JP4572258B2

JP4572258B2 - 培養細胞シート包装体

Info

Publication number: JP4572258B2
Application number: JP2009003118A
Authority: JP
Inventors: 益和井家; 欣秀蜷川; 由紀夫森
Original assignee: 株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング
Priority date: 2009-01-09
Filing date: 2009-01-09
Publication date: 2010-11-04
Anticipated expiration: 2022-12-09
Also published as: JP2009089715A

Description

本発明は、培養細胞シート包装体及びシート挟持部材に関する。

近年、細胞や組織をインビトロ（生体外）で培養し、再び生体に適用することで治療を行う組織工学や再生医療が注目されている。殊に、患者本人やドナーの皮膚あるいは口腔粘膜等の一部を採取し、シート状に培養してから生体に適用する技術に関しては、実用化の段階に至っている。例えば、皮膚の場合、母斑、潰瘍、熱傷、刺青等の治療や、移植用皮膚を採取した採皮部等に、培養上皮（表皮）細胞シートの移植が試みられている。また、口腔粘膜の場合、歯周病や悪性腫瘍などの口腔内疾患による歯肉および粘膜組織の創傷・欠損に対する治療として、口腔粘膜上皮細胞を用いた培養細胞シートの移植が試みられている。これらの培養細胞シートは組織工学の手法を用いて作製され、上皮（表皮）細胞が５〜１０層に重層化した薄いシート状の構造となるように培養フラスコ内で培養した後、培養フラスコから剥離して移植に供されている。しかし、このような培養細胞シートの作製は培養操作が繁雑であり普通の医療機関で容易にできるわけではない。そのため、十分な培養設備が揃い、熟練した培養技術を有した大学病院などの専門施設でのみ、この培養細胞の移植治療が実施されているに過ぎない。また、培養フラスコによる輸送の場合、培養細胞シートの剥離作業を医療機関で行うことになるので、手術前に余分な手間が必要となり、術者の負担となる。

このことから、専門施設で作製された培養細胞シートが適切に包装されて安定に輸送することができれば、一般的な手術設備がある多くの医療機関で容易に適用することが可能となり、大勢の患者が培養細胞の移植治療を享受することができる。この種の培養細胞シートの包装体としては、例えば特許文献１に開示されているように、基質シートにクリップ止めした培養上皮細胞シートをトレイの窪み部の底面上に載せ、このトレイの窪み部に培養培地を入れたあとシート状のリッドによってトレイを密封したものが知られている。

特許第２７３３８００号公報

しかしながら、特許文献１の培養細胞シートの包装体では、包装時に内部に空気が残っているおそれがある。内部に空気が残存していると、運搬時の揺れ等によって培養培地が波立ったり培養培地中を気泡が移動したりして培養上皮細胞シートがズレたり欠損したりすることが懸念されるし、培養上皮細胞シートが空気に接触して劣化することも懸念される。また、基板シートにクリップ止めされた培養上皮細胞シートとリッドとの間に隙間が空いているため、運搬時に培養細胞シート包装体が揺れると培養上皮細胞シートとリッドとが衝突し、培養上皮細胞シートが損傷するおそれも懸念される。

本発明はこのような問題点を解決することを課題とするものであり、培養細胞シートが運搬時にズレたり欠損したり劣化したりするのを防止する培養細胞シート包装体を提供することを目的とする。

本発明の培養細胞シート包装体は、上述した目的を達成するために以下の手段を採用した。

即ち、本発明の培養細胞シート包装体は、
気密且つ液密な材質で構成されたトレイと、
気密且つ液密な材質で構成されたリッドと、
前記トレイと前記リッドとによって囲まれた密閉空間に空気を略完全に排除した状態で充填された液体培地と、
前記密閉空間内で前記液体培地に浸漬された培養細胞シートと
を備えたものである。

この培養細胞シート包装体では、密閉空間に充填された液体培地は空気を略完全に排除されているため、液体培地に浸漬された培養細胞シートは空気によって劣化するおそれがない。また、運搬時に培養細胞シート包装体が揺れたとしても液体培地が波立ったり液体培地中を気泡が移動したりすることがないため、培養上皮細胞シートがズレたり欠損したりするおそれもない。なお、「空気を略完全に排除した状態で充填された液体培地」における「空気を略完全に排除」とは、これらの効果を奏する程度に空気を排除しておくという意であり、完全に空気を排除する場合のほか、空気が小気泡として僅かに残存している場合も含む。

本発明の培養細胞シート包装体は、
前記培養細胞シートと前記トレイとの間にて前記トレイと接触すると共に前記培養細胞シートと部分的に接触する第１介在部材と、
前記培養細胞シートと前記リッドとの間にて前記リッドと接触すると共に前記培養細胞シートと部分的に接触する第２介在部材と
を備えていてもよい。

この培養細胞シート包装体では、培養細胞シートは第１介在部材と第２介在部材とによって液体培地内で保持されている。このため、運搬時に培養細胞シート包装体が揺れたとしても、培養細胞シートは容易に移動することはなく、培養細胞シートがリッドやトレイと衝突して損傷するというおそれがない。また、培養細胞シートと第１及び第２介在部材とは全面的に接触しているのではなく部分的に接触しているに過ぎないため、培養細胞シートが第１及び第２介在部材によってダメージを受けることもほとんどない。したがって、この培養細胞シート包装体によれば、トレイやリッドと培養細胞シートとの衝突を防止することにより、培養細胞シートを損傷なく運搬することができる。

本発明における「培養細胞シート」とは、［従来の技術］の欄で述べたような、細胞のみによって構成される単層または複数層（重層化）の培養上皮（表皮）細胞シートだけでなく、上皮（表皮）細胞がコラーゲンゲルやフィブリンゲルなどで構成されるシート状のスキャホールド（Scaffold）上で培養されたものも含む。また、コラーゲンスポンジやヒアルロン酸スポンジ等の多孔質体をスキャホールドとして線維芽細胞を播種・培養した培養真皮や、この培養真皮上に上皮（表皮）細胞層を形成した複合型培養皮膚など、シート状の細胞組込み型移植物を含む。

「トレイ」、「リッド」、「第１介在部材」、「第２介在部材」の材質は、液体培地や培養細胞シートに対して不活性なものであれば特に限定されないが、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル、テフロン（登録商標）等の合成樹脂、ヒドロキシアパタイトセラミックス、アルミナセラミックス、ガラス等から構成されたものが好適に使用される。また、「第１介在部材」や「第２介在部材」については、培養細胞シートにダメージを与えない柔軟性のあるものが好ましく、例えば前出の合成樹脂のほかシリコーンゴムなどの弾性材が使用される。

本発明の培養細胞シート包装体において、前記培養細胞シートは、平面状の支持体に支持された状態で前記第１介在部材及び前記第２介在部材に接触していてもよい。こうすれば、培養細胞シートは平面状の支持体によって補強されるため、培養細胞シートが十分な強度を有していなくても取り扱い時に破損するの防止できるうえ広げた状態で支持できるので取り扱いが容易となる。ここで、培養細胞シートを平面状の支持体に支持するにあたっては、１つの支持体の片面と培養細胞シートとを重ね合わせて支持してもよいし、１つの支持体を培養細胞シートで包み込んでもよいし、１つの支持体を折り畳みその間に培養細胞シートを包み込んでもよいし、２つの支持体の間に培養細胞シートを挟み込んでもよいし、その他にどのような方法を採用してもよい。

このように支持体に支持された培養細胞シートを用いる場合、前記支持体は創傷被覆材で形成されていてもよい。創傷被覆材で形成した支持体は培養細胞シートを支持するのに適するうえ、培養細胞シートを使用するときに支持体の支持を解く際の作業性がよい。ここで、創傷被覆材としては、例えば滅菌ガーゼ、ベスキチン（登録商標）などの生体成分被覆材、ソーブサン（登録商標）などのアルギニン酸塩被覆材、デュオアクティブ（登録商標）などのハイドロコロイドドレッシング、バイオクルーシブ（登録商標）などのポリウレタンフィルムドレッシングなどが挙げられる。このような創傷被覆材を培養細胞シートの片面を支持する支持体とした際には、移植部位に適用した後、そのまま創傷被覆材として適用することが可能である。なお、支持体は、これに限らず、培養細胞シートにダメージを与えない柔軟性のある高分子材料（例えばシリコーンゴム）で形成されていてもよい。また、コラーゲンゲル、フィブリンゲル、ゼラチン、寒天培地等をシート状にしたものや、滅菌和紙、滅菌不織布などを利用することも可能である。

また、このように支持体に支持された培養細胞シートを用いる場合、前記支持体は第１支持シートと第２支持シートとからなり、前記第１支持シートはその片面が前記培養細胞シートと重ね合わされて一体となり、前記第２支持シートは前記第１支持シートと一体化された前記培養細胞シートを包み込んだ状態で支持していてもよい。こうすれば、培養細胞シートは第１支持体によって補強されるため、培養細胞シートが十分な強度を有していなくても取り扱い時に破損するの防止できるうえ広げた状態で支持できるので取り扱いが容易となる。また、移植時の取り扱いを容易にすることを考慮すると、培養細胞シートの移植適用面（移植部位と接触する面）の反対側を第１支持シートで支持することが好ましい。この場合、培養細胞シートの移植適用面は、第１支持シートによっては被覆されないが第２支持シートにより包み込まれて被覆されるため確実に保護される。特に培養上皮（表皮）細胞シートの場合、移植適用面の細胞増殖能を有する基底層を確実に保護することができる。さらに、第２支持シートの開封部をリッド側に設けることが好ましい。この場合、第２支持シートをトレイ内に残したまま、第１シートに支持された培養細胞シートを容易に取り出すことができる。

本発明の培養細胞シート包装体において、前記第１介在部材が前記培養細胞シートに接触する位置と前記第２介在部材が前記培養細胞シートに接触する位置とは互いに対向せずずれていてもよい。両位置が対向しているとトレイ又はリッドが変形した際に培養細胞シートがその位置で挟み込まれて過大な圧力がかかるおそれがあるのに対して、両位置が対向せずずれているとトレイ又はリッドが変形したとしても培養細胞シートが挟み込まれることはなく過大な圧力がかかるおそれがないので好ましい。

本発明の培養細胞シート包装体において、前記第１介在部材は、前記トレイとは別体に成形されたものであるか又は前記トレイに一体成形されたものであり、前記第２介在部材は、前記リッドとは別体に成形されたものであるか又は前記リッドに一体成形されたものであってもよい。第１介在部材や第２介在部材がトレイやリッドに一体成形されている場合には両介在部材を個別に扱う必要がないため、包装時や包装解除時の操作性に優れている。一方、第１介在部材や第２介在部材がトレイやリッドとは別体に成形されている場合には既存のトレイとリッドを利用して本発明の効果を得ることができる。具体的には、（１）第１介在部材がトレイに一体成形され、第２介在部材がリッドに一体成形されていてもよいし、（２）第１介在部材がトレイに一体成形され、第２介在部材がリッドとは別体に成形されていてもよいし、（３）第１介在部材がトレイとは別体に成形され、第２介在部材がリッドに一体成形されていてもよいし、（４）第１介在部材がトレイとは別体に成形され、第２介在部材がリッドとは別体に成形されていてもよい。

本発明の培養細胞シート包装体において、前記第１介在部材は、格子状の線部材であるか又は複数の突部材であり、前記第２介在部材は、格子状の線部材であるか又は複数の突部材であってもよい。線部材を採用したときには培養細胞シートとの接触が略線接触となり、突部材を採用したときには培養細胞シートとの接触が略点接触となるため、いずれにしても培養細胞シートに負担がかかりにくい。具体的には、（１）第１介在部材及び第２介在部材とも格子状の線部材であってもよいし、（２）第１介在部材及び第２介在部材とも複数の突部材であってもよいし、（３）第１介在部材が格子状の線部材で第２介在部材が複数の突部材であってもよいし、（４）第１介在部材が複数の突部材で第２介在部材が格子状の線部材であってもよい。

ここで、前記第１介在部材は、前記トレイとは別体のネットであるか又は前記トレイに一体成形された複数の突部材であり、前記第２介在部材は、前記リッドとは別体のネットであるか又は前記リッドに一体成形された複数の突部材であってもよい。

本発明の培養細胞シート包装体において、前記第１介在部材及び前記第２介在部材は、両部材によって前記培養細胞シートが損傷を受けることのない押圧力でもって前記培養細胞シートに接触していることが好ましい。こうすれば、培養細胞シート包装体に包装された培養細胞シートが両介在部材によってダメージを受けるのを確実に防止できる。例えば、密閉空間の高さから第１介在部材の高さと第２介在部材との高さの和を引いた値が培養細胞シート（支持体に支持されているときには支持体も含む）の厚みと略一致するか培養細胞シートの厚みよりも若干小さくなるようにしてもよい。

本発明の培養細胞シート包装体は、用途として前記培養細胞シートの運搬時に使用されてもよい。培養細胞シートは専門施設で作製されたあと医療機関へ運搬される時に培養細胞シートを損傷しないようにする必要があるが、本発明の培養細胞シート包装体によれば医療現場で取り扱い易い剥離した状態の培養細胞シートを輸送する場合であってもその要望を満足することができる。

本発明の細胞培養シート包装体は、前記トレイの略中央に設けられたトレイ窪み部と、前記リッドの略中央に設けられたリッド窪み部とを備え、前記トレイと前記リッドとによって囲まれた前記密閉空間は前記トレイ窪み部と前記リッド窪み部とに挟まれた空間であってもよい。こうすることで、リッド開封時に密閉空間に充填された液体培地がトレイから零れたり、溢れたりすることを防止することができる。また、培養細胞シート包装体では密閉空間内に空気が残留することは好ましくないため、包装時に密閉空間から空気を排除する作業が必要となるが、トレイおよびリッドが共に窪み部を有することによって、液体培地を密閉空間に充填する量よりも多くトレイに注入し、リッドで密封する際に若干の液体培地と共に空気を排除することによって、容易に密閉空間から空気を除外することができる。なお、各窪み部は、培養細胞シートより広い底面積（第１支持体を用いたときには第１支持体より広い面積、第２支持体を用いたときには第２支持体より広い面積）を有していることが好ましい。

このようにトレイ窪み部及びリッド窪み部を備えた培養細胞シート包装体は、前記トレイのうち前記トレイ窪み部の外周に設けられたトレイ土手部と、前記トレイのうち前記トレイ土手部の外周に設けられたトレイ溝部と、前記リッドのうち前記リッド窪み部の外周に設けられたリッド土手部と、前記リッドのうち前記リッド土手部の外周に設けられたリッド溝部とを備え、前記トレイと前記リッドとによって前記密閉空間を形成したとき前記トレイ土手部と前記リッド土手部とが密着し前記トレイ溝部と前記リッド溝部とが密着するようにしてもよい。こうすれば、リッド開封時に密閉空間に充填された液体培地がトレイから零れたり、溢れたりすることを確実に防止することができる。また、一層容易に密閉空間から空気を排除することができる。

このとき、前記トレイ溝部及び前記リッド溝部の少なくとも一方には孔が穿設されていてもよい。こうすれば、密封時において密閉空間から排除されてきた少量の液体培地と空気がトレイ土手部とリッド土手部との隙間を通過した後、トレイ溝部又はリッド溝部に設けた孔から外部へ排出されるため、より一層容易に密閉空間から空気を排除することができる。なお、トレイ土手部やリッド土手部にも同様の機能を有する孔を穿設してもよい。

本発明の培養細胞シート包装体において、前記トレイ及び前記リッドはそれぞれトレイ鍔部及びリッド鍔部を有し、前記トレイ及び前記リッドとは異なる材質のシール材を両鍔部にまたがるように貼り付けることにより前記トレイ及び前記リッドを密封していてもよい。こうすれば、シール材を剥がすとき、シール材はトレイとリッドとは異なる材質であるため剥がしやすい。

本発明のシート挟持部材は、トレイとリッドとによって囲まれた密閉空間に略完全に空気が排除された状態で充填された液体培地に培養細胞シートが浸漬された培養細胞シート包装体に使用されるシート挟持部材であって、前記培養細胞シートと前記トレイとの間にて前記培養細胞シートと部分的に接触し前記トレイとは別体に成形された第１挟持部材と、前記培養細胞シートと前記リッドとの間にて前記培養細胞シートと部分的に接触し前記リッドとは別体に成形された第２挟持部材と、前記第１挟持部材と第２挟持部材を実質的に一体的に係合する係合手段とを備えたことを特徴とする。こうすることで、培養シート包装体を開封した後、第１及び第２挟持部材によって確実に保持された培養細胞シートを容易に取り出すことができる。また、支持体で包み込まれていない培養細胞シートを第１及び第２挟持部材で挟持する場合には、その状態で培養細胞シートを容易に洗浄することができる。一方、係合手段は、第１挟持部材と第２挟持部材とを係合したあと容易に分離できる手段であることが好ましい。例えば、係合手段として凸部と凹部とをそれぞれの挟持部材に設け、培養細胞シートを挟持する際には凹部と凸部とを係合し、培養細胞シートを取り出す際には係合している凹部と凸部とを分離するようにしてもよい。また、係合手段により係合したときの第１挟持部材と第２挟持部材との隙間が、挟持する培養細胞シートの厚さあるいは培養細胞シートと支持体の厚さと同等又は僅かに大きくなるように設計することが好ましい。また、第１挟持部材の一辺と第２挟持部材の一辺とが共通な辺となるように両部材を連ねて形成し、この共通な辺を折り目にして折りたたんで培養細胞シート（あるいは培養細胞シートと支持体）を挟み込むようにしてもよい。

細胞シート内包キャリアの作製フローである。培養細胞シート包装体の組立斜視図である。培養細胞シート包装体の断面図（左半分）である。培養細胞シート包装体の組立斜視図である。培養細胞シート包装体の断面図（左半分）である。ネットの嵌合部の拡大図である。

１．培養上皮細胞シートの作製
インフォームド・コンセントを行った患者から約１ｃｍ²の皮膚組織を採取した。採取した皮膚組織は上皮剥離用培地で処理を行うことにより、真皮層と上皮層とに分離し、この上皮層をトリプシン処理することで上皮細胞懸濁液を作製した。次いで、培養フラスコの底面にフィーダ細胞を敷設した後、上皮細胞懸濁液を播種した。フィーダ細胞としては、マイトマイシンＣにより増殖能を抑制したマウス線維芽細胞を使用した。細胞播種後、５ｖ／ｖ％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）−ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）を培養用培地として注入し、フィーダ細胞の存在下で上皮細胞を培養した。上皮細胞のコロニー形成が確認された後、継続的に培養することにより、コンフルエント状態を経て重層化（シート化）し、培養上皮細胞シートが形成された。また、培養上皮細胞シートが形成される頃には、フィーダ細胞のほとんどは培養系から排除されていた。

２．細胞シート内包キャリアの作製
細胞シート内包キャリアの作製方法について、図１に基づいて説明する。培養上皮細胞シート１０が培養されている培養フラスコ１２に剥離用培地（４００ＰＵ／ｍＬディスパーゼ培地）を加え、ＣＯ₂インキュベータ（３７℃、１０％ＣＯ₂）で３０分間インキュベートした。その後、培養フラスコ１２がピール・オフ・フラスコの場合には上面のシール部材を剥離し、通常の培養フラスコの場合には上面部分をホットナイフで切断した。続いて、ピンセットを用いて培養上皮細胞シート１０の周囲の一部が培養フラスコ１２から剥離することを確かめた後、培地を抜き去り、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）で２回洗浄した。洗浄後、ピンセットを用いて培養上皮細胞シート１０の周囲をこそげた後、ＰＢＳを少量残して抜き去った（図１（ａ）参照）。一方、培養上皮細胞シート１０の全面積よりもやや小さな面積を持つ滅菌不織布を第１キャリア（第１支持体）１４として用意し、この第１キャリア１４を培養フラスコ１２内の培養上皮細胞シート１０の上に重ね合わせ（図１（ｂ）参照）、培養上皮細胞シート１０のうち第１キャリア１４の周囲からはみ出た部分を第１キャリア１４に折り返し、培養上皮細胞シート１０と第１キャリア１４とを一体化した（図１（ｃ）参照）。培養フラスコ１２内では培養上皮細胞シート１０は移植適用面である基底層が下を向いているため、第１キャリア１４は移植適用面とは反対側の面を被覆することになる。一方、図示しない滅菌トレイに少量の液体培地（輸送用培地）を入れ、第１キャリア１４の約２．５倍の面積を持つ滅菌不織布を第２キャリア（第２支持体）１６として用意し、この第２キャリア１６を滅菌トレイ内に敷いた。そして、第１キャリア１４と一体化した培養上皮細胞シート１０を懸架し、移植適用面が上を向くように滅菌トレイ内の第２キャリア１６の上に載せ、第２キャリア１６で包み込み（図１（ｄ）参照）、細胞シート内包キャリア１８とした（図１（ｅ）参照）。つまり、細胞シート内包キャリア１８は、培養上皮細胞シート１０を第１キャリア１４及び第２キャリア１６で包み込んだものである。なお、このときの第２キャリア１６の開封部は上方に設けた。

３．培養細胞シート包装体の作製−その１
図２は、培養細胞シート包装体の組立斜視図である。包装容器２０は、トレイ２１、リッド３１及びシール４１から構成されている。トレイ２１は、材質がポリプロピレンであり、液体培地を貯留可能なトレイ窪み部２２と、このトレイ窪み部２２の周囲に設けられたトレイ土手部２３と、このトレイ土手部２３の外周に沿って設けられたトレイ溝部２４と、このトレイ溝部２４の外周に沿って設けられたトレイ鍔部２５とを備えている。また、トレイ鍔部２５の内周側には環状段差２６が設けられ、トレイ鍔部２５の四隅のうちの一角には三角形状段差２７が設けられている。一方、リッド３１は、材質がポリプロピレンであり、トレイ窪み部２２の深さよりも浅いリッド窪み部３２と、このリッド窪み部３２の周囲に設けられたリッド土手部３３と、このリッド土手部３３の外周に沿って設けられたリッド溝部３４と、このリッド溝部３４の外周に沿って設けられたリッド鍔部３５とを備えている。そして、トレイ窪み部２２にリッド窪み部３２を嵌め込み、トレイ土手部２３とリッド土手部３３とを一致させ、トレイ溝部２４とリッド溝部３４とを一致させ、トレイ鍔部２５にリッド鍔部３５を重ね合わせると、リッド鍔部３５はトレイ鍔部２５の環状段差２６と一致した状態となり、これにシール４１を被せてトレイ鍔部２５とリッド鍔部３５とシール４１とを熱溶着すると、トレイ窪み部２２とリッド窪み部３２とによって囲まれた密閉空間Ｓが形成される。但し、シール４１を剥がすときに三角形状段差２７から剥がすことができるように、シール４１と三角形状段差２７とは熱溶着されない。なお、シール４１の材質はトレイ２１及びリッド３１とは異なる材質が好ましい。こうすることで、開封時にシール４１をトレイ２１及びリッド３１から容易に剥がすことができる。

さて、トレイ２１のトレイ窪み部２２に輸送用培地（抗生物質含有ＤＭＥＭ）を入れ、前記２．で作製した細胞シート内包キャリア１８を上下からネット４５，４６で緩く挟み込み、それを輸送用培地に浸漬した。ネット４５，４６としては、材質がポリプロピレンであり、太さ２ｍｍの線部材が所定間隔（例えば１ｃｍ）で縦横に張り巡らされたものを用いた。この線部材は、培養細胞シートの大きさ等によって太さや所定間隔が決定されるが、培養上皮細胞シート１０を確実に保持できる最小限の接触面積となるように太さや間隔を決定することが培養上皮細胞シート１０へのダメージを抑制する上で好ましい。その後、トレイ窪み部２２にリッド窪み部３２を嵌め込み、密閉空間Ｓに空気が残留しないようにトレイ土手部２３とリッド土手部３３とを一致させ、トレイ溝部２４とリッド溝部３４とを一致させ、トレイ鍔部２５にリッド鍔部３５を重ね合わせると、リッド鍔部３５はトレイ鍔部２５の環状段差２６と一致した状態となり、これにシール４１を被せてトレイ鍔部２５とリッド鍔部３５とシール４１とを熱溶着した。この結果、トレイ窪み部２２とリッド窪み部３２とによって囲まれた密閉空間Ｓは輸送用培地で満たされ、その輸送用培地内に細胞シート内包キャリア１８がネット４５，４６によって保持された状態となり、培養細胞シート包装体５０が完成した。この培養細胞シート包装体５０の断面図（左半分）を図３に示す。なお、以上の操作は無菌室内で行った。また、包装容器２０およびネット４５，４６は予め滅菌処理をしたものを用いた。

この培養細胞シート包装体５０では、細胞シート内包キャリア１８とトレイ窪み部２２の底面との間に介在しているネット４５が細胞シート内包キャリア１８に略線接触すると共にトレイ窪み部２２の底面表側にも略線接触し、また、細胞シート内包キャリア１８とリッド窪み部３２の底面との間に介在しているネット４６が細胞シート内包キャリア１８に略線接触すると共にリッド窪み部３２の底面裏側にも略線接触することにより、輸送用培地内に細胞シート内包キャリア１８を保持している。また、トレイ窪み部２２の底面表側からリッド窪み部３２の底面裏側までの距離（つまり密閉空間Ｓの高さ）からネット４５の厚みとネット４６の厚みとを差し引いた値が、細胞シート内包キャリア１８の厚みと略一致するか細胞シート内包キャリア１８の厚みよりも若干小さくなるように設計されている。このため、ネット４５，４６が細胞シート内包キャリア１８を押圧する力は僅かである。

以上詳述した培養細胞シート包装体５０によれば、密閉空間Ｓに充填された液体培地は空気を略完全に排除されているため、液体培地に浸漬された培養細胞シートは空気によって劣化するおそれがない。また、運搬時に培養細胞シート包装体５０が揺れたとしても、液体培地が波立ったり液体培地中を気泡が移動したりすることがないため培養上皮細胞シートがズレたり欠損したりするおそれがないし、細胞シート内包キャリア１８は容易に移動したり解けたりすることはなく、細胞シート内包キャリア１８に内包されている培養上皮細胞シート１０がトレイ２１やリッド３１と衝突して損傷するというおそれもない。また、細胞シート内包キャリア１８とネット４５，４６とは全面的に接触しているのではなく略線接触しているに過ぎず、しかもネット４５，４６が細胞シート内包キャリア１８を押圧する力は僅かなため、細胞シート内包キャリア１８に内包されている培養上皮細胞シート１０がネット４５，４６によってダメージを受けることもほとんどない。したがって、培養上皮細胞シート１０（特に培養上皮細胞シート１０の生着・治癒に重要な基底層）を損傷なく運搬することができる。

また、使用時においては、トレイ２１およびリッド３１の各窪み部２２、３２で密閉空間Ｓを構成したことによって、リッド３１の開封の際に密閉空間Ｓに充填された液体培地の零れを防止できる。さらに、細胞シート内包キャリア１８を構成する第２キャリア１６の開封部をリッド側としたことで、リッド３１を開け、ネット４６を取除いた後、第２キャリア１６を開封することで第１キャリア１４に懸架された培養上皮細胞シート１０が曝露し、容易に取り出すことができる。

また、ネット４５，４６はトレイ２１やリッド３１とは別体に成形されているため、既存のトレイ２１やリッド３１を利用して本実施例の効果を得ることができる。更に、密閉空間Ｓの高さからネット４５，４６の厚みの和を引いた値が細胞シート内包キャリア１８の厚みと略一致するか細胞シート内包キャリア１８の厚みよりも若干小さくなるようにすることにより、ネット４５，４６は培養上皮細胞シート１０が損傷を受けることのない押圧力でもって細胞シート内包キャリア１８に小さな接触面積で接触していることになり、細胞シート内包キャリア１８を確実に保持するとともに、培養細胞シート包装体５０に包装された培養上皮細胞シート１０がネット４５，４６によってダメージを受けるのを確実に防止できる。

更にまた、培養上皮細胞シート１０は創傷被覆材で形成した第１キャリア１４によって補強されているため、培養上皮細胞シート１０が十分な強度を有していなくても取り扱い時に破損するのを有効に防止できるうえ広げた状態で支持できるので取り扱いが容易になり、しかも、第１キャリア１４に支持された培養上皮細胞シート１０を第２キャリア１６で包み込むため確実に培養上皮細胞シート１０を保護でき、特に細胞増殖能を有する培養上皮細胞シート１０の基底層を確実に保護できる。そしてまた、第１キャリア１４は創傷被覆材で形成されているため、培養上皮細胞シート１０を使用する際に第１キャリア１４の支持を解く作業を容易に行うことができる。

なお、図２及び図３では、細胞シート内包キャリア１８を挟み込むネット４５とネット４６とは格子が一致するように配置したが、格子が一致しないようにずらして配置してもよい。また、トレイ２１やリッド３１とは別体のネット４５，４６を用いる代わりに、トレイ窪み部２２の底面表側にネット４５と類似の格子状の線部材を一体成形により設けたり、リッド窪み部３２の底面裏側にネット４６と類似の格子状の線部材を一体成形により設けたりしてもよい。

４．培養細胞シート包装体の作製−その２
図４は、培養細胞シート包装体の組立斜視図である。包装容器６０は、トレイ６１、リッド７１及び環状シール８１から構成されている。トレイ６１は、材質がポリプロピレンであり、液体培地を貯留可能なトレイ窪み部６２と、このトレイ窪み部６２の周囲に設けられたトレイ土手部６３と、このトレイ土手部６３の外周に沿って設けられたトレイ溝部６４と、このトレイ溝部６４の外周に沿って設けられたトレイ鍔部６５と、トレイ窪み部６２の底面表側にて所定間隔（例えば１ｃｍ）おきに縦横に立設された複数の三角錐状の突起６８とを備えている。この突起６８は、培養上皮胞シート１０の大きさ等によって個数、所定間隔や突起形状が決定されるが、培養上皮細胞シート１０を確実に保持できる最小限の接触面積となるように個数、間隔、突起形状を決定することが培養上皮細胞シート１０へのダメージを抑制する上で好ましい。また、頂点は尖っていてもよいが丸味をおびている方が好ましい。また、トレイ鍔部６５の内周側には環状段差６６が設けられ、トレイ鍔部６５の四隅のうちの一角には三角形状段差６７が設けられている。一方、リッド７１は、材質がポリプロピレンであり、トレイ窪み部６２の深さよりも浅いリッド窪み部７２と、このリッド窪み部７２の周囲に設けられたリッド土手部７３と、このリッド土手部７３の外周に沿って設けられたリッド溝部７４と、このリッド溝部７４の外周に沿って設けられたリッド鍔部７５と、リッド窪み部７２の底面裏側にて所定間隔（例えば１ｃｍ）おきに縦横に立設された複数の三角錐状の突起７８とを備えている。そして、トレイ窪み部６２にリッド窪み部７２を嵌め込み、トレイ土手部６３とリッド土手部７３とを一致させ、トレイ溝部６４とリッド溝部７４とを一致させ、トレイ鍔部６５にリッド鍔部７５を重ね合わせると、リッド鍔部７５はトレイ鍔部６５の環状段差６６と一致した状態となり、これに環状シール８１を被せてトレイ鍔部６５とリッド鍔部７５と環状シール８１とを熱溶着すると、トレイ窪み部６２とリッド窪み部７２とによって囲まれた密閉空間Ｓが形成される。但し、環状シール８１を剥がすときに三角形状段差６７から剥がすことができるように、環状シール８１と三角形状段差６７とは熱溶着されない。

さて、トレイ６１のトレイ窪み部６２に輸送用培地（抗生物質含有ＤＭＥＭ）を入れ、前記２．で作製した細胞シート内包キャリア１８をトレイ窪み部６２の底面表側に立設された複数の突起６８の上に載置した。その後、トレイ窪み部６２にリッド窪み部７２を嵌め込み、密閉空間Ｓに空気が残留しないようにトレイ土手部６３とリッド土手部７３とを一致させ、トレイ溝部６４とリッド溝部７４とを一致させ、トレイ鍔部６５にリッド鍔部７５を重ね合わせると、リッド鍔部７５はトレイ鍔部６５の環状段差６６と一致した状態となり、これに環状シール８１を被せてトレイ鍔部６５とリッド鍔部７５と環状シール８１とを熱溶着した。この結果、トレイ窪み部６２とリッド窪み部７２とによって囲まれた密閉空間Ｓは輸送用培地で満たされ、その輸送用培地内に細胞シート内包キャリア１８が突起６８，７８によって保持された状態となり、培養細胞シート包装体９０が完成した。この培養細胞シート包装体９０の断面図（左半分）を図５に示す。なお、以上の操作は無菌室内で行った。また、包装容器６０は予め滅菌処理をしたものを用いた。

この培養細胞シート包装体９０では、トレイ窪み部６２の底面表側に一体成形された突起６８が細胞シート内包キャリア１８に略点接触し、また、リッド窪み部７２の底面裏側に一体成形された突起７８が細胞シート内包キャリア１８に略点接触することにより、輸送用培地内に細胞シート内包キャリア１８を保持している。また、突起６８の先端から突起７８の先端までの距離が、細胞シート内包キャリア１８の厚みと略一致するか細胞シート内包キャリア１８の厚みよりも若干小さくなるように設計されている。このため、突起６８，７８が細胞シート内包キャリア１８を押圧する力は僅かである。

以上詳述した培養細胞シート包装体９０によれば、密閉空間Ｓに充填された液体培地は空気を略完全に排除されているため、液体培地に浸漬された培養細胞シートは空気によって劣化するおそれがない。また、運搬時に培養細胞シート包装体９０が揺れたとしても、液体培地が波立ったり液体培地中を気泡が移動したりすることがないため培養上皮細胞シートがズレたり欠損したりするおそれがないし、細胞シート内包キャリア１８は容易に移動したり解けたりすることはなく、細胞シート内包キャリア１８に内包されている培養上皮細胞シート１０がトレイ６１やリッド７１と衝突して損傷するというおそれがない。また、細胞シート内包キャリア１８と突起６８，７８とは全面的に接触しているのではなく略点接触しているに過ぎず、しかも突起６８，７８が細胞シート内包キャリア１８を押圧する力は僅かなため、細胞シート内包キャリア１８に内包されている培養上皮細胞シート１０が突起６８，７８によってダメージを受けることもほとんどない。したがって、培養上皮細胞シート１０（特に培養上皮細胞シート１０の生着・治癒に重要な基底層）を損傷なく運搬することができる。

また、図５に示すように突起６８が細胞シート内包キャリア１８に接触する位置と突起７８が細胞シート内包キャリア１８に接触する位置とは互いに対向せずずれているため、成形誤差や輸送時における歪みが生じたとしても細胞シート内包キャリア１８に過大な圧力がかかるおそれがない。更に、突起６８，７８はトレイ６１やリッド７１と一体成形されているため、別体の場合に比べて包装時や包装解除時の操作性に優れている。更にまた、密閉空間Ｓの高さから突起６８，７８の高さの和を引いた値が細胞シート内包キャリア１８の厚みと略一致するか細胞シート内包キャリア１８の厚みよりも若干小さくなるようにすることにより、細胞シート内包キャリア１８を確実に保持するとともに、突起６８，７８は培養上皮細胞シート１０が損傷を受けることのない押圧力でもって細胞シート内包キャリア１８に小さな接触面積で接触していることになり、培養細胞シート包装体９０に包装された培養上皮細胞シート１０が突起６８，７８によってダメージを受けるのを確実に防止できる。第１キャリア１４及び第２キャリア１６による効果は前記３．の培養細胞シート包装体５０と同様である。

さらに、環状シール８１によってトレイ鍔部６５とリッド鍔部７５を熱溶着しているので、培養細胞シート包装体９０を安定して積み重ねることができ、複数の培養細胞シートを容易に輸送することができる。この場合、リッド土手部３３を橋架けする大きさの板材をリッド土手部３３上に敷設した後、別の培養細胞シート包装体９０を載せるようにすれば、培養細胞シート１０が保持される密閉空間Ｓに圧力が加わることなく、複数の培養細胞シート包装体９０を安定して積み重ねることができるので好ましい。なお、このような板材を予めトレイ窪み部２２の下部に付着させ、一体化させていてもよい。また、密閉空間Ｓを構成する壁面を斜めにすることによって、同様の効果を得ることもできる。

さらにまた、環状シール８１を採用したため、リッド７１を透明部材で形成すれば、培養細胞シート包装体９０を開封することなく密閉空間Ｓ内の状態を観察することができ、輸送によるキャリアの解けや培養細胞シートの破損等の不具合を予め確認できる。もちろん、シール４１とリッド３１を共に透明部材とした際も同様の効果が得られる。

なお、トレイ６１やリッド７１と一体成形された突起６８，７８を用いる代わりに、トレイ６１やリッド７１とは別体の平面板に同様の突起を設けて、前記３．のネット４５，４６と同様にしてこれらの平面板で細胞シート内包キャリア１８を挟み込んでもよい。

本発明は、上記実施例に何ら限定されるものではなく、本発明の技術的範囲に属する限り種々の形態を採り得ることはいうまでもない。例えば、前記３．又は４．では、第１キャリア１４及び第２キャリア１６を用いて培養上皮細胞シート１０を支持したが、第２キャリア１６を用いず第１キャリア１４だけ用いてもよいし、第１キャリア１４を用いず第２キャリア１６だけ用いてもよいし、両キャリア１４，１６を用いずに培養上皮細胞シート１０を直接ネット４５，４６（又は突起６８，７８）で挟み込んでもよい。また、前記３．においてトレイ２１はトレイ土手部２３やトレイ溝部２４を有さずトレイ窪み部２２の外周に直接トレイ鍔部２５が形成されていてもよく、リッド３１もリッド土手部３３やリッド溝部３４を有さずリッド窪み部３２の外周に直接リッド鍔部３５が形成されていてもよい（前記４．についても同様）。さらに、前述の特許文献１にあるように、トレイ窪み部２２の外周に直接トレイ鍔部２５が形成されていて、リッドとしてシール４１が直接熱溶着されていてもよい。

また、リッド溝部３４，７４に複数個の孔を設けておいてもよい。こうすることで、密封時において密閉空間Ｓから排除されてきた少量の液体培地と空気がトレイ土手部２３，６３とリッド土手部３３，７３の隙間を通過した後、孔からリッド溝部３４，７４の上方に排出され、リッド鍔部３５，７５とトレイ鍔部２５，６５の内周側の環状段差２６，６６を汚染することがない。したがって、容易かつ確実にシール４１，８１を熱溶着することができ、密閉空間Ｓから空気を略完全に排除して液体培地を充填する作業を容易に行うことができる。

更に、上述した実施例では、トレイ鍔部２５とリッド鍔部３５とシール４１とを熱溶着したり、トレイ鍔部６５とリッド鍔部７５と環状シール８１とを熱溶着したりしたが、熱溶着の代わりに接着剤等で接着してもよい。

更にまた、ネット４５，４６の４隅に図６に示すような凹部と凸部（係合手段）を設けて両者を嵌合してもよく、この場合には、細胞シート内包キャリア１８はネット４５，４６間で確実に保持されるので、ネット４５，４６とトレイ２１又はリッド３１との間に若干の隙間が生じたとしても、キャリア１６の解け等を抑制することができる。このようにネット４５，４６の４隅に凹部と凸部を設けた場合には、第２キャリア１６（又は第１及び第２キャリア１４，１６の両方）を用いずに培養上皮細胞シート１０をネット４５，４６で挟み込み凹部と凸部とを係合することにより、トレイ２１からネット４５，４６と共に培養上皮細胞シート１０を取り出したあとも培養上皮細胞シート１０を確実にネット４５，４６間で保持することができ、ネット４５，４６間に保持したままの状態で培養上皮細胞シート１０を洗浄することができる。

１０培養上皮細胞シート、１２培養フラスコ、１４第１キャリア、１６第２キャリア、１８細胞シート内包キャリア、２０包装容器、２１トレイ、２２トレイ窪み部、２３トレイ土手部、２４トレイ溝部、２５トレイ鍔部、２６環状段差、２７三角形状段差、３１リッド、３２リッド窪み部、３３リッド鍔部、３３リッド土手部、３４リッド溝部、３５リッド鍔部、４１シール、４５，４６ネット、５０培養細胞シート包装体。

Claims

気密且つ液密な材質で構成されたトレイと、
気密且つ液密な材質で構成されたリッドと、
前記トレイと前記リッドとによって囲まれた密閉空間に空気を略完全に排除した状態で充填された液体培地と、
前記密閉空間内で前記液体培地に浸漬された培養細胞シートと、
前記トレイの略中央に設けられたトレイ窪み部と、
前記リッドの略中央に設けられ、前記トレイ窪み部よりも浅いリッド窪み部と、
を備え、
前記トレイと前記リッドとによって囲まれた前記密閉空間は前記トレイ窪み部と前記リッド窪み部とに挟まれた空間であり、該密閉空間の容積は前記トレイ窪み部の容積よりも小さく形成され、
前記トレイ及び前記リッドはそれぞれトレイ鍔部及びリッド鍔部を有し、前記トレイ鍔部の内周側には環状段差が設けられ、前記トレイ及び前記リッドを密封したときには前記リッド鍔部が前記環状段差に嵌り込んで前記リッド鍔部の表面と前記トレイ鍔部のうち前記環状段差よりも外周側の表面とが同一平面になり、該同一平面となった両表面にまたがるように前記トレイ及び前記リッドとは異なる材質のシール材が貼り付けられて前記トレイ及び前記リッドが密封されている、
培養細胞シート包装体。
前記トレイは前記トレイ窪み部の外周に高さが前記トレイ鍔部よりも低いトレイ土手部を有し、前記リッドは前記リッド窪み部の外周に高さが前記リッド鍔部よりも低いリッド土手部を有し、前記トレイ及び前記リッドを密封したときには前記トレイ土手部と前記リッド土手部とが一致した状態となる、
請求項１に記載の培養細胞シート包装体。
請求項２に記載の培養細胞シート包装体であって、
前記トレイのうち前記トレイ土手部の外周に設けられたトレイ溝部と、
前記リッドのうち前記リッド土手部の外周に設けられたリッド溝部と
を備え、
前記トレイと前記リッドとによって前記密閉空間を形成したとき前記トレイ土手部と前記リッド土手部とが密着し前記トレイ溝部と前記リッド溝部とが密着する
培養細胞シート包装体。
前記トレイ溝部及び前記リッド溝部の少なくとも一方には孔が穿設されている
請求項３に記載の培養細胞シート包装体。
請求項１〜４のいずれかに記載の培養細胞シート包装体であって、
前記培養細胞シートと前記トレイとの間にて前記トレイと接触すると共に前記培養細胞シートと部分的に接触する第１介在部材と、
前記培養細胞シートと前記リッドとの間にて前記リッドと接触すると共に前記培養細胞シートと部分的に接触する第２介在部材と
を備えた培養細胞シート包装体。
前記培養細胞シートは、平面状の支持体に支持された状態で前記第１介在部材及び前記第２介在部材に接触している
請求項５に記載の培養細胞シート包装体。
前記支持体はシート状の創傷被覆材で形成されている
請求項６に記載の培養細胞シート包装体。
前記支持体は第１支持シートと第２支持シートとからなり、前記第１支持シートはその片面が前記培養細胞シートと重ね合わされて一体となり、前記第２支持シートは前記第１支持シートと一体化された前記培養細胞シートを包み込んだ状態で支持している
請求項６又は７に記載の培養細胞シート包装体。
前記第１介在部材が前記培養細胞シートに接触する位置と前記第２介在部材が前記培養細胞シートに接触する位置とは互いに対向せずずれている
請求項５〜８のいずれかに記載の培養細胞シート包装体。
前記第１介在部材は、前記トレイとは別体に成形されたものであるか又は前記トレイに一体成形されたものであり、
前記第２介在部材は、前記リッドとは別体に成形されたものであるか又は前記リッドに一体成形されたものである
請求項５〜９のいずれかに記載の培養細胞シート包装体。
前記第１介在部材は、格子状の線部材であるか又は複数の突部材であり、
前記第２介在部材は、格子状の線部材であるか又は複数の突部材である
請求項５〜１０のいずれかに記載の培養細胞シート包装体。
前記第１介在部材は、前記トレイとは別体のネットであるか又は前記トレイに一体成形された複数の突部材であり、
前記第２介在部材は、前記リッドとは別体のネットであるか又は前記リッドに一体成形された複数の突部材である
請求項１１に記載の培養細胞シート包装体。
前記第１介在部材及び前記第２介在部材は、両部材によって前記培養細胞シートが損傷を受けることのない押圧力でもって前記培養細胞シートに接触している
請求項５〜１２のいずれかに記載の培養細胞シート包装体。
前記培養細胞シートの運搬時に使用される
請求項１〜１３のいずれかに記載の培養細胞シート包装体。