CZ293683B6 - Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje - Google Patents

Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje Download PDF

Info

Publication number
CZ293683B6
CZ293683B6 CZ19973765A CZ376597A CZ293683B6 CZ 293683 B6 CZ293683 B6 CZ 293683B6 CZ 19973765 A CZ19973765 A CZ 19973765A CZ 376597 A CZ376597 A CZ 376597A CZ 293683 B6 CZ293683 B6 CZ 293683B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
methyl
nhch
peptide
nhc
och
Prior art date
Application number
CZ19973765A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ376597A3 (cs
Inventor
Andreas Dr. Haupt
Franz Dr. Emling
Cynthia A. Dr. Romerdahl
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co. Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co. Kg
Publication of CZ376597A3 publication Critical patent/CZ376597A3/cs
Publication of CZ293683B6 publication Critical patent/CZ293683B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

Peptid obecného vzorce I, kde znamená R.sup.1.n. methyl, ethyl nebo izopropyl, R.sup.2.n. vodík, methyl nebo ethyl, nebo R.sup.1.n. a R.sup.2.n. spolu s atomem N dohromady tvoří pyrroilidinový kruh, A zbytky valyl, izoleucyl, leucyl, 2-terc-butylglycyl, 2-ethylglycyl, norleucyl nebo norvalyl, B zbytky N-methylvalyl, N-methylleucyl, N-methylizoleucyl, N-methylnorvalyl, N-methylnorleucyl, N-methyl-2-terc-butylglycyl, N-methyl-3-terc-butylalanyl nebo N-methyl-2-ethylglycyl, D zbytky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroprolyl, 4,4-difluoroprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3-methylprolyl, 4-methylprolyl nebo 5-methylprolyl, E zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl nebo thiazolidin-4-karbonyl, F zbytky valyl, 2-terc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, alanyl, .beta.-alanyl nebo aminoizobutyroyl, X C.sub.2-5.n. alkyl, cyklopropyl nebo cyklopentyl, t je 0 nebo 1, a K C.sub.1-4.n. alkoxy, benzyloxy nebo substituovanou nebo nesubstituovanou aminoskupinu, nebo jeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami. Nové peptidy mají antineoplastický účinek.ŕ

Description

Oblast techniky
Vynález se týká peptidu a farmaceutického prostředku, který ho obsahuje.
Dosavadní stav techniky
Je známé, že peptidy izolované z mořských zdrojů jako Dolastatin-10 (americký patentový spis US 4 816 444) a Dolastatin-15 (evropský patentový spis číslo EP-A-398 558) mají mocnou aktivitu jako inhibitory růstu buněk (Biochem Pharmacology 40, č. 8, str. 1859 až 1864, 1990; J. Nati. Cancer Inst. 85, str. 483 až 488, 1993 a tam uváděné odkazy na literaturu). Na základě zajímavých výsledků při pokusech s nádorovými systémy in vivo se provádějí v současné době další preklinická hodnocení těchto přírodních produktů k iniciaci klinických studií na nemocných rakovinou.
Přírodní produkty mají však ten nedostatek, že jsou špatně rozpustné ve vodných rozpouštědlech a investiční náklady pro jejich syntézu jsou vysoké.
Vynález se týká nových peptidů a jejich derivátů, které představují zlepšený terapeutický potenciál pro ošetřování neopíastových onemocnění ve srovnání s Dolastatinem-15. Kromě toho lze nové peptidy podle vynálezu snadno syntetizovat dále podrobně popsaným způsobem.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je peptid obecného vzorce I
R^^-CHX-CO-A - B - D-E - (F)t-K (I), kde znamená
R1 methyl, ethyl nebo izopropyl,
R2 vodík, methyl nebo ethyl,
R’-N-R2 spolu dohromady pyrrolidinový kruh,
A zbytky valyl, izoleucyl, leucyl, 2-/erc-butylglycyl, 2-ethylglycyl, norleucyl nebo norvalyl,
B zbytky N-methylvalyl, N-methylleucyl, N-methylizoleucyl, N-methylnorvalyl, N-methylnorleucyl, N-methyl-2-terc-butylglycyl, N-methyl-3-terc-butylalanyl nebo N-methyl-2ethylglycyl,
D zbytky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroprolyl, 4,4-difluoroprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3methylprolyl, 4-methylprolyl nebo 5-methylprolyl,
E zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl nebo thiazolidin-4-karbonyl,
F zbytky valyl, 2-íerc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, alanyl, beta-alanyl nebo aminoizobutyroyl,
X alkyl s výhodou s 2 až 5 atomy uhlíku, cyklopropyl nebo cyklopentyl,
-1 CZ 293683 B6 t O nebo 1 a
K alkoxy s výhodou s 1 až 4 atomy uhlíku, benzyloxy nebo substituovanou nebo nesubstituovanou aminoskupinu, nebo jeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami. Vynález se také týká způsobu přípravy těchto peptidů obecného vzorce I, farmaceutických prostředků, které tento peptid obecného vzorce I obsahují spolu s farmaceuticky vhodnými nosiči a kterých se používá pro ošetřování rakoviny.
io Symbol K znamená obzvláště Ci^-alkoxy, benzyloxy, -NH2, -NH-Ci_i2-alkyl, -NHC(CH3)2Cn, -NH-C(CH3)2CCH, -NH-C(CH3)2OCH2, -NH-C(CH3)2CH2CH2OH, -NHC(CH3)2CH2OH, -NH-C3_8-cykloalkyl, -NH-[3,3,0]-bicyklooktyl, norefedryl, norpseudoefedryl, -NH-chinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-CH2-benzimidazolyl, -NH-adamantyl, -NH-CH2adamantyl, -NH-CH(CH3}-fenyl, -NH-C(CH3)r-fenyl, -N(CM-alkoxy)- CM-alkyl, -N(C^15 alkoxy)-CH2-fenyl, -N(C^-alkoxy)-fenyl, -N(CH3)OBzl, -NH(CH2)v-fenyl (v=0,l,2,3), -NH-(CH2)mnaftyl (m=0, 1), -NH-(CH2)w-benzhydryl (w=0,l or 2), -NH-bifenyl, -NHpyridyl, -NH-CH2-pyridyl, -NH-CH2-CH2-pyridyl, -NH-benzothiazolyl, -NH-benzoizothiazolyl, -NH-benzopyrazolyl, -NH-benzoxazolyl, -NH-(CH2)nr-fluorenyl (m=0, 1), -NHpyrimidyl, -NH-(CH2)m-indanyl (m=0, 1), -NH-(CH2CH2O)y-CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -NH20 (CH2CH2O)y-CH2CH3 (y=0,1,2,3,4,5), -(CH2CH2O)y-CH3 (y=0,1,2,3,4,5), -<CH2CH2O)yCH2CH3 (y=0,l,2,3,4,5), -NCH3-NH-C6H5, -NCH3-NH-CH2^C6H5; nebo
-2CZ 293683 B6
COCEt
CH,
Výhodné jsou peptidy obecného vzorce I, kde znamená
R1 methyl nebo ethyl,
R2 vodík, methyl nebo ethyl,
-4CZ 293683 B6
A zbytky valyl, izoleucyl nebo 2-íerc-butylglycyl,
B zbytky N-methylvalyl, N-methylizoleucyl nebo N-methyl-2-/erc-butylglycyl,
D zbytky 3,4-dehydropropyl, 4-fluorprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3-methylprolyl nebo 5methylprolyl,
E zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl nebo thiazolidin-4-karbonyl
F zbytky D-valyl, 2-fórc-butylglycyl, D-izoleucyl, D-leucyl nebo aminoizobutyroyl,
X -CH(CH3)2, -C(CH3)3j nebo -CH(CH3)CH2CH3;
t 0 nebo 1 a
K s výhodou znamená
-OC(CH3)3, -NHCH3, -NHCH2CH3j -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)3CH3j
-NH(CH2)4CH3, -NH(CH2)5CH3j -NH(CH2)6CH3j -NH(CH2)7CH3,
-NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH2CH3, -NHCH(CH3)CH2CH2CH3,
-NHCH(CH2CH3)2, -NHCH(CH2CH2CH3)2, -NHC(CH3)3,
-NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3,-NHCH(CH3)CH(CH3)2,
-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2,-NHCH(CH3)CH(CH3)2,
-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2,-NHCH(CH3)C(CH3)3,-NH-cyklopropyl,
-NH-cyklobutyl, -NH-cyklopentyl, -NH-cyklohexyl,
-NH-cykloheptyl, -NH-cyklooktyl, -NH-bicyklo[3.3.0]oktyl,
-N(CH3)OCH3, -N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3,
-N(CH3)OCH(CH3)2j -N(CH2CH3)OCH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3,
-N(CH(CH3)2)OCH3, -N(CH3)OCH2C6H5, -N(OCH3)CH2-C6H5,
-N(CH3)OC6H5s -NH-CH2-C6H5, -NH(CH2)2C6H5, -NH(CH2)3C6H5j
-NHCH(CH3)C6H5, -NHC(CH3)2C6H5, -NHC(CH3)2CH2CH3,
-NHC(CH3)(CH2CH3)2, -NHCH(CH3)CH(OH)C6H5, -NHCHr-cyklohexyl, -NH-CH2CF3,-NHCH(CH2F)2,-NHC(CH3)2CH2CH2OH,
-NH(CH2CH2O)2CH2CH3, -NHC(CH3)2CH(CH3)2, -NHC(CH3)2CN,
-NHC(CH3)2CCH, norefedryl, norpseudoefedryl,
-NH-chinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-adamant-2-yl (2),
-NH-adamant-l-yl, -NH-CHr-adamantyl, -NH-CH2-naftyl,
-NH-benzhydryl, -NH-bifenyl, -NH-pyridyl, -NH-CH2-pyridyl,
-NH-CH2-CH2-pyridyl, -NH-benzothiazolyl, -NH-benzoizothiazolyl, -NH-enzopyrazolyl, -NH-benzoxazolyl, -NH-fluorenyl, -NH-pyrimidyl, -NH-CH2-(4-methyl)thiazol-2-yl, -NH-CH2-furan-2-yl, -NH-CH2-thien-2-yl, -NH-CH2-(5-methyl)thien-2-yl} -NH-thiazol-2-yl,
-NH-izoxazol-3-yl, -NH-(3-methyl)izoxazol-5-yl,
-NH-(3-methyl)izothiazolyl-5-yl, -NH-(2-trifluormethyl)-thiadiazol-5- -NH-(2-cyklopropyl)thiadiazol-5-yl,
-NHC(CH3)2C=CH2, nebo
-5CZ 293683 B6
Uvedené příklady vynálezu toliko objasňují, nijak jej však neomezují.
Peptidy obecného vzorce I se skládají z L-aminokyselin, F-může však znamenat rovněž Daminokyselinu.
Peptidy obecného vzorce I mohou být ve formě solí s fyziologicky vhodnými kyselinami, jako jsou například kyselina chlorovodíková, citrónová, vinná, mléčná, fosforečná, methansulfonová, octová, mravenčí, maleinová, fumarová, jablečná, jantarová, malonová, sírová, L-glutamová, L-asparagová, pyrohroznová, mukov, benzoová, glukuronová, šťavelová, askorbová a acetylglycin.
Peptidy obecného vzorce I se mohou připravovat o sobě známými způsoby z chemie peptidů. Tak se například mohou postupně skládat z aminokyselin nebo se mohou získat vázáním vhodných malých peptidových fragmentů. Při postupném skládání se vychází z C zakončení peptidového řetězce, který se postupně prodlužuje vždy o jednu aminokyselinu. Při kopulaci fragmentů je možné spolu vázat fragmenty různé délky, přičemž se takové fragmenty získají postupným vázáním aminokyselin nebo rovněž kopulací fragmentů. Při obou těchto způsobech je nutné vázat vzájemně jednotky vytvářením amidové vazby. K tomuto účelu jsou vhodné jak chemické tak enzymatické způsoby.
Chemické způsoby pro vytváření amidové vazby podrobně popsal Mueller (Methoden der organischen Chemie, svazek XV/2, str. 1 až 364, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974; Stewart, Young, Solid, Phase Peptide Synthesis, str. 31 až 34, 71 až 82, Pierce Chemical Company, Rockford, 1984; Bodanszky, Klausner, Ondetti, Peptide Snthesis, str. 85 až 128, John Wiley and Sons, New York, 1976) a jsou rovněž popsány v jiných základních publikacích o chemii peptidů. Obzvláště výhodným je azidový způsob, symetrický a směsný anhydridový způsob, in šitu generované a předformované aktivní estery, použití urethanu chráněného N-karboxyanhydridy aminokyselin a vytváření amidových vazeb za použití systému kopulační složka/aktivátory, přičemž se zvláště uvádějí dicyklohexylkarbodiimid (DCC), diizopropylkarbodiimid (DIC), l-ethoxykarbonyl-2ethoxy-1,2-dihydrochinolin (EEDQ), l-ethyl-3-(3-dimethyIaminopropyl)karbodiimidhydrochlorid (EDCI), anhydrid n-propanfosfonové kyseliny (PPA), N,N-bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)amidofosforylchlorid (BOP-C1), bromo-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát (PyBop), Obenzotriazolyl-N,N,N',N'-tetramethyluroniové soli (HBTU), O-azabenzotriazolyl-N,N,N',N'tetramethyluroniové soli (HATU), diethylfosforylkyanid (DEPCN), 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3oxo-4-hydroxythiofendioxid (Steglichovo reakční činidlo, HOTDO), a l,l'-karbonyldiimidazol (CDI). Kopulační činidla se mohou používat samotná nebo v kombinaci s aditivy, jako jsou například N,N-dimethyl-4-aminopyridin (DMAP) N-hydroxybenzotriazol (HOBt), N-hydroxysukcinimid (HOSu) nebo 2-hydroxypyridin.
Zatímco je zpravidla možné upustit od chránících skupin při enzymatické syntéze peptidů, je přechodná ochrana reaktivních skupin, které se nepodílejí na amidové vazbě, nutná pro reakční sločky při chemické syntéze. Při chemické syntéze peptidů se dává přednost třem běžným způsobům použití chránících skupin: způsob používajícího benzyloxykarbonyl (Z), t-butoxykar
-6CZ 293683 B6 bonyl (Boc) a 9-fluorenylmethoxykarbonyl (Fmoc). V každém případě se používá chránící skupiny na alfa-aminoskupině jednotky prodlužující řetězec. Podrobný přehled skupin chránících aminoskupinu uvádí Mueller (methoden der organischen Chemie, svazek XV/1, str. 20 až 906, Thieme, Verlag, Stuttgart, 1974).
Jednotky, používané pro vytváření peptidové řetězce, se mohou nechávat reagovat v roztoku, v suspenzi nebo podobným způsobem, jaký popsal Murrifield (J. Amer. Chem. Soc. 85, str. 2149, 1963). Obzvláště výhodnými jsou způsoby, při kterých se peptidy vytvářejí postupně nebo kopulací fragmentů se použití chránících skupin Z, Boc nebo Fmoc. Jedna z reakčních složek při způsobu, který popsal Murrifield, se váže na nerozpustný polymemí nosič (označovaný zde také jako pryskyřice). Peptid se zpravidla vytváří postupně na polymemím nosiči za použití chránících skupin Boc nebo Fmoc, rostoucí peptidový řetězec je kovalentně vázán C zakončením na nerozpustné pryskyřičné částice (obr. 1 a 2). Tento způsob umožňuje odstranit reagenční činidla a vedlejší produkty filtrací a tedy je překrystalování meziproduktů zbytečné.
Chráněné aminokyseliny se mohou vázat na jakýkoliv vhodný polymer, který musí být pouze nerozpustný v použitém rozpouštědle a musí mít stálou fyzikální formu, která usnadňuje filtraci. Polymer musí obsahovat funkční skupinu, na kterou se může pevně vázat první chráněná aminokyselina kovalentní vazbou. Pro tento účel jsou vhodné nejrůznější polymery: příkladně se uvádějí celulóza, polyvinylalkohol, polymethakrylát, sulfonovaný polystyren, kopolymer chlormethylovaného styrenu a divinylbenzenu (Murrifieldova pryskyřice). 4-methylbenzhydrylaminová pryskyřice (pryskyřice MBHA), fenylacetamidomethylová pryskyřice (Pam-pryskyřice), pbenzyloxybenzylalkoholová pryskyřice, benzhydrylaminová pryskyřice (BHA-pryskyřice), 4(hydroxymethyl)benzoyloxymethylová pryskyřice, pryskyřice, kterou popsal Breipohl a kol. (Tetrahedron Letters 28, str. 565, 1987, obchodní produkt společnosti BACHEM), 4-(2,4dimethoxyfenylaminomethyl)fenoxypryskyřice (obchodní produkt společnosti Novabiochem) nebo o-chlortritylová pryskyřice (obchodní produkt společnosti Biohellas).
Pro peptidovou syntézu v roztoku se hodí všechna rozpouštědla, jež jsou inertní za reakčních podmínek, obzvláště voda, Ν,Ν-dimethylformamid (DMF), dimethylsulfoxid (DMSO), a-cetonitril, dichlormethan (DCM), 1,4-dioxan, tetrahydrofuran (THF), N-methyl-2-pyrrolidon (NMP) a směsi těchto rozpouštědel. Peptidovou syntézu na polymemím nosiči lez provádět ve všech inertních organických rozpouštědlech, ve kterých jsou použité deriváty aminokyselin rozpustné. Výhodná rozpouštědla jako Ν,Ν-dimethylformamid, dichlormethan, N-methyl-2-pyrrolidon, acetonitril a dimethylsulfoxid a jejich směsi však působí bobtnání pryskyřic. Když je syntéza ukončena, peptid se od polymemího nosiče odštěpí. Podmínky, za kterých je odštěpení od různých pryskyřic možné, jsou popsány v literatuře. Nejběžněji používané odštěpovací reakce jsou popsány katalyzovány kyselinami a palladiem, obzvláště je vhodné štěpení v tekutém bezvodém hydrogenfluoridu, v bezvodé trifluormethansulfonové kyselině, ve zředěné nebo v koncentrované trifluoroctové kyselině, palladiem katalyzované štěpení v tetrahydrofuranu nebo ve směsi tetrahydrofuranu a dichlormethanu v přítomnosti slabé zásady, jako je morfolin, nebo štěpení ve směsích kyseliny octové a dichlormethantrifluormethanolu. V závislosti na zvolených chráničích skupinách, mohou se tyto skupiny udržet na popřípadě odštěpit za štěpících podmínek. Cenné může také částečně odstranění chránících skupin peptidu, mají-li se provést určité derivatizační reakce. Peptidy dialkylované na N-zakončení se mohou připravovat
a) kopulací příslušných Ν,Ν-dialkylaminových kyselin v roztoku nebo na polymemím nosiči,
b) redukční alkylací peptidu vázaného na pryskyřici v systému dimethylformamid/1% octová kyselina s NaCNBH3 a s příslušným aldehydem nebo ketonem,
c) hydrogenací peptidů v roztoku v přítomnosti aldehydu nebo ketonu a palladia na uhlí.
Různé v přírodě se nevyskytují aminokyseliny podle vynálezu jsou obchodně dostupné nebo se mohou syntetizovat z obchodně dostupných materiálů způsoby známými ze stavu techniky.
-7CZ 293683 B6
Obchodně dostupnými výchozími materiály jsou kyselina azetidin-2-karboxylová, 3-methyl-Lprolin, 5-methyl-L-prolin a skupinou Boc nebo Fmoc chráněný 3,4-dehydroprolin (ACROS, NOVABIOCHEM, BACHEM). Cis- a trans-4-fluoroprolin lze připravit způsobem, který popsal Panasik a kol., (N. Panasik. E. S. Eberhardt, A. S. Edizon, D.R. Powell, R. T. Raines, Int.
J. Peptide Protein Res. 44, str. 262 až 269, 1994) z hydroxyprolinu.
Sloučeniny podle vynálezu mohou sloužit k inhibici nebo jinému léčení pevných nádorů (například nádorů plicních, prsních, tlustého střeva, prostaty, žlučníku, konečníku nebo endotriálních nádorů) nebo hematologických onemocnění (například leukemie, lymphomas), podáváním 10 sloučenin savcům.
Speciální předností nových sloučenin podle vynálezu je, že jsou odolnější vůči enzymatickému rozkladu ve srovnání s Dolastatinem-15.
Podávání může být běžnými farmaceutickými, s výhodou onkologickými prostředky, včetně orálních a parenterálních prostředků, subkutánně, intravenózně, intramuskulámě a intraperitoneálně.
Sloučeniny mohou být podávány samotné nebo v podobě farmaceutických prostředků obsahuj í20 cích sloučeninu obecného vzorce I spolu s farmaceuticky vhodným nosičem pro danou cestu podávání. Takovými farmaceutickými prostředky mohou být kombinované výrobky, mohou tedy obsahovat jiné terapeuticky účinné přísady.
Dávka podávaná samcům obsahuje nádor inhibující účinnou látku, která závisí na běžných 25 faktorech, jako je biologická aktivita použité sloučeniny, způsob podání, věk, zdravotní stav a hmotnost pacienta, povaha a druh příznaků, frekvence ošetřování, podávání jiných léků a požadovaný účinek. Typickou denní dávkou je přibližně 0,5 až 50 mg na kg tělesné hmotnosti při orálním podávání a přibližně 0,05 až 20 mg při parenterálním podávání.
Nové sloučeniny podle vynálezu lze podávat ve formě běžných pevných nebo tekutých farmaceutických prostředků, tedy povlečených nebo nepovlečených tablet, kapslí, prášků, granulí, čípků nebo roztoků. Tyto se vyrábějí obvyklým způsobem. Účinné látky mohou být přitom kombinovány s obvyklými farmaceutickými pomocnými látkami, jako s pojivý tablet, plnidly, chránícími činidly, činidly k rozpadavosti tablet, regulátory tekutosti, zvláčňovadly, rozpouštědly, látkami zpožďujícími účinek, antioxidanty a nebo s nosnými plyny (H. Sucker a kol. Pharmazeutische Technologie, Thieme Verlag, Stuttgart, 1978). Takto podávané formy léčiv obsahují normálně hmotnostně 1 až 90 % účinné látky.
Následující příklady vynálezu objasňují, aniž ho jakkoli omezují. V příkladech jsou proteinové 40 aminokyseliny uváděny zkratkami v běžném 3-písmenovém kódu. Jinými zkratkami jsou:
Me2Val = Ν,Ν-dimethylvalin, MeVal = N-methylvalin, Z = benzyloxykarbonyl.
Další použité zkratky:
HOAc - kyselina octová,
DIPEA - diizopropylethylamin
THA - hydrochlorid 9-amino-l,2,3,4—tetrahydroakridinu
MeOH - methanol
-8CZ 293683 B6
Příklady provedení vynálezu
A. Obecné postupy
I. Peptidy podle vynálezu obecného vzorce I jsou buď syntetizované klasickou roztokovou syntézou standardními shora popsanými způsoby za použití Z a Boc, nebo standardními způsoby syntézy v pevném stavu pomocí chránících skupin Boc a Fmoc.
a) Cyklus syntézy pro techniku chránících skupin Fmoc.
1. promytí DMF
2. 20 % piperidinu v DMF
3. 20 % piperidinu v DMF
4. promytí DMF x 1 min x 4 min x 16 min x 1 min
5. přidání předem aktivované chránící aminokyseliny (aktivované 1 ekvivalentem TBTU a 5 ekvivalenty DIPEA v DMF) peptidová kopulace 1 x61 min
6. promytí DMF 3 x 1 min
7. není-li konverze úplná opakování kopulace (zpět k 5.)
8. promytí DMF 3 x 1 min
9. zpět do 2.
Ke kopulaci aminokyselin po N-aminokyselinách se používá reakčních činidel BOP-C1 a PyBrop. Reakční doby se příslušně zvětší zařazením dvojných vazeb. Při roztokové syntéze je pro tento způsob kopulace nej výhodnější použití buď Boc-chráněných (N-karboxy anhydridů) aminokyselin NCA, Z-chráněných (N-karboxyanhydridů) aminokyselin NCA, nebo pivaloylchloridu jako kondenzačního činidla.
II. Redukční alkylace N-zakončení
Peptidová pryskyřice podle Ala se zbaví chránících skupin na N-zakončení (kroky 2 až 4 v Ala) a pak se nechá reagovat s 3-násobným molámím nadbytkem aldehydu nebo ketonu v systému dimethylformamid/1 % octové kyseliny, s přísadou 3 ekvivalentů NaCNBH3. Po ukončení reakce (negativní Kaiser-test) se pryskyřice promyje několikrát vodou, izopropanolem, dimethylformamidem a dichlormethanem. Reduktivní alkylace v roztoku lze například dosáhnout reakcí peptidů zbavených chránících skupin na N-zakončení, peptidových fragmentů nebo aminokyselin s odpovídajícími aldehydy nebo ketony použitím NaCNBH3 nebo systému vodík-palladium na uhlí.
III: Zpracování peptidových pryskyřic získaných podle odstavce lb a II
Peptidová pryskyřice se vysuší za sníženého tlaku a pak se zpracuje 1,5 hodiny směsí TFA/voda (95:5) (Wade, Tregear, Howard Florey Fmoc Workshop Manual, Melboume, 1985). Pryskyřice se odfiltruje a promyje se TFA a dichlormethanem. Filtrát a promývací roztoky se zkoncentrují a peptid se vysráží přísadou diethyletheru. Po ochlazení v ledové lázni se sraženina odfiltruje, vyjme se do 30% octové kyseliny a lyofilizuje se.
IV. Použije-li se o-chlorotritylové pryskyřice (obchodní produkt společnosti Biohellas), míchá se 1 hodinu při teplotě místnosti suspenze peptidové pryskyřice v systému octová kyselina/trifluorethanol/dichlormethan (1:1:3). Pryskyřice se odfiltruje za odsávání a důkladně se promyje štěpícím roztokem. Spojené filtráty se zkoncentrují ve vakuu a zpracují se etherem. Vysrážená
-9CZ 293683 B6 pevná látka se odstraní filtrací nebo odstředěním, promyje se diethyletherem a vysuší se za sníženého tlaku.
V. Čištění a charakterizace peptidů
Čištění se provádí gelovou chromatografií (SEPHADEX G-10, G-15/10 % HOAc, SEPHADEX LH20/MeOH) a/nebo středotlakou chromatografií (stacionární fáze: HC-SIL C-8, 20-45 mikrometrů, 100 Angstrom; mobilní fáze: gradient s A = systém 0,1 % TFA/voda, B = systém 0,1 % TFA/MeOH), nebo preparativní chromatografií HPLC (stacionární fáze: Waters Delta-Pak C-18, 15 mikrometrů 100 Angstrom; mobilní fáze: gradient s A = systém 0,1 % TFA/voda, B = systém 0,1 % TFA/MeOH).
Čistota výsledných produktů se zjišťuje analytickou chromatografií HPLC (stacionární fáze: 100 2,1 mm VYDAČ C-18 300 Angstrom; mobilní fáze: acetonitril-voda gradient, pufrováno s0,l % TFA, 40 °C). Charakterizace bombardováním rychlými atomy hmotovou spektroskopií a NMR spektroskopií.
B.- Specifické postupy
Příklad 1 (SEQIDNO:1)
Me2V al-V al-MeV al—3,4-dehydroproly 1-Pro-amid
Nechává se reagovat 0,53 g pryskyřice Fmoc-RINK (substituce 0,46 mmol/g), odpovídající velikosti dávky 0,25 mmol jako v Ala pokaždé s 0,4 mmol
Fmoc-Pro-OH,
Fmoc-3,4-dehydroprol in
Fmoc-Me Val-OH,
Fmoc-Val-OH,
Fmoc-Val-OH.
Aminokyselina následující po N-methylaminokyselině se spojí dvojnou vazbou kopulačním činidlem ByProp. Po ukončení iterativních syntetických cyklů, se z peptidové pryskyřice odstraní chránící skupiny N-zakončení (kroky 2 až 4 v Ala) a nechá se dále reagovat s vodným roztokem formaldehydu jako v AII a vysuší se za sníženého tlaku. Výsledná pryskyřice se odštěpí TFA jako v ΑΠΙ. Surový produkt (132 mg) se čistí preparativní středotlakou chromatografií, čímž se získá 32 mg žádaného čistého peptidu (10 až 40 % A v 10'; 40 až 90 % A ve 140'). Sloučenina se dále charakterizuje bombardováním rychlými atomy hmotovou spektroskopií a NMR spektroskopií. [M+H]+.
Příklad 2 (SEQ ID NO: 1)
Me2Val-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamid
a) Z-(2S,3S)-3-Methylpyrrolidin-2-karboxylová kyselina
Ve 4 ml vody a 2,33 ml 5N roztoku hydroxidu sodného se rozpustí 1,5 g (2S,3S) 3-methylpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (11,6 mmol). Během jedné hodiny se přidá při teplotě 4 °C 2,12 ml benzylchlorformátu (Z-Cl; 12,8 mmol) a 6,5 ml 2N roztoku hydroxidu sodného. Po míchání směsi přes noc při teplotě místnosti se nastaví hodnota pH na 10. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (4x), nastaví se na hodnotu pH 2 5N kyselinou chlorovodíkovou
-10CZ 293683 B6 a extrahuje se dichlormethanem (2x). Spojené organické extrakty se vysuší síranem sodným a zkoncentrují se ve vakuu. Získá se 1,75 g produktu v podobě oleje.
b) Z-(2S,3S)-3-Methylpyrrolidin-2-karbonyl-L-prolylbenzylamid
V 66 ml dichlormethanu se rozpustí 1,75 g (2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karboxylové kyseliny (6,62 mmol) a 1,59 g prolinbenzaldehydhydrochloridu (6,62 mmol) a ochladí se na teplotu 4 °C. Po přidání 0,89 ml N-methylmorfolinu (7,94 mmol), 0,304 g HOBt (2,21 mmol) a 1,28 g EDCI (6,62 mmol) se reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti, zředí se 150 ml dichlormethanu a promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx) 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (lx), a nasyceným roztokem chloridu sodného (lx). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 2,63 g produktu v podobě vysoce viskózního oleje.
c) (2S,3 S)-3-MethylpynOlidin-2-karbonyl-L-prolylbenzylamid
Ve 43 ml methanolu se rozpustí 2,63 g Z-(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl-L-prolylbenzylamidu (5,8 mmol). Po přidání 105 mg 10% palladia na uhlí se reakční směs hydrogenuje přes noc. Po filtraci a vysušení se získá 1,88 g chránících skupin zbaveného dipeptidu.
d) Z-MeVal-[(2S,3 S)-3-Methylpyirolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamid
V 58 ml dichlormethanu se rozpustí 1,54 g Z-MeVal-OH (5,8 mmol) a 1,88 g (2S,3S)-3methylpyrrolidin-2-karbonyl-L-prolyl-benzylamidu a ochladí se na teplotu 4 °C. Po přidání 0,78 ml N-methylmorfolinu (6,96 mmol), 0,266 g HOBt (1,93 mmol) a 1,12 g EDCI (5,8 mmol) se reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti, zředí se 120 ml dichlormethanu a promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (lx) a nasyceným roztokem chloridu sodného (lx). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 3,01 g produktu v podobě suché bílé pěny.
e) MelVal-[(2S,3S)-3-Methylpyrrolidín-2-karbonyl]-Pro-benzylamid
Ve 39 ml methanolu se rozpustí 3,01 g Z-MeVal-[(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl]Pro-benzylamidu (5,33 mmol). Po přidání 96 mg 10% palladia na uhlí se reakční směs hydrogenuje tři hodiny. Filtrací a odpařením k suchu se získá 2,18 g chránící skupiny zbavené tripeptidu v podobě čirého oleje.
f) Z-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-Methylpyrrolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamid
V 10 ml dichlormethanu se rozpustí 1,28 g Z-Val-OH (5,11 mmol). Po přidání 0,73 ml triethylaminu (5,37 mmol) a ochlazení na teplotu -10 °C se pomalu přidá 0,66 g pivaloylchloridu (5,37 mmol). Po 1,5 - hodinovém míchání směsi při teplotě -10 °C následuje přísada roztoku 2,18 g MeVal-[(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (5,11 mmol a 0,73 ml triethylaminu (5,37 mmol) v 10 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě -10 °C a při teplotě místností přes noc, zředí se dichlormethan a promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (lx) a nasyceným roztokem chloridu sodného (lx). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 2,75 g produktu v podobě suché pěny.
g) Val-MeVal-[(2S,3S)-3-MethylpynOlidin-2-karbonyl]-pro-benzylamid
Ve 30 ml methanolu se rozpustí 2,75 g Z-VaI-MeVal-[(2S,3S)-3-methylpyrrolídin-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (4,13 mmol). Po přidání 0,34 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové
-11 CZ 293683 B6 (4,13 mmol) a 78 mg 10% palladia na uhlí se reakční směs hydrogenuje tři hodiny. Filtrace a odpaření k suchu poskytne 2,23 g chránící skupiny zbaveného tripeptidu a podobě suché bílé pěny. Surový produkt se dále rozpustí v 50 ml vody a hodnota pH se nastaví na 2 až 3 IN kyselinou chlorovodíkovou. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (3x), hodnota pH se nastaví na 10 5N roztokem hydroxidu sodného a dále se extrahuje dichlormethanem (3x). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným za sníženého tlaku, čímž se získá 1,71 g chránící skupiny zbaveného tetrapeptidbenzaldehydu.
h) Me2Val-Val-MeVal-[(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamid
Ve 32 ml suchého DMF se rozpustí 0,47 g Me2Val-OH (3,24 mmol) a 1,71 g Val-MeVal[(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (3,24 mmol). Po ochlazení na teplotu 4 °C se přidá 1,07 ml DEPCN (6,48 mmol) 1,88 ml triethylaminu (12,96 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a dimethylformamid se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 100 ml dichlormethanu, promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (lx) nasyceným roztokem chloridu sodného (lx). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 0,88 g produktu v podobě bezbarvého oleje. Surový produkt se rozpustí ve vroucím diizopropyletheru a vysráží se za chlazení. Sraženina se oddělí a vysuší se za vzniku 0,56 g čistého produktu. Sloučenina se dále charakterizuje hmotovou spektrometrií při bombardování rychlými atomy. ([M+H]+ = 655,6).
Následující sloučeniny byly připraveny a mohou být připraveny podle příkladu 1 a 2:
3. XaaValXabXacXad
4. Xaa Val Xab Xac Xae
5. Xaa Val Xab Xac Xaf
6. Xaa Val Xab Xac Xag
7. Xaa Val Xab Xac Xah
8. Xaa Val Xab Xac Xai
9. Xaa Val Xab Xac Xak
10. Xaa Val Xab Xac Xal
11. Xaa Val XabXacXam
12. Xaa Val Xab Xac Xan
13. Xaa Val Xab XacXao
14. Xaa Val Xab Xac Xap
15. Xaa Val Xab Xac Xaq
16. Xaa Val XabXacXar
17. Xaa Val XabXacXas
18. Xaa Val XabXacXat
19. Xaa Val Xab Xac Xat
20. Xaa Val Xab Xac Xav
21. Xaa Val Xab Xac Xaw
22. Xaa Val XabXacXax
23. Xaa Val Xab Xac Xay
24. Xaa Val Xab Xac Xaz
25. Xaa Val Xab Xac Xba
- 12CZ 293683 B6
26. Xaa Val Xab Xac Xbb
27. Xaa Val Xab Xac Xbc
28. Xaa Val Xab Xac Xbd
29. Xaa Val Xab Xac Xbe
30. Xaa Val Xab Xac Xbf
31. Xbg Val Xab Xac Xar
32. Xbg Val Xab Xac Xas
33. Xbh Val Xab Xac Xar
34. Xbh Val Xab Xac Xar
35. Xaa Ile Xab Xac Xar
36. Xaa Ile Xab Xac Xas
37. Xaa Xbk Xab Xac Xar
38. Xaa Xbk Xab Xac Xas
39. Xaa Val Xbi Xac Xar
40. Xaa Val Xbi Xac Xas
41. Xaa Val Xbi Xac Xas
42. Xaa Val Xab Xab Xbm
43. Xaa Val Xab Xac Xbn
44. Xaa Val Xab Xbo Xea
45. Xaa Val Xab Xbo Xbp
46. Xaa Val Xab Xbo Xar
47. Xaa Val Xab Xbo Xas
48. Xaa Val Xab Xbo Xbm
49. Xaa Val Xab Xbq Xae
50. Xaa Val Xab Xbq Xar
51. Xaa Val Xab Xbq Xas
52. Xaa Val Xab Xbq Xbm
53. Xaa Val Xab Xbr Xbp
54. Xaa Val Xab Xbr Xae
55. Xaa Val Xab Xbr Xas
56. Xaa Val Xab Xbr Xar
57. Xaa Val Xab Xbs Xae
58. Xaa Val Xab Xbs Xas
59. Xaa Val Xab Xbs Xar
60. Xaa Val Xab Xac Xbt
61. Xaa Val Xab Xac Xbt
62. Xaa Val Xab Xbq Xbu
63. Xaa Val Xab Xbq Xbt
64. Xaa Val Xab Xac Pro Xbv
65. Xaa Val Xab Xac Pro Xbw
66. Xaa Val Xab Xac Pro Xbx
67. Xaa Val Xab Xac Pro Xby
-13CZ 293683 B6
68. Xaa Val Xab Xac Pro Xbz
64. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv
65. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbw
66. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbx
67. Xaa Val Xab Xbq Pro Xby
68. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbz
69. Xaa Val Xab Xbo Xaz
70. Xaa Val Xab Xbq Xaz
71. Xaa Val Xab Xbq Xbn
72. Xaa Val Xab Xbo Xbn
Příklady MS-charakterizace syntetizovaných nových sloučenin jsou uvedeny v následující tabulce.
Příklad č.______Analýza MS při bombardování rychlými atomy [mo. hmotnost (naměřená)]
45. 627
53. 655
Tabulka I - Identifikace sekvence sloučenin připravených podle příkladu 1 a 2
Sloučenina č.
1-34, 39-63, 69-72
35,36
37,38
64-68
Sekvenční ID-číslo
Symboly Xaa v součtu mají následující význam:
Xaa: N,N-dimethylvalin
Xab: N-Methylvalin
Xax: 3,4-dihydroproplin
Xad:
Xae:
- 14CZ 293683 B6
Xaf :
Xag:
Xah:
h3c
Xai:
o HjC
Xak:
0 Η,Ο
O H>C
Xal:
- 15 CZ 293683 B6
Xara:
Xan:
Xao:
Xap:
Xaq:
Xar:
Xas:
- 16CZ 293683 B6
Xat:
Xau:
Xav:
Xaw:
Xax:
Xay:
Xaz:
- 17CZ 293683 B6
Xba:
Xbb:
Xbe:
Xbg: N,N-dimethylizoleucin
Xbh: N,N-dirnethyl-2-terc-butyl-glycin
Xbi: N-methylizoleucin
Xbk: 2-terc-butylglycin
- 18CZ 293683 B6
Xbl:
Xbm:
Xbn:
Xbo: L-azetidin-2-karbonyl
Xbp:
Xbq: (4-fluoro)-L-prolin
Xbr: (5-methyl)-L-prolin
Xbs: (3-methyl)-L-prolin
Xbt:
Xbu:
- 19CZ 293683 B6
Xbv:
Xbw:
H3CxCH.
XbX:
Xby:
Xbz:
Sloučeniny podle vynálezu se mohou testovat na účinek proti rakovině běžnými způsoby včetně například dále popsaného způsobu:
A. Metodologie in vitro
Cytotoxicita se měří standardní metodologii pro přilnuté buněčné linie jako je „microculture tetrazolium test“ (MTT). Podrobnosti této zkoušky jsou popsány v literatuře (Alley, MC a kol. Cencer Research 48: str. 589 až 601,1988). Z získání kultur pro mikrotitrační destičky se použije exponenciálně rostoucích kultur nádorových buněk, jako jsou buňky HT-29 colon-carcinoma nebo LX-plicního nádoru. Buňky se nasedí v množství 5000 až 20 000 na důlek v 96-důlkových destičkách (ve 150 μΐ média) a kultivují se přes noc při teplotě 37 °C. Přidají se sloučeniny v 10násobném zředění ΙΟ-4 M až ΙΟ'10 M. Buňky se pak inkubují 48 hodin. Ke zjištění počtu živých buněk v každém důlku se přidá barvivo MTT (50 μΐ roztoku 3 mg/ml 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidu v solance). Tato směs se inkubuje 5 hodin při teplotě 37 °C a pak se do každého důlku přidá 50 μΐ 25% SDS, pH 2. Po celoroční inkubace se pak odečítá absorbance každého důlku při 550 nm čítačem ELISA. Vypočtou se střední hodnoty +/- SD dat s replikovaných důlků, za použití vzorce % T/C (% ošetřených živých buněk/kontrolních buněk).
-20CZ 293683 B6
OD ošetřených buněk
------------------ x 100 = % T/C
OD kontrolních buněk
Koncentrace zkoušené sloučeniny, která dává hodnotu inhibice růstu T/C = 50 % je označována jako hodnota IC50.
Sloučenina podle příkladu IC5o [M]
1. 1 x 10'9
2. 1 x 10’9
45. 1 x 10'7
1 x 10'8
B. Metodologie in vivo
Sloučeniny podle vynálezu se zkoušely dále v preklinických testech na aktivitu in vivo, která je indikativní pro klinické použití. Takové testy se provádějí na holých myších, kterým se transplantují (xenoroubují) nádorové tkáně, s výhodou lidského původu, jak je to dobře známo v tomto oboru. Zkoušené sloučeniny se vyhodnocují z hlediska protinádorové účinnosti po podání myším s xenoimplantátem.
Lidské prsní nádory (MX-1), které rostly vathymické holé myši, se transplantují do nové hostitelské myši pomocí nádorových fragmentů o velikosti přibližně 50 nm. Den transplantace je dnem O. Šest až deset dní později se myši ošetří zkoušenými sloučeninami podávanými jako intravenózní injekce ve skupinách po 5 až 10 myších při každé dávce. Sloučeniny se podávaly každý druhý den po dobu tří týdnů v dávkách 1 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti. Průměry nádorů a tělesná hmotnost se měřily dvakrát týdně. Objemy nádorů se vypočetly s z průměrů měřených posuvným měřítkem a pro každou ošetřovanou skupinu se vypočtou objemy nádorů podle vzorce (délka x šířka2)/2 = mm3 objemu nádoru.
Pro každou skupinu se vypočte střední objemy nádorů a zjistí se hodnoty T/C pro každou skupinu oproti neošetřeným kontrolním nádorům.
Nové sloučeniny vykazují dobré vlastnosti inhibice nádorů.
Průmyslová využitelnost
Peptid pro výrobu farmaceutických prostředků k ošetřování onkologických onemocnění savců.
Seznam sekvencí (1) Obecné informace
i) Přihlašovatel
A. Adresát: BASF Aktiangesellschaft
B. Ulice: Carl-Bosch-Strasse 38
C. Město: Ludwigshafen
E. Stát: Německá spolková republika
F. ZIP: D-67056
G. Telefon: 0621/60448526
H. Telefax: 0621/6043123
I. Telex: 1762175170
-21 CZ 293683 B6
π) Název vynálezu: Peptid a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje iii) Počet sekvencí: 4 iv) Forma pro počítač
A. Typ média: Disketa 3,5 palce, 2 dd
B. Počítač. IBM AT-Kompatibilní, 80286 procesor
C. Operační systém: MS-DOS version 5,0
D. Software: WordPerfect
2. Informace o SEQ ID NO: 1:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 5 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 1: Xaa Val Xaa Xaa Xaa
2. Informace o SEQ ID NO: 2:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 5 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence: SEQIDNO:2:
Xaa lle Xaa Xaa Xaa
2. Informace o SEQ ID NO: 3:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 5 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence: SEQIDNO:3:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2. Informace o SEQ ID NO: 4:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 6 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence: SEQ ID NO:4: Xaa Val Xaa Xaa Pro Xaa

Claims (4)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptid obecného vzorce I
    R^^-CHX-CO-A-B-D-E-(F)t-K (I), kde znamená
    R1 methyl, ethyl nebo izopropyl,
    R2 vodík, methyl nebo ethyl, nebo R1 a R2 spolu s atomem N dohromady tvoří pyrrolidínový kruh,
    A zbytky valyl, izoleucyl, leucyl, 2-/erc-butylglycyl, 2-ethylglycyl, norleucyl nebo norvalyl,
    B zbytky N-methylvalyl, N-methylleucyl, N-methylizoIeucyl, N-methylnorvalyl, Nmethylnorleucyl, N-methyI-2-tórc-butylglycyl, N-methyl-3-terc-butylalanyl nebo Nmethyl-2-ethylglycyl,
    D zbytky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluorprolyl, 4,4-difluorprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3-methylprolyl, 4-methylprolyl nebo 5-methylprolyl,
    E zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl nebo thiazolidin-4-karbonyl,
    F zbytky valyl, 2-terc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 2-cykíohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, alanyl, β-alanyl nebo aminoizobutyroyl,
    X C2_5 alkyl, cyklopropyl nebo cyklopentyl, t 0 nebo 1, a
    K C]_4 alkoxy, benzyloxy, nebo nesubstituovanou aminoskupinu nebo substituovanou aminoskupinu zvolenou ze souboru, zahrnujícího -NHCH3, -NHCH2CH3, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)3CH3,
    -NH(CH2)4CH3, -NH(CH2)5CH3, -NH(CH2)6CH3, -NH(CH2)7CH3,
    -NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH2CH3, -NHCH(CH3)CH2CH2CH3,
    -NHCH(CH2CH3)2, -NH(CH2CH2CH3)2j -NHC(CH3)3,
    -NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3,-NHCH(CH3)CH(CH3)2,
    -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2,-NHCH(CH3)C(CH3)3,
    -NH-cyklopropyl, -NH-cyklobutyl, -NH-cyklopentyl, -NH-cyklohexyl,
    -NH-cykloheptyl, -NH-cyklooktyl, -NH-bicyklo[3.3.0]oktyl,
    -N(CH3)OCH3, -N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3,
    -23 CZ 293683 B6
    -N(CH3)OCH(CH3)2, -N(CH2CH3)OCH3j -N(CH2CH3)OCH2CH3j
    -N(CH(CH3)2)OCH3, -N(CH3)OCH2C6Hs, -N(OCH3)CH2-C6H5,
    -N(CH3)OC6H5, -NH-CH2-C6H5, -NH(CH2)2C6H5, -NH(CH2)3C6H5,
    -NHCH(CH3)C6H5, -NHC(CH3)2C6H5, -NHC(CH3)2CH2CH3,
    -NHC(CH3)(CH2CH3)2, -NHCH(CH3)CH(OH)C6Hs, -NHCHr-cyklohexyl,
    -NH-CH2CF3, -NHCH(CH2F)2, -NHC(CH3)2CH2CH2OH,
    -NH(CH2CH2O)2CH2CH3, -NHC(CH3)2CH(CH3)2, -NHC(CH3)2CN,
    -NHC(CH3)2CCH, norefedryl, norpseudoefedryl,
    -NH-chinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-adamant-2-yl,
    -NH-adamant-l-yl, -NH-CH2-adamantyl, -NH-CHr-naftyl,
    -NH-benzhydryl, -NH-bifenyl, -NH-pyridyl, -NH-CHr-pyridyl,
    -NH-CH2-CH2-pyridyl, -NH-benzothiazolyl, -NH-benzoizothiazolyl, -NH-benzopyrazolyl, -NH-benzoxazolyl, -NH-fluorenyl, -NH-pyrimidyl, -NH-CHr-(4-methyl)thiazol-2-yl, -NH-CH2-furan-2-yl, -NH-CH2-thien-2-yl, -NH-CH2-(5-methyl)thÍen-2-yl, -NH-thiazol-2-yI,
    -NH-izoxazol-3-yl, -NH-(3-methyl)izoxazol-5-yl,
    -NH-(3-methyl)izothiazol-5-yl, -NH-(2-trifluormethyl)-thiadiazol-5-yl, -NH-(2-cyklopropyl)-thiadiazol-5-yl,
    -NHC(CH3)2C=CH2, nebo K znamená nebo jeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami.
  2. 2. Peptid podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam nebo jeho soli pro použití v medicíně, zvláště pro ošetřování onkologických nemocí.
  3. 3. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam a farmaceuticky vhodný nosič.
  4. 4. Použití peptidu obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, pro přípravu léčiva k ošetřování nádorů savců.
CZ19973765A 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje CZ293683B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/472,453 US5831002A (en) 1992-05-20 1995-06-07 Antitumor peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ376597A3 CZ376597A3 (cs) 1998-06-17
CZ293683B6 true CZ293683B6 (cs) 2004-07-14

Family

ID=23875567

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973765A CZ293683B6 (cs) 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
CZ19973763A CZ293682B6 (cs) 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973763A CZ293682B6 (cs) 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Country Status (33)

Country Link
US (1) US5831002A (cs)
EP (2) EP0871656B1 (cs)
JP (2) JP4221062B2 (cs)
KR (2) KR100437986B1 (cs)
CN (2) CN1182154C (cs)
AR (2) AR003136A1 (cs)
AT (2) ATE224910T1 (cs)
AU (2) AU725170B2 (cs)
BG (2) BG102125A (cs)
BR (2) BR9609424A (cs)
CA (2) CA2219819C (cs)
CO (2) CO4700527A1 (cs)
CZ (2) CZ293683B6 (cs)
DE (2) DE69623472T2 (cs)
DK (2) DK0871656T3 (cs)
ES (2) ES2188759T3 (cs)
HR (2) HRP960257A2 (cs)
HU (2) HU228071B1 (cs)
IL (2) IL122215A (cs)
MX (2) MX9709147A (cs)
MY (2) MY119042A (cs)
NO (2) NO317670B1 (cs)
NZ (2) NZ310444A (cs)
PL (2) PL185762B1 (cs)
PT (2) PT871656E (cs)
RO (2) RO118953B1 (cs)
SI (2) SI0832104T1 (cs)
SK (1) SK282466B6 (cs)
TR (2) TR199701545T1 (cs)
TW (2) TW508357B (cs)
UA (2) UA46776C2 (cs)
WO (2) WO1996040751A1 (cs)
ZA (2) ZA964710B (cs)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807984A (en) * 1995-11-09 1998-09-15 Basf Aktienegesellschaft Oligopeptides, the preparation and use thereof
TW474946B (en) * 1995-12-15 2002-02-01 Basf Ag Novel compounds, the preparation and use thereof
US20010009901A1 (en) * 1996-12-11 2001-07-26 Basf Aktiengesellschaft Germany Antineoplastic peptides
US5965537A (en) * 1997-03-10 1999-10-12 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives with carbonyl and heterocyclic functionalities at the C-terminus
US6103698A (en) * 1997-03-13 2000-08-15 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
US6143721A (en) 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US6015790A (en) * 1997-10-06 2000-01-18 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
CA2360740A1 (en) 1999-03-02 2000-09-08 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
WO2002088298A1 (en) 2001-04-27 2002-11-07 The Procter & Gamble Company Compounds, compositions, and methods for controlling biofilms
WO2003051835A2 (en) * 2001-12-18 2003-06-26 Proteologics, Inc. Methods and compositions for the inhibition of viral release
EP1531846A4 (en) * 2002-02-27 2006-04-19 Us Gov Health & Human Serv CONJUGATES OF LIGAND, LINK AND CYTOTOXIC AGENS, AND RELATED COMPOSITIONS AND USE PROCESSES
US8568637B2 (en) 2004-08-02 2013-10-29 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Method of forming a fiber made of peptide nanostructures
JP4954983B2 (ja) 2005-05-18 2012-06-20 ファーマサイエンス・インコーポレイテッド Ｂｉｒドメイン結合化合物
US20080292616A1 (en) * 2005-08-19 2008-11-27 Government Of The United Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And.... Topical Formulations of Histone Deacetylase Inhibitors and Methods Using the Same
US10004828B2 (en) * 2005-10-11 2018-06-26 Romat at Tel-Aviv University Ltd. Self-assembled Fmoc-ff hydrogels
CN101535300B (zh) 2006-05-16 2014-05-28 埃格拉医疗公司 Iap bir域结合化合物
EP2049524A2 (en) * 2006-07-24 2009-04-22 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Iap inhibitors
NZ580271A (en) * 2007-04-12 2011-03-31 Scinopharm Taiwan Ltd Process for making galantamine
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
US8283372B2 (en) 2009-07-02 2012-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corp. 2-(1H-indol-3-ylmethyl)-pyrrolidine dimer as a SMAC mimetic
WO2011098904A1 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Aegera Therapeutics, Inc. Iap bir domain binding compounds
MX2013007677A (es) 2010-12-30 2013-07-30 Abbvie Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa de hepatitis.
AU2011352145A1 (en) 2010-12-30 2013-07-18 Abbvie Inc. Phenanthridine macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
JP6581774B2 (ja) * 2011-05-27 2019-09-25 アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. 非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体を含有する化合物またはその化合物の溶媒和物、およびドラスタチンアナログを誘導体化するための方法
EP3089757A1 (en) 2014-01-03 2016-11-09 AbbVie Inc. Solid antiviral dosage forms
WO2023033129A1 (ja) 2021-09-03 2023-03-09 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4879278A (en) * 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
DE69230824T2 (de) * 1991-08-09 2000-07-27 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Neue tetrapeptidderivate
UA45304C2 (uk) * 1992-05-20 2002-04-15 Басф Аг Похідні пептиду або їх солі, фармацевтична композиція
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5530097A (en) * 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides

Also Published As

Publication number Publication date
DE69623472T2 (de) 2003-08-21
NZ310444A (en) 1999-11-29
HRP960257A2 (en) 1998-02-28
AU6124296A (en) 1996-12-30
IL122215A0 (en) 1998-04-05
CA2219818C (en) 2008-05-20
SK282466B6 (sk) 2002-02-05
US5831002A (en) 1998-11-03
ZA964710B (en) 1997-12-08
PL323726A1 (en) 1998-04-14
NO975711L (no) 1998-01-30
AR003136A1 (es) 1998-07-08
CZ293682B6 (cs) 2004-07-14
NO975711D0 (no) 1997-12-05
EP0871656B1 (en) 2002-09-25
ZA964711B (en) 1997-12-08
AU725170B2 (en) 2000-10-05
ATE224910T1 (de) 2002-10-15
CN1182154C (zh) 2004-12-29
CA2219819A1 (en) 1996-12-19
EP0871656A1 (en) 1998-10-21
CA2219819C (en) 2008-05-20
CN1187199A (zh) 1998-07-08
DK0871656T3 (da) 2003-01-27
CA2219818A1 (en) 1996-12-19
PL185763B1 (pl) 2003-07-31
RO119783B1 (ro) 2005-03-30
JPH11504652A (ja) 1999-04-27
WO1996040752A1 (en) 1996-12-19
MY124487A (en) 2006-06-30
CZ376597A3 (cs) 1998-06-17
TW424096B (en) 2001-03-01
EP0832104B1 (en) 2002-09-04
DE69623992T2 (de) 2003-05-22
CZ376397A3 (cs) 1998-06-17
KR19990022583A (ko) 1999-03-25
AR003427A1 (es) 1998-08-05
JPH11504653A (ja) 1999-04-27
EP0832104A1 (en) 1998-04-01
IL122216A (en) 2002-02-10
TW508357B (en) 2002-11-01
KR19990022582A (ko) 1999-03-25
AU6124196A (en) 1996-12-30
UA46775C2 (uk) 2002-06-17
HUP9801817A2 (hu) 1998-11-30
NO317670B1 (no) 2004-11-29
NO975710L (no) 1998-02-02
RO118953B1 (ro) 2004-01-30
PL185762B1 (pl) 2003-07-31
MX9709146A (es) 1998-03-31
ATE223431T1 (de) 2002-09-15
UA46776C2 (uk) 2002-06-17
HRP960277A2 (en) 1997-10-31
AU725164B2 (en) 2000-10-05
ES2188759T3 (es) 2003-07-01
CN1187198A (zh) 1998-07-08
DK0832104T3 (da) 2003-01-06
BR9609424A (pt) 2000-03-28
PT871656E (pt) 2002-12-31
JP4221062B2 (ja) 2009-02-12
HUP9801910A2 (hu) 1999-01-28
MY119042A (en) 2005-03-31
SI0832104T1 (en) 2003-08-31
MX9709147A (es) 1998-03-31
WO1996040751A1 (en) 1996-12-19
SI0871656T1 (en) 2003-08-31
NO318384B1 (no) 2005-03-14
HUP9801817A3 (en) 1999-06-28
ES2186783T3 (es) 2003-05-16
DE69623472D1 (de) 2002-10-10
SK165397A3 (en) 1998-10-07
HUP9801910A3 (en) 1999-06-28
DE69623992D1 (de) 2002-10-31
HU228073B1 (hu) 2012-09-28
PL323723A1 (en) 1998-04-14
HU228071B1 (hu) 2012-09-28
BG102125A (en) 1998-09-30
BR9609423A (pt) 1999-06-29
CN1182153C (zh) 2004-12-29
TR199701544T1 (xx) 1998-03-21
JP3957751B2 (ja) 2007-08-15
TR199701545T1 (xx) 1998-04-21
CO4700526A1 (es) 1998-12-29
IL122216A0 (en) 1998-04-05
NO975710D0 (no) 1997-12-05
KR100437986B1 (ko) 2004-09-18
CO4700527A1 (es) 1998-12-29
KR100437985B1 (ko) 2004-09-18
IL122215A (en) 2001-08-26
BG102152A (en) 1998-09-30
NZ310443A (en) 1999-10-28
PT832104E (pt) 2002-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ293683B6 (cs) Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
US5502032A (en) Peptides, the preparation and use thereof
JP3523253B2 (ja) ドラスタチン誘導体
IL166853A (en) Antineoplastic peptides, their preparation and various uses thereof
AU775090B2 (en) Antineoplastic peptides
SK165497A3 (en) Peptides, preparation method thereof and pharmaceutical composition containing the same

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20150603