JPH0417956B2 - - Google Patents

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【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明は二環式カテコール誘導体及びその製造
法に関するものである。 （発明が解決しようとする問題点および手段） 本発明は一般式（）および（） （式中、R₁およびR₂はそれぞれ水素原子または
メチル基を表わし、R₃はハロゲン原子またはト
リフルオロメチル基で置換されてもよいフエニル
基を表わし、そしてＺはカルボニル基、ヒドロキ
シメチレン基、メチレン基、カルボニルメチレン
基、ヒドロキシエチレン基もしくはエチレン基を
表わし、カルボニルメチレン基およびヒドロキシ
エチレン基の場合の酸素一炭素結合は環の縮合に
伴なう炭素原子に隣接する炭素原子を含有する）
で示される二環式カテコール誘導体を提供するも
のである。 前記一般式（）および（）の化合物はリポ
キシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼの阻害
剤である。該化合物は非ステロイド系の抗炎症
剤、抗血栓剤、抗アレルギー剤、抗貧血剤および
抗アナフイラキシー剤として人間の治療に使用さ
れる。 さらに本発明は次式（） （式中、R₁およびR₂は前記の意味を有する）の
化合物（この化合物はジユシウス リービツヒス
アンナーレン ヒミーエ（JUSIUS LIEBIGS
ANN.CHEM）第468巻第162頁、1929年の方法
から誘導された方法に従つて芳香環をスルホクロ
ル化し、次いで発生期の水素による還元（クレメ
ンゼン反応）によつて合成される）を次式（） （式中、R₃は前記の意味を有する）の適当に置
換されたプロピオン酸または酪酸（またはそれら
のエステルもしくは塩）と反応させることからな
る前記一般式（）および（）の化合物の製造
法を提供するものである。 アルカリ条件ではこの方法は次式（） の化合物を与える。この化合物は無水リン酸、ポ
リリン酸またはそのエステル、硫酸、クロロスル
ホン酸および他のルイス酸の如き脱水剤によつて
環化される。 前記式（）の化合物については、製造方法は
K.W.BENTLEYおよびW.I.RUSHVOETHの英
国特許第1428110号明細書に従つて式（）の化
合物をγ−R₃置換γ−ブチロラクトン（） と反応させ次式（） の化合物を得、次いでカルボキシル基の処で環化
させた後に所望の化合物（）を生起することか
らなる。 Ｚがメチレン基、エチレン基、ヒドロキシメチ
レン基またはヒドロキシエチレン基である前記化
合物（）および（）は通常の還元方法によつ
て得られる。 前記のカルボニル基はH.NAKAZUMI、T.
VEYAMAおよびK.KITAOのジヤーナルオブ
ヘテロサイクリツク ケミストリー（J.OF
HETEROCYCLIC CHEMISTRY）第21巻第
193頁、1984年の方法に従つて化学量論量の塩化
アルミニウムおよび水素化リチウムアルミニウム
で処理することによりまたはヒドラジンを使用す
るWOLL−KISHNER−HUANG MINLONの
方法によつてメチレン基に、あるいはV.J.
TRAYNELISおよびR.F.LOVEのジヤーナル
オブ オーガニツクケミストリー（J.Org.
Chem.）第26巻第2728頁1961年に従つて水素化ホ
ウ素ナトリウム還元によつてヒドロキシメチレン
基に転化し得る。 （実施例） 以下の実施例により本発明を説明する。 実施例 １ ６，７−ジヒドロキシ−２−フエニル−４−オ
キソ−チアクロメンの製造（：R₁＝R₂＝Ｈ、
Ｚ＝CO、R₃＝C₆H₅） 磁気撹拌機を備えた50mlの二首フラスコに入れ
た濃硫酸10.5mlにβ−（３，４−ジヒドロキシフ
エニルチオ）ケイ皮酸５ｇ（0.017モル）を少量
ずつ加えた。反応混合物を氷で冷却し、得られた
懸濁液を乾燥し、次いでベンゼンで洗浄した。 加温エタノールから再結晶すると橙色の粉末を
得た（収率13％）。この化合物は融点（トツトリ
法）が250℃以上であつた。その同定および構造
はPMRおよび元素微量分析によつて確認した。 元素微量分析結果 Ｃ Ｈ 計算値(%) 66.65 3.73 実測値(%) 66.71 3.81 実施例 ２ ６，７−ジヒドロキシ−２−（ｏ−トリフルオ
ロメチル−フエニル）−４−オキソ−チアクロ
メンの製造（：R₁＝R₂＝Ｈ、Ｚ＝CO、R₃＝
ｏ−CF₃−C₆H₄） ゆるやかな窒素気流下、磁気撹拌機を備えた50
mlの三ツ首フラスコに入れた無水クロロホルム15
mlにｏ−トリフルオロメチル−β−（３，４−ジ
ヒドロキシ−フエニルチオ）ケイ皮酸１ｇ
（0.028モル）を溶解した。これに無水クロロホル
ム１ml中のエチルポリホスフエート3.25ｇ
（0.0075モル）の溶液を20℃で加えた。該混合物
は２時間還流させた。反応混合物を氷で冷却し、
次いでアンモニアでアルカリ性にした。抽出後、
有機層を水で洗浄した。有機溶媒を蒸発させると
橙色のゴム状物を得、これをジクロロメタンで溶
出させてシリカゲルクロマトグラフイーによつて
精製した（収率12％）。この化合物は131℃（トツ
トリ法）で溶融する固体である。その同定および
構造は¹³CNMRおよび元素微量分析によつて確
認した。 元素微量分析結果 Ｃ Ｈ 計算値(%) 56.80 2.70 実測値(%) 56.64 2.69 実施例 ３ ６，７−ジメトキシ−２−フエニル−４−オキ
ソ−チアクロメンの製造（：R₁＝R₂＝CH₃、
Ｚ＝CO、R₃＝C₆H₅） ｏ−トリフルオロメチル−β−（３，４−ジヒ
ドロキシフエニルチオ）ケイ皮酸の代わりにβ−
（３，４−ジメトキシフエニルチオ）ケイ皮酸を
使用する以外は実施例２に記載したように操作し
て、標題化合物を収率15％で得た。それは212℃
（トツトリ法）で溶融する黄色固体である。その
同定および構造は¹³CNMRおよび元素微量分析
によつて確認した。 元素微量分析結果 Ｃ Ｈ 計算値(%) 68.44 4.73 実測値(%) 68.44 4.74 実施例 ４ ６，７−ジメトキシ−２−（ｏ−トリフルオロ
メチル−フエニル）−４−オキソ−チアクロメ
ンの製造（：R₁＝R₂＝CH₃、Ｚ＝CO、R₃＝
ｏ−CF₃−C₆H₄） ｏ−トリフルオロメチル−β−（３，４−ジヒ
ドロキシフエニルチオ）ケイ皮酸の代りにｏ−ト
リフルオロメチル−β−（３，４−ジメトキシフ
エニルチオ）ケイ皮酸を使用する以外は実施例２
に記載したように操作して、標題化合物を収率50
％で得た。それは194℃で溶融する白色固体であ
る。その同定および構造は¹³CNMRおよび元素
微量分析により確認した。 元素微量分析結果 Ｃ Ｈ 計算値(%) 59.01 3.57 実測値(%) 58.84 3.56 実施例 ５ ７，８−ジメトキシ−２−フエニル−５−オキ
ソ−ベンゾ〔ｂ〕チエパンの製造（：R₁＝
R₂＝CH₃、Ｚ＝CH₂・CO、R₃＝C₆H₅） ｏ−トリフルオロメチル−β−（３，４−ジヒ
ドロキシフエニルチオ）ケイ皮酸の代りに４−フ
エニル−４−（３，４−ジメトキシフエニルチオ）
酪酸を使用する以外は実施例２に記載したように
操作して、標題化合物を収率27％で得た。ジエチ
ルエーテルから傾シヤすることによつて精製し
た。この化合物は135℃（トツトリ法）で溶融す
る白色固体である。その同定および構造は
¹³CNMRおよび元素微量分析によつて確認した。 元素微量分析結果 Ｃ Ｈ 計算値(%) 68.76 5.77 実測値(%) 68.63 5.84 実施例 ６ ６，７−ジメトキシ−２−（ｏ−トリフルオロ
メチルフエニル）−4H−チアクロメンの製造
（：R₁＝R₂＝CH₃、Ｚ＝CH₂、R₃＝ｏ−CF₃
−C₆H₄） ゆるやかな窒素気流下磁気撹拌機を備えた100
mlの３ツ首フラスコに入れた無水テトラヒドロフ
ラン32mlに室温で水素化リチウムアルミニウム
204.9mg（5.4ミリモル）および塩化アルミニウム
720mg（5.6ミリモル）を溶解した。これに無水テ
トラヒドロフラン９mlに溶かし且つ実施例４で記
載した如く調製した６，７−ジメトキシ−２−
（ｏ−トリフルオロメチル−フエニル）−４−オキ
ソ−チアクロメン１ｇ（2.7ミリモル）の溶液を
25℃で加えた。反応媒質は20〜25℃で２時間撹拌
し、次いで水0.54ｇおよび濃硫酸1.35mlで加水分
解した。得られた混合物を過し、次いでジエチ
ルエーテルで抽出した。有機溶媒を蒸発させると
94℃（トツトリ法）で溶融する赤色粉末を得た
（収率20％）。この化合物の同定および構造は
¹³CNMRおよび元素微量分析によつて確認した。 元素微量分析結果 Ｃ Ｈ 計算値(%) 61.36 4.29 実測値(%) 61.52 4.35 薬理試験 リポキシゲナーゼ（LOs）はアラキドン酸
（AA）をヒドロキシ誘導体とロイコトリエンと
に変える。これらの生成物は炎症および過敏症の
疾病において潜在的に重要な役割をもつ強力な薬
剤である。幾つかのLOsはAAに作用し、主とし
て 5LOはロイコトリエンを生起し、 12LOは12−ヒドロペルオキシエイコサテトシ
エン酸（12HPETE）および他の12ヒドロキシ化
合物を生起し、 15LOは15HPETEおよび他の15ヒドロキシ化
合物を生起し、 および（より低い程度で）8LOならびに11LO
はAAに作用する。 LO使用経路の最も重要な生成物は５−LOによ
つて生成されるロイコトリエン類である。喘息な
らびにアナフイラキシ−反応におけるSRS−Ａの
示唆された重要性およびSRS−Ａがロイコトリエ
ン類に属するという発見はこれらの化合物の生物
学的有用性の研究における興味を刺激した。 LTC₄およびLTD₄（0.1〜1nM）がヒスタミン
に対するSRS−Ａ関連の生物学的活性を決定する
ために使用されてきていたのでLTC₄および
LTD₄はモルモツト回腸の濃度依存性の収縮を引
き起こした。モル基準でヒスタミンはLTC₄より
も200倍活性が低く、これはSRS−Ａの１単位
（6ng Hist、HCl）がほぼ0.2ピコモルのLTC₄に
相当することを示唆していることが見出された。 LTC₄およびLTD₄はまたモルモツトの皮膚に
おける血管透過性を亢進させそして先にSRS−Ａ
について先に観察されたのと同一の平滑筋刺激性
を有した。LTC₄およびLTD₄は心臓または肺動
脈の微細循環（microcirculation）において重大
な役割を果たす。 LTB₄は後毛細血管静脈の内皮に白血球付着を
引きおこすことによつて、および強力な走化性作
用によつて白血球遊走に影響を及ぼす。これ故、
ロイコトリエン類は直接の過敏症反応および急性
炎症反応のような宿主防衛機序において重要なメ
ジエーターである。更に幾つかのシクロオキシゲ
ナーゼ（CO）生成物とロイコトリエン類との作
用は補完的である。すなわち、血漿漏泄を引き起
こすロイコトリエン類と血管拡張剤PGE2および
PGI2との間の相乗作用は浮腫の生成において重
要であるかもしれない。さらに、気管支狭窄にロ
イコトリエン類とトロンボキサン（TxA₂）との
間の相乗作用がきわめて重要であるに違いない。
LTC₄およびLTD₄はモルモツトの肺にTxA₂を放
出させる。TxA₂は気道の強力な収縮剤であるの
で、TxA₂の放出はアレルギー感染の気管支痙攣
に寄与しうる。さらに、若干の結果はPAF−
Acetherの幾つかの作用がLTB₄によつて媒介さ
れ得ることを証明していると思われる。非ステロ
イド抗炎症剤（AINS）はアナフイラキシーを防
止しない。逆にそれらはLOs使用経路にAAを流
通させるので、過敏症反応を増大させる。コルチ
コステロイド（CS）はホスホリパーゼA2のペプ
チド阻害剤であるリポモジユリン
（lipomodulin）の合成を促進することによつて
使用するプリカーサーの放出を防止する。AAの
放出を阻害することによつて、COはCO生成物の
みならずLOs生成物およびロイコトリエンの生成
をも防止する。 LOs体系について増加した知識によると特に喘
息、アレルギー、心臓アナフイラキシー、脳貧血
および炎症の如き直接過敏症反応に関連した病気
に新規でより多くの治療剤を開発する新規な可能
性を示していると思われる。そのような医薬は最
終生成物の拮抗作用に基づくかまたはキー中間体
LTA₄の生成および次段の変形に関連する酵素の
阻害に基づいているかもしれない。ロイコトリエ
ン合成経路とシクロオキシゲナーゼ合成経路に関
する二重作用もまた重要であるかもしれない。 (1) 大豆リポキシゲナーゼの有効な阻害剤として
７種類の化合物の試験管内選抜試験 ａ 序論 モノヒドロキシ−エイコサテトラエン酸類
（HETEs）は種々の哺乳類の細胞および組織
におけるアラキドン酸（AA）の定量的に有
意な程の代謝物である。例えば、12−Ｌ−
HETEは血小板から確認され；５−Ｄ−
HETEはラビツトのPMNから確認され；12
−Ｌ−HETE、11−HETEおよび15−
HETEはモルモツトの肺およびラツト肥満
細胞から確認され；５−HETE、８−
HETE、９−HETE、11−HETEおよび12
−HETEの人間の好中球から確認された。
HETEsの分布は種に依存しそしてリポキシ
ゲナーゼによつて酵素的に触媒作用された
AA代謝を表わしている。これらの生成物の
可能な生物学的な役割はまだ完全には明らか
にされていない。しかしながら、人間の血小
板から得られた12−HETEは人間の多形核
白血球の走化活性を示した（Siegel、M.Iら
Proc.Natl.Acad.Sci、77、308−312（1980）〕
５−HPETE（ヒドロペルオキシ酸）は、直
接過敏症の症状を媒介する非常に強力な平活
筋収縮剤である遅反応性物質の前駆体であ
る。すなわち、リポキシゲナーゼの阻害は特
に抗アレルギー剤または抗炎症剤の選抜試験
を行う場合に有益であると思われる。哺乳動
物および植物（大豆）リポキシゲナーゼは共
通して多くの生化学的性質を有し、植物酵素
の大部分の阻害剤をまた血液血小板または白
血球から由来するリポキシゲナーゼを阻害す
ることが証明された〔Baumann、J.らのプ
ロスタグランジン（Prostaglandins）第20巻
第627−639頁、1980年〕。大豆のリポキシゲ
ナーゼは15−HPETEを専ら生成せしめ〔C.
P.A.VanOsらのBiochim.et Biophys.Acta、
663、177−193（1981）．〕そして血小板リポキ
シゲナーゼよりも10倍も敏感であることが証
明された〔Wallach、D.P.らのBiochim.and
BiophysActa、663、361−372（1981）〕。加
えるに15−HETEはトロンボキサンA₂の生
成を間接的に促進する血小板リポキシゲナー
ゼ（12−HETE）の強力で特異な阻害剤で
ある〔Vanderhoek、J.らのジヤーナルオブ
バイオロジカルケミストリー（j.Biolog.
Chem.）第225巻第5996−5998頁、1980年〕。
15−ヒドロペルオキシ類縁体は豚の大動脈プ
ロスタサイクリンシンテターゼ活性を抑制す
ることもまた報告されている〔Gryglewski、
R.J.らのプロスタグランジン
（Prostaglandins）第12巻、第685−713頁、
1976年〕この阻害作用は破壊的な酸化種の生
成恐らくは水酸基または類似活性種の生成に
よつて発揮される〔Weiss、S.J.らのブラツ
ド（Blood）第53巻、第1191頁、1979年〕。 ｂ 使用物質および試験方法 (b1) 分光光度による検定 分光光度による検定法はCoreyE.J.らに
よつて酵素活性を測定するために開発され
た〔ジヤーナルオブジアメリカンケミカル
ソサエテイー（J.Amer.Chem.Soc.）第104
巻、第1750−1752頁、1982年〕。1.8mlの最
終容量に通気硼砂緩衝液（PH＝9.00）
0.2Mを大豆リポキシゲナーゼ500単位と混
合した。試験するときに、阻害剤を最終濃
度10^-3M〜10^-8Mで0.6mlで加え続いて室
温で10分間予備反応させた。反応はアラキ
ドン酸10^-4Mによつて開始した。室温で90
分間の反応の後、15−HPETEを236mmで
吸光度測定によつて定量した。 (b2) 結果の表示 この方法は既知のリポキシゲナーゼ阻害
剤で確認した。各々の供試物質に対し、使
用した波長での化合物の吸収を考慮するた
めに対照を煮沸リポキシゲナーゼに包含さ
せた。酵素活性の百分率は各々の濃度につ
いて計算し、酵素活性の50％を阻害するた
めに必要とされる物質の量を濃度（Ｍ）／
阻害率（％）の対数を描く一組のデータ点
についての直線的な折返しによつて計算し
た。

【表】 (2) スーパーオキシドアニオンラジカル（O₂）
の試験管内有効阻害 ａ 序論 炎症の進行は内皮細胞障壁の完全性の減
少、血管透過性の変化および活性化合物群
（そのうちの若干はフリーラジカルである）
の細胞外空間への次段の放出ならびに発生を
伴なう多形核白血球（PMN）の如き食細胞
の活性化によつて特徴づけられる。炎症の他
の特徴に対するこれらのフリーラジカル種の
関係は完全には解明されていない。PMNの
如き活性化炎症細胞の呼吸による破裂の本質
的要素はスーパーオキシドアニオンラジカル
O₂ ^-へのO₂の１価の酵素還元である。発生し
たO₂ ^-の大部分は任意の不均化がH₂O₂とO₂
の生成を同時に伴なつて生起し得る細胞外空
間に放出される。細胞外空間にO₂ ^-、H₂O₂
およびキレート金属触媒が同時に存在すると
水酸基（OH）およびシングレツト酵素
（¹O₂）のようなより活性化された酵素の由
来の分子を更に生じることができる。スーパ
ーオキシドジスムターゼ（SOD）はO₂ ^-の酵
素スカベンジヤーとして機能する〔McCord
らのジヤーナルオブバイオロジカルケミスト
リー（J.Biol Chem.）第244巻第6049−6055
頁、1969年〕。これに対し１−メチオニンお
よびDMSOは両方ともOHスカベンジヤーで
ある。 基質（Substrate）−キサンチンオキシダー
ゼフリーラジカル生成の試験的機構 概要１ フリーラジカル発生について基質
（Substrate）−キサンチンオキシダーゼモデ
ルは集中的に研究され〔Fridowich、I.のジ
ヤーナルオブバイオロジカルケミストリー
（J.Biol.Chem.）第215巻第4053−4057頁、
1970年〕、試験管内でも生体内でもフリーラ
ジカルを産生するために採用されて来た
〔Chmori、H.らのバイオケミカルフアーマ
コロジー（Biochem.Pharmacol.）第27巻、
第1397−1400頁、1978年〕。 O₂ ^-を特異的に検出および監視するための
便利で鋭敏な分光光度法による検定はフエリ
シトクロムＣ（Cyt c³⁺）を還元するこのフリ
ーラジカルの性質に基づいている。重炭酸塩
緩衝液中にヒポキサンチン及びCyt c³⁺と共
にキサンチンオキシダーゼが存在するとO₂ ^-
を発生しこれは最初CytC³⁺をCytC²⁺に還元
し〔Del Maestro、R.F.のミクロバスキユラ
ーリサーチ（Microvascular Res.）第22巻、
第255−270頁、1981年〕次いでOHにより若
干のCytC²⁺を再酸化する〔Fong、K.らの
Chem.Biol.Interact.15、77−89（1976）〕。 過酸化水素は分子状酸素の２電子還元によ
つてまたはO₂ ^-の不均化によつて生成する。
カタラーゼ（CAT）はH₂O₂をH₂Oに還元す
る。 (b) 使用物質および方法 スーパーオキシドアニオンラジカルO₂ ^-の
発生 次の方法はDel Maestro、R.F.、J.Bjork
およびK.E.Arforsによつて記載された方法
〔ミクロバスキユラーリサーチ
（Microvascular Res.）第22巻、第239−254
頁、1981年〕と同じである。すなわちシトク
ロムC³⁺（CytC³⁺）の還元は重炭酸塩緩衝液
PH＝7.35（0.132MNacl、4.7×10^-3MKCl、２
×10^-3MCaCl₂、1.2×10^-3M MgSO₄、0.018M NaHCO₃）中に入れた
ヒポキサンチン0.96ｍＭ、CytC³⁺5×10^-5M
から成る操作系で検定した。反応は0.07単
位／mlの濃度でキサンチンオキシダーゼの添
加によつて開始した。550mmでの吸光度の増
加を温度調節した分光光度測定セルで４分間
毎分毎に37℃で監視した。 各々の供試化合物はキサンチンオキシダー
ゼの添加前に加えた。活性単位は0.001単
位／分の変化として定義した。酵素活性の百
分率は各々の供試化合物の濃度について計算
し、そして酵素の50％阻害（IC₅₀）に必要と
される物質の量は濃度Ｍ／阻害率％の対数を
示す一組のデータ点について直線状の折返し
によつて計算した。

【表】 (3) 人の血小板ミクロゾームにおけるアラキドン
酸カスケード代謝に関する化合物の試験管内選
抜試験 ａ 使用物質および試験方法 酵素検定はP.Ho、P.WaltersおよびH.
Sullivanの方法〔プロスタグランジン
（Prostaglandins）第12巻、第951頁、1976
年〕に従つてシラン化ガラス容器で行なつ
た。トリスHCl緩衝液（PH＝7.9）50ｍＭ、
２−トリプトツアン５ｍＭ、メトヘモグロビ
ン2M、ミクロソマール粉末0.2mgおよび0.2
mlの総容量での試験化合物を含む反応混合物
を37℃で５分間反応させてから20μM¹⁴Cアラ
キドン酸（0.08μCI）10μを添加した。５分
間反応後、反応は1Mクエン酸10μの添加
によつて終結した。 該混合物は無水ジエチルエーテル0.5mlで
４回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。残
渣はエーテル約40μに再懸濁し、シリカゲ
ル板でのクトマトグラフイーに供した。溶離
液系はジエチルエーテル／メタノール／酢酸
（90：１：２）から成る。RF値はアラキドン
酸について測定した。薄層クロマトグラフイ
ー板（TLC）は約24時間LKBウルトラフイ
ルムに暴露した。スポツトの部分同定は同一
溶媒系での流走標準物（PGA₂、PGB₂、
PGE₂、PGF_2c、PXB₂、アラキドン酸）によ
つて行つた。定量結果はHewlett
Pockard3309Aインテグレーターに接触した
伝送密度計（EC Apparatus910）により展
開膜を走査する（scanning）ことによつて
得られた。イミダゾールおよびインドメタシ
ンをそれぞれトロンボキサンシンテターゼお
よびシクロヘキサゲナーゼを特異的に阻害す
る陽性標準品として用いた。 ｂ 人の血小板ミクロゾームにおけるシクロオ
キシゲナーゼ阻害率

【表】 シクロオキシゲナーゼの物質の活性は
PGE₂およびTXB₂に対応する２スポツトに
よつて定量される（PGE₂／TXB₂比）。 (4) 雄羊精嚢小胞ミクロゾームにおけるプロスタ
グランジンシンテターゼの試験管内阻止試験 ａ 使用物質および試験方法 改良検定法がBaumannら〔Naunyn−
Schmiede−berg′s Arch Pharm.、307、73
（1979）．〕及びTakeguchi Ｃら〔バイオケミ
ストリー（Biochem）第10巻第2372頁、
1971年〕の発表した方法に基づいて工夫され
た。酵素放射線検定をシラン化ガラス容器で
行つた。還元グルタチオン（GSH）１ｍＭ
の存在下にトリスHCl緩衝液（PH＝0.3）50
ｍＭ並びにヒドロキノン0.55ｍＭのみならず
還元グルタチオン（GSH）１ｍＭ、試験化
合物および総容量0.2mlの雄羊精嚢小胞ミク
ロゾーム粉末50μｇを含む反応混合物を37℃
で５分間反応させてから¹⁴Cアラキドン酸
10^-6M（0.08μCI）の10μを添加した。時々
振盪しながら30分間反応後、反応はクエン酸
1Mの10μを添加して終結させた。 混合物は無水ジエチルエーテル0.5mlで４
回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。残渣
はエーテル約40μに再懸濁しシリカゲル板
でのクロマトグラフイーに供した。溶離液系
はジエチルエーテル／メタノール／酢酸
（45；１；２）から成る。RF値はアラキドン
酸について測定した。薄層クロマトグラフイ
ー板は、約20時間LKBウルトラフイルムで
さらした。スポツトの仮同定は同一溶媒系で
の流走標準品（PGE₁、PGE₂、PGF_1a、
PGF_2a、PGA₁、PGA₂、PGB₁、PGB₂）に
よつて行つた。定量結果は密度計によつて得
られた。

【表】 (5) キサンチンオキシダーゼの有効な阻害剤とし
ての化合物の試験管内選抜試験 ａ 使用物質および試験方法 キサンチンオキシダーゼ活性は分光光度法
により尿酸生成を測定するH.M.Kalkerの方
法〔ジヤーナルオブバイオロジカルケミスト
リー（J.Biol.Chem.）第167巻、第429−443
頁、1947年〕によつて測定した。 分光光度測定吸収管（クヴエツト）にキサ
ンチンオキシダーゼを最終濃度0.01単位／ml
で加え、次いでリン酸塩緩衝液（PH＝7.4）
0.05Mまたは阻害剤を加えた。反応は最終濃
度５×10^-5Mでキサンチンの添加によつて開
始させた。尿酸の放出は２分間30秒毎に295
mmで監視した（直線相）。活性単位は0.001単
位／分の変化として定義した。酵素活性の百
分率は各々の供試化合物の濃度について計算
し、そして酵素の50％を阻害する（IC₅₀）た
めに必要とされる物質量を阻害率（％）の関
数として濃度Ｍのlogを記載する一組のデー
タ点について直線状の折返しによつて計算し
た。

【表】 (6) 人の血球リポキシゲナーゼ（LO）の阻害 (a) ５−および12−リポキシゲナーゼの人の多
核白血球に対する阻害 実験No.１の操作方法 １ 37℃で20分間阻害剤の存在下でCa²⁺2ｍ
ＭおよびMg²⁺0.5ｍＭと共に人の白血球15
×10⁶個／mlの反応 ２ ４分間イオノフオア（A23187）1μｇ／
mlで刺激 ３ メタノール１容量で反応停止 ４ RP−HPLC、カラム18、5μｍによる分
析 ５ ピーク高さの測定および内部標準品
（PGB₂）との比較

【表】 (b) ５−、12−および15−リポキシゲナーゼの
人の多核白血球に対する阻止 実験No.２の操作方法 １ 37℃で20分間阻害剤と共に人白血球11×
10⁶個／mlの反応（Ca²⁺2ｍＭおよび
Mg²⁺0.5ｍＭ） ２ ４分間アラキドン酸10μｇ／mlおよびイ
オノフオア（A23187）1μｇ／mlで刺激 ３ メタノール１容量で反応停止およびRP
−HPLCによる分析 ４ ピーク高さの測定および内部標準品
（PGB₂）との比較

【表】 考 察 前記の３化合物による15−リポキシゲナーゼの
刺激は10^-6M〜３×10^-6Mの濃度で認められる
が、５−リポキシゲナーゼはこれらの濃度で阻害
される。 実験No.１で白血球がイオノフオア単独によつて
刺激されたが、実験No.２では、白血球細胞がイオ
ノフオアとアラキドン酸とによつて刺激されたこ
とが注目されるであろう。アラキドン酸エキワゲ
ンが存在すると阻害剤のID₅₀を10倍だけ増加さ
せ、一方アラキドン酸を添加すると通常イオノフ
オア単独で刺激された白血球には認められない15
−リポキシゲナーゼの活性を測定し得る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の一般式（）又は（）： （式中、R₁およびR₂はそれぞれ水素原子または
   メチル基を表わし、R₃はハロゲン原子またはト
   リフルオロメチル基で置換されてもよいフエニル
   基を表わし、そしてＺはカルボニル基、ヒドロキ
   シメチレン基、メチレン基、カルボニルメチレン
   基、ヒドロキシエチレン基もしくはエチレン基を
   表わしカルボニルメチレン基およびヒドロキシエ
   チレン基の場合の酸素一炭素結合は環縮合に伴な
   う炭素原子に隣接する炭素原子を含有する）で示
   される二環式カテコール誘導体。 ２ 次式（）： （式中、R₁およびR₂は後記の意味を有する）の
   化合物を次式（） （式中、R₃は後記の意味を表わす） の適当に置換されたプロピオン酸または酪酸（ま
   たはそれらのエステルもしくは塩）と反応させる
   ことからなる次の一般式（）又は（）： （式中、R₁およびR₂はそれぞれ水素原子または
   メチル基を表わし、R₃はハロゲン原子またはト
   リフルオロメチル基で置換されてもよいフエニル
   基を表わし、そしてＺはカルボニル基、ヒドロキ
   シメチレン基、メチレン基、カルボニルメチレン
   基、ヒドロキシエチレン基もしくはエチレン基を
   表わしカルボニルメチレン基およびヒドロキシエ
   チレン基の場合の酸素一炭素結合は環縮合に伴な
   う炭素原子に隣接する炭素原子を含有する）で示
   される二環式カテコール誘導体の製造法。