SK282466B6 - Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie - Google Patents

Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK282466B6
SK282466B6 SK1653-97A SK165397A SK282466B6 SK 282466 B6 SK282466 B6 SK 282466B6 SK 165397 A SK165397 A SK 165397A SK 282466 B6 SK282466 B6 SK 282466B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
methyl
residues
xab
tert
xaa
Prior art date
Application number
SK1653-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK165397A3 (en
Inventor
Andreas Haupt
Franz Emling
Cynthia A. Romerdahl
Original Assignee
Basf Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Basf Aktiengesellschaft filed Critical Basf Aktiengesellschaft
Publication of SK165397A3 publication Critical patent/SK165397A3/sk
Publication of SK282466B6 publication Critical patent/SK282466B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

Peptidy všeobecného vzorca (I), R1R2N - CHX - CO - A - B - D - E - (F)t-K (I), kde znamená R1 metyl, etyl alebo izopropyl, R2 vodík, metyl alebo etyl, R1-N-R2 spolu pyrolidínový kruh, A zvyšky Valyl, Ile, Leu, 2-terc-butylglycyl, 2-etylglycyl, norleucyl alebo norvalyl, B zvyšky N-metylvalyl, N-metylleucyl, N-metylizoleucyl, N-metylnorvalyl, N-metylnorleucyl, N-metyl-2-terc-butylglycyl, N-metyl-3-terc-butylalanyl alebo N-metyl-2-etylglycyl, D zvyšky, 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl, 4,4-difluórprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3-metylprolyl, 4-metylprolyl alebo 5-metylprolyl, E zvyšky Pro, homoprolyl, hydroxyprolyl alebo tiazolidín-4-karbonyl, F zvyšky Val, 2-terc-butylglycyl, Ile, Leu, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, Ala, beta-Ala alebo aminoizobutyroyl, X alkyl, cyklopropyl alebo cyklopentyl, t 0 alebo 1, K alkoxyskupinu, benzyloxyskupinu substituovanú alebo nesubstituovanú aminoskupinu, alebo ich soli s fyziologicky vhodnými kyselinami, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie v medicíne, zvlášť na ošetrovanie onkologických ochorení a nádorov cicavcov.ŕ

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka peptidov, farmaceutického prostriedku, ktorý ich obsahuje a ich použitia v medicíne, zvlášť na ošetrovanie onkologických ochorení a nádorov cicavcov.
Doterajší stav techniky
Je známe, že peptidy izolované z morských zdrojov ako Dolastatín-10 (americký patentový spis číslo 4 816 444) a Dolastatín-15 (európsky patentový spis číslo EP-A-398558) majú veľkú aktivitu ako inhibitory rastu buniek (Biochem Pharmacology 40, č. 8, str. 1859 až 1864, 1990; J.Natl.Cancer Inst. 85, str. 483 až 488, 1993 a tam uvádzané odkazy na literatúru). Na základe zaujímavých výsledkov pri pokusoch s nádorovými systémami in vivo, sa uskutočňujú v súčasnosti ďalšie preklinické hodnotenia týchto prírodných produktov na iniciáciu klinických štúdii pre chorých na rakovinu.
Prírodné produkty majú však ten nedostatok, že sú zle rozpustné vo vodných rozpúšťadlách a investičné náklady na ich syntézu sú vysoké.
Vynález sa týka nových peptidov a ich derivátov, ktoré predstavujú zlepšený terapeutický potenciál na ošetrovanie neoplastových ochorení v porovnaní s Dolastatínom-15. Okrem toho je možné nové peptidy podľa vynálezu ľahko syntetizovať spôsobom ďalej podrobne opísaným.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu sú peptidy všeobecného vzorca (I) R^N-CHX - CO-A - B - D - E - (F)t-K, kde znamená
R1 metyl, etyl alebo izopropyl,
R2 vodík, metyl alebo etyl,
R'-N-R2 spolu pyroilidínový kruh,
A zvyšky valyl, izoleucyl, leucyl, 2-terc-butylglycyl, 2-etylglycyl, norleucyl alebo norvalyl,
B zvyšky N-metylvalyl, N-metylleucyl, N-metylizoleucyl, N-metylnorvalyl,N-metylnorleucyl, N-metyl-2-terc-butylglycyl, N-metyl-3-terc-butylalanyl alebo N-metyl-2-etylglycyl,
D zvyšky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl, 4,4-difluórprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3-metylprolyl, 4-metylprolyl alebo 5-metylprolyl,
E zvyšky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl alebo tiazolidín-4-karbonyl,
F zvyšky valyl, 2-terc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, a -lanyl, β-alanyl alebo aminoizobutyroyl,
X alkyl výhodne s 2 až 5 atómami uhlíka, cyklopropyl alebo cyklopentyl, alebo 1 a
K alkoxyskupinu výhodne s 1 až 4 atómami uhlíka, benzyloxyskupinu alebo nesubstituovanú aminoskupinu, -NH-Cui-alkyl, -NH-C(CH3)2CN, -NH-C(CH3)2CCH, -NH-C(CH3)2C=CH2, -NH-C(CH3)2CH2CH2OH, -NH-C(CH3)2CH2OH, -NH-C3.8-cykloalkyl, -NH-[3,3,0]-bicyklooktyl, norefedryl, D norpseudoefedryl, -NH-chinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-CH2-benzimidazolyl, -NH-adamantyl, -NH-CH2-adamantyl, -NH-CH(CH3)-fenyl, -NH-C(CH3)2-fenyl, -N(CM-alkoxy-CM-alkyl, -N(CM-alkoxy)-CH2-fenyl, -N(C1_4-alkoxy)fenyl, -N(CH3)OBzl, -NH-(CH2)v-fenyl (v=0,1,2,3), -NH-(CH2)m-naftyl (m=0,l),
-NH-(CH2)w-benzhydryl (w=0,l alebo 2), -NH-bifenyl, -NH-pyridyl, -NH-CH2-pyridyl, -NH-CH2-CH2-pyridyl, -NH-benzotiazolyl, -NH-benzoizotiazolyl, -NH-benzopyrazolyl, -NH-benzoxazolyl, -NH-(CH2)m-fluorenyl (m=0,l), -NH-pyrimidyl, -NH-(CH2)m-indanyl (m=O,l), -NH(CH2CH2O)y-CH3 (y=0,lA3,4,5), -NH-(CH2CH2O^-CH2CH3 (y=0,1,2,3,4,5), -(CH2CH2O)y-CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -(CH2CH2O)y-CH2CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -NCHj-NH-CsH;, -NCH3-NH-CH2-C6H5; alebo K znamená
—H J r~\ —’W s=o
Z cs. * ® s
-Ό '“ÝX “Aa -“Ό. ·™Λα.
«, <a, ch, ci,
alebo ich soli s fyziologicky vhodnými kyselinami.
Vynález sa tiež týka farmaceutického prostriedku, ktorý obsahuje peptid všeobecného vzorca (I) spolu s farmaceutický vhodnými nosičmi, a použitia tohto peptidu na ošetrovanie onkologických ochorení a nádorov cicavcov.
Výhodné sú peptidy všeobecného vzorca (I), kde znamená
R1 metyl alebo etyl
R2 vodík, metyl alebo etyl,
A zvyšky valyl, izoleucyl alebo 2-terc-butylglycyl,
B zvyšky N-metylvalyl, N-metylizoleucyl alebo N-mefyl-2-terc-bufylglycyl,
D zvyšky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3-metylprolyl alebo 5-metylprolyl,
E zvyšky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl alebo tiazolidín-4-karbonyl,
F zvyšky D-valyl, 2-terc-butylglycyl, D-izoleucyl, D-leucyl alebo aminoizobutyroyl,
X -CH(CH3)2, -C(CH3)3 alebo -CH(CH3)CH2CH3, alebo 1 a
K výhodne znamená
-OC(CH3h, -NHCHj, -NHCHjCHj, -NHÍCHjjjCHa, -NH(CH2>3CH,,
-NH(CH2)4CHj, -NH(CH2)jCH3, -NHCCHACHj, -NH(CH2),CH3, -NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)CHíCH3, -NHCH(CH3)CI IjCIIíCIIj, -NHCHfCHjCÍI3ý, -NHÍCHjCHjCH^, -NHCíCHjK -NHCHtCHAHjjCHfHjCHj, -NHCH(CH3)CH(CH3)2, -NHCHtCHjCf-bXľHtCHA -NHCH(CH3)C(CH3};, -NH-cyldopropyl, -NH-cyldobutyl, -NH-cyklopentyl, -NH-cyldohexyl, -NH-cykloheptyl, -NH-cyklooktyl, -NH-bicyklo[3,3,0]oktyl, -N(CH3)OCH3, -NtCHjiOCiyľHj, -NÍC^jOCHjCHzCHj, -N(CH3)CX3H(CH3)2, -N(CH2CH3)OCH3, -N/CHjCHíjOCHjCHj, -N(CH(CII3)2)OCH3, -N/CHjPCHjCä, -NÍOCHjýľHrCJ I5, -NXCHjPQHs, -NH-CHrCsHj, -NHfCHjhCJb, -NHÍCH^CeHj, -NHCH(CH3)C6Hs, -NHC(CH3)£6H,, -ΝΗ€(αΐ3}£Η£Η3,
-NHCťCHjXCHjCHA -NHCHíCHjjCHÍOHjCsHj, -NHCHr -cyklohexyl,
-NH-CHrCFj, -NHCH(CH2F)2, -NHC(CH3)2CH2CH2OH, -NÍKCHjCHjOýCHjCHi -NHQCHjjjCHfCH^ -NHC(CH3)zCN, -NHC(CH3)2CCH, norefedryl, noipseudoefedryl,
-NH-chinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-adamantýl(2), -NH-adamantyl(l), -NH-CH2-adamantyl, -NH-CHrnaftyl, -NH-benzhydŕyl, -NH-bifenyl, -NH-pyridyl, -NH-CHrpyridyl, -NH-CHrCH2-pyridyl, -NH-benzotiazolyl, -NH-benzoizotiazolyl, -NH-benzopyrazolyl, -NH-benzoxazolyl, -NH-fluorenyl, -NH-pyrimidyl, -NH-CH2-(4-metyl)tiazolyl(2), -NH-CHrfiiranyl(2), -NH-CHrtienylfŽ), -NH-CHr(5-metyl)1jenyl(2), -NH-tiazolyl(2), -NH-izoxazolyl(3),
-NH-(3-metyl)izoxazolyl(5),-NH-(3-metyl)izotiazDlyl(5), -NH-(2-trifluónnetyl)tíadÍazolyl(5),-NH-{2-cyklopropyl)tiadiazolyl(5), -NHC(CH3)2C=CH2, alebo
K,C
Uvedené príklady vynález iba objasňujú, ale ho však nijako neobmedzujú.
Peptidy všeobecného vzorca (I) sa skladajú z L-aminokyselín, F môže však znamenať takisto D-aminokyselinu.
Peptidy všeobecného vzorca (I) môžu byť vo forme solí s fyziologicky vhodnými kyselinami, ako sú napríklad kyselina chlorovodíková, citrónová, vínna, mliečna, fosforečná, metánsulfónová, octová, mravčia, maleínová, fumarová, jablčná, jantárová, malónová, sírová, L-glutamová, L-asparágová, pyrohroznová, muková, benzoová, glukuronová, šťaveľová, askorbová a acetylglycín.
Peptidy všeobecného vzorca (I) je možné pripravovať o sebe známymi spôsobmi z chémie peptidov. Napríklad sa môžu postupne skladať z aminokyselín alebo sa môžu získať viazaním vhodných malých peptidových fragmentov. Pri postupnom skladaní sa vychádza z C zakončenia peptidového reťazca, ktorý sa postupne predlžuje vždy o jednu aminokyselinu. Pri kopulácii fragmentov je možné viazať spolu fragmenty rôznej dĺžky, pričom sa takéto fragmenty získajú postupným viazaním aminokyselín alebo takisto kopuláciou fragmentov. Pri obidvoch týchto spôsoboch je nutné vzájomne viazať jednotky vytváraním amidovej väzby. Na tento účel sú vhodné tak chemické, ako aj enzymatické spôsoby.
Chemické spôsoby na vytváranie amidovej väzby podrobne opísal Mueller (Methoden der organischen Chemie, zväzok XV/2, str. 1 až 364, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974; Stewart, Young, Solid Phase Peptide Synthesis, str. 31 až 34, 71 až 82, Pierce Chemical Company, Rockford, 1984; Bodanszky, Klausner, Ondetti, Peptide Synthesis, str. 85 až 128, John Wiley and Sons, New York, 1976) a ktoré sú takisto opísané v iných základných publikáciách o chémii peptidov. Zvlášť výhodným je azidový spôsob, symetrický a zmesový anhydridový spôsob, in situ generované a predformované aktívne estery, použitie uretanu chráneného N-karboxyanhydridmi aminokyselín a vytváranie anódových väzieb s použitím systému kopulačná zložka/aktivátory, pričom sa zvlášť uvádzajú dicyklohexylkarbodiimid (DCC), diizopropylkarbodiimid (DIC), l-etoxykarbonyl-2-etoxy-l,2-dihydrochinolín (EEDQ), l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidhydrochlorid (EDCI), anhydrid n-propánfosfónovej kyseliny (PPA), N,N-bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)amidofosforylchlorid (ΒΟΡ-Cl), bromo-trispyrolidinofosfóniumhexafluórfosfát (PyBrop), difenylfos3
SK 282466 Β6 forylazid (DPPA) reagencia Castro (BOP, PyBop), 0-benzotriazolyl-N,N,N',N'-tetrametyluróniovej soli (HBTU), O-azabenzotriazolyl-N,N,N',N'-tetrametyluróniovej soli (HATU), dietylfosforylkyanid (DEPCN), 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxytioféndioxid (Steglichovo reakčné činidlo, H0TD0) a l,ľ-karbonyldiimidazol (CDI). Kopulačné činidlá je možné používať samotné alebo v kombinácii s aditívami, ako sú napríklad N,N-dimetyl-4-aminopyridín (DMAP) N-hydroxybenzotriazol (HOBt), N-hydroxysukcinimid (HOSu) alebo 2-hydroxypyridín.
Zatiaľ, čo je spravidla možné upustiť od chrániacich skupín pri enzymatickej syntéze peptidov, je prechodná ochrana reaktívnych skupín, ktoré sa nepodieľajú na amidovej väzbe, potrebná pre reakčné zložky pri chemickej syntéze. Pri chemickej syntéze peptidov sa dáva prednosť trom bežným spôsobom použitia chrániacich skupín: spôsobu používajúceho benzyloxykarbonyl (Z), t-butoxykarbonyl (Boe) a 9-fluorenylmetoxykarbonyl (Fmoc). V každom prípade sa používa chrániaca skupina na a-aminoskupine jednotky predlžujúcej reťazec. Podrobný prehľad skupín chrániacich aminoskupinu uvádza Mueller (Methoden der organischen Chemie, zväzok XV/1, str. 20 až 906, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974).
Jednotky používané na vytváranie peptidového reťazca, sa môžu nechávať reagovať v roztoku, v suspenzii alebo podobným spôsobom, aký opísal Murrifield (J. Amer. Chem. Soc. 85, str. 2149, 1963). Zvlášť výhodné sú spôsoby, pri ktoiých sa peptidy vytvárajú postupne alebo kopuláciou fragmentov s použitím chrániacich skupín Z, Boe alebo Fmoc. Jedna z reakčných zložiek pri spôsobe, ktorý opísal Murrifield, sa viaže na nerozpustný polymémy nosič (označovaný tu tiež ako živica). Peptid sa spravidla vytvára postupne na polymémom nosiči s použitím chrániacich skupín Boe alebo Fmoc, rastúci peptidový reťazec je kovalentne viazaný C zakončením na nerozpustné živicové častice (obr. 1 a 2). Tento spôsob umožňuje odstrániť reagenčné činidlá a vedľajšie produkty filtráciou a tak je prekryštalovanie medziproduktov zbytočné.
Chránené aminokyseliny sa môžu viazať na akýkoľvek vhodný polymér, ktorý musí byť iba nerozpustný v použitom rozpúšťadle a musí mať stálu fyzikálnu formu, ktorá uľahčuje filtráciu. Polymér musí obsahovať funkčnú skupinu, na ktorú sa môže pevne viazať prvá chránená aminokyselina kovalentnou väzbou. Na tento účel sú vhodné najrôznejšie polyméry: napríklad sa uvádza celulóza, polyvinylalkohol, polymetakrylát, sulfónovaný polystyrén, kopolymér chlórmetylovaného styrénu a divinylbenzénu (Murrifieldova živica), 4-metylbenzhydrylamínová živica (živica MBHA), fenylacetamidometylová živica (Pamživica), p-benzyloxybenzylalkoholová živica, benzhydrylamínová živica (BHA-živica), 4-(hydroxymetyl)benzoyloxymetylová živica, živica, ktorú opísal Breipohl a kol. (Tetrahedron Letters 28, str. 565, 1987, obchodný produkt spoločnosti BACHEM), 4-(2,4-dimetoxyfenylaminometyl)fenoxyživica (obchodný produkt spoločnosti Novabiochem) alebo o-chlórtritylová živica (obchodný produkt spoločnosti Biohellas).
Na peptidovú syntézu v roztoku sa hodia všetky rozpúšťadlá, ktoré sú inertné pri reakčných podmienkach, zvlášť voda, Ν,Ν-dimetylformamid (DMF), dimetylsulfoxid (DMSO), acetonitril, dichlórmetán (DCM), 1,4-dioxán, tetrahydrofiirán (THF), N-metyl-2-pyrolidón (NMP) a zmesi týchto rozpúšťadiel. Peptidovú syntézu na polymérnom nosiči je možné uskutočňovať vo všetkých inertných organických rozpúšťadlách, v ktorých sú použité deriváty aminokyselín rozpustné. Výhodné rozpúšťadlá ako N,N-dimetylformamid, dichlórmetán, N-metyl-2-pyrolidón, a cetonitril a dimetylsulfoxid a ich zmesi však spôsobujú nabobtnávanie živíc. Keď je syntéza ukončená, peptid sa od polymémeho nosiča odštiepi. Podmienky, pri ktorých je odštiepenie od rôznych živíc možné, sú opísané v literatúre. Najbežnejšie používané odštepovacie reakcie sú katalyzované kyselinami a paládiom, zvlášť je vhodné štiepenie v tekutom bezvodom hydrogenfluoride, v bezvodej trifluórmetánsulfónovej kyseline, v zriedenej alebo v koncentrovanej trifluóroctovej kyseline, paládiom katalyzované štiepenie v tetrahydrofúráne alebo v zmesi tetrahydrofuránu a dichlórmetánu v prítomnosti slabej zásady, ako je morfolín alebo štiepenie v zmesiach kyseliny octovej a dichlórmetántrifluórmetanole. V závislosti od zvolených chrániacich skupín, sa môžu tieto skupiny udržať alebo prípadne odštiepiť za štiepiacich podmienok. Cenné môže byť tiež čiastočné odstránenie chrániacich skupín peptidu, ak sa majú uskutočniť určité derivatizačné reakcie. Peptidy dialkylované naN-zakončení sa môžu pripravovať:
a) kopuláciou príslušných Ν,Ν-dialkylamínových kyselín v roztoku alebo na polymémom nosiči
b) redukčnou alkyláciou peptidu viazaného na živici v systéme dimetylformamid/1 % kyselina octová s NaCNBHj a s príslušným aldehydom alebo ketónom,
c) hydrogenáciou peptidov v roztoku s prítomnosťou aldehydu alebo ketónu a paládia na uhlí.
Rôzne v prírode sa nevyskytujúce aminokyseliny podľa vynálezu sú obchodne dostupné alebo sa môžu syntetizovať z obchodne dostupných materiálov spôsobmi známymi zo stavu techniky. Obchodne dostupnými východiskovými materiálmi sú kyselina azetidín-2-karboxylová, 3-metyl-L-prolín, 5-metyl-L-prolín a skupinou Boe alebo Fmoc chránený 3,4-dehydroprolín (ACROS, NOVABIOCHEM, BACHEM). Cis- a trans-4-fluórprolín je možné pripraviť spôsobom, ktorý opísal Panasik a kol. (N. Panasik, E.S. E -berhardt, A.S. Edison, D.R. Powell, R.T. Raines Int. J. Peptide Protein Res. 44, str. 262 až 269,1994) z hydroxyprolínu.
Zlúčeniny podľa vynálezu môžu slúžiť na inhibíciu alebo na iné liečenie pevných nádorov (napríklad nádorov pľúcnych, prsných, hrubého čreva, prostaty, žlčníka, konečníka alebo endometriálnych nádorov) alebo hematologických ochorení (napríklad leukémia, lymphomas), podávaním zlúčenín cicavcom.
Špeciálnou prednosťou nových zlúčenín podľa vynálezu je, že sú odolnejšie proti enzymatickému rozkladu v porovnaní s Dolastatínom-15.
Podávanie môže byť bežnými farmaceutickými, výhodne onkologickými prostriedkami vrátane orálnych a parenterálnych prostriedkov, subkutánne, intravenózne, intramuskuláme a intraperitoneálne.
Zlúčeniny sa môžu podávať samotné alebo v podobe farmaceutických prostriedkov obsahujúcich zlúčeninu všeobecného vzorca (I) spolu s farmaceutický vhodným nosičom na danú cestu podávania. Takýmito farmaceutickými prostriedkami môžu byť kombinované výrobky, môžu teda obsahovať iné terapeuticky účinné prísady.
Dávka podávaná cicavcom obsahuje nádor inhibujúci účinnú látku, ktorá závisí od bežných faktorov, ako je biologická aktivita použitej zlúčeniny, spôsob podania, vek, zdravotný stav a hmotnosť pacienta, povaha a druh príznakov, frekvencia ošetrovania, podávanie iných liekov a požadovaný účinok. Typickou dennou dávkou je asi 0,5 až 50 mg na kg telesnej hmotnosti pri orálnom podávaní a asi 0,05 až 20 mg pri parenterálnom podávaní.
Nové zlúčeniny podľa vynálezu je možné podávať vo forme bežných pevných alebo tekutých farmaceutických prostriedkov, teda potiahnutých alebo nepotiahnutých tabliet, kapsúl, práškov, granúl, čapíkov alebo roztokov. Tie sa
SK 282466 Β6 vyrábajú obvyklým spôsobom. Účinné látky môžu byť pri tom kombinované s obvyklými farmaceutickými pomocnými látkami, ako so spojivami tabliet plnidlami, chrániacimi činidlami, činidlami pre rozpadavosť tabliet, regulátormi tekutosti, zvláčňovadlami, rozpúšťadlami, látkami oneskorujúcimi účinok, antioxidantmi a/alebo s nosnými plynmi (H. Sucker a kol. Pharmazeutische Technológie, Thieme Verlag, Stuttgart, 1978). Takto podávané formy liečiv obsahujú normálne hmotnostné 1 až 90 % účinnej látky.
Nasledujúce príklady vynález objasňujú bez toho, aby ho obmedzovali. V príkladoch sú proteínové aminokyseliny uvádzané skratkami v bežnom 3-písmenovom kóde. Inými skratkami sú: Me2Val = Ν,Ν-dimetylvalín, MeVal = N-metylvalín, Z= benzyloxykarbonyl.
Príklady uskutočnenia vynálezu
A. Všeobecné postupy
I. Peptidy podľa vynálezu všeobecného vzorca (1) sú buď syntetizované klasickou roztokovou syntézou štandardnými opísanými spôsobmi s použitím Z a Boe alebo štandardnými spôsobmi syntézy v pevnom stave pomocou chrániacich skupín Boe a Fmoc.
a) Cyklus syntézy pre techniku chrániacich skupín Fmoc.
l. premytie DMF 1 x 1 min.
2.20 % piperidínu v DMF 1 x 4 min.
3. 20 % piperidínu v DMF 1x16 min.
4. premytie DMF 5 x 1 min.
5. pridanie vopred aktivovanej chrániacej aminokyseliny (aktivovanej 1 ekvivalentom TBTU a 5 ekvivalentmi DIPEA v DMF) peptidová kopulácia 1x61 min
6. premytie DMF 3 x 1 min
7. ak nie je konverzia úplná, opakovanie kopulácie (späť k 5.)
8. premytie DMF 3 x 1 min
9. späť do 2.
Na kopuláciu aminokyselín po N-aminokyselinách sa používajú reakčné riedidlá ΒΟΡ-Cl a PyBrop. Reakčné doby sa príslušne zväčšia zaradením dvojitých väzieb. Pri roztokovej syntéze je na tento spôsob kopulácie najvýhodnejšie použitie buď Boc-chránených (N-karboxy anhydridov) aminokyselín NCA, Z-chránených (N-karboxyanhydridov) aminokyselín NCA, alebo pivaloylchlorid ako kondenzačné činidlo.
II. Redukčná alkylácia N-zakončenia
Peptidová živica podľa Ala sa zbaví chrániacich skupín na N-zakončení (kroky 2 až 4 v Ala) a potom sa nechá reagovať s 3-násobným molámym nadbytkom aldehydu alebo ketónu v systéme dimetylformamid/1 % kyseliny octovej, s prísadou 3 ekvivalentov NaCNBH3. Po ukončení reakcie (negatívny Kaiser-test) sa živica premyje niekoľkokrát vodou, izopropanolom, dimetylformamidom a dichlórmetánom. Reduktívnu alkyláciu v roztoku je možné napríklad dosiahnuť reakciou peptidov zbavených chrániacich skupín na N-zakončení, peptidových fragmentov alebo aminokyselín so zodpovedajúcimi aldehydmi alebo ketónmi použitím NaCNBH3 alebo systémom vodík paládium na uhlí.
m. Spracovanie peptidových živíc získaných podľa odstavca Ib a Π
Peptidová živica sa vysuší pri zníženom tlaku a potom sa spracuje 1,5 hodiny zmesou TFA/voda (95 : 5) (Wade, Tregear, Howard Florey Fmoc Workshop Manual, Melboume, 1985). Živica sa odfiltruje a premyje sa TFA a dichlórmetánom. Filtrát a premývacie roztoky sa skoncentrujú a peptid sa vyzráža prísadou dietyléteru. Po ochladení v ľadovom kúpeli sa zrazenina odfiltruje, vyberie sa do 30 % kyseliny octovej a lyofilizuje sa.
IV. Ak sa použije o-chlorotritylová živica (obchodný produkt spoločnosti Biohellas), mieša sa 1 hodinu pri laboratórnej teplote suspenzia peptidovej živice v systéme octová kyselina/ /trifluóretanol/dichlórmetán (1:1: 3). Živica sa odfiltruje pri odsávaní a dôkladne sa premyje štiepiacim roztokom. Spojené filtráty sa skoncentrujú vo vákuu a spracujú sa éterom. Vyzrážaná pevná látka sa odstráni filtráciou alebo odstredením, premyje sa dietyléterom a vysuší sa pri zníženom tlaku.
V. Čistenie a charakterizácia peptidov
Čistenie sa uskutočňuje gélovou chromatografiou (SEPHADEX G-10, G-15(10% HOAc, SEPHADEX LH20/MeOH) a/alebo strednotlakovou chromatografiou (stacionárna fáza: HD-SIL C-8, 20-45 mikrometrov, 100 Angstrom; mobilná fáza: gradient s A = systém 0,1 % TFA/voda, B = systém 0,1 % TFA/MeOH), alebo preparatívnou chromatografiou HPLC (stacionárna fáza: Waters Delta-Pak C-18, 15 mikrometrov 100 Angstrom; mobilná fáza: gradient s A = systém 0,1 % TFA/voda, B = systém 0,1 % TFA/MeOH).
Čistota výsledných produktov sa zisťuje analytickou chromatografiou HPLC (stacionárna fáza: 100 2,1 mm VYDAC C-18 300 Angstrom; mobilná fáza: acetonitrilvoda gradient, pufrované s 0,1 % TFA, 40 C). Charakterizácia bombardovania rýchlymi atómami hmotnostnou spektroskopiou a NMR spektroskopiou.
B.- Špecifické postupy Príklad 1 (SEQ ID NO: 1) Me2Val-Val-MeVal-3,4-dehydroprolyl-Pro-amid
Necháva sa reagovať 0,53 g živice Fmoc-RINK (substitúcia 0,46 mmól/g), zodpovedajúcej veľkosti dávky 0,25 mmól ako v Ala vždy s 0,4 mmól
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-3,4-dehydroprolín, Fmoc-MeVal-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Val-OH.
Aminokyselina nasledujúca po N-metylaminokyseline sa spojí dvojitou väzbou kopulačným činidlom ByProp. Po ukončení iteratívnych syntetických cykloch sa z peptidovej živice odstránia chrániace skupiny N-zakončenie (kroky 2 až 4 v Ala) a nechá sa ďalej reagovať s vodným roztokom formaldehydu ako v AII a vysuší sa pri zníženom tlaku. Výsledná živica sa odštiepi TFA ako v AIII. Surový produkt (132 mg) sa čistí preparatívnou stredotlakovou chromatografiou, čím sa získa 32 mg žiadaného čistého peptidu (10 až 40 % A počas 10'; 40 až 90 % A počas 140'). Zlúčenina sa ďalej charakterizuje bombardovaním rýchlymi atómami hmotnostnou spektroskopiou a NMR spektroskopiou. [M+H]+.
Príklad 2 (SEQ ID NO:1) Me2Val-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karbonyl] -Probenzylamid
a) Z-(2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-karboxylová kyselina
V 4 ml vody a 2,33 ml 5N roztoku hydroxidu sodného sa rozpustí 1,5 g (2S,3S)-3-metylpyrolidin-2-karboxylovej kyseliny (11,6 mmól). V priebehu 1 hodiny sa pridá pri teplote 4 C 2,12 ml benzylchlorformátu (Z-Cl; 12,8 mmól) a 6,5 ml 2N roztoku hydroxidu sodného. Po miešaní zmesi cez noc pri laboratórnej teplote sa nastaví hodnota pH na
10. Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (4x), nastaví sa na hodnotu pH 2 5N kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje sa dichlórmetánom (2x). Spojené organické extrakty sa vysušia síranom sodným a skoncentrujú sa vo vákuu. Získa sa 1,75 g produktu v podobe oleja.
b) Z-(2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-kaibonyl-L-prolylbenzyl-amid
V 66 ml dichlórmetánu sa rozpustí 1,75 g (2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karboxylovej kyseliny (6,62 mmól) a 1,59 g prolínbenzaldehydhydrochloridu (6,62 mmól) a ochladí sa na teplotu 4 C. Po pridaní 0,89 ml N-metylmorfolínu (7,94 mmól), 0,304 g HOBt (2,21 mmól) a 1,28 g EDCI (6,62 mmól) sa reakčná zmes mieša cez noc pri laboratórnej teplote, zriedi sa 150 ml dichlórmetánu a premyje sa nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x), vodou (lx) a nasýteným roztokom chloridu sodného (lx). Organická vrstva sa vysuší síranom sodným a skoncentruje sa pri zníženom tlaku. Získa sa 2,63 g produktu v podobe vysoko viskózneho oleja.
c) (2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-karbonyl-L-prolylbenzyl-aniid
V 43 ml metanolu sa rozpustí 2,63 g Z-(2S,3S)-metylpyrolidín-2-karbonyl-L-prolylbenzylamidu (5,8 mmól). Po pridaní 105 mg 10 % paládia na uhlí sa reakčná zmes hydrogenuje cez noc. Po filtrácii a vysušení sa získa 1,88 g chrániacich skupín zbaveného dipeptidu.
d) Z-MeVal-[(2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-karbonyl]-Probenzylamid
V 58 ml dichlórmetánu sa rozpustí 1,54 g Z-MeVal-OH (5,8 mmól) a 1,88 g (2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karbonyl-L-prolylbenzylamidu a ochladí sa na teplotu 4 C. Po pridaní 0,78 ml N-metylmorfolínu (6,96 mmól), 0,266 g HOBt (1,93 mmól) a 1,12 g EDCI (5,8 mmól) sa reakčná zmes mieša cez noc pri laboratórnej teplote, zriedi sa 120 ml dichlórmetánu a premyje sa nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x), vodou (lx) a nasýteným roztokom chloridu sodného (lx). Organická vrstva sa vysuší síranom sodným a skoncentruje sa pri zníženom tlaku. Získa sa 3,01 g produktu v podobe suchej bielej peny.
e) MeVal-[(2SfS)-3-MetylpyroHdín-2-kaibonyI]-Pro-ben-zylamid
V 39 ml metanolu sa rozpustí 3,01 g Z-MeVal-[(2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (5,33 mmól). Po pridaní 96 mg 10 % paládia na uhlí sa reakčná zmes hydrogenuje tri hodiny. Filtráciou a odparením do sucha sa získa 2,18 g chrániacej skupiny zbaveného tripeptidu v podobe číreho oleja.
f) Z-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-karbonyl]-Probenzylamid
V 10 ml dichlórmetánu sa rozpustí 1,28 g Z-Val-OH (5,11 mmól). Po pridaní 0,73 ml trietylamínu (5,37 mmól) a ochladení na teplotu -10 C sa pomaly pridá 0,66 ml pivaloylchloridu (5,37 mmól). Po 1,5 hodinovom miešaní zmesi pri teplote -10 C nasleduje prísada roztoku 2,18 g MeVal-[(2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karbonyl]-Probenzylamidu (5,11 mmól) a 0,73 ml trietylamínu (5,37 mmól) v 10 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa mieša 1,5 hodiny pri teplote -10 C a pri laboratórnej teplote cez noc, zriedi sa dichlórmetánom a premyje sa nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x), vodou (lx) a nasýteným roztokom chloridu sodného (lx). Organická vrstva sa vysuší síranom sodným a skoncentruje sa pri zníženom tlaku. Získa sa 2,75 g produktu v podobe suchej peny.
g) Val-MeVal-[(2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-karbonyl]-Probenzylamid
V 30 ml metanolu sa rozpustí 2,75 g Z-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (4,13 mmól). Po pridaní 0,34 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej (4,13 mmól) a 78 mg 10 % paládia na uhlí sa reakčná zmes hydrogenuje tri hodiny. Filtrácia a odparenie do sucha poskytne 2,23 g chrániacej skupiny zbaveného tripeptidu v podobe suchej bielej peny. Surový produkt sa ďalej rozpustí v 50 ml vody a hodnota pH sa nastaví na 2 až 3 IN kyselinou chlorovodíkovou. Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (3x), hodnota pH sa nastaví na 10 5N roztokom hydroxidu sodného a ďalej sa extrahuje dichlórmetánom (3x). Spojené organické extrakty sa vysušia síranom sodným pri zníženom tlaku, čím sa získa 1,71 g chrániacej skupiny zbaveného tetrapeptidbenzaídehydu.
h) Me2Val-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-Metylpyrolidín-2-karbonyl]-Pro-benzylamid
V 32 ml suchého DMF sa rozpustí 0,47 g Me2Val-OH (3,24 mmól) a 1,71 g Val-MeVal-[(2S,3S)-3-metylpyrolidín-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (3,24 mmól). Po ochladení na teplotu 4 C sa pridá 1,07 ml DEPCN (6,48 mmól) a 1,88 ml trietylamínu (12,96 mmól). Reakčná zmes sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote a dimetylformamid sa odparí pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustí v 100 ml dichlórmetánu premyje sa nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x), vodou (lx) a nasýteným roztokom chloridu sodného (lx). Organická vrstva sa vysuší síranom sodným a skoncentruje sa pri zníženom tlaku. Získa sa 0,88 g produktu v podobe bezfarebného oleja. Surový produkt sa rozpustí vo vriacom diizopropylétere a vyzráža sa pri chladení. Zrazenina sa oddelí a vysuší sa pri vzniku 0,56 g čistého produktu. Zlúčenina sa ďalej charakterizuje hmotnostnou spektrometriou pri bombardovaní rýchlymi atómami. ([M+H]+=655,6).
Nasledujúce zlúčeniny sa pripravili a môžu byť pripravené podľa príkladu 1 a 2:
3. Xaa Val Xab Xae ; Xad
4. xaa Val Xab Xae Xae
5, Xaa Val Xab Xac Xaf
S. Xaa Val Xab xae Xag
7. Xaa Val Xab Xae Xab
β. XA4 Val Xab Xae Xaí
9. Xaa v»i Xab Xae Xak
10. Xaa Val Xab Xae Xal
11. Xaa Val Xab Xac Xan
12. Xaa Val Xab Xac Xan
13. Xaa Val Xab Xac Xac
14. Xaa val Xab Xac Xap
15. Xaa Val Xab Xae Xaq
15. Xaa Val Xab Xae Xar
17. Xa* val Xab Xac Xas
10. Xaa Val Xab Xac Xat
19. Xaa val Xab Xac Xat
90. Xaa Val Xab Xae Xav
21. Xaa Val Xab Xae Xaw
22. Xaa Val Xab Xae Xax
23. Xaa Val Xab Xac Xay
24. Xaa Val Xab Xac Xas
25. Xaa Val Xab Xac xba
25. Xaa Val Xab Xae Xbb
27. Xaa Val Xab Xae Xbc
28. Xaa Val Xab xae XM
29. Xaa Val Xab Xae Xte
30. Xaa Val Xab Xac Xbf
31. Xb9 Val Xab Xae Xar
32. Xb9 Val Xab Xae Xas
33. Xbh Val Xab Xac Xar
34. »h Val Xab Xac Xas
35. Xaa 11a Xab Xac Xar
36. Xaa íle xab Xac Xas
37. Xaa Xbk Xab xac Xar
3B. Xaa Xbk Xab Xac Xa«
39. xaa val zbi Xac Xar
40. Xaa Val xbl Xae Xa*
41. Xaa Val Xab Xac Xbl
42. Xaa Val Xab Xac Xbn
43. Xaa Val Xab Xac Xba
44. Xaa val Xab Xbo Xae
45. Xaa Val Xab Xbo Xbp
46. Xaa Val Xab xbo Xar
47. Xaa Val Xab Xbo Xas
48. Xaa Val Xab Xbo xbn
49. Xaa Val Xab Xbq Xae
SO. Xaa Val Xab Xbq Xar
SI. Xaa Val Xab Xbq Xas
52. Xaa val Xab Xbq Xbm
S3. Xaa Val Xab Xbr Xbp
5*. Xaa Val xab xbr xae
55. Xaa Val Xab Xbr Xas
56. Xaa Val Xab Xbr Xar
57. Xaa Val Xab Xbs Xae
58. Xaa Val Xab Xbs Xas
59. xaa val xab Xbs Xar
60. Xaa val xab Xac Xbu
61. Xaa val Xab Xac Xbt
62. Xaa Val xab Xbq xbu
63. Xaa val Xab Xbq Xbt
64. xaa Val Xab Xac Pro Xbv
65. Xaa Val Xab Xac Pro Xbv
66. Xaa Val Xab Xac Pro Xbr
67. Xaa Val Xab Xac Pro Xby
68. Xaa Val Xab Xac Pro Xbs
64. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv
65. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv
66. Xaa Val Xab Xbq Pro xbx
67. Xaa Val Xab Xbq Pro Xby
«8. Xaa val Xab Xbq Pro xbz
69. Xaa Val Xab Xbo Xas
70. Xaa Val Xab Xbq Xaz
71. Xaa Val Xab Xbq xbn
72. xaa Val Xab Xbo Xbn
Xah:
Xai:
Xak:
Xal:
Príklady MS-charakterizácie syntetizovaných nových zlúčenín sú uvedené v nasledujúcej tabuľke.
Xaa:
Príklad Analýza MS pri bombardovaní rýchlymi atómami č. (mol. hmotnosť (nameraná)]
Xan:
627 «55
O HjC
Tabuľka I - Identifikácia sekvencie zlúčenín pripravených podľa príkladu 1 a 2
Xao:
Zlúčenina 6.
Sekvenčné ID-číslo
1-34, 39-63, 69-721
35, 362
37, 383
64-684
Xap:
Symboly Xaa v súčte majú nasledujúci význam:
Xaa: N,N-Dimetylvalín
Xab: N-Metylvalín
Xac: 3,4-dehydroprolín
Xaq:
xad:
Xar:
Xas:
Xae:
0 HjC
Xat:
Xať:
Xag:
Xau:
Xav·
X*W:
Xax:
Xay;
Xbq: (4-fluór)-L-prolín
Xbr: (5-metyl)-L-prolín
Xbs: (3-metyl)-L-prolín
Xbt:
Xaz;
Xba:
Xbb:
Xbui
Xbv:
Xbc:
Xbd:
xtr-r’
Xbx:
Xbe:
Xby:
Xbz:
xbf:
Xbg: N,N-dimetylizoleucín
Xbh: N,N-dimetyl-2-terc-butyl-glycín
Xbi: N-metylizoleucín
Xbk: 2-terc-butylglycín
Zbi:
Xbm:
Xbn;
Xbo: L-azetidín-2-karbonyl
Xbp:
A o
CH, Κ,θγ-CH, o
H,C O
Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu testovať na účinok proti rakovine bežnými spôsobmi napríklad vrátane ďalej opísaného spôsobu:
A. Metodológia in vitro
Cytotoxicita sa meria štandardnou metodológiou pre priľnuté bunkové línie, ako je „microculture tctrazolium test“ (MTT). Podrobnosti tejto skúšky sú opísané v literatúre (Alley, MC a kol. Cancer Research 48: str. 589 až 601, 1988). Na získanie kultúr pre mikrotitračné doštičky sa použijú exponenciálne rastúce kultúry nádorových buniek, ako sú bunky HT-29 colon-carcinoma alebo LX-pľúcneho nádoru. Bunky sa nasadia v množstve 5000 až 20 000 na jamku v 96-jamkových doštičkách (v 150 pl média) a kultivujú sa cez noc pri teplote 37 C. Pridajú sa zlúčeniny v 10-násobnom zriedení 104M až 10‘10M. Bunky sa potom inkubujú 48 hodín. Na zistenie počtu živých buniek v každej jamke sa pridá farbivo MTT (50 μΐ roztoku 3 mg/ml 3(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidu v solanke). Zmes sa inkubuje 5 hodín pri teplote 37 °C a po8
SK 282466 Β6 tom sa do každej jamky pridá 50 μΐ 25 % SDS, pH 2. Po celonočnej inkubácii sa potom odpočíta absorbancia každej jamky pri 550 nm počítačom ELISA. Vypočítajú sa stredné hodnoty +/- SD dát z replikovaných jamiek, s použitím vzorca % T/C (% ošetrených živých buniek/kontrolných buniek).
OD ošetrených buniek ~--------------------- x 100 - % T/C
OD kontrolných buniek
Koncentrácia skúšanej zlúčeniny, ktorá dáva hodnotu inhibície rastu T/C = 50 % je označovaná ako hodnota IC5o. Zlúčenina podľa príkladu IC5o[M]
Zlúčenina podta príkladu IC5q[M]
IX ίο-;» 2 1 x 10*® 45 lx 10~7 53 1 x ΙΟ'»
B. Metodológia in vivo
Zlúčeniny podľa vynálezu sa skúšali ďalej v preklinických testoch na aktivitu in vivo, ktorá je indikatívna na klinické použitie. Takéto testy sa uskutočňujú na holých myšiach, ktorým sa transplantujú (xenovrúbľujú) nádorové tkanivá, výhodne ľudského pôvodu, ako je to dobre známe v odbore. Skúšané zlúčeniny sa vyhodnocujú z hľadiska protinádorovej účinnosti po podaní myšiam so xenoimplantátom.
Ľudské prsníkové nádory (MX-1), ktoré rástli v atymickej holej myši sa transplantujú do novej hostiteľskej myši pomocou nádorových fragmentov s veľkosťou asi 50 nm. Deň transplantácie je dňom 0. Šesť až desať dní neskôr sa myši ošetria skúšanými zlúčeninami podávanými ako intravenózne injekcie v skupinách po 5 až 10 myší pri každej dávke. Zlúčeniny sa podávali každý druhý deň počas troch týždňov v dávkach 1 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti. Priemery nádorov a telesná hmotnosť sa merali dvakrát týždenne. Objemy nádorov sa vypočítali z priemerov meraných posuvným merítkom a pre každú ošetrovanú skupinu sa vypočítajú objemy nádorov podľa vzorca (dĺžka x šírka2)/2 = mm3 objemu nádoru
Pre každú skupinu sa vypočítajú stredné objemy nádorov a zistia sa hodnoty T/C pre každú skupinu oproti neošetreným kontrolným nádorom.
Nové zlúčeniny majú dobré vlastnosti inhibície nádorov.
Priemyselná využiteľnosť
Peptid na výrobu farmaceutických prostriedkov na ošetrovanie onkologických ochorení cicavcov.
Zoznam sekvencii
1. Všeobecné informácie
i) Prihlasovateľ
A. Adresát: BASF Aktiengesellschaft
B. Ulica: Carl-Bosch-Strasse 38
C. Mesto: Ludwigshafen
E. Štát: Nemecká spolková republika
F. ZIP: D-67056
G: Telefón: 0621/6048526 H: Telefax: 0621/6043123
1. Telex: 1762175170 ii) Názov vynálezu: Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie iii) Počet sekvencii: 4 i v) Forma pre počítač
A. Typ média: Disketa 3,5 palca, 2 DD
B. Počítač: IBM AT-kompatibilný, 80286 procesor
C. Operačný systém: MS-DOS version 5,0
D. Softvér: WordPerfect
2. Informácia o SEQ ID.NO’.l:
i) Charakteristiky sekvencie
A. Dĺžka: 5 aminokyselín
B. Typ: aminokyselina
D. Topológia: lineárna ii) Typ molekuly: peptid xi) Opis sekvencie: SEQ ID. NO: 1:
Xaa Val Xaa Xaa Xaa
2. Informácia o SEQ ID. NO: 2:
i) Charakteristiky sekvencie
A. Dĺžka: 5 aminokyselín
B. Typ: aminokyselina
D. Topológia: lineárna ii) Typ molekuly: peptid xi) Opis sekvencie: SEQ ID. NO:2 :
Xaa íle Xaa Xaa Xaa
2. Informácia o SEQ ID. NO:3 :
i) Charakteristiky sekvencie
A. Dĺžka: 5 aminokyselín
B. Typ: aminokyselina
D. Topológia: lineárna ii) Typ molekuly: peptid xi) Opis sekvencie: SEQ ID. NO:3 :
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2. Informácia o SEQ ID. NO:4:
i) Charakteristiky sekvencie
A. Dĺžka: 6 aminokyselín
B. Typ: aminokyselina
D. Topológia: lineárna ii) Typ molekuly: peptid xi) Opis sekvencie: SEQ ID. NO:4 :
Xaa Val Xaa Xaa Pro Xaa

Claims (4)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptidy všeobecného vzorca (I)
    R'R2N - CHX - CO-A-B - D - E-(F)fK, kde znamená
    R1 metyl, etyl alebo izopropyl,
    R2 vodík, metyl alebo etyl,
    R’-N-R2 spolu pyroilidínový kruh,
    A zvyšky valyl, izoleucyl, leucyl, 2-terc-butylglycyl, 2-etylglycyl, norleucyl alebo norvalyl,
    B zvyšky N-metylvalyl, N-metylleucyl, N-metylizoleucyl, N-metylnorvalyl, N-metylnorleucyl, N-metyl-2-terc-butylglycyl, glycyl,N-metyl-3-terc-butylalanyl alebo N-metyl-2-etylglycyl,
    D zvyšky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl, 4,4-difluórprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3-metylprolyl, 4-metylprolyl alebo 5-metylprolyl,
    SK 282466 Β6
    E zvyšky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl alebo tiazolidín-4-karbonyl,
    F zvyšky valyl, 2-terc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, alanyl, β-alanyl alebo aminoizobutyroyl,
    X alkyl výhodne s 2 až 5 atómami uhlíka, cyklopropyl alebo cyklopentyl,
    10 alebo 1 a
    K alkoxyskupinu výhodne s 1 až 4 atómami uhlíka, benzyloxyskupinu alebo nesubstituovanú aminoskupinu, -NH-Ci.12-alkyl, -NH-C(CH3)2CN, -NH-C(CH3)2CCH, -NH-C(CH3)2C=CH2, -NH-C(CH3)2CH2CH2OH, -nh-C(CH3)2CH2OH, -NH-C3.8-cykloalkyl, -NH-[3,3,0]-bicyklooktyl, norefedryl, norpseudoefedryl, -NH-chinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-CH2-benzimidazolyl, -NH-adamantyl, -NHCH2-adamantyl, -NH-CH(CH3)-fenyl, -NH-C(CH3)2-fenyl, -N(C1.4-alkoxy-CM-alkyl, -N(C1.4-alkoxy)-CH2-fenyl, -N(Cw-alkoxy)-fenyl, -N(CH3)OBzl, -NH-(CH2)v-fenyl (v=0,1,2,3), -NH-(CH2)m-naftyl (m=0,l), -NH-(CH2)W-benzhydryl (w=0,l alebo 2), -NH-bifenyl, -NH-pyridyl, NH-CH2-pyridyl, -NH-CH2-CH2-pyridyl, -NH-benzotiazolyl, -NH-benzoizotiazolyl, -NH-benzopyrazolyl,-NH-benzoxazolyl, -NH-(CH2)m-fluorenyl (m=0,l), -NH-pyrimidyl, -NH-(CH2)m-indanyl (m=O,l), -NH-(CH2CH2O)y-CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -NH-(CH2CH2O)y-CH2CH3 (y=0,1,2,3,4,5), -(CH2CH2O)y-CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -(CH2CH2O)y-CH2CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -NCH3-NH-C6H5, -NCH3-NH-CH2-C6H5; alebo K znamená r~\ r~\ \j -vy ~\j -vy -v/
    COOEt
    Ý- C v A --(j “Vc «.C .. Az “Aa © -¾ y -«h! “VCi AO Auo
    alebo ich soli s fyziologicky vhodnými kyselinami.
  2. 2. Peptidy všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 alebo ich soli na použitie v medicíne, zvlášť na ošetrovanie onkologických ochorení.
  3. 3. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje terapeuticky účinné množstvo peptidu všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 a farmaceutický vhodný nosič.
  4. 4. Použitie peptidov všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 na prípravu liečiva na ošetrovanie nádorov cicavcov.
SK1653-97A 1995-06-07 1996-06-03 Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie SK282466B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/472,453 US5831002A (en) 1992-05-20 1995-06-07 Antitumor peptides
PCT/EP1996/002392 WO1996040751A1 (en) 1995-06-07 1996-06-03 Novel dolastatin derivatives, their preparation and use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK165397A3 SK165397A3 (en) 1998-10-07
SK282466B6 true SK282466B6 (sk) 2002-02-05

Family

ID=23875567

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1653-97A SK282466B6 (sk) 1995-06-07 1996-06-03 Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Country Status (33)

Country Link
US (1) US5831002A (sk)
EP (2) EP0871656B1 (sk)
JP (2) JP4221062B2 (sk)
KR (2) KR100437985B1 (sk)
CN (2) CN1182154C (sk)
AR (2) AR003427A1 (sk)
AT (2) ATE224910T1 (sk)
AU (2) AU725170B2 (sk)
BG (2) BG102125A (sk)
BR (2) BR9609423A (sk)
CA (2) CA2219818C (sk)
CO (2) CO4700527A1 (sk)
CZ (2) CZ293682B6 (sk)
DE (2) DE69623992T2 (sk)
DK (2) DK0832104T3 (sk)
ES (2) ES2186783T3 (sk)
HR (2) HRP960257A2 (sk)
HU (2) HU228071B1 (sk)
IL (2) IL122215A (sk)
MX (2) MX9709147A (sk)
MY (2) MY119042A (sk)
NO (2) NO318384B1 (sk)
NZ (2) NZ310444A (sk)
PL (2) PL185762B1 (sk)
PT (2) PT871656E (sk)
RO (2) RO118953B1 (sk)
SI (2) SI0832104T1 (sk)
SK (1) SK282466B6 (sk)
TR (2) TR199701545T1 (sk)
TW (2) TW508357B (sk)
UA (2) UA46776C2 (sk)
WO (2) WO1996040751A1 (sk)
ZA (2) ZA964710B (sk)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807984A (en) * 1995-11-09 1998-09-15 Basf Aktienegesellschaft Oligopeptides, the preparation and use thereof
TW474946B (en) * 1995-12-15 2002-02-01 Basf Ag Novel compounds, the preparation and use thereof
US20010009901A1 (en) * 1996-12-11 2001-07-26 Basf Aktiengesellschaft Germany Antineoplastic peptides
US5965537A (en) * 1997-03-10 1999-10-12 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives with carbonyl and heterocyclic functionalities at the C-terminus
US6103698A (en) * 1997-03-13 2000-08-15 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
US6143721A (en) * 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US6015790A (en) * 1997-10-06 2000-01-18 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US6395897B1 (en) 1999-03-02 2002-05-28 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Nitrile compounds useful as reversible inhibitors of #9 cathepsin 5
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
AU775373B2 (en) 1999-10-01 2004-07-29 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US7018642B2 (en) 2001-04-27 2006-03-28 The Procter & Gamble Company Compounds, compositions, and methods for controlling biofilms
AU2002359792A1 (en) * 2001-12-18 2003-06-30 Proteologics, Inc. Methods and compositions for the inhibition of viral release
WO2003072754A2 (en) * 2002-02-27 2003-09-04 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
WO2006013552A2 (en) 2004-08-02 2006-02-09 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Articles of peptide nanostructures and method of forming the same
CA2607940C (en) 2005-05-18 2009-12-15 Aegera Therapeutics Inc. Bir domain binding compounds
EP1924245A2 (en) * 2005-08-19 2008-05-28 Government of the United States of America, Represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Topical formulations of histone deacetylase inhibitors and methods of using the same
EP1973928A2 (en) * 2005-10-11 2008-10-01 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Self-assembled fmoc-ff hydrogels
US8163792B2 (en) 2006-05-16 2012-04-24 Pharmascience Inc. IAP BIR domain binding compounds
JP5452223B2 (ja) * 2006-07-24 2014-03-26 テトラロジック ファーマシューティカルズ コーポレーション Ｉａｐ阻害剤
CN101674835B (zh) * 2007-04-12 2013-12-11 台湾神隆股份有限公司 制备加兰他敏的方法
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
US8283372B2 (en) 2009-07-02 2012-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corp. 2-(1H-indol-3-ylmethyl)-pyrrolidine dimer as a SMAC mimetic
SG10201501095WA (en) 2010-02-12 2015-04-29 Pharmascience Inc Iap bir domain binding compounds
CA2822556A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc Macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
CN103380132B (zh) 2010-12-30 2016-08-31 益安药业 菲啶大环丙型肝炎丝氨酸蛋白酶抑制剂
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
EA201391756A1 (ru) * 2011-05-27 2014-05-30 Амбркс, Инк. Композиции, содержащие, способы, включающие, и применение производных доластатина, связанных с неприродными аминокислотами
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
MX2024002571A (es) 2021-09-03 2024-03-20 Toray Industries Composicion farmaceutica para tratamiento y/o prevencion de cancer.

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4879278A (en) * 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
DK0934950T3 (da) * 1991-08-09 2002-07-29 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Tetrapeptidderivat
CZ292612B6 (cs) * 1992-05-20 2003-11-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Peptid s protirakovinnou aktivitou, jeho použití a farmaceutický prostředek s obsahem takového peptidu
US5530097A (en) * 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9801910A3 (en) 1999-06-28
ATE224910T1 (de) 2002-10-15
IL122215A (en) 2001-08-26
DK0871656T3 (da) 2003-01-27
AU725164B2 (en) 2000-10-05
SK165397A3 (en) 1998-10-07
DE69623472T2 (de) 2003-08-21
NO975710D0 (no) 1997-12-05
NO975710L (no) 1998-02-02
MY124487A (en) 2006-06-30
US5831002A (en) 1998-11-03
PT871656E (pt) 2002-12-31
CA2219819A1 (en) 1996-12-19
HU228071B1 (hu) 2012-09-28
UA46775C2 (uk) 2002-06-17
CZ376397A3 (cs) 1998-06-17
PL185763B1 (pl) 2003-07-31
EP0871656B1 (en) 2002-09-25
ES2188759T3 (es) 2003-07-01
CN1182154C (zh) 2004-12-29
JPH11504652A (ja) 1999-04-27
CN1187198A (zh) 1998-07-08
RO118953B1 (ro) 2004-01-30
UA46776C2 (uk) 2002-06-17
DK0832104T3 (da) 2003-01-06
HU228073B1 (hu) 2012-09-28
KR19990022582A (ko) 1999-03-25
PL185762B1 (pl) 2003-07-31
PL323723A1 (en) 1998-04-14
TR199701545T1 (xx) 1998-04-21
DE69623992D1 (de) 2002-10-31
TR199701544T1 (xx) 1998-03-21
IL122216A0 (en) 1998-04-05
CA2219818C (en) 2008-05-20
NZ310443A (en) 1999-10-28
SI0871656T1 (en) 2003-08-31
ZA964710B (en) 1997-12-08
CN1187199A (zh) 1998-07-08
BR9609423A (pt) 1999-06-29
IL122216A (en) 2002-02-10
IL122215A0 (en) 1998-04-05
MX9709146A (es) 1998-03-31
BG102125A (en) 1998-09-30
DE69623472D1 (de) 2002-10-10
NO317670B1 (no) 2004-11-29
EP0832104B1 (en) 2002-09-04
CZ376597A3 (cs) 1998-06-17
WO1996040751A1 (en) 1996-12-19
WO1996040752A1 (en) 1996-12-19
ZA964711B (en) 1997-12-08
AR003136A1 (es) 1998-07-08
NO975711D0 (no) 1997-12-05
NO975711L (no) 1998-01-30
HUP9801817A3 (en) 1999-06-28
DE69623992T2 (de) 2003-05-22
TW508357B (en) 2002-11-01
AR003427A1 (es) 1998-08-05
NO318384B1 (no) 2005-03-14
HUP9801817A2 (hu) 1998-11-30
BR9609424A (pt) 2000-03-28
CO4700526A1 (es) 1998-12-29
NZ310444A (en) 1999-11-29
JP3957751B2 (ja) 2007-08-15
PL323726A1 (en) 1998-04-14
SI0832104T1 (en) 2003-08-31
AU725170B2 (en) 2000-10-05
CZ293682B6 (cs) 2004-07-14
KR100437986B1 (ko) 2004-09-18
MY119042A (en) 2005-03-31
PT832104E (pt) 2002-12-31
KR19990022583A (ko) 1999-03-25
HRP960257A2 (en) 1998-02-28
CN1182153C (zh) 2004-12-29
HRP960277A2 (en) 1997-10-31
CA2219818A1 (en) 1996-12-19
TW424096B (en) 2001-03-01
EP0832104A1 (en) 1998-04-01
ES2186783T3 (es) 2003-05-16
MX9709147A (es) 1998-03-31
EP0871656A1 (en) 1998-10-21
JPH11504653A (ja) 1999-04-27
KR100437985B1 (ko) 2004-09-18
AU6124296A (en) 1996-12-30
ATE223431T1 (de) 2002-09-15
JP4221062B2 (ja) 2009-02-12
HUP9801910A2 (hu) 1999-01-28
CZ293683B6 (cs) 2004-07-14
AU6124196A (en) 1996-12-30
CA2219819C (en) 2008-05-20
BG102152A (en) 1998-09-30
CO4700527A1 (es) 1998-12-29
RO119783B1 (ro) 2005-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK282466B6 (sk) Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
AU679479B2 (en) Dolostatin analog
US7662786B2 (en) Dolastatin 15 derivatives
IL166853A (en) Antineoplastic peptides, their preparation and various uses thereof
SK282467B6 (sk) Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
AU775090B2 (en) Antineoplastic peptides

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Assignment and transfer of rights

Owner name: ABBVIE DEUTSCHLAND GMBH & CO. KG, WIESBADEN, DE

Free format text: FORMER OWNER: ABBOTT GMBH & CO. KG, WIESBADEN, DE

Effective date: 20141020

MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20150603