TW424096B - Novel peptides, the preparation and use thereof - Google Patents

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424096 . A7 B7 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 五、發明説明（1 ) - 已知從海洋生物來源中分離出的肽類，如多拉斯塔丁_1〇 (D〇laStatin-10)(美國專利第4，S16,444號）和多拉^塔丁 _ 1 5 (I洲專利-A - 39855 8號），顯示出有效的細胞生長抑制 活性（參見：Bi〇chem. Pharmacology 40，第 8號，1859-64， 1990 ; J‘ Natl. Cancer Inst. 85，483-88 ’ 1993 ,並在本文中 引用以作爲參考）。依據在活體内實驗性質之腫瘤系統中令 人感興趣的結果，目前正在進行這些天然產物的進一步臨 床前評估，以便對癌症患者開始進行臨床研究。然而，天 然產物亦有缺點，如在含水溶劑中有不佳的溶解性，且合 成需要筇貴的材料。 本文中描述的本發明’提供了新穎的肽類及其衍生物， 其對於治療贅生物之疾病’提供經過改良、可與多拉斯塔 丁 -1 5相比擬的治療效力。此外，本發明之化合物可按照 下文的詳細説明來便利地合成。 本發明之化合物包括式I之新穎肽類 R1R2N-CHX-CO-A-B-D-E-(F)t-K I其中 R1 爲甲基、乙基或異丙基； R2 爲氫、曱基或乙基； W-N-R2可一起形成p比洛淀環： A 爲纈胺醯基、異白胺醯基、白胺醯基、2 -第三-丁 基甘胺醯基、2 -乙基甘胺醯基、正白胺醯基或正 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（21〇Χ^7公釐） 424096 A7 一 __B7 五、發明説明（2 ) 纈胺醯基殘基； B 爲N -甲基-纈胺醯基、-白胺醯基、-異白胺醯基、 -正纈胺醯基、-正白胺醯基、-2 -第三丁基甘胺醯 基、-3-第三-丁基丙胺醯基或-2 -乙基甘胺醯基殘 基； D 爲3，4-脱氫脯胺醯基、4-氟脯胺醯基、4,4-二氟 脯胺醯基、氮雜環丁二烯-2-羰基、3 -甲基脯胺醯 基、4-甲基脯胺醯基或5-甲基脯胺醯基殘基； E 爲脯胺醯基、高脯胺酿基、題基脯胺酿基或〃塞岭 烷-4-羰基殘基； F 爲纈胺醯基、2-第三-丁基甘胺醯基、異白胺醯基 、白胺醯基、2 -環己基甘胺醯基、正白胺醯基、 正纈胺醯基、新戊基甘胺醯基、丙胺醯基、；5-丙 胺醯基或胺基異丁醯基殘基； X 爲烷基（較佳的是c2_5)、環丙基或環戊基； t 爲0或1 ;且 κ 爲貌氧基（較佳的是Ci-4)，苄氧基或一個經取代 或未經取代的胺基部份； 以及其與生理學上可容忍之酸類形成的鹽類。本發明亦提 供製備式I化合物的方法、與藥學可接受之載劑在一起並含 有這類化合物的醫藥組合物，以及利用同樣事物來治療哺 乳動物之癌症的方法。 特定而言，K可以是Cbf烷氧基、苄氧基、-NH2、-NH-Cb12-烷基、-NH-C(CH3)2CN、-NH-C(CH3)2CCH、 ______-_5-____ 本紙張尺度適用中國標準（CNS ) A4規格（210X297公"ϋ ' ~ ~~ hr. I---------I-- -( (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 40 96 A7 B7 五、發明説明（3 ) -NH-C(CH3)2C = CH2 ' -NH-C(CH3)2CH2CH2OH --NH-C(CH3)2CH2OH、-NH-C3-8-環烷基、-ΝΗ· [3,3,0]-二環辛基、正麻黃基（norephedryl)、正假麻黃基 、-NH-喳啉基、吡呼基、-NH-CH2-苯幷咪唑基、 -NH-金鋼烷基、-NH-CH2-金鋼烷基 ' -NH-CH(CH3)-苯基、-NH-C(CH3)2-苯基、-IvKCu-烷氧基烷 基、烷氧基）-CH2-苯基、-NiCiM•烷氧基）-苯 基、-N(CH3)OBzl、-NH-(CH2)V-苯基（v = 0、1、2或 3) 、-NH-(CH2)m-萘基（m = 0 或 1)、-1^11-((：112)%,-二苯甲 基（w = 0、1或 2)、-NH -二苯基、-NH-p比峻基、-NH-CH2 -吡啶基、-NH-CH2-CH2·吡啶基、-NH -苯并嘍唑基 、-NH-苯并異嘧唑基、-NH -苯并吡唑基、-NH -苯幷哼唑 基、-NH-(CH2)m -苐基（m = 0 或 1)、-NH-嘧啶基、-NH-(CH2)m-氫茚基（m = 〇 或 1)、·ΝΗ-((：Η2(：Η20)γ-(：Η3 (y = 0、1、2、3、4或 5)、-NH-(CH2CH20)y-CH2CH3 (y = 0、1、2、3、4或 5)、-(CH2CH2〇)y-CH3(y = 〇、t 、2、3、4 或 5)、-(CH2CH2〇)y-CH2CH3(y = 0、1 ' 2、 3、4或 5)、-NCH3-NH-C6H5、-NCH3-NH-CH2-C6H5 :或K爲 — )裝 訂rijt * ' 1 (諳先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 • 6 - 本纸張尺度.適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） 424096 A7 , B7 五、發明説明（4 ) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2I0X297公嫠） 1^1- ...... - - Ji— 一*^ϋ.- 二：ί ^ϋ· Bn m、一SJ- D4I n .^n I- -- - -- , y 1 一， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 424096 A7 B7 五、發明説明（5 )

CH,

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--- ί -1 J! - - n I - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（2]0X297公釐) 424096 A7 B7 五'發明説明（ 6

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CH, H,C H,C ---------重— * ^ (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁}

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、1Τ 經濟郜中央標準局員工消費合作社印製 CH,

本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（2Ϊ0Χ297公釐） 424096 A7 B7 五、發明説明（7 )

* 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 最好是式I化合物中，取代;^RhRlA'B'D'E'X ' F和t具有下列之意義 R1 爲甲基或乙基： R2 •爲氫、甲基或乙基；/ A 爲纈胺醯基、異白胺基'2 -第三-· 丁基甘胺酿基 殘基； '一 B 爲H -曱基-纈胺醯基、-異白胺醯基或-2 -第三-丁 基甘胺醯基璋基； D 爲3,4-脱氫'脯胺i基、4-氟脯胺醯基 '氮雜環丁 二晞-2-羰基、_3 -甲基脯胺醯基或5 -甲基脯胺酿基 t殘基； - E 爲脯胺醯基、高脯胺醯基、羥基脯胺醯基或嘍峻 烷-4-羰基殘基； F . 爲D-纈胺醯基、2’-第三·丁基甘胺醯基、D -異白胺 醯基、D -白胺醯基或胺基異丁醯基殘基； X 爲-CH(CH3)2、_(：((：113)3或_(：11(<：113)(：^12(：113 5 t 爲0或1 ; 關於K之較佳定義爲： . •10· 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS)A4規格（2丨OX 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再蛾寫本頁) 、-° ι 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 Α7 Β7五、發明説明（8 ) oc(ch3)3、-NHCH3、-NHCH2CH3、 -nh(ch2)2ch3、-NH(CH2)3CH3、-NH(CH2)4CH3、 -NH(CH2)5CH3 > -NH(CH2)6CH3 ' -NH(CH2)7CH3 ' NHCH(CH3)2、-NHCH(CH3)CH2CH3、 -NHCH(CH3)CH2CH2CH3、-NHCH(CH2CH3)2、 -NH(CH2CH2CH3)2、-NHC(CH3)3、 -NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3 ' -NHCH(CH3)CH(CH3)2 > -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2 、-NHCH(CH3)C(CH3)3、-NH-環丙基、-NH-環丁基 、-NH -環戊基、-NH -環己基、-NH -環庚基、-NH -環辛 基、-NH-二環[3,3,0]辛基、-N(CH3)OCH3、 -N(CH3)OCH2CH3、-N(CH3)OCH2CH2CH3、 -N(CH3)OCH(CH3)2、-N(CH2CH3)OCH3、 -N(CH2CH3)OCH2CH3 ' -N(CH(CH3)2)OCH3 > -N(CH3)OCH2C6H5、-N(OCH3)CH2-C6H5、 -N(CH3)OC6H5 > -NH-CH2-C6H5%-NH-C(CH2)2C6H5、-nh_(ch2)3c6h5、-nhch(ch3)c6h5、NHC(CH3)2C6H5、-NHC(CH3)2CH2CH3、-nhc(ch3)(ch2ch3)2、_nhch(ch3)ch(oh)c6h5 、-nhch2_環己基、-nh-ch2cf3、-nhch(ch2f)2、 -NHC(CH3)2CH2CH2OH ' -NH(CH2CH20)2CH2CH3、-nhc(ch3)2ch(ch3)2、_nhc(ch3)2cn、_NHC(CH3)2CCH、正麻黃基、正假麻黃基、-NH-4啉基 、-NH-吡畊基、-NH-·金鋼烷基（2)、-NH-金鋼烷基（1)、 ___ -11 - 本紙悵尺度適用中國國家標準（CNS > Λ4規格（210X2Q7公楚〉 · ---------变— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -0 424096 A7 , __B7_ 五、發明説明（9 ) ' -NH-CH2-金鋼烷基、-NH-CH2”莕基、-NH-二苯甲基、 -N Η -二苯基、·ΝΗ-^ 淀基、-NH-CH〗-11 比咬基、-NH_ CH2-CH2-吡啶基、-NH-苯幷p塞唑基、-NH-苯幷異嘍唑 基、-NH-苯幷吡唑基、-NH-苯彳幷呤唑基、-NH-葬基、 -NH-嘧啶基、-NH-CH2-(4-甲•基）·嘍唑基（2)、-NH-CH2-呋喃基（2)、-NHCH2-P塞吩基（2)、-NH-CH2-(5-甲 基）嘍吩基（i)、- N Η -嘍唑基（2 )、 N Η -異哼唑基（3 )、 -ΝΗ·(3-甲基）異哼唑基（5)、-ΝΗ-(3-甲基）異嘍哇基（5) 、-ΝΗ-(2-三氟甲基‘)嘧二唑基（5)、-ΝΗ，（2-環丙基）嘍二 唑基（5)、-NHC(CH3)2C = CH2,或 Κ 可以是 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) )裝·

訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 這些實例解釋了本發明，但並未企圖限制本發明之範圍 〇 式I之肽類係由L-胺基酸構成，但F也可以是D -胺基酸。 該新穎化合物可以與生理學上可容忍之酸_一起形成之 鹽類的形式存在，像是：氫氣酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸 、鱗酸、甲磺酸、醋酸 '甲酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸 ___·12-. 本紙張尺度適中( CNS ) Λ4規輅（2!0Χ 297公釐） 424096 A7 _______ B7 --------------- 五、發明説明（） 、蘋果酸、琥拍酸、丙二酸、硫酸、L_穀胺酸、L_天冬胺 酸、丙酮酸、黏酸、苯甲酸、葡萄糖醛酸 '草酸、抗壞血 酸和乙醯甘胺酸。 該新穎的化合物，可藉著肽化學的已知方法來製備。因 此可從胺基酸連續集合，或藉著連結適當的小肽片段來组 合成肽類。在連續集合時，由肽鏈的C終端開始，藉著每 次一個胺基酸逐步地延伸。在片段偶聯時，可以將不同長 度的片段連結在一起，可藉著由胺基酸連續集合，或自己 藉著片段偶聯而依序獲得這些片段。 在連續集合和片段偶聯中，必須藉著形成醯胺連結來連 接這些單元。關於此點，酵素和化學方法都是適合的。 形成酿胺連結的化學方法，由]Viueller，Methoden der 〇^钍1^5。1^11(：1^1^6第父\//2册’第1至 364 頁，1'1^611^ Verlag, Stuttgart, 1974 ; Stewart, Young, Solid Phase Peptide Synthesis,第 31 至 34 頁，第 71 至 82 頁，Pierce

Chemical Company, Rockford, 1984 ； Bodanszky, Klausner, Ondetti，Peptide Synthesis,第 8 5 至 128 頁，John Wiley &

Sons, New York，1976，以及其他在肽化學中的標準作業， 詳細地描述。特別喜愛的是疊氮化合物法、對稱和混合奸 法，就地產製或預先形成活性酯，使用尿烷保護胺基酸的 N-羧基酐，並利用偶聯試劑/活化劑形成醯胺連結，特別 是二環己基碳化二亞胺（DCC)、二異丙基碳化二亞胺 (DIC)、1-乙氧羰基-2 -乙氧基-1,2 -二氫喹啉（EEDQ ) ' 1-乙基- 3- (3 -二甲胺基丙基）碳化二亞胺氫化物（EDCI) ' -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） ΙΓΙ i l·— · I-------J 裝-- (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本筲) .丨線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 經濟部中央樣隼局員工消費合作社印敢 424096 A7 __ 五、發明説明（11 ) 正丙烷瞵酸酐（PPA)、N，N-二（2·氧代_3·噚唑啶基）醯 胺磷醯氯（BOP-C1)、三-吡咯啶鳞六氟磷酸溴（pyBr〇p) 、二苯磷醯基疊氮化合物（DPP A)、凱斯特（Castr〇，s )試劑 ，（BOP，PyBop)、Ο-苯并三唑-Ν,Ν,Ν'Ν’-四甲基糖醛 鑌（uronium)鹽（HBTU)、Ο -氮雜笨幷三唑 _NNN，N，_W 甲基鹽（HATU)、二乙基磷醯氰（DEPCN)、2,5-二苯基-2,3-二氫-3-氧代-4-羥基嘧吩二氧化物（斯提格林區氏 (Steglich’s)試劑；H0TD0)和 1，Γ_ 羰基-二咪唑（cdi)。 偶聯試劑可以單獨使用，或與添加物混合使用，像是Ν，Ν _ 二甲基-4-胺基ρ比淀（DMAP)、Ν-經基-苯幷三峰（HOBt) 、N-羥基苯并三畊（HOOBt)、氮雜苯幷三唑（HOAt)、N-觀基-號珀酿亞胺（HOSu )或2 -輕基峨咬。然而在酵素肤合 成中，通常免除保護基團是有可能的，反應基團的可逆性 保護，並不意味著對於在化學合成中兩種反應劑形成醯胺 連結而言是必要的。對於化學肤合成而言，較佳的是三種 傳統的保護基技術：苄氧羰基（Z)、第三丁氧羰基（Boc) 和9-第基甲氧羰基（Fmoc)技術。在每個案例中，將在延伸 -鏈單元之胺基上基團的視作保護基。胺基酸保護基團 的詳細回顧，由有機化學方法（Mueller, Methoden der organischen Chemie )第 XV/l册’第 20至 906 頁’ Thieme Verlag，Stuttgart, 1974提供。用來集合成肽鏈的單元，可在 溶液中、在懸浮液中，或藉類似Merrifield在J. Amer. Chem. Soc. 85(1963) 2149中描述方法來進行反應。特佳的方法是 其中使用Z、Boc或Fmoc保護基技術，連績集合成肽類或 -14- _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) .M规格（2】〇X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 424096 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（12 ) -- &由片段偶聯的那些。在該Merrifieid技術中，反應劑其中 個是與不可溶之聚合支撑物（在後文中亦稱爲樹脂）相結 合。通常在聚合支撑物上引起肽類被連續集合，係使用 B 〇 c或Fmoc保護基技術，正在生長的肽鏈在c終端被共價 連結到不可溶樹脂顆粒上（參見圖1和2 )。該程序使得藉著 過/慮移除试劑和副產物成爲有可能的，並因此不需要中間 物的再結晶作用。 可將經過保護的胺基酸連接到任何適當的聚合物上，該 聚合物只需不溶於所使用之溶劑，且具有穩定的物理形式 ，而使其易於過濾。該聚合物必須含有第一個經保護之胺 基酸可以藉著共價鍵穩固定附著於其上的官能基^適合此 一目的者爲各種聚合物，例如纖維素、聚乙烯醇、聚甲基 丙烯酸酯、磺化的聚苯乙烯、氯甲基化的苯乙烯/二乙烯 基苯共聚物（Merrifield樹脂）、4 -甲基二苯甲胺樹脂 (MBHA·樹脂）、苯基乙醯胺基甲基-樹脂（pam-樹脂）、對 •苄氧基-苄基-醇-樹脂' 二苯甲基-胺-樹脂（BHA -樹脂）、 4-(羥甲基）-苯甲醯氧基-甲基·樹脂、Breipohl等人的樹脂 (Tetrahedron Letters 28 (1987 )565 ;由 BACHEM 提供）、4-(2,4·二甲氧苯基胺甲基）苯氧基-樹脂（由Novabiochem提供) 或鄰·氣三苯甲基-樹脂（由Biohellas提供）。 適用於在溶液中之肽合成者，是所有在反應條件下爲惰 性的溶劑，特別是水、Ν,Ν-二曱基肀醯胺（DMF)、二甲 亞颯（DMSO)、乙腈、二氣甲烷（DCM)、1,4-二氧六環、 四氫呋喃（THF)、N-甲基-2-吡咯啶酮（NMP)和該溶劑的 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2I0X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ¾. ,ιτ

424096 I A7 B7 五、發明説明（13 ) ~ 混合物。在聚合支撐物上的肽合成，可在所有的惰性有機 溶劑中完成’在其中所使用的胺基酸衍生物均是可溶的。 然而，較佳的溶劑額外具有樹脂_膨賬的特性，如DMF、 DCM、NMP、乙腈和DMSO，以及這些溶劑的混合物。在 完成合成之後，將該肽與聚合支撑物分開。在文獻中揭示 了 夠在其下切開各種樹腊種類的條件。最常使用的切開 反應是酸-和鈀-催化者，特別是在液態無水的氟化氫中、 在無水二氟甲續酸中、在稀釋或濃縮的三氟乙酸中的切開 作用、在THF或THF-DCM混合物中，在諸如嗎啉之類弱 鹼存在下的切開作用，或是在醋酸_二氣甲烷_三氟乙醇混 合物中的切開作用。依據選用的保護基，在切開條件下可 以保留這些或有類似的切開作用。當要完成某些衍生反應 時，肽的部份去保護可能也是有價値的。肽類在终端的 二烷基化作用可藉著下列方式來製備：昀在溶液中或在聚 合支撑物上適當之N，N-二-烷胺基酸的偶聯反應，㈧在 DMF/1%醋酸中，與樹脂結合之肽與NaCNBH3*適當之 趁或嗣的還原性烷基化作用，幻在溶液中，在醛或酮和Pd /C的存在下，肽類的氫化作用。 在本文中揭示的各種非天然存在的胺基酸，可由商業來 源獲得’或利用此項技藝中已知的方法由可購得之物質來 合成。氮雜環丁二烯-2-羧酸、3 -甲基-L-脯胺酸、5 -曱基 -L-脯胺酸，和30(；_或？1110卜保護的3,4_脱氫脯胺酸’均 是可購得的起始物質（ACROS，NOVABIOCHEM， BACHEM)。順式-和反式-4 ·氟脯胺酸，可經由panasik等 _ -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) •-----^-- 〔請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -、τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424096 經濟部中央標率扃員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（14 ) -—-

描述的方法（N. Panasik, H Eberhardt，A.i Edison, D R

Powell, R.T. Raines, Int. J. Peptide Pr〇tein Res. 44, 1994, 262-269),由羥基脯胺酸來製備。 ， 藉著對哺乳動物投予本發明化合物，可利用該化合物來 抑制或相反地治療固體腫瘤（例如肺臟、乳房、結腸、前列 腺、膀胱、直腸或子宮内膜的腫瘤），或是血液學的惡性病 (例如白血病、淋巴瘤）。 與多拉斯塔丁 -1 5相比較，該新穎化合物對酵素降解有較 強的抵抗力，是它們特殊的優點。 投藥可藉著任何傳統用於藥學上的方法，最好是用於腫 瘤學藥物的方法’包括口服和非經腸的方法，如皮下、靜 脈内、肌肉内和腹腔内的方式。 可單獨或以醫藥组合物之形式來投予該化合物，該醫藥 組合物含有式ί化合物，與適用於想要之投藥途徑的藥學可 接受之載劑一起。這類醫藥組合物可以是混合產物，也就 是説亦可以含有其他具有治療活性的成份。 對哺乳動物投藥的劑量，將含有活性成份之有效抑制-腫 瘤的量，其將依據傳统的因素，包括：所使用之特定化合 物的生理學活性；投藥的方法：接受者的年齡、健康和體 重；病徵的性質和程度；治療的頻率；其他治療的投藥； 以及想要的效果。典型的每日劑量，對於口服將約爲〇·5到 50毫克/每公斤體重，對於非經腸投藥則是約0·05到20毫 克/每公斤體重。 可以傳統的固體或液體之藥學投藥形式來投予該新顆化 _____ -17- 準（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁}

424096 A7 B7 15 五、發明説明（ «物’例如未經塗覆的或（薄膜·）塗覆的錠劑、膠囊、散劑 、顆粒、坐劑或溶液。這些係以傳統方式來產製。爲了此 —目的’可利用傳統的藥學輔助劑來處理活性物質，如錠 劑粘合劑、填料、防腐劑、錠劑崩解劑、流動調節劑、增 塑劑、濕潤劑、分散劑、乳化劑、溶劑、持續釋放的组合 物、抗氧化劑及/或推進氣體（參見Hsucker等人： Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978 ) °以此方式獲得的投藥形式通常含有i _ 9 〇重量％的 活性物質。 下列實例企圖解釋本發明。在實例中係利用已知的三個 字母的密碼來縮寫生成蛋白質的胺基酸。所使用的其他縮 窝爲：Me2Val = N，N-二甲基纈胺酸，MeVal = N-甲基纈胺 酸 ’ Z =爷氧欺基。 A.共同程序 I _在申請專利範圍第1項中提出申請的肽類，係藉著典型的 溶液合成法，利用上述的標準Z-和Boc-方法學，或是藉著 固相合成的標準方法，利用Boc和Fmoc保護基技術來合成 之0 (錆先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -ο 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 a) Fmoc保護基技術的合成循環 1. DMF沖洗 1 X ]分鐘 2. 在DMF中的20%六氩吡啶 IX 4分鐘 3. 在DMF中的20%六氫吡啶 1 X 16分鐘 4. DMF沖洗 5 XI分鐘 -18- —-——, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4规格（210X 297公釐） 424096 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印11 五、發明説明（16 ) 5. 添加預先活化、經過保護的胺基酸(藉著 在DMF中的1當量TBTU和5當量DIPEA的 1X61分鐘 活化作用），肽的偶聯反應 6. DMF沖洗 3 XI分鐘 7. 若是轉變不完全，重複偶聯反應(回到5.) 8. DMF沖洗 1 Χ8分鐘 9. 回到2. 3Χ 1分鐘 關於胺基酸和隨後的N -甲基胺基酸的偶聯反應，可利用 B0P-C1和PyBrop作爲試劑。包含雙重偶聯反應時，反 應時間相對地增加。在溶液合成作用中，對於這類偶聯反 應，分別使用經Boc-保護的胺基酸NCA’s(N-羧基酐類）、 經Z-保護的胺基酸NCA’s(N·羧基酐類），或使用三曱基乙 si氣作爲縮合劑是最有利的。 11 · N ·終端的還原性烷基化作用 按照在AI a中製備的肽-樹脂，使其在N -終端去保護（在 Ala中的步驟2-4)，然後與三-倍莫耳過量的醛或酮，在添 加3當量NaCNBH^^DMF/l%醋酸中進行反應。在反應 完成之後（負的開氏（Kaiser )試驗），以水、異丙醇、DMF 和二氣甲烷沖洗該樹脂數次。 在溶液中的還原性烷基化作用，可以藉著例如N -終端去 保護之肽類、肽片段或胺基酸，利用NaCNBH3或氫-Pd/C ，與相對應的醛或酮反應來完成之。 III.按照在lb和II中而獲得之肽-樹脂的處理 在減低的壓力下使肽-樹脂脱水，然後接受TFA/水混合 _ -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) )裝

、1T 424096 經濟部中失標準局員工消费合作社印製 A7 __B7_五、發明説明（17 ) 物（95 : 5)的處理 1，5 小時（Wade, Tregear，Howard Florey Fmoc Workshop Manual，Melbourne 1985)。然後濾去樹脂 ，並以T F A和D C M沖洗。濃縮該濾液和沖洗液，並藉著加 入二乙醚使肽沉澱出來。在冰浴中冷卻之後，濾出沉澱物 ’將其溶解於30 %醋酸中並冷凍乾燥之。 IV.在使用鄰氣三笨甲基·樹脂（由Biohellas提供）時，在室 溫下攪拌在醋酸/三氟乙醇/二氣甲烷混合物（1 : 1 : 3) 中的肽-樹脂懸浮液1小時。藉著抽吸滤去樹脂，並以裂解 溶液徹底地沖洗。在眞空中濃縮混合的濾液，並以乙醚處 理。藉著過濾或離心移除沉澱的固體，以二乙醚沖洗，並 在減低的壓力下脱水。 V ·肽類的純化作用及定出特徵 藉著凝膠層析法（交聯葡聚糖G-10，0-15 / 10%HOAc ’交聯葡聚糖LH20/MeOH)，及/或中等壓力廣析法（固 定相：HD-SIL C-8，20-45微米，100埃；移動相：梯度 A = 0‘1%TFA/ 水，B = 0.1%TFA/MeOH)，或製備用 HPLC (固定相：Waters Delta-Pak C-18，1 5 微米，1〇〇 埃； 移動相：梯度A = 0.]%TFA/水，B = 0.1%TFA/MeOH)來 完成純化作用。 藉著分析用HPLC(固定相：1〇〇2.1毫米乂丫〇八(：（：-18， 300埃；移動相：乙腈-水的悌度，以〇 1〇/〇TFa緩衝，4 〇 aC ) 來決定所得產物的純度。 藉著快速原子撞擊質譜分析和NMR光譜分析來定出其特 徵。 (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝

.IT ________ _ -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（€阳）八4規格（210父297公嫠）

4 240 9G 經濟部中央標率局員工消費合作社印裝 A7 B7_ 五、發明説明（18 ) B .特定程序 實例1(序列識別1號）

Me2Val-Val-MeVal-3,4-二脱氫脯胺醯基-Pro-醯胺 0.53克Fmoc-RINK-樹脂（代替0.46毫莫耳/克），相當於 一批0.25毫莫耳的大小，使其與下列物質各〇.4毫莫耳，按 照AI a進行反應：

Fmoc-Pro-OH ?«1〇(：-3,4-脱氫脯胺酸 Fmoc-Me Val-OH Fmoc - V al - Ο Η Fmoc -Val-OH 利用雙重偶聯反應，以作爲偶聯試劑的PyBrop將胺基酸 和隨後的N-甲基胺基酸偶聯。在完成反覆的合成循環之後 ’使該肤-樹脂接受N -終端的去保護作用（在Ala中的步驟 2 - 4 )，再進一步按照A11與含水的甲醛溶液反應，然後在 減低的壓力下脱水。按照A111使所得的樹脂接受T F A切開 作用。藉著製備用中等壓力層析法純化粗產物（132毫克）， 產生32毫克想要的純肽（10-40%A 10分鐘；40-90%A 140分鐘）。進一步藉著快速原子撞擊質譜分析定出該化合 物的特徵（[M + H] + = 548)。 實例2(序列識別1號）

Me2Val-Val-MeVal-[(2S,3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羰基 ]-Pro-苯甲醯胺 a)Z-(2S，3S)-3 -甲基·峨咯啶-2-羧酸 -21 - 本紙張尺度ϋ用中國國家標準（CNS 規格.(210 X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) )裝· 訂 424093 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 ____B7_ 五、發明説明（19 ) 將1.5克（2S，3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羧酸（11.6毫莫耳）溶 解於4毫升水和2.33毫升5]\[1^011中。在4。(：下，在1小時 内加入2.12毫升氣甲酸芊酯（Z-C1 ; 12.8毫莫耳）和6.5毫升 2N HaOH。在室溫下攪拌反應混合物過夜之後，將ρ η値調 整到10。以二氣甲烷（4χ)萃取液層，利用5Ν HC1將pH値 調整到2，並以二氣曱烷（2x)萃取。將混合的有機萃取物 覆以硫酸鎂脱水’並在眞空中蒸發，得到1,75克油狀的想 要產物。 b) Z-(2S，3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羰基-L-脯胺醯基苯甲醯 胺 將1.75克Z-(2S,；3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羧酸（6.62毫莫耳） 和1,59克脯胺酸苯甲醯胺氮氯化物（6.62毫莫耳）溶解於66 毫升二氣甲烷中，並冷卻至4°C。在加入0.89毫升N -甲基 嗎啉（7.94毫莫耳）、0.304克HOBt(2.21毫莫耳）和1.28克 EDCI (6.62毫莫耳）之後，在室溫下擾拌反應混合物過夜， 以150毫升二氣甲娱:稀釋，並以飽和的碳酸氫鈉溶液（3χ) 、水（lx)、5%檸檬酸（3χ)、水（lx)和飽和的NaCl(lx)沖 洗。將有機層覆以硫酸鎂脱水，並在減低的壓力下濃縮， 產生2.63克高黏性的油。 c) (2S，3S)-3·甲基·吡咯啶-2-羰基*L -脯胺醯基苯甲醯胺 將2.63克Z-(2S，3S)-3-甲基·吡咯啶-2-羧基-L-脯胺醯 基苯甲醯胺（5.8毫莫耳）溶解於43毫升的甲醇中。在加入 105毫克1 〇 %鈀/活性碳之後，使反應混合物氫化過夜。 過濾並蒸發至無水，得到1.88克去保護的二肽。 _ -22-___________ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS〉Λ4規格（210X297公ΪΊ ~ — .1 I I - I I ' 各— I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -s 424096 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2{ϊ ) d) Z-MeVal-[(2S，3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羰基]-Pro-笨 甲醯胺 將 1.54克Z-MeVal-〇H(5.8 毫莫耳）和 1.88 克（2S，3S)-3-甲基-吡咯啶-2-羧基-L-脯胺醯基笨甲醯胺（5.8毫莫耳）溶 解於58毫升二氣甲烷中，並冷卻至4X：。在加入0.78毫升 N -甲基嗎啉（6.96毫莫耳）' 0.266克的HOBt( 1.93毫莫耳） 和M2克EDCI(5.8毫莫耳）之後，在室溫下攪拌反應混合物 過夜，以120宅升二氣甲境> 稀釋，並以飽和的碳酸氫納溶 液沖洗一次（3x)、水（lx)、5%檸檬酸（3x)、水（lx)和飽 和的NaCl( lx)沖洗。將有機層覆以硫酸鎂脱水，並在減 低的壓力下濃縮，產生3.01克無水白色泡沫狀的產物。 e) MeVal-[(2S，3S)-3_甲基吡咯啶_2·羰基]-Pro -苯甲醯 胺 將3.01克的2-^^\^1-[(28,33)-3-甲基-吡咯啶_2-羰基] -Pro-苯曱醯胺（5.33毫莫耳）溶解於39毫升甲醇中。在加 入9 6毫克1 0 %鈀/活性碳之後，使反應混合物氫化3小時 。過濾並蒸發至無水，得到2.18克澄清油狀的去保護之三 肽0 f) Z-Val-MeVal-[(2S，3S)-3-曱基比咯咬-2_羰基]-

Pro-苯甲酿胺 將1.28克Z-Val-OH(5.11毫莫耳）溶解於1〇毫升二氣甲 烷中。在加入0,73毫升三乙胺（5.37毫莫耳）並冷卻至_1〇1 後，慢慢地加入0.66毫升三甲基乙醯氣（5.3 7毫莫耳）。在_ 1 0°C下撥拌該混合物1.5小時，隨後加入在1 〇毫升二氣甲 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2]OX297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁〕 -··*

424096 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（21 ) 烷中的2.18克MeVal-[(2S,3S)-3 -甲基-吡咯啶_2-羰基]-Pro-苯甲醯胺（5.11毫莫耳）和0.73毫升三乙胺（5.37毫莫耳） 的溶液。並以飽和的破酸氫納（3x)、水（ΐχ)、5%檸檬酸 (3 X)、水（1 X)和飽和的N a C1 (1 X)沖洗。將有機層覆以硫 酸鎂脱水，並眞空濃縮以產生2 · 75克乾燥泡沫體之產品。 g) Val-MeVa】-[(2S，3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羰基]-Pro-苯甲醯胺 將 2.75 克Z-Val-MeVal-[(2S,3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羰 基]-Pro-苯甲醯胺（4.13毫莫耳）溶解於30毫升甲醇中。在 加入0.34毫升濃HC1(4.13毫莫耳）和78毫克1〇%把/活性 碳之後，使反應混合物氫化3小時。過濾並蒸發至無水， 得到2.23克無水白色泡沫狀的去保護三肽。進一步將粗產 物溶解於5 0毫升水中，並利用IN HC1將ρ Η値調整到2 - 3。 以二氯甲烷（3χ)萃取液層，利用5Ν NaOH調整到pH 10， 並進一步以二氣甲烷（3x)萃取。將混合的有機萃取物覆以 硫酸鎂脱水，並在減低的壓力下濃縮，產生1.71克去保護 的四肽苯甲醯胺。 h) Me2Val-Val-MeVal-[(2S，3S)-3 -甲基·ϊτ比哈遠-2-羰 基]-Pro-苯甲醯胺 將0.47克的Me2Val-OH(3,24毫莫耳）和1.71克的Val-MeVal-[(2S，3S)-3 -甲基-吡咯啶-2-羰基]_ρΓ0·苯甲醯胺 (3.24毫莫耳）溶解於3 2毫升無水D M F中。在冷卻至4 °C之 後，加入1.07毫升DEPCN (6.48毫莫耳）和1.88毫升三乙胺 (12.96毫莫耳）。在室溫下攪拌反應混合物過夜，並在減低 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉Λ4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

T 424096 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 的壓力下蒸發掉DMF。將殘餘物溶解於100毫升二氯甲烷 中，並以飽和的碳酸氫朝（3x)、水（lx)、5 %檸檬酸（3x) 、水（lx)和飽和的NaCl(lx)沖洗。將有機層覆以硫酸鍰 脱水，並在減低的壓力下濃縮，產生0.88克無色油狀的產 物。將粗產物溶解於沸騰的二異丙醚中，並使其在冷卻時 沉澱出來。收集沉澱物並將其脱水，產生0.56克的純產物 。進一步藉快速原子衝擊質譜定出該化合物的特徵 ([M + H] + = 655.6)。 製備下列的化合物，並可根據實例1和2來製備之： 3 . Xaa Val Xab Xac Xad 4. Xaa Val Xab Xac Xae 5 . Xaa Val Xab Xac Xaf 6 . Xaa Val Xab Xac Xag 7 . Xaa Val Xab Xac Xah 8. Xaa Val Xab Xac Xai 9. Xaa Val Xab Xac Xak 10. Xaa Val Xab Xac Xal 1 1 . Xaa Val Xab Xac Xam 1 2 . Xaa Val Xab Xac Xan 1 3 . Xaa Val Xab Xac Xao 1 4 . Xaa Val Xab Xac Xap 1 5 . Xaa Val Xab Xac Xaq 16. Xaa Val Xab Xac Xar 17. Xaa Val Xab Xac Xas -25- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2】Ox297公釐) 424096 A7 B7 五、發明説明（) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 18. Xaa Val Xab Xac Xat 19. Xaa Val Xab Xac Xat 20. Xaa Val Xab Xac Xav 2 1. Xaa Val Xab Xac Xaw 22. Xaa Val Xab Xac Xax 23 . Xaa Val Xab Xac Xay 24. Xaa Val Xab Xac Xaz 25 . Xaa Val Xab Xac Xba 26. Xaa Val Xab Xac Xbb 2 7. Xaa Val Xab Xac Xbc 28. Xaa Val Xab Xac Xbd 29. Xaa Val Xab Xac Xbe 3 0. Xaa Val Xab Xac Xbf 3 1 . Xbg Val Xab Xac Xar 3 2 . Xbg Val Xab Xac Xas 33. Xbh Val Xab Xac Xar 34. Xbh Val Xab Xac Xas 3 5. Xaa lie Xab Xac Xar 3 6. Xaa He Xab Xac Xas 3 7. Xaa Xbk Xab Xac Xar 3 8. Xaa Xbk Xab Xac Xas 39. Xaa Val Xbi Xac Xar 40. Xaa Val Xbi Xac Xas 4 1. Xaa Val Xab Xac Xbl -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ;裝'

、1T 424096 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（24 ) 42. Xaa Val Xab Xac Xbm 43 . Xaa Val Xab Xac Xbn 44. Xaa Val Xab Xbo Xae 45. Xaa Val Xab Xbo Xbp 46. Xaa Val Xab Xbo Xar 47. Xaa Val Xab Xbo Xas 48. Xaa Val Xab Xbo Xbm 49. Xaa Val Xab Xbq Xae 50. Xaa Val Xab Xbq Xar 5 1. Xaa Val Xab Xbq Xas 52. Xaa Val Xab Xbq Xbm 53 . Xaa Val Xab Xbr Xbp 54. Xaa Val Xab Xbr Xae 55 . Xaa Val Xab Xbr Xas 5 6. Xaa Val Xab Xbr Xar 57. Xaa Val Xab Xbs Xae 58. Xaa Val Xab Xbs Xas 59. Xaa Val Xab Xbs Xar 60. Xaa Val Xab Xac Xbu 6 1 . Xaa Val Xab Xac Xbt 62. Xaa Val Xab Xbq Xbu 63 . Xaa Val Xab Xbq Xbt 64 . Xaa Val Xab Xac Pro Xbv 65. Xaa Val Xab Xac Pro Xbw -27- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） 424096 A7 B7五、發明説明（25 ) 6 6. Xaa Val Xab Xac Pro Xbx 67. Xaa Val Xab Xac Pro Xby 68. Xaa Val Xab Xac Pro Xbz 64. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv 65. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbw 66. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbx 67. Xaa Val Xab Xbq Pro Xby 68. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbz 69. Xaa Val Xab Xbo Xaz 70. Xaa Val Xab Xbq Xaz 71 . Xaa Val Xab Xbq Xbn 72 . Xaa Val Xab Xbo Xbn 在下列表格中提供 已經 .合成之新穎化合物的M S -特徵之實 例。 實例 快速原子衝擊MS分析 [編號] [分子量（測量値）] 45. 627 53 . 655 I--------言-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 表I -根據實例1和2製備之化合物的序列確認 化合物編號 序列識別編號 1-34 > 39-63 - 69-72 1 35、36 2 __128J_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210 X Μ7公釐） 24096 A7 B7 五、發明説明 26 37 ' 38 64-68 3 4 在摘要中的符號Xaa有下列之意義 Xaa: N，N -二甲基纈胺酸 Xab : N -甲基纈胺酸 \&〇:3,4-脱氮舖胺酸

Xad;

CH.

Xae ：

° H3C

Xaf ：

----;--^---一裝------訂------ί-i (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局舅工消費合作社印製 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2丨Ο X 297公釐） 五、發明説明（ 27 Α7 Β7

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Xag ： CH.

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N CH, ca (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

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0 HrtC 經濟部中夬標準局負工消費合作社印製

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〇 h3c 30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2 K) X 297公釐） 4 0 962 4096 A7 B7 五、發明説明（28 )

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-31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） A7 五、發明説明（ 29

〇

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---^--_---(裝------訂------f A (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ca

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o" N, CH. 32 - 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Λ4規格（210X297公酱） 五、發明説明（30 )

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(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

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〇 ca Ή -33- 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） 4 0 96 A7 B7 五、發明説明（31 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Xbf : Xbg: Xbh: Xbi : Xbk: Xbl: * Xbm: Xbn : Xbo:

N，N-二甲基異白胺酸.N，N-二甲基-2-第三丁基.-甘胺酸 N-.甲基異白胺酸 2-第三丁基甘胺酸

L-氮雜環丁二烯-2-羰基 -34- 本紙張尺度遍用中國國家橾準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明説明（ 32 A7 B7

Xbp : Xbq: Xbr： Xbs ;

(4-氟)-L-脯胺酸 (5-甲基)-L-她胺酸 (3-甲基)-L-诚胺酸 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本貢) -裝_

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經濟部中央標準局員工消費合作社印裝

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αΗ ---------裝— ^ ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作杜印製 36 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） U96 A7 B7 經濟部中央標準扃員工消費合作社印象 五、發明説明（34 ) 可藉著傳統的方法來評估本發明化合物的抗-癌症活性， 該傳統方法包括例如下文描述的方法。 A .在活體外的方法學 利用諸如微量培養四吐鑌（microculture tetrazolium)分析 (MTT)之類粘附性細胞株的標準方法學來測試細胞毒性。 已經發表該分析的細節（Alley，MC等人，Cancer Research 48 : 589-601，1988)。利用以指數方式生長的、諸如HT-29結腸癌或LX-1肺腫瘤之類腫瘤細胞的培養物，來製造 微滴定盤培養物。在9 6 -孔的培養盤中，以每孔5000 -20,000個細胞的量來接種細胞（在150微升的培養基中），並 使其在37°C下過夜生長。從i〇-4M到1〇-10Μ，按10 -倍稀 釋加入受試化合物。然後培養細胞48小時。要確定在每個 孔中可存活細胞的數目，加入MTT染料（50微升的在生理 鹽水中之3-(4,5 -二甲基噻唑-2-基）-2,5 -二苯基溴化四唑 (鑌）之3毫克/毫升溶液）。在3 7。(：下培養該混合物5小時 ，然後在每個孔中加入5 0微升的2 5 % SDS，pH 2。在過夜 培養之後’利用ELISA讀數器讀取每個孔在550毫微米處的 吸光度。計算得自重複孔之數據的平均値+ /-標準差（SD) ，利用公式％丁/(：(%經過處理的存活細胞/對照組）。 經過處理之細胞的Ο D --------X 100 = %T/C 對照細胞的OD 提供5 0%生長抑制之T / C的受試化合物濃度，被稱爲 _ -37- .---m^l —Ei - -- ^ - —-ί ml ---5J_ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210 乂297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424096 Α7 _____ Β7 "" ,I· „ 五、發明説明（35 ) IC 5 0 値。 實例之化合物 IC5〇[M] 1. 1x10-9 2. 1x10-9 45. 1x10-7 53. 1 X 1 0 ·8 B .在活體内的方法學 在臨床前分析中，對於在活體内的活性進一步測試本發 明化合物，活體内的活性是臨床利用的指標。這類分析係 利用裸鼠來進行，按照此項領域中已熟知的，已經將腫瘤 组織，最好是人類來源的，移殖（異種移殖）到該裸鼠體内 。隨後將要評估其抗-腫瘤效力的受試化合物投予帶有異種 移殖物的老鼠。 更特定而言，利用大小约爲5 0毫克的腫瘤片段，將已經 生長在無胸腺之裸鼠體内的人類乳房腫瘤（Μχ-”移殖到 新的接受者老鼠體内。將移殖當天定爲第〇天。在6到1〇天 後’以靜脈注射之方式’利用受試化合物來治療老鼠，每 個劑量爲一組5 - 1 0隻老鼠。以從1 - 100毫克/每公斤體重 的劑量，每隔_天給予化合物，總共三週。每週測量兩次 腫瘤的直徑和體重。利用以游標卡尺測得的直徑和下式來 計算腫瘤的體積 238-_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS 44規格（2)(^297公釐> ---------裝------訂------β (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 24 0 96 B7 五、發明説明（36 ) (長度X寬度2)/2 =腫瘤體積的毫米3 對每個治療組計算平均腫瘤體積，並決定每組相對於未 治療對照組腫瘤的T / C値。 該新穎化合物具有良好的腫瘤抑制性。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 _-39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X297公釐） 424096 A7 B7 經濟部t央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（37 ) 序列一覽表 (1) 共同訊息 U)申請者： (A) BASF Aktiengesellschaft (B) 街道：Carl-Bosch-Strasse 38 (C) 城市：Ludwigshafen (E) 國家：Bundesrepublik Deutschland (F) 郵遞區號：D-67056 (G) 電話：0621/6048526 (H) 傳眞：0621/6043123 (I) 電傳：1762175170 (ii) 發明標題：新穎的肽類，其製法及用途 (iii) 序列數目：4 (vi)電腦可讀形式： (A) 媒體型式：軟碟，3.5吋，2DD (B) 電腦：IBM AT-可相容的，80286處理器 (C) 操作系統：MS-DOS 5.0版 (D) 軟體：WordPerfect (2) 序列識別1號的訊息： (i)序列特徵： (A) 長度：5個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 (D)局部解剖學：直線狀 -40- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) r ，一-1·

T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ίτ:4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ϋ 9 6 Α7 Β7五、發明説明（38 ) (ii)分子類型：肽 (xi)序列説明：序列識別1號： Xaa Val Xaa Xaa Xaa (2)序列識別2號的訊息： (i) 序列特徵： (A) 長度：5個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 (D)局部解剖學：直線狀 (ii) 分子類型：肽 (xi)序列説明：序列識別2號： Xaa lie Xaa Xaa Xaa (2)序列識別3號的訊息： (i) 序列特徵： (A) 長度：5個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 (D)局部解剖學：直線狀 (ii) 分子類型：肽 (xi)序列説明：序列識別3號： Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa (2 )序列識別4號的訊息： (i)序列特徵： _-41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） --------「裝------訂------^良 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) Α7 Β7五、發明説明（39 ) (A) 長度：6個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 (D)局部解剖學：直線狀 (ii)分子類型：肽 (xi)序列説明：序列識別4號： Xaa Val Xaa Xaa Pro Xaa (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 _-42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 24 0 90 ~ 1第85106867號專利申請案 中文申請專利範圍修正本(89年U月） A8 B8 C8 D8 申請專利範圍

   I. 一種式I之新穎肽類 RIR2N-CHX-CO-A-B-D-E-(F)rK 經濟部中央橾隼局貝工消费合作杜印蓑 其中 Rl 為甲基、乙基或異丙基； r2 為氫、甲基或乙基； Rl -N-R2可一起形成吡咯啶環； A 為纈胺醯基、異白胺醯基、白胺醯基、2 -第三- 丁基甘胺醯基、2 -乙基甘胺醯基、正白胺醯基或 正纈胺醯基殘基； 為N -甲基-纈胺醯基、-白胺醯基、-異白胺醯 基、-正纈胺酿基、-正白胺酿基、-2·第三-丁基 甘胺醯基、-3 -第三-丁基丙胺醯基或·2·乙基甘 胺醯基殘基； 為3,4 -脫氫脯胺醯基、4 -氟脯胺鏟基、4,4 -二 氟脯胺醢基、氮雜環丁二烯-2-羰基、3 -甲基脯 胺醯基、4·甲基脯胺瞌基或5 -甲基脯胺醯基殘 基； 為脯胺醯基、高脯胺醯基、羥基脯胺醢基或嘍唑 烷-4-羰基殘基； 為纈胺醯基、2 -第三-丁基甘胺醯基、異白胺醯 基、白胺酿基、2 -環己基甘胺酿基、正白胺斑 基、正纈胺醢基、新戊基甘胺醯基、丙胺醢基、 B D Ε F 本纸張尺度遘用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) -裝· 訂 線 424〇9e ---77、申請專利範圍 A8 B8 C8 D8 X tK 召-丙胺醯基或胺基異丁醯基殘基； 為c2_5烷基、環丙基或環戊基； 為0或1 ;且 為匸卜4燒氧基，苄氧基或經取代或未經取代的 -NH,； 以及其與生理學上可容忍之酸類形成的鹽類。 根據申請專利範圍第丨項之式I化合物或其鹽類，其係用 於醫學上’特定言之用於治療腫瘤學上之疾病。 種用來治療哺乳動物腫瘤之醫藥組合物，其包括抑制 腫瘤量之根據申請專利範圍第丨項中定義的式丨化合物。 (请先閱讀背曲之注意事項存填寫本賓) 装 訂 超濟部ΐ央棣率局負工消f合作社印衷 本紙張尺度遑用中國國家輮隼（CNS ) Μ洗格（210X297公釐） 申請曰期 S5.I0.1 案 號 R51Q6S67 類 (以上各欄由本局填註 新型 中 文 發明 新型 名稱 英 文 姓 名 國 籍 發明 創作 人 住、居所 姓 名 (名稱）

   TTTfl ηΒ.1〇·3〇 正頁) 424096 %專利説明書 新穎肽類，其製法及用途 "NOVEL PEPTIDES, THE PREPARATION AND USE THEREOF"-— 1. 安德瑞斯.霍普# 2. 法蘭兹·艾米林 3. 辛希亞.A ·羅莫達爾 1.2.德國 3.美國 1. 美國麻州威斯特波洛市玫瑰林廣場2號 2. 德國來恩河勞域沙芬市菜姆街2號 3. 美國麻州威蘭市柯奇杜艾特路260號 德商巴地斯顏料化工廠 裝 訂 線 經濟部中央標準局舅工消費合作社印裝 國 籍 德國 三' 申請人 住、居所 (事務所） 代表人 姓 名 德國來恩河勞域沙芬市 1. 卡爾-菲得里契·班格 2. 克勞斯·狄特·藍芬 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS > A4洗格（210 X 297公釐） 2 4 096 ^ 第851Ό6867號專利申請案 中文説明書修正頁(86年1〇月)

   A5 B5 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 r：\n Α ι/. : t ” i <3 / u j 四、中文發明摘要（發明之名稱： ） 新穎肽類，其製法及用途 本發明係説明如下式之新穎式I之新穎肽類 R1R2N-CHX-CO-A-B-D-E-(F)t-K I 其中 R1 爲甲基、乙基或異丙基； -R2 爲氫、甲基或乙基； R1 -N-R2可一起形成吡咯啶環； A 爲纈胺醯基、異白胺醯基、白胺醯基、2 -第三- 丁基甘胺醯基、2 -乙基甘胺醢基、正白胺醯基或 正纈胺醯基殘基； -N〇VEL PEPTIDESj the PREPARATION ) AND USE THEREOF" Novel peptides of the formula I R1R2N-CHX-CO-A-B-D-E-(F)t-K I _ where Ri is methyl/ ethyl, or isopropyl； R2 is hydrogen, methyl, or ethyl; R1-N-R2 together may be a pyrrollidine ring； A is a valyl, isoleucyl, leucyl, 2-tert-butylglycyl, 2- ethylglycyl, norleucyl or · norvalyl residue； * 1 B is a N-methyl-valyl, -leucyl, -isoleucyl, -norvalyl, -norleucyl -2-tert-butylglycy1, -3-tert-butylalanyl, or -2-ethylglycyl residue； -2- (請先閲讀背面之注意事項再填穿私頁各欄) 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4说格（210X297公釐〉 -裝. 訂 第85lb6867號專利申請案 中文説明書修正頁(86年10月） ^ ii' a 修正 A5 B5 四' 中丈發明摘要（發明之名稱 B D E F B6.10· 30 補見 爲N -甲基-纈胺醯基、·白胺醯基、-異白胺醯 基、-正纈胺醯基、-正白胺醯基、-2-第三-丁基 甘胺醯基、-3 -第三-丁基丙胺醯基或-2 -乙基甘 胺醯基殘基； 爲3,4-脱氫脯胺醯基、4-氟脯胺醯基、4,4-二氟 脯胺醯基、氮雜環丁二稀-2-羰基、3-甲基脯胺醯 基、4-甲基脯胺醯基或5-甲基脯胺醯基殘基； 爲脯胺醯基、高脯胺醯基、羥基脯胺醯基或嘧唑 娱1-4 -藏基殘基； 爲纈胺醯基、2 -第三-丁基甘胺醯基、異白胺醯 基、白胺醯基' 2-'環己基甘胺醯基 '正白胺醯 基、正纈胺醯基、新戊基甘胺醯基、丙胺醯基、 召-丙胺醯基或胺基異丁醯基殘基 英文發明摘要（發明之名稱·· D E F X t K is a 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroprolyl, 4,4-difluoroprolyl, azetidine-2-carbonyl, 3-methvlprolyl, 4-methylprolyl, or 5-methyl-prolyl residue; is a prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl or thiazolidine-4-carbonyl residue； is a valyl, 2 -tert-butylglycyl, isoleucyl, leucyl, 2 -cyclohexyIglycyl, norleucyl, norvalvl, neopentyIglycyl, alanyl, β-alanyl, or aminoisobutyroyl residue； is alkyl (preferably C2-5), cyclopropyl, or cyclopentyl ； is 0 or 1; and is alkoxy (preferably C1-4), benzyloxy or a substituted or unsubstituted amino moiety； -2a 本紙張尺度適用中囷國家標隼（CNS ) A4规格（2丨〇x297公釐） I H ϋ·—· nn ^1·^— m 1^1 I I ί .^n (請先閲讀背面之注意事項再填寫本真各梱W 訂 線 c\i . 經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 4 9 C渾85;iQ6867號專利_請案 中文説明書修 四' 中文發明摘要（有|充1 A5 B5 爲烷基（較佳的是c2.5)、環丙基或環戊基； 爲0或1 ;且 爲燒氧基（較佳的是Cb4)，芊氧基或經取代或 未經取代的胺基部份； 以及其與生理學上可容忍之酸類形成的鹽類，及其製備 方法。該等新穎物質具有抗贅生物的作用。 X t κ 請 先 閲 讀 背 A 之 注 意 事 項 再 填 頁 各 櫊 英文發明摘要（發明之名稱： and the salts thereof with physiologically tolerated acids, and the preparation thereof are described. The novel substances have an ant ineop last ic effect. -2b 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4说格（2丨0 X 297公釐） 24 0 90 ~ 1第85106867號專利申請案 中文申請專利範圍修正本(89年U月） A8 B8 C8 D8 申請專利範圍

   I. 一種式I之新穎肽類 RIR2N-CHX-CO-A-B-D-E-(F)rK 經濟部中央橾隼局貝工消费合作杜印蓑 其中 Rl 為甲基、乙基或異丙基； r2 為氫、甲基或乙基； Rl -N-R2可一起形成吡咯啶環； A 為纈胺醯基、異白胺醯基、白胺醯基、2 -第三- 丁基甘胺醯基、2 -乙基甘胺醯基、正白胺醯基或 正纈胺醯基殘基； 為N -甲基-纈胺醯基、-白胺醯基、-異白胺醯 基、-正纈胺酿基、-正白胺酿基、-2·第三-丁基 甘胺醯基、-3 -第三-丁基丙胺醯基或·2·乙基甘 胺醯基殘基； 為3,4 -脫氫脯胺醯基、4 -氟脯胺鏟基、4,4 -二 氟脯胺醢基、氮雜環丁二烯-2-羰基、3 -甲基脯 胺醯基、4·甲基脯胺瞌基或5 -甲基脯胺醯基殘 基； 為脯胺醯基、高脯胺醯基、羥基脯胺醢基或嘍唑 烷-4-羰基殘基； 為纈胺醯基、2 -第三-丁基甘胺醯基、異白胺醯 基、白胺酿基、2 -環己基甘胺酿基、正白胺斑 基、正纈胺醢基、新戊基甘胺醯基、丙胺醢基、 B D Ε F 本纸張尺度遘用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) -裝· 訂 線