JP6846345B2 - 破壊及び場による細胞への化合物及び組成物の送達 - Google Patents
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Description
本願は、米国特許法第119条(e)項に基づいて、2015年10月8日に出願した米国仮出願第62,239,241号及び2014年11月14日に出願した米国仮出願第62/080,201号の優先権の利益を主張し、その全体を参照により本明細書に援用する。
本発明は、米国国立衛生研究所により付与された助成金番号R01GM101420‐01A1の下で政府の支援によってなされた。政府は本発明の一定の権利を有する。
別段定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、当業者に一般的に理解されているもの(例えば、細胞培養、分子遺伝学、及び生化学において)と同じ意味を有するものと解釈するべきである。
ミトコンドリア病は、機能不全のミトコンドリアに起因する。ミトコンドリア病は、例えば、ミトコンドリアDNA(mtDNA)またはミトコンドリア成分をコードする核遺伝子における後天性または先天性の変異によって生じ得る。疾患は、薬物、感染症、または他の環境的要因の副作用による後天性ミトコンドリア機能不全に起因し得る。ミトコンドリア病の例として、ミトコンドリア筋症;糖尿病性腎症;糖尿病及び難聴(DAD)のいくつかの形態;レーバー遺伝性視神経萎縮症(LHON);リー症候群;神経障害、運動失調、網膜色素変性症、及び眼瞼下垂(NARP);筋神経胃腸脳症(MNGIE);赤色ぼろ線維・ミオクローヌスてんかん症候群(MERRF);ミトコンドリア筋症、脳筋症、乳酸アシドーシス、脳卒中様症状(MELAS);ならびにミトコンドリア神経胃腸管脳筋症(MNGIE)が挙げられる。
本発明の態様は、標準的なまたは以前に記載した電気穿孔法のパラメータと比較して、より低い電場強度の使用、またはより短時間の電場への曝露に関する。電気穿孔法のパラメータは、多数の細胞型について報告されている。例えば、www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-culture/transfection/transfection---selection-misc/neon-transfection-system/neon-protocols-cell-line-data.htmlで入手可能なNeon(登録商標)形質移入システムに関する情報参照を参照されたい。また、Kim et al.,(2008) Biosens Bioelectron,23(9):1353‐1360参照も参照されたい。この全内容が参照により本明細書中に援用される。例えば、Neon(登録商標)形質移入システムは、0.3〜1kv/cmの電場を5ms〜50msのパルス持続時間で使用してもよい。Neon(登録商標)形質移入システムの電気穿孔法パラメータの例を、以下の表にも提供する。
DFEは、標準的または以前に開示した電気穿孔法システムと比較して、核酸のより効率的かつ迅速な送達(及びその後の機能、例えばコードされた遺伝子産物の発現)を、高い細胞生存率でもたらす。本発明は、電場のようなエネルギー場が、細胞変形狭窄部によって生じる細胞膜内の摂動を介してペイロードを輸送するか、ペイロードを細胞内のある位置から別の位置へ、例えば、細胞膜の近傍から1つ以上の細胞小器官へ輸送する方法、システム、及び装置を提供する。いくつかの例示的な実装形態は電場を用いるが、一方で他の輸送機構が有用である。輸送機構として、例えば1つ以上の電場、磁場、及び音場を利用してもよい。
癌特異的抗原を認識するキメラ抗原受容体(CAR)を発現するようにT細胞を改変することにより、免疫検出を免れた腫瘍細胞を認識させて死滅させることができる。本プロセスは、患者のT細胞を抽出し、それらにCARの遺伝子を形質移入し、その後、形質移入した細胞を患者に再注入することを含む。
本発明の態様は、細胞膜内に摂動を引き起こすためのマイクロ流体システムを提供し、該システムは、管腔を画定するとともに、緩衝液中に懸濁した細胞が管腔を通過できるように構成されたマイクロ流体チャネルを備え、マイクロ流体チャネルは細胞変形狭窄部を有し、狭窄部の直径は細胞の直径の関数であり、かつ該システムは、(a)エネルギー場;または(b)該狭窄部の下流、上流、もしくは上流及び下流に位置するエネルギー場のソースもしくはエミッタを有する。
DNA形質移入のための多くの技術が開発されている。リポフェクションのような担体に基づく方法は、担体と細胞膜との相互作用、及び生物学的に活性なプロセスであるDNAの細胞内輸送に大きく依存する。マイクロインジェクションは、転写のためにDNAを核に直接送達するために使用されてきたが、スループットにより制限される。電気穿孔法はDNA形質移入に広く使用されているが、そのメカニズムに依然として議論の余地があり、また電気パルス後の原形質膜から核への能動的DNA輸送に依存する点でも制限がある。ここでは、破壊及び場による送達(DFE;本用語は本実施例の実施形態に限定されない)と名付けた細胞内送達の概念を説明する。DFEでは、まず破壊によって原形質膜内の摂動部が開き、次いでこれらの間隙を介した細胞質及び核へのDNA送達が可能になる。本戦略は、機械的破壊と電場との組合せに関し、GFPプラスミドDNAのような積荷分子またはその混合物を核に直接送達し、処理後1時間以内に発現させるものであり、これは電気穿孔法のような他の方法よりも迅速である。この新規戦略は、形質移入が困難な細胞に対する細胞内遺伝子送達、及び広範な物質の同時送達に有用である。
本明細書において、破壊及び場による送達(DFE)の概念の展開例を開示する。本アプローチでは、まず機械的プロセスによって細胞膜を破壊した後に、細胞を場に曝露して物質を標的細胞に輸送する。ハイスループットでDNAを細胞の核に直接送達することができるマイクロ流体装置が開発されている。DFE概念の1つの実装形態は、細胞圧搾を用いて細胞膜を一時的に破壊した後に細胞を電場に曝露し、それにより、例えば核膜またはミトコンドリア膜などの膜破壊を介して負に荷電しているDNAを輸送し、かつカート(carto)を細胞の細胞質ゾルへ送達した後に細胞核内へ輸送することを含む。CellSqueeze技術は、様々な細胞型にわたって多様な物質を送達する頑強な能力を実証したが、単独ではDNAの核送達を促進するには効果的ではない(Shalek et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.107,1870‐5(2010))。DNA分子が原形質膜に向かって電気泳動的に移動して原形質膜上に凝集する電気穿孔法とは異なり、DFEプロセスでは、DNA分子は、機械的破壊によって生じる細胞膜内の摂動または間隙を介して細胞内へかつ/または細胞内部において移動する。例えば、図9A参照。本組合せプロセス(DFE)は、積荷、例えば荷電化合物、例えばDNAの、細胞質ゾル及び細胞下構造への送達において相乗効果をもたらす。相乗効果は、送達する積荷の機能、例えば、送達するDNAによる遺伝子発現を測定することによって実証される。
シリコンウェーハをPyrexウェーハに結合させて、DFEマイクロ流体装置を形成した。下記の2つの主要な工程、すなわち(1)シリコンウェーハ上へのマイクロ流体チャネルの製造、及び(2)Pyrexウェーハ上へのマイクロ流体電極の製造が製造に関与していた。入口及び出口リザーバを備えたホルダに装置を取り付けた。発振器(Agilent E4422B)から電気パルスを発生させ、増幅器を介して増幅し、導電性エポキシを用いて電極パッドに結合したワイヤを介して装置を駆動した。所望の送達物質(積荷化合物または組成物)と混合した細胞の溶液を、入口リザーバ内に配置する。次いでこのリザーバを、調整器によって制御される圧縮空気ラインに接続する。圧力(0〜20psi)を利用して流体を輸送して装置に通過させるとともに、細胞が通過する際に装置に電気パルスを印加する。出口リザーバから細胞を回収してさらに処理する。
本明細書に記載する主題は、所望の構成に応じて、システム、装置、方法、及び/または物品に具体化することができる。上記の説明の実装形態は、本明細書に記載する主題に合致する全ての実装形態を表すものではない。代わりに、それらは、記載する主題に関連する態様に合致する単なるいくつかの例に過ぎない。いくつかの変形例を上記で詳細に説明したが、他の修正または追加が実行可能である。特に、本明細書に記載したものに加えて、さらなる特徴及び/または変形を提供することができる。例えば、上記の実装形態は、開示した特徴の様々な組合せ及び部分的組合せ、ならびに/または上記のいくつかのさらなる特徴の組合せ及び部分的組合せを対象とすることができる。さらに、添付の図面に示し、かつ/または本明細書に記載した論理フローは、望ましい結果を達成するために、示した特定の順序または連続的順序を必ずしも必要としない。他の実装形態は、添付の特許請求の範囲の範囲内であり得る。
Claims (24)
- ペイロードを細胞内に送達するためのマイクロ流体システムであって、
管腔を画定するとともに、緩衝液中に懸濁した細胞が前記管腔を通過できるように構成されたマイクロ流体チャネルであって、細胞変形狭窄部を有し、前記狭窄部の直径が前記細胞の直径の関数であり、前記ペイロードが通過するのに十分なほど大きい細胞膜の一時的な摂動を誘発するように選択される、前記マイクロ流体チャネルと、
(a)電場、または、
(b)前記狭窄部の下流、上流、もしくは上流及び下流に位置する電場のソースまたはエミッタと
を備え、前記電場が約0.1〜10kV/cmの強度またはパルス強度、及び50〜200マイクロ秒のパルス持続時間を有するように構成されている、前記マイクロ流体システム。 - 前記ソースもしくはエミッタが電極を含む、請求項1に記載のマイクロ流体システム。
- 前記ソースまたはエミッタが電極を含み、かつ、前記マイクロ流体システムが電極対ごとに電極サイズが様々に異なる複数の電極対をさらに含む、請求項1又は2に記載のマイクロ流体システム。
- (a)前記細胞が、前記狭窄部を通って連続流で前記電場に進行し、前記狭窄部を通過した後、前記細胞が前記一時的な摂動を介して前記ペイロードを輸送するのに十分な強度を有する前記電場の部分に接触するかもしくはそこを通過し;または、
(b)前記狭窄部を通過した後、前記細胞が、前記狭窄部の下流に位置する前記装置のゾーン内に進入して留まり、前記ゾーン内の細胞が前記電場と接触する、請求項1〜3のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。 - 前記マイクロ流体チャネルが、前記マイクロ流体システム内の複数の平行なマイクロ流体チャネルのうちの1つであり、前記複数の平行なマイクロ流体チャネルの各マイクロ流体チャネルが、管腔を画定するとともに、緩衝液中に懸濁した細胞が前記管腔を通過できるように構成され、各マイクロ流体チャネルが細胞変形狭窄部を有し、前記狭窄部の直径が前記細胞の直径の関数である、請求項1〜4のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。
- 前記複数の平行なマイクロ流体チャネルが、少なくとも約2、5、10、20、25、30、40、45、50、75、100、500、または1,000個のマイクロ流体チャネルを備える、請求項5に記載のマイクロ流体システム。
- (a)前記電極が、前記緩衝液中に懸濁した前記細胞内に前記ペイロードを輸送するための前記電場を生成する2つの電極を有する;及び/または
(b)前記マイクロ流体システムが、
(i)少なくとも第一及び第二電極アレイに構成される複数の電極であって、前記第一電極アレイが前記第二電極アレイからずらして配置される、前記複数の電極、または
(ii)少なくとも第一及び第二電極対アレイに構成される複数の電極対であって、前記第一電極対アレイが前記第二電極対アレイからずらして配置される、前記複数の電極対;を備え、及び/または
(c)前記マイクロ流体システムが、
(i)前記細胞変形狭窄部に前記細胞を接触させた後に、前記緩衝液に懸濁した前記細胞内に前記ペイロードを輸送するために、前記少なくとも1つの電極に連結し、前記少なくとも1つの電極を輸送駆動して電場を生成する発振器;または、
(ii)前記細胞変形狭窄部に前記細胞を接触させた後に、前記緩衝液に懸濁した前記細胞内に前記ペイロードを輸送するために、誘導によって前記少なくとも1つの電極を駆動して電場を生成する発振器をさらに備える、
請求項2〜6のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。 - 前記マイクロ流体システムが、
(i)少なくとも第一及び第二電極アレイに構成される複数の電極であって、前記第一電極アレイが前記第二電極アレイからずらして配置される、前記複数の電極、または
(ii)少なくとも第一及び第二電極対アレイに構成される複数の電極対であって、前記第一電極対アレイが前記第二電極対アレイからずらして配置される、前記複数の電極対を備え、
水平、垂直、または対角方向の平面において、約1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、1〜10、1〜20、1〜30、1〜45、または1〜90°の角度で、前記第一アレイが前記第二アレイからずらして配置される、
請求項7に記載のマイクロ流体システム。 - 前記マイクロ流体システムが、
(i)前記細胞変形狭窄部に前記細胞を接触させた後に、前記緩衝液に懸濁した前記細胞内に前記ペイロードを輸送するために、前記少なくとも1つの電極に連結し、前記少なくとも1つの電極を駆動して電場を生成する発振器;または、
(ii)前記細胞変形狭窄部に前記細胞を接触させた後に、前記緩衝液に懸濁した前記細胞内に前記ペイロードを輸送するために、誘導によって前記少なくとも1つの電極を駆動して電場を生成する発振器
をさらに備え、
前記発振器が、前記少なくとも1つの電極を駆動して、約0.1〜0.5、0.1〜1、0.1〜1.5、0.1〜2、0.1〜2.5、0.1〜3kV/cm、1〜3kV/cm、または0.1〜10kV/cmの強度を有する電場を生成するように構成される、
請求項7に記載のマイクロ流体システム。 - 前記電場が、
(a)前記ペイロードを前記細胞内の第一位置から前記細胞内部の第二位置に移送する;
または
(b)前記ペイロードを前記細胞内に輸送する、
請求項7〜9のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。 - 前記狭窄部の直径が、そこを通過する前記細胞の直径の約20%〜99%である、請求項1〜10のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。
- 前記狭窄部の直径が、約4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、15μm、20μm、4μm〜10μm、または10μm〜20μmであり、かつ/または、前記狭窄部の長さが、約10μm、15μm、20μm、24μm、30μm、40μm、50μm、60μm、10μm〜40μm、10μm〜50μm、または10μm〜60μmである、請求項11に記載のマイクロ流体システム。
- 前記マイクロ流体チャネルが、単一の細胞変形狭窄部、または複数の細胞変形狭窄部を並列及び/または直列で有する、請求項1〜12のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。
- 化合物または組成物の細胞内への送達方法であって:
ペイロードを含有する細胞懸濁液に細胞を提供すること;
細胞変形狭窄部を有するマイクロ流体チャネルに前記細胞懸濁液を通すこと;
前記細胞を前記狭窄部に通し、それによって前記細胞に圧力を加え、前記ペイロードが前記細胞膜を通過して前記細胞の細胞質ゾルに到達するのに十分なほど大きい前記細胞膜の摂動を引き起こすこと;及び
前記細胞を、電場に接触させ、
(a)前記細胞内の第一位置から前記細胞内部の第二位置に前記ペイロードを移送する;
または
(b)前記ペイロードを前記細胞内に輸送する
ことを含み、
前記電場が約0.1〜10kV/cmの強度又はパルス強度、及び50〜200マイクロ秒のパルス持続時間を有するように、システムが構成されている、前記送達方法。 - (a)前記電場が1つ以上の電極によって生成する;または
(b)前記細胞を、第一装置内のマイクロ流体チャネルに通し、次いで前記第一装置から除去し、第二装置内の電場と接触させる;または
(c)前記マイクロ流体チャネル及び前記電場が、1つの装置内にある、
請求項14に記載の方法。 - 前記マイクロ流体チャネル及び前記電場が、1つの装置内にあり、前記細胞が、前記狭窄部を通って連続流で前記電場に進入し、
(a)前記狭窄部を通過する前または通過した後、前記細胞は、一時的な摂動を介してペイロードを輸送するのに十分な強度の電場の部分に接触するか、またはそれを通過する;
または
(b)前記狭窄部を通過した後、前記細胞は、前記装置のゾーン内に流入して留まり、そこで前記細胞が前記電場と接触する、
請求項15に記載の方法。 - 前記狭窄部の直径が、前記ペイロードが通過するのに十分なほど大きい前記細胞膜の一時的な摂動を誘発するように選択され、前記狭窄部の前記直径が、細胞の直径よりも小さい、請求項14〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ペイロードが、
(a)デオキシリボ核酸(DNA);
(b)リボ核酸(RNA);
(c)インビボもしくはインビトロでDNAもしくはRNAの安定性もしくは半減期を増加させる1つ以上の修飾ヌクレオチドを含む前記DNAもしくはRNA;
(d)ペプチド核酸(PNA);
(e)メチル化DNA;
(f)天然に存在する染色体もしくはその一部;
(g)発現ベクター;
(h)タンパク質;
(i)小分子;
(j)糖;
(k)生物学的、合成的、有機的、もしくは無機的分子のポリマー;
(l)荷電分子もしくは荷電分子を含む組成物;または、
(m)非荷電分子、
の1つ以上を含む、請求項14〜17のいずれか一項に記載の方法。 - 前記ペイロードが、局在化シグナルを含むポリペプチドである、請求項18に記載の方法。
- 前記ペイロードを、(a)前記細胞の核内;
(b)前記細胞のミトコンドリア内;または、
(c)前記細胞の核もしくは前記細胞のミトコンドリア以外の前記細胞の小器官内、
の1つ以上に輸送する、請求項14〜19のいずれか一項に記載の方法。 - 前記電場が
(a)2つの電極によって生成され、前記緩衝液に懸濁した前記細胞内に前記ペイロードを輸送する、かつ/または
(b)電極対ごとに電極サイズが様々に異なる複数の電極対によって生成される、請求項14〜20のいずれか一項に記載の方法。 - 少なくとも1つの電極を、前記電極に連結する発振器によって駆動させ、前記細胞を前記細胞変形狭窄部に接触させた後に、前記細胞内に前記ペイロードを輸送するために、前記発振器が、前記電極を駆動して前記電場を生成する、請求項21に記載の方法。
- (a)前記狭窄部の直径が、そこを通過する前記細胞の直径の約20〜99%であり;
(b)前記狭窄部の直径が、約4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、15μm、20μm、4μm〜10μm、または10μm〜20μmであり;
(c)前記狭窄部の長さが、約10μm、15μm、20μm、24μm、30μm、40μm、50μm、60μm、10μm〜40μm、10μm〜50μm、10μm〜60μmであり;
(d)前記細胞が、前記細胞変形狭窄部を出てから約0.0001秒、0.001秒、0.002秒、0.003秒、0.004秒、0.005秒、1秒、2秒、3秒、4秒、5秒、6秒、7秒、8秒、9秒、10秒、0.001秒〜0.005秒、または0.0001秒〜10秒後に、または前記細胞変形狭窄部を出てから約0.0001秒、0.001秒、0.002秒、0.003秒、0.004秒、0.005秒、1秒、2秒、3秒、4秒、5秒、6秒、7秒、8秒、9秒、10秒、0.001秒〜0.005秒、または0.0001秒〜10秒以内に前記電場と接触し;
(e)前記電場に対する前記細胞の曝露時間は約10〜50ms、50〜100msまたは10〜100msであり;
(f)前記電場が直流パルス電流であり;
(g)前記電場をパルスし;
(h)前記電場の強度またはパルス強度が約1kV/cm〜3kV/cm、または0.1kV/cm〜0.5kV/cm、0.1kV/cm〜1kV/cm、0.1kV/cm〜1.5kV/cm、0.1kV/cm〜2kV/cm、0.1kV/cm〜2.5kV/cm、もしくは0.1〜3kV/cmであり;
(i)前記電場の強度またはパルス強度が、電気穿孔のみの特定の細胞型に対する所与のペイロードに対して同等レベルの送達を達成するのに必要な強度よりも低く;
(j)前記電場の強度またはパルス強度が、前記細胞を電気穿孔するのに必要な強度よりも約50%、1〜50%、50〜99%、または1〜99%低く;
(k)約10psi〜100psiの圧力を用いて前記細胞懸濁液を前記マイクロ流体チャネルに通し;
(l)前記細胞を、約300mm/s、100mm/s〜300mm/s、200mm/s〜700mm/s、250mm/s〜400mm/s、100mm/s〜1000mm/s、または1mm/s〜1000mm/sの速度で前記マイクロ流体チャネルに通し;
(m)前記マイクロ流体チャネルが、単一の細胞変形狭窄部を有するか、または前記マイクロ流体チャネルが、複数の細胞変形狭窄部を並列及び/または直列で有し;
(n)前記細胞が複数の細胞であり、前記電場に通した後に、前記細胞の約80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、90〜95、または80〜100%が生存可能であり;
(o)前記電場を、約0.1msの持続時間、1ms〜20ms、0.1ms〜2000ms、または1ms〜200msの周期でパルスし;
(p)前記細胞を、約100mm/s、170mm/s、300mm/s、100mm/s〜300mm/s、200mm/s〜700mm/s、250mm/s〜400mm/s、100mm/s〜1000mm/s、または1mm/s〜1000mm/sの速度で前記電場に通し;
(q)前記細胞膜の前記摂動が、約1nm〜20nm、1nm〜600nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm、10nm、12nm、14nm、16nm、18nm、20nm、25nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、250nm、300nm、350nm、400nm、450nm、500nm、または600nmの最大直径を有し;かつ/または、
(r)約1nm〜20nm、1nm〜600nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm、10nm、12nm、14nm、16nm、18nm、20nm、25nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、250nm、300nm、350nm、400nm、450nm、500nm、または600nmの最大直径を有する前記細胞膜の前記摂動が、前記細胞膜上において、少なくとも約1分、2分、3分、4分、5分、6分、7分、8分、9分、10分、または1〜10分間持続する、請求項14〜22のいずれか一項に記載の方法。 - 導入遺伝子をコードする発現ベクターの細胞への送達方法であって:
前記細胞及び前記発現ベクターを含有する細胞懸濁液を細胞変形狭窄部に通し、それによって前記細胞に圧力を加え、前記発現ベクターが通過するのに十分なほど大きい前記細胞膜の摂動を引き起こすこと;
前記発現ベクターを前記細胞内に輸送するために、少なくとも1つの電極によって生成された電場に前記細胞懸濁液を通すことを含み、
前記電場が約0.1〜10kV/cmの強度またはパルス強度、及び50〜200マイクロ秒のパルス持続時間を有するように、システムが構成されており、かつ
(a)前記細胞中の前記導入遺伝子の最大発現を、前記細胞変形狭窄部を通過することなく前記電場を通過した細胞、または前記電場を通過することなく前記細胞変形狭窄部を通過した細胞中の前記発現に比べて、より速い速度で達成する、及び/または
(b)前記細胞中に前記導入遺伝子が、前記細胞変形狭窄部を通過することなく前記電場を通過した細胞、または前記電場を通過することなく前記細胞変形狭窄部を通過した細胞中の前記導入遺伝子の発現に比べて、より広範囲に発現する、及び/または
(c)前記細胞懸濁液が細胞集団を含み、前記集団中の前記導入遺伝子を発現する細胞の割合が、前記細胞変形狭窄部を通過することなく前記電場を通過した細胞集団中、または前記電場を通過することなく前記細胞変形狭窄部を通過した細胞集団中の前記導入遺伝子を発現する細胞の割合よりも大きい、及び/または
(d)前記細胞懸濁液が細胞集団を含み、前記集団中の前記導入遺伝子を高レベルで発現する細胞の割合が、前記細胞変形狭窄部を通過することなく前記電場を通過した細胞集団中、または前記電場を通過することなく前記細胞変形狭窄部を通過した細胞集団中の前記導入遺伝子を高レベルで発現する細胞の割合よりも大きい、及び/または
(e)前記細胞内で前記導入遺伝子が、前記細胞変形狭窄部を通過することなく前記電場を通過した細胞、または前記電場を通過することなく前記細胞変形狭窄部を通過した細胞中の前記導入遺伝子の発現よりも、より速く発現する、
前記送達方法。
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Family Cites Families (110)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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DE2502621C3 (de) | 1975-01-23 | 1978-09-14 | Kernforschungsanlage Juelich Gmbh, 5170 Juelich | Messung elastischer und dielektrischer Eigenschaften der Membran lebender Zellen |
US4478824A (en) | 1983-08-08 | 1984-10-23 | Franco Robert S | Method for altering red blood cell function and survival |
FR2569477B1 (fr) | 1984-08-24 | 1987-01-02 | Descartes Universite Rene | Appareil et procede pour la determination de la deformabilite des globules rouges du sang |
DE3742607A1 (de) | 1987-12-16 | 1989-06-29 | Asea Brown Boveri | Hochtemperatur-speicherbatterie |
JP2720161B2 (ja) | 1988-02-01 | 1998-02-25 | 株式会社アドバンス | 細胞変形能測定装置 |
JP2685544B2 (ja) | 1988-11-11 | 1997-12-03 | 株式会社日立製作所 | 血液フィルタおよび血液検査方法並びに血液検査装置 |
JP2532707B2 (ja) | 1990-03-08 | 1996-09-11 | 佑二 菊池 | 血液回路及びこれを用いた血液測定装置及び血液測定方法 |
DK0528859T3 (da) | 1990-04-24 | 1998-09-14 | Flustat Pty Ltd | Oral vaccine, som omfatter antigen knyttet til overfladen af røde blodlegemer |
US5658892A (en) | 1993-01-15 | 1997-08-19 | The General Hospital Corporation | Compound delivery using high-pressure impulse transients |
US6218166B1 (en) | 1994-12-09 | 2001-04-17 | John Wayne Cancer Institute | Adjuvant incorporation into antigen carrying cells: compositions and methods |
ES2201177T3 (es) | 1995-03-08 | 2004-03-16 | The Scripps Research Institute | Sistema de presentacion de antigenos y activacion de celulas-t. |
US6051409A (en) | 1995-09-25 | 2000-04-18 | Novartis Finance Corporation | Method for achieving integration of exogenous DNA delivered by non-biological means to plant cells |
CA2239574A1 (en) | 1995-12-04 | 1997-06-12 | Puget Sound Blood Center | Non-immunogenic and toleragenic platelet and red blood cell compositions |
EP0921816A4 (en) | 1996-03-28 | 2004-09-22 | Whitehead Biomedical Inst | CELLS WITH INCREASED OPSONINE CONTENT AND METHOD FOR REGULATING AN IMMUNE RESPONSE TO ANTIQUE |
US5885470A (en) | 1997-04-14 | 1999-03-23 | Caliper Technologies Corporation | Controlled fluid transport in microfabricated polymeric substrates |
DE69732225T2 (de) | 1997-05-05 | 2005-06-23 | Dideco S.R.L., Mirandola | Verfahren zur Verkapselung von biologisch aktiven Stoffen in Erythrocyten und Gerät dafür |
US5842787A (en) | 1997-10-09 | 1998-12-01 | Caliper Technologies Corporation | Microfluidic systems incorporating varied channel dimensions |
SE9704076D0 (sv) | 1997-11-06 | 1997-11-06 | Holdingbolaget Vid Goeteborgs | Method for permeabilisation of cell structures and use thereof |
US20050026283A1 (en) | 2001-11-27 | 2005-02-03 | Owe Ormar | Method for combined parallel agent delivery and electroporation for cell structures and thereof |
GB9816583D0 (en) | 1998-07-31 | 1998-09-30 | Univ Ulster | Nucleic acid carrier |
WO2000078920A1 (en) | 1999-06-21 | 2000-12-28 | The General Hospital Corporation | Methods and devices for cell culturing and organ assist systems |
JP2002325572A (ja) | 2000-12-25 | 2002-11-12 | Univ Osaka | 外来物質の導入方法 |
WO2002067863A2 (en) | 2001-02-22 | 2002-09-06 | The Scepens Eye Research Institute, Inc. | Tolerogenic antigen presenting cells and in treating immune-inflammatory conditions |
WO2003020039A1 (en) | 2001-08-28 | 2003-03-13 | Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center | Immune tolerance to predetermined antigens |
US20030133922A1 (en) | 2002-01-15 | 2003-07-17 | Kasha John R. | Oral tolerance using allogeneic platelets in ITP |
US7148059B1 (en) * | 2002-02-22 | 2006-12-12 | Ionoptix Corporation | Myocyte culture pacing apparatus |
WO2003104788A1 (ja) | 2002-06-05 | 2003-12-18 | 松下電器産業株式会社 | 細胞外電位測定デバイスおよびその製造方法 |
GB0214528D0 (en) | 2002-06-24 | 2002-08-07 | Univ Aberdeen | Materials and methods for induction of immune tolerance |
WO2004063342A2 (en) | 2003-01-09 | 2004-07-29 | Invitrogen Corporation | Cellular delivery and activation polypeptide-nucleic acid complexes |
US20060134067A1 (en) | 2003-02-18 | 2006-06-22 | Maxcyte, Inc. | Loading of cells with antigens by electroporation |
EP1771608B1 (en) | 2004-07-27 | 2010-09-15 | DSM IP Assets B.V. | Process for making a carbon nanotubes/ultra-high molar mass polyethylene composite fibre |
US20060134772A1 (en) | 2004-11-18 | 2006-06-22 | The Regents Of The University Of California | System for locating cells and for cellular analysis |
US8420078B2 (en) | 2005-03-10 | 2013-04-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and immunogenic cell preparations for treating antigen-associated diseases |
US7704743B2 (en) | 2005-03-30 | 2010-04-27 | Georgia Tech Research Corporation | Electrosonic cell manipulation device and method of use thereof |
US7993821B2 (en) | 2005-08-11 | 2011-08-09 | University Of Washington | Methods and apparatus for the isolation and enrichment of circulating tumor cells |
WO2007067032A1 (en) | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Academisch Medisch Cemtrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for influencing the stability of cells |
WO2007097934A2 (en) | 2006-02-17 | 2007-08-30 | Elusys Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for using erythrocytes as carriers for delivery of drugs |
US8293524B2 (en) | 2006-03-31 | 2012-10-23 | Fluxion Biosciences Inc. | Methods and apparatus for the manipulation of particle suspensions and testing thereof |
US20070249038A1 (en) | 2006-04-21 | 2007-10-25 | Andrea Adamo | Microfluidic device for single cell targeted operations |
AU2007284454A1 (en) | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Method and apparatus for microfluidic injection |
US20120264108A1 (en) * | 2007-01-05 | 2012-10-18 | The Regents Of The University Of California | Intracellular Molecular Delivery Based On Nanostructure Injectors |
US20080311140A1 (en) | 2007-05-29 | 2008-12-18 | Baylor College Of Medicine | Antigen specific immunosuppression by dendritic cell therapy |
US8841135B2 (en) | 2007-06-20 | 2014-09-23 | University Of Washington | Biochip for high-throughput screening of circulating tumor cells |
EP2169070B1 (en) | 2007-06-21 | 2015-06-10 | National University Corporation Nagoya University | Method for introducing foreign substance into cell having cell wall |
FR2919804B1 (fr) | 2007-08-08 | 2010-08-27 | Erytech Pharma | Composition et vaccin therapeutique anti-tumoral |
GB0718160D0 (en) | 2007-09-18 | 2007-10-24 | Medical Res Council | Methods |
EP2057998A1 (en) | 2007-10-31 | 2009-05-13 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf | Use of modified cells for the treatment of multiple sclerosis |
EP2216639A4 (en) | 2007-11-28 | 2014-01-15 | Konica Minolta Opto Inc | APPARATUS AND METHOD FOR MEASURING BLOOD FLUIDITY |
US20090280518A1 (en) * | 2008-05-12 | 2009-11-12 | Massachusetts Institute Of Technology | System for high throughput measurement of mechanical properties of cells |
JP5137129B2 (ja) | 2008-07-23 | 2013-02-06 | 国立大学法人山口大学 | 血液細胞の力学的特性測定装置 |
EP2321405A4 (en) | 2008-08-08 | 2012-09-12 | Agency Science Tech & Res | MICROFLUIDIC CONTINUOUS FLOW DEVICE |
US8211656B2 (en) | 2008-08-13 | 2012-07-03 | The Invention Science Fund I, Llc | Biological targeting compositions and methods of using the same |
US8187864B2 (en) * | 2008-10-01 | 2012-05-29 | The Governing Council Of The University Of Toronto | Exchangeable sheets pre-loaded with reagent depots for digital microfluidics |
US20110091973A1 (en) | 2008-12-09 | 2011-04-21 | Glaser Larry F | Modified and fusion enhanced erythrocytes, cells and uses thereof |
US9157550B2 (en) | 2009-01-05 | 2015-10-13 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Microfluidic systems and methods |
EP2405959A4 (en) | 2009-03-13 | 2013-10-16 | Univ Tufts | METHODS, APPARATUSES AND KITS FOR INTRODUCING GENETIC MATERIAL INTO LIVING CELLS |
US9017991B2 (en) | 2009-03-13 | 2015-04-28 | Tufts University | Methods tip assemblies and kits for introducing material into cells |
CN102439131A (zh) | 2009-03-20 | 2012-05-02 | 新加坡科技研究局 | 用于分离细胞的装置及其使用方法 |
WO2010129671A2 (en) * | 2009-05-08 | 2010-11-11 | Chauncey Sayre | Method of and apparatus for changing one type of cell into another type of cell |
GB0909754D0 (en) | 2009-06-05 | 2009-07-22 | Magnani Mauro | Drug delivery systems |
US20110300205A1 (en) | 2009-07-06 | 2011-12-08 | Novartis Ag | Self replicating rna molecules and uses thereof |
US9364831B2 (en) * | 2009-08-08 | 2016-06-14 | The Regents Of The University Of California | Pulsed laser triggered high speed microfluidic switch and applications in fluorescent activated cell sorting |
EP2493487B1 (en) | 2009-10-27 | 2016-08-24 | Erytech Pharma | Composition to induce specific immune tolerance |
CA2951341A1 (en) | 2009-12-21 | 2011-06-30 | Keygene N.V. | Improved techniques for transfecting protoplasts |
US9005579B2 (en) | 2010-01-05 | 2015-04-14 | Contrafect Corporation | Methods and compositions for enhanced immunological therapy and targeting of gram-positive bacteria |
US8844570B2 (en) | 2010-02-01 | 2014-09-30 | California Institute Of Technology | Generating binary states using a microfluidic channel |
JP5704590B2 (ja) | 2010-02-05 | 2015-04-22 | 国立大学法人東京農工大学 | サイズ選択マイクロキャビティアレイを用いた循環腫瘍細胞の検出 |
US20110287948A1 (en) | 2010-03-22 | 2011-11-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Measurement of material properties and related methods and compositions based on cytoadherence |
WO2015061458A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-30 | Cellanyx Diagnostics, Inc. | Systems, devices and methods for microfluidic culturing, manipulation and analysis of tissues and cells |
AU2012208926A1 (en) | 2011-01-19 | 2013-07-25 | The University Of British Columbia | Apparatus and method for particle separation |
WO2012118799A2 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | President And Fellows Of Harvard College | Cell culture system |
CN102250842A (zh) * | 2011-05-23 | 2011-11-23 | 昆明理工大学 | 一种电穿孔转染昆虫细胞的方法 |
CN108531360A (zh) | 2011-05-27 | 2018-09-14 | 不列颠哥伦比亚大学 | 用于高通量分析的微流控细胞捕获和分析设备 |
MX2013013243A (es) | 2011-07-05 | 2014-05-30 | Sotio As | Medios y metodos para activar la inmunoterapia celular del cancer utilizando celulas cancerosas destruidas mediante presion hidrostatica y celulas dendriticas. |
US20130065314A1 (en) | 2011-08-25 | 2013-03-14 | Phytocentric Biotech Inc. | Algal transformation systems, compositions and methods |
JP6219832B2 (ja) | 2011-10-17 | 2017-10-25 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 細胞内送達 |
WO2013185032A1 (en) | 2012-06-07 | 2013-12-12 | President And Fellows Of Harvard College | Nanotherapeutics for drug targeting |
US9255245B2 (en) | 2012-07-03 | 2016-02-09 | Agilent Technologies, Inc. | Sample probes and methods for sampling intracellular material |
US9327526B2 (en) * | 2012-07-25 | 2016-05-03 | Xerox Corporation | Active biased electrodes for reducing electrostatic fields underneath print heads in an electrostatic media transport |
CN102925337B (zh) | 2012-11-08 | 2014-06-18 | 武汉友芝友生物制药有限公司 | 一种微流体细胞捕获芯片及其制备方法 |
GB201300049D0 (en) | 2013-01-03 | 2013-02-20 | Transimmune Ag | Method for obtaining immuno-stimulatory dendritic cells |
GB201300052D0 (en) | 2013-01-03 | 2013-02-20 | Transimmune Ag | Method for obtaining immuno-suppressive dendritic cells |
WO2014120956A1 (en) | 2013-01-30 | 2014-08-07 | Asta Fluidic Technologies, Inc. | Microfluidic-based fetal red blood cell detection |
US9725709B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-08-08 | OpenCell Technologies, Inc. | Intracellular delivery and transfection methods and devices |
CN105452471A (zh) | 2013-03-15 | 2016-03-30 | 加利福尼亚大学董事会 | 使用光热平台向活细胞中的高通量运输物递送 |
KR20140115560A (ko) | 2013-03-21 | 2014-10-01 | 인하대학교 산학협력단 | 기계적 스트레스를 이용한 단세포 생물체 개질 방법 및 이에 사용되는 장치 |
CA3185368A1 (en) | 2013-04-03 | 2014-10-09 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Effective generation of tumor-targeted t cells derived from pluripotent stem cells |
AU2014306423B2 (en) | 2013-08-16 | 2019-04-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Selective delivery of material to cells |
US10137673B2 (en) | 2013-12-31 | 2018-11-27 | Canon U.S. Life Sciences, Inc. | Methods and systems for continuous flow cell lysis in a microfluidic device |
BR112016022814A8 (pt) | 2014-04-01 | 2021-07-06 | Rubius Therapeutics Inc | composição farmacêutica e seu método de preparação, ácido nucleico, e dispositivo médico ou kit médico |
IL292512B2 (en) | 2014-04-18 | 2024-07-01 | Editas Medicine Inc | CRISPR-CAS-related methods, compositions and components for cancer immunotherapy |
EP3164482B1 (en) * | 2014-07-03 | 2024-05-22 | Massachusetts Institute of Technology | Apparatus and method for optimization of cell electroporation |
KR20170074235A (ko) | 2014-10-31 | 2017-06-29 | 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 | 면역 세포로의 생체분자의 전달 |
CN113897285A (zh) | 2014-11-14 | 2022-01-07 | 麻省理工学院 | 化合物和组合物向细胞中的破坏和场实现的递送 |
WO2016094715A2 (en) | 2014-12-10 | 2016-06-16 | Berkeley Lights, Inc. | Movement and selection of micro-objects in a microfluidic apparatus |
CN107429262A (zh) | 2015-01-07 | 2017-12-01 | 英迪公司 | 一种用于机械和水动力微流体转染的方法以及用于其的设备 |
US11125739B2 (en) | 2015-01-12 | 2021-09-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Gene editing through microfluidic delivery |
US20180135012A1 (en) | 2015-05-13 | 2018-05-17 | Rubius Therapeutics, Inc. | Membrane-receiver complex therapeutics |
GB201513278D0 (en) | 2015-07-03 | 2015-09-09 | Transimmune Ag And Yale University | Device and method for obtaining immunostimulatory antigen-presenting cells |
CA2988996A1 (en) | 2015-07-09 | 2017-01-12 | Massachusetts Institute Of Technology | Delivery of materials to anucleate cells |
US20190382796A1 (en) | 2015-09-04 | 2019-12-19 | Sqz Biotechnologies Company | Intracellular delivery of biomolecules mediated by a surface with pores |
EP3344575B1 (en) | 2015-09-04 | 2020-04-15 | SQZ Biotechnologies Company | Intracellular delivery of biomolecules to cells comprising a cell wall |
SG11201805052YA (en) | 2015-12-22 | 2018-07-30 | Sangui Bio Pty Ltd | Therapeutic methods using erythrocytes |
AU2017207736A1 (en) | 2016-01-11 | 2018-07-12 | Rubius Therapeutics, Inc. | Compositions and methods related to multimodal therapeutic cell systems for immune indications |
CN108779475A (zh) | 2016-01-12 | 2018-11-09 | Sqz生物技术公司 | 复合物的细胞内递送 |
RU2747878C2 (ru) | 2016-05-03 | 2021-05-17 | ЭсКьюЗед БАЙОТЕКНОЛОДЖИЗ КОМПАНИ | Внутриклеточная доставка биомолекул для индукции толерантности |
CN109415741A (zh) | 2016-05-03 | 2019-03-01 | Sqz生物技术公司 | 细胞内递送生物分子以诱导耐受性 |
US20170326213A1 (en) | 2016-05-16 | 2017-11-16 | Augusta University Research Institute, Inc. | Protein-Coupled Red Blood Cell Compositions and Methods of Their Use |
CN106244543A (zh) | 2016-07-29 | 2016-12-21 | 北京时合生物科技有限公司 | 一种pbmc体外诱导分化成为树突状细胞的方法 |
EP3538269A4 (en) | 2016-11-08 | 2020-07-01 | Georgia Tech Research Corporation | METHODS OF INTRACELLULAR CONVECTION ADMINISTRATION |
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