JPH04502474A - イセパミシンを調製するための改良法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ゲンタマイシンＢを、１−Ｎ−［（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキ シ１０ピオニルｊゲンタマイシンＢであるイセバミシンに変換するための新規な 方法およびその方法で有用な新規なホルミル化剤である２−ホルミルメルカプト ベンゾチアゾールに関する。

更に詳しくは、本発明は、２−ホルミルメルカプトベンゾチアゾールを用い、１ −アミノ基を（Ｓ）−イソセリン誘導体でアシル化した後、高収率で所望の生成 物を生じる条件下で保護基を除去することによって、ゲンタマイシンＢを３゜６ ′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢに変換するための方法に関する。

式 を有するイセバミシンは、既知のアミノグリコシド系抗生物質である。ゲンタマ イシンＢからのこの化合物の製法は、米国特許第４．２３０．８４７号明ｄ書に 記載されている。この特許で記載された方法は、ゲンタマイシンＢの銅−ニッケ ル（ＩＩ）塩紹体とＮ−ベンジルオキシカルボニルオキシフタルイミドとを反応 させた後、その中間体化合物とＮ−（Ｓ−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ −２−ヒドロキシ１０ピオニルオキシ）スクシンイミドとを反応させることによ って３．６′−ジーＮ−ペンジルオキシ力ルポニルゲンタマイシシロを生成する ことを含む、得られる物賀からベンジルオキシカルボニル保護基を、炭素上パラ ジウムによる接触水素添加によって除去して、中間の出ｌ＠物質からの収４１６ ０％でイセパミシンを生成した。

ッチャ（Ｔｓｕｃｈｉ３／ａ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、 第５１号、４９５１〜４９５４頁（１９７９）に、酢酸亜鉛キレート化、３゜６ ′−Ｎ−ビスベンジルオキシカルボニル化、亜鉛の除去、カルボン酸塩生成、そ して最後に３″−アミノ基のトリフルオロアセチル化を含む、カナマイシンＡｉ 　の３．３″−６′−アミノ基を保護するための複雑な多段階方法が記載されて いる。このようにして生じた３、３”　−６’　Ｎ−トリブロックカナマイシン Ａを、次に、１−Ｎ−［（ｓ＞−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ］−２− ヒドロキシ酪酸の活性エステルを用いて遊１１１１ｃｍ１アミノ基でアシル化す る。最終的に、得られる生成物に二つの部分からなる脱保護スキームを施してア ミカシンが得られる。同様の順序が、ジベカシンのその１−Ｎ〜［（Ｓ）−４− アミノ−２−ヒドロキシブチリル］誘導体への変換用にも記載されている。＠の アミノグリコシドの選択的アシル化にこの方法を用いることに関しては開示され なかった。ツチャらの操作順序は、保護段階でトリフルオロアセチル化およびベ ンジルオキシカルボニル化双方を行い且つ脱ｉＸ１段階でアミツリシスおよび水 素化分解を必要として厄介である。これらの段階により、その方法は、経常費お よび装置に要する費用の理由で商業的に関心を呼ぶものではない、更に、検討中 であるが、ツチャらの方法説明での意味に反して、酢酸亜鉛キレート化は、カナ マイシンおよびジベカシン以外のアミノグリコシドにおいて選択的な３．６′− ジブロツケード（ｄｉｂｌｏｃｋａｄｅ）を常に導くわけではない４例えば、予 想外にも、ゲンタマイシンＢの酢酸亜鉛キレート化に続くホルミルイミダゾール を用いるアシル化によって導かれるのは、主として１．６′−Ｎ−ジホルミル化 であって３゜６′−ジホルミル化ではない、この同じゲンタマイシンＢ酢酸亜鉛 キレートを別のホルミル化剤であるホルミル酢酸混合無水物で再度アシル化する ことにより、所望の３．６’−Ｎ−ジホルミルゲンタマイシンＢの他に、望まし くない水準のアセチル化したゲンタマイシンＢの生成物も生じる。予測が困難で あることを強調するために、ホルミル−ｐ−ニトロ安息香酸混合無水物は、ゲン タマイシンＢ酢酸亜鉛キレートのホルミル化において有用であるには反応性が不 十分であることが証明されたが、ホルミル−Ｐ−アニス酸混合無水物を用いるこ とにより、優れた収率で所望の３．６′−ジホルミルゲンタマイシンＢが少量の アニソイル不純物を混入して得られた。

金属酢ｉｓ！塩、例えば酢酸亜鉛等を用いることにより、少量のｔ！１ましくな い副生成物、例えばＮ−ア七チル誘導体が生じ、これを除去するは困難であり、 しかも望ましい生成物の収率が低減する。

アミノグリコシドのホルミル化は、従来、ＩＮ−アルキル化カナマイシン抗生物 質の製法に関連して、トーマス（Ｔｈｏｍａｓ）らによって、Ｔｅｔｒａ−ｈｅ ｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、ｅｒｓ、２１巻、４９８１〜４９８４頁（１９８０）に記 載されていた。しかしながら、トーマスらは、ＩＮ−アシル化アミノグリコシド を製造する鳩舎のアミノ保ＩＩ基としてのホルミル化の有用性を示していない。

アミノグリコシドに関する他のいずれの文献でもこの点は認められていない、そ れどころか、文献には、アミノ基を保護するためにトリフロロアセチル基、トリ クロロアセチル基およびフタロイル基などを用いることが記載されており、しか もこのような基のアミツリシスまたはヒドラジツリシスは、分子上に存在するこ とができる他のある種のＮ−アシル基に実質的に影響を及ぼすことなく行うこと ができるということが示されている。要するに、３．６゛−Ｎ−ホルミルｆと− １−Ｎ−アシル化アミノグリコシドからのホルミル基の選択的水性塩基加水分解 は前例がない。

本出願人は、ここで、新規なホルミル化剤である式■を有する２−ホルミルメル カプトベンゾチアゾールが、ゲンタマイシンＢ亜餡キレートの３．６′−アミノ 基を選択的にホルミル化することができることを発見した。更に、本発明の方法 は、ピバル駿亜鉛などの別の亜鉛塩を用いてＸｌましくない副生成物の生成を避 けるならば、高収率をもたらす、更に、下用願人は、キレートから亜鉛を除去す ることによりて得られた３、６’　−Ｎ−ジホルミルゲンタマイシンＢを、Ｎ− ホルミル−（Ｓ）−イソセリン活性エステルを用いて、ツチャらの方法でのよう にＣ−３＃メチルアミノ基を別個に保護することなく、Ｃ−１７ミノ基でのみ選 択的にアシル化することができることを発見した。最終的に、本出願人は、得ら れる３、６′−Ｎ−ジホルミル−１−Ｎ−［Ｎ−ホルミル−（Ｓ）−イソセリノ イルコーゲンタマイシンＢから水性塩基加水分解によって、所望のイソセリン側 鎖を除去することなく高収率でホルミル基全部を除去することができることを発 見した。

主型Ω！牧 本発明は、ゲンタマイシンＢを高収率でイセバミシンに変換するための改良され た多Ｐｉ階方法に関する。

本発明の方法は、 （ａ）ゲンタマイシンＢをキレート化剤と反応させ、続いて、ゲンタマイシンＢ においてホルミル基を選択的に導入することができる２−ホルミルメルカプトベ ンゾチアゾールと反応させて３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢを生 成し；　− （ｂ）３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢの１−アミノ基を、活性化 Ｎ−アシル保護（Ｓ）−イソセリン化合物でアシル化し：（ｃ）保護基を全部除 去し；そして （ｄ）イセバミシンを単離すること； から成る。

及井］杉しｌ朋 中間体化合物である３、６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢは、ゲンタマ イシンＢの二価の金属塩ＩＩと２−ホルミルメルカプトベンゾチアゾールとを反 応させてホルミル保護基を３．６′−位に導入することによって調製される。

金属塩錯体は、米国特許第４，１３６．２５４号明細書およびトーマスらのＴｅ ｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒ、２１巻、４９８１〜４９８４頁（１９８０ ）で開示された方法を用いて調製される。

３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢ　（Ｉｌｌ）を調製するための反 応スキームを下記に記載する。

本発明の方法においてξ量生成刑として有用な遷移金属塩には、銅（■）、ニッ ケル（■）、コバル１−（ｉｌ）−カドミウム（Ｉ［）および亜鉛（Ｉ［）のこ のような二価σ１塩並びにそれらの混合物が挙げられる。二価の金属塩は有機酸 の塩であり、好ましくは、有僑酸は、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバル 酸および安息香酸である。好ましい二価の金属塩として、亜鉛（Ｉｌ）およびコ バルト（旧のピバル酸塩が挙げられる。特に用いられるのはピバル酸亜＃９（ｎ ）である。

ゲンタマイシンＢの二Ｉｊｉの４１１体の生成は、不活性有機溶媒中で行われる 。好ましい有ｔＭ媒は、例えばジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、 ジメチルアセトアミド、塩化メチレン、トルエン、酢酸エチルおよびそれらの混 合物である。

ゲンタマイシンＢの二価の塩ｆ１体を調製する場合、亜鉛（ＩＩ）などの二価の 塩を、ゲンタマイシンＢの１モル当り約１．５〜４６５モル用いるのが好都合で あることが見出された。試薬の好ましいモル比は、ゲンタマイシンＢの１モル当 り二価の塩約２．７〜３．５モルである。

ゲンタマイシンの二価の塩錯体を２−ホルミルメルカプトベンゾチアゾールと反 応させて、３−アミノ基および６′−アミノ基の双方でホルミル保護基を導入す る。

２−ホルミルメルカプトベンゾチアゾールのモル量は、通常、ゲンタマイシンＢ の二価の塩＃ｉ体のモル量１に対して２〜３である。好ましいモル量は１に対し て２．５である。

ゲンタマイシンＢの二価の塩鰭体のホルミル化は、０℃〜４０℃の温度で、好ま しくは、２０℃〜３０℃で行われる。

ゲンタマイシンＢの二価の塩鰭体のホルミル化反応は、有機溶媒中または有機溶 媒の混合物中で行うのが好都合である。この反応で用いることができる有機溶媒 として、双性非プロトン性有機溶媒、例えばジメチルスルホキシド、ジメチルホ ルムアミド、ジメチルアセトアミド等が挙げられる。更に、双性非プロトン性有 機溶媒と、不活性有機溶媒、例えばトルエン、酢酸エチル、１．２−ジメトキシ エタン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、塩化メチレン等との混合物を用 いるのが好都合であることが見出された。好ましい溶媒混合物は、塩化メチレン かまたは酢酸エチルを含むジメチルスルホキシドである。

従来の方法は全て、沈殿剤の使用または二価の金属塩陽イオンを除去する操作を 必要とするが、２−ホルミルメルカプトベンゾチアゾールおよび亜鉛を用いるこ とにより、有機溶媒層中の亜鉛２−メルカプトベンゾチアゾール塩の抽出除去が 可能になる。

水性溶液は、３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢを約９０〜９５％の 収率で含む、生成物を、通常の方法、例えばイオン交換クロマトグラフィーによ って単離し且つ精製する。

３．６゛−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢの１−アミノ基での（Ｓ）−イソ セリン側鎖の導入は、下記の反応スキームにしたがって、ジシクロへキシルカル ボジイミド存在下で活性化試薬を用いてＮ−保護−（Ｓ）−イソセリンの活性エ ステルを現場で生成することによって行われる。

不今明の方法において有用であるＮ−保護−（Ｓ）−イソセリン化合物は、−（ Ｓ）−イソセリンのアミノ基が、ホルミル保護基を除去する条件下で容易に除去 することができ且つ分子の他の部分に引着を及ぼすことがないアシル基で保護さ れているものである。穏やかな塩基性条件下でまたはヒドラジンによって容易に 除去することができるアシル保護基をその方法で用いる。穏やかな塩基性条件下 で容易に除去されるＮ−アシル保護基の例として、ホルミル、トリクロロアセチ ルおよびトリフルオロアセチルが挙げられる。ヒドラジンによって容易に除去さ れるＮ−アシル保護基の例として、フタロイルおよびスクシノイルが挙げられる 。イソセリン化合物に好ましいＮ−アシル保護基はホルミル基である。

本発明の方法において有用であるＮ−保護イソセリン化合物として、Ｎ−ホルミ ル−（Ｓ）−イソセリン、Ｎ−フタロイル−（Ｓ）−イソセリン、Ｎ−）クロロ ロアセチルー（Ｓ）−イソセリンおよびＮ−トリフルオロアセチル−（Ｓ）−イ ソセリンが挙げられる。好ましいＮ−保護イソセリン化合物はＮ−ポルミル−（ Ｓ）−イソセリンである。

Ｎ−保１ｌ−（Ｓ）−イソセリンの活性エステルは、イソセリン化合物と、例え ばＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、イミダ ゾール、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２ ゜３−ジカルボキシイミド等の化合物とを、ジシクロヘキシルカルボジイミドな どのカップリング剤存在下で反応させることによって調製される。

Ｎ−保護−（Ｓ）−イソセリンと３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢ との反応は、溶媒中、０℃〜４０℃の温度、好ましくはおよそ室温で行われる。

本発明の方法で用いることができる溶媒の例として、プロトン性百ｌｌ１ｌ渭媒 、例えば、メタノール、エタノール、グロパノール等のようなアルコール；水性 メタノール、水性エタノール等のような水およびアルコールの混合物：非プロト ン性溶媒、例えばジメチルホルムアミド、ジオキサンおよび塩化メチレン；が拳 げられる。好ましい溶媒は水性メタノールである。

Ｎ−ホルミルイソ七リンと３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢとを反 応させることによって得られる化合物は、化合物１ｖのトリホルミルイ七バミシ 化合物■から下記の反応スキームによる加水分解によって保護基を除去する。

化合物■を脱保護する前に２反応混合物から溶媒を除去する。加水分解による脱 保護は通常の方法であるが、イソセリン側鎖を除去することなくホルミル基を特 異的に除去することは、アミノグリコシドの分野では前例がない、加水分解反応 が室温で一晩中撹拌することによって行われる場合に、優れた収率（８８〜９０ ％）で望ましい生成物が得られることが見出された。得られる加水分解物を酸に よってＰＨ６まで酸性にし且つ単離することによってイセバミシンが得られる。

下記の実施例は、本発明を実施する好ましい態様を例証するものであるが、その 範囲を制限すると解釈されるべきではない、その同等物は本願書を読む当業者に 明らかであり、前記の同等物は本発明の範囲内に包含されると解釈される。実施 例において、ＨＰＬＣとは高速液体クロマトグラフィーを意味し、アンバーライ ト（Ａｍｂｅｒｌ　１ｔｅ）ＩＲＣ−５０はローム・アンド・ハース・カンパニ ー（Ｒｏｈｍ　ａｎｄ　Ｈａａｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ）から入手可能な弱陽イオン 交換樹脂である。

衷施区上 ２−ホルミルメルカプトベンゾ　アゾールの　５００ｍ１の乾燥三つ口丸底フラ スコに、アセトニトリル８０ｍ１．ギ酸５、Ｏｍｌ　（０，１３３モル）および ギ酸ナトリウム１８．１ｇ　（０，２６６モル）を入れた。得られる懸濁液を０ 〜５℃まで冷却し、塩化アセチル１４．Ｏｍｌ　（０，２モル）を、反応混合物 の温度を８°Ｃ未満に尿持しながら徐々に加えた。塩化アセチルの添加を終了し た後、反応混合物を１８〜２０℃まで加温した。

反応の完了を１Ｈ−ＮＭＨによって判断した。酢酸ギ酸無水物を含む不均一混合 物に、アセトニトリル６０ｍ１を加え、続いて２−メルカプトベンゾチアゾール ２０ｇ（０，１０３モル）を加え、そして温度を３２℃まで加温し且つその温度 で保持し、同時に、反応の進行をＨＰＬＣによって１０分間隔で監視した０反応 は、約４％の２−メルカプトベンゾチアゾール（面積％で）が未反応で残音した 場合またはその面積％が生成物の分解によって増加し始める場合に完了したとみ なされた。

次に、反応混合物を氷水２００ｍ１で急冷し且つ２分間撹拌した。沈殿した生成 物を一過し、水（４Ｘ１５０ｍｌ＞で充分に洗浄し、そして固形物の水分含量が ０．０８％未満になるまで真空下で乾燥させて、２−ホルミルメルカプトベンゾ チアゾールが２１．４ｇ　（ＨＰＬＣによる純度９８％、収率８９％）得られ、 ｍ、ｐ、１２５℃〜１３０℃（分解）；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ　３　）　ｗ７ 　、３６〜７．４４　（ｍ、　３Ｈ）　、８．４５〜８．５２　（ｍ、ＩＨ）、 ９．９２　（ｓ、ＩＨ）であった。

寒旌医λ 亘ど止奴豆餘Ｏ製法 ６０〜７０℃まで加温された水２５０ｍ１に、ビバルｉ＄！（トリメチル酢酸） シロ、ｉｇ　（０，５５モル）を加えた０次に、カルボン酸亜鉛３１．２５ｇ（ ０，２５モル）を少量ずつ１０〜１５分間にわたって加えた後、温度を９６〜９ ８℃まで上昇させた１反応混合物を１時間撹拌した後、水浴を用いて混合物を４ ℃まで３０分間冷却し、そして懸濁液を一過した。濾過ゲーキを冷水７５ｍ１で １回および冷アセトン３Ｘ５０ｍｌで洗浄した。得られる生成物をドラフトオー ブン中、６０℃で１６時間乾燥させてピバル酸亜＄９５８ｇ（８７％）を生成し た。

犬旌区ユ １２虹二」辷に主止ｌ配乙ヨさ２虫２旦ジメチルスルホキシド２８５ｍ１および 塩化メチレン２８５ｍ１に、ピバル酸亜鉛３４．０ｇ　（１２７ミリモル）およ びゲンタマイシンＢ（純度９３．１％、３６．７ミリモル）１９ｇを加えた。得 られた懸濁液を室温で１０〜１５分間撹拌して溶液にした。この溶液に、２−ホ ルミルメルカプトベンゾチアゾール１６．０ｇ　（８１゜９ミリモル）を加え、 ５分後に一部分を取出して、モノホルミル／ジホルミルピークの比率を液体クロ マトグラフィーによって分析した。最後の全添加量が１６．９５ｇ　（８６，８ ミリモル）であるように更に少量を２回添加して最終のピーク比率を０．０２に し、それによって完了したと判断した。

反応混合物を２リツトルの分液漏斗に移し、水８００ｍ１を加えた０層を分離し 、水性層を塩化メチレン３０ｍ１部分で再抽出した０次に、水性層をセライトの 小型パッドを介して一過して固体の曇りを除去した。

Ｆ液を水で稀釈して最終容量を２リツトルにし、そのＰＨはこの時点で約６であ った。この水溶液を、不完全なアンモニウムサイクルに調整されたアンバーライ トｒＲｃ−５０１１脂８００ｍ１が入っているカラムに充填しな、生成物を０． ７５Ｎ水酸化アンモニウムで溶離し；生成物を含む画分を集め且つ濃縮して溶液 を生じ、これを液体クロマトグラフィーによって分析し、そして３．６’　−ジ −Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢが１７．９ｇ　（９０，５％）含まれることが 分かった。

質量スペクトルｍ／ｅ（％）（ＦＡＢ／ＧＬＹ−ＴＨＩＯ）　５３９　（１００ ゜Ｍ”＋１）、５１１　（９）、３８０（９）、３５０（４）、１９１　（１０ ）。

１９０　（５）、１６０　（２８）。

ＩＨ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、　Ｄ２０；ｐＨ＝９）ｗｌ、　２５　（ｓ、　３ Ｈ。

Ｃ−４″−ＣＨ）　、２．５７　（ｓ、３Ｈ，Ｎ−ＣＨ５）　、　５．１１　（ ｄ。

Ｊ＝４．０２　Ｈｚ、ＩＨ，アノマー性）、５．３８　（ｄ、Ｊ＝４．０２　Ｈ ｚ。

ＩＨ，７／？−性）、８．１５　（ｓ、ＩＨ，Ｎ−ＣＨｏ）、８．１６　（ｓ、 ＩＨ。

Ｎ−ＣＨｏ）。

”　Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ　、Ｄ　２０　；　Ｐ　Ｈ＝９　）　ｖｖ５１− ３６　（ＣＩ　）　。

４７．８　（Ｃ−３＞、３８．９６　（Ｃ−６′）、６４．５　（Ｃ−３″）。

３７．０１（Ｎ−ＣＨ”）、２２．２２（Ｃ−４″−ＣＨ３）、１６５．４７（ Ｎ−ＣＨＯ）、１６４．７６　（Ｎ−ＣＨＯ）。

寒施区生 Ｎｏ−ジホルミル−（Ｓ　−イソ上１ンの　゛（Ｓ）−イソセリン５０ｇ　（０ ，４７６モル）およびギ１Ｉ１６２．５ｍｌが入りている１リツトルの丸底フラ スコに、新たに調製された酢酸ギ酸無水物溶液率（５当量）を０〜５℃で３０分 間で加えた０反応の完了をＨ’−ＮＭＲによって試験した後（約２時間）、混合 物を真空下４０℃で濃縮して最初の量の半分にした。イン１０パノール２５０ｍ １を徐々に加え、同時に冷却して結晶化をおこなっな、スラリーを０℃で１時間 撹拌した。生成物であるＮ、Ｏ−ジホルミル〜（Ｓ）−イソセリンを一過し且つ イン１０パノールで洗浄した。これによって、Ｎ、Ｏ−ジホルミル−（Ｓ）−イ ソセリン６４ｇが得られ、収率８４％；ｍ、ｐ。

１３９．５°Ｃ〜１４１．５℃；［ａ］Ｄ　：　３８°　（１％、ＭｅＯＨ）で あった。

ＩＨＮＭＲ（Ｄ　２０）　ＶＦ６　、８　（ｄｄ、　Ｉ　Ｈ，Ｊ　＝　１４　、 ６．４−４Ｈｚ　＞　。

３．９１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１４．６．５．５Ｈｚ）、５．３８（ｄｄ、ＬＨ 。

Ｊ＝５．５，４．４Ｈｚ）、８．１５（ｓ、ＩＨ）、８．２７（ｓ、ＩＨ）。

傘酢酸ギ酸無水物は、塩化アセチルを、無水アセトニトリル中、１．２当量のギ 酸ナトリウム〈無水物、超微粉砕）　（ギ酸ナトリウム／ＣＨ３ＣＮの濃度は５ ０％と同程度に高いことがある）に０〜５℃で加えることによって調製された０ 反応は完了するのに２時間を要する。沈殿を一過し、Ｆ液を前記の反応でのよう に用いた。若干の一酸化炭素が、温度に応じてこの混合物から発生する。適度の 安定性が０℃で１か月間観察された。

ス旌区旦 Ｎ−フ　ロイル−Ｓ　−イソ上１ンの　゛（Ｓ）−イソセリン１５．７５ｇ（１ ５０ミリモル）および無水フタル酸２２．２ｇ　（１うＯミリモル）をトルエン ：ジメチルホルムアミド（３：１）６００ｍｌ中で撹拌した懸濁液に、トリエチ ルアミン２．１ｍｌ　（１５ミリモル）を加えた。懸濁液を加熱して還流し、生 じた水をディーン・スターク冷却器を用いて除去した。還流で２時間後にはそれ 以上水は分離されなかった。溶媒を蒸発させて最終容量的１００ｍ１にした０反 応混合物を冷却し、氷水で稀釈し、そして２Ｎ塩酸で酸性にして沈殿が得られた 。生成物を一過し、氷水で洗浄し、そして真空下で乾燥させてＮ−フタロイル− （Ｓ）イソセリン３０．４ｇ　（８６％）’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｗ３ ．７６　（ｄｄ、　ＬＨ，Ｊ＝１３．４６゜７．６９Ｈｚ）、３．８４　（ｄｄ 、ＬＨ，Ｊ＝１３．４６．５．７７Ｈｚ）。

４．３　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝７．６９，５．７７Ｈｚ）、７．７７〜７．８９　 （ｍ。

４Ｈ）。

塞旌泗旦 Ｎ−ト１フル　ロアセ　ルーＳ−イ１セ１ンの　゛メタノール中で撹拌されたナ トリウムメトキシド溶液１１ｍ１（１当量、２４．８％ｗ／ｗ溶液）に２　（Ｓ ）−イソセリン５ｇを加えた。混合物を室温で１５分間、均一溶液かえられるま で撹拌した。トリフルオロ酢酸エチル７ｍ１（１，２５当量）を加えた。添加後 、混合物を３０分間撹拌した０反応の完了を’ＨＮＭＲによって監視した。混合 物を減圧下で濃縮して可能な限り容量を低減させた。残留物に酢酸エチル５０ｍ １を加えた。混合物を０〜５℃まで冷却し、２Ｎ−ＨＣｉを２５ｍ１　（１当量 ）加え、続いて、固体塩化ナトリウム５ｇを加えた。有機層を分離した。水性層 を酢酸エチル５０ｍ１で再抽出した０合わせた有機抽出物を乾燥させ（乾燥硫酸 マグネシウム５ｇ上）、−過し、そして減圧下で濃縮して２０ｍ１にした。それ にヘプタン５０ｍ１を水浴中で３０分間撹拌しながら加えた。生成物を一過し且 つ乾燥させてＮｈトリルオロアセチル−（Ｓ）−イソセリン８．６８ｇ　（９３ ％）を生成し；ｍ、ｐ、１４２〜１４３℃；４．５３　（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝５．４ ８　Ｈｚ）であった。

天旌烈ヱ 歪欠バ亙２ンＱ製法 下記の方法でイセバミシンの製法を例証する。

イソセリン２０ｇ　（１２４，２ミリモル）をメタノール（８５ｍｌ　）および ピリジン（１５ｍｌ、１．５当量）の混合物中、室温で１４〜１６時間撹拌する ことによって調製した１反応の完了を’Ｈ−ＮＭＲによって判断した。

別のフラスコで、３．６′−・ジホルミルゲンタマイシンＢの水性濃厚物２０ｇ （４，４２４ｇ活性、８．２ミリモル）およびＩＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾ ール−水和物１．２６ｇ　（８，２６ミリモル）をメタノール４０ｍ１中に溶解 させた。撹拌された混合物に対して、前記のＮ−ホルミル−（Ｓ）−イソセリン のメタノール中溶液（２２，２ｍｌ、２４．４ミリモル、３当量）およびジシク ロへキシルカルボジイミド（５ｇ、２４．３ミリモル、３当量）のメタノール２ ０ｍ１中溶液を４０分間にわたワて同時に加えた。添加を終了した後、混合物を １５分間撹拌した０反応の進行をＨＰＬＣかまたは薄層クロマトグラフィーによ って監視した０次に、溶媒を減圧下で除去し、生成物であるトリホルミルイセバ ミシンを、２Ｎ−ＮａＯＨ９０ｍｌと一緒に室温で１６時間撹拌することによっ て加水分解した０反応混合物を酸でＰＨ６まで中和し、−過し、そしてｒ液を稀 釈して正確に容量１０１００Ｏにした。この溶液の外部標準ＨＰＬＣ検定によリ イセバミシンの収率８９％（４，１７ｇ、７．３ミリモル）が示された。

方法旦 ３．６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢを１．１５６ｇ（純度９６．６％ 、２．０７ミリモル）、Ｎ−フタロイルイソセリン８００ｍｇ　＜１．７当量） およびＮ−ヒドロキシベンズトリアゾール−水和物３６５ｍｇ　（１，２当量） をメタノール４０ｍＩ中に溶解させることによって溶液を調製した。この溶液に 対して、ジシクロへキシルカルボジイミド７００ｍｇ　（１，７当量）を加えた ０反応を室温で１時間撹拌し、Ｎ−フタロイル−（Ｓ）−イソセリン１６０ｍｇ およびジシクロへキシルカルボジイミド１４０ｍｇを加え、そして反応を室温で 約３時間撹拌した０反応の進行を薄層クロマトグラフィーによって監視した。溶 媒を蒸発によって除去し、残留物をエタノール５０ｍ１および水５ｍｌ中に入れ た。

得られる混合物をヒドラジン水和物６．０ｍｌ　（８５％）で処理することによ って保護基を除去した０反応を窒素下、８５〜９０℃で１４時間加熱した０反応 の外部標準ＨＰＬＣ検定によグ、イセバミシンの収率８９％（１，０５ｇ、１． ８５ミリモル）が示された。

立法ｑ ３．６′−ジホルミルゲンタマイシンＢの水性濃厚物４８．９ｇ　（８，４５ｇ 活性、１５．７ミリモル）に対して、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール− 水和物２．４ｇ　（１５，７ミリモル）を加え、続いてメタノール８０ｍ１を加 えた。撹拌された混合物に対して、メタノール４０ｍ１中、Ｎ−）リフルオロア セチル−（Ｓ）−イソセリン９．５ｇ　（４７，３ミリモル、３当量）およびメ タノール４０ｍ１中、ジシクロへキシルカルボジイミド９．７ｇ　（４７，１ミ リモル、３当量）を４０分間にわたって同時に加えた。添加を終了した後、混合 物を１５分間撹拌した０反応の進行をＨＰＬＣかまたは薄層クロマトグラフィー によって監視した１次に、溶媒を減圧下で除去し、生成物を、２Ｎ−ＮａＯＨ１ ７０ｍｌと一緒に室温で１６時間撹拌することによって加水分解した０反応混合 物を酸でＰＨ６まで中和し、−過し、そしてｒ液を稀釈して正確に容量１０１０ ０Ｏにした。溶液の外部標準ＨＰＬＣ検定により、イセバミシンの収率８８％（ ７，８４ｇ、１３．８ミリモル）が示された。

手続補正書

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）ゲンクマイシンＢの二価の塩錯体と、ゲンタマイシンＢの３，６′− アミノ基においてホルミル保護基を選択的に導入することができる２−ホルミル メルカプトベンゾチアゾールとを反応させて３，６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタ マイシンＢを生成し； （ｂ）３，６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢの１−アミノ基をＮ−保護 （Ｓ）−イソセリン化合物でアシル化し；（ｃ）保護基を全部除去し； （ｄ）イセパミシンを単離すること； から成る、イセパミシンの調製方法。
2. ２．ゲンタマイシンＢの二価の塩錯体がコバルト（ＩＩ）または亜鉛（ＩＩ）で ある請求項１に記載の方法。
3. ３．亜鉛塩がピバル酸亜鉛から誘導される請求項１または２に記載の方法。
4. ４．二価の塩錯体をゲンタマイシンＢの１モル当り約１．５〜４．５モルの亜鉛 （ＩＩ）から生成する請求項１〜３のいずれが１項に記載の方法。
5. ５．２−ホルミルメルカプトベンゾチアゾール対ゲンタマイシンＢの二価の塩錯 体のモル量が約２〜３対１、好ましくは２．５対１である請求項１〜４のいずれ か１項に記載の方法。
6. ６．段階（ｂ）のＮ−保護−（Ｓ）−イソセリン化合物が、Ｎ−ホルミル−（Ｓ ）−イソセリン、Ｎ−フタロイル−（Ｓ）−イソセリンまたはＮ−トリフルオロ アセチル−（Ｓ）−イソセリンである請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法 。
7. ７．段階（ｂ）が、Ｎ−保護−（Ｓ）−イソセリン化合物の活性エステルの現場 での生成によって行われる請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
8. ８．段階（ｂ）のＮ−保護−（Ｓ）−イソセリン化合物を、ジシクロヘキシルカ ルボジイミド存在下で活性化試薬と反応させる請求項１〜７のいずれか１項に記 載の方法。
9. ９．活性化試薬が、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、イミダゾール、Ｎ−ヒ ドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドまたはＮ−ヒドロキシ− ５−ノルボルネン−２，３−ジカルボシイミドである請求項１〜８のいずれか１ 項に記載の方法。
10. １０．保護基を塩基性加水分解によって除去する請求項１〜９のいずれか１項に 記載の方法。
11. １１．構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する３，６′−ジ−Ｎ−ホルミルゲンタマイシンＢ化合物。
12. １２．構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＲはＨ、ＣＣｌ３またはＣＦ３であり且つＲ′はＨである；またはＲお よびＲ′が一緒にフタロイル残基のイミド環を形成している）を有する化合物。
13. １３．ＲがＨであり且つＲ′がＨである請求項１２に記載の化合物。
14. １４．Ｎ，Ｏ−ジホルミル−（Ｓ）−イソセリン化合物。
15. １５．Ｎ−ホルミル−（Ｓ）−イソセリン化合物。
16. １６．２−ホルミルメルカプトべンゾチアゾール化合物。