JP6215206B2 - 緑茶成分を含有する化粧料組成物 - Google Patents

Description

本発明は、緑茶成分を含有する化粧料組成物に関する。

近年、植物の全能性（ｔｏｔｉｐｏｔｅｎｃｙ）を用いた植物細胞培養技術の発展に伴い、植物由来の機能性二次代謝産物（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ）に対する関心が高まりつつある。当該二次代謝産物は、多様な生理活性を有することが知られており、高機能性化粧品の新規な原料として植物幹細胞由来の抽出物質が注目を浴びている。この技術を用いれば、天然に存在するが、化学的合成方法では得られにくかった高機能性活性物質を経済的に生産することができるという点から、これまで用いることのできなかった新規な成分を開発し応用できるようになることが期待されている。その他、酵素処理（ｅｎｚｙｍｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を活用した物質変換技術（ａｃｔｉｖｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）といったバイオプロセスを活用した素材開発も活発に行われてきている。最近、機能性化粧品に対する消費者らからの様々な要求に応じられるような、新機能性素材や関連技術の発展が十分ではなかったという点から、無数の多様な新機能性成分を作り出すことのできる植物幹細胞技術や、酵素処理といったバイオプロセスを利用した化粧品は、多様な皮膚効能、特に抗老化効能部分において高い人気を集めるものと考えられる。

韓国公開特許第１０−２０１１−００２３４８３号公報 韓国公開特許第１０−２０１１−００３１８０１号公報 韓国特許第１０−０６５９１３８号公報 韓国特許第１０−０５８９７１６号公報 特開２００９−５０７８２６号公報

本発明者らは、皮膚副作用を誘発しない天然植物由来の成分であり且つ皮膚老化防止及びしわ改善効果に優れる化粧料の開発のために鋭意研究を繰り返えした結果、緑茶成分を含有すればその効果が高くなることを確認した。

したがって、本発明の目的は、植物由来の成分を用いて皮膚安全性に優れ、且つ皮膚老化防止及びしわ改善効果に優れる化粧料組成物を提供することである。

前記目的を達成するために、本発明は、緑茶サポニン及び緑茶ポリフェノールからなる群より選ばれる一種以上を有効成分として含有する化粧料組成物を提供する。

本発明の一実施例において、前記組成物は、緑茶幹細胞培養産物をさらに含有していてよい。

また、本発明の一実施例において、前記緑茶サポニンは、緑茶種の皮から抽出して糖残基を除去してなるものであってよい。

また、本発明の一実施例において、前記緑茶ポリフェノールは、緑茶葉から抽出したＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌoｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）であってよい。

また、本発明の一実施例において、前記緑茶サポニンまたは緑茶ポリフェノールは、組成物の総重量を基準にして、それぞれ０．００１〜１重量％の範囲で含有されていてよい。

また、本発明の一実施例において、前記幹細胞は、カルス由来のものであってよい。

また、本発明の一実施例において、前記幹細胞培養産物は、幹細胞株、そのライセート、その抽出物、及びその培養液からなる群より選ばれる一種または二種以上の混合物であってよい。

また、本発明の一実施例において、前記幹細胞培養産物は、組成物の総重量を基準にして、０．０１〜１０重量％の範囲で含有されていてよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、抗老化用組成物であってよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、皮膚保湿用または皮膚バリア強化用組成物であってよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、フィラグリン（Ｆｉｌｌａｇｒｉｎ）遺伝子を活性化させるものであってよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、皮膚美白用または皮膚の色素沈着抑制用組成物であってよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、インターロイキン―６（ＩＬ―６）遺伝子を活性化させるものであってよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、皮膚弾力強化用または皮膚しわ改善用組成物であってよい。

また、本発明の一実施例において、前記組成物は、カタラーゼ（Ｃａｔａｌａｓｅ）遺伝子を活性化させるものであってよい。

本発明の化粧料組成物は、皮膚に対する安全性に優れ、且つ遺伝子活性化といった皮膚中の生物学的メカニズムの改善に卓越した効果を奏し、抗老化用化粧料組成物として有用である。また、本発明において用いた緑茶成分は、老化によって低下していた遺伝子活性を再び上昇させ、コラーゲンの生合成を濃度依存的に増大させるため、老化した皮膚を根本的に改善させ、且つ、コラーゲンを供給することで張りや艶のない皮膚に張りや艶を与えることができ、皮膚の弾力増進と共に老化を予防することができるという効能がある。

フィラグリン、インターロイキン―６、カタラーゼに対する遺伝子発現量を示す図である。

以下、本発明について詳述する。

なお、本発明において用いられる技術用語及び科学用語に対し、特にその定義がなされていなければ、この発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が通常に理解している意味を持つものとする。

本発明は、緑茶サポニン（Ｓａｐｏｎｉｎ）及び緑茶ポリフェノール（ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ）からなる群より選ばれる一種以上を有効成分として含有する化粧料組成物を提供する。前記組成物は、緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｓｉｎｅｎｓｉｓ）幹細胞培養産物をさらに含有していてよい。

本発明の緑茶サポニン（Ｓａｐｏｎｉｎ）は、緑茶種の皮から巨大分子量の粗サポニン（ｃｒｕｄｅ ｓａｐｏｎｉｎ）を抽出し、酵素で糖残基（ｍｏｉｅｔｙ）間を切断して除去することで肌に吸収されやすくなって高効能を示す成分に転換させたものを用いる。

本発明の緑茶ポリフェノール（ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ）は、緑茶葉に最も豊富なＥＧＣＧ（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）であって、緑茶葉を温水にて抽出してから固形化したパウダー成分を用いる。

前記緑茶サポニンまたは緑茶ポリフェノールは、組成物の総重量を基準にして、それぞれ０．００１〜１重量％、好ましくは０．０１〜０．５重量％の範囲で含有されていてよい。各成分の含有量が０．００１重量％未満の場合は、皮膚細胞の再生及び抗酸化効果を期待しにくい。また、１．０重量％を超過した場合は、それ以上効能を大きく増大しないため、その原料効率性が悪くなり、さらには、難溶性である緑茶サポニンとポリフェノールを剤形中に安定して担持するために、各種の溶媒を組み合わせることで化粧料組成物としての価値を落とすことがある。

前記緑茶幹細胞は、最近脚光を浴びている植物幹細胞培養技術を用いて得ることができる。緑茶の種子、葉、幹、根などから全能性を有するカルス（ｃａｌｌｕｓ）を誘導した後、固体培養（ｓｏｌｉｄ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ）して幹細胞株（ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）を確立し、懸濁培養（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ）にて有効成分を大量生産した後、抽出して得る。

前記培養産物としては、誘導された幹細胞株そのもの、そのライセート、その抽出物、及びその培養液からなる群より選ばれる一種または二種以上の混合物であってよい。前記抽出物は、抽出方法において制限はないが、例えば、前記植物の組織外植体（ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｐｌａｎｔ）に由来する細胞株の植物性培養方法にて抽出して用いることができる。本発明の製造例１では、葉由来のカルスから得た幹細胞培養液と幹細胞株のライセート（ｌｙｓａｔｅ）とを同時に獲得して用いたが、緑茶の胚（ｅｍｂｒｙｏ）、形成層、前形成層に由来のカルスを培養して得た幹細胞株、そのライセート、その抽出物、またはその培養液を用いても、本発明と同じ結果が得られる。

前記培養産物は、緑茶幹細胞から抽出して分離／精製して得たアミノ酸などを有効成分として含有していてよく、本発明において用いられた抽出物は、皮膚老化とともに活性が低下する核心遺伝子の活性を再び増加させることで、皮膚老化に根本的に対応することができるようにする。また、皮膚でコラーゲン合成を増大させることで皮膚真皮層の弾力繊維を増大させてしわを改善または緩和する効果を奏し、さらには、皮膚老化の原因でもあった活性酸素を除去したりもする。その結果、皮膚老化の根本的な原因である遺伝子活性の低下を解決し、且つ酸化的ストレスをブロッキングすることで総合的な抗老化効果を奏するようになる。

前記幹細胞培養産物は、組成物の総重量に対して０．０１〜１０重量％の範囲で含有され、好ましくは、０．１〜５重量％の範囲で含有される。含有量が０．０１重量％未満である場合は、遺伝子の再活性化による抗老化効果を期待しにくく、また１０重量％を超過した場合は、それ以上効能が大きく増大しないため、その原料効率性が大きく低下するようになる。

本発明の前記化粧料組成物は、抗老化用組成物である。

また、本発明の前記化粧料組成物は、皮膚保湿用、皮膚バリア強化用、皮膚美白用、色素沈着抑制用、皮膚弾力強化用、抗酸化用、またはしわ改善用組成物である。

ヒトの皮膚を構成する細胞は、表皮の大部分を占めているケラチノサイト（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）、メラニン生成を担うメラニン形成細胞（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ）、真皮の大部分を占めている繊維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）といった三つの細胞に大別される。ケラチノサイトは、皮膚水分の蒸発を抑える保湿や、外部からの有害因子に対して皮膚を守るバリア機能と深く関連しており、またメラニン形成細胞は、肌の色やトーンを決めるとともにしみやそばかすを生じさせたりする。また、繊維芽細胞は、コラーゲンのような弾力繊維を産生する細胞であって、皮膚弾力、皮膚しわと深く関連している。皮膚遺伝学の研究を総合的に分析してみたとき、３種の細胞のそれぞれに対し、年を取るにつれてその活性が最も大きく低下する遺伝子を研究した結果、ケラチノサイトではフィラグリン（Ｆｉｌｌａｇｒｉｎ）遺伝子、メラニン形成細胞ではＩＬ−６遺伝子、繊維芽細胞ではカタラーゼ（Ｃａｔａｌａｓｅ）遺伝子が皮膚老化と最も深く連関していることを確認した。

フィラグリンは、ケラチノサイトの分化マーカーであって天然保湿因子の前駆物質として知られており、インターロイキン―６は、低メラニン形成因子（ｈｙｐｏｍｅｌａｎｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒ）であってメラニン形成細胞に作用してメラニン生成を阻害することが知られている。カタラーゼは、細胞内で発生する過酸化物を分解する酵素である。

したがって、前記三つの核心の皮膚遺伝子を活性化させると、肌年齢をより若い年齢の肌状態に戻すことができるという考えから本発明を着目した。

本発明の組成物は、フィラグリン遺伝子を活性化させる効果がある。フィラグリン遺伝子が活性化すると、皮膚の水分蒸発を抑制する保湿効果を奏し且つ外部からの有害因子から皮膚を守る皮膚バリアが強化する効果がある。

本発明の組成物は、インターロイキン−６（IL−６）遺伝子を活性化させる効果がある。IL−６遺伝子が活性化すると、肌色や肌トーンが明るくなって皮膚美白効果があり、且つ、シミやそばかすの生成が抑制されることで皮膚の色素沈着が抑制されるという効果がある。

本発明の組成物は、カタラーゼ（Ｃａｔａｌａｓｅ）遺伝子を活性化させる効果がある。カタラーゼ遺伝子が活性化すると、コラーゲンの生成が促進されることで皮膚弾力が良くなり、且つ、皮膚しわが改善するという効果がある。

本発明の化粧料組成物としては、例えば、基礎化粧料、メーキャップ化粧料、毛髪用化粧料、ボディー用化粧料などが挙げられ、その剤形は特に制限されず、目的するところに応じて適宜選択すればよい。

例えば、前記化粧料組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、せっけん、界面活性剤含有クレンジング、オイル、粉末ファウンデーション、乳濁液ファウンデーション、ワックスファウンデーション、及びスプレーなどで剤形化することができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。より詳しくは、柔軟化粧水、栄養化粧水、ローション、ボディーローション、栄養クリーム、マッサージクリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、エッセンス、アイクリーム、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、ゲル、パッチ、水中油（Ｏ／Ｗ）型、油中水（Ｗ／Ｏ）型などの基礎化粧料、リップスティック、メーキャップベースまたはファウンデーションなどのポイントメーキャップ化粧料、シャンプー、リンス、ボディークレンザー、歯磨きまたは口腔洗浄剤などの洗浄料、ヘアトニック、ジェルまたはムースなどの整髪剤、養毛剤または染毛剤などの毛髪用化粧料組成物にて剤形化されていてよい。

前記化粧料組成物は、化粧学的に許容し得る媒質または基剤を含む。前記化粧料組成物は、局所適用に適したあらゆる剤形にて提供されていてよく、例えば、溶液、ゲル、固体または練り無水生成物、水状物に油状物を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微細顆粒球またはイオン型（リポソーム）及び／または非イオン型の小胞性分散剤の形態、クリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレー、またはコンシーラースティックの形態が挙げられる。また、これらの組成物は、当該分野の通常の方法にて製造されていてよい。

本発明の剤形が溶液または乳濁液の場合は、担体成分として、溶媒、溶解化剤、または乳濁化剤が用いられ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１,３−ブチルグリコール、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコールまたはソルビタンの脂肪酸エステルが挙げられる。

本発明の剤形が懸濁液の場合は、担体成分として、水、エタノール、またはプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁液剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天またはトラガカントなどが用いられていてよい。

本発明の剤形がペースト、クリーム、またはゲルの場合は、担体成分として、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカンド、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、または酸化亜鉛などが用いられていてよい。

本発明の剤形がパウダーまたはスプレーの場合は、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケート、またはポリアミドパウダーが用いられていてよく、特にスプレーの場合は、更に、クロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタン、またはジメチルエーテルのような推進剤を含んでいてよい。

本発明の剤形が界面活性剤含有クレンジングの場合は、担体成分として、脂肪族アルコールサルフェート、脂肪族アルコールエーテルサルフェート、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテル硫酸、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物油、ラノリン誘導体、またはエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられていてよい。

本発明において、前記化粧料組成物は、更に粘増剤を含んでいてよい。本発明の化粧料組成物に含まれる粘増剤としては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシグアニン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリクォータニウム、セテアリルアルコール、ステアリン酸、カラギナンなどが用いられていてよく、好ましくは、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリクォータニウムから選ばれた１種以上が用いられていてよく、より好ましくは、カルボキシビニルポリマーが用いられていてよい。

本発明の一実施態様における前記化粧料組成物は、必要に応じて適切な各種の基剤または添加剤を含有していてよく、これらの成分の種類と量は、発明者によって適宜選定されるものとする。必要に応じて許容し得る添加剤を含有していてよく、例えば、当業界においては通常の防腐剤、色素、添加剤などの成分を更に含んでいてよい。防腐剤としては、具体的にフェノキシエタノール（Ｐｈｅｎｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ）または１,２−ヘキサンジオール（１,２−Ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ）などが挙げられ、香料としては、人工香料などが挙げられる。

また、本発明の化粧料組成物は、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスからなる群より選ばれた組成物を含んでいてよい。その他添加していてよい配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。

なお、その他添加していてもよい配合成分は、これらに限定されるものではなく、また、前記いずれの成分も本発明の目的及び効果を損なわない範囲内で配合可能なものとする。

次いで、下記の実施例、比較例、参考例、製造例、及び試験例を通じて本発明をより具体的に説明する。なお、下記の実施例、比較例、参考例、製造例、及び試験例は、本発明についての理解を助けるために例示したものに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がこれらに限定されるものではない。

［製造例１］有効成分の抽出
緑茶の葉に傷を付け、それをカルス誘導用培地（表１）にて培養してカルスを誘導した。培養１５日後にカルスが誘導され始め、培養３０日経過後にカルス層が分離し始めた。カルス層を分離した後、生長率の良い白くて砕けやすい部分を誘導培地と同一の新しい培地で２１日ごとに継代した。このとき、カルス誘導用培地の組成は、下記の表１のとおりである。培地に生長調節剤としてオーキシン（Ａｕｘｉｎ）を１〜３ｍｇ／Ｌの濃度で添加した。培養は２５±１℃に調節された暗室で実施された。

前記のようにカルスを誘導して選別した後、選別されたカルスを固体培地（Ｇｕｃｈｅｆａ社製）で培養して、安定して生長する幹細胞株を選別した。本発明において用いた固体培地はＭＳ培地であって、他の培地に比べて、ＮＯ_３−Ｎ、ＮＨ_４−Ｎ、及びＫの含量が非常に高い培地である。固体培地の組成は、下記の表２のとおりである。

選別された幹細胞株を糖及び成長ホルモンが含有された懸濁培養液（表３）で培養した。下記の表３は、幹細胞株を培養した懸濁培養液の組成を表すものである。

前記懸濁培養液で培養された細胞から外部の液相で排出された種々の活性成分の混合物を得た。更に培養された細胞の細胞壁を破壊することで溶出された成分も一緒に収得した。

緑茶サポニンの場合、緑茶種の皮から抽出して酵素で処理して収得し、緑茶ポリフェノールの場合、緑茶葉を温水で抽出、濃縮する過程を繰り返して高純度ＥＧＣＧを収得した。

［試験例１］コラーゲン合成促進効果
ヒト繊維芽細胞を２４ウェル（ｗｅｌｌ）平板培養器で培養した後、それぞれ１０ｐｐｍ（参考例１）、５ｐｐｍ（参考例２）、１ｐｐｍ（参考例３）、０ｐｐｍ（比較例１）の緑茶幹細胞から抽出した抽出混合物が含まれた培地に置き換えた。培養３日目に１０％のウシ胎児血清が含有された培地であるＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）を各ウェル当たり０．５ｍｌずつ添加した後、Ｌ［２,３,４,５^−３Ｈ]−プロリン１０μＣｉを添加した。２４時間経過後、各ウェルに入っている培地と細胞を掻き集めて５％卜リクロロ酢酸（Ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＴＣＡ）溶液に入れて水洗した後、比較例１の試験管は４℃で保管し、フェニルプロパノイドの各濃度別の参考例及び実施例の試験管にはＩ型コラゲナーゼ（ｔｙｐｅ Ｉ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）１ｕｎｉｔ／μｌを入れて、３７℃で９０分間培養した。

その後、すべての試験管に５０％トリクロロ酢酸を０．０５ｍｌずつ添加して、４℃で２０分間放置した後、それぞれ１２,０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、それぞれの上澄液と沈殿物を液体シンチレーション計数器（ＬＳＣ：Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ）でＣＰＭ（Ｃｏｕｎｔ Ｐｅｒ Ｍｉｎｕｔｅ）値を得て、次式１に基づいて、参考例、比較例に対してコラーゲン生合成値（ＲＣＢ：Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を測定し、その結果を下記の表４に表した。

表４に見られるように、緑茶幹細胞から抽出した成分混合物が繊維芽細胞のコラーゲン生合成を濃度依存的に増加させることが分かった。

下記の表５は、緑茶サポニン（実施例１）、緑茶ポリフェノール（実施例２）、緑茶幹細胞と緑茶サポニンとの混合物（実施例３）、緑茶幹細胞と緑茶ポリフェノールとの混合物（実施例４）、緑茶サポニンと緑茶ポリフェノールとの混合物（実施例５）、緑茶幹細胞と、緑茶サポニン、及び緑茶ポリフェノールとの混合物（実施例６）に対して、コラーゲン生合成値（ＲＣＢ：Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を測定し、その結果を表したものである。

［試験例２］遺伝子活性化効果
皮膚細胞における緑茶幹細胞、緑茶サポニン、緑茶ポリフェノールのそれぞれの効能を確認するために、正常ヒトケラチノサイト（Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ、ＮＨＫ）と正常ヒト繊維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、ＮＨＦ）を用いた。繊維芽細胞の場合、繰り返しの継代培養を通じて細胞老化を誘発した複製セネッセンスモデル（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｍｏｄｅｌ）を用いて評価した。

遺伝子として、ケラチノサイトの場合はフィラグリンとインターロイキン―６、繊維芽細胞の場合はカタラーゼを選定した。

緑茶幹細胞、緑茶サポニン、緑茶ポリフェノールは、各対象細胞別に細胞毒性を評価した後、８０％以上の細胞生存を見せる濃度以下で試験を行った。各細胞に対して緑茶幹細胞、緑茶サポニン、緑茶ポリフェノールをそれぞれ処置してから２４時間後に細胞を収去し、１０ｍｌのリン酸塩緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）で細胞を２回洗浄し、トリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて細胞中の全ＲＮＡ（ｔｏｔａｌ ＲＮＡ）を分離した。分離したＲＮＡをキアゲン社製のＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いてもう１回精製した後、先の分離されたＲＮＡから、インビトロジェン社製の逆転写キット（Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（ＲＴ） ＩＩ ｋｉｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いてｃＤＮＡを合成し、リアルタイム逆転写重合酵素連鎖反応（ｒｅａｌ ｔｉｍｅ−ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｑ−ＲＴ−ＰＣＲ）でフィラグリン、インターロイキン―６、カタラーゼのそれぞれの遺伝子発現変化を定量的に分析した。遺伝子発現パターンの変化はアプライドバイオシステム社製のタックマン遺伝子発現システム（ＴａｑＭａｎ（登録商標） ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＦｏｒｓｔｅｒＣｉｔｙ、ＣＡ）を用いて評価した。用いられたプライマーは、フィラグリン：Ｈｓ００８５６９２７_ｇ１；インターロイキン―６：Ｈｓ００１７４３６０_ｍ１；カタラーゼ：Ｈｓ００１５６３０８_ｍ１である。各細胞においてフィラグリン、インターロイキン―６、カタラーゼが発現した量をＲｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲで確認した結果を表６に表した。

表６に見られるように、緑茶幹細胞培養産物（実施例４）、緑茶サポニン（実施例５）、緑茶ＥＧＣＧ（実施例６）が皮膚核心遺伝子の発現を増加させることを確認することができた。緑茶幹細胞の場合、ＩＬ−６遺伝子の発現を特に増加させ、緑茶サポニンの場合、カタラーゼ遺伝子の発現を特に増加させ、緑茶ＥＧＣＧはフィラグリン遺伝子発現量の増加に特に有効であった。そして、これらの成分を組み合わせる実施例７ないし実施例１０の実験を行なっており、２種以上の成分を組み合わせた場合、シナジー効果を示し、特に３種をいずれも組み合わせた実施例１０の場合、３種の遺伝子をいずれも大きく活性化させることで最適のアンチエイジング効能を示すことを遺伝子レベルで確認することができた。表６における遺伝子発現量を図１に示した。

［試験例３］皮膚安全性テスト
本発明に係る抗老化用化粧料組成物の皮膚に対する安全性を評価するために、剤形例２の皮膚に対する刺激度合いを測定した。

測定は、忠北大学校皮膚科病院で実施した。平均年齢３３．２歳の健康な成人３０人を対象にして、背中部位に４８時間貼り付け、２４時間にかけて皮膚反応を調べてみた。皮膚刺激の評価基準は、ＣＴＦＡガイドライン（１９８１年）とＦｒｏｓｃｈ ＆ Ｋｌｉｇｍａｎの判定基準を参考にした。

本発明に係る化粧料組成物としての下記の剤形例２を貼り付けた成人３０人のいずれもが皮膚刺激を起こさなかった。このことから、本発明は皮膚安全性に極めて優れる組成物であるものと判断することができる。

以下、本発明に係る化粧料組成物の剤形例について説明するが、下記に例示した剤形に限られず、その他の様々な剤形として応用可能であり、また、かかる剤形例は本発明を限定するためのものではなく、単に具体的に説明するためのものに過ぎない。

［剤形例１］柔軟化粧水（スキンローション）
下記の表７に表した組成にて通常の方法により柔軟化粧水を製造した。

［剤形例２］栄養化粧水（ミルクローション）
下記の表８に表した組成にて通常の方法により栄養化粧水を製造した。

［剤形例３］栄養クリーム
下記の表９に表した組成にて通常の方法により栄養クリームを製造した。

［剤形例４］マッサージクリーム
下記の表１０に表した組成にて通常の方法によりマッサージクリームを製造した。

［剤形例５］パック
下記の表１１に表した組成にて通常の方法によりパックを製造した。

本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者であれば、前記内容を基に本発明の範疇内で種々の応用及び変形を行うことが可能であろう。

以上、本発明の特定の部分を詳しく記述したが、本発明の属する技術分野の通常の知識を有する者にとって、かかる具体的な記述は、単に好適な具現例に過ぎず、本発明の範囲がこれらに制限されるものではないことは明らかである。よって、本発明の実質的な範囲は、特許請求の範囲及びそれの等価物によって定義されるものとする。

Claims (8)

1. 緑茶サポニン、緑茶ポリフェノール及び緑茶幹細胞培養産物を有効成分として含有する化粧料組成物であって、
   前記緑茶ポリフェノールは、緑茶葉から抽出されたＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌoｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）であり、
   皮膚保湿用若しくは皮膚バリア強化用、又は皮膚美白用若しくは皮膚の色素沈着抑制用であることを特徴とする、化粧料組成物。
2. 前記緑茶サポニンは、緑茶種の皮から抽出して糖残基を除去してなることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。
3. 前記緑茶サポニンまたは緑茶ポリフェノールは、組成物の総質量を基準にして、それぞれ０．００１〜１質量％の範囲で含有されることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。
4. 前記幹細胞は、カルス由来のものであることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。
5. 前記幹細胞培養産物は、幹細胞株、そのライセート、その抽出物、及びその培養液からなる群より選ばれる一種または二種以上の混合物であることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。
6. 前記幹細胞培養産物は、組成物の総質量を基準にして、０．０１〜１０質量％の範囲で含有されることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。
7. フィラグリン（Ｆｉｌｌａｇｒｉｎ）遺伝子を活性化させることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。
8. インターロイキン―６（ＩＬ―６）遺伝子を活性化させることを特徴とする請求項１に記載の化粧料組成物。

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