HU228071B1 - Dolasztatinszármazékok, elõállításuk és felhasználásuk - Google Patents

Dolasztatinszármazékok, elõállításuk és felhasználásuk Download PDF

Info

Publication number
HU228071B1
HU228071B1 HU9801910A HUP9801910A HU228071B1 HU 228071 B1 HU228071 B1 HU 228071B1 HU 9801910 A HU9801910 A HU 9801910A HU P9801910 A HUP9801910 A HU P9801910A HU 228071 B1 HU228071 B1 HU 228071B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
xaa
xab
methyl
nhch
nhc
Prior art date
Application number
HU9801910A
Other languages
English (en)
Inventor
Franz Emling
Andreas Haupt
Cynthia A Romerdahl
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co Kg
Publication of HUP9801910A2 publication Critical patent/HUP9801910A2/hu
Publication of HUP9801910A3 publication Critical patent/HUP9801910A3/hu
Publication of HU228071B1 publication Critical patent/HU228071B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Uj dolaszóatin-származékok, előállításuk és alkalmazásuk
Ismeretes, hogy a tengeri élőlényekből Izolált doiasztatín-lü (US 4,816,444 számú szabadalmi irat: és dolasztatin~15 .(E.P-A~3.98S'5'8 számú szabadalmi irat) nevű peptidek potenciális sejtnövekedést (sejtosztódást) gátló hatásúak [lásd; Biochem. Pharmacoiogy, 40, (8), 1859-64 (1990); J, hasi, Cancer Inst., 85, 483-88 (1993) és as abban idézett közleményeket}< Kísérletes daganat-rendszereken nyert értékes adatok alapján jelenleg preklinikai vizsgálatok vannak folyamatban ezekkel a természetes eredetű anyagokkal, azzal. a céllal, hogy daganatos betegekkel klinikai vizsgálatokat kezdhessenek.
hagy hátránya ezeknek a természetes- anyagoknak, hogy vízben, vizes oldószerekben gyengén oldódnak, továbbá előállításukhoz költséges köztitermékekre van szükség.
A találmány tárgyát olyan uj peptidek és azok .számazékaí képezik, amelyek a daganatos betegségek kezelésében a dolasztatin-15-höz képest jobb terápiás potenciálnak♦ Ezenkívül, a találmány szerinti vegyületek a szokásos módon állíthatok elő, amint azt a következőkben ismertetjük.
A találmány tárgyát az rI^N-CHX-CÖ-A-B-D-E-<nfc“K <X >
általános képletű éj peptidek, amely képletben
R-1 jelentése metil-, etil- vagy 1zopropíicsoport;
R*- jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport;
p.i.p2„p„ jelentése együttesen pirrelidinoesoport lehet;
A jelentése valil-, izole.uci.l-, leuc.il-, 2-terc-butil-
* 0 0 » -> « Κ ♦ ·· X «' <· » * Φ « ν « *·* · * Χ « 5t χ : φ
-glicil-, 2-etil-glícll-, norleucíl- vagy norvaiil-maradék; β jelentése N-meti.l-vaii.l-, -leucíl-, -izoleucil-, -norvslil·-,
-no r1euci1-, -2-te rc-bút i1-g iicí1-, -3-1e rc-but il-ala n i1vagy - 2 - e t i 1 - g 1 í c i 1 - ma r a dé-k;
D- jelentése 3, 4-deh.idroproii.i~·, 4-fluor-propil.-, 4,j~dífluor~ -propíl-, azetidín-z-karhonii-, 3-metíl-proiiI-, 4~metil~ -prolii- vagy 5-metil-pro-iíi-maradék?
E jelentése prolii-, homoprolil-, hidroxi-prolii- vagy tiazo-1 i d i n - 4 - ka r b on i I -ma r adé k;
-ciklohex.il~-g.lic.il-, norleuoil-, norvaiil-, neopentll-glicil-, alanil-, S-alanil- vagy amíno-izobutirii-maradék;
X jelentése alkil- (előnyösen 2-5 szénatomon alkil-),, cikic— propil- vagy ciklop-entilesoport;
t értéke 0 vagy 1; és
K jelentése alkoxi- (előnyösen 1-4 szénatomos alkoxi-}, benzil-oxí- vagy szubsztituált vagy szubsztituálatlan am.inocsoport — és fiziológiailag elviselhető- savakkal alkotott sóik képezik.
Ugyancsak a találmány tárgyát képezik az: (1) általános képletű vegyületek, és az ilyen vegyületeket gyógyszerészetíieg elfogadható vivőanyagokkal együtt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására szolgáló eljárások is.
jelentése lehet különösen 1-4 szénatomos alkoxi-.
-όχι-, amono-,
-NH-C(CHg)gcN,
N H~ -(1 -12 szénatomos
-NH-C (CHhu gCCH,
V.. bs· V X. Ü- f
ÍW '•A- !
íCHs · jCHgCHgCH# ~NH~€íCHg)yCKgOH, -NH~(3~ö szénatomos cikloalkil): képletű csoport, ~ΝΉ~( 3# 3# öl-bicikiooktii, noreísdrii-# notpszeudoefedril-, -NH-kinolii, -NH-pira-il, -NH-CHg-benzimidazolil, -NH-adamantil, -WH-Cfíg-őáamantil, -PH--CH (CKg)-feni!# -N(l-4 szénatomos aikoxi) - íl-4 szénatomos alkil), ~N{1~4 szénatomos aikoxi)-benzil, -Níl~4 szénatomos
^.r*· aiKoxi) -feni!# -N íCHg)OB-zl, -NH- (CH?) v-fsnil ív 1# 2 vagy 3) , ~PH~ (0¾} m-nsf ti X ím értéke: 0 vagy 1), ~PH~(CHg)w~benzhidril íw értéke: ű, 1 vagy 2-, ~NR-bifenii#
-NH-píridiX,
-NH-benzciazolil,
-Nfí-CHz-piridiX, -NH-CHz-CHg-piridil#
-NH-banzizotiazolii, -NH-benzpírazolil, NH-benzo.xazolil# -NH- ÍCHg)m~f luorenil. ím értéke: 0 vagy 1), ΝΉ-pirimidil csoport, -NH-(CHa)m~indáéi1 (m. értéke: 0 vagy }, -PH-vCHgCHgQ)y-CHh íy értéke: 0, X, 2, 3, 4 vagy 5) ,
-PH
Hl- (GHgCHyO) -.-CHo-CHg íy értéke:
v <· x ,< £ ? / tt V’Ci^V íCHvCHgO) y-CHg .{y értéke: 0, X# vagy 5)
-{CH2CH2O?y-CHgCHj íy értéke: 0# i# 2, 3, 4 vagy 5) ált nos képlett csoport, -NCH3-NH-fen.il, -PCRg-PH-benzil tort; vagy K a kővetkező képletö maradékokat jelenti:
* * V
9
9 φφφ:
Ό λ /β;
φ *
-NHíCHt)7CH3,
A K szubsztituens előnyös jelentései, a következők:
-ÖCÍCH3J3, - -NH-ÜHy, -NH-CH2CH3, -NH-(CH?A2CH3' -NH (CHy) 3CK3, -NH (CHy? gCHy, -NH (CHo) 5CH3., -NH (CHy) 6£Η3,
-NHCHÍCfí3) 2, -NHCHiCHtkCHyCHa, -NH-CH ÍCH3Í CHyC^CKz, -NHCH{CH9CH3}y, -NH(CH2CH2CH3)2< -MRCÍCKy)3-NHCH(CHjCHsí CHgCHgCHz, -NHCH(CH3)CH(CH3)2/ -NHCH(CHvCHy)CHiCH35 2, -NHCB(CH3)C{CK3) ...,, -NH-ciklopropil, -NH-eiklobotil·, “NH~ciklopent.il, -NH-ciklohexii, -NH-ciklohepf.il, -NH-eíkiooktii, -NH-feicikloí 3,3,0] oktii,
-N(CH3i OCH9CH3, ~.NÍC03)GCHyCHtCHo, ~N (CH2-CH3} OCH3, ~N (C«2ca2 > OCHsCH3,
-NiCHz/OCHyCgüy, -H (OCH3}CH9C3H5, -H(CH3iOC3H5f -NH-CHy-CrHy, -NH- (CH?) nCgHs, -NH (CHs) yCgHg, -NHCH (CH3) C3H5-NHC(CH3}tCHvCHz, -NHC (CH3; iCHpC^ly, -NHCH (CH3I CH (OHkCgHo, -NHCH9-0iklohexri, -NH-CHjCFy, -NHCH(CHsC)a, -NHC(CH3j2CK2CH2OH, -NH(CHyCHyO)vCHtCHv, -NHC(CHy)2Cfí(CH35 ti -NHC (CHy)2CN,-NHCiCHnjtCCH, aorefedril-.
-N {CH33OCH3, -N (CK3ŐOCH ÍCH3) ν, -N[ CH {C'H3>2] ÖCH3, norpszendoefedril-, -NH-klnolil, -NH-pirazil, ~NH~adama;ntil (2).,
-NH-adaraantii(I), -NK-CHo-adamantii, -NH-CHo-naftil, ~NH~benzhröril, -HH-bifeníl, -NH-piridil, -NH-CHt-pizidil,
-NH-Cí^CHy -piridil, -NH-fcenz tiazoül, -NH-benzr zotiazoir 1,
-NH-benzpirázol .il, -HK-benzoxazolii, -NH-fluorért! 1/
-NH-p.irimidí 1, -NH-CHy- (4-raetil-fiazol-2-il) , -NH-CHy- {2-furil} , ~NH~CH2“ (2-tienii), -NH-CHg- {5-raetil-2~t.ie.nii), -NH- (l-tiasoiíi),
-NH- (.3-i20xa20l.il), -NH- {3~matii~5“izoxazol-il}, -NH- id-metíi-S-izotiazolii), -NHp 2-{trif luox'-raaf 1.1}-tia-diazoI-S-il] , -NH-Cz-ciklopropil-tiadiazoi-S-il), -NHC {CH3) 2C-CH2; vagy K jelentheti a következő csoportokat:
S
ΦΦΧ
Szék a példák szemléltetik, de semmilyen tekintetben nem korlátozzák a találmány oltalmi körét.
Az (I) általános képletü peptidek L-aminosavakból épülnek fel, de F D~aminosav is lehet.
Az új vegyületek fiziológiailag elviselhető savakkal képezett sók formájában is léteznek; ilyen sökspzö savak például a sósav, citromsav, borkosav, tejsav, foszforsav, metánszuifonsav, ecetsav, hangyasav, maleínsav, fumársav, almasav, borostyánkősav, malonsav, kénsav, b-giutaminsav, L-aszparaginsav, piroszolősav, nyálkasav, banzoesav, giükuronsav, oxálsav, aszkorbinsav és acetíi-glicin.
Az új vegyületeket a peptidkémia ismert eljárásai szerint lehet előállítani. Ezért a peptídeket felépíthetjük aminosavakbői, lépésenként vagy oly módon, hogy kisebb peptid-fragmentumokat kapcsolunk össze. A lépésenkéntí felépítés esetén a paptid C-terminálisától indulva lépésenként egy-egy aminosavval bővítjük a peptidláncot. Ha peptid-fragmentumokat kapcsolunk össze, különböző hosszúságú peptídeket lehet összekapcsolni, és ezeket a peptid-fragmentumokat is előállíthatjuk lépésenként, aminosavakból vagy kisebb fragmentumok összekapcsolásával,
Akár lépésenként! felépítéssel, akar pedig fragmentumok kapta . 9~<ΐ73.ε
...
csalásával áliitjuk elő az új peptideket, lényeges,· hogy az egységeket amid kötéssel kapcsoljuk össze. Erre a célra enzimatíkus és kémiai eljárások egyaránt alkalmasak.
Az amid kötés kialakítására alkalmas kémiai eljárásokat részletesen tárgyalják a következő irodalmi Müller, Methoden dér o.rganíschen Chemle, XV/2, Verlag, Stuttgart., 1974; Stewart, Young, Soiid hivatkozások:
1-364., Thíeme
Phase Peptide
Synthesis, 31-34, 71-82,
Pierce Chemical
Company, Rockford,
1984; Sodanszky., Klausner, Ondetti, Peptide Synthesls·, 85-128,
John Wiley and Sons, Kew York, 1976, továbbá a peptídkéraia egyéb sztenderd művei. Különösen előnyösen használható módszerek az az idős módszer, a szimmetrikus és vegyes anhidrides módszer,· az in situ generált illetve előre elkészített, aktív észteres módszer, az aminosavak uretán-védett M-karboxi-anhidridjeinek felhasználása, továbbá az amid kötés kialakításához kapcsolási reágensek/aktivátorok alkalmazása, különösen ilyenek a diciklohexil-karbodiimid (DCC), diízopro-pil-karbodí Imid (DIC5 , i~ -{etoxi-karbonil)-2-eto-xi-l,.2-dihídrokinolin (EEDQ), l-etíi-3-í. (3-öimetíi-amino)-propil] -karbodiimid-hídroklo-rid (SDC1), propánfoszf onsavanhidrid (PIA) , N, N-fcisz í2~oxo~3~oxazoiidiniii -amido-foszforii-klorid (BöP-CI), brom-trisz-plrroiídino- -foszfónium-hexafluor-foszfát (PyBrop.) , difenil-fossforil-asíd (DPBA) , Castro-féle reagens (Bök, PyBOP) , O-benztriazolíl-N,N,.K:’,N'-tetrametil-urőnium-sók (HBTU), c-azabenztriazoiil-N,ül, N’, N*-tetrametii-urónium-sök (HATü) , dietil-íoszforil-cianid (DE'PCN) ,
2, '5-dífeni 1-2, 3-dihidro~3-oxo-4-h:idro.xi-tio.fén-l., 1-dioxid (.Steglich-féie reagens; H07D0) és az 1,1'-karbonil-diimidazol (CDI).
.974/íiS ilkalmazhatjuk egyedü.
; j ;*vt ,<.i <.· j Λ L.· <- Ai l·· i. / f
A kapcsolást elősegítő reagenseket. » egyéb anyagokkal együtt, például 4-(dirceti.l-areino) -piridinnei N-hidroxi-benztriazoilai (HOBt), N-hidroxi-benztrí(ROOBt), azabenztriazollal (HOAt), N-hidroxi-szukcínimiddel (EOSu) vagy S-hidro-xí-piridinnel.
Az snzimatikus pectldszíntéziseknéi normális esetben nincs szükség, védőcsoportok alkalmazására; ezzel szemben a kémiai szintézisnél mindkét reagensben védeni keli a peptidkötés kialakításában részt nerc vevő, reaktív csoportokat, éspedig reverzibilis módon. A kémiai szintézis tekintetében hárem szokásos védőcsoport technika alkalmazása előnyös: a .(benzil-oxi)-karbonil terc-butoxi-karbonil) (Soc) és a (9-fluorenil)-metoxivagy
Frcoc) technikák. Az azonosítás minden esetben a lan·->
félő egység alfa-aminocsoportján lévő védőcsöpört alapján történik. Az aminosavak védőcsoportiáiról részletes áttekintést nyújt az alábbi szakkönyv: Müller, Methoden dér organiséhen Chereié, XV/1, 20-906, Thieme Verlag, Stuttgart, 1971. A peptidláne felépítésére ajánlott egységeket reagáltathatjuk oldatban, szuszpenzióban vagy pedig a éfórrifieid által leírt módon f Herrifteid, a. Amer. -Chere. Sót., 85, 2149 (1963)7: . Különösen előnyösek azok a. módszerek, amelyekben, a peptideket a. 2. Soc vagy Fmoo védőcsoport technikákat alkalmazva lépésenként vagy fragmentumok összekapcsolásával építik fel.
A Merrifield technika esetében a reaktánsok egyikét egy oldhatatlan polimer hordozóhoz' (a továbbiakban ezt gyantának is nevezzük) kapcsolják. Ez tipikusan azt jelenti, hogy a peptidet a polimer hordozón a Boc vagy Freoc védőcsoport technikát alkal♦ « φ « φ mazva, lépésenként építik tel; eközben a növekvő peptidlánc a Cterminálisánál fogva végig kovalens kötéssel kapcsolódik az oldhatatlan gyanta részecskékhez. (lásd az 1. és a 2. ábrát;, Sz az eljárási mód lehetővé teszi, hogy a reagenseket és a melléktermékeket szűréssel lehessen eltávolítani, ezért a köztitermékek át kristályosítására nincs szükség .
A védett aminosavakat olyan megfelelő polimerekhez kapcsolhatjuk, amelyek az alkalmazott oldószerekben teljesen oldhatatlanok, és stabil fizikai formájukkal könnyűvé teszik a szűrést. A polimernek tartalmaznia kell egy olyan funkciós csoportot, amelyhez az első védett amínosavat szilárdan, kovalens kötéssel lehet hozzákapcsolni. Erre a célra számos polimer alkalmas; ilyen például a cellulóz, poli(vínii-alkohol), polimetakrilát, sznlfonált poiisztiroi, kiór-metilezett sztírol/divinil-benzöl kopolímer (Merrifield-gyanta; ; 4-metii---benzhídril~amzn~gyanta (MBHA-gyantaí, feni;-acetamido-mecil-gyanta (Pam-gyanta), para-(benzii-oxi) -benzil-aikohol-gyanta, henzhidril-amin-gyanta (BHA-gyanfa), 4-(hidroxi-metilf-(benzii-oxi/-metil-gyanta, a Brsipohl-féle gyanta [ Breipohl et al., Tetrahedron Letters, 28, 565 {1987} ; szállító cég: SACfiSHj , 4~( (2, 4-dimetoxi-fenilt-amirio-metil] -fenoxi-gyanta (szállító cég: Novabiochem} vagy az o-kiőr-tritil-gyanta (szállító cég: Bioheilas).
A peptidek szintéziséhez megfelelőek azok az oldószerek, amelyek a reakciókörülmények között insrtek; különösen alkalmasak a váz, N, N-dimetil-f ormamid (DAF), dime ti I-szuif oxid {.DMSO} , aoetonitrii, metilén-dikiorid (DCNÍ , 1,4-ái.oxáü, tetrahidrofurán {THF}, N-metll-2-pirrolidon (NMP) és a nevezett oldószerek keveŐ4.374/3E rékei. A polimer bodozón végzett pepiid szintézishez minden olyan inért,· szerves oldószer alkalmazható/ amelyben a felhasznált aminosavszármazékok oldhatók. Emellett azok az előnyös oldószerek, amelyek hatására a gyanták megduzzadnak; ilyenek az ö, N-dimetii-tormamid, metilén-diklorid, E-meti1-2-pirrolidon, acetonitríi és a dimetii-szulfoxld, illetve ezen oldószerek keverékei. A szintézis befejezése után a peptidet lehasítják a polimer hordozóról. Az egyes gyantaféleségek esetében alkalmazható hasítási feltételek a szakirodalomban megtalálhatók, A leginkább használatos hasítási reakciók a savval, illetve palládiummal katalizáltak, különösen a cseppfolyós hidrogén-fluoridban, a vízmentes trifiuor-metánszaXfonsavanhídrídben, a hígított vagy koncentrált trifiuor-ecetsavban, továbbá a tetrahídrofuránban vagy tetrahidrofurán/metiién-dikloríd eíegyben, palládiummal katalizált hasítás gyenge bázisok, például morfolzn jelenlétében, vagy az ecetsav/metiíén-dikloríd/trifIuor-etanol eíegyben végzett hasítás. A választott védócsoportoktöi függően, azok a hasítás körülményei között is megmaradhatnak, vagy maguk is l.ehasadhacnak.
A peptidekről a védőcsoporfok részleges eltávolítására akkor van szükség, ha különböző származékképzési reakciókat kívánunk végezni a pepiiddel. Az d-termi.náiison például a következő módokon végezhetünk diaikiiezést: a) a megfelelő E, h-dialkíi-aminosavat kapcsoljuk a pepiidhez oldatban vagy polimer hordozón; b) a gyantához kötött peptidet reduktív módon alkilezzük N,K-dimeti I.-formamíd/l% ecetsav oldatban, a megfelelő aldehiddel, vagy ketonnal és nátriurh cíano-trihidro-borát (111 f] -reagenssel;
cl a peptidet oldatban, aldehid vagy keton és Pd/C katalizátor
* » •ϊ ί - « » ·'?
elenlétében hidrogénézük.
Az alkalmazott, nem-természetes amínosavakat vagy kereskedelmi forgalomban szereztük be, vagy a kereskedelemben kapható anyagokból az ismert módszerekkel állítottak elő. Az nzetiáin-2- karbon savat, 3-metiI-L-prolint, 5-mesíi-L-proiínt, továbbá a Boc- vagy Fmoc-védett 3,é-dehíroprolint a kereskedelemben szerettük be (cégek: AÜROS, NOVASIOCKSM, BACÜEM; . A cisz- és a transz~4~fluor-prolint a Panasík és munkatársai által leirt eljárással ( N« Fanasík, E.S. Sberbardt, A.S, Edison, O.R. Fowell, R.T. Raines, int. J. Feptide Protein Rés., 44, 262-269 (1994b hidroxí-proiinbói állítottuk elé.
A találmány szerinti vegyületeket felhasználhatjuk kemény tumorok (például tüdő-, mell-, vastagbél-, prosztata-, hólyagvagy végbélrák, vagy endometriáiís (méhnyáikahártya) daganatok gátlására vagy kezelésére, továbbá rosszindulatú hematológiai betegségek (például leukémiák, limfőmák) kezelésére akkor, ha ezeket a vegyületeket emlősöknek adjuk.
Az új vegyületek különleges előnye, hogy a doiasztatrn-15höz viszonyítva sokkal ellenállóbbak az enzimes lebontással szemben.
Az adagolásuk a gyógyszerekre, különösen az onkológiai hatóanyagokra szokásos módon történhet, ideértve az orális vagy parenterálís adagolást, amely történhet szubkután, intravénásán, intrarnasokulárlsen és intraperítoneáiisan.
A vegyületeket alkalmazhatjuk önmagukban vagy olyan gyógyszerkészítmény formájában, amely egy (1) általános képleté vegyületet egy gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyaggal együtt
S‘3 ,97-3/BB tartalmaz# és amely megfelel a választott adagolási módnak. Az ilyen gyógyszerkészítmények kombinációs készítmények is lehetnek, azaz egyéb# terápiásán aktív komponenseket is tartalmazhatnak .
Az emlősöknek adott dózis a hatóanyag hatékony daganatgátló mennyiségét tartalmazza.# amely olyan szokásos tényezőktől függ# mint például az ajánlott speciális vegyület biológiai hatékonysága# az alkalmazás (adagolási módja# a páciens kora# egészségi állapota és testtömege# a tünetek természete és mértéke# a kezelés gyakorisága, az egyéb terápiás szerek adása, és az elérni kívánt hatás. A jellemző napi adag orális adás eseten 0,5-50 mg/testtömeg kg, parenterális adás esetében pedig 0,05-20 m g /1 e s 11Ö meg - kg.
Az új vegyűleteket adhatjuk a szokásos szilárd vagy folyékony gyógyszerformákban, például bevonat nélküli vagy (film)bevonatos tabletták, kapszulák, porok# granolák, kúpok vagy oldatok formájában, Ezeket a szokásos módon lehet előállítani. A hatóanyagokat erre a célra a szokásos gyógyszerészeti segédanyagokkal, például kötő-, töltő-, konzerváló-, tabletta szétesést elősegítő anyagokkal, folyékonyság-szabályozókkal, lágyítókkal, nedvesítő-, diszpergáiószerekkel, emurgeátorokkai, oldószerekkel, szabályozott hatöanyagleadást biztositő készítményekkel, antioxidánsokkai és/vagy hajtőgázokkal együtt dolgozzák fel készítményekké (lásd: H. Su.oker et al., Pharmazeutische Technológia, Thieme-Variay, Stuttgart, 1978). Az ilyen módon előállított adagolási formák normális esetben 1-90 tömeg! hatóanyagot tartalmaznak.
54.374/SF.
* ♦ >
* * X « * * * χ * * ,ϊ : :
··· ..
A következe példák célja, a találmány bemutatása. A. protein-
alkohó amioosavakat a példákban az ismert hárombetűs kóddal rö-
v i;d. i. o v s jélezzük. Az egyéb, alkalmazott rövidítések; MayVal ·
Ν, N-dimetil-vai in, MeVai - d-metil-vaiin, Z- ~- (benzi.1
A. J. v Általános aljárások Az 1, igénypontban igényelt peptideket vagy a klassz!-
felhaszj -iáié szintézissel, a fentebb leírtak szerint, vagy a szí-
lárd.f áz; Lsu szintézis sztenderd módszereivel, a Bee és Fmoc védő-
csoport technikákat alkalmazva állóitjuk elő.
ρ: \ Szintézis-ciklus a Fmoc védőcsoport technika esetében
I. Mcí ;ás d, h-dimetii-formamiddal 1x1 perc
Mosás N,N-dimetli~formamiddal
3.fc t /válás 1 ekvivalens TB-TU és 5 ekvivalens DTPEA
1 X V.·· A rzáadásával történik N,N-dimetíi-formamidban};
P-í ;tid~kapcsolás 1x61 perc
6» Ho í. sás N,d-dimetii-formamiddai 3x1 perc
7. Ha a konverzió nem teljes, a kapcsolást meg kell
ismételni (vissza az 5.-hez
8 „ Mo í sás h,ö~dzmetii-formamiddal 3x1 perc
9. Vü ;sza a 2.-höz
2-\. 2 04 . 9-? 4/SX d~metii-aminosavakat követően az aminosav kapcsolásába:
♦ *
ΒΟΡ-Ci és PyBrop kapcsoló- reagenseket alkalmazunk. A reakcióidőket ennek megfelelőén megnöveljük, különösen a kettős kapcsolások esetében. Oldatban végzett szintézis esetében az ilyen típusú kapcsolásokhoz legelőnyösebb, ha vagy Boc-védett aminosav hCA-t (N-karboxi-anhidridet) vagy a-védett aminosav NOA-t (N-karboxi-anhidrídet3 vagy plvaioíi-kioridot használunk kondenzáló ágensként.
11, Az b-terminális reduktív alkilezése
Az Alá) szerint előállított peptia-gyantát az h-terminálisán védöesoport-mentesícjuk (az Alá 2-4. lépései), azután 3~ szoros moláris fölösiegű aldehiddel vagy ketonnal reagáltatjuk
N,N~dimetíi~fcrmamiá./l% ecetsavas oldatban, 3 ekvivalens nátriumí crano-trihidrido-borát (ΙΣΙ)) reagens jelenlétében. A reakció befejeződése után (negatív Kaiser teszt; a gyantát néhányszor mossuk vízzel, ízopropíl-aikohollal, N,N-dimelil-formamiddal és metiién-dikloriddai.
A reduktív alkilezése oldatban például úgy végezhetjük, hogy az N~terminálisán szabad peptidefc, peptid-fragmentumot, vagy aminosavat a megfelelő aldehiddel vagy ketonnal reagáltatjuk nátrium) ciano-trihidrído-borát (III)·> vagy Pd/c katalizátor és hidrogéngáz jelenlétében.
171, Az 7b és 17 .reakcióiepésekben kapott poptíd-gyanták feldolgozása
A peptid-gyantát csökkentett nyomáson megszáritjuk, azután trifiuor-ecetsav/víz (95:51 arányú eleggyel kezeljük 1,5 órán
S4.3“<ί/·?.ε keresztül (Wade, Tregaar, Howard Florey F®oe Workshop Manual, Melbourne, -1985). Ezután a gyantát leszűrjük, trífIvor-ecetsavval és meti.lé-n~dikloriddal mossuk, a szűrletet és a mosófoivadékot egyesítés után betöményítjük, és a peptidet dietíi-éterrel kicsapjuk. Lehűtjük jeges fürdővel, majd a csapadékot szűrjük, feloldjuk .30 %-os ecetsavban, és as oldatot iiofilrzáijuk:.
IV. Ha egy o-klór-tritíi-gyantát (szálító cég: Síoheiias? használunk, akkor a peptíd-gyantát eoets'.av/tr i f iuor-etanoi/matiién-diklorid (1:1:3) elegyben keverjük szobahőmérsékleten 1 órán keresztül. Azután a gyantát szívatással szűrjük, és alaposan kimossuk a hasító oldattal. Az egyesített szűrietet csökkentett nyomáson betöményítjük., majd. dietil-éterrel kezeljük. A kicsapódott szilárd anyagot szűrjük vagy centrifugáljuk, dietil-éterrel mossuk, és csökkentett nyomáson megszárítjuk.
v. .9. pepiidet tisztítása és azonosítása
A tisztítást gél-kromatográflávai (SEPHADEX G-IO, G~15/I0% ecetsav, SEPHADEX LH2ü/MeO.K^ és/vagy közepes nyomású kromatográfiával (stacioner fázis: HD-S1L C-8, 20-45 mikron, 1 χ 1Ο~^θ m löd Angström; mozgó fázis: gradiens, A - Q,l% TFA/viz, B ~ ~ 0,1% TEA/MeOH) ; vagy preparatív HPLC-vel (álló fázis.: Waters Delta-Vak C-18, 15 mikron, 1 x lO1^ m - iqq AngstrÖ-m; mozgó fázis: gradiens, A « 0,1% TEA/víz. és B - 0,1% TFA/MeOH-val} végezzük.·
A kapott termékek tisztaságát analitikai HPLC-vel (álló fáéi . sn /ss zis: 100 2,1 mm VYDAC C-18, 3 x lö~iy m ~ 300 ángström; mozgó fázis: acetonitril/viz grádiens, amelyet 0,1% TFA-vai pufféroltunk, 4Ö°C) 'határoztuk, meg.
Az azonosítást gyors atomos bombázással végzett tömegspektroszkópiával és spektroszkópiával végezzük.
B.. Specifikus eljárások 1. példa: (1, számú szekvencia)
Vai — Medál — 3,4-dehidroproli2 — .Pro — amid
0,53 g Fmoe-RINK-gyantát (a helyettesítés mértéke 0,46 ó:25 mmol mennyiségnek felei meg, Az Alá szerint re.ábbi reagensek 0,4 -0,4 mmol-nyi mennyiségével:
rámol /g), amely
agáltatu; tk az
Fmoc--Pro -OH,
Fmcc-3,4 -dehi
1* ii: O k ** V a.l -0 R.
-í?
A A f
-PR .
.ehasit jak (az
Az N-metil-aminosavat követe aminosav kapcsolásánál kapcsoló reagensként Py.Brop-t alkalmazunk és kettős kapcsolást végzünk. Amint az ismétlődő szintetikus ciklusok befejeződtek, é peptid-gyantáről az N~terminális védőcsoportot
Alá 2-4 lépései), majd az Ali szerint vizes formaldehid-oldattal reagáitatjuk, és csökkentett nyomáson megszáritjuk. A kapott gyantát trifluor-ecetsavas hasításnak vetjük alá az AXII-ban leírtak szerint. A nyersterméket (132 mg) preparatív közepes nyomású kromatográfiával tisztítva 32 mg tiszta, kívánt összetételű peptidőt kapunk (10-40% A 10'-ben, 40-90% A 140’- ben), A vegyü40-90% ί
letet gyors atomokkal bombázva, fomegspekt.rome.triával is azonosítottuk ~ 548 .
2. .példa: U . számú szekvencia)
Meptfal-Vlal-MgV'a.X-f (25,35) -J-wtál-pírrolidííJ-^-karhonrlJ -P.ro~&ez3zi2 -amid
a) 2-(25,35) -o~Aétíi~pírroiiáan-2-kar.óonsav
1,5 g ¢:11,6 mmol) (2S, 3S) ~3-~metii~pírroIidin-2~karbonsavat feloldunk 4 mi viz és 2, 33 mi 5M nátríum-híöroxid-oldat elegyeben. Ehhez az elegyhez 4 °'C-on 2,12 mi (12,8 rsanol) benzil~(klór-formlát)-ot (2-C1) és 6,5 ml 2M nátríum-hídroxid-ol.datot adunk 1 óra leforgása alatt, majd a reakcióeiegyet éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap a pH-t 10-re állítjuk be, és a vizes elegyet metilén-dikloriddal négyszer extraháijuk. Azután az elegy pH-ját 2-re állítjuk be 5M vizes sósavoldattal·, és metilén-dikloróddal kétszer extraháijuk. Az egyesített szerves extraktumckat nátrium-szulfáton megszárifjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztlliáljuk. A kívánt terméket olaj formájában kapjuk meg; mennyisége 1,75 g, ,ő) .2- (.25, 3.5) -5-Metii~pirroiidin-2~karbűnii~l~propiI~
-benő .1.1-amid
1,75 g (6,62 mmol) (2S, 3S)~3~metil~pirroiidin~2-karbonsavat és 1,52 g (6,62 mmol) prolin-benzil-amid-hiá.rokioridot feloldunk 66 mi. .metilén-dikioridban., és az oldatot lehűtjük 4 “C-ra. Hozzáadunk 0,89 mi (7,94 mmol) d-metii-morfelint, 0,304 g (2,21 mmol) HGBt-t és 1,28 g (6,62 mmol) EDCl-i, majd a reakcióeiegyet éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap az elegyet 150 mi on. íor/as:
XX
...
metiién-dikloriddal hígítjuk, és háromszor mossuk telített nátrium-hiáro>gén~karfoonát~oíöattal, egyszer mossuk vízzel, háromszor mossuk 5 %-os citromsavoidattai, egyszer mossuk vízzel, végül egyszer mossuk telített nátrium-kiorid-öidattai. A szerves réteget nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson iedes2tí Háljuk. Kapunk 2,63 g erősen viszkózus olajat. :
c) (2S, 35) -3-óíetii-pí.rroildin-z -karborii-i-proHi -benzol~am.rd
2,63 g (5,8 mmol) 2~(2S,35) -o-metii-plrroiidin-l-karbonl1L-proIii-benzil-smidöt feloldunk 43 mi metanolban, hozzáadunk 105 mg 10 %-os Kd/C katalizátort, és a reakcióelegyet éjjelen át hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és a szűriethői az oldószert teljesen ledesztilláljuk. Kapunk 1,88 g védőcsoportjától megfosztott dlpeptidet.
d) 2-010001-1 (25, 35.) ~3~mesií~pirroiidln~2-karbonil?~5ro~
-benzil-amid
1,54 g (5,8 mmol) t-MeVai-OH-t és 1,88 g (5,8 mmol) (ZS,35)~3-metiI-pirrolidiu~2~karhoni!~L~prolií-benzii-amidot feloldunk 58 ml metilén-dikloridban, és az oldatot lehűtjük 4 ’Cra. Hozzáadunk 0,78 ml (6,96 mmol) K-metíi-morfelint, 0,266 g (1,93 mmol) HOEt-t és 1,12 g (5,8 mmol) EDCi~t, majd a reakcióelegyet éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap Hozzáadunk 120 mi mellLén-dikloridot, és a kapott oldatot háromszor mossuk telített nátrium-hidrogén-karbonát-oidattai, egyszer mossuk vízzel, háromszor mossuk 5 %-os citromsavoidattai., egyszer mossuk vízzel, és egyszer mossuk telített nátrium-kiorid-ol21 dattál. A szerves oldatot nátrium-szulfáton megssárltjuk, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A termék száraz, fehér hab, mennyisége 3,01 g, e> Metál-f (23, 3Sj -3~metl2-p.irro.2idin~2-káróoni..n -Pro-.benzll -amid
3,01 g (5,33 mmoi.) Z-MeVai-[ (2S,3Sj-3~metii-pirroiidín~2~ -karbonii.] -Pro-benzll-amidot feloldunk 39 ml metanolban, hozzá>YV' %-os Pd/G katalizátort, reakcióalecvet 3 órán keresztül hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrlefcbdl az oldószert teljesen ledesztilláljuk. A védőcsoportjától megfosztott, t-r ip-ept id 2,18 g mennyiségű, színtelen olaj.
r) ő-2a.; -Metál-f (23,351 ~l-,meti2-oir.roiidin-.2-karbo.nil/S-Val-OH-t feloldunk 10 ml metílén-dikiorídban, hozzáadunk 0,73 mi (5,37 mmoi) trietil-amint, és az elegyet lehűtjük -10 ’C-ra, majd. lassan hozzáadunk 0,66 mi (5,37 mmoi) pivaloii-kloridot. A reakcióelegyet -iö »C-on 1,5 órán keresztül keverjük, majd hozzáadjuk 2,13 g (5,11 mmoi) MeVal-( (23,33}-5~metil~pirrolidin~2-karbonil] ~Pr.o~benzil-am.id és
0,73 mi (5,37 mmoi) trietii-amin 10 ml metilén-díkloriddal készített oldatát. A kapott reakcióelegyet -10 aC.-on keverjük 1,5 órán át, azután éjjelen át szobahőmérsékleten folytatjuk a keverést. Másnap az elegyet metilén-dikloriddai hígítjuk, t* 1 ta’lí egyszer mossuk virrel, háromszor mossuk 5 %~ss citrcmssvol.* dattai, egyszer vízzel, végül egyszer telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, Ά szerves réteget nátrium-szulfáton megszárit>2 juk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztiliáijuk, Száraz hab formájában 2,75 g terméket kapunk.
gj Val -dekái-/ /25, 35/ -3-mef ii“plrro2ibin~2~ksr.borii ? -Pro-benzil -amid
2,75 g {4,13 mmol) 3-ual-MeVai-í (2S,3S)-3-metii-pirrilidin-2-karbonilj -éro-benzii-amldot feloldunk 30 mi metanolban. Hozzáadunk. 0,34 mi {4,13 mmol) tömény sősavoidatot, 78· mg 10 %-os Pd/C katalizátort, és a reakciőelegyet 3 őrén keresztül hidrogénezzük. Az oldószer iedesztillálása után száraz, fehér hab formájában kapjuk meg a védőcsoporttól megfősztót tetrapeptiáét, amelynek mennyisége 2,23 g, Ezt a nyersterméket feloldjuk 50 mi vízben, az oldat pH-ját 1M sősavoldattal 2-3 közé beállítjuk, a vizes részt metilén-dikloriddal háromszor extraháijuk, a vizes fázis pH-ját 5-M nátrium-hídroxid-oidattai lö~re beállítjuk, és az elegyet metilén-dikloriddal ismét háromszor extraháijuk. Az egyesített szerves extraktumokat nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztíliáljuk. A védőcsoporttói megfosztott tetrapeptíd-benzii-amíd kitermelése 1,71 g.
h) éíegVái-éál-Mekál-/ /25,35/ -Ő-metii-pirroiidin-r-karbor11/-Fro-ben z11-amid
0,47 g (3,24 mmol) MegVal-OH-t és 1,71 g (3,24 mmol) Vai-MaV'ai~ ~i {2S, 3S) ~3~metii~pirrolidín-2~karboniil -Prc—bensíi-amidot feloldunk 32 mi vízmentes d,N-dimetii-formamidban. Az oldatot lehűtjük 4 *G-ra, hozzáadunk 1,07 mi ('8,48 mmol) DSPCN-t és 1,88 mi (12,36 mmol) fc.rietil-ami.nt. A. reakcióeíegyet éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap az d,h-dimetll-formamídot csökkentett nyomáson Iedesztílláljuk, a maradékot feloldjuk 100 ml
64.974/SS metilén-dikroriában, az oldatot telített nátriom-hidrogén-kar·· booát—oldattal, háromszor, viszel egyszer, 5 %~os cftromsavoidattál háromszor, vízzel egyszer, végül telített nátrium-klóriá-oldattal egyszer mossuk. A szerves réteget nátrium-szulfáton megszárítjuk, es az oldószert csökkentett nyomáson ledesztiiláljuk, A termék színtelen olaj, mennyisége 0,88 g. A nyersterméket feloldjuk forrásban lévő diizopropii-éterben, és az oldatot lehűtjük, ekkor a termék kiválik. A csapadékot szűrjük, majd megszáritjuk. A tiszta termék kitermelése 0,56 g. Gyors atomokkal végzett bombázással kapcsolt tömegspekérometrlávai jellemezzük.
(ΜΑΗ) + ~ 655, 6 .
Az 1.. es 2, Oí éIdában leírtak szerint a következő veovüietekét állatjuk erő:
Xaa Val Xaa Val
Xab Xac Xab Xac
5. Xaa Val Xab Xac Xaf
6. Xas Val Xab Xac X&g
7. Xaa Val Xab Xac Xab,
8. Xaa Val Xab Xac Xai
9. Xaa Val Xab Xac Xak
10. Xaa Val Xab Xac Xal
11. Xaa Val Xab Xac Xa®
2 Xaa Val Xab Xac Xaa
13, Xaa Val Xab Xac Xac
n. Xaa Val Xab Xac Xap
151 Xaa Val Xab Xac Xaq
IS. Xaa Val Xab Xac xar
17. Xaa Val Xab Xac Xas
18. Xaa Val Xab Xac Xat
15, Xaa Val Xab Xac Xat
20. Xaa Val Xab Xac Xav
·>·$ ι£>-«te « Xaa Val Xab Xac Xav
22. Xaa Val Xab Xac Xax
ebe v* *. Xaa Val Xab Xac Xay
Λ . Xaa Val Xab Xac Xas
% Xaa Val Xab Xac Xba
26. Xaa Val Xab Xac Xbb
27. Xaa Val Xab Xac Xbc
28. Xaa Val Xab Xac Xbd
φ* «« * * A „ « « * X * *«
2S. Xaa Val Xab Xac Xbe
30. Xaa Val Xab Xac Xbf
31. Xbg Val Xab Xaa Xar
32. Xbg Val Xab Xaa Xas
33, Xbh Val Xab Xaa Xar
34. Xhh Val Xab Xaa Xaa
35. Xaa Ile Xab Xaa Xar
38. Xaa Xle Xab Xaa Xas
37. Xaa Xbk Xab Xaa Xar
38. Xaa Xbk Xab Xaa Xas
39. Xaa Val Xbl Xaa Xar
40. Xaa Val Xbl Xaa Xas
41. Xaa Val Xab Xaa Xbl
42. Xaa Val Xab Xaa Xbm
43. Xaa Val Xab Xaa Xba
44. Xaa Val Xab Xbo Xae
45. Xaa Val Xab Xbc Xbp
46. Xaa Val Xab Xbo Xar
47. Xaa Val Xab Xbo Xas
48. Xaa Val Xab Xbo Xbo
49. Xaa Val Xab Xbc Xae
50. Xaa Val Xab Xbq Xar
51. Xaa Val Xab Xbq Xas
52. Xaa Val Xab Xbq Xb©
53. Xaa Val Xab Xbr Xbp
54 . Xaa Val Xab Xbr Xaa
55. Xaa Val Xab Xbr Xas
58« Xaa Val Xab Xbr Xar
57. Xaa Val Xab Xbs Xae
58. Xaa Val Xab Xba Xas
59. Xaa Val Xab Xbs Xar
80. Xaa val Xab Xac Xbc
81. Xaa val Xab Xac Xbt
82 . Xaa Val Xab Xbq Xbc
83. Xaa Val Xab Xbq Xbb
64 . Xaa Val Xab Xac Pro Xbv
65. Xaa Val Xab Xac Pro Xbw
§0 . Xaa Val Xab Xac tbv» Xbr
87, Xaa Val Xab Xac Pro Xby
88. Xaa Val Xab Xac Pro Xbc
84. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv
85. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv
68. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbx
67. Xaa Val Xab Xbq Pro Xby
68. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbc
89. Xaa Val Xab Xbo Xac
70, Xaa Val Xab Xbq Xac
72. Xaa Val Xab Xbq Xbo 72. Xaa Val Xab Xbo Xba
X Λ * X
Példák a szixsfcetiaált új vegyületek tömeg-spektroszkópiával történő jellemzésére ax alábbi táblázat szerint;
A példa száma Tomegspektrométriás analízis gyors atomokkal végzett bombázással (a mart molekulatömeg értéke) 'Ί
1. táblázat
Az 1, ás 2, példák szerint előállított vegyületek szekvencia azonosítása vegyület(ek)
X φ * φ> fc *
X*.
Φ w « Φ * *
Xal:
*
-ί
A találmány szerinti vegyületek daganatellenes hatását a szokásos eljárásokkal vizsgálhatjuk, például ez alább ismertetett módszerrel.
A. In vitro módszer
A sejttoxicitást a tapadó sejtvonalakra kidolgozott sztoridéra módszerek valamelyikével, például a mikrokultúra tetrazőiium próbával (angol nyelvű rövidítésen MTT) határozzuk meg. A próba leírása a szakirodalomból ismert [ Alley, M.ü. et al., üancer Research, 48, 589--60Ú (1988}] . A méréshez szükséges mikrotitráló lemez kultúrához exponenciálisan növekvő daganatos sejteket, például HT-29 vastagbél karcínóma vagy uX-1 tüdő-daganat sejteket használunk, A 96 mintahelyes mikrotitráló lemez mindegyik mintaheiyébe 5.GÖO-20.000 sejtet helyezünk 150 ni tápfolyadékban, és éjjelen át növesztjük a sejteket 37 °C-on. A vizsgálandó vegyületeket tízszeres hígításban, lQ”4~10“i!Jmo-Í mennyiségben adjuk a mintaheivekhez, majd a sejteket 4 8 órán keresztül ínkubáljuk. Az élő sejtek számának meghatározása céljából mindegyik mintahelyhez MTT festéket adunk [a 2,5~difeni1-3~
-(4, ö-dimetil-tiazol-2-li}-tetrazolium-bromid fiziológiás nátrium-klorid-oidattaí készített, 3 mg/ml koncentrációjú oldatából 50 μΙ-t] > Az elegyet 37 °C-on 5 órán keresztül Ínkubáljuk, majd mindegyik mintahelyhez 50 μί 25 %-os 2-es pü-jú nátrium-iaurl1szuifát-oldatot adunk. Éjjelen át tartó Inknbálás után a mintahelyek abszorbanciáját ÉL1SA leolvasóval határozzuk meg 550 rímnél. Az osztódott sejteket tartalmazó mintahelyek adatainak átlagát és a */- hibát az alábbi képletet felhasználva számítjuk ki, ahol a T/C %-a kezelt élő sej tek./kon troli sejtek %-a:
S4. S7.Í/HZ a kezelt sejtek optikai, sűrűsége
--- κ 100 = T/C % a kontroll sejtek optikai sűrűsége
A vizsgált vegyületeknek az a koncentrációja, amelyik a sejtek növekedését 50 %-ban gátolja, az. úgynevezett ICjq érték.
A vizsgált vegyület példájának száma íCoq (mól)
1. 1 x IC”9
2 . I x lö-
45, 1 x 10j;
53. 1 x 10
B. Xn vivő módszer
A találmány szerinti vegyületek in vívó hatékonyságát olyan prekiinikai vizsgáló módszerekkel vizsgáljuk, -amelyek adatai alapján következtetni lehet azok klinikai felhasználhatóságára. A vizsgálatokat olyan meztelen egereken végezzük, amelyekbe daganatos szövetet, előnyösen humán eredetűt, ültetnek be (esek az úgynevezett ”xenograft állatok); ez az eljárás jól ismert ezen a hatásterületen. A vizsgálandó vegyület daganatellenes hatékonyságát úgy értékeljük, hogy ilyen xenograftot~hordoz.ö állatokat kezelnek velük.
Részletezve a fentebb mondottakat, timuszuktól megfosztott meztelen egerekben növesztett humán mellrák (MX-1) daganatos szövetből mintegy 50 mg. tömegű darabot ültetünk be egy új recipiens egérbe, A beültetés napját a 0~ik napnak tekintjük. Hat-tíz napa! később az egereket a vizsgálandó vegyülettel, intravénás injekció formájában, dózisonként 5-10 állatból álló escb 4,974 / δε'.
X * portokat kecelünk. A vegyületeket 3 héten keresztül másodnaponként adagoljuk; a dózisok. 1-100 mg/testtömeg kg közöttiek. A daganat átmérőjét és az állatok testtömegét hetente két alkalommal mérjük meg. A daganat térfogatát a Vámzár mérőkörzővel mért daganat átmérők alapján, a következő· képlettel számítjuk ki:
(hosszúság x szélesség2} ::: a daganat térfogata mm^-ben Mindegyik kezelt állatcsoportban kiszámítjuk a daganat térfogatot és a T/C értéket a kezeletlen o-sooort daoanatálhoz viΟΠ VÍ. uVS.
A.z új vegyületek jő daganatgétló hat £4.9?4/3£ (1) «X
Αχ 1. számú szekvencia adatai: íi) A szekvencia jellemzői;
(A) Hossz: 5 aminosav {BJ Típus: aminosav ÍD) Topológia; lineáris íii) Molekulatípus: peptid (xíí Az 1. számú szekvencia leírása;
Xaa Val Xaa Xaa Xaa (2) A 2. számú szekvencia adatai: fi) A szekvencia jellemzői:
ÍA) Hossz: 5 aminosav (B) Típus: aminosav ÍD) Topológia; lineáris (rí) Molekulatípus: peptid (xi) A 2. számú szekvencia leírása:
Xaa Tie Xaa Xaa Xaa (3) A 3. számú szekvencia adatai:
íí) A szekvencia jellemzői:
ÍA) Hossz; 5 aminosav (3) Típus: aminosav (D) Topo1dg i a: 1ineár i s (ii) Molekniatipus: peptid (xi) A 3. számú szekvencia leírása:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa (4) A 4. számú szekvencia adatai: ír) A szekvencia jellemzői:
ÍA) Hossz: 5 aminosav ÍS) Típus: aminosav ÍD; Topológia; lineáris (ii) Moiekulatípus: peptid (xi) A 4. számú szekvencia leírása:
Xaa Var Xaa Xaa ?ro Xaa
64,.9W8S
Χ^Ν-ΟΗΧ-ΟΟ-Α-Β-Β-Β- {F} fe~K (ϊ >
általános képletű új peptidek — amely képletben R- jelentése metii-, etil- vagy izopropilcsoport.;
R^ jelentése hídrogénatonp. metii- vagy etílesoport;
R^-N-R2 jelentése együtt párróliáin gyűrű;
A jelentése valil-, izoleucii-, leuc.il-, 2-tsrc-butíl~giicíl~,
2-etil-gIicil·-, norleucíi- vagy norvalil-maradék;
B jelentése N-metil-valil-, -leuc.il-, -icoiencíl-, -norvalil-,
-no rieucíl-, -2-1 e ro-but11-c1i c iI-, -3-t e rc-but i1-a i aη ί1vagy - 2 ~ e t ί1-g1i o11-maradék;
D jelentése 3,4-dehidroprol.il-, 4-fl.nor-propii-, 4,4-dífluor-propii-, azstidin-2-karbonii-, 3-metii-prolii-, 4-metil-proiiI vagy
5-metii-proli1-maradék;
E jelentése prolii-, homoprolil-, hidroxi-prolil- vagy
11a t o1í d in-4-karbonil-ma rádék;
F jelentése valil-, 2-terc~butiI-glieil-, izoieucil-, lencíl-,
2-orklohexil-gzicil-, norieucíI-, norvalii-, neopentil-giicíl-, alsnii-, B-aianíi- vagy amino-izobutirii-maradék;
X jelentése alkii- (előnyösen 2-5 szénatomos), ciklopropiivagy c1k1openti1csoport;
t értéke 0 vagy 1; és
X jelentése 1-4 szénatomos alkoxi-, benzii-oxi-, amíno-csoport vagy szubsztituált aminocsoport az alábbiak közül:
-NH-11-12 szénatomos alkil), -RH-C (CH3) 2CN, -Rfí-C (CH3) .-CCH, :00 0:0 00 0
0
Οί
-Nii-CíCHshCülh, > -hH-C<:CH.3) sCH2CH2OKf -NH-C (CH;=).2CH2OH,
-hH~{3~8 szénatomos cikloaikil), -NR- [3.3 . Q]-bíciklooktil, norefedril-, norpszeudoeíedril-, -NH-kinoiil, -NR-pirazil, ~N'R —CH 2 - ben z i mida 2 ol i I, -NH-atíamantί1, -NH-C H ?~adamant11,
-GH-CH (CHd-feaxI, -NH-C (c; H ·.; > 2-fenil, ~G(1~4 szénatomos aikoxi)-(1-4 szénatomos alkii),
-N(l-4 szénatcmos altexl)~CH2~£enil, -N/I-i szénatomos aikoxi)-ien.il,
-N · CH3) OBzl, -NH-ÍCüU-fonil (ahol v - Ο, 1, 2 vagy 3),
-NH~ (CHk).π,-nartil (ahol m ~ 0 vagy I) , -NH-(CH?) v-beazhidril (ahol w - >3, 1 vagy 2), -HH-bifenil, -NH-pirid-il, -NH-CHg-pirióil, ~ NH - c H 2 - CH 2 - p i r i d ί 1, -h H-benzotiazolil, ~ MH.~b e η ζ o i ζ o t í a ζ ο 1.1.1, -KH-foenzopirasolil, -NH-benzoxazoli 1, -NH- ( CH?) í;!~f luorenil (ahol m ~ 0 vagy 1), ~NH~pi.rha.idil, -NH- (CH?) indáról (ahol m- 0 vagy 1) , -HH-(CH?CH?O) y-GH? (ahol y =» 0, 1, .2, 3, 4 vagy 5), -NB- (CH^CHgO) y-CH2CH3 (a.ho.1 y - 0, 1, 2, 3, 4 vagy 5), -NGH'2-N.H-Cg.H'K., -HCBs-NK-CH^-CeHv vagy K jelentése az alábbi csoportok bármelyike::

Claims (6)

  1. és fiziológiailag elviselhető savakkal alkotott sóik.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében
    R1 jelentése metii- vagy etiicsoport;
    Rz jelentése hidrogénatom, metil- vagy etiicsoport;
    A jelentése valil-, izoleucil- vagy 2-tere-butii-glicil-maradék; 8 jelentése H-mstil-valii-, -izoleucil- vagy -2-tero-butii-glieil'
    -maradék;
    Ώ jelentése 3,4-debidroproiil-, 4-fluor-prop.il-, azetidin-2-karboníl3-metil~prolil- vagy 5-metii-proiii-maradék;
    S jelentése prolii-, hameproiil---, hidroxi-proiil- vagy tiazolidin
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti vegyületek, amelye képletében
    K jelentése ~OC(CH3)3í -HHCH2CH3, -NH (Cfí2) 2CH3, -NH (CH2) 3CH3
    -Id-HCt-bUeig, -NH(CH.2hCH3, ~ΕΗ(οΗ2; 6CH3, -NH(CH2) 7CK3, ~NHCH.(CH3)2
    -NHCH (CH3: CH2CH3, -NHCH (CH3 ) C:H2CH2CH3, -NHCR tCRrfrf }2 -KHCH (abClbCHA 2, -NHC (CHb 3, -RHCH (CH2CR3) CH2CH2CH3
    -NHCH tCHb CH ÍCH;P 2, -HHCH ; CHAdb í CH (Cü2 i;, -NHCR (CH3) C (C.H3 } 3
    -NH-cíklopropil, -NH-ciklobutii, -NH-oíkiopentil, -NH-cikiohezil b »*· t *
    -NR-cikloheptí1, ~MH~-erkiooktií , -NH-biciklo[3.3.0] cfctil, -N(CHbOCH3f ~WH.3ÍOCH2CH3:, ~N (CRC OCrkCH;:, ~N(CH ;) OCíbCH2CH3, -X (CH5) OCH (CH2; 2, -X (CH2CH3 > OÖV, -N ( Ch2CK3) OCHgbh, ~N (CH (CH 2) 2) OCH3 , -X ÍCHÓ OCH2CsHt, N«OCH3í CHyCGR, ~N (CHy) OCŐHS, -NH-CHyCgHs, ~N (CH2; 2CgH3í -X(CH2)3CsH3/ ~NHCfííCH3}CsHSf ~XBC <CH-3J 2Ce.H5, -NHC(CH3) 2CH2ÜK3, -NHC(CH3) <CHgCR3}2, -NHCH(CH2)CH(OH)C6K5< -XHCHy-cíklohex.il ~HH~CK2CF3, -XHCH (CH2F) 2, -XHC (CH3 ? 2CH2CH2OH, -XH(CH2CH2O)2OH2CK2, -NKC (CH2 · 2CK (CH2)2, -NHC (CH3s 2CX, ~XRC{CK3}2CCH, norezedril-, norpszeudoefedrii-, -HH-'kínolil, -NH-piraz.il, ~NH~ (2-adamant.il), -NH~ (l~adamantii) , -NH-CH^-adamantil, -NH-CH^-naftil < -NH__foenzfoidr.il, -NH-bífení1, -NH-pi.rid.il, ~NH-CH2~píridil, -NH-CHg-CH^-pirídil, -NH-foenzotía zoli.1,
    -NH-benzcizotiazciil, -NH-henzopíra zolii, -NH-foenzoxazoli 1, ~NK---flnoter.il, -HH-pirimádil, -NH-CH2-{4-metiI-2-tiasolil), ~XH~CH2~(2-fotii), ~BH~Cib~ (2-tienil) , -KH-CH2- (S~nxrtri-2~tienilá , -NH- < 2~tiazol.il), -NH- (3-i'zoxa Zolii), -NH~{3~mecii~S~.izoz.azoiil)·, -NH-(3-mt.il~5~izotiazolii), ~NH~ [2- (trifluor-raet.il] ~5~tiadiazol.il], -NH-(2-ciklopropil-5~tiadiazolil; , ~NHC(OH3;cC^Crb csoport, vagy K jelentése lehet az alábbi csoportok bármelyike:
  4. 4. Az .1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek gyógyászatban, különösen onkológiai betegségek kezelésére való •o. vv/íenemip:
    #*· $ alkalmazásra.
    -4”karbonii~maradók;
    F jelentése b-valil™, 2-terc-butiI-glicil-, D-izoIencii-, D-leucil vagy amino-izobotirii-maradék;
    X jelentése -CH<C.H3} 2,· -CC€H3}3 vagy -CH(CH3) CH2ÜR3 csoport; es t értéke 0 vagy I.
  5. 5. Gyógyszerkészítmény, amely gyógyszerészetileg elfogadható hordozót és egy 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület terápiásán hatásos mennyiségét tartalmazza.
  6. 6. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyűiet alkalmazása emlősben tumor kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására 7. kijárás az '1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy azokat a peptidkémia ismert módszereivel állítjuk elő.
HU9801910A 1995-06-07 1996-06-03 Dolasztatinszármazékok, elõállításuk és felhasználásuk HU228071B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/472,453 US5831002A (en) 1992-05-20 1995-06-07 Antitumor peptides
PCT/EP1996/002392 WO1996040751A1 (en) 1995-06-07 1996-06-03 Novel dolastatin derivatives, their preparation and use

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP9801910A2 HUP9801910A2 (hu) 1999-01-28
HUP9801910A3 HUP9801910A3 (en) 1999-06-28
HU228071B1 true HU228071B1 (hu) 2012-09-28

Family

ID=23875567

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9801910A HU228071B1 (hu) 1995-06-07 1996-06-03 Dolasztatinszármazékok, elõállításuk és felhasználásuk
HU9801817A HU228073B1 (hu) 1995-06-07 1996-06-03 Új dolasztatin-származékok, elõállításuk, alkalmazásuk és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9801817A HU228073B1 (hu) 1995-06-07 1996-06-03 Új dolasztatin-származékok, elõállításuk, alkalmazásuk és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Country Status (33)

Country Link
US (1) US5831002A (hu)
EP (2) EP0871656B1 (hu)
JP (2) JP4221062B2 (hu)
KR (2) KR100437985B1 (hu)
CN (2) CN1182154C (hu)
AR (2) AR003427A1 (hu)
AT (2) ATE224910T1 (hu)
AU (2) AU725170B2 (hu)
BG (2) BG102125A (hu)
BR (2) BR9609423A (hu)
CA (2) CA2219818C (hu)
CO (2) CO4700527A1 (hu)
CZ (2) CZ293682B6 (hu)
DE (2) DE69623992T2 (hu)
DK (2) DK0832104T3 (hu)
ES (2) ES2186783T3 (hu)
HR (2) HRP960257A2 (hu)
HU (2) HU228071B1 (hu)
IL (2) IL122215A (hu)
MX (2) MX9709147A (hu)
MY (2) MY119042A (hu)
NO (2) NO318384B1 (hu)
NZ (2) NZ310444A (hu)
PL (2) PL185762B1 (hu)
PT (2) PT871656E (hu)
RO (2) RO118953B1 (hu)
SI (2) SI0832104T1 (hu)
SK (1) SK282466B6 (hu)
TR (2) TR199701545T1 (hu)
TW (2) TW508357B (hu)
UA (2) UA46776C2 (hu)
WO (2) WO1996040751A1 (hu)
ZA (2) ZA964710B (hu)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807984A (en) * 1995-11-09 1998-09-15 Basf Aktienegesellschaft Oligopeptides, the preparation and use thereof
TW474946B (en) * 1995-12-15 2002-02-01 Basf Ag Novel compounds, the preparation and use thereof
US20010009901A1 (en) * 1996-12-11 2001-07-26 Basf Aktiengesellschaft Germany Antineoplastic peptides
US5965537A (en) * 1997-03-10 1999-10-12 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives with carbonyl and heterocyclic functionalities at the C-terminus
US6103698A (en) * 1997-03-13 2000-08-15 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
US6143721A (en) * 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US6015790A (en) * 1997-10-06 2000-01-18 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US6395897B1 (en) 1999-03-02 2002-05-28 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Nitrile compounds useful as reversible inhibitors of #9 cathepsin 5
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
AU775373B2 (en) 1999-10-01 2004-07-29 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US7018642B2 (en) 2001-04-27 2006-03-28 The Procter & Gamble Company Compounds, compositions, and methods for controlling biofilms
AU2002359792A1 (en) * 2001-12-18 2003-06-30 Proteologics, Inc. Methods and compositions for the inhibition of viral release
WO2003072754A2 (en) * 2002-02-27 2003-09-04 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
WO2006013552A2 (en) 2004-08-02 2006-02-09 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Articles of peptide nanostructures and method of forming the same
CA2607940C (en) 2005-05-18 2009-12-15 Aegera Therapeutics Inc. Bir domain binding compounds
EP1924245A2 (en) * 2005-08-19 2008-05-28 Government of the United States of America, Represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Topical formulations of histone deacetylase inhibitors and methods of using the same
EP1973928A2 (en) * 2005-10-11 2008-10-01 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Self-assembled fmoc-ff hydrogels
US8163792B2 (en) 2006-05-16 2012-04-24 Pharmascience Inc. IAP BIR domain binding compounds
JP5452223B2 (ja) * 2006-07-24 2014-03-26 テトラロジック ファーマシューティカルズ コーポレーション Ｉａｐ阻害剤
CN101674835B (zh) * 2007-04-12 2013-12-11 台湾神隆股份有限公司 制备加兰他敏的方法
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
US8283372B2 (en) 2009-07-02 2012-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corp. 2-(1H-indol-3-ylmethyl)-pyrrolidine dimer as a SMAC mimetic
SG10201501095WA (en) 2010-02-12 2015-04-29 Pharmascience Inc Iap bir domain binding compounds
CA2822556A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc Macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
CN103380132B (zh) 2010-12-30 2016-08-31 益安药业 菲啶大环丙型肝炎丝氨酸蛋白酶抑制剂
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
EA201391756A1 (ru) * 2011-05-27 2014-05-30 Амбркс, Инк. Композиции, содержащие, способы, включающие, и применение производных доластатина, связанных с неприродными аминокислотами
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
MX2024002571A (es) 2021-09-03 2024-03-20 Toray Industries Composicion farmaceutica para tratamiento y/o prevencion de cancer.

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4879278A (en) * 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
DK0934950T3 (da) * 1991-08-09 2002-07-29 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Tetrapeptidderivat
CZ292612B6 (cs) * 1992-05-20 2003-11-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Peptid s protirakovinnou aktivitou, jeho použití a farmaceutický prostředek s obsahem takového peptidu
US5530097A (en) * 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9801910A3 (en) 1999-06-28
ATE224910T1 (de) 2002-10-15
IL122215A (en) 2001-08-26
DK0871656T3 (da) 2003-01-27
AU725164B2 (en) 2000-10-05
SK165397A3 (en) 1998-10-07
DE69623472T2 (de) 2003-08-21
NO975710D0 (no) 1997-12-05
NO975710L (no) 1998-02-02
MY124487A (en) 2006-06-30
US5831002A (en) 1998-11-03
PT871656E (pt) 2002-12-31
CA2219819A1 (en) 1996-12-19
UA46775C2 (uk) 2002-06-17
CZ376397A3 (cs) 1998-06-17
PL185763B1 (pl) 2003-07-31
EP0871656B1 (en) 2002-09-25
ES2188759T3 (es) 2003-07-01
CN1182154C (zh) 2004-12-29
JPH11504652A (ja) 1999-04-27
CN1187198A (zh) 1998-07-08
RO118953B1 (ro) 2004-01-30
UA46776C2 (uk) 2002-06-17
DK0832104T3 (da) 2003-01-06
HU228073B1 (hu) 2012-09-28
KR19990022582A (ko) 1999-03-25
PL185762B1 (pl) 2003-07-31
PL323723A1 (en) 1998-04-14
TR199701545T1 (xx) 1998-04-21
DE69623992D1 (de) 2002-10-31
TR199701544T1 (xx) 1998-03-21
IL122216A0 (en) 1998-04-05
CA2219818C (en) 2008-05-20
NZ310443A (en) 1999-10-28
SI0871656T1 (en) 2003-08-31
ZA964710B (en) 1997-12-08
CN1187199A (zh) 1998-07-08
BR9609423A (pt) 1999-06-29
IL122216A (en) 2002-02-10
IL122215A0 (en) 1998-04-05
MX9709146A (es) 1998-03-31
BG102125A (en) 1998-09-30
DE69623472D1 (de) 2002-10-10
NO317670B1 (no) 2004-11-29
EP0832104B1 (en) 2002-09-04
CZ376597A3 (cs) 1998-06-17
WO1996040751A1 (en) 1996-12-19
WO1996040752A1 (en) 1996-12-19
ZA964711B (en) 1997-12-08
AR003136A1 (es) 1998-07-08
NO975711D0 (no) 1997-12-05
NO975711L (no) 1998-01-30
HUP9801817A3 (en) 1999-06-28
DE69623992T2 (de) 2003-05-22
TW508357B (en) 2002-11-01
AR003427A1 (es) 1998-08-05
NO318384B1 (no) 2005-03-14
HUP9801817A2 (hu) 1998-11-30
BR9609424A (pt) 2000-03-28
CO4700526A1 (es) 1998-12-29
NZ310444A (en) 1999-11-29
JP3957751B2 (ja) 2007-08-15
PL323726A1 (en) 1998-04-14
SI0832104T1 (en) 2003-08-31
AU725170B2 (en) 2000-10-05
CZ293682B6 (cs) 2004-07-14
KR100437986B1 (ko) 2004-09-18
MY119042A (en) 2005-03-31
PT832104E (pt) 2002-12-31
KR19990022583A (ko) 1999-03-25
HRP960257A2 (en) 1998-02-28
CN1182153C (zh) 2004-12-29
HRP960277A2 (en) 1997-10-31
CA2219818A1 (en) 1996-12-19
TW424096B (en) 2001-03-01
EP0832104A1 (en) 1998-04-01
ES2186783T3 (es) 2003-05-16
MX9709147A (es) 1998-03-31
EP0871656A1 (en) 1998-10-21
JPH11504653A (ja) 1999-04-27
KR100437985B1 (ko) 2004-09-18
AU6124296A (en) 1996-12-30
ATE223431T1 (de) 2002-09-15
JP4221062B2 (ja) 2009-02-12
HUP9801910A2 (hu) 1999-01-28
CZ293683B6 (cs) 2004-07-14
AU6124196A (en) 1996-12-30
CA2219819C (en) 2008-05-20
BG102152A (en) 1998-09-30
CO4700527A1 (es) 1998-12-29
RO119783B1 (ro) 2005-03-30
SK282466B6 (sk) 2002-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU228071B1 (hu) Dolasztatinszármazékok, elõállításuk és felhasználásuk
US5502032A (en) Peptides, the preparation and use thereof
US7662786B2 (en) Dolastatin 15 derivatives
EP0642530B1 (en) Derivatives of dolastatin
IL166853A (en) Antineoplastic peptides, their preparation and various uses thereof
SK282467B6 (sk) Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Legal Events

Date Code Title Description
GB9A Succession in title

Owner name: ABBVIE DEUTSCHLAND GMBH & CO KG, DE

Free format text: FORMER OWNER(S): ABBOTT GMBH & CO. KG, DE; BASF AKTIENGESELLSCHAFT, DE

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees