JPH11504653A - 新規ドラスタチン誘導体、その製法及び使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）：Ｒ¹Ｒ²Ｎ-ＣＨＸ-ＣＯ-Ａ-Ｂ-Ｄ-Ｅ（Ｆ）_tＫの新規ドラスタチン誘導体（式中のＲ¹、Ｒ²、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｋ、Ｘ及びｔは明細書に記載された意味を有する）、及びその製法を記載する。新規物質は抗腫瘍作用を有する。

Description

【発明の詳細な説明】 新規ドラスタチン誘導体、その製法及び使用 海洋由来様ドラスタチン（dolastatin）−１０（ＵＳ ４８１６４４４）及び ドラスタチン−１５（ＥＰ−Ａ−３９８５５８）から単離されたペプチドが有効 な細胞成長阻止活性を示すことは公知である（Biochem.Pharmacology 40,no.8,1 859-64,1990；J.Natl.Cancer Inst.85,483-88,1993及びこの中で引用された文献 、参照）。生体内での、腫瘍システム中での実験における興味深い結果に基づき 、これら天然物質の更なる前臨床学的評価付けが、癌患者における臨床学的研究 を開始するために現在進められている。しかしながら、これらの天然生成物は水 性溶剤中への溶解性が乏しいこと、及び合成のために必要なブロックの製造のた めに費用がかかるという欠点を有する。 本発明は、腫瘍疾患の治療のために、ドラスタチン−１５に比較して改良され た治療効果を示す、新規ペプチド及びその誘導体を提供する。更に、本発明によ る化合物は以下に詳細に記載するように簡単に製造することができる。 本発明の化合物は式Ｉ： ［式中、 Ｒ¹はメチル、エチル又はイソプロピルであり； Ｒ²は水素、メチル又はエチルであり； Ｒ¹−Ｎ−Ｒ²は一緒にピロリジン環であってもよく； Ａはバリル、イソロイシル、ロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル、２−エチルグ リシル、ノルロイシル又はノルバリル基であり； ＢはＮ−メチル−バリル、−ロイシル、−イソロイシル、−ノルバリル、−ノル ロイシル、−２−ｔ−ブチルグリシル、−３−ｔ−ブチルアラニル又は−２−エ チルグリシル基であり； Ｄはプロリル、３,４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、４,４−ジフ ルオロプロリル、アゼチジン−２−カルボニル、ホモプロリル、３−メチルプロ リル、４−メチルプロリル、５−メチルプロリル又はチアゾリジン−４−カルボ ニル基であり； Ｅは３,４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、３−メチルプロリル、 ４−メチルプロリル、アゼチジン−２−カルボニル、又は４,４−ジフルオロプ ロリル基であり； Ｆはバリル、２−ｔ−ブチルグリシル、イソロイシル、ロイシル、２−シクロヘ キシルグリシル、ノルロイシル、ノルバリル、ネオペンチルグリシル、アラニル 、β−アラニル、又はアミノイソブチロイル基であり； Ｘはアルキル（有利にＣ_2-5）、シクロプロピル、又はシクロペンチルであり； ｔは０又は１であり；かつ Ｋはアルコキシ（有利にＣ_1-4）、ベンジルオキシ又は置換又は非置換アミノ部 分である］の新規ペプチド及び生理学的に認容性の酸との塩を包含する。本発明 は式Ｉの化合物の製法、該化合物を薬学的に認容性の担体とともに含有する医薬 組成物、及び哺乳動物中の癌を治療するためのその使用法をも提供する。 特にＫはＣ_1-4アルコキシ、ベンジルオキシ又は式Ｒ⁵−Ｎ−Ｒ⁶のアミノ部分 であるのがよく、ここでＲ⁵は水素、又はヒドロキシ、又はＣ_1-4アルコキシ、又 はベンジルオキシ（これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルス ルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、Ｃ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキ シ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂で あってよい、置換基２つまでで置換されていてよい）、又はフェニルオキシ（こ れは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−ア ルコキシ、ハロゲン、Ｃ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、Ｃ ＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい、置換基 ２つまでで置換されていてよい）であり； Ｒ⁶は水素、又はＣ_1-12−アルキル（これは、フッ素 原子１つ以上で置換されていてよい）、又は−Ｃ(ＣＨ₃)₂ＣＮ、又はＣ(ＣＨ₃)₂ ＣＣＨ、又はＣ(ＣＨ₃)₂Ｃ＝ＣＨ₂、又は−Ｃ(ＣＨ₃)₂ＣＨ₂ＯＨ、又は−Ｃ(Ｃ Ｈ₃)₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ、又は−(ＣＨ₂)_v−Ｃ_3-7−シクロアルキル（v＝０、１又 は２）（これはメチル基で置換されていてよい）、又はノルエフェドリル、又は ノルプソイド−エフェドリル、又はキノリル、又はピラジル、又はアダマンチル 、又は−ＣＨ₂−ベンズイミダゾリル、又は−ＣＨ₂−アダマンチル、又はα−メ チル−ベンジル、又はα−ジメチルベンジル、又は−(ＣＨ₂)_v−フェニル（v＝ ０、１、２、又は３；これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキル スルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキ ル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ 、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は −(ＣＨ₂)_m−ナフチル（m＝０又は１；これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、 Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよ いＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥ ｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置換されて いてよい）、又は−(ＣＨ₂)_w−ベンズヒドリル（w＝０、１、又は２；これは相 互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキ ルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アル キル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰ ｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又 はビフェニル（これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホ ニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シ アノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又は ＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はピリジ ル（これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_{1- 4} −アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒド ロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよ い置換基２つまでで置換されていてよい）、又はピコリル（これは相互に独立し て、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲ ン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、 ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置 換されていてよい）、又は−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピリジル（これは相互に独立して、 ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、 環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ 、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であ ってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾチアゾリル（これ は相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アル コキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ 、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であ ってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾイソチアゾリル（ これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4− アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロ キシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂ であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾピラゾリル（ これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-7−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4− アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロ キシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂ であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾオキサゾリル （これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4 −アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒド ロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯ ＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置換されていてよい ）、又は−(ＣＨ₂)_m−フルオレニル（m＝０又は１；これは相互に独立して、Ｃ Ｆ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、環 を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯ Ｍｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つま でで置換されていてよい）、又はピリミジル（これは相互に独立して、ＣＦ₃、 ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成 してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、 ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまでで置 換されていてよい）、又は−(ＣＨ₂)_m−インダニル（m＝０又は１；これは相互 に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ 、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(Ｃ Ｈ₃)₂、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい 置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_y−ＣＨ₃(y＝０ 、１、２、３、４、又は５)、又は−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_y−ＣＨ₂ＣＨ₃(y＝０、１、 ２、３、４、又は５)、又は−ＮＨ−Ｃ₆Ｈ₅（これは相互に独立して、ＣＦ₃、ニ トロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アル コキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ 、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換 基２つまでで置換されていてよい）、又は−ＮＣＨ₃−Ｃ₆Ｈ₅（これは相互に独 立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハ ロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ(ＣＨ₃)₂ 、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換 基２つまでで置換されていてよい）、又は−ＮＨ−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅（これは相互 に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ 、ハロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯ ＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つ までで置換されていてよい）、又は−ＮＣＨ₃−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅（これは相互に独 立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−アルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、ハ ロゲン、環を形成してもよいＣ_1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭ ｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ₂であってよい置換基２つまで で置換されていてよい）、又は置換基２個までで置換されていてよい五員環ヘテ ロアリール基、ここでこの置換基は相互に独立して、ＣＦ₃、ニトロ、Ｃ_1-4−ア ルキルスルホニル、Ｃ_1-4−アルコキシ、チオメチル 、チオエチル、ピコリル、アセチル、Ｃ_3-6−シクロアルキル、チオフェニル、 −ＣＨ₂−ＣＯＯＥｔ、ヘテロ環とビシクロ系を形成するＣ_3-4−アルキレン基、 フェニル（これは相互に独立して、ニトロ、ＣＦ₃、ＣＮ、ハロゲン、又はＣ_1-4 −アルキルであってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、ベンジル（こ れは相互に独立して、ニトロ、ＣＦ₃、ハロゲン、Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_1-4−ア ルキルスルホニル、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4−ジアルキルアミノであってよ い置換基２つまでで置換されていてよい）である、又はＣＨＲ⁷−五員環ヘテロ アリール（これは相互に独立してＣＦ₃、ニトロ、シアノ、ハロゲン、ＣＯＯＭ ｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、ＣＯＮＨ₂、Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_1-4−アルコ キシ、フェニル、ベンジル、ナフチル、又はＣ_1-4−アルキルスルホニルであっ てよい置換基２つまでで置換されていてよい［Ｒ⁷＝水素、直鎖又は分枝鎖Ｃ_1-5 −アルキル、ベンジル］）である。 −ＣＨＲ⁷−五員環ヘテロアリールは例えば次の基の１つによって示すことが できる： 五員環ヘテロアリールは次の基により表すこともできる： Ｒ⁵−Ｎ−Ｒ⁶は一緒になって次の群から選択された 構造を形成していてもよい： 置換基Ｒ¹、Ｒ²、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｘ、Ｆ及びｔが次の意味を有する式Ｉの化 合物が有利である： Ｒ¹はメチル又はエチルであり； Ｒ²は水素、メチル又はエチルであり； Ａはバリル、イソロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル基であり； ＢはＮ−メチル−バリル、−イソロイシル又は−２−ｔ−ブチルグリシル基であ り； Ｄはプロリル、３,４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、３−メチル プロリル又はチアゾリジン−４−カルボニル基であり； Ｅは３,４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、３−メチルプロリル、 又はアゼチジン−２−カルボニル基であり； ＦはＤ−バリル、２−ｔ−ブチルグリシル、Ｄ−イソロイシル、Ｄ−ロイシル、 又はアミノイソブチロイル基であり； Ｘは−ＣＨ(ＣＨ₃)₂、−Ｃ(ＣＨ₃)₃、又は−ＣＨ(ＣＨ₃)ＣＨ₂ＣＨ₃であり； ｔは０又は１である。 Ｋの有利な意味は次のものである： −ＯＣ(ＣＨ₃)₃、−ＮＨ₂、−ＮＨ−Ｃ_1-12−アルキル、−ＮＨ−Ｃ_3-8−シク ロアルキル、−ＮＨ−［３,３,０］−ビシクロオクチル、ノルエフェドリル、ノ ルプソイドエフェドリル、−ＮＨ−キノリル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−ＣＨ₂ −ベンズイミダゾリル、−ＮＨ−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ₂-アダマンチル 、−ＮＨ−ＣＨ(ＣＨ₃)−フェニル、−ＮＨ−Ｃ(ＣＨ₃)₂-フェニル、−Ｎ（Ｃ_{1- 4} −アルコキシ）Ｃ_1-4−アルキル、−Ｎ（Ｃ_1-4−アルコキシ）−ＣＨ₂−フェニ ル、−Ｎ（Ｃ_1-4−アルコキシ）−フェニル、−Ｎ(ＣＨ₃)ＯＢｚｌ、−ＮＨ−( ＣＨ₂)_v−フェニル（v＝０、１、２、又は３）、−ＮＨ−(ＣＨ₂)_m−ナフチル（ m＝０又は１）、−ＮＨ−(ＣＨ₂)_w−ベンズヒドリル（w＝０、１又は２）、−Ｎ Ｈ−ビフェニル、−ＮＨ−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂ −ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ベンゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリ ル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル、−ＮＨ−ベンゾオキサゾリル、−ＮＨ−(ＣＨ₂ )_m−フルオレニル（m＝０又は１）、−ＮＨ−ピリミジル、−ＮＨ−(ＣＨ₂)_m− インダニル（m＝０又は１）、−ＮＨ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_y−ＣＨ₃（y＝０、１、２ 、３、４、又は５）、−ＮＨ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_y−ＣＨ₂ＣＨ₃（y＝０、１、２、 ３、４、又は５）、−ＮＨ−（五員環ヘテロアリール）（第７〜９頁参照 ）−ＮＨ−ＣＨＲ⁷−五員環ヘテロアリール［Ｒ⁷＝水素、直鎖又は分枝鎖Ｃ_1-5 アルキル、ベンジル］（第６頁参照）；又はＫは次のものを表す、 より有利なＫは次のものを表す： −ＮＨＣＨ₃、−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ(ＣＨ₂)₂ＣＨ₃、−ＮＨ(ＣＨ₂)₃ＣＨ₃ 、−ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＣＨ₃、−ＮＨ(ＣＨ₂)₅ＣＨ₃、−ＮＨ(ＣＨ₂)₆ＣＨ₃、−Ｎ Ｈ(ＣＨ₂)₇ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ(ＣＨ₃)₂、−ＮＨＣＨ(ＣＨ₃)ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ ＣＨ(ＣＨ₃)ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ(ＣＨ₂ＣＨ₃)₂、−ＮＨ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ Ｈ₃)₂、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)₃、−ＮＨＣＨ(ＣＨ₂ＣＨ₃)ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣ Ｈ(ＣＨ₃)ＣＨ(ＣＨ₃)₂、−ＮＨＣＨ(ＣＨ₂ＣＨ₃)ＣＨ(ＣＨ₃)₂、−ＮＨＣＨ(Ｃ Ｈ₃)Ｃ(ＣＨ₃)₃、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＮＨ−シクロブチル、−ＮＨ−シ クロペンチル、−ＮＨ−シクロヘキシル、−ＮＨ−シクロヘプチル、−ＮＨ−シ クロオクチル、−ＮＨ−ビシクロ［３,３,０］オクチル、−Ｎ(ＣＨ₃)ＯＣＨ₃、 −Ｎ(ＣＨ₃)ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ(ＣＨ₃)ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ(ＣＨ₃)ＯＣ Ｈ(ＣＨ₃)₂、−Ｎ(ＣＨ₂ＣＨ₃)ＯＣＨ₃、−Ｎ(ＣＨ₂ＣＨ₃)ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ( ＣＨ(ＣＨ₃)₂)ＯＣＨ₃、−Ｎ(ＣＨ₃)ＯＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−Ｎ(ＯＣＨ₃)ＣＨ₂−Ｃ₆ Ｈ₅、−Ｎ(ＣＨ₃)ＯＣ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ(ＣＨ₂)₂Ｃ₆Ｈ₅、 −ＮＨ(ＣＨ₂)₃Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣＨ(ＣＨ₃)Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)₂Ｃ₆Ｈ₅、 −ＮＨＣ(ＣＨ₃)₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)(ＣＨ₂ＣＨ₃)₂、−ＮＨＣＨ(Ｃ Ｈ₃)ＣＨ(ＯＨ)Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣＨ₂−シクロヘキシル、−ＮＨ−ＣＨ₂ＣＦ₃、 −ＮＨＣＨ(ＣＨ₂Ｆ)₂、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ) −ＮＨ(ＣＨ₂ＣＨ₂ Ｏ)₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)₂ＣＨ(ＣＨ₃)₂、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)₂ＣＮ、−Ｎ ＨＣ(ＣＨ₃)₂ＣＣＨ、−ＮＨＣ(ＣＨ₃)₂Ｃ＝ＣＨ₂、ノルエフェドリル、ノルプ ソイドエフェドリル、−ＮＨ−キノリル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−アダマン チル（１）、−ＮＨ−アダマンチル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂−アダマンチル、− ＮＨ−ＣＨ₂−ナフチル、−ＮＨ−ベンズヒドリル、−ＮＨ−ビフェニル、−Ｎ Ｈ−ピリジル、−ＮＨ−ピコリル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ− ベンゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル 、−ＮＨ−ベンゾオキサゾリル、−ＮＨ−フルオレニル、−ＮＨ−ピリミジル、 −ＮＨ−チアゾリル（２）、−ＮＨ−イソオキサゾリル（３）、−ＮＨ−ＣＨ₂ −フラニル（２）、−ＮＨ−（３−メチル）イソオキサ ゾリル（５）、−ＮＨ−（３−メチル）イソチアゾリル（５）、−ＮＨ−(２-ト リフルオロメチル)−チアジアゾリル（５）、−ＯＣ(ＣＨ₃)₃、−ＮＨ−ＣＨ₂− （４−メチル）チアゾリル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂−チエニル（２）、−ＮＨ− ＣＨ₂−（５−メチル）チエニル（２）、−ＮＨ−（２−メチル）−チアジアゾ リル（５）、−ＮＨ−（２−シクロプロピル）チアジアゾリル（５）であるか、 又はＫは である。 これらの例は、本発明を明らかにするためのものであり、限定するものではな い。 式ＩのペプチドはＬ−アミノ酸からなるが、ＦはＤ−アミノ酸であってもよい 。 新規化合物は生理学的に認容性の酸との塩であってもよい：例えば塩酸、クエ ン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フ マール酸、リンゴ酸、コハク酸、マロン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アス パラギン酸、ピルビン酸、ムチン酸、安息香酸、グルクロン酸、蓚酸、アスコル ビン酸及びアセチルグリシンである。 新規化合物は、ペプチド化学において公知の方法で製造することができる。こ うして、このペプチドは連続的にアミノ酸から、又は好適な小さなペプチドフラ グメントを結合することにより、組み立てることができる。連続的な組立におい て、Ｃ−末端で出発し、ペプチド鎖はその都度１個のアミノ酸で段階的に延長す る。フラグメント結合においては、異なる長さのフラグメントを一緒に結合させ ることが可能であり、かつ言い換えるとこのフラグメントは、アミノ酸から連続 的に組み立てることにより、又はそれ自体をフラグメント結合することにより、 得ることができる。 連続的な組立においても、更にフラグメントでの結合においても、アミド結合 を形成することよりユニットを結合することが必要である。このために、酵素的 及び化学的方法が好適である。 アミド結合を形成するための化学的方法の詳細はミュラー(Mueller，Methoden der organischen Chenie Vol.XV/2,pp1-364,Thieme Verlag,Stuttgart,1974)； スチュワート、ヤング(Stewart,Young,Solid Phase Peptide Synthesis,pp31-34 ,71-82,Pierce Chemical Company,Rockford,1984);ボダンスキー、クラウスナー 、オンデッチ(Bodanszky,Klausner,Ondetti,Peptide Synthesis,pp85-128,John Wiley & Sons,New York,1976)及びその他のペプチド化学における標準的な文献 において、詳細に記載されている。特に有利であ るのは、アジド法、対称及び混合無水物法、その場で製造されるか又は予め形成 された活性エステル、アミノ酸のウレタン保護されたＮ−カルボキシ無水物の使 用、及び結合試薬／アクチベーターを使用するアミド結合の形成、特にジシクロ ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ） 、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１,２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤ Ｑ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロ クロリド（ＥＤＣＩ）、ｎ−プロパンホスホン酸無水物（ＰＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビ ス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−アミドホスホリル クロリド（ＢＯ Ｐ−Ｃｌ）、ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウム ヘキサフルオロホスフ ェート（ＰｙＢｒｏｐ）、ジフェニルホスホリル アジド（ＤＰＰＡ）、カスト ロ（Castro）の試薬（ＢＯＰ、ＰｙＢｏｐ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ,Ｎ, Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニウム塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ−アザベンゾトリアゾ リル−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニウム塩（ＨＡＴＵ）、ジエチルホ スホリル シアニド（ＤＥＰＣＮ）、２,５−ジフェニル−２,３−ジヒドロ−３ −オキソ−４−ヒドロキシチオフェン ジオキシド（Steglichの試薬；ＨＯＴＤ Ｏ）及び１,１′−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。結合試薬は単 独で、又は添加物、例えばＮ,Ｎ−ジメチル−４−アミ ノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、 Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、アザベンゾトリアゾール（Ｈ ＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）又は２−ヒドロキシピリ ジンと組み合わせて適用することができる。 この際、通常酵素的ペプチド合成においては保護基なしで済ますことも可能で あるのに対して、アミド結合の形成にかかわらない反応性基の可逆的な保護は、 化学合成において両方の成分に必要である。３個の常用の保護基を使用する方法 が化学的ペプチド合成にとって有利である：ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、 ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）及び９−フルオレニルメトキシカルボニル（ Ｆｍｏｃ）法。それぞれの場合において同一であるのは、連鎖延長ユニットのα −アミノ基上の保護基である。アミノ酸保護基の詳細はミュラー(Mueller，Meth oden der organischen Chemie Vol.XV/1,pp20-906,Thieme Verlag,Stuttgart,19 74)により、記載されている。ペプチド鎖を組み立てるために適用されるユニッ トは、溶液中で又は懸濁液中で、又はメリフィールド（Merrifield in J.Amer.C hem.Soc.85(1963)2149）により記載された方法と同様な方法で反応させることが できる。特に有利な方法は、ペプチドをＺ、Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ保護基法を用い て、連続的に又はフラグメント結合で組み立てる方 法である。 このメリフィールド法において、反応成分の１つは不溶性のポリマー支持体（ 以降、樹脂とも呼ぶ）に結合している。これは、典型的にペプチドがＢｏｃ又は Ｆｍｏｃ保護基法を用いてポリマー支持体上に連続的に組み立てられ、成長する ペプチドが不溶性樹脂粒子にＣ末端で共有結合していることを必要とする（図１ 及び図２参照）。この方法は濾過により試薬及び副生成物を除去することを可能 とし、かつこうして中間生成物の再結晶を必要としない。 保護されたアミノ酸は任意のポリマーに結合していてよく、このポリマーは使 用される溶剤中に不溶性であるだけでなく、濾過を容易にする安定な物理的な形 態を有していなければならない。このポリマーは、最初の保護されたアミノ酸が 共有結合によりこれに堅固に結合することのできる官能基を有していなければな らない。この目的に好適であるポリマーは非常に幅広い、例えば、セルロース、 ポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、スルホン化ポリスチレン、クロル メチル化スチレン／ジビニルベンゼンコポリマー（メリフィールド樹脂）、４− メチルベンジルヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ−樹脂）、フェニルアセトアミド メチル樹脂（Ｐａｍ−樹脂）、ｐ−ベンジルオキシ−ベンジル−アルコール−樹 脂、ベンズヒドリル−アミン−樹脂（ＢＨＡ−樹脂）、４−（ヒドロキシメチル ）−ベンゾイルオキシ−メチル−樹脂、ブライポール（Breipohl）等の樹脂（Te trahedron Letters 28（1987）565;BACHEMより提供）、４−（２,４−ジメトキ シフェニルアミノメチル）フェノキシ−樹脂（Novabiochemより提供）又はｏ− クロロトリチル−樹脂（Biohellasより提供）である。 溶液中でのペプチド合成に好適であるのは、反応条件下に不活性である全ての 溶剤である、特に水、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスル ホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１,４− ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（Ｎ ＭＰ）及び該溶剤の混合物である。ポリマー支持体上でのペプチド合成は、使用 されるアミノ酸誘導体が可溶性である全ての不活性有機溶剤中で実施することが できる。しかしながら、有利な溶剤は付加的に樹脂膨潤特性を有する溶剤、例え ばＤＭＦ、ＤＣＭ、ＮＭＰ、アセトニトリル及びＤＭＳＯ、及びこれらの溶剤の 混合物である。合成が完了した後、このペプチドをポリマー支持体から開裂分離 する。種々の樹脂型がどのような条件下に開裂分離可能であるかは、文献中に記 載されている。最も通常に使用される開裂条件は、酸触媒及びパラジウム触媒さ れた、特に液体無水フッ化水素中で、無水トリフルオロメタンスルホン酸中で、 希釈又は濃トリフルオロ酢酸中での開裂、モルホリン のような弱塩基の存在下でのＴＨＦ又はＴＨＦ−ＤＣＭ混合物中でのパラジウム 触媒開裂、又は酢酸−ジクロロメタントリフルオロエタノール混合物中での開裂 である。選択した保護基により、これらの保護基は開裂条件下に保持されるか又 は同様に開裂除去される。ある一定の誘導体化反応を実施しなければならないと き、ペプチドの部分的な脱保護も価値がある。Ｎ−末端でジアルキル化したペプ チドは、ａ）溶液中又はポリマー支持体上で、好適なＮ,Ｎ−ジアルキルアミノ 酸を結合させることにより、ｂ）ＤＭＦ／１％酢酸中でＮａＣＮＢＨ₃及び好適 なアルデヒド又はケトンとともに樹脂結合ペプチドを還元的にアルキル化するこ とにより、ｃ）アルデヒド又はケトン及びＰｄ／Ｃの存在下に、溶液中でペプチ ドを水素化することにより、製造することができる。 本発明において開示されている種々の非天然由来のアミノ酸は市販されている か、又は市販の材料から公知法を用いて合成することができる。アゼチジン−２ −カルボン酸、３−メチル−Ｌ−プロリン、５−メチル−Ｌ−プロリン、及びＢ ｏｃ−又はＦｍｏｃ−保護３,４−デヒドロプロリンは市販されている出発材料 である（ACROS,NOVABIOCHEM,BACHEM）。シス−及びトランス−４−フルオロプロ リンはパナシック等（N.Panasik，E.S.Eberhardt，A.S.Edison，D.R.Powell，R. T.Raines，Int.J.Peptide Protein Res．44,1994,262 -269）により記載された方法でヒドロキシプロリンから製造することができる。 本発明の化合物は、哺乳動物にこの化合物を投与することにより、固体腫瘍（ 例えば、肺の腫瘍、胸部、結腸、前立腺、膀胱、直腸、又は子宮の腫瘍）又は血 液学的癌（例えば、白血病、リンパ腫）を阻止又は他の方法で治療するために使 用することができる。 この新規化合物の特別な利点はドラスタチン−１５に比較して酵素分解に対し てより抵抗性である。 投与は薬学的、有利に腫瘍学的薬剤に関して常用の任意の手段で実施すること ができ、これは経口及び非経口、例えば皮下、静脈内、筋肉内及び腹腔内適用を 含む。 この化合物は単独で、又は所望の投与経路に好適な薬学的に認容性の担体と共 に、一般式Ｉの化合物を含有する医薬組成物の形で投与することもできる。その ような医薬組成物は組合せ製品であってもよい、即ち他の治療活性成分を含有し てもよい。 哺乳動物に適用すべき用量は活性成分の効果的腫瘍阻止量を含有しており、こ れは適用した個別の化合物の生物学的活性；投与法；患者の年齢、健康状態及び 体重；症状の性質及び程度；治療の頻度；他の治療の適用；及び所望の効果を含 む、通常のファクターに依存する。典型的な日用量は経口投与の場合体重１ｋｇ あたり約０.５〜５０ｍｇであり、非経口投与の場合 は約０.０５〜２０ｍｇである。 新規化合物は従来の固体又は液体投与剤形で投与することができる、例えば非 被覆又は（膜）被覆錠剤、カプセル、粉末、顆粒、座薬又は溶液。これらは常用 の方法で製造される。この目的のために、活性物質を従来の医薬助剤、例えば錠 剤結合剤、充填剤、保存剤、錠剤崩壊剤、流動調節剤、可塑剤、湿潤剤、分散剤 、乳化剤、溶剤、持続放出組成物、抗酸化剤及び／又は噴射ガス（H.Sucker et al.:Pharmazeutische Technologie，Thieme-Verlag,Stuttgart,1978参照）と一 緒に加工することができる。投与剤形は活性物質１〜９０重量％を通常含有する 。 次の実施例は、本発明を詳細に説明することを意図する。蛋白質を構成するア ミノ酸は実施例において公知の三文字記号を用いて省略した。他の使用した省略 形は、Ｍｅ₂Ｖａｌ＝Ｎ,Ｎ−ジメチルバリン、ＭｅＶａｌ＝Ｎ−メチルバリンで ある。 Ａ． 一般的方法 Ｉ． 請求項１で請求されたペプチドは前記のように、標準Ｚ−及びＢｏｃ− 法を用いて、標準的な溶液合成法によって合成するか、又はＢｏｃ及びＦｍｏｃ 保護基法を用いて標準固相合成法により合成する。 ａ） Ｆｍｏｃ保護基法に関する合成サイクル １． ＤＭＦ洗浄 １×１分 ２． ＤＭＦ中２０％ピペリジン １×４分 ３． ＤＭＦ中２０％ピペリジン １×１６分 ４． ＤＭＦ洗浄 ５×１分 ５． 前活性化保護アミノ酸の添加 （ＤＭＦ中、ＴＢＴＵ１当量及び ＤＩＰＥＡ５当量での活性化）； ペプチド結合 １×６１分 ６． ＤＭＦ洗浄 ３×１分 ７． 変換が不完全の場合、結合工程の反復 （５．に戻る） ８． ＤＭＦ中の１０％酢酸無水物 １×８分 ９． ＤＭＦ洗浄 ３×１分 １０． ２に戻る ＢＯＰ−Ｃｌ及びＰｙＢｒｏｐはＮ−メチルアミノ酸に続くアミノ酸の結合の ための試薬として使用された。反応時間は二重の結合を含めて相応して増大した 。溶液合成法においては縮合剤として、Ｂｏｃ−保護アミノ酸ＮＣＡ'ｓ（Ｎ− カルボキシ無水物）、Ｚ−保護アミノ酸ＮＣＡ'ｓ（Ｎ−カルボキシ無水物）の 使用も、塩化ピバロイルの使用もそれぞれ、このタイプの結合にとって最も有利 である。 ＩＩ． Ｎ末端の還元アルキル化 ＡＩａにおけるように製造したペプチド樹脂をＮ末端で脱保護し（ＡＩａ中の 工程２〜４）、次いで３倍モル過剰のアルデヒド又はケトンと、ＤＭＦ／１％酢 酸中で、ＮａＣＮＢＨ₃３当量を添加して、反応させ た。反応の完了後（カイザー(Kaiser)テスト・マイナス）、この樹脂を水、イソ プロパノール、ＤＭＦ及びジクロロメタンで数回洗浄した。 溶液中での還元アルキル化は、例えばＮａＣＮＢＨ₃又は水素−Ｐｄ／Ｃを用 いて、Ｎ−末端脱保護ペプチド、ペプチドフラグメント、又はアミノ酸と相応す るアルデヒド又はケトンとの反応により達せられる。 ＩＩＩ． Ｉｂ及びＩＩにおけるようにして得られたペプチド−樹脂の処理 ペプチド−樹脂を減圧下に乾燥し、次いでＴＦＡ／水混合物（９５：５）で１ .５時間処理した（Wade,Tregear,Howard Florey Fmoc Workshop Manual,Melbour ne 1985）。次いで、この樹脂を濾別し、ＴＦＡ及びＤＣＭで洗浄した。濾液及 び洗浄液を濃縮し、かつペプチドをジエチルエーテルを添加することにより沈殿 させた。氷浴中で冷却後、沈殿を濾別し、かつ３０％酢酸中に取り込み、凍結乾 燥した。 ＩＶ． ｏ−クロロトリチル−樹脂（Biohellasが提供）を使用するとき、酢酸／ トリフルオロエタノール／ジクロロメタン（１：１：３）混合物中のペプチド− 樹脂の懸濁液を、室温で１時間撹拌する。次いで、この樹脂を吸引濾別し、開裂 溶液で完全に洗浄する。合した濾液を真空中で濃縮し、エーテルで処理する。沈 殿した固体を、濾過又は遠心分離により分離し、ジエチルエーテルで洗浄し、か つ減圧下に乾燥する。 Ｖ． ペプチドの精製及び特徴付け 精製はゲルクロマトグラフィー（SEPHADEX G-10,G15/10% HOAc，SEPHADEX LH2 0/MeOH）及び／又は中圧クロマトグラフィー（固定相：HD-SIL C-8,20-45μ,100 Å；移動層：A=0.1%TFA/水、B=0.1%TFA/MeOHでの傾斜溶液）又は分取ＨＰＬＣ（ 固定相：Water Delta-Pak C-18,15μ,100Å；移動層：A=0.1%TFA/水、B=0.1%TFA /MeOHでの傾斜溶液）により実施した。 生じた生成物の純度は、分析ＨＰＬＣ（固定相：100 2.1mm VYDAC C-18,300Å ；移動層：アセトニトリル−水傾斜溶液、０.１％ＴＦＡで緩衝、４０℃）で決 定した。特徴付けは高速原子衝撃質量分析及びＮＭＲ分析で実施した。 Ｂ． 個別の方法 実施例１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１） Ｍｅ₂Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−アゼチジニル−２−カルボ キサミド Ｆｍｏｃ−ＲＩＮＫ−樹脂（置換０．４６ｍｍｏｌ／ｇ）０.５３ｇ、バッチ の量０.２５ｍｍｏｌに相当する、をＡＩａにおけると同様にして、それぞれ０. ４ｍｍｏｌの Ｆｍｏｃ−Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸、 Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、 Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＨ、 Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、 Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、 と反応させた。 Ｎ−メチルアミノ酸に続くアミノ酸は結合試薬としてＰｙＢｒｏｐで二重の結 合で、結合した。反復合成サイクルが終了した後、このペプチド−樹脂をＮ−末 端脱保護（ＡＩａ中の工程２〜４）処理し、及びＡＩＩにおけると同様に水性ホ ルムアルデヒド溶液と更に反応させ、次いで減圧下に乾燥した。生じた樹脂をＡ ＩＩＩにおける様に、ＴＦＡ開裂に晒した。粗生成物を分取中圧クロマトグラフ ィーにより精製し、所望の純粋なペプチド５ｍｇが得られた（１０分かけてＡ１ ０−４０％；２００分かけてＡ４０−９０％）。この化合物を高速原子衝撃質量 分析で特徴付けした（［Ｍ＋Ｈ］⁺＝５３７.３７）。 実施例２ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１） Ｍｅ₂Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−３,４−デヒドロプロリルベンジ ルアミド ａ）Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ６６.２５ｇ（２５０ｍｍｏｌ）を無水ジクロ ロメタン２５０ｍｌ中に溶かした。トリエチルアミン３６.４１ｍｌ（２６２.５ ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を−２５℃に冷却し、かつ塩化ピバロイル ３２.２７ｍｌ（２６２.５ｍｍｏｌ）を添加した。ジクロロメタン２５０ｍｌ中 のＨ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ ｘＨＣｌ ４１.８９ｇ（２５ ０ｍｍｏｌ）を０℃でトリエチルアミン３６.４１ｍｌ（２６２.５ｍｍｏｌ）で 中和し、２.５時間撹拌した後、反応混合物中に添加した。撹拌を更に−２５℃ で２時間継続し、かつ室温で一夜放置した。この反応混合物をジクロロメタンで 希釈し、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×） 及び飽和ＮａＣｌ溶液で、完全に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し 、かつ蒸発乾固した。残分（９１.２４ｇ）を石油エーテルと共に一夜撹拌し、 かつ濾過した。生成物６２.３ｇが得られた。 ｂ）Ｈ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ４８.９ｇ（１３０ｍｍｏｌ）をメタノール ４９０ｍｌ中に溶かした。濃塩酸１０.９ｍｌ（１３０ｍｍｏｌ）及び１０％パ ラジウム／木炭２.４３ｇを添加した後、反応混合物を水素化した。濾過及び蒸 発乾固により、生成物３６.４３ｇが得られた。 ｃ）Ｚ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ Ｈ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ１８.１ｇ（６５ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｖａｌ− Ｎ−カルボン酸無水物２１.６ｇ（７８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルア ミン２２.８（１３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１１０ｍｌ中で、４０℃で２日間撹拌 した。ＤＭＦを蒸発させた後、ジクロロメタンを添加し、かつ有機相を飽和Ｎａ ＨＣＯ₃水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸 （３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で、完全に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上 で乾燥し、かつ蒸発乾固した。生成物（２９.３ｇ）が粘稠油状物質として得ら れた。 ｄ）Ｈ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ Ｚ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ２９.３ｇ（６１.６ｍｍｏｌ）をメ タノール２３０ｍｌ中に溶かした。１０％パラジウム／木炭１.１５ｇを添加し た後、反応混合物を水素化した。濾過及び蒸発乾固により、生成物２１.９６ｇ が得られた。 ｅ）Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ Ｚ−Ｖａｌ−ＯＨ１５.２９ｇ（６１ｍｍｏｌ）及びＨ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ −Ｐｒｏ−ＯＭｅ２１.９６ｇ（６１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６１０ｍｌ中 に溶かし、０℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン８.１６ｍｌ（７３.２ｍｍｏ ｌ）、ＨＯＢｔ２.７７ｇ（２０.３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ １１.７４ｇ（６１ ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を室温で一夜撹拌し、ジクロロメタンで希釈し 、かつ飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及 び飽和ＮａＣｌ溶液で、完全に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、 かつ蒸発乾固することにより、生成物３１.９６ｇが得られた。 ｆ）Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｏｍｅ３１.９６ｇ（５７ｍｍｏ ｌ）をメタノール２５０ｍｌ中に溶かし、かつ１Ｍ ＬｉＯＨ水溶液１０２.６ｍ ｌ（１０２.６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４時間撹拌した後、水を添加し 、減圧下にメタノールを蒸発させた。この水相を酢酸エチルで３回抽出し、４℃ でｐＨ２に調節し、かつ酢酸エチルで３回抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナ トリウム上で乾燥させ、かつ溶剤を減圧下に蒸発させると、白色固体３０.６ｇ が得られた。 ｇ）Ｍｅ₂Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ Ｎ，Ｎ−ジメチル化テトラペプチド酸は、Ｚ−保護テトラペプチド酸から、Ｚ 保護基の水素化及び引き続く水素化混合物へのホルムアルデヒド水溶液の添加に より製造され、所望の生成物がほとんど定量的に得られた。 ｈ）Ｍｅ₂Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−３,４−デヒドロプロリンメチ ルエステル Ｍｅ₂Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ３.３８ｇ（７.２７ｍｍｏ ｌ）及び３,４−デヒドロプロリンメチルエステルヒドロクロリド０.９２５ｇ（ ７.２７ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン７５ｍｌ中に溶かした。Ｎ−メチルモ ルホリン０.９７５ｍｌ（８.７２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ０.３３２ｇ（２.４ ３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ １.４ｇ（７.２７ｍｍｏｌ）を４℃で添加した。室 温で一夜撹拌した後、ジクロロメタンを添加し、かつ有機相を飽和炭酸水素ナト リウム溶液で３回、水で１回洗浄した。有機相を５％クエン酸水溶液で抽出した 。酸性の水相のｐＨを１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ８とし、ジクロロメタンで４回抽出 した。硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ減圧下に蒸発させると、ペンタペプチド メチルエステル２.８２ｇが得られた。 ｋ）Ｍｅ₂Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−３,４−デヒドロプロリンベン ジルアミド メタノール２０ｍｌ中のペンタペプチドメチルエステルを含有するデヒドロプ ロリン２.０ｇを室温で１Ｎ ＬｉＯＨ溶液４.６ｍｌで処理した。この反応が完 結した後（ｔｌｃコントロール）、水を添加し、メタノールを蒸発させ、かつこ の化合物を水から凍結乾燥した。得られた白色粉末をジクロロメタン３６ｍｌ中 に溶かし、ベンジルアミン０.３８８ｍｌ（３.５５ｍｍｏｌ）を添加した。Ｎ− メチルモルホリン０.４７６ｍｌ（４.２６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ０.１６３ｇ（ １.１９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ ０.６８４ｇ（３.５５ｍｍｏｌ）を４℃で添加 した後、この反応混合物を室温で一夜撹拌した。ジクロロメタンを添加し、かつ 有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回、水で１回洗浄した。有機相を５％ クエン酸水溶液で２回抽出 した。酸性の水相を５Ｎ ＮａＯＨでｐＨ９とし、ジクロロメタンで４回抽出し た。硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ減圧下に溶剤を蒸発させると、粗ペンタペ プチドベンジルアミド６００ｍｇが得られた。この粗ペプチドの３００ｍｇを中 圧液体クロマトグラフィーにより（５分間０-１０％、１０分間１０-２５％、４ ５０分間２５-９０％）精製することにより、分析上純粋な生成物９２ｍｇが得 られた。更に、この化合物を高速原子衝撃質量分析により特徴付けした（［Ｍ＋ Ｈ］⁺＝６３９.４）。 次の化合物を製造した。これは実施例１及び２と同様にして製造することがで きた。 合成した新規化合物のＭＳ−特徴付けに関する例を次の表に記載した。 例 高速原子衝撃ＭＳ分折 ［Ｎｏ］ ［分子量（測定）］ ６１ ６２７ ６４ ５４６ ８８ ５５２ ８９ ６５５ 包括的に記号Ｘａａは次の意味を有する： 本発明の化合物は従来の方法により抗癌活性を効力検定することができ、例と してその方法を以下に記載する。 Ａ．試験管内法 細胞毒性を付着細胞列に関する標準法、たとえばマイクロ培養テトラゾリウム アッセイ（ＭＴＴ）を用いて測定した。このアッセイの詳細は公開されている（ Alley,MC et al，Cancer Research 48:589-601,1988）。指数関数的に成長する 腫瘍細胞の培養、例えばＨＴ−２９結腸癌又はＬＸ−１肺腫瘍をマイクロタイタ ープレート培養を作るために使用した。細胞を９６穴プレート中の１穴あたり細 胞５０００〜２００００個を播種し（培地１５０μｌ中）、かつ３７℃で一夜培 養した。試験化合物を添加し、１０倍希釈で１０^-4〜１０^-10Ｍで変化させる。 次いで、細胞を４８時間インキュベートする。次いで、各穴中の成長可能な細胞 の数を決定するために、ＭＴＴ色素を添加する（食塩水中の３−（４,５−ジメ チルチアゾール−２−イル）−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド溶液 ３ｍｇ／ｍｌの５０μｌ）。この混合物を３７℃で５時間インキュベートし、次 いで２５％ＳＤＳ、ｐＨ２ ５０μｌを各穴中に添加する。一夜インキュベートした後、５５０ｎｍでの各穴 の吸光度をＥＬＩＳＡ読みとり装置を用いて読みとる。複製した穴からのデータ の平均+/- ＳＤに関する値を、式Ｔ／Ｃ％（処理した成長細胞／コントロール成 長細胞(％)）を用いて、計算した。 処理細胞のＯＤ／コントロール細胞のＯＤ ×１００＝Ｔ／Ｃ％ 成長抑制５０％を示すＴ／Ｃを与える、試験化合物の濃度をＩＣ₅₀値として示 した。 例の化合物 ＩＣ₅₀[Ｍ] １ ６×１０^-6 ２ １×１０^-9 ６１ ２×１０^-8 ６４ ２×１０^-8 ８８ ４×１０^-8 ８９ ６×１０^-8 Ｂ．生体内法 更に、本発明の化合物を臨床上の有用性を示す生体内活性に関して、前臨床ア ッセイにおいて試験した。そのようなアッセイは、この分野においては十分に公 知である、腫瘍組織、有利にヒト由来の腫瘍組織が移 植された（異種移植）ヌードマウスで実施した。試験化合物は、異種移植を受け たマウスへの投与による、その抗腫瘍効果に関して評価された。 更に詳細には、無胸腺ヌードマウス中で成長したヒト乳房腫瘍（ＭＸ−１）を 、約５０ｍｇの大きさの腫瘍片を用いて、新しい受容マウスに移植した。移植日 を０日として示した。６〜１０日後に、各投与量ごとに５〜１０匹のマウスの群 で、静脈内注射で投与することにより、試験化合物でマウスを処理した。１日お きに３週間の間、１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重で投与した。腫瘍の直径及び体重を 週に２回測定した。腫瘍容積をバーニアー・キャリパースで測定した直径及び式 ： （長さ×幅²）／２＝腫瘍容積、ｍｍ³ を用いて計算した。 平均腫瘍容積を各処理群に関して計算し、未処理コントロール腫瘍に比較して 、各群に関してＴ／Ｃ価を決定した。 新規化合物は良好な腫瘍抑制特性を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＵ，ＢＧ ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＨＵ，ＩＬ，ＪＰ，ＫＲ， ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｔ Ｒ，ＵＡ，ＵＳ (72)発明者 シンシア エー ロマーダール アメリカ合衆国 01778 マサチューセッ ツ ウェイランド コチトゥエイト ロー ド 260

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式Ｉ ［式中、 Ｒ¹はメチル、エチル又はイソプロピルであり； Ｒ²は水素、メチル又はエチルであり； Ｒ¹−Ｎ−Ｒ²は一緒にピロリジン環を形成してもよく； Ａはバリル、イソロイシル、ロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル、２−エチル グリシル、ノルロイシル又はノルバリル基であり； ＢはＮ−メチル−バリル、−ロイシル、−イソロイシル、−ノルバリル、−ノ ルロイシル、−２−ｔ−ブチルグリシル、−３−ｔ−ブチルアラニル又は−２− エチルグリシル基であり； Ｄはプロリル、３,４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、４,４−ジ フルオロプロリル、アゼチジン−２−カルボニル、ホモプロリル、３−メチルプ ロリル、４−メチルプロリル、５−メチルプロリル又はチアゾリジン−４−カル ボニル基であり； Ｅは３,４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、３−メチルプロリル 、４−メチルプロリル、 アゼチジン−２−カルボニル、又は４,４−ジフルオロプロリル基であり； Ｆはバリル、２−ｔ−ブチルグリシル、イソロイシル、ロイシル、２−シクロ ヘキシルグリシル、ノルロイシル、ノルバリル、ネオペンチルグリシル、アラニ ル、β−アラニル、又はアミノイソブチロイル基であり； Ｘはアルキル（有利にＣ_2-5）、シクロプロピル、又はシクロペンチルであり ； ｔは０又は１であり；かつ Ｋはアルコキシ（有利にＣ_1-4）、ベンジルオキシ又は置換又は非置換アミノ 部分である］の新規ペプチド及び生理学的に認容性の酸との塩。 ２．医学において、特に腫瘍疾患の治療のために使用するための式Ｉの化合物又 はその塩。 ３．薬学的に認容性の担体及び治療上有効な量の請求項１記載の化合物からなる 医薬組成物。 ４．腫瘍を患う哺乳動物に、請求項１に記載した式Ｉの化合物を腫瘍抑制量で投 与することよりなる、哺乳動物の腫瘍の治療法。 ５.ペプチド化学で公知の方法で製造することを特徴とする、請求項１記載の式 Ｉの化合物の製法。