3018487A1 (en) 2010-04-29
IL302142A (en) 2023-06-01
HRP20180093T1 (hr) 2018-02-23
CN106834291B (zh) 2020-09-29
LTC2937418I2 (lt) 2019-12-27
NZ602404A (en) 2014-04-30
EP3354733B1 (en) 2020-12-09
SMT201500176B (it) 2015-09-07
IL243178B (en) 2021-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7500658B2 (ja) トランスチレチンの発現を阻害するための組成物および方法
JP5723378B2 (ja) トランスサイレチン（ｔｔｒ）を阻害する脂質製剤化組成物及び方法
AU2021203272B2 (en) Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin
AU2017204161B2 (en) SiRNA therapy for transthyretin (TTR) related ocular amyloidosis
BRPI0919732B1 (pt) Ácidos ribonucleicos de fita dupla (dsrna), composição farmacêutica e uso dos mesmos