KR100700087B1

KR100700087B1 - 뉴클레오티드 동족체의 제조 방법

Info

Publication number: KR100700087B1
Application number: KR1020057020624A
Authority: KR
Inventors: 머티 엔. 아리밀리; 토마스 티. 케이. 리; 로렌스 브이. 마네즈; 존 디. 주니어 멍거; 어니스트 제이. 프리스베; 리사 엠. 슐체; 다프네 이. 켈리
Original assignee: 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드
Priority date: 1997-07-25
Filing date: 1998-07-23
Publication date: 2007-03-28
Also published as: KR20010014284A; ES2187991T3; IL133461A; WO1999004774A2; CA2298057C; PT1256584E; JP3573713B2; CN1216062C; DE69809749T2; CO4980869A1; HK1051693A1; CA2596497A1; CA2596497C; ATE277937T1; KR100618663B1; AR016548A1; KR20060038363A; DE69826735T2; CN1251592A; CA2596320C

Abstract

본 발명은 아데포버 디피복실의 결정형 및 결정을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물 및 방법은 결정형 아데포버 디피복실의 대규모 합성 또는 치료적 투약 형태로 배합에 적합한 특성을 갖는다. 본 발명의 조성물은 아데포버 디피복실의 무수 결정형을 함유한다.

Description

뉴클레오티드 동족체의 제조 방법{PREPARATION METHOD OF NUCLEOTIDE ANALOGS}

도 1은 결정형 1의 XRD 패턴을 나타낸다.

도 2는 시차주사 열량법에 의해 얻어진 결정형 1의 온도 기록도를 나타낸다.

도 3은 결정형 1의 프리어(Fourier) 변형 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.

도 4-10은 100배 크기에서 결정형 1의 구체예를 보여주는 사진이다. 또한 128% 확대에서 얻어진 사진의 사본이다.

도 11은 결정형 2의 XRD패턴을 나타낸다.

도 12는 시차주사 열량법에 의해 얻어진 결정형 2의 온도기록도를 나타낸다.

도 13은 결정형 2의 프리어(Fourier) 변형 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.

도 14는 결정형 3의 XRD패턴을 나타낸다.

도 15 시차주사 열량법에 의해 얻어진 결정형 3의 온도기록도를 나타낸다.

도 16은 결정형 4의 XRD패턴을 나타낸다.

도 17은 시차주사 열량법에 의해 얻어진 결정형 4의 온도기록도를 나타낸다.

도 18은 AD 헤미술페이트염 결정 XRD 패턴을 나타낸다.

도 19는 AD 브롬화수소염 결정 XRD패턴을 나타낸다.

도 20은 AD 질산염 결정 XRD패턴을 나타낸다.

도 21은 AD 메실염 결정 XRD패턴을 나타낸다.

도 22는 AD 에틸술폰산염 결정 XRD 패턴을 나타낸다.

도 23은 AD β-나프틸렌 술폰산염 결정 XRD 패턴을 나타낸다.

도 24는 AD α-나프틸렌 술폰산염 결정 XRD 패턴을 나타낸다.

도 25는 AD (S)-캄퍼 술폰산염 결정XRD 패턴을 나타낸다.

도 26은 AD 숙신산염 결정 XRD 패턴을 나타낸다.

본 발명은 뉴클레오티드 동족체 9-[2-[{비스(피발로일옥시)-메톡시}포스피닐]메톡시]에틸]아데닌("아데포버 디피복실" 또는 "AD") 및 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 AD를 합성하는 방법에 관한 것이다.

AD는 모화합물인 9-[2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌("PMEA")의 비스-피발로일옥시메틸 에스테르이며, 동물 및 사람에서 항바이러스 활성을 가진다. AD 및 PMEA는 예컨대, 미국특허 제 4,724,233, 4,808,716, 유럽특허 제 481214, Benzaria등의 Nucleosides and Nucleotides(1995) 14(3-5):563-565, Holy등의 Collect Czech. Chem. Commun. (1989) 53: 2801-2809, Rosenberg등의 Collect.Czech. Chem. Cmmun. (1988) 53:2755-2777, Starrett등의 Antiviral Res. (1992) 19:267-273; Starrett et al., J. Med. Chem. (1994) 37:1857-1864에 기술되어 있다. 이후에, AD는 비결정형 또는 무정형으로서만 제공되어 왔다. 결정형 물질의 제조에 대해서는 이제까지 보고된 바 없다.

유기 화합물 그 자체를 결정화하는 방법은 J.A. Landgreble, Theory and Practice in the Organic Laboratory, 2nd Ed. 1977, D.C. Heath and Co., Lexington, MA, P.43-51; A.S. Myerson, Handbook of Industrial Crystallization, 1993, Butterworth-Heinemann, Stoneham, MA, p. 1-101에 기재되어 있다.

본 발명은 다음의 한가지 이상의 목적을 충족시키는 한가지 이상의 조성물 또는 방법을 제공한다.

본 발명의 주요 목적은 대규모 합성 및 치료적 투약 형태로 배합에 적합한 특성을 가진 신규한 AD형태로 이루어지는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 AD함유 조성물의 제조 및 배합을 용이하게 하는 좋은 융점 및/또는 유속 또는 용량 밀도 특성을 가지고 있는 AD를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 저장 안정성형 AD를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 여과 및 건조가 용이한 AD를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 적어도 약 97%(wt/wt)순도, 바람직하게는 약 98%(wt/wt)의 순도를 갖는 고도로 정제된 AD를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 AD합성중에 부산물의 생성을 최소화하거나 제거하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 비싸고 시간이 많이 소비되는 칼럼 크로마토그래피를 피하여 AD를 정제하는 방법을 제공하는 것이다.

발명의 요약

본 발명의 첫번째 목적은 결정형 AD, 특히 무수결정형(이하에서, "결정형 1"이라 함), 수화형, C₂₀H₃₂N₅O₈P₁ㆍ2H₂O(이하에서, "결정형 2"라고 함), 메탄올 용매화합물형, C₂₀H₃₂N₅O₈P₁ㆍCH₃OH(이하에서, "결정형 3"이라 함), 푸마르산염 또는 복합체, C₂₀H₃₂N₅O₈P₁ㆍC₄H₄O₄(이하에서, "결정형 4"라 함), 헤미술페이트염 또는 복합체, 브롬화수소염 또는 복합체, 염산염 또는 복합체, 질산염 또는 복합체, 메실(CH₃SO₃H)염 또는 복합체, 에틸술폰산염(C₂H₅SO₃H) 또는 복합체, β-나프틸렌 술폰산염 또는 복합체, α-나프틸렌 술폰산염 또는 복합체, (S)-캄퍼 술폰산염 또는 복합체, 숙신산염 또는 복합체, 말레인산염 또는 복합체, 아스코르브산염 또는 복합체 및 니코틴산염 또는 복합체를 제공함으로써 달성된다.

발명의 구체예는 (1) 본질적으로 2θ에서 약 6.9, 약 11.8, 약 12.7, 약 15.7, 약 17.2, 약 20.7, 약 21.5, 약 22.5, 및 약 23.3 중 한가지 이상 (이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절("XRD") 스펙트럼을 갖는 결정형 1 AD; (2) 본질적으로 2θ에서 약 8.7-8.9, 약 9.6, 약 16.3, 약 18.3, 약 18.9, 약 19.7, 약 21.0,약 21.4, 약 22.0, 약 24.3, 약 27.9, 약 30.8 및 약 32.8 중 어느 한가지 이상 (이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사 용하는 X-선 분말 회절("XRD") 스펙트럼을 갖는 결정형 2 AD; (3) 본질적으로 2θ에서 약 8.1, 약 8.7, 약 14.1, 약 16.5, 약 17.0, 약 19.4, 약 21.1, 약 22.6, 약 23.4, 약 24.2, 약 25.4, 약 30.9 중 어느 한가지 이상 (이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절("XRD") 스펙트럼을 갖는 결정형 3 AD; (4) 본질적으로 2θ에서 약 9.8, 약 15.2, 약 15.7, 약 18.1, 약 18.3, 약 21.0, 약 26.3 및 약 31.7 중 어느 한가지 이상 (이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절("XRD") 스펙트럼을 갖는 결정형 4 AD를 포함한다.

본 발명의 구체예는 도 4-10중 어느 한가지 이상에서 나타낸 결정 형태를 갖는 AD결정을 포함한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 약 6-45% AD 및 약 55-94%의 결정화 용매로 이루어지는 결정화 용액으로부터 결정을 형성하도록 함으로써 AD 결정을 제조하는 방법을 제공한다. 여기에서, 결정화 용매는 다음을 포함한다: (1) 약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 아세톤:디-n-부틸에테르의 혼합물; (2) 약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 에틸아세테이트:디-n-프로필에테르의 혼합물; (3) 약 1:10(v/v) 내지 약 10:1(v/v)의 t-부탄올:디-n-부틸에테르의 혼합물; (4) 약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 메틸렌클로라이드:디-n-부틸에테르의 혼합물; (5)약 1:10(v/v) 내지 약 10:1(v/v)의 디에틸에테르:디-n-프로필에테르의 혼합물; (6) 약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 테트라하이드로퓨란:디-n-부틸에테르의 혼합물; (7)약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 에틸아세테이트:디-n-부틸에테르의 혼합물; (8) 약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 테트라히드로피란:디-n-부틸에테르의 혼합물; (9) 약 1:10(v/v) 내지 약 1:3(v/v)의 에틸아세테이트:디에틸에테르; (10) t-부틸-메틸에테르, (11) 디에틸에테르, (12) 디-n-부틸에테르, (13) t-부탄올, (14) 톨루엔, (15) 이소프로필 아세테이트, (16)에틸아세테이트, (17) (A)R¹-O-R²분자식(여기에서 R¹는 탄소수가 1,2, 3, 4, 5 또는 6인 알킬기, R²는 탄소수가 2, 3, 4, 5 또는 6인 알킬기 또는 디알킬에테르가 메틸-에틸 에테르가 아니라는 조건하에 R¹ 및 R² 모두 함께 연결되어 5-,6-,7-, 또는 8-원고리를 형성한다)의 첫번째 디알킬에테르로 이루어지는 첫번째 결정화 용매, 및 (B)(a)R¹-O-R²분자식의 두번째 디알킬 에테르 (여기서,두번째 디알킬에테르는 첫번째 디알킬에테르와 다르나 메틸-에틸-에테르는 아님), (b) 톨루엔, (c)테트라하이드로퓨란, (d)t-부탄올, (e)에틸아세테이트, (f)메틸렌클로라이드, (g)프로필아세테이트 및 (h)이소프로판올로 이루어지는 군에서 선택된 두번째 결정화 용매로 본질적으로 이루어지는 혼합물.

본 발명의 구체예는 정제된 결정형 AD(예컨대, 결정형 1 및/또는 결정형 2)를 포함한다. 또한, 본 발명의 구체예는 결정형 AD (예컨대, 결정형 1 및/또는 결정형 2) 및 한가지 이상의 화합물, 예컨대 결정형 AD를 함유하는 반응 혼합물에 존재하는 화합물 또는 약리적 부형제와 같은 조성물을 포함한다.

본 발명의 구체예는 메탄올에 AD를 용해시키고 결정을 형성하게 하는 것으로 이루어지는 AD결정의 제조방법을 포함한다.

또 다른 구체예는 예컨대, 한가지 이상의 결정형 1, 결정형 2, 결정형 3, 및/또는 결정형 4 AD, 및 PMEA가 사람 또는 동물에서 활성인 것으로 알려진 바이러스 질병, 예컨대 레트로바이러스 감염(HIV, SIV, FIV) 또는 헤파티티스 B 또는 다른 헤파드나바이러스 감염, 또는 DNA바이러스 감염(사람의 사이토메갈로바이러스 또는 허피스바이러스, 예컨대, HSV1, 또는 HSV2)을 치료하기 위해 약리적으로 적합한 담체(들)로 이루어지는, 약제 조성물 또는 약제 용도에 적합한 결정 AD에 관한 것이다.

본 발명은 물의 존재하에 AD결정을 형성하는 것으로 이루어지는 결정형 2 AD를 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 구체예에서, N-메틸피롤리디논(NMP,1-메틸-2-피롤리디논) 및 트리에틸아민(TEA)과 같은 트리알킬아민에서 클로로메틸피발레이트와 PMEA를 접촉시키고, AD를 회수하는 것으로 이루어지는 AD제조방법을 제공한다.

추가의 구체예에서, 약 2% 이하의 염을 포함하는 PMEA 조성물을 제공하며, 이는 약 2% 이하의 염을 포함하는 PMEA를 클로로메틸피발레이트와 접촉시키는 것으로 이루어지는 방법에 사용될 수 있다.

추가의 구체예에서, 액체, 결정형 1의 아데포버 디피복실 및 허용 가능한 부형제로 이루어지는 혼합물로부터 젖은 과립을 제조, 및 임의로 젖은 과립을 건조시키는 것으로 이루어지는 방법에 의해서 AD 산물을 얻는다.

특별히 나타내지 않으면, 온도는 섭씨이고, 실온은 약 18-23℃이다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 알킬은 직쇄, 측쇄, 및 고리형 포화 탄화수 소를 의미한다. 본 명세서에서 사용된 "알킬" 또는 "알킬부분"은 반대로 언급하지 않는다면, 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,9,10,11 또는 12의 노말, 이부, 삼부, 또는 고리 구조를 가지는 탄화수소이다. 용어 C₁ _- ₁₀알킬은 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,9 또는 10의 탄소수를 갖는 알킬기를 의미한다. 예로는 다음이 있다: -CH₃, -CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -CH₂CH₂CH₂CH₃, -CH₂CH(CH₃)₂, -CH(CH₃)CH₂CH₃, -C(CH₃)₃, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃, -CH₂(CH₂CH₃)₂, -C(CH₃)₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)CH(CH₃)₂, -CH₂CH₂CH(CH₃)₂, -CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃, -CH₂C(CH₃)₃, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃). -C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃, -CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃, -CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂, -C(CH₃)(CH₂CH₃)₂, -CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₂CH(CH₃)₂, -CH(CH₃)C(CH₃)₃,시클로프로필, 시클로부틸, 시클로프로필메틸, 시클로펜틸, 시클로부틸메틸, 1-시클로프로필-1-에틸, 2-시클로프로필-1-에틸, 시클로헥실, 시클로펜틸메틸, 1-시클로프로필-1-프로필, 3-시클로프로필-1-프로필, 2-시클로프로필-2-프로필 및 1-시클로프로필-2-프로필.

본 명세서에서 사용된 "알콕사이드"는 반대로 언급하지 않는다면, 알킬의 정의와 같이 1,2, 3, 4, 5 또는 6의 탄소 원자를 포함하는 동시에 산소 원자와 결합되어 있는 탄화수소이다. 예로는 다음이 있다: -OCH₃, -OCH₂CH₃ _,

"트리알킬아민"은 독립적으로 선택된 3개의 C₁ _-6 부분으로 치환되어 있는 질소 원자를 의미한다. 예로는

또는 -CH(CH₃)C(CH₃)₃부분들로1, 2 또는 3 치환된 질소를 들 수 있다.

본 명세서에서 사용된 "헤테로아릴"은 그 예를 제시한 것이며 Paquette, Leo A.;Principles of Modern Heterocyclic Chemistry (W.A. Benjamin, New York, 1968), 특히 1,3,4,6,7 및 9장; The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 특히 13,14,16,19 및 28권;및 J.Am. Chem. Soc.,(1960)82:5566에 기재된 이러한 헤테로고리에 제한하는 것은 아니다.

헤테로고리의 예는 다음과 같으며 이에 제한하는 것은 아니다: 피리딜, 티아졸일, 테트라히드로티오페닐, 황 산화된 테트라히드로티오페닐, 피리미디닐, 푸라 닐, 티에닐, 피롤일, 피라졸일, 이미다졸일, 테트라졸일, 벤조푸라닐, 티아나프탈레닐, 인돌일, 인도레닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸일, 피페리디닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 2-피롤리도닐, 피롤리닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 데카히드로퀴놀리닐, 옥타히드로이소퀴놀리닐, 아조시닐, 트리아지닐, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐, 티에닐, 티안트레닐, 피라닐, 이소벤조푸라닐, 크로메닐, 크산테닐, 페노크산티닐, 2H-피롤일, 이소티아졸일, 이소크사졸일, 피라지닐, 피리다지닐, 인돌지닐, 이소인돌일, 3H-인돌일, 1H-인다졸리, 푸리닐, 4H-퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴노크살리닐, 퀴나졸리닐, 시놀리닐, 테리디닐, 4aH-카바졸일, 카바졸일, b-카보리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 피리미디닐, 페난트로리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 푸라자닐, 페노크사지닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 퀴뉴클리디닐, 모폴리닐, 옥사졸리디닐, 벤조트리아졸일, 벤즈이소크사졸일, 옥스인돌일, 벤조크사졸리닐 및 이사티놀일.

예컨대, 탄소 결합 헤테로고리는 피리딘의 2, 3, 4, 5 또는 6 위치, 피리다진의 3, 4, 5 또는 6 위치, 피리미딘의 2, 4, 5 또는 6 위치, 피라진의 2, 3, 5 또는 6 위치, 퓨란, 테트라하이드로퓨란, 티오퓨란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 2, 3, 4 또는 5 위치, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 2, 4 또는 5 위치, 이소크사졸, 피라졸 또는 이소티아졸의 3, 4 또는 5 위치, 아지리딘의 2 또는 3위치, 아제티딘의 2, 3 또는 4위치, 퀴놀린의 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 위치 또는 이소퀴놀린의 1, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 위치에서 결합되지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

예컨대, 질소 결합 헤테로고리는 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피레라진, 인돌, 인돌린 또는 1H-인다졸의 1위치, 이소인돌 또는 이소인돌린의 2위치, 모폴린의 4위치, 그리고 카바졸 또는 β-카볼린의 9위치에 결합되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 통상적으로 헤테로고리 결합된 질소는 1-아지리딜, 1-아제테딜, 1-피롤일, 1-이미다졸일, 1-피라졸일 및 1-피페리디닐을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 AD, 즉 "결정형 물질", "결정형" 또는 "결정"이라는 용어는 모든 성분 분자(들)가 한정된 3차원 공간의 패턴 또는 격자내에서 주어진 배열을 갖고 있는 고형 AD를 의미한다. 결정형 또는 결정 AD는 한가지 타입 이상의 조성물, 예컨대 AD·푸마르산 또는 AD·2H₂O로 이루어진다. 결정형 물질 또는 결정은 한가지 이상의 형태, 예컨대, 알약, 막대, 판 또는 바늘 형태를 갖는다.

문맥에 의해 또는 명확하게 명시하지 않는 한, %로 표시되는 백분율 양은 중량(w/w)에 의한 것이다. 그러므로, 적어도 약 40% AD를 함유하는 용액은 적어도 약 40% w/w AD를 함유하는 용액을 표시한다. 0.1% 물을 함유하는 고형물 AD는 0.1% w/w 물이 고형물에 결합되어 있는 것을 의미한다.

대체로 무결정형 AD가 제거된 결정형 AD라는 것은 약 60% 이상의 AD가 조성 물 내에서 결정형 물질로 존재하는 고형 조성물을 의미한다. 전형적으로 그러한 조성물은 적어도 약 80%, 일반적으로 적어도 약 90%가 한가지 이상의 결정형 AD이고, 나머지 AD는 비결정형 AD로 존재한다.

선택적으로 본 발명의 조성물은 약리적으로 허용가능한 염, 예를 들어 비전하 부분 또는 단가 음이온을 포함하는 염화합물로 이루어진다. 염은 무기 혹은 유기산과 같이 적절한 음이온의 조합에 의해 유도된 것을 포함한다. 적절한 산은 안정한 염을 형성하기에 충분한 산성을 가지며, 바람직하게는 낮은 독성을 갖는 산이다. 예를 들어, 특정 유기산 및 무기산, 예컨대 HF, HCl, HBr, HI, H₂SO₄, H₃PO₄, 또는 유기 술폰산, 유기 카르복실산을, 통상적으로는 아민인 염기성 중심(basic centers)에 첨가함으로써 본 발명의 염이 형성될 수 있다.

유기 술폰산의 좋은 예로는 C₆ _-16 아릴 술폰산, C₆ _-16 헤테로아릴 술폰산 및 페닐, α-나프틸, β-나프틸, (S)-캄퍼, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, i-부틸, t-부틸, 펜틸 및 헥실 술폰산과 같은 C₆ _-16 알킬 술폰산을 들 수 있다. 유기 카르복실산의 좋은 예로는 C₆ _-16 알킬, C₆ _-16 아릴 카르복실산 및 아세틱, 글리콜릭, 락틱, 피루빅, 말로닉, 글루타릭, 타타릭, 시트릭, 푸마릭, 숙시닉, 말릭, 말레익, 히드로말레익, 벤조익, 히드로벤조익, 페닐아세틱, 시나믹, 살리실릭, 및 2-페녹시벤조익과 같은 C₄ _-16 헤테로아릴 카르복실산을 들 수 있다. 또한 염은 한가지 이상의 아미노산을 함유하는 본 발명의 염을 포함한다. 적절한 많은 아미노산 이 있으며, 통상적으로 아미노산은 염기기(basic group) 또는 산기를 갖는 측쇄를 갖는 것, 예컨대, 라이신, 아르지닌 또는 글루타민산, 혹은 글리신, 세린, 트레오닌, 알라닌, 이소류신 또는 류신과 같이 중성기(neutral group)을 갖는 측쇄를 갖는 것이지만, 다수의 아미노산, 특히 단백질 성분으로서 발견되는 천연 아미노산이 적합하다. 일반적으로 염은 생물학적으로 적합하거나 약리적으로 허용 가능하고 또는 무독성이며, 특히 포유류 세포를 위한 것이다. 생물학적으로 유독한 염은 대개 본 발명의 화합물을 위한 합성 중간 산물로 이용된다. AD의 염은 전형적으로 상기 언급된 결정형 4와 같은 결정형이다.

구체예는 방법이나 조작 단계가 진행되는 동안 일시적으로 나타나는 조성물을 포함한다. 예를 들어, 소디움 알콕사이드를 9-(2-히드록시에틸)아데닌 용액과 접촉시킬 때, 혼합의 초기에 생성되는 조성물은 무시할 수 있는 양의 소디움 알콕사이드를 함유할 것이다. 일반적으로 이 조성물은 충분한 교반으로 용액을 혼합시키기 전에는 불-균일한 혼합물로서 존재할 것이며, 무시할 수 있을 정도의 반응 산물과 대부분을 차지하는 반응 물질을 함유한다. 유사하게, 반응 과정 전반에서, 반응 물질, 반응 산물 및 부산물의 비율은 서로 상대적으로 변화할 수 있다. 이러한 일시적인 조성물이 공정 단계가 진행되는 동안 생길 수 있는 중간 산물이며, 본 발명의 구체예에 포함되어 있다.

본 발명은 두가지 이상의 서로 다른 결정형 또는 타입, 예컨대 결정형 1과 2, 결정형 1, 2 및 결정형 4, 또는 결정형 2와 4의 혼합물로 이루어진 조성물을 포함한다. 결정형 AD 1과 2의 혼합물은 약리적 배합물 또는 그 제조물에 존재하고, 통상 그러한 혼합물은 적어도 약 70%, 일반적으로 적어도 약 90%의 결정형 1을 함유한다. 그러나 몇몇 경우에 그러한 혼합물의 약 70% 이상이 결정형 2 및/또는 무정형 AD를 함유한다.

AD의 결정형

AD는 기재된 대로(Starrett 등, J.Med. Chem.(1994)19:1857-1864) 제조 및 회수된다. AD는 회전식 기화에 의해 감압하에 약 35°침전물에서 비결정형 또는 무정형 고형물로서 메탄올(약 4%)과 메틸렌 클로라이드(약 96%) 용액에서 실리카겔 컴럼으로부터 회수된다. 여기에서 AD가 결정형으로 제조될 수 있다는 것이 발견되었다.

몇 가지 다른 결정형 AD가 제시되어 왔다. 여러 방법, 흔히 XRD 및 DSC 온도 기록도에 의해 이들의 특성을 나타낼 수 있다. 결정형 조성물의 특성을 나타내거나 감정하기 위해 일반적으로 이용하는 방법은 XRD이다(예, U.S.Pharmacopoeia, 23권, 1995, 방법 941, p.1843-1845, U.S.P.Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, MD; Stout 등, X-레이 Structure Determination;A Practical Guide, Macmillan Co., New York, N.Y. 1968). 비록 결정의 연속적인 묶음으로부터 얻어지는 반복되는 회절 패턴에 항상 약하거나 매우 약한 회절 피크가 나타나는 것은 아닐지라도 결정형 화합물로부터 얻을 수 있는 회절 패턴으로 종종 주어진 결정형을 감지할 수 있다. 이것은 특히 시료내에 다른 결정형이 상당한 양으로 존재하는 경우, 예컨대 결정형 1이 부분적으로 결정형 2에 수화되어 있는 경우에 나타날 수 있다. 밴드의 상대 강도는 특히 낮은 각도의 X-레이 투시가(낮은 2θ)에서 예컨대, 결정의 특성, 입자 크기 및 다른 측정 조건의 차이에서 야기되는 바람직한 적응 효과 때문에 다양하게 나타날 수 있다. 그러므로 회절 피크의 상대 강도로 주어진 결정형을 확실하게 감지할 수 있는 것은 아니다. 대신에, 결정 AD가 상기 언급된 형태 중의 하나인지를 알기 위해서는 피크의 넓이 대신 상대적인 피크의 위치를 확인해야 한다. 각기 다른 시료에서 나타나는 개개의 XRD 피크는 일반적으로 넓은 피크인 경우 약 0.3-1 2θ수치내에 위치한다. 넓은 XRD 피크는 가까운 위치에 함께 존재하는 두개 이상의 개개 피크로 구성된다. 분리된 날카로운 피크의 경우, 그 피크는 대개 연속적인 XRD 분석에서 약 0.1 2θ수치내에서 발견된다. 연속적인 XRD 분석에서 화합물의 XRD 스펙트럼을 측정하기 위해 동일한 기구를 이용한 경우, XRD 피크 위치가 다르게 나타나는 주요한 이유는 시료의 배함물이 다르거나 또는 자체의 순도 때문이다. 분리된 날카로운 XRD 피크가 주어진 위치, 예컨대, 약 6.9에서 감지되었을 때 이 피크는 6.9±0.1에 존재하는 것을 의미한다. 주어진 위치에서 넓은 XRD 피크가 어떠한 2θ 수치에서 감지되었을 때 이것은 이 피크가 2θ수치±0.3에 있는 것을 의미한다.

본 명세서가 고순도 AD 레퍼런스 시료에서 관찰할 수 있는 모든 밴드를 반드시 필요로 하는 것은 아니다; 심지어 단일 밴드로 주어진 결정형 AD, 예컨대 6.9는 결정형 1임을 진단하는 것이 가능하다. 감정은 밴드의 위치와 일반적인 패턴, 특히 다양한 결정형에 따라 독특한 밴드의 선택에 초점을 맞추어야 한다.

결정형 AD를 감정하기 위한 부가적인 진단 기술로 시차주사 열량법(DSC), 융점 측정 및 자외선 흡수 스펙트로스코피(IR)를 선택적으로 사용할 수 있다. DSC는 그 결정 구조가 변화되거나 융해될 때 결정이 흡수 또는 방출시키는 열 전이 온도를 측정한다. 열 전이 온도 또는 융점은 전형적으로 연속적인 분석에서 그 오차가 약 2℃ 범위 내이고, 일반적으로 약 1도 범위이다. 어떠한 화합물이 DSC 피크 또는 융점을 갖는 주어진 수치의 의미는 DSC피크 또는 융점이 수치의 ±2℃ 이내라는 것이다. 또한 DSC는 어떠한 화합물을 다른 결정형 AD와 구별할 수 있게 한다. 다른 결정형인 경우 적어도 부분적으로, 그들의 전이 온도 프로파일이 다른 것에 기초하여 감지할 수 있다. IR은 빛에 반응하여 떨림을 갖는 분자형 작용기를 연결하는 독특한 화학 결합에 의해 야기된 자외선 빛의 흡수를 측정한다. 그러므로 DSC 및/또는 IR은 결정 AD를 기술하는데 이용할 수 있는 물리 화학적인 정보를 제공할 수 있다.

결정형 1

단일 결정의 X-레이 결정학을 결정형 1 AD의 특성을 밝히는데 이용하였다. 지정된 C-중심의 단사정 세포에 대응하여 3.00 < 2θ < 45.00°범위에서 I>10σ를 갖는측정된 3242 반사 위치를 측정함으로써 최소의 정방형 정제로부터 얻은 세포 지수와 배향 매트릭스는 다음과 같다 : a=12.85Å, b=24.50Å, c=8.28Å, β=100.2°, Z=4, 공간군 Cc.

결정형 1의 XRD 패턴은 일반적으로 약 6.9에서, 통상 약 6.9 및 약 20.7 또는 보다 일반적으로 약 6.9, 약 15.7 및 약 20.7에서 그리고 대체로 적어도 약 6.9, 약 11.8, 약 15.7 및 약 20.7에서 피크를 표시한다. 전형적으로 약 6.9에 위치하는 XRD 피크, 또는 일반적으로 (1)한개 혹은 두개의 피크를 부가적으로 동반하 는 피크이거나 (2)약 6.9에서 시차주사 열량법에 의한 수치 또는 융점 수치와 결부된 한개 또는 두개의 다른 피크를 동반하는 피크는 결정형 1을 다른 형태로부터 구별하거나 결정형 1 자체를 감정하는데 충분하다. 대개 결정형 1 스펙트럼은 약 6.9, 약 11.8 , 약 12.7, 약 15.7, 약 17.2, 약 20.7, 약 21.5, 약 22.5 및 약 23.3에서 피크를 갖는다. 결정형 1 XRD 패턴은 일반적으로 약 6.9 및/또는 11.8 및/또는 15.7 및/또는 17.2 및/또는 20.7 및/또는 23.3의 어느 한가지(또는 이들의 조합)에서 피크를 표시한다. 그러나, 도 1-26은 단지 구체예일 뿐이며 다른 결정형 AD 배합물의 진단된 결과는 이와 다를 수 있다.

결정형 1 AD는 검출할 수 있는 물을 거의 또는 전혀 함유하지 않은 무수물이다. 결정형 1은 통상 약 1%이하, 일반적으로 약 0.5%이하 및 약 0.2%이하의 물을 함유할 것이다. 게다가, 결정형 1은 약 20%이하, 통상 약 10%이하, 종종 약 1% 이하 및 일반적으로 약 0.1% 이하의 비결정형 AD를 함유할 것이다. 종종, 결정형 1은 DSC, XRD 또는 100X 확대의 편광 현미경으로 관측 가능한 비결정형 AD를 전혀 함유하지 않는다. 결정형 1 AD는 통상적으로 결정화 용매로부터 자유롭다. 즉, 결정 용액으로부터 충분히 회수되고 격자-내장된 용매 분자를 함유하지 않는다면, 일반적으로 약 1%이하, 대개 약 0.6%이하를 함유한다.

일반적으로 결정형 1은 빛 산란에 의해 측정하였을 때 약 25-150㎛, 일반적으로 약 30-80㎛의 중간 크기를 갖는다. 개개의 결정형 1 배합물은 약 1-200㎛ 범위의 길이를 갖는 결정을 함유하고 배합물내에서 각각의 결정은 통상 약 60-200㎛의 최대 크기를 갖는다. 몇몇 결정형 1 배합물에서, 그 안에 존재하는 결정의 약 1-10%는 250㎛보다 큰 최대 크기를 가질 것이다. 도 4-10에 나타난 결정형 1 결정은 통상적으로 알약, 판, 바늘 형태 및/또는 비규칙적인 모양을 갖는다. 또한 결정형 1의 집합체는 그 지름의 범위가 통상적으로 약 25-150㎛이다.

결정형 1은 약 102℃에서 DSC 흡열 전이(도 2)를 표시하고 IR 스펙트럼은 도 3에 기재되어 있다. 다른 결정형 1 배합물은 약 0.10-2.20㎡/g, 일반적으로 약 0.20-0.60㎡/g의 표면적을 갖는, 약 0.15-0.60g/ml, 일반적으로 약 0.25-0.50g/ml의 용량 밀도를 갖는다. 그러므로 결정형 1 AD는 2θ에서 약 6.9 및/또는 약 11.8 및/또는 약 15.7 및/또는 약 20.7 중 어느 한가지(또는 이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 XRD 스펙트럼 피크와 약 102°에서 시차주사 열량법에 의해 측정되는 흡열 전이에 의해 특성을 나타낼 수 있다. 선택적으로 결정형 1 AD는 2θ에서 6.9±0.1, 11.8±0.1, 15.7±0.1, 20.7±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크와 약 102.0±2°에서의 시차주사 열량법 및/또는 99.8±2°에서의 흡열 개시에 의해 측정되는 흡열 전이 피크를 이용하여 특성을 나타낼 수 있다.

결정형 2

도 11에 묘사되어 있는 결정형 2 XRD 패턴은 일반적으로 약 22.0에, 통상적으로 약 18.3 및 약 22.0에, 또는 보다 일반적으로 약 9.6, 약 18.3 및 약 22.0에 그리고 대체로 적어도 약 9.6, 약 18.3, 약 22.0 및 약 32.8에 피크를 표시한다. 통상적으로 이러한 네개의 특징적인 XRD 피크 중에서 어떠한 세개 혹은 네개는, 또는 일반적으로 (1)네개의 피크 또는 (2)시차주사 열량계에 의한 수치 또는 융점 수 치와 결부된 이러한 피크 중의 두개 또는 세개의 피크는 결정형 2를 다른 형태로부터 구별하거나 결정형 2 자체를 감정하는데 충분하다. 결정형 2 XRD 패턴은 대개 약 8.7-9.9, 약 9.6, 약 16.3, 약 18.3, 약 18.9, 약 19.7, 약 21.0-21.3, 약 21.4, 약 22.0, 약 24.3, 약 27.9, 약 30.8 및 약 32.8 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 피크를 표시한다.

결정형 2는 AD 이수화물로 그들은 대개 물 이외에는 검출할 수 있는 결정화 용매를 본질적으로 함유하지 않는다. 결정형 2는 일반적으로 약 30%이하, 통상 약 10%이하, 종종 약 1% 이하 및 일반적으로 약 0.1% 이하의 비결정형 AD를 함유할 것이다. 대체로, 그 결정은 DSC, XRD 또는 100X 확대의 편광 현미경으로 관측 가능한 비결정형 AD를 전혀 함유하지 않는다. 통상적으로, 결정형 2는 빛 산란에 의해 측정하였을 때 약 15-85㎛, 일반적으로 약 25-80㎛의 중간 크기를 갖는다. 개개의 결정형 2 배합물은 약 1-300㎛ 범위의 길이를 갖는 결정을 함유한다. 결정형 2는 약 73℃에서 DSC 흡열 전이(도 12)를 표시하고 IR 스펙트럼은 도 13에 기재되어 있다. 그러므로 결정형 2 AD는 2θ에서 약 9.6 및/또는 약 18.3 및/또는 약 22.0 및/또는 약 32.8 중 어느 한가지(또는 이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 XRD 스펙트럼 피크와 약 73°에서 시차주사 열량법에 의해 측정되는 흡열 전이에 의해 특성을 나타낼 수 있다. 선택적으로 결정형 2 AD는 2θ에서 9.6±0.1, 18.3±0.1, 22.0±0.1, 24.3±0.1및 32.8±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크와 약 72.7±2°에서의 시차주사 열량법 및/또는 69.5±2°에서의 흡열 개시에 의해 측정되는 흡열 전이 피크를 이용하여 특성을 나 타낼 수 있다.

결정형 3

도 14에 묘사되어 있는 결정형 3 XRD 패턴은 일반적으로 약 8.1에, 통상적으로 약 8.1 및 약 25.4에, 또는 보다 일반적으로 약 8.1, 약 19.4 및 약 25.4에 피크를 표시한다. 통상적으로 이러한 세개의 특징적인 XRD 피크 중에서 어떠한 한개 혹은 두개는, 또는 일반적으로 (1)이러한 피크 중의 세개 혹은 네개의 피크 또는 (2)시차주사 열량계에 의한 수치 또는 융점 수치와 결부된 이러한 피크 중의 두개 또는 세개의 피크는 결정형 3을 다른 형태로부터 구별하거나 결정형 3 자체를 감정하는데 충분하다. 결정형 3은 약 85℃에서 시차주사 열량범에 의해 측정된 흡열 전이(도 15)를 표시한다. 결정형 3 스펙트럼은 대개 약 8.1, 약 8.7, 약 14.1, 약 16.5, 약 17.0, 약 19.4, 약 21.1, 약 22.6, 약 23.4, 약 24.2, 약 25.4, 및 약 30.9 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 피크를 표시한다.

결정형 3은 결정형 1 및 2와 다르게 결정 격자 내에 약 1 당량의 메탄올을 함유한다. 통상적으로 메탄올은 결정화 용매에서 얻어진 것이다. 그러나 결정형 3은 본질적으로 검출할 수 있는 다른 용매 또는 물을 함유하지 않는다. 결정형 3은 일반적으로 약 20%이하, 통상 약 10%이하, 종종 약 1% 이하 및 일반적으로 약 0.1% 이하의 비결정형 AD를 함유할 것이다. 대체로, 그 결정은 DSC, XRD 또는 100X 확대의 편광 현미경으로 관측 가능한 비결정형 AD를 전혀 함유하지 않는다. 통상적으로, 결정형 3은 빛 산란에 의해 측정하였을 때 약 20-150㎛, 일반적으로 약 30-120㎛의 중간 크기를 갖는다. 개개의 결정형 3 배합물은 일반적으로 약 1-300㎛ 범위 의 길이를 갖는 결정을 함유한다.

결정형 4

도 16에 묘사되어 있는 결정형 4 XRD 패턴은 일반적으로 약 26.3에, 통상적으로 약 26.3 및 약 31.7에, 또는 보다 일반적으로 약 26.3, 약 31.7 및 약 15.2에 또는 대체로 약 26.3, 약 31.7, 약 15.2 및 약 21.0에 피크를 표시한다. 통상적으로 이러한 네개의 특징적인 XRD 피크, 또는 일반적으로 (1)이러한 피크 중 세개의 피크 또는 (2)시차주사 열량계에 의한 수치 또는 융점 수치와 결부된 이러한 피크 중의 두개 또는 세개의 피크는 결정형 4를 다른 형태로부터 구별하거나 결정형 4 자체를 감정하는데 충분하다. 결정형 4 AD는 약 121℃ 및 148℃에서 시차주사 열량범에 의해 측정된 흡열 전이(도 17)를 표시한다. 결정형 4 스펙트럼은 대개 약 9.8, 약 15.2, 약 15.7, 약 18.1, 약 18.3, 약 21.0, 약 26.3 및 약 31.7 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 피크를 표시한다. 그러므로 결정형 4 AD는 2θ에서 약 15.2 및/또는 약 21.0 및/또는 약 26.3 및/또는 약 31.7 중 어느 한가지(또는 이들의 조합)에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 XRD 스펙트럼 피크와 약 121.3°및 약 148.4°에서 시차주사 열량법에 의해 측정되는 흡열 전이에 의해 특성을 나타낼 수 있다. 선택적으로 결정형 4 AD는 2θ에서 9.8±0.1, 18.1±0.1, 21.0±0.1, 26.3±0.1 및 31.7±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크와 약 121.3±2°및 148.4±2°에서 시차주사 열량법에 의해 측정되는 흡열 전이 피크를 이용하여 특성을 나타낼 수 있다.

유기 및 무기산의 결정화 염

도 18-26은 결정화 염 또는 선택적으로 AD의 복합체 그리고 유기 및 무기산으로부터 얻은 XRD 스펙트럼을 보여준다. 이러한 염은 헤미술페이트염 또는 복합체(도 18), 브롬화수소염 또는 복합체(도 19), 질산염 또는 복합체(도 20), 메실(CH₃SO₃H)염 또는 복합체(도 21), 에틸술폰산염(C₂H₅SO₃H) 또는 복합체(도 22), β-나프틸렌 술폰산염 또는 복합체(도 23), α-나프틸렌 술폰산염 또는 복합체(도 24), (S)-캄퍼 술폰산염 또는 복합체(도 25) 및 숙신산염 또는 복합체(도 26)이다. 이러한 XRD 스펙트럼은 화합물의 특성을 나타낼 수 있는 수많은 피크를 보여주며 각 화합물을 다른 결정형으로부터 감정할 수 있게 한다.

도 18은 헤미술페이트염과 그 복합체가 2θ에서 약 8.0, 약 9.5, 약 12.0, 약 14.6, 약 16.4, 약 17.0, 약 17.5-17.7, 약 18.3, 약 19.0, 약 20.2, 약 22.7, 약 24.1 및 약 28.2 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 나타나는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 131-134℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 12.0, 약 14.6, 약 16.4 및 약 17.5-17.7에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 131-134℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 헤미술페이트 AD는 8.0±0.1, 12.0±0.1, 14.6±0.1, 16.4±0.1 및 17.5-17.7±0.3에서 2θ로 표현되는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 131-134±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 19는 브롬화수소염과 그 복합체가 약 13.2, 약 14.3, 약 15.9, 약 17.8, 약 20.7, 약 21.8, 약 27.2 및 약 28.1 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 2θ로 표현되는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 196-199℃로 가열시켰을 때 분해된다. 그러므로 이것은 약 13.2, 약 14.3, 약 17.8 및 약 28.1에서 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 196-199℃로 가열시켰을 때 분해되는 특성을 나타낸다. 선택적으로 브롬화 수소 AD는 2θ에서 13.2±0.1, 14.3±0.1, 17.8±0.1, 20.7±0.1 및 27.2±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 분해점 196-199±2.0°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 20은 질산염과 그 복합체가 약 8.0, 약 9.7, 약 14.1, 약 15.2, 약 16.7, 약 17.1, 약 18.3, 약 18.9, 약 19.4, 약 20.0, 약 21.2 및 약 22.3, 약 23.2, 약 24.9, 약 27.6, 약 28.2, 약 29.4 및 약 32.6 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 2θ로 표현되는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 135-136℃로 가열시켰을 때 분해된다. 그러므로 이것은 약 14.1, 약 23.2, 약 29.4 및 약 32.6에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 131-134℃로 가열되었을 때 분해되는 특성을 나타낸다. 선택적으로 질산 AD는 2θ에서 8.0±0.1, 14.1±0.1, 23.2±0.1, 29.4±0.1 및 32.6±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 분해점 135-136±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 21은 메실염과 그 복합체가 2θ에서 약 4.8, 약 15.5, 약 16.2, 약 17.5, 약 18.5, 약 20.2, 약 24.8, 약 25.4 및 약 29.5 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 나타나는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 138-139℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 4.8, 약 15.5, 약 20.2 및 약 24.8에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 138-139℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 메실 AD는 2θ에서 4.8±0.1, 15.5±0.1, 16.2±0.1, 20.2±0.1 및 24.8±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 138-139±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 22는 에틸술폰산염과 그 복합체가 약 4.4, 약 8.8, 약 18.8, 약 23.0-23.3 및 약 27.3 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 2θ로 표현되는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 132-133℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 4.4, 약 8.8, 약 18.8 및 약 27.3에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 132-133℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 에틸술폰산 AD는 2θ에서 4.4±0.1, 8.8±0.1, 18.8±0.1, 23.0-23.3±0.1 및 27.3±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 132-133±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 23은 β-나프틸렌 술폰산염과 그 복합체가 약 9.8, 약 13.1, 약 16.3, 약 17.4, 약 19.6, 약 21.6-22.3, 약 23.4, 약 24.1-24.5 및 약 26.6 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 2θ로 표현되는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 156-157℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 13.1, 약 17.4, 약 23.4 및 약 26.2에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 156-157℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 β-나프틸렌 술폰산 AD는 2θ에서 9.8±0.1, 13.1±0.1, 17.4±0.1, 23.4±0.1 및 26.2±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 156-157±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 24는 α-나프틸렌 술폰산염과 그 복합체가 약 8.3, 약 9.8, 약 11.5, 약 15.6, 약 16.3, 약 16.7-17.4, 약 19.6, 약 21.0, 약 22.9, 약 23.7, 약 25.0 및 약 26.1 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 2θ로 표현되는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 122-128℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 9.8, 약 15.6, 약 19.6 및 약 26.1에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 122-128℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 α-나프틸렌 술폰산 AD는 2θ에서 9.8±0.1, 15.6±0.1, 19.6±0.1, 21.0±0.1 및 26.1±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 122-128±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 25는 (S)-캄퍼 술폰산염과 그 복합체가 약 5.4, 약 6.5, 약 13.7, 약 15.5, 약 16.8-17.2, 약 19.6, 약 20.4-20.7, 약 21.2, 약 23.1, 약 26.1, 약 27.5, 약 28.4, 약 31.3 및 약 32.2 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 2θ로 표현되는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 160-161℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 5.4, 약 6.5, 약 13.7 및 약 16.8-17.2에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 160-161℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 (S)-캄퍼 술폰산 AD는 2θ에서 5.4±0.1, 6.5±0.1, 13.7±0.1, 16.8-17.2±0.3 및 19.6±0.1에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 160-161±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

도 26은 숙신산염과 그 복합체가 2θ에서 약 4.7, 약 9.5, 약 10.6, 약 14.9, 약 16.3, 약 17.4, 약 17.9, 약 19.9, 약 20.8, 약 22.1, 약 23.9-24.2, 약 26.5, 약 27.6 및 약 28.2 중의 어느 하나 (또는 이들의 조합)에서 나타나는 독특한 XRD 피크를 나타낸다. 염 또는 복합체는 약 122-124℃의 융점을 갖는다. 그러므로 이것은 약 4.7, 약 9.5, 약 14.9 및 약 17.4에서 이러한 독특한 네개의 XRD 피크를 갖는 것으로 특성을 나타낼 수 있다. 부가적으로 이 화합물은 이러한 XRD 피크중의 세개 혹은 네개를 가지며 약 122-124℃의 융점을 갖는 특성을 나타낸다. 선택적으로 숙신산 AD는 2θ에서 9.5±0.1, 14.9±0.1, 16.3±0.1, 17.4±0.1 및 23.9-24.2±0.3에서 나타나는 Cu-Kα 방사선을 사용하는 명백한 XRD 스펙트럼 피크 및 융점 122-124±2°를 이용하여 그 특성을 표시할 수 있다.

본 발명의 구체예는, 예컨대 상기 그 특성을 기술한 염과 같은, 아데포버 디 피복실의 결정화 염 및 약리적으로 허용가능한 부형제를 포함한다. 다른 구체예는, 예컨대 상기 그 특성을 기술한 염과 같은, 아데포버 디피복실의 결정화 염 및 약리적으로 허용가능한 부형제를 접촉시켜 허용가능한 약제 조성물을 제조하는 방법을 포함한다. 다른 구체예는 예컨대 상기 그 특성을 기술한 염과 같은, 아데포버 디피복실의 결정화 염 및 약리적으로 허용가능한 부형제를 접촉시키는 방법에 의해 생산된 생성물을 포함한다.

AD 합성 방법

반응식 1는 AD 및 결정형 AD를 만들기 위한 대표적인 방법 흐름도이다.

요구에 따라 반응식 1에 표시된 방법 단계 및 후술하는 단계에서 그 범위를 증가시키거나 감소시킬 수 있다.

디에틸 p- 톨루엔설포닐옥시메틸포스페이트 합성 방법

구체예에서, 반응식 1의 단계 1에 표시된 디에틸 p-톨루엔설포닐옥시메틸포 스페이트의 합성은 다음과 같이 기술된다. 불활성 대기, 예컨대 질소가 들어있는 반응기에서 디에틸포스파이트(0.8kg), 파라포름알데히드(0.22kg) 및 톨루엔(2.69kg) 용매의 트리에틸아민(0.06kg)의 혼합물을 교반과 함께 두시간 동안 87℃(84내지 110℃)로 가열시켰다. 그리고 나서 가열된 환류를 반응이 완전히 이루어질 때까지 1시간동안 유지시켰다. 반응이 완전히 이루어진 것은 TLC(검출할 수 있는 디에틸 포스파이트가 미량 있거나 없슴)에 의해 모니터링되고 δ8.4-8.6ppm에서 디에틸 포스파이트 피크가 1% 이하임을 표시하는 ¹HNMR 에 의해 확인된다. 그 용액을 약 1℃(-2 내지 4℃)로 냉각시키고 p-톨루엔설포닐 클로라이드(1.0kg)를 첨가시킨 뒤, 10℃를 넘지 않게 하여 트리에틸아민(0.82kg)을 천천히 첨가(발열 반응으로 약 3-6시간에 걸쳐서)시킨다. 그 반응 생성물을 22℃(19-25℃)로 가온시키고 반응이 완전히 이루어질때까지 적어도 5시간(통상적으로 약 16-24시간) 동안 교반시킨다. 반응이 완전히 이루어진 것은 TLC(검출할 수 있는 p-톨루엔설포닐 클로라이드가 미량 있거나 없슴)에 의해 모니터링되고 (δ7.9 ppm에서 p-톨루엔설포닐 클로라이드 이중선이 더 이상 검출되지 않음) ¹HNMR 에 의해 확인된다. 여과에 의해 고형물을 제거시키고 톨루엔(0.34kg)을 이용하여 씻어낸다. 세척과 여과를 혼합하여 물(각 1.15kg)로 두번 세척하거나 또는 선택적으로 물(각 1.15kg), 5% 수성 소디움 카보네이트(3.38kg)를 연이어 이용하고 물(각 1.15kg)로 두번 세척할 수 있다. 에멀젼이 생성된 경우, 첫번째 유기/물 혼합물에 염수를 첨가시킨다. 50℃를 넘지 않도록 하여, 톨루엔을 제외시키고, 약 85-95%의 순도를 갖는 기름으로서 목적 화합물을 산출하도록 유기상을 진공내에서(KF(Karl Fischer) 적정에 의해 10%를 넘지 않은 LOD와 0.5%를 넘지 않는 물 함량을 갖도록) 증류시킨다. 그 기름은 냉각되어 점도를 갖는다.

9-(2- 히드록시에틸 )아데닌 합성 방법

구체예에서, 반응식 1의 단계 2에 표시된 9-(2-히드록시에틸)아데닌의 합성은 다음과 같이 기술된다. 불활성 대기, 예컨대 질소가 들어있는 반응기에서, 소디움 히드록사이드(6g)를 DMF(2.5kg) 하에 아데닌(1.0kg)과 용해된 에틸렌 카보네이트(0.72kg, 융점 37-39℃)의 슬러리에 첨가시킨뒤 완전한 반응이 이루어질때까지 그 혼합물을 교반시키면서 125℃(95℃ 환류로)로 가열시킨다(혼합물 온도가 환류로 110℃에 있다면 약 3-9시간 또는 95-110℃라면 약 15-48시간). 반응이 완전히 이루어진 것은 HPLC(남아있는 아데닌이 0.5%를 넘지 않는다)에 의해 모니터링 된다. 그 혼합물을 50℃ 이하로 냉각시키고 톨루엔(3.2kg)으로 희석시킨다. 생성된 슬러리를 3℃(0-6℃)로 냉각시키고 적어도 2시간 동안 교반시킨다. 슬러리는 여과되고 여과 덩어리는 차가운(0-5℃) 톨루엔(각 0.6kg)으로 두번 세척된다. 여과 덩어리는 진공으로 35 내지 70℃에서 건조되고(¹HNMR 또는 LOD에 의해, 2% 톨루엔을 넘지 않도록) 선택적으로 분쇄되어 회백색 분말 고형물에서 백색의 목적 화합물을 얻는다.

9-[2-( 디에틸포스포노메톡시 )에틸]아데닌 합성 방법

이 화합물은 소디움 알콕사이드(C1-6 알킬)와 9-(2-히드록시에틸)아데닌으로 이루어진 조성물을 이용하여 제조되었다. 소디움 알콕사이드, 통상적으로 소디움 t-부톡사이드 또는 소디움 i-프로폭사이드를 DMF와 같은 용매하에 약 20-30°의 온도에서 약 1-4시간에 걸쳐서 9-(2-히드록시에틸)아데닌에 접촉시킨다. 전형적으로 1몰의 9-(2-히드록시에틸)아데닌과 약 1.2-2.2몰의 소디움 알콕사이드를 이용한 경우에 우수한 합성 결과가 나온다.

구체예에서, 반응식 1의 단계 3에 표시된 9-[2-(디에틸포스포노메톡시)-에틸]아데닌의 합성은 다음과 같이 기술된다. 불활성 대기, 예컨대 질소가 들어있는 반응기에서, 9-(2-히드록시에틸)아데닌(1.0kg)과 DMF(4.79kg)의 슬러리를 30-60분 동안 약 130°(125-135°)로 가온시킨다. 반응기의 내용물을 강한 교반과 함께 약 25°(20-30°)로 급격히 냉각시키고 소디움 tert-부톡사이드(0.939kg)를 약 1-3시간에 걸쳐서 부분적으로 첨가시킨다. 이 때 강한 교반과 약 25°(20-30°)인 내용물 온도는 동일하게 유지시킨다. 교반과 온도는 소디움 tert-부톡사이드를 모두 첨가시킨 뒤에 약 15-45분 가량 지속된다. 그리고 나서 반응기의 내용물은 약 -10°(-13 내지 0°)로 냉각되고 DMF(1.22kg) 용매하에 디에틸 p-톨루엔설포닐옥시메틸-포스페이트(순수한 것 기준으로 2.25kg) 용액을 약 5-10시간에 걸쳐서 첨가시킨다. 그 혼합물은 반응이 완전히 이루어질 때까지, 통상적으로 디에틸 p-톨루엔설포닐옥시메틸-포스포네이트의 최종 부분이 첨가된 뒤 약 0.5-2시간 동안 약 -5°(-10 내지 0°)로 유지된다. 반응이 완전히 이루어진 것은 HPLC(남아 있는 9-(2-히드록시에틸)아데닌이 3%를 넘지 않는다)에 의해 모니터링된다. 포트 온도가 20°를 넘지 않도록 조절하면서 빙초산(0.67kg)을 첨가시킨다. 그 혼합물을 약 22°(15-25°)에서 약 15-45분간 교반시킨다. 담금질된 혼합물은 증류가 멈출 때까지 진공에서 농 축되고 그 내용물은 40°이하로 냉각된다. 디클로로메탄(16.0kg)을 첨가시키고 그 내용물을 20°(15-25°)에서 적어도 1시간 동안 교반시킨다. 만약 총 고형물(NaOTs(소디움 토실레이트), NaOAc, Et₂PMEA)에 대한 DMF 함량이 20%(¹HNMR에 의해)보다 높다면 그 혼합물은 증류가 멈출 때까지 진공에서 농축되고 그 내용물은 40°이하로 냉각된다. 그리고 나서 디클로로메탄(16.0kg)을 첨가시켜 그 반응기의 내용물을 20°(15-25°)에서 적어도 1시간 동안 교반시킨다. 규조토(0.5,kg)를 첨가시킨 내용물을 20°(15-25°)에서 적어도 1시간 동안 교반시킨다. 고형물은 여과에 의해 제거되고 CH₂Cl₂(각 약 1kg)로 세번 세척된다. 여과액과 세척액은 80°를 넘지 않는 온도에서 증류가 멈출 때까지 진공으로 농축되고, 반응기의 내용물은 40°이하로 냉각된다. 디클로로메탄(5.0kg)을 나머지 부분에 첨가시켜 그 내용물을 고형물이 용해되도록 약 25°(20-40°)에서 교반시킨다. 그 생성물은 80°를 넘지 않는 온도에서 증류가 멈출 때까지 진공으로 농축된다. 디클로로메탄(7.0kg)을 첨가시켜 그 내용물을 고형물이 용해되도록 약 25°(20-40°)에서 교반시킨다. 만약 디에틸 PMEA에 대한 DMF 함량이 12%보다 높다면 그 혼합물은 80°가 넘지 않는 온도에서 진공으로 농축되고, 그 내용물은 40°이하로 냉각된다. 그리고 나서 디클로로메탄(7.0kg)을 첨가시켜 그 내용물을 고형물이 용해되도록 약 25°(20-40°)에서 교반시킨다. 혼합물은 약 25°(22-30°)에서 교반에 의해 약 15-45분 동안 물(0.8kg)로 세척된다. 4시간 동안 상 분리가 일어난 뒤 상을 분리한다. 수성상은 약 25°(22-30°)로 용액을 유지시키며 약 15-45분 동안 교반에 의해 디클로로메탄(세척 당 1.5,kg)으로 두번의 역-추출이 이루어진다. 그리고 나서 적어도 2시간 동안 상 분리가 일어나도록 한다. 결합되어 있는 유기물은 80°를 넘지 않도록 하여 증류가 멈출 때까지 진공에서 농축된다. 톨루엔(3.0kg)을 첨가시키고 약 25°(22-30°)에서 약 15-45분 동안 교반시킨다. 그 반응 생성물을 80°가 넘지 않도록 하여 진공에서 공비혼합시킨다. 톨루엔(30kg)을 첨가시키고 그 혼합물을 약 80°(75-85°)까지 가열시킨 뒤, 약 15-45분 동안 교반시키고 약 60-90분에 걸쳐서 30°이하로 냉각시킨다. 그리고 나서 약 0°(-3 내지 6°)로 냉각시킨다. 약 0°에서 적어도 12시간 동안 천천히 교반시킨 뒤에, 생성된 슬러리를 여과시키고 그 여과 덩어리를 찬(약 0-6°) 톨루엔(세척 당 약 0.2kg)으로 세번 씻어낸다. 젖은 덩어리는 약 50°(35 내지 65°)에서 진공으로 건조시키고 건조된 생성물을 분쇄한다. 생성물의 건조는 물의 제거 정도(KF 적정에 의해 검출되는 물이 0.3%를 넘지 않는다)를 통해 모니터링된다. 단계 3까지 불활성 대기가 유지된다.

PMEA 합성 방법

구체예에서, 반응식 1의 단계 4에 표시된 PMEA의 합성은 다음과 같이 기술된다. 불활성 대기, 예컨대 질소가 들어있는 반응기에서, 디에틸 PMEA(1.00kg), 아세토니트릴(2.00kg) 및 브로모트리메틸실란(1.63kg)의 혼합물을 가열시키고, 반응이 완전히 이루어질 때까지 약 1-3시간 동안 교반과 함께 환류에서 유지시켰다. 반응이 완전히 이루어진 것은 ³¹P NMR 또는 HPLC(검출되는 디에틸 PMEA가 없고 모노에틸 PMEA의 검출이 2%를 넘지 않는다)에 의해 모니터링된다. 그 용액은 ≤80℃의 진 공에서 반-고체로 증류된다. 이것을 물(2.00kg)과 섞어서 고체가 모두 용해될 때까지 교반과 함께 약 30-60분 동안 약 55℃(52-58℃)로 가온시킨다. 생성된 혼합물은 수성 소디움 히드록사이드를 이용하여 pH 3.2로 조절되고 약 22℃(19-25℃)로 냉각된다. 그 내용물을 점도가 약해질 때까지(약 15-120분) 약 75℃(72-78℃)로 가열시키고 약 3℃(0-6℃)로 냉각하여 적어도 3시간(3-6시간) 동안 교반시킨다. 슬러리는 여과되고 여과 덩어리를 물(1.00kg)로 씻어낸다. 젖은 덩어리를 물(3.75kg)에 현탁시키고 현탁액을 강한 교반과 함께 약 75℃(72-78℃)로 가열시킨다. 약 2시간의 교반 뒤에 슬러리를 약 3℃(0-6℃)로 냉각시켜 또 다시 적어도 2시간동안 교반시킨다. 슬러리는 여과되고 여과 덩어리는 이부의 물(세척당 0.50kg)과 이부의 아세톤(세척당 1.00kg)에 의해 순차적으로 세척된다. 분리된 고형물은 진공에서 약 90℃를 넘지 않도록 하여 낮은 물 함량(KF 적정에 의해 검출되는 물이 0.5%를 넘지 않도록 한다)을 갖도록 건조되고, 백색 결정으로서 PMEA를 생산한다. 생성물은 미세한 입자 크기를 갖도록 분쇄된다.

AD 합성 방법

AD를 제조하는 구체적인 방법은 1몰 상당의 PMEA를 약 5.68-56.8 상당의 NMP/동등한 PMEA의 부피로 현탁시킨 다음 , 약 2-5몰 상당의, 종종 약 2.5-3.5, 일반적으로 약 3몰 상당의 트리에틸아민("TEA")을 용액에 첨가시키고 약하거나 보통 정도의 교반을 이용하는 것으로 이루어진다. 그리고 나서 약 3-6몰 상당의, 종종 약 4.5-5.5몰 상당의, 일반적으로 약 5몰 상당의 클로로메틸 피발레이트를 첨가시켜 반응 혼합물을 얻는다. 일반적으로 반응 혼합물의 제조는 실온에서 이루어진다. 66°이하의 온도, 통상적으로 약 28-65°, 일반적으로 약 55-65°사이의 온도를 유지하도록 반응 혼합물을 약 2-4시간동안 가열시켜 반응을 수행한다. 반응 혼합물을 약 28-65°로 가열시키는데 걸리는 시간은 정해진 것이 아니고 반응 혼합물의 부피 및 가열에 이용되는 장치의 용량에 따라 다양해진다. 약하거나 중간 정도의 교반은 반응이 진행되는 동안 현탁액 내에 고형물을 유지시키고 반응 용기 내에서 반응 물질들이 폭넓게 튀는 것을 최소화한다. 이러한 방법을 이용하여 통상적으로 주어진 조건 하에서, 열거한 반응 물질을 반응시키는 방법에 의해 생산된 AD를 함유한 생성물을 얻는다.

구체예에서, 반응식 1의 단계 5에 표시된 PMEA의 AD로의 전환은 다음과 같이 기술된다. 불활성 대기, 예컨대 질소가 들어있는 반응기에서, 1-메틸-2-피롤리디논(3.15,kg), PMEA(1.00kg), 트리에틸아민(1.11kg) 및 클로로메틸 피발레이트(2.76kg)의 혼합물을 약 60±3℃(66℃를 넘지 않도록)로 가열시키고 중간 정도의 교반을 이용하여 반응이 완전히 이루어질때까지 ≤4시간(1-4시간) 동안 저어준다. 반응이 완전히 이루어진 것은 ³¹PNMR 또는 HPLC(모노(POM) PMEA가 15%를 넘지 않는다)에 의해 알 수 있다. 혼합물을 이소프로필 아세테이트(12.00kg)로 희석시키고 25±3℃로 냉각시킨 뒤, 약 30분 동안 교반시킨다. 여과에 의해 고형물을 제거시키고 이소프로필 아세테이트(5.0kg)를 이용하여 세척한다. 혼합물을 온도 25±3℃에서 약 15-45분 동안 중간 정도의 세기로 물(세척당 3.70kg)과 함께 교반시킴에 의해 결합되어 있는 유기물을 두번 세척한다. 결합되어 있는 수성 세척액은 이소프로 필 아세테이트(추출당 4.00kg)와 함께 혼합물 온도 25±3℃에서 약 15-45분 동안 교반시킴에 의해 두번 역-추출된다. 결합되어 있는 유기물을 25±3℃에서 15-45분 동안 교반시키며 물(1.80kg)로 세척시킨 뒤, 약 35±5℃(40℃를 넘지 않도록)에서 원래 부피의 약 40%가 될 때까지 진공으로 농축시킨다. 마무리 여과(1㎛ 여과기) 뒤에, 1.5kg의 이소프로필 아세테이트로 세척이 이루어지고, 유기물의 농축은 옅은 기름이 유기물을 남길 때까지 약 35±5℃(50℃를 넘지 않도록)에서 진공하에 재실시된다. 통상적으로 기름은 약 6-45%, 일반적으로 약 30-42%의 AD를 함유한다.

AD 결정화 방법

유기 기름으로부터 AD를 결정화시키는 것은 일반적으로 (1)AD 합성 반응에서 반응 물질로서 존재하는 PMEA의 양에 비해 상대적으로 낮은 NMP의 부피, 예컨대 PMEA 그램 당 NMP가 약 10mL 보다 낮은 것을 이용, 및/또는 (2)진공 증류 시간을, 예컨대 일반적으로 적어도 약 4-6시간 정도로 충분히 함으로써, 진공 증류 뒤에 유기 기름에 남아 있는 이소프로필 아세테이트의 양을 최소화시킴에 의해서 이루어진다. 기름에서 반응 개시 물질, 예컨대 NMP 또는 PMEA의 집합체는 결정화 용액의 약 2-20%, 일반적으로 약 1-2%보다 낮은 양으로 볼 수 있다. 유기 기름으로부터 결정을 제조할 때, AD의 약 20-45%, 종종 약 30-42% 및 일반적으로 약 35-42%는 결정화 용매가 첨가되기 전에 기름에 존재한다.

과포화된 용액으로부터 선택적으로 AD를 결정화시킨다. 그러한 과포화 용액에서는 핵 형성이 일어나므로 쉽게 결정이 만들어질 수 있다. 통상적으로 과포화 정도와 온도가 증가할 때 핵 형성율도 증가한다. 전형적으로 과포화된 용액은 온도 (일반적으로 감소시켜서)의 변화, 용매의 기화 또는 용매 조성의 변화, 예컨대 섞을 수 있는 비용매나 부족한 용매를 첨가함에 의해서 제조된다. 또한 이러한 방법을 함께 사용하여, 예컨대 용질의 농도를 증가시키는 반면 양쪽의 차가운 용액을 감압하에 기화시킴으로써 과포화된 AD 용액을 만들 수 있다.

결정형 AD는 AD 조성물, 일반적으로 적어도 약 6%, 통상적으로 적어도 약 30%, 일반적으로 적어도 약 35%의 AD를 함유한 결정화 혼합물에 존재하는 AD 용액으로부터 결정을 형성시킴으로써 제조할 수 있다. 대체로 약 6-45% AD 및 약 55-94% 결정화 용매를 함유하는 AD 용액을 제조하여 결정화를 수행한다. AD 용해도의 최고 한계는 실온에서 대부분의 결정화 용매에 대하여 약 10-41%이다. AD는 몇몇 결정화 용매에서 충분히 용해되지 않는다. 예컨대 디-n-부틸에테르에서 AD의 용해도는 약 0.3mg/mL를 넘지 않고, AD 용액에 이러한 용매를 첨가시키는 것은 용액의 포화 또는 과포화도를 증가시킨다. 일반적으로 이용되는 유기 용액은 결정화 용매에서의 최고 용해도 한계에 가까운 양의 AD를 함유한다. 더 적은 양, 즉 6%는 결정을 생산하기 위한 점도를 용액에 제공하기 위해 필요한 최소의 AD 양이다. 특정 용매, 예컨대 메탄올 또는 CH₂Cl₂는 AD를 약 50% 이상 함유할 수 있다.

일반적으로 결정화 공정이 온도 전반에 걸쳐 자연스럽게 진행되므로, 결정화 온도는 고정된 값이 아니고 다양할 수 있다. 약 35°이상, 특히 약 45-50°에서 결정화가 이루어지면 수율이 감소되고/또는 결정의 불순도가 증가할 수 있다. 일반적으로 결정화는 약 -5°내지 약 50°, 종종 약 0-35°, 일반적으로 약 4-23°의 온 도 범위에서 이루어진다. 선택적으로 약 -5°이하의 온도로 결정화를 수행할 수 있으며 이는 결정의 수율을 증가시키고 결정 형성율을 향상시킬 수 있는 반면 부산물의 생성이 증가될 수 있다. 그러므로 주위 온도(약 15-23°)와 유사하거나 통상적으로 대부분의 냉각 장치나 방법에 의해 쉽게 도달할 수 있는 온도(약 0-4°)에서 용매를 이용하는 것이 보다 편리하고 경제적이다. 용액이 상대적으로 낮은 농도, 예컨대 약 10-20%의 AD를 함유하는 경우, 상대적으로 낮은 온도, 예컨대 약 0-15°에서 결정화시키는 것이 종종 결정의 수율을 향상시킬 것이다.

AD와 결정화 용매(들)를 함유한 용액을 실온 이상의 온도, 바람직하게는 약 35°로 가열시키는 것이 결정화를 촉진시킨다. 아마도 이것은 핵 형성율의 증가에 의한 것이라 여겨진다. 약 35°에서 결정화 혼합물을 가열시키는 시간은 고정된 값이 아니고 사용되는 장치의 용량에 따라 다양할 수 있으며 일반적으로 약 20-45분 가량 소요된다. 그리고 나서 가열을 중단시키고 냉각시킴으로써 또는 온도가 떨어지도록 약 10-120분간 방치함으로써 온도를 감소시킨다. 이 시기에 결정이 형성되며 적어도 약 4-36분에 걸쳐서 형성이 지속된다. 일반적으로 결정화는 결정화 혼합물이 35°에 도달한 즉시 또는 짧은 시간 안에 시작된다. 용액이 35°에 도달한 뒤 그 온도를 약 0-23°로 감소시키면서 결정화를 수행하였다. 약하거나 중간 정도의 교반을 이용하여 또는 이용하지 않고 결정화를 수행할 수 있으며, 통상적으로 중간 정도의 교반을 이용하여 좋은 결과를 낼 수 있다. 일반적으로 결정화의 상당 부분은 약 5분 내지 약 72시간에 걸쳐서 일어나고 약 10-16시간은 대체로 사용된 용매에 관계없이 좋은 수율이 얻어진다. 비록 상대적으로 짧은 결정화 시간(약 30-90 분)이 AD의 회수 정도를 감소시킬 수 있지만, 결정화 시간은 고정된 값이 아니고 다양하다. 다른 유기 용매, 예컨대 NMP를 함유한 반응 혼합물에 결정화 용매를 첨가시켰을 때, 결정화는 일반적으로 그 온도가 일단 약 35°정도에 도달한 즉시 시작되고 용액은 탁해진다.

결정화는 대개 실험실용 또는 제조용 장치 기구, 예컨대 둥근 바닥 플라스크, 에를렌메이어(Erlenmeyer) 플라스크, 스테인레스 스틸 반응기 또는 유리선 반응기에서 이루어진다. 기계적 교반과 온도를 조절하기 위하여 기본 실험실 규모 또는 상업적 규모의 제조 장치가 결정화에 이용될 것이다.

두개의 다른 용매를 결정화계에 이용하는 경우, 극성이 강한 용매를 우선 AD에 첨가시키고 이어서 보다 적은 극성의 용매를 첨가시키는 것이 일반적이다. 선택적으로, 첫번째 결정화 용매를 첨가시킨 후 존재하는 용해되지 않은 성분은, 예컨대 여과 또는 원심 분리에 의해 용액으로부터 제거시킨다. 예를 들어, AD와 성분들을 함유한 유기 용매로부터 AD 합성 반응에 의해 결정형 1을 제조하기 위해 아세톤과 디-n-부틸 에테르를 이용한다면 일반적으로 아세톤을 먼저 첨가시킨다. 유사하게, 디-n-부틸 에테르를 첨가시키기 전에 n-부탄올을 첨가시키고, 디-n-프로필 에테르에 앞서 에틸 아세테이트를 첨가시킬 것이다. 첫번째 극성 용매를 함유한 용액은 존재하는 모노(POM) PMEA의 침전으로 탁해질 것이다. 그 후에 모노(POM) PMEA를 표준의 물리적 방법, 예컨대 여과 또는 원심 분리에 의해 제거시키고 디-n-부틸 에테르와 같은 두번째 용매를 첨가시킨다.

결정형 1을 제조하기 위해 일반적으로 이용하는 결정화 용매는 약 0.2% 이하 의 물을 함유한다. 결정화 용매에 약 1-2%의 상당한 양의 물이 존재할 경우, 결정화 공정에서 결정형 2의 양이 다양하게 생산되고 그것은 또한 결정형 1과 함꼐 회수된다. 결정화 반응에 존재하는 물의 양은 무수형 시약을 이용하거나 분자 여과기 또는 다른 알려진 건조 배합물에 의해 용매를 건조시킴으로써 선택적으로 편리하게 감소시킬 수 있다. AD를 함유한 유기 용액에 존재하는 물의 양은, 예컨대 부산물과 함께 상기 기술된 유기 기름과 같은 용매를 포함하는 AD 합성 반응으로부터, 결정화 용매를 첨가시키기 이전에 물을 감소시키는 이소프로필 아세테이트와 같은 공비 조-용매를 사용함으로써 감소시킨다.

구체예에서, 반응식 1의 단계 6에 표시된 결정형 1 AD의 결정화는 다음과 같이 기술된다. 상기의 AD를 함유한 옅은 기름을 아세톤(1.0kg)에 용해시키고 35±3℃로 가열시킨 뒤, 약 32-38℃의 온도에서 중간 정도의 교반을 유지하면서 약 4부의 디-n-부틸 에테르(5.00kg)를 이용하여 희석시킨다. 투명한 용액을 약 30-60분(90분을 넘지 않도록)에 걸쳐서 약 25-30℃까지 냉각시켜 소량의 결정형 1 AD(약 5g)를 얻은 뒤, 그 내용물을 중간 정도의 교반을 유지하면서 약 30-60분(90분을 넘지 않도록)에 걸쳐서 약 22±3℃까지 냉각시킨다. 혼합물에 이용하는 중간 정도의 교반은 최소 약 15시간 동안 22±3℃에서 지속된다. 생성된 슬러리는 여과되고 여과 덩어리는 미리 혼합된 디-n-부틸 에테르(2.4kg) 용매의 아세톤(0.27kg) 용액(1:9 v/v)으로 세척된다. 선택적으로, 젖은 고형물은 미리 혼합된 디-n-부틸 에테르(4.92kg) 용매의 아세톤(0.57kg) 용액을 첨가시켜 그 내용물을 약 22±3℃에서 약 15-24시간 동안 교반과 함께 지속시킴에 의해서 부가적으로 정제된다. 그리고 나서 고형물을 여과시킨 뒤 여과 덩어리를 미리 혼합된 아세톤(0.27kg)과 디-n-부틸 에테르(2.4kg)로 세척시킨다. 여과 덩어리는 ≤35℃(약 25-35℃)로 유지되며 진공에서 약 1-3일(0.5%를 넘지 않는 LOD)동안 건조되어 회백색 분말 고형물에서 백색의 결정형 1 AD를 얻는다. 건조된 생성물을 분쇄시킨다.

본 발명은 결정형 2의 제조 방법을 포함한다. 결정형 2는 결정형 1을 수화시킴에 의해 편리하게 제조되어진다. 수화에는 필수적인 양인 동시에 결정화를 방해하지 않을 정도의 물을 함유한 결정화 용매로부터 AD를 결정화 시킴에 의해 수화가 이루어진다. 그 물은 얼음, 액체 또는 수증기로 존재한다. 통상적으로 결정형 2를 형성하기 위한 조건 하에 결정형 1에 대한 물리적 접촉이 이루어진다. 선택적으로 결정형 1은 적어도 상대습도 약 75%의 공기, 카본 디옥사이드 또는 질소와 같은 기체상에서 수증기와 접촉하여 결정형 2로의 완전한 전환이 이루어진다. 결정형 1은 일반적으로 적어도 상대 습도 약 75%에서 약 1-10일 동안, 약 18-30°에서 또는 통상적으로 실온에서 공기와 접촉하여 결정형 2로의 완전한 전환을 얻는다. 그러나 결정형 1은 본질적으로 실온의 상대 습도 54%의 공기에서 비-흡습성을 가지며 13일의 노출 후에도 물의 함량은 증가하지 않는다.

결정형 1을 결정형 2로 수화시키는 방법은 결정형 1과 2 AD의 혼합물로 이루어진 조성물을 생산한다. 그 안에서 결정형 1 AD의 함량비는 결정형 2로 존재하는 AD와 균형을 이루면서 약 100% 내지 0%로 다양하다. 따라서 결정형 2의 비율은 전환 공정 동안 0%에서 100%까지 증가한다. 이러한 조성물은 알약형과 같은 배합물로 이루어질 것이다.

또한 상기 언급한 바와 같이 결정형 2는 물의 존재하에 AD 결정화를 수행함으로써 제조된다. 예컨대, 여기에서는 결정형 1 AD를 제조할 때와 다르게 약 2-5%의 물이 결정화 용매에 존재한다. 결정화는 본질적으로 결정형 1에서 기술한 바에 따라, 예컨대 약 4-36시간에 걸쳐서 약 0-23°에서 일어난다. 그러한 제조는 다소의 결정형 1을 포함할 수 있다. 그러나, 그러한 잔여분의 결정형 1은 임의로 상기 기술한 바와 같이 수증기에 노출시키거나 충분한 물을 결정화 용매에 첨가시킴에 의해서 결정형 2로 전환시킨다.

결정형 3은 일반적으로 AD의 무수 메탄올 용액에서 결정을 발생시킴으로써 제조된다. 메탄올에서 충분한 비결정형 또는 결정형 AD를 약 10-15분 동안 실온에서 혼합시킴에 의해서 AD를 얻거나 필요에 따라 고형물 AD를 용해시켜 적어도 약 100-150mg AD/mL 메탄올 용액을 얻는다. 실온의 경우 메탄올에 대한 AD의 용해도는 600mg/mL 이상이다. 그리고 나서 약 4 내지 48시간 동안 약 -5° 내지 약 25°의 온도에서, 일반적으로 약 0-23°에서 결정화가 이루어진다.

통상적으로, 단일 결정화 용매로서 이소프로필 아세테이트를 이용하여 얻은 결정은 대체로 그 길이가 긴, 예컨대 약 500㎛ 이상의 길이를 가지는 막대형이며 또한 얼마간의 바늘 형태도 존재한다. 도 8은 약 15°이상의 온도로 이소프로필 아세테이트에서 결정화된 길이 약 20-500㎛의 막대-형 결정을 나타낸 것이다.

과포화 및 포화 또는 다소 불포화된 AD 용액으로부터 결정화를 진행시키는 것은 선택적으로 그 용액에 AD의 씨 결정을 첨가시킴에 의해 촉진 또는 향상시킬 수 있으나, 씨 결정체가 필수적인 것은 아니다. 예를 들어, 상기 언급한 대로 유기 용액, 예컨대 결정화 용매가 첨가된 유기 기름에 소량의 결정형 1 AD를 첨가시킴으로써 35°까지 가열시키지 않고 결정형 1 AD를 얻을 수 있다. 씨 결정은 결정형 1의 형성을 촉진시킨다. 결정형 2와 결정형 3은 개개의 결정형을 가진 적절한 용액을 씨딩함으로써 얻어진다. 예컨대, 결정형 2는 에틸 아세테이트와 약 2%의 물을 함유한 유기 용액이 적절하고 무수 메탄올 용매의 AD 포화 용액은 결정형 3에 적절하다. 씨딩을 위해 사용되는 결정의 양은 최적의 결과를 얻기 위해 임의로 다양할 수 있다. 일반적으로 AD 재결정 용액 L당 약 0.1-1.0g의 결정으로 충분하다.

요구에 따라, 예컨대 결정의 순도를 높이기 위해 결정 AD의 재결정화가 가능하다.

예를 들어, 상기 기술한 결정형 1의 제조 방법과 본질적으로 동일한 방법에 의해 결정형 1 AD를 재결정화시킨다. 예를 들어, 약 20-35°에서 결정 AD를 약 0.2-0.4g/mL로 아세톤에 용해시키고, 용액을 여과 또는 원심분리시켜 용해되지 않은 성분을 제거시킨 뒤, 일반적으로 탁해진 생성물을 얻는 방법을 따르는 아세톤과 디-n-부틸 에테르를 이용한 재결정화가 이루어진다. 용해되지 않은 성분은 통상적으로 모노(POM) PMEA 이다. 그리고 나서 그 용액을 약 35-40°까지 가온시키고, 재결정화 초기에 이용된 결정의 0.2-0.4g 당 가온된(약 35-40°) 디-n-부틸 에테르 약 5.2-6.2mL(일반적으로 약 5.7mL)를 첨가시킨다. 재결정화 혼합물은 약 4-4.5시간에 걸쳐서 실온으로 냉각된다. 재결정화 혼합물은 상대적으로 적은 부피, 예컨대 1-3L가 사용된 경우, 보다 급속하게 실온까지 냉각될 것이다. 혼합물의 냉각 시간은 고정된 값이 아니고 다양할 수 있다.

일반적으로 재결정화는 디-n-부틸 에테르가 첨가되어 혼합이 완전히 이루어진 직후에 시작되며 약 4-36시간 동안, 일반적으로 6-24시간 동안 진행된다. 약 4-36시간 동안 실온의 재결정으로부터 부가적으로 생산되는 결정은 재결정 혼합물을 약 4-10°로 냉각시키고 감소된 온도에서 약 1-6시간 혼합물을 유지시킴으로써 얻을 수 있다. 일반적으로 재결정에 이용하는 AD의 양은 포화 혹은 거의 포화된 용액을 형성하기에, 예컨대 아세톤을 사용하여 약 0.4g/mL로 충분할 것이다. 아세톤에 AD를 용해시키는 것은 중간 정도의 교반을 이용하여 약 2-8분으로 완전히 이루어진다. 초기의 혼합 시기 이후에 용해되지 않고 남아 있는 물질을 제거시키고, 짝을 이루는 용매 중 극성을 덜 갖는 두번째 용매를 첫번째 결정화 용매를 포함하는 혼합물에 첨가시킨다.

임의로 아세톤과 같은 단일 용매를 이용하여 결정형 1을 재결정화시킬 수 있다. 구체예에서, 충분한 결정을 실온에서 용매에 용해시키고 용해되지 않은 성분을 제거시킴으로써 포화된 또는 거의 포화된 용액을 얻을 수 있다. 그리고 나서 그 혼합물을 35°로 가온시키고, 아세톤과 디-n-부틸 에테르 용매의 쌍을 이용하여 재결정화를 위해 기술한 대로 냉각시킨다.

결정형 2의 재결정은 결정형 1의 재결정화를 위해 기술한 바에 따라 진행될 것이나 재결졍화 용매에 용해되어 있는 결정형 2를 사용한다. 결정형 1을 결정형 2로 전환시키기 위해 본 명세서에서 기술한 대로, 재결정화로 얻은 결정형 1을 선택적으로 결정형 2로 전환시킨다. 또한 결정형 2의 결정형 1로의 재결정화가 수행된다. 이 경우에, 분자 여과기 또는 다른 용매 건조 빙법이 선택적으로 이용되어 결 정형 2를 첫번째 용매에 용해시킨 후 및 재결정화 방법이 진행되는 동안 존재하는 물의 양을 제한한다. 또한 약 1-2%의 물을 함유한 용매를 이용하여 결정형 2를 재결정화 시키면 직접적으로 결정형 2를 얻을 수 있다.

결정형 3을 제조하기 위해 상기 기술된 동일한 방법에 의해 메탄올에서 결정형 3의 재결정화를 진행한다. 결정을 제조하기 위해 포화된 또는 거의 포화된 메탄올 용액, 예컨대 적어도 약 0.6g/mL AD를 이용된다.

특정 유기산 및 무기산을 첨가함으로써 AD의 아데노신에 있는 염기성 중심과 필요에 따라 염을 제조한다. 일반적으로 표준적인 방법, 즉 선택된 산 또는 산의 반대 이온을 함유하는 수용액, 수-알코올 용액 또는 수-유기 용액에 AD 유리 염기(free base)를 용해시키고, 선택적으로 결정화를 수행하고 임의로 증류, 교반 또는 용액을 냉각시킴에 의해 산의 염을 제조한다. 일반적으로 산 또는 반대 이온을 함유한 유기 용액에서 유리 염기를 반응시킨다. 이러한 경우 대체로 염이 바로 분리되거나 또는 염의 침전을 촉진시키기 위해 결정 또는 용액의 농축물로 용액을 씨드할 수 있다. 구체예는 AD, 용매, 일반적으로 결정화 용매 및 C₆ _-16 아릴 술폰산, C₄ _-16헤테로아릴 술폰산 또는 C₁ _- ₁₆알킬 술폰산과 같은 술폰산으로 이루어진 용액을 포함한다. 또한 구체예는 AD, 용매, 일반적으로 결정화 용매 및 트리카르복실산, 디카르복실산 또는 모노카르복실산과 같이 탄소 원자 약 1-12개로 구성된 카르복실산으로 이루어진 용액을 포함한다.

약리적 배합 및 투여 경로

결정형 AD, 통상적으로 결정형 1(이후에 활성 성분으로 간주된다)을 함유한 본 발명의 조성물은 처방되는 조건에 따라 적절한 경로를 통해 투여된다. 적절한 경로라는 것은 경구, 직장, 코, 국소의(눈, 입 및 혀 밑), 질의 및 비경구적(피하, 근육, 정맥 내, 피부 내, 피내의, 척수강내의 및 경막의) 경로를 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 조성물은 경구적으로 투여되나 결정형 AD를 함유하는 조성물은 상기 언급된 어떠한 다른 경로를 통해서도 투여될 수 있다.

AD가 순수한 화합물로서 투여되는 것이 가능한 반면, 약리적 배합물로 존재하는 것이 보다 바람직하다. 본 발명의 배합물은 한 가지 이상의 허용 가능한 부형제 또는 담체("허용 가능한 부형제") 및 선택적으로 다른 치료용 성분과 함께 AD를 함유할 수 있다. 부형제(들)는 배합물내의 다른 성분과 상충됨 없이 양립할 수 있고 환자에게 유독하지 않다는 의미에서 "허용 가능" 해야 한다.

그 배합물은 경구, 직장, 코, 입, 혀 밑, 질의 및 비경구적(피하, 근육, 정맥 내, 피부 내, 피내의, 척수강내의 및 경막의) 투여를 포함하여 국소적 또는 전신적으로 투여하기 적절하다. 그 배합물은 투여형 단위를 가지며 제약의 기술 분야에 잘 알려진 방법에 의해 제조된다. 그 방법은 한 가지 이상의 부속 성분으로 구성된 담체 혹은 부형제를 활성 성분과 결합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로 액상 담체이거나 미세하게 나누어진 고형 담체 또는 두가지 모두를 활성 성분과 일률적으로 및 깊이 결합시킨 뒤 필요에 따라 그 생성물을 건조 또는 형태화 시킴에 의해서 배합물을 제조한다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 배합물은 선결된 양의 활성 성분을 함유한 향 분, 캡슐 또는 알약과 같은 개개의 형태를 가진다; 분말 또는 과립형; 수성 액체 또는 비-수성 액체의 용액 또는 현탁액; 오일-인-워터 타입 또는 워터-인-오일 타입의 액체 에멀젼으로 존재한다. 활성 성분은 또한 큰 환약, 저제 또는 연고로서 존재한다.

본 발명의 배합물은 AD와 허용 가능한 부형제로 이루어진 조성물을 포함한다. 그러한 부형제는 결합제, 희석제, 붕해제, 방부제, 확산제, 활택제(항점착제) 및 윤활제를 포함한다. 그러한 조성물은 선택적으로 알약 및 캡슐과 같은 투여형 단위이다. 그러한 조성물은 약 5-250mg, 일반적으로 약 5-150mg의 AD를 함유하는 알약으로 이루어져 있으며 그 알약은 알약 당 약 60mg 내지 120mg의 AD를 포함한다. 임의로 그러한 알약은 약 1-10%의 결합제, 약 0.5-10%의 붕해제, 약 50-60%의 희석제 또는 약 0.25-5%의 윤활제로 이루어진다. 또한 그러한 조성물은 액체, 예컨대 물, AD 및 결합제, 희석제, 확산제 및 붕해제로 구성되는 군에서 선택된 한 가지 이상의 허용 가능한 부형제를 함유하는 젖은 과립으로 구성된다.

알약은 선택적으로 한 가지 이상의 부속 성분 또는 부형제를 포함하며 압착 또는 주조에 의해 만들어진다. 알약은 통상적으로 알약당 약 5-250mg, 일반적으로 약 30-120mg의 결정형 AD를 함유하고, 주로 결정형 1 AD, 예컨대 결정형 1 AD의 경우 알약당 약 60mg 또는 알약당 120mg를 함유한다. 여기에서 결정형 2, 다른 결정 타입 또는 비결정형 AD의 제한된 양은 일반적으로 단지 약 20% 미만이다.

결합제, 붕해제, 윤활제, 비활성 희석제, 방부제, 표면 활성제 또는 확산제와 임의로 혼합시킨 분말 또는 과립과 같은 자유-유동 형태의 AD를 적절한 기계에 의해 압착시킴으로서 압착된 알약이 제조된다. 액체 희석제로 습기를 준 분말 화합물의 혼합물을 적절한 기계에 의해 주조시킴으로써 주조된 알약이 만들어진다. 알약에 선택적으로 코팅 및 주형, 양각 또는 선을 만들고, 활성 성분의 방출이 천천히 이루어지거나 조절이 가능하도록 배합시킨다. 구체예는 결정형 AD, 통상적으로 결정형 1 또는 결정형 2 및, 예컨대 락토스, 미리 젤라틴화된 전분, 크로스카멜로스 소디움, 탤크 및 마그네슘 스테아레이트를 함유하는 건조된 젖은 과립과 같은 허용 가능한 부형제를 포함하는 혼합물을 압착시키는 방법에 의해 생산되는 생성물을 포함한다.

결정형 AD 및 부형제(들)를 포함하는 배합물은 또한 L-카르니틴 또는 L-카르니틴 염, 예컨대 L-카르니틴-L-타트레이트(2:1)를 함유한다. 생체 내에서 AD의 피발로일옥시메틸 부분으로부터 피발르산의 방출은 환자에 있어 L-카르니틴의 수준을 낮추는 것으로 나타난다. L-카르니틴-L-타트레이트와 AD를 함유하는 알약은 AD를 섭취한 환자에 있어서 L-카르니틴을 감소시키는 피발르산의 효과를 감소시킨다. 포함시키는 L-카르니틴의 양은 환자에 있어서 그 감소 한도에 따라 임상의학자에게 명백해질 것이다.

알약 또는 관련된 투여 형태에 있어서 통상적인 배합물 성분은 한가지 이상의 결합제, 희석제, 붕해제 또는 윤활제를 포함한다. 이러한 부형제들은 배합물 안정성을 증가시키고 제조 중의 알약의 압착을 촉진시키며 섭취 후 배합물의 붕해를 돕는다. 통상적으로 알약은 혼합물 상의 AD와 함께 한가지 이상의 부형제를 습윤 과립화시키고 그 과립을 습윤 분쇄한 뒤 약 3%이하로 건조시킴으로써 만들어진다. 공정을 촉진시키는 결합제, 예컨대 미리 젤라틴화된 전분 또는 포비돈은 선택적으로 약 1-10% 수준으로 존재한다. 미세결정형 셀룰로스 또는 크로스카멜로스 소디움과 같은 교차연결된 셀룰로스를 예롤 들 수 있는 붕해제는 알약의 용해를 촉진시키기 위한 것으로 약 0.5-5% 수준으로 존재한다. 단당류 또는 이당류와 같은 희석제는 AD의 물리적 특성을 가리거나 알약의 용해를 촉진시키기 위한 용도로 약 40-60% 수준으로 존재한다. 마그네슘 스테아레이트, 탤크 또는 실리콘 디옥사이드와 같은 윤활제는 공정을 통해 알약의 배출을 촉진시키기 위해 약 0.25-10% 수준으로 존재한다. 알약은 임의로 라이신 또는 젤라틴과 같은 포착제를 함유하여 AD의 저장소에서 방출될 수 있는 포름알데히드를 가둘 수 있다. 부형제는 예컨대, 전공 논문 "미리 젤라틴화된 전분", 약리적 부형제의 편람, 2판, American Pharmaceutical Assocition, 1994, pp:491-493; 전공 논문 "크로스카멜로스 소디움", 약리적 부형제의 편람, 2판, American Pharmaceutical Assocition, 1994, pp:141-142; 전공 논문 "락토스 모노히드레이트", 약리적 부형제의 편람, 2판, American Pharmaceutical Assocition, 1994, pp:252-261; 전공 논문 "탤크", 약리적 부형제의 편람, 2판, American Pharmaceutical Assocition, 1994, pp:519-521; 전공 논문 "마그네슘 스테아레이트", 약리적 부형제의 편람, 2판, American Pharmaceutical Assocition, 1994, pp:280-282에 기술되어 있다.

결정형 1 AD 배합물을 담기 위한 통상적인 용기의 경우, 용기 안에 존재하는 물의 양을 제한한다. 전형적으로 배합물 또는 투약 단위에는 실리카겔 또는 활성탄 또는 그 둘 모두와 같은 건조제가 함께 들어 있으며 대개 용기는 유도 봉합되어 있 다. 주위 온도에서 AD를 함유하는 알약제의 경우 실리카겔만으로 충분한 건조제의 역할을 한다. AD는 분자당 2부의 피발로일옥시메틸을 함유한다. 그러므로 1부 이상의 피발로일옥시메틸을 함유하는 약리적 배합물과 같은 화합물의 경우 단일 건조제로서 실리카겔이 적절하다. 용기의 물 투과성은, 예컨대 용기-투과, Chapter, USP 23, United States Pharmacopeial Convention, Inc., 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852, pp:1787(1995)에 기술되어 있다.

눈 또는 다른 외부 조직, 예컨대 입 및 피부의 감염에 대하여, 0.01 내지 10%(0.6% w/w, 0.7% w/w 등과 같이 0.1% w/w의 증가를 갖는 0.1% 내지 5% 범위의 활성 성분을 함유한다), 바람직하게는 0.2% 내지 3% 및 가장 바람직하게는 0.5% 내지 2% w/w의 양으로 활성 성분을 함유하는 국소적 연고 또는 크림의 형태로 본 발명의 배합물을 적용시키는 것이 바람직하다. 연고로 배합시켰을 때, 활성 성분은 파라핀 또는 물과 섞일 수 있는 연고 베이스와 함께 이용된다. 선택적으로 활성 성분은 오일-인-워터 크림 베이스를 이용하여 크림으로 배합시킬 수 있다.

필요하다면 크림 베이스의 수성상이 다중 수화 알코올, 즉 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-디올, 만니톨, 솔비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 400을 포함하는) 그리고 그들의 혼합물과 같은 두가지 이상의 수산기를 갖는 알코올을, 예를 들어 적어도 30% w/w 이상 함유할 수 있다. 국소적 배합물은 피부 또는 다른 영향 부위에 대하여 활성 성분이 흡수되거나 스며드는 것을 향상시키는 화합물을 포함하는 것이 바람직하다. 피부에 대한 그러한 흡수 향상제의 예로는 디메틸 설폭사이드 및 관련 동족체를 들 수 있다.

본 발명의 에멀젼에 포함된 기름상은 당해 분야에 이미 알려진 성분들로 구성된다. 그 상은 단순히 유화제(에멀젼트로서 알려진 것과 다른)만을 함유할 수 있는 반면 지방 또는 기름, 또는 지방과 기름 모두를 갖는 적어도 한가지 이상의 유화제 혼합물로 구성되는 것이 바람직하다. 바람직하게는 친수성 유화제와 안정제의 역할을 하는 친유성 유화제가 함께 포함된다. 또는 기름과 지방 모두를 포함하는 것이 바람직하다. 동시에, 안정제(들)를 가진 또는 가지지 않은 유화제가 유화형 왁스를 구성하고 그 왁스는 기름 및 지방과 함께 크림 배합물의 기름진 확산 상을 형성하는 유화형 베이스를 구성한다.

본 발명의 배합물에 사용하기 적합한 에멀젼트와 에멀젼 안정제는 트윈(Tween) 60, 스판(Span) 80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 소디움 리우릴 설페이트를 들 수 있다.

본 발명의 배합물을 위한 적합한 기름 또는 지방의 선택은 바람직한 화장품 특성을 얻기 위한 기본이 된다. 그러므로 그 크림은 번들거림이 없고, 얼룩지지 않으며 세척이 가능한 생성물로 튜브 또는 용기에서 누수되는 것을 방지할 정도의 적절한 점도를 갖는 것이 바람직하다. 직쇄 또는 측쇄 고리, 디이소아디페이트, 이소세틸 스테아레이트, 코코넛 지방산의 프로필렌 글리콜 디에스테르, 이소프로필 미리스테이트, 데실 올레이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트 또는 크로다몰(Crodamol) CAP로 알려진 측쇄 고리 에스테르의 혼합과 같은 모노- 또는 2염기의 알킬 에스테르가 사용될 수 있으며 마지막 세개의 에스테르가 특히 바람직하다. 이들은 요구되는 특성에 따라 단독 또는 조합으로 사용 될 수 있다. 선택적으로 백색의 부드러운 파라핀 및/또는 액상 파라핀과 같은 높은 융점의 지방질 또는 다른 미네랄 기름을 이용할 수 있다.

눈에 국소적으로 투여하기에 적합한 배합물은 또한 적절한 담체, 특별히 활성 성분을 위한 수성 용매에 활성 성분이 용해 또는 현탁되어 있는 안약(eye drops)을 들 수 있다. 활성 성분은 그러한 배합물내에 0.01내지 20%의 농도, 몇몇 구체예에서 0.1 내지 10%의 농도, 및 다른 예에서 약 1.0% w/w 농도로 존재하는 것이 적합하다.

입에 국소적으로 투여하기에 적합한 배합물로는 풍미를 낸 기반, 일반적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸드내에 활성 성분을 함유하는 구중정(lozenges); 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 불활성 기반내에 활성 성분을 함유하는 향정(pastilles); 및 적절한 액체 담체 내에 활성 성분을 포함하고 있는 마우스워시를 들 수 있다.

직장 투여를 위한 배합물로는 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트로 구성된 적절한 기반을 갖는 좌약을 들 수 있다.

코 또는 흡입제용 투여를 위해 적절한 배힙믈(담체는 고형물이다)은 입자의 크기가, 예를 들어 1내지 500마이크론 범위(30마이크론, 35마이크론 등과 같이 5마이크론의 증가를 갖는 20 내지 500 마이크론 범위의 입자 크기를 포함한다)에 있는 분말을 들 수 있다. 담체가 액체이며, 예를 들어 코 스프레이 또는 코 드롭스로서 투여되는 적절한 배합물은 활성 성분의 수성 또는 지성 용액을 포함한다. 에어로졸 투여에 적합한 배합물은 종래 기술에 따라 제조될 수 있고 다른 치료용 배합물과 함께 운반된다. 흡입제용 치료는 미터드 복용량 흡입기에 의해 쉽게 이루어진다.

질의 투여를 위해 적합한 배합물은 활성 성분 이외에 당해 기술 분야에 적합하다고 알려진 담체를 함유하는 페서리, 탬폰, 크림, 젤, 연고 또는 스프레이 배합물을 들 수 있다.

비경구적 투여를 위해 적합한 배합물은 무균이며 항-산화제, 완충 용액, 정균제 및 배합물에 의도된 수용체의 혈액을 갖는 등장성을 부여하는 용질; 및 현탁제와 농축제를 포함하는 수성 및 비-수성 무균의 현탁액을 함유하는 수성 및 비-수성 삽입 용액을 포함한다. 배합물은 단위-용량 또는 다중-용량의 용기, 예를 들어 탄성 중합체의 스토퍼를 갖는 밀봉된 앰풀 및 바이알에 존재하고, 냉동-건조되어(얼림 건조된, lyophilized) 사용 직전에 단지 무균의 액체 담체, 예를 들어 삽입을 위한 물의 첨가만을 허용하면서 저장된다. 임기 삽입 용액과 현탁액은 상기 기술한 종류의 무균의 분말, 과립 및 알약으로부터 제조된다. 바람직한 단위 투약량의 배합물은 상기 열거한 대로, 그 안에 활성 성분의 매일의 복용량 또는 매일 단위의 부-복용량 또는 그들의 적절한 비율을 포함하고 있다.

본 발명의 배합물에서 상기 언급한 특별한 성분 이외에, 목적이 되는 배합물의 타입에 따라 해당 분야에서 편리하게 다른 시료를 첨가할 수 있다. 예를 들어, 경구 투여에 적합한 것으로 풍미제를 들 수 있다.

부가적으로 본 발명은 수의학용 담체와 함께 상기 정의된 한가지 이상의 활성 성분을 함유하는 수의용 조성물을 생산한다.

수의학용 담체는 고양이, 개, 말, 토끼 및 다른 동물들에게 조성물을 투여하 는 목적에 적합하며, 비활성 물질이거나 수의 분야에서 허용 가능하고 활성 성분과 상충됨 없이 조화될 수 있는 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 이러한 수의용 조성물은 경구적, 비경구적 또는 다른 바람직한 경로에 의해 투여된다.

본 발명의 화합물은 기질 또는 흡수 물질 그리고 본 발명의 한가지 이상의 화합물을 활성 성분으로 함유하는 약리적 배합물의 방출을 조절하기 위하여 이용될 수 있다. 여기에서 활성 성분의 방출은 복용의 빈발도를 낮추거나 화합물의 약물 동태 또는 유독성 프로파일을 향상시킴으로써 조절 및 제어할 수 있다. 본 발명의 화합물을 한가지 이상 함유하며 불연속성 단위를 갖는 경구 투여에 이용하기 위해 적용되는 방출이 조절되는 배합물은 이미 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다.

여기에 언급된 모든 참고 문헌들은 특정 참고 문헌을 통해 구체적으로 표현되어 있다.

[실시예]

다음 실시예들은 구체적으로 그 예를 들기 위한 것이며, 본 발명을 이에 제한하는 것은 아니다.

실시예 1. 결정형 1의 제조

마그네틱 교반 막대를 넣은 500mL의 단일-목 둥근 바닥 플라스크에 PMEA(27.3g, 100mmol)을 첨가하였다. 여기에, 질소하에 N-메틸피롤리디논(109.3mL)과 트리에틸아민(50.6g, 69.8mL, 500mmol)을 첨가시키고 그 현탁액을 급격히 교반시켰다. 클로메틸 피발레이트(75.2g, 72.0mL, 500mmol)를 첨가시키고 교반시킨 현탁액을 45°기름 용기에서 18.5시간 동안 방치하였다. 그 결과 생성된 걸죽한, 밝 은 노란색의 현탁액을 이소프로필 아세테이트(1.0L)를 이용하여 희석시키고 1시간 동안 교반시켰다. 여과("C" 유리 원료로 된 Kimax 유리 깔때기)에 의해 고형물을 제거시키고 약간의 이소프로필 아세테이트(250mL)를 이용하여 세척하였다. 세척은 여과와 함께 물(200mL x 2)에 의한 유기상 추출을 혼합시켜 이룰 수 있다. 수성 추출은 이소프로필 아세테이트(250mL x 2)에 의한 역-추출과 혼합하여 이루어진다. 모든 유기 상들이 혼합되었고, 1975mL로 측정되었다. 이소프로필 아세테이트를 첨가시켜 유기상의 총 부피는 2.0L로 증가하였다. 이 실험의 내부적인 조절을 위해 유기 상을 동량 즉, 1.0L씩 나누었다. 한 부분은 염수와 소디움 설페이트 처리로 워크업을 실시한 반면 다른 부분은 이러한 단계 없이(후술함) 처리되었다.

새로운 공정을 위해 1.0L 유기상 시료를 표준(뷔키) 회전식 증류기를 이용하여 직접 기름으로 농축시켰다. 공정 전반에서 용기의 온도는 45°, 진공은 50-70mm를 적용시켰다. 기름의 중량은 32.4g이었고, 그 기름은 완전히 투명하여 육안으로 확인되는 염이 존재하지 않았다. 그 기름을 아세톤(25mL)으로 희석시킨 결과 침전 염이 존재하지 않는 완전하게 투명한 용액이 생성되었다. 실온에서 약 3시간 동안 방치시킨 뒤에도 용액은 여전히 완전히 투명하였다. 이 용액을 45°로 조절된 기름 용기에 놓고 내부 온도를 약 40℃로 유지시키면서 디-n-부틸 에테르(140mL)를 천천히 첨가시켰다. 그리고 나서 기름 용기로부터 플라스크를 꺼내 실온까지 냉각시키고 실온에서 약 16시간 동안 교반시킨 결과 결정형 1 AD의 침전을 얻었다. 고형 생성물은 여과("M" 유리 원료로 된 Kimax 유리 깔때기)에 의해 수집된다. 고형물을 90% 디-n-부틸 에테르 용액(v/v)(40mL)에서 10% 아세톤을 이용하여 세척하고, 진공 오븐에서 12시간 동안(주위 온도, 질소 블리이드, 28" 진공) 건조시킨다. 백색 고형물 12.2g(50mmol 반응을 기준으로 하여 이론치의 48.8%에 해당)이 생산되었고 대외적인 기준에 대비하여 순도 99.8%의 AD로 감정(HPLC)되었다.

나머지 1.0L의 유기상은 상기 결과를 위한 컨트롤로 이용되었고 다음과 같이 워크업되었다. 유기상을 염수(25mL)로 세척시키고 소디움 설페이트(25g, 12시간의 건조 시간)를 통해 건조시킨 뒤 상기 기술한 대로 농축시켰다. 그 결과 27.4g의 기름이 생성되었고 그 기름은 상기 기술한 대로 아세톤(25mL)과 부틸 에테르(135mL)로부터 결정화되었다. 고형물은 상기와 동일하게 여과에 의해 수집되고 건조되어 12.3g(이론 수율의 48.9%)의 백색 고형물을 생산하였고 대외적인 기준에 대비하여 순도 98.7%의 AD로 감정(HPLC)되었다.

실시예 2. 결정형 1의 제조

30 갤런 유리-선의 스틸 반응 용기(Pfaudler, Rochester, NY, 모델 No. P20-30-150-115)를 이용하여 실온에서 9.7kg의 NMP를 3kg의 PMEA에 첨가시켰다. NMP를 첨가시킨 혼합물을 중간 정도로 교반시켰다. 중간 정도의 교반으로 현탁액 내에 PMEA 고형물을 유지시키고 반응 내용물이 벽에 튀는 것을 충분히 방지할 수 있다. 그리고 나서 5.6kg의 TEA를 첨가시키고 뒤이어 8.3kg의 클로로메틸 피발레이트를 첨가시켰다. 반응기내로 물질 주입시 이용되는 수송선에 남아있는 물질을 세척하기 위하여 부가적으로 2.7kg의 NMP를 첨가시켰다. 온도는 약 48°로 조절되고 그 온도는 18시간 동안 중간 정도의 교반과 함께 38-48°사이로 유지시켰다. 반응이 완전히 이루어진 뒤, 실온에서 48kg의 이소프로필 아세테이트를 반응기에 첨가시키고, 고형물 제거를 위한 여과(Tyvek™ 여과기, 15.5" 지름, Kavon Filter Prodeucts, Wall, NJ, model No. 1058-D) 이전에 그 혼합물을 중간 정도의 교반하에 1시간동안 43-48°로 유지시켰다. 30갤런 용기는 12kg의 부가적인 이소프로필 아세테이트를 이용한 여과를 통해 세척되었다. 여과물은 43-48°의 온도를 유지하면서 50 갤런 유리-선의 스틸 반응 용기(Pfaudler, 모델 No. P24-50-150-105)로 옮겨진다. 그 온도는 다음에 이어지는 단계에서 주위 온도까지 떨어진다.

혼합물을 22kg의 물을 이용하여 격렬한 교반에 의해 약 1.5-2분 동안 세척시켰다. 교반이 중지되고 상은 완전히 분리된다(약 10분). 밑에 있는 수성상(약 26L)을 30 갤런 유리-선의 스틸 반응 용기로 옮겼다. 또 다른 22kg의 물을 50 갤런 유리-선의 스틸 반응 용기에 남아있는 유기상에 첨가하여 약 1.5-2분 동안 격럴하게 교반시켰다. 교반이 중지되고 상은 완전히 분리된다(약 1시간 40분). 밑에 있는 수성상을 30 갤런 유리-선의 스틸 반응 용기로 옮겼다. 이제 반응 용기에는 두개의 수성 세척액이 모두 담겨 있다. 24kg의 이소프로필 아세테이트를 30 갤런 반응기에 담겨 있는 수성 세척액에 첨가시키고 그 상을 약 1.5-2분 동안 격렬하게 교반시켰다. 충분한 시간 뒤에 교반을 중지시킨 결과 완전한 상 분리(약 10분)를 얻었다. 위에 있는 유기상을 건져 내어 50 갤런 반응기에 담겨 있는 앞서 분리된 유기상과 혼합시켰다. 24kg의 이소프로필 아세테이트를 30 갤런 반응기에 담겨 있는 수성 세척액에 첨가시키고 그 상을 약 1.5-2분 동안 격렬하게 교반시켰다. 충분한 시간 뒤에 교반을 중지시킨 결과 완전한 상 분리(약 20분)를 얻었다. 위에 있는 유기상을 건져 내어 50 갤런 반응기에 담겨 있는 앞서 분리된 유기상과 혼합시켰다. 그리고 나서 혼합된 유기상을 염수 용액(7kg 물, 3.9kg NaCl)을 이용하여 격렬한 교반과 함께 약 1.5-2분 동안 세척하였다. 교반을 중지시켰을 때 완전한 상 분리가 일어났다(약 5분). 염수 상은 버려진다. 반응기에 18kg의 소디움 설페이트를 첨가시켜 그 혼합물을 약 1.5-2분 동안 격렬하게 교반시킨 뒤 1시간 동안 방치시켰다. 유기상의 중량은 이 시기에 98.5kg이었다.

반응기의 내용물을 부드럽게 교반시키고 주머니 여과기(American Felt and Filter Co., 모델 No. RM C S/D 122)를 통해 여과시킨다. AD를 함유한 유기 용액이 깨끗한 50 갤런 반응기로 옮겨지고, 농축물 50-55L가 수집될 때까지 휘발성 유기물을 33-41℃, 진공 26-30"Hg에서 진공 증류에 의해 제거시켰다. 50 갤런 반응기의 유기상은 카트리지를 감싼 면사를 포함하고 있는 카트리지 여과기(Memtec America, Corp., 모델 No. 910044)를 이용한 진공 여과를 통해 깨끗한 30 갤런 반응기로 옮겨지고 8.6kg의 이소프로필 아세테이트로 세척되었다. 그 용액은 하룻밤 동안 5°로 유지된 뒤, 진공하에 26-41°에서 3시간 동안 농축되어 약 7-9L의 기름을 생산하였다. 그 기름에 5.4kg의 아세톤을 첨가시켜 투명한 용액을 얻었다. 이후에 용액을 교반시키고 43℃까지 가온시켜 실온의 27kg 디-n-부틸 에테르를 약 4분에 걸쳐 첨가시켰다. 용액의 온도는 다시 43℃까지 가온시켰다. 부가의 15kg 디-n-부틸 에테르를 4분에 걸쳐 첨가시키고 온도를 43-44℃로 회복시켰다. 약 7시간 15분에 걸쳐서 온도를 20℃로 떨어뜨리는 동안 반응기 안에 AD 결정이 형성된다. 결정은 여과(Nutche 여과기)에 의해 회수되고 건조된다. 2.40kg의 AD가 얻어졌다(45.1%).

실시예 3. 결정형 1의 제조

12L용 3-목 둥근 바닥 플라스크에 546.3g의 PMEA(2몰)를 넣고 실온에서 NMP 2.18L를 첨가시켰다. 천천히 기계적 교반(내용물이 플라스크에 튀지 않고 현탁되어 있는 고형 PMEA가 유지되기에 충분한)이 시작되어 PMEA를 현탁시킨 뒤, 1.39L의 TEA를 플라스크에 첨가시키고 뒤이어 1.44L의 피발로일옥시메틸 클로라이드를 첨가시켰다. 그리고 나서 질소를 이용하여 플라스크를 깨끗이 한 뒤, 30-45분에 걸쳐서 60℃까지 반응물을 가열하였다. 부드러운 교반은 60°에서 반응과 함꼐 2-2.5시간 동안 유지되었다. 반응이 완전히 이루어진 것은 HPLC에 의해 측정된다. 반응은 AD의 수율이 영역 표준화에 의해 65-68%에 도달했을 때, 플라스크에 7.48L의 차가운(0-3°) 이소프로필 아세테이트를 첨가시킴에 의해 종료된다. 교반은 중간 정도의 교반(중간 정도의 소용돌이이나 내용물이 튀지 않음)으로 강해지고 고형물(예컨대, TEA·HCl, 모노(POM)PMEA)이 용액으로부터 침전되는 동안 혼합물을 실온에서 30분 동안 중간 정도의 교반하에 유지시켰다.

반응 혼합물을 유리-소결 깔때기(40-60㎛)를 이용하여 여과시키고 여과 덩어리는 실온에서 2.51L의 이소프로필 아세테이트로 세척하였다.

그리고 나서 여과물을 2.0L의 식수용 물로 실온에서 두번 추출하였다. 혼합된 수성 상들을 2.51L의 이소프로필 아세테에트(실온)를 이용하여 두번 역추출하였다. 모든 유기 상들을 혼합시켜 985L의 식수용 물로 한번 추출하였다. 유기상을 분리하여 35-39°의 온도, 약 30mm Hg의 진공에서 약 1-2시간 동안 진공으로 농축시켜 1.24kg의 노란색 기름을 얻었다.

그 기름을 12L용 3-목 플라스크로 옮기고 약 30분에 걸쳐 실온까지 냉각시켰 다. 실온의 아세톤 628mL를 플라스크에 담은 뒤 3.14L의 디-n-부틸 에테르를 첨가시켰다. 천천히 교반이 시작되고 용액은 약 5-20분에 걸쳐 35°까지 가열되었다. 온도가 35°에 이르면, 가열이 중단되고 더 이상의 온도 증가는 일어나지 않는다. 그 용액을 약 30분에 걸쳐 30°(20-29°)이하로 냉각시켰다. 냉각이 진행되는 동안 천천히 교반이 지속되면서 결정화 혼합물에서 결정형 1이 형성되었다. 이후 실온에서 14-20시간 동안 천천히 교반이 유지되었다. 결정을 여과(Tyvek™ 여과기)시키고 여과 덩어리를 10% 아세톤 2L, 90% 디-n-부틸 에테르(v/v) 용액으로 세척하였다. 그 덩어리를 일정한 중량이 얻어질때까지(약 2일) 질소 블리이드를 갖는 건조 오븐에서 실온으로 건조시켰다.

얻어진 결정형 1 AD의 수율은 PMEA로부터 얻어지는 이론치의 50-54% 정도이고 순도는 영역 표준화에 의해 HPLC로 측정한 결과 97-98.5%였다.

실시예 4. 결정형 1의 제조

3L용 3-목 둥근 바닥 플라스크에 273.14g의 PMEA(1몰)를 넣고 실온에서 NMP 1.09L를 첨가시켰다. 천천히 기계적 교반(내용물이 플라스크에 튀지 않고 현탁되어 있는 고형 PMEA가 유지되기에 충분한)이 시작되어 PMEA를 현탁시킨 뒤, 0.418L의 TEA(3당량)를 플라스크에 첨가시키고 뒤이어 0.72L의 피발로일옥시메틸 클로라이드(5당량)를 첨가시켰다. 그리고 나서 질소를 이용하여 플라스크를 깨끗이 한 뒤, 30-45분에 걸쳐서 60℃까지 반응물을 가열하였다. 부드러운 교반은 60°에서 반응과 함꼐 2-2.5시간 동안 유지되었다. 반응이 완전히 이루어진 것은 HPLC에 의해 측정된다. 반응은 AD의 수율이 영역 표준화에 의해 68-70%에 도달했을 때, 플라스크 에 3.74L의 차가운(0-3°) 이소프로필 아세테이트를 첨가시킴에 의해 종료된다. 교반은 중간 정도의 교반(중간 정도의 소용돌이이나 내용물이 튀지 않음)으로 강해지고 고형물(예컨대, TEA·HCl, 모노(POM)PMEA)이 용액으로부터 침전되는 동안 혼합물을 실온에서 30분 동안 중간 정도의 교반하에 유지시켰다. 반응 혼합물을 유리-소결 깔때기(40-60㎛)를 이용하여 여과시키고 여과 덩어리는 1.26L의 이소프로필 아세테이트(실온)로 세척하였다. 그리고 나서 여과물을 1.01L의 식수용 물로 실온에서 두번 추출하였다. 혼합된 수성 상들을 1.26L의 이소프로필 아세테이트(실온)를 이용하여 두번 역추출하였다. 모든 유기 상들을 혼합시켜 492L의 식수용 물로 한번 추출하였다. 유기상을 분리하여 35-39°의 온도, 약 30mm Hg의 진공에서 약 1-2시간 동안 진공으로 농축시켜 0.6kg의 노란색 기름을 얻었다. 그 기름을 3L용 3-목 플라스크로 옮기고 약 30분에 걸쳐 실온까지 냉각시켰다. 실온의 아세톤 314mL를 플라스크에 담은 뒤 1.57L의 디-n-부틸 에테르를 첨가시켰다. 천천히 교반이 시작되고 용액은 약 5-20분에 걸쳐 35°까지 가열되었다. 온도가 35°에 이르면, 가열이 중단되고 더 이상의 온도 증가는 일어나지 않는다. 그 용액을 약 30분에 걸쳐 30°(20-29°)이하로 냉각시켰다. 냉각이 진행되는 동안 천천히 교반이 지속되면서 결정화 혼합물에서 결정형 1이 형성되었다. 부가적으로 1.15L의 실온의 디-n-부틸 에테르를 결정화 혼합물에 첨가시켰다. 중간 정도의 교반이 실온에서 약 16시간 동안 지속되었다. 결정을 여과(Tyvek™ 여과기)시키고 여과 덩어리를 10% 아세톤 1L, 90% 디-n-부틸 에테르(v/v) 용액으로 세척한 뒤 여과에 의해 용액을 제거하였다. 그 덩어리를 일정한 중량이 얻어질때까지(약 2일) 질소 블리이드를 갖는 건조 오븐에서 실온으로 건조시켰다.

얻어진 결정형 1 AD의 수율은 PMEA로부터 얻어지는 이론치의 55-58% 정도이고 순도는 영역 표준화에 의해 HPLC로 측정한 결과 99-100%였다.

실시예 5. 결정화 용매로서 이소프로필 아세테이트를 이용하는 결정 AD의 제조

실온의 NMP 43.7mL를 교반 장치가 적용된 500mL용 3-목 플라스크에서 질소하에 PMEA(10.93g)에 첨가시켰다. PMEA를 현탁시키기 위해 혼합물을 교반시켰다. 그리고 나서 실온에서 TEA(27.9mL)를 첨가시키고 뒤이어 실온에서 피발로일옥시메틸 클로라이드(28.9mL)를 첨가시켰다. 온도를 45°로 상승시키고, 현탁액을 45°에서 12시간 동안 교반시켰다. 그 결과 생성된 걸죽한, 노란색의 현탁액을 이소프로필 아세테이트(150mL)를 이용하여 실온에서 희석시키고 역시 실온에서 75분 동안 격렬하게 교반시켰다. "C" 소결된 유리 원료에 의해 여과시킴으로써 고형물을 제거시키고 이소프로필 아세테이트 50mL를 이용하여 실온에서 세척하였다. 여과물을 혼합하여 세척당 40mL의 탈이온수를 이용하여 두번 세척하였다. 세척에 이용된 물을 혼합하여 추출당 40mL의 이소프로필 아세테이트를 이용하여 두번 역-추출하였다. 모든 유기 상들을 혼합하여 20mL 탈이온수로 한번 세척한 뒤 수성 및 유기 상들을 분리시켜 17°에서 2시간 동안 접촉한 채로 유지시켰다. 이 시기 동안 긴 막대-형의 결정이 수성-유기상의 접촉면에 형성되는 것이 관찰되었다. 결정을 "M" 소결된 유리 원료를 이용한 여과에 의해 수집하고 건조시켜, 512mg의 긴 막대-형 결정을 얻었다.

실시예 6. HPLC 에 의한 AD 분석

순도를 측정하고 부산물을 분리 또는 감정하며 AD를 위한 레퍼런스 표준치로서 부산물의 사용을 구체화하기 위하여 HPLC에 의해 결정형 1 AD를 분석하였다. 존재하는 화합물의 수치를 영역 표준화 방법에 의해 분석하였다. HPLC 분석은 표준 또는 시료 제조의 12시간 이내에 수행되었다.

고정된 부피의 시료 주입기, 가변의 파장 흡수 인지기 및 전자 적분기를 장착한 액체 크로마토그래피가 칼럼(Alltech Mixed Mode Anion Exchange™ C8, 7㎛, 100Å pore size, 250mm x 4.6mm(i.d.), Alltech, Deerfield, IL) 및 보호 칼럼(20mm x 4.6mm(i.d.), dry packed with Pellicular C8 particles, Alletch, Deerfield, IL)과 함께 사용되었다. 크로마토그래피 품질의 물이 사용되었다. 사용된 화학 약품으로는 크로마토그래피 등급의 아세토니트릴(Burdick & Jackson, Muskegon, MI), 무수 분석적 등급의 포타슘 포스페이트 모노베이직(KH₂PO₄, Mallinckrodt, Paris, KY), 무수 분석적 등급의 포타슘 포스페이트 디베이직(K₂HPO₄, Mallinckrodt, Paris, KY) 및 A.C.S. 시약 등급의 인산(Mallinckrodt, Paris, KY)을 들 수 있다. 수성 포타슘 포스페이트 용액을 여과시키고(0.45㎛ Nylon 66 막 여과기, Rainin, Woburn, MA) 사용 전에 가스를 제거시켰다. 또한 이러한 성분들과 화합물들의 대응물이 사용될 수 있다. 유사한 결과를 얻기 위하여 동등한 장치 및/ 또는 시약이 사용될 수 있다.

pH 6.0, 200mM의 포타슘 포스페이트 완충 용액 1400mL를 아세토니트릴 600mL 와 혼합시킴으로써, pH 6.0의 포타슘 포스페이트 완충 용액 : 아세토니트릴 70:30 v/v로 구성된 유동상 A를 제조하였다. pH 6.0, 200mM의 포타슘 포스페이트 완충 용액 1000mL를 아세토니트릴 1000mL와 혼합시킴으로써, pH 6.0의 포타슘 포스페이트 완충 용액 : 아세토니트릴 50:50 v/v로 구성된 유동상 B를 제조하였다.

시료를 분석하기에 앞서, HPLC 칼럼은 유동상 A로 실온에서 1시간 동안 분당 1.2mL으로 평형을 유지시켰다. 부산물을 함유한 AD 시료 5㎕(약 1mg/mL 용액)를 25분 동안 실온에서 가동시킴으로써 분석하였다. 이 때 1분동안 100% 유동상 A를 이용한 분당 1.2mL의 유동율에서 분석하였다. 100% 유동상 B로 19분까지 선형 경사를 이루었다. 그리고 나서 칼럼은 5분 동안 100% 유동상 B에서 유지된다.

AD를 함유하는 시료는 정확하게 약 25mg의 중량을 가지며 시료 용매의 최종 부피 25.0mL에서 AD를 용해시킴으로써 제조되었다. 시료 용매는 200mL 포타슘 포스페이트 완충 용액(물 1L 당 포타슘 포스페이트 모노베이직 3.40g, 인산을 이용하여 pH 3.0으로 조절된)과 800mL 아세토니트릴을 혼합시키고 실온에서 평형을 유지시킴으로써 제조되었다. 화합물은 그들의 용출 시간 및/또는 체류 시간에 기초하여 감정된다. 일반적으로 AD는 약 9.8분에서 그러한 경사로부터 용출시키고, 모노(POM) PMEA는 약 6.7분에서, 그리고 PMEA는 약 3.5분에서 용출시킨다.

실시예 7. 결정형 1의 물리적 특성

약 100 내지 150mg의 결정을 회절 미터기와 연결된 알루미늄 홀더에 담고, XRD에 의해 결정형 1을 분석하였다(Nicolet automation package로 자동화된 GE 모델 XRD-5). 결정형 1을, 4내지 35도 2θ 사이의 값으로 1.5초당 0.05°의 스캔 속 도를 가지고 흑연 단색기(ES Industries) 및 섬광 측정기를 포함하는 표준 촛점 구리 X-레이 관(Varican CA-8)을 이용하여 40KV 및 -20mA에서 조작되는 X-레이 발생기에 노출시킴으로써 스캔하였다. 계산치를 위하여 사용된 가중된 X-레이 파장의 평균값은 CuKα 1.541838Å이었다. 결정형 1 AD는 약 6.9, 11.8, 12.7, 15.7, 17.2, 20.7, 21.5, 22.5 및 23.3에서 2θ로 표현되는 특징적인 XRD 피크를 나타내었다. 결정형 1의 XRD 패턴의 예가 도1에 표시되어 있다.

또한 시차 주사 열량법에 의해 결정형 1을 분석하였고, 약 99.8°에서 시작되어 약 102.0°에서 특징적인 흡열 전이를 표시하는 온도 기록도를 도 2에 나타내었다. 온도 기록도는 질소 대기 하에 분당 10°의 스캔 속도를 이용하여 얻은 것이다. 시료는 DSC 장치에서 컨테이너에 밀봉되는 대신 주위 기압으로 분석하였다. 열량 측정 스캔은 시차 주사 열량계(TA Instrument, 모델 2200 조절기를 갖는 모델 DSC 2910)를 이용하여 얻었다. 약 5kg의 AD를 온도 기록도를 얻는데 이용하였다. 시차 주사 열량법은 다음에 기술되어 있다(예컨대, U.S. Pharmacopoeia, vol. 23, 1995, method 891, U.S.P. Pharmacopeial Convention, Inc, Rockville, MD).

결정형 1의 융점을 종래의 융점 분석 방법에 의해 측정하였다. 분석은 제조자의 지시에 따라 세포를 측정하는 모델 FP 81이 장착된 Mettler 모델 FP 90 Central Processor를 이용하여 이루어졌다. 시료는 초기 온도 63°에서 30초간 평형을 유지하고 이어서 1.0°/분으로 온도가 상승된다. 결정형 1은 99.1°내지 100.7°에 걸쳐서 융해되었다.

결정형 1의 자외선 흡수(IR) 스펙트럼을 제조자의 지시에 따라 Perkin-Elmer 모델 1650 FT-IR 분광 측광기에 의해 얻을 수 있다. 미세한 분말을 얻기 위해 두개의 분말을 함께 분쇄시킴으로써, 중량(5mg)으로 약 10%에 해당하는 결정형 1과 중량(50mg)으로 약 90%인 건조된(진공하에 60℃에서 하룻밤 동안) 포타슘 브로마이드(Aldrich, IR 등급)를 함유하는 반투명 펠리트를 제조하였다. IR 분광학에 대한 것은 다음에 기술되어 있다(예컨대, U.S.Pharmacopoeia, vol. 23, 1995 method 197, U.S.P.Pharmacopeial Convention, Inc, Rockville, MD;Morrison, R.T. 등, Organic Chemistry, 3rd 판, Allyn과 Bacon, Inc., Boston, p 405-412, 1973). 시료를 스캐닝하기 이전에 배경 스캔에서 카본 디옥사이드의 흡수 장애를 ≤3%로 감소시키기 위하여, 분광 측광기의 시료 방을 약 6 p.s.i.에서 고순도의 질소 기체를 이용하여 적어도 5분 동안 정화시켰다. 결정형 1은 포타슘 브로아미드에서 약 3325-3275, 3050, 2800-1750, 1700, 1625, 1575-1525, 1200-1150, 1075 및 875에 상응하는 센티미터에서 특징적인 밴드를 갖는 자외선 흡수 스펙트럼을 나타내었다. 결정형 1의 자외선 흡수 스펙트럼의 예가 도3에 표시되어 있다.

일반적으로 결정형 1은 건조시 불투명 백색 또는 회백색 분말이다. 주어진 제조에 의해 얻어진 결정은 일반적으로 다중 분산성이며 알약, 바늘 형태, 판형 및 알약, 바늘형 및 판형의 집합체로 이루어지는 결정 형태를 갖는다. 통상적으로 결정형 1은 약 1㎛ 내지 약 300㎛ 범위의 길이를 갖는 크기이며, 분열 또는 각진 모서리로 형태화된 비규칙적 알약형이다. 아세톤 및 디-n-부틸 에테르를 결정화 용매로 하여 낮은 온도, 일반적으로 약 2-4°에서 제조된 결정형 1은 통상적으로 대부분이 바늘형태와 몇몇 판상형으로 이루어진 집합체이다. 도 4-7은 아세톤과 디-n- 부틸 에테르에서 15°이상의 온도로 결정화시킨 결정형 1의 사진을 나타낸 것이다. 이러한 사진에서 그 크기가 약 10㎛내지 약 250㎛ 길이 범위에 있는 알약 또는 판상 및 바늘 형태의 결정을 볼 수 있다. 도 9는 약 2-4°사이의 온도에서 아세톤과 디-n-부틸 에테르로 결정화시킨 결정형 1을 보여준다. 지름이 약 30㎛ 내지 약 120㎛ 범위에 있는 판상 및 바늘형 결정의 집합체를 볼 수 있다. 집합체 내의 개개의 결정은 각진 모서리를 갖는다.

Karl Ficher 적정에 의해, 결정형 1이 1% 미만의 물을 함유하는 것이 발견되었다. 물 성분의 분석을 기술된 바에 따라 본질적으로 수행하였다(예컨대, U.S. Pharmacopoeia, 1990, p 1619-1621, U.S. Pharmacopoeial Convention).

실시예 8. 결정형 2의 제조

결정형 1을 94%의 상대 습도를 갖는 공기 중에서 실온으로 3일동안 배양시킴으로써 결정형 2 이수화물로 전환시켰다. 결정형 1이 결정형 2로 전환되는 동안, 초기 결정형 1의 제조에서 결정형 2가 검출되지 않는 시간으로부터 초과 시간을 증가시키면서 결정형 1과 결정형 2의 혼합물을 얻었다. 3일의 배양이 끝나면 최종 결정형 2 배합물은 검출 가능한 결정형 1을 전혀 포함하지 않는다.

실시예 9. 결정형 2의 물리적 특성

결정형 2를 결정형 1에서 이용한 방법과 동일하게 XRD 분석하였다. 결정형 2 AD는 약 8.7-8.9, 9.6, 16.3, 18.3, 18.9, 19.7, 21.0, 21.4, 22.0, 24.3, 27.9, 30.8 및 32.8에서 2θ로 표현되는 특징적인 XRD 피크를 나타내었다. 결정형 2의 XRD 패턴의 예가 도11에 표시되어 있다.

또한 결정형 1의 분석에서 사용한 동일한 방법으로 시차 주사 열량법에 의해 결정형 2를 분석하였고, 약 69.5°에서 시작되어 약 72.7°에서 특징적인 흡열 전이를 표시하는 온도 기록도를 도 12에 나타내었다.

결정형 2의 융점을 종래의 융점 분석 방법에 의해 측정하였다. 분석은 결정형 1에서 기술한 바와 동일한 방법을 이용하여 수행하였다. 결정형 2는 70.9°내지 71.8°에 걸쳐서 융해되었다.

*결정형 1에서 기술한 바와 동일한 방법을 이용하여 결정형 2의 IR 스펙트럼을 얻었다. 결정형 2의 IR 스펙트럼을 도 13에 나타내었고, 약 3300-3350, 3050, 2800-1750, 1700, 1625, 1575-1525, 1200-1150, 1075 및 875에 상응하는 센티미터로 표현되는 특징적인 흡수 밴드를 갖는다. 이러한 밴드들은 결정형 1의 결과와 유사하나, 결정형 2의 경우 물과 결합된 부가적인 OH- 결합의 스트레치 밴드가 약 3500에 나타난다.

Karl Ficher 적정에 의해, 결정형 2가 6.7%의 물을 함유하는 것이 발견되었다. 물 성분의 분석을 기술된 바에 따라 본질적으로 수행하였다(예컨대, U.S. Pharmacopoeia, 1990, p 1619-1621, U.S. Pharmacopoeial Convention).

실시예 10. 결정형 3의 제조

충분한 결정형 1(약 250mg)을 실온에서 무수 메탄올(약 2mL)에 용해시켜 용액을 얻었다. 용액은 결정이 용해될 때까지 약 10-15분 동안 혼합시켜 얻은 것이다. 그 용액을 혼합시킴 없이 10-48시간 동안 방치시켜 용액으로부터 결정형 3을 회수하였다.

실시예 11. 결정형 3의 물리적 특성

결정형 3을 결정형 1에서 이용한 방법과 동일하게 XRD 분석하였다. 결정형 3 AD는 약 8.1, 8.7, 14.1, 16.5, 17.0, 19.4, 21.1, 22.6, 23.4, 24.2, 25.4 및 30.9에서 2θ로 표현되는 XRD 피크를 본질적으로 갖는 것이 특징이었다.

실시예 12. PMEA 의 합성과 정제

AD의 합성과 결정화에 이용되는 PMEA를 정제시키는 것은 생성물의 수율과 순도를 증가시킨다. 실온에서, 548.8g의 디에틸 PMEA를 포함하는 12L용 3-목 둥근 바닥 플라스크에 637.5mL의 아세토니트릴을 첨가시켰다. 디에틸 PMEA를 중간 정도의 교반(내용물이 플라스크에 다소 또는 전혀 튀지 않는 중간 정도의 소용돌이)으로 용해시켰다. 플라스크를 질소로 정화시키고 803.8g의 브로모트리메틸실란을 천천히 첨가시켰다(약 2-5분). HPLC 영역 표준화 분석에 의해 남아 있는 모노에틸 PMEA가 ≤1%로 측정될 때까지 플라스크의 내용물을 2시간 동안 환류(65°)로 가열시켰다. 휘발성 물질을 ≤80°및 20mm Hg에서 증류시켰다. 그리고 나서 플라스크를 실온의 1500mL 물로 채웠다. 플라스크내의 용액의 pH는 25% w/w NaOH를 이용하여 3.2로 조절되었다. 이후에 플라스크의 내용물을 75°까지 2시간 동안 가열시킨 뒤 15-20분에 걸쳐서 3-4°로 냉각시켜 동일 온도에서 3-3.5시간 동안 유지하였다. 플라스크의 내용물은 유리 원료 여과기로 여과되고 여과 덩어리는 150mL의 차가운(3-4°) 물로 세척되었다. 세척된 덩어리를 깨끗한 12L용 3-목 플라스크로 옮기고 2025mL의 물을 첨가시킨 뒤 75°까지 가열시키고 그 온도에서 2시간 동한 지속시켰다. 가열 을 중단하고 플라스크를 냉각시킨 뒤 3-4°에서 3-3.5시간 동안 유지시켰다. 플라스크의 내용물을 유리 원료 여과기로 여과시킨 뒤, 그 여과 덩어리는 150mL의 차가운(3-4°) 물로 세척하였고 그리고 나서 실온의 아세톤 1050mL로 세척하였다. 그 덩어리를 65-70°및 20mm Hg에서 가열시킴으로써 일정한 중량으로 건조되었다. 영역 표준화 또는 외부 표준 HPLC 분석으로 측정한 결과, 99% 순도를 갖는 85.4%의 PMEA 수율을 얻었다.

실시예 13. 결정형 1의 단일 결정 X- 레이 결정학

약 200mg의 약물 840-D-1 AD 덩어리를 200mg의 아세톤에 용해시켰다. 그 용액은 약 60℃까지 가열되었다. 주위 온도에서, 디-n-부틸 에테르를 침전의 최초 미소량이 나타날때까지 60℃의 용액에 천천히 첨가시켰다. 혼합물을 흔들어 준 뒤 약 60℃까지 재가열시켜 투명하고 균질한 용액을 형성하였다. 그 용액을 하룻밤 동안 주위 온도로 냉각시키고 동일 온도에서 약 2일 동안 유지시켰다. 그 결과 생성된 결정은 몇몇개가 1mm 이상의 긴 길이를 갖는 고도의 다중 분산성을 갖는다. 상등액을 따라낸 뒤 남아있는 상등액을 제거시키기 위해 총 약 1mL의 디-n-부틸 에테르를 이용하여 4번에 걸쳐 결정을 세척하였다. 약 150 x 200 x 320㎛의 크기를 갖는 결정을 가지고 단일 결정 X-레이 회절을 이용한 분석을 수행하였다.

모든 측정은 흑연 단색의 Mo-Kα 방사선(λ=0.71069Å)을 갖는 Siemens SMART 회절 미터기(Siemens Industrial Automation, Inc, Madison, WI)를 이용하여 이루어진다. 결정은 Paratone N™ 탄화수소 기름을 이용하여 유리 섬유 위에 올려진다. 수치는 -135±1℃에서 얻는다. 대응 공간의 임의의 범위를 위한 구조가 구조 당 10초로 계산되는 구조당 0.3°의 w 스캔을 이용하여 수집되었다.

51.6°의 최대 2θ로 측정되는 5967 통합 반사가 생산 3205 Friedel 단일 반사(R_int = 0.044)로 평균화되었다. 그 구조는 이등방성으로 정제된 1비-수소 원자를 가진 것으로 해석되었다. 수소 원자는 이상적인 시점에서 도입되었다. 최대 매트릭스의 최소 정방형들의 정제에 있어서 최종 주기는 2438에 기초하여, I > 3σ 및 306 다양한 수치를 갖는 반사를 측정하였고, R = 0.038(Rw = 0.054)에서 수렴하였다.

C-중심의 단사정 세포에 대응하여 3.00 < 2θ < 45.00°범위에서 I>10σ를 갖는 측정된 3242 반사 위치를 측정함으로써 최소의 정방형 정제로부터 얻은 세포 지수와 배향 매트릭스는 다음과 같다 : a=12.85Å, b=24.50Å, c=8.28Å, β=100.2°, Z=4, 공간군 Cc.

다음의 표는 연구에서 얻은 수치를 나타낸 것이다. AD의 그림은 도 27과 28에 나타내었다.

*^a 마지막에 표시된 표준 오차를 가리키는 괄호 안의 수

^a 마지막에 표시된 표준 오차를 가리키는 괄호 안의 수

^a 마지막에 표시된 표준 오차를 가리키는 괄호 안의 수

도29는 결정형 1 AD 분말의 X-레이 회절 패턴을 표시:(a)측정치 및 (b)계산치.

실시예 14. 결정형 4의 제조

결정형 1 AD(10.05g)를 가온시키면서(약 35℃) 이소프로판올(50mL)에 용해시킨 뒤 유리 원료(M firt, ASTM 10-15㎛)를 통해 여과시켰다. 여과물은 그 안에 푸마르산(2.33g)을 용해시켜 포함한 채로 약 35℃에서 교반되고 있는 이소프로판올 용액에(49mL) 첨가되었다. 혼합물을 자발적으로 실온까지 냉각된다. AD 용액에 이소프로판올 용액이 첨가된 뒤 짧은 시간안에 혼합물에 자발적으로 결정형 4, AD·푸마르산(1:1)이 형성되었다. 실온에서 2일 동안 결정을 형성시켰고 여과에 의해 회수한 뒤, 질소 하에 실온에서 진공으로 건조시켰다.

실시예 15. 결정형 4의 제조

결정형 1 AD(1005.1g)를 따뜻한(약 45℃) 이소프로판올(3.0L)에 용해시켰다. 따뜻한 AD 용액을 약 20분에 걸쳐서 중간 정도의 교반과 함께 약 45℃에서 교반된 이소프로판올 용액(6.0L)에 첨가시켰다. 이것은 푸마르산(233.0g)이 용해되어 포함되어 있는 12L 플라스크에서 이루어졌다. 혼합물 온도는 40-45℃에서 10분간 유지되었고 짙은 형성물이 형성될 때 가온을 중지시켰다. 모든 AD 용액이 첨가되고 수분 뒤 혼합물이 탁해졌고 또 다시 수분 뒤 침전물이 커졌다. 이 시점에서 교반을 중지시켰다(혼합물 온도 42℃). 한 시간 동안 침전을 형성시켰다. 천천히 교반이 시작되고 약 두시간동안 교반을 지속시킨 뒤, 혼합물의 냉각을 촉진시키기 위해 하룻 밤동안 천천히 교반을 유지하면서 실온의 물에 12L 플라스크를 담가 두었다. 침천물이 첫번째 여과(Tyvek™ 여과기)와 두번째 여과(M 유리 원료)에 의해 회수되고 실온에서 질소 하에 진공으로 건조되었다.

실시예 16. 유기 및 무기산으로부터 결정형 AD 염의 제조

결정형 1 AD (500mg, 1.0mmol)를 가온시키면서(<40℃) 이소프로필 알코올(5mL)에 용해시켰다. 2mL의 이소프로필 알코올, 또는 산을 용해시키기 위해 요구되는 더 큰 부피의 알코올에 용해된 산(1.0mmol)을 AD 용액에 첨가시켰다. 그 용액은 뚜껑을 정확하게 덮은 섬광 바이알에 실온으로 저장된다. 몇몇 경우에, 용액을 뚜껑으로 덮은 직후(약 1분)에 침전염이 관찰되었다. 다른 경우에, 뚜껑을 덮은 후 수개월이 지난 뒤에 침전이 형성되기 시작했다. 13개 염의 융점이 후술되어 있다. 9개 염의 XRD 수치(2θ)가 또한 후술되어 있으며, XRD 수치는 이러한 염들에 나타나는 가장 높은 강도의 피크를 표시한 것이다.

* 두개의 피크 또는 어깨를 갖는 피크 표시

** 넓은 피크에 존재하는 3-4개의 피크

*** ND = XRD 분석된 바 없음

실시예 17. AD의 배합

몇가지 부형제로 결정형 1 AD를 다음과 같이 알약당 30, 60 또는 120mg AD를 함유하는 알약으로 배합시켰다.

성분	30mg 알약	60mg 알약	120mg 알약
성분	% mg/알약 w/w	% mg/알약 w/w	% mg/알약 w/w
아데포버 디피복실	7.5 30.0	15.0 60.0	30.0 120.0
미리 젤라틴화된 전분, NF	5.0 20.0	5.0 20.0	5.0 20.0
크로스카멜로스 소디움, NF¹	6.0 24.0	6.0 24.0	6.0 24.0
락토스 모노히드레이트, NF¹	74.5 298.0	67.0 268.0	52.0 208.0
순수한 물, USP²	--	--	--
탤크, USP	6.0 24.0	6.0 24.0	6.0 24.0
마그네슘 스테아레이트, NF	1.0 4.0	1.0 4.0	1.0 4.0
합계	100.0 400.0	100.0 400.0	100.0 400.0

¹ 제조 공정 동안 두가지(입자내 및 입자외)의 투약 형태와 혼합된다

² 첨가시키는 물의 양은 적절한 젖은 과립을 형성하기에 충분하다. 물은 건조를 통해(LOD) 3% 손실을 넘지 않는 수준으로 제거된다

결정형 1 AD를 과립 제조기에서 크로스카멜로스 소디움, 미리 젤라틴화된 전분 및 락토스 모노히드레이트와 혼합시켰다. 물을 첨가시키고 적절한 젖은 과립이 형성될 때까지 혼합시켰다. 젖은 과립을 분쇄시키고, 건조를 통해 3% 손실을 넘지 않는 수분 함량으로 건조기에서 건조시켰다. 분쇄된 입자를 입자외 부형제, 락토스 모노히드레이트, 크로스카멜로스 소디움 및 탤크와 혼합시키고, 혼합기에서 혼합 결과 분말의 혼합물을 얻었다. 마그네슘 스테아레이트를 첨가시키고 혼합기에서 혼합시킨 뒤 알약으로 압착시켰다. 알약은 충진 물질인 폴리에스테르 섬유와 함께 고밀도 폴리에틸렌 또는 유리 병에 채워지고, 임의로 건조제인 실리카겔을 포함시킨다.

실시예 18. AD의 배합

몇가지 부형제로 결정형 1 AD를 다음과 같이 알약당 25 또는 50mg AD를 함유하고 각 100mg의 중량을 갖는 알약으로 배합시켰다.

성 분	단위 내용물 당
성 분	% w/w	% w/w
결정형 1 AD	25.0	50.0
락토스 모노히드레이트, NF	40.5	26.5
미세 결정 셀룰로스, NF	31.0	20.0
크로스카멜로스 소디움, NF	2.0	2.0
실리콘 디옥사이드, NF	0.5	0.5
마그네슘 스테아레이트, NF	1.0	1.0

본 발명에 따라, AD 함유 조성물의 제조 및 배합을 용이하게 하는 좋은 융점 및/또는 유속 또는 용량 밀도 특성, 저장 안정성을 가지며, 여과 및 건조가 용이한 AD 및 그 제조 방법이 제공되었다.

본 발명에서는 또한 적어도 약 97%(wt/wt)순도, 바람직하게는 약 98%(wt/wt)의 순도를 갖는 고도로 정제된 AD가 제공되었다.

본 발명의 또다른 목적은 AD합성중에 부산물의 생성을 최소화하거나 제거하는 방법, 비싸고 시간이 많이 소비되는 칼럼 크로마토그래피를 피하여 AD를 정제하는 방법이 제공되었다.

Claims

9-[2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌을 1-메틸-2-피롤리디논 및 트리알킬아민 존재 하에서 클로로메틸 피발레이트와 접촉시키는 단계와,

아데포버 디피복실을 회수하는 단계를 포함하는,

아데포버 디피복실의 제조 방법.
제1항에 있어서, 상기 트리알킬아민은 트리에틸아민인 아데포버 디피복실의 제조 방법.
제2항에 있어서, 1몰 당량의 9-[2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌을 약 5.6-56.8몰 당량의 1-메틸-2-피롤리디논과 접촉시키는 것을 포함하는 아데포버 디피복실의 제조 방법.
제1항에 있어서, 1몰 당량의 9-[2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌을 약 2-5몰 당량의 트리에틸아민과 접촉시키는 것을 포함하는 아데포버 디피복실의 제조 방법.
약 2% 미만의 염을 함유하는 9-[2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌을 1-메틸-2-피롤리디논 및 트리알킬아민 존재 하에서 클로로메틸 피발레이트와 접촉시키는 것을 포함하는 아데포버 디피복실의 제조 방법.
제5항에 있어서, 상기 염은 NaBr 또는 KBr인 방법.