JPH11514333A - アミロイドの凝集の調節剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 アミロイド形成性蛋白又はペプチドの凝集を調節する化合物を開示する。本発明の調節剤は、アミロイドの凝集を促進し、又は好ましくは天然アミロイドの凝集を抑止することができる。好ましい具体例において、この化合物は、天然β−アミロイドペプチド（β−ＡＰ）の凝集を調節する。好ましい具体例において、本発明のβ−アミロイド調節剤化合物は、Ａβ凝集コアドメインとこれにカップリングした変性基とからなり、この化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化させ又はその神経毒性を抑止するようなものである。さらに、この調節剤は、天然β−ＡＰが調節剤に対してモル過剰量であるときに天然β−ＡＰの凝集を変化させることができる。本発明の化合物からなる製薬組成物並びに本発明の化合物を使用してアミロイド形成性疾病を診断し治療する方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】 アミロイドの凝集の調節剤発明の背景 アルツハイマー病（ＡＤ）は、１９０７年にバイエルンの精神科医であるアロ イス・アルツハイマーによって最初に報告されたもので、短期間の記憶喪失より 始まって、失見当識、判断及び推理の欠陥、究極的には痴呆に進行する進行性の 神経障害である。この疾病の経過は、通常、兆候があってから４年〜１２年の間 にひどく衰弱して不動の状態で死に至る。ＡＤは、６５才以上の人口の５〜１１ ％、そして８５才以上の人口の４７％以上を悩ましているものと推定された。Ａ Ｄを処置し取扱うための社会的な経費は、主としてＡＤ患者に必要とされる莫大 な保護ケアのために年間で８００億ドル以上になる。さらに、１９４０年から１ ９５０年代の人口ブームの間に生まれた成人がＡＤがさらに流行するようになる 年齢に近づいているので、ＡＤの抑制と処置はさらに重要なヘルスケアの問題と なるであろう。現在、この疾病の進行を有意に遅らせる治療法はない。ＡＤにつ いての論評については、セルコエＤ．Ｊ．Sci．Amer．Nov.1991，pp.68-78及び ヤンクナーＢ．Ａ．他 N．Eng．J．Med．325:1849-1857を参照されたい。 最近、アルツハイマー型神経病理学的状態が遺伝子導入マウスにおいて作り出 されたことが報告された（ゲームズ他(1995)Nature 373:523-527）。遺伝子導入 マウスは、高レベルのヒト突然変異アミロイド先駆体蛋白を発現させ、ＡＤと関 係した多くの病理学的な状態を徐々に発生させる。 病理学的には、ＡＤは罹病者の脳に特有の病変が存在するのが特徴である。こ れらの脳の病変には、神経細線維のもつれ（ＮＴＦｓ）と称される異常な細胞内 フィラメント及び老人におけるアミロイド形成性蛋白の細胞外沈着、即ちアミロ イドプラークが含まれる。アミロイドの沈着は、ＡＤ患者の脳血管の壁にも存在 する。アミロイドプラークの主要蛋白成分は、β−アミロイドペプチド（β−Ａ Ｐ）と称される４キロダルトンのペプチドとして同定された（グレンナーＧ．Ｇ ．及びウオングＣ．Ｗ．(1984)Biochem．Biophys．Res．Commun．120 :885- 890 ；マスターズＣ．他(1985)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 82:4245-4249）。 β−ＡＰの散らばった沈着は、正常な成人にしばしば観察されるのに対して、Ａ Ｄの脳組織は一層詰まった緻密なコア状のβ−アミロイドプラークによって特徴 づけられる（例えば、デービスＬ．他(1998)Neurology 38:1688-1693）。これら の観察は、β−ＡＰの沈着が、ＡＤにおいて起こるニューロンの破壊に先行し、 その破壊に寄与することを示唆している。β−ＡＰの直接の病理学的な役割のさ らなる裏付けして、β−アミロイドは、培養でまたインビボでも成熟ニューロン に対して毒性であることが示された。ヤンカーＢ．Ａ．他(1989)Science 245:41 7-420；ヤンカーＢ．Ａ．他(1990)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:9020-9023； ローハーＡ．Ｅ．他(1991)Biochem．Biophys．Res．Commun．174:572-579；コー ウオールＮ．Ｗ．他(1991)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:7247-7251を参照さ れたい。さらに、アミロイドーシス−ドイツ型の遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ ）（これは大脳皮質及び脳血管系内に散らばったβ−アミロイド沈着を特徴とす る。）のある患者は、β−ＡＰ内でアミノ酸置換をもたらす点突然変異を有する ことが示された。レビーＥ．他(1990)Science 248:1124-1126を参照されたい。 この観察は、β−ＡＰ配列の特定の変化がβ−アミロイドを沈着させ得ることを 立証している。 天然β−ＡＰは、アミロイド先駆体蛋白（ＡＰＰ）と称される非常に大きい蛋 白から蛋白分解によって誘導される。カングＬ．他(1987)Nature 325:733 ；ゴ ールドゲーバーＤ．他(1987)Nature 235:877 ；ロバキスＮ．Ｋ．他（1987）Pro c．Natl．Acad．Sci．USA 84:4190；タンジＲ．Ｅ．他（1980）Science 235:880 を参照されたい。ＡＰＰ遺伝子は染色体２１にマップされ、これによって染色 体２１の三染色体性によって生じるダウン症候群のある個体において若い年齢で 見られるβ−アミロイドの沈着についての説明が与えられる。マンＤ．Ｍ．他(1 989)Neuropathol．Appl．Neurobiol 15:317；ランブルＢ．他(1989)N．Eng．J． Med．320:1446 を参照されたい。ＡＰＰは単一膜を張っている領域と、細胞外の 環境に伸びている長いアミノ末端領域（蛋白の約３分の２）及び細胞質中に突き 出ているこれよりも短いカルボキシ末端領域を含む。ＡＰＰメッセンジャーＲＮ Ａの分化スプライシングでは、５６３個のアミノ酸（ＡＰＰ−５６３）、６ ９５個のアミノ酸（ＡＰＰ−６９５）、７１４個のアミノ酸（ＡＰＰ−７１４） 、７５１個のアミノ酸（ＡＰＰ−７５１）又は７７０個のアミノ酸（ＡＰＰ−７ ７０）のいずれかからなる少なくとも５形態のＡＰＰがもたらされる。 ＡＰＰ内では、天然産β−アミロイドペプチドは、ＡＰＰ−７７０のアミノ酸 位置６７２におけるアスパラギン酸残基で始まる。ＡＰＰの蛋白分解から誘導さ れる天然産β−ＡＰは、異質性を示すカルボキシ末端の終点に応じて、長さが３ ９〜４３個のアミノ酸残基である。ＡＤ患者とび正常な成人の双方の血液及び脳 脊髄液におけるβ−ＡＰの支配的な循環形体は、β１−４０（“短いβ”）であ る。シューベルトＰ．他(1992)Nature 359:325 ；ショウジＭ．他（1992）Scien ce 258:126 を参照されたい。しかし、β１−４２及びβ１−４３（“長いβ” ）もβ−アミロイドプラークの形体である。マスターズＣ．他(1985)Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 82:4245；ミラーＤ．他(1993)Arch．Biochem．Biophys．301: 41；モリＨ．他(1992)J．Biol．Chem．267:17082 を参照されたい。β−ＡＰＰ の凝集及び沈着をもたらす正確な分子機構はわからないけれども、その過程は、 核形成に依存する重合、例えば、蛋白の結晶化、微小球の形成及びアクチンの重 合の機構になぞらえられた。例えば、ジャレットＪ．Ｔ．及びランスバリーＰ． Ｔ．(1993)Cell．73:1055-1058を参照されたい。このような過程においては、単 量体成分の重合は、核の形成まで起こらない。従って、これらの過程は、凝集が 起こる前のラグタイム、次いで核形成後の迅速な重合によって特徴づけられる。 核形成は、“種”又は予め形成された核の添加により促進させることになり、こ れが迅速な重合をもたらす。β−ＡＰの長いβ体は、種として作用し、これによ って長いβ−ＡＰ体及び短いβ−ＡＰ体の双方の重合を促進させることが示され た。ジャレットＪ．Ｔ．他(1993)Biochemistry 32:4693 を参照されたい。 β−ＡＰでアミノ酸置換が行われた一つの研究において、２種の突然変異βペ プチドは、突然変異体と非突然変異体のβペプチドが混合されたときに非突然変 異体のβ−ＡＰの重合を妨げることが報告された。ヒルビッヒＣ．他(1992)J．M ol．Biol．228:460-473を参照されたい。しかし、この効果を知るために、等モ ル量の突然変異体と非突然変異体（即ち、天然）のβ−アミロイドペプチドを使 用し、突然変異体ペプチドはインビイボで使用するのに不適当であると報告され た。Ｃ．ヒルビッヒ他(1992)同誌を参照されたい。発明の概要 本発明は、アミロイド形成性蛋白及びペプチドの凝集を調節することができる 化合物及びその製薬組成物、特に、天然β−アミロイドペプチド（β−ＡＰ）の 凝集を調節することができ且つ天然β−ＡＰの神経毒性を抑止することができる 化合物に関する。一つの具体例として、本発明は、アミロイド形成蛋白又はその ペプチド断片を少なくとも１個の調節基に直接に又は間接的にカップリングさせ てなるアミロイド調節剤化合物であって、これが天然アミロイド形成蛋白又はペ プチドと接触したときに天然アミロイド蛋白又はペプチドの凝集を調節するよう にカップリングさせたアミロイド調節剤化合物を提供する。好ましくは、この化 合物は、天然アミロイド形成蛋白又はペプチドと接触したときに天然アミロイド 形成蛋白又はペプチドの凝集を抑止する。アミロイド形成蛋白又はそのペプチド 断片は、例えば、トランスチレチン（ＴＴＲ）、プリオン蛋白（ＰｒＰ）、小島 アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、心房ナトリウム排泄因子（ＡＮＦ）、κ −軽鎖、λ−軽鎖、アミロイドＡ、プロカルシトニン、シスタチンＣ、β２−ミ クログロブリン、アポＡ−Ｉ、ゲルソリン、プロカルシトニン、カルシトニン、 フィブリノーゲン及びリゾチームよりなる群から選択される。 本発明の最も好ましい具体例において、この化合物は、天然β−ＡＰの凝集を 調節させる。本発明は、下記の式からなるβ−アミロイドペプチド化合物を提供 する。 （ここで、Ｘａａは、β−アミロイド先駆体蛋白−７７０（ＡＰＰ−７７０）の 位置６６８に対応し又はＡＰＰ−７７０の位置６６８に対してカルボキシ末端側 の残基に対応するアミノ末端アミノ酸残基を有するβ−アミロイドペプチドであ り、Ａは、この化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β− アミロイドペプチドの凝集を抑止するように該化合物のアミロイドペプチドに直 接又は間接的に結合した変性基であり、ｎはこの化合物が天然β−アミロイドペ プチドと接触したときに天然βアミロイドペプチドの凝集を抑止するように選択 される整数である。） 一具体例において、少なくとも１個のＡ基は、化合物のβ−アミロイドペプチ ドのアミノ末端に直接又は間接的に結合している。別の具体例では、少なくとも １個のＡ基が化合物のβ−アミロイドペプチドのカルボキシ末端に直接又は間接 的に結合している。さらに他の具体例では、少なくとも１個のＡ基が、化合物の β−アミロイドペプチドの少なくとも１個のアミノ酸残基の側鎖に直接又は間接 的に結合している。 また、本発明は、Ａβ凝集コアドメイン（ＡＣＤ）を少なくとも１個の変性基 に直接又は間接的にカップリングしてなるβ−アミロイド調節剤化合物であって 、これが天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプ チドの凝集を調節し又は神経毒性を抑止させるようにカップリングさせたβ−ア ミロイド調節剤化合物を提供する。好ましくは、Ａβ凝集コアドメインは、長さ が３〜１０個のアミノ酸の天然β−アミロイドペプチドのサブ領域にならってモ デル化される。 また、本発明は、下記の式からなるβ−アミロイド調節剤化合物を提供する。 （ここで、Ｘａａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃はそれぞれアミノ酸構造であり、Ｘａ ａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃の少なくとも２個は独立してロイシン構造、フェニル アラニン構造及びバリン構造よりなる群から選択され、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａは化合物に直接又は間接的に結合した変性基であり、ｎは整数であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₂、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びｎは、この化合物が天然β−ア ミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し 又は神経毒性を抑止するように選択される。） 好ましい具体例において、Ｘａａ₁及びＸａａ₂はそれぞれフェニルアラニン構造 である。他の具体例においては、Ｘａａ₂及びＸａａ₃はそれぞれフェニルアラニ ン構造である。 さらに、本発明は、下記の式からなるβ−アミロイド調節剤化合物を提供する 。 （ここで、Ｘａａ₁及びＸａａ₃はアミノ酸構造であり、 Ｘａａ₂はバリン構造であり、 Ｘａａ₄はフェニルアラニン構造であり、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａはこの化合物に直接又は間接的に結合した変性基であり、ｎは整数であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びｎは、この化合物が天然β−アミロイドペ プチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し又は神経毒 性を抑止するように選択される。） 好ましい具体例において、Ｘａａ₁はロイシン構造であり、Ｘａａ₃はフェニル アラニン構造である。 さらに、本発明は、下記の式からなる化合物を提供する。 A-Xaa₁-Xaa₂-Xaa₃-Xaa₄-Xaa₅-Xaa₆-Xaa₇-Xaa₈-B （ここで、Ｘａａ₁はヒスチジン構造であり、 Ｘａａ₂はグルタミン構造であり、 Ｘａａ₃はリシン構造であり、 Ｘａａ₄はロイシン構造であり、 Ｘａａ₅はバリン構造であり、 Ｘａａ₆フェニルアラニン構造であり、 Ｘａａ₇はフェニルアラニン構造であり、 Ｘａａ₈はアラニン構造であり、 Ａ及びＢはこの化合物のアミノ末端及びカルボキシ末端にそれぞれ直接又は間 接的に結合した変性基であり、 Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃、Ｘａａ₁−Ｘａａ₂又はＸａａ₁は存在しても存在 しなくてもよく、 Ｘａａ₈存在しても存在しなくてもよく、 Ａ及びＢの少なくとも１個は存在する。） 本発明は、さらに、変性基をペプチド構造に直接又は間接的に結合してなるβ −アミロイド調節剤化合物であって、該ペプチド構造が よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアミノ酸構造からなる、該β− アミロイド調節剤化合物を提供する。 調節基を含む本発明の化合物において、好ましくは、変性基は、環式、複素環 式又は多環式基からなる。好ましい変性基は、コラノイル構造のようなｃｉｓ− デカリン基を含有する。好ましい変性基は、コリル基、ビオチン含有基、ジエチ レントリアミンペンタアセチル基、（−）−メントキシアセチル基、フルオレセ イン含有基又はＮ−アセチルノイラミニル基を含む。 本発明の化合物は、例えば、化合物の薬物動力学的性質を変更させ又は化合物 を検出可能な物質で標識付けするためにさらに変性することができる。好ましい 放射性標識物は、放射性沃素又はテクネチウムである。 また、本発明は、モル過剰量の天然β−アミロイドペプチドと接触したときに 天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止するβ−アミロイド調節剤を提供する 。 さらに、本発明は、天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−ア ミロイドペプチの凝集を抑止するように、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１ 個のアミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなるβ−アミロイドペプチド化合物 を提供する。一具体例において、この化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少なく とも１個の内部アミノ酸欠失を有する。他の具体例では、この化合物は、βＡＰ_1-39 になぞらえて少なくとも１個のＮ−末端アミノ酸欠失を有する。さらに他の 具体例においては、化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１個のＣ−末 端アミノ酸欠失を有する。好ましい化合物は、βＡＰ_6-20（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ：１３）、βＡＰ_16-30（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、βＡＰ_1-20,26-40（Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）及びＥＥＶＶＨＨＨＨＱＱ−βＡＰ_16-40（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を含む。 本発明の化合物は、この化合物と製薬上許容できるキャリアーを含む製薬組成 物に処方することができる。また、この化合物は、診断薬の製造に又はアミロイ ド形成性疾病の治療に使用することができる。 本発明の別の観点は、本発明の化合物を使用する診断及び治療方法に関する。 本発明は、天然β−アミロイドペプチドの凝集が抑止されるように天然β−アミ ロイドを本発明の化合物と接触させることからなる、天然β−アミロイドペプチ ドの凝集を抑止する方法を提供する。また、本発明は、天然β−アミロイドペプ チドの神経毒性が抑止されるように天然β−アミロイドペプチドを本発明の化合 物と接触させることからなる、天然β−アミロイドペプチドの神経毒性を抑止す る方法を提供する。 他の具体例として、本発明は、生物学的試料中の天然β−アミロイドペプチド の存在の有無を検出するにあたり、生物学的試料を本発明の化合物と接触させ、 天然β−アミロイドペプチドに結合した化合物を検出することにより生物学的試 料中の天然β−アミロイドペプチドの存在の有無を検出することからなる、該検 出方法を提供する。一つの具体例では、β−アミロイド調節剤化合物と生物学的 試料がインビトロで接触される。他の具体例では、β−アミロイド調節剤化合物 は、β−アミロイド調節剤化合物を被検者に投与することによって生物学的試料 と接触される。インビボでの投与のためには、好ましくは化合物は、放射性テク ネチム又は放射性沃素により標識付けされる。 さらに他の具体例において、本発明は、生物学的試料を本発明の化合物と接触 させ、天然β−アミロイドペプチドに結合した化合物を検出してβ−アミロイド 形成性疾病の診断を容易にさせることからなる、β−アミロイド形成性疾病の診 断を容易にさせるために天然β−アミロイドペプチドを検出する方法を提供する 。一つの具体例では、β−アミロイド調節剤化合物と生物学的試料がインビトロ で接触される。他の具体例では、β−アミロイド調節剤化合物は、β−アミロイ ド調節剤化合物を被検者に投与することによって生物学的試料と接触される。イ ンビボでの投与のためには、好ましくは化合物は、放射性テクネチム又は放射性 沃素により標識付けされる。好ましくは、この方法はアルツハイマー病の診断を 容易にさせる。 また、本発明は、被験者がアミロイドーシスと関連した障害のために治療され るように、その被験者に製薬上又は予防上有効な量の本発明の化合物を投与する ことからなる、アミロイドーシスと関連した障害を治療する方法を提供する。こ の方法は、例えば、家族性アミロイド多発性神経障害（ポルトガル、日本及びス エーデン型）、家族性アミロイド心筋症（デンマーク型）、独立性心臓アミロイ ド、全身老人性アミロイドーシス、スクラピー、牛海綿状エンセファロパシー、 クロイツフェルト−ヤコブ病、ゲルストマン−シュトラウスラー−シュアインカ ー症候群、成人発症糖尿病、インスリノーマ、独立性心房アミロイドーシス、特 発性（原発性）アミロイドーシス、骨髄腫又はマクログロブリン血症と関連した アミロイドーシス、ジョーグレン症候群と関連した原発性局所皮膚小結節性アミ ロイドーシス、反応性（二期の）アミロイドーシス、蕁麻疹及び難聴を伴う家族 性地中海熱及び家族性アミロイドネフロパシー（マックルーウエルズ症候群）、 アイスランド型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、長期血液透析と関連し たアミロイドーシス、遺伝性非ニュロパシー全身アミロイドーシス（家族性アミ ロイド多発性神経障害III）、フィンランド型の家族性アミロイドーシス、甲状 腺の髄質癌と関連したアミロイドーシス、フィブリノーゲンと関連した遺伝性腎 臓アミロイドーシス及びリゾチームと関連した遺伝性全身アミロイドーシスより なる群から選択される障害を治療するのに使用することができる。 好ましい具体例において、本発明は、被験者がβ−アミロイドーシスと関連し た障害のために治療されるように、その被験者に製薬上又は予防上有効な量の本 発明の化合物を投与することからなる、β−アミロイドーシスと関連した障害を 治療する方法を提供する。好ましくは、障害はアルツハイマー病である。 さらに他の具体例において、本発明は、β−アミロイドーシスと関連した障害 について被験者を治療するにあたり、本発明の化合物が被験者において合成され 、その被験者がβ−アミロイドーシスと関連した障害のために治療されるように 、その被験者に本発明の化合物をコード化する組換え発現ベクターを投与するこ とからなる、β−アミロイドーシスと関連した障害を治療する方法を提供する。 好ましくは、障害はアルツハイマー病である。図面の簡単な説明 第１図は、β−アミロイド調節剤の不存在下又はβ−アミロイド調節剤Ｎ−ビ オチニル−βＡＰ_1-40（１％又は５％）の存在下で４００ｎｍの光学密度で測定 されたときのβ−ＡＰ_1-40の濁度を示すグラフである。 第２図は、本発明のβ−アミロイド調節剤を形成するようにβ−ＡＰ又はＡβ 凝集コアドメインを変性するのに使用できる化合物の該略である。 第３図は、培養されたニューロン細胞に対するＡβ_1-40凝集物（Ａβ_1-40単量 体ではなくて）の毒性を示すグラフである。 第４図は、等モル量のコリル−Ａβ_6-20（パネルＡ）、〜２倍モル過剰量のコ リル−Ａβ_6-20（パネルＢ）又は〜６倍モル過剰量のコリル−Ａβ_6-20（パネル Ｃ）の存在下でのＡβ_1-40の凝集並びに培養されたニューロン細胞に対応するパ ネルＡ、Ｂ及びＣの凝集物の毒性（パネルＤ、Ｅ及びＦ）を示すグラフである。発明の詳細な説明 本発明は、アミロイド形成蛋白及びペプチドの凝集を調節することができる化 合物及びその製薬組成物、特に、天然β−アミロイドペプチド（β−ＡＰ）の凝 集を調節することができ且つ天然β−ＡＰｓの神経毒性を抑止することができる 化合物に関する。天然β−ＡＰの凝集を調節する本発明の化合物（ここでは、β −アミロイド調節剤化合物、β−アミロイド調節剤又は単純に調節剤と換えて使 用するが）は、調節剤が天然β−ＡＰと接触したときに天然β−ＡＰの凝集を変 化させる。従って、本発明の化合物は、β−ＡＰについて天然凝集過程又は速度 を変化させることによってこの過程を壊すように作用する。好ましくは、本発明 の化合物は、β−ＡＰの凝集を抑止させる。さらに、本発明は、天然β−アミロ イドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化させ（ 及び好ましくは抑止する）のに十分である（以下に説明するように適当に変性さ れたときに。）β−アミロイドペプチドのサブ領域を提供する。本発明の特に好 ましい調節剤化合物は、β−ＡＰについて天然凝集過程又は速度を変化させる（ 及び好ましくは抑止する）のに十分である上述のＡβサブ領域（以下にさらに説 明する。）にならってモデル化されたＡβ凝集コアドメインの変性された形体か らなる。このＡβ凝集コアドメインは、３個ほどに少ないアミノ酸残基（又は、 その誘導体、類似体又は擬似体（ｍｉｍｅｔｉｃ））からなることができる。さ らに、Ａβ凝集コアドメインのアミノ酸配列は天然β−ＡＰに見出されるアミノ 酸配列に直接対応できるけれども、アミノ酸配列がβ−ＡＰの配列に直接対応す ることは必須ではない。むしろ、β−ＡＰの好ましいサブ領域（位置１７〜２０ を中心とした疎水性領域）から誘導されるアミノ酸残基は本発明の調節剤化合物 内で順序を再配列し及び（又は）同族の残基により置換することができ、それで もその抑止活性を維持することができる（以下に詳述する。）。 本発明のβ−アミロイド調節剤化合物は、インビトロでの天然β−ＡＰの凝集 を抑制し及び（又は）培養された細胞に対する天然β−ＡＰフィブリルの神経毒 性を抑止する能力に基づいて（以下に説明する検定法を使用して）選択すること ができる。従って、好ましい調節剤化合物は、天然β−ＡＰの凝集を抑制し及び （又は）天然β−ＡＰの神経毒性を抑止する。しかし、これらの性質の一方又は 両方に基づいて選択さらた調節剤化合物は、アミロイドーシスの治療において有 益であり得るインビボでの追加性質を有することができる。例えば、調節剤化合 物は、（直接又は間接的なプロテアーゼの抑制によって或はインビボで毒性のβ −ＡＰ又はその他のＡＰＰ断片を生じる過程を調節することによって天然β−Ａ Ｐの過程を妨げることができる。或いは、調節剤化合物は、インビトロでのＡβ の凝集の抑止よりはむしろこれらの後者の性質に基づいて選択することができる 。さらに、天然β−ＡＰとの相互作用に基づいて選択される本発明の調節剤化合 物は、ＡＰＰ又はその他のＡＰＰ断片と相互作用することができる。 β−アミロイドの凝集の“調節剤”とは、ここで使用するときは、天然β−ア ミロイドペプチドと接触したときに、天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化 させる物質を言うものである。用語“β−アミロイドペプチドの凝集”とは、ペ プチドが互いに会合して多量体の非常に不溶性の錯体を形成するような過程を言 う。さらに、用語“凝集”とは、β−アミロイドフィブリルの形成を包含し、ま たβ−アミロイドプラークも包含するものとする。 ここに相互変換的に使用される用語“天然β−アミロイドペプチド”、“天然 β−ＡＰ”及び“天然Ａβペプチド”とは、β−ＡＰの凝集及びβ−アミロイド ーシスに関係するβ−アミロイド先駆体蛋白（ＡＰＰ）の天然産蛋白分解生成物 を包含するものとする。これらの天然ペプチドは、３９〜４３個のアミノ酸を有 するβ−アミロイドペプチド（即ち、Ａβ_1-39、Ａβ_1-40、Ａβ_1-41、Ａβ_1-42 及びＡβ_1-43）を包含する。天然β−ＡＰのアミノ末端アミノ酸残基は、アミロ イド先駆体蛋白の７７０個のアミノ酸残基形体（“ＡＰＰ−７７０”）の位置６ ７２のアスパラギン酸残基に対応する。天然β−ＡＰの４３個のアミノ酸長さの 形体は次のアミノ酸配列 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIAT （また、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示される。）を有するが、これよりも短い形 体はカルボキシ末端からの１〜４個のアミノ酸残基欠失を有する。ＡＰＰ−７７ ０の位置６７２（即ち、天然β−ＡＰのアミノ末端）からそのＣ末端までのアミ ノ酸配列（１０３個のアミノ酸）をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で示す。以下に説明 する凝集検定法に使用するのに好ましい形体の天然β−ＡＰは、Ａβ_1-40である 。 本発明の調節剤の存在下では、天然β−アミロイドペプチドの凝集が“変化” 又は“調節”される。種々の形の用語“変化”又は“調節”とは、β−ＡＰの凝 集ｎｏ抑止及びβ−ＡＰの凝集の促進の両方を包含するものとする。天然β−Ａ Ｐの凝集は、調節剤の不存在下にβ−ＡＰ凝集の量及び（又は）速度と比べてβ −ＡＰ凝集の量及び（又は）速度の低下があるときに、調節剤の存在下に“抑止 ”される。種々の形の用語“抑止”とは、β−ＡＰの凝集の完全な抑止及び部分 的な抑止の両方を包含するものとする。凝集の抑止は、実施例に記載するような 凝集検定法を使用して、凝集のための倍で表したラグタイムの増加又は凝集の全 平坦域レベル（即ち、凝集の総量）の減少として定量化することができる。種々 の具体例において、本発明の調節剤は、凝集のラグタイムを少なくとも１．２倍 、１．５倍、１．８倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍又は５倍増加させる。種々 の他の具体例においては、本発明の調節剤は、凝集の平坦域レベルを少なくとも １０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％又は１００％抑止する。 β−ＡＰの凝集を抑止する調節剤（“抑止性調節剤化合物”）は、β−アミロ イドの沈着の開始を防止し又は遅延させるのに使用することができる。さらに、 例１０において立証するように、本発明の抑止性調節剤化合物は、天然Ａβペプ チドの神経毒性凝集物の形成及び（又は）活性を抑止する（即ち、抑止性化合物 は、β−ＡＰの神経毒性を抑止するのに使用することができる。）。さらにまた 、例１０において立証するように、本発明の抑止性化合物は、予め形成されたβ −ＡＰ凝集物の神経毒性を低下させるのに使用することができ、抑止性調節剤が 予め形成されたＡβフィブイル又は可溶性凝集物に結合し、その固有の神経毒性 を調節することができ或いは調節剤がβ−ＡＰの単量体形体と凝集形体との間の 平衡を神経毒性でない形体の方に撹乱させ得ることを示している。 さらに、別の具体例において、本発明の調節剤化合物は、天然Ａβペプチドの 凝集を促進させる。種々の形の用語“促進”とは、調節剤の不存在下でのβ−Ａ Ｐの凝集の量及び（又は）速度と比べて、調節剤の存在下でのβ−ＡＰの凝集の 量及び（又は）速度の増加を言う。Ａβの凝集を促進させるこのような化合物は 、刺激性調節剤化合物という。刺激性調節剤化合物は、例えば、β−ＡＰの凝集 が有害である生物学的区画から、β−ＡＰの凝集が有害でなくてβ−ＡＰを枯渇 させ得る生物学的区画にβ−アミロイドペプチドを隠退させるのに有用である。 さらに、刺激性調節剤化合物は、インビトロでの凝集検定法（例えば、実施例に 記載のような検定法）において、例えばこのＡβの凝集を抑止し又は逆にさせる ことができる被検化合物のためのスクリーニング検定法においてＡβの凝集を促 進させるのに使用することができる（即ち、刺激性調節剤化合物は、Ａβ凝集物 の形成を促進させる“種”として作用し得る。）。 好ましい具体例において、本発明の調節剤は、モル過剰量の天然β−ＡＰと接 触したときにβ−ＡＰの凝集を変化させることができる。“モル過剰量の天然β −ＡＰ”とは、調節剤のモル濃度よりも大きい天然β−ＡＰのモル濃度を言う。 例えば、調節剤とβ−ＡＰが両方とも１μＭの濃度で存在するならば、それらは “等モル”といわれるが、これに対して調節剤が１μＭの濃度で存在し且つβ− ＡＰが５μＭの濃度で存在するならば、β−ＡＰは調節剤と比べて５倍モル過剰 量で存在するという。好ましい具体例において、本発明の調節剤は、天然β−Ａ Ｐが調節剤の濃度と比べて少なくとも２倍、３倍又は５倍モル過剰量で存在する ときに天然β−ＡＰの凝集を変化させるのに有効である。他の具体例において、 調節剤は、天然β−ＡＰが調節剤の濃度と比べて少なくとも１０倍、２０倍、３ ３倍、５０倍、１００倍、５００倍又は１０００倍モル過剰量で存在するときに β−ＡＰの凝集を変化させるのに有効である。 本発明の調節剤及びその用途のさらに種々の観点について以下に詳細に説明す る。 Ｉ．調節剤化合物 一つの具体例において、本発明の調節剤化合物は、次式よりなるβ−アミロイ ドペプチド化合物からなる。 （ここで、Ｘａａはβ−アミロイドペプチドであり、Ａは、この化合物が天然β −アミロイドペプチドと接触したときに天然アミロイドペプチドの凝集を抑止す るように化合物のアミロイドペプチドに直接又は間接的に結合した調節基であり 、ｎはこの化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然βアミロ イドペプチドの凝集を抑止するように選択される整数である。） 好ましくは、本発明の化合物のβ−アミロイドペプチドは、β−アミロイド先 駆体蛋白−７７０（ＡＰＰ−７７０）の位置６６８に対応し又はＡＰＰ−７７０ の位置６６８に対してカルボキシ末端側の残基に対応するアミノ末端アミノ酸残 基を有する。位置６６８から位置７７０（即ち、カルボキシ末端）までのＡＰＰ −７７０のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として以下の式 EVKMDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIATVIVITL VMLKKKQYTSIHHGVVEVDAAVTPEERHLSKMQQNGYENPTYKFFEQMQN で示される。さらに好ましくは、β−アミロイドペプチドのアミノ末端アミノ酸 残基は、ＡＰＰ−７７０の位置６７２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列 の位置５）に対応し又はＡＰＰ−７７０の位置６７２に対してカルボキシ末端側 の残基に対応する。本発明の化合物のβ−アミロイドペプチドは、ＡＰＰ−７７ ０の位置６６８〜７７０に対応する１０３個のアミノ酸残基を包むことができ、 好ましくはペプチドは長さが６〜６０個のアミノ酸、さらに好ましくは長さが１ ０〜４０個のアミノ酸、最も好ましくは長さが１０〜２５個のアミノ酸残基の間 である。 用語“β−アミロイドペプチド”とは、ここで使用するときは、本発明の調節 剤において使用したように、ＡＰＰにおける天然配列のアミノ酸配列と同等のア ミノ酸配列を有するペプチド並びに天然配列から許容できるアミノ酸置換を有す るペプチドを包含するものとする。許容できるアミノ酸置換は、ペプチドが天然 β−ＡＰの凝集を変化させる能力に影響を与えないものである。さらに特定のア ミノ酸置換は、ペプチドが天然β−ＡＰの凝集を変化させる能力に寄与し得るし 及び（又は）ペプチドに追加の有益な性質（例えば、溶解度の増加、その他のア ミロイド蛋白との会合の減少など）を付与し得る。例えば、天然β−ＡＰの位置 １９及び２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示されるアミノ酸配列の位置１９及び ２０）の２個のフェニルアラニン残基の疎水性アミノ酸残基による置換は、ペプ チドが天然β−ＡＰの凝集を変化させる能力にさらに寄与し得る（ヒルビッヒＣ ．(1992)J．Mol．Biol．228:460-473を参照）。従って、一つの具体例において 、化合物のβ−ＡＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として示される下記の式 DAEFRHDSGYEVHHQKLV(Xaa₁₉)(Xaa₂₀)AEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIAT （又はそのアミノ末端又はカルボキシ末端の欠失） （ここで、Ｘａａは疎水性アミノ酸である。） のアミノ酸配列からなる。疎水性アミノ酸の例は、イソロイシン、ロイシン、ト レオニン、セリン、アラニン、バリン又はグリシンである。好ましくは、Ｆ₁₉Ｆ₂₀ がＴ₁₉Ｔ₂₀又はＧ₁₉Ｉ₂₀により置換される。 その他の好適なアミノ酸置換には、ヒトペプチドにおけるアミノ酸の齧歯類β −ＡＰペプチドの対応アミノ酸による置換が含まれる。ヒトβ−ＡＰとラットβ −ＡＰの間で異なる３個のアミノ酸残基は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及び３で示 されるアミノ酸配列の位置５、１０及び１３である。ヒトと齧歯類の置換：Ａｒ ｇ₅とＧｌｙ、Ｔｙｒ₁₀とＰｈｅ及びＨｉｓ₁₃とＡｒｇを有するヒトβ−ＡＰは 、ヒトペプチドの性質を保持することが示された（フレーザーＰ．Ｅ．他(1992) Biochemistry 31:10716-10723 及びヒルビッヒＣ．他(1991)Eur．J．Bio．Chem ．201:61-69を参照されたい。）。従って、齧歯類β−ＡＰａ．ａ．置換を有す るヒトβ−ＡＰは、本発明の調節剤において使用するのに好適である。 その他の可能なβ−ＡＰアミノ酸置換は、ヒルビッヒＣ．他(1991)J．Mol．Bi ol．218:149-163 及びヒルビッヒＣ．他(1992)J．Mol.Biol．228:460-473 に 記載されている。さらに、β−ＡＰがその他の蛋白と会合する能力に影響を与え るアミノ酸置換を導入することができる。例えば、β−ＡＰがセルピン酵素錯体 （ＳＥＣ）受容体、α１−アンチキモトリプシン（ＡＣＴ）及び（又は）アポリ ポ蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）と会合する能力を減少させる一つ以上のアミノ酸置換を導 入することができる。ＳＥＣ受容体に対する結合を減少させるための好ましい置 換は、Ｌ₃₄Ｍ₃₅とＡ₃₄Ａ₃₅（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及び３で示されるアミノ酸 配列の位置３４及び３５）である。ＡＣＴに対する結合を減少させるための好ま しい置換は、Ｓ₈とＡ₈（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及び３で示されるアミノ酸配列 の位置８）である。 ここに説明した又は斯界で知られたβ−ＡＰアミノ酸置換の別法として、少な くとも一部がアミノ酸置換β−アミロイドペプチドからなる調節剤を、標準的な 手順で製造し、ここに説明する凝集検定法を使用してβ−ＡＰの凝集を変化させ る能力について試験することができる。元の調節剤の性質を保持するためには、 好ましくは保存的なアミノ酸置換が１個以上のアミノ酸残基で行われる。“保存 的なアミノ酸置換”とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基によ り置換されるようなものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基の部類は、斯 界で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン） 、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、帯電していない極性側 鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロ シン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソ ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β− 分岐状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例 えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を包含する 。従って、天然β−ＡＰの凝集を変化させる能力を依然として保持しているＡＰ Ｐ−７７０における野生型配列のアミノ酸配列から突然変異したアミノ酸配列を 有するβ−アミロイドペプチドからなる調節剤は、本発明の範囲内に入る。 用語“β−アミロイドペプチド”とは、ここで使用するときは、さらに、ここ に説明するような天然β−ＡＰの凝集を変化させる能力を保持するペプチド類似 体又はペプチド誘導体又はペプチド擬似体を包含するものとする。例えば、本発 明の調節剤のβ−アミロイドペプチドは、その安定性、バイオアベイラビリテイ 、溶解度などを増大させるように変性することができる。用語“ペプチド類似体 ”、“ペプチド誘導体”及び“ペプチド擬似体”とは、ここで使用するときは、 ペプチドの化学構造を模倣し且つペプチドの機能的性質を保持する分子を包含す るものとする。ペプチド類似体を設計する方法は斯界で知られいる。例えば、フ ァーマーＰ．Ｓ．「ドラッグ・デザイン」（Ｅ．Ｊ．アリエンス編）アカデミッ ク・プレス社、ＮＹ、1980，vol.10，pp.119-143；ボールＪ．Ｂ．及びアレウッ ドＰ．Ｆ．(1990)J．Mol．Recognition 3:55 ；モルガンＢ．Ａ．及びゲイノア Ｊ．Ａ．(1989)Ann．Rep．Med．Chem．24:243；フライディンガーＲ．Ｍ．(1989 )Trends Pharmacol．Sci．10:270を参照されたい。ペプチド類似体、誘導体及 びペプチド擬似体の例には、１個以上のベンゾジアゼピン分子により置換された ペプチド（例えば、ジェームズＧ．Ｌ．他(1993)Science 260:1937-1942を参照 されたい。）、メチル化アミド結合を有するペプチド及び“レトロ−インバーソ ”ペプチド（シストによる米国特許第４，５２２，７５２号を参照）が含まれる 。ペプチド類似体、ペプチド誘導体及びペプチド擬似体は、Ａβ凝集コアドメイ ンを含む化合物に関して以下に詳細に説明する。 上で示した式を有する本発明の調節剤において、調節基（“Ａ”）は、調節剤 のβ−アミロイドペプチドに直接又は間接的に結合される（用語“調節基”及び “変性基”は、ここで使用するときは、Ａβから誘導のペプチド構造に直接又は 間接的に結合した化学基を説明するために相互変換的に使用する。）。例えば、 調節基はβ−アミロイドペプチドに共有結合により直接又は間接的に結合し、或 いは調節基は安定な非共有的会合により直接又は間接的に結合することができる 。本発明の一具体例において、調節基は調節剤のβ−アミロイドペプチドのアミ ノ末端に結合される。従って、調節剤は、次式 を有する化合物からなる。また、本発明の別の具体例においては、調節基は、調 節剤のβ−アミロイドペプチドのカルボキシ末端に結合される。従って、調節剤 は、次式 を有する化合物からなる。さらに他の具体例において、調節基は、化合物のβ− アミロイドペプチドの少なくとも１個のアミノ酸残基の側鎖に結合される（例え ば、リシル残基のε−アミノ基により、アスパラギン酸残基又はグルタミン酸残 基のカルボキシル基により、チロシル残基、セリン残基又はトレオニン残基のヒ ドロキシル基により、或いはアミノ酸側鎖上の他の好適な反応性基により）。 調節基は、化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−ア ミロイドペプチドの凝集を抑止するように選択される。従って、化合物のβ−Ａ ペプチドがその天然状態から変性されるので、調節基“Ａ”は、ここで使用する ときは、水素を含まないものとする。好ましい具体例において、調節基は、次式 （ここで、Ｘ₁〜Ｘ₃はそれぞれＳ、Ｏ及びＮＲ₂（Ｒ₂は水素、又はアリール、低 級アルキル、アルケニル若しくはアルキニル部分である。）から独立に選択され 、Ｗは＝Ｏ又はＮＲ₂であり、Ｒ₁は低級アルキレニル部分であり、Ｙは直接結合 又はβ−ＡＰ上のターゲット基と反応する能力に関して選択されるスペーサー分 子である。Ｘ₁〜Ｘ₃又はＷの少なくとも１個はＮＲ₂である。） のビオチン化合物である。 用語“アリール”とは、置換又は非置換の環を含有する芳香族部分、例えば、 ベンジル、ナフチルなどを包含するものとする。その他のより複雑な縮合環部分 も包含されるものとする。 用語“低級アルキル又はアルキレニル部分”とは、１〜約６個、好ましくは１ 〜３個の炭素原子を含有する飽和の直鎖又は分岐鎖状（又はこの組合せ）炭化水 素を言う。用語“低級アルケニル部分”及び“低級アルキニル部分”とは、１〜 約６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を含有する不飽和の炭化水素を言う。好 ましくは、Ｒ₂は１〜３個の炭素原子を含有する。好ましくは、Ｒ₁は４個の炭素 原子を含有する。 スペーサー分子（Ｙ）は、例えば、低級アルキル基又はリンカーペプチドであ ってよく、好ましくは、遊離アミノ基（例えば、β−ＡＰのアミノ末端のα−ア ミノ基）と結合する能力に関して選択される。従って、好ましい具体例において 、ビオチン化合物は、β−アミロイドペプチドのアミノ末端を変性させる。 さらに好適な調節基には、その他の環式及び複素環式化合物並びに類似の立体 的な“嵩さ”を有するその他の化合物が含まれる。β−ＡＰを変性するのに使用 できる化合物の限定的ではない例を第２図に概略的に示すが、Ｎ−アセチルノイ ラミン酸、コール酸、ｔｒａｎｓ−４−コチニンカルボン酸、２−イミノ−１− イミダゾリジン酢酸、（Ｓ）−（−）−インドリン−２−カルボン酸、（−）− メントキシ酢酸、２−ノルボルナン酢酸、γ−オキソ−５−アセナフテン酪酸、 （−）−２−オキソ−４−チアゾリンカルボン酸、テトラヒドロ−３−フラン酸 、２−イミノビオチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ジエチレント リアミン五酢酸二無水物、塩化４−モルホリンカルボニル、塩化２−チオフェン アセチル、塩化２−チオフェンスルホニル、５−（及び６−）カルボキシフルレ セイン（スクシンイミジルエステル）、フルオレセインイソチオシアネート及び 酢酸（又はその誘導体）が含まれる。好適な調節基は、後記のIIの部で詳述する 。 本発明の調節剤には、単一の調節基をβ−アミロイドペプチドに結合させるこ とができ（例えば、上に示した基においてｎ＝１）、又は多くの調節基をペプチ ドに結合することができる。調節基の数は、化合物が天然β−アミロイドペプチ ドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止させるように選択 される。しかし、ｎは、好ましくは１〜６０、さらに好ましくは１〜３０、最も 好ましくは１〜１０又は１〜５の間の整数である。 他の具体例において、本発明のβ−アミロイド調節剤化合物は、Ａβ凝集コア ドメイン（以下、ＡＣＤと略記する。）を、この化合物が天然β−アミロイドペ プチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し又は神経毒 性を抑止させるように、変性基に直接又は間接的に結合させてなるものである。 用語“Ａβ凝集コアドメイン”とは、ここで使用するときは、天然β−ＡＰのこ のサブ領域は以下に説明するように適切に変性される（例えば、アミノ末端で変 性される。）ときに天然β−ＡＰｓの凝集を調節するのに十分である天然β−Ａ Ｐのサブ領域にならってモデル化される構造を言うものとする。用語“天然β− アミロイドペプチドのサブ領域”とは、天然β−ＡＰのアミノ末端及び（又は） カルボキシ末端失欠を包含するものとする。従って、用語“天然β−ＡＰのサブ 領域”は、天然β−ＡＰの全長を包含しないものとする（即ち、“サブ領域”は Ａβ_1-39、Ａβ_1-40、Ａβ_1-41、Ａβ_1-42及びＡβ_1-43を包含しない）。 特定の機構によって限定するつもりはないが、本発明の調節剤のＡＣＤは、化 合物を認識して天然β−ＡＰと特異的に相互作用させる特定のターゲット官能基 を化合物に与えるものと思われる。好ましくは、ＡＣＤは、長さが１５個よりも 少ないアミノ酸、さらに好ましくは長さが３〜１３個のアミノ酸である天然β− ＡＰのサブ領域にならってモデル化される。種々の具体例において、ＡＣＤは、 長さが１０、９、８、７、６、５、４又は３個のアミノ酸であるβ−ＡＰのサブ 領域にならってモデル化される。一つの具体例において、ＡＣＤがモデル化され るβ−ＡＰのサブ領域は、β−ＡＰの内部又はカルボキシ末端領域（即ち、アミ ノ酸位置１のアミノ末端の下流）である。他の具体例では、ＡＣＤは、疎水性で あるβ−ＡＰのサブ領域にならってモデル化される。ある特定の具体例では、用 語“Ａβ凝集コアドメイン”は、アミノ酸位置１〜１５（Ａβ_1-15）、６〜２０ （Ａβ_6-20）及び１６〜４０（Ａβ_16-40）に対応するβ−ＡＰサブ領域を特に 除外する。 Ａβ凝集コアドメインは、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基からな っていてよい。即ち、ＡＣＤは、β−ＡＰのサブ領域に対応するペプチドであっ てよい。或いは、Ａβ凝集コアドメインは、天然Ａβペプチド領域にならってモ デル化さてもよいが、ペプチド類似体、ペプチド誘導体又はペプチド擬似体或い は天然ペプチドの構造及び機能をまねるその他の類似の化合物からなっていてよ い。従って、“Ａβ凝集コアドメイン”とは、ここで使用するときは、適切に変 性されたときに、変性された天然Ａβペプチドサブ領域の凝集調節活性を保持す るペプチド、ペプチド類似体、ペプチド誘導体又はペプチド擬似体化合物を包含 するものとする。アミノ酸配列に基づいて設計されるこのような構造は、ここで は“Ａβから誘導のペプチド構造”と言う。ペプチド類似体、ペプチド誘導体又 はペプチド擬似体を設計する方法は斯界で知られている。例えば、ファーマーＰ ．Ｓ．「ドラッグ・デザイン」（Ｅ．Ｊ．アリエンス編）アカデミック・プレス 社、ＮＹ、1980,vol.10,pp.119-143；ボールＪ．Ｂ．及びアレウッドＰ．Ｆ．(1 990)J．Mol．Recognition 3:55；モルガンＢ．Ａ．及びゲイノアＪ．Ａ．(1989) Ann．Rep．Med．Chem．24:243 ；フライディンガーＲ．Ｍ．(1989)Trends Pharm acol．Sci．10:270を参照されたい。また、ソーヤーＴ．Ｋ．（1990）“ペプチ ド擬似体の設計及びペプチド代謝への化学的アプローチ”、テーラーＭ．Ｄ．及 びアミドンＧ．Ｌ．編“ペプチド系のドラッグデザイン：輸送及び代謝の制御” １７章；スミスＡ．Ｂ．他(1995)J．Am．Chem．Soc.,117:1113-11123 ；スミス Ａ．Ｂ．三世他(1994)J．Am．Chem．Soc．116:9947-9962；ヒルシュマンＲ．他( 1993)J．Am．Chem．Soc．115:12550-12568を参照されたい。 化合物Ｘ（例えば、ペプチド又はアミノ酸）の“誘導体”とは、ここで使用す るときは、化合物上の１個以上の反応基が置換基によって誘導体化された形のＸ を言う。ペプチド誘導体の例には、アミノ酸側鎖、ペプチド主鎖又はアミノ若し くはカルボキシ末端が誘導体化されたペプチドが包含される（例えば、メチル化 アミド結合を有するペプチド化合物）。化合物Ｘの“類似体”とは、ここで使用 するときは、Ｘの機能的活性に必要なＸの化学構造を保持するが、Ｘと異なった ある種の化学構造を含有する化合物を言う。天然産ペプチドの類似体の例は、１ 個以上の非天然産アミノ酸を含むペプチドである。化合物Ｘの“擬似体”とは、 ここで使用するときは、Ｘの機能的活性に必要なＸの化学構造がＸの立体配座を まねるその他の化学構造により置き換えられている化合物を言う。ペプチド擬似 体の例には、ペプチド主鎖が１個以上のベンゾジアゼピン分子により置換された ペプチド化合物（例えば、ジェームズＧ．Ｌ．他(1993)Science 260:1937-1942 を参照されたい。）、全てのＬ−アミノ酸が対応するＤ−アミノ酸により置換さ れたペプチド及び“レトロ−インバーソ”ペプチド（シストによる米国特許第４ ，５２２，７５２号を参照されたい。）が含まれる。 用語“擬似体”、特に“ペプチド擬似体”とは、イソスターを包含するものと する。ここで、用語“イソスター”とは、第二の化学構造を置き換えることがで きる第一の化学構造を包含するものとする。なぜならば、第一の構造の空間立体 配座が第二の構造に特有の結合部位に合致するからである。この用語は、当業者 に周知のペプチド主鎖の変性（即ち、アミド結合擬似体）を特に包含する。この ような変性には、アミド窒素、α−炭素、アミドカルボニルの変性、アミド結合 の完全置換、延長、失欠又は主鎖の架橋が含まれる。いくつかのペプチド主鎖の 変性は周知であって、Ψ［ＣＨ₂Ｓ］、Ψ［ＣＨ₂ＮＨ］、Ψ［ＣＳＮＨ₂］、Ψ ［ＮＨＣＯ］、Ψ［ＣＯＣＨ₂］及びΨ［（Ｅ）又は（Ｚ）ＣＨ＝ＣＨ］を含む 。上で使用した命名において、Ψはアミド結合の不存在を示す。アミド基を置き 換える構造は、括弧内に示す。イソスターのその他の例は、１個以上のベンゾジ アゼピン分子により置換されたペプチド（例えば、ジェームズＧ．Ｌ．他(1993) Science 260:1937-1942 を参照されたい。）を含む。 その他の可能な変性はＮ−アルキル（又はアリール）置換（Ψ［ＣＯＮＲ］） 、ラクタム及びその他の環式構造を構成するための主鎖の架橋、化合物内の全て のＬ−アミノ酸のＤ−アミノ酸による置換（“インバーソ”化合物）又は“レト ロ−インバーソ”アミノ酸組込み（Ψ［ＮＨＣＯ］）を包含する。用語“インバ ーソ”とは配列のＬ−アミノ酸をＤ−アミノ鎖により置き換えることを意味し、 また“レトロ−インバーソ”又は“エナンチオ−レトロ”とはアミノ酸の配列を 逆にし（“レトロ”）、Ｌ−アミノ酸をＤ−アミノ酸により置き換えることを意 味する。 例えば、親のペプチドがＴｈｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒであるならば、レトロ変性体 はＴｙｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒであり、インバーソ体はｔｈｒ−ａｌａ−ｔｙｒであ り、レトロ−インバーソ体はｔｙｒ−ａｌａ−ｔｈｒである（小文字はＤ−アミ ノ酸を言う。）。親のペプチドと比べて、レトロ−インバーソペプチドは逆の主 鎖を有するが、側鎖の元の空間立体配座を実質上保持し、親のペプチドにぴった りと類似するトポロジーを有するレトロ−インバーソ異性体をもたらす。グッド マン他、“ペプチド化学における展望”pp.283-294(1981)を参照されたい。また 、“レトロ−インバーソ”ペプチドについてはシストによる米国特許第４，５２ ２，７５２号を参照されたい。 本発明の調節剤化合物のその他の誘導体は、Ｃ−末端ヒドロキシメチル誘導体 、Ｏ−変性誘導体（例えば、Ｃ−末端ヒドロキシメチルベンジルエーテル）、ア ルキルアミド及びヒドラジドのような置換アミドを含めてＮ−末端変性誘導体、 Ｃ−末端フェニルアラニン残基がフェネチルアミド類似体で置き換えられている 化合物（例えば、トリペプチドＶａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅの類似体としてのＶａｌ −Ｐｈｅ−フェネチルアミド）を包含する。 好ましい具体例において、調節剤のＡＣＤは、アミノ酸位置１７〜２０（即ち 、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）を包含するβ −ＡＰのサブ領域にならってモデル化される。例７、８及び９においてさらに説 明するように、Ａβ_1-40のペプチドサブ領域を製造し、アミノ末端を変性し、そ れらの天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節する能力を評価した。凝集を抑 止するのに有効であった一つのサブ領域は、Ａβ_6-20（即ち、天然Ａβ_1-40ペプ チドのアミノ酸残基６〜２０。このアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で示 される）であった。凝集抑止活性のために十分であった最小のサブ領域をさらに 明確にするために上記のサブ領域のアミノ末端又はカルボキシ末端からアミノ酸 残基を連続的に欠如させた。この方法は、適切に変性されたときに、凝集抑止活 性のために十分である最小サブ領域としてＡβ_17-20（即ち、天然Ａβ_1-40ペプ チドのアミノ酸残基１７〜２０）を規定した。従って、本発明の調節剤化合物内 の“Ａβ凝集コアドメイン”は、Ａβ_17-20にならってモデル化することができ る。一具体例において、Ａβ凝集コアドメインはＡβ_17-20自体からなる（即ち 、アミノ酸配列ロイシン−バリン−フェニルアラニン−フェニルアラニンからな るペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。他の具体例において、Ａβ_17-20の 構造は、Ａβ_17-20と類似の構造及び機能を有するＡβ凝集コアドメインを設計 するためのモデルとして使用される。例えば、Ａβ_17-20のペプチド擬似体、誘 導体又は類似体（上記のような）をＡβ凝集コアドメインとして使用することが できる。Ａβ_17-20の他に、天然Ａβペプチドは、凝集抑止活性のために十分で あるその他の最小サブ領域を含有するようである。このような追加の最小サブ領 域は、例７、８及び９に記載の方法により同定すことができる。これらの例では 、Ａβ_1-40の１５両体のサブ領域がアミノ末端又はカルボキシ末端から欠如され 、欠如されたペプチドを適切に変性し、次いで凝集抑止活性について評価した。 Ａβ_17-20にならってモデル化したＡβ凝集コアドメインを少なくとも１個の 変性基に直接又は間接的に結合させてなるβ−アミロイド調節剤化合物の一つの 形体は、次式 （ここで、Ｘａａ₁及びＸａａ₃はアミノ酸構造であり、 Ｘａａ₂はバリン構造であり、 Ｘａａ₄はフェニルアラニン構造であり、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａは化合物に直接又は間接的に結合した変性基であり、ｎは整数であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びｎは、この化合物が天然β−アミロイドペ プチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し又は神経毒 性を抑止するように選択される。） を有する。 好ましくは、上記の式の調節剤化合物は、天然β−アミロイドペプチドと接触 したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止し及び（又は）Ａβ神経毒 性を抑止する。或いは、この調節剤化合物は、天然β−アミロイドペプチドと接 触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を促進させることができる。調 節剤に結合した変性基（“Ａ”）の種類及び数は、この化合物が天然β−アミロ イドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化（及び 好ましくは抑止）するように選択される。単一の変性基を調節剤に結合させるこ とができ（即ち、上記の式においてｎ＝１）、或いは多くの変性基を調節剤に結 合させることができる。種々の具体例において、ｎは、１〜６０、１〜３０、１ 〜１０、１〜５又は１〜３の間の整数である。変性基の好適なタイプは、以下の IIの部においてさらに説明する。 例９で立証するように、Ａβ_17-20（Ｘａａ₂及びＸａａ₄に対応する。）のア ミノ酸位置１８（Ｖａｌ₁₈）及び２０（Ｐｈｅ₂₀）は、調節剤化合物の抑止活性 のためにコアドメイン内で特に重要である。従って、これらの位置は上記の式に おいてコアドメイン内で保存される。用語“バリン構造”及び“フェニルアラニ ン構造”とは、上記の式で使用するときは、天然アミノ酸並びに化合物の機能的 活性を保持するバリン及びフェニルアラニン（Ｄ−アミノ酸も含めて）のそれぞ れの非天然産の類似体、誘導体及び擬似体を包含するものとする。さらに、Ｖａ ｌ₁₈及びＰｈｅ₂₀は重要な機能的役割を有するが、Ｘａａ₂及び（又は）Ｘａａ₄ がそれぞれバリン又はフェニルアラニンと構造的に関連するがそれでも化合物の 活性を保持するその他の天然産アミノ酸により置換できることが可能である。従 って、用語“バリン構造”とはＸａａ₂でバリンの活性を保持する保存性のアミ ノ酸置換を包含するものとし、また用語“フェニルアラニン構造”とはＸａａ₄ でフェニルアラニンの活性を保持する保存性のアミノ酸置換を包含するものとす る。しかし、用語“バリン構造”は、トレオニンを包含しないものとする。 Ａβ_17-20の一１８及び２０とは逆に、１９位置（Ｘａａ₃に対応する。）での ＰｈｅとＡｌａの置換は、調節剤の活性を破壊せず、位置１９はアミノ酸置換に 対して影響を受けやすいことを示した。上記の式の種々の具体例において、位置 Ｘａａ₁及びＸａａ₃は任意のアミノ酸構造である。用語“アミノ酸構造”とは、 Ｄ−アミノ酸を含めて、天然の及び天然でないアミノ酸並びにそれらの類似 体、誘導体及び擬似体を包含するものとする。上記の式の好ましい具体例におい て、Ｘａａ₁はロイシン構造であり、Ｘａａ₃はフェニルアラニン構造である（即 ち、天然Ａβペプチド配列においてそれぞれＬｅｕ₁₇及びＰｈｅ₁₉にならってモ デル化される）。用語“ロイシン構造”は上記のバリン構造及びフェニルアラニ ン構造と同様に使用される。或いは、他の具体例では、Ｘａａ₃はアラニン構造 である。 上記の式の調節剤の４個のアミノ酸構造ＡＣＤは、天然Ａβペプチド配列か又 は天然でないＡβ配列から誘導されたペプチド構造によりアミノ末端側で、カル ボキシ末端側で又は両方で結合させることができる。用語“ペプチド構造”とは 、前記のようにペプチド類似体、誘導体及び擬似体を包含するものとする。ペプ チド構造は１個以上の連結したアミノ酸構造からなっており、そのタイプ及び数 は可変である。例えば、一つの具体例では、Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａ ａ₄コア配列に隣接する追加のアミノ酸構造はない（即ち、Ｙ及びＺは上記の式 では不存在である。）。他の具体例においては、１個以上の追加のアミノ酸構造 がコア配列のアミノ末端のみに隣接する（即ち、上記の式でＹは存在するが、Ｚ は存在しない。）。さらに他の具体例において、１個以上の追加のアミノ酸構造 がコア配列のカルボキシ末端のみに隣接する（即ち、上記の式でＺは存在するが 、Ｙは存在しない。）。また、Ｚ又はＹを隣接させる長さは可変である。例えば 、一つの具体例において、ａ及びｂは１〜１５の間の整数である。さらに好まし くは、ａ及びｂは１〜１０の間の整数である。さらに好ましくは、ａ及びｂは１ 〜５の間の整数である。最も好ましくは、ａ及びｂは１〜３の間の整数である。 Ａβ_17-20にならってモデル化したＡβ凝集コアドメインを少なくとも１個の 変性基に直接又は間接的に結合させてなるβ−アミロイド調節剤化合物の一つの 形体は、次式 A-(Y)-Xaa₁-Xaa₂-Xaa₃-Xaa₄-(Z)-B （ここで、Ｘａａ₁及びＸａａ₃はアミノ酸又はアミノ酸擬似体であり、 Ｘａａ₂はバリン又はバリン擬似体であり、 Ｘａａ₄はフェニルアラニン又はフェニルアラニン擬似体であり、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸又はアミノ酸擬似体であり、ａは１〜１５の整数である。）を有す るペプチド又はペプチド擬似体であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸又はアミノ酸擬似体であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有す るペプチド又はペプチド擬似体であり、 Ａ及びＢはそのうちの少なくとも１個が存在し、この化合物のアミノ末端及び カルボ基末端にそれぞれ直接又は間接的に結合した変性基であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びＢは、化合物が天然β−アミロイドペプチ ドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し又は神経毒性を 抑止するように選択される。） を有する。 この具体例において、調節剤化合物は、そのアミノ末端、そのカルボ基末端又 は両方において特異的に変性される。この式において使用される用語は上記と同 じである。好適な変性基は、以下のIIの部において説明する。一つの具体例にお いて、化合物は、そのアミノ末端においてのみ変性される（即ち、Ｂは不存在で あり、化合物は式Ａ−（Ｙ）−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−（Ｚ）か らなる。）。他の具体例において、化合物は、そのカルボキシ末端においてのみ 変性される（即ち、Ａは不存在であり、化合物は式（Ｙ）−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂− Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−（Ｚ）−Ｂからなる。）。さらに他の具体例において、化合 物は、そのアミノ及びカルボキシ末端の両方において変性される（即ち、化合物 は式Ａ−（Ｙ）−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−（Ｚ）−Ｂからなり、 ＡとＢの両方が存在する。）。上記のように、上記の式においてＸａａ₁−Ｘａ ａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄コア配列を隣接させるアミノ酸構造のタイプ及び数は可 変である。例えば、一つの具体例において、ａ及びｂは１〜１５の間の整数であ る。さらに好ましくは、ａ及びｂは１〜１０の間の整数である。さらに好ましく は、ａ及びｂは１〜５の間の整数である。最も好ましくは、ａ及びｂは１〜３の 間の整数である。 例７、８及び９で立証するように、本発明の好ましいＡβ調節剤化合物は、変 性された形体のＡβ_14-21（Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ −Ｐｈｅ−Ａｌａ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はそのアミノ末端若しくはカル ボキシ末端欠失体からなり、好ましい“最小コアドメイン”はＡβ_17-20からな る。従って、特定の具体例において、本発明は次式 A-Xaa₁-Xaa₂-Xaa₃-Xaa₄-Xaa₅-Xaa₆-Xaa₇-Xaa₈-B （ここで、Ｘａａ₁はヒスチジン構造であり、 Ｘａａ₂はグルタミン構造であり、 Ｘａａ₃はリシン構造であり、 Ｘａａ₄はロイシン構造であり、 Ｘａａ₅はバリン構造であり、 Ｘａａ₆フェニルアラニン構造であり、 Ｘａａ₇はフェニルアラニン構造であり、 Ｘａａ₈はアラニン構造であり、 Ａ及びＢは化合物のアミノ末端及びカルボキシ末端にそれぞれ直接又は間接的 に結合した変性基であり、 Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃、Ｘａａ₁−Ｘａａ₂又はＸａａ₁は存在しても存在 しなくてもよく、 Ｘａａ₈存在しても存在しなくてもよく、 Ａ及びＢの少なくとも１個は存在する。） からなる化合物を提供する。 特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘ ａａ₇−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２からなる変性された形のＡβ_17-20）からなる。 別の特定の具体例において、化合物は式：Ａ−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆− Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ −Ａｌａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１からなる変性された形のＡβ_17-21）から なる。 さらに特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅ −Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐ ｈｅ−Ｐｈｅ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０からなる変性された形のＡβ_16-20） からなる。 さらに特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅ −Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖ ａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｌａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９からなる変性された形 のＡβ_16-21）からなる。 さらに特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄ −Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌ ｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８からなる変性された形 のＡβ_15-20）からなる。 さらに特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄ −Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｇｌｎ− Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｌａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７か らなる変性された形のＡβ_15-21）からなる。 さらに他の特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘ ａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｂ（例えば、アミノ酸配列Ｈｉ ｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６からなる変性された形のＡβ_14-20）からなる。 さらに他の特定の具体例において、化合物は、式：Ａ−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘ ａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｂ（例えば、アミノ酸 配列Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｌａ：ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ：５からなる変性された形のＡβ_14-21）からなる。 上記の特定の具体例の好ましい具体例において、Ａ又はＢはコラノイル構造又 はビオチン含有構造（以下のIIの部においてさらに説明する。）である。 Ａβ凝集コアドメインがをモデル化できるＡβのサブ領域を明確にするための さらなる実験において（この結果は例１１で説明する。）、抑止活性を有する調 節剤化合物は３個ほどに少ないＡβアミノ酸残基（例えば、Ａβ_18-20に対応す るＶａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ又はＡβ_19-21に対応するＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｌａ） からなっていてよいことが立証された。また、これらの結果は、そのカルボキシ 末端に調節基を有する調節剤化合物がＡβの凝集を抑止するのに有効であること を立証した。さらにまた、これらの結果は、調節基としてのコリル基が化合物の 抑止活性を保持しながら改変できること並びに化合物がＡβの凝集を抑止する能 力を保持しながらフェニルアラニンをヨードチロシルで置き換えることができる （例えば、Ａβ配列の位置１９又は２０で）ことを立証した。 さらに、これらの結果は、抑止活性を有する化合物がほぼ位置１７〜２１の領 域のＡβ配列から誘導されるがアミノ酸配列が再配列されたか又は非Ａβ誘導型 のアミノ酸により置換を有するアミノ酸残基を使用して創製すことができること を立証した。このような化合物の例は、Ａβ_17-21の配列（ＬＶＦＦＡ）が再配 列された（ＦＦＶＬＡ）ＰＰＩ−４２６、Ａβ_16-20の配列（ＫＬＶＦＦ）が再 配列された（ＦＫＦＶＬ）ＰＰＩ−３７２、Ａβ_17-21の配列（ＬＶＦＦＡ）が アラニン残基によりそれぞれ位置１７、１８又は１９で置換されたＰＰＩ−３８ ８、−３８９及び−３９０（ＰＰＩ−３８８についてＡＶＦＦＡ、ＰＰＩ−３８ ９についてＬＡＦＦＡ及びＰＰＩ−３９０についてＬＶＡＦＡ）を包含する。こ れらの化合物の抑止活性は、Ａβの一部に直接対応するアミノ酸配列の存在が抑 止活性に対して必須ではないことを示すが、むしろ、フェニルアラニン、バリン 、ロイシンのようなアミノ酸残基の導入（その正確な順序に関係なく）によって 、このコアドメインの疎水性の保持がＡβの凝集の抑止にとって十分であり得る ことを示唆する。従って、Ａβ凝集コアドメインは、直接のＡβアミノ酸配列に 基づいて設計することができ又はＡβサブ領域、例えば、位置１７−２０の回り の領域の疎水性を保持する再配列されたＡβ配列に基づいて設計することができ る。Ａβのこの領域はアミノ酸残基Ｌｅｕ、Ｖａｌ及びＰｈｅを含有する。従っ て、好ましいＡβ凝集コアドメインは、少なくとも３個のアミノ酸構造（この用 語は上記のように定義されるとき、アミノ酸誘導体、類似体及び擬似体を含む。 ）からなり、この場合にアミノ酸構造の少なくとも２個は独立してロイシン構造 、バリン構造又はフェニルアラニン構造のいずれかである（これらの用語は上記 のように定義されるとき、アミノ酸誘導体、類似体及び擬似体を含む。）。 従って、別の具体例において、本発明は、次式 （ここで、Ｘａａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃はそれぞれアミノ酸構造であり、Ｘａ ａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃の少なくとも２個は独立してロイシン構造、フェニル アラニン構造及びバリン構造よりなる群から選択され、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａはこの化合物に直接又は間接的に結合した変性調節基であり、ｎは整数であ り、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₂、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びｎは、この化合物が天然β−ア ミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し 又は神経毒性を抑止するように選択される。） からなるβ−アミロイド調節剤化合物を提供する。 好ましくは、この化合物は、天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天 然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止する。好ましい具体例において、Ｘａａ₁ 及びＸａａ₂はそれぞれフェニルアラニン構造であり又はＸａａ₂及びＸａａ₃は それぞれフェニルアラニン構造である。“ｎ”は１〜５の整数であるが、“ａ” 及び“ｂ”は例えば１〜５の整数である。変性基“Ａ”は、好ましくは環式、複 素環式又は多環式基からなる。さらに好ましくは、Ａは、コラノイル構造又はコ リル基のようなｃｉｓ−デカリン基を含有する。他の具体例では、Ａはビオチン 含有基、ジエチレントリアミンペンタアセチル基、（−）−メトキシアセチル基 、フルオレセイン含有基又はＮ−アセチルノイラミニル基からなるこ とができる。さらに他の具体例において、化合物は、天然β−アミロイドペプチ ドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を促進させことができ、 化合物の薬物動力学的性質を変化させるようにさらに変性でき、又は化合物を検 出可能な物質により標識付けするようにさらに変性することができる。 さらに他の具体例において、本発明は、次式 Ａ−（Ｙ）−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−（Ｚ）−Ｂ （ここで、Ｘａａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃はそれぞれアミノ酸構造であり、Ｘａ ａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃の少なくとも２個は独立してロイシン構造、フェニル アラニン構造及びバリン構造よりなる群から選択され、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａ及びＢはそのうちの少なくとも１個が存在し、化合物のアミノ末端及びカル ボキシ基末端にそれぞれ直接又は間接的に結合した変性基であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₂、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びＢは、この化合物が天然β−ア ミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し 又は神経毒性を抑止するように選択される。） からなるβ−アミロイド調節剤化合物を提供する。 好ましくは、この化合物は、天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天 然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止する。好ましい具体例において、Ｘａａ₁ 及びＸａａ₂はそれぞれフェニルアラニン構造であり又はＸａａ₂及びＸａａ₃は それぞれフェニルアラニン構造である。一つの具体例において、化合物は、次式 Ａ−（Ｙ）−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−（Ｚ） からなる。さらに他の具体例において、化合物は、次式 （Ｙ）−Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃−（Ｚ）−Ｂ からなる。“ｎ”は１〜５の整数であるが、“ａ”及び“ｂ”は例えば１〜５の 整数である。変性基“Ａ”は、好ましくは環式、複素環式又は多環式基からなる 。さらに好ましくは、Ａは、コラノイル構造又はコリル基のようなｃｉｓ−デカ リン基を含有する。他の具体例では、Ａはビオチン含有基、ジエチレントリアミ ンペンタアセチル基、（−）−メトキシアセチル基、フルオレセイン含有基又は Ｎ−アセチルノイラミニル基からなることができる。さらに他の具体例において 、化合物は、天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイド ペプチドの凝集を促進させことができ、化合物の薬物動力学的性質を変化させる ようにさらに変性でき、又は化合物を検出可能な物質により標識付けするように さらに変性することができる。 好ましい特定の具体例において、本発明は、変性基をペプチド構造に直接又は 間接的に結合してなるβ−アミロイド調節剤化合物であって、該ペプチド構造が よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアミノ酸構造からなるものであ る該β−アミロイド調節剤化合物を提供する。 これらの特定の化合物は、化合物の薬物動力学的性質を変化させるようにさら に変性でき及び（又は）化合物を検出可能な物質により標識付けするようにさら に変性することができる。 本発明の調節剤化合物は、製薬組成物に配合でき（以下のＶの部においてさら に説明する。）、また以下のVIの部においてさらに説明するように検出及び治療 法に使用することができる。 II．変性基 本発明の調節剤化合物内では、ペプチド構造（例えば、Ａβから誘導のペプチ ド、又はＡβ凝集コアドメイン、又は再配列されたＡβ凝集コアドメインに対応 するアミノ酸配列）は、少なくとも１個の変性基（ＭＧと略記）と直接又は間接 的に結合される。一つの具体例として、凝集コアドメインを変性基に結合させて なる本発明の調節剤化合物では、この化合物はＭＧ−ＡＣＤと例示することがで きる。用語“変性基”とは、ペプチド構造に（例えば、共有結合により）直接結 合した構造並びにペプチド構造に（例えば、安定な非共有結合性の会合により又 はＡβから誘導のペプチド構造に隣接し得る追加のアミノ酸残基、その擬似体、 類似体又は誘導体に共有結合することにより）間接的に結合した構造を包含する ものとする。例えば、変性基は、Ａβから誘導のペプチド構造のアミノ末端又は カルボキシ末端に、或いはコアドメインに隣接するペプチド又はペプチド擬似体 と結合させることができる。或いは、変性基は、Ａβから誘導のペプチド構造の 少なくとも１個のアミノ酸残基の側鎖と、或いはコアドメインに隣接するペプチ ド又はペプチド擬似体と（例えば、リシル残基のε−アミノ基を介して、アスパ ラギン酸残基又はグルタミン酸のカルボキシル基を介して、チロシル残基、セリ ン残基又はトレオニン残基のヒドロキシル基を介して或いはアミノ酸側鎖上の他 の好適な反応性基により）結合させることができる。ペプチド構造に共有結合さ れた変性基は、例えば、アミド、アルキルアミノ、カルバメート又は尿素結合を 含めて化学構造を結合させるのに斯界で周知の手段及び方法により結合させるこ とができる。 用語“変性基”とは、未変性の形態にある天然Ａβペプチドに当然に結合して いない基を包含するものとする。従って、用語“変性基”は、水素を包含しない ものとする。変性基は、調節剤化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触した ときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化させ及び好ましくは抑止し、或 いは天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチド の神経毒性を抑止するように選択される。特定の機構により限定しようと欲しな いが、本発明の調節剤化合物の変性基は、Ａβの重合を壊す能力を調節剤に与え るために重要であるキーとなる薬物発生団（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）とし て機能するものと思われる。 好ましい具体例において、変性基は、環式、複素環式又は多環式基からなる。 用語“環式基”とは、ここでは、約３〜１０個、好ましくは約４〜８個、さらに 好ましくは約５〜７個の炭素原子を有する環状の飽和又は不飽和の（即ち、芳香 族）基を包含するものとする。環式の例としては、シクロプロピル、シクロブチ ル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロオクチルが含まれる。環式基は 非置換であるか或いは１個又はそれ以上の環位置で置換されていてよい。しかし て、環式基は、例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ア ルキニル、アリール、複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミ ン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、 シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、スルホネート、セレノエーテル 、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ₃、−ＣＮなどにより置換されていて よい。 用語“複素環式基”とは、ここで使用するときは、約３〜１０個、好ましくは ４〜８個、さらに好ましくは約５〜７個の炭素原子を有する環状の飽和又は不飽 和の（即ち、芳香族）基であって、その環構造が約１〜４個の複素原子を含むも のを包含するものとする。複素環式基には、ピロリジン、オキソラン、チオラン 、イミダゾール、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンなどが含 まれる。複素環式基は、１個以上の位置で、例えば、ハロゲン、アルキル、シク ロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、他の複素環、ヒドロキシル、 アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィ ン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル 、スルホネート、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ₃、 −ＣＮなどのような置換基により置換されていてよい。また、複素環は、以下に 記載のようなその他の環式基に架橋し又は縮合していてもよい。 用語“多環式基”とは、ここで使用するときは、２個以上の飽和又は不飽和の （即ち、芳香族）環状の環であって、その２以上の炭素が２個の隣接する環に共 有であるものを言うものとする。例えば、環は“縮合環”である。隣接していな い原子を介して結合している環は、“架橋”した環と称される。多環式基の環の それぞれは、例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アル キニル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、 ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チ オエーテル、スルホニル、スルホネート、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド 、エステル、−ＣＦ₃、−ＣＮなどのような前記した置換基により置換されてい てよい。 好ましい多環式基は、ｃｉｓ−デカリン構造を含有する基である。特定の機構 により限定しようと欲しないが、ｃｉｓ−デカリン構造の存在により変性基に与 えられた“曲がった”立体配座がＡβの重合の破壊に際して変性基の効能に寄与 しているものと思われる。従って、ｃｉｓ−デカリン構造の“曲がった”立体配 座をまねるその他の構造も変性基として使用することができる。変性基として使 用することができるｃｉｓ−デカリン含有構造の例は、コリル基のようなコラニ ル構造である。例えば、調節剤化合物は、例４に記載のように凝集コアドメイン をコール酸、胆汁酸と反応させることにより、そのアミノ末端でコリル基により 変性させることができる（コール鎖の構造は第２図に例示する。）。さらに、調 節剤化合物は、斯界で周知の方法に従ってそのカルボキシ末端でコリル基により 変性することができる（例えば、ウエスＧ．他(1993)Tetrahedron Lettes 34:81 7-822；ウエスＧ．他(1992)Tetrahedron Lettes 33:195-198；クラマーＷ．他(1 992)J．Biol．Chem．267:18598-18604 を参照）。また、コリル誘導体及び類似 体も変性基として使用することができる。例えば、好ましいコリル誘導体は、Ａ ｉｃ（３−（Ｏ−アミノエチル−ｉｓｏ）−コリル）であり、これは調節剤化合 物をさらに変性するのに使用できる遊離のアミノ基を有する（例えば、Ａｉｃの 遊離アミノ基を介して^99mＴｃのためのキレート化基を導入することができる。 ）。用語“コラノイル基”とは、ここで使用するときは、コリル基並びにその誘 導体及び類似体、特に、四環ｃｉｓ−デカリン立体配座を保持するものを包含す るものとする。コラノイル構造の例は、その他の胆汁酸、例えば、デオキシコー ル酸、リトコール酸、ウルソデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸及びヒオ デオキシコール酸並びにその他の関連構造、例えば、コラン酸、ブファリン及び レジブホゲニン（後者の二つの化合物は変性基として使用するには好ま しくないが）を包含する。ｃｉｓ−デカリン含有化合物の他の例は、５β−コレ スタン−３α−オール（（＋）−ジヒドロコレステリンのｃｉｓ−デカリン異性 体）である。胆汁酸及びステロイドの構造及び命名の詳細については、ネスＷ． Ｒ．及びマッキーンＭ．Ｌ．「ステロイド及びその他のイソペンタノイドの生化 学」、ユニバーシテー・パーク・プレス社、バルチモア、ＭＤ、第二章を参照さ れたい。 ｃｉｓ−デカリン含有基の他に、その他の多環式を変性基として使用すること ができる。例えば、ステロイド又はβ−ラクタムから誘導される変性基も好適な 変性基であり得る。さらに、Ａβ−誘導ペプチド構造を変性するのに使用できる いくつかの追加の環式、複素環式又は多環式化合物の限定的でない例を第２図に 示す。一つの具体例において、変性基は“ビオチニル構造”であって、これには ビオチニル基並びにその類似体及び誘導体（例えば、２−イミノビオチニル基） が含まれる。他の具体例において、変性基は“フルオレセイン含有基”、例えば Ａβ−誘導ペプチド構造を５−（及び６−）−カルボキシフルオレセイン、スク シンイミジルエステル又はフルオレセインイソシアネートと反応させることによ り誘導される基からなる。種々の他の具体例において、変性基は、Ｎ−アセチル ノイラミニル基、ｔｒａｎｓ−４−コチニンカルボキシル基、２−イミノ−１− イミダゾリジンアセチル基、（Ｓ）−（−）−インドリン−２−カルボキシル基 、（−）−メントキシアセチル基、２−ノルボルナンアセチル基、γ−オキソ− ５−アセナフテンブチリル基、（−）−２−オキソ−４−チアゾリジンカルボキ シル基、テトラヒドロ−３−フロイル基、２−イミノビオチニル基、ジエチレン トリアミンペンタアセチル基、４−モルホリンカルボニル基、２−チオフェンア セチル基又は２−チオフェンスルホニル基からなる。 好ましい変性基は、コリル構造、ビオチニル構造を含む基、フルオレセイン含 有基、ジエチレントリアミンペンタアセチル基、（−）−メントキシアセチル基 及びＮ−アセチルノイラミニル基を包含する。さらに好ましい変性基は、コリル 構造を含むもの又はイミノビオチニル基である。 上で検討した環式、複素環式又は多環式基の他に、その他の変性基を本発明の 調節剤に使用することができる。例えば、小さい疎水性基が好適な変性基である 。好適な環状でない変性基はアセチル基である。 さらに別のタイプの変性基は、β−ターンミメチックとして作用する非天然型 アミノ酸を含有する化合物、例えば、ツァンクＫ．Ｙ．他(1994)J．Am．Chem．S oc．116:3988-4005；ディアズＨ．及びケリーＪ．Ｗ．(1991)Tetrahedron Lette rs 41:5725-5728；ディアズＨ．他(1992)J．Am．Chem．Soc．114:8316-8318に記 載のようなジベンゾフランをベースにしたアミノ酸である。このような変性基の 例は、ペプチド−アミノエチルジベンゾフラニルプロピオン酸（Ａｄｐ）基（例 えば、ＤＤＩＩＬ−Ａｄｐ）である。このタイプの変性基は、このタイプの化合 物が天然β−ＡＰと相互作用するときに天然β−ＡＰの凝集に対してさらなる立 体障害を導入するために１個以上のＮ−メチルペプチド結合を含むことができる 。 III．Ａβ調節剤の追加の化学的変性 本発明のβ−アミロイド調節剤化合物は、この化合物がＡβの凝集を変化させ 且つＡβの神経毒性を抑止する能力を保持しながら該化合物の特異的な性質を変 化させるようにさらに変性することができる。例えば、一つの具体例において、 化合物は、その薬物動力学的性質、例えばインビボでの安定性又は半減期を変化 させるためにさらに変性される。他の具体例では、化合物は、これに検出可能な 物質で標識付けするためにさらに変性される。さらに他の具体例では、化合物は 、これを追加の治療的部分に結合させるためにさらに変性される。概略的には、 Ａβ凝集コアドメインを少なくとも１個の変性基に直接又は間接的に結合ささせ てなる本発明の調節剤は、ＭＧ−ＡＣＤとして例示できるが、調節剤の性質を変 化させるためにさらに変性されたこの化合物はＭＧ−ＡＣＤ−ＣＭとして例示す ることができる。ここで、ＣＭは追加の化学的変性を表す。 化合物を化学的にさらに変性させるためには、例えば化合物の薬物動力学的性 質を変化させるためには、反応基を誘導体化することができる。例えば、変性基 が凝集コアドメインのアミノ末端に結合しているときは、この化合物のカルボキ シ末端をさらに変性することができる。好ましいＣ−末端変性には、化合物がカ ルボキシペプチダーゼのための基質として作用する能力を低下させるようなもの が含まれる。好ましいＣ−末端変性剤の例は、アミド基、エチルアミド基、そし て種々の非天然系アミノ酸、例えばＤ−アミノ酸及びβ−アラニンを含む。或い は、変性基が凝集コアドメインのカルボキシ末端に結合しているときは、例えば 、化合物がアミノペプチダーゼのための基質として作用する能力を低下させるた めにこの化合物のアミノ末端をさらに変性することができる。 調節剤化合物は、これを検出可能な物質と反応させることによってこれを標識 付けするようにさらに変性することができる。好適な検出可能な物質には、種々 の酵素、補欠分子族、蛍光物質、ルミネセンス物質及び放射性物質が含まれる。 好適な酵素の例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスホター ゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを包含する。好適な 補欠分子族錯体の例は、ストレプタビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが 含まれる。好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、 フルオレセインイソシアネート、ローダミン、ジクロルトリアジニルアミンフル オレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリスリンが含まれる。ルミネセンス物質 の例には、ルミノールが含まれる。好適な放射性物質の例には、¹⁴Ｃ、¹²³Ｉ、^{1 24} Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、^99mＴｃ、³⁵Ｓ又は³Ｈが含まれる。好ましい具体例におい て、調節剤化合物は、その化合物内の変性基か又は１個以上のアミノ酸構造に¹⁴ Ｃを組み込むことによって¹⁴Ｃにより放射能標識される。標識付き調節剤化合物 は、化合物のインビボでの薬物動力学を評価し並びに例えば診断の目的のために Ａβの凝集を検出するために使用することができる。Ａβの凝集は、インビボで 又は被験者から得たインビトロ試料に標識付き調節剤化合物を使用して検出する ことができる。 好ましくは、インビボでの診断剤として使用するためには、本発明の調節剤化 合物は、放射性テクネチウム又は沃素により標識付けされる。従って、一つの具 体例において、本発明は、テクネチウム、好ましくは^99mＴｃにより標識付けさ れた調節剤化合物を提供する。ペプチド化合物をテクネチウムにより標識付けす るための方法は斯界で周知である（例えば、いずれもディーン他による米国特許 第５，４４３，８１５号、同５，２２５，１８０号及び同５，４０５，５９７号 ；ステプニアクービニアキエビックＤ．他(1992)J．Med．Chem．35:274-279 ； フリッツバーグＡ．Ｒ．他(1988)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85:4025-4029； バイドーＫ．Ｅ．他(1990)Cancer Res．Suppl．50:799s-803s；レーガンＬ．及 びスミスＣ．Ｋ．(1995)Science 270:980-982を参照）。^99mＴｃのためのキレー ト化基を導入できる部位を与える変性基、例えば、遊離のアミノ基を有するコー ル酸のＡｉｃ誘導体を選定することができる（例１１を参照されたい。）。別の 具体例において、本発明は、放射性沃素により標識付けされた調節剤化合物を提 供する。例えば、Ａβの配列内のフェニルアラニン残基（例えば、Ｐｈｅ₁₉又は Ｐｈｅ₂₀）を放射性ヨードトシルにより置換することができる（例１１を参照さ れたい）。放射性沃素の種々の同位体のいずれも診断剤を作るために組み込むこ とができる。好ましくは、¹²³Ｉ（半減期＝１３．２時間）は全身のシンチグラ フィーのために使用され、¹²⁴Ｉ（半減期＝４時間）は陽電子射出断層撮影法（ ＰＥＴ）のために使用され、¹²⁵Ｉ（半減期＝６０日）は代謝回転の研究のため に使用され、¹³¹Ｉ（半減期＝８日）は全身計数研究及び遅延低解像度画像研究 のために使用される。 さらに、本発明の調節剤化合物の追加の変性は、化合物に追加の治療学的性質 を付与するのに役立つ。即ち、追加の化学的変性としては追加の官能性部分を入 れることである。例えば、アミロイドプラークを壊し又は溶解させるように働く 官能性部分を調節剤化合物に結合することができる。この形態では、調節剤のＭ Ｇ−ＡＣＤ部分は、化合物をＡβペプチドに向けさせＡβペプチドの重合を妨げ るように働くのに対して、追加の官能性部分は化合物がこれらの部位に向けられ た後にアミロイドプラークを壊し又は溶解させるように働く。 これとは別の化学的変性においては、本発明のβ−アミロイド化合物は、“プ ロドラッグ”の形態で製造される。この場合に、化合物自体はＡβの凝集を調節 しないが、インビボで代謝を受けると、上記のようなβ−アミロイド調節剤化合 物に転換されることができる。例えば、このタイプの化合物では、調節基は、代 謝を受けると活性な調節基の形態に転化され得るプロドラッグ形態で存在できる 。変性基のこのようなプロドラッグ形態をここでは“二次変性基”と言う。斯界 では、ペプチドを基材とした薬剤の活性形体の放出を最適化するために代謝を制 限するペプチドプロドラッグを製造するための種々の方策が知られたいる（例え ば、モスＪ．(1995)「ペプチド系薬剤の設計、輸送及び代謝の制御」、テイラー Ｍ．Ｄ．及びアンミドンＧ．Ｌ．編、第１８章を参照）。さらに、“逐次代謝” に基づくＣＮＳ放出を達成するための方策が特に仕上げられた（例えば、ボーダ ーＮ．他(1992)Science 257:1698-1700；プロカイＬ．他(1994)J．Am．Chem．So c．116:2643-2644；ボーダーＮ．及びプロカイＬ．(1995)「ペプチド系薬剤の設 計、輸送及び代謝の制御」、テイラーＭ．Ｄ．及びアンミドンＧ．Ｌ．編、第１ ４章を参照）。本発明の調節剤のプロドラッグ形態の一つの具体例において、変 性基は、血液脳関門の透過性を助長するためのアルキルエステルを含む。 本発明の調節剤化合物は、斯界で周知の標準的な技術により製造することがで きる。少なくとも一部がペプチドからなる調節剤のペプチド成分は、標準的な技 術、例えば、ボダンスキーＤ．「ペプチド合成の原理」、スプリンガー・フェル ラーク社、ベルリン(1993)及びグラントＧ．Ａ．編「合成ペプチド、ユーザーガ イド」、Ｗ．Ｈ．フリーマン＆カンパニー、ニューヨーク(1992)に記載の技術を 使用して合成することができる。自動化ペプチド合成器が市場で入手できる（例 えば、アダバンスト・ケムテク社、モデル３９６、ミリゲン／ビオサーチ９６０ ０）。さらに、標準的な方法により、例えば、アミノ基（例えば、ペプチドのア ミノ末端のα−アミノ基）、カルボキシル基（例えば、ペプチドのカルボキシ末 端で）、ヒドロキシル基（例えば、チロシン、セリン又はトレオニン上の）又は アミノ酸側鎖上の他の好適な反応基を介する反応法を使用してＡβ−誘導ペプチ ド成分（例えば、Ａβ凝集コアドメイン）に１個以上の調節基を結合することが できる（例えば、グリーンＴ．Ｗ．及びウッツＰ．Ｇ．Ｍ．「有機合成における 保護基」、ジョンウイリー＆ソンズ社、ニューヨーク(1991)を参照）。好ましい β−アミロイド調節剤の合成例は例１、４及び１１に詳述する。 IV．スクリーニング検定法 本発明の他の観点は、β−アミロイド凝集の調節剤を選定するための方法に関 する。この方法においては、被検化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触さ れ、天然β−ＡＰの凝集が測定され、被検化合物が天然β−ＡＰの凝集を変化さ せる（例えば、凝集を抑止し又は促進させる）能力に基づいて調節剤が選定され る。好ましい具体例においては、被検化合物がモル過剰量の天然β−ＡＰと接触 される。被検化合物の存在下での天然β−ＡＰの凝集の量及び（又は）速度は、 以下に説明する（例えば、例２、５及び６を参照）β−ＡＰの凝集を表示する適 当な検定法によって決定することができる。 好ましい検定法においては、天然β−ＡＰが被検化合物の存在下に溶液状に溶 解され、天然β−ＡＰの凝集が核形成検定法（例６を参照）で、４０５ｎｍでの 溶液の見かけ吸光度によって測定される溶液の濁度を時間を経時的に評価するこ とによって評価される（例６にさらに説明する。また、ジャレット他(1993)Bioc hemistry 32:4693-4697を参照）。β−アミロイド調節剤の不存在下では、溶液 のＡ_405nmはβ−ＡＰが溶液状で留まっているラグタイム中は典型的に比較的一 定のままであるが、しかし、溶液のＡ_405nmは、β−ＡＰが凝集して溶液から出 てくるにつれて、急速に増加し、究極的には平坦域レベルに達する（即ち、溶液 のＡ_405nmは経時的にＳ字状の動力学を示す。）。これとは逆に、β−ＡＰの凝 集を抑止する被検化合物の存在下では、溶液のＡ_405nmは、調節剤が不存在であ ると比べて減少する。従って、抑止性調節剤の存在下では、溶液は、調節剤の不 存在のときと比べて、ラグタイムの増大、凝集勾配の低下及び（又は）低い平坦 域レベルを示すであろう。β−アミロイドの重合の調節剤を選定するためのこの 方法は、同様に、β−ＡＰの凝集を促進させる調節剤を選定するのに使用するこ とができる。従って、β−ＡＰの凝集を促進させる調節剤の存在下では、溶液の Ａ_405nmは、溶液の不存在のときと比較して増大する（例えば、溶液は、調節剤 の不存在のときと比較して、ラグタイムの減少、凝集勾配の増加及び（又は）高 い平坦域レベルを示すことができる。）。 また、本発明のスクリーニング法に使用するのに好適な別の検定法である播種 拡大検定法も例６に詳述する。この検定法では、β−ＡＰ単量体と凝集したβ− ＡＰの“種”が被検化合物の存在下及び不存在下に一緒にされ、β−フィブリル の形成量が、β−ＡＰフィブイルと接触したときの染料チオフラビンＴの発色の 増大に基づいて検定される。さらに、β−ＡＰの凝集は、調節剤の存在下又は不 存在下でβ−ＡＰ調製物を電子顕微鏡（ＥＭ）によって評価することができる。 例えば、ＥＭにより検出できるβ−アミロイドフィブイルの形成は、β−ＡＰの 凝集を抑止する調節剤の存在下では減少する（即ち、調節剤の存在下ではβ−フ ィブリルの量又は数の減少がある。）のに対して、β−フィブイルの形成 は、β−ＡＰの凝集を促進する調節剤の存在下では増大する（即ち、調節剤の存 在下ではβ−フィブリルの量又は数の増大がある。）。 好適な調節剤を選定するために本発明のスクリーニング法において使用するの にさらに好ましい検定法は、例３及び１０に記載する神経毒性検定法である。神 経毒性Ａβ凝集物の形成を抑止し及び（又は）予め形成されたＡβフィブイルの 神経毒性を抑止する化合物が選定される。この神経毒性検定法は、インビボでの 神経毒性を予測するものとみなされる。従って、インビトロでの神経毒性検定法 における調節剤化合物の抑止活性は、インビボでの神経毒性に対して化合物の類 似の抑止活性を予測させるものである。 Ｖ．製薬組成物 本発明の他の観点は、本発明のβ−アミロイド調節剤化合物の製薬組成物に関 する。一つの具体例において、この組成物は、天然β−アミロイドペプチドの凝 集を変化させる、好ましくは抑止するのに十分な治療学的又は予防的に有効な量 のβ−アミロイド調節剤化合物及び製薬上許容できるキャリアーを含有する。別 の具体例では、この組成物は、天然β−アミロイドペプチドの神経毒性を抑止す るのに十分な治療学的又は予防的に有効な量のβ−アミロイド調節剤化合物及び 製薬上許容できるキャリアーを含有する。用語“治療学的に有効な量”とは、所 望の治療効果、例えば、β−アミロイドの沈着の減少若しくは逆転及び（又は） Ａβの神経毒性の減少若しくは逆転を達成するのに必要な薬量及び時間における 有効な量を言う。調節剤の治療学的に有効な量は、種々の因子、例えば、疾病の 状態、個体の年齢、性別、体重並びに調節剤が個体において所望の応答を引き出 す能力に従って変化し得る。投薬法は、最適な治療応答を提供するように調節す ることができる。また、治療学的に有効な量は、調節剤のどんな毒性又は有害な 効果よりも治療学的に有益な効果の方が優っているようなものである。本発明の 調節剤の潜在的な神経毒性は例３及び１０に記載の細胞に基づく検定法を使用し て検定できるので、有意の神経毒性を示さない治療学的に有効な調節剤を選定す ることができる。好ましい具体例において、調節剤の治療学的に有効な量は、モ ル過剰量の天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化させる、好ましくは抑止さ せるのに十分である。用語“予防的に有効な量”とは、所望の予防的結果、例え ば、β−アミロイドの沈着にかかりやすくさせた被験者におけるβ−アミロイド の沈着速度及び（又は）Ａβ神経毒性の防止又は抑止を達成するのに必要な薬量 及び時間で有効な量を言う。予防的に有効な量は、治療学的に有効な量について 前記したのと同様に決定することができる。典型的には、予防的な投薬は疾病の 前に又は疾病の早期の段階で被験者に使用されるので、予防的に有効な量は治療 学的に有効な量よりも少ないであろう。 β−アミロイド調節剤の治療学的又は予防的に有効な量を決定するときに考慮 できる因子の一つは、被験者の生物学的区域、例えば被験者の脳脊髄液（ＣＳＦ ）における天然β−ＡＰの濃度である。ＡＳＦ中の天然β−ＡＰの濃度は、３ｎ Ｍで概算された（シュワルツマン(1994)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91:8368-8 372）。β−アミロイド調節剤の治療学的又は予防的に有効な量の限定的でない 範囲は、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭである。投薬値は軽減しようとする状態の発病 度によって変わるものと言える。さらに、任意の特定の被験者について、特定の 投薬法が個体のニーズ並びに組成物を投与し又はその投与を管理する専門家の判 断に従って経時的に調節されるべきであること、並びにここに記載した投薬量の 範囲は例示にすぎず、本発明の組成物の範囲又は実施を制限するものではないこ とを理解すべきである。 組成物中の活性化合物の量は、個体の疾病状態、年齢、性別及び体重のような 因子に従って変動し得る（これらのそれぞれは個体における天然β−ＡＰの量に 影響する。）。投薬法は、最適の治療応答を提供するように調節することができ る。例えば、１個の巨丸薬を投与でき、いくつかに分けた薬量を経時的に投与で き、或いは薬量を治療状況の危急によって指示された通りに比例的に削減し又は 増加させることができる。投薬を容易にし且つ薬量の均一化を図るために投薬単 位形体の非経口用組成物を処方することが特に有益である。ここで、投薬単位形 態とは、治療すべき哺乳動物の被験体のために単一の投薬として適した物理的に 分離された単位であって、各単位が所要の製薬用キャリアーと共に所望の治療効 果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有するものを言う。本発明 の投薬単位形体についての明細は、（ａ）活性化合物の独特の特性及び達成すべ き特定の治療効果並びに（ｂ）このような活性化合物を個体における感受性の処 置のために配合する当業界における固有の制限によって及びこれらに直接依存し て指図される。 用語“製薬上許容できるキャリアー”とは、ここで使用するときは、生理学的 に適合する任意の全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌抗菌剤、等張性吸 収遅延剤などを包含するものとする。一つの具体例において、キャリアーは、非 経口的投与にとって好適である。好ましくは、キャリアーは、中枢神経系に投与 するのに好適である（例えば、脊髄内に又は大脳内に）。或いは、キャリアーは 静脈内、腹腔内又は筋肉内投与に好適であろう。別の具体例では、キャリアーは 経口投与に好適である。製薬上許容できるキャリアーには、無菌の水溶液又は分 散液及び無菌の注射用溶液又は分散液を即時に調製するための無菌の粉末が含ま れる。製薬学的に活性な物質のためにこのような媒体及び部室を使用することは 斯界で周知である。任意の周知の媒体又は物質が活性化合物と適合性でないこと を除けば、本発明の製薬組成物へのそれらの使用が考慮される。また、補助的な 活性化合物も組成物に配合することができる。 製薬組成物は、典型的には製造及び貯蔵の条件下で無菌で且つ安定でなければ ならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム又は高い薬物濃 度に適したその他のあつらえられた構造として処方することができる。キャリア ーは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレン グリコール、液状ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物などを含有す る溶媒又は分散媒であってよい。適度の流動性は、例えば、レシチンのようなコ ーティングを使用することによって、分散液の場合には所要の粒度を維持するこ とによって及び界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合に 、等張剤、例えば、糖類、マンニット、ソルビットのようなポリアルコール、又 は塩化ナトリウムを組成物に包含させることが好ましい。注射用組成物の持続性 吸収は、組成物中に、吸収を遅らせる物質、例えば、モノステアリン酸塩及びゼ ラチンを包含させることによってもたらすことができる。さらに、調節剤は、時 間放出処方物、例えば、遅い放出性の重合体を含む組成物で投与することができ る。活性化合物は、迅速な放出に対して化合物を保護するキャリアーを使用して 、例えば、植込み物及びマイクロカプセル化送出系を含めて放出制御組成物を使 用して調製することができる。生物分解性の生体適合性重合体、例えば、エチレ ン酢酸ビニル重合体、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルト エステル、ポリ乳酸及びポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体（ＰＬＧ）を使用 することができる。このような処方物の多くの調製法が特許され、また当業者に 一般に知られている。 無菌の注射用溶液は、活性成分（例えば、β−アミロイド調製剤）を所要の量 で上に列挙した成分の一つ以上と組合せて適当な溶媒に配合し、次いで濾過によ る殺菌を行って調製することができる。一般に、分散液は、基本分散媒及び上に 列挙したたものから選ばれた所要の他の成分を含有する無菌のビヒクルに化合物 を配合することによって調製される。無菌の注射用溶液の調製のための無菌粉末 の場合には、好ましい調製法は真空乾燥及び凍結乾燥であって、これはその前の 無菌の濾過溶液から活性成分＋任意の追加の所望成分の粉末を生じる。 本発明の調節剤化合物は、調節剤化合物の溶解度を高める１種以上の追加の化 合物と共に処方することができる。調節剤の溶解度を高めるために処方物に添加 される好ましい化合物は、シクロデキストリン誘導体、好ましくはヒドロキシプ ロピル−γ−シクロデキストリンである。中枢神経系にペプチドを送出するため にシクロデキストリンを含有する薬物送出用ビヒクルは、ボーダーＮ．他(1992) Science 257:1698-1700 に記載されている。本明細書に記載するβ−アミロイド 調節剤については、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンを処方物に５ ０〜２００ｎＭの濃度で配合すると、化合物の水溶解度が上昇する。溶解度の増 大の他に、処方物へのシクロデキストリンの配合は、その他の有益な効果を有す ることができる。何故ならば、β−シクロデキストリン自体はＡβペプチドと相 互作用してインビトロでフィブリル形成を抑止することが報告されているからで ある（カミレリＰ．他(1994)FEBS Leters 341:256-258）。従って、本発明の調 節剤化合物をシクロデキストリン誘導体と併用することは、調節剤単独の使用よ りも大きなＡβ凝集の抑止をもたらすであろう。シクロデキストリンの化学的変 性は斯界で周知である（ハネシアンＳ．他(1995)J．Org．Chem．60:4786-4797） 。また、本発明の調節剤を含有する製薬組成物への添加剤としての使用の他に、 シクロデキストリン誘導体は、変性基として有用でもあり、従って本発明の調 節剤を形成するようにＡβペプチド化合物に共有結合させることができる。 他の具体例において、本発明の調節剤を含有する製薬組成物は、調節剤が血液 脳関門（ＢＢＢ）を通して輸送されるように処方される。ＢＢＢを介する輪送を 増大させるために斯界で知られた種々の方策を本発明の調節剤に適合させてＢＢ Ｂを介する調節剤の輸送を高めることができる（このような方策については、例 えば、パードリッジＷ．Ｍ．(1994)Trends in Biotechnol．12:239-245；バンブ リーＪ．Ｂ．他(1993)Pharm．World Sci．15:2-9 ；パードリッジＷ．Ｍ．(1992 )Pharmcol．Toxicol．71:3-10を参照されたい。）。一つの方法において、調節 剤は、膜透過による輸送が高められたプロドラッグを形成するために化学的に変 性される。好適な化学的変性には、脂肪酸を調節剤にアミド又はエステル結合を 介して共役結合させること（例えば、共にシャショウアによる米国特許第４，９ ３３，３２４号及びＰＣＴ公間ＷＯ８９／０７９３８；ヘス他による米国特許第 ５，２８４，８７６号；トスＩ．他(1994)J．Drug Target．2:217-239；シャシ ョウアＶ．Ｅ．他(1984)J．Med．Chem．27:659-664 を参照）及び調節剤をグリ ケート化すること（例えば、ポヂュスロ他による米国特許第５，２６０，３０８ 号を参照）が含まれる。また、Ｎ−アシルアミノ酸誘導体を調節剤に使用して“ リピド型”プロドラッグを形成することができる（例えば、ハシモト他による米 国特許第５，１１２，８６３号を参照）。 ＢＢＢを介する輸送を高める別の方法では、ペプチド又はペプチド擬似体調節 剤が第二のペプチド又は蛋白と抱合され、これにより、第二のペプチド又は蛋白 がＢＢＢを介して吸収剤媒介又は受容体媒介トランスサイトーシスを受けるキメ ラ蛋白を形成する。従って、調節剤をこの第二のペプチド又は蛋白に結合させる ことによって、キメラ蛋白はＢＢＢを通して輸送される。第二のペプチド又は蛋 白は、脳毛細血管内皮細胞受容体配位子のための配位子であてよい。例えば、好 ましい配位子は、脳毛細血管内皮細胞上のトランスフェリン受容体に特異的に結 合するモノクロナール抗体である（例えば、共にフライデン他による米国特許第 ５，１８２，１０７号、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１０８１９及びＷＯ９５／０２４ ２１を参照）。ＢＢＢを介する輸送を媒介できるその他の好ましいペプチド又は 蛋白は、ヒストン（例えば、パードリッジ及びシンメルによる米国特許第４，９ ０２，５０５号を参照）並びにビオチン、葉酸塩又はエステル、ニアシン、パン トテン酸、リボフラビン、チアミン、ピリドキサール及びアスコルビン酸のよう な配位子（例えば、共にハインシュタインによる米国特許第５，４１６，０１６ 号及び同５，１０８，９２１号を参照）を包含する。さらに、グルコース輸送体 ＧＬＵＴ−１はＢＢＢを通してグリコペプチド（［Ｍｅｔ⁵］エンケファリンの Ｌ−セリル−β−Ｄ−グルコシド類似体）を輸送させると報告された（ポルトＲ ．他(1994)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91:7114-1778）。従って、調節剤化合 物は、調節剤をＧＬＵＴ−１グルコース輸送体に向けるようにこのようなグリコ ペプチドに結合させることができる。例えば、アミノ末端で変性基Ａｉｃ（３− （Ｏ−アミノエチル−ｉｓｏ）コリル、遊離のアミノ基を有するコール酸の誘導 体）により変性される調節剤化合物は、標準的な方法によりＡｉｃのアミノ基を 介してグリコペプチドに結合させることができる。キメラ蛋白は、組換え型ＤＮ Ａ法（例えば、融合蛋白をコード化するキメラ遺伝子の形成によって）又はキメ ラ蛋白を形成するように調節剤を第二のペプチド又は蛋白に化学的に架橋させる ことによって形成させることができる。多くの化学的架橋剤が斯界で周知である （例えば、ピアース社、ロックフォルド、ＩＬから商業的に入手できる）。調節 剤を第二のペプチド又は蛋白に高収率でカップリングさせ且つ次いでリンカーを 解裂させて生物活性の調節剤を放出させる架橋剤を選定することができる。例え ば、ビオチン−アビジンをベースとしたリンカー系を使用することができる。 ＢＢＢを介する輸送を高めるためのさらに別の方法においては、調節剤は、Ｂ ＢＢを介する輸送を媒介するキャリアーベクター中にカプセル化される。例えば 、調節剤は、リポソーム、例えば、正帯電した単層リポソーム（例えば、共にフ ァデンによるＰＣＴ公開ＷＯ８８／０７８５１及びＷＯ８８／０７８５２を参照 ）又は重合体微小球（例えば、カーン他による米国特許第５，４１３，７９７号 、マチオビッツ他による米国特許第５，２７１，９６１号及びゴムボッツ他によ る米国特許第５，０１９，４００号を参照）にカプセル化される。さらに、キャ リアーベクターは、ＢＢＢを介する輸送のためにそれを仕向けるように変性する ことができる。例えば、キャリアーベクター（例えば、リポソーム）は、ＢＢＢ を介して積極的に輸送される分子により又は脳内皮細胞受容体のための配位子、 例えばトランスフェリン受容体に特異的に結合するモノクロナール抗体により（ 例えば、コリンズ他によるＰＣＴ公開ＷＯ９１／０４０１４及びグレイグ他によ るＰＣＴ公開ＷＯ９４／０２１７８を参照）共有結合的に変性される。 ＢＢＢを介する調節剤の輸送を高めるさらに別の方法においては、調節剤は、 ＢＢＢを透過性化させるように機能する他の物質と共に投与される。このような ＢＢＢ“透過性化剤”の例は、ブラジキニン及びブラジキニンアゴニスト（例え ば、マルフロリー−カミンによる米国特許第５，１１２，５９６号を参照）並び にコザルッチ他による米国特許第５，２６８，１６４号に開示されたペプチド化 合物を包含する。 本発明の調節剤化合物は、調節剤が唯一の活性成分である製薬組成物に又はそ れが追加の活性化合物を含有できる製薬組成物に処方することができる。例えば 、２種以上の調節剤化合物を併用することができる。さらに、本発明の調節剤化 合物は、抗アミロイド形成性を有する１種以上の薬剤と併用することができる。 例えば、調節剤化合物は、非特異的コリンエステラーゼ阻害剤タクリン（Ｃｏｇ ｎｅｘ^R、パークーデービス社）と併用することができる。 他の具体例において、本発明の製薬組成物は、パッケージ処方物として提供さ れる。パッケージ処方物は、β−アミロイドーシスを伴う障害、例えば、アルツ ハイマー病を有する患者を治療するための組成物を投与するための容器及び印刷 された指図書に本発明の製薬組成物を含むことができる。 VI．Ａβ調節剤を使用する方法 本発明の別の観点は、天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化させ又はその 神経毒性を抑止するための方法に関する。本発明の方法においては、天然β−ア ミロイドペプチドは、天然β−アミロイドペプチドの凝集が変化するように又は 天然β−アミロイドペプチドの神経毒性が抑止されるようにβ−アミロイド調節 剤と接触される。好ましい具体例において、調節剤は、天然β−アミロイドペプ チドの凝集を抑止させる。他の具体例では、調節剤は、天然β−アミロイドペプ チドの凝集を促進させる。好ましくは、調節剤の量に対してモル過剰量のβ−Ａ Ｐの凝集は、調節剤と接触すると変化する。 本発明の方法において、天然β−アミロイドペプチドは、インビトロか又はイ ンビボで調節剤と接触させることができる。しかして、用語“と接触させる”と は、調節剤を天然β−ＡＰ調製物をインビトロでインキュベーションすること及 び天然β−ＡＰが存在するインビボの部位に調節剤を送出することを包含するも のとする。調節剤化合物は天然β−ＡＰと相互作用するので、調節剤化合物は天 然β−ＡＰをインビトロで又はインビボで検出するのに使用することができる。 従って、本発明の調節剤化合物の用途の一つは、被験者の生物学的試料又はイン ビボの天然β−ＡＰの存在を検出するための診断剤としての使用である。さらに 、本発明の調節剤化合物を使用する天然β−ＡＰの検出は、被験者のアミロイド ーシスを診断するのに使用することができる。従って、本発明の調節剤化合物は 、β−ＡＰの凝集を破壊し且つβ−ＡＰの神経毒性を抑止するので、また調節剤 化合物はβ−アミロイドーシスを伴う障害の処置に予防的又は治療学的に有用で ある。従って、本発明の調節剤化合物の他の用途は、天然β−ＡＰの凝集及び（ 又は）神経毒性を変化させるための治療剤としての用途である。 一つの具体例において、本発明の調節剤化合物は、例えば、試料（例えば、生 物学的液体試料）中の天然β−ＡＰを検出し定量化するためにインビトロで使用 される。検出を助成するために、調節剤化合物は、検出可能な物質により変性す ることができる。この方法に使用される天然β−ＡＰ源は、例えば、脳脊髄液（ 例えば、ＡＤ患者、家族歴からＡＤになりやすい成人、又は正常な成人）の試料 である。天然β−ＡＰ試料が本発明の調節剤と接触され、β−ＡＰの凝集が、 例えば、例２、５及び６に記載の検定法によって測定される。好ましくは、例６ に記載の核形成検定法及び（又は）播種拡大検定法が使用される。次いで、β− ＡＰ試料の凝集度が、同様に調節剤と接触させたβ−ＡＰの既知の濃度の対照例 試料の凝集度と比較され、その結果は被験者がβ−アミロイドーシスになりやす いか又はβ−アミロイドーシスを伴う障害を有するかどうかの指針として使用す ることができる。さらに、β−ＡＰは、調節剤に組み入れた調節基を検出するこ とによって検出することができる。例えば、前記のようなビオチン化合物を組み 込んだ調節剤（例えば、アミノ末端をビオチニル化したβ−ＡＰペプチド）は、 検出可能な物質（例えば、ペルオキシダーセのような酵素）で標識付けしたスト レプタビジン又はアビジンプローベを使用して検出することができる。調節基に 結合するプローベ（例えば、ビオチン／ストレプタビジン）を使用する本発明の 調節剤と混合された天然β−ＡＰ凝集物の検出は、例２においてさらに説明する 。 別の具体例では、本発明の調節剤化合物は、例えば、被験者のβ−アミロイド ーシスの診断を助成するために、被験者における天然β−ＡＰの沈着を検出し、 所望ならば、定量化するのにインビボで使用される。検出を助成するために、調 節剤化合物は、被験者においてインビボで検出できる検出可能な物質、好ましく は^99mＴｃ又は放射性沃素により標識付けすることができる。標識付きβ−アミ ロイド調節剤化合物が被験者に投与され、アミロイド沈着の箇所に調節剤を蓄積 させるのに十分な時間の後に、標識付き調節剤化合物が標準的画像形成技術によ って検出される。標識付き化合物により発生した放射能シグナルが直接検出でき （例えば全血液の計数）、或いは別法として放射能シグナルは被験者におけるア ミロイドの沈着を画像化させるオートラジオグラフ上で又はコンピューター上で 画像に転換させることができる。放射能標識付き蛋白を使用するアミロイドを画 像化する方法は、斯界で周知である。例えば、¹²³Ｉ又は^99mＴｃにより放射能標 識付けされた血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）は、全身アミロイドーシスを画像 化するのに使用された（例えば、ホーキンスＰ．Ｎ．及びペピーズＭ．Ｂ．(199 5)Eur．J．Nucl．Med．22:59-599を参照）。放射性沃素の種々の同位体のうちで は、好ましくは¹²³Ｉ（半減期＝１３．２時間）は全身のシンチグラフィー のために使用され、¹²⁴Ｉ（半減期＝４日）は陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ） のために使用され、¹²⁵Ｉ（半減期＝６０日）は代謝回転研究のために使用され 、¹³¹Ｉ（半減期＝８日）は全血液計数及び遅延低解像画像形成の研究のために 使用される。放射能標識付きＳＡＰを使用する研究と同様に、本発明の標識付き 調節剤化合物は、例えば、ほぼ１８０ＭＢｑの放射能を有する１００μｇの標識 付き化合物を含有する巨大丸薬として適当な経路（例えば、静脈内、脊髄内、大 脳内）で被験者に送出することができる。 本発明は、生物学的試料を本発明の化合物と接触させ、天然β−アミロイドペ プチドに結合した化合物を検出して生物学的試料中の天然β−アミロイドペプチ ドの存在の有無を検出することからなる、生物学的試料中の天然β−アミロイド ペプチドの存在の有無を検出する方法を提供する。一つの具体例においては、β −アミロイド調節剤化合物と生物学的試料とがインビトロで接触される。他の具 体例では、β−アミロイド調節剤化合物は、これを被験者に投与することによっ て生物学的試料と接触される。インビボでの投与のためには、好ましくは化合物 は、放射性テクネチウム又は放射性沃素により標識付けされる。 また、本発明は、生物学的試料を本発明の化合物と接触させ、天然β−アミロ イドペプチドに結合した化合物を検出してβ−アミロイド形成性疾病の診断を容 易にさせることからなる、β−アミロイド形成性疾病の診断を容易にさせるため に天然β−アミロイドペプチドを検出する方法を提供する。一つの具体例におい ては、β−アミロイド調節剤化合物と生物学的試料とがインビトロで接触される 。他の具体例では、β−アミロイド調節剤化合物は、これを被験者に投与するこ とによって生物学的試料と接触される。インビボでの投与のためには、好ましく は化合物は、放射性テクネチウム又は放射性沃素により標識付けされる。好まし くは、この方法を使用するとアルツハイマー病の診断が容易になされる。 他の具体例として、本発明は、天然β−ＡＰの凝集を変化させ又はβ−ＡＰの 神経毒性を抑止させる方法を提供する。これは、β−アミロイドーシスを伴う疾 病、例えばアルツハイマー病の処置又は予防に予防的又は治療学的に使用するこ とができる。例１０で立証するように、本発明の化合物は、培養された神経細胞 に対する天然β−ＡＰ凝集物の毒性を減少させる。さらに、調節剤は、神経毒凝 集物の形成を減少させるのみならず、予め形成されたＡβフィブイルの神経毒性 を減少させる能力を有する。従って、本発明の調節剤化合物は、被験者（例えば 、β−アミロイドの沈着にかかりやすくされた被験者に予防的に）における神経 毒Ａβフィブイルの形成を抑止し又は防止するのに使用することができ、またβ −アミロイドの沈着を既に示している被験者においてβ−アミロイドーシスを治 療学的に逆転させるのに使用することができる。 本発明の調節剤は、被験者（例えば、被験者の脳脊髄液又は大脳）に存在する 天然β−アミロイドペプチドと接触して天然β−ＡＰの凝集を変化させ及び（又 は）天然β−ＡＰの神経毒性を抑止させる。また、調節剤化合物のみを被験者に 投与することができ、或いは、調節剤化合物をその他の治療活性薬剤と併用して 投与することができる（例えば、上記のIVの項で検討したように）。併用治療を 使用するときは、治療剤は、単一に製薬組成物で一緒に投与し、別個の製薬組成 物で一緒に投与し、又は続けて投与することができる。 調節剤は被験者における天然β−ＡＰの凝集を抑止するのに有効な任意の好適 な経路により被験者に投与することができるが、特定の好ましい具体例において は、調節剤は非経口的に、最も好ましくは被験者の中枢神経系に投与される。Ｃ ＮＳの可能な投与経路には、脊髄内投与及び大脳内投与（例えば、大脳血管内投 与）が含まれる。別法として、化合物は、例えば、経口的に、腹腔内経路で、静 脈内で又は筋肉内で投与することができる。ＣＮＳではない投与経路のためには 、化合物は、ＢＢＢを介する輸送を可能させる処方物で投与することができる。 ある種の調節剤はさらに追加の変性を行うことなくＢＢＢを介して輸送すること ができるが、他のものは前記のIVの項で説明したようにさらに変性を必要としよ う。 被験者のＣＮＳに治療用化合物を送出するための好適な方式及び装置は、斯界 で周知であって、大脳血管レザバー(例えば、オマヤ又はリッカーのレザバー、 例えば、ラネーＪ．Ｐ．他(1988)J．Neurosci．Nurs.,20:23-29；サンダーサン Ｎ．他(1989)Oncology 3:15-22)、鞘内送出のためのカテーテル（例えば、ポー ト・ア・キャス、Ｙ−カテーテルなど、例えば、プラムマーＪ．Ｌ．(1991)Pain 44:215-220 ；ヤクシＴ．Ｌ．他(1986)Pharmacol．Biochem．Behav．25 :483-485）、注射用鞘内レザバー（例えば、スピナルゲシック（Ｓｐｉｎａｌｇ ｅｓｉｃ）、例えば、ブラゼノールＧ．Ａ．Neurosurgery 21:484-491 を参照） 、植え込み可能な注入ポンプ系（例えば、インフーセッド（Ｉｎｆｓａｉｄ）、 例えば、ジールスキーＪ．他(1998)Acta Neurochem．Suppl．43:94-99；カノフ Ｒ．Ｂ．(1994)J．Am．Osteopath.Assoc．9:487-493 を参照）、及び浸透ポンプ （アルザ社から販売）を含む。特に好ましい投与方法は、埋め込み可能な外部か らプログラム可能な注入ポンプである。また、好適な注入ポンプ系及びレザバー 系は、ブロムキストによる米国特許第５，３６８，５６２号及びドアンによる米 国特許第４，７３１，０５８号に記載されており、ファルマシア・デルテック社 により開発された。 インビボでのβ−Ａの凝集を変化させ、特にβ−Ａの凝集を抑止しするための 本発明の方法は、異常なβ−アミロイドの凝集及び沈着と関連する疾病に治療学 的に使用してβ−アミロイドの沈着速度を遅くさせ及び（又は）β−アミロイド の沈着度を少なくさせ、もって疾病の過程を改善することができる。好ましい具 体例において、この方法は、アルツハイマー病（例えば、ＡＤ症候群を示してい る個体と家族性のＡＤにかかりやすい個体の両者を含めて散発性又は家族性のＡ Ｄ）を治療するのに使用される。また、この方法は、β−アミロイド沈着のその 他の臨床的な発生、例えば、ダウン症候群の個体及びアミロイドーシスドイツ型 （ＨＣＨＷＡ−Ｄ）の遺伝性脳出血のある患者において治療するのに予防的又は 治療学的に使用することができる。β−ＡＰの凝集の抑止が好ましい治療法であ るが、また、β−ＡＰの凝集を抑止させる調節剤も、神経学的障害をもたらさな い部位でβ−ＡＰの封鎖を可能させることによって治療学的に有用である。 さらに、筋線維におけるβ−アミロイド先駆体蛋白の異常な蓄積は、散発性封 入体筋炎（ＩＢＭ）の病理に関係をしていた（アスカナＶ．他(1996)Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 93:1314-1319 ；アスカナＶ．他(1995)Curent Opinion in Rh eumatology 7:486-496）。従って、本発明の調節剤は、β−ＡＰ又はＡＰＰが非 神経学的な位置に異常に沈着する障害の治療に、例えば、ＩＢＭの治療に、調節 剤を筋線維に送出することによって予防的又は治療学的に使用することができる 。 VII．天然β−ＡＰの凝集を抑止する未変性Ａβペプチド Ａβペプチドが変性基と結合している上で説明したβ−アミロイド調節剤に加 えて、また本発明は、未変性Ａβペプチドからなるβ−アミロイド調節剤を提供 する。ここに、天然β−ＡＰのある部分が天然β−ＡＰと接触したときに天然β −ＡＰの凝集を変化させることができることが発見された（例１２を参照）。従 って、これらの未変性のＡβペプチドは、天然β−ＡＰ配列の一部分（即ち、β ＡＰ_1-39、βＡＰ_1-40、βＡＰ_1-42及びβＡＰ_1-43の一部分）からなる。特に、 これらの未変性Ａβペプチドは、化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触し たときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を変化させるように、最も短い天然 β−ＡＰである、βＡＰ_1-39と比べて少なくとも１個のアミノ酸欠失を有する。 種々の具体例において、これらの未変性ペプチド化合物は、天然β−アミロイド ペプチドの凝集を促進し、又はさらに好ましくは天然β−アミロイドペプチドと 接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止することができる。さ らに好ましくは、この未変性ペプチド化合物は、モル過剰量の天然β−アミロイ ドペプチド（例えば、１０倍、３３倍又は１００倍モル過剰量の天然β−ＡＰ） と接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止する。 上で検討したように、本発明の未変性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39のアミノ 酸配列になぞらえて少なくとも１個のアミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からな る。或いは、本発明の未変性のペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少な くとも５、１０、１５、２０、２５、３０又は３５個のアミノ酸欠失を有するこ とができる。さらに、未変性のペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて１〜 ５、１〜１０、１〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０又は１〜３５個のアミ ノ酸欠失を有することができる。アミノ酸欠失は、β−ＡＰ配列のアミノ末端、 カルボキシ末端、中間部位又はその組合せで起こり得る。従って、一つの具体例 において、本発明の未変性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくと も１個の内部アミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなる。或いは、また、未変 性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも５、１０、１５、２０ 、２５、３０又は３５個の内部アミノ酸欠失を有することができる。またさらに 、未変性のペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて１〜５、１〜１０、１〜 １５、１〜２０、１〜２５、１〜３０又は１〜３５個の内部アミノ酸欠失を有す ることができる。内部欠失を有するペプチドについては、好ましくは、ペプチド は、天然βＡＰのアミノ酸残基１に対応するアミノ末端及び天然βＡＰの残基４ ０に対応するカルボキシ末端を有し、また１個以上の内部β−ＡＰアミノ酸残基 欠失を有する（即ち、非隣接Ａβペプチド）。 他の具体例においては、未変性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39と比べて少なく とも１個のＮ−末端アミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなる。或いは、未変 性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも５、１０、１５、２０ 、２５、３０又は３５個のＮ−末端アミノ酸欠失を有することができる。またさ らに、未変性のペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて１〜５、１〜１０、 １〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０又は１〜３５個のＮ−末端アミノ酸欠 失を有することができる。 さらに他の具体例においては、未変性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞら えて少なくとも１個のＣ−末端アミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなる。或 いは、未変性ペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも５、１０、 １５、２０、２５、３０又は３５個のＣ−末端アミノ酸欠失を有することができ る。またさらに、未変性のペプチド化合物は、βＡＰ_1-39になぞらえて１〜５、 １〜１０、１〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０又は１〜３５個のＣ−末端 アミノ酸欠失を有することができる。 βＡＰ_1-39になぞらえたときのアミノ酸の欠失に加えて、本発明のペプチド化 合物は、例えば、そのアミノ末端、カルボキシ末端又は内部の部位で付加された 追加の非β−ＡＰ型のアミノ酸残基を有することができる。一つの具体例におい て、ペプチド化合物は、そのＮ−末端に少なくとも１個の非β−アミロイドペプ チドから誘導のアミノ酸を有する。或いは、化合物は、そのＮ−末端に、１〜３ 、１〜５、１〜７、１〜１０、１〜１５又は１〜２０個の非β−アミロイドペプ チドから誘導のアミノ酸を有することができる。他の具体例では、ペプチド化合 物は、そのＣ−末端に少なくとも１個の非β−アミロイドペプチドから誘導のア ミノ酸を有する。或いは、化合物は、そのＣ−末端に、例えば、１〜３、１〜５ 、１〜７、１〜１０、１〜１５又は１〜２０個の非β−アミロイドペプチドから 誘導のアミノ酸を有することができる。 特に好ましい具体例において、本発明の未変性ペプチド化合物は、Ａβ_6-20（ そのアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で示す。）、Ａβ_16-30（そのアミ ノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示す。）、Ａβ_{1-20、26ー40}（そのアミノ 酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示す。）又はＥＥＶＶＨＨＨＨＱＱ−Ａβ_16-40 （そのアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示す。）からなる。こ こで使用する命名法において、βＡＰ_1-20、_26-40は、内部アミノ酸残基２１〜 ２５が欠失したβＡＰ_1-40を表す。 本発明の未変性ペプチド化合物は、ボンダスキーＭ．「ペプチド合成の原理」 、スプリンガー・フェルラグ社、ベルリン（１９９３）及びグラントＧ．Ａ．編 「合成ペプチド、ユーザーガイド」Ｗ．Ｈ．フリーマン＆カンパニー、ＮＹ（１ ９９２）に記載の技術のような標準的技術を使用して化学的に合成することがで きる。自動化されたペプチド合成器が市場で入手できる（例えば、アドバンスド ・ケムテク社、モデル３９６、ミリガン／バイオサーチ９６００）。或いは、未 変性ペプチド化合物は、ペプチドをコード化する核酸分子を使用する標準的組換 えＤＮＡ技術に従って製造することができる。ペプチドをコード化するヌクレオ チド配列は、遺伝子コードを使用して決定することができ、またこのヌクレオチ ド配列を有するオリゴヌクレオチド分子は標準的ＤＮＡ合成法（例えば、自動化 ＤＮＡ合成器）によって合成することができる。別法として、未変性ペプチド化 合物をコード化するＤＮＡ分子は、標準的分子生物学技術に従って、天然β−ア ミロイド先駆体蛋白遺伝子又はｃＤＮＡから（例えば、ポリメラージ連鎖反応及 び（又は）制限酵素消化を使用して）誘導することができる。 従って、さらに、本発明は、β−アミロイドペプチド化合物をコード化するヌ クレオチド配列からなる単離核酸分子であって、該β−アミロイドペプチド化合 物はこのものが天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイ ドペプチドの凝集を変化させるように、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１個 のアミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなるものである、該単離核酸分子を提 供する。用語“核酸分子”とは、ここで使用するときは、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ 分子を包含するものとし、また一本鎖又は二本鎖であってよいが、好ましくは二 本鎖ＤＮＡである。単離核酸は、上で検討したように、１個以上のアミノ酸がβ ＡＰ_1-39のＮ−末端、Ｃ−末端及び（又は）内部の部位から欠失しているペプチ ドをコード化する。さらに他の具体例において、単離核酸は、βＡＰ_1-39になぞ らえて１個以上のアミノ酸欠失を有し且つ例えばアミノ末端、カルボキシ末端又 は内部の部位で付加された少なくとも１個の非β−ＡＰから誘導のアミノ酸残基 を有するペプチド化合物をコード化する。特に好ましい具体例においては、本発 明の単離核酸分子は、βＡＰ_6-20、βＡＰ_16-30、βＡＰ_1-20,26-40又はＥＥＶ ＶＨＨＨＨＱＱ−βＡＰ_16-40をコード化する。 標準的組換えＤＮＡ技術による宿主細胞におけるペプチド化合物の発現を容易 にさせるために、ペプチドをコード化する単離核酸を組換え発現ベクターに組み 込むことができる。従って、本発明は、また、本発明の核酸分子からなる組換え 発現ベクターを提供する。用語“ベクター”とは、ここで使用するときは、それ が結合した別の核酸を輸送することができる分子を言う。ベクターの一つのタイ プは“プラスミド”であって、これは中に追加のＤＮＡ断片を繋ぐことができる 環状の二本鎖ＤＮＡループを言う。ベクターの別のタイプは、ウイルスベクター であって、ここでは追加のＤＮＡ断片がウイルスゲノムに繋がれる。ある種のベ クターは、宿主細胞において自律的複製を行うことができ、その中に導入される （例えば、細菌性複製起源を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳類ベクタ ー）。その他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳類ベクター）は、宿主細 胞に導入すると宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、これにより宿主ゲノムと一緒 に複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが機能的に連結される遺伝 子の発現を命令することができる。このようなベクターは、ここでは、“組換え 発現ベクター”又は単に“発現ベクター”と言う。一般に、組換えＤＮＡ技術に おいて有益な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態にある。この明細書に おいて、“プラスミド”及び“ベクター”は、プラスミドがベクターの最も普通 に使用される形態であるので、相互変換的に使用することができる。しかし、本 発明は、このような他の形態の発現ベクター、例えば、同等の機能を果たすウイ ルスベクターなども包含するものとする。 本発明の組換え発現ベクターにおいて、ペプチド化合物をコード化するヌクレ オチド配列は、発現のために使用すべき宿主細胞に基づいて選択された１個以上 の調節配列に機能的に連結する。用語“機能的に連結する”とは、ペプチド化合 物をコード化する配列が調節配列にペプチド化合物の発現を可能にさせるような 態様で連結することを意味するものとする。用語“調節配列”とは、プロモータ ー、エンハンサー及びその他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル ）を包含するものとする。このような調節配列は、例えば、ゲッデルの「遺伝子 発現技術、酵素学における方法」１８５、アカデミック・プレス社、サンジェゴ 、ＣＡ（１９９０）に記載されている。調節配列には、多くのタイプの宿主細胞 におけるヌクレオチド配列の構成的発現を命令するもの、ある種の宿主細胞にお けるヌクレオチド配列のみの発現を命令するもの（例えば、組織に特異的な調節 配列）及び制御可能な態様での（例えば、誘導剤の存在下でのみ）発現を命令す るものが含まれる。当業者には、発現ベクトルのデザインが、転換すべき宿主細 胞の選定、所望のペプチドの発現の程度などのような因子に依存し得ることが認 められよう。本発明の発現ベクトルは、宿主細胞に導入してここに記載のように 核酸によりコード化されるペプチド化合物を生じさせることができる。 本発明の組換え発現ベクトルは、原核細胞又は真核細胞においてペプチド化合 物を発現させるために設計することができる。例えば、ペプチド化合物は、細菌 細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ．、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使 用して）、酵母細胞又は哺乳類細胞で発現させることができる。好適な宿主細胞 は、さらに、ゲッデルの「遺伝子発現技術、酵素学における方法」１８５、アカ デミック・プレス社、サンジェゴ、ＣＡ（１９９０）に検討されている。これと は別に、組換え発現ベクトルは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列及びＴ７ポ リメラーゼを使用してインビトロで転写し翻訳することができる。酵母Ｓ．ｃｅ ｒｉｖｉｓａｅにおいて発現させるためのベクターの例は、ｐＹｅｐＳｅｃ１（ バルダリ他(1987)EMBO J．6:229-234）、ｐＭＦａ（クリャン及びハースコビッ チ（1982）Cell 30:933-943）、ｐＪＲＹ８８（シュルツ他(1987)Gene 54:113-1 23）及びｐＹＥＳ２（インビトロゲン社、サンジエゴ、ＣＡ）を含む。培養昆虫 細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）でたんぱく質又はペプチドを発現させるために入手 できるバキュロウイルスベクターは、ｐＡｃ系（スミス他(1983)Mol．Cell. Biol．3:2156-2165）及びｐＶＬ系（ラックロウＶ．Ａ．及びサマーズＭ．Ｄ．( 1989)Virology 170:31-39）を含む。哺乳類発現ベクターの例は、ｐＣＤＭ８（ シードＢ．(1987)Nature 329:840）及びｐＭＴ２ＰＣ（カウフマン他(1987)EMBO J．6:187-195）を包含する。哺乳類細胞で使用するときは、発現ベクターの制 御機能は、ウイルス調節要素によってしばしば提供される。例えば、普通に使用 されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス 及びシミアンウイルス４０から誘導される。 上で検討した調節性制御配列に加えて、組換え発現ベクターは、追加のヌクレ オチド配列を含有することができる。例えば、組換え発現ベクターは、ベクター を組み込んだ宿主細胞を同定するように選択マーカーをコード化することができ る。このような選択マーカーは斯界で周知である。さらに、宿主細胞、特に哺乳 類宿主細胞からのペプチド化合物の分泌を容易にさせるために、好ましくは、組 換え発現ベクターは、発現したならばペプチド化合物がそのアミノ末端に融合し たシグナル配列で合成されるように、ペプチド化合物のアミノ末端をコード化す る配列に効果的に結合したシグナル配列をコード化する。このシグナル配列は、 ペプチド化合物を細胞の分泌経路に向け、次いで解裂されて宿主細胞から成熟ペ プチド化合物（即ち、シグナル配列を有しないペプチド化合物）を放出させる。 哺乳類宿主細胞からの蛋白又はペプチドの分泌を容易にさせるためにシグナル配 列を使用することは、斯界で周知である。 天然β−ＡＰの凝集を変化させるペプチド化合物をコード化する核酸からなる 組換え発現ベクターは、宿主細胞に導入して宿主細胞にペプチド化合物を生じさ せることができる。したがって、本発明は、また、本発明の組換え発現ベクター を含有する宿主細胞を提供する。用語“宿主細胞”及び“組換え宿主細胞”は、 ここでは相互交換的に使用される。このような用語は、特定の主題細胞のみなら ずそのような細胞の子孫又は潜在的な子孫をも言うことを理解されたい。ある種 の変性が突然変異又は環境の影響のために次の世代で起こり得るが、このような 子孫は、実際には、親細胞と同等ではないが、それでもここで使用するときの用 語の範囲に包含されるものである。宿主細胞は、どんな原核細胞でも真核細胞で も良い。例えば、ペプチド化合物は、Ｅ．ｃｏｌｌ．のような細菌細胞、昆虫細 胞、酵母又は哺乳類細胞において発現させることができる。好ましくは、ペプチ ド化合物は、哺乳類細胞で発現される。好ましい具体例におて、ペプチド化合物 は、遺伝子治療（以下に検討する）により哺乳類被験体におけるアミロイドーシ スを治療するために被検体においてインビボで哺乳類細胞で発現される。好まし くは、組換え発現ベクターによりコード化されたβ−アミロイドペプチド化合物 は、宿主細胞で発現されると宿主細胞から分泌される。 ベクターＤＮＡを慣用の形質転換又は転入技術によって原核細胞又は真核細胞 に導入することができる。用語“形質転換”又は“転入”は、ここで使用すると きは、りん酸カルシウム又は塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介 転入、リポフェクション、エレクトロポレーション、ミクロインジェクション及 びウイルス媒介転入を含めて、異種核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入す るための斯界で認められた各種の技術を言うものとする。宿主細胞を形質転換し 又は転入させるための好適な方法は、サムブルック他「分子クローニング、実験 室マニュアル」、第二版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プ レス社（１９８９）及びその他の実験室マニュアルに見出すことができる。ＤＮ Ａをインビボで哺乳類細胞に導入する方法も、斯界で周知であって、遺伝子治療 （以下に検討する。）のために被検体にベクターＤＮＡを送出するのに使用する ことができる。 哺乳類細胞の安定な形質転入のためには、使用する発現ベクター及び転入技術 に従って、細胞の小さい画分のみが異種のＤＮＡをそのゲノムに組み込む（ｉｎ ｔｅｇｒａｔｅ）ことができることが知られている。これらの組み込み物を同定 し選定するためには、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性）をコード化する遺 伝子が、関心のある遺伝子と一緒に宿主細胞に一般に導入される。好ましい選択 マーカーには、薬物に耐性を与えるもの、例えば、Ｇ４１８、ヒグロマイシン及 びメトトレキセートが含まれる。選択マーカーをコード化する核酸は、ペプチド 化合物をコード化するベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入することがで き、又はセパレーターベクターに導入することができる。導入された核酸により 安定して形質転入された細胞は、薬物の選定によって同定することができる（例 えば、選択マーカー遺伝子を組み入れた細胞は生存するが、その他の細胞は死亡 する）。 本発明の核酸は、斯界で周知の方法、例えば、ＤＮＡの直接注入、受容体媒介 ＤＮＡの取り込み又はウイルス媒介形質転入を使用して、インビボで細胞に送出 することができる。直接注入は、裸のＤＮＡをインビボで細胞に導入するのに使 用された（例えば、アクサジ他(1991)Nature 332:815-818 ；ウオルフ他(1990)S cience 247:1465-1468 を参照）。ＤＮＡをインビボで細胞に注入するための送 出装置（例えば、“遺伝子ガン”）を使用することができる。このような装置は 市場で入手できる（例えば、バイオラド社から）。また、裸のＤＮＡは、ＤＮＡ を、細胞表面受容体のための配位子に結合させた陽イオン、例えばポリリシンと 錯化させることによって細胞に導入することができる（例えば、ウーＧ．及びウ ーＣ．Ｈ．(1988)J．Biol．Chem．263:14621；ウイルソン他(1992)J．Biol．Che m．267:963-967 及び米国特許第５，１６６，３２０号を参照）。ＤＮＡ−配位 子錯体を受容体に結合させると、受容体媒介エンドサイトーシスによるＤＮＡの 取り込みが容易になる。さらに、エンドソームを自然に分断してこれにより物質 を細胞質に放出させる、アデノウイルスカプシドに連結したＤＮＡ−配位子錯体 は、細胞内リソソームによる錯体の分解を防止するのに使用することができる（ 例えば、キュリエル他(1991)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:8850 ；クリスチ アノ他(1993)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:2122-2126を参照）。 欠損レトロウイルスが、遺伝子治療のための遺伝子運搬に使用するために十分 に特徴づけられている（概説については、ミラーＡ．Ｄ(1990)Blood 76:271を参 照）。組換えレトロウイルスを生成させ且つこのようなウイルスにより細胞をイ ニビトロ又はインビボで感染させるためのプロトコルは、「分子生物学における 最新のプロトコル」、オウスベル他編、グリーン・プブリッシング・アソシアイ ツ社（１９８９）、セクション９．１０〜９．１４及びその他の標準的実験室マ ニュアルに見出すことができる。好適なレトロウイルスの例には、当業者に周知 のｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥ及びｐＥＭが含まれる。好適なパッケジングウイル ス系統の例としては、ΨＣｒｉｐ、ΨＣｒｅ、Ψ２及びΨＡｍがある。レトロウ イルスは、上皮細胞、内皮細胞、リンパ球、筋芽細胞、肝細胞、骨髄細胞を含め て、多くの異なった細胞に種々の遺伝子をインビトロで及び（又は）インビボで 導入するのに使用された（例えば、エグリチス他(1985)Science 230:1395-1398 ；ダノス及びミュリガン(1988)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85:6460-6464；ウ イルソン他(1988)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85:3014-3018；アルメンタノ他( 1990)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:6141-6145；ヒューバー他(1991)Proc．Na tl．Acad．Sci．USA 88:8039-8043；フェリー他(1991)Proc．Natl．Acad．Sci． USA 88:8377-8381 ；ショウドハリ他(1991)Science 254:1802-1805；バンボイス ケム他(1992)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89:7640-7644；ケイ他(1992)Human G ene therapy 3:641-647；ダイ他(1992)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89:10892-1 0895；ホウ他(1993)J．Immunol．150:4104-4115；米国特許第４，８６８，１１ ６号；米国特許第４，９８０，２８６号；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０７１３６；Ｐ ＣＴ出願ＷＯ８９／０２４６８；ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０５３４５；ＰＣＴ出願 ＷＯ９２／０７５７３を参照）。 或いは、さらに、アデノウイルスのゲノムは、それがペプチド化合物をコード 化し発現させるがそれが正常な溶解ウイルス生活周期において複製する能力の点 で不活性化されるように改変することができる。例えば、バークナー他(1988)Bi o Techniques 6:616；ローゼンフェルド他(1991)Science 252:431-434及びロー ゼンフェルド他(1992)Cell 68:143-155を参照されたい。アデノウイルス株Ａｄ タイプ５ ｄ１３２４又はその他のアデノウイルス株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３ 、Ａｄ７など）から誘導される好適なアデノウイルスベクターは当業者に周知で ある。組換えアデノウイルスは、それが有効な遺伝子送出ビヒクルであるように 細胞分裂を要求せず且つ広範なタイプの細胞、例えば、気道上皮細胞（ロゼンフ ェルド他(1992)同上誌）、内皮細胞（レマーシャンド他(1992)Proc．Natl．Acad ．Sci．USA 89:6482-6486）、肝細胞（ヘルツ及びジェラルド(1993)Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 90:2812-2816、筋細胞（クアンチン他（1992）Proc．Natl．A cad．Sci．USA 89:2581-2584）を含めて種々の細胞を感染させるのに使用するこ とができるという点で有益である。さらに、導入アデノウイルスＤＮＡ（及びそ れに含まれる異種ＤＮＡ）は宿主細胞のゲノムに組み込まれないが、エピソーム のままであるので、導入ＤＮＡ（例えば、レトロウイルスＤＮＡ）が宿主ゲノム 中に組み込まれるようになる状況で挿入突然変異誘発の結果とし て起こり得る潜在的な問題を回避させる。 また、アデノ関連性ウイルス（ＡＡＶ）は、遺伝子治療のためにＤＮＡを送出 させるに使用することができる。ＡＡＶは、効率的な複製及び増殖生活周期のた めにヘルパーウイルスとしてアデノウイルス又はヘルペスウイルスのような別の ウイルスを要求する天然産欠損ウイルスである（概説については、例えば、ミュ ジツカ他Curr．Topics in Micro.and Immunol.，(1992)158:97-129を参照）。ま た、それは、そのＤＮＡを非分裂細胞に組み込み、高頻度の安定な組み込みを示 すことができるウイルスの一つである（例えば、フロット他(1992)Am．J．Respi r．Cell．Mol．Biol．7:349-356；サミュルスキー他(1989)J．Virol．63:3822-3 828 ；マックロウリン他(1989)J．Virol．62:1963-1973を参照）。３００個ほど に少ない塩基対を含有するベクターをパッケージし組み込むことができる。ＡＡ Ｖベクター、例えば、トラッチン他(1985)Mol．Cell．Biol．5:3251-3260に記載 のようなものをＤＮＡを細胞に導入するのに使用することができる。種々の核酸 が、ＡＡＶベクターを使用して異なったタイプの細胞に導入された（例えば、ハ ーモナート他(1984)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81:6466-6470；トラッチン他( 1985)Mol．Cell．Biol．4:2072-2081 ；ウオンジスホルド他（1988）Mol．Endoc rinol．2:32-39；トラッチン他(1984)J．Virol.,51:611-619 及びフロット他(19 93)J．Bol．Chem．268:3781-3790 を参照）。 また、本発明は、被験者に、β−アミロイドペプチド化合物であってβＡＰ_{1- 39} にぞらえて少なくとも１個のアミノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなるもの をコード化する組換え発現ベクターを投与し、しかも該β−アミロイドペプチド 化合物が被験者において合成され且つ被験者がβ−アミロイドーシスと関連する 障害について治療されるように投与することからなる、β−アミロイドーシスと 関連する障害のために被験者を治療する方法を提供する。好ましくは、この障害 はアルツハイマー病である。一つの具体例において、組換え発現ベクターは神経 細胞でのペプチド化合物の発現を命令する。他の具体例においては、組換え発現 ベクターはグリア細胞でのペプチド化合物の発現を命令する。さらに他の具体例 において、組換え発現ベクターは、線維芽細胞でのペプチド化合物の発現を命令 する。 遺伝子治療の一般的方法は、斯界で周知である。例えば、アンダーソン他によ る米国特許第５，３９９，３４６号を参照されたい。遺伝子物質を送出させるた めの生体適合性のカプセルがベーツエ他によるＰＣＴ公開ＷＯ９５／０５４５２ に記載されている。中枢神経系の障害を治療するための遺伝子的に変性された細 胞を移植する方法が、共にゲージ他による米国特許第５，０８２，６７０号、Ｐ ＣＴ公開ＷＯ９０／０６７５７及びＷＯ９３／１０２３４に記載されている。ま た、多能性神経幹細胞又は神経誘導胎児細胞の単離及び（又は）遺伝子的変性が アンダーソン他によるＰＣＴ公開９４／０２５９３、バイス他による同ＷＯ９４ ／１６７１８及びメイジャー他による同ＷＯ９４／２３７５４に記載されている 。遺伝子物質を形質導入した線維芽細胞がミュリガン他によるＰＣＴ公開８９／ ０２４６８に記載されている。中枢神経系の細胞に遺伝子物質を運搬するための アデノウイルスベクターがカーン他によるＰＣＴ公開ＷＯ９４／０８０２６に記 載されている。神経障害を治療するのに好適なヘルペス単式ウイルスベクターが カプリットによるＰＣＴ公開ＷＯ９４／０４６９５及びゲラー他による同ＷＯ９ ０／０９４４１に記載されている。連結された遺伝子又は遺伝子断片上に神経膠 星状細胞の特異的発現を与えることができ、したがって神経膠星状細胞にＡβペ プチドを特異的に発現させるのに使用することができるグリア線維性酸性蛋白の プロモーター要素がブレンナー他によるＰＣＴ公開ＷＯ９３／０７２８０に記載 されている。さらに、アミロイドーシスを調節するためにＡβペプチドを発現さ せることとは別に、ここに記載のペプチドに対応するβ−アミロイド先駆体蛋白 ｍＲＮＡの領域に対して補足的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを、アミ ロイドーシスを調節するために被験者に発現させることができる。中枢神経系の 障害を調節するためにアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現させる一般的な方 法は、ＰＣＴ公開ＷＯ９５／０９２３６に記載されている。 遺伝子治療による送出とは別に、βＡＰ_1-39にぞらえて少なくとも１個のアミ ノ酸欠失を有するアミノ酸配列からなる本発明のペプチド化合物は、本発明の変 性されたペプチド化合物について詳述したように被験者にペプチド化合物を直接 投与することによって被験者に送出することができる。このペプチド化合物は、 製薬上有効な量のβ−アミロイドペプチド化合物及び製薬上許容できるキャリア ーを含む製薬組成物に処方することができる。ペプチド化合物は、天然β−アミ ロイドペプチドの凝集が抑止されるように天然β−アミロイドペプチドと接触さ せることができる。さらに、ペプチド化合物は、被験者がアルツハイマー病のよ うなβ−アミロイドーシスと関連する障害について治療されるように治療学的に 有効な量で被験者に投与することができる。 VIII．その他の具体例 本発明をＡβペプチド化合物に関して例示したが、ペプチド化合物に対する変 性基の結合を伴う上記に説明は、アミロイドの凝集を調節し、好ましくは抑止す る調節剤化合物を創製するための手段として、どんなアミロイド形成蛋白又はペ プチドにも適用することができる。従って、本発明は、各種の形態及び臨床環境 でアミロイドーシスを治療するのに使用することができる。 アミロイドーシスは、アミロイドの存在によって特徴づけられる病理学的状態 を説明するのに使用される一般的な用語である。アミロイドは、多数の異なった 疾病において見られる多様であるが特定の細胞外蛋白沈着の一群を言う一般的な 用語である。その発生は多様であるが、全てのアミロイド沈着は、共通の形態学 的性質を有し、特定の染料（例えば、コンゴーレッド）で染色し、染色後に偏光 光線で特徴的な赤−緑色複屈折を有する。また、共通の微細構造の特徴、共通の Ｘ線解説及び赤外スペクトルを共有する。アミロイドーシスは、臨床的に、原発 性、続発性、家族性及び（又は）単独型として分類される。原発性アミロイドは 、どんな疾病前歴なしに新たに現れる形態である。続発性アミロイドは、前から 存在する疾病の合併症として現れる形態である。家族性のアミロイドは、特定の 地理学的集団で見出される遺伝的に受け継がれる形態である。アミロイドの単独 型は、単一の臓器系を巻き込む傾向のあるものである。 種々のアミロイドは、沈着物中に存在する蛋白又はペプチドのタイプによって 特徴づけられる。例えば、上で説明したように、アルツハイマー病と関連するア ミロイド沈着物は、β−アミロイドペプチドからなり、しかしてアルツハイマー 病を検出し及び（又は）治療するために本発明の調節剤化合物はβ−アミロイド ペプチドの変性に基づいて設計される。多数のその他のアミロイド形成性疾病と 関連するアミロイド沈着物中に存在するたんぱく及び（又は）ペプチドの同一性 が解明された。従って、これらのその他のアミロイド形成性疾病を検出し及び（ 又は）治療するのに使用するための調節剤化合物を、β−ＡＰから誘導の調節剤 について上で説明したものと同じ方式で創製することができる。また上で説明し たＡβ検定法と同様にして、インビトロでフィブリルを形成するアミロイド形成 蛋白及び（又は）ペプチドを使用してインビトロでの検定法を確立することがで きる。調節剤は、このような検定法を使用し、調節剤がフィブリルのβ−シート 構造を壊す能力に基づいて同定することができる。まず、全体のアミロイド形成 蛋白を変性し、又はさらに好ましくはインビトロでフィブリルを形成することが 知られたそのペプチド断片（例えば、上で説明したＡβ_1-40に類似の）を変性す ることができる。次いで、変性された蛋白又はペプチドについてアミノ酸欠失及 び置換の分析を行って、変性されときにフィブリルの形成を壊すのに十分な凝集 コアドメインの輪郭を描くことができる。 アミロイド形成蛋白又はペプチド並びにそれらに関連するアミロイド形成性疾 病の限定的でない例としては、下記のものが含まれる。 トランスチレチン（ＴＴＲ）：トランスチレチンを含有するアミロイドは、家 族性アミロイド多発性神経障害（ポルトガル、日本及びスイス型）、家族性アミ ロイド心筋症（デンマーク型）、単独型心臓アミロイド及び全身型老人性アミロ イドーシスに起こる。トランスチレチンのペプチド断片はインビトロでアミロイ ドフィブリルを形成することが示された。例えば、ＴＴＲ１０〜２０及びＴＴＲ １０５〜１１５は、２０〜３０％アセトニトリル／水中で室温でアミロイド様フ ィブイルを形成する（ジャービスＪ．Ａ．他(1994)Int．J．Protein Res．44:38 8-398）。さらに、家族性心筋症（デンマーク型）は位置１１１のＬｅｕのＭｅ ｔへの突然変異と関連しており、また位置１１１の野生型ＬｅｕがＭｅｔで置換 されたＴＴＲ１０５〜１１５の類似体（ＴＴＲ１０５〜１１５Ｍｅｔ１１１）は インビボでアミロイド様フィブリルを形成する（例えば、ハーマンセンＬ．Ｆ． 他(1995)Eur．J．Biochem．227:772-779 ；ジャービス他、同誌）。また、イン ビトロでアミロイドフィブリルを形成するＴＴＲの断片がジャービスＪ．Ａ．他 (1993)Biochem．Biophys．Res．Commun．192:991-998 及びガスタブソンＡ．他( 1991)Biochem．Biophys．Res．Commun．175:1159-1164 に記載された。しかして 、アミロイドフィブリルを形成する野生型又は突然変異型トラスチレチンのペプ チド断片は、家族性アミロイド多発性神経障害（ポルトガル、日本及びスイス型 ）、家族性アミロイド心筋症（デンマーク型）、単独型心臓アミロイド又は全身 型老人性アミロイドーシスの検出又は治療に使用することができるアミロイドの 調節剤を創製するためにここに説明するように変性することができる。 プリオン蛋白（ＰｒＰ）：羊のスクラピー、牛における牛海綿状エンセファロ パシー（脳障害）及びヒトのクロイツフェルト−ヤコブ病（ＣＪ）及びゲルスト マンーシュトラウスラー−シュラインカー症候群（ＧＳＳ）を含めて、多数の海 綿状エンセファロパシー（脳障害）におけるアミロイドは、ＰｒＰを含有する。 ＰｒＰＳｃ（スクラピーと関連したプリオン蛋白）の制限された蛋白分解は、棒 状のアミロイドに重合する２７〜３０ｋＤａの断片（ＰｒＰ２７〜３０）を導く （例えば、パンＫ．Ｋ．他(1993)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:10962-10966 ；ガセットＭ．他(1993)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:1-5を参照）。ヒト及 び他の哺乳類からのＰｒＰのペプチド断片は、インビトロでアミロイドフィブリ ルを形成することが示された。例えば、コドン１７８及びコドン２００の領域の ＰＲＮＰ遺伝子（ＣＪに係るプリオン蛋白の先駆体をコード化する）の正常な及 び変異体の対立因子によりコード化された配列に対応するポリペプチドは、イン ビトロでアミロイドフィブリルを自然に形成する（例えば、ゴールドファブＬ． Ｇ．他(1993)Proc．Nati．Acad．Sci．USA 90:4451-4454 を参照）。ヒトＰｒＰ の残基１０６〜１２６を包含するペプチドはＧＳＳ脳から抽出したものと類似の 直鎖状フィブリルを形成することが報告されたのに対して、ヒトＰｒＰの残基１ ２７〜１４７を包含するペプチドはスクラピーと関連したフィブリルと類似する ねじれたフィブリルを形成することが報告された（タグリアビニＦ．他(1993)Pr oc．Natl．Acad．Sci．USA 90:9678-9682）。残基１０９〜１２２、１１３〜１ ２７、１１３〜１２０、１７８〜１９１又は２０２〜２１８を包含するシリアハ ムスターＰｒＰのペプチドは、アミロイドフィブイルを形成し、最もアミロイド 形成性のペプチドがＡｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ −Ａｌａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）であり、これはシリアハムスターＰｒＰ の残基１１３〜１２０に対応するが他の種からのＰｒＰに保存されることが報告 された（ガセットＭ．他(1992)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89:10940-10944） 。しかして、アミロイドフィブリルを形成するＰｒＰのペプチド断片は、スクラ ピー、牛海綿状エンセファロパシー及びヒトのクロイツフェルト−ヤコブ病及び ゲルストマー−シュトラウスラー−シュラインカー症候群の検出又は治療に使用 できるアミロイドーシスの調節剤を創製するためにここで説明するよう に変性することができる。 アイレットアミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ、アミリンとして知られる）： ＩＡＰＰを含有するアミロイドは、成人の初期糖尿病及びインスルノーマにおい て起こる。ＩＡＰＰは、８９個のアミノ酸先駆体蛋白から形成される３７個のア ミノ酸ポリペプチドである（例えば、ベッツホルツＣ．他(1989)Exp．Cell．Res ．183:484-493；ウエスターマークＰ．他(1987)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84 :3881-3885を参照）。ＩＡＰＰ残基２０〜２９に対応するペプチドは、インビト ロでアミロイド様フィブリルを形成し、残基２５〜２９が配列Ａｌａ−Ｉｌｅ− Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）を有し、強くアミロイド 形成性であることが報告された（ウエスターマークＰ．他(1990)Proc．Natl．Ac ad．Sci．USA 87:5036-5040；グレンナーＧ．Ｇ．他(1988)Biochem．Biophys．R es．Commun．155:608-614）。しかして、アミロイドフィブリルを形成するＩＡ ＰＰのペプチド断片は、成人の初期糖尿病及びインスルノーマの検出又は治療に 使用できるアミロイドーシスの調節剤を創製するためにここに説明したように変 性することができる。 心房ナトリウム排泄増加因子（ＡＮＦ）：ＡＮＦを含有するアミロイドは、単 独型心房アミロイドと関連している（例えば、ヨハンセンＢ．他(1987)Biochem ．Biophys．Res．Commun．148:1087-1092を参照）。ＡＮＦは、ＡＮＦプロホル モン（ｐｒｏＡＮＦ１〜１２６）のアミノ酸残渣９９〜１２６（ｐｒｏＡＮＦ９ ９〜１２６）に対応する（パッチＡ．他(1991)J．Pathol．165:241）。しかして 、アミロイドフィブリルを形成するＡＮＦ又はその断片は、単独型心房アミロイ ドの検出又は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤を創製するためにここ で説明したように変性することができる。 κ又はλ軽鎖：κ又はλ軽鎖を含有するアミロイドは、特発性（原発性）アミ ロイドーシス、骨髄種又はマクログロブリン血症と関連するアミロイドーシス及 びショーグレン症候群と関連する原発性限局性小結節アミロイドーシスと関係す る。アミロイド形成性κ及びはλ軽鎖の構造は、アミノ酸配列分析も含めて、特 徴づけられた（例えば、バックスバウムＪ．Ｎ．他(1990)Ann．INtern．Med．11 2 :455-464 ；スコールマンＮ．他(1995)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 92: 9490-9494 ；ハールＭ．Ｒ．他(1994)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91:5446-5 450；リープニークスＪ．Ｊ．他(1990)Mol．Immunol．27:481-485 ；ゲルツＭ． Ａ．他(1985)Scand．J．Immunol．22:245-250；イナズミＴ．他(1994)Dermatolo gy 189:125-128 を参照）。しかして、アミロイドフィブリルを形成するκ又は λ軽鎖或いはそのペプチド断片は、特発性（原発性）アミロイドーシス、骨髄種 又はマクログロブリン血症と関連するアミロイドーシス及びショーグレン症候群 と関連する原発性限局性小結節アミロイドーシスの検出又は治療に使用できるア ミロイドーシスの調節剤を創製するためにここで説明したように変性することが できる。 アミロイドＡ：血清アミロイドＡから誘導されたアミロイドＡ蛋白（ＡＡ蛋白 ）を含有するアミロイドは、反応性（続発性）アミロイドーシス（例えば、リー プニークスＪ．Ｊ．他(1995)Biochim．Biophys．Acta 1270:81-86を参照）、家 族性地中海熱並びに蕁麻疹及び難聴を伴う家族性アミロイドネフロパシー（マッ クル−ウエルズ症候群）（例えば、リンケＲ．Ｐ．他(1983)Lab．Invest．48:69 8-704）と関連している。組換えヒト血清アミロイドＡは、インビトロでアミロ イド様フィブリルを形成し（ヤマダＴ．他(1994)Biochim．Biophys．Acta 1226: 323-329）、そして円二色性の研究はきわだったβシート／回転構造を明らかに した（マックビンＷ．Ｄ．他(1998)Biochem．J．256:775-783）。しかして、ア ミロイドフィブリルを形成する血清アミロイドＡ、アミロイドＡ蛋白又はその断 片は、反応性（続発性）アミロイドーシス、家族性地中海熱並びに蕁麻疹及び難 聴を伴う家族性アミロイドネフロパシー（マックル−ウエルズ症候群）の検出又 は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤を創製するためにここに記載した ように変性することができる。 シスタチンＣ：シスタチンＣの変異体を含有するアミロイドは、アイスランド 型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血と関連している。この疾病は、位置６ ８でのロイシンからグリシンの突然変異及びこの突然変異体を含有するシスタチ ンＣと関連している（エーブラハムソンＭ及びグラッブＡ．(1994)Proc．Nati． Acad．Sci．USA 91:1416-1420）。しかして、アミロイドフィブリルを形成する シスタチンＣ又はそのペプチド断片は、アイスランド型のアミロイドーシスを伴 う遺伝性脳出血の検出又は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤を創製す るためにここに記載のように変性することができる。 β２ミクログリブリン：β２ミクログリブリン（β２Ｍ）を含有するアミロイ ドは、長期の血液透析の主たる合併症である（例えば、ステインＧ．他(1994)Ne phrol．Dial.Transplant．9:48-50 ；フロージＪ．他(1992)Kidney Int．Suppl ．38:S78-S85 ；モーリーＣ．Ｐ．(1990)Rheumatol．Tnt．10:1-8を参照）。天 然β２Ｍ蛋白は、インビトロでアミロイドフィブリルを形成することが示された （コンノールズＬ．Ｈ．他(1985)Biochem．Biophys．Res．Commun．131:1063-10 68 ；オノＫ．他(1994)Nephron 66:404-407）。しかして、アミロイドフィブリ ルを形成するβ２Ｍ又はそのペプチド断片は、長期の血液透析と関連するアミロ イドーシスの検出又は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤を創製するた めにここに記載のように変性することができる。 アポリポ蛋白Ａ−Ｉ（ＡｐｏＡ−Ｉ）：ＡｐｏＡ−Ｉの変異体をアミロイドは 、遺伝性の非神経障害性全身アミロイドーシス（家族性アミロイド多発性神経障 害III）において見出された。例えば、位置５０でのＴｒｐからＡｒｇの突然変 異を有するＡｐｏＡ−Ｉ変異体のＮ−末端断片（残基１〜８６、１〜９２及び１ 〜９３）がアミロイドで検出された（ブースＤ．Ｒ．他（1995）OJM 88:695-702 ）。別の系統では、位置６０でのロイシンからアルギニンの突然変異が見出され た（ソウターＡ．Ｋ．他(1992)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89:7389-7393）。 しかして、アミロイドフィブリルを形成するＡｐｏＡ−Ｉ又はそのペプチド断片 は、遺伝性の非神経障害性全身アミロイドーシスの検出又は治療に使用できるア ミロイドーシスの調節剤を創製するためにここに記載のように変性することがで きる。 ゲルソリン：ゲルソリンの変異体を含有するアミロイドは、フィンランド型の 家族性アミロイドーシスと関連している。野生型又は突然変異体ゲルソリンと相 同の配列を有し且つインビトロでアミロイドフィブリルを形成する合成ゲルソリ ンペプチドがモーリーＣ．Ｐ．他(1994)Lab．Invest．70:558-564に報告された 。残基１８７を取り巻く９個の残基断片（家族性ゲルソリンアミロイドーシスで 突然変異した）がアミロイド形成領域と規定された（モーリーＣ．Ｐ．他、同誌 ；モーリーＣ．Ｐ．他(1992)Biochem．Biophys．Res．Commun．183:227-231 ； モーリーＣ．Ｐ．(1991)J．Clin．Invest．87:119-1199）。しかして、アミロイ ドフィブリルを形成するゲルソリン又はそのペプチド断片は、フィンランド型の 家族性アミロイドーシスの検出又は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤 を創製するためにここに記載のように変性することができる。 プロカルシトニン又はカルシトニン：プロカルシトニン、カルシトニン又はカ ルシトニン免疫反応性を含有するアミロイドが、甲状腺の髄質癌と関連するアミ ロイドフィブリルにおいて検出された（例えば、バトラーＭ．及びカーンＳ．(1 986)Arch．Pathol．Lab.Med.，110:647-649 ；スレッテンＫ．他(1976)J．Exp． Med．143:993-998）。カルシトニンは、インビトロで非分枝状フィブリル構造を 形成することが示された（ケダーＩ．他(1976)Isr．J．Med．12:1137-1140）。 しかして、アミロイドフィブリルを形成するプロカルシトニン、カルシトニン又 はその断片は、甲状腺の髄質癌と関連するアミロイドーシスの検出又は治療に使 用できるアミロイドーシスの調節剤を創製するためにここに記載のように変性す ることができる。 フィブリノーゲン：フィブリノーゲンα−鎖の変異体を含有するアミロイドが 、遺伝性腎アミロイドーシスにおいて見出された。位置５５４でのアルギニンか らロイシンの突然変異体が、罹患した個体の死後の腎臓から単離されたアミロイ ドフィブリル蛋白中に存在することが報告された(ベンソンＭ．Ｄ．他(1993)Nat ure Genetics 3:252-255)。しかして、アミロイドフィブリルを形成するフィブ リノーゲンα−鎖又はそのペプチド断片は、フィブリノーゲンと関連する遺伝性 腎アミロイドーシスの検出又は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤を創 製するためにここに記載のように変性することができる。 リゾチーム：リゾチームの変異体を含有するアミロイドが、遺伝性全身アミロ イドーシスにおいて見出された。ある系統ではこの疾病は位置５６でのトレオニ ンからイソロイシンの突然変異と関連したが、他の系統ではこの疾病は位置６７ でのヒスチジンからアスパラギン酸の突然変異と関連した（ペピーズＭ．Ｂ．他 (1993)Nature 362:553-557）。しかして、アミロイドフィブリルを形成するリゾ チーム又はそのペプチド断片は、リゾチームと関連した遺伝性全身アミロイド ーシスの検出又は治療に使用できるアミロイドーシスの調節剤を創製するために ここに記載のように変性することができる。 本発明を下記の実施例によって詳細に例示するが、これらは制限的なものでは ない。以下に説明する検定法において調節剤がβ−アミロイドの凝集を変化させ る能力は、この調節剤がインビボで同じ機能を果たす能力を予測させるものであ る。この明細書と通じて引用された全ての参考文献、特許及び公開特許の内容は 、ここで引用することによってここに含めるものとする。例１ ：β−アミロイド調節剤の構成 次のアミノ酸配列 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の位置１〜４０）のアミノ末端ビオチニル化β−アミ ロイドペプチドからなるβ−アミロイド調節剤を、以下に記載のようなＮα−９ −フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）をベースにした保護方法を使用 して固相ペプチド合成によって製造した。２．５ミリモルのＦＭＣＯ−Ｖａｌ− Ｗａｎｇ樹脂から出発して、各アミノ酸の逐次添加を４倍過剰量の保護アミノ酸 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）及びジイソプロピルカルボジ イミド（ＤＩＣ）を使用して行った。再カップリングは、カップリング後の樹脂 のニンヒドリン試験により決定して必要なときに行った。各合成サイクルは、３ 分間の脱保護（２５％ピペリジン／Ｎ−メチルピロリジン（ＮＭＰ））、１５分 間の脱保護、５回の１分間ＮＭＰ洗浄、６０分間のカップリングサイクル、５回 のＮＭＰ洗浄及びニンヒドリン試験によて最小限に記述した。完全に組み立てら れたペプチド−樹脂の７００ｍｇの部分に、ビオチン（モレキュラー・プロベズ 社から入手できる）を用いて上記のプロトコルによってカップリングされたＦＭ ＯＣ−アミノ酸の置換を行った。樹脂をトリフルオル酢酸（ＴＦＡ）（８２．５ ％）、水（５％）、チオアニソール（５％）、フェノール（５％）及びエタンジ チオオール（２．５％）で２時間処理することによりペプチドを取り出し、次い でペプチドを冷エーテル中で沈殿させたた。固形物を遠心分離（２４００ｒｐｍ ×１０分間）によりペレットにし、エーテルをデカンテーションした。これをエ ーテルに再懸濁させ、ペッレトにし、第二のデカンテーションを行った。固形物 を１０％酢酸に溶解し、凍結乾燥して２３０ｍｇの粗製のビオチニル化ペプチド を生じさせた。固形物の６０ｍｇを２５％アセトニトリル（ＡＣＮ）／０．１％ ＴＦＡに溶解し、逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）カラムに適用 した。３０〜４５％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡの線状勾配を使用してビオ チニルβＡＰ_1-40を４０分間にわたり溶離した。一つの主要画分（４ｍｇ）とい くつかの追加の画分が単離された。主要画分は、４５５６の質量スペクトル（マ トリックス補助レーザー脱着イオン化−飛行時間）を生じたが、これはこのペプ チドの理論値（４５５５）と一致する。 次のアミノ酸配列 ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の位置１〜１５）のアミノ末端ビトチニル化β−アミ ロイドペプチドからなるβ−アミロイド調節剤を、０．０２５ミリモルスケール の合成のために製造者により確立された自動化プロトコルを使用してアダバンス ド・ケムテク・モデル３９６多段ペプチド合成器で製造した。２−（１Ｈ−ベン ゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサ フルオルホスフェート（ＨＢＴＵ）／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ｄ ＩＥＡ）／ＨＯＢｔ／ＦＭＯＣ−ＡＡを４倍過剰量で３０分間、次いでＤＩＣ／ ＨＯＢｔ／ＦＭＯＣ−ＡＡを４倍過剰量で４５分間使用して、ダブルカップリン グを全てのサイクルで行った。このペプチドを脱保護し、ＴＦＡ／水（９５％／ ５％）で３時間処理することにより樹脂から取り出し、上記のようにエーテルで 沈殿させた。ペレットを１０％酢酸に再懸濁し、凍結乾燥した。この物質をＶｙ ｄａｃＣ１８カラム（２１×２５０ｍｍ）で１５％〜４０％アセトニトリルを使 用して８０分間にわたり分取ＨＰＬＣにより精製した。主要単離物が、分析ＨＰ ＬＣにより分析すると単一の対称ピークとして溶離し、エレクトロスプレー質量 分光測定により分析すると所期の分子量を与えた。結果＝２０５２．６（理論値 ２０５２）。 β−ＡＰアミノ酸配列のその他の領域（例えば、Ａβ凝集コアドメイン）から なるβ−アミロイド調節剤化合物を上記の合成法を使用して同様に製造した。さ らに、他のアミロイド形成ペプチドからなる分子も同様に製造することができる 。例２ ：調節剤によるβ−アミロイドの凝集の抑止 天然β−ＡＰと一緒にしたときにβ−アミロイド調節剤が天然β−ＡＰの凝集 を抑止する能力を、一連の凝集検定法によって検査した。天然β−ＡＰ（β−Ａ Ｐ_1-40）はベーケム社（トーランス、ＣＡ）から市場で得た。アミノ末端ビオチ ニル化β−ＡＰ調節剤は、例１に記載のように製造した。 Ａ．光学濃度検定法 第一の検定法では、β−ＡＰの凝集は、種々の濃度の調節剤の存在下又は不存 在下での天然β−ＡＰ溶液の時間経過による濁度の増加を決定することによって 測定した。溶液の濁度は、溶液の４００ｎｍでの光学濃度（Ａ_400nm）を経時的 に決定することにより定量化した。 調節剤の不存在下での天然β−ＡＰの凝集は、以下のように決定した。β−Ａ Ｐ_1-40をヘキサフルオルイソプロパノール（ＨＦＩＰ、アルドリッチ・ケミカル 社）に２ｍｇ／ｍｌで溶解した。ＨＦＩＰ溶液の一定量（８７μｌ）を個々の１ ０ｍｍ×７５ｍｍの試験管に移した。各試験管にアルゴンガスの流れを通じてＨ ＦＩＰを蒸発させた。生じたペプチドの薄いフィルムにジメチルスルホキシド（ ＤＭＳＯ、アルドリッチ・ケミカル社）（２５μｌ）を添加してペプチドを溶解 させた。２ｍｍ×７ｍｍのテフロン被覆磁気攪拌棒を各試験管に入れた。ＤＭＳ Ｏ溶液に緩衝液（４７５μｌ。１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのりん酸ナトリ ウム、ｐＨ７．４）攪拌しながら添加した。生じた混合物を連続攪拌し、光学濃 度を４００ｎｍで監視して不溶性ペプチド凝集物の形成を観察した。 別法として、β−ＡＰ_1-40を１．６ｍＭ（６．９ｍｇ／ｍｌ）で上記のように ＤＭＳＯに溶解し、その一定量（２５μｌ）を攪拌した緩衝液（４５７μｌ）に 添加し、次いで４００ｎｍで吸光度を監視した。 β−アミロイド調節剤を天然β−ＡＰと一緒に溶液状に溶解した抑止研究では 、調節剤は、ＨＦＩＰへの予備溶解を行い又はそれなしでＤＭＳＯに溶解した。 次いで、これらの化合物を緩衝液に攪拌しながら添加し、次いでβ−ＡＰ_1-40の ＤＭＳＯ溶液を添加した。別法として、調節剤のＨＦＩＰの溶液をβ−ＡＰ_1-40 のＨＦＩＰ溶液と一緒にし、次いで蒸発させ、混合物をＤＭＳＯに再溶解した。 次いで、緩衝液をＤＭＳＯ溶液に添加して検定法を開始させた。アミノ末端ビオ チニル化β−アミロイドペプチド調節剤のＮ−ビオチニル−βＡＰ_1-40及びＮ− ビオチニル−βＡＰ_1-15を１％及び５％の濃度で天然β−ＡＰ_1-40中で試験した 。 結果の代表的な例を第１図に示す。これはＮ−ビオチニル−βＡＰ_1-40による 天然β−ＡＰ_1-40の凝集の抑止を図示する。調節剤の不存在下では、天然β−Ａ Ｐ溶液の光学密度は特徴的なＳ字状の曲線を示し、Ａ_400nmが低い凝集前のラグ タイム（第１図においてほぼ３時間）があり、次いでＡ_400nmの急速な増加があ り、これが急速に平坦域になったが、これは天然β−アミロイドペプチドの凝集 を表している。これと対照的に、１％ほどに少量のＮ−ビオチニル−βＡＰ_1-40 調節剤の存在下では、天然β−アミロイドペプチドの凝集は、著しく抑止された 。ラグタイムの増加、凝集の傾斜の低下及び溶液の濁度に達する平坦域の低下に より示される（第１図を参照）。５％濃度のＮ−ビオチニル−βＡＰ_1-40は、天 然β−アミロイドペプチドの凝集を同様に抑止した。さらに、Ｎ−ビオチニル− βＡＰ_1-15を調節剤として使用しても、同様の結果が観察された。これらの結果 は、Ｎ−末端ビオチニル化β−ＡＰ調節剤が、天然β−アミロイドペプチドが１ ００倍モル過剰濃度で存在するときでさえも、天然β−アミロイドペプチドの凝 集を効果的に抑止することができることを立証している。 Ｂ．蛍光検定法 第二の検定法では、β−ＡＰの凝集は、実質的にはレビンＨ．(1993)Protein Science 2:404-410 に記載のような蛍光光度法を使用して測定した。この検定法 では、染料のチフラビン（ＴｈＴ）をβ−ＡＰ溶液と接触させる。ＴｈＴと凝集 したβ−ＡＰ（単量体又はゆるく会合したβ−ＡＰではない）との会合では、遊 離の染料についての３８５ｎｍでの励起最大発光（ｅｘ）及び４４５ｎｍでの活 性化発光（ｅｍ）と比べて、新たに４５０ｎｍで（ｅｘ）及び４８２ｎｍで（ｅ ｍ）が生じる。β−ＡＰの凝集をこの方法によって以下のように検定した。前記 のＡの部に説明したような凝集検定法で使用した溶液の一定量（２．９μｌ）を 試料から取り出し、チオフラビンＴ（１０μＭ、アルドリッチ・ケミカル社 から入手した。）を含有する２００μｌのりん酸カリウム緩衝液（５０μＭ、ｐ Ｈ７．０）で希釈した。励起を４５０ｎｍに設定し、発光を４８２ｎｍで測定し た。Ａの部で説明した光学濃度検定法により得られ得た結果と同様に、１％ほど に少量のＮ−ビオチニル化β−ＡＰ調節剤は、この蛍光光度検定法を使用して、 天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止するにあたって有効であった。 Ｃ．静的凝集検定法 第三の検定法では、β−ＡＰの凝集は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気 泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を使用してペプチド凝集物を可視化させることによっ て測定された。この検定法では、β−ＡＰ溶液を所定の時間にわたって凝集させ 、次いで反応物の一定量を標準ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に流した。典型的な溶液 の条件はＰＢＳ中２００μＭのβ−ＡＰ_1-40で３７℃で８日であるか又は０．１ Ｍの酢酸ナトリウム中２００μＭのβ−ＡＰ_1-40で３７℃で３日であった。ペプ チド凝集物はゲルをコーマシーブルーにより染色させることにより可視化させる か、又は、ビオチニル化β−ＡＰ調節剤を含有したβ−ＡＰ溶液については、ゲ ルから作ったフィルムをストレプタビジン−ペルオキシダーゼプローベによりウ エスターンブロッチングし、次いで標準ペルオキシダーゼにより可視化させた。 β−ＡＰ凝集物はゲル上で高分子量、低易動度のバンドとして同定でき、これは 低分子量、高易動度のβ−ＡＰ単量体又は二量体バンドから容易に識別すること ができる。 天然β−ＡＰ_1-40の凝集をこの方法によりβ−アミロイド調節剤の不存在下に 検定した時に、高分子量の凝集物はゲル上で容易に検出できた。これと対照をな して、Ｎ−ビオチニル−βＡＰ_1-40調節剤の自己凝集（即ち、天然β−ＡＰの不 存在下でのＮ−ビオチニルペプチドのみの凝集）を検定すると、高分子量の凝集 物はあっても少ししか観察されなかったが、これは調節剤が自己凝集する能力が 天然β−ＡＰと比べて有意に減少したことを示している。最後に、天然β−ＡＰ_1-40 とＮ−ビオチニル−βＡＰ_1-40との混合物の凝集をこの方法により検定する と、ペプチド混合物が高分子量の凝集物中に会合する量が減少し、しかしてβ− アミロイド調節剤が天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止するのに有効であ ることを立証している。例３ ：β−アミロイド調節剤の神経毒性の分析 β−アミロイド調節剤の神経毒性を細胞をベースとした検定法で、ニューロン 先駆細胞株ＰＣ−１２又は一次ニューロン細胞及び生存指示薬３−（４，４−ジ メチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ ＭＴＴ）を使用して試験する(シャーマンＭ．Ｓ．他（1994）)Proc．Natl．Acad ．Sci．USA 91:1470-1474 ；ハンセンＭ．Ｂ．他(1989)J．Immun．Methods 119: 203-210 を参照）。ＰＣ−１２は、ラット副腎褐色細胞腫細胞株であり、アメリ カ基準菌株コレクション（ロクビル、ＭＤ）から入手できる（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７２１）。ＭＴＴ（シグマ・ケミカル社から入手できる）は、生存細胞にお いて黄色から青色に変化する色素体基質であって、分光光度法により検出ことが できる。 β−アミロイド調節剤の神経毒性を試験する（単独か又は天然β−ＡＰと共に ）ためには、細胞はまず９６のウエルプレートに１個のウエル当たり７，０００ 〜１０，０００個の細胞で入れ、３７℃で一夜培養することによって固着させる 。リン酸塩緩衝塩水溶液（ＰＢＳ）に新たに溶解したか又は“経時した”調節剤 の段階希釈溶液（単独か又は天然β−ＡＰと共に）をウエルに３通りに添加し、 インキュベーションを２日以上続ける。経時した調節剤は、調節剤の水溶液を３ ７℃で長期間（例えば、５日以上）乱さないでインキュベーションすることによ って調製した。細胞を調節剤調製物に暴露する最後の２日間について、ＭＴＴを 媒体に１ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、３７℃でインキュベーションする。 ＭＴＴと共に２時間インキュベーションしてから、媒体を取り出し、細胞をイソ プロパノール／０．４Ｎ ＨＣｌ中で攪拌しながら溶解させる。各ウエルに等容 量のＰＢＳを添加し、５７０ｎｍでの各ウエルの吸光度を測定して生存している 細胞を定量化する。別法として、ＭＴＴをウエル中の媒体に直接添加した５０％ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／２０％ドデシル疏酸ナトリウムの添加により可 溶化させ、同様に生存している細胞を５７０ｎｍでの吸光度を測定することによ り定量化する。β−アミロイド調節剤（単独か又は天然β−ＡＰと共に）の相対 的な神経毒性は、この検定法で神経毒性を示し、従って積極的な対照例として役 立つ天然β−ＡＰ単独（例えば、β１〜４０、β１〜４２）と比較することによ り決定される。例４ ：追加の変性β−アミロイドペプチド化合物の合成 この例では、種々のＮ−末端又はランダム側鎖の変性を有する一連のβ−ＡＰ を合成した。 標準的な方法を使用して一連のＮ−末端変性β−アミロイドペプチドを合成し た。Ｗａｎｇ樹脂上で例１に記載のようにＡβ（１〜１５）及びＡβ（〜４０） に対応する完全に保護された樹脂に結合したペプチドを製造して究極的にカルボ キシル末端ペプチド酸を得た。各ペプチド樹脂の少量（それぞれ１３及び２０μ モル）をアドバンスド・ケムテク・モデル３９６マルチペプチド合成器の反応ブ ロックのウエルに分配した。各試料のＮ−末端ＦＭＯＣ保護基を２５％ピペリジ ンＮＭＰ溶液により標準的な態様で除去し、次いでＮＭＰにより激しく洗浄した 。各ペプチド−樹脂試料の保護されていないＮ−末端−α−アミノ酸を下記の方 法を使用して変性した。 方法Ａ：遊離カルボン酸基を含有する変性剤のカップリング 変性剤（５当量）をＮＭＰ、ＤＭＳＯ又はこれらの２種の溶媒の混合物に予め 溶解した。溶解した変性剤にＨＯＢＴ及びＤＩＣ（各試薬の５等量）を添加し、 得られた溶液を１当量の遊離アミノペプチド−樹脂に添加した。カップリングを 終夜進行させ、次いで洗浄した。ペプチド−樹脂の少量試料についてのニンヒロ リン試験が、カップリングが完全でないことを示したならば、ＨＯＢｔの代わり に１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）を使用してカップ リングを繰り返した。 方法Ｂ：予め活性化された形態で得られた変性剤のカップリング 変性剤（５当量）をＮＭＰ、ＤＭＳＯ又はこれらの２種の溶媒の混合物に予め 溶解し、１当量のペプチド−樹脂に添加した。活性化された変性剤とペプチド− 樹脂の懸濁液にジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、６当量）を添加した。 カップリングを終夜行わせ、次いで洗浄した。ペプチド−樹脂の少量試料につい てのニンヒロリン試験が、カップリングが完全でないことを示したならば、カッ プリングを繰り返した。 第二のカップリング（必要ならば）の後、Ｎ−末端変性ペプチド−樹脂を減圧 下に乾燥し、例１に記載のように側鎖保護基を除去して樹脂から取り出した。ミ リポアＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジ又は分取逆相ＨＰＬＣを使用して精製された 生じた粗製ペプチド中に主生成物が存在することを確認するために、分析用逆相 ＨＰＬＣを使用した。生成物中に所望の化合物が存在することを確認するために 質量スペクトルを使用した。 方法Ａは、Ｎ−アセチルノイラミ酸、コール酸、ｔｒａｎｓ−４−コチニンカ ルボン酸、２−イミノ−１−イミダゾリジン酢酸、（Ｓ）−（−）−インドリン −２−カルボン酸、（−）−メントキシカルボン酸、２−ノルボルナン酢酸、γ −オキソ−５−アセナフテン酪酸、（−）−２−オキソ−４−チゾリジンカルボ ン酸及びテトラヒドロ−３−フラン酸をカップリングさせるのに使用した。方法 Ｂは、２−イミノビオチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ジエチレ ントリアミンペンタ酢酸二無水物、塩化４−モルホリンカルボニル、塩化２−チ オフェンアセチル及び塩化２−チオフェンスルホニルをカップリングさせるため に使用した。 上で記載したＮ−末端変性Ａβ（１〜１５）及びＡβ（１〜４０）ペプチドの 構成と類似の態様で、Ｎ−フルオレセイニルＡβ（１〜１５）及びＡβ（１〜４ ０）を、予備活性化試薬の５−（及び６）−カルボキシフルオレセインスクシン イミジルエステル及びフルオレセイン−５−イソシアネート（ＦＩＴＣ 異性体 Ｉ）を使用して二つの異なる態様で製造した。両試薬はモレキュラー・プローベ 社から得た。カップリングは、１当量のペプチド−樹脂当たり４当量の試薬を使 用し、ＤＩＥＡを添加して反応溶液を湿ったｐＨ紙まで塩基性にして、行った。 Ａβ（１〜１５）樹脂への各試薬のカップリングは、一夜のカップリングの後に 完全であると思われた。Ａβ（１〜４０）樹脂へのカップリングは正のニンヒド リン試験により指示されるように低かったので、両試薬をテトラヒドロフラン− ＮＭＰ（１：２ｖ／ｖ）中でこのペプチド−樹脂に再カップリングさせた。生じ たＮ−末端変性ペプチド−樹脂を例Ａに記載のように解裂させ、脱保護し、精製 した。 上記のＮ−フルオレセイニルＡβペプチドに加えて、Ａβ（１〜４０）をフル オレセインによりランダムに変性したものからなるβ−アミロイド調節剤を製造 した。ベーケム社から販売されたＡβ（１〜４０）をＤＭＳＯにほぼ２ｍｇ／ｍ ｌで溶解した。モレキュラー・プローベ社から販売された５−（及び６）−カル ボキシフルオレセインを１．５モル過剰量で添加し、ＤＩＥＡを添加して溶液を 湿ったｐＨ紙まで塩基性にした。反応を周囲温度で１時間進行させ、次いでトリ エタノールアミンにより急冷させた。生成物をこの粗製混合物として添加して検 定した。 また、β−ＡＰアミノ酸配列の他の領域（例えば、Ａβ凝集コアドメイン）か らなるβ−アミロイド調節剤化合物を上記の合成法を使用して同様に製造した。 さらに、その他のアミロイド形成ペプチドからなる調節剤を同様に製造すること ができる。例５ ：追加のβ−アミロイド調節剤の同定 この例では、Ａβ凝集の二つの検定法を使用してこの過程を抑止することがで きるβ−アミロイド調節剤を同定した。 第一の検定法は、播種静的検定法（ＳＳＡ）といい、以下のように実施した。 Ａβ単量体の溶液を作るために、適当量のＡβ（１〜４０）ペプチド（ベーケ ム社）を微量天秤で秤量した（量は調製物中の水の量について較正されたが、こ れはロットナンバーによって２０〜３０％ｗ／ｗであった。）。ペプチドを１／ ２５容量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、次いで水により１／２ 容となし、１／２容の２×ＰＢＳ（１０×ＰＢＳ：１３７ｍＭのＮａＣｌ；２． ７ｍＭのＫＣｌ；４．３ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ；１．４ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄ ；ｐＨ７．２）により２００μＭの最終濃度にした。 原料の種を調製するために、１ｍｌの上記のＡβ単量体調製物を３７℃で８日 間インキュベーションし、１８、２３、２６及び３０ゲージの針によりそれぞれ ２５回、２５回、５０回及び１００回続けて剪断を加えた。蛍光単位（ＦＵ）が 安定な平坦域となるまで（ほぼ１００〜１５０×）３０ゲージの針を５０回ごと 通した後に、剪断処理した物質の２μｌの試料を蛍光測定のために採取した。 候補の抑止剤を調製するために、所要量の候補抑止剤を秤量し、原料を１ｍＭ の最終濃度（１０×原料）まで１×ＰＢＳに溶解した。不溶であるならば、これ を１／１０容のＤＭＳＯに溶解し、１×ＰＢＳで１ｍまで希釈した。さらに、各 候補を１００μＭ及び１０μＭの双方で試験するために１／１０の希釈物を調製 した。 凝集の検定のためには、各試料を３通りに設定した［５０μｌの２００μＭの 単量体、１２５ＦＵの剪断処理した種（種のバッチに応じて可変の量であり、通 常は３〜６μｌ）、１０μｌの１０×抑止剤溶液、最終容量は１×ＰＢＳにより １００μｌにした。］。１：１及び１：１０の単量体対抑止剤のモル比に等しい 各抑止剤の二つの濃度、１００μＭ及び１０μＭを試験した。対照例は、新たな 単量体が種を含まなかったことを確認するための播種しない反応並びに推定され る抑止剤と比較するための参照例としての抑止剤の不存在下での播種された反応 を含んだ。検定物は、蛍光測定のために２μｌの試料を１時間ごとに採取しなが ら３７℃で６時間インキュベーションした。蛍光を測定するために、Ａβの２μ ｌの試料を４００μｌのチオフラビン−Ｔ溶液（５０ｍＭのりん酸カリウム、１ ０ｍＭのチオフラビン−Ｔ、ｐＨ７．５）に添加した。試料をうず巻き回転し、 蛍光を０．５ｍｌのミクロ石英キュベットでＥＸ４５０ｎｍ及びＥＭ４８２ｎｍ で読み取った（日立４５００蛍光光度計）。β凝集は、チオフラビン−Ｔの高め られた発光をもたらす。従って、有効な抑止剤化合物を含む試料は、抑止剤化合 物を含まない対照例試料と比べて、減少した発光を示す。 第二の検定法を振盪板凝集検定法といい、以下のように行った。 ベーケム社（トーランス、ＣＡ）から得たＡβ（１〜４０）をＨＦＩＰ（１， １，１，３，３，３−ヘキサフルオル−２−プロパノール、アルドリッチ社、１ ０．５２２−８）に２ｍｇのペプチド／ｍｌの濃度で溶解し、室温で３０分間イ ンキュベーションした。ＨＦＩＰにより可溶化されたペプチドを水浴音波処理器 で最高の設定で５分間音波処理し、次いでアルゴン気流中で蒸発乾固させた。ペ プチドフィルムを無水のジメチルホルムアミド（ＤＭＳＯ）に６．９ｍｇ／ｍｌ の濃度で再懸濁させ、上記のように５分間音波処理し、次いで０．２μのナイロ ンシリンジフィルター（ＶＷＲ社、ｃａｔ．Ｎｏ．２８１９６−０５０）により 濾過した。候補抑止剤をＤＭＳに、一般的には、Ａβ（１〜４０）ペプチドのモ ル濃度の４倍の濃度で直接溶解した。 候補は３回検定した。各被検候補について、ＤＭＳＯ中の４部のＡβ（１〜 ４０）ペプチドをＤＭＳＯ中１部の候補抑止剤とガラスびんで一緒にし、混合し て１：１のモル比のＡβペプチド対候補とした。異なったモル比を得るために、 候補をＡβ（１〜４０）と混合する前にＤＭＳＯで希釈して最終ＤＦＭＳＯ及び Ａβ（１〜４０）の濃度を一定に保持した。ウルトラロウバインディング９６ウ エルプレート（コーニング・コスター社、ｃａｔ．Ｎｏ．２５００、ケンブリッ ジ、ＭＡ）に、ウエル１個当たり１００μｌのＰＴＬ緩衝液（１５０ｍＭのＮａ Ｃｌ、１０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．４）を定量配分した。各候補のために 、緩衝液を入れた３個のウエルのそれぞれにＤＭＳＯ中１０μｌのペプチド混合 物を定量配分した。カバーしたプレートをプレート振盪機上で高速で３０秒間う ず巻き運動させた。各ウエルに追加の１００μｌのＰＴＬ緩衝液を添加し、プレ ートを３０秒間激しくうず巻き運動させた。基準線を読み取るためにプレートリ ーダーで４０５ｎｍでの吸光度を直ちに読み取った。プレートをプレート振盪器 に戻し、室温で５時間緩慢な速度でうず巻き運動させ、吸光度の読み取りを１５ 〜２０分間隔で行った。吸光度の増大は凝集を示した。従って、有効な抑止剤化 合物は、抑止剤のない対照例試料と比べて、被検試料における吸光度の減少を生 じさせる。 好ましいβ−アミロイド調節剤についての静的播種検定法及び振盪プレート検 定法の代表的な結果を以下の表１に示す ^*＋＋＝強い凝集抑止剤。抑止剤の存在下での凝集速度は、対照例と 比較して少なくとも３０〜５０％まで低下した。 これらの結果は、広範な種類のＮ−末端変性基により変性されたβ−ＡＰがβ −アミロイドの凝集の調節にあたって有効であることを示す。例６ ：追加のβ−アミロイド凝集検定法 最も好ましくは、β−アミロイド調節剤化合物が天然β−ＡＰと接触したとき に天然β−ＡＰの凝集を調節（例えば、抑止又は促進）させる能力は、以下に説 明する凝集検定法のいずれか又は両方により検査される。凝集検定法に使用する ための天然β−ＡＰ（β−ＡＰ_1-40）は、ベーケム社（トーランス、ＣＡ）から 商業的に入手できる。 Ａ．核形成検定法 被検化合物が単量体β−ＡＰからのβ−ＡＰ繊維の形成の際の早期の成り行き を変化（例えば、抑止）させる能力を決定するために核形成検定法を使用する。 核形成重合の機構の特徴であるラグタイムが核形成の前に観察され、その後、ペ プチドは濁度の直線的な上昇で反映されるように急速に繊維を形成させる。β− ＡＰ単量体の重合前の時間遅れは、不溶性繊維の形成の程度と同様に、光散乱（ 濁度）によって定量化することができる。最大濁度が平坦行きになったときに重 合は平衡に達する。種々の濃度のβ−アミロイド調節剤化合物の存在下及び不存 在下での天然β−ＡＰの溶液の濁度は、４０５ｎｍでの見かけ吸光度（Ａ_405nm ）を経時的に測定することによって決定される。濁度の測定のための感度の閾値 は、１５〜２０μβ−ＡＰの範囲内にある。調節剤の不存在下での濁度と比較し て、調節剤の存在下での濁度の経時的な減少は、調節剤が単量体β−ＡＰからの β−ＡＰ繊維の形成を抑止させることを示す。この検定法は、重合を促進させる ために攪拌又は振盪を使用し、これによって検定の速度を上昇させることによっ て達成することができる。 核形成検定法を行うためには、まずＡβ_1-40ペプチドをＨＦＩＰ（１，１，１ ，３，３，３−ヘキサフルオル−２−プロパノール、アルドリッチ社、１０．５ ２２−８）に２ｍｇのペプチド／ｍｌの濃度で溶解し、室温で３０分間インキュ ベーションする。ＨＦＩＰにより可溶化されたペプチドを水浴音波処理器で最高 の設定で５分間音波処理し、次いでアルゴン気流中で蒸発乾固させる。ペプチド のフィルムを無水のジメチルホルムアミド（ＤＭＳＯ）に６．９ｍｇ／ｍｌの濃 度（２５×濃度）で再懸濁させ、上記のように５分間音波処理し、次いで０．２ μのナイロンシリンジフィルター（ＶＷＲ社、ｃａｔ．Ｎｏ．２８１９６ −０５０）により濾過する。被検化合物をＤＭＳＯに１００×濃度で溶解する。 ４容のＤＭＳＯ中の２５×Ａβ_1-40ペプチドを１容のＤＭＳＯ中の被検化合物と ガラスびんで一緒にし、混合して１：１のモル比のＡβペプチド対被検化合物と する。異なったモル比を得るために、被検化合物をＡβ_1-40と混合する前にＤＭ ＳＯで希釈して最終ＤＦＭＳＯ及びＡβ_1-40の濃度を一定に保持する。対照例試 料は被検化合物を含有しない。次いで、数μｌの混合物をコーニング・コスター ・ウルトラロウバインド９６ウエルプレート（コーニング・コスター社、ケンブ リッジ、ＭＡ、ｃａｔ．Ｎｏ．２５００）の底部に添加する。ウエルに９０μｌ の水を添加し、プレートを回転振盪機上で一定速度で３０秒間振盪させ、追加の １００μｌの２×ＰＴＬ緩衝液（２０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄、３００ｍＭのＮａＣ ｌ、ｐＨ７．４）をウエルに添加し、プレートを３０秒間再振盪させ、バイオー ラッドモデル４５０マイクロプレートリーダーを使用して４０５ｎｍでの見かけ 吸光度を測定することによって基準線（ｔ＝Ｏ）濁度の読み取りを行う。プレー トをプレート振盪機に戻し、５時間連続的に振盪させる。濁度の読み取りを１５ 分間隔で行う。 調節剤の不存在下でのβ−アミロイドの凝集は、天然β−ＡＰ溶液の濁度の上 昇（即ち、４０５ｎｍでの見かけ吸光度の経時的増大）を生じさせる。従って、 有効な調節剤化合物を含む溶液は、調節剤化合物のない対照例試料と比較して、 濁度の減少（即ち、対照例試料と比較して低い４０５ｎｍでの経時的な見かけ吸 光度）を示す。 Ｂ．播種拡大検定法 播種拡大検定法を使用して、重合体Ａβ繊維の“種”を添加した後のＡβ単量 体の溶液中に形成されるＡβ繊維の速度を測定することができる。先に沈着した アミロイドに単量体Ａβのさらなる沈着を化合物が防止させる能力は、蛍光を使 用するβ−シート形成の直接指示薬を使用して決定される。核形成検定法とは対 照的に、種の添加は直ちに核形成をもたらし、連続的な攪拌の必要もなく予め形 成されたフィブリルの連続した成長をもたらし、しかして重合が開始する前のラ グタイムの不存在となる。この検定法は静的重合条件を使用するので、核形成検 定法での陽性の化合物の活性をこの第二の検定法において異なった条件で且つア ミロイド構造の追加の試験により確認することができる。 播種拡大検定法においては、単量体Ａβ_1-40を“種”核（制御された静的条件 下で予め重合せしめられたＡβの１０モル％）の存在下にインキュベーションさ れる。次いで、溶液試料をチフラビンＴ（Ｔｈ−Ｔ）で希釈する。Ｔｈ−ＴとＡ βとの重合体に特異的な会合は、フィブリルの形成の程度の測定を可能にさせる 蛍光性錯体を生じる（レビンＨ．(1993)Protein Science 2:404-410）。特に、 Ｔｈ−Ｔと凝集したβ−ＡＰ（単量体でも又はゆるく会合したβ−ＡＰでもない ）との会合は、遊離の染料についての３８５ｎｍでの励起最大発光（ｅｘ）及び ４５５ｎｍでの活性化発光（ｅｍ）と比べて、新たに４５０ｎｍで（ｅｘ）及び ４８２ｎｍで（ｅｍ）をもたらす。重合体混合物の少量試料は、反復試料採取に よって反応混合物を監視させるのに十分なＴｈ−Ｔと混合すべきフィビリルを含 有する。過剰の単量体の存在下では直線的な成長曲線が観察される。チオフラビ ンＴに応答するβ−シートフィブリルの形成は、核形成検定法を使用して観察さ れる濁度の増加と近似している。 播種拡大検定法に使用するためのＡβ単量体の溶液は、適当量のＡβ_1-40ペプ チドを１／２５容量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、次いで水に より１／２容となし、１／２容の２×ＰＢＳ（１０×ＰＢＳ：ＮａＣｌ１３７ｍ Ｍ；ＫＣｌ２．７ｍＭ；Ｎａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ４．３ｍＭ；ＫＨ₂ＰＯ₄１．４ ｍＭ；ｐＨ７．２）により２００μＭの最終濃度にする。原料の種を調製するた めに、１ｍｌの上記のＡβ単量体調製物を３７℃でほぼ８日間インキュベーショ ンし、１８、２３、２６及び３０ゲージの針によりそれぞれ２５回、２５回、５ ０回及び１００回続けて剪断を加える。蛍光単位（ＦＵ）が安定な平坦行きとな るまで（ほぼ１００〜１５０×）３０ゲージの針を５０回ごと通した後に、剪断 処理した物質の２μｌの試料を蛍光測定のために採取する。被検化合物は、適当 量の被検化合物を１ｍＭ（１０×原料）の最終濃度まで１×ＰＢＳに溶解して調 製する。不溶であるならば、化合物を１／１０容のＤＭＳＯに溶解し、１×ＰＢ Ｓに１ｍまで希釈する。さらに、各被検候補を１００μＭ及び１０μＭの双方で 試験するために１／１０の希釈物を調製する。 播種拡大検定法を実施するためには、各試料を、５０μｌの２００μＭの単量 体、１２５ＦＵの剪断処理した種（種のバッチに応じて可変の量であって、通常 は３〜６μｌである）、１０μｌの１０×調節剤溶液により調整する。試料の容 量は、１×ＰＢＳにより１００μｌの最終容量に調整する。１：１及び１：１０ の単量体対調節剤のモル比に等しい各調節剤の二つの濃度、１００μＭ及び１０ μＭを典型的に試験する。対照例は、新たな単量体が種を含まなかったことを確 認するための播種しない反応並びに候補の調節剤と比較するための参照例として の調節剤の不存在下での播種された反応を含む。検定物は、蛍光測定のために２ μｌの試料を１時間ごとに採取しながら３７℃で６時間インキュベーションする 。蛍光を測定するために、Ａβの２μｌの試料を４００μｌのチオフラビン−Ｔ 溶液（５０ｍＭのりん酸カリウム、１０ｍＭのチオフラビン−Ｔ、ｐＨ７．５） に添加する。試料をうず巻き回転し、蛍光を０．５ｍｌのミクロ石英キュベット でＥＸ４５０ｎｍ及びＥＭ４８２ｎｍで読み取る（日立４５００蛍光光度計）。 β−アミロイド凝集は、チオフラビン−Ｔの高められた発光をもたらす。従っ て、有効な抑止性調節剤化合物を含む試料は、調節剤化合物を含まない対照例試 料と比べて、減少した発光を示す。例７ ：β−アミロイド調節剤化合物の抑止活性に対するＡβペプチドのアミノ酸 サブ領域の効果 β−アミロイド調節剤の抑止活性に対するＡβ_1-40の種々のサブ領域の効果を 決定するために、重複するＡβペプチドの１５量体を構成した。各１５量体につ いては、４種の異なったアミノ末端変性剤：コリル基、イミノビオチニル基、Ｎ −アセチルノイラミニル基（ＮＡＮＡ）及び５−（及び６−）−カルボキシフル オレセイニル基（ＦＩＣＯ）を試験した。調節剤を例６に記載の核形成及び播種 拡大検定法で評価した。 核形成検定法の結果を下記の表IIに要約する。検定法で使用したＡβ_1-40の濃 度は５０μＭであった。表IIにリストした“モル％”は、Ａβ_1-40に対する被検 化合物の％濃度を言う。従って、１００％は、Ａβ_1-40と被検化合物が等モルで あることを示す。１００％未満のモル％は、Ａβ_1-40が被検化合物に対してモル 過剰であったことを示す（例えば、１０％は、Ａβ_1-40が被検化合物に対して１ ０倍モル過剰であったことを示す）。核被検化合物についての核形成検定法の結 果を表IIに二通りで示す。“ラグタイムの増加（倍）”は、化合物が凝集の開始 を遅らせる能力の尺度であって、被検化合物なしの対照例において観察されたラ グタイムに対する被検化合物の存在下で観察されたラグタイムの比率を言う。従 って、１．０倍のラグタイムの増加はラグタイムに変化がないことを示すのに対 して、＞１．０の数はラグタイムの増加を示す。“平坦域の％抑止率”は、化合 物が凝集の全量を減少させる能力の尺度であって、被検化合物なしの対照例の％ として表した、被検化合物の存在下での最終濁度の減少を言う。従って、検定の 過程で凝集を破壊する抑止剤は、１００の％抑止率を有する。抑止活性を示すＮ −末端変性Ａβサブ領域を表IIでは太字で示す。 これらの結果は、Ａβ_1-40のある種のサブ領域が適当な変性基により変性され たときにＡβ_1-40の凝集を抑止するのに有効であることを示す。コリル基は、い くつかのサブ領域のために有効な変性基であった。コール酸自体を抑止活性につ いて試験したが、Ａβの凝集に作用を及ぼさなかった。Ａβ_6-20は、いくつかの 異なった変性基（コリル、ＮＡＮＡ、イミノビオチニル）で変性すると高レベル の抑止活性を示し、コリル−Ａβ_6-20（ＰＰＩ−２６４）が最も活性体であった 。従って、この調節剤化合物を例８に記載のさらなる分析のために選択した。例８ ：β−アミロイド調節剤化合物の抑止活性に対して十分な５個のアミノ酸サ ブ領域の同定 抑止活性にとって十分なコリル−Ａβ_6-20の最小サブ領域をさらに明確にする ために、コリル−Ａβ_6-20の一連のアミノ末端及びカルボキシ末端アミノ酸欠失 を構成した。全ての調節剤は、同じコリルアミノ末端変性を有した。さらに、ペ プチドシリーズはカルボキシ末端欠失を有するので、カルボキシ末端をアミドま でさらに変性した。調節剤は、例７に記載のように評価し、結果を以下の表III に要約するが、ここではデータは例７に記載のように表した。 これらの結果は、アミノ酸残基６が調節剤のアミノ末端から除去されると調節 剤の活性が保持される（即ち、コリル−Ａβ_7-20は活性を保持した。）が、ペプ チドがアミノ酸位置７からアミノ酸位置１２まで除去することによってさらに欠 失される（即ち、コリル−Ａβ_8-20からコリル−Ａβ_13-20まではＡβの凝集の 平坦域を抑止しなかった。）と活性が失われることを示す。しかし、アミノ酸位 置１３のさらなる欠失は、抑止活性が回復する化合物（即ち、コリル−Ａβ_{14-2 0} ）を生じさせた。さらに、アミノ酸位置１４の欠失（即ち、コリル−Ａβ_15-20 ）又は位置１４及び１５の欠失（即ち、コリル−Ａβ_16-20）は依然として抑止 活性を保持した。しかして、Ａβ_6-20のアミノ酸欠失は、適当に変性したときに 抑止活性に対して十分である最小サブ領域としてＡβ_16-20であるとを同定した 。これとは逆に、アミノ酸位置２０のカルボキシ末端の欠失は、ペプ チドがカルボキシ末端でさらに欠失されたので十分に回復しない活性の損失をも たらした。しかして、調節剤内で位置２０の保持は抑止活性にとって重要である かもしれない。例９ ：β−アミロイド調節剤化合物の抑止活性に対して十分な４個のアミノ酸サ ブ領域の同定 この例では、例８に記載の研究で同定された最も小さい有効な調節剤コリル− Ａβ_16-20（ＰＰＩ−３５０）をさらに分析した。調節剤の抑止活性に対して十 分な最も小さい領域を同定するために、さらにアミノ−及びカルボキシ−末端の 欠失並びにアミノ酸置換（Ｖａｌ₁₈→ＴＨｒ）をコリル−Ａβ_16-20について行 った。コール酸によりそのアミノ−末端を変性した５個のアラニン残基（Ａｌａ ）₅からなるペプチドを特定の対照例として使用した。調節剤を例７に記載のよ うに評価し、結果を以下の表IVに要約するが、ここでのデータは例７に記載のよ うに表す。 表IVに示すように、コリル−Ａβ_16-20（ＡＰＰ−３５０）及びコリル−Ａβ_{1 7-21} （ＰＰＩ−３６８）は共に抑止活性を示し、位置１７〜２０の４個のアミノ 酸最小サブ領域が抑止活性について十分であることを示した。位置２０の損失（ 例えば、ＰＰＩ−３６６及びＰＰＩ−３２１）は抑止活性の損失を生じ、位置２ ０の重要性を証明した。さらに、位置１８のバリンからトレオニンへの変異（Ｐ ＰＩ−３６９）は、活性の損失を生じ、位置１８の重要性を立証した。これとは 逆に、位置１９のフェニルアラニンからアラニンへの変異（コリル−Ａβ_16-20 Ｐｈｅ→Ａｌａ；ＰＰＩ−３７０）は検出できる抑止活性を依然保持している化 合物を生じた。従って、位置１９のフェニルアラニンは、好ましくはその他の疎 水性アミノ酸残基による置換に一層従いやすい。コリル−ペンタアラニン（ＰＰ Ｉ−３６５）は抑止活性を示さず、調節剤のＡβペプチド部分の特異 性を立証した。さらに、未変性のコリル−Ａβ_16-20（ＰＰＩ−３７７）は、抑 止活性を示さず、アミノ末端変性基の機能的な重要性を立証した。また、特定の 官能基が調節剤の活性に影響した。例えば、イミノビオチニル−Ａβ_16-20（Ｐ ＰＩ−３７４）はコリル−Ａβ_16-20と類似の抑止活性を示したが、Ｎ−アセチ ルノイラミン酸（ＮＡＳＮＡ）−変性Ａβ_16-20は有効な抑制調節剤ではなかっ た（表IVにはリストしなかった）。コリル−Ａβ_16-20（ＰＰＩ−３１９）のＣ −末端アミド誘導体は、凝集のラグタイムを遅らせるのに高い活性を保持し、調 節剤のカルボキシ末端が抑止活性の損失なしに誘導体化できることを示した。こ のアミド誘導体化化合物は全体の平坦域レベルの経時的凝集を抑止しなかったが 、化合物は３３モル％よりも高い濃度で試験しなかった。これよりも高い濃度の アミド誘導体化化合物は、コリル−Ａβ_16-20（ＡＰＰ−３５０）と類似して、 全体の平坦域レベルの凝集を抑止することが予測される。例１０ ：天然β−アミロイドペプチド凝集物の神経毒性に対するβ−アミロイド 調節剤の効果 β−アミロイド調節剤の存在下又は不存在下での天然β−アミロイドペプチド 凝集物の神経毒性をラット又はヒトニューロン誘導細胞株（それぞれＰＣ−１２ 又はＮＴ−２細胞）及び生存指示薬３−（４，４−ジメチルチアゾール−２−イ ル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を使用して細胞に 基づく検定法で試験する（例えば、類似の細胞に基づく生存度検定法の記述につ いて、シェアーマンＭ．Ｓ．他（1994）Pro．Natl．Acad．Sci．USA 91:1470-14 74；ハンセンＭ．Ｂ．他(1989)J．Immun．Methods 119:203-210）。ＰＣ−１２ はラットの褐色細胞腫細胞株であり、アメリカ基準細胞コレクション（ロックビ ル、ＭＤ）から入手できる（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７２１）。ＭＴＴ（シグマ・ ケミカルズ社から商業的に入手できる）は生存細胞では黄色から緑色に変換する 色素原物質であり、分光光度法により検出できるものである。 天然β−アミロイドペプチドの神経毒性を試験するためには、新鮮なＡβ単量 体及び経時したＡβ凝集物の原料溶液をまず調製した。１００％ＤＭＳＯ中のＡ β_1-40溶液を凍結乾燥粉末から調製し、直ちにＨ₂Ｏで最終容量の半分に希釈し 、次いで４％ＤＭＳＯ中２００μＭのペプチドの最終濃度が得られるように２× ＰＢＳで最終容量の半分に希釈した。このように調製し且つ直ちに細胞で試験す るペプチドを“新鮮な”Ａβ単量体という。“経時した”Ａβ凝集物を調製する ためには、ペプチド溶液を１．５ｍｌのエッペンドルフ試験管に入れ、３７℃で ８日間インキュベーションしてフィブリルを形成させた。このような“経時した ”Ａβペプチドは、細胞で直接試験でき又は−８０℃で凍結することができる。 新鮮な単量体及び経時した凝集物の神経毒性は、ＰＣ−１２及びＮＴ−２細胞を 使用して試験した。ＰＣ−１２細胞は、１０％のウマ血清、５％の胎生ウシ血清 、４ｍＭのグルタミン及び１％のゲンタマイシンを含有するＤｕｌｂｅｃｏの変 性Ｅａｇｌｅ培地で普通に培養した。ＮＴ−２細胞は、１０％の胎生牛血清、２ ｍＭのグルタミン及び１％のゲンタマイシンを補充したＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地（ ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ ｃａｔ．＃３１９８５）で普通に培養した。細胞は、処理 の３〜４時間前に９６−ウエル組織培養プレートで９０μｌの新鮮な培地中で１ ０〜１５，０００個（１個のウエル当たり）の細胞で培養した。次いで、新鮮な 又は経時したＡβ溶液（１０μｌ）を１：１０に希釈して直接組織培養培地に最 終濃度が１〜１０μＭのペプチドとなるように入れた。細胞をペプチドの存在下 に培地の変更なく３７℃で４８時間インキュベーションする。細胞をβ−ＡＰ調 製物に暴露する最後の３時間の間に、ＭＴＴを培地に１ｍｇ／ｍｌの最終濃度ま で添加し、インキュベーションを３７℃で継続した。ＭＴＴと共に２時間インキ ュベーションした後に、培地を取り出し、細胞を１００μｌのイソプロパノール ／０．４Ｎ ＨＣｌ中で攪拌しながら溶解させた。各ウエルに等容量のＰＢＳを 添加し、プレートをさらに１０分間攪拌した。ミクロタイタープレートリーダー を使用して５７０ｎｍでの各ウエルの吸光度を測定して生存細胞を定量化した。 経時した（５日間又は８日間）Ａβ_1-40凝集物のみ（新鮮なＡβ_1-40単量体で はない）の神経毒性を実験で確認した。その結果を第３図に示す。これは、新鮮 なＡβ_1-40単量体の量を増大させながらニューロン細胞をインキュベーションす ると細胞に対してそれほど毒性ではないのに対して、５日間又は８日間のＡβ_{1- 40} 凝集物の量を増大させて細胞をインキュベーションすると神経毒性の量が増大 したことを立証している。経時したＡβ_1-40凝集物の毒性のＥＤ５０はＰ Ｃ−１２細胞及びＮＴ−２細胞の双方に対して１〜２μＭであった。 Ａβ_1-40凝集物の神経毒性に対するβ−アミロイド調節剤化合物の効果を決定 するために、調節剤化合物コリル−Ａβ_6-20（ＰＰＩ−２６４）をＡβ_1-40単量 体と共に例６に記載のような標準核形成検定法条件及び特定の時間間隔後インキ ュベーションにより予備インキュベーションし、β−ＡＰ／調節剤溶液の一定量 を取り出し、１）その溶液の濁度を凝集の尺度として評価し、２）その溶液を培 養ニューロン細胞に４８時間適用し、その時点で細胞の生存度をＭＴＴを使用し て評価して溶液の神経毒性を決定した。濁度分析の結果を第４図のパネルＡ、Ｂ 及びＣに示す。パネルＡでは、Ａβ_1-40及びコリル−Ａβ_6-20が共に６４μＭで 存在した。パネルＢでは、Ａβ_1-40が３０μＭで存在し、コリル−Ａβ_6-20が６ ４μＭで存在した。パネルＣでは、Ａβ_1-40が１０μＭで存在し、コリル−Ａβ_6-20 が６４μＭで存在した。これらのデータは、等モル量のＡβ_6-20がＡβ_1-40 の凝集を抑止するのに有効であること（第４図のパネルＡを参照されたい。）及 びＡβ_1-40の濃度が減少するにつれて、Ａβ_1-40単量体の検出可能な凝集の量が それに応じて減少すること（第４図のパネルＢ及びＣとパネルＡを比較されたい 。）を示す。これに対応した神経毒性の分析結果を第４図のパネルＤ、Ｅ及びＦ に示す。これらの結果は、β−アミロイド調節剤化合物がＡβ_1-40単量体の凝集 を抑止するのみならず、Ａβ_1-40単独の場合と比べてＡβ_1-40／調節剤溶液とイ ンキュベーションしたときに細胞の％毒性が減少することによって例示される（ 例えば、第４図のパネルＤを参照されたい。）ように、Ａβ_1-40溶液の神経毒性 も抑止することを立証している。さらに、光散乱法により測定したときにＡβ_{1- 40} の凝集が検出できなかたときでも、調節剤化合物はＡβ_1-40溶液の神経毒性を 抑止した（第４図のパネルＥ及びＦを参照されたい）。従って、神経毒性Ａβ_{1- 40} 凝集物の形成は光散乱により検出できる不溶性凝集物の形成に先行し、調節剤 化合物はこれらの神経毒性凝集物の形成及び（又は）活性を抑止するのに有効で ある。類似の結果は、その他の調節剤化合物、例えば、イミノビオチニル−Ａβ_16-20 （ＰＰＩ−２６７）、コリル−Ａβ_16-20（ＰＰＩ−３５０）及びコリル− Ａβ_16-20−アミド（ＰＰＩ−３１９）について見られた。 さらに、β−アミロイド調節剤化合物は、予め形成されたＡβ_1-40凝集物の神 経毒性を低下させることが立証された。これらの実験では、Ａβ_1-40凝集物は単 量体を調節剤の不存在下にインキュベーションすることによって予備形成した。 次いで、調節剤化合物をこの予備形成されたＡβ_1-40凝集物と共に３７℃で２４ 時間インキュベーションし、その後β−ＡＰ／調節剤溶液を集め、その神経毒性 を上記のように評価した。予備形成されたＡβ_1-40凝集物を調節剤化合物と共に インキュベーションしてからその溶液をニューロン細胞に適用すると、Ａβ_1-40 溶液の神経毒性の低下があった。これらの結果は、調節剤がＡβフィブリル又は 可溶性凝集物に結合しその固有の神経毒性を調節できること、或いは調節剤がＡ β_1-40の単量体と凝集物形態との間の平衡を非神経毒性形態の方に有利のように 撹乱させ得ることを示唆している。例１１ ：さらに他のβ−アミロイド調節剤化合物の特徴付け この例では、Ａβのアミノ酸１７〜２０、ＬＶＦＦ（例９で同定された）に基 づいて設計したさらに他の調節剤化合物を製造し、β−アミロイドの凝集の抑止 に必要な構造的特色をさらに明らかにするために分析した。分析した化合物のタ イプは、Ａβ凝集コアドメインの３個のアミノ酸残基のみを有するもの、Ａβ凝 集コアドメインのアミノ酸残基が再配列されたか又はアミノ酸置換がされた化合 物、カルボキシ−末端変性基により変性した化合物並びに変性基が誘導体化され た化合物を包含した。この例で使用する略語は、−ｈ（遊離のアミノ末端）、− ｏｈ（遊離のカルボン酸末端）、−ｎｈ₂（アミド末端）、ＣＡ（コリル、コー ル酸のアシル部分）、ＮＡＮＡ（Ｎ−アセチルノイラミニル）、ＩＢ（イミノビ オチニル）、βＡ（β−アラニル）、ＤＡ（Ｄ−アラニル）、Ａｄｐ（アミノエ チルジベンゾフラニルプロパン酸）、Ａｉｃ（３−（Ｏ−アミノエチル−ｉｓｏ ）コリル、コール酸の誘導体）、ＩＹ（ヨードチロシル）、ｏ−ｍｅｔｈｙｌ（ カルボキシ末端メチルエステル）、Ｎ−ｍｅ（Ｎ−メチルペプチド結合）、Ｄｅ ｏｘｙＣＡ（デオキシコリル）及びＬｉｔｈｏＣＡ（リトコリル）である。 アミノ−末端か又はカルボキシ−末端にＡｉｃ変性基を有する調節剤化合物（ 例えば、ＰＰＩ−４０８及びＰＰＩ−４１８）は、既知の方法を使用して製造し た（例えば、ウエスＧ．他(1993)Tetrahedron Letters 34:817-822 ；ウエス Ｇ．他(1992)Tetrahedron Letters 33:195-198 を参照）。概説すれば、３−ｉ ｓｏ−Ｏ−（２−アミノエチル）コール酸（３β−（２−アミノエトキシ）−７ α，１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を、ＦＭＯＣ−ＯＳｕ（ＦＭＯＣ 基のヒドロキシスクシンイミドエステル、これは市場で入手できる）を使用して ＦＭＯＣ−保護誘導体に転化して試薬を得た。これを使用して化合物にコール酸 誘導体を導入した。コール酸部分をＮ−末端に導入するためには、ＦＭＯＣ−保 護した試薬を標準的態様で固相ペプチドのＮ−末端アミノ酸に結合させ、次いで 標準的なＦＭＯＣ−脱保護条件にし、次いで樹脂から解裂させ、次いでＨＰＬＣ 精製を行った。コール酸部分をＣ−末端に導入するためには、ＦＭＯＳ−保護し た試薬を標準的な態様で塩化２−クロルトリチルに結合させた。次いで、このア ミノアシル誘導体化した樹脂を標準的な態様で使用して完全変性ペプチドを合成 した。 調節剤は例６に記載の核形成及び播種拡大検定法で評価し、結果を表５に要約 する。ラグタイムの変化（ΔＬａｇ）は、対照例のラグタイムに対する被検化合 物の存在下で観察されたダグタイムの比率として表される。データはＡβ_1-40の 濃度に対して１００モル％の抑止剤の存在下での検定について報告するが、ＰＰ Ｉ−３１５、ＰＰＩ−３４８、ＰＰＩ−３８０、ＰＰＩ−４０７及びＰＰＩ−４ １８についてはデータは３３モル％の抑止剤の存在下でのものを報告する。核形 成法での抑止率（％Ｉ_nucl'n）は検定期間の終了時の対照例において観察された 最大の濁度の％低下としてリストする。拡大検定法での抑止率（％Ｉ_ext'n）は ２５モル％の抑止剤の存在下でのβ−構造のチオフラビン−Ｔ蛍光の％低下とし てリストする。少なくとも３０％の％Ｉ_nucl'nを有する化合物を太字で強調して ある。 ^*ND=測定せず ^**=33モル％ ^***=h-DDIII(N-Me-Val)DLL(Adp) ^****=h-DDII(N-Me-Leu)VEH(Adp) また、表Ｖに示すある種の化合物（ＰＰＩ−３１９、ＰＰＩ−３４９、ＰＰＩ −３５０、ＰＰＩ−３６８及びＰＰＩ−４２６）を神経毒性検定法、例えば、例 １０に記載の検定法で試験した。各化合物について、対照例に対する神経毒性の 発現の遅れは、Ａβの重合が核形成検定法で開始した時間の遅れと一致した。こ の神経毒性Ａβ種の形成の防止とＡβの重合の防止との間の相関関係は、試験し た全ての化合物について観察された。 表Ｖに示す結果は、有効な調節剤化合物が３個ほどに少ないＡβアミノ酸から なり得ることを立証している（例えば、Ａβ_18-20に相当するアミノ酸配列ＶＦ ＦからなるＰＰＩ−３９４及びＡβ_19-21に相当するアミノ酸配列ＦＦＡからな るＰＰＩ−３９５を参照されたい）。また、これらの結果は、カルボキシ−末端 に調節基を有する調節剤化合物がＡβのも凝集の抑止に有効であることを立証し ている（例えば、Ｃ末端でＡｉｃにより変性されたＰＰＩ−４０８を参照された い）。さらに、これらの結果は、調製基としてのコリル基が化合物の抑止活性を 保持しながらさらに改変できることを立証している（例えば、両方ともコリル誘 導体Ａｉｃを含むＰＰＩ−４０８及びＰＰＩ−４１８を参照されたい）。コール 酸のＡｉｃ誘導体の遊離のアミノ基は、例えば、診断剤を創製するために、^99m Ｔｃのためのキレート化基を導入できる位置を表している。さらに、化合物がＡ βの凝集を抑止する能力を保持しながらＡβ配列の位置１９又は２０のフェニル アラニンをヨードチロシルで置換できる能力（ＰＰＩ−３９６及びＰＰＩ−３９ ７を参照）は、例えば、診断剤を創製するために、化合物の抑止活性を失うこと なく、化合物を放射性沃素により標識化できることを示している。 最後に、Ａβから誘導のアミノ酸であるが、そのアミノ酸配列が再配列された か又は非−Ａβから誘導のアミノ酸による置換を有するものを使用して、抑止活 性を有する化合物を創製した。このような例の化合物は、Ａβ_17-21の配列（Ｌ ＶＦＦＡ）が再配列されたＰＰＩ−４２６（ＦＦＶＬＡ）、Ａβ_16-20の配列（ ＫＬＶＦＦ）が再配列されたＰＰＩ−３７２（ＦＫＦＶＬ）、Ａβ_17-21の配列 （ＬＶＦＦＡ）がそれぞれ位置１７、１８又は１９でアラニン残基により置換さ れたＰＰＩ−３８８、ＰＰＩ−３８９及びＰＰＩ−３９０（ＰＰＩ−３８８につ いてはＡＶＦＦＡ、ＰＰＩ−３８９についてはＬＡＦＦＡ、ＰＰＩ−３９０につ いてはＬＶＡＦＡ）を包含する。これらの化合物の抑止活性は、化合物における Ａβの一部に直接相当するアミノ酸配列の存在が抑止活性にとって必須ではない ことを示し、むしろ、フェニルアラニン、バリン、ロイシンのようなアミノ酸残 基を包含させる（その正確な順序に関係なく）ことによってこのコア領域の疎水 性を保持することがＡβの凝集の抑止にとって十分であり得ることを示唆してい る。例１２ ：未変性のβ−アミロイドペプチドからなるβ−アミロイド調節剤化合物 の特徴付け 未変性Ａβペプチドが天然β−ＡＰの凝集を調節する能力を検査するために、 Ａβ_1-40と比べてアミノ−及び（又は）カルボキシ−末端欠失を有し或いは内部 アミノ酸欠失を有する一連のＡβペプチド（即ち、非近接ペプチド）を製造した 。一つのペプチド（ＰＰＩ−２２０）は、そのアミノ−末端に追加の非−Ａβか ら誘導のアミノ酸残基を有した。これらのペプチドの全ては、アミノ−末端に遊 離のアミノ基を、カルボキシ−末端に遊離のカルボン酸を有した。これらの未変 性ペプチドを例７に記載のような検定法で評価した。結果を表VIに要約する。こ こでは、データは例７におけるように表した。少なくとも１．５倍のラグタイム の増加を示した化合物は太字で強調してある。 表VIに示したこれらの結果は、ペプチドが変性基により変性されていないとき でもＡβ配列の限られた部分が天然β−ＡＰの凝集に対して有意の抑止活性を有 し得ることを立証している。好ましい未変性のペプチドは、Ａβ_6-20（ＰＰＩ− ２２６）、Ａβ_16-30（ＰＰＩ−２２８）、Ａβ_1-20,26-40（ＰＰＩ−２４９） 及びＥＥＶＶＨＨＨＨＱＱ−Ａβ_16-40（ＰＰＩ−２２０）であって、そのアミ ノ酸配列は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、１４、１５及び１６で示す。 この開示の一部を構成するものとしてさらに追加の配列のリストを挙げるが、 その内容を下記の表に要約する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 ０８／５４８，９９８ (32)優先日 1995年10月27日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ (72)発明者 ベンジャミン，ハワード アメリカ合衆国 02173 マサチューセッ ツ，レクシントン，マーレット ロード 410 (72)発明者 ガーニック，マーク ビー. アメリカ合衆国 02146 マサチューセッ ツ，ブルックライン，ダドリー ストリー ト 140 (72)発明者 ゲフター，マルコム エル. アメリカ合衆国 01773 マサチューセッ ツ，リンカン，ベイカー ブリッジ ロー ド 46 (72)発明者 フンダル，アルビンド アメリカ合衆国 02135 マサチューセッ ツ，ブライトン，コモンウェルス アベニ ュー 1875，アパートメント ７ (72)発明者 カスマン，ローラ アメリカ合衆国 30605 ジョージア，ア シンズ，ハイランド パーク ドライブ 240 (72)発明者 ムッソー，ゲアリー アメリカ合衆国 01748 マサチューセッ ツ，ホプキントン，プロクター ストリー ト 38 (72)発明者 シグナー，イーサン アール. アメリカ合衆国 02140 マサチューセッ ツ，ケンブリッジ，フォレスト ストリー ト 20 (72)発明者 ウエイクフィールド，ジェイムズ アメリカ合衆国 02146 マサチューセッ ツ，ブルックライン，ビーコン ストリー ト 1862 アイ−ビー２ (72)発明者 リード，マイケル ジェイ. アメリカ合衆国 37830 テネシー，オー クリッジ，イースト モーニングサイド ドライブ 104 (72)発明者 モーリンオークス，スーザン アメリカ合衆国 02146 マサチューセッ ツ，ブルックライン，センター ストリー ト 69 (72)発明者 クーバセク，ウィリアム アメリカ合衆国 02178 マサチューセッ ツ，ベルモント，ウエイバリー 153 (72)発明者 ジン，ジョーゼフ アメリカ合衆国 01970 マサチューセッ ツ，セーレム，ローリング アベニュー 190 (72)発明者 リー，ジュンジャ アメリカ合衆国 01778 マサチューセッ ツ，ウエイランド，コチチュエイト ロー ド 261 (72)発明者 ケリー，マイケル アメリカ合衆国 02174 マサチューセッ ツ，アーリントン，フローレンス アベニ ュー 15

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． アミロイド形成蛋白又はそのペプチド断片を少なくとも１個の調節基に直 接又は間接的にカップリングさせてなるアミロイド調節剤化合物であって、これ が天然アミロイド形成蛋白又はペプチドと接触したときにモル過剰量の天然β− アミロイド蛋白又はペプチドの凝集を調節するようにカップリングさせたアミロ イド調節剤化合物。 ２． 天然アミロイド形成蛋白又はペプチドと接触したときに天然アミロイド蛋 白又はペプチドの凝集を抑止する請求項１に記載の化合物。 ３． アミロイド形成蛋白又はそのペプチド断片がトランスチレチン（ＴＴＲ） 、プリオン蛋白（ＰｒＰ）、小島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、心房ナ トリウム排泄因子（ＡＮＦ）、κ−軽鎖、λ−軽鎖、アミロイドＡ、プロカルシ トニン、シスタチンＣ、β２−ミクログロブリン、ＡｐｏＡ−Ｉ、ゲルソリン、 プロカルシトニン、カルシトニン、フィブリノーゲン及びリゾチームよりなる群 から選択される請求項１に記載の化合物。 ４． 下記の式からなるβ−アミロイドペプチド化合物： （ここで、Ｘａａは、β−アミロイド先駆体蛋白−７７０（ＡＰＰ−７７０）の 位置６６８に対応し又はＡＰＰ−７７０の位置６６８に対してカルボキシ末端側 の残基に対応するアミノ末端アミノ酸残基を有するβ−アミロイドペプチドであ り、Ａは、この化合物が天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β− アミロイドペプチドの凝集を抑止するように該化合物のアミロイドペプチドに直 接又は間接的に結合した変性基であり、ｎはこの化合物が天然β−アミロイドペ プチドと接触したときに天然βアミロイドペプチドの凝集を抑止するように選択 される整数である）。 ５． 少なくとも１個のＡ基が化合物のβ−アミロイドペプチドのアミノ末端に 直接又は間接的に結合している請求項４に記載の化合物。 ６． 少なくとも１個のＡ基が化合物のβ−アミロイドペプチドのカルボキシ末 端に直接又は間接的に結合している請求項４に記載の化合物。 ７． 少なくとも１個のＡ基が化合物のβ−アミロイドペプチドの少なくとも１ 個のアミノ酸残基の側鎖に直接又は間接的に結合している請求項４に記載の化合 物。 ８． Ａβ凝集コアドメイン（ＡＣＤ）を少なくとも１個の変性基に直接又は間 接的にカップリングしてなるβ−アミロイド調節剤化合物であって、これが天然 β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を 調節し又は神経毒性を抑止させるようにカップリングさせたβ−アミロイド調節 剤化合物。 ９． Ａβ凝集コアドメインが、長さが３〜１０個のアミノ酸の天然β−アミロ イドペプチドのサブ領域にならってモデル化される請求項８に記載の化合物。 １０． 下記の式からなるβ−アミロイド調節剤化合物： （ここで、Ｘａａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃はそれぞれアミノ酸構造であり、Ｘａ ａ₁、Ｘａａ₂及びＸａａ₃の少なくとも２個は独立してロイシン構造、フェニル アラニン構造及びバリン構造よりなる群から選択され、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａは化合物に直接又は間接的に結合した変性基であり、ｎは整数であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₂、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びｎは、この化合物が天然β−ア ミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し 又は神経毒性を抑止するように選択される）。 １１． Ｘａａ₁及びＸａａ₂それぞれフェニルアニリン構造である請求項１０ に記載の化合物。 １２． Ｘａａ₂及びＸａａ₃それぞれフェニルアニリン構造である請求項１０に 記載の化合物。 １３． 下記の式からなるβ−アミロイド調節剤化合物： （ここで、Ｘａａ₁及びＸａａ₃はアミノ酸構造であり、 Ｘａａ₂はバリン構造であり、 Ｘａａ₄はフェニルアラニン構造であり、 Ｙは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_a（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ａは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ｚは、存在しても存在しなくてもよく、式（Ｘａａ）_b（ここで、Ｘａａは任 意のアミノ酸構造であり、ｂは１〜１５の整数である。）を有するペプチド構造 であり、 Ａはこの化合物に直接又は間接的に結合した変性基であり、ｎは整数であり、 Ｘａａ₁、Ｘａａ₃、Ｙ、Ｚ、Ａ及びｎは、この化合物が天然β−アミロイドペ プチドと接触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し又は神経毒 性を抑止するように選択される）。 １４． Ｘａａ₁がロイシン構造であり、Ｘａａ₃がフェニルアラニン構造である 請求項１３に記載の化合物。 １５． 下記の式からなる化合物： A-Xaa₁-Xaa₂-Xaa₃-Xaa₄-Xaa₅-Xaa₆-Xaa₇-Xaa₈-B （ここで、Ｘａａ₁はヒスチジン構造であり、 Ｘａａ₂はグルタミン構造であり、 Ｘａａ₃はリシン構造であり、 Ｘａａ₄はロイシン構造であり、 Ｘａａ₅はバリン構造であり、 Ｘａａ₆フェニルアラニン構造であり、 Ｘａａ₇はフェニルアラニン構造であり、 Ｘａａ₈はアラニン構造であり、 Ａ及びＢはこの化合物のアミノ末端及びカルボキシ末端にそれぞれ直接又は間 接的に結合した変性基であり、 Ｘａａ₁−Ｘａａ₂−Ｘａａ₃、Ｘａａ₁−Ｘａａ₂又はＸａａ₁は存在しても存在 しなくてもよく、 Ｘａａ₈は存在しても存在しなくてもよく、 Ａ及びＢの少なくとも１個は存在する）。 １６． 変性基をペプチド構造に直接又は間接的に結合してなるβ−アミロイド 調節剤化合物であって、該ペプチド構造が よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアミノ酸構造からなる、該β− アミロイド調節剤化合物。 １７． 変性基が環式、複素環式又は多環式基からなる請求項１〜１６のいずれ かに記載の化合物。 １８． 変性基がｃｉｓ−デカリン基を含有する請求項１〜１６のいずれかに記 載の化合物。 １９． 変性基がコラノイル構造を含有する請求項１〜１６のいずれかに記載の 化合物。 ２０． 変性基がコリル基である請求項１〜１６のいずれかに記載の化合物。 ２１． 変性基がビオチン含有基、ジエチレントリアミンペンタアセチル基、（ −）−メントキシアセチル基、フルオレセイン含有基又はＮ−アセチルノイラミ ニル基からなる請求項１〜１６のいずれかに記載の化合物。 ２２． 化合物の薬物動力学性質を変化させるようにさらに変性される請求項１ 〜１６のいずれかに記載の化合物。 ２３． 化合物を検出可能な物質により標識化するようにさらに変性される請求 項１〜１６のいずれかに記載の化合物。 ２４． モル過剰量の天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−ア ミロイドペプチドの凝集を抑止するβ−アミロイド調節剤。 ２５． 天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプ チの凝集を抑止するように、βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１個のアミノ酸 欠失を有するアミノ酸配列からなるβ−アミロイドペプチド化合物。 ２６． βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１個の内部アミノ酸欠失を有するア ミノ酸配列からなる請求項２５に記載の化合物。 ２７． βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１個のＮ−末端アミノ酸欠失を有す るアミノ酸配列からなる請求項２５に記載の化合物。 ２８． βＡＰ_1-39になぞらえて少なくとも１個のＣ−末端アミノ酸欠失を有す るアミノ酸配列からなる請求項２５に記載の化合物。 ２９． βＡＰ_6-20（ＳＥＱ ＩＤＮＯ：１３）、βＡＰ_16-30（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、βＡＰ_1-20,26-40（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）及びＥＥＶＶ ＨＨＨＨＱＱ−βＡＰ_16-40（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）よりなる群から選択 される化合物。 ３０． 請求項１〜２９のいずれかに記載の化合物と製薬上許容できるキャリア ーを含む製薬組成物。 ３１． アミロイド形成性疾病の診断用薬剤の製造のための請求項１〜２９のい ずれかに記載の化合物の使用。 ３２． アミロイド形成性疾病の治療用薬剤の製造のための請求項１〜２９のい ずれかに記載の化合物の使用。 ３３． 天然β−アミロイドペプチドの凝集が抑止されるように天然β−アミロ イドを請求項４〜２９のいずれかに記載の化合物と接触させることからなる、天 然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止する方法。 ３４． 天然β−アミロイドペプチドの神経毒性が抑止されるように天然β−ア ミロイドペプチドを請求項４〜２９のいずれかに記載の化合物と接触させること からなる、天然β−アミロイドペプチドの神経毒性を抑止する方法。 ３５． 生物学的試料中の天然β−アミロイドペプチドの存在の有無を検出する にあたり、生物学的試料を請求項４〜２９のいずれかに記載の化合物と接触させ 、天然β−アミロイドペプチドに結合した化合物を検出することにより生物学的 試料中の天然β−アミロイドペプチドの存在の有無を検出することからなる、該 検出方法。 ３６． β−アミロイド調節剤化合物と生物学的試料をインビトロで接触させる 請求項３５に記載の方法。 ３７． β−アミロイド調節剤化合物を被検者に投与することによって生物学的 試料と接触させる請求項３５に記載の方法。 ３８． 化合物が放射性テクネチム又は放射性沃素により標識付けされる請求項 ３７に記載の方法。 ３９． 生物学的試料を請求項４〜２９のいずれかに記載の化合物と接触させ、 天然β−アミロイドペプチドに結合した化合物を検出してβ−アミロイド形成性 疾病の診断を容易にさせることからなる、β−アミロイド形成性疾病の診断を容 易にさせるために天然β−アミロイドペプチドを検出する方法。 ４０． β−アミロイド調節剤化合物と生物学的試料をインビトロで接触させる 請求項３９に記載の方法。 ４１． β−アミロイド調節剤化合物を被検者に投与することによって生物学的 試料と接触させる請求項３９に記載の方法。 ４２． 化合物が放射性テクネチム又は放射性沃素により標識付けされる請求項 ４１に記載の方法。 ４３． アルツハイマー病の診断を容易にさせる請求項３９に記載の方法。 ４４． 被験者がアミロイドーシスと関連した障害のために治療されるように、 その被験者に製薬上又は予防上有効な量の請求項１〜３のいずれかに記載の化合 物を投与することからなる、アミロイドーシスと関連した障害を治療する方法。 ４５． 障害が、家族性アミロイド多発性神経障害（ポルトガル、日本及びスエ ーデン型）、家族性アミロイド心筋症（デンマーク型）、独立性心臓アミロイド 、全身老人性アミロイドーシス、スクラピー、牛海綿状エンセファロパシー、ク ロイツフェルト−ヤコブ病、ゲルストマン−シュトラウスラー−シュアインカー 症候群、成人発症糖尿病、インスリノーマ、独立性心房アミロイドーシス、特発 性（原発性）アミロイドーシス、骨髄腫又はマクログロブリン血症と関連したア ミロイドーシス、ジョーグレン症候群と関連した原発性局所皮膚小結節性アミロ イドーシス、反応性（二期の）アミロイドーシス、蕁麻疹及び難聴を伴う家族性 地中海熱及び家族性アミロイドネフロパシー（マックル−ウエルズ症候群）、ア イスランド型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、長期血液透析と関連した アミロイドーシス、遺伝性非ニュロパシー全身アミロイドーシス（家族性アミロ イド多発性神経障害III）、フィンランド型の家族性アミロイドーシス、甲状腺 の髄質癌と関連したアミロイドーシス、フィブリノーゲンと関連した遺伝性腎臓 アミロイドーシス及びリゾチームと関連した遺伝性全身アミロイドーシスよりな る群から選択される請求項４４に記載の方法。 ４６． 被験者がβ−アミロイドーシスと関連した障害のために治療されるよう に、その被験者に製薬上又は予防上有効な量の請求項４〜２９のいずれかに記載 の化合物を投与することからなる、β−アミロイドーシスと関連した障害のため に被験者を治療する方法。 ４７． 障害がアルツハイマー病である請求項４６に記載の方法。 ４８． β−アミロイドーシスと関連した障害について被験者を治療するにあた り、本発明の化合物が被験者において合成され、その被験者がβ−アミロイドー シスと関連した障害のために治療されるように、その被験者に請求項２５〜２９ のいずれかに記載の本発明の化合物をコード化する組換え発現ベクターを投与す ることからなる、β−アミロイドーシスと関連した障害を治療する方法。 ４９． 障害がアルツハイマー病である請求項４８に記載の方法。 ５０． 化合物のペプチド成分の少なくとも１種のアミノ酸がＤ−アミノ酸であ る請求項１〜１６のいずれかに記載の化合物。 ５１． 化合物のペプチド成分が完全にＤ−アミノ酸からなる請求項１〜１６の いずれかに記載の化合物。 ５２． 少なくとも１個のＤ−アミノ酸を含むβ−アミロイドペプチドからなる β−アミロイド調節剤化合物であって、該化合物は天然β−アミロイドペプチド に結合するか又は天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロ イドペプチドの凝集を調節し若しくはその神経毒性を抑止するようなものである 、β−アミロイド調節剤化合物。 ５３． β−アミロイドペプチドからなるβ−アミロイド調節剤化合物であって 、該β−アミロイドペプチドは完全にＤ−アミノ酸からなり、しかも該化合物は 天然β−アミロイドペプチドに結合するか又は天然β−アミロイドペプチドと接 触したときに天然β−アミロイドペプチドの凝集を調節し若しくはその神経毒性 を抑止するようなものである、β−アミロイド調節剤化合物。 ５４． β−アミロイドペプチドのレトロ−インバーソ異性体からなるβ−アミ ロイド調節剤化合物であって、該化合物は天然β−アミロイドペプチドに結合す るか又は天然β−アミロイドペプチドと接触したときに天然β−アミロイドペプ チドの凝集を調節し若しくはその神経毒性を抑止するようなものである、β−ア ミロイド調節剤化合物。 ５５． β−アミロイドペプチドがアミノ末端で変性された請求項５２〜５４の いずれかに記載の化合物。 ５６． β−アミロイドペプチドが、環式、複素環式又は多環式基からなる変性 基によりアミノ末端で変性された請求項５５に記載の化合物。 ５７． 変性基がｃｉｓ−デカリン含有基、コリル基、ビオチン含有基、ジエチ レントリアミンペンタアセチル基、（−）−メントキシアセチル基、フルオレセ イン含有基及びＮ−アセチルノイラミニル基よりなる群から選択される請求項５ ６に記載の化合物。 ５８． β−アミロイドペプチドがカルボキシ末端で変性された請求項５２〜５ ４のいずれかに記載の化合物。 ５９． β−アミロイドペプチドがアミド基又はエチルアミド基によりカルボキ シ末端で変性された請求項５８に記載の化合物。 ６０． β−アミロイドペプチドがアミノ末端で変性され且つカルボキシ末端で 変性された請求項５２〜５４のいずれかに記載の化合物。 ６１． 化合物の薬物動力学性質を変化させるようにさらに変性される請求項５ ２〜５４のいずれかに記載の化合物。 ６２． 化合物を検出可能な物質により標識化するようにさらに変性される請求 項５２〜５４のいずれかに記載の化合物。 ６３． 請求項５２〜５４のいずれかに記載の化合物と製薬上許容できるキャリ アーを含む製薬組成物。 ６４． アミロイド形成性疾病の診断用薬剤の製造のための請求項５２〜５４の いずれかに記載の化合物の使用。 ６５． アミロイド形成性疾病の治療用薬剤の製造のための請求項５２〜５４の いずれかに記載の化合物の使用。 ６６． 天然β−アミロイドペプチドの凝集が抑止されるように天然β−アミロ イドを請求項５２〜５４のいずれかに記載の化合物と接触させることからなる、 天然β−アミロイドペプチドの凝集を抑止する方法。 ６７． 天然β−アミロイドペプチドの神経毒性が抑止されるように天然β−ア ミロイドペプチドを請求項５２〜５４のいずれかに記載の化合物と接触させるこ とからなる、天然β−アミロイドペプチドの神経毒性を抑止する方法。 ６８． 生物学的試料中の天然β−アミロイドペプチドの存在の有無を検出する にあたり、生物学的試料を請求項５２〜５４のいずれかに記載の化合物と接触さ せ、天然β−アミロイドペプチドに結合した化合物を検出することにより生物学 的試料中の天然β−アミロイドペプチドの存在の有無を検出することからなる、 該検出方法。 ６９． β−アミロイド調節剤化合物と生物学的試料をインビトロで接触させる 請求項６８に記載の方法。 ７０． β−アミロイド調節剤化合物を被検者に投与することによって生物学的 試料と接触させる請求項６８に記載の方法。 ７１． 化合物が放射性テクネチム又は放射性沃素により標識付けされる請求項 ６８に記載の方法。 ７２． 生物学的試料を請求項５２〜５４のいずれかに記載の化合物と接触させ 、天然β−アミロイドペプチドに結合した化合物を検出してβ−アミロイド形成 性疾病の診断を容易にさせることからなる、β−アミロイド形成性疾病の診断を 容易にさせるために天然β−アミロイドペプチドを検出する方法。 ７３． β−アミロイド調節剤化合物と生物学的試料をインビトロで接触させる 請求項７２に記載の方法。 ７４． β−アミロイド調節剤化合物を被検者に投与することによって生物学的 試料と接触させる請求項７２に記載の方法。 ７５． 化合物が放射性テクネチム又は放射性沃素により標識付けされる請求項 ７２に記載の方法。 ７６． アルツハイマー病の診断を容易にさせる請求項７２に記載の方法。 ７７． 被験者がアミロイドーシスと関連した障害のために治療されるように、 その被験者に製薬上又は予防上有効な量の請求項５２〜５４のいずれかに記載の 化合物を投与することからなる、アミロイドーシスと関連した障害のために被験 者を治療する方法。 ７８． 障害がアルツハイマー病である請求項７７に記載の方法。