KR102154927B1

KR102154927B1 - 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 기능성 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102154927B1
Application number: KR1020190046803A
Authority: KR
Inventors: 정병헌; 이정욱; 이유나
Original assignee: 세라노틱스(주)
Priority date: 2019-04-22
Filing date: 2019-04-22
Publication date: 2020-09-11

Abstract

본 발명은 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 기능성 화장료 조성물로써, 더욱 상세하게는, 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유함으로써, 항노화, 항산화, 항염, 피부장벽 및 보습 개선, 피부 주름 개선, 피부 미백, 자외선으로부터의 피부 보호, 여드름 개선, 피부 활력 증진, 피지 억제, 모공수축 등의 용도를 가진 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

Description

클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 기능성 화장료 조성물{A cosmetic composition for anti-aging, anti-oxidant, skin regeneration comprising chlorogenic acid, ferulic acid, resveratrol, and Streptococcus thermophilus fermented extract}

인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 된다. 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 트러블이 자주 발생하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

유해산소라고도 하는 활성산소종 (ROS, Reactive oxygen species)은 호흡 등과 같은 생리작용에 의해 세포에서 생성되는 독성물질로 끊임없이 생산되고 소멸하며, 정상적인 상태에서는 항산화 인자와 균형을 이루면서 3~5 % 정도로 존재한다. 미토콘드리아와 같은 세포 내 소기관의 정상적인 대사 및 세포질 내 일부 효소인 Peroxisome, NOX(NADPH oxidase) 등에 의해 생성되는 ·O₂,H₂O₂,·OH 등을 일컫는 이들은 생리계 내에서 세균을 살균하는 생체 방어 작용을 하는 장점도 있지만, 과다한 생성 혹인 항산화 인자의 결핍으로 인해 산화력을 증가시켜 생물 분자를 공격하기 때문에 세포나 조직의 기능 저하와 사멸 혹은 괴사가 일어나, 암, 신경계 질환 등을 야기한다.

또한 외적으로 자외선으로 인한 활성산소종 생성 유발은 피부세포와 조직에 손상을 주어 염증반응을 일으킬 뿐만 아니라 막의 지질과산화, DNA 손상 등을 초래하고, 피부 진피층의 주요한 구성인자인 collagen과 elastin을 감소시켜 피부노화를 일으키는 것으로 알려져 있다. 이와 같은 피부 세포의 건강을 위해서는 '산화 환원 항상성(redox homeostasis)'의 유지가 매우 중요하다. 활성산소가 여러 질병 뿐 아니라 피부노화의 주요원인으로도 밝혀짐에 따라 최근에는 활성산소 발생에 원인이 되는 NOX(NADPH oxidase)로부터 세포 노화를 예방하고 지연시키는 것이 중요한 연구 과제로 여겨지고 있다.

대한민국등록특허 10-1863297

본 발명자들은, 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물이 NOX 활성 억제에 의한 항산화 및 항염 효과를 나타내고, 또한, 피부장벽보호, 주름개선, 보습, 미백, 자외선으로부터의 피부 보호, 피부 활력 증진, 항노화, 피부 여드름 개선 효과 등 다양한 피부 개선 효과를 나타냄으로써, 기능성 화장료 소재가 될 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유함으로써, 항노화, 항산화, 항염, 피부장벽 및 보습 개선, 피부 주름 개선, 피부 미백, 자외선으로부터의 피부 보호, 여드름 개선, 피부 활력 증진, 피지 억제, 모공수축 등의 용도를 가진 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은, 상기 피부 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는데 있다.

상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 기능성 화장료 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명에 있어서, 클로로겐산(Chlorogenic acid)은 화학식은 C₁₆H₁₈O₉이고 분자량은 354.31이다. 카페인산과 퀸산의 에스테르 결합으로 구성된 천연 화합물로 리그닌 생합성에서 중요한 중간체이다. 식물계에 널리 분포하며, 특히 커피콩 속에 다량(약 7~10%) 포함되어 있는 폴리페놀 화합물의 일종이다. 산화 방지제로 알려진 이 화합물은 식물이 스트레스를 받으면 발생하는 다양한 활성 산소와 반응할 뿐 아니라 강력한 에너지를 가진 UV를 흡수하여 스트레스에 대한 식물의 저항성을 높여준다. 병원균에 의해 식물이 감염되었을 경우도 클로로겐산이 많을수록 저항성이 올라간다. 클로로겐산은 생체 내에서 과산화지질의 생성 억제효과, 콜레스테롤 생합성 억제효과 및 항산화 작용, 항암작용이 있다. 또한 식사 후 혈액으로 글루코스 방출을 느리게 하고 심장질환을 예방하며, 글리코겐 및 글루코스-6-인산의 간 내부 농축을 증가시키고 혈당수치를 감소시키는 것으로 나타났다. 다른 연구에서는 무기질의 분배를 개선시키고, 혈장 및 간의 지방을 감소시키며, 글루코스 내성을 개선시키는 것으로 나타났다.

본 발명에 있어서, 페룰산(Ferulic acid)은 화학식은 C₁₀H₁₀O₄이고 분자량은 194.18이다. 페놀성 하이드록시기(-OH), 이중결합, 카복실기(-COOH) 등을 작용기로 함유하기 때문에 각종 생리활성물질의 원료가 될 수 있는 물질이다. 페룰산은 자연으로부터 얻을 수 있으며 주로 식물에서 유리 산 혹은 에스테르 상태로 씨와 잎과 껍질에 존재한다.

본 발명에 있어서, 레스베라트롤 (Resveratrol)은 화학식은 C₁₄H₁₂O₃이고 분자량은 228.25이다. 스틸벤(stilbene)의 한 종류로서 식물에서 효소인 스틸벤 합성효소(stilbene synthase; STS) 덕분에 생성하며, 2개의 구조상 이성체로 존재하는 폴리페놀 계이다. 오디, 땅콩, 포도, 라스베리, 크렌베리 등의 베리류 등을 포함한 많은 식물에서 발견되고 있는데, 식물이 스트레스를 받을 때 분비되는 피토알렉신(phytoalexin)으로서 특히 포도는 곰팡이의 공격을 받으면 자신을 보호하기 위한 방어물질로 강력한 항균 작용을 하는 레스베라트롤을 분비하기 때문에 다른 식물체보다 더 많이 발견된다. 레스베라트롤은 항암 및 강력한 항산화 작용을 하는 것으로 알려져 있으며, 혈청 콜레스테롤을 낮춰 주는 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

본 발명에 있어서, 스트렙토코쿠스 테모필루스 발효물은 본 기술분야에 알려져있는 발효 기술을 이용하여, 적절하게 배양될 수 있으며, 예를 들어, 스크렙토코쿠스 테루모필루스는 생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures)로부터 분양받아 사용가능하며, 배지조성으로써, 수련(Nymphaea teragona) 피토플라센타배양추출물(즉, 수련 태좌배양추출물) 을 함유한 배양 배지를 사용하는 것을 특징으로 한다. 일 예로, Lactobacilli MRS Broth (10 g Proteose Peptone No. 3, 10 g Beef Extract, 5 g Yeast Extract, 20 g Dextrose, 1 g Polysorbate 80, 2 g Ammonium Citrate, 5 g Sodium Acetate, 0.1 g Magnesium Sulfate, 0.05 g Manganese Sulfate, 2 g Dipotassium Phosphate) (Cat no. DF0881) 55 g을 수련피토플라센타배양추출물 1 L에 넣고 혼합한 후 121 ℃에서 15분 동안 가열하여 멸균처리한 배지를 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 배양 배지에 함유되는 수련피토플라센타배양추출물의 양은 배지 조성물 전체 100중량부에 대하여 50중량부 내지 100 중량부를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.

예를 들어, 배지 조성물 100중량부에 대하여 100중량부로 수련피토플라센타배양추출물을 함유하는 경우, 정제수없이 상기 수련피토플라센타배양추출물로 배지 조성물을 넣는 것이고, 50중량부로 함유하는 경우는, 예를 들어, 정제수 500ml에 수련피토플라센타배양추출물 500ml을 섞어서 배지 조성물을 사용하는 것이다. 이러한 배지에, 함유될 수 있는 필수 성분으로는, Proteose Peptone, Beef Extract, Yeast Extract, Dextrose 등이 있다.

이러한 배양 배지 조성물에, 구체적으로 Streptococcus thermophilus 균주를 2 일동안 전배양하고, 0.5 %(v/v) 농도로 접종하여 100 rpm으로 교반하면서 37 ℃에서, 72시간 동안 배양하여 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물을 수득할 수 있다. 이러한 발효물은 수련태좌세포배양추출물을 함유할 수 있다.

필요에 따라, 상기 수득한 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물을 mesh로 여과한 다음 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 수련피토플라센타배양추출물은 식물 조직으로부터 즉, 구체적으로 수련의 태좌 식물 세포를 분리하여 배양한 다음 추출하여 추출물을 얻고, 이러한 추출물을 미생물 발효시킨 발효물을 의미한다. 구체적으로, 식물의 태좌(Placenta)는 동물 유래의 태반과 같이, 종자 육성을 주관하는 중요한 부위로, 암술의 씨방(자방, Ovary)안에서 밑씨가 붙는 부분이다. 보통 씨방을 형성하는 심피(carpel)의 가장자리에 있는데, 때로는 심피의 중맥에도 있다. 또 씨방의 기저나, 기저로부터 씨방 안에 직립하는 기둥 모양으로 생길 때도 있다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 수련태좌배양추출물을 분말화하거나, 냉수추출법, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득한 추출물을 의미한다. 본 발명에서 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 추출, 열수 추출 등이 있다. 여기서, 열수추출의 경우, 열탕증류기에서 8~48시간동안, 80~ 100℃ 로 가열하여 열수 추출물을 얻는다. 냉수 추출의 경우, 예컨대, 냉수 (15-25℃)에 상기 태좌조직 배양물 자체 또는 그것의 건조된 분말을 혼합하여 3일동안 추출하여 냉수추출물을 얻는다. 또는, 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하는 방법으로 제조될 수 있다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 특히, 본 발명에 있어서는 에탄올 추출물, 바람직하게는 20-50% 에탄올 추출물, 일 구체예로써 50% 에탄올 추출물이 바람직하며, 추출방법은 50% 에탄올에 섞은 후 3일동안 교반하여 얻는다. 본 발명에 있어서, 상기 추출물은 농축, 또는 희석하여 사용할 수 있고, 추출물의 증류액을 사용할 수도 있다.

본 발명에 있어서, 피부개선용이란, 피부 보호 및 피부 상태 개선, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 피부보습, 피지분비억제, 여드름개선, 모공축소, 피부 보호 및 피부의 염증 반응의 완화, 항염, 피부 장벽 기능, 보습 개선, 피부 활력 증진, 자외선으로부터의 피부 보호, 항산화, 항노화 등을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 화장료 조성물로써 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, NOX 억제 활성 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서, 상기 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물은 그 함량에 제한없으나, 조성물의 총 중량 100중량부에 대하여 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물은 예를 들어, 0.1 내지 20 중량부로 함유할 수 있다.

일 예시로, 클로로겐산은 1 내지 50 mg/L (0.001 ~ 0.05 중량부), 페룰산은 1 내지 20 mg/L (0.001 ~ 0.02 중량부), 레스베라트롤은 1 내지 20 mg/L (0.001 ~ 0.02 중량부) 이다.

일 예시로, 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물 100중량부에 대하여, 클로로겐산, 페룰산 및 레스베라트롤은 각각 0.001 내지 0.05 중량부, 0.001 내지 0.02 중량부, 0.001 내지 0.02 중량부, 각각, 바람직하게 0.01 내지 0.03 중량부, 0.01 내지 0.02 중량부, 0.01 내지 0.02 중량부 일 수 있다.

본 발명의 피부개선용 화장료 조성물의 제조방법은 다음의 단계를 포함한다:

(a) 수련 조직으로부터 태좌세포를 분리하여 배양한 다음 추출하고, 얻어진 추출물을 배양 배지에 함유하여 스트렙토코쿠스 테르모필루스를 발효시켜 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 제조하는 단계; 및

(b) 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 상기 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 혼합하여 피부개선용 조성물을 제조하는 단계.

본 발명에 있어서, 상기 발효물은 자체를 사용하거나, 발효물을 여과하여 사용하거나, 발효물을 파쇄하여 사용하거나, 발효물을 건조시켜 분말화한 다음, 정제수에 녹여 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 제조방법에 있어서, 상기 (a)단계에서, 구체적으로는 태좌세포 배양은 기술 분야에서 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한 없이 사용가능하다. 일반적으로 MS배지, B5배지 등을 주로 사용하고, 일 예로, MS배지의 조성(1L기준시)은 NH₄NO₃ 1650 mg, KNO₃ 1900 mg, CaCl₂.2H₂O 440 mg, MgSO₄.7H₂O 370 mg, KH₂PO₄ 170 mg, KI 0.83 mg, H₃BO₃ 6.2 mg, MnSO₄.4H₂O 22.3 mg, ZnSO₄.7H2O 8.6 mg, Na₂MoO₄.2H₂O 0.25 mg, CuSO₄,5H₂O 0.025 mg, CoCl₂.6H₂O 0.025 mg, FeSO₄.7H₂O 27.8 mg, Na₂EDTA.2H₂O 37.3 mg, Myoinositol 100 mg, Nicotinic acid 0.5 mg, Pyridoxine-HCl 0.5 mg, Thiamine-HCl 0.5 mg, Glycine 2 mg, Sucrose 30000 mg 이다.

본 발명에 있어서, 상기 (b)단계에서 있어서, (a)단계를 통해 얻어진 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물, 클로로겐산, 페룰산 및 레스베라트롤 함유 조성물을 적절한 형태의 화장료 조성물로 제조할 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장료 조성물이 제조되는 후술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

또한, 종래에 잘 알려져 있는 생리활성성분이나 다른 태좌세포 배양물 또는 추출물을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 (소프트 캅셀, 하드 캅셀) 제형 등의 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서의 피부는 얼굴 뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 화장료 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 제조할 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 특히, NOX 활성 억제 효능을 가지며, 이를 통해, 피부 염증 완화 등과 같은 항염, 항산화, 항노화, 미백, 주름개선, 피부 활력 증진, 피부 보습, 피부 장벽 기능 개선 등의 기능을 가진 화장료 조성물로써, 다양한 기능성 화장품의 소재로 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 조성물의 NOX 활성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명에 따른 조성물의 생체시계 조절에 관여하는 효과를 확인한 결과이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

실시예 1: 본 발명에 따른 조성물 ("Thera-Nox") 제조

1.1 수련(Nymphaea tetragona) 식물 태좌 세포배양

수련(Nymphaea tetragona) 식물태좌세포배양을 위해서, 꽃봉오리를 70 % 에탄올 및 0.5 % sodium hypochlorite로 5분간 멸균 소독하고, 멸균수로 여러 차례 씻어줬다. 조심스럽게 핀셋을 이용하여 씨방벽을 벗겨내고, 태좌세포를 분리하여 5% Sucrose가 포함된 MS 배지(Duchefa, Cat# M0256)에서 2~ 3주간 배양 및 증식하였다.

증식된 수련의 태좌세포를 수확하여 깨끗한 티슈로 충분히 수분을 제거한 후 60 ℃로 2일 동안 건조기에서 건조한 후 100g을 용기에 담고, 정제수 10 L를 넣은 후, 열탕증류기에서 8 ~ 48시간동안, 80 ~ 100℃ 로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, mesh로 여과하여 고형분을 제거하고, 수련태좌세포배양추출물을 제조하여 사용하였다.

1.2 수련(Nymphaea tetragona) 식물태좌배양추출물을 함유한 배지에서 배양된 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물( Streptococcus thermophilus) 제조

본 조성물에 사용된 Streptococcus thermophilus 균주는 생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures)로부터 분양받아 사용하였다.

Difco사로부터 입수한 Lactobacilli MRS Broth (10 g Proteose Peptone No. 3, 10 g Beef Extract, 5 g Yeast Extract, 20 g Dextrose, 1 g Polysorbate 80, 2 g Ammonium Citrate, 5 g Sodium Acetate, 0.1 g Magnesium Sulfate, 0.05 g Manganese Sulfate, 2 g Dipotassium Phosphate) (Cat no. DF0881) 55 g을 수련태좌배양추출물 1 L에 넣고 혼합한 후 121 ℃에서 15분 동안 가열하여 멸균처리하여 사용하였다.

구체적으로 Streptococcus thermophilus 균주를 상기의 배지에서 2일동안 전배양하고, 0.5 %(v/v) 농도로 접종하여 100 rpm으로 교반하면서 37 ℃에서, 72시간 동안 배양하여 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물을 수득하였다. 수득한 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물을 mesh로 여과한 다음 본 조성물로 사용하였다.

1.3 본 발명의 조성물의 제조

Merck사로부터 클로로겐산(Chlorogenic acids) (Cat. C3878), 페룰산(Ferulic Acid) (Cat. 1270311), 레스베라트롤(Resveratrol) (Cat. R5010)를 확보하였다. 상기의 1.2에서 준비된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물 100g에 30 mg의 클로로겐산, 10 mg의 페룰산 및 10 mg의 레스베라트롤을 멸균된 정제수 1 L에 용해한 뒤, 필터하여 본 발명의 조성물로 ("Thera-Nox^TM") 사용하였다.

실험예 1: 피부세포 배양을 통한 무자극 효과 확인 시험

먼저 실시예 1의 본 발명에 따른 조성물인 Thera-Nox^TM 가 피부세포에서 독성에 의한 자극이 있는지 알아보기 위해, 세포생존률을 측정하는 MTT assay를 진행하였다.

이를 위하여 HaCaT 세포(keratinocyte, 각질형성세포), Detroit 세포(fibroblast, 섬유아세포), B16F1 세포(melanocyte, 멜라닌형성세포)를 각각 10 % FBS(Fetal Bovine Serum), 1 % Antibiotic-Antimycotic이 함유된 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle's Medium)과 함께 96 well plate에 분주하고, 5 % CO₂, 37 ℃의 조건인 항온기에서 24시간 배양하였다. 이 후 정제수를 첨가한 대조군과 시험물질인 조성물을 최종 0.1, 1, 5, 10, 20 %인 농도가 되도록 세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. 이어 5 mg/mL MTT(3-(4, 5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) 용액을 각 well에 4 μL씩 첨가하고, 4시간 동안 배양하여 반응시켰다. 배양액을 제거한 다음 DMSO(Dimethyl sulfoxide) 용액 100 μL씩 첨가하여 세포를 용해시킨 후, spectrophotometer를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물은 0.1~20 % 처리 농도에서 대조군 대비 세포생존률이 모두 95 % 이상으로 피부세포 내 독성을 일으키지 않고, 특정 처리 농도에서는 약간의 증식이 있었다. 이는 자극의 유발 가능성이 낮고 안전한 물질임을 의미하여 피부세포에 본 발명의 조성물이 무해하다는 효과를 확인할 수 있었다.

실험예 2: DPPH 자유 라디칼 소거에 따른 항산화 효과 확인 시험 ( in vitro test)

본 발명에 따른 조성물의 항산화효과를 살펴보기 위하여, DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)에 의한 자유 라디칼 소거능을 조사하였다.

이를 위하여 에탄올 0.4 mL에 0.1 mM DPPH 용액 0.5 mL, 대조군과 시험물질인 조성물을 최종 농도 1~50 %가 되도록 0.1 mL씩 첨가하였다. 이때 양성대조군으로는 Ascorbic acid 20 μg/mL를 사용하였다. 각 시료들을 혼합하여 실온 암조건에서 30분간 반응시킨 후, 515 nm에서 흡광도 측정하여 DPPH 라디칼 소거능을 확인하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물이 대조군 대비 처리 농도 의존적으로 자유 라디칼 소거능이 증가하였기 때문에 항산화 효과가 있을 것으로 확인하였다.

실험예 3: NOX 활성 억제에 따른 항산화 및 항염증 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 항산화와 항염증 효과를 살펴보기 위하여, 두 반응에 모두 관여하는 NOX(NADPH oxidase)의 활성 억제에 의한 NADPH 감소 양상을 알아보았다.

이를 위하여 RAW264.7 세포(macrophage, 대식세포)를 10 % FBS, 1 % Antibiotic-Antimycotic이 함유된 RPMI-1640 배지와 함께 6 well plate에 분주하고, 5 % CO₂, 37 ℃의 조건인 항온기에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물 1 %, 5 %를 세포에 처리하고, 2시간 동안 선 배양하였다. 이때 양성대조군으로는 DPI(Diphenyleneiodonium) 5 μg/mL를 사용하였다. 이어 NOX의 활성 증가를 위해 10 μg/mL PMA(Phorbol-12-Myristate-13-Acetate)를 5분 동안 처리하고, 추가로 85 μg/mL NADPH를 첨가하여 340nm에서 30분 동안 시간대 별로 흡광도를 측정하였다

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물을 처리한 세포에서는 시간(분)이 경과함에 따라, 대조군(정제수) 대비 NOX의 활성화를 억제하여 NADPH의 양을 감소를 지연시켰기 때문에 항산화 효과가 있음을 확인하였고, 뿐만 아니라 항염증 효과도 있을 것으로 확인하였다.

실험예 4: NOX2와 iNOS 발현 감소에 따른 항염증 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 항염증 효과를 살펴보기 위하여, 염증 반응에 관여하는 NOX2(NADPH oxidase 2)와 iNOS(Inducible nitric oxide synthase)의 발현양 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이후 UVB 조사를 통해 염증반응을 유도하고, 대조군과 시험 물질인 조성물 1 %를 세포에 처리하고, 4시간 동안 추가 배양하였다. 이때 조성물 내 포함된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물, 30 mg/L 클로로제닉애씨드(클로로겐산), 10 mg/L 페룰릭애씨드(페룰산) 및 10 mg/L 레스베라트롤 단일 물질 4종류도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. NOX2와 iNOS의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^TM cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^TM SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; Cat. QT01192646, NOX2; Cat. QT00029533, iNOS; Cat. QT01323189)이며 시료의 NOX2, iNOS mRNA 발현량은 GADPH로 정량화 되어 비교하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95 ℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물 1 %를 처리한 세포에서 대조군(UVB 처리) 대비 NOX와 iNOS의 mRNA 발현률이 감소하여 항염증 효과가 있음을 확인하였다. 단일 물질 처리에 비해서도 훨씬 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 5: AQP3과 FLG 발현 증가에 따른 피부장벽 개선 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 피부장벽 개선 효능을 살펴보기 위하여, 수분/glycerol 수송체인 AQP3와 자연보습인자로 알려진 FLG의 발현양 변화를 알아보았다.

HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과시험물질인 조성물 1 %를 세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. 이때 조성물 내 포함된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물, 30 mg/L 클로로제닉애씨드, 10 mg/L 페룰릭애씨드 및 10 mg/L 레스베라트롤 단일 물질 4종류도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. AQP3와 FLG의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^TM cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^TM SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; Cat. QT01192646, AQP3; Cat. QT00212996, FLG; Cat. QT02448138)이며 시료의 AQP3, FLG mRNA 발현량은 GADPH로 정량화 되어 비교하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95 ℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물 1 %를 처리한 세포에서 대조군 대비 AQP3과 FLG의 mRNA 발현률이 증가하여 피부장벽 개선에 효과가 있음을 확인하였다. 단일 물질 처리에 비해서도 훨씬 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 6: PIP 증가에 따른 주름 개선 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 피부 재생 및 주름 개선 효과를 살펴보기 위하여, 콜라겐의 합성의 전구체인 프로콜라겐(Procollagen Type I C-Peptide, PIP)의 생합성양을 측정하였다.

이를 위하여 Detroit551 세포를 48 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물 1 %를 세포에 처리하고, 48시간 동안 추가 배양하였다. 이때 조성물 내 포함된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물, 30 mg/L 클로로제닉애씨드, 10 mg/L 페룰릭애씨드 및 10 mg/L 레스베라트롤 단일 물질 4종류도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. 이어 배양한 배지의 상층액을 희석한 일부 20 μL를 취해 PIP EIA Kit(Takara, Cat. MK101) 내 PIP 표준물질 20 μL와 함께 각각 antibody coated microtiter plate에 넣고 100 μL의 peroxidase 표식 antibody solution을 또한 각 well에 첨가하여, 37 ℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 배지를 제거하여 200 μL의 PBS로 4회 세척한 후, 각 well에 100 μL의 substrate solution을 첨가하고 차광한 상태에서 15분간 실온에서 반응시켰다. 이 후 100 μL stop solution (1 N H₂SO₄)을 첨가하고, 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 450 nm에서 흡광도를 측정한 후 PIP 표준농도곡선을 작성하여 시료 내 PIP 양을 산정하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물 1 %를 처리한 세포에서 대조군 대비 PIP 양이 증가하여 항주름에 효과가 있음을 확인하였다. 단일 물질 처리에 비해서도 훨씬 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 7: 멜라닌 생성 억제에 따른 미백효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 미백 효과를 살펴보기 위하여, 합성된 멜라닌의 생성을 저해하는지 알아보았다.

이를 위하여 B16F1 세포를 6 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이후 대조군과 시험물질인 조성물 1 %를 세포에 처리하였고, 멜라닌 합성을 위해 α-MSH를 최종 10 nM가 되도록 같이 첨가하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 이때 조성물 내 포함된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물, 30 mg/L 클로로제닉애씨드, 10 mg/L 페룰릭애씨드 및 10 mg/L 레스베라트롤 단일 물질 4종류도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. 이어 배양액을 제거하고 PBS를 이용하여 3 회 세척한 뒤 1 N NaOH 용액 300 μL씩 첨가하여 90 ℃ 1시간 동안 세포를 용해시켰다. 세포 내 멜라닌 양은 492 nm에서 흡광도를 측정하여 구하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물 1 %를 처리한 세포에서 대조군(α-MSH 처리) 대비 멜라닌 생성을 억제함으로써 미백 효과가 있음을 확인하였다. 단일 물질 처리에 비해서도 훨씬 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 8: 자외선 자극으로부터 피부세포 보호 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 자외선 독성에 의한 피부세포 보호 효과를 살펴보기 위하여, 세포생존률의 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이후 UVB를 조사하고, 대조군과 시험물질인 조성물 1 %를 세포에 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 이때 조성물 내 포함된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물, 30 mg/L 클로로제닉애씨드, 10 mg/L 페룰릭애씨드 및 10 mg/L 레스베라트롤 단일 물질 4종류도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. 이후 자외선 유도에 의한 피부세포의 손상을 보호하는지 확인하고자 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 측정하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물 1 %를 처리한 세포에서 UVB 처리에 의해 손상된 세포 사멸을 회복시킴으로써 세포 보호 효과가 있음을 확인하였다. 단일 물질 처리에 비해서도 훨씬 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 9: PER1에 의한 생체시계 조절 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 생체시계 조절 효과를 살펴보기 위하여, 낮과 밤의 주기에 따라 발현되는 PER1 유전자의 발현양 변화를 조사하였다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 96 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 UVB를 유도한 다음, 대조군과 시험물질인 조성물 1 %, 5 %를 세포에 처리하여 8, 16, 24, 32시간 동안 추가 배양하였다. PER1의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^TM cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture (gDNA remover 포함)를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 추출한 mRNA 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^TM SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; Cat. QT01192646, PER1; Cat. QT00069265)이며 시료의 PER1 mRNA 발현량은 GADPH로 정량화 되어 비교하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95℃ 15분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

그 결과 도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물을 처리한 세포에서는 대조군(UVB 처리) 대비 시간대 별 PER1의 불규칙한 양상을 개선시켜 생체시계 조절에 관여하는 효과가 있음을 확인하여, 항노화에 우수한 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 10: 에너지 활성 증진 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 피부 에너지 활성 증진 효과를 살펴보기 위하여, 세포의 에너지 (ATP) 활성 정도를 알아보았다.

이를 위하여 Detroit551 세포를 12 well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물 1 %를 세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. 이때 조성물 내 포함된 10 % 스트렙토코쿠스 테르모필루스발효물, 30 mg/L 클로로제닉애씨드, 10 mg/L 페룰릭애씨드 및 10 mg/L 레스베라트롤 단일 물질 4종류도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. 이어 배양한 세포의 용해물을 희석한 일부 50 μL를 취해 ATP assay Kit(Abcam, Cat. ab83355) 내 ATP 표준물질 50 μL와 함께 각각 96 well plate에 넣고 50 μL의 ATP reaction mix 용액을 또한 각 well에 첨가하여 차광한 상태에서 30분간 실온 반응시켰다. 생성된 ATP 양은 570 nm에서 흡광도를 측정하여 구하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물 1 %를 처리한 세포에서 대조군 대비 ATP 양이 증가하여 에너지 활성 증진 효과가 있음을 확인하였다. 단일 물질 처리에 비해서도 훨씬 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 11: 피부 활력 증진 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 피부 활력 증진 효과를 살펴보기 위하여, BMI(Body Mass Index)가 21~27인 20~45세의 여성 피험자 20명에게 시험물질인 조성물이 포함된 제품과 포함되지 않은 제품(대조군)을 4주 간 하루 1회 샤워 후 마사지와 함께 사용하게 하였으며, 사용 전과 사용 4주 후를 비교한 효과 여부를 판단하였다. 평가 항목은 설문평가를 하여 피부 세포 활성화 및 피부 활력 증진에 대해 효과를 느꼈다고 응답한 피험자 수를 하기 표에 나타냈다.

그 결과, 본 발명의 조성물이 함유된 제품을 4주 간 사용하였을 때 피부 활력 증진을 느낀 응답자가 증가하였다. 이에 비해서 대조제품은 피부 활력 증진 효과를 거의 느끼지 못하였다.

실험예 12: 여드름 개선 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 여드름 개선 효과를 살펴보기 위하여, 여드름이 발생한 남녀 10명에게시험물질인 조성물이 포함된 제품을 아침, 저녁으로 4주 간 얼굴 전체에 고루 바르도록 하였다. 여드름 개선 효과의 판정은 피험자 본인이 느끼는 정도에 따라 하기 판정기준을 참고로 1~3점으로 시험 전 상태를 평가한 뒤, 사용 2주 후, 사용 4주 후의 여드름 치유 효과를 평가하도록 하여 그 결과를 표에 나타냈다.

<시험 전 상태의 평가>

1 = 여드름 조금 있음 2 = 여드름 약간 있음 3 = 여드름 심함

<여드름 효과 판정>

- : 효과 거의 없음, + : 약간의 효과 있음, ++ : 많이 완화, +++ : 완전히 치유됨

그 결과, 본 발명의 조성물이 함유된 제품을 4주 간 사용하였을 때 대다수 피험자들에게서 여드름 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 13: 피지 억제 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 피지 억제 효과를 살펴보기 위하여, 20~60세의 여성 피험자 10명에게 시험물질인 조성물이 포함된 제품과 포함되지 않은 제품(대조군)을 아침, 저녁으로 4주 간 얼굴 반쪽에 각각 도포하도록 하였다. 피지 억제 효과의 판정은 피부 유분 측정기(Sebum meter 810)를 이용하여 사용 전과 사용 2주 후, 사용 4주 후를 측정하였다. 지성 피부인 경우 측정값이 220 μg/cm²이상이고, 정상 피부인 경우 100

220 μg/cm²이다.

그 결과, 본 발명의 조성물이 함유된 제품을 4주 간 사용하였을 때 피부의 유분량이 확연히 감소하여 피지 억제 효과를 확인하였다. 이에 비해서 대조군은 피지 억제 효과가 상대적으로 낮은 것을 확인할 수 있었다

실험예 14: 모공 수축 효과 확인 시험 ( in vitro test)

본 발명의 조성물의 모공 수축 효과를 살펴보기 위하여, 피부를 대신할 단백질로 헤모글로빈을 사용하여 침전되는 정도에 의한 모공 수축 활성을 알아보았다.

이를 위하여 1 mg/mL 헤모글로빈 용액 2 mL에 대조군과 시험물질인 조성물 1%를 2 mL씩 가한 후, 30초 동안 진탕 혼합하였다. 이때 조성물 내 포함 된 1 mg/L의 단일 물질들인, 클로로제닉애씨드, 페룰릭애씨드, 레스베라트롤도 각각 1 %씩 같이 처리하였다. 이 후 3,500 rpm에서 10분 동안 원심분리 하여, 상등액 1 mL을 취하였다. 이어 상등액에 정제수 2 mL을 첨가하고, 407 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 본 발명의 조성물이 대조군 대비 헤모글로빈 침전 효과가 증가하였기 때문에 모공 수축 효과가 있을 것으로 확인하였다. 그리고 이는 단일 물질 처리시에 비해 우수한 효과를 나타내었다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물로,
상기 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물은
수련(Nymphaea tetragona)의 태좌세포배양추출물을 함유한 배지에서 스트렙토코쿠스 테르모필루스를 배양하여 얻은 것을 특징으로 하는
피부 개선용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 조성물은 항염인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 항노화 또는 항산화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부장벽 및 보습 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 자외선으로부터 피부 보호용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 여드름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 활력 증진용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피지억제용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 모공수축용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
다음의 단계를 포함하는 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 유효성분으로 함유하는 제1항에 따른 피부 개선용 화장료 조성물의 제조방법:
(a) 수련 조직으로부터 태좌세포를 분리하여 배양한 다음 추출하고, 얻어진 추출물을 함유한 배지에서 스트렙토코쿠스 테르모필루스를 발효시켜 발효물을 제조하는 단계; 및
(b) 클로로겐산, 페룰산, 레스베라트롤 및 상기 스트렙토코쿠스 테르모필루스 발효물을 혼합하여 피부개선용 조성물을 제조하는 단계.