JPS63301832A - イムノグロブリン結合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はイムノグロブリン接合体、その製法およびその
使用に関する。

モノクローナル抗体（以下ＭＯＡｔ＋と略記する）を使
用して腫瘍ヲ抗新生物剤でねらい撃ちさせる一般的概念
は知られておりその治療上の重要性が現在評価されてい
る。一般にこの方法には選択的に局在集中できそして腫
瘍細胞を損傷させることができるものである抗体と毒性
剤との接合体の製造が包含される。植物および細菌毒素
のＡ鎖と抗体とからイムノトキシンを構成させ、それら
を抗原に結合させそしてインターナリゼーションさせて
細胞を死なせることに主なる注意が向けられてきた。実
際上、腫瘍に対して特異的であると考えられる多くのＭ
ｏＡｂは正常な細胞のサブ集団とも反応性であり、その
結果かかる強力な毒素を利用することは非現実的であり
うる、何故ならそれらは正常な組織にも損害を及ぼしう
るからである。植物毒素より安全な代替物はドキソルビ
シン、ビンデシン（Ｖｉｎｄθｓｉｎθ）、クロラムプ
シル（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）　、メルフアラン（
Ｍｅ’１ｐｈａｌａｎ）およびメトトレキサート（Ｍｅ
ｔｈｏ−ｔｒｅｘａｔθ）のような慣用の抗癌性薬物に
抗体を結合させたものである。現在使用されている抗新
生物剤の毒性作用が非特異的であるので、それらを腫瘍
抗原に対するＭｏＡｂに結合させることにより治療指数
を高める試みがなされている。

胸腺由来のＴ−細胞による移植片拒否反応を抑制する試
みにおいては、抗胸腺細胞グロブリンを用いることによ
りＴ−細胞活性を低下させることにしばしば焦点があて
られていた。より最近は、モノクローナル抗体の発達に
伴いＴ−細胞サブセットをインビトロにおけるそれらの
機能に従いかつＭｏＡｂにより限定される特異的な表面
抗原の存在に従って定義することができるようになった
。それによりＴ−細胞が移植片拒否反応を調節する機構
についての研究が刺激されることとなりそしてその研究
はＬ５Ｔ４およびＬｙ　−２ネズミ抗原により限定され
るヘルパー／インデューサーサブセットおよび細胞障害
性／サプレッサーサブセットに大別して集中的に行われ
ている。抗−汎Ｔ−細胞試薬であるＯＫＴ３ＭｏＡｂは
インビボでの効力が証明されているが、最近の研究では
２０種の異なるネズミリンノぞ球抗原に対する２０ｗｆ
１のＭｏＡｂがマウスでインビボで効力がなく、従って
インビボ研究には利用価値がないことが判明した。それ
ゆえこれら特異性の高いＭｏＡｂがより強力になされ標
的細胞を完全に除去できる方法を検査するのが適切であ
る。

かかる方法の一つがＭｏＡｂに結合された細胞障害性薬
物の使用である。

薬物−ＭｏＡｂ接合体の臨床的な効力には癌の免疫化学
療法および種々の免疫調節障害と同種移植拒否反応の軽
減が包含される。多くの研究において、腫瘍会合抗原に
対するＭｏ　Ａｂに結合された場合の毒素および薬物の
腫瘍細胞に対する特異的な細胞障害性が示されている。

しかしながら、毒素−抗体接合体は骨髄移植に先立ちＴ
−細胞を根絶させるために広範にインビトロで使用され
てはいるが、Ｔ−細胞を根絶させかつ移植片拒否反応に
おけるＴ−細胞免疫調節について調査するのに薬物−Ｍ
ｏＡｂ接合体をインビボ使用することはあまり強調され
てこなかった。

アントラサイクリン類は癌の化学療法に右いて使用され
る抗新生物剤の重要な一群であり、そのうちドキソルビ
シンおよびダウノルビシンは固形腫瘍に対して有効であ
る。しかしながら抗体にダウノルビシンおよびドキソル
ビシンを結合させると、その結合がアミノ基を介して行
われた場合は薬物の活性がかなり失われる。最近ダウノ
ルビシンがプロモダクツルビシンを経て１４−位炭素原
子を介してＭＯＡＩ）に結合された。

これら接合体はインビトロで活性を示した。しかしなが
らインビボ研究報告はない（Ｇａｌｘｅｇ。

民地１　［工ｎｔ、　、Ｔ、　ＣａｎｃｅｒＪｌ　９８
４　、５５　、７３７〜７４４）。さらに、ダウノルビ
シン−ＭｏＡｂ　接合体が１０μＩ／−より高い濃度で
非特異的な毒性を示すことも示されている。

今、イダルビシン（４−デメトキシ−ダウノルビシン、
以下工ｄａと略記する）がＭｏＡ’ｂに結合されうろこ
とおよびその接合体が選択的で強力なインビトロおよび
インビボ抗腫瘍活性を示すことが見出された。Ｉｄａ−
ＭｏＡｂ接合体の非特異的な毒性は＆０■／麺より低い
投与量ではインビボで証明されなかった。この工ｄａ−
ＭｏＡｂ接合体はダウノルビシン−Ｍｏ　Ａｂ接合体よ
りインビトロおよびインビボ効力が大きい。

さらに、異なるリンパ球サブ集団（Ｌ３Ｔ４　”、Ｉ、
７　、２＋およびＴｈｙ−１”）と反応することが知ら
れているＭｏＡｂに工ｄａを結合させることによりＩＩ
ｄａ−ＭｏＡｂ接合体が細胞集団を根絶させる能力を詳
細に検べた。この方法が細胞を減少させる驚くべき有効
な手段であることを見出した。例えば、インビボでＬ７
−２．１＋細胞に対し何ら測定可能なほどの作用を及ぼ
さない抗−Ｌｙ　−Ｚ　Ｉ　ＭｏＡｂは細胞毒性薬剤で
ある工ｄａと結合することにより有効な細胞障害剤に変
換されうる。

Ｌｙ−２およびＬ５Ｔ４抗原に対するＭｏＡｂを用いる
コトＫ　ｊ　’）　、　　ｌａ−ＭＯＡｂが標的細胞を
インビトロおよびインビボで除去しうろことが今や示さ
れた。移植片拒否反応の原因であるＴ−細胞サブセット
を特異的に減少させるのに抗リンパ球グロブリンまたは
抗−汎−Ｔ−細胞試薬例えばＤＫＴ３　ＭｏＡｂより大
きい効力を有する工ｄａ−ＭｏＡｂ接合体が提供されう
る。

本発明によれば、モノクローナル抗体にまたはその抗体
の少くとも１個の抗原結合部位を含有するその断片に接
合されたｌａからなるイムノグロブリン接合体が提供さ
れる。

Ｉａａは米国特許−ａ　−４，０７７，９８８号に記載
されている。抗体または抗体断片分子のそれぞれに対し
２〜８個、より好ましくは２〜６個のｌａ分子が共有結
合されるのが好ましい。このｌａ分子は必ずしもそうで
はないが一般にモノクローナル抗体または抗体断片にそ
の１４−位で接合する。これらは直接結合していること
が好ましいが、不活性担体またはリンカ−が間に介在し
ていることもできる。しかしながら工ｄａは代りにアミ
ノ基を介してモノクローナル抗体または抗体断片に結合
されることもできる。これは分解可能なズプチドスば一
す−、デキストラン担体、酸感受性スＲ−サーまたはポ
リグルタミン酸を用いてなされうる。結合に用いられる
基には、ポリ−Ｌ−グルタミン酸およびポリーＬ−アス
パラギン酸のような合成、＋６１Ｊアミノ酸のカルボン
酸基が含まれ、またヒト血清アルブミンのような不活性
蛋白買またはカルボキシメチルデキストランのような官
能性化したデキストランが担体として作用しうる。かか
る担体は１０〜６０キロダルトンの範囲の大きさであり
うる。

代表的にはそれぞれの抗体または抗体断片は工ｄａが標
的として狙うことが望まれる細胞表面上の抗原に対して
特異的である。例えば、抗体または抗体断片は所望の標
的組織例えばヒト新生物に対して特異的であることがで
きる。工ｄａが標的として狙うことが所望されうるヒト
新生物の例をあげれば、乳癌、結腸癌、肺癌、前立腺癌
、卵巣癌、胸腺癌およびその他の癌、肉腫および白血病
である。抗体または抗体断片はまた動物の新生物に対し
て特異的であることもできる。分裂中の細胞、赤血球前
駆体細胞および種々の腫瘍の細胞上に存在するヒトトラ
ンスフェリンレセプター（ＴＦＲ）に対して特異的な抗
体または抗体断片が用いられうる。適当な抗ＴＦＲモノ
クローナル抗体はＬｉＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ−２（ＨＭ
ｙ−２）細胞上のトランスフェリンレセプターに対する
ものであることができる。

イムノグロブリン接合体が特異的なＴ−リン／４球集団
を減少させるための使用を意図させる場合は１その抗体
または抗体断片は、これらＴ−リン／ξ球にとってそれ
自身特異的である細胞表面抗原に特異的である。それゆ
え抗体または抗体断片は、ル、５−１．プレッサーまた
は細胞障害性のＴ　−リンパ球に対して特異的テアルコ
とができる。

モノクローナル抗体または抗体断片はイムノグロブリン
接合体が投与される予定の釉と同じ種であるのが好まし
い。それゆえヒトまたはマウスのモノクローナル抗体ま
たは抗体断片は代表的にはヒトにその接合体を投与する
ことが意図される場合に用いられる。また、抗体または
抗体断片が工（、ａクラスのものであることも好ましい
。抗体断片はＦａｂ　、　　Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’
）２フラグメントであるのが好ましい。工ｇＭ抗体から
タンノぞり分解的酵素消化により誘導されうる１ｇＭモ
ノマーも用いられうる。

イムノグロブリン接合体は本発明によりＩｄａをモノク
ローナル抗体またはその断片に接合させることからなる
方法により調製されうる。１４−ハロー１ｄａをモノク
ローナル抗体またはその断片と反応させるのが好ましい
。１４−置換基は弗素、塩素、臭素または沃素であるこ
とかできるが、しかし臭素が好ましい。１４−　Ｂｒづ
ムは米国特許Ａ　−４，１２５，６０７号に記載されて
いる。

接合は従って下記のことからなる工程により行うことが
できる。

（ａ）モノクローナル抗体またはその断片を過剰モルの
１４−ハローエｄａと混合し、 （ｂ）　　その混合物を１８〜５７℃で反応させ。

（Ｃ）　　すべての沈殿を分離しう （（１）　　未反応の出発物質をゲル濾過により除去し
、そして （θ）薬物（工ｄａ）を吸着クロマトグラフィーまたは
イオン交換クロマトグラフィーにより分離する。

工程（ａ）は代表的にはＮ、Ｄｒ−ジメチルホルムアミ
ドのような水混和性有機溶媒中で遂行される。

工程（ＦＬ）における１４−ハローＩｄａの過剰モルは
０〜５０倍が好ましい。工程（ｂ）においては、反応は
１〜８時間行われるのが好ましい。代表的な反応温度は
室温である。

しかしながら他の接合法も用いられうる。接合体がｘｄ
ａとモノクローナル抗体または抗体断片との間に不活性
担体またはリンカ−を挿入された形で有することが要求
される場合は、その担体またはリンカ−は代表的にはは
じめにＩｄａのＣ−１４炭素原子で結合しそして次に抗
体または抗体断片に結合される。また、前記したように
抗体または抗体断片は分解可能なイブチドスベーサー、
デキストラン担体、酸感受性スハーサーまたはポリグル
タミン酸を用いてアミ７基を介して工ｄａに結合される
こともできる。

本発明のイムノグロブリン接合体は癌を患っているヒト
またはその他の哺乳類の治療に用いられうる。治療上有
効な量の接合体が投与されうる。癌は固形腫瘍、腹水腫
瘍または白血病であることができる。治療されうるヒト
の新生物は前記しである。それぞれの接合体中のモノク
ローナル抗体または抗体断片が異なる特異性を有する２
種またはそれ以上の接合体が投与されう　　る　。

接合体は注射により投与されうる。このものは非経口的
例えば静脈投与されうる。また局所的にかまたは直接１
瘍に投与されうる。患者に投与される接合体の量は治療
される＠瘍および患者の状態のような種々の因子の如何
によるであろう。しかしながら代表的には患者の体の面
積Ｍ２につき１０〜２００１１９の接合体量が投与され
つる。

接合体は他の化学療法剤と一緒に、または接合体の活性
を高める薬剤例えば血管作用剤または腫瘍壊死因子と一
緒にも投与されつる。

イムノグロブリン接合体はまた細胞の集団からＴ　−Ｉ
Ｊンパ球のサブセットを特異的に減少させるのにも使用
されうる。減少されるべきリンパ球上に存在する細胞表
面抗原に対するモノクローナル抗体または抗体断片をと
り込んだ。接合体の薬学的に有効な量がヒトまたは動物
に投与されうる。あるいはまた、細胞集団をかかる接合
体とインビトロでインキュベートすることもできる。

２種またはそれ以上の細胞表面抗原に対する接合体の組
み合せを用いることもできる。減少されるべきリンパ球
はヘルパー、サプレッサーまたは細胞障害性のＴ−細胞
であることができる。

本発明のこの局面は、移植片受容者における移植組織の
拒否反応を阻止するために用いることができる。接合体
は免疫抑制剤として使用され５る。移植片拒否反応を阻
止するのに有効な電の接合体が移植片受答者に投与され
る。この場合減少されるのは細胞障害性Ｔ−細胞である
のが好ましい。癌の患者または動物は適当な接合体全投
与することによりサプレッサーＴ−細胞を減少させるこ
とにより治療され５る。自己免疫疾患はヘルパーチー細
胞を除去する目的で接合体を投与することにより治療さ
れ５る。それぞれの場合に、投与経路および接合体の景
は前記したとおりである。

イムノグロブリン接合体は製剤上許容され５る担体また
は希釈剤と共に医薬組成物として製剤化される。任意の
適当な担体または希釈剤が用いられうる。適当な担体ま
たは希釈剤には生理学的食塩溶液またはリンゲルブドー
糖溶敵が包含される。

以下の実施例により本発明を説明する。添付図面におい
て、第１〜１１図は実施例１に関し、そして第１２〜１
６図は実施例２に関するものである。より詳しくは以下
に記載されるとおりである。

本発明で用いられるアントラサイクリン誘導体の構造を
示せば次のとおりである。

アントラサイクリン誘導体： ム：イダルビシン　　　Ｒ＝Ｈ Ｂ：プロモイダルビシン　　ＲｗＢｒ Ｃ：アミン結合　　　　Ｒｚ　ＮＨ−ＭｏＡｂＤ：エス
テル結合　　　Ｒ＝　０−Ｃ−ＭｏＡｂ（ここで１４ｏ
Ａ’ｂはモノクローナル抗体を示す）第１図は抗−Ｌ７
−２．１（１１５■）へのイダルビシン（Ｉｄａ）の結
合を示す。抗−Ｌ７−２．１の１−Ｅ−ル肖りとり込才
れた工ｄａのモル（■印）（左側縦座標）およびタンノ
５り質回収（・印）（右側縦座標）が反応混合物中の工
ｄａのｎモル数（横座標）の函数として示される。

第２図は工ＴＴ　（１）　７５　Ｎ８１３標的細胞上の
抗−Ｌ７−２．１接合体の抗体希釈度（Ｘ１０”Ｘ横座
標）に対するロゼツト形成細胞チ（縦座標）として測定
された抗体力価を表わす。連続希釈は抗−Ｌ７−２．１
　（ム印）の［１５岬／ｄ溶液に対して、あるいは抗体
１そル当り２（・印）またはＳ（Ｏ印）モルノＩｄａを
有する抗−Ｌ７−２．１の［Ｌ５ｇｖ／−溶液に対して
行われた。

ａＩ３図は！！３細胞に及ぼす工ｄａ　（■印）または
ｌａ−抗−Ｌｙ　−２，１、工ｄａ　５モル／抗体モル
（・印）の２４時間アッセイにおける阻害作用を示し％
　（５Ｈ）チミジンとり込みの阻害％（縦座標）が工ｄ
ａ濃度（Ｍ）（横座標）に対してプロットされている。

第４図は（Ｉ、７−２”）’Ｅ　５細胞に及ぼす工ｄａ
　（■印）、工ｄａ−抗−Ｌｙ−２，１、Ｉｄａ　５モ
ル／抗体モル（φ印）または工ｄａ−抗−ＴＦＲ，工ｄ
ａ　５モル／抗体モル（Ｏ印）の３０分間阻害アッセイ
における阻害作用を示し、（５Ｈ）チミジンのとり込み
の阻害％（縦座標）がＩｄａ濃度（Ｍ）（横座標）に対
してプロットされている。

第５図はＥ５標的細胞に及ぼすｌａ−抗−ｂｙ−２，１
、ｌａ　５モル／抗体モル（Ｏ印）および接合体＋抗−
Ｌｙ−２，１（・印）の５０分間特異性アッセイにおけ
る阻害作用を示しｋ　（５Ｈ）チミジンとり込みの阻害
％（縦座標）が工ｄａ濃度（Ｍ）（横座標）に対してプ
ロットされている。

第６図は２×１０６個の細胞を皮下注射されたＣＢＦ　
１マウスにおけるＥ３胸腺腫の生育を示す。

マウス１０匹ずつの群に矢印で示される下記静脈処置を
した。すなわち、ＰＢＳ　（０印）、工ｄａ（■印）、
抗−Ｌｙ−２，１（ム印）、工ｄａ−抗−’ＩＲ（Ｑ印
）または工ｄａ−抗−Ｌｙ−２，１（”印）。平均ｒｇ
ｉ瘍寸法（３２）（縦座標）が腫瘍接種後の日数（横座
標）に対してプロットされている。誤差パーは平均の士
標準誤差を示す。

第７図は２．０Ｘ１０’個のｍ３Ｍ１瘍細胞を皮下注射
しそして第４１目および５日目に工ｄａ−抗−Ｌ７−２
．１接合体で静脈処置されたＣＢＦ　ｊマクスのそれぞ
れのａ瘍生長曲線を示す。腫瘍寸法（ｃｒｎ２　）（縦
座標）が腫瘍接種後の日数（横座標）に対してプロット
されている。

第８図は！Ａ、０×１０６個の細胞を皮下注射されたＣ
ＢＦ１マクスにおけるＥ５胸腺腫の生長を示す。

マウス１０匹ずつの群に矢印で示される下記静脈処置を
した。すなわち、ＰＢＳ　（０印）、抗−Ｌｙ−２，１
（ム印）、工ｄａ　（−印）またはＩｄａ−抗−Ｌ７−
２．１接合体（Ｓ印）。平均腫瘍寸法（ｃｒＩｔ２）（
縦座標）が腫瘍接種後の日数（横座標）に対してプロッ
トされている。誤差パーは平均の士標準誤差を表わす。

第９図はＡＯＸ１０’個の細胞を皮下注射されたＣＢＦ
１マウスにおける］！ｉ３胸腺腫の生長を示す。

マウス１０匹ずつの群に矢印で示される下記腫瘍的処置
をした。すなわち、ＰＢＳ（［］印）、抗−Ｌ７−２．
１（ム印）、工ｄａ　（■印）または工ｄａ−抗−Ｌｙ
−２．１接合体（・印）。平均腫瘍寸法（ａｎ２）（縦
座標）が腫瘍接１１後の日数（横座標）に対してプロッ
トされている。誤差パーは平均の±標準誤差を示す。

第１０図は２　Ｘ　１０６個の細胞を皮下注射されたヌ
ードマウスにおけるｃｏＬｏ　２０５ヒト腫瘍異種移植
片の生長を示す。マウス１０匹ずつの群に矢印で水源れ
る下記静脈処置をした。すなわち、ＰＢＳ　（Δ印）、
遊離の工ｄａ　（◆印）　、　ｒｄａ　−２５０−３０
６接合体（・印）、Ｉｄａと２５０−３［１６の混合物
（Ｑ印）および２５０−３１６（ム印）。平均腫瘍寸法
（備２）（縦座標）が腫瘍接種後の日数（横座標）に対
してプロットされている。誤差パーは平均腫瘍寸法の士
標準誤差を示す。

第１１図は１ａ−２５０−３α６接合体で静脈処置（矢
印）された異種移植されたヌードマウスのそれぞれの腫
瘍生長曲線を示す。破線はＰＢｓで処置されたマウスの
平均ｍ瘍寸法を示す。ａｕｉｉ法（ｃｒｎ２　’）（縦
座標）が腫瘍接種後の日数（横座標）に対してプロット
されている。

第１２図は抗−Ｌ３Ｔ４　（α５ｗ９）に対するイダル
ビシン（工ｄａ）の結合を示す。抗−Ｌ３Ｔ４０１モル
当りとり込まれた工ｄａのモル数（◆印）（左側縦座標
）およびタンパク質回収（・印）（右側縦座標）が反応
混合物中のｌａのｎモル数（横座標）の函数として示さ
れる。

第１３図は工ＴＴ　（ａ　７５　ＮＢ　Ｋ３標的細胞上
の抗−Ｔｈｙ　−１接合体の抗体希釈度（×１０″′１
）（横座標）に対するロゼツト形成細胞％（縦座標）と
して測定された抗体力価を表わす。連続希釈は抗−Ｔｈ
ｙ−１（◆印）またけ抗−’ｒｈｙ−１１モル当り工ｄ
ａ１（○印）、４（・印）または７（◇印）モルを有す
る接合体の’１．　ＯｊｌｌＦ／ｇｄ溶液について行わ
れた。

第１４図は工ｄａ−抗−Ｉ、３Ｔ４処置（−一）、抗−
Ｌ３Ｔ４処置（ムーム）、工ｄａ−抗−Ｌｙ　−、２，
１処置（−、−）、抗−Ｌｙ−２４処置（ム・・・ム）
または未処置（口・・・口）マウスの肺臓における多数
のＬ３Ｔ４＋およびＬｙ−２＋細胞に及ぼす工ｄａ−Ｍ
ｏＡｂおよびＭＱ　Ａｂ処装の影響について示す。ロゼ
ツト形成細胞チ（縦座標）が日数（横座標）に対してプ
ロットされている。

第１５図はＣＢＡマウスにおゆるＰ３８８Ｄ　Ｉ　Ｆｉ
ｌ！瘍移植片の生存（Ｈ−２および非Ｈ−２差をこえて
）に及ぼす組み合せＩｄａ−ＭｏＡｂ接合体処置の影響
について示す。マウス１０〜１５匹の群にａｏｘｔｏ６
個のＰ５８Ｂ　ＤＩ　！瘍細胞を皮下注射しそして下記
のものの一つを静脈投与した（矢印）。（ｉ）ＰＢＳ（
◆）。

（ｉｉ）抗−Ｌ５Ｔ４および抗−ｔ、ｙ　−２，１（０
）、Ｇｉ）工ｄａ−抗−Ｌ！ｉＴ４　（ＩＩ）、鴫Ｖ）
　Ｉｄａ−抗−Ｌｙ−２，１’（’）および位）工ｄａ
−抗−Ｌ５Ｔ４および工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１（ム）
。平均腫瘍寸法（ｄ）（縦座標）がａ瘍接種後の日数（
横座標）に対してプロットされている。誤差パーは平均
ｎ瘍寸法の士標準誤差を示す。

第１６図はＣＢＡマウスにおけるＰ３８８Ｄ１腫瘍移植
片の生存に及ぼすＩｄａ−抗−’ｒｈｙ−ｉ接合体の影
響について示す。マウス１０匹ずつの群に１．０×１０
７個のＰ、５８８　Ｄ１９１ａ細胞を皮下注射しそして
下記のうちの１つを静脈投与（矢印）した。

（１）　ＰＢＢ　（ロ）、（ｌｉ）抗−Ｔｈｙ−１（り
および（ｉｉｉ）　Ｉｄａ−抗−Ｔｈ７−１　（ム）。

平均Ｍ瘍寸法（ｍｌ）（縦座標）が腫瘍接椎後の日数（
横座標）に対してプロットされている。誤差パーは平均
の士標準誤差を示す。

第１７図は細胞８×１０個／マウスを注射されたヌード
マウスにおけるｃｏｔｏ　２０５　（５α６＋、１７．
１＋）異種移植片の生長を示す。マウス１０匹ずつの群
に矢印で示される下記静脈処置をした。ＰＢＢ　（ロ）
、１７．１−　Ｉｄａ　（ｏ）、６α６−　Ｉｄａ（Δ
）または３（１６−１ａおよ、び１７．１−工ｄａの混
合物（・）。平均腫瘍寸法（３２Ｘ縦座標）が腫瘍接種
後の日数（横座標）に対してプロットされている。誤差
パーは平均の士標準誤差を示す。Ｉｄａの総量は２００
μＩであった。

第１８図は腫瘍断片（１〜５岬）を移植されたヌードマ
ウスにおけるＬ工Ｍ２２１０ヒト結腸腫瘍異種移植片の
生、長を示す。マウス１０匹ずつの群に矢印で示される
下記静脈処置をした。ＦＢ８（ロ）、１７．１−工ｄａ
　（◆）、ＪＧＴ−１３−ｉａａ　（ム）、２７．１−
工ａａ（・）ｓ　３α６−　）ｄａ　（０）ｏ平均腫瘍
寸法（ｃＩＩＩ２）（縦座標）がＩｌＩｍ接種後の日数
（横座標）に対してプロットされている。誤差バーは平
均の士標準哄差を示す。Ｉｄａの総量は８０μ９で実施
例　１ 材料および方法 ＆１瘍細胞 この研究で検査される細胞系統には（Ｌｙ−２＋）マウ
ス胸腺砕工ＴＴ（１）　７５ＮＳ　ｍｌ変種（Ｋ３）　
（Ｓｍｙｔｈ氏他、「１．　Ｎａｔｌ　Ｃａｎｃｅｒ　
Ｉｎｅｔ、Ｊ　１９８６７６５０！１−５１０　＞　、
　（Ｌｙ−２″″、　ＴＩＦＲ−）リンパ＠　ＫＬ４　
（Ｈｏｒｏｗｉｔｚ氏他、［５ｃｉ民地ｃｅＪ　１９６
８１ＭＬ５３３−５３５　）、（ＴＦＲ”）ヒト細胞系
統（ＪＭ　（Ｆｏｇｇｙ氏他、「民地ｎｃｅｒＪ１９６
５１８５２２〜５２９）および（２５０−３０，６”）
　　ヒト細胞系統Ｃ！ＯＬＯ２０５が包含される。細胞
はダルベツコ該イーグル培地（ＤＭＥ　）またはＲＰＭ
工１６４０培地（ＦＬヌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、８
ｙｌｎｅｙ、Ａｕ５ｔｒａｌｉａ）に１０％熱不活化新
生ウシ血清（ＦＩＯＷ）、　２ｍＭグルタミン（Ｃｏｍ
ｍｏｎｖｒｅａｌｔｈ　　日ｅｒｕｍ　　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ　　８ｙｄｎｅｙ。

ムｕｓｔｒａｌｉａ）　：　１００　ｕｐ／ｄ　　スト
レプトマイシン（Ｇｌａｘｏ、　Ｍｅ’１ｂｏｕｒｎｅ
、ムｕｅｔｒａ１ｉａ）および１００１、Ｕ、　／、ｄ
　−＜　ニジリン（Ｃｏｍｉｏｎｗｅａｌｔｈ　Ｓｅｒ
ｕｍ。

Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を補充したものの中でイン
ビトロで保持した。Ｅ３酵傷は（Ｃ５７ＢＬ／６ｘＢＡ
ＬＢ／ｃ）Ｆ１マウス（Ｃ！ＢＦＩマウス）に連続継代
することにより　。

インビボで保持した。腹水液から得られた細胞を洗浄し
てｐｉ（７，３の燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢ９）中で２回
遠心分離しく４００ｙｘ５分）　ＰＢＥＩ中に再懸濁さ
せそしてマウスの腹壁中に皮下（ｓ、ｃ、　）注射した
。これらは処置前シて触診しうるｌ！Ｊ傷に発達した。

マウスを一連の静脈（ｉ、ｖ、　）または膿瘍内（１，
ｔ、）処置にかけそして以後のｌ撞瘍寸法を膿瘍の垂直
軸を通ってノギスにより毎日測定した。データは平均帽
瘍寸法として記録された（２つの直径士標準誤差の結果
）。

マウス ＣＢＡおよび（０５７ＢＬ／６ＸＢＡＴＩＪ／ｅ　）マ
ウス（ＣＢＦ１マウス）およびヌード（ｎｕ／ｎｕ）マ
ウスがＤｅｐａ−ｒｔｍｅｎｔ　　ｏｆ　　Ｐａｔｈｏ
ｌｏｇｙ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　　ｏｆ　Ｍｅｌｂｏ
ｕｒｎｅで生産された。すべてが同性１司年令のマウス
８〜１０匹からなる実験群をそれぞれの実験につき用い
た。

モノクローナル抗体 用いられるＭｏＡｂは（：）マウスＬ７−２．１　　と
特異的に反応する抗−Ｌｙ　−２，１（ＩｇＧ　１）　
　（Ｈｏｇａｒｔｈ氏他の「工ｍ民地ｘｎｏｌｏｇｙ　
Ｊ　１９８２４６１＋５−１４４　）、（１１）ヒトト
ランスフェリン　レセプター（ＴＦＲ）と反応するＡ３
Ｃ６（抗−ＴＦＲ）（工ｇＧ　１　）　（Ｐａｎａｃｃ
ｉｏ氏他の［Ｉｍｒ民地ｎＯＩＯｇ７　ａｎｄ　Ｃｅ１
ｌ　Ｂｉｏ１ｏｇｙ６５，４６１〜４７２，１９８７Ｊ
）糟腎 ヒト結腸癌細胞上に存在する抗原に対して反応する２５
０−５０．６で示される抗体であった。

ＭＯＡｔ）は腹水液から４０％硫酸アンモニアを用いる
沈殿、　ＰＢＳ中への溶解および同じ緩衝液での透析に
より単離された。これら粗製調製物はタンパク質−Ａ−
セファロース（ＰｈａｒｍａｃｉａＩｎｃ、、　Ｐｉｓ
ｃａｔａｗａｙ、　Ｎｅｗ　、Ｔｅｒｓｅｙ）上に吸着
させ、ＰＢＳ（ｐＨ７，！ｌ）で充分に洗浄しそして０
．２Ｍグリシン／　ＨＣＱ　（ｐＨｚ　Ｂ　）を用いて
溶離するか、またはアフィゲル（Ａｆｆｔｇｅｌ）ブル
ーカラム（Ｂｉｏ−ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　
Ｐｔｙ、　Ｌｔｄ、、　５ｙｄｎｅｙ）に通した。

中和に続き、　ＭｏＡｂをＰＢＳで透析し、等分して一
７０℃で貯蔵した。Ａ３り６はＣＢＡマウスを２×１０
６個（７）　ＬｔｃＲ−ＬｏＮ−ｕｕｙ−２（ｕＭｙ−
２）細胞（ＯＫＴ９＋ｖ８）を用いて１週間間隔で６週
間腹腔内から免疫し、最後の注射の３日後に膵臓をとり
出しそしてＰ３−ＮＳニーＡＧ４−１　（ＭＳ−１＞細
胞と融合させることにより得られた。

接合体の調製および定電化 完全無欠の抗−：１．＋７−２．１　、抗−ＴＦＲＭｏ
Ａｂ　。

または２５０−３０．６（ｐＨａｏ　ノホウ酸塩緩衝液
１−中１〜２η）を、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（
ＤＭＰＦ）中に濃度１ａＶ／−で溶解された１４−プロ
モー４−デメトキシグウノルビシン（Ｂｒ−ＩｄＩＬ）
の（１〜５０）過剰モルと混合した。反応を室温で４時
間保持させ、次に遠心分離（４００ｆＸＳ分間）してす
べての沈殿を分離した。遊離のＢｒ−Ｉ＋ｉａおよびそ
の他の未反応出発物質をセファデックスＧ−２５カラム
（ＦＤ−１０，Ｐｈａｒｎ＋ａｃｉａ　）を用いてケ′
ル濾過クロマトグラフィーすることにより除去しそして
次に接合体をＰｏｒａｐａｋ　Ｑ　（Ｍｉｌｌｉ−ｐｏ
ｒｅ）のカラムに通してすべての吸着された薬物を分離
した（　Ｎｌｅｄｅｒｖｉｅｓｅｒ氏他、「Ｊ　、　Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇ、Ｊ１９７１５４２１５〜２２３）。

薬物−ＭｏＡｂ接合体中にとり込まれた工ｄａの量は４
８５ｎｍでの吸収分光測定（１４９８−五４　Ｘ　１０
’　Ｍ−’　ｃｍ−’　）およびタンノζり概算（Ｂｒ
ａｄｆｏｒｄ氏の「Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ　１
９７６７２２４８〜２５３）によシ測定された。

抗体活性 結合法に訃いて用いられると同じ繰作を受けた遊離のＭ
ｏＡｂに比較して、工（Ｌ！Ｌ−ＭｏＡｂ　　接合体の
抗体活性を測定するのに羊の抗マウスイムノグロブＩＪ
　ｙ（ｓＡＭＧ）を用いるロゼツト形成分析が用いられ
た（　Ｐａｒｌｓｈ氏他、［Ｊ民地ｍｍｕｎｏ１．　Ｍ
ｅｔｈｏａａＪ１９７８皿１７３〜１８３）。

薬物活性 （ａ）２４時間阻害活性、細胞（２〜５Ｘ１０’／ｄ）
１００μ２を平底ミクロ滴定プレートに加えそして６７
℃で１時間インキエベートした。遊離のイダルビシン’
（Ｉｄａ）　（ｐＨ８中に溶解）およびｌａ−ＭｏＡｂ
接合体を無菌的に一過しそして滅菌ＰＢＳ中で希釈した
。遊離の工ｄａまたは接合体の５０μ２を各検体当りウ
ェル２個を用いて細胞に加え、対照ウェルにはＦＢ８５
０μＣを加えた。そして細胞をＣ０２７％の下３７℃で
２４時間培養した。

（ｂ）３０分間阻害アッセイ：細胞（２〜５　Ｘ　１０
’／ｄ）２００μ１２を滅菌エラはンドルフ（ｌｐｐｅ
ｎｃｌｏｒｆ）管に集め、滅菌薬物または接合体中に再
懸濁させそして３７℃で３０分間混合した。次に細胞を
遠心分離しく４００ｆＸＳ分）％生育培地に再懸濁させ
そして各検体当りウェル２個ずつを用いて１００μαず
つをミクロ滴定プレートに種つけし１６〜２４時間イン
キュベーションした。これら２種のアッセイにおいてイ
ンキュベーション期間終了後、１μＣ１の〔３Ｈ〕−チ
ミジンを含有する生育培地５０ＡＱ（比活性−５Ｃ！ｉ
／ミＩＪモル。

Ａｍｅｒｓｈａｍ）を加え、そしてプレートを２〜４時
間インキュベートした。次に細胞を収穫し、乾燥し、そ
して個々の検体を分離してβ−シンチレーションカウン
ターで計測した。〔３Ｈ〕−チミジンのとり込みを対照
のとり込みと比較した阻害％として表わした。任意の時
点での標準誤差が二重測定により生じそしてすべての所
定の実酸ポイントで５％を越えなかった。

ｌｌ　　性 ＣＢＡマウス１０〜２０匹ずつの群に種々の景のＩｄａ
または工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１を１河靜脈注射しそし
て生存するマウス数を投与された薬物のｆｆ　、／　Ｋ
９ｔに対して記録した。これらのマウスの器官をとり出
して秤量したのちホルマリン固定してヘマトキシリンお
よびニオシンで染色した。

Ｂｒ−工ｄａを数種のＭｏＡｂ　、すなわちヒトＴＦＨ
に対する抗体、ヒト結腸癌細胞上に存在する抗原、に対
する抗体（抗体２５０−３１６）、およびマウスＬｙ−
２７０抗原に対する抗体に共有結合させも反応条件はＭ
ＯＡｂに添加されるＢｒ−１ａ　　の過剰モルを変動さ
せそして比較的高い工ｄａとり込みと比較的低いタンパ
ク質回収との間を妥協させることによりその接合につい
て設定された。工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１（第１図）％
工ｄａ−抗−ＴＦＲおよび工ｄａ　−２５０−３［Ｌ６
　　（データは示されず）は３〜５分子の工ｄａをとり
込みタンパク質回収は５０％より大きかった。Ｂｒ−Ｉ
ｄａとＭＯＡｔ）との反応は２種類の結合を生成しうる
（前記アントラサイクリン誘導体のＣおよびＤ）。どち
らが存在するかを確定させるためには、接合体を−１４
，５または−９０に４８時間露出させ、放出された遊離
の薬物をＰｏｒａｐａｋ　Ｑに吸収させそして検体を分
光測定により再定量した。塩基（…９０）に露出させる
と結合薬物の５０％が放出されるが、一方−４，５では
何らの損失もなかった。このことは薬物の少くとも５０
％がエステル結合（同上Ｄ）をしていることを示す。な
ぜならエステル結合は塩基性条件に対し感受性であるが
アミン結合は安定であるからである。

抗体活性 接合の前および後における抗体の力価をロゼツト形成法
によプ計測しそして標的細胞の５０％がロゼツトを示す
希釈度として測定された。

２および８分子のｌａを含有するＩｄａ−抗−Ｌ７−２
．１接合体はｘ３細胞に対して抗体力価それぞれ１：５
６０００および１：３３０００を有し、一方弁接合抗体
力価は１：８００００であった（第２図）。

２および６分子のｌａを含有する工ｄａ　−２５０−３
０，６接合体は（！ＯＬＯ２０５細胞に対する抗体力価
それぞれに１：１６０００および１：１１０００　　を
有し、一方弁接合抗体力価は１　：３３０００であった
。従って接合操作により抗体活性が幾分か損失される。

ＭｏＡｂと６分子未満の工ｄａ分子との接合体がインビ
トロおよびインビボ研究に用いられた。工ｄａ−抗−Ｌ
７−２．１接合体の溶解度および抗体活性はこれらのＩ
ｄａとシ込みのレベルをはるかにこえて低下することが
注目された（データは示さず）。有用にとシ込まれうる
工ｄ、ａ分子の最大数は個々の抗体の如何に応じ変動し
よう。

マウスエＴＴ（１）７５Ｎ８１３細胞系統（Ｌ７−２”
ＴＦＲ−）およびヒト０１Ｍ細胞系統（Ｌ７−２−ＴＦ
Ｒ＋）に及ぼす工ｄａおよび２種の工ｄａ−ＭｏＡｂ接
合体のインビトロ細胞障害性を２４時間阻害アッセイに
おいて測定しそしてよりｓｏの値（（３ＦＩ：ｌ−チミ
ジンとシ込みにおける対照の５０％阻害）を測定した。

その結果を第３図および第１表に示す。Ｉｄａについて
のより５ｏは試験した２種の細胞系統に対して１．０〜
２．５　Ｘ　１０−’　Ｍの範囲であった（第３図およ
び第１表参照）。Ｅ３に対する工ｄａ−抗−Ｌ７−２．
１のより５０は遊離の工ｄａのそれよシ４倍大きく（第
３図）そしてＯＥＭに対する工ｄａ−抗−ＴＦＲのＩＤ
５Ｑは遊離の工ｄａの場合より１〜２倍大きかった（嬉
１表）。それゆえ、遊離の工ｄａはＥ３お二びＯＫＭの
両方に対して工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１および工ｄａ−
抗−ＴＦＲのそれぞれより細胞障害性が大きかった。し
かしながらこれら工ｄａ−ＭｏＡ’ｂ接合体は非反応性
の細胞系統（第１表）に対して細胞障害性が１Ａｏシか
なく、このととはそれらの細胞障害作用が特異的であり
、それらの抗体活性保有から生ずることを示している（
第２図）。

第１表 ＩＩＩ瘍細胞　に及ぼすイダルビシンモノクローナル抗
体接合体の影響 １丁、Ｄ、５０一対照の〔３Ｈ〕−チミジンとり込みの
５０％阻害２　＝試験した調製物数 ｌａ　−２５０−３０，６接合体は遊離の工ｄａよシ少
し活性が劣っていた。標的細胞系統Ｃ０ＬＯ２０５に対
し遊離のｌａは１．Ｄ、５０６　Ｘ　１０−８Ｍを有す
るが接合体は１．Ｄ、５０五５Ｘ１０−７Ｍを有してい
た。

接合体が標的細胞に対するそれらの細胞障害作用におい
て選択性を示すか否か検査するために、■ａａ−抗−１
７−２．１および工ｄａ−抗−ＴＦＲをＥ３（Ｌ７−２
”）細胞と３０分間インキユベートシ。

次に結合されなかった接合体を洗い去りそして細胞障害
性について測定した。遊離のＩｃ１ａについてのより５
０５．２Ｘ１０−７　Ｍに比較して工ｄａ−抗−Ｌ７２
．１接合体はより５０６．２Ｘ１０−７　Ｍを有してい
た（第４図）。対照すると、非反応性のＩｄａ　−抗−
ＴＦＲ接合体はよりｓｏ　５．ＯＸ　１０−６　Ｍ　、
すなわち遊離のＩ＋１ａのそれより１０倍大きく、この
ことはＩｄａ−抗−Ｌｙ−２，１接合体の抗体結合活性
によねその選択的細胞障害性が生じたことを示している
。同様にして工ｄａ−２５０−３α６接合体および遊離
の薬物を０ＯＬＯ２０５（２５０−３α６　＋ｖｅ）お
よび’Ｒ５（２５０−３０，６−ｖｅ）細胞系統と３０
分間インキュベートし次に洗浄して細胞障害アッセイに
かけた。いずれの細胞系統も遊離の薬物に対しては同様
の薬量応答を示した。す表わちｃｏｒ、ｏ　２０５に対
して９．２Ｘ１０−７ＭセしてＫＡに対して９．８Ｘ１
０−７Ｍであった。しかし外から、工ｄａ−２５０−３
０，６接合体は抗体非反応性Ｅ３細胞系統に対してよ１
）　０ＯＬｏ　２０５に対して４倍毒性が大きかった。

ＣＫＭ細胞系統および工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１を非反
応性対照として用いて同様の結果が得られた（データは
示さず）。さらに、標的細胞に対するＩｄａ　−ＭＯＡ
ｂ接合体の細胞障害性が特異的であって抗体結合部位に
て起ることを確認するために、遊離のＭｏＡｂを用いて
接合体の細胞障害性を阻害する研究を行った。ｌａ濃度
４．　ＯＸｌｏ−６Ｍ（抗−Ｌ７−２．１２μｆ）で　
Ｅ３細胞に対する抗−Ｌ７−２．１接合体の細胞障害性
は抗−Ｉ、７−２．１５０μｆ　（２５０ａｆ／ｄ）の
添加により７０％低下しく第５図）、このことｉ！ｌａ
−抗−Ｌｙ−２，１接合体の細胞障害性がその抗体結合
能力に直接関連していることを示している。同轡の対照
結果は２５０−５０．６でも得られた。すべてのアッセ
イにおいて遊離の抗−Ｌ７−２．１、抗−ＴＦＲおよび
２５０−３０．６が非細胞障害性であること１で留意さ
れるべきである（データは示さず）。

マウス胸腺騨工ＴＴ（１）　７５Ｎ８１３のインビトロ
Ｍ固形腫瘍の生長阻害を査定するために、腹部領域に２
．０Ｘ１０６個のに３細胞を皮下接極されたＯＢＦ’１
マウス（１群１０匹）の群に下記の１種を静脈注射した
。すなわち、（＋）　ＰＨ１、（１）抗−ＴＪ７−２．
１−　　（ＩＩＩ）　■ｄａ＊　　（ＩＶ）工ｄａ−抗
−ＴＩＦＲまたは（Ｖ）丁ｄａ−抗−Ｌ７−２．１゜マ
ウスには腫瘍接種後筒４白目および５日目＜’ａ４Ｑ寸
法−０，１ａｍ２）にそれぞれ１α２０μｍおよび／ま
たは抗−Ｌｙ−２，１１２００μＶを与えた。

第１回目の処置の２４時間以内で、工ｄａ−抗−Ｌ７−
２．１処置マウスは平均ｆｉｌ１寸法がＰＢＳ処置マウ
スのそれの２０％であった（すなわち膿瘍塊の８０％減
少（第６図））。抗−Ｌ７−２．１単独および非特異的
な抗−ＴＦＲＭＯＡｂに共有結合したｌａはに３［１１
瘍の生長に影響を及はさカいことが明らかであった。Ｉ
ｄａ単独を与えられたマウスの腫瘍は５０％まで減少し
たが、これらマウ・スのうち３匹は死亡しそして残りは
体重が２５％減少した。工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１を与
えられたマウスのそれぞれの腫瘍生長曲線は処置期間中
１０個の腫瘍のうち９個が退行したことを示しく第７図
）、Ｊｊ＄実腫瘍１０個のうち５個は完全に退縮して再
発せず（＞２００日）、処置完了時に生長し続けていた
ｌｌ！瘍（１０のうち５）はＰＢＢおよび工ｄａ−抗−
ＴＦＲ処置マウスのｉｌｌ　０３より生長速度が遅かっ
た。ｌａ−抗−Ｉ、７−２．１を用いる比較的大きい腫
瘍の静脈内処置を査定するためにもう一つの実験が行わ
れた。ＣＢＦＩ系マウス群（１群１０匹）Ｋ五〇×１０
６個のＥ３細胞を接種し、そして次にマウスに腫瘍接種
後筒６臼目（ｌｌｉ１瘍寸法α２の２）および第７８目
に工ｄａおよび抗−Ｌ７−２．１をそれぞれ１５μｆお
よび９００μｆ与えた（第８図）。工ｄａ−抗−Ｌ７−
２．１処置マウスは７日目までで平均ｌｌ！瘍寸法がＰ
Ｂ８処！マウスのそれの５０％セして工ｄａ−処置マウ
スのそれの６６％であり、この傾向は研究の終了時（第
１８８目）まで続いた。工ｄａ　−抗−Ｌ７−２．１を
与えられたＣＢＩＰ１マウス１０匹のそれぞれの―瘍生
長曲線では―瘍塊のうちの４例が退行しそして１例が完
全になくなったことが示された（＞２００日、データは
示されていない）。

それゆえＩｄａ−抗−Ｌ７−２．１は比較的大きい腫瘍
に対して有効であり、そしていずれの実験においてもＩ
ｄａの抗１１１１瘍活性は抗−Ｌｙ　−２，１ＭｏＡｂ
に結合された場合にかカリ改善された。

Ｉｄａ−抗−２５０−３α６接合体の効力をＣ！ＯＬＯ
２０５異種移植片を担持するヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウ
スで評価した。

２Ｘ１０’個の細胞を腹壁に皮下注射すると４日以内で
触診しうる塊が生じた（約ａ　ｊ　ＤｙＩ３）。

次に１群１０匹ずつのマウスに下記のものの１種を静脈
注射した。すなわち（１）　ＰＢＢ　、　（ＩＩ）　２
５０−３α６、（Ｉｉｌ）　Ｉｉｌａ　＋２５０−５α
６（非接合）ｓ　（＋ｖ）　Ｉａａ　ｓまたは（ｖ）工
ｄａ　−２５０−３０，６接合体。腫瘍接種後筒４％５
％６，１０および１２日目に総量２７５μｆの工ｄａを
連続５回静脈注射した。

ＰＢＢまたは未接合２５０−５１Ｍで処置したマウスの
群では何ら明らかな治療効果が見られなかった。Ｉｌａ
単独では、マウス１０匹中２匹が生き延び、一方弁接合
Ｉｄａ　＋２５０−３０．６を与えられた群ではすべて
のマウスが７日目までに死亡し、体重減少のような先に
示された毒性の徴候を有していた。ｌａ　−２５０−３
０，６接合体を与えられたマウスは腫瘍寸法が劇的に減
少した。これらの結果を第１０図に示す。比較すると、
それぞれのマウスについての腫瘍生長曲線（第１１図）
ではマウス１０匹のうち５匹の＠瘍が７日目までに退縮
したことが示され１次にこれらＩＩＩ傷は生育し始める
が、１０匹のうち２匹は腫瘍がなくなった。とれらマウ
スは毒性による作用を何ら示さなかった。

肺瘍内処置 ＷＩ４瘍内治療は動物およびヒトの腫瘍の免疫療法にと
って有用な技法であることが示されている。従って工ｄ
ａ−抗−Ｌ７−２．１接合体を直接固形１３１１１１５
に投与した場合の抗腫瘍活性を特性化する研究が行われ
た。五０Ｘ１０’個のＥ３細胞を皮下に移植されたＣ！
ＢＦ１マウス１０匹ずつの群では（２）瘍接ａｉ５日後
Ｋ１１ｌＩ瘍が発達した（ｃＬ１〜α２ＣＩＲ２）。処
置はｍ瘍接種後筒５白目および第６８目に行われる２つ
の注射からカリ、マウスには下記のうちの１種が与えら
、れた、すなわち、（１）ＰＢ８　、　（２）工ａａ、
（５）抗−Ｌｙ−２，１、’！たけ（４）工（ＩＩＬ−
抗−Ｌ７−２．１（総Ｉｌａ量＝３ｏｎ２）。工ｄａ　
−抗−Ｌｙ−２，１が最大の抗ｖａ瘍活性を示し、遊離
の工ｄａおよび抗−Ｌｙ−２，１単独は直接腫瘍内に投
与された場合は＠瘍生育に影響し危かった。

工ｄａ−抗−Ｌｙ−２．１処置されたマウスは第８８目
で平均１１１瘍寸法がＰＢ８処置マウスのそれの６０９
にそして第１３日日でｐＢｓＩＡｆｄｊマウスのそれの
３０％であった（第９図）。工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１
処置マウスのそれぞれの腫瘍生長曲線（データは示され
ていない）では処置完了３日後で１匹が完全に退縮し一
方残りのマウスは肺癌生長の低下が遅延することが示さ
れた。

毒　　性 急性１工性実絵を行うためにＣＢＡ　（Ｌ７２．１”）
マウス１０匹ずつの群にＩＩＩＩＩＬ％　Ｉｄａ−抗−
Ｉ、７−２．１または工ｄａ−抗−ＴＦＨのいずれかの
種々の量を１回注射した。Ｉｄａを注射されたマウスの
すべてはもとの体重の２５％までの当初体重減少を示し
たがＩｄａ　−ＭｏＡｂ接合体のいずれかで処置された
マウスでは何ら体重減少は観察され危かった。＄２表は
ＬＤｓｏおよびＬＤＩＱ値に反映されるｌａおよびＩｄ
ａ　−ＭｏＡｂ接合体の毒性を示す。

そこに示されるように、工ｄａ−抗−Ｌ７−２．１のＬ
Ｄｌ　ｏは遊離工ｄａのほんのα７５岬／Ｋｌに比較し
て工ａａ　１０．Ｏｑ／Ｋｐであった。さらに、工ｄａ
−抗−ＴＦＲ接合体はＩ、ＤＨＩ　ａｏＩｌｖ／Ｋｅで
あった。Ｉｄａ　−１＆）Ａｂ接合体はＩ、Ｄ５Ｑの量
までは試験されなかった。

これらの結果は遊離のＩｄａに比較して工ｄａ　−ＭＯ
ムｂ接合体の治療指数が大きいことを示している。

第２表 ＯＤＡマウスに及ぼすイダルビシンモノクローナル抗体
接合体の作用 Ｉｄａ　　　　　　　　　　　　　　　　α７５　　　
　　五〇〇工ｄｅ、−抗−Ｌ７−２．１　　１αＱＱ　
　　ＩＪ、Ｔ。

工ｄａ−抗−’ｒＦＲ１５，００Ｎ、Ｔ。

組織病理学的結果 急性作用：遊離のｌａの静脈投与（１，０ダ／む）によ
り処置１５日後に膵臓の白色髄の萎縮および心筋繊維の
幾分かの肥大が生じた（データは示さず）これと対照的
に、Ｉｄａ−抗−Ｌ７−２．１の１回量（２，４岬／に
９）は１５および３０日後で何ら特異的な組織障害性を
惹起しなかったが肝細胞の幾らかの膨潤が１５日目に観
察された。

実施例　２ マウス （ＤＢＡ／２　Ｘ　ＢＡＬＢ／ｃ　）　ＦｌおよびＣＢ
ＡマウスがＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌ
ｏｇｙ、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＭｅｌｂｏｕｒ
ｎｅで生産された。すべてが同性同年令のマウス１０〜
２０匹からなる実験群を各実験につき用いた。

腫瘍細胞 この研究で検査される細胞系統には（ＬＹ−２）マウス
胸腺腫ＩＴＴ（１）７５　ＮＢ　Ｅ３３柵（２３）　、
（Ｌ３Ｔ４＋）リンパｎ１ＥＬ４　（Ｈｏｒｏｗｉｔｚ
氏他、［５ｃｉ民地ｃｅ　Ｊ　１９６８１６Ｌ）　　５
３３−５３５）、ヒト結腸癌Ｃｏ−１ｏ　２０５　（８
ｏｍｐｌｅ氏他、「Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、Ｊ　１９７
８　３８　１３４５−１５５５）および（Ｌｙ−２−ｔ
　Ｔ−５Ｔ４−　）ヒトＴ−細胞白血病Ｃ′ＥＭ（Ｆｏ
ｌｅｙ氏他、「民地ｎｃｅｒＪ　１９６５　１８　５２
２−５２９）が包含される。細胞は実施例１の記載と同
様にしてインビトロで保持された。Ｐ３８８Ｄ１マクロ
ファージ細胞系統は（ＤＢＡ／２　Ｘ　ＢＡＬＢ／ｃ）
Ｆ１マウスへの連続継代によりインビボで保持した。

腹水液から得られた細胞を洗浄してｐＨ７，３の燐酸塩
緩衝食塩水（ＰＨ１）中で２回遠心分離しく４００９×
５分）、ＰＨ３中に再懸濁させそしてマウスの腹壁中に
皮下注射するとそこで触診しうる腫瘍移植片に発達した
。マウスを一連の静脈処置にかけそして腫瘍寸法を腫瘍
の垂直軸を通ってノギスにより毎日測定した。データは
平均腫瘍寸法として記録された（２つの直径上標準誤差
の結果）。

リン／ぐ球の明確に区別されるサブ集団を特徴ずけるも
のである。マウス細胞表面抗原Ｌ３Ｔ４　。

Ｌｙ−２およびＴｈｙ−１に対するモノクローナル抗体
がモデル系として用いられた。

用いられるＭｏＡｂは（１）マウスＬｙ−２、１と特異
的に反応する抗−Ｌｙ−２，１（マウスＩｇＧ２ａ）（
）（ｏｇａｒｔｈ氏他の「Ｉ民地ｕｎｏｌｏｇｙＪ　１
９８２　４６１３５−１４４）、（１１）マウスＬ３Ｔ
４と特異的に反応するＨ１２９．１９（抗−Ｌ３’Ｉ’
４　）　（ラットＩｇＧ　２　ｂ　）（Ｐｉｅｒｒｅｓ
氏他、ｒＪ、民地ｍｍｕｎｏｌｏｇｙＪ　１９８４　１
３２２７７５−２７８２）、　および（＋＋＋）マウス
チー細胞と反応する抗−Ｔｈｙ　−１（ラットＩｇＧ　
２　ｂ　）　（Ｍａｒｓｈａｋ　−Ｒｏ　ｔｈｓ　ｔｅ
　ｉｎ氏民地ｒ、ｙ、　ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＪ　１９
７９１２２２４９１−２４９７）であった。抗体は実施
例１の記載と同様にして単離し、精製しそして貯蔵した
。抗体活性は実施例１の記載と同様にして羊抗−マウス
イムノグロブリン（ＳＡＭＧ　）を用いるロゼツト形成
アッセイにより測定された。

ＭｏＡｂ　（１〜２Ｗｑ／ｄ）をＮ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド中に溶解された１４−プロモー４−デメトキシ
ダウノルビシン（Ｂｒ−１１ａ　）　（１０ｓｖ／ｄ）
の５〜２０モル過剰と１）Ｈ８，０（α０５Ｍホウ酸塩
緩衝液）および室温で４時間混合した。実施例１の記載
と同様にして反応を進行させ、精製しそして得られる接
合体中にとり込まれたＩｄａ　ｆ）量を測定した。

薬物活性 濃度１〜５Ｘ１．０’個／−の細胞を用いて、実施例１
に記載されるようにして２柵のアッセイ（２４時間およ
び３０分間）を行い薬物活性を査定した。

血清学 抗体力価の測定およびＬ３Ｔ４＋およびＬｙ−２＋細胞
の数を測定するためにこれら実験を通してロゼツト形成
法を用いた。この方法にはリンパ性細胞の表面上の抗体
を検出するために、羊赤血球（８ＲＣ）に結合したラッ
トイムノグロブリン（Ｉｇ）をも検出する結合性ＳＡＭ
Ｇを必要とする。Ｉｇ十牌細胞はその表面Ｉｇが８ＡＭ
Ｇでのキャップ形成により除去されていた（２５μｔお
よび２−１細胞１０７個／μｔ）。次に細胞をイムノグ
ロブリンの再合成を阻止するために０．０１％のナトリ
ウムアジドを含有する培地中水上で保持した。

結果 この研究は別々の相で行われた。

ｆａ）３ｍの異なるＩｄａ−ＭｏＡｂ接合体のインビト
ロ特性化、および ｌｂ）　　次に腫瘍細胞同種移植片の拒否反応前または
その期間中、Ｔ−細胞サブセットを活動的に減少させる
ためＫそれらを使用することについての例示。

マウスＬ３Ｔ４、Ｌ７−２および’ｒｈｙ−１抗原に対
するＭｏＡｂにＢｒ−Ｉｄａを共有結合させた。反応条
件はＭｏＡｂに添加されるＢｒ−Ｉｄａの過剰モルを変
動させそして比較的高いＩｄａとり込みと比較的低いタ
ンパク質回収との間を妥協させることによりその接合に
ついて設定された。Ｉｄａ−抗−Ｌ３Ｔ４（第１２図）
、Ｉｄａ−抗−Ｌｙ−２，１およびＩｄａ−抗−Ｔｈｙ
−１（データは示さず）は３〜６分子のＩｄａをとり込
み、タンパク質回収は５０％より大きかった。

抗体活性 接合の前および後における抗体の力価はロゼツト形成法
により計測しそしてＥ３標的細胞の５０％がロゼツトを
示す希釈度として測定された。１，４および７分子のＩ
ｄａを含有するＩｄａ　−抗−Ｔｈｙ　−１接合体ハソ
れぞれ抗体力価１　：４２５０００　。

１　：１７００００および１　：１３００００を有し、
一方修飾されてない抗体力価は１：５５００００であっ
た（第１５図）。すなわち、Ｉｄａへの接合に際して抗
体活性が幾分か損失される。しかしながら、４分子未満
のＩｄａ分子がＭｏＡｂに接合した接合体がインビトロ
およびインビボ研究に用いられた。同様にＩｄａ−抗−
Ｌ７−２．１およびＩｄａ−抗−Ｌ３Ｔ４接合体、の抗
体活性（データは示さず）はいずれの場合も６分子より
多いＩｄａ分子がＭｏＡｂにとり込まれるとかなり低下
した。

Ｉｄａ　−ＭｏＡｂ接合体の細胞障害性を種々の反応性
標的細胞について２４時間アッセイを用いて試験し、遊
離Ｉｄａのそれと比較した。遊離Ｉｄａの活性はＩｄａ
　−ＭｏＡｂ接合体より４〜１０倍大きく、遊離Ｉｄａ
の試験された腫瘍細胞系統に対するＩＤ５ｏ　（対照の
〔５Ｈ〕−チミジンとり込みの５０％阻害）は６．６〜
９．０Ｘ１０　　Ｍにあった。Ｉｄａ−抗−Ｌｙ−２，
１接合体は、Ｌ７−２抗原が富化された在来細胞系統の
変種であるＩＴＴ（１）　７５Ｎ８　Ｅ３細胞系統に対
して試験された場合に最′も細胞障害性が大きい接合体
であることが明らかであった（ＩＤｓ。

＝４．３Ｘ１０　　Ｍ）。標的細胞に対する接合体作用
の選択性を検査するために、Ｉｄａ−ＭｏＡｂ接合体を
標的細胞と３分間インキュベートし、次に結合されなか
った接合体を洗い去りそして細胞障害性について測定し
た。この３０分間アッセイを用ると、非反応性のＩｄａ
−ＭｏＡｂ接合体は遊離Ｉｄａのそれより１０〜５０倍
大きいＩＤ５ｏを有しており、このことはＩｄａ　−Ｍ
ｏＡｂ接合体の細胞障害性にとって抗体結合が必須要件
であることを示している。この研究で用いられたＭｏＡ
ｂのいずれも補体の非存在下では標的細胞に対しインビ
トロで何ら細胞障害性作用を有しなかったことは注目さ
れるべきである。結果を第３表にまとめる。

ンビボ効力 Ｉｄａ　−ＭｏＡｂ接合体が肺臓からＬ３Ｔ４＋または
Ｌｙ−２細胞を選択的に減少させうる能力について試験
すること罠よりその接合体のインビボ免疫抑制効力をＭ
ｏＡｂ単独のそれと比較した。ＣＢＡマウスに第０．２
．５および１０日口の４回、抗−Ｌｙ　−２，１または
抗−Ｌ３Ｔ４接合体（Ｉｄａ　３０　Ｐ９１Ｍｏｋｂｔ
５ｖ）をｔ＃脈注射しそして膵臓中のＬｙ−２＋または
Ｌ３Ｔ４　　ｍ胞の数をｐゼット形成アッセイにょ９監
視した。各処置につき２匹の処置マウスの肺臓細胞を毎
日検査し、そしてその結果を平均した（第１４図）。正
常マウスにおける第０日目の総肺臓細胞の約３０襲から
第２０日までのＺｄａ−抗−Ｌ３’ｒ４処置マウスにお
け約４弧までＬ３’ｒ４”細胞の数が速やかに低下した
。これらＬ５Ｔ４＋［胞は６０日以上にわたり減少した
ままであり次に徐々に増加がみられた。抗−Ｌ３Ｔ４単
独でのインビボ処置後の減少でもＬ３Ｔ４＋細胞数の急
激な低下を招来した（３０邦から５％へ）。

Ｉｄａ−抗−ＬＹ　−２，１接合体は膵臓Ｌ７−２＠胞
数を１０日までで２５％から５襲まで低下させた。

しかしながら、Ｌｙ−２細胞の数は第１５日月までに増
加し始め、そして４０〜５０日目まで白目常に戻った。

抗−Ｌｙ−２，１ＭｏＡｂ単独ではＬｙ−２＋細胞を有
意に減少させることができなかったことは興味深い。未
処置対照マウスにおけるＬｙ−ｔおよびＬ５Ｔ４＋細胞
数の変動はマウス間の自然の変異によると見なされた。

かくの如＜、Ｉｄａ−抗−Ｌ３Ｔ４およびＩｄａ−抗−
Ｌ７−２．１のいずれも処置マウスの肺臓からＭｏＡｂ
単独より効果的にそれぞれＬ３Ｔ４”　＊たはＩ、ｙ−
２＋細胞を減少させうろことは明らかであった。Ｉｄａ
−抗−ＬＹ　−２，１接合体の作用は重要である。何故
なら抗−”Ｉ　−２，１ＭｏＡｂは単独で用いられた場
合は全く効力がないが、しかしＩ（ｉｌｌに結合された
場合は強力な免疫抑制剤に変換されうるからである。そ
れゆえ薬物−ＭｏＡｂ接合体により維持される減少は移
植片拒否反応におけるＬｙ−２＋およびＬ３’ｌ’４＋
細胞のインビボにおける役割を検査するのに適する。

これらの実験においては、Ｉｄａ−抗−Ｌ３ｒＩ′４、
Ｉｄａ−抗−ＬＹ−２，１およびＩｄａ−抗−Ｔｈｙ　
−１接合体をＣＢＡ″ｌｒウスにおけるＰ５８８Ｄ１腫
瘍移植片の生存時間を高めるのに用いた。この同種移植
片はＨ−２（クラス■および■）および非−Ｈ−２障壁
を包含するものである。

１詳１０〜１５匹ずつのＣＢＡマウスの群に８．０Ｘ１
０’個のＰ３８８Ｄｉ腫瘍細胞を皮下注射しそして第一
１、第Ｏ（腫瘍接種当日）、第３、第５および第１０８
目に下記のうちの１つを静脈投与した、すなわち、ｍ　
ＰＢＳ　、　（＋＋）抗−Ｌ３Ｔ４および抗−ＬＹ　−
２，１，０ｆｆ）　Ｉｄａ−抗−Ｉ、３Ｔ４．４Ｖ）　
工ｄａ−抗−ＬＹ−２，１およびＭ　Ｉｄａ−抗−Ｌ３
Ｔ４および工ｄａ−抗−Ｌｙ−２，１゜投与されたＩｄ
ａおよびＭｏＡｂの総量はそれぞれ１２５μ７および５
．７５■であった。ＰＢＳおよびＭｏＡｂ処置両マウス
の腫瘍移植片は１４〜１７日間生存し、最大平均腫瘍寸
法は０．３１　ｃｍ２であった。このことは両未接合Ｍ
ｏＡｂを一緒にしたものが腫瘍移植片が生存しつるに有
効に’、３Ｔ４＋お、よびＬ　ｙ−２＋釧胞を減少させ
ることができなかったことを示している（第１５図）。

さらに、Ｉｄａ−抗−Ｌｙ−２，１またはＩｄａ−抗−
Ｌ３Ｔ４単独では移植片の生存期間を延長させうるのみ
（２０〜２８日）でありその最大平均腫瘍寸法は０．４
０〜０．５０　ｃｍ２であつた。恐ら＜　Ｉｄａ−抗−
Ｌｙ−２，１またはＩｄａ−抗−Ｌ３Ｔ４単独ではすべ
てのＴ−細胞を除去せず、そして強力な抗原挑戦（全Ｍ
ＨＣ相異で見られるように）により残留するＬＹ−２＋
およびＬ３Ｔ４＋細胞の増殖および拒否反応を惹起する
ことができるのであろう。これと比較してＩｄａ−抗−
ＬＹ−２，１およびＩｄａ−抗−Ｌ３’ｒ４接合体の両
方を組み合せると、１４／１５Ｐ３８８Ｄ１腫瘍＃植片
の拒否反応を回避でき、マウスが殺されるまで寸法を増
大させることができた（第５０日目、２．００倒２）。

これら接合体処置Ｐ３８ＢＤＩ腫瘍のうちの少数が第８
日日から第１６日目まで幾分か寸法減少を示したことは
注目される。しかしながらＬ３Ｔ４＋およびＬ７−２＋
細胞を連続的に減少させると（第１０８目）、Ｐ３８８
Ｄ１腫瘍移植片を一貫して生育させることができた。

（ｂ）　　Ｉｄａ−抗−Ｔｈｙ　−１接合体１群当り１
０匹のＣＢＡマウスからなる群に１０７個のＰ５８８Ｄ
１腫瘍細胞を皮下注射しそして第一１．０．５および６
８目に下記のものの１つを静脈投与した、すなわち、（
１）　ＰＢＳ、（１１）抗−’ｒｈｙ　−１および（ｉ
ｌｌ）　Ｉｄａ−抗−Ｔｈｙ　−１。投与されたＩｄａ
および抗−Ｔｈｙ　−１の総量はそれぞれ１３０μりお
よび５．４ｑであり、そしてＰＢ８処置されたマウスの
腫瘍移植片は１５日間生存した。抗−Ｔｈｙ−Ｉ　　Ｍ
ｏＡｂ単独では腫瘍移植片が２８〜６２日間生存でき、
最大平均腫瘍寸法は０．５８ｍ２（第６日月）であった
（第１６図）。

Ｉｄａ−抗−Ｔｈ７−１処置マウスでは、腫瘍移植片の
３０％が４０日日目でに完全に拒否され、一方残る７０
％は生育を続け、結局は（第３２８目）その群の平均腫
瘍寸法を高めることになった。それゆえＩｄａ−抗−Ｔ
ｈｙ　−１は、Ｉｄａ　−抗−Ｌ７−２．１およびＩｄ
ａ−抗−Ｌ３Ｔ４の組み合せζ同様にＬ７−２＋および
Ｌ３Ｔ４＋細胞を減少させることができ、従って大多数
のｐ３８８Ｄ１１１ｇ移植片が、通常は速やかな筈の拒
否反応を伴わずにＣＢＡマウス中で生存できた。

実施例　３ 実施例１記載の操作に従い、Ｉｄａとモノクローナル抗
体１７．１　（Ｊｈｏｍｐｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ｃａｎｃｅｒ、　Ｉｎ５ｔ、　７０．４０９〜４１９　
、１９８３．　Ｍｕｒｉｎｅ　ＩｇＣ）２ａ）との間お
よびＩａａとモノクローナル抗体５０．６（Ｔｈｏｍｐ
ｓｏｎ　ｅｔ、　ａｌ、、　Ｂｒ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅ
ｒ　４７．５９５＋−６０５゜Ｍｕｒｉｎｅ　ＩｇＧ　
２ｂ）との間で接合体を調製した。

ヒト結腸癌Ｃｏ１ｏ２０５細胞（５０，６，１７，１）
を実施例２記載のよう、にして１マウス当り細胞８×１
０６個でヌードマウスに皮下接種した。この接種された
マウスを次に一連の腹腔的処置にかけた。腫瘍の寸法を
ノギスを用い、腫瘍の垂直軸を通って計測した。データ
は平均腫瘍寸法として記録した（２つの直径士標準誤差
の結果）０その結果を第１７図に示す。

実施例　４ 実施例１記載の操作に従い、Ｉｄａとモノクローナル抗
体１７１との間、Ｉｄａとモノクローナル抗体ＪＧＴ−
１５（マウスＩｇＣ）１、結腸カルシノーマ上のカルジ
ノエンブリオニック抗原とは反応性であるが通常組織と
は反応性ではない）との間、Ｉｄａとモノクローナル抗
体２Ｚ１（マウスＩｇＧ１、多くの結腸暉瘍上のヒトミ
ルクファツトグロブリン抗原とは反応性）との間、およ
びＩｄａとモノクローナル抗体３０．６との間で接合体
を調製した。ＬＩＭ２２１０ヒト結腸腫瘍異種移植片（
１〜５■）をヌードマウスに移植（ＳＣ）　した６移植
されたマウスを次に一連の静脈内処置にかけた。、腫瘍
の寸法を腫瘍の垂直軸を通ってノギスで計測した。デー
タは平均腫瘍寸法として、記録した（２つの直径上標準
誤差の結果）。結果を第１８図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗−Ｌｙ−２，１へのイダルビシン（Ｉｄａ　
）の結合を示す。 第２図はＩＴＴ（１）７５　Ｎ　Ｓ　Ｅ　！ｌ標準細胞
上の抗−Ｌｙ−２，１接合体の抗体希釈度に対するロゼ
ツト形成細胞％として測定された抗体力価を表わす。 第３図はＥ３細胞に及ぼすＩｄａ　（−印）またはＩｄ
ａ−抗−ＬＭ　−２，１の２４時間アッセイにおける阻
害作用を示す。 第４図は（Ｌｙ−２）Ｅ３細胞に及ぼすＩｄａ　（ＩＩ
Ｉ印）、Ｉｄａ−抗−Ｌｙ−２，１（０印）またはＩｄ
ａ　−抗−ＴＦＲ（Ｏ印）の３０分間阻害アッセイにお
ける阻害作用を示す。 第５図はＥ３標的細胞に及ぼすＩｄａ−抗−Ｌｙ−２，
１、工ｄａ５モル／抗体モル（○印）および接合体＋抗
−Ｌｙ−２，１（・印）の３０分間特異性アッセイにお
ける阻害作用を示す。 第６図は２Ｘ１０６個の細胞を皮下注射されたＣＢＦ　
１マウスにおけるに３Ｍ腺雑の生育を示す（静脈処ｂｆ
ｆｆｉ）。 第７図は２．０Ｘ１０６個のｗ　３　腫瘍細胞を皮下注
射しそして第４日日および５日目にＩｄａ−抗−ＬＹ−
２，１接合体で静脈処置されたＣＢＦ１マウスのそれぞ
れの腫瘍生長曲線を示す。 第８図は３．０Ｘ１０’個の細胞を皮下注射されたｃＢ
Ｆ１マウスにおけるｇ３Ｍ腺腫の生長を示す（静脈処置
）。 第９図は５．０Ｘ１０６個の細胞を皮下注射されたＣＢ
ＦＩマウスにおけるＥ３胸腺腫の生長を示す（腫瘍内処
Ｗ）。 第１０図は２Ｘ１０６個の細胞を皮下注射されたヌード
マウスにおけるＣ０ＬＯ２０５ヒト腫瘍異種移植片の生
長を示す（静脈処ｔｆ）。 第１１図はＩｄａ−２５０−３０，６接合体で静脈処＠
（矢印）された異種移植されたヌードマウスのそれぞれ
の腫瘍生長曲線を示す。 第１２図は抗−Ｉ、！ｌＴ４　（０，５■）に対するイ
ダルビシン（Ｉｄａ　）の結合を示す。 第１３図はＩＴＴ（１）７５　Ｎ　Ｓ　Ｂ５標的細胞上
の抗−Ｔｌ’１Ｙ−１接合体の抗体希釈度に対するロゼ
ツト形成細胞％として測定された抗体力価を表わす。 第１４図はＩｄａ−抗−Ｌ３Ｔ４処ｆｉｔ　（ｅ−＠　
）　、抗−Ｌ３Ｔ４処Ｌ？０トム）、工ｄａ−抗−ＬＹ
　−２，１処貯（ｅ・・・・・）、抗−Ｌ７−２．１処
置（ム・・・ム）または未処［（口・・・口）−ｒウス
の肺臓における多数のＬ３Ｔ４＋およびｔ＋ｙ−２＋細
胞に及ぼすＩｄａ−ＭｏＡｂおよびＭｏＡｂ処置の影＃
について示す。 第１５図はＣＢＡマウスにおけるＰ３８８Ｄ［腫瘍移植
片の生存に及ぼす組み合せＩｄａ　−ＭｏＡｂ接合体処
置の影響について示す。 第１６図はＣＢＡマウスにおけるＰ３ＢＢＤＩ腫瘍移植
片の生存に及ぼすＩｄａ−抗−Ｔｈｙ　−１接合体の影
響につい【示す。 第１７図は細胞８Ｘ１０個／マウスを注射されたヌード
マウスにおけるＣ０ＬＯ２０５（３０，６，１７，１＋
）異種移植片の生長を示す（腹腔内）。 第１８図は腫瘍断片を移植されたヌードマウスにおける
ＬＩＭ２２１０ヒト結腸腫瘍異種移植片の生長を示す。 同　　　　ザ・ユニパーシティ・オブΦメルボルン外２
名 Ｆｌ々、１ 口 Ｆｊｇ、９ （キ千　　　　（ 〜、１１ ！牛（平生 ０　　７０　１４０　２１０　２８０　３’＋ＯｊＪＯ
防Ｕｂ６υＦｉｇ、７７ １１＋　　　　　号管

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）モノクローナル抗体にまたはその抗体の抗原結合部
   位の少くとも１個所を含有するその断片に接合されたイ
   ダルビシンからなるイムノグロブリン接合体。 ２）モノクローナル抗体またはその断片が所望の標的組
   織に対して特異的である請求項１記載の接合体。 ３）前記標的組織がヒト新生物である請求項２記載の接
   合体。 ４）前記モノクローナル抗体またはその断片がＴ−リン
   パ球細胞表面抗原に対して特異的である請求項１記載の
   接合体。 ５）２〜８個のイダルビシン分子がそれぞれの抗体分子
   に共有結合されている請求項１〜４のいずれか１項記載
   の接合体。 ６）イダルビシンがそのＣ−１４位でモノクローナル抗
   体にまたは抗体断片に接合されている請求項１〜５のい
   ずれか１項記載の接合体。 ７）イダルビシンをモノクローナル抗体またはその断片
   に接合されることからなる請求項１〜６のいずれか１項
   記載のイムノグロブリン接合体の製法。 ８）１４−ハロ−イダルビシンをモノクローナル抗体ま
   たはその断片と反応させることからなる請求項７記載の
   方法。 ９）製剤上許容されうる担体または希釈剤、および活性
   成分として請求項１〜６のいずれか１項に記載されるか
   または請求項７または８記載の方法により製造されたイ
   ムノグロブリン接合体を含有する医薬組成物。 １０）細胞の集団からＴ−リンパ球のサブセットを特異
   的に減少させるにあたり、前記モノクローナル抗体また
   はその断片が減少されるべきリンパ球上に存在する細胞
   表面抗原に対して特異的である請求項１記載のイムノグ
   ロブリン接合体と細胞とをインビトロでインキュベート
   することからなる方法。