JPH08508164A

JPH08508164A - 新規な殺病害虫タンパク質および株

Info

Publication number: JPH08508164A
Application number: JP6521344A
Authority: JP
Inventors: ウォーレン，グレゴリー，ダブリュ．; ジー．コジール，マイケル; エー．ムリンズ，マーサ; ジェイ．ニー，ゴードン; ディザイ，ナリーニ; カール，ブライアン; コスティカ，エヌ．クリスティ
Original assignee: チバ−ガイギーアクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1993-03-25
Filing date: 1994-03-23
Publication date: 1996-09-03
Also published as: SK283509B6; UA52579C2; ES2235162T3; RO117111B1; EP0690916B1; BG63313B1; HUT73337A; CZ290301B6; EP1471145A2; NZ263445A; HU9502466D0; DE69434283T2; HU220714B1; CN1119877A; SK117695A3; BG100000A; CZ247695A3; DE69434283D1; AU684068B2; WO1994021795A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、殺虫性株及びタンパク質に関する。バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株であって栄養生長の間に殺虫性タンパク質及び補助タンパク質を作り出すことができるものを提供する。また、その精製タンパク質、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに害虫防除のための上記株、タンパク質及び遺伝子の使用方法をも提供する。

Description

【発明の詳細な説明】新規な殺病害虫タンパク質および株本発明は、１９９３年３月２５日提出の米国特許出願第０８／０３７，０５７号の一部継続出願（その開示をここに引用により取り込む）である。発明の分野本発明は、植物および植物以外の病害虫を防除する方法および組成物に関する。発明の背景昆虫の病害虫は世界の商業的に重要な農作物の損失における主要な因子である。広いスペクトルの化学的農薬は農業的に重要な病害虫を防除または撲滅するためにもっぱら使用されてきている。しかしながら、有効な別の農薬を開発することは実質的に重要である。微生物の農薬は化学的病害虫の防除に対する代替物として重要な役割を演ずる。最も広範に使用される微生物の生産物は、細菌バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂｔ）に基づく。Ｂｔは、胞子形成の間に殺昆虫性結晶質タンパク質（ＩＣＰ）を生産する、グラム陽性の胞子形成性バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）である。２５より多いが、関係するするＩＣＰを生産するＢｔの多数の変種が知られている。Ｂｔにより作られるＩＣＰは、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）および鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）のある種の昆虫の幼虫に対して毒性である。一般に、ＩＣＰを感受性昆虫が摂取するとき、結晶は可溶化されそして昆虫の消化管のプロテアーゼにより毒性成分に形質転換される。鞘翅類の幼虫に対して活性のＩＣＰのいずれも、ジアブロティカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）属、とくにジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）、ウェスタン・ウリハムシ（Ｗｅｓｔｅｒｎｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）（ＷＣＲＷ）またはジアブロティカ・ロンギコミス・バルベリ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｌｏｎｇｉｃｏｍｉｓｂａｒｂｅｒｉ）、ノーザン・ウリハムシ（Ｎｏｒｔｈｅｒｎｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）に対する作用を示さなかった。Ｂｔはバシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）（Ｂｃ）に密接に関係する。主要なきわ立って特徴的である特性は、Ｂｃにおける副芽胞子の結晶の欠如である。Ｂｃは土壌の中に普通に見出されそして種々の食物および薬物から単離されてきている、広く分布した細菌である。この生物は食物の腐敗に関係づけられてきている。Ｂｔは昆虫の病害虫を防除するとき非常に有用であるが、潜在的生物学的防除剤の数を拡張することが必要とされている。発明の要約本発明は、植物および植物以外の病害虫を防除する組成物および方法に関する。特に、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種々の成長段階から単離可能な、新規な殺病害虫タンパク質を開示する。バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株、タンパク質、およびタンパク質をエンコードする遺伝子が提供される。本発明の方法および組成物は、植物および植物以外の病害虫を防除する種々の系において使用できる。発明の詳細な説明植物の農薬を防除するための組成物および方法が提供される。特に、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株の栄養成長の間に生産される新規な殺病害虫タンパク質が提供される。タンパク質は農薬として有用である。本発明は、殺病害虫タンパク質がバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株の栄養成長の間に生産されることを認識する。本発明の目的に対して、栄養成長は胞子形成の開始の前の期間として定義される。Ｂｔの場合において、この栄養成長はＩＣＰの生産の前に起こる。病害虫管理のプログラムにおいて使用するために、このようなタンパク質をコードする遺伝子を単離し、クローニングしそして種々のデリバリー伝達体の中に形質転換することができる。本発明の目的に対して、病害虫は、昆虫、真菌、細菌、線虫、ダニ（ｍｉｔｅｓ）、マダニ（ｔｉｃｋｓ）、原生動物の病原体、動物の寄生体の肝臓吸虫類などを包含するが、これらに限定されない。昆虫の病害虫は、鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、膜翅目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、ハジラミ目（Ｍａｌｌｏｐｈａｇａ）、同翅目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、直翅目（Ｏｒｔｈｒｏｐｔｅｒａ）、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、ハサミムシ目（Ｄｅｒｍａｐｔｅｒａ）、シロアリ目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、シラミ目（Ａｎｏｐｌｕｒａ）、ノミ目（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ）、トビケラ目（Ｔｒｉｃｈｏｐｔｅｒａ）などを包含する。表１〜１０は、主要な作物植物に関連する病害虫およびヒトおよび獣医学的に重要な病害虫のリストを記載する。このような病害虫は本発明の範囲内に包含される。今回、殺病害虫タンパク質を栄養成長期のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から単離できることが認識されたので、他の株を標準の技術により単離し、そして特定の植物および植物以外の病害虫に対する活性について試験することができる。一般に、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株は任意の環境の試料、例えば、土壌、植物、昆虫、穀粒エレベーターのほこり、および他の試料の物質などから、この分野において知られている方法により単離することができる。参照、例えば、Ｔｒａｖｅｒｓら（１９８７）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５３：１２６３−１２６６；Ｓａｌｅｈら（１９６９）ＣａｎＪ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５：１１０１−１１０４；ＤｅＬｕｃｃａら（１９８１）ＣａｎＪ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２７：８６５−８７０；およびＮｏｒｒｉｓら（１９８１）″ＴｈｅｇｅｎｅｒａＢａｃｉｌｌｕｓａｎｄＳｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、″Ｓｔａｒｒら（編）、ＴｈｅＰｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ：ＡＨａｎｄｂｏｏｋｏｎＨａｂｉｔａｔｓ，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢａｃｔｅｒｉａ、Ｖｏｌ．ＩＩ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−ＶｅｒｌｏｇＢｅｒｌｉｎＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ。単離後、株を栄養成長の間に殺病害虫活性について試験することができる。この方法において、新しい殺病害虫タンパク質および株を同定することができる。本発明における使用が見出されるこのようなバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）は、バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）およびバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、ならびに表１１に列挙するバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種を包含する。本発明によれば、栄養成長の間に生産された殺病害虫タンパク質はバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から単離することができる。１つの実施態様において、栄養成長の間に生産された殺昆虫タンパク質、ここにおいてＶＩＰ（栄養成長の殺昆虫タンパク質）と呼ぶ、を単離することができる。タンパク質単離の方法はこの分野において知られている。一般に、タンパク質は普通のクロマトグラフィー、例えば、ゲル濾過、イオン交換、およびイムノアフィニティークロマトグラフィーにより、高性能液体クロマトグラフィー、例えば、逆相高性能液体クロマトグラフィー、イオン交換高性能液体クロマトグラフィー、大きさ排除高性能液体クロマトグラフィー、高性能クロマトフォーカシングおよび疎水相互作用クロマトグラフィーなどにより、電気泳動分離、例えば、１次元ゲル電気泳動、２次元ゲル電気泳動などにより精製することができる。このような方法はこの分野において知られている。参照、例えば、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１および２、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（１９８８）。さらに、タンパク質の実質的に純粋な調製物に対する抗体を調製することができる。参照、例えば、Ｒａｄｋａら（１９８３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：２８０４；およびＲａｄｋａら（１９８４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ１９：６３。方法の任意の組み合わせを使用して、殺病害虫性質を有するを有するタンパク質を精製することができる。このような精製は実質的に精製されたタンパク質画分を生ずるであろう。「実質的に精製された」または「実質的に純粋な」は、その天然の状態のタンパク質に通常関連する化合物を実質的に含まないタンパク質を意図する。タンパク質の「実質的に純粋な」調製物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後に視的にまたはデンシトメトリーの走査により決定して他の検出可能なタンパク質のバンドの不存在により評価することができる。あるいは、精製された調製物の中の他のアミノ末端の配列またはＮ−末端の残基の不存在は純度のレベルを示す。純度は、イオン交換、逆相または毛管電気泳動により他のピークの不存在を示す、「純粋な」調製物の再クロマトグラフィーにより評価することができる。用語「実質的に純粋な」または「実質的に精製された」は、タンパク質と他の化合物との人工的または合成の混合物を排除することを意図しない。用語は、また、タンパク質の生物学的活性を妨害せず、そして、例えば、不完全な精製のために、存在することがある、少量の不純物の存在を排除ことを意味しない。いくつかのタンパク質は単一のポリペプチド鎖であるが、多数のタンパク質は２以上のポリペプチド鎖から成る。精製されたタンパク質かいったん単離されると、タンパク質、またはそれを構成するポリペプチドをこの分野において知られている標準の方法により特性決定しそして配列決定することができる。例えは、精製されたタンパク質、またはそれを構成するポリペプチドは、例えば、臭化シアンを使用するか、あるいはプロテアーゼ、例えば、パパイン、キモトリプシン、トリプシン、リシル−Ｃエンドペプチダーゼなどで断片化することができる（Ｏｉｋｅら（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：９７５１−９７５８；Ｌｉｕら（１９８３）Ｉｎｔ．Ｊ．ｐｅｐｔ．ｐｒｏｔｅｉｎＲｅｓ．２１：２０９−２１５）。生ずるペプチドは、好ましくはＨＰＬＣによるか、あるいはゲルの分割およびＰＶＤＦ膜上へのエレクトロブロッティングにより分離し、そしてアミノ酸の配列決定にかけることができる。この仕事を達成するために、ペプチドは好ましくは自動化配列決定装置により分析する。Ｎ−末端、Ｃ−末端、または内部のアミノ酸配列を決定できることが認識される。精製されたタンパク質のアミノ酸配列から、殺病害虫タンパク質をエンコードする遺伝子の単離を促進するプローブとして使用できるヌクレオチド配列を合成することができる。タンパク質は分子量、成分のペプチド、特定の病害虫に対する活性、および他の特性が変化することが認識される。しかしながら、ここに記載する方法により、種々の病害虫に対して活性のタンパク質を単離しそして特性決定することができる。いったん精製されたタンパク質が単離されそして特性決定されると、それはアミノ酸の置換、欠失、および挿入を包含する種々の方法で変更可能であることが認識される。このような操作の方法は一般にこの分野において知られている。例えば、殺病害虫タンパク質のアミノ酸配列の変異体はＤＮＡにおける突然変異により調製することができる。このような変異体は所望の殺病害虫活性を有するであろう。明らかなように、変異体をエンコードするＤＮＡの中で作られる突然変異はリーディングフレームの中から外に配列を配置してはならず、そして好ましくは２次ｍＲＮＡ構造を生成しうる相補的領域をつくらないであろう。参照、欧州特許出願公開第７５，４４４号。この方法において、本発明は殺病害虫タンパク質ならびにその成分および断片を包含する。すなわち、殺病害虫活性を保持するタンパク質の成分のポリペプチドまたは断片は生成できることが認識される。これらの断片は切形配列、ならびにタンパク質のＮ−末端、Ｃ−末端、内部のおよび内部的に欠失されたアミノ酸配列を包含する。タンパク質配列の大部分の欠失、挿入、および置換が殺病害虫タンパク質の特性の徹底的な変化を生成することは期待されない。しかしながら、そのように実施することに先立って置換、欠失、または挿入の正確な作用を予測することが困難であるとき、当業者は理解するように、効果は日常的スクリーニングアッセイにより評価されるであろう。ここに記載するタンパク質または他の成分のポリペプチドは単独で、あるいは組み合わせで使用できる。すなわち、いくつかのタンパク質を使用して昆虫の病害虫を防除することができる。さらに、本発明のある種のタンパク質は殺病害虫タンパク質の活性を増強する。これらのタンパク質をここにおいて「補助タンパク質」と呼ぶ。作用の機構は完全には理解されないが、補助タンパク質および問題の殺病害虫タンパク質を一緒にするとき、殺病害虫タンパク質の殺昆虫性質は数倍増強される。本発明の殺病害虫タンパク質は分子量が変化し、少なくとも３０ｋＤａ、好ましくは約５０ｋＤａまたはそれより大きい分子量を有する成分のポリペプチドを有する。本発明の補助タンパク質は分子量が変化し、少なくとも１５ｋＤａ、好ましくは約２０ｋＤａまたはそれより大きい分子量を有する。補助タンパク質それら自体は成分のポリペプチドを有することができる。殺病害虫タンパク質および補助タンパク質はマルチマーの、殺病害虫タンパク質の成分であることが可能である。その成分のポリペプチドの１または２以上として補助タンパク質を含むこのような殺病害虫タンパク質は、分子量が変化することができ、少なくとも５０ｋＤａから少なくとも２００ｋＤａまで、好ましくは約１００ｋＤａ〜１５０ｋＤａの分子量を有する。補助タンパク質は本発明の殺病害虫タンパク質と組み合わせて使用して活性を増強することができる。補助タンパク質が活性に影響を与えるかどうかを決定するために、殺病害虫タンパク質を単独でかつ補助タンパク質と組み合わせてて発現することができ、そしてそれぞれの活性を給餌アッセイにおいて殺病害虫活性の増加について比較することができる。株の活性を単独でおよび補助タンパク質と組み合わせて試験することによって、殺病害虫タンパク質の活性について株をクローニングすることは有益であろう。ある場合において、補助タンパク質および株の天然のタンパク質は、補助タンパク質の不存在下に見られない殺病害虫活性を生成する。補助タンパク質は、前述したように、種々のこの分野において知られている方法により修飾することができる。したかって、本発明の目的に対して、用語「栄養成長の殺昆虫タンパク質」（ＶＩＰ）は、単独で、あるいは組み合わせで殺病害虫活性のために使用できる、栄養成長の間に生産されたタンパク質を包含する。これは殺病害虫タンパク質、補助タンパク質、および補助タンパク質またはこれらのタンパク質のポリペプチド成分の不存在下にのみ活性を示すタンパク質を包含する。本発明のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を得るために利用可能な別の方法が存在することが認識される。例えば、殺病害虫タンパク質をエンコードするヌクレオチド配列を得るために、殺病害虫タンパク質を発現するコスミドのクローンをゲノムのライブラリーから単離することができる。より大きいコスミドのクローンから、より小さいサブクローンを作りそして活性について試験することができる。この方法において、活性な殺病害虫タンパク質を発現するクローンを配列決定して遺伝子のヌクレオチド配列を決定することができる。次いで、アミノ酸配列をタンパク質について推定することができる。一般的分子の方法については、例えば、次の文献を参照のこと：ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、第２版、Ｖｏｌ．１〜３、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（１９８９）、およびその中に引用されている文献。本発明は、また、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）以外の生物からのヌクレオチド配列を包含し、ここでヌクレオチド配列は本発明のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）のヌクレオチド配列とのハイブリダイゼーションにより単離可能である。このようなヌクレオチド配列は殺病害虫活性について試験することができる。本発明は、また、ヌクレオチド配列によりエンコードされるタンパク質を包含する。さらに、本発明はバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）以外の生物から得られるタンパク質を包含し、ここでタンパク質は本発明の生産物に対して作られた抗体と交差反応する。再び、単離されたタンパク質をここに開示する方法により殺病害虫活性についてアッセイすることができる。本発明の殺病害虫タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいったん単離されると、それらを操作しそして、微生物および植物を包含する、他の生物を包含する種々の宿主の中でタンパク質を発現するために使用できる。本発明の殺病害虫遺伝子は植物における増強された発現のために最適化することができる。参照、例えば、米国特許出願第０７／９５１，７１５号；欧州特許出願公開（ＥＰＡ）第０３５９４７２号；欧州特許出願公開（ＥＰＡ）第０３８５９６２号；ＷＯ第９１／１６４３２号；Ｐｅｒｌａｋら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：３３２４−３３２８；およびＭｕｒｒａｙら（１９８９）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１７：４７７−４９８。この方法において、遺伝子は植物の好ましいコドンを利用して合成できる。すなわち、特定の宿主のために好ましいコドンは、その宿主の中のそのアミノ酸を最も頻繁にコードする単一のコドンである。例えば、特定のアミノ酸のための、トウモロコシの好ましいコドンはトウモロコシからの既知の遺伝子配列から誘導することができる。トウモロコシ植物からの２８遺伝子ののためのトウモロコシのコドン使用は、Ｍｕｒｒａｙら（１９８９）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１７：４７７−４９８（その開示をここに引用によって加える）の中に見出される。合成遺伝子は、また、特定の宿主が特定のアミノ酸について使用するコドンの分布に基づいて作るすることができる。この方法において、ヌクレオチド配列を任意の植物における発現のために最適化することができる。遺伝子配列のすべてまたは任意の部分を最適化するか、あるいは合成できることが認識される。すなわち、合成のまたは部分的に最適化された配列をまた使用できる。同様な方法において、ヌクレオチド配列を任意の微生物における発現のために最適化することができる。バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の好ましいコドンの使用について、例えば、米国特許第５，０２４，８３７号およびＪｏｈａｎｓｅｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ６５：２９３−３０４、を参照のこと。植物の発現カセットを構成する方法ならびに外来ＤＮＡを植物の中に導入する方法はこの分野において記載されている。このような発現カセットは、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、イントロンおよび殺病害虫タンパク質のコーディング配列に操作的に連鎖された他の調節配列を包含することができる。一般に、外来ＤＮＡを植物の中に導入するために、Ｔｉプラスミドベクターを外来ＤＮＡのデリバリーならびに直接のＤＮＡの取込み、リポソーム、エレクトロポレイション、マイクロインジェクション、およびマイクロ投射体の使用のために利用されてきている。このような方法はこの分野において確立されている。参照、例えば、Ｇｕｅｒｃｈｅら（１９８７）ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ５２：１１１−１１６；Ｎｅｕｈａｕｓｅら（１９８７）Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．７５：３０−３６；Ｋｌｅｉｎら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ３２７：７０−７３；Ｈｏｗｅｌｌら（１９８０）Ｓｃｉｅｎｃｅ２０８：１２６５；Ｈｏｒｓｃｈら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２７：１２２９−１２３１；ＤｅＢｌｏｃｋら（１９８９）ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ９１：６９４−７０１；ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＷｅｉｓｓｂａｃｈおよびＷｅｉｓｓｂａｃｈ、編）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８８）；およびＭｅｔｈｏｄｓｉｎＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＳｃｈｕｌｅｒおよびＺｉｅｌｉｎｓｋｉ、編）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８９）。参照、また、米国特許出願第０８／００８，３７４号、ここに引用によって加える。参照、また、欧州特許出願公開（ＥＰＡ）第０１９３２５９号および欧州特許出願公開（ＥＰＡ）第０４５１８７８Ａ１号。形質転換の方法は形質転換すべき植物に依存するであろうことが理解される。さらに、発現カセットを修飾して発現を増加することができることが理解される。例えば、切形配列、ヌクレオチドの置換または他の修飾を使用できる。参照、例えば、Ｐｅｒｌａｋら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：３３２４−３３２８；Ｍｕｒｒａｙら（１９８９）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１７：４７７−４９８；およびＷＯ第９１／１６４３２号。構成体は、また、ヌクレオチド配列に操作的に連鎖された、任意の他の必要なレギュレーター、例えば、ターミネーター（Ｇｕｅｒｉｎｅａｕら、（１９９１）、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２２６：１４１−１４４；Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、（１９９１）、Ｃｅｌｌ、６４：６７１−６７４；Ｓａｎｆａｃｏｎら、（１９９１）、ＧｅｎｅｓＤｅｖ．、５：１４１−１４９；Ｍｏｇｅｎら、（１９９０）、ＰｌａｎｔＣｅｌｌ、２：１２６１−１２７２；Ｍｕｎｒｏｅら、（１９９０）、Ｇｅｎｅ、９１：１５１−１５８；Ｂａｌｌａｓら、（１９８９）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．、１７：７８９１−７９０３；Ｊｏｓｈｉ、Ｃ．Ｐ．（１９８７）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ、１５：９６２７−９６３９）；植物の翻訳コンセンサス配列（Ｊｏｓｈｉ、Ｃ．Ｐ．（１９８７）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ、１５：６６４３−６６５３）、イントロン（ＬｕｅｈｒｓｅｎおよびＷａｌｂｏｔ、（１９９１）、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２２５：８１−９３）などを包含する。発現カセット構成体の中に５ ’リーダー配列を含有させることは有益であることがある。このようなリーダー配列は翻訳を増強する作用をすることができる。翻訳リーダーはこの分野において知られており、そして次のものを包含する：ピコルナウイルスのリーダー、例えば、ＥＭＣＶリーダー（脳心筋５’非コーディング領域）（Ｅｌｒｏｙ−Ｓｔｅｉｎ、Ｏ．、Ｆｕｅｒｓｔ、Ｔ．Ｒ．、およびＭｏｓｓ、Ｂ．（１９８９）ＰＮＡＳＵＳＡ８６：６１２６−６１３０）；ポチウイルス（ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ）リーダー、例えば、ＴＥＶリーダー（タバコ・エッチ（ｅｔｃｈ）・ウイルス）（Ａｌｌｉｓｏｎら、（１９８６）；ＭＤＭＶ（トウモロコシ矯性モザイクウイルス）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１５４：９ −２０）；およびヒト免疫グロブリン重鎖結合タンパク質（ＢｉＰ）、（Ｍａｃｅｊａｋ、Ｄ．Ｇ．、およびＳａｒｎｏｗ、Ｐ．、（１９９１）、Ｎａｔｕｒｅ、３５３：９０−９４；アルファルファモザイクウイルスのコートタンパク質からの未翻訳リーダー（ＡＭＶＲＮＡ４）、（Ｊｏｂｌｉｎｇ、Ｓ．Ａ．、およびＧｅｈｒｋｅ、Ｌ．）、（１９８７）、Ｎａｔｕｒｅ、３２５：６２２−６２５；タバコモザイクウイルスのリーダー（ＴＭＶ）、（Ｇａｌｌｉｅ、Ｄ．Ｒ．ら、（１９８９）、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＲＮＡ、ｐｐ．２３７−２５６；およびトウモロコシ白化斑紋ウイルスのリーダー（ＭＣＭＶ）（Ｌｏｍｍｅｌ、Ｓ．Ａ．ら、（１９９１）、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、８１：３８２−３８５。参照、また、Ｄｅｌｌａ−Ｃｉｏｐｐａら、（１９８７）、ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、８４：９６５−９６８。植物のターミネーターを発現カセットにおいて利用できる。参照、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、（１９８７）、Ｇｅｎｅ、５６：１２５；Ｇｕｅｒｉｎｅａｕら、（１９９１）、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２２６：１４１−１４４；Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、（１９９１）、Ｃｅｌｌ、６４：６７１−６７４；Ｓａｎｆａｃｏｎら、（１９９１）、ＧｅｎｅｓＤｅｖ．、５：１４１−１４９；Ｍｏｇｅｎら、（１９９０）、ＰｌａｎｔＣｅｌｌ、２：１２６１−１２７２；Ｍｕｎｒｏｅら、（１９９０）、Ｇｅｎｅ、９１：１５１−１５８；Ｂａｌｌａｓら、（１９８９）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．、１７：７８９１−７９０３；Ｊｏｓｈｉら（１９８７）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓ．、１５：９６２７−９６３９）。組織特異的発現のために、本発明のヌクレオチド配列は組織特異的プロモーターに操作的に連鎖することができる。参照、例えば、米国特許出願第０７／９５１，７１５号、ここに引用によって加える。殺病害虫タンパク質をコードする遺伝子を使用して昆虫の病原性生物を形質転換できることが認識される。このような生物は、バキュロウイルス、真菌、原生動物、細菌および線虫を包含する。本発明のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株は、農業作物および生産物を病害虫から保護するために使用できる。あるいは、農薬をエンコードする遺伝子は適当ベクターを介して微生物の宿主の中に導入することができ、そして前記宿主を環境または植物または動物に適用できる。問題の１または２以上の作物の「フィトスファア（ｐｈｙｔｏｓｐｈｅｒｅ）」（フィロプレーン［ｐｈｙｌｌｏｐｌａｎｅ］、フィロスファア［ｐｈｙｌｌｏｓｐｈｅｒｅ］、リゾスファア［ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ］および／またはリゾプレイン［ｒｈｉｚｏｐｌａｎｅ］）を占有することが知られている微生物の宿主を選択できる。これらの微生物は特定の環境において野生型微生物と首尾よく競合することができ、ポリペプチドの農薬を発現する遺伝子の安定な維持および発現を提供し、そして、望ましくは、環境の分解および不活性化からの農薬の改良された保護を提供するように選択される。このような微生物は、細菌、藻類、および真菌を包含する。特に重要ものは次の通りである：微生物、例えば、細菌、例えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ザントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、ロドシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、メチリウス（Ｍｅｔｈｙｌｉｕｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、リューコノストク（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、およびアルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）；真菌、特に酵母、例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコックス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、スポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、およびオーレオバシディム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）。特に重要なものは、次のようなフィトスフェア細菌種である：シュードモナス・シリンゲ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、アセトバクター・キリヌム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｉｎｕｍ）、アグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ロドシュードモナス・スフェロイデス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐｈｅｒｏｉｄｅｓ）、ザントモナス・カンペトリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、リゾビウム・メリオチ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｍｅｌｉｏｔｉ）、アルカリゲネス・エントロファス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｎｔｒｏｐｈｕｓ）、クラビバクター・キシリ（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒｘｙｌｉ）およびアゾトバクター・ビンランジイ（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｖｉｎｌａｎｄｉｉ）；およびフィトスフェア酵母種、例えば、ロドトルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｒｕｂｒａ）、ロドトルラ・グルチニス（Ｒ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ）、ロドトルラ・マリナ（Ｒ．ｍａｒｉｎａ）、ロドトルラ・アウランチアカ（Ｒ．ａｕｒａｎｔｉａｃａ）クリプトコックス・アルビヅス、（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓ）、クリプトコックス・ディフルエンス（Ｃ．ｄｉｆｆｌｕｅｎｓ）、クリプトコックス・ラウレンチイ（Ｃ．ｌａｕｒｅｎｔｉｉ）、サッカロミセス・ロセイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｒｏｓｅｉ）、サッカロミセス・プレトリエンシス（Ｓ．ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）スポロボロミセス・ロスエス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓｒｏｓｕｅｓ）、スポロボロミセス・オドルス（Ｓ．ｏｄｏｒｕｓ）、クルイベロミセス・ベロネ（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｖｅｒｏｎａｅ）、およびオーレオバシディウム・ポルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｐｏｌｌｕｌａｎｓ）。着色微生物は特に重要である。遺伝子の安定な維持および発現を可能とする条件下に、殺病害虫タンパク質を発現する遺伝子を微生物宿主の中に導入するためにある数の方法を利用可能である。例えば、ＤＮＡ構成体の発現のために転写および翻訳調節シグナルと操作的に連鎖された問題のＤＮＡ構成体、および宿主生物中の配列と相同のＤＮＡ配列（これにより組み込みが起こるであろう）、および／または宿主の中で機能的である複製系（これにより組み込みまたは安定な維持が起こるであろう）を含む発現カセットを構成することができる。転写および翻訳の調節シグナルは次のものを包含するが、これらに限定されない：プロモーター、転写開始出発部位、オペレーター、アクチベーター、エンハンサー、他の調節要素、リボソーム結合部位、開始コドン、停止コドンなど。参照、例えば、米国特許第５，０３９，５２３号；米国特許第４，８５３，３３１号；ＥＰＯ第０４８０７６２Ａ２号；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前掲；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｍａｎｉａｔｉｓら、（編）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（１９８２）；ＡｄｖａｎｃｅｄＢａｃｔｅｒｉａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ、Ｄａｖｉｓら（編）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（１９８０）；およびその中に引用されている文献。次いで処理された細胞を１または２以上の標的病害虫の環境に適用するとき、農薬含有細胞を処理して細胞の中の毒素の活性を延長する場合、適当な宿主細胞は原核細胞または真核細胞を包含することができ、高等生物、例えば、哺乳動物に対して毒性の物質を生産しない細胞に通常限定される。しかしながら、高等生物に対して毒性の物質を生産する生物を使用することができ、ここで毒素は不安定であるか、あるいは適用レベルは哺乳動物の宿主に対する毒性の可能性を回避するために十分に低い。宿主として、特に重要であるものは、原核生物および下等真核生物、例えば、真菌であろう。原核生物の例は、グラム陰性およびグラム陽性の両方であり、次のものを包含する：エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、およびプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）；バシラセエ（Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）；リゾビアセエ（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）、例えば、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）；スピリラセエ（Ｓｐｉｒｉｌｌａｃｅａｅ）、例えば、フォトバクテリウム属、ザイモモナス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、デスルホビブリオ（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ）、スピリルム（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）；ラクトバシラセエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）；シュードモナダセエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、例えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）およびアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）；アゾトバクテラセエ（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）およびニトロバクウテラセエ（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）。真核生物の中には、真菌、例えば、藻菌網（Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）および子嚢菌（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）があり、これらは酵母、例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｒｏｍｙｃｅｓ）；および担子菌網（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）酵母、例えば、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、オーレオバシディウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、スポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｌｏｍｙｃｅｓ）などを包含する。生産の目的のための宿主細胞を選択とき特に重要な特性は、宿主の中にタンパク質遺伝子を導入する容易さ、発現系の入手可能性、発現の効率、宿主の中のタンパク質の安定性、および補助遺伝学的能力の存在を包含する。農薬のマイクロカプセルとして使用するために重要な特性は、農薬についての保護の品質、例えば、厚い細胞壁、色素沈着、および細胞内のパッケージングまたは封入体の形成；葉の親和性；哺乳動物の毒性の欠如；摂取のための病害虫の誘因性；毒素に対する損傷なしの殺しおよび固定の容易さ：などを包含する。他の考慮は、配合および取り扱いの容易さ、経済性、貯蔵安定性などを包含する。特に重要な宿主生物は、酵母、例えば、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）種、オーレオバシディウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）種、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種、およびスポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）種；フィロプレーン生物、例えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）種、およびフラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種；または他の生物、例えば、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種などを包含する。特定の生物は、シュードモナス・エルジノーサ［緑膿菌］（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｕｒｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、エシェリキア・コリ［大腸菌］（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、バシラス・サチリス［枯草菌］（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）などを包含する。農薬の防除において、あるいは農薬として他の生物を操作するとき、本発明の方法を使用する一般的方法はこの分野において知られている。参照、例えば、米国特許第５，０３９，５２３号および欧州特許（ＥＰ）第０４８０７６２Ａ２号。本発明のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種または殺病害虫性遺伝子またはタンパク質を含有するように遺伝学的に変更された微生物は、農業作物および生産物を病害虫から保護のために使用できる。本発明の１つの面において、毒素（農薬）生産性生物の全、すなわち、未溶解の、細胞を、細胞を１または２以上の病害虫の環境に適用したとき、細胞の中で生産される毒素の活性を延長する試薬で処理する。あるいは、異種遺伝子を細胞の宿主の中に導入することによって、農薬を生産する。異種遺伝子の発現は農薬の細胞内の生産および維持を、直接または間接的に、生ずる。次いで、細胞を１または２以上の病害虫の環境に適用したとき、細胞の中で生産される毒素の活性を延長する条件下に、これらの細胞を処理する。生ずる生産物は毒素の毒性を保持する。次いで、これらの天然に包膜された農薬を、標的病害虫を住まわせる環境、例えば、土壌、水、および植物の葉に適用するために、普通の技術に従い配合することができる。参照、例えば、欧州特許出願公開（ＥＰＡ）第０１９２３１９号、およびその中に引用されている文献。本発明の活性成分は通常組成物の形態であり、そして処理すべき作物の区域または植物に、他の化合物とともに、同時にまたは連続的に適用することができる。これらの化合物は肥料または微量栄養素の両方の供与体であるか、あるいは植物の成長に影響を及ぼす他の調製物であることができる。それらは、また、選択的除草剤、殺昆虫剤、殺真菌剤、殺菌剤、殺線虫剤、殺貝剤またはこれらの調製物のいくつかの混合物、ならびに、必要に応じて、それ以上の農業上許容されうる担体、界面活性剤または配合分野において普通に使用される適用促進アジュバントであることができる。適当な担体およびアジュバントは固体または液体であり、そして配合技術において通常使用される物質、例えば、天然または再生の鉱物、溶媒、分散剤、湿潤剤、粘着付与剤、結合剤または肥料に相当することができる。本発明の活性成分あるいは本発明の細菌株により生産された少なくとも１種の殺病害虫タンパク質を含有する本発明の農業化学的組成物を適用する方法は、葉の適用、種子の被覆または土壌の適用である。適用数および適用割合は、対応する病害虫の発生の程度に依存する。本発明の１つの実施態様において、ジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）、およびジアブロティカ・ロンギコミス・バルベリ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓｂａｒｂｅｒｉ）を殺すことができるバシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）微生物が単離された。新規なバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）ＡＢ７８は、アグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチャー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ノーザン・リージョナル・センター（ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ）、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｉｓｔｙＳｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ、ＩＬ６１６０４、ＵＳＡに寄託されそして受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０５８を与えらた。タンパク質はバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）株から実質的に精製された。タンパク質の精製はＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび生物学的活性により評価された。タンパク質は約６０〜約１００ｋＤａ、特に約７０〜約９０ｋＤａ、より特に約８０ｋＤａの分子量を有する。アミノ末端の配列決定はＮ−末端のアミノ酸配列が次の通りであることを明らかにした：ここでＡｓｘはＡｓｐまたはＡｓｎを表す。全体のアミノ酸配列は配列識別番号：７の中に与えられている。ＮＨ２−末端のアミノ酸３〜９をエンコードする遺伝子の領域のためのオリゴヌクレオチドのプローブを発生させた。このプローブはバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）（Ｂｔ）δ−エンドトキシン遺伝子のコドンの使用に基づいて合成された。サザンハイブリダイゼーションのために使用したオリゴヌクレオチドのブローブのヌクレオチド配列は、次の通りであった：ここでＮは任意の塩基を表す。さらに、ここに記載するＢｃＡＢ７８ＶＩＰ−１遺伝子のためのＤＮＡプローブは、ＶＩＰ−１遺伝子（または関係する遺伝子）が自然に存在するかどうか、あるいは特定の形質転換された生物がＶＩＰ−１遺伝子を含むかどうかを決定するためのバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）または他の生物のスクリーニングを可能とする。ここで本発明を一般にに記載したが、本発明は次の詳細な実施例を参照することによっていっそうよく理解されるであろう、これらの実施例は例証を目的として提供されかつ特記しない限り本発明を限定すると考慮すべきでない。実験実施例１．ＡＢ７８の単離および特性決定バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）株ＡＢ７８をＴ３培地（１リットルにつき：３ｇのトリプトン、２ｇのトリプトース、１．５ｇの酵母エキス、０．０５Ｍのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、および０．００５ｇのＭｇＣｌ２；Ｔｒａｖｅｒｓ、Ｒ．Ｓ．１９８３）上で実験室の中のプレートの汚染物質として単離された。ＡＢ７８はウェスタン・ウリハムシ（ｗｅｓｔｅｒｎｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）に対する有意な活性を与えた。また、グラム陽性バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種に対する抗生活性が証明された（表１２）。ＡＢ７８の形態学的特性は次の通りである：栄養成長の桿は直線であり、３．１〜５．０ｍｍの長さおよび０．５〜２．０ｍｍの幅である。丸い末端、単一の短い鎖をもつ細胞。単一の終わりに近い所にある、円筒形−卵形の、内生胞子が細胞につき形成した。副芽胞子結晶が形成した。コロニーは不透明であり、でこぼこの、葉状でありそして平らである。色素は生成しなかった。細胞は運動型である。鞭毛は存在する。ＡＢ７８の成長特性は次の通りである：２１〜３０℃の最適成長温度で条件的好気性。１５、２０、２５、３０および３７℃において成長するであろう．４０℃より上において成長しないであろう。５〜７％ＮａＣｌの中で成長する。表１３はＡＢ７８の生化学的プロフィルを提供する。実施例２．細菌の培養Ｂｃ株ＡＢ７８の継代培養物を使用して、ＴＢブロスとして知られている次の培地を接種した：トリプトン１２ｇ／ｌ酵母エキス２４ｇ／ｌグリセロール４ｍｌ／ｌＫＨ２ＰＯ４２．１ｇ／ｌＫ２ＨＰＯ４１４．７ｇ／ｌｐＨ７．４リン酸カリウムをオートクレーブ処理したブロスに冷却後に添加した。フラスコを３０℃において回転震盪機上で２５０ｒｐｍで２４〜３６時間の間インキュベーションした。上の手順はこの分野において知られている手順により大型発酵槽までに容易に大規模化することができる。栄養成長の間に、通常培養開始後２４〜３６時間に、ＡＢ７８細菌を培養上澄みから遠心分離した。活性タンパク質を含有する培養上澄みをバイオアッセイにおいて使用した。実施例３．昆虫のバイオアッセイバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）株ＡＢ７８を後述するように種々の昆虫に対して試験した。ウェスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）、ノーザン・ウリハムシ（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ）およびサウザーン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ）ウリハムシ（ｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）、それぞれ、Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ、Ｄ．ｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓｂａｒｂｅｒｉおよびＤｉａｂｒｏｔｉｃａｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａｈｏｗａｒｄｉ：２４〜３６時間成長したＡＢ７８培養上澄みを希釈し、溶融人工飼料（Ｍａｒｒｏｎｅら、（１９８９）Ｊ．ｏｆＥｃｏｎｏｍｉｃＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ７８：２９０−２９３）と混合しそして固化させた。固化した飼料を切断し、そして皿の中に入れた。新生児の幼虫を飼料上に配置しそして３０℃保持した。致死率を６日後に記録した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のクローンのバイオアッセイ：大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）をＬ−Ａｍｐ１００の中で３７℃において一夜成長させた。１０ｍｌの培養物を各回２０秒間３×超音波処理した。５００ｍｌの超音波処理した培養物を溶融したウェスタン・ウリハムシの飼料上に添加した。コロラド・ジャガイモ甲虫（Ｃｏｌｏｒａｄｏｐｏｔａｔｏｂｅｅｔｌｅ）Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ：２４〜３６時間成長したＡＢ７８培養上澄みをトリトンＸ−１００の中で希釈した（０．１％のトリトンＸ−１００の最終濃度とした）。５ｃｍ２のジャガイモの葉片をこれらの希釈物の中に浸漬し、空気乾燥し、そしてプラスチック皿の中で湿った濾紙上に配置した。新生児の幼虫を葉片上に配置しそして３０℃保持した。致死率を３〜５日後に記録した。黄色コメノゴミムシダマシ、Ｔｎｅｂｒｉｏｍｏｌｉｔｏｒ：２４〜３６時間成長したＡＢ７８培養上澄みを希釈し、溶融人工飼料（Ｂｉｏｓｅｒｖ＃Ｆ９２４０）と混合しそして固化させた。固化した飼料を切断し、そして皿の中に入れた。新生児の幼虫を飼料上に配置しそして３０℃保持した。致死率を６〜８日後に記録した。ヨーロッパ・アワノメイガ（Ｅｕｒｏｐｅａｎｃｏｒｎｂｏｒｅｒ）、クロヨトウムシ、タバコガ、スズメガ（ｔａｂａｃｏｈｏｒｎｗｏｒｍ）およびシロモンジヨトウ；それぞれ、Ｏｓｔｒｉｎｉａｎｕｂｉｌａｌｉｓ、Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、ＭａｄｕｃａｓｅｘｔａおよびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａ：２４〜３６時間成長したＡＢ７８培養上澄みをトリトンＸ−１００の中で希釈した（０．１％のトリトンＸ−１００の最終濃度とした）。１００ｍｌを１８ｃｍ２の固化した人工飼料（Ｂｉｏｓｅｒｖ＃Ｆ９２４０）の表面上にピペットで配置し、そして空気乾燥した。次いで、新生児の幼虫を飼料の表面上に配置しそして３０℃保持した。致死率を３〜６日後に記録した。ノザン・アカイエカ（Ｎｏｒｔｈｅｒｎｈｏｕｓｅｍｏｓｑｕｉｔｏ）、Ｃｕｌｅｘｐｉｐｉｅｎｓ：２４〜３６時間成長したＡＢ７８培養上澄みを希釈した。１００ｍｌを３０ｍｌのプラスチックのコップ中の１０ｍｌの水の中にピペットで入れた。第３虫齢の幼虫を水の中に添加しそして室温に保持した。致死率を２４〜４８時間後に記録した。新しく発見されたバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）株ＡＢ７８は、Ｂｔからの既知の鞘翅類の活性δ−エンドトキシン類に比較して、殺昆虫活性の有意に異なるスペクトルを示した。特に、ＡＢ７８は甲虫類に対して既知の鞘翅類活性のＢｔ株よりもいっそう選択的な活性を示し、それはジアブロティカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）種に対して特別に活性であった。さらに詳しくは、それはジアブロティカ・ウンデシンプンクタタ・ホワルディ（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａｈｏｗａｒｄｉ）に対してではなく、ジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄ．ｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）およびジアブロティカ・ロンギコミス・バルベリ（Ｄ．ｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓｂａｒｂｅｒｉ）に対して最も活性であった。ある数のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株をウェスタン・ウリハムシ（ｗｅｓｔｅｒｎｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）に対する栄養成長の間の活性についてバイオアッセイした。結果が証明するように、ＡＢ７８はウェスタン・ウリハムシに対する活性が一般的現象ではないことにおいて独特である。ウェスタン・ウリハムシに対するＡＢ７８の比活性を表１６に示す。ＬＣ₅₀はウェスタン・ウリハムシの飼料の１ｍｌについて６．２μｌの培養上澄みであると計算された。実施例４．ＡＢ７８からのウリハムシ（ｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）活性タンパク質の単離および精製細胞および破片を含まない培地を固体の硫酸アンモニウム、すなわち、（４７２ｇ／ｌ）の添加により７０％飽和にした。室温において溶解し、次いで氷浴の中で冷却し、そして１０，０００×ｇで３０分間遠心して沈澱したタンパク質を沈降させた。上澄みを廃棄しそしてペレットをもとの体積の１／１０で２０ｍＭのＴＲＩＳ −ＨＣｌ、ｐＨ７．５で溶解した。溶解したペレットを２０ｍＭのＴＲＩＳＨＣｌｐＨ７．５中で透析するか、あるいは脱塩カラムに通過させることによって脱塩した。所望の物質を２０ｍＭのクエン酸ナトリウムｐＨ２．５でｐＨ３．５に滴定した。室温において３０分間インキュベーションした後、溶液を３０００×ｇで１０分間遠心した。この段階における上澄みは最大量の活性タンパク質を含有した。ｐＨを７．０に中和した後、２０ｍＭのＴＲＩＳｐＨ７．５と平衡化したＭｏｎｏ−Ｑアニオン交換カラムに、上澄みを３００ｍｌ／分の流速で適用した。このカラムを段階的にかつ直線の勾配で２０ｍＭのＴＲＩＳｐＨ７．５中の４００ｍＭのＮａＣｌを使用して展開した。カラムのバイオアッセイおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を使用して、活性画分を確証した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、生物学的に活性なタンパク質を８０ｋＤａの範囲の分子量を有するとして同定した。実施例５．ウリハムシ（ｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）活性タンパク質の配列の分析ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより単離された８０ｋＤａのタンパク質をＰＶＤＦ膜に移し、そしてＡＢＩ４７０パルスド−液体配列決定装置を使用する反復エドマン（Ｅｄｍａｎ）サイクルにより実行するアミノ末端の配列決定にかけた。転移を次のようにして１０％のメタノールｐＨ１１．０を使用して１０ｍＭのＣＡＰＳ緩衝液の中で実施した：電気泳動後のゲルのインキュベーションを転移緩衝液の中で５分間実施した。プロブロット（ＰｒｏＢｌｏｔｔ）ＰＶＤＦ膜を１００％のＭｅＯＨで短時間湿潤させ、次いで転移緩衝液の中で平衡化させた。サンドイッチをスポンジと正方形の濾紙との間に、カソード−ゲル−膜−アノードの立体配置で、配置した。転移を７０Ｖの一定電圧で１時間の間実行した。転移後、膜を水ですすぎ、そして５０％のＭｅＯＨ中の０．２５％のクーマッシーブルー（ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢｌｕｅ）Ｒ−２５０で２分間染色した。５０％のＭｅＯＨ、４０％の水、１０％の酢酸で数回すすいで、脱染色を実施した。脱染色後、膜を空気乾燥した後、配列の分析のためにバンドを切取った。ブロットカートリッジ（ＢｌｏｔｔＣａｒｔｒｉｄｇｅ）および適当なサイクルを利用して、最大の効率および収率を達成した。各順次のサイクルについてＰＴＨ− アミノ酸誘導体を同定しかつ定量するために、６１０型配列分析のソフトウェアを使用して、データの分析を実行した。Ｎ−末端の配列は次の通りであると決定された：はＡｓｎを表す。実施例６．ＤＮＡプローブの構成Ｎ−末端の配列（実施例５）のアミノ酸３〜９をエンコードする遺伝子の領域のためのオリゴヌクレオチドのプローブを発生させた。プローブはバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）（Ｂｔ）δ− エンドトキシン遺伝子のコドンの使用に基づいて合成した。ヌクレオチド配列をサザンハイブリダイゼーションにおいてプローブとして使用した。このオリゴヌクレオチドは標準の技術および装置を使用して合成した。実施例７．ウリハムシ活性タンパク質の等電点の決定精製プロセスの工程５からの精製されたタンパク質は、ファストゲル（Ｐｈａｓｔｇｅｌ）電気泳動システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用して３〜９ｐＩ等電点フォーカシングゲルで分析した。分離および銀染色現像の両方の手順のために、ユニットについて標準の操作手順に従った。ｐｌはほぼ約４．９であった。実施例８．ＡＢ７８についてのＰＣＲデータＰＣＲ分析（参照、例えば、米国特許出願第０８／００８，００６号；およびＣａｒｏｚｚｉら（１９９１）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５７（１１）：３０５７−３０６１、ここに引用によって加える）を使用して、バシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）株ＡＢ７８はバシラス・スリンジェンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）またはバシラス・スフェリカス（Ｂ．ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）の殺昆虫結晶タンパク質遺伝子を含有しないことを評価した（表１７）。実施例９．バシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）株ＡＢ７８からの全体のＤＮＡのコスミドのクローニングＶＩＰ−１遺伝子を次のようにしてＡＢ７８株から調製した全体のＤＮＡからクローニングした。ＡＢ７８ＤＮＡの単離は次の通りであった：１．１０ｍｌのＬ−ブロスの中で一夜成長させる。（５０ｍｌの無菌の遠心管を使用する）２．２５ｍｌの新鮮なＬ−ブロスおよびアンピシリン（３０ｍｇ／ｍｌ）を添加する。３．細胞を３０℃において震盪しなから２〜６時間成長させる。４．ＩＥＣベンチトップの臨床用遠心機中で５０ｍｌのポリプロピレンのオレンジ色管中の細胞を３／４速度で回転する。５．１０ｍｌのＴＥＳの中に細胞のペレットを再懸濁させる。６．３０ｍｇのリゾチームを添加しそして３７℃において２時間インキュベーションする。７．２００ｍｌの２０％のＳＤＳおよび４００ｍｌのプロテイナーゼＫ（２０ｍｇ／ｍｌ）を添加する。３７℃においてインキュベーションする。８．２００ｍｌの新鮮なプロテイナーゼＫを添加する。５５℃において１時間インキュベーションする。５ｍｌのＴＥＳ（ＴＥＳ＝５０ｍＭのｔｒｉｓｐＨ８．０、１００ｍＭのＥＤＴＡ、１５ｍＭのＮａＣｌ）を添加して１５ｍｌの最終体積とする。９．２回フェノール抽出する（１０ｍｌのフェノール、室温においてＩＥＣべンチトップの臨床用遠心機中で３／４速度で回転する）。上澄み（上部）をきれいな管を大きい穴のピペットで移す。１０．１：１体積のフェノール：クロロホルム／イソアミルアルコール（２４：１の比）で１回抽出する。１１．ＤＮＡを等しい体積の冷イソプロパノールで沈澱させる；遠心してＤＮＡを沈降させる。１２．５ｍｌのＴＥの中にペレットを再懸濁させる。１３．ＤＮＡを０．５ｍｌの３ＭのＮａＯＡｃｐＨ５．２および１１ｍｌの９５％のエタノールで沈澱させる。−２０℃において２時間配置する。１４．ＤＮＡを管からプラスチックのループで「引っかけ」、マイクロフージ（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ）管に移し、回転し、過剰のエタノールをピペットで取り出し、真空乾燥する。１５．０．５ｍｌのＴＥの中に再懸濁させる。６５℃において９０分間インキュベーションして、ＤＮＡが溶解するのを促進する。１６．標準の方法を使用して濃度を決定する。ＡＢ７８のコスミドのクローニングすべての手順は、特記しない限り、ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のプロトコール、スーパーコス（Ｓｕｐｅｒｃｏｓ）１のインストラクション・マニュアル、カタログＮｏ．２５１３０１に従い実行した。一般に、工程は次の通りであった：Ａ．ＡＢ７８ＤＮＡをＳａｕ３Ａで部分的に消化する。Ｂ．ベクターＤＮＡを調製する。Ｃ．ＤＮＡの結合およびパッケージング。Ｄ．コスミドのライブラリーを力価決定する。１．０．２％のマルトースを含む５ｍｌのＴＢの中に５０ｍｌの一夜の培養物を配置することによって、ＨＢ１０１細胞の培養を開始する。３７℃において３．５時間インキュベーションする。２．細胞を回転しそして０．５ｍｌの１０ｍＭのＭｇＳＯ４の中に再懸濁させる。３．一緒に添加する：１００ｍｌの細胞１００ｍｌの希釈したパッケージング混合物１００ｍｌの１０ｍＭのＭｇＳＯ４３０ｍｌのＴＢ４．室温において震盪しないで３０分間吸着する。５．１ｍｌのＴＢを添加しそしておだやかに混合する。３７℃において３０分間インキュベーションする。６．２００ｍｌをＬ−ａｍｐプレート上にプレートする。少なくとも４００のコスミドを、実施例３に記載するように、ウェスタン・ウリハムシに対する活性についてスクリーニングした。５つの活性クローンおよび５つの非活性のクローンからのＤＮＡをサザンハイブリダイゼーションにおいて使用した。結果が証明するように、前述のオリゴヌクレオチドのプローブを使用するハイブリダイゼーションはウェスタン・ウリハムシと相関関係を有した（表１８）。コスミドのクローンＰ３−１２およびＰ５−４は、アグリカルチュラル・リサーチ・サービス・パテント・カルチュアー・コレクション（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）に寄託され、そして受け入れ番号Ｂ−２１０６１およびＢ−２１０５９を与えられた。実施例１０．ウェスタン・ウリハムシに対する活性の６ｋｂの領域の同定Ｐ３−１２からのＤＮＡを制限酵素Ｓａｕ３Ａで部分的に消化し、そして大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ベクターｐＵＣ１９の中に結合しそして大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の中に形質転換した。８０ｋＤａに対して特異的なＤＮＡプローブを、Ｐ３−１２ＤＮＡの一部分のＰＣＲ増幅により合成した。８０ｋＤａのタンパク質の部分的アミノ酸配列を使用して、ＶＩＰ−１の部分にハイブリダイゼーションするオリゴヌクレオチドＭＫ１１３およびＭＫ１１７を合成した。プラスミドのサブクローンをＰＣＲプローブへのコロニーのハイブリダイゼーションにより同定し、そしてウェスタン・ウリハムシに対する活性について試験した。１つのこのようなクローンＰＬ２はＰＣＲ断片にハイブリダイゼーションし、そして前述のアッセイによりウェスタン・ウリハムシに対して活性である。ＰＬ２からの６ｋｂのＣｌａＩ制限断片を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）−バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）シャトルベクターｐＨＴ３１０１（Ｌｅｒｅｃｌｕｓ、Ｄ．ら、１９８９、ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ６０：２１１−２１８）のＳｍａＩ部位の中にクローニングしてｐＣＩＢ６２０１を生成した。この構成体はバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の両方の株に、いずれかの向きで、抗ウェスタン・ウリハムシ活性に付与する。ｐＣＩＢ６０２２はｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）の中に同一の６ｋｂのＣｌａＩ断片を含有し、同等のＶＩＰ−１タンパク質を生成し（ウェスタンブロットによる）、そしてまたウェスタン・ウリハムシに対して活性である。ｐＣＩＢ６０２２のヌクレオチド配列はＳａｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７４：５４６３−５４６７（１９７７）のジデオキシ法により、ＰＲＩＳＭレディー反応色素デオキシターミネーターサイクル配列決定キット（ＲｅａｄｙＲｅａｃｔｉｏｎＤｙｅＤｅｏｘｙＴｅｒｍｉｎａｔｏｒＣｙｃｌｅＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔｓ）およびＰＲＩＳＭセクエナーゼ（ＳｅｑｕｅｎａｓｅR）ターミネーター二本鎖ＤＮＡ配列決定キット（ＴｅｒｍｉｎａｔｏｒＤｏｕｂｌｅ−ＳｔｒａｎｄｅｄＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔｓ）を使用して決定し、そしてＡＢＩ３７３自動配列決定装置で分析した。この配列は配列識別番号：１に与えられている。ｐＣＩＢ６０２２はアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ、ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、に寄託され、そして受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２２を与えられた。実施例１１．ＶＩＰ−１ＤＮＡ領域の機能的解剖ＶＩＰ−１オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が殺昆虫活性に必要であることを確証するために、翻訳フレームシフトの突然変異を遺伝子の中につくった。制限酵素ＢｇｌＩＩはＶＩＰ−１のコーディングの中に１７５８ｂｐに位置する独特部位を認識する。ｐＣＩＢ６２０１をＢｇｌＩＩで消化し、そして一本鎖の末端をＤＮＡポリメラーゼ（クレノー断片）およびｄＮＴＰＳでフィルインした。プラスミドを再結合しそして大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の中に形質転換した。生ずるプラスミドｐＣＩＢ６２０３は、ＶＩＰ−１のコーディング領域の中に４つのヌクレオチドの挿入を含有する。ｐＣＩＢ６２０３は殺昆虫活性を付与せず、ＶＩＰ−１がウェスタン・ウリハムシ活性の必須成分であることを確証する。ＶＩＰ−１をエンコードするために必要な領域を定めるために、ＶＩＰ−１およびＶＩＰ−２（補助領域）のサブクローンを構成しそしてｐＣＩＢ６２０３における突然変異を相補するそれらの能力について試験した。ｐＣＩＢ６０２３はｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）の中に３．７ｋｂのＸｂａＩ−ＥｃｏＲＶ断片を含有する。ウェスタンブロット分析は、ｐＣＩＢ６２０３がクローンＰＬ２およびｐＣＩＢ６０２２と等しい大きさおよび量のＶＩＰ−１タンパク質を生産することを示す。ｐＣＩＢ６０２３は８０ｋｄのタンパク質のための全体の遺伝子を含有する。ｐＣＩＢ６２０３はアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクシヨン（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ、ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、に寄託され、そして受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２３を与えられた。ｐＣＩＢ６０２３は多少のウェスタン・ウリハムシ活性を示す。しかしながら、活性のレベルはｐＣＩＢ６０２２の活性より小さい。ｐＣＩＢ６２０３（ＶＩＰ−１−突然変異したおよびＶＩＰ−２）を含有する細胞およびｐＣＩＢ６０２３（ＶＩＰ−１のみ）を含有する細胞の混合物は、ウェスタン・ウリハムシに対して高い活性を示す。こうして、ｐＣＩＢ６０２３は機能的ＶＩＰ−１遺伝子生産物を生産しなくてはならなず、そしてｐＣＩＢ６２０３は機能的ＶＩＰ−２遺伝子生産物を生産しなくてはならない。これらの結果が示唆するように、最大のウェスタン・ウリハムシ活性を付与するために、ＶＩＰ−１と組み合わせて、ＶＩＰ−２領域からの追加の１または２以上の遺伝子生産物が要求される。表１９を参照のこと。ボックスの領域はＶＩＰ−１の範囲を表す。明るい陰影はバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）において観察された８０ｋＤａのペプチドをコードする領域を示す。暗い陰影はＶＩＰ−１のＤＮＡ配列により予測されるＮ−末端のアミノ酸を表す。大きい「Ｘ」はＶＩＰ−１の中に導入されたフレームシフトの突然変異の位置を表す。矢印はベーターガラクトシダーゼプロモーターにより転写された構成体を表す。制限部位：Ｃ−ＣｌａＩ；Ｘ−ＸｂａＩ；Ｓ−ＳａｃＩ；ＲＩ−ＥｃｏＲＩ；Ｂ−ＢｇｌＩＩ；ＲＶ−ＥｃｏＲＶ。実施例１２．ＡＢ７８抗体の生産抗体の生産を２匹のレウィス（Ｌｅｗｉｓ）ラットにおいて開始して、ハイブリドーマ細胞系の生産へ動く可能性およびまたｃＤＮＡライブラリーの制限されたスクリーニングのために十分な血清を生産するのを可能とした。他の因子は入手可能な抗原の非常に制限された量および抗原がＰＡＧＥおよび引き続くニトロセルロースへの電気転移によってのみ純粋に生産することができるという事実であった。ニトロセルロース上の抗原の制限された入手可能性のために、ニトロセルロースをＤＭＳＯの中に乳化し、そして動物の後足のふくらみに注射して、ちょうど上流の膝窩リンパ節におけるＢ−細胞の生産を誘発した。強い反応性の血清が最初の生産の採血内にウェスタン分析により生産された。数回の引き続く注射および採血は、要求されるスクリーニングのすべてを達成するために十分な血清を生産した。次いで、ラットの一方を使用するハイブリドーマの生成を開始した。膝窩リンパ節を切取り、離解し、そして生ずる細胞をマウス骨髄腫Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３と融合させた。引き続く細胞のスクリーニングを後述するように達成した。制限希釈クローニングに動かすべき最大の乳化された抗原反応を与えた、４つの初期のウェルを選択した。追加の１０ウェルを拡張および凍結保存のために選択した。ＥＬＩＳＡスクリーニングのためのＤＭＳＯ中でニロセルロース上のＡＢ７８を乳化する方法ＰＡＧＥ上で展開したＡＢ７８をニトロセルロースに電気転移した後、可逆株ポンェウス（Ｐｏｎｃｅａｕｓ）を使用して転移したすべてのタンパク質を可視化する。前もって同定されそしてＮ−末端の配列決定された、ＡＢ７８毒素に相当するバンドを同定し、そしてニトロセルロースから切取る。各バンドはほぼ１ｍｍ×５ｍｍの大きさであり、乳化するニトロセルロースを量を最小にする。単一のバンドを２５０μｌのＤＭＳＯを含有するマイクロフージ管の中に入れ、そしてプラスチックのへら（Ｋｏｎｔｅｓ、ニュージャージイ州バインランド）を使用して離解する。乳化を促進するために、ＤＭＳＯ混合物を３７℃〜４５℃に２〜３分間加熱する。多少のそれ以上の離解を加熱後に必要とすることがある；しかしながら、ニトロセルロースのすべてを乳化すべきである。いったんＡＢ７８が乳化されると、乳化された抗原を使用してマイクロタイタープレートの被膜を調製するとき、試料をホウ酸塩緩衝液の中で次のようにして希釈しなくてはならない：１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：３０、１：５０、１：１００、および０。被膜の抗原は使用直前に新しく調製しなくてはならない。ＥＬＩＳＡのプロトコール：１．ＢＢＳ中のＡＢ７８／ＤＭＳＯで被覆する。４℃において一夜インキュベーションする。２．１×ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを３×洗浄する。３．室温において３０分間ブロックする（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡおよび０．０５％ツイーン２０）。４．１×ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを３×洗浄する。５．ラットの血清を添加する。３７℃において１．５時間インキュベーションする。６．１×ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを３×洗浄する。７．ヤギ抗ラットをＥＬＩＳＡ希釈液中の２μｇ／ｍｌの濃度で添加する。３７℃において１時間インキュベーションする。８．１×ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを３×洗浄する。９．ウサギ抗ヤギアルカリ性ホスファターゼをＥＬＩＳＡ希釈液中の２μｇ／ｍｌの濃度で添加する。３７℃において１時間インキュベーションする。１０．１ＸＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で３×洗浄する。１１．基質を添加する。室温において３０分間インキュベーションする。１２．３０分後３ＮＮａＯＨで停止する。実施例１３．ＡＢ７８ＶＩＰクローンを使用する非活性Ｂｔ株の殺昆虫活性の活性化ｐＣＩＢ６２０３をＢｔ株ＧＣ９１からの培養上澄みと一緒に添加して、ジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）において１００％の致死率を生成する。ｐＣＩＢ６２０３またはＧＣ９１のいずれもそれ自体ジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）に対して活性ではない。実施例１４．バシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）ＡＢ８１の単離および生物学的活性ＡＢ８１と表示する第２のバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）株を、穀物置場の試料から標準の方法で単離した。ＡＢ８１の継代培養物を成長させそして、実施例２に記載するように、バイオアッセイのために調製した。生物学的活性を実施例３に記載するように評価した。結果は次の通りである：実施例１５．バシラス・スリンジェンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＡＢ６の単離および生物学的活性ＡＢ６と表示するバシラス・スリンジェンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）株を、穀物置場の試料から標準の方法で単離した。ＡＢ６の継代培養物を成長させそして、実施例２に記載するように、バイオアッセイのために調製した。試料の半分を１５分オートクレーブ処理して、β−エキソトキシンの存在について試験した。生物学的活性を実施例３に記載するように評価した。結果は次の通りである：ＡＢ６株はアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ，ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、に寄託され、そして受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０６０を与えられた。実施例１６．バシラス・スリンジェンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＡＢ８８の単離および生物学的特性決定ＡＢ８８と表示するＢｔ株を、穀物置場の試料から標準の方法で単離した。ＡＢ８８の継代培養物を成長させそして、実施例２に記載するように、バイオアッセイのために調製した。試料の半分を１５分オートクレーブ処理して、β−エキソトキシンの存在について試験した。生物学的活性を実施例３に記載するようにある数の昆虫種に対して評価した。結果は次の通りである：デルタ−エンドトキシンの結晶をＡＢ８８株から標準の方法により精製した。アグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）に対してバイオアッセイしたとき、精製結晶からの活性は観察されなかった。実施例１７．ＡＢ８８株からＶＩＰの精製細菌の液体培養物をＴＢ培地の中で３０℃において一夜成長させた。細胞を回転し、そして上澄みを保持した。タンパク質を硫酸アンモニウム（７０％飽和）で沈澱させ、遠心しそしてペレットを保持した。ペレットをもとの体積の２０ｍＭのＴｒｉｓｐＨ７．５の中に再懸濁させ、そして同一緩衝液に対して透析した。ＡＢ８８の透析物はＡＢ７８からの匹敵する物質よりも濁っていた。等電点電気泳動（Ｒｏｔｏｆｏｒ、ＢｉｏＲａｄ、カリフォルニア州ハーキュレス）、ｐＨ４．５における沈澱、イオン交換クロマトグラフィー、大きさ排除クロマトグラフィーおよび限外濾過を包含する清浄に従ういくつかの方法により、ＡＢ８８タンパク質を分離した。ヨーロッパ・アワノメイガ（ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｒｎＢｏｒｅｒ）活性タンパク質は、透析物のｐＨ４．５の沈澱により得られたペレットの中に止まった。調製用ＩＥＦを透析物についてｐＨ３〜１０の両性電解質を使用して実施したとき、ＥＣＢ殺昆虫活性はすべての画分の中にｐＨ７またはそれ以上で見出された。これらの画分のＳＤＳ−ＰＡＧＥは、約６０ｋＤａおよび約８０ｋＤａのタンパク質バンドを示した。６０ｋＤａおよび８０ｋＤａのバンドを、ポロス（Ｐｏｒｏｓ）−Ｑカラム（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、マサチュセッツ州ケンブリッジ）のアニオン交換ＨＰＬＣにより分離した。Ｎ−末端の配列はわずかに異なる分子量であるが、両方ともほぼ６０ｋＤａ大きさのタンパク質を含有する２つの画分から得られた。得られた配列は互いにかついくつかはδ−エンドトキシンに類似した。アニオン交換画分２８（より大きい）：ｘＥＹＥＮＶＥＰＦＶＳＡｘ（配列識別番号：１１１）（活性）ｐＨ４．５ペレットをポロス−Ｑカラムのアニオン交換によりさらに分離したとき、活性は約６０ｋＤａの主要なバンドをもつ画分においてのみ見出された。クロヨトウムシ活性タンパク質は、ＡＢ８８透析物をｐＨ４．５に下げたとき、ペレットの中に止まった。ｐＨ３〜１０の両性電解質を使用する調製用ＩＥＦにおいて、活性はＥＣＢ活性ＩＥＦ画分の中に見出されなかった；その代わり、それはｐＨ４．５〜５．０の画分において最高であった。その主要な化合物は約３５および約８０ｋＤａの分子量を有する。ｐＨ４．５のペレットをアニオン交換ＨＰＬＣにより分離して、３５ｋＤａの物質のみを含有する画分および３５ｋＤａおよび８０ｋＤａの両方を含有する画分を生成した。実施例１８．ＡＢ８８ＶＩＰの特性決定種々の鱗翅類活性の栄養成長のタンパク質を含有する画分を、実施例１７に記載するように、発生させた。活性画分の分析により、異なるＶＩＰが異なる鱗翅類種の活性の原因となることが証明される。アグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）活性は、単一にあるいは組み合わせで送り出された８０ｋＤａおよび／または３５ｋＤａのためである。これらのタンパク質は、既知のδ−エンドトキシン配列の配列の相同性の欠如により証明されるように、Ｂｔからのδ−エンドトキシンに関係しない。また、これらのタンパク質はＡＢ８８のδ−エンドトキシン結晶の中に見出されない。主要なδ−エンドトキシンのタンパク質のＮ−末端の配列を、８０ｋＤａおよび３５ｋＤａのＶＩＰのＮ−末端の配列と比較し、そして配列の相同性を明らかにしなかった。結果の要約は次の通りである：Ｏｓｔｒｉｎｉａｎｕｂｉｌａｌｉｓ活性は６０ｋＤａのＶＩＰのためであり、そしてスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）活性は未知のＶＩＰのためである。バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）株ＡＢ８８はアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ、ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、に寄託され、そして受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２５を与えられた。実施例１９．他のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種の単離および生物学的活性栄養成長の間に殺昆虫活性をもつタンパク質を生産する他のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種を単離した。これらの株は環境のするから標準の方法により単離された。単離物をバイオアッセイについて調製しそして、それぞれ、実施例２および３に記載されているように、アッセイした。バイオアッセイにおいてアグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）に対する活性をもつ殺昆虫タンパク質を栄養成長の間に生産する単離物を下表に示す。分離物ＡＢ２８９、ＡＢ２９４およびＡＢ３５９はアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ、ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、に寄託されそして、それぞれ、受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２７、ＮＲＲＬＢ−２１２２９、およびＮＲＲＬＢ−２１２２６を与えられた。ジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）に対する活性をもつ殺昆虫タンパク質を栄養成長の間に生産するバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の単離物を下表に示す。分離物ＡＢ５９およびＡＢ２５６はアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ、ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、に寄託されそして、それぞれ、受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２８およびＮＲＲＬＢ−２１２３０を与えられた。この明細書の中に述べられているすべての刊行物および特許出願は、本発明が関係する当業者の水準を示す。すべての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物および特許出願が引用によって加えるべきことを詳しくかつ個々に示しているのと同程度に、ここに引用によって加える。次の寄託がアグリカルチュラル・リサーチ・サービス（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈＳｅｒｖｉｃｅ）、パテント・カルチュアー・コレクション（ＰａｔｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＮＲＲＬ）、ＮｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ、１８１５ＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｒｅｅｔ、ペオリア、イリノイ州６１６０４、米国、においてなされた。１．大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＰＬ２受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ− ２１２２１２．大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｐＣＩＢ６０２２受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２２３．大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｐＣＩＢ６０２３受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２３４．バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＨＤ７３−７８ＶＩＰ受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２４５．バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＡＢ８８受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２５６．バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＡＢ３５９受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２６７．バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＡＢ２８９受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２７８．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種ＡＢ５９受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２８９．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種ＡＢ２９４受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２９１０．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種ＡＢ２５６受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２３０１１．大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｐ５−４受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ −２１０５９１２．大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｐ３−１２受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０６１１３．バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）ＡＢ７８受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０５８１４．バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＡＢ６受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０６０前述の本発明は理解の明瞭を目的として例示および実施例により多少詳細に記載したが、明らかなようにある種の変化および変化および変更を本発明の範囲内で実施することができる。配列のリスト（１）一般的情報：（ｉ）出願人：（Ａ）名称：チバーガイギー社（Ｂ）街：クリベクストラッセ１４１（Ｃ）市：バスレ（Ｄ）国：スイス（Ｅ）郵便番号（ＺＩＰ）：ＣＨ−４００２（Ｆ）ＴＥＬ：（０６１）６９６１１１１（Ｇ）ＦＡＸ：（０６１）６９６７９７６（Ａ）名前：グレゴリーＷ．ワレン（Ｂ）街：３２４ボンドレイックドライブ（Ｃ）市：カリイ（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７５１３（Ａ）名前：ミカエルＧ．コシエル（Ｂ）街：５０９カロラインコート（Ｃ）市：カリイ（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７５１１（Ａ）名前：マーサＡ．ムリンス（Ｂ）街：１０４カントリイブルックレーン（Ｃ）市：ヤングスビレ（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７５９６（Ａ）名前：ゴードンＪ．ニエ（Ｂ）街：１００１ブレイコート（Ｃ）市：エイペックス（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７５０２（Ａ）名前：ブリアン・カール（Ｂ）街：１１０ＤレディススリッパーＣｔ（Ｃ）市：ラレイ（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７６０６（Ａ）名前：ナリニ・マナジ・デサイ（Ｂ）街：１０７シルバーウッドレーン（Ｃ）市：カリイ（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７５１１（Ａ）名前：Ｎ．クリスティ・コスチィシカ（Ｂ）街：５０１７ワインベリーＤｒ．（Ｃ）市：ヅラム（Ｄ）州：ノースカロライナ州（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：２７７１３（ｉｉ）発明の名称：新規な殺病害虫タンパク質および株（ｉｉｉ）配列の数：１８（ｉｖ）コンピューターの読取り可能なフォーム：（Ａ）媒体の型：フロッピーディスク（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭＰＣコンパティブル（Ｃ）操作システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：パテント・イン・リリース＃１．０、バージョン＃１．２５（ＥＰＯ）（ｖｉ）先の出願のデータ：（Ａ）出願番号：米国０８／０３７，０５７（Ｂ）提出日：１９９３年３月２５日（２）配列識別番号：１についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：６１０６塩基対（Ｂ）型：核酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ＤＮＡ（ゲノム）（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｃｅｒｅｕｓ）（Ｂ）株：ＡＢ７８（Ｃ）個々の分離物：ＮＲＲＬＢ−２１０５８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キ−：ＣＤＳ（Ｂ）位置：１０８２．．１８１０（Ｄ）他の情報：／生産物＝「ＶＩＰ−２」／標識＝ＯＲＦ−１（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：１９２５．．２４７０（Ｄ）他の情報：／生産物＝「ＶＩＰ−２」／標識＝ＯＲＦ−２（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１（２）配列識別番号：２についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：２４３アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：タンパク質（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：２（２）配列識別番号：３についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１８２アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：タンパク質（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：３（２）配列識別番号：４についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：２６５５塩基対（Ｂ）型：核酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし（ｉｉｉ）アンチセンス：なし（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｃｅｒｅｕｓ）（Ｂ）株：ＡＢ７８（Ｃ）個々の分離物：ＮＲＲＬＢ−２１０５８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：１．．２６５２（Ｃ）同定方法：実験（Ｄ）他の情報：／生産物＝「１００ｋＤａのタンパク質ＶＩＰ−１」／証拠＝実験（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：４（２）配列識別番号：５についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：８８４アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：タンパク質（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：５（２）配列識別番号：６についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：２００４塩基対（Ｂ）型：核酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし（ｉｉｉ）アンチセンス：なし（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｃｅｒｅｕｓ）（Ｂ）株：ＡＢ７８（Ｃ）個々の分離物：ＮＲＲＬＢ−２１０５８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：１．．２００１（Ｃ）同定方法：実験（Ｄ）他の情報：／生産物＝「８０ｋＤａのタンパク質ＶＩＰ−１」／証拠＝実験（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：６（２）配列識別番号：７についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：６６７アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：タンパク質（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：７（２）配列識別番号：８についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１６アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｃｅｒｅｕｓ）（Ｂ）株：ＡＢ７８（Ｃ）個々の分離物：ＮＲＲＬＢ−２１０５８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ＡＢ７８株から精製されたＮ−末端の配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：８（２）配列識別番号：９についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：２１アミノ酸（Ｂ）型：核酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし（ｉｉｉ）アンチセンス：なし（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｃ特徴（Ｂ）位置：１．．２１（Ｄ）他の情報：／注＝「バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）のコドンを使用する、配列識別番号：８のアミノ酸３〜９に基づくオリゴヌクレオチドのプローブ」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：９（２）配列識別番号：１０についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１４アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ）株：ＡＢ８８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．１４（Ｄ）他の情報：／注＝「アニオン交換画分２３（より小さい）として知られているタンパク質のＮ− 末端のアミノ酸配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１０（２）配列識別番号：１１についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１３アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ）株：ＡＢ８８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．１３（Ｄ）他の情報：／注＝「アニオン交換画分２３（より大きい）として知られているタンパク質のＮ− 末端のアミノ酸配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１１（２）配列識別番号：１２についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１４アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ）株：ＡＢ８８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．１４（Ｄ）他の情報：／注＝「アグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）に対して活性な８０ｋＤａのＶＩＰのＮ−末端の配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１２（２）配列識別番号：１３についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１５アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ）株：ＡＢ８８（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．１５（Ｄ）他の情報：／注＝「アグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）に対して活性な３５ｋＤａのＶＩＰのＮ−末端の配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１３（２）配列識別番号：１４についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：９アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．９（Ｄ）他の情報：／注＝「１３０ｋＤａのデルタ−エンドトキシンのＮ−末端の配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１４（２）配列識別番号：１５についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：９アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．９（Ｄ）他の情報：／注＝「８０ｋＤａのデルタ−エンドトキシンのＮ−末端の配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１５（２）配列識別番号：１６についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：１１アミノ酸（Ｂ）型：アミノ酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ペプチド（ｉｉｉ）仮説：なし（ｖ）断片の型：Ｎ−末端（ｖｉ）もとの源：（Ａ）生物：バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）位置：１．．１１（Ｄ）他の情報：／注＝「６０ｋＤａのデルタ−エンドトキシン６０ｋＤａのＮ−末端の配列」（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１６（２）配列識別番号：１７についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：２６５５塩基対（Ｂ）型：核酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし（ｉｉｉ）アンチセンス：なし（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１７（２）配列識別番号：１８についての情報：（ｉ）配列の特性：（Ａ）長さ：２０１０塩基対（Ｂ）型：核酸（Ｃ）鎖：一本鎖（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子の型：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし（ｉｉｉ）アンチセンス：なし（ｘｉ）配列の記載：配列識別番号：１８

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ムリンズ，マーサエー. アメリカ合衆国，ノースカロライナ 27596，ヤングスビル，カントリーブルックレーン 104 (72)発明者ニー，ゴードンジェイ. アメリカ合衆国，ノースカロライナ 27502，アペックス，ブレイコート 1001 (72)発明者ディザイ，ナリーニアメリカ合衆国，ノースカロライナ 27511，キャリー，シルバーウッドレーン 107 (72)発明者カール，ブライアンアメリカ合衆国，ノースカロライナ 27606，ラレイ，レディススリッパーコート 1100ディー (72)発明者コスティカ，エヌ．クリスティアメリカ合衆国，ノースカロライナ 27713，ダーハム，ワインベリードライブ 5017

Claims

【特許請求の範囲】１．栄養成長の間に殺病害虫タンパク質を生産する実質的に精製されたバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。２．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）が表１１に列挙するバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種から選択される請求の範囲１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。３．前記タンパク質が昆虫、真菌、細菌、線虫、ダニ（ｍｉｔｅｓ）、マダニ（ｔｉｃｋｓ）、原生動物の病原体、動物の寄生体などからから選択される病害虫を殺す請求の範囲１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。４．前記タンパク質が鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、膜翅目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、同翅目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、直翅目（Ｏｒｔｈｒｏｐｔｅｒａ）、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、ハサミムシ目（Ｄｅｒｍａｐｔｅｒａ）、シロアリ目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、ハジラミ目（Ｍａｌｌｏｐｈａｇａ）、シラミ目（Ａｎｏｐｌｕｒａ）、ノミ目（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ）またはトビケラ目（Ｔｒｉｃｈｏｐｔｅｒａ）から選択される昆虫を殺すことができる、請求の範囲３のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。５．前記鞘翅類の種がジアブロティカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）である、請求の範囲４のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。６．ジアブロティカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）がジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）またはジアブロティカ・ロンギコルニス・バルベリ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓｂａｒｂｅｒｉ）である、請求の範囲５のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。７．鱗翅類の種がヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ）である、請求の範囲４のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。８．ヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ）がアグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）である、請求の範囲７のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。９．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）がバシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）である、請求の範囲２のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１０．前記バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０５８を有するバシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）である、請求の範囲９のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１１．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）がバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）である、請求の範囲２のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１２．前記バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０６０を有するバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）である、請求の範囲１０のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｉｓ）株。１３．前記タンパク質が３０ｋＤａまたはそれより大きい分子量を有する、請求の範囲２のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１４．前記タンパク質か約６０〜約１００ｋＤａの分子量を有する、請求の範囲１３のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１５．前記タンパク質が約８０ｋＤａの分子量を有する、請求の範囲１４のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１６．前記タンパク質が配列識別番号：７を有する、請求の範囲１５のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１７．前記タンパク質が約１００ｋＤａの分子量を有する、請求の範囲１４のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１８．前記タンパク質が配列識別番号：５を有する、請求の範囲１７のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。１９．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種の栄養成長期の間に単離可能な実質的に純粋な殺病害虫タンパク質またはその活性断片。２０．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）が表１１に列挙するバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種から選択される請求の範囲１９の殺病害虫タンパク質。２１．前記昆虫が鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、膜翅目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、同翅目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、直翅目（Ｏｒｔｈｒｏｐｔｅｒａ）、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、ハサミムシ目（Ｄｅｒｍａｐｔｅｒａ）、シロアリ目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、ハジラミ目（Ｍａｌｌｏｐｈａｇａ）、シラミ目（Ａｎｏｐｌｕｒａ）、ノミ目（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ）またはトビケラ目（Ｔｒｉｃｈｏｐｔｅｒａ）から選択される、請求の範囲２０の殺病害虫タンパク質。２２．前記鞘翅類の種がジアブロティカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）である、請求の範囲２１の殺病害虫タンパク質。２３．ジアブロティカ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）がジアブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｖｉｒｇｉｆｅｒａｖｉｒｇｉｆｅｒａ）またはジアブロティカ・ロンギコルニス・バルベリ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓｂａｒｂｅｒｉ）である、請求の範囲２２の殺病害虫タンパク質。２４．鱗翅類の種がヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ）である、請求の範囲２４の殺病害虫タンパク質。２５．ヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ）がアグロティス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓｉｐｓｉｌｏｎ）である、請求の範囲２４の殺病害虫タンパク質。２６．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）がバシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）である、請求の範囲１９の殺病害虫タンパク質。２７．前記バシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０５８を有するバシラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）である、請求の範囲２６の殺病害虫タンパク質。２８．バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）がバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）である、請求の範囲１９の殺病害虫タンパク質。２９．前記バシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０６０、ＮＲＲＬＢ− ２１２２４、ＮＲＲＬＢ−２１２２５、ＮＲＲＬＢ−２１２２６およびＮＲＲＬＢ−２１２２７を有するバシラス・スリンジェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ）である、請求の範囲２８の殺病害虫タンパク質。３０．前記タンパク質が３０ｋＤａまたはそれより大きい分子量を有する、請求の範囲１９の殺病害虫タンパク質。３１．前記タンパク質が約６０〜約１００ｋＤａの分子量を有する、請求の範囲３０の殺病害虫タンパク質。３２．前記タンパク質か約８０ｋＤａの分子量を有する、請求の範囲３１の殺病害虫タンパク質。３３．前記タンパク質が配列識別番号：７を有する、請求の範囲３２の殺病害虫タンパク質。３４．前記タンパク質が配列識別番号：５を有する、請求の範囲３１の殺病害虫タンパク質。３５．前記タンパク質は配列識別番号：１０または１１の中に記載するＮ−末端の配列を含む、請求の範囲１９の殺病害虫タンパク質。３６．請求の範囲１９のタンパク質をコードする実質的に純粋なヌクレオチド配列。３７．請求の範囲３３のタンパク質をコードする実質的に純粋なヌクレオチド配列。３８．請求の範囲３４のタンパク質をコードする実質的に純粋なヌクレオチド配列。３９．請求の範囲３５のタンパク質をコードする実質的に純粋なヌクレオチド配列。４０．前記配列が植物の中の発現のために最適化されている、請求の範囲３６のヌクレオチド配列。４１．前記植物がトウモロコシ、ダイズ、ワタ、コムギ、ヒマワリ、トマト、ジャガイモ、およびセイヨウアブラナ（ｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅ）から選択される、請求の範囲４０のヌクレオチド配列。４２．前記配列が植物の中の発現のために最適化されている、請求の範囲３７のヌクレオチド配列。４３．前記植物がトウモロコシ、ダイズ、ワタ、コムギ、ヒマワリ、トマト、ジャガイモ、およびセイヨウアブラナ（ｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅ）から選択される、請求の範囲４２のヌクレオチド配列。４４．前記配列が植物の中の発現のために最適化されている、請求の範囲３８のヌクレオチド配列。４５．前記配列が配列識別番号：１８の中に記載されている、請求の範囲４４のヌクレオチド配列。４６．前記配列が植物の中の発現のために最適化されている、請求の範囲３９のヌクレオチド配列。４７．前記配列が配列識別番号：１７の中に記載されている、請求の範囲４６のヌクレオチド配列。４８．前記配列が微生物の中の発現のために最適化されている、請求の範囲３６のヌクレオチド配列。４９．前記微生物がバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クラビバクター（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ザントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、昆虫病原性ウイルス、真菌、原生動物および線虫から選択される、請求の範囲４８のヌクレオチド配列。５０．請求の範囲３６〜４７のいずれか１つのヌクレオチド配列で安定に形質転換された植物。５１．前記植物がトウモロコシ植物である、請求の範囲４８の植物。５２．前記配列が本質的に受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０５９を有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）クローンＰ５−４の配列である、請求の範囲３６のヌクレオチド配列。５３．前記配列が本質的に受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１０６１を有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）クローンＰ３−１２の配列である、請求の範囲３６のヌクレオチド配列。５４．前記配列か本質的に受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２２を有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）クローンｐＣＩＢ６０２２の配列の中に含有されている、請求の範囲３６のヌクレオチド配列。５５．前記配列が配列識別番号：１の中でＶＩＰ−１として与えられている請求の範囲５４のヌクレオチド配列。５６．殺病害虫タンパク質の殺病害虫活性を増強する補助タンパク質。５７．前記殺病害虫タンパク質がバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）からのものである請求の範囲５６の補助タンパク質。５８．前記殺病害虫タンパク質がバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）からのものである請求の範囲５７の補助タンパク質。５９．前記殺病害虫タンパク質がＡＢ７８株からのものである請求の範囲５８の補助タンパク質。６０．前記補助タンパク質がバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）からのものである請求の範囲５６の補助タンパク質。６１．前記補助タンパク質がバシラス・セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）からのものである請求の範囲６０の補助タンパク質。６２．前記補助タンパク質がＡＢ７８株からのものである請求の範囲６１の補助タンパク質。６３．請求の範囲５６、６０、６１、および６２のいずれか１つの補助タンパク質をエンコードする実質的に純粋なヌクレオチド配列。６４．前記配列が本質的に受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２２を有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）クローンｐＣＩＢ６０２２の配列の中に含有されている、請求の範囲６３のヌクレオチド配列。６５．前記株が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２５を有するＡＢ８８である、請求の範囲１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。６６．前記株が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２７を有するＡＢ２８９である、請求の範囲１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。６７．前記株が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２９を有するＡＢ２９４である、請求の範囲１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。６８．前記株が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２６を有するＡＢ３５９である、請求の範囲１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。６９．前記株が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２２８を有するＡＢ５９である、請求項１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。７０．前記株が受け入れ番号Ｎｏ．ＮＲＲＬＢ−２１２３０を有するＡＢ２５６である、請求項１のバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株。