JP5990403B2

JP5990403B2 - 培養皿及び培養キット

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Publication number: JP5990403B2
Application number: JP2012124818A
Authority: JP
Inventors: 陽子淡海; 益和井家; 誠杉浦; 裕子諏訪; 隆広小笠原
Original assignee: Nidek Co Ltd
Current assignee: Nidek Co Ltd
Priority date: 2012-05-31
Filing date: 2012-05-31
Publication date: 2016-09-14
Anticipated expiration: 2032-05-31
Also published as: WO2013179913A1; CN104334713A; JP2013247909A

Description

本発明は、培養皿及び培養キットに関する。

細胞や組織の培養に用いる培養容器としては、例えばφ３５ｍｍ、φ６０ｍｍ、φ１００ｍｍ、φ１５０ｍｍなどの有底円筒形状の培養皿が汎用品として市販されている。

角膜や皮膚、口腔粘膜などのシート状の培養細胞（細胞シート）では、培養細胞が培養面（培養皿の内底面）一杯になるコンフルエント状態まで培養したものが最終製品として移植に用いられる。培養面の面積が大きいほど、コンフルエント状態まで培養するのに時間がかかったり、多くの播種細胞が必要であったり、と効率が悪いため、培養面の面積は必要な細胞シートのサイズに比して大きすぎないことが望まれる。例えば、角膜ではφ２５ｍｍ程度の細胞シートが得られれば十分であるため、培養面の面積はφ２５ｍｍ程度であることが望ましい。

一方、ただ単に培養皿全体の大きさを培養面の面積に合わせて小さくしてしまうと、操作性が悪くなり落下させてしまったり、汎用品に適合するように設計された一般的な設備機器などに対応できないという不都合が生じる。こうしたことから、汎用サイズの培養皿の中に、培養面の面積に合わせた底面積を持つ円筒を配置し、その円筒内で少量の細胞を培養できるようにしたものが開発されている（特許文献１参照）。

意匠登録第１３８２４６２号公報

しかしながら、特許文献１の培養皿では、汎用品に適合するように設計された設備機器に対応できるものの、操作性に問題があった。具体的には、円筒の開口部が小さすぎて細胞シートを取り出しにくいとか、円筒内に培養液を供給しにくいという問題があった。

本発明はこのような課題を解決するためになされたものであり、汎用品に適合するように設計された設備機器に対応可能で、しかも操作性のよい培養皿を提供することを目的とする。

本発明の培養皿及び培養キットは、上述の主目的を達成するために以下の手段を採った。

すなわち、本発明の培養皿は、
内底面が培養面となる有底円筒形状で小径の絞り部と円筒形状で大径の開口部とを連結部を介して連結した皿本体と、
前記絞り部の底面の外側に設けられた支持部材と、
を備え、
前記開口部の外径及び前記支持部材の外径は、汎用の培養皿の外径と同じである。

この培養皿では、開口部の外径及び支持部材の外径が汎用の培養皿の外径と同じであるため、汎用品に適合するように設計された設備機器に対応可能である。また、小径の絞り部の内底面で培養を行うため、汎用品で培養を行う場合より小さな細胞シートが得られる。また、絞り部には大径の開口部が連結されているため、細胞シートが比較的取り出しやすいし培養液の供給を行いやすい。

本発明の培養皿において、前記支持部材は、外径が前記汎用の培養皿の外径と一致するように形成された環状の支持部材であり、前記絞り部との間に隙間が形成されているものとしてもよい。こうすれば、得られた細胞シートを培養皿ごとに輸送液に浸漬した状態で輸送を行い、輸送液から培養皿を取り出して細胞シートを操作する際などに、支持部材に輸送液が残りにくいため、輸送液の滴りなどを心配することなく操作を行うことができる。

本発明の培養皿において、前記培養皿の高さは、汎用の培養皿の高さと同じであるものとしてもよい。こうすれば、汎用の培養皿に適合するように設計された一般的な設備機器などに、より対応しやすい。

本発明の培養キットは、上述した本発明の培養皿と、該培養皿の内底面に、前記内底面の一部が露出するように載置されるキャリアと、を備え、前記培養皿の内底面は、所定の臨界温度を境にして細胞接着性と細胞剥離性とが切り替わる温度応答性ポリマーで被覆され、前記キャリアは、温度に依存しない細胞接着性を有するものである。この培養キットでは、接着依存性細胞を培養する際には、内底面を細胞接着性となる温度に維持することにより、細胞接着性を有するキャリア上だけでなく露出した内底面上でも接着依存性細胞が接着して増殖し細胞シートとなる。一方、コンフルエント状態になった時点で内底面を細胞剥離性となる温度に維持することにより、内底面から細胞シートが剥離し、キャリアのみに接着した細胞シートが得られる。細胞シートは非常に薄いため取り出しが困難であるが、この培養キットでは、キャリアを把持して培養皿から取り出せば細胞シートを同時に取り出すことができる。このように、接着依存性細胞の培養及び取り出しを容易に行うことができる。

本発明の培養キットにおいて、前記キャリアは、前記培養皿の絞り部の内径よりわずかに小径の外径を有する環状部と、該環状部の外側に設けられ、前記培養皿に前記環状部を載置したときに前記培養皿の絞り部の側壁に沿って立ち上がり該側壁の上方に一部がはみ出すようになっている耳部と、を備えたものとしてもよい。こうすれば、細胞シートの外周全体がキャリアに接着した状態で細胞シートを取り出すことができるため、細胞シートの収縮や変形などを抑制できる。また、キャリアの耳部が絞り部の側壁の上方にはみ出しているため、キャリアを把持しやすく、細胞シートをより取り出しやすい。

培養皿１０の斜視図である。培養皿１０を上から見た図である。培養皿１０を下から見た図である。図２の各切断面における端面を示す図である。培養キット１５の斜視図である。キャリア９０の説明図である。培養キット１５を用いた細胞シートの作製方法の説明図である。包装容器１００の説明図である。包装体２００の説明図である。培養皿１０から細胞シートを取り出す方法を示す説明図である。

１．培養皿
次に、本発明の好適な一実施形態について、図面を用いて説明する。図１は培養皿１０の斜視図、図２は培養皿１０を上から見た図、図３は培養皿１０を下から見た図、図４は図２の各切断面における端面を示す図である。図４（Ａ）はＡ−Ａ切断面、図４（Ｂ）はＢ−Ｂ切断面、図４（Ｃ）はＣ−Ｃ切断面に対応する。

培養皿１０は、図１〜４に示すように、皿本体２０と、支持部材６０と、架橋部７０とを備えている。この培養皿１０は、ポリスチレン樹脂製であり、全体が透明である。このため、図１〜３では、透明の奥の線も記載すべきであるが、便宜上、透明の奥の線は省略した。

皿本体２０は、絞り部３０と、開口部４０と、連結部５０とを備えている。この皿本体２０は、汎用の培養皿と高さが同じ（ここでは１２ｍｍ）である。絞り部３０は、内底面３２が培養面となる有底円筒形状に形成され、底に脚３６が設けられている。内底面３２の直径は、ここではφ２５ｍｍとなっている。この内底面３２には、温度応答性ポリマーが敷設されている。温度応答性ポリマーは、所定の臨界温度（ここでは３２℃）を境にそれより低温では細胞剥離性を示し、それより高温では細胞接着性を示すようになっている。このため、接着依存性細胞を培養する際には、内底面３２の温度を例えば３７℃程度に維持して内底面３２を細胞接着性とすることにより、内底面３２に細胞が接着して増殖していく。一方、コンフルエント状態になった時点で内底面３２の温度を例えば２０℃程度に下げて細胞剥離性とすることにより、内底面３２から細胞が剥離する。なお、温度応答性ポリマーについては、例えば特開２００３−３８１７０などに詳しく説明されているため、ここでは詳細な説明を省略する。脚３６は、汎用の培養皿の底に設けられている脚と同様、皿本体２０の底が作業台などに直接接触することによって生じる傷などを防止するためのものである。この脚３６は、内底面３２と外径が同一で９０°毎に隙間を有する環状に形成されている。開口部４０は、絞り部３０よりも大径の円筒形状に形成され、外径が汎用の培養皿の外径と同じ（ここではφ３５ｍｍ）である。連結部５０は、絞り部３０の上端と開口部４０の下端とを連結している。この連結部５０は、絞り部３０の側壁の上端からほぼ水平に外側に向けて広がり、徐々に外側上方に伸びる断面視円弧状の形状を有している。なお、本発明において、汎用の培養皿とは、φ３５ｍｍ、φ６０ｍｍ、φ１００ｍｍ、φ１５０ｍｍなどの、汎用品として市販されているものをいう。また、本発明において、汎用の培養皿と外径や高さが同じであるとは、その汎用の培養皿に適合するように設計された一般的な設備機器などに対応できる程度に同じであればよい。

支持部材６０は、環状に形成されている。この支持部材６０は、外径が汎用の培養皿の外径と同じ（ここではφ３５ｍｍ）である。また、支持部材６０の下端は、皿本体２０の脚３６の下端と高さ方向の位置が一致するようになっている。支持部材６０には、突起６２が設けられている。

架橋部７０は、皿本体２０と支持部材６０との間に９０°毎に４ヶ所設けられており、皿本体２０と支持部材６０とを架橋している。これにより、皿本体２０と支持部材６０と架橋部７０とで囲まれた隙間８０が形成されている。架橋部７０には、皿本体２０の絞り部３０と支持部材６０とを架橋する第１架橋部７２と、絞り部３０だけでなく連結部５０とも架橋する第２架橋部７４とがあり、これらが交互に配置されている。架橋部７０の底は、皿本体２０の底（脚３６を除く）と高さ方向の位置が同じである。

２．培養キット
以下では、上述した培養皿１０を含む培養キットの一例について、図面を用いて説明する。図５は、培養キット１５の斜視図であり、図６はキャリア９０の説明図である。

培養キット１５は、図５，６に示すように、培養皿１０とキャリア９０とを備えている。培養皿１０については、上記「１．培養皿」で説明したため、説明を省略する。キャリア９０は、厚さが０．１ｍｍ以下（より好ましくは０．０５ｍｍ以下）のポリエチレンテレフタレート樹脂（ＰＥＴ）製のシートであり、細胞接着面となる表面が親水処理されている。親水処理により、温度に依存しない細胞接着性を有するものとなっている。ここで、「温度に依存しない細胞接着性を有する」とは、少なくとも、培養皿１０の内底面３２に敷設された温度応答性ポリマーの臨界温度付近（プラスマイナス１０℃以内）に、細胞接着性と細胞剥離性とが明確に切り替わる温度を有さないことをいう。このキャリア９０は、培養皿１０の絞り部３０の内径よりわずかに小径の外径を有する環状部９２と、環状部９２の外側に９０°毎に設けられた４つの耳部９４とを備えている。環状部９２を培養皿１０の内底面３２に載置すると、環状部９２の内側に内底面３２の一部が露出する。耳部９４は、図６のように破線部で折り曲げて用いる。この耳部９４は、培養皿１０に環状部９２を載置したときに、培養皿１０の絞り部３０の側壁に沿って立ち上がり側壁の上方に一部がはみ出すようになっている。

３．細胞シートの作製
以下では、培養皿１０を含む培養キット１５を用いて細胞シートを作製する操作の一例について、図面を用いて説明する。図７は、培養キット１５を用いた細胞シートの作製方法の説明図である。

約１ｍｍ²の角膜輪部組織を採取した後、トリプシン処理により組織から細胞を分散し、細胞懸濁液を調製する。

培養皿１０の内底面３２にキャリア９０を敷設する（図７（Ａ））。そして、キャリア９０を敷設した内底面３２にフィーダ細胞を敷設し、細胞懸濁液を播種する（図７（Ｂ））。フィーダ細胞としては、マイトマイシンＣやＸ線照射などでの不活化処理により増殖能を抑制したマウス線維芽細胞を使用する。細胞播種後、１０ｖ／ｖ％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有ＤＭＥＭ／Ｆ１２混合培地を培養用培地として供給し、フィーダ細胞の存在下で角膜細胞を培養する。角膜細胞を継続的に培養することにより、7日程度でコンフルエント状態に達し、培養角膜細胞の細胞シートが形成される（図７（Ｃ））。コンフルエント状態に達する頃には、フィーダ細胞のほとんどは培養系から排除される。培養は、培養皿１０の内底面３２が細胞接着性を示す３７℃程度の温度条件下で行う。このため、培養キット１５を用いた培養では、培養皿１０の内底面３２が露出した部分では内底面３２に細胞が接着して増殖し、キャリア９０が敷設された部分ではキャリア９０の上面に細胞が接着して増殖する。このとき、内底面３２に接着した細胞とキャリア９０に接着した細胞とがキャリア９０の厚みを超えて結合し、一体となった細胞シートが形成される。このとき、キャリア９０の厚さが０．１ｍｍ以下であると、キャリアの厚みを超えて細胞が結合しやすい。なお、図示を省略したが、培養時には、培養皿１０に蓋を被せて培養を行う。本実施形態の培養皿１０は、開口部４０及び支持部材６０の外径が汎用の培養皿と同じφ３５ｍｍであるため、φ３５ｍｍの汎用の培養皿に適合するように設計された蓋（汎用品）をそのまま適用可能である。また、培養は、必要に応じて途中で培地交換や継代操作を行ってもよい。培養には、温度管理や培地交換などを自動で行う自動培養装置を用いてもよい。なお、こうした装置は、汎用の培養皿に適合するように設計されているものが一般的であり、そこから外れる培養皿は使用できないことが多く、専用治具を準備するなどの対策が必要となる。特に、培養皿の移動や培地交換などを培養皿を把持して行うタイプの装置では、汎用の培養皿と外径が一致しないと培養皿を把持することができず、使用できないことが多い。本実施形態の培養皿１０は、開口部４０及び支持部材６０の外径が汎用の培養皿と同じφ３５ｍｍであるため、こうした装置にそのまま適用可能である。

４．細胞シートの包装
以下では、上記「３．細胞シートの作製」で作製した細胞シートを、培養皿１０ごと包装する操作について説明する。ここでは、図８に示す包装容器１００を用いて包装する場合について説明する。

まず、包装容器１００について説明する。包装容器１００は、細胞シートを培養皿１０ごと包装して保存や輸送をするためのものであり、容器本体１１０と、アダプター１７０と、蓋体１４０とを備えている。

容器本体１１０は、輸送液などの液体を貯留可能な容器であり、側壁に複数の段差をもつコップ状の容器である。具体的には、内底面１１２から上方に向かって、第１段差部１１４、第２段差部１１６、第３段差部１１８が形成されている。この容器本体１１０の側壁には、上下方向に伸びる一対の縦溝１２４，１２５が形成されている。一対の縦溝１２４，１２５は、互いに向かい合うように形成され、内底面１１２から第１段差部１１４を経て第２段差部１１６に至っている。第３段差部１１８の外周側には、小さな段差を隔てた水平面１２０が形成されている。

アダプター１７０は、培養皿１０を容器本体１１０の内底面１１２から離間した状態で保持するためのものである。アダプター１７０は、円筒１７２と円筒１７２の上端に設けられたフランジ１７４とを備えている。円筒１７２は、その内側に培養皿１０を固定する部位であり、内径が培養皿１０の外径よりもわずかに大きくなるように形成されている。また、円筒１７２は、下端に、内側に折れ込んだ爪１８６が設けられており、培養皿１０が下方向にずれないようになっている。フランジ１７４は、凹状に湾曲しており、平面視の形状が円を２つの平行な弦で切り取った形状である湾曲部１７６と、２つの弦から垂直に立ち上がっている１対の縦壁１７８，１７９とを備えている。湾曲部１７６の外周は、容器本体１１０の第２段差部１１６の内周と略同じ形状になっている。また、湾曲部１７６の裏側には、容器本体１１０の第１段差部１１４の上面に安定して載置されるよう、水平な底面を有する載置爪１８８が設けられている。縦壁１７８，１７９は、それぞれ、流通用切欠き１８０，１８１を備えている。このアダプター１７０は、円筒１７２とフランジ１７４の両方にまたがって内外を貫通するように設けられた流通ホール１８２や、円筒１７２の下端に設けられた流通スリット１８４を備えている。なお、流通スリット１８４は、培養皿１０の支持部材６０に設けられた突起６２が引っ掛かるようになっており、培養皿１０の上方向への移動を規制する。

蓋体１４０は、容器本体１１０の開口を塞ぐものである。蓋体１４０は、底面１４２と、底面１４２の外周側に設けられた水平面１４４とを備えており、底面１４２と水平面１４４とが壁面１４６で連結されている。また、蓋体１４０は、底面１４２から隆起したつまみ１４８を備えている。底面１４２には、下に凸で線状の補強用凹部１５０が平行に複数形成されている。この蓋体１４０の外周は、容器本体１１０の第３段差部１１８の外周と略同じ形状になっている。

こうした包装容器１００を用いて、以下のように培養皿１０ごと細胞シートを包装する。まず、作製した細胞シートを洗浄液で複数回洗浄する。続いて、細胞シートを有したままの培養皿１０をアダプター１７０の円筒１７２に押し込んで固定し、このアダプター１７０を容器本体１１０内にセットする。アダプター１７０を容器本体１１０にセットすると、円筒１７２が容器本体１１０の内底面１１２と第１段差部１１４との間に入り込み、フランジ１７４の湾曲部１７６が第２段差部１１６の内周に入り込み、湾曲部１７６の底面に設けた載置爪１８８が第１段差部１１４に載置される。このとき、１対の縦壁１７８，１７９が容器本体１１０に設けられた１対の縦溝１２４，１２５と対向し、アダプター１７０と容器本体１１０との間にアダプター１７０の上側の領域と下側の領域を結ぶ通路ができる。続いて、縦壁１７８，１７９と縦溝１２４，１２５との間に形成された通路からアダプター１７０の下側の領域に輸送液を注入し、その水位が容器本体１１０の第２段差部１１６の上面の高さになるまで注入する。輸送液は、その水位がアダプター１７０の流通用切欠き１８０，１８１を超えると、流通用切欠き１８０，１８１を介してアダプター１７０の上側の領域にも入り込む。輸送液の注入時などに、培養皿１０の下方に空気溜まりができることがあるが、そうした空気は、縦壁１７８，１７９と縦溝１２４，１２５との間に形成された通路のほか、アダプター１７０に設けられた流通ホール１８２や流通スリット１８４、培養皿１０の脚３６と脚３６との間に設けられた隙間や、皿本体２０と支持部材６０との間の隙間８０などを通して、アダプター１７０の上方に抜くことができる。輸送液の注入が終了したら、蓋体１４０で蓋をする。蓋体１４０で容器本体１１０に蓋をすると、底面１４２と壁面１４６が第３段差部１１８の内周に入り込み、水平面１４４が第３段差部１１８の上面に載置され、水平面１４４の上面と水平面１２０の上面とが略面一になる。その後、包装容器１００の上方に密閉シート２１０（図中、網掛けで表示）を載置し、包装容器１００の上面に熱融着させることで、図９に示すような包装体２００を得る。密閉シート２１０は、包装容器１００からはがすときの持ち手となる耳２１２を備えている。
５．細胞シートの取り出し
以下では、上記「４．細胞シートの包装」で得られた包装体２００から移植用の細胞シートを取り出す操作について説明する。

まず、包装体２００の密閉シート２１０を包装容器１００からはがし、蓋体１４０を容器本体１１０から取り外し、容器本体１１０からアダプター１７０を取り出す。そして、培養皿１０をアダプター１７０に固定したまま、これを傾けることにより、流通用切り欠き１８０，１８１から培養皿１０内の不要な輸送液を排出する。なお、輸送液の排出については、アダプター１７０をかたむけなくても、シリンジやスポイトを使用して排出してもよい。

続いて、培養皿１０から細胞シートを取り出す。以降の操作については、図１０を用いて説明する。まず、培養皿１０を２０℃程度まで冷却することにより、培養皿１０の内底面３２を細胞剥離性とし、内底面３２と細胞シートとが直接接触している部分を剥離する。このとき、温度応答性を有さない細胞接着性のシートであるキャリア９０には、細胞シートが接着したままである。次に、キャリア９０の耳部９４を把持して、キャリア９０ごとその上に形成された細胞シートを取り出す（図１０（Ａ））。そして、細胞シートのうちキャリア９０の環状部９２の内側部分に形成された部分をメスで切り取り（図１０（Ｂ））、移植などに用いる。

以上説明した実施形態の培養皿１０では、開口部４０の外径及び支持部材６０の外径が汎用の培養皿の外径と同じφ３５ｍｍであるため、φ３５ｍｍの汎用品に適合するように設計された設備機器に対応可能である。また、培養皿１０に温度応答性ポリマーを敷設する際にも、φ３５ｍｍの汎用の培養皿に適合するように設計された設備をそのまま用いることができる。

また、φ２５ｍｍの内底面３２で培養を行うため、φ３５ｍｍの汎用品で培養を行う場合より小さな細胞シートが得られ、以下のような利点がある。上述した角膜細胞の培養では、細胞シートはφ２５ｍｍ程度であれば十分なので、φ３５ｍｍの汎用品で培養を行うと、コンフルエント状態になるまでに時間がかかったり、多くの細胞を播種したり、余分な領域に細胞シートが形成されたりする。一方、培養皿１０を用いれば、効率的に細胞シートを得ることができる。

更に、有底円筒形状の絞り部３０には大径の開口部４０が連結されているため、細胞シートが比較的取り出しやすい。この点について、開口部４０がない有底円筒形状の培養容器でも、容器の深さが浅ければ、細胞シートは容易に取り出せるようにも思われる。しかし、細胞の培養にはある程度の培養液の液量が必要であるし、操作時に培養液がこぼれないように容器の深さに余裕が必要であるため、容器を浅くすることは困難である。また、大径の開口部４０に培養液を供給すればその培養液は必然的に小径の絞り部３０に流入するため、培養面への培養液の供給が容易である。

更にまた、支持部材６０が、汎用の培養皿と外径が一致するように形成された環状の支持部材であり、絞り部３０との間に隙間８０が形成されているため、得られた細胞シートを培養皿１０ごと輸送液に浸漬した状態で輸送を行い、輸送液から培養皿１０を取り出して細胞シートを操作する際などに、支持部材６０に輸送液が残りにくい。このため、輸送液の滴りなどを心配することなく操作を行うことができる。

また、皿本体２０は、汎用の培養皿と高さが同じであり、培養皿１０は全体として汎用の培養皿と高さが同じである。このため、汎用の培養皿に適合するように設計された一般的な設備機器などに、より対応しやすい。

また、培養皿１０の内底面３２は、所定の臨界温度で細胞接着性と細胞剥離性とが切り替わる温度応答性ポリマーが敷設されており、さらに、温度に依存しない細胞接着性を有し載置したときに内底面３２の一部が露出するような形状のキャリア９０を内底面３２に載置して用いている。このため、細胞シートの培養と取り出しが容易である。また、キャリア９０は、培養皿１０の絞り部３０の内径よりわずかに小径の外径を有する環状部９２を備えているため、外周全体がキャリア９０に接着した状態で細胞シートを取り出すことができる。このため、細胞シートの収縮や変形などを抑制できる。また、キャリア９０の耳部９４が絞り部３０の側壁の上方にはみ出しているため、キャリア９４を把持しやすく、細胞シートをより取り出しやすい。

また、包装容器１００のような包装容器を用いることで、培養皿１０ごと包装して保存や輸送を行うことができる。この包装容器１００では、培養皿１０に代えて汎用の培養皿を用いることもできる。

なお、本発明は上述した実施形態に何ら限定されることはなく、本発明の技術的範囲に属する限り種々の態様で実施し得ることはいうまでもない。

例えば、上述した実施形態では、支持部材６０は環状の支持部材であり、絞り部３０との間に隙間８０が形成されているものとしたが、外径が汎用の培養皿の外径と同じであれば、これに限定されない。例えば、支持部材６０は、絞り部３０との間に隙間８０が形成されない円盤形状のものでもよいし、絞り部３０から放射状に伸びた複数の棒状部材からなるものでもよい。こうしても、汎用品に適合するように設計された設備機器に対応できる。

上述した実施形態では、培養皿１０は、ポリスチレン樹脂製としたが、これに限定されない。例えば、ポリ塩化ビニル樹脂、ポリエチレン樹脂、アクリル樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、フッ素樹脂、フェノール樹脂、尿素樹脂、エポキシ樹脂、メラミン樹脂、シリコン樹脂等の各種樹脂が使用可能である。また、培養皿１０は、細胞の状態を確認しやすいよう、全体が透明であるものとしたが、これに限定されない。例えば、絞り部３０の底が透明であれば、顕微鏡観察ができるため、それ以外の部分は透明でなくてもよい。

上述した実施形態では、開口部４０と支持部材６０の外径がφ３５ｍｍであり、内底面３２の直径はφ２５ｍｍであり、高さが１２ｍｍであるものとしたが、これに限定されない。例えば、細胞シートの寸法がφ１０ｍｍあれば十分である場合には、内底面３２の直径はφ１０ｍｍとすればよい。また、φ４０ｍｍの細胞シートが必要な場合には、内底面３２の直径はφ４０ｍｍとすればよく、この場合、例えば、φ６０ｍｍの汎用品に適合する設備に対応できるよう、開口部４０と支持部材６０の外径をφ６０ｍｍとすることができる。高さは、汎用品と同じとしてもよいし、異なるものとしてもよい。

上述した実施形態の培養皿では、内底面３２は、温度応答性ポリマーが敷設されているものとしたが、これに限定されない。例えば、温度応答性ポリマーの敷設に代えて、細胞接着性ポリマーの敷設や親水処理等の表面処理により、単に細胞接着性を付与したものでもよい。このようなものでも、角膜細胞などの接着依存性細胞を培養することができる。この場合、細胞を剥離するために酵素処理を行うことで細胞シートを剥離することができる。表面処理は、細胞接着性が得られる処理であればどのようなものでもよいが、例えば、コラーゲン、フィブロネクチン等の接着因子や温度応答性ポリマーなどの化学素材によるコーティング、イオン照射やプラズマ処理等による表面改質などが挙げられる。

上述した実施形態では、架橋部７０は、９０°毎に４ヶ所設けられているものとしたが、これに限定されない。例えば、等間隔に設けられていなくてもよいし、３ヶ所以下又は５ヶ所以上設けられていてもよい。また、皿本体２０の絞り部３０の側面と支持部材６０とを架橋する第１架橋部７２と、絞り部３０の側面だけでなく連結部５０の下面とも架橋する第２架橋部７４とを備えこれらが交互に配置されているものとしたが、第１架橋部７２だけを備えるものとしてもよいし、第２架橋部７４だけを備えるものとしてもよい。また、これらが交互に配置されていなくてもよい。なお、第１架橋部７２には培養皿１０の底に液体が滞留しにくいという利点があり、第２架橋部７４には強度を高めやすいという利点があるため、使用方法などに応じて適宜選択すればよい。また、架橋部７０の底は、皿本体２０の底（脚３６を除く）と高さ方向の位置が同じであるものとしたが、これに限定されない。例えば、脚３６の下端と高さ方向の位置が同じであるものとしてもよい。

上述した実施形態では、皿本体２０の底には脚３６が設けられているものとしたが、脚３６を有していなくてもよい。また、脚３６は９０°毎に隙間を有するものとしたが、隙間を有しなくてもよいし、隙間が等間隔に設けられていなくてもよいし、隙間の間隔が９０°でなくてもよい。

上述した実施形態では、連結部５０の形状を、絞り部３０の側壁の上端からほぼ水平に外側に向けて広がり、徐々に外側上方に伸びる断面視円弧状としたが、これに限定されない。例えば、絞り部３０の側壁の上端から開口部４０の上端に向けて緩やかなスロープ形状としてもよいし、絞り部３０の側壁の上端と開口部４０の上端の途中地点に向けて緩やかなスロープ形状とし、そこから開口部４０の上端まで垂直に屹立させた形状としてもよい。

上述した実施形態では、角膜細胞の培養を行ったが、培養する細胞はこれに限定されない。例えば、皮膚や口腔粘膜などの接着依存性細胞の培養に好適に用いることができる。また、細胞の培養以外の用途に用いてもよい。

上述した実施形態では、キャリア９０を敷設して用いたが、必ずしもキャリア９０を敷設する必要はない。また、キャリア９０は、培養皿１０の絞り部３０の内径よりわずかに小径の外径を有する環状部９２を有するものとしたが、このようなものに限定されず、キャリア９０を培養皿１０の内底面３２に載置したときに、内定面３２の一部が露出するものであればよい。また、キャリア９０は、耳部９４を９０°毎に４つの耳部９４を備えているものとしたが、耳部９４を備えていなくてもよいし、等間隔に備えていなくてもよいし、３つ以下又は５つ以上備えていてもよい。

上述した実施形態では、得られた細胞シートを包装容器１００で包装した後、取り出して用いたが、このような包装を行わなくてもよい。また、包装容器１００以外の包装容器で包装してもよい。

１０培養皿、１５培養キット、２０皿本体、３０絞り部、３２内底面、３６脚、４０開口部、５０連結部、６０支持部材、６２突起、７０架橋部、７２第１架橋部、７４第２架橋部、８０隙間、９０キャリア、９２環状部、９４耳部、１００包装容器、１１０容器本体、１１２内底面、１１４第１段差部、１１６第２段差部、１１８第３段差部、１２０水平面、１２４，１２５縦溝、１４０蓋体、１４２底面、１４４水平面、１４６壁面、１４８つまみ、１５０補強用凹部、１７０アダプター、１７２円筒、１７４フランジ、１７６湾曲部、１７８，１７９縦壁、１８０，１８１流通用切欠き、１８２流通ホール、１８４流通スリット、１８６爪、１８８載置爪、２００包装体、２１０密閉シート、２１２耳。

Claims

内底面が培養面となる有底円筒形状で小径の絞り部と円筒形状で大径の開口部とを連結部を介して連結した皿本体と、
前記絞り部の底面の外側に設けられた支持部材と、
前記皿本体と前記支持部材とを架橋する架橋部と、
を備えた培養皿であって、
前記開口部の外径及び前記支持部材の外径は、同じであり、
前記皿本体と前記支持部材と前記架橋部とで囲まれた隙間は、前記培養皿の底面側と側面側とを連通している、
培養皿。
前記支持部材は、環状の支持部材である、
請求項１に記載の培養皿。
請求項１又は２に記載の培養皿と、
該培養皿の内底面に、前記内底面の一部が露出するように載置されるキャリアと、
を備え、
前記培養皿の内底面は、所定の臨界温度を境にして細胞接着性と細胞剥離性とが切り替わる温度応答性ポリマーで被覆され、
前記キャリアは、温度に依存しない細胞接着性を有する、
培養キット。
前記キャリアは、前記内底面の一部が露出するように前記内底面に載置される環状部と、該環状部の外側に設けられ、前記培養皿に前記環状部を載置したときに前記培養皿の絞り部の側壁に沿って立ち上がり該側壁の上方に一部がはみ出すようになっている耳部と、を備えた、請求項３に記載の培養キット。