JPH10508868A

JPH10508868A - ＴＰ−３／ｐ８０を標的とする癌の生物療法

Info

Publication number: JPH10508868A
Application number: JP8521737A
Authority: JP
Inventors: アックン，ファティー・エム; アンダーソン，ピーター・エム
Original assignee: University of Minnesota
Current assignee: University of Minnesota
Priority date: 1995-01-13
Filing date: 1996-01-11
Publication date: 1998-09-02
Also published as: US6042829A; WO1996021467A1; US5690935A; EP0802799A1; CA2209767A1; AU4652496A

Abstract

(57)【要約】ヒトのある種の癌を処置するのに効果的な細胞障害性生物療法剤が提供され、それはアメリカヤマゴボウ抗ウイルス・タンパク質（ＰＡＰ）に化学的にコンジュゲートしたＴＰ-3 ネズミ・モノクローナル抗体を含む。少し修飾することにより、本発明の方法は、ＴＰ-3またＴＰ-1抗体あるいはＰＡＰ毒素を用いて、他の細胞障害性生物療法剤の製造および使用に、一般的に適用される。本発明は、腫瘍細胞の表面または腫瘍血管のいずれかでＴＰ-1／ＴＰ-3抗体により認識されるｐ80抗原を発現する患者に用いられ得る。

Description

【発明の詳細な説明】ＴＰ−３／ｐ８０を標的とする癌の生物療法発明の背景骨肉腫中胚葉由来の悪性腫瘍である肉腫は、主に骨および柔組織で発達する。McClay 等著、『骨および柔組織の肉腫の処置に関する免疫療法的な試み』、Seminars i n Oncology 、16，328(1989)。また、これらの組織は成人ヒト体重の60％以上を占めている。McClay著、『骨および柔組織の肉腫の疫学』、Seminars in Oncolo gy 、16，264(1989)。しかし、この組織での悪性腫瘍が減退することはまれである。1994年には新しいケースの骨肉腫2000件と新しいケースの柔組織の肉腫6000 件が存在したと推測されている。American Cancer Society: Cancer Facts and Figures-1994 、ニューヨーク、American Cancer Society、1994，p.6。またそれらはアメリカ合衆国で診断された全ての癌の約0.8％を占めている。これらの肉腫は一般的ではないが、これらの腫瘍をもつかなり多くの患者が転移性疾病が原因で死亡している。事実、1972年以前は転移性骨原性肉腫の症状をもつ患者の致死率は100％であった。Frei等著、『骨原性肉腫：治療的処置の発展』：Frontiers of Osteosarcoma Research、Novak等著、HogrefeおよびHuber 監修、pp.5-13(1993)。転移疾病のない患者は、その大半が原発性腫瘍を処置するために切断手術を必要としており、また切断したにもかかわらず80％で再発し、主に肺転移が原因で死亡する。Bruland等著、『放射免疫検出法および放射免疫治療：骨原性肉腫の治療技術における有益な試み？』、Frontiers of Osteosa rcoma Research 、Novak等著、HogrefeおよびHuber監修、pp.149-159(1993)。アジュバント化学療法により再発することのない、また完全な生存は、実質的に増加している。しかしながら、ここ20年間の間で、骨原性肉腫をもつ患者の処置において、大量のメトトレキセート、ドキソルビシンおよび例えばシクロホスファミド、イホスファミドおよびシスプラチンのようなアルキル化剤を含む治療法を用いて、かなりの進展がみられたにもかかわらず、これらの患者の40％がまだこの疾病で死亡している。Ward等著、『第IIＢ段階の四肢骨肉腫の転移性肺腫瘍および続発性転移性肺腫瘍』、Journal of Clinical Oncology，12，1849(1 994)。第一選択薬で処置した後に化学療法耐性腫瘍細胞が再成長し、骨肉腫が再発した患者に積極的に第二選択薬の化学療法を用いても二義的な効果しか得られないようである。従って、骨肉腫をもつ患者には疾病の早期発見および、化学療法剤耐性疾病の除去が必要である。上記したように、アジュバント化学療法はユーイング肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含めた数多くの肉腫に対する標準的な処置法である。 Balis等著、『化学療法の一般原理』、小児腫瘍学の原理と診療、第2版、Pizzo 等著、J.B.Lippincott Company監修、フィラデルフィア、pp.197-245(1993)。しかしながら、診断時に転移性疾病を伴うものまたは肺転移進行後の成人柔組織肉腫および骨肉腫において化学療法の有意義な利点を見い出すことはより困難である。Elias等著、『柔組織肉腫のアジュバント化学療法：効果的な養生法の探索の試み』、Seminars in Oncology，16，305(1989)；Meyers等著、『初期の症状における臨床的に検知可能な骨原性肉腫』、J.of Clinical Oncology，11，449( 1993)。薬物ターゲティングは正常組織を損傷せず悪性腫瘍細胞を殺滅する将来性のある新しい試みである。薬物ターゲティングにおける躍進はハイブリドーマ技術の出現であり、これはモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）を臨床に適用するというものである。腫瘍細胞の特定の個体群に選択性をもつ薬剤を構築するために、ＭｏＡｂまたはその他の細胞標的タンパク質を細胞障害性薬剤と結合させて生物療法剤と呼ばれる分子を形成し、これはすなわち担体部分（例えばＭｏＡｂ）の選択性に細胞毒性効力を付与したものとなる。担体部分は、酵素または蛍光標識した抗体との反応で決められた悪性腫瘍細胞の表面抗原プロフィールに基づき選択し得る。過去十年間、様々な種類の癌の処置のために生物療法が研究されており、より近年には、慢性関節リウマチおよび後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）のような免疫学的疾病の処置のため生物療法の研究が行われている。これらの薬剤は、特定のヒト病理に対する安全かつ効果的な治療法を提供する可能性があることが分かっているけれども、まだ多くの難問が残っている。理想的には、標的細胞上に常時存在する信頼し得る標識があれば、生物療法剤の結合部位が非標的組織に結合するのを完全に防げるだろう。現実的には、生命維持に絶対必要な器官により発現された抗体との間で交差反応を起こすためにin vivoの適用においてしばしば許容できない合併症を引き起こす。疾病が進行する過程で患者はすでに免疫反応が抑制されているかもしれないけれども、生物療法剤（特に天然ヒトタンパク質でない場合）の分離成分に対して免疫応答を示す可能性もある。さらに、患者が耐え得る用量には限界があることから、in vitroの研究で得られた細胞障害性を、臨床に応用するには限界がある。さらに、固形腫瘍は完全に浸透するのが難しく、結果として再発の原因となり得る疾病を残してしまう可能性がある。最後に、肉腫の希少性および不均一性のために、これらの癌に対する生物療法剤の開発が困難となっている。McClay、E.F.、『骨および柔組織の肉腫の疫学』、Semi nars in Oncology ，16，264(1989)、McClay等著、『骨および柔組織の肉腫の処置に対する免疫療法的試み』、Seminars in Oncology,16,328(1989)。このように、肉腫で苦しむ患者に新しい処置法を開発することが強く必要とされている。新アジュバント化学療法による骨肉腫の壊死度合が、疾病を伴わず生存するかどうかの非常に有意な指標となることが示されているため、新アジュバント化学療法にあまり反応を示さない患者または転移疾病をもつ患者に対する新規な処置法の開発ならびに新アジュバント化学療法に対して好ましい初期反応を示す骨肉腫患者の割合を増加させることが必要である。Raymond等著、『骨肉腫化学療法効果：予後の因子』、Seminars in Diagnostic Pathology，4，212(198 7)；Winkler等著、『骨肉腫の新アジュバント化学療法：組織学的腫瘍応答に基づくサルベージ化学療法を用いた無作為的協同試験（COSS-82）の結果』、J.of Clinical Oncology ，6, 329(1988)。発明の要約本発明は、担体、好ましくはｐ80細胞表面レセプターに結合する抗体または抗体断片に結合している毒素、好ましくはアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）からなる、細胞障害性生物療法剤に関するものである。ｐ80抗原は、骨肉腫または柔組織肉腫のような癌の腫瘍血管ならびに腫瘍細胞と関係する。該生物療法剤の毒素部分は、抗体特異性の細胞表面レセプターを発現しない周辺の正常組織に対する有意な非特異的細胞毒性なしに(すなわち副作用が無害である)、標的腫瘍細胞の分裂を阻害したりまたは殺滅する。さらに、生物療法剤は個々の腫瘍細胞に対して細胞障害性を現し、直接的に標的腫瘍を殺滅するだけでなく、腫瘍に酸素や栄養物を運搬する血管を殺滅し間接的にも標的腫瘍を殺滅する。異種移植したヒト骨肉腫の急速な壊死がＳＣＩＤマウスモデルで観察された。最も重要なことに、ヒト骨肉腫を用いて異種移植したＳＣＩＤマウスの寿命は、ＴＰ-3-ＰＡＰで処置すると著しく改善され、これは腫瘍発育をこの生物療法剤が阻害したためである。ＰＡＰ単独またＴＰ−3単独のいずれも、非常な高濃度においても腫瘍細胞成長を阻害しなかったため、本発明の生物療法剤が示す細胞障害性は予期できない効力があった。本発明は、部分的にはＴＰ-1およびＴＰ-3モノクローナル抗体により認識されるｐ80抗原が肉腫に明らかに独特なものであり、さらに、ＴＰ-1／ＴＰ-3抗原の分布は正常細胞上では数が極めて限定されているという発見に基づいている。このように、本発明の好ましい態様は、肉腫細胞上のレセプターに特異的に結合するモノクローナル抗体または抗体断片といった担体に結合している、細胞障害性量のＰＡＰ分子からなる。このように、好ましい担体は、ＴＰ-1およびＴＰ-3ならびにＴＰ-3の活性断片であるＦａｂまたはＦａｂ₂、および標的抗原を認識する組換え抗体であるＴＰ-1またはＴＰ-3の単鎖ＦＶ（scＦＶ）である。最も好ましくは、使用する担体がＴＰ-3であるかまたはその活性断片Ｆａｂ、Ｆａｂ₂またはscＦＶである。ＰＡＰおよび好ましい担体とのコンジュゲートにより生じる生物療法剤は意図するＴＰ-3-ＰＡＰとなり得る。ここで使用しているように、用語『担体』は抗体、抗体断片およびそのサブユニットを含むものであり、これらは結合特異性においては少なくとも等価である。ここでＰＡＰに関して使用しているように、『細胞障害性量』は、少なくとも一つのＰＡＰ、すなわち、1-3分子のＰＡＰが各抗体分子に結合していることを意味している。本発明は、また標的癌の処置に対する治療法にも関するものである。本方法は標的癌で苦しむ患者に、有効細胞障害性量のＰＡＰに共有結合的に結合しているモノクローナル抗体ＴＰ-3を構成成分とする生物療法剤からなる医薬組成物の有効量を、薬学的に許容できる担体との組み合わせで非経口的に投与することを含む。ここで使用しているように、用語『標的癌』はＴＰ-1およびＴＰ-3により認識される抗原すなわちｐ80抗原を発現するホ乳動物細胞の増殖に関連した疾病を意味する。ｐ80抗原は標的癌の腫瘍血管または腫瘍細胞自身のいずれかに発現し得る。このような標的癌は、以下に限定されることはないが、骨肉腫、血管外皮細胞腫、軟骨肉腫、悪性腫瘍繊維性組織球種（ＭＦＨ）、カポジ肉腫、繊維肉腫および滑膜細胞肉腫を含むその他のヒト肉腫を含む。ここで使用しているように、用語『ＰＡＰ』はサブタイプであるＰＡＰ-IIおよびＰＡＰ-Ｓを含めた、あらゆる細胞障害性アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質またはその誘導体を意味する。この免疫毒素の示す高い細胞障害作用は予期していないものであった。というのもＰＡＰまたはＴＰ-3だけでは当量またはそれ以上の濃度でも細胞障害性が見られなかったからである。さらに、ＴＰ-3-ＰＡＰは、白血病関連の抗原（例えばＢ43-ＰＡＰ）に対するＰＡＰ免疫コンジュゲートよりもはるかに効力があることが発見された。さらに、ｐ80抗原は様々な種類の癌および骨肉腫の出芽毛細血管上に存在しているので、ＴＰ-3-ＰＡＰのようなｐ80指向の、生物療法剤は、選択的に癌細胞を破壊するだけでなく腫瘍の血管内皮細胞をも破壊することにより、肉腫の成長を阻害し得る。１ミリ以上の大きさの腫瘍はいずれも新生血管が同様に成長することを必要とするので、そのような新生血管の破壊は究極的には腫瘍の死につながる。Folkman等著、Biologic Therapy of Cancer、DeVita等著、J.B.Lippincot t Company監修、pp.743-753(1991)。さらに、そのような破壊は抗腫瘍薬が腫瘍の固形組織に侵入するのを容易にし得る。他の言葉でいえば、腫瘍血管の破壊に加えて、ＴＰ-3-ＰＡＰ生物療法剤は、抗腫瘍薬が腫瘍に侵入し得る腫瘍血管の障害部位または『窓』を提供することで抗腫瘍薬の侵入を助け得る。このように、本発明のさらなる態様は１つ以上の慣用的な抗腫瘍薬の有効量の投与を伴う生物療法剤の投与を含む。好ましくは、用いる抗腫瘍薬はドキソルビシン、メトトレキセート、エトポシドおよび、オキシアザホスホリン(シクロホスファミドおよびイホスファミド)のようなアルキル化剤、およびシスプラチンおよびカルボプラチンのようなプラチナ化合物である。図の簡単な説明図1Ａ、1Ｂおよび1ＣはＴＰ-3-ＰＡＰの精製および同定を示している。具体的には、図 1Ａは、ＨＰＬＣ溶出クロマトグラムであり、38分にＴＰ-3-ＰＡＰの溶出が、56分に遊離のＰＡＰの溶出がみられる。図 1Ｂは、ＴＰ-3およびＴＰ-3 -ＰＡＰのクーマシーブルー染色ゲルであり、図 1Ｃは、抗-ＰＡＰを用いて行ったウエスタンブロットである。図 2Ａおよび2Ｂは、³Ｈチミジン取り込み解析により決定した、ＴＰ-3ＭｏＡｂ、ＰＡＰおよびＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素で処理後のヒトＯＨＳ骨肉腫細胞の増殖を図示したものである。具体的には、図 2Ａでは、ＴＰ-3ＭｏＡｂではなくＴＰ-3-ＰＡＰのみがＯＨＳ細胞の成長を阻害したが、一方、図 2Ｂでは、ＴＰ-3 結合部分が低濃度でＯＨＳ細胞に対するＰＡＰ毒素効果をもたらすのに必要であったことが示されている。ＣＤ19陰性ＯＨＳ細胞に結合しない抗-ＣＤ19-ＰＡＰ免疫毒素であるＢ-43-ＰＡＰは非常に高い濃度（＞1000ｐＭ）でも小さな効果しかなかった。図 3Ａおよび3Ｂは、ＴＰ-3陰性細胞系でのＴＰ-3-ＰＡＰの効果を示している。具体的には、図 3Ａは、犬Ｄ17骨肉腫の培養に対するヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)、ＴＰ-3ＭｏＡｂ、ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素またはＢ43-ＰＡＰ免疫毒素の効果を示している。図 3Ｂは、ＣＤ19＋ＲＳ4;11ヒト急性リンパ性白血病におけるＨＳＡ、ＴＰ-3ＭｏＡｂ、ＴＰ-3-ＰＡＰおよびＢ43-ＰＡＰの効果を図示している。図4はＭＣＡ106肉腫肺転移に対するＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素の用量反応を図示している棒グラフである。図5は、Ｃ.Ｂ.-17-ＳＣＩＤマウスの右後方の足に注射後の皮下ＯＨＳ（ヒト骨肉腫）の腫瘍容積に対するＴＰ-3-ＰＡＰの効果を示している。図6は皮下のヒト骨肉腫（ＯＨＳ）を注射し、続いてＰＢＳまたはＴＰ-3-ＰＡＰのいずれかで処理し、腫瘍を残すことなく助かったマウスの生存率を図示している。発明の詳細な説明免疫毒素免疫毒素（抗体−毒素コンジュゲート）は、比較的新しい部類の生物療法剤であり、細胞型特異的ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を、数多くある触媒酵素の１つと共有結合で直接にまたは結合剤を介して、共有結合的に結合させて調製する。Pastan等著、『免疫毒素』、Cell，47，641(1986)。下記するように、肉腫の場合、免疫毒素についての技術はＴＰ-3およびＴＰ-1ＭｏＡｂを効果的に治療利用するための効力のある方法を提供する。１．モノクローナル抗体モノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）は脾リンパ球と骨髄原発性腫瘍の悪性腫瘍細胞（骨髄腫）を融合することで産生される。Milstein、Sci.Am.，243 ，66(1980) 。この方法では、単一融合細胞ハイブリドーマまたはクローンから生じたハイブリッド細胞系が得られ、これはリンパ球および骨髄腫細胞系の両方の特徴を有する。リンパ球（抗原としてヒツジ赤血球をもつ動物から取得）のように、融合ハイブリッドまたはハイブリドーマは抗原と反応する抗体（免疫グロブリン）を分泌する。さらに、骨髄腫細胞系のように、ハイブリッド細胞系は不死である。特に、ワクチン接種した動物由来の抗血清は、全く同じには再生産できないような様々な抗体の入った混合物であり、一方、ハイブリドーマにより分泌された単一型の免疫グロブリンは、抗原分子構造または抗原決定基（エプトープ）を複数有する複合分子である抗原上に存在する、唯一の抗原決定基に特異的である。このように、単一の抗原から生じたモノクローナル抗体は、形成を促す抗原決定基に依存して互いに異なり得る。しかしながら、一つのクローンにより産生された全ての抗体は同一である。さらに、ハイブリッド細胞系は際限なく再生産し得、in vit roおよびin vivoで容易に増殖し、極度に高濃度のモノクローナル抗体を産生する。ａ．ＴＰ-1／ＴＰ-3 骨および柔組織の肉腫は一般にまれであるので、その個々の型はさらにまれである。このことが腫瘍特異的なＭｏＡｂの発展を妨げているのだけれども、いくらかの進展がみられた。加えて、数種類の肉腫が保持する抗原を認識すると思われる抗体が数多く産生された。肉腫抗原に対するＭｏＡｂの大半は開発段階にある。臨床試験に用いる準備のできているものはごくわずかである。モノクローナル抗体ＴＰ-1およびＴＰ-3はヒトおよび犬肉腫上に存在する80ｋＤの抗原（これをｐ80抗原と呼んでいる）の異なるエピトープと反応することが分かっている。Bruland等著、『ヒト肉腫に特異的な新しいモノクローナル抗体』、Int.J.Cancer，38，27(1986)。特に、ＴＰ-3はIgＧ_2bモノクローナル抗体であり、これは骨肉腫ならびに様々な種類の出芽毛細管を含めた間葉性腫瘍を認識する。O.Bruland等著、Cancer Research,48，5302(1988)。ＴＰ-1およびＴＰ-3 はまた血管周囲細胞腫、軟骨肉腫、悪性繊維性組織球腫（ＭＦＨ）および悪性滑膜腫を含むその他の様々なヒト骨肉腫と結合する。Bruland等著『新しいヒト骨肉腫関連細胞表面抗原の発現および特徴』、Cancer Research、48,5302(1988)。正常組織におけるＴＰ-1／ＴＰ-3抗原の分布は大変限定されている。このように組織分布が限定しているので、ＴＰ−3抗原を免疫毒素治療に用いることは魅力的である。正常組織および間葉性腫瘍でのＴＰ-1／ＴＰ-3の抗原の分布に関する現段階の知識は、最近BrulandおよびPhilにより要約された。『放射免疫検出法および放射免疫法：骨腫瘍の治療における有益な試み』Frontiers of Osteosa rcoma Research 、J.F.NovakおよびJ.H.McMaster(監修)、HogrefeおよびHuber発行者、pp.149-159(1993)。陰性組織は繊維芽細胞、抹消血管細胞、骨髄細胞、胎児皮膚繊維芽細胞、胎児肺繊維芽細胞、羊膜細胞、繊維性結合組織細胞、骨格筋細胞、軟骨細胞、滑膜細胞、末梢神経細胞、扁桃細胞、脾臓細胞、肝臓細胞、結腸細胞および肺細胞を含む。新しい活動的な仮骨、胎盤内皮細胞、腎臓の近位尿細管(弱い結合)および副腎髄質の補助細胞のみが、ＴＰ-1およびＴＰ−3結合に陽性である。Bruland等著、Cancer Research，48，5302(1988)。ｂ．その他の担体ＴＰ-1およびＴＰ−3に加えて、他のいくつかの抗体もヒト骨肉腫と反応することが発見され、それ故、本発明においてＰＡＰコンジュゲートとして使用するのに適している。下記の表１参照。数多くのこれらの抗体を用いたin vitroの試験が行なわれているが、この試験はＰＡＰとコンジュゲートしている抗体ついては行なわれていない。さらに、これらの抗体を用いた骨肉腫に対するin vivoにおける免疫毒素の試験は報告されていない。２．毒素様々な研究者が免疫毒素中に用いている数多くの毒素は、２つのグループに大別できる。第１のグループはリチンのような無損傷性毒素からなる。リチンは２つのサブユニットからなり、Ａ鎖は1500個/分ものリボソームを不活性化し得、Ｂ鎖は細胞表面の非還元末端のガラクトトース残基を認識しＡ鎖が侵入するのを助ける。無損傷リチン免疫毒素は標的細胞を大変効果的に破壊するが、Ｂ鎖部分の非選択性からin vivoにおける白血病の処置には適用できない。第２グループの毒素をヘミトキシンという。ヘミトキシンは、真核生物のリボソームに触媒的に作用し60-Ｓサブユニットを不活性化し、結果としてペプチド伸長の段階で細胞内タンパク質合成を不可逆的に阻害する単鎖リボソーム不活性化タンパク質である。このようなポリペプチド毒素はアメリカヤマゴボウ(Phyto lacca americana)、苦いひょうたん(Momordica charantia)、小麦(Tritium vulg aris)、シャボンソウ(Saponaria officinalis)、Gelonium multiflorumおよびいくつかのその他の植物から単離されている。このようなリボソーム不活性化タンパク質は、無損傷リチンと異なり、非選択的細胞結合能力をもつＢ鎖サブユニットをもっていないため、容易に細胞膜を通過できない。それゆえ、ヘミトキシンは無損傷真核細胞に対して実質上毒性がない。ａ．ＰＡＰアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）には3つのサブタイプがあり、その発現は季節に依存する。ＰＡＰは春の葉にみられ、ＰＡＰIIは残夏の葉にみられ、ＰＡＰ-Ｓは種子にみられる。Irvin、Pharmacol.Ther ．21，371(19 83)。大きさ(全て約29,000分子量である)にわずかな差がみられ、触媒的にリボソームを阻害する能力間に差があるとしてもほんのわずかな差である。Houston 等著、『リチンではなく毒素およびヘミトキシンを用いて作られた免疫毒素』、Immunological Antibody Conjugates in Radioimaging and Therapy of Cancer 、C.W.Vogel監修、ニューヨーク、オックスフォード大学出版、P.71(1987)。ＰＡＰは毒素のヘミトキシングループの一員であり、よって全ての大きいｒＲＮＡの3'末端近傍の保存的ループ配列から一つのアデニンを特異的に除去することによりリボソームを不活性化する。Irvin等著、Phamacology and Therapeutic s ，55 ，279,(1992)。この特異的な脱プリン化によりリボソームと相互作用する伸長因子の能力が極度に低下し、結果としてタンパク質合成を不可逆的に阻害する。Irvin等著、上記。さらに、ＰＡＰは最も活性のあるリボソーム不活性化タンパク質の一つである。抗マウスＩｇＧ免疫毒素ゲロニン、リチンＡ鎖、モモルディン、ジアンチン32、サポリンおよびＰＡＰの細胞障害性と比較すると、ＰＡＰ構成体は試験した中で最も効力のある免疫毒素の一つであった。Bolognesi等著、『異なるリボソーム不活性化タンパク質および抗体を含む抗リンパ球免疫毒素の比較』、Clin.Exp.Immunol.89，341(1992)。３．生物療法剤本発明の生物療法剤は、一般的に上記に開示した毒素のような細胞障害性薬剤を特定の標的細胞または器官に細胞障害性薬剤を運搬できるような担体と結合させた化合物と定義し得る。このように、本発明の生物療法剤は、上記に定義した免疫毒素だけでなく、例えば組換えタンパク質のような遺伝子工学の既知方法により合成された構築物も含み得る。これらの生物療法剤の活性は、使用する毒素のみならず、抗体の抗原への効率的な結合、エンドサイトーシスおよび機能性リボソーム不活性化タンパク質の細胞内放出にも依存している。例えば、ＴＰ-3- ＰＡＰは、間充組織腫瘍を認識するＩｇＧ_2bモノクローナル抗体であり、共有結合的にリボソーム阻害植物毒素ＰＡＰに結合しているモノクローナル抗体ＴＰ-3 から構成されている。細胞内の数個のＰＡＰ分子で十分に細胞を殺戦できるほどの効力をＰＡＰは有しているので、この特定の免疫毒素の究極的な有効性および治療係数を決定するにあたりＴＰ-3抗原濃度は結合の特異性よりも重要ではない。Vitetta等著、『免疫毒素』：Biologic Therapy of Cancer、V.T.DeVita、Jr. 、S.Hellman、S.A.Rosenberg(監修)、J.B.Lippincott Company、pp．482-495(19 91)。さらに、このＰＡＰ免疫毒素に独特であると思われるＴＰ-3-ＰＡＰの予期しない効力は、より少ない免疫毒素の投与を可能とし、これは治療面での利点である。４．生物療法剤の生産および精製好ましい生物療法剤は、細胞障害性有効量のＰＡＰ分子をＴＰ-1またはＴＰ-3 の各々の分子に結合することにより形成される。例えば、本発明の実践に有益な薬剤は１分子のＴＰ-3に対して1〜3分子のＰＡＰ分子をもつＴＰ-3-ＰＡＰの混合物である。モノクローナル抗体-ＰＡＰ免疫毒素の形成において有益なヘテロ二重機能性架橋剤は、ＳＰＤＰ（Ｎ-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオン酸）およびその誘導体を含む。例えば、下記の実施例で用いた特定のＴＰ-3-ＰＡＰは、架橋剤であるＳＰＤＰでＴＰ-3 ＭｏＡｂを修飾し、次いで修飾したＴＰ- 3を3.5:1モル数で過剰の2-イミノチラン修飾ＰＡＰと反応させて調製する。５．生物療法剤の投与方法本発明の生物療法剤は医薬組成物として形成せしめ、ヒト患者のようなホ乳動物宿主に、静脈注射、筋肉内注射または皮下注射から選択した非経口投与に適合する様々な形で投与し得る。ａ．用法形態本発明の生物療法剤は、非経口投与、すなわち、注射または点滴による静脈投与または皮下投与が好ましい。生物療法剤の溶液または懸濁液は、水またはＰＢＳのような等張食塩水中で調製し得、所望により無毒性界面活性剤を混合し得る。分散液もまたグリセロール、液体ポリエチレングリコール、ＤＭＡ、植物油、トリアセチンおよびそれらの混合物中で調製し得る。通常の貯蔵および使用条件下で、これらの調製物は微生物の増殖を防ぐために保存剤を含み得る。肉腫はしばしば肺に転移するので、療法剤の肺へのより特異的な運搬はエアゾール運搬系を用いて行い得る。エアゾール運搬に適する薬剤用法形態は適当なサイズのリポソームのような製剤を含み得る。注射または点滴使用に適する薬剤用法形態には、無菌の注射または点滴溶液または分散液に適する活性成分を含有する無菌水溶液または懸濁液、または無菌粉末などがある。全ての場合において、最終の用法形態は、無菌であり、液体であり、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならない。液体担体または賦形剤は、例えば水、エタノール、多価アルコール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、無毒性グリセリルエステル、脂質（例えばジミリストイルホスファチジルコリン）および適当なそれらの混合物からなる溶媒または液体拡散媒質であり得る。適当な流動性は、例えばリポソームの形成、拡散の場合に必要とされる粒子サイズの維持または無毒性な界面活性剤の使用などにより維持できる。微生物の活動は、様々な抗菌剤および抗真菌菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チベロース等により防御し得る。多くの場合において、例えば糖、緩衝液または塩化ナトリウムのような等張剤を含むことが望ましい。注射可能な組成物吸収の延長効果は、例えばアルミニウムモノステアリン酸ヒドロゲルおよびゲラチンのような吸収を遅める薬剤を組成物中に含有することにより達成し得る。無菌の注射可能なまたは点滴可能な溶液は、必要量の生物療法剤を適当な溶媒中に、上記に記載した様々なその他の成分とともに取り込み、ついで必要により無菌濾過することで調製される。無菌注射または点滴溶液の調製用の無菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥および凍結乾燥技術であり、これにより活性成分の粉末と所望により添加した成分が前記の無菌濾過溶液中に存在するものが生じる。ｂ．用量上記成分中の生物療法剤の用量は、患者の体重、年令および状態と標的癌の状況により大きく変化する。動物実験に基づくと、用量は約1〜7日間にわたって投与したとき0.025mg/kgから1mg/kgの間で変化することが予想される。本発明は次の詳細な実施例を参照することでより詳細に説明される。本発明において、ＯＨＳ系はＴＰ1／3抗原の構造性発現を有する粘着性ヒト骨肉腫である。ＯＨＳは、網膜芽細胞腫から13年後におこった転移性骨肉腫の若者からFostad 等によりもたらされた(『左右対象網膜芽細胞腫の処置13年後に現れた多骨肉腫をもつ患者から確立された細胞系の特徴』、Int.J.Cancer ，38，33(1986))。本研究では、ＯＨＳは、Dr.Deborah Haines（Western College of Veterinary Med icine、Saskatoon、カナダ）から得られ、2mM L-グルタミン、100U/mlペニシリン、100mcg/mlストレプトマイシンおよび10％ＦＣＳと共にＲＰＭＩ1640中を通過させた。Ｄ17(犬骨肉腫)はDr.Stuart Helhfand(ウィスコンシン大学、マジソンウィスコンシン)から得られた；Ｄ17はＴＰ−3抗原に対して陰性である。ヒトＣＤ19＋異質急性リンパ性白血病細胞系、ＲＳ4;11はDr.John Kersey（ミネソタ大学、ミネアポリスミネソタ）から得られ、ＴＰ-3-ＰＡＰ研究の陰性対照系として用いた。実施例１：ＴＰ-3 ＭｏＡｂ産生および精製ＴＰ-3 ＭｏＡｂハイブリドーマを、Fostad等（『複合網膜芽細胞腫に対する処置の13年後に現れた多骨肉腫をもつ患者から確立された細胞系の特徴』、Int. J.Cancer,38 ，33(1986)）が記載しているように、ヒト骨肉腫異種移植片に対するＢＡＬＢ／ｃマウスの免疫感作から得た。簡潔にいうと、ＴＰ-3ハイブリドーマ細胞を25ｍＭＨＥＰＥＳ、2ｍＭ L-グルタミン、100U/mlペニシリン、100μg /mlストレプトマイシン、10ｍＭ非必須アミノ酸、100ｍＭピルビン酸ナトリウムおよび10％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ；Sigma、セントルイスミズーリ）を含有するＤＭＥＭ(Celox、ホプキンズミネソタ)中で培養した。ＢＡＬＢ/ｃマウスに、ＴＰ-3ハイブリドーマ細胞2×10⁶個を腹膜投与する7日前にプリスタン(Aldrich Chemical Co.、ミルウォーキーウィスコンシン）0.5mlを腹膜投与（i.p.）で注入した。ＴＰ-3 ＭｏＡｂを含む腹水を集め12,000g×20分で遠心し、合わせ、0. 22μｍ濾紙に通して濾過した。ＴＰ-3 ＭｏＡｂは硫安沈澱法およびタンパク質Ａアガロース(Immunopure Plus immobilized protein Ａ：Pierce、ロックフォードイリノイ)を用いてさらに精製した。タンパク質Ａからの溶出はイムノピュア溶離液（Immunopure elution buffer）（Pierce）を用いて行った。ＴＰ-3 はリン酸緩衝液に対して透析し、使用前に無菌濾過した。実施例２：ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素合成ＴＰ-3 ＭｏＡｂは上記実施例１に記載のように精製し、一方ＰＡＰは以前にI rvin等が記載したように出発物質としてアメリカヤマゴボウ（Phytolacca ameri cana）の春の葉を用いて精製した。(『アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質：リボソームの不活性化および治療適用』、Pharmac.Ther.，55，279(1992) )。リン酸緩衝液中8mg/mLの濃度の精製ＴＰ-3 ＭｏＡｂを、ＤＭＳＯ中で新しく調製し、使用直前にＰＢＳ中で1:10に希釈したＳＰＤＰ(Ｎ-スクシンイミジル3- (2-ピリジルジチオ)プロピオン酸(ファルマシア、Biotech Inc.、Piscataway、ニュージャージー)の過剰量と3.5:1のモル比で反応させた。精製し、リン酸緩衝液に対して透析したｐＨ8.0のＰＡＰを10mg/mLまで濃縮し、使用直前に50ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ8.6中で調製した2-イミノチオランＨＣｌ(Pierce、ロックフォード、イリノイ）の過剰量と3.5:1モル比で混合した。どちらの修飾方法も無菌および発熱物質のないガラスのバイアル内でゆるやかに振盪しながら室温で1.5時間反応させた。過剰の架橋剤を、ＰＢＳ中で平衡化したprepacked Sephadex G-25 PD-10カラム(ファルマシア、Biotech Inc.、Piscataway、ニュージャージー)に通過させることで除去した。画分を280ｎｍで測定しタンパク質の大半を含む画分を合わせ、ＭｏＡｂおよびＰＡＰの全量をそれぞれＭｏＡｂおよびＰＡＰのＥ_280nm(１％ )値1.43および0.83を用いてそれぞれ決定した。チオール化したＰＡＰを、最終モル比ＰＡＰ：ＭｏＡｂ 3.5:1となるようにＳＰＤＰ-修飾ＭｏＡｂに加えた。混合物を室温で3時間穏やかに振盪し、一晩4℃でインキュベートし、ＨＰＬＣ精製段階の調製用に濾過する前に更に3時間室温で振盪した。未反応のＰＡＰおよび高分子量（≧300kd）免疫コンジュゲート/集合体を取り除くためにｐＨ6.８の100ｍＭリン酸ナトリウム中、流速3mL/minで平衡化した21 .5×600 mm Spherogel ＴＳＫ3000ＳＷＨＰＬＣカラム（Beckman Instruments and TosoHaas）を用いてゲル濾過クロマトグラフィーを行なった。コンジュゲートを形成していないＴＰ-3 ＭｏＡｂをイオン交換クロマトグラフィーを用いてＨＰＬＣ-精製ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素調製物から除去した。ＨＰＬＣ分画を濃縮し、一晩4℃でｐＨ7.1の10ｍＭリン酸ナトリウムに対して透析した。透析したＴＰ-3-ＰＡＰのｐＨおよび導電率は、初めにｐＨ6.5の10ｍＭリン酸ナトリウム中で平衡化したＣＭ-セファロースレジンに合わせた。ＣＭ-セファロースカラムは簡単にｐＨ7.1の10ｍＭリン酸ナトリウムで洗浄し；ＴＰ-3 ＭｏＡｂを20ｍＭ塩化ナトリウムを含むｐＨ7.8の10ｍＭリン酸ナトリウム中で溶出し、ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素を溶離液であるｐＨ7.5のリン酸緩衝液で回収した。図１に示したように、ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素は注入から約34分後に溶出し始め、続いて近接して未反応ＴＰ-3 ＭｏＡｂが溶出した。遊離型ＰＡＰは5 6分に溶出し、これは免疫毒素からよく分離していた。ＨＰＬＣ半-精製物質はまだかなりの量の未反応ＴＰ-3 ＭｏＡｂを含んでいた。精製方法はＳＤＳ-ＰＡＧＥで5％分離ゲルを用いて調べた。乾燥ゲルのＳＤＳ -ＰＡＧＥの走査によると、最終ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素調製物中には＜5％のＰＡＰが存在することが分かり、これはまた、ＭｏＡｂ(150kd)が14％、１個のＭｏＡｂ分子に１個のＰＡＰ分子がジスルフィド結合している180kd種が34％、１個のＭｏＡｂ分子に2個のＰＡＰ分子が結合している210kd種が34％および各ＭｏＡｂ分子に3個のＰＡＰ分子が結合している240kd種18％を含んでいた（図１）。クーマシーブルー染色ゲルを乾燥させ、ベックマンDU62分光光度計およびゲルスキャンソフト-パックモデュールソフトウェア（GelScan Soft-Pac Module softw are）を用いて走査した。タンパク質濃度をビシンコニン酸検定システム(Bicinc honinic acid assay system)(Sigma)を用いて測定した。加えて、Bio-Rad研究所から得られたシルバーステインキット（silver stain kit）を用いてＳＤＳ-ＰＡＧＥ後のタンパク質のバンドをより感度よく検知し視覚化した。ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素中のＴＰ-3モノクローナル抗体およびＰＡＰ部分の存在ならびに精製ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素中の有意な量の遊離型ＰＡＰによる汚染がないことをウエスタンブロット解析（図１Ｃ）および上記に記載したように、以前にMyers等が記載したようにBio-Rad研究所から得られた検知キットを用いて確認した。抗ＰＡＰ原発性抗体は高純度のＰＡＰを用いて過剰免疫したウサギ中で産生した。またイムノブロッティングをアルカリホスファターゼーコンジュゲート・ヤギ抗-マウスIgＧ（Sigma Chemical Co.、セントルイス、ミズーリ）を用いて、上記に記載のように、以前にMyers等が報告しているように、精製免疫コンジュゲート調製物中に残存する非コンジュゲート抗-ＴＰ-3モノクローナル抗体を検知した。タンパク質濃度はSigmaのビシンコニン酸検定システムを用いて決定した。実施例３：ヒトＯＨＳ骨肉腫細胞に対するＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素活性標準的な³Ｈチミジン取り込み解析を用いて、ＭｏＡｂ、毒素および免疫毒素の溶液のＯＨＳ細胞成長に対する効果について試験を行なった。サンプルと指示薬ＯＨＳ細胞を2〜4日間インキュベートした後、³Ｈチミジン（デュポンＮＥＮ、ボストンマサチューセッツ）25μl（2μ Ｃｉ）を、濾過紙ディスク上にＤＮＡを接種する前に6時間インキュベートした各穴およびプレートにＰＨＤ細胞接種装置（Cambridge Technology、Inc.、ウォータータウン、ミネソタ）を用いて加える。液体シンチレーション流体（Cytoscint；ＩＣＮ、C osta Mesa カリフォルニア）を添加後、ＬＫＢ1216液体シンチレーションンカウンターを用いて決定した。データはDr.Bob Jarvis(University of Minnesota Co mputer Sciences)が執筆したExcel macro routineを用いて解析し、各サンプルの3セットの平均および標準偏差を決定した。Clonogenic Assayは以前にUckun等により報告された方法を用いてＯＨＳで行なった。(『共通Ｂ-列急性リンパ芽球白血病の患者から新しく得られた芽原種細胞に対するアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質を含む免疫毒素の細胞障害性を評価するための新規コロニー解析の使用』、J.Exp.Med.、163，347(1986))。ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素は効果的にＴＰ-3＋ＯＨＳ骨肉腫細胞を殺滅することが示された。例えば、図2はＴＰ-3 ＭｏＡｂ、ＴＰ-3-ＰＡＰ、ＰＡＰのみおよびＢ細胞（Ｂ43-ＰＡＰ）上に存在するＣＤ19に結合する関連免疫毒素構築物の、ヒトＯＨＳ骨肉腫細胞の増殖に対する効果を示している。ＴＰ-3 ＭｏＡｂのみ（すなわちＰＡＰ毒素なしで）では増殖に対して何の効果もなく；細胞は³Ｈチミジンをヒト血清アルブミン(ＨＳＡ；図2Ａ)をもつ媒体と同じような方法でＤＮＡ中に取りこんだ。ＴＰ-3-ＰＡＰは、しかしながらＯＨＳ細胞をもつ最初の4穴で³Ｈチミジンの取り込みを完全に阻害した；ＯＨＳはＴＰ-3-ＰＡＰが20 ｐＭまたはそれ以下に希釈されるまで免疫毒素処置に耐えられなかった。さらに、異なるロットのＴＰ-3-ＰＡＰは再現性のあるＯＨＳの高度殺滅能を有する。ロット１のＴＰ-3-ＰＡＰをもつ５つの独立した実験におけるＯＨＳを用いた³Ｈチミジン増殖解析では、平均ＩＣ₅₀値が3.1±1.0ｐＭであった。第2のロットのＴＰ-3-ＰＡＰを用いた3つの異なる実験では平均ＩＣ₅₀値が4.1±0.3ｐＭであった。全体の平均ＩＣ₅₀は3.5±1.0ｐＭであった。これらの結果は、ＴＰ-3-ＰＡＰによる細胞の殺滅がＴＰ-3抗原を発現する細胞に対して高度に特異的であるということを示している。ＰＡＰのみまたは抗- ＣＤ19免疫毒素であるＢ43-ＰＡＰは、濃度が10,000ｐＭまたはそれ以上になるまでＯＨＳ増殖に対して全く効果がなかった（図2B参照）。これは、もしＴＰ-3 -ＭｏＡｂがＰＡＰ部位にコンジュゲートしていれば細胞障害性が＞3,000倍増加することを示している。もし腫瘍がＴＰ-3抗原を発現していなかったのならば、ＴＰ-3-ＰＡＰによる殺滅は＜10⁴ｐＭの濃度ではおこらなかった（図3Ａおよび3 Ｂ)。しかしながらＢ43-ＰＡＰはＣＤ19＋細胞系ＲＳ4;11に対して活性があった（図3Ｂ）。このように、ＰＡＰ免疫コンジュゲートによる殺滅は特異的なＭｏＡｂ結合によりもたらされた。高感度のin vitro連続希釈clonogenic assay systemを用いてclonogenic ＯＨＳヒト骨肉腫細胞に対するＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素のlog殺滅効力を決定した。下記の表2に示されるように、37℃／5％ＣＯ₂で100-3000ng/mLのＴＰ-3-ＰＡＰで4 時間処置するとclonogenic ＯＨＳ細胞を用量依存的に1000ng/mL（5.6nM）において最大3.9±0.2のlog値で殺滅した。特筆すべきことに、濃度≦100ng/mLのＴＰ-3-ＰＡＰで4時間処理する実験法ではＯＨＳ細胞のclonogenic成長をたいして阻害しなかった(log殺滅≦0.2log値)。対照的に、1ng/mL〜3000ng/mLのＴＰ-3- ＰＡＰに18時間さらすと用量依存的にclonogenic細胞を殺戮し、100ng/mL濃度では1.2のlog殺滅値、濃度≧300ng/mLでは＞3.9のlog殺滅であった（表2）。実施例４．ＴＰ-3-ＰＡＰのin vivo投与ＮＩＨのガイドラインに従いマウスをミネソタ大学 Research Animal Resourc esが飼育した。生動物を含む方法および実験法はミネソタ大学 Animal Care Com itteeにより承認された。ｐ80抗原（ＴＰ-3抗原）陽性ＭＣＡ106柔組織骨肉腫は Dr.Jim Mu1e（ＮＣＩ、Bethesda メリーランド）から得、雌Ｃ57ＢＬ/6マウスに順次通過させた。腫瘍を切り取り、細かく切り、100u/mlのペニシリン、100ucg/ mlのストレプトマイシンおよび2mM L-グルタミンと共にＲＰＭＩ1640中で0.4mg/ mlヒアルロニダーゼ、0.05mg/mlデオキシリボヌクレアーゼおよび4.0mg/mlコラゲナーゼ（Sigma）を用いて4時間マグネチック撹拌プレート上で撹拌し消化した。細胞をCell Strainers^TM(Falcon、Becton Dickinson)を通して濾過し、Ｃａ²⁺ またはＭｇ²⁺のないハンクスの平衡塩類溶液(Hank's Balanced Solt Solution)( HBSS)で3回洗浄し、濃度を1×10⁵細胞/mlに合わせた。肺転移は、ＭＣＡ106骨肉腫細胞（40,000細胞/マウスを含有する0.4cc）を6〜8週の雌Ｃ57ＢＬ/6マウスの尾の静脈に静脈内注射することで確立した。肺転移をもつ10匹のマウスのグループに抗体のみまたは免疫毒素調製物を腹膜投与で処置した。転移数を転移確立14日後に直接数えることで評価した。ＣＯ₂ で窒息させた後、India ink（5％ 3gtt ＮＨ₄ＯＨ／100ml）を気管に注入した。肺および心臓は塊で除去し、Fekete's溶液（70％エタノール300ml、10％ホルマリン30mlおよび氷酢酸15ml)の中に入れる。肺は少なくとも二重盲検法により記録し計測した。処置グループ間の転移の数における相違はStudentの非対ｔ-検定 (Instat^TM、GraphPad Software、サンディエゴ、カリフォルニア)を用いて評価した。ＴＰ-3-ＰＡＰはin vivoにおいて肺転移に対して活性があることが分かった。下記の表3および図4はＭＣＡ106肺転移をもつマウス中でＴＰ-3-ＰＡＰを用いたときの結果を要約している。ＴＰ-3 ＭｏＡｂのみでも関連するＢ43-ＰＡＰ免疫毒素でも肺転移の数に対する効果は全くなかった(表３)。しかしながら、３日間連続でＴＰ-3-ＰＡＰを腹膜投与した免疫毒素処置では肺転移数を劇的に減少させることができた(p＜0.04)。第二の実験で用量反応相関を調べた(図4)。ＴＰ-3 -ＰＡＰによる肺転移の減少は用量相関的であり、試験用量が非常に重要であった(表3)。興味深いことに、ＴＰ-3-ＰＡＰ処置したマウスでみられた転移数が極めて少ないだけでなく、ＴＰ-3-ＰＡＰ処置マウスの肺転移のサイズも対照のマウスの転移に比較してずっと小さかった。有意な抗腫瘍効果に必要とされるＴＰ -3-ＰＡＰの蓄積量は3.75μgおよび30μg/マウス（0.2〜1.5mg/kg）の間であった。実施例５：ヒト骨肉腫のＳＣＩＤマウスモデルにおけるＴＰ-3-ＰＡＰに関する研究ＳＣＩＤマウスの異種移植モデルにおけるヒト骨肉腫に対するＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素のin vivoにおける抗腫瘍効力は以下のように調べた。Ｃ.Ｂ.-17-ＳＣＩＤマウスにＯＨＳ細胞1×10⁶個を右後足に皮下接種した。右後足に腫瘍細胞を皮下接種した2時間後に、3日間続けてＴＰ-3-ＰＡＰの腹膜投与による処置を開始した。未処置のマウスの大半は17日までにＯＨＳ足腫瘍ができ、25日までに未処置マウスの100％に平均容積137mm³の足腫瘍ができた。腫瘍容積は図5に示す。用量レベルが5,10または20μg/マウスのＴＰ-3-ＰＡＰによって、ＳＣＩＤマウス中のＯＨＳ足腫瘍の発現および進行が大幅に遅延した。ＴＰ-3-ＰＡＰ 20μ gで処置したＳＣＩＤマウスはどれも、接種から110日まで足の腫瘍ができなかった。最も重要なことは、これは生存の改善に関連しているということである。図 6参照。さらに、ＴＰ-3-ＰＡＰは大きな腫瘍の急速な壊死をもたらした。対照的に、非コンジュゲートＴＰ-3抗体、非コンジュゲートＰＡＰまたはＢ43-ＰＡＰ（対照の白血球細胞指向の免疫毒素）の混合物はこのモデル系では抗腫瘍活性を全くもたなかった。これらの実験によれば、ＴＰ-3-ＰＡＰ免疫毒素はin vi voにおいてヒト骨肉腫移植片に対する顕著な抗腫瘍活性を示し、他の極めて多くのヒトＯＨＳ骨肉腫細胞にかかったＳＣＩＤマウスの腫瘍の発現しない期間を改善する。参考文献として個々に挙げているが、全ての出版物、特許および特許文献がここで参考文献として合体する。この発明は特定および好ましい態様および技術に関して記載されている。しかしながら、本発明の精神および範囲内において多くの変法や修飾をなし得ることを理解されたい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者アンダーソン，ピーター・エムアメリカ合衆国55426ミネソタ州セント・ルイス・パーク、ルイジアナ・アベニュー 2809番

Claims

【特許請求の範囲】１．ｐ80骨肉腫に対する担体と結合したアメリカヤマゴボウ抗ウイルス・タンパク質の細胞障害性有効量を含む生物療法剤。２．担体が抗体または抗体断片である、請求項１の生物療法剤。３．抗体がＴＰ-1、ＴＰ-3またはその誘導体である、請求項２の生物療法剤。４．アメリカヤマゴボウが化学的架橋結合により抗体と結合している、請求項３の生物療法剤。５．アメリカヤマゴボウの1−3分子が抗体の各分子と結合している、請求項２の生物療法剤。６．ｐ80抗原を発現する癌患者に、ｐ80抗原に対する担体に結合したアメリカヤマゴボウ抗ウイルス・タンパク質の細胞障害性有効量を含有する生物療法剤の治療的有効量を非経口的に投与することを含む癌の処置のための治療方法。７．癌が肉腫である、請求項６の方法。８．肉腫が骨肉腫である、請求項７の方法。９．生物療法剤が薬学的に許容される液体担体と併用して投与される、請求項６の方法。１０．液体担体が等張塩類を含む、請求項９の製法。１１．生物療法剤が静脈に投与される、請求項９の方法。１２．担体が抗体または抗体断片である、請求項６の方法。１３．抗体がＴＰ-1、ＴＰ-3またはその誘導体である、請求項１２の方法。１４．抗体がＴＰ-3またはその活性サブユニットである、請求項１３の方法。１５．ＰＡＰの1−3分子がＴＰ-3の各分子に結合している、請求項１４の方法。１６．ＴＰ-3-ＰＡＰ量は約1−7日を越えて投与される0.025−1mg／kgである、請求項１４の方法。１７．生物療法剤の投与に抗腫瘍薬の有効量の非経口投与を伴う、請求項６の方法。１８．抗腫瘍薬がドキソルビシン、メトトレキセート、エトポシド、アルキル化剤またはプラチナ化合物からなる群より選ばれる、請求項１７の方法。１９．抗腫瘍薬が薬学的に許容される担体と結合している、請求項１８の方法。