JP5940565B2 - 抗−ｉｌ−６抗体、組成物、方法および使用 - Google Patents

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Description

本発明は、少なくとも１種のＩＬ−６蛋白質またはこれのフラグメントに特異的な抗体（特定の部分および変異体を包含）ばかりでなく抗イディオタイプ抗体および前記抗−ＩＬ−６抗体をコードする核酸、相補的核酸、ベクター、宿主細胞、そしてそれらの製造および使用方法（治療用製剤、投与および機器を包含）に関する。
ＩＬ−６は、多種多様な細胞型、最も注目すべきは抗原提示細胞、ＴおよびＢ細胞が産生および分泌する多面発現的炎症性サイトカインである。ＩＬ−６はＢ細胞の増殖および分化、Ｔ細胞の活性化、造血、破骨細胞の活性化、ケラチン生成細胞増殖、神経細胞成長および肝細胞の活性化の如き多様な活性に関与している。ＩＬ−６は膜貫通もしくは可溶ＩＬ−６Ｒと結合しそしてｇｐ１３０（他の数種のサイトカインと共有する）を通してシグナルを伝達する。
ＩＬ−６は、全身性エリテマトーデス、多発性骨髄腫およびリンパ増殖性疾患で示される如きＢ細胞異常で重要な役割を果たす。同様に、ＩＬ−６は、また、自己免疫および炎症性疾患、例えば関節リウマチおよび変形性関節症などの病因にも関係していると思われている。最近の間接的な証拠によって、ＩＬ−６と慢性閉塞性肺疾患および２型糖尿病におけるインスリン耐性の間に関連があることが示唆されている。ＩＬ−６は免疫系に炎症誘発および抗炎症効果の両方をもたらし、このことは、そのようなサイトカインは疾患に対する生理学的反応を調節する時に中心的な役割を果たす可能性があることを示している。従って、ＩＬ−６を標的にすることは潜在的に多様な病気領域で治療的利益を与える可能性がある。
数多くの病気でＩＬ−６の産生が増加することが観察され、そのような病気には、アルツハイマー病、自己免疫病、例えば関節リウマチなど、炎症、心筋梗塞、パジェット病、骨粗しょう症、固形腫瘍（腎細胞癌）、前立腺および膀胱癌、神経学的癌およびＢ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｃａｓｔｅｌｅｍａｎ病、特定のリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および多発性骨髄腫）が含まれる。研究により、ＩＬ−６とそのような病気の多く、特に癌の病因に関連があることが示されており、従って、ＩＬ−６を阻害すると臨床的利益が得られると解釈されるべきである。
マウス、キメラおよびヒト以外の他の抗−ＩＬ−６抗体が開発されたが、しかしながら、それらは効力、効果の点で限界がある可能性があり、しばしば受け入れられない免疫反応の引き金になる可能性があり（即ち、免疫原性）そして／または高い投薬量を必要とし得る［非特許文献１（引用することによって本明細書に組み入れられる）を参照］。例えば、ヒト以外の部分を含有する抗体はしばしばヒトに免疫反応をもたらす。従って、抗体の投与を繰り返し行うことは治療として適切でなく、免疫が複雑に介在して抗体が循環から除去されることで抗体の効力／有効性が低下し得る。血清病とアナフィラキシーがヒト以外の部分を有する抗体を繰り返し投与することによって引き起こされる可能性のある２つの典型的な状態である。これに関して、以前から用いられている抗−ＩＬ−６抗体に比べて必要な投与量が低いように効力がより高くて免疫原性の可能性がより低い、即ちヒト許容性がより高い抗−ＩＬ−６抗体が求められている。
Ｔｒｉｋｈａ他、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．９、４６５３−４６６５、２００３年１０月
本発明は、単離ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（またＩＬ−６抗体とも呼ぶ）、これの免疫グロブリン、フラグメント、開裂生成物および他の特定部分および変異体ばかりでなく抗−ＩＬ−６抗体組成物、ＩＬ−６−抗−イディオタイプ抗体、コード化もしくは相補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、機器、遺伝子導入動物、遺伝子導入植物およびそれらの製造および使用方法を提供するものである。
本発明は、１つの面において、特定の抗−ＩＬ−６抗体または抗−イディオタイプ抗体をコードするポリヌクレオチドを含んで成るか、それに相補的であるか或はそれとハイブリダイズする単離核酸分子を提供し、これは少なくとも１種の特定配列、これのドメイン、部分または変異体を含んで成る。本発明は、更に、前記抗−ＩＬ−６抗体核酸分子を含んで成る組換え型ベクター、前記核酸および／または組換え型ベクターを含有する宿主細胞ばかりでなく前記抗体の核酸、ベクターおよび／または宿主細胞を生産および／または使用する方法も提供する。
本発明は、また、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体またはＩＬ−６抗−イディオタイプ抗体を宿主細胞内に発現させる少なくとも１種の方法も提供し、この方法は、本明細書に記述する如き宿主細胞を少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が検出可能および／または回収可能な量で発現する条件下で培養することを含んで成る。
本発明は、また、（ａ）本明細書に記述する如き単離抗−ＩＬ−６抗体をコードする核酸および／または抗体および（ｂ）適切および／または製薬学的に受け入れられる担体もしくは希釈剤を含有して成る少なくとも１種の組成物も提供する。
本発明は、更に、細胞、組織、器官、動物または患者および／または関連状態になる前、後または間のそれらにおける少なくとも１種のＩＬ−６が関与する症状を調節または処置するに治療的に有効な量を本技術分野で公知および／または本明細書に記述するようにして投与するに適した少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体方法もしくは組成物も提供する。
本発明は、また、本発明に従う少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を治療的または予防的に有効な量で送達する少なくとも１種の組成物、機器および／または方法も提供する。
本発明は、更に、細胞、組織、器官、動物または患者および／または関連状態になる前、後または間のそれらにおける少なくとも１種のＩＬ−６関連状態を本技術分野で公知および／または本明細書に記述するようにして診断するに適した少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体方法もしくは組成物も提供する。
本発明は、また、本発明に従う少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を診断の目的で送達する少なくとも１種の組成物、機器および／または方法も提供する。
また、本発明の少なくとも１種の単離哺乳動物抗−ＩＬ−６抗体を含有して成る医学機器も提供し、ここで、前記機器は、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体、ＩＬ−６抗−イディオタイプ抗体、核酸分子、化合物、蛋白質および／または組成物を接触させるか或は投与するに適する。
また、本発明の少なくとも１種の単離抗−ＩＬ−６抗体の溶液または凍結乾燥形態物が入っている容器および包装用材料を含んで成るヒト製薬学的または診断用途用製品も提供
する。この製品に場合により送達デバイスまたはシステムの構成要素として前記容器を持たせることも可能である。
本発明は更に本明細書に記述する全ての発明も提供する。
＜発明の記述＞
本発明は、単離、組換え型および／または合成抗−ＩＬ−６ヒト改変抗体およびこれのＩＬ−６抗−イディオタイプ抗体ばかりでなく少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体もしくは抗−イディオタイプ抗体をコードする少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んで成る組成物およびコード化核酸分子も提供する。本発明は、更に、これらに限定するものでないが、前記核酸および抗体および抗−イディオタイプ抗体の製造および使用方法も包含し、それには診断用および治療用組成物、方法および機器が含まれる。
本明細書で用いる如き「抗−ＩＬ−６抗体」、「ＩＬ−６抗体」、「抗−ＩＬ−６抗体部分」または「抗−ＩＬ−６抗体フラグメント」および／または「抗−ＩＬ−６抗体変異体」などには、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えばこれらに限定するものでないが、重もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域またはこれのいずれかの部分、またはＩＬ−６受容体もしくは結合蛋白質の少なくとも一部など（これらを本発明の抗体の中に組み込むことができる）を含んで成る蛋白質もしくはペプチド含有分子のいずれも含まれる。そのような抗体は、場合により、更に、特定のリガンドに影響を与える可能性もあり、例えば、これらに限定するものでないが、そのような抗体は少なくとも１種のＩＬ−６の活性もしくは結合またはＩＬ−６受容体の活性もしくは結合に関してインビトロ、インシトゥおよび／またはインビボで修飾、低下、向上、アンタゴニストとしての作用、アゴニストとしての作用、軽減、緩和、阻害、抑制、無効および／または妨害などを及ぼす。非限定例として、本発明の適切な抗−ＩＬ−６抗体、特定部分または変異体は少なくとも１種のＩＬ−６分子またはこれの特定部分、変異体またはドメインと結合し得る。また、適切な抗−ＩＬ−６抗体、特定部分または変異体は場合によりＩＬ−６の活性または機能、例えばこれらに限定するものでないが、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは蛋白質の合成、ＩＬ−６の放出、ＩＬ−６受容体のシグナル伝達、膜ＩＬ−６の開裂、ＩＬ−６の活性、ＩＬ−６の産生および／または合成などの中の少なくとも１つにも影響を与える。
更に、用語「抗体」は抗体、これの消化フラグメント、特定部分および変異体［抗体またはこれの特定フラグメントもしくは部分の構造および／または機能を模倣するか或は模倣する抗体部分を含んで成る抗体模倣物（一本鎖抗体およびこれのフラグメントを包含）を包含］を包含することも意図する。機能的フラグメントには、哺乳動物のＩＬ−６と結合する抗原結合フラグメントが含まれる。本発明は例えばＩＬ−６もしくはこれの部分と結合し得る抗体フラグメントなどを包含し、それには、これらに限定するものでないが、Ｆａｂ（例えばパパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えばペプシン消化および部分的還元による）およびＦ（ａｂ’）２（例えばペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えばプラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えばペプシンまたはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えばペプシン消化、部分的還元および再集合による）、ＦｖまたはｓｃＦｖ（例えば分子生物学技術による）フラグメントが含まれる（例えば上記Ｃｏｌｌｉｇａｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照）。
そのようなフラグメントの生成は本技術分野で公知および／または本明細書に記述する如き酵素による開裂、合成または組換え技術を用いて実施可能である。また、１つ以上の終止コドンを天然の終止部位の上流に導入しておいた抗体遺伝子を用いることで抗体をいろいろな切断型で生じさせることも可能である。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコー
ドする組換え遺伝子が重鎖のＣＨ１ドメインおよび／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含有するようにそれを設計することも可能である。抗体のいろいろな部分を通常技術を用いて化学的に一緒に結合させてもよいか、或は遺伝子工学技術を用いて連続した蛋白質として調製することも可能である。
本明細書で用いる如き用語「ヒト改変抗体」は、少なくとも完全にヒトのフレームワークおよび定常領域［ＣＬ、ＣＨドメイン（例えばＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）およびヒンジ］および抗原結合抗体由来ＣＤＲを伴う抗体である。完全にヒトのフレームワークには、ヒト生殖細胞配列ばかりでなく体細胞変異を伴う配列に相当するフレームワークが含まれる。ＣＤＲは、抗体フレームワークのいずれかに関連してＩＬ−６と結合する１つ以上のＣＤＲに由来するものであってもよい。例えば、本発明のヒト改変抗体のＣＤＲは、マウス抗体フレームワークに関連してＩＬ−６と結合するＣＤＲに由来するものであってもよく、その後、完全にヒトのフレームワークに関連してＩＬ−６と結合するようにそれを改変させる。そのようなヒト改変抗体はしばしばヒトに実質的に免疫原性を示さない。
同様に、抗体が霊長類［サル、バブーン（ｂａｂｂｏｏｎ）、チンパンジーなど］、齧歯類（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスターなど）および他の哺乳動物を指定する場合、それは、そのような種、亜属、属、亜科および科に特異的な抗体を示す。その上、キメラ抗体には前記の任意組み合わせが含まれ得る。そのような変形もしくは変異体は、場合によるが好適には、ヒトまたは他の種において、修飾を受けさせていない抗体に比べて免疫原性を保持しているか或は低い免疫原性を示す。従って、ヒト改変抗体はキメラ抗体ともヒト化抗体とも異なる。
機能的に再配列させたヒトもしくはヒト改変免疫グロブリン（例えば重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現し得る動物（ヒト以外）または原核もしくは真核細胞を用いてヒト改変抗体を生じさせることができることを指摘する。その上、ヒト改変抗体が一本鎖抗体の場合、これは天然のヒト抗体には見られないリンカーペプチドを含んで成り得る。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域をつなげているリンカーペプチド、例えば２から約８個のグリシンもしくは他のアミノ酸残基などを含んで成り得る。そのようなリンカーペプチドはヒトに由来するものであると考えている。
また、少なくとも２種類の異なる抗原に結合特異性を示すモノクローナルの二重特異性、異種特異性、異種接合もしくは同様な抗体、好適にはヒト、ヒト改変もしくはヒト化抗体も使用可能である。本ケースでは、結合特異性の中の一方は少なくとも１種のＩＬ−６蛋白質に対する特異性であり、もう一方は他のいずれかの抗原に対する特異性である。二重特異性抗体を生じさせる方法は本技術分野で公知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（２つの重鎖が異なる特異性を示す）を一緒に発現させることが基になっている［Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）］。免疫グロブリンの重および軽鎖の組み合わせは無作為であることから、そのようなハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種類の異なる抗体分子の潜在的混合物をもたらし、これらの中で的確な二重特異性を示す構造を有するのは１つのみである。その的確な分子の精製は一般にアフィニティークロマトグラフィー段階で実施される。同様な手順が例えばＷＯ ９３／０８８２９、米国特許第６２１０６６８，６１９３９６７，６１３２９９２，６１０６８３３，６０６０２８５，６０３７４５３，６０１０９０２，５９８９５３０，５９５９０８４，５９５９０８３，５９３２４４８，５８３３９８５，５８２１３３３，５８０７７０６，５６４３７５９，５６０１８１９，５５８２９９６，５４９６５４９，４６７６９８０，ＷＯ９１／００３６０，ＷＯ９２／００３７３，ＥＰ０３０８９，Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ 他．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１），Ｓｕｒｅｓｈ 他， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０（これらは各々引用することによって全体が本明細書に
組み入れられる）に開示されている。
本発明の方法および組成物で用いるに有用な抗−ＩＬ−６抗体は、場合により、ＩＬ−６に高い親和力で結合することでも特徴付け可能であり、かつ場合によるが好適には、毒性が低いとしても特徴付け可能である。個々の成分、例えば可変領域、定常領域およびフレームワークなどが個別および／または集合的に場合によるが好適には低い免疫原性を示す本発明の抗体、特定フラグメントまたは変異体が特に本発明で用いるに有用である。本発明で使用可能な抗体は、場合により、患者を長期間に渡って測定可能な症状軽減を伴いかつ低いおよび／または受け入れられる毒性度合で処置することができることでも特徴付けられる。免疫原性が低いか或は受け入れられる度合でありそして／または親和力が高いばかりでなく他の適切な特性を有することが、そのように達成する治療結果に貢献している可能性がある。本明細書では、抗−ＩＬ−６抗体で処置した患者における「低い免疫原性」を、処置期間の間の推奨される治療期間の間に推奨用量で処置した場合に抗−ＩＬ−６抗体に対する抗体が滴定濃度で発生する率が処置した患者の２５％未満、好適には処置した患者の１０％未満であるとして定義する。
本発明の単離核酸は、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体もしくはこれの特定変異体を生じさせる目的で使用可能であり、それらは、これらに限定するものでないが、免疫疾患もしくは病、心臓血管疾患もしくは病、感染、悪性および／または神経学的疾患または病気または他の公知もしくは特定のＩＬ−６関連状態の中の少なくとも１つから選択した少なくとも１種のＩＬ−６状態を診断、監視、調節、処置、改善、発生率阻止の補助または症状の軽減を測定または実施する目的で細胞、組織、器官または動物（哺乳動物およびヒトを包含）で使用可能である。
前記方法は、そのような症状、影響または機構における修飾、処置、改善、予防または軽減を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有させておいた組成物または製薬学的組成物を有効量で投与することを含んで成り得る。そのような有効量には、本明細書に記述するか或は関連技術で公知の如き公知方法を用いて実施および測定した時に１回（例えばボーラス）、多数回または連続投与当たり約０．００１から５００ｍｇ／ｋｇの量または１回、多数回または連続投与当たり血清濃度１ｍｌ当たり０．０１−５０００μｇの血清中濃度が達成される量、またはそれらの中の有効な範囲または値のいずれも含まれ得る。
本発明の抗体−産生および発生
本発明の少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を場合により本技術分野で良く知られている如き細胞系、混合細胞系、不死化細胞または不死化細胞のクローン集団を用いて産生させることができる。例えば下記を参照：Ａｕｓｕｂｅｌ，他編集、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ 他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ
Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ 他編集、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ 他、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，（１９９７−２００１）。
ヒトＩＬ−６蛋白質またはこれのフラグメントに特異的なヒト改変抗体を適切な免疫原性抗原、例えば単離ＩＬ−６蛋白質および／またはこれの一部（合成分子、例えば合成ペ
プチドを包含）に対して生じさせることができる。他の特定または一般的哺乳動物抗体も同様に生じさせることができる。免疫原性抗原の調製およびモノクローナルの産生は適切な技術のいずれかを用いて実施可能である。
１つのアプローチでは、適切な不死化細胞系［例えば骨髄腫細胞系、例えばこれらに限定するものでないが、Ｓｐ２／０，Ｓｐ２／０−ＡＧ１４，ＮＳＯ，ＮＳ１，ＮＳ２，ＡＥ−１，Ｌ．５，Ｌ２４３，Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３，Ｓｐ２ ＳＡ３，Ｓｐ２ ＭＡＩ，Ｓｐ２ ＳＳ１，Ｓｐ２ ＳＡ５，Ｕ９３７，ＭＬＡ １４４，ＡＣＴＩＶ，ＭＯＬＴ４，ＤＡ−１，ＪＵＲＫＡＴ，ＷＥＨＩ，Ｋ−５６２，ＣＯＳ，ＲＡＪＩ，ＮＩＨ ３Ｔ３，ＨＬ−６０，ＭＬＡ １４４，ＮＡＭＡＬＷＡ，ＮＥＵＲＯ ２Ａ など、またはヘテロミローマ（ｈｅｔｅｒｏｍｙｌｏｍａｓ）、これの融合生成物、またはそれから生じさせた細胞または融合細胞のいずれも、または本技術分野で公知の如き他の適切な細胞系のいずれも含まれる］（例えばｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ，ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．，などを参照）と抗体産生細胞、例えばこれらに限定するものでないが、単離もしくはクローン化脾臓、抹消血液、リンパ液、扁桃腺または他の免疫もしくはＢ細胞含有細胞、または重もしくは軽鎖定常もしくは可変もしくはフレームワークもしくはＣＤＲ配列を発現する他の細胞のいずれかの融合を内因性もしくは異種核酸としてか、組換え型もしくは内因性ウイルス、細菌、藻、原核生物、両生類、昆虫、爬虫類、魚類、哺乳動物、齧歯類、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、霊長類、真核生物、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮＡ、緑葉体ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、１本鎖、２本鎖もしくは３本鎖、雑種形成などまたはこれらの任意組み合わせのいずれかとして起こさせることでハイブリドーマを生じさせる。例えば、上記Ａｕｓｕｂｅｌおよび上記Ｃｏｌｌｉｇａｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙの２章（引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
抗体産生細胞を、また、興味の持たれる抗原を用いて免疫性を与えておいたヒトまたは他の適切な動物の抹消血または好適には脾臓またはリンパ節から得ることも可能である。また、本発明の抗体、これの特定フラグメントまたは変異体をコードする異種もしくは内因性核酸を発現させる目的で他の適切な宿主細胞のいずれかを用いることも可能である。融合させた細胞（ハイブリドーマ）または組換え型細胞を選択的培養条件または他の適切な公知方法を用いて単離した後、限界希釈方法または細胞選別または他の公知方法を用いてクローン化してもよい。所望特異性を示す抗体を産生する細胞を適切な検定（例えばＥＬＩＳＡ）で選択してもよい。
また、ヒト以外またはヒトの抗体を改変またはヒト化する方法も使用可能であり、本技術分野で良く知られている。ヒト化もしくは改変抗体は、ヒト以外の源、例えばこれらに限定するものでないが、マウス、ラット、ウサギ、ヒト以外の霊長類または他の哺乳動物などに由来するアミノ酸残基を１個以上持ち得る。そのようなヒト以外のアミノ酸残基を「重要な」残基（典型的には公知ヒト配列の「重要な」可変、定常または他のドメインから取った）としばしば呼ぶ残基に置き換える。
公知ヒトＩｇ配列は例えば下記に開示されている：
ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ＡＬＩＧＮＭＥＮＴＳ．ｐｈｐ；ｗｗｗ．ｋａｂａｔｄａｔａｂａｓｅ．ｃｏｍ／ｔｏｐ．ｈｔｍｌ；ｆｔｐ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ／ｋａｂａｔ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／〜ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．
ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／〜ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／〜ｙａｓｕｈｉｔｏ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｕｋ．ｏｒｇ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／〜ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｈｔｔｐ：／／ ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／〜ｕｂｃｇ０７ｓ；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ；Ｋａｂａｔ 他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）（各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）。
そのような移入配列を用いて免疫原性を低下させるか或は結合、親和、オンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、親和性、特異性、半減期または本技術分野で公知の如き他の適切な特徴のいずれかを低下、向上または修飾することができる。一般的には、抗原の結合に影響を与えることに直接かつ最も実質的に関与しているのはＣＤＲ残基である。従って、ヒト以外またはヒトＣＤＲ配列の一部または全部を保持させながら可変もしくは定常領域のヒト以外の配列をヒトまたは他のアミノ酸と置き換えてもよい。
また、場合により、抗体にヒト化または改変またはヒト抗体改変を抗原の高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持させながら受けさせることも可能である。そのような目的が達成されるように、場合により、親配列、改変配列およびヒト化配列の三次元モデルを用いて親配列およびいろいろな概念的ヒト化および改変産物を分析する方法を用いることでヒト化（またはヒト）または改変抗体を生じさせることも可能である。三次元免疫グロブリンモデルは一般に入手可能でありかつ本分野の技術者に良く知られている。選択した候補免疫グロブリン配列の可能性のある三次元立体配座構造を例示かつ表示するコンピュータープログラムを利用することができる。そのような表示を検査することで、当該残基が候補免疫グロブリン種の機能に関して果たす可能性のある役割を分析することができる、即ち候補免疫グロブリンがこれの抗原と結合する能力に影響を与える残基を分析することができる。このようにして、フレームワーク（ＦＲ）残基を選択しそしてコンセンサス配列および移入配列を用いて組み合わせることで必要な抗体特徴、例えば標的抗原１種または２種以上に対する親和性の向上などを達成することができる。
加うるに、本発明のヒト改変ＩＬ−６抗体にヒト生殖細胞軽鎖フレームワークを含有させることも可能である。特定の態様では、そのような軽鎖生殖細胞配列をヒトＶＫ配列から選択するが、そのようなＶＫ配列には、これらに限定するものでないが、Ａ１，Ａ１０
，Ａ１１，Ａ１４，Ａ１７，Ａ１８，Ａ１９，Ａ２，Ａ２０，Ａ２３，Ａ２６，Ａ２７，Ａ３，Ａ３０，Ａ５，Ａ７，Ｂ２，Ｂ３，Ｌ１，Ｌ１０，Ｌ１１，Ｌ１２，Ｌ１４，Ｌ１５，Ｌ１６，Ｌ１８，Ｌ１９，Ｌ２，Ｌ２０，Ｌ２２，Ｌ２３，Ｌ２４，Ｌ２５，Ｌ４／１８ａ，Ｌ５，Ｌ６，Ｌ８，Ｌ９，Ｏ１，Ｏ１１，Ｏ１２，Ｏ１４，Ｏ１８，Ｏ２，Ｏ４，およびＯ８ が含まれる。特定の態様では、そのような軽鎖ヒト生殖細胞フレームワークをＶ１−１１，Ｖ１−１３，Ｖ１−１６，Ｖ１−１７，Ｖ１−１８，Ｖ１−１９，Ｖ１−２，Ｖ１−２０，Ｖ１−２２，Ｖ１−３，Ｖ１−４，Ｖ１−５，Ｖ１−７，Ｖ１−９，Ｖ２−１，Ｖ２−１１，Ｖ２−１３，Ｖ２−１４，Ｖ２−１５，Ｖ２−１７，Ｖ２−１９，Ｖ２−６，Ｖ２−７，Ｖ２−８，Ｖ３−２，Ｖ３−３，Ｖ３−４，Ｖ４−１，Ｖ４−２，Ｖ４−３，Ｖ４−４，Ｖ４−６，Ｖ５−１，Ｖ５−２，Ｖ５−４，およびＶ５−６から選択する。いろいろな生殖細胞配列の説明に関してはＰＣＴ ＷＯ ２００５／００５６０４を参照のこと。
他の態様では、本発明のヒト改変ＩＬ−６抗体にヒト生殖細胞重鎖フレームワークを含有させてもよい。特別な態様では、そのような重鎖ヒト生殖細胞フレームワークをＶＨ１−１８，ＶＨ１−２，ＶＨ１−２４，ＶＨ１−３，ＶＨ１−４５，ＶＨ１−４６，ＶＨ１−５８，ＶＨ１−６９，ＶＨ１−８，ＶＨ２−２６，ＶＨ２−５，ＶＨ２−７０，ＶＨ３−１１，ＶＨ３−１３，ＶＨ３−１５，ＶＨ３−１６，ＶＨ３−２０，ＶＨ３−２１，ＶＨ３−２３，ＶＨ３−３０，ＶＨ３−３３，ＶＨ３−３５，ＶＨ３−３８，ＶＨ３−４３，ＶＨ３−４８，ＶＨ３−４９，ＶＨ３−５３，ＶＨ３−６４，ＶＨ３−６６，ＶＨ３−７，ＶＨ３−７２，ＶＨ３−７３，ＶＨ３−７４，ＶＨ３−９，ＶＨ４−２８，ＶＨ４−３１，ＶＨ４−３４，ＶＨ４−３９，ＶＨ４−４，ＶＨ４−５９，ＶＨ４−６１，ＶＨ５−５１，ＶＨ６−１，およびＶＨ７−８１から選択する。いろいろな生殖細胞配列の説明に関してはＰＣＴ ＷＯ ２００５／００５６０４を参照のこと。
特定の態様における軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域はフレームワーク領域またはフレームワーク領域の少なくとも一部（例えば２または３個の小領域、例えばＦＲ２およびＦＲ３などを含有）を含んで成る。特定の態様において、少なくともＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３またはＦＲＬ４は完全にヒトである。他の態様において、少なくともＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３またはＦＲＨ４は完全にヒトである。いくつかの態様において、少なくともＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３またはＦＲＬ４は生殖細胞配列（例えばヒト生殖細胞）であるか或は個々のフレームワーク用のヒトコンセンサス配列を含んで成る（この上に記述した公知ヒトＩｇ配列の給源の所で容易に入手可能）。他の態様において、少なくともＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３またはＦＲＨ４は生殖細胞配列（例えばヒト生殖細胞）であるか或は個々のフレームワーク用のヒトコンセンサス配列を含んで成る。好適な態様におけるフレームワーク領域はヒトフレームワーク領域（例えば以下の表１３および１４に示すヒトフレームワーク領域）である。いくつかの態様におけるフレームワーク領域は配列識別番号：１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２またはこれらの組み合わせを含んで成る。
本発明の抗体のヒト化もしくは改変は公知方法、例えばこれらに限定するものでないが、Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ 他、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ 他、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ 他、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８）），Ｓｉｍｓ 他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒ 他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ 他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３），米国特許第：５７２３３２３，５９７６８６２，５８２４５１４，５８１７４８３，５８１４４７６，５７６３１９２，５７２３３２３，５，７６６８８６，５７１４３５２，６２０４０２３，６１８０３７０，５６９３７
６２，５５３０１０１，５５８５０８９，５２２５５３９，４８１６５６７，ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０，ＵＳ９６／１８９７８，ＵＳ９１／０９６３０，ＵＳ９１／０５９３９，ＵＳ９４／０１２３４，ＧＢ８９／０１３３４，ＧＢ９１／０１１３４，ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３，ＷＯ９０／１４４２４，ＷＯ９０／１４４３０，ＥＰ２２９２４６，（各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられ、それらに引用されている文献を包含）に記述されているそれらのいずれかを用いて実施可能である。
特定の態様における本抗体は改変（例えば変異）Ｆｃ領域を含んで成る。例えば、いくつかの態様では、本抗体が示すエフェクター機能が低下または向上するようにＦｃ領域に改変を受けさせた。いくつかの態様におけるＦｃ領域は、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥまたは他のアイソタイプから選択したアイソタイプである。
別法としてか或は追加的に、アミノ酸修飾をＩＬ−６結合分子のＦｃ領域が示すＣ１ｑ結合および／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）機能を変える１種以上のさらなるアミノ酸修飾と組み合わせるのも有用であり得る。特に興味の持たれる出発ポリペプチドは、Ｃ１ｑと結合しかつ補体依存性細胞障害を示すポリペプチドであり得る。前以て存在するＣ１ｑ結合活性を有するポリペプチドが場合によりＣＤＣを調節する能力を更に持つようにそれに修飾を受けさせることでそのような活性の中の一方または両方を向上させることができる。Ｃ１ｑを変えそして／またはそれの補体依存性細胞障害機能を修飾するアミノ酸修飾は例えばＷＯ ００４２０７２（これは引用することによって本明細書に組み入れられる）に記述されている。
この上で考察したように、本発明のヒト改変ＩＬ−６抗体のＦｃ領域が改変エフェクター機能を持つようにデザインすることができ、例えばＣ１ｑ結合および／またはＦｃγＲ結合を修飾することでＣＤＣ活性および／またはＡＤＣＣ活性を変えることなどでデザインすることができる。「エフェクター機能」は、生物学的活性（例えばある被験体における）を活性化または低下させる責任を負っている。エフェクター機能の例には、これらに限定するものでないが、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在細胞障害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体、即ちＢＣＲ）の下方調節などが含まれる。そのようなエフェクター機能を持たせるには、Ｆｃ領域を結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と組み合わせる必要があり得、それをいろいろな検定（例えばＦｃ結合検定、ＡＤＣＣ検定、ＣＤＣ検定など）で検定することができる。
例えば、本ヒト改変ＩＬ−６抗体が向上したＣ１ｑ結合および向上したＦｃγＲＩＩＩ結合を示す（例えば向上したＡＤＣＣ活性と向上したＣＤＣ活性の両方を持つ）ように、それの変異Ｆｃ領域を生じさせることができる。別法として、エフェクター機能を低下させるか或はなくす必要がある場合には、ＣＤＣ活性が低下しそして／またはＡＤＣＣ活性が低下するように変異Ｆｃ領域に改変を受けさせることも可能である。他の態様では、そのような活性の中の一方のみを向上させかつ場合によりまたもう一方の活性を低下させることも可能である（例えばＡＤＣＣ活性が向上しているがＣＤＣ活性が低下しているように改変されたＦｃ領域そしてその逆のＦｃ領域を生じさせる）。
また、Ｆｃ変異を改変に導入してそれらと新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）の相互作用を変えることで薬物動態特性を向上させることも可能である。ＦｃＲｎとの結合が向上したヒトＦｃ変異体の収集は記述されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ 他、（２００１）．Ｈｉｇｈ
ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ＩｇＧｌ ｆｏｒ ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ，ＦｃγＲＩＩＩ，ａｎｄ ＦｃＲｎ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＩｇＧｌ ｖａｒｉａｎｔｓ ｗｉｔｈ
ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＦｃγＲ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４）。
別の種類のアミノ酸置換を用いて、本ヒト改変ＩＬ−６抗体のＦｃ領域が示すグリコシル化パターンを変える。Ｆｃ領域が示すグリコシル化は典型的にＮ−結合またはＯ−結合のいずれかである。Ｎ−結合は、炭水化物部分がアスパラギン残基の側鎖と結合することを指す。Ｏ−結合グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの中の１つとヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンの結合を指すが、また、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを用いることも可能である。そのような炭水化物部分とアスパラギン側鎖ペプチド配列の酵素による結合を認識する配列はアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニンであり、ここで、Ｘはプロリンを除くアミノ酸のいずれかである。従って、そのようなペプチド配列の中のいずれかがポリペプチドに存在すると潜在的グリコシル化部位が作り出される。
そのグリコシル化パターンを変えようとする場合、例えばポリペプチドに存在するグリコシル化部位を１つ以上取り除きそして／またはポリペプチドに存在しないグリコシル化部位を１つ以上付加させることなどで変化させることができる。ヒト改変ＩＬ−６抗体のＦｃ領域にグリコシル化部位を付加させようとする場合、便利には、そのアミノ酸配列が上述したトリペプチド配列（Ｎ−結合グリコシル化部位用の）を１つ以上含有するようにそれを変えることで付加を達成する。典型的なグリコシル化変異体では、重鎖の残基Ａｓｎ ２９７のアミノ酸が置き換わっている。また、元々のポリペプチドの配列に１個以上のセリンまたはトレオニン残基（Ｏ−結合グリコシル化部位用の）を付加させるか或は置換させることでそのような改変を行うことも可能である。加うるに、Ａｓｎ ２９７をＡｌａに変えることでグリコシル化部位の中の１つを除去することも可能である。
特定の態様では、本発明のヒト改変ＩＬ−６抗体をベータ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ ＩＩＩ）を発現する細胞の中で発現させることで、ＧｎＴ ＩＩＩによってＧｌｃＮＡｃが本ヒト改変ＩＬ−６抗体に付加するようにする。そのような様式で抗体を生じさせる方法は ＷＯ／９９５４３４２，ＷＯ／０３０１１８７８，特許公開 ２００３０００３０９７Ａ１，およびＵｍａｎａ 他，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１７：１７６−１８０，１９９９年２月に示されている。
場合により、本明細書に記述しそして／または本技術分野で公知の如く、ヒト抗体のレパートリーをもたらし得る形質転換動物（例えばマウス、ラット、ハムスター、ヒト以外の霊長類など）に免疫性を与えることでヒト抗−ＩＬ−６抗体を生じさせることも可能である。ヒト抗−ＩＬ−６抗体を産生する細胞を前記動物から単離した後、適切な方法、例えば本明細書に記述する方法などを用いてそれを不死化させる。
ヒト抗原と結合するヒト抗体のレパートリーをもたらし得る形質転換マウスを公知方法を用いて生じさせることができる［例えばこれらに限定するものでないが、Ｌｏｎｂｅｒｇ他に発行された米国特許第５，７７０，４２８，５，５６９，８２５，５，５４５，８０６，５，６２５，１２６，５，６２５，８２５，５，６３３，４２５，５，６６１，０１６および５，７８９，６５０ ｉｓｓｕｅｄ ｔｏ Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ 他、ＷＯ ９８／５０４３３，Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ 他、ＷＯ ９８／２４８９３，Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、ＷＯ ９８／２４８８４， Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、ＷＯ
９７／１３８５２，Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、ＷＯ ９４／２５５８５，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ 他、ＷＯ ９６／３４０９６，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ 他、ＥＰ ０４６３ １５１ Ｂ１，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ 他、ＥＰ ０７１０ ７１９ Ａ１，Ｓ
ｕｒａｎｉ 他、米国特許第５，５４５，８０７，Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ 他、ＷＯ ９０／０４０３６，Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ 他、ＥＰ ０４３８ ４７４ Ｂ１，Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、ＥＰ ０８１４ ２５９ Ａ２，Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、ＧＢ ２ ２７２ ４４０ Ａ，Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４），Ｔａｙｌｏｒ 他、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９−５９１（１９９４），Ｇｒｅｅｎ 他、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１（１９９４），Ｍｅｎｄｅｚ 他、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６（１９９７），Ｔａｙｌｏｒ 他、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｈ ２０（２３）：６２８７−６２９５（１９９２），Ｔｕａｉｌｌｏｎ 他、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０（８）３７２０−３７２４（１９９３），Ｌｏｎｂｅｒｇ 他、Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３（１）：６５−９３（１９９５）およびＦｉｓｈｗａｌｄ 他、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４（７）：８４５−８５１（１９９６），（これらは各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）］。
一般に、そのようなマウスは、少なくとも１種のヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するＤＮＡを含んで成る少なくとも１種のトランス遺伝子を含有し、それを機能的に再配列させるか或はそれに機能的再配列を受けさせてもよい。そのようなマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座が崩壊または欠如していることで、その動物の内因性遺伝子がコードする抗体を産生する能力が消失している。
同様な蛋白質またはフラグメントと特異的に結合する抗体を選別しようとする場合、便利には、ペプチド提示ライブラリーを用いてそれを達成することができる。このような方法は、大きなペプチド集団に選別を所望の機能または構造を有する個々の員に関して受けさせることを伴う。ペプチド提示ライブラリーの抗体選別は本技術分野で良く知られている。その提示させるペプチド配列は長さがアミノ酸３から５０００個分以上、しばしば長さがアミノ酸５−１００個分、しばしば長さがアミノ酸約８から２５個分であり得る。ペプチドライブラリーを生じさせるに適した直接化学的合成方法に加えて、組換え型ＤＮＡ方法がいくつか記述された。１つの種類の方法は、ペプチド配列をバクテリオファージもしくは細胞の表面に提示させることを伴う方法である。バクテリオファージまたは細胞は各々が個々の提示ペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含有する。そのような方法はＰＣＴ特許公開番号９１／１７２７１、９１／１８９８０、９１／１９８１８および９３／０８２７８に記述されている。
ペプチドのライブラリーを生じさせる他のシステムは、インビトロ化学的合成と組換え方法の両方の面を有する。ＰＣＴ特許公開番号９２／０５２５８、９２／１４８４３および９６／１９２５６を参照。また、米国特許第５，６５８，７５４号および５，６４３，７６８号も参照のこと。ペプチド提示ライブラリー、ベクターおよび選別用キットはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）およびＣａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）の如き供給業者から商業的に入手可能である。例えばＥｎｚｏｎに譲渡された米国特許第４７０４６９２，４９３９６６６，４９４６７７８，５２６０２０３，５４５５０３０，５５１８８８９，５５３４６２１，５６５６７３０，５７６３７３３，５７６７２６０，５８５６４５６、Ｄｙａｘに譲渡された５２２３４０９、５４０３４８４、５５７１６９８、５８３７５００、Ａｆｆｙｍａｘに譲渡された５４２７９０８、５５８０７１７、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに譲渡された５８８５７９３、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈに譲渡された５７５０３７３、Ｘｏｍａに譲渡された５６１８９２０、５５９５８９８、５５７６１９５、５６９８４３５、５６９３４９３、５６９８４１７、上記Ｃｏｌｌｉｇａｎ、上記Ａｕｓｕｂｅｌまたは上記Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと。また、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体をコードする核酸を用いて、そのような抗体を乳の中に産生するように遺伝子が導入された動物もしくは哺乳動物、例えばヤギ、ウシ、ウマ、ヒツ
ジ、ウサギなどがもたらされるようにすることでも本発明の抗体を生じさせることができる。公知方法を用いてそのような動物を生じさせることができる。例えば、これらに限定するものでないが、米国特許第５，８２７，６９０；５，８４９，９９２；４，８７３，３１６；５，８４９，９９２；５，９９４，６１６；５，５６５，３６２；５，３０４，４８９など（これらは各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
加うるに、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体をコードする核酸を用いて、そのような抗体、特定部分または変異体をこれらを用いて培養した植物部分または細胞の中にもたらす形質転換植物を生じさせそして植物細胞（例えばこれらに限定するものでないが、タバコおよびトウモロコシ）を培養することでも、本発明の抗体を生じさせることができる。非限定例として、組換え型蛋白質を発現する形質転換タバコ葉を用いて組換え型蛋白質を成功裏に多量に生じさせることが行われ、例えば誘導プロモーターを用いることなどで行われた。例えばＣｒａｍｅｒ他、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）およびそこに引用されている文献を参照のこと。また、哺乳動物の蛋白質を商業的生産濃度で発現する形質転換トウモロコシも用いられ、それの生物学的活性は他の組換えシステムで生産されたそれまたは天然源から精製されたそれに相当する。例えばＨｏｏｄ他、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４９（１９９９）およびそれに引用されている文献を参照のこと。また、抗体フラグメント、例えば１本鎖抗体（ｓｃＦｖ）などを含有する形質転換植物の種（タバコの種およびジャガイモの塊茎を包含）を用いて抗体を多量に生じさせることも行われた。例えばＣｏｎｒａｄ他、Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびそこに引用されている文献を参照のこと。このように、また、形質転換植物を公知方法に従って用いることで本発明の抗体を生じさせることも可能である。また、例えばＦｉｓｃｈｅｒ 他、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．，１９９９），Ｍａ 他、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ 他、Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍ 他、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびそれらに引用されている文献も参照のこと。
本発明の抗体はヒトＩＬ−６と幅広い範囲の親和力（ＫＤ）で結合し得る。好適な態様において、場合により、本発明の少なくとも１種のヒトｍＡｂはヒトＩＬ−６と高い親和力で結合し得る。例えば、ヒトもしくはヒト改変ｍＡｂはヒトＩＬ−６と約１０−７Ｍに等しいか或はそれ以下のＫＤ［例えばこれらに限定するものでないが、０．１−９．９（またはこれの中のいずれかの範囲または値）ｘ１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３、１０−１４、１０−１５またはこれの中のいずれかの範囲または値（本分野の技術者が実施する如き表面プラズモン共鳴またはＫｉｎｅｘａ方法で測定した時）］で結合し得る。
ある抗体がある抗原に対して示す親和力または親和性は適切な方法のいずれかを用いて実験的に測定可能である［例えばＢｅｒｚｏｆｓｋｙ，他、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編集、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ
ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）；および本明細書に記述する方法を参照］。個々の抗体−抗原相互作用の測定親和力は測定条件（例えば塩の濃度、ｐＨ）が異なると変わる可能性がある。従って、親和力および他の抗原結合パラメーター（例えばＫＤ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定を好適には抗体および抗原の標準溶液および標準緩衝液、例えば本明細書に記述する緩衝液などを用いて実施する。
ＩＬ−６との結合に関して本発明の抗体と一緒にどの蛋白質、抗体および他のアンタゴニストが競合しそして／またはエピトープ領域を共有するかを測定する目的で、本発明の抗体を用いた競合検定を実施してもよい。そのような検定は本分野の通常の技術者に良く知られており、ある蛋白質が有する限られた数の結合部位に関して示すアンタゴニストまたはリガンド間の競合を評価するものである。競合前または後に蛋白質および／または抗体を固定または不溶にし、そしてＩＬ−６と結合したサンプルを結合しなかったサンプルから分離、例えば傾斜法（蛋白質／抗体を前以て不溶にしておいた場合）または遠心分離（蛋白質／抗体が競合反応後に沈澱する場合）などで分離する。また、抗体と蛋白質が結合するか或は結合しないことによって機能が変化するか否か、例えば抗体分子が例えば標識の酵素による活性を抑制するか或は促進させるかなどによって、競合的結合を決定することも可能である。本技術分野で良く知られている如きＥＬＩＳＡおよび他の機能的検定を用いてもよい。
本発明の好適な抗−ＩＬ−６抗体は以下の表１−５および１２−１４に示す配列を有する。例えば、本発明の抗−ＩＬ−６抗体は、表１に示す軽鎖ＣＤＲ配列（即ち、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３）の中の１つおよび表２に示す重鎖ＣＤＲ配列（即ち、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）の中の１つを有する。より具体的には、抗−ＩＬ−６抗体（分子ＡＭＥ−Ａ９）は、配列識別番号：１５のＣＤＲＬ１、配列識別番号：２７のＣＤＲＬ２、配列識別番号：３５のＣＤＲＬ３、配列識別番号：４７のＣＤＲＨ１、配列識別番号：６１のＣＤＲＨ２、配列識別番号：９１のＣＤＲＨ３を有する。
核酸分子
本明細書に示す情報を用いることで、本明細書に記述する方法を用いるか或は本技術分野で公知のようにして、例えば、本明細書に開示する他の配列の中で配列識別番号：９３、９７および１０１の軽鎖可変領域の中の少なくとも１つと本明細書に開示する他の配列の中で配列識別番号：９５、９９および１０３の重鎖可変領域の中の少なくとも１つから成る連続したアミノ酸の少なくとも７０−１００％をコードするヌクレオチド配列、これの特定フラグメント、変異体またはコンセンサス配列、またはそのような配列の中の少なくとも１つ含有して成る寄託ベクター（ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｖｅｃｔｏｒ）、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体をコードする本発明の核酸分子などを得ることができる。
本発明の核酸分子は、ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡなどの形態または他のいずれかの形態であり得るか、或はＤＮＡ（これらに限定するものでないが、クローン化で得ることができるか或は合成で生じさせることができるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡが含まれる）の形態、またはこれらの任意組み合わせであり得る。そのようなＤＮＡは３本鎖、２本鎖または１本鎖またはこれらの任意組み合わせであり得る。そのようなＤＮＡまたはＲＮＡの中の少なくとも１本の鎖のいずれかの部分はコード鎖（またセンス鎖としても知られる）であってもよいか、或はそれは非コード鎖（またアンチセンス鎖とも呼ばれる）であってもよい。
本発明の単離核酸分子には、本明細書に記述しそして／または本技術分野で公知の如く、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を場合により１種以上のイントロン、例えばこれらに限定するものでないが、少なくとも１つの重鎖（例えば配列識別番号：３８、４０、４２、４４など）または軽鎖（例えば配列識別番号：２、４、６、８など）の少なくとも１つのＣＤＲ、例えばＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３などの少なくとも１種の特定物を含んで成る核酸分子；抗−ＩＬ−６抗体または可変領域（例えば本明細書に開示する他の配列の中で配列識別番号：９４、９８および１０２の軽鎖可変領域および配列識別番号：９６、１００および１０４の重鎖可変領域など）のコード配列を含んで成る核酸分子；およびこの上に記述したヌクレオチド配列とは実質的に異なるヌクレオチド配列を含有するが遺伝子コードが縮重していることが理由でまだ少なくとも１種の抗−Ｉ
Ｌ−６抗体をコードする核酸分子が含まれ得る。勿論、遺伝子コードは本技術分野で良く知られている。従って、本発明の特定の抗−ＩＬ−６抗体をコードするそのような縮重核酸変異体を生じさせることは本分野の技術者にとって常規のことである。例えば、上記Ａｕｓｕｂｅｌ他が参考になり、そしてそのような核酸変異体も本発明に含まれる。
本明細書に示すように、抗−ＩＬ−６抗体をコードする核酸を含んで成る本発明の核酸分子には、これらに限定するものでないが、抗体フラグメントのアミノ酸配列をコードする核酸自身；その抗体全体またはこれの一部のコード配列；抗体、フラグメントまたは蛋白質のコード配列ばかりでなく追加的配列、例えば少なくとも１種のシグナルリーダーもしくは融合ペプチドのコード配列［これは、追加的非コード配列（これらに限定するものでないが、非コード５’および３’配列を包含）、例えば転写、ｍＲＮＡプロセシング（スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを包含）である役割（例えばリボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）を果たす転写された非翻訳配列と一緒に上述した追加的コード配列、例えば少なくとも１種のイントロンなどを伴うか或は伴わない］；追加的アミノ酸、例えば追加的機能を与えるアミノ酸などをコードする追加的コード配列が含まれ得る。従って、抗体をコードする配列をマーカー配列、例えば抗体のフラグメントまたは部分を含んで成る融合抗体の精製を容易にするペプチドをコードする配列などと融合させることも可能である。
本明細書に記述する如きポリヌクレオチドと選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は、本明細書に開示するポリヌクレオチドと選択的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離核酸を提供する。従って、この態様のポリヌクレオチドを用いて、そのようなポリヌクレオチドを含有して成る核酸を単離、検出および／または量化することができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドを用いて、寄託ライブラリーの中の部分的または全長クローンを同定、単離または増幅することができる。いくつかの態様におけるポリヌクレオチドは、ヒトまたは哺乳動物の核酸ライブラリーから単離したゲノムもしくはｃＤＮＡ配列または他の様式でｃＤＮＡと相補的なそれらである。
そのようなｃＤＮＡライブラリーは、好適には、全長配列の少なくとも８０％、好適には全長配列の少なくとも８５％または９０％、より好適には全長配列の少なくとも９５％を含有する。そのｃＤＮＡライブラリーに標準化を受けさせることで稀な配列の発現量を増加させることも可能である。相補的配列に比べて配列同一性が低い配列を用いる時には、排他的ではないが典型的に、ストリンジェンシーが低いか或は中程度のハイブリダイゼーション条件を用いる。同一性がより高い配列の場合には、場合により、ストリンジェンシーが中程度および高い条件を用いてもよい。低いストリンジェント条件を用いると、配列同一性が約７０％の配列の選択的ハイブリダイズを起こさせることが可能になり、それを用いて、オーソロガスまたはパラロガス配列を識別することができる。
場合により、本発明のポリヌクレオチドが本明細書に記述するポリヌクレオチドがコードする抗体の少なくとも一部をコードするようにしてもよい。本発明のポリヌクレオチドには、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドと選択的にハイブリダイズさせる目的で使用可能な核酸配列が含まれる。例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌ、上記Ｃｏｌｌｉｇａｎ（これらは各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
核酸の構築
本発明の単離核酸の構築は、本技術分野で良く知られている如き（ａ）組換え方法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術および／または（ｄ）これらの組み合わせを用いて実施可能である。
本核酸に本発明のポリヌクレオチドに加えて便利な配列を含有させることも可能である。例えば、エンドヌクレアーゼ制限部位を１個以上含んで成るマルチクローン化部位（ｍｕｌｔｉ−ｃｌｏｎｉｎｇ ｓｉｔｅｓ）を本核酸に挿入することで本ポリヌクレオチドの単離に役立たせることも可能である。また、翻訳可能配列を挿入させることで本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離に役立たせることも可能である。例えば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は本発明の蛋白質を精製する便利な手段を与える。本発明の核酸（コード配列を除く）は場合により本発明のポリヌクレオチドをクローン化および／または発現させるためのベクター、アダプターまたはリンカーであってもよい。
そのようなクローン化および／または発現用配列がクローン化および／または発現で果たす機能を最適にするか、本ポリヌクレオチドの単離を補助するか、或は本ポリヌクレオチドを細胞に導入する時の導入を向上させる追加的配列を付加させることも可能である。クローン化用ベクター、発現用ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は本技術分野で良く知られている（例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌまたは上記Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。
核酸を構築するに適した組換え方法
本分野の技術者に公知のいろいろなクローン化方法のいずれかを用いることで本発明の単離核酸組成物、例えばＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはこれらの任意組み合わせを生物学的源から得ることができる。いくつかの態様では、本発明のポリヌクレオチドと緊縮条件下で選択的に雑種形成するオリゴヌクレオチドプローブを用いてｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリーの中の所望配列を同定する。ＲＮＡの単離およびｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は本分野の通常の技術者に良く知られている（例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌまたは上記Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。
核酸の選別および単離方法
本発明のポリヌクレオチドの配列、例えば本明細書に開示する如き配列などが基になったプローブを用いてｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーに選別を受けさせることができる。同じまたは異なる有機体の中に入っている相同遺伝子を単離する目的でゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列とハイブリダイズするプローブを用いることができる。本分野の技術者は、そのような検定でいろいろなストリンジェント条件下のハイブリダイゼーションを用いることができ、かつハイブリッド形成もしくは洗浄用媒体のいずれかがストリンジェントであってもよいことを理解するであろう。ハイブリッド形成条件のストリンジェンシーが高くなるにつれて、プローブと二重鎖形成標的の間に存在する相補度をより高くすべきである。温度、イオン濃度、ｐＨおよび部分変性溶媒、例えばホルムアミドなどの存在の中の１種以上を用いてストリンジェンシーを制御することができる。例えば、便利には、反応体溶液の極性を例えばホルムアミドの濃度が０％から５０％の範囲内になるように操作することなどで変えることでハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを変える。結合が検出可能であるに必要な相補度（配列同一性）はハイブリッド形成用媒体および／または洗浄用媒体のストリンジェンシーに応じて変わるであろう。相補度は最適には１００％または７０−１００％またはこれの中のいずれかの範囲または値であろう。しかしながら、プローブとプライマーの配列が若干異なる場合にはハイブリッド形成および／または洗浄用媒体のストリンジェンシーを低下させることでそれを補うことができると理解されるべきである。
ＲＮＡまたはＤＮＡを増幅させる方法は本技術分野で良く知られており、それを本明細書に示す教示および指針を基にして過度な実験を行うことなく本発明に従って用いることができる。
公知のＤＮＡもしくはＲＮＡ増幅方法には、これらに限定するものでないが、ポリメラ
ーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連増幅方法［例えばＭｕｌｌｉｓ他の米国特許第４，６８３，１９５号、４，６８３，２０２号、４、８００、１５９号、４，９６５，１８８号、Ｔａｂｏｒ他の米国特許第４，７９５，６９９号およびお４，９２１，７９４号、Ｉｎｎｉｓの米国特許第５，１４２，０３３号、Ｗｉｌｓｏｎ他の米国特許第５，１２２，４６４号、Ｉｎｎｉｓの米国特許第５，０９１，３１０号、Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ他の米国特許第５，０６６，５８４号、Ｇｅｌｆａｎｄ他の米国特許第４，８８９，８１８号、Ｓｉｌｖｅｒ他の米国特許第４，９９４，３７０号、Ｂｉｓｗａｓの米国特許第４，７６６，０６７号、Ｒｉｎｇｏｌｄの米国特許第４，６５６，１３４号を参照］、および２本鎖ＤＮＡ合成の鋳型として標的配列に対するアンチセンスＲＮＡを用いるＲＮＡ媒介増幅（Ｍａｌｅｋ他の米国特許第５，１３０，２３８号、商標ＮＡＳＢＡ）（これらの文献の内容は全体が引用することによって本明細書に組み入れられる）（例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌまたは上記Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）が含まれる。
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いて本発明のポリヌクレオチドの配列および関連遺伝子をゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーから直接増幅させることができる。また、ＰＣＲおよび他のインビトロ増幅方法も有用であり、例えば発現させるべき蛋白質をコードする核酸配列をクローン化する方法、サンプルの中に入っている所望ｍＲＮＡの存在を検出する目的、核酸の配列を決定する目的または他の目的のプローブとして用いる核酸を生じさせる方法なども有用であり得る。技術者をインビトロ増幅方法に導くに充分な技術の例が上記Ｂｅｒｇｅｒ、上記Ｓａｍｂｒｏｏｋおよび上記ＡｕｓｕｂｅｌばかりでなくＭｕｌｌｉｓ他の米国特許第４，６８３，２０２号（１９８７）およびＩｎｎｉｓ他のＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．編集、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０）に見られる。ゲノムＰＣＲ増幅用市販キットは本技術分野で公知である。例えばＡｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＰＣＴ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照のこと。加うるに、長鎖ＰＣＲ産物の収率を向上させる目的で例えばＴ４遺伝子３２蛋白質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いることも可能である。
核酸を構築するに適した合成方法
本発明の単離核酸の調製をまた公知方法による直接的化学合成で実施することも可能である（例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌを参照のこと）。化学的合成では一般に１本鎖オリゴヌクレオチドがもたらされ、これを相補的配列と雑種形成させるか或は１本鎖を鋳型として用いたＤＮＡポリメラーゼによる重合で２本鎖ＤＮＡに変化させることができる。本分野の技術者は、ＤＮＡの化学的合成は塩基数が約１００またはそれ以上の配列に制限され得るが、より短い配列を連結させることでより長い配列を得ることも可能であることを理解するであろう。
組換え型発現カセット
本発明は、更に、本発明の核酸を含有して成る組換え型発現カセットも提供する。本発明の抗体をコードする本発明の核酸配列、例えばｃＤＮＡまたはゲノム配列などを用いて、少なくとも１種の所望宿主細胞の中に導入することができる組換え型発現カセットを構築することができる。組換え型発現カセットは、典型的に、意図した宿主細胞の中で起こさせる本ポリヌクレオチドの転写を指図する転写開始調節配列と機能的に連結している本発明のポリヌクレオチドを含んで成る。本発明の核酸の発現を指図する目的で異種プロモーターおよび異種ではない（即ち内因性）プロモーターの両方を用いることができる。
いくつかの態様では、プロモーター、エンハンサーまたは他の要素として働く単離核酸を異種ではない形態の本発明のポリヌクレオチドの適切な場所（イントロンの上流、下流または中）に導入することで本発明のポリヌクレオチドの発現を上方または下方調節する
ことも可能である。例えば、内因性プロモーターに変異、欠如および／または置換による改変をインビボまたはインビトロで受けさせてもよい。
ベクターおよび宿主細胞
本発明は、また、本発明の単離核酸分子を含有させたベクター、本組換え型ベクターを用いて遺伝的に改変を受けさせた宿主細胞、および本技術分野で良く知られている如き組換え技術を用いて少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を生じさせることにも関する。例えば上記Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、上記Ａｕｓｕｂｅｌ他（各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
本ポリヌクレオチドを場合により選択可能マーカー含有ベクターと連結させて宿主の中で増殖させてもよい。一般的には、プラスミドベクターを沈澱物、例えば燐酸カルシウム沈澱物などまたは帯電脂質との複合体の中に導入する。当該ベクターがウイルスの場合、適切なパッケージング細胞株を用いてそれにパッケージングをインビトロで受けさせた後、宿主細胞の中に形質導入してもよい。
ＤＮＡ挿入断片と適切なプロモーターを動作可能なように連結させておくべきである。その発現構築物に更に転写開始部位および終止部位も含有させ、そして転写された領域の中に翻訳用リボソーム結合部位も含有させる。そのような構築物が発現する成熟した転写物のコード部分に好適には翻訳されるべきｍＲＮＡの開始部分の所に適切に位置する翻訳開始コドンおよびそれの末端部の所に適切に位置する終止コドン［例えばＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ（哺乳動物または真核細胞発現の場合にはＵＡＡおよびＵＡＧが好適である）］を含有するようにする。
場合によるが好適には、発現ベクターに少なくとも１種の選択可能マーカーを含有させる。そのようなマーカーには、例えばこれらに限定するものでないが、真核細胞を培養する場合のメトトレキセート（ＭＴＸ）、ジヒドロホレート還元酵素（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６；４，６３４，６６５；４，６５６，１３４；４，９５６，２８８；５，１４９，６３６；５，１７９，０１７）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸またはグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号、５，７７０，３５９号、５，９２７，７３９号）耐性遺伝子、そして大腸菌および他の細菌または原核細胞を培養する場合のテトラシクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子などが含まれる（前記特許は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）。上述した宿主細胞用の適切な培養培地および条件は本技術分野で公知である。適切なベクターが本分野の技術者に容易に明らかになるであろう。宿主細胞へのベクター構築物の導入は燐酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染または他の公知方法を用いて実施可能である。そのような方法は本技術分野、例えば上記Ｓａｍｂｒｏｏｋの１−４章および１６−１８章、上記Ａｕｓｕｂｅｌの１、９、１３、１５、１６章などに記述されている。
本発明の少なくとも１種の抗体を修飾形態、例えば融合蛋白質などとして発現させることも可能であり、それに分泌シグナルばかりでなくまた追加的異種機能領域を含有させることも可能である。例えば、追加的アミノ酸、特に帯電しているアミノ酸などの領域を抗体のＮ末端に付加させることで、精製または次の取り扱いおよび貯蔵中にそれが宿主細胞内で示す安定性および持続性を向上させることも可能である。また、精製を容易にするペプチド部分を本発明の抗体に付加させることも可能である。そのような領域を抗体またはこれの少なくとも１つのフラグメントを最終的に調製する前に除去しておくことも可能である。そのような方法は数多くの標準的実験マニュアル、例えば上記Ｓａｍｂｒｏｏｋの１７．２９−１７．４２章および１８．１−１８．７４章、上記Ａｕｓｕｂｅｌの１６、
１７および１８章などに記述されている。
本分野の通常の技術者は、本発明の蛋白質をコードする核酸の発現で利用可能な数多くの発現系を認識するであろう。別法として、本発明の核酸の発現を本発明の抗体をコードする内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞の中でターンオン（ｔｕｒｎｉｎｇ ｏｎ）（操作）することで宿主細胞の中で起こさせることも可能である。そのような方法は例えば米国特許第５，５８０，７３４号、５，６４１，６７０号、５，７３３，７４６号および５，７３３，７６１号（これらは引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）に記述されているように本技術分野で良く知られている。
本抗体、これの特定部分または変異体を産生させるに有用な細胞培養物の例は哺乳動物の細胞である。哺乳動物の細胞系はしばしば単層形態の細胞であるが、また、哺乳動物の細胞の懸濁液またはバイオリアクターを用いることも可能である。無傷のグリコシル化蛋白質を発現し得る適切な宿主細胞系が本技術分野で数多く開発され、それらには、ＣＯＳ−１（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０），ＣＯＳ−７（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６５１），ＨＥＫ２９３，ＢＨＫ２１（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１０），ＣＨＯ（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６１０）およびＢＳＣ−１（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−２６）細胞株、Ｃｏｓ−７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐ Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３，ＳＰ２／０−Ａｇ１４，２９３細胞、ＨｅＬａ細胞などが含まれ、これらは例えばＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）などから容易に入手可能である。好適な宿主細胞には、リンパ系起源の細胞、例えば骨髄腫およびリンパ腫細胞などが含まれる。特に好適な宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ＣＲＬ−１８５１）が含まれる。特に好適な態様における組換え型細胞はＰ３Ｘ６３Ａｂ８．６５３またはＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞である。
そのような細胞用の発現ベクターに下記の発現制御配列、例えばこれらに限定するものでないが、複製起点；プロモーター［例えば後期もしくは早期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号、５，３８５，８３９号）、ＨＳＶ
ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセレートキナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号）、少なくとも１種のヒト免疫グロブリンプロモーター；エンハンサーおよび／またはプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０ラージＴＡｇポリＡ付加部位）、および転写終了配列などの中の１つ以上を含有させてもよい。例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌ他、上記Ｓａｍｂｒｏｏｋ他を参照。本発明の核酸または蛋白質の産生で用いるに有用な他の細胞も公知でありそして／または入手可能、例えばＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）または他の公知もしくは商業源から入手可能である。
真核宿主細胞を用いる場合、典型的には、ポリアデニル化または転写終了配列をベクターの中に取り込ませる。終了配列の一例はウシ成長ホルモン遺伝子に由来するポリアデニル化配列である。また、転写物の正確なスプライシングを起こさせる配列を含めることも可能である。スプライシング配列の一例はＳＶ４０に由来するＶＰ１イントロンである［Ｓｐｒａｇｕｅ他、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３）］。加うるに、本技術分野で公知のように、宿主細胞の中で起こる複製を制御する遺伝子配列をベクターの中に取り込ませることも可能である。
抗体の精製
抗−ＩＬ−６抗体を良く知られた方法で組換え型細胞培養物から回収して精製することができるが、そのような方法には、これらに限定するものでないが、蛋白質Ａによる精製、硫酸アンモニウムもしくはエタノールによる沈澱、酸による抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーなどが含まれる。また、高性能液クロ（「ＨＰＬＣ」）を精製で用いることも可能である。例えばＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙまたはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，（１９９７−２００１）の例えば１、４、６、８、９、１０章（各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）などを参照のこと。
本発明の抗体には、天然精製生成物、化学合成手順の生成物および真核宿主（例えば酵母菌、高等植物、昆虫および哺乳動物の細胞を包含）を用いた組換え技術で生じさせた生成物が含まれる。組換え産生手順で用いる宿主に応じて、本発明の抗体にグリコシル化を受けさせてもよいか或はグリコシル化を受けさせなくてもよいが、グリコシル化を受けさせるのが好適である。そのような方法は数多くの標準的実験マニュアルに記述されており、例えば上記Ｓａｍｂｒｏｏｋの１７．３７−１７．４２章、上記Ａｕｓｕｂｅｌの１０、１２、１３、１６、１８および２０章、上記Ｃｏｌｌｉｇａｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅの１２−１４章（これらは全部引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）などに記述されている。
抗−ＩＬ−６抗体
本発明に従う抗−ＩＬ−６抗体には、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えばこれらに限定するものでないが、少なくとも１つのリガンド結合部分（ＬＢＰ）、例えばこれらに限定するものでないが、重もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、フレームワーク領域（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４またはこれらのフラグメント、または配列識別番号：１０５−１１２に示す如き領域、更に場合により少なくとも１種の置換、挿入または欠失を含んで成っていてもよい）、重鎖もしくは軽鎖定常領域（例えば少なくとも１つのＣＨ１、ヒンジ１、ヒンジ２、ヒンジ３、ヒンジ４、ＣＨ２またはＣＨ３、またはこれらのフラグメントを含んで成り、更に場合により少なくとも１種の置換、挿入または欠失を含んで成っていてもよい）、またはこれらのいずれかの部分（これらを本発明の抗体の中に組み込むことができる）を含んで成る蛋白質もしくはペプチド含有分子のいずれも含まれる。本発明の抗体には、いずれかの哺乳動物、例えばこれらに限定するものでないが、ヒト、マウス、ウサギ、ラット、齧歯類、霊長類またはこれらの任意組み合わせなどの抗体またはそれらに由来する抗体が含まれる。
本発明の単離抗体は、適切なポリヌクレオチドのいずれかまたは単離もしくは調製抗体のいずれかがコードする本明細書に開示する抗体アミノ酸配列を含んで成る。好適には、本ヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントはヒトＩＬ−６と結合することで、その蛋白質が示す少なくとも１種の生物学的活性をある程度または実質的に中和する。少なくとも１種のＩＬ−６蛋白質もしくはフラグメントが示す少なくとも１種の生物学的活性をある程度または好適には実質的に中和する抗体またはこれの特定部分または変異体は、その蛋白質またはフラグメントと結合することでＩＬ−６とＩＬ−６受容体の結合が介在するか或はＩＬ−６に依存するか或はそれが介在する他の機構による活性を抑制する。本明細書で用いる如き用語「中和抗体」は、ＩＬ−６依存活性を検定に応じて約２０−１２０％、好適には少なくとも約１０，２０，３０，４０，５０，５５，６０，６５，７０，７５，８０，８５，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，１００％またはそれ以上抑制し得る抗体を指す。抗−ＩＬ−６抗体がＩＬ−６依存活性を抑制する能
力の検定を好適には本明細書に記述しそして／または本技術分野で公知の如き少なくとも１種の適切なＩＬ−６蛋白質もしくは受容体検定で実施する。本発明のヒト抗体は、如何なる種類（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤなど）またはアイソタイプであってもよく、カッパもしくはラムダ軽鎖を含んで成り得る。１つの態様における本ヒト抗体はＩｇＧ重鎖もしくは限定フラグメント、例えばアイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４（例えばγ１、γ２、γ３またはγ４）の中の少なくとも１つを含んで成る。この種類の抗体の調製は、本明細書に記述しそして／または本技術分野で公知の如き少なくとも１つのヒト軽鎖（例えばＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＭ）トランス遺伝子を含んで成る遺伝子導入マウスまたは他の遺伝子導入哺乳動物（ヒト以外）を用いて実施可能である。別の態様における抗−ヒトＩＬ−６ヒト抗体はＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１軽鎖を含んで成る。
本発明の少なくとも１種の抗体は、少なくとも１種のＩＬ−６蛋白質、これのサブユニット、フラグメント、部分または任意組み合わせに特異的な少なくとも１つの特定エピトープと結合する。前記少なくとも１つのエピトープは、本蛋白質の少なくとも一部を含んで成る少なくとも１つの抗体結合領域を含んで成っていてもよく、好適には、そのエピトープを本蛋白質の少なくとも１つの細胞外、可溶、親水性、外側または細胞質部分で構成させる。前記少なくとも１つの特定エピトープは、配列識別番号：１１５の連続したアミノ酸の中の少なくとも１−３個のアミノ酸から特定部分全体の少なくとも１種のアミノ酸配列の任意組み合わせ、例えばアミノ酸残基１５１−１７８、より具体的には残基１７１−１８２を含んで成っていてもよい。
本発明のヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントは、一般に、少なくとも１つの重鎖可変領域の少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは変異体および少なくとも１つの軽鎖可変領域の少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは変異体を含んで成る抗原結合領域を含有して成る。前記ＣＤＲ配列はヒト生殖細胞配列に由来するものであってもよいか或は生殖細胞配列に密に合致するものであってもよい。例えば、元々のマウスＣＤＲから生じさせた合成ライブラリーに由来するＣＤＲなどを用いてもよい。元々のマウス配列に同類置換を取り込ませることでそのようなＣＤＲを生じさせることができる。非限定例として、本抗体もしくは抗原結合部分もしくは変異体は、配列識別番号：７９、８１、８３、８５、８７、８９および９１から成る群から選択したアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３および／または配列識別番号：２９、３１、３３および３５から成る群から選択したアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３の中の少なくとも一方を含んで成り得る。特別な態様における本抗体もしくは抗原結合フラグメントは、ＣＤＲ１、２および／または３（例えば配列識別番号：３７、４９および７９）に相当するアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ（即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３）の少なくとも一部を含んで成る抗原結合領域を持ち得る。別の態様における本抗体もしくは抗原結合部分もしくは変異体は、ＣＤＲ１、２および／または３（例えば配列識別番号：１、１７および９）に相当するアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ（即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３）の少なくとも一部を含んで成る抗原結合領域を持ち得る。
好適な態様において、本抗体もしくは抗原結合フラグメントの前記３つの重鎖ＣＤＲおよび前記３つの軽鎖ＣＤＲは、本明細書に記述する如きｍＡｂ ＡＭＥ−Ａ９，ＡＭＥ−１ｂ，ＡＭＥ−１８ａ，ＡＭＥ−２２ａ，ＡＭＥ−２０ｂ，ＡＭＥ−２３ａ，およびＡＭＥ−１９ａの中の少なくとも１つの相当するＣＤＲのアミノ酸配列を有する。そのような抗体の調製は、本抗体のいろいろな部分（例えばＣＤＲ、フレイムワーク）を通常技術を用いて一緒に化学的に結合させるか、本抗体をコードする核酸分子（即ち１種以上の分子）を調製しそして通常の技術である組換えＤＮＡ技術を用いて発現させるか、或は他の適切な方法のいずれかを用いて実施可能である。
本抗−ＩＬ−６抗体は、限定したアミノ酸配列を有する重もしくは軽鎖可変領域の中の少なくとも一方を含んで成り得る。例えば、好適な態様における本抗−ＩＬ−６抗体は、少なくとも１つの重鎖可変領域（場合により配列識別番号：９５、９９、１０３、１１８、１２２、１２６および１３０から成る群から選択したアミノ酸配列を持たせてもよい）および／または少なくとも１つの軽鎖可変領域（場合により配列識別番号：９３、９７、１０１、１１６、１２０、１２４および／または１２８から成る群から選択したアミノ酸配列を持たせてもよい）の中の少なくとも一方を含んで成る。ヒトＩＬ−６と結合しかつ限定した重もしくは軽鎖可変領域を含んで成る抗体の調製は適切な方法、例えばファージ提示法［Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．他、Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ、１（５）：８６３−８６８（１９９８）］または本技術分野で公知でありそして／または本明細書に記述する如き遺伝子導入動物を用いる方法などを用いて実施可能である。例えば、機能的に再配列させたヒト免疫グロブリン重鎖トランス遺伝子および機能的再配列を受けていてもよいヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に由来するＤＮＡを含んで成るトランス遺伝子を含有して成る遺伝子導入マウスにヒトＩＬ−６またはこれのフラグメントを用いて免疫性を与えることなどで抗体の産生を引き出してもよい。必要ならば、そのような抗体産生細胞を単離してもよく、そして本明細書に記述しそして／または本技術分野で公知のようにして、ハイブリドーマまたは他の不死化抗体産生細胞を生じさせてもよい。別法として、コード化核酸またはこれの一部を適切な宿主細胞の中で用いることで本抗体、特定部分または変異体を発現させることも可能である。
アミノ酸コード
本発明の抗−ＩＬ−６抗体を構成するアミノ酸をしばしば省略形で示す。アミノ酸の表示を本技術分野で充分に理解されているように当該アミノ酸をそれの単一文字コード、３文字コード、名前または３ヌクレオチドコドン１種または２種以上で表示することで示すことができる（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ
Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４）を参照）。
本発明の抗−ＩＬ−６抗体は、本明細書に示す如き１種以上のアミノ酸置換、欠失または付加（自然変異またはヒトによる操作のいずれかによる）を含んでいてもよい。本発明の抗−ＩＬ−６抗体の中の機能に必須なアミノ酸を本技術分野で公知の方法、例えば部位特異的突然変異誘発法またはアラニン走査突然変異誘発法［例えば上記Ａｕｓｕｂｅｌの８、１５章、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８９）］などで同定することができる。後者の手順では、分子中の全て残基の所に単一のアラニン変異を導入する。次に、その結果としてもたらされた変異分子に生物学的活性、例えばこれらに限定するものでないが、少なくとも１種のＩＬ−６中和活性などに関する試験を受けさせる。また、抗体結合に重要な部位も構造分析、例えば結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識（Ｓｍｉｔｈ，他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ Ｖｏｓ，他、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））などを用いることで同定可能である。
本発明の抗−ＩＬ−６抗体は、これらに限定するものでないが、配列識別番号：９１、９３、９５、９７、９９などの中の少なくとも１つの連続したアミノ酸の中の５個から全部から選択した少なくとも一部、配列または組み合わせを含有し得る。
この示した活性の中の少なくとも１つが向上しているか或はそれを維持し得る非限定変異体には、これらに限定するものでないが、開示する変異アミノ酸配列の中の変化した残基の中の少なくとも１つの置換に相当する少なくとも１種の変異を更に含んで成る前記ポリペプチドのいずれも含まれる。
抗−ＩＬ−６抗体に更に場合により配列識別番号：９５、９９および１０３などの中の少なくとも１つの連続したアミノ酸の配列から変化したアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有させることも可能である（例えば本明細書に示す配列の１種以上の同類置換）。また、本発明は、配列識別番号：９３、９７または１０１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列または配列識別番号：７９、８１、８３、８５、８７、８９または９１の重鎖のアミノ酸配列の変異体も包含する。
技術者が理解するであろうように、本発明は、本発明の少なくとも１種の生物学的活性抗体を包含する。生物学的活性抗体は、天然（合成ではない）、内因性または関連および公知抗体が示す活性の少なくとも２０％、３０％または４０％、好適には少なくとも５０％、６０％または７０％、最も好適には少なくとも８０％、９０％または９５％−１０００％またはそれ以上の比活性を示す。酵素の活性および基質の特異性の尺度を検定および量化する方法は本分野の技術者に良く知られている。
本発明は、別の面において、有機部分を共有結合させることによる修飾を受けさせておいた本明細書に記述する如きヒト抗体および抗原結合フラグメントに関する。そのような修飾によって、薬物動態特性が向上した（例えば生体内血清中半減期が向上した）抗体または抗原結合フラグメントを生じさせることができる。その有機部分は直鎖もしくは分枝親水性重合体基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であってもよい。特別な態様では、そのような親水性重合体基に約８００から約１２０，０００ダルトンの分子量を持たせてもよく、それはポリアルカングリコール［例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）］、炭水化物重合体、アミノ酸重合体またはポリビニルピロリドンなどであってもよく、そして脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基は炭素原子を約８から約４０個含有していてもよい。
本発明の修飾を受けさせた抗体および抗原結合フラグメントは、本抗体と共有結合しているか、直接的または間接的に結合している１種以上の有機部分を含んで成り得る。本発明の抗体または抗原結合フラグメントと結合させる有機部分は各々独立して親水性重合体基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であってもよい。本明細書で用いる如き用語「脂肪酸」にはモノカルボン酸およびジカルボン酸が含まれる。「親水性重合体基」を本明細書で用語として用いる場合、これは水中の溶解度の方がオクタン中の溶解度より高い有機重合体を指す。例えば、ポリリシンは水中の方がオクタン中よりも高い溶解性を示す。従って、ポリリシンを共有結合させることによる修飾を受けさせた抗体は本発明に含まれる。本発明の抗体に修飾を受けさせる時に用いるに適した親水性重合体は直鎖もしくは分枝であってもよく、それには例えばポリアルカングリコール［例えばＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど］、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など）、親水性アミノ酸の重合体（例えばポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパルテートなど）、ポリアルカンオキサイド（例えばポリエチレンオキサイド、ポリプロピレンオキサイドなど）およびポリビニルピロリドンなどが含まれる。好適には、本発明の抗体を修飾する親水性重合体が個別の分子実体として示す分子量を約８００から約１５０，０００ダルトンにする。例えばＰＥＧ５０００およびＰＥＧ２０，０００［下付き文字は重合体が示す平均分子量（ダルトン）である］を用いてもよい。そのような親水性重合体基は１から約６個のアルキル、脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換されていてもよい。脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換されている親水性重合体の調製は適切な方法を用いることで実施可能である。例えば、アミン基を含有する重合体を脂肪酸もしくは脂肪酸エステルのカルボキシレートと連成させてもよく、そして脂肪酸または脂肪酸エステルが有する活性カルボキシレート（例えばＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールで活性化させた）を重合体が有するヒドロキシル基と連成させてもよい。
本発明の抗体に修飾を受けさせる時に用いるに適した脂肪酸および脂肪酸エステルは飽和であってもよいか或は不飽和単位を１個以上含有していてもよい。本発明の抗体に修飾を受けさせる時に用いるに適した脂肪酸には、例えばｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ４０）、シス−Δ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレエート）、あらゆるシス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタ二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸などが含まれる。適切な脂肪酸エステルには、直鎖もしくは分枝低級アルキル基を含有するジカルボン酸モノエステルが含まれる。そのような低級アルキル基は炭素原子を１から約１２個、好適には１から約６個含有し得る。
そのような修飾を受けたヒト抗体および抗原結合フラグメントの調製は適切な方法、例えば１種以上の修飾剤を用いた反応などで実施可能である。「修飾剤」を本明細書で用語として用いる場合、これは、活性基を含有する適切な有機基（例えば親水性重合体、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性基」は、適切な条件下で２番目の化学基と反応して当該修飾剤と前記２番目の化学基の間に共有結合を形成し得る化学的部分または官能基である。例えば、アミン反応性活性基には親電子基、例えばトシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシニミジルエステル（ＮＨＳ）などが含まれる。チオールと反応し得る活性基には、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロイル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などが含まれる。アルデヒド官能基をアミン含有もしくはヒドラジン含有分子と連成させることができ、そしてアジド基を三価燐基と反応させることでホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を生じさせることができる。活性基を分子の中に導入するに適した方法は本技術分野で公知である（例えばＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６））を参照）。活性基を有機基（例えば親水性重合体、脂肪酸、脂肪酸エステル）と直接結合させてもよいか、或はリンカー部分、例えば二価Ｃ１−Ｃ１２基（ここで、１個以上の炭素原子がヘテロ原子、例えば酸素、窒素または硫黄に置き換わっていてもよい）などを通して結合させてもよい。適切なリンカー部分には、例えばテトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−，−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−，−（ＣＨ２）２−ＮＨ−および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−が含まれる。リンカー部分を含有して成る修飾剤の製造は、例えばモノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えばモノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）と脂肪酸を１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で反応させて遊離アミンと脂肪酸のカルボキシレートの間にアミド結合を生じさせることなどで実施可能である。その生成物にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた処理を受けさせることで前記Ｂｏｃ保護基を除去することで第一級アミン基を露出させることができ、それを別のカルボキシレート（記述した如き）と連成させてもよいか、或は無水マレイン酸と反応させそしてその結果として生じた生成物を環化させることで当該脂肪酸の活性マレイミド誘導体を生じさせてもよい［例えばＴｈｏｍｐｓｏｎ他、ＷＯ ９２／１６２２１（これの教示は全体が引用することによって本明細書に組み入れられる）を参照］。
本発明の修飾抗体の製造は、ヒト抗体または抗原結合フラグメントを修飾剤と反応させることで実施可能である。例えば、アミン反応性修飾剤、例えばＰＥＧのＮＨＳエステルなどを用いて有機部分を本抗体と部位に特異的ではない様式で結合させてもよい。また、抗体または抗原結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば鎖内ジスルフィド結合）に還元を受けさせることを通して、修飾ヒト抗体または抗原結合フラグメントを調製するこ
とも可能である。次に、その還元を受けさせた抗体もしくは抗原結合フラグメントをチオール反応性修飾剤と反応させることで本発明の修飾抗体を生じさせることができる。本発明の抗体の特定部位と結合している有機部分を含んで成る修飾ヒト抗体および抗原結合フラグメントの調製は適切な方法、例えば逆蛋白分解（Ｆｉｓｃｈ 他、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ 他、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ 他、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ 他、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）：５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓ 他、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７）），およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｒｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）に記述されている方法などを用いて実施可能である。
抗−ＩＬ−６抗体組成物に対する抗イディオタイプ抗体
本発明は、モノクローナル抗−ＩＬ−６抗体に加えて、また、本発明の前記抗体に特異的な抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体にも向けたものである。抗−Ｉｄ抗体は、別の抗体の抗原結合領域に一般に関連したユニークな決定基を認識する抗体である。そのような抗−Ｉｄの調製は、同じ種および遺伝型の動物（例えばマウス株）をＩｄ抗体の源として用いてそれに本抗体またはこれのＣＤＲ含有領域を用いて免疫性を与えることで実施可能である。その免疫性を与えた動物は免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識しかつ反応することで抗−Ｉｄ抗体を産生する。その抗−Ｉｄ抗体をまた「免疫原」として用いて更に別の動物に免疫反応を誘発することでいわゆる抗−抗−Ｉｄ抗体を生じさせることも可能である。
本発明は、また、本発明の抗−ＩＬ−６抗体を少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種、少なくとも６種またはそれ以上含有して成る少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物も提供し、本明細書に記述しそして／または本技術分野で公知のようにして、それらを天然には存在しない組成物、混合物または形態として提供する。そのような組成物には、配列識別番号：１−１１４および１１６−１３８の連続したアミノ酸の中の７０−１００％から成る群から選択した抗−ＩＬ−６抗体アミノ酸配列またはこれの特定フラグメント、ドメインまたは変異体の全長、Ｃ末端および／またはＮ末端欠如変異体、ドメイン、フラグメントまたは特定変異体を少なくとも１つまたは２つ含んで成る天然には存在しない組成物が含まれる。好適な抗−ＩＬ−６抗体組成物は、本明細書に記述する抗−ＩＬ−６抗体配列の一部、例えば配列識別番号：１５、２７、３５、４７、６１および９１の７０−１００％またはこれの特定フラグメント、ドメインまたは変異体を含有する少なくとも１種のＣＤＲまたはＬＢＰとして全長、フラグメント、ドメインまたは変異体を少なくとも１つまたは２つ含有する。さらなる好適な組成物は、例えば配列識別番号：９３、９５、９７、９９、１０１、１０３などの７０−１００％の中の少なくとも１つの４０−９９％またはこれの特定フラグメント、ドメインまたは変異体を含んで成る。そのような組成物のパーセントは、本技術分野で公知であるか或は本明細書に記述するように、液体または無水溶液、混合物、懸濁液、乳液、粒子、粉末またはコロイドとしての重量、体積、濃度、モル濃度または重量モル濃度である。
さらなる治療有効成分を含有して成る抗体組成物
本発明の抗体組成物に場合により更に抗感染薬、心臓血管（ＣＶ）系作用薬、中枢神経系（ＣＮＳ）作用薬、自律神経系（ＡＮＳ）作用薬、呼吸器作用薬、胃腸（ＧＩ）管作用薬、ホルモン薬、体液もしくは電解質平衡用薬剤、血液製剤、抗癌薬、免疫修飾薬、眼、耳もしくは鼻用薬剤、局所用薬剤、栄養薬などの中の少なくとも１種から選択した少なくとも１種の化合物もしくは蛋白質を有効量で含有させることも可能である。そのような薬剤は本技術分野で良く知られており、それには本明細書に示す各々の調製、適応、投薬お
よび投与が含まれる（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，第２１版、Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ，ＰＡ，２００１；Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ Ｄｒｕｇ Ｇｕｉｄｅ ２００１，編集、Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＪ；Ｐｈａｒｍｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ 他編集、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ，各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられるを参照）。
前記抗感染薬は、抗アメーバ薬または少なくとも１種の抗原虫薬、駆虫薬、抗真菌薬、抗マラリア薬、抗結核薬または少なくとも１種の抗ハンセン菌薬、アミノグリコシド、ペニシリン、セファロスポリン、テトラシクリン、スルホンアミド、フルオロキノロン、抗ウイルス薬、マクロライド系抗感染薬およびいろいろな抗感染薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記ＣＶ作用薬は強心薬、抗不整脈薬、抗狭心症薬、抗高血圧薬およびいろいろな心臓脈管薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記ＣＮＳ作用薬は、非麻薬性鎮痛薬から選択した少なくとも１種または解熱薬、非ステロイド系抗炎症薬、麻酔薬または少なくとも１種のオピオイド鎮痛薬、睡眠−鎮痛薬、抗けいれん薬、抗うつ薬、抗不安薬、抗精神病薬、中枢神経系興奮薬、抗パーキンソン病薬、およびいろいろな中枢神経系薬剤から選択した少なくとも１種であってもよい。前記ＡＮＳ作用薬は、コリンアゴニスト（副交感神経作用薬）、抗コリン作用薬、アドレナリン作用薬（交感神経作用薬）、アドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）、骨格筋弛緩薬および神経筋遮断薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記呼吸器作用薬は、抗ヒスタミン剤、気管支拡張剤、去痰薬または少なくとも１種の鎮咳薬、およびいろいろな呼吸器作用薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記ＧＩ管作用薬は、制酸薬または少なくとも１種の粘滑薬または少なくとも１種の整腸薬、消化酵素または少なくとも１種の胆石溶解剤、下痢止め薬、下剤、制吐薬および抗潰瘍薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記ホルモン薬は、コルチコステロイド、アンドロゲンまたは少なくとも１種のアナボリックステロイド、エストロゲンまたは少なくとも１種のプロゲスチン、ゴナドトロピン、抗糖尿病薬または少なくとも１種のグルカゴン、甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモンアンタゴニスト、下垂体ホルモンおよび副甲状腺様薬剤から選択した少なくとも１種であってもよい。前記体液および電解質平衡用薬剤は、利尿薬、電解質または少なくとも１種の置換溶液、酸性化薬または少なくとも１種のアルカリ性化薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記血液製剤は、造血剤、抗凝血薬、血液製剤および血栓溶解酵素から選択した少なくとも１種であってもよい。前記抗癌薬は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、ホルモン平衡を変える抗癌薬およびいろいろな抗癌薬から選択した少なくとも１種であってもよい。前記免疫修飾薬は、免疫抑制剤、ワクチンまたは少なくとも１種のトキソイド、抗毒素薬または少なくとも１種の抗毒血清、免疫血清、および生物反応修飾物質から選択した少なくとも１種であってもよい。前記眼、耳および鼻用薬剤は、眼科用抗感染薬、眼科用抗炎症薬、縮瞳薬、散瞳薬、眼科用血管収縮薬、いろいろな眼、耳および鼻用薬剤から選択した少なくとも１種であってもよい。前記局所用薬剤は、局所抗感染薬、局所抗疥癬薬、または少なくとも１種のシラミ駆除剤または外用副腎皮質ホルモン剤から選択した少なくとも１種であってもよい。前記栄養薬は、ビタミン、ミネラルまたはカロリー薬（ｃａｌｏｒｉｃｓ）から選択した少なくとも１種であってもよい。例えば上記Ｎｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの内容を参照のこと。
前記少なくとも１種の抗アメーバ薬または抗原虫薬は、アトバクオン、塩酸クロロキン、燐酸クロロキン、メトロインダゾール、塩酸メトロニダゾールおよびイセチオン酸ペンタミジンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の駆虫薬は、メベンダゾール、パモ酸ピランテルおよびチアベンダゾールから選択した少なくとも１種であってもよい。前記抗真菌薬は、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ硫酸コレステリ
ル複合体、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテリシンＢリポソーム、フルコナゾール、フルシトシン、微細グリセオフルビン、超微細グリセオフルビン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ニスタチンおよび塩酸テルビナフィンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗マラリア薬は、塩酸クロロキン、燐酸クロロキン、ドキシシクリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、燐酸プリマキン、ピリメタミンおよびスルファドキシンを伴うピリメタミンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗結核薬または抗ハンセン菌薬は、クロファジミン、シクロセリン、ダプソン、塩酸エタムブトール、イソニアジド、ピラジナミド、リファブチン、リファムピン、リファペンチンおよび硫酸ストレプトマイシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のアミノグリコシドは、硫酸アミカシン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸ネオマイシン、硫酸ストレプトマイシンおよび硫酸トブラマイシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のペニシリンは、アモキシシリン／クラブラン酸カリウム、アモキシシリン三水和物、アンピシリン、アンピシリンナトリウム、アンピシリン三水和物、アンピシリンナトリウム／スルバクタムナトリウム、クロキサシリンナトリウム、ジクロキサシリンナトリウム、メズロシリンナトリウム、ナフシリンナトリウム、オキサシリンナトリウム、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＧナトリウム、ペニシリンＶカリウム、ピペラシリンナトリウム、ピペラシリンナトリウム／タゾバクタムナトリウム、チカルシリンジナトリウムおよびチカルシリンジナトリウ／クラブラン酸カリウムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のセファロスポリンは、セファクロル、セファドロキシル、セファゾリンナトリウム、セフジニル、塩酸セフェピム、セフィキシム、セフメタゾールナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォテタンジナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフポドキシムプロキセチル、セフプロジル、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシムナトリウム、セフトリアクソンナトリウム、セフロキシムアクセチル、セフロキシムナトリウム、塩酸セファレキシン、セファレキシン一水和物、セファラジンおよびロラカルベフから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のテトラシクリンは、塩酸デメクロシクリン、ドキシシクリンカルシウム、ドキシシクリンヒクレート、塩酸ドキシシクリン、ドキシシクリン一水和物、塩酸ミノシクリンおよび塩酸テトラシクリンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のスルホンアミドは、コ−トリモキサゾール、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフィソキサゾールおよびスルフィソキサゾールアセチルから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシンおよびメシル酸トロバフロキサシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシンおよびメシル酸トロバフロキサシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗ウイルス薬は、硫酸アバカビル、アシクロビルナトリウム、塩酸アマンタジン、アムプレナビル、シドホビル、メシル酸デラビルジン、ジダノシン、エファビレンズ、ファムシクロビル、ホミビルセンナトリウム、ホスカルネットナトリウム、ガンシクロビル、硫酸インジナビル、ラミブジン、ラミブジン／ジドブジン、メシル酸ネルフィナビル、ネビラピン、燐酸オセルタミビル、リバビリン、塩酸リマンタジン、リトナビル、サキナビル、メシル酸サキナビル、スタブジン、塩酸バラシクロビル、ザルシタビン、ザナミビルおよびジドブジンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のマクロリン抗感染薬は、アジトロマイシン、クラリトロマイシン、ジリトロマイシン、エリスロマイシン塩基、エリスロマイシンエストレート、エチルこはく酸エリスロマイシン、ラクトビオン酸エリスロマイシンおよびステアリン酸エリスロマイシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の
いろいろな抗感染薬は、アズトレオナム、バシトラシン、こはく酸クロラムフェニコールナトリウム、塩酸クリンダマイシン、塩酸クリンダマイシンパルミテート、燐酸クリンダマイシン、イミペネムおよびシラスタチンナトリウム、メロペネム、ニトロフラントイン巨結晶、ニトロフラントイン微結晶、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、塩酸スペクチノマイシン、トリメトプリムおよび塩酸バンコマイシンから選択した少なくとも１種であってもよい（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの２４−２１４頁を参照）。
前記少なくとも１種の強心薬は、乳酸アムリノン、ジゴキシンおよび乳酸ミルリノンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗不整脈薬は、アデノシン、塩酸アミオダロン、硫酸アトロピン、トシル酸ブレチリウム、塩酸ジルチアゼム、ジソピラミド、燐酸ジソピラミド、塩酸エスモロール、酢酸フレカイニド、フマル酸イブチリド、塩酸リドカイン、塩酸メキシレチン、塩酸モリシジン、フェニトイン、フェニトインナトリウム、塩酸プロカイナミド、塩酸プロパフェノン、塩酸プロプラノロール、二硫酸キニジン、グルコン酸キニジン、ポリガラクツロン酸キニジン、硫酸キニジン、ソタロール、塩酸トカイニドおよび塩酸ベラパミルから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗狭心症薬は、アムロジピジンベシレート、亜硝酸アミル、塩酸ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、二硝酸イソソルビド、一硝酸イソソルビド、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニトログリセリン、塩酸プロプラノロール、ベラパミルおよび塩酸ベラパミルから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗高血圧薬は、塩酸アセブトロール、アムロジピンベシレート、アテノロール、塩酸ベナゼプリル、塩酸ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、カンデサルタンシレキセチル、カプトプリル、塩酸カルテオロール、カルベジロール、クロニジン、塩酸クロニジン、ジアゾキシド、塩酸ジルチアゼム、メシル酸ドキサゾシン、エナラプリラット、マレイン酸エナラプリル、メシル酸エプロサルタン、フェロジピン、メシル酸フェノロドパム、フォシノプリルナトリウム、酢酸グアナベンズ、硫酸グアナドレル、塩酸グアンファシン、塩酸ヒドララジン、イルベサルタン、イスラジピン、塩酸ラベタロール、リシノプリル、ロサルタンカリウム、メチルドーパ、塩酸メチルドペート、こはく酸メトプロロール、酒石酸メトプロロール、ミノキシジル、塩酸モエキシプリル、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、ニトロプルシドナトリウム、硫酸ペンブタロール、ペリンドプリルエルブミン、メシル酸フェントールアミン、ピンドロール、塩酸プラゾシン、塩酸プロプラノロール、塩酸キナプリル、ラミプリル、テルミサルタン、塩酸テラゾシン、マレイン酸チモロール、トランドラプリル、バルサルタンおよび塩酸ベラパミルから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗脂血症薬は、アトルバスタチンカルシウム、セリバスタチンナトリウム、コレスチラミン、塩酸コレスチポール、フェノフィブラート（微粉化）、フルバスタチンナトリウム、ゲムフィブロジル、ロバスタチン、ナイアシン、プラバスタチンナトリウムおよびシムバスタチンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のいろいろなＣＶ作用薬は、アブシキシマブ、アルプロスタジル、塩酸アルブタミン、シロスタゾール、二硫酸クロピドグレル、ジピリダモール、エプチフィバチド、塩酸ミドドリン、ペントキシフィリン、塩酸チクロピジンおよび塩酸チロフィバンから選択した少なくとも１種であってもよい（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの２１５−３３６頁を参照）。
前記少なくとも１種の非麻薬性鎮痛薬または解熱薬は、アセタミノフェン、アスピリン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、ジフルニサールおよびサリチル酸マグネシウムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の非ステロイド系抗炎症薬は、セレコキシブ、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、インドメタシンナトリウム三水和物、ケトプロフェン、ケトロラクトロメタミン、ナブ
メトン、ナプロキセン、ナプロセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブおよびスリンダクから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の麻酔薬またはオピオイド鎮痛薬は、塩酸アフェンタニル、塩酸ブプレノルフィン、酒石酸ブトルファノール、燐酸コデイン、硫酸コデイン、クエン酸フェンタニル、フェンタニル経皮システム、フェンタニル経粘膜、塩酸ヒドロモルフォン、塩酸メペリジン、塩酸メタドン、塩酸モルヒネ、硫酸モルヒネ、酒石酸モルヒネ、塩酸ナルブフィン、塩酸オキシコドン、オキシコドンペクチネート、塩酸オキシモルフォン、塩酸ペンタゾシン、塩酸ペンタゾシンおよび塩酸ナロキソン、乳酸ペンタゾシン、塩酸プロポキシフェン、ナプシル酸プロポキシフェン、塩酸レミフェンタニル、クエン酸フェンタニルおよび塩酸トラマドールから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の睡眠−鎮痛薬は、抱水クロラール、エスタゾラム、塩酸フルラゼパム、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、テマゼパム、トリアゾラム、ザレプロンおよび酒石酸ゾルピデムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗けいれん薬は、アセタゾールアミドナトリウム、カルバマゼピン、クロナゼパム、クロラゼブ酸二カリウム、ジアゼパム、ジバルプロエキスナトリウム、エトスクシミド、フォスフェニトインナトリウム、ガバペンチン、ラモトリギン、硫酸マグネシウム、フェノバルビタール、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、フェニトインナトリウム、フェニトインナトリウム（加増量剤）、プリミドン、塩酸チアガビン、トピラメート、バルプロエートナトリウムおよびバルプロ酸から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗うつ薬は、塩酸アミトリプチリン、パモ酸アミトリプチリン、アモキサピン、塩酸ブプロピオン、臭化水素酸シタロプラム、塩酸クロミプラミン、塩酸デシプラミン、塩酸ドキセピン、塩酸フルオキセチン、塩酸イミプラミン、パモ酸イミプラミン、ミルタザピン、塩酸ネファゾドン、塩酸ノルトリプチリン、塩酸パロキセチン、硫酸フェネルジン、塩酸セルトラリン、硫酸トラニルシプロミン、マレイン酸トリミプラミンおよび塩酸ベンラファクシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗不安薬は、アルプラゾラム、塩酸ブスピロン、クロルジアゼポキシド、塩酸クロルジアゼポキシド、クロラゼブ酸二カリウム、ジアゼパム、塩酸ドキセピン、ヒドロキシジンエンボネート、塩酸ヒドロキシジン、パモ酸ヒドロキシジン、ロラゼパム、メフロバメート、塩酸ミダゾラムおよびオキサゼパムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗精神病薬は、塩酸クロルプロマジン、クロザピン、デカン酸フルフェナジン、エナント酸フルフェナジン、塩酸フルフェナジン、ハロペリドール、ドデカン酸ハロペリドール、乳酸ハロペリドール、塩酸ロキサピン、こはく酸ロキサピン、メソリダジンベシレート、塩酸モリンドン、オランザピン、ペルフェナジン、ピモジド、プロクロルペラジン、フマル酸ケチアピン、リスペリドン、塩酸チオリダジン、チオチキセン、塩酸チオチキセンおよび塩酸トリフルオペラジンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の中枢神経系興奮薬は、硫酸アンフェタミン、カフェイン、硫酸デキストロアンフェタミン、塩酸ドキサプラム、塩酸メタンフェタミン、塩酸メチルフェニデート、モダフィニル、ペモリンおよび塩酸フェンテルミンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗パーキンソン病薬は、塩酸アマンタジン、メシル酸ベンズトロピン、塩酸ビペリデン、乳酸ビペリデン、メシル酸ブロモクリプチン、カルビドパ−レボドパ、エンタカポン、レバドパ、メシル酸ペルゴリド、二塩酸プラミペキソール、塩酸ロピニロール、塩酸セレギリン、トルカポンおよび塩酸トリヘキシフェニジルから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のいろいろな中枢神経系作用薬は、塩酸ブプロピオン、塩酸ドネペジル、ドロペリドール、マレイン酸フルボキサミン、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、塩酸ナラトリプタン、ニコチンポラクリレクス、ニコチン経皮システム、プロポフォール、安息香酸リザトリプタン、塩酸シブトラミン一水和物、こはく酸スマトリプタン、塩酸タクリンおよびゾルミトリプタンから選択した少なくとも１種であってもよい（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの３３７−５３０頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種のコリンアゴニスト（例えば副交感神経作用薬）は、塩化ベタネコール、塩化エドロホニウム、臭化ネオスチグミン、メチル硫酸ネオスチグミン、サリチル酸フィゾスチグミンおよび臭化ピリドスチグミンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗コリン作用薬は、硫酸アトロピン、塩酸ジシクロミン、グリコピロレート、ヒヨスチアミン、硫酸ヒヨスチアミン、臭化プロパンテリン、スコポラミン、臭化ブチルスコポラミンおよび臭化水素酸スコポラミンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のアドレナリン作用薬（交感神経作用薬）は、塩酸ドブタミン、塩酸ドーパミン、酒石酸水素メタラミノール、酒石酸水素ノルエピネフリン、塩酸フェニレフリン、塩酸プソイドエフェドリンおよび硫酸プソイドエフェドリンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のアドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）は、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、酒石酸エルゴタミン、マレイン酸メチセルギドおよび塩酸プロプラノロールから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の骨格筋弛緩薬は、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、塩酸シクロベンザプリン、ダントロレンナトリウム、メトカルバモールおよび塩酸チザニジンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の神経筋遮断薬は、アトラクリウムベシレート、シサトラクリウムベシレート、塩化ドキサクリウム、塩化ミバクリウム、臭化パンクロニウム、臭化ピペクロニウム、臭化ラパクロニウム、臭化ロクロニウム、塩化スクシニルコリン、塩化ツボクラリンおよび臭化ベクロニウムから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの５３１−８４頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の抗ヒスタミン剤は、マレイン酸ブロムフェニラミン、塩酸セチリジン、マレイン酸クロルフェニラミン、フマル酸クレマスチン、塩酸シプロフェプタジン、塩酸ジフェンヒドラミン、塩酸フェキソフェナジン、ロラタジン、塩酸プロメタジン、プロメタジンテオクレートおよび塩酸トリプロリジンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の気管支拡張剤は、アルブテロール、硫酸アルブテロール、アミノフィリン、硫酸アトロピン、硫酸エフェドリン、エピネフリン、酒石酸水素エピネフリン、塩酸エピネフリン、臭化イプラトロピウム、イソプロテレノール、塩酸イソプロテレノール、硫酸イソプロテレノール、塩酸レバルブテロール、硫酸メタプロテレノール、オキシトリフィリン、酢酸ピルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、硫酸テルブタリンおよびテオフィリンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の去痰薬または鎮咳薬は、ベンゾナテート、燐酸コデイン、硫酸コデイン、臭化水素酸デキストラメトルファン、塩酸ジフェンヒドラミン、グアイフェネシンおよび塩酸ヒドロモルホンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のいろいろな呼吸器作用薬は、アセチルシステイン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベラクタント、ブデソニド、カルファクタント、クロモリンナトリウム、ドルナーゼアルファ、エポプロステノールナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、ノンテルカストナトリウム、ネドクロミルナトリウム、パリビズマブ、トリアムシノロンアセトニド、ザフィルルカストおよびジレウトンから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの５８５−６４２頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の制酸薬、粘滑薬または整腸薬は、炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、マガルドレート、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、シメチコンおよび重炭酸ナトリウムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の消化酵素または胆石溶解剤は、パンクレアチン、パンクレリパーゼおよびウルソジオールから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の下痢止め薬は、アタパルジャイト、次サリチル酸ビスマス、カルシウムポリカルボフィル、塩酸ジフェノキシレートおよび硫酸アトロピン、ロペラミド、酢酸オクトレオチド、アヘン
チンキおよびオピウムチンクレ（樟脳含有）から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の下剤は、ビソコジル、カルシウムポリカルボフィル、カスカラサグラダ、カスカラサグラダ芳香流エキス剤、カスカラサグラダ流エキス剤、ヒマシ油、ドキュセートカルシウム、ドキュセートナトリウム、グリセリン、ラクトース、クエン酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メチルセルロース、鉱油、ポリエチレングリコールまたは電解質溶液、オオバコ、センナンおよび燐酸ナトリウムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の制吐薬は、塩酸クロルプロマジン、ジメンヒドリナート、メシル酸ドラセトロン、ドロナビノール、塩酸グラニセトロン、塩酸メクリジン、塩酸メトクロプロアミド、塩酸オンダンセトロン、ペルフェナジン、プロクロルペラジン、エジシル酸プロクロルペラジン、マレイン酸プロクロルペラジン、塩酸プロメタジン、スコポラミン、マレイン酸チエチルペラジンおよび塩酸トリメトベンズアミドから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗潰瘍薬は、シメチジン、塩酸シメチジン、ファモチジン、ランソプラゾール、ミソプロストール、ニザチジン、オメプラゾール、ラベプロゾールナトリウム、クエン酸ランチジンビスマス、塩酸ラニチジンおよびスクラルフェートから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの６４３−９５頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種のコルチコステロイドは、ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾンまたは燐酸ベタメタゾンナトリウム、燐酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、燐酸ナトリウムデキサメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンシピオネート、燐酸ナトリウムヒドロコルチゾン、こはく酸ナトリウムヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、こはく酸メチルプレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、燐酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニドおよび二酢酸トリアムシノロンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のアンドロゲンまたはアナボリックステロイドは、ダナゾール、フルオキシメステロン、メチルテストステロン、デカン酸ナンドロロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、テストステロン、テストステロンシピオネート、エナント酸テストステロン、プロピオン酸テストステロンおよびテストステロン経皮システムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のエストロゲンまたはプロゲスチンは、エステル化エストロゲン、エストラジオール、エストラジオールシピオネート、酢酸エストラジオール／ノルエチンドロン経皮システム、吉草酸エストラジオール、エストロゲン（共役）、エストロピペート、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオールとデソゲストレル、エチニルエストラジオールとエチノジオールジアセテート、エチニルエストラジオールとレボノルゲストレル、エチニルエストラジオールとノレチンドロン、エチニルエストラジオールと酢酸ノルエチンドロン、エチニルエストラジオールとノルゲスチメート、エチニルエストラジオールとノルゲストレル、エチニルエストラジオールとノルエチンドロンおよびアセテートとフマル酸第一鉄、レボノルゲストレエル、酢酸メドロキシプロゲステロン、メストラノールとノレチンドロン、ノレチンドロン、酢酸ノレチンドロン、ノルゲストレルおよびプロゲステロンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のゴナドトロピンは、酢酸ガニレリクス、酢酸ゴナドレリン、酢酸ヒストレリンおよびメノトロピンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗糖尿病薬またはグルカオンは、アカルボース、クロルプロパミド、グリメピリド、グリピジド、グルカゴン、グリブリド、インスリン、塩酸メトフォルミン、ミグリトール、塩酸ピオグリタゾン、レパグリニド、マレイン酸ロシグリタゾンおよびトログリタゾンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の甲状腺ホルモンは、レボチロキシンナトリウム、リオチロニンナトリウム、リオトリックスおよびチロイドから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の甲状腺ホルモンアンタゴニストは、メチマゾール
、ヨウ化カリウム、ヨウ化カリウム（飽和溶液）、プロピルチオウラシル、放射性ヨウ素（ヨウ化ナトリウム１３１Ｉ）および強ヨウ素溶液から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の下垂体ホルモンは、コルチコトロピン、コシントロピン、酢酸デスモフレシン、酢酸ロイプロリド、持続性コルチコトロピン、ソマトレム、ソマトロピンおよびバソプレシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の副甲状腺様薬剤は、カルシフェジオール、カルシトニン（ヒト）、カルシトニン（サケ）、カルシトリオール、ジヒドロタキステロールおよびエチドロン酸２ナトリウムから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの６９６−７９６頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の利尿薬は、アセタゾールアミド、アセタゾールアミドナトリウム、塩酸アミロリド、ブメタニド、クロルタリドン、エタクリン酸ナトリウム、エタクリン酸、フロセミド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、マンニトール、メトラゾン、スピロノラクトン、トルセミド、トリアムテレンおよび尿素から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の電解質または置換溶液は、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、カルシウムグルビオネート、カルシウムグルセプテート、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、燐酸カルシウム（二塩基性）、燐酸カルシウム（三塩基性）、デキストラン（高分子量）、デキストラン（低分子量）、ヘタスターチ、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸カリウム、重炭酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、リンゲル注射液、リンゲル注射液（乳酸加）および塩化ナトリウムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の酸性化薬またはアルカリ性化薬は、重炭酸ナトリウム、乳酸ナトリウムおよびトロメタミンから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの７９７−８３３頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の造血剤は、フマル酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、硫酸第一鉄、硫酸第一鉄（乾燥）、デキストラン鉄、ソルビトール鉄、多糖−鉄錯体およびグルコン酸第一鉄ナトリウム錯体から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗凝血薬は、アルデパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム、ダナパロイドナトリウム、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンカルシウム、ヘパリンナトリウムおよびワルファリンナトリウムから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の血液製剤は、５％アルブミン、２５％アルブミン、抗血友病因子、活性化プロトロンビン複合体、アンチトロンビンＩＩＩ（ヒト）、因子ＩＸ（ヒト）、因子ＩＸ複合体および血漿蛋白画分から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の血栓溶解酵素は、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、レテプラーゼ（組換え型）、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの８３４−６６頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種のアルキル化剤は、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ロムスチン、塩酸メクロレタミン、メルファラン、塩酸メルファラン、ストレプトゾシン、テモゾロミドおよびチオテパから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の代謝拮抗剤は、カペシタビン、クラドリビン、シタラビン、フロクスリジン、燐酸フルダラビン、フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウムおよびチオグアニンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗腫瘍性抗生物質は、硫酸ブレオマイシン、ダクチノマイシン、クエン酸ダウノルビシンリポソーム、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム、塩酸エピルビシン、塩酸イダルビシン、ミトマイシン、ペントスタチン、プリカマイシンおよびバルルビシンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のホルモン平衡を変える抗癌薬は、アナストロゾール、ビカル
タミド、燐酸エストラムスチンナトリウム、エキセメスタン、フルタミド、酢酸ゴセレリン、レトロゾール、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、ニルタミド、クエン酸タモキシフェン、テストラクトンおよびクエン酸トレミフェンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のいろいろな抗癌薬は、アスパラギナーゼ、カルメットゲラン菌（ＢＣＧ）（生膀胱内）、ダカルバジン、ドセタキセル、エトポシド、燐酸エトポシド、塩酸ゲムシタビン、塩酸イリノテカン、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、パクリタキセル、ペガスパルゲーゼ、ポルフィマーナトリウム、塩酸プロカルバジン、リツキシマブ、テニポシド、塩酸トポテカン、トラスツブマブ、トレチノイン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチンおよび酒石酸ビノレルビンから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの８６７−９６３頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の免疫抑制剤は、アザチオプリン、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ、リンパ球免疫グロブリン、ムロモナブ−ＣＤ３、ミコフェノール酸モフェチル、塩酸ミコフェノール酸モフェチル、シロリマスおよびタクロリムスから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のワクチンまたはトキソイドは、ＢＣＧワクチン、コレラワクチン、ジフテリアおよび破傷風トキソイド（沈降）、ジフテリア破傷風トキソイドおよび沈降無細胞百日咳ワクチン、ジフテリア破傷風トキソイドおよびホールセル百日咳ワクチン、ヘモフィルスｂ共役ワクチン、Ａ型肝炎ワクチン（不活化）、Ｂ型肝炎ワクチン（組換え型）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価タイプＡおよびＢ（精製表面抗原）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価タイプＡおよびＢ（サブビリオンまたは精製サブビリオン）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価タイプＡおよびＢ（ホールビリオン）、日本脳炎ウイルスワクチン（不活化）、ライム病ワクチン（組換え型ＯｓｐＡ）、はしか・おたふく風邪・風疹ウイルスワクチン（生）、はしか・おたふく風邪・風疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、はしかウイルスワクチン（弱毒化生）、髄膜炎菌多糖類ワクチン、おたふく風邪ウイルスワクチン（生）、ペストワクチン、肺炎球菌ワクチン（多価）、ポリオウイルスワクチン（不活化）、ポリオウイルスワクチン（生、経口、三価）、狂犬病ワクチン（沈降）、狂犬病ワクチン（ヒト２倍体細胞）、風疹・おたふく風邪ウイルスワクチン（生）、風疹ウイルスワクチン（生、弱毒化）、破傷風トキソイド（沈降）、破傷風トキソイド（流体）、腸チフスワクチン（経口）、腸チフスワクチン（非経口）、腸チフスＶｉ多糖ワクチン、水痘ウイルスワクチンおよび黄熱病ワクチンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗毒素薬または抗毒血清は、クロゴケグモ抗毒血清、クロタリダエ抗毒血清（多価）、ジフテリア抗毒素（ウマ）およびサンゴヘビ抗毒素から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の免疫血清は、サイトメガロウイルス免疫グロブリン（静脈内）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（ヒト）、免疫グロブリン筋肉内、免疫グロブリン静脈内、狂犬病免疫グロブリン（ヒト）、呼吸器合胞体ウイルス免疫グロブリン静脈内（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン静脈内（ヒト）、破傷風免疫グロブリン（ヒト）および水痘帯状疱疹免疫グロブリンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の生物反応修飾物質は、アルデスロイキン、エポエチンアルファ、フィルグラスチム、注射用酢酸ガラティラメル、インターフェロンアルファコン−１、インターフェロンアルファ−２ａ（組換え型）、インターフェロンアルファ−２ｂ（組換え型）、インターフェロンベータ−１ａ、インターフェロンベータ−１ｂ（組換え型）、インターフェロンガンマ−１ｂ、塩酸レバミゾール、オプレルベキンおよびサルグラモスティムから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの９６４−１０４０頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の眼科用抗感染薬は、バシトラシン、クロラムフェニコール、塩酸シプロフロキサシン、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、オフロキサシン０．３％
、硫酸ポリミキシンＢ、スルファセタミドナトリウム１０％、スルファセタミドナトリウム１５％、スルファセタミドナトリウム３０％、トブラマイシンおよびビダラビンから選択可能である。前記少なくとも１種の眼科用抗炎症薬は、デキサメタゾン、燐酸デキサメタゾンナトリウム、ジクロフェナクナトリウム０．１％、フルオロメトロン、フルルビプロフェンナトリウム、ケトロラクトロメタミン、酢酸プレドニゾロン（懸濁液）および燐酸プレドニゾロンナトリウム（溶液）から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の縮瞳薬は、塩化アセチルコリン、カルバコール（眼球内）、カルバコール（局所）、ヨウ化エコチオフェート、ピロカルピン、塩酸ピロカルピンおよび硝酸ピロカルピンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の散瞳薬は、硫酸アトロピン、塩酸シクロペントレート、塩酸エピネフリン、ホウ酸エピネフリル、臭化水素酸ホマトロピン、塩酸フェニルエフリン、臭化水素酸スコポラミンおよびトロピカミドから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の眼科用血管収縮薬は、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリンおよび塩酸テトラヒドロゾリンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のいろいろな眼科用薬剤は、塩酸アプラクロニジン、塩酸ベタキソロール、酒石酸ブリモニジン、塩酸カルテオロール、塩酸ジピベフリン、塩酸ドルゾラミド、二フマル酸エメダスチン、フルオレセインナトリウム、フマル酸ケトチフェン、ラタノプロスト、塩酸レボブノロール、塩酸メチプラノロール、塩化ナトリウム（高浸透圧）およびマレイン酸チモロールから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の耳用薬剤は、ホウ酸、過酸化カルバミド、クロラムフェニコールおよびトリエタノールアミンポリペプチドオレート凝集物から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の鼻用薬剤は、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、硫酸エフェドリン、塩酸エピネフリル、フルニゾリド、プロピオン酸フルチカゾン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸フェニルフリン、塩酸テトラヒドロゾリン、トリアムシノロンアセトニドおよび塩酸キシロメタゾリンから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの１０４１−９７頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種の抗感染薬は、アシクロビル、アンホテリシンＢ、アゼライン酸クリーム、バシトラシン、硝酸ブトコナゾール、燐酸クリンダマイシン、クロトリマゾール、硝酸エコナゾール、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、ケトコナゾール、酢酸マフェニド、メトロニダゾール（局所）、硝酸ミコナゾール、ムピロシン、塩酸ナフチフィン、硫酸ネオマイシン、ニトロフラゾン、ニスタチン、スルファジアジン銀、塩酸テルビナフィン、テルコナゾール、塩酸テトラシクリン、チオコナゾールおよびトルナフテートから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の抗疥癬薬またはシラミ駆除剤は、クロタミトン、リンダン、ペルメトリンおよびピレトリンから選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種の外用副腎皮質ホルモン剤は、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、燐酸デキサメタゾンナトリウム、二酢酸ジフロラゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ヒドロコルチゾン、モメタゾンフロエートおよびトリアムシノロンアセトニドから選択した少なくとも１種であってもよい（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの１０９８−１１３６頁を参照のこと）。
前記少なくとも１種のビタミンもしくはミネラルは、ビタミンＡ、ビタミンＢ複合体、シアノコバラミン、葉酸、ヒドロキソコバラミン、ロイコボリンカルシウム、ナイアシン、ナイアシンアミド、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、塩酸チアミン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、ビタミンＤ類似体、ドキセルカルシフェロール、パリカルシトール、ビタミンＥ、ビタミンＫ類似体、フィトナジオン、フッ化ナトリウム、フッ化ナトリウム（局所）、微量元素、クロム、銅、ヨウ素、マ
ンガン、セレンおよび亜鉛から選択した少なくとも１種であってもよい。前記少なくとも１種のカロリー薬は、アミノ酸輸液（結晶）、デキストロースに入っているアミノ酸輸液、電解質を伴うアミノ酸輸液、デキストロースに入っている電解質を伴うアミノ酸輸液、肝不全用アミノ酸輸液、高代謝的ストレス用アミノ酸輸液、腎不全用アミノ酸輸液、デキストロース、脂肪乳剤および中鎖脂肪酸トリグリセリドから選択した少なくとも１種であってもよい。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｄｒｕｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋの１１３７−６３頁を参照のこと）。
本発明の抗−ＩＬ−６抗体組成物には、更に、そのような調節、処置または治療を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に接触または投与すべき少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有しかつ場合により更に少なくとも１種のＴＮＦアンタゴニスト［例えばこれらに限定するものでないが、ＴＮＦ化学もしくは蛋白質アンタゴニスト、ＴＮＦモノクローナルもしくはポリクローナル抗体もしくはフラグメント、可溶ＴＮＦ受容体（例えばｐ５５、ｐ７０またはｐ８５）またはフラグメント、それの融合ポリペプチドまたは低分子ＴＮＦアンタゴニスト、例えばＴＮＦ結合蛋白質ＩまたはＩＩ（ＴＢＰ−１またはＴＢＰ−ＩＩ）、ネレリモンマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ＣＤＰ−５７１、ＣＤＰ−８７０、アフェリモマブ、レネルセプトなど］、抗リウマチ剤（例えばメトトレキサート、オーラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサルジン）、筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮痛剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤（例えばアミノグリコシド、抗真菌薬、抗寄生虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルロルキノロン、マクロリド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラシクリン、別の抗菌剤）、乾癬治療薬、コルチコステロイド、蛋白同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養剤、甲状腺用薬剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、制吐薬、抗腫瘍薬、下剤、抗凝血薬、エリスロポイエチン（例えばエポエチンアルファ）、フィルグラスチム（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、予防接種、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制因子、放射性薬剤、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経様作用薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息用薬剤、ベータ作用薬、ステロイド剤吸引、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンまたは類似物、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択した少なくとも１種を含有していてもよい少なくとも１種の適切な有効量の組成物もしくは製薬学的組成物のいずれも含まれ得る。そのようなサイトカインの非限定例には、これらに限定するものでないが、ＩＬ−１からＩＬ−２３（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２など）のいずれも含まれる。適切な投薬量は本技術分野で良く知られている。例えばＷｅｌｌｓ他編集、Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，第２版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）；ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００），（これらの文献は各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
そのような抗癌もしくは抗感染薬には、また、本発明の少なくとも１種の抗体と会合させるか、結合させるか、共調製するか或は共投与するトキシン分子も含まれ得る。そのようなトキシンは場合により病原性細胞または組織を選択的に死滅させる働きをし得る。そのような病原性細胞は癌細胞または他の細胞であり得る。そのようなトキシンは、これらに限定するものでないが、精製もしくは組換え型トキシン、またはトキシンの少なくとも
１種の機能的細胞障害ドメインを含んで成るトキシンフラグメント、例えばリシン、ジフテリアトキシン、ベノムトキシンまたは細菌トキシンの中の少なくとも１種から選択したトキシンであってもよい。用語「トキシン」はまた天然に存在するか或は突然変異を起こしたか或は組換え型の細菌またはウイルスのいずれかが産生するエンドトキシンおよびエクソトキシンの両方も含まれ、それらはヒトおよび他の哺乳動物における病気状態のいずれかの原因になり得、それには、トキシンショック（結果として死亡する可能性がある）が含まれる。そのようなトキシンには、これらに限定するものでないが、腸管毒素原性大腸菌易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）、耐熱性エンテロトキシン（ＳＴ）、シゲラ細胞毒素、アエロモナスエンテロトキシン、毒素性ショック症候群トキシン−１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）またはＣ（ＳＥＣ）、連鎖球菌エンテロトキシンなどが含まれ得る。前記細菌には、これらに限定するものでないが、腸管毒素原性大腸菌種（ＥＴＥＣ）、腸管出血性大腸菌種（例えば血清型株０１５７：Ｈ７）、ブドウ球菌種（例えば黄色ブドウ球菌、化膿ブドウ球菌）、シゲラ種（例えばシゲラディゼンテリエ、シゲラフレキシネリ、シゲラボイジイおよびシゲラソネイ）、サルモネラ種（例えばチフス菌、サルモネラコレラスイス、腸炎菌）、クロストリジウム種（例えばウェルシュ菌、クロストリジウムジフィサイル、ボツリヌス菌）、カンフロバクター種（例えばカンフロバクタージェジュニ、カンフロバクターフェタス）、ヘリコバクター種（例えばピロリ菌）、アエロモナス種（例えばアエロモナスソブリア、アエロモナス細菌、アエロモナスカビアエ）、プレイソモナスシゲロイデス、エルシニアエンテロコリチカ、ビブリオ種（例えばビブリオコレラ、腸炎ビブリオ）、クレブシエラ種、緑膿菌および連鎖球菌の株が含まれる。例えばＳｔｅｉｎ編集、ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第３版、１−１３頁、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ，（１９９０）；Ｅｖａｎｓ 他編集、Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，第２版、２３９−２５４頁、Ｐｌｅｎｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９１）；Ｍａｎｄｅｌｌ 他、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，第３版、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）；Ｂｅｒｋｏｗ 他編集、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，第１６版、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９９２；Ｗｏｏｄ 他、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ 他、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０），（これらの文献の内容は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
本発明の抗−ＩＬ−６抗体化合物、組成物または組み合わせに更に適切な全ての助剤、例えばこれらに限定するものでないが、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、防腐剤、アジュバントなどの中の少なくとも１種を含有させることも可能である。製薬学的に受け入れられる助剤が好適である。前記無菌溶液の非限定例および製造方法は本技術分野、例えばこれらに限定するものでないが、Ｇｅｎｎａｒｏ編集、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）１９９０などで良く知られている。製薬学的に受け入れられる担体は、本技術分野で良く知られているか或は本明細書に記述するように、本抗−ＩＬ−６抗体、フラグメントまたは変異体組成物の投与様式、溶解性および安定性に適するように常規通り選択可能である。
本組成物で用いるに有用な製薬学的賦形剤および添加剤には、これらに限定するものでないが、蛋白質、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物［例えば糖（単糖、二糖、三糖、四糖およびオリゴ糖を包含）、誘導体化糖、例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化糖など、および多糖または糖重合体）が含まれ、これらを単独または組み合わせて存在させてもよく、それには、単独または１−９９．９９重量％または体積％の組み合わ
せが含まれる。典型的な蛋白質賦形剤には血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換え型ヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどが含まれる。代表的なアミノ酸／抗体成分（これはまた緩衝能力としても機能し得る）には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルタムなどが含まれる。１つの好適なアミノ酸はグリシンである。
本発明で用いるに適した炭水化物賦形剤には、例えば単糖類、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど、二糖類、例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど、多糖類、例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、澱粉など、およびアルジトール、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどが含まれる。本発明で用いるに適した好適な炭水化物賦形剤はマンニトール、トレハロースおよびラフィノースである。
抗−ＩＬ−６抗体組成物にまた緩衝剤またはｐＨ調節剤を含有させることも可能であり、そのような緩衝剤は典型的に有機酸または塩基から生じさせた塩である。代表的な緩衝剤には有機酸塩、例えばクエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、こはく酸、酢酸またはフタル酸などの塩、Ｔｒｉｓ、塩酸トロメタミンまたは燐酸塩緩衝剤が含まれる。本組成物で用いるに適した好適な緩衝剤は有機酸塩、例えばクエン酸塩などである。
加うるに、本発明の抗−ＩＬ−６抗体組成物に重合体賦形剤／添加剤、例えばポリビニルピロリドン、フィコール（高分子量糖）、デキストレート（例えばシクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、風味剤、抗菌剤、甘味剤、抗酸化剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えばポリソルベート、例えば「ＴＷＥＥＮ ２０」および「ＴＷＥＥＮ ８０」）、脂質（例えば燐脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）およびキレート剤（例えばＥＤＴＡ）などが含まれ得る。
本発明に従う抗−ＩＬ−６抗体、部分または変異体組成物で用いるに適した前記および追加的公知製薬学的賦形剤および／または添加剤は本技術分野で公知であり、例えば
“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”第１９版、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５），および“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”第５２版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８），（これらの開示は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）に示されているように公知である。好適な担体もしくは賦形剤は炭水化物（例えば糖およびアルジトール）および緩衝剤（例えばクエン酸塩）または高分子作用剤である。典型的な担体分子はムコ多糖、ヒアルロン酸であり、これは関節内送達で用いるに有用であり得る。
製剤
この上で述べたように、本発明は、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が製薬学的に受け入れられる製剤の中に入っている安定な製剤（好適には燐酸塩緩衝剤に加えて食塩水または選択した塩を含有して成る）ばかりでなく防腐剤を含有させた防腐処理溶液および製剤、並びに製薬学または獣医用途で用いるに適した多用途防腐処理製剤を提供する。防腐処理製剤は水性希釈剤に入っている少なくとも１種の公知防腐剤を含有するか或は場合により少なくとも１種のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば六水化物）、アルキル
パラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールなど、それの重合体または混合物から成る群から選択した防腐剤を含有する。本技術分野で公知の如く適切な如何なる濃度も混合物も使用可能であり、例えば約０．００１５％、または如何なる範囲でも値でも分率でも使用可能である。非限定例には、防腐剤無し、約０．１−２％のｍ−クレゾール（例えば０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、約０．１−３％のベンジルアルコール（例えば０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、約０．００１−０．５％のチメロサール（例えば０．００５、０．０１）、約０．００１−２．０％のフェノール（例えば０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５−１．０％のアルキルパラベン１種または２種以上（例えば０．０００７５，０．０００９，０．００１，０．００２，０．００５，０．００７５，０．００９，０．０１，０．０２，０．０５，０．０７５，０．０９，０．１，０．２，０．３，０．５，０．７５，０．９，１．０％）などが含まれる。
この上に示したように、本発明は、包装用材料と少なくとも１つに瓶を含んで成る製品を提供し、前記瓶に、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体に加えて指定緩衝剤および／または防腐剤が場合により水性希釈剤に入っている溶液を入れ、ここで、前記包装用材料に、前記溶液を１，２，３，４，５，６，９，１２，１８，２０，２４，３０，３６，４０，４８，５４，６０，６６，７２時間またはそれ以上の時間に渡って保持することができることを示すラベルを含める。本発明は、更に、包装用材料と凍結乾燥させた少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている１番目の瓶と指定緩衝剤もしくは防腐剤を含有する水性希釈剤が入っている２番目の瓶を含んで成る製品も包含し、ここで、前記包装用材料に、前記少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を前記水性希釈剤に入れて再構成させて２４時間またはそれ以上の時間に渡って保持することができる溶液を生じさせることを患者に知らせるラベルを含める。
本発明に従って用いる少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体の製造は組換え手段（哺乳動物の細胞または遺伝子導入を用いた調製を包含）を用いて実施可能であるか、或は本明細書に記述するか或は本技術分野で公知のように、それを他の生物学的源から精製することも可能である。
本発明の製品に入れる少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体の量の範囲には、再構成時（湿潤／乾燥系で実施する場合）に約１．０μｇ／ｍｌから約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度がもたらされるような量が含まれるが、より低い濃度およびより高い濃度も有効であり、これは意図した送達用媒体に依存し、例えば溶液製剤のそれは経皮パッチ、肺、経粘膜または浸透圧またはミクロポンプ方法のそれとは異なるであろう。
好適には、前記水性希釈剤に場合により更に製薬学的に受け入れられる防腐剤も入れておいてもよい。好適な防腐剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールなどまたはそれらの混合物から成る群から選択した防腐剤が含まれる。本製剤で用いる防腐剤の濃度は、抗菌効果をもたらすに充分な濃度である。そのような濃度は選択した防腐剤に依存するが、本分野の技術者はそれを容易に決定することができるであろう。
前記希釈剤に場合によるが好適には他の賦形剤、例えば等張剤、緩衝剤、抗酸化剤および防腐向上剤などを加えることも可能である。等張剤、例えばグリセリンなどを一般に公知濃度で用いる。好適には、ｐＨ制御を向上させる目的で生理学的に許容される緩衝剤を加える。本製剤のｐＨの範囲は幅広い範囲に渡り、例えば約ｐＨ４から約ｐＨ１０の範囲
であってもよいが、好適な範囲は約ｐＨ５から約ｐＨ９であり、最も好適な範囲は約６．０から約８．０である。本発明の製剤のｐＨを好適には約６．８から約７．８の範囲にする。好適な緩衝剤には、燐酸塩緩衝剤、最も好適には燐酸ナトリウム、特に燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。
場合により、他の添加剤、例えばＴｗｅｅｎ ２０［ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート］、Ｔｗｅｅｎ ４０［ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート］、Ｔｗｅｅｎ ８０［ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート］、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロック共重合体）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）などの如き製薬学的に受け入れられる可溶化剤または非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート２０もしくは８０またはポロキサマー１８４または１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）ポリル、他のブロック共重合体およびキレーター、例えばＥＤＴＡおよびＥＧＴＡなどを本製剤または組成物に添加することで凝集度合を低くすることも可能である。特に、本製剤を投与する時にポンプまたはプラスチック製容器を用いる場合にそのような添加剤が有用である。製薬学的に受け入れられる界面活性剤を存在させると蛋白質が凝集する傾向が軽減される。
本発明の製剤の調製は、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体とフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールなどまたはそれらの混合物から成る群から選択した防腐剤を水性希釈剤に入れて混合することを含んで成る方法を用いて実施可能である。前記少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体と防腐剤を水性希釈剤に入れて混合することを通常の溶解および混合手順を用いて実施する。適切な製剤を生じさせるには、例えば測定量の少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を緩衝溶液に入れてそれを本蛋白質および防腐剤が所望の濃度になるに充分な量で緩衝溶液に入れておいた所望防腐剤と一緒にする。本分野の通常の技術者はそのような方法の変法を認識するであろう。例えば、前記成分を添加する順、追加的添加剤を用いるか否か、当該製剤を調製する時の温度およびｐＨは全部が使用する濃度および投与手段毎に最適にすることができる要因である。
本請求する製剤を患者に透明な溶液としてか或は凍結乾燥させた少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている瓶とこれを再構成させる時の水、防腐剤および／または賦形剤、好適には燐酸塩緩衝剤および／または食塩水および選択した塩（水性希釈剤の中に入っている）が入っている２番目の瓶を包含する２個の瓶として供給してもよい。溶液が入っている単一の瓶または再構成が必要な２個の瓶のいずれも多数回再使用可能であり、患者の処置を１回または多数回実施するに充分であり得、従って、現在利用可能な処置療法に比べてより便利であり得る。
この請求する製品は、即時から２４時間またはそれ以上の範囲の時間に渡って投与するに有用である。従って、この請求する製品は患者に大きな利点を与える。本発明の製剤は場合により約２℃から約４０℃の温度で安全に貯蔵可能でありかつ本蛋白質が示す生物学的活性を長期間に渡って維持させ、従ってその溶液を６、１２、１８、２４、３６、４８、７２または９６時間またはそれ以上の時間に渡って保持しそして／または使用することができることを示すパッケージラベルを付けることを可能にする。防腐処理希釈剤を用いると、そのようなラベルに１−１２カ月、半年、１年半および／または２年に及ぶ使用を含めることも可能である。
本発明の少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている溶液の調製は、少なくとも１種の抗体を水性希釈剤に入れて混合することを含んで成る方法を用いて実施可能である。
混合を通常の溶解および混合手順を用いて実施する。適切な希釈剤を生じさせるには、例えば、測定量の少なくとも１種の抗体を水または緩衝液に入れて、これを本蛋白質および場合により防腐剤または緩衝剤が所望濃度になるに充分な量で一緒にする。本分野の通常の技術者はそのような方法の変法を認識するであろう。例えば、前記成分を添加する順、追加的添加剤を用いるか否か、当該製剤を調製する時の温度およびｐＨは全部が使用する濃度および投与手段毎に最適にすることができる要因である。
この請求する製品を患者に透明な溶液としてか或は凍結乾燥させた少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている瓶とこれを再構成させる時の水性希釈剤が入っている２番目の瓶を包含する２個の瓶として供給してもよい。溶液が入っている単一の瓶または再構成が必要な２個の瓶のいずれも多数回再使用可能であり、患者の処置を１回または多数回実施するに充分であり得、従って、現在利用可能な処置療法に比べてより便利であり得る。
透明な溶液としてか或は凍結乾燥させた少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている瓶とこれを再構成させる時の水性希釈剤が入っている２番目の瓶を包含する２個の瓶を薬局、診療所または他のそのような機関および施設に供給することを通して、この請求する製品を患者に間接的に供給してもよい。この場合の透明な溶液の大きさは１リットルまたはそれ以上の量であってもよく、大型の貯蔵槽を供給して、それから、その少なくとも１種の抗体溶液の少ない部分を取り出し、より小さい瓶に１回もしくは数回移し、そして薬局または診療所が顧客および／または患者に供給するようにしてもよい。
単一瓶システムを包含すると認識される機器には、溶液送達用ペンインジェクター機器、例えばＢＤ Ｐｅｎｓ，ＢＤ Ａｕｔｏｊｅｃｔｏｒ(R)，Ｈｕｍａｊｅｃｔ(R)，ＮｏｖｏＰｅｎ(R)，Ｂ−Ｄ(R)Ｐｅｎ，ＡｕｔｏＰｅｎ(R)，ａｎｄ ＯｐｔｉＰｅｎ(R)，ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎ(R)，ＧｅｎｏｔｒｏｎｏｒｍＰｅｎ(R)，Ｈｕｍａｔｒｏ Ｐｅｎ(R)，Ｒｅｃｏ−Ｐｅｎ(R)，Ｒｏｆｅｒｏｎ Ｐｅｎ(R)，Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ(R)，Ｉｊｅｃｔ(R)，Ｊ−ｔｉｐ Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ(R)，Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ(R)，Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ(R) など［Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ｗｗｗ ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ），Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（Ｂｕｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇｏｎ（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｅｓｔｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ，ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ），Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ Ｃｏｒｐ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）が製造または開発した如き］および同様な適切な機器が含まれる。２個の瓶システムを包含すると認識される機器には、凍結乾燥薬剤をカートリッジの中で再構成させて前記再構成させた溶液を送達するペンインジェクターシステム、例えばＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ（商標）などが含まれる。他の適切な機器の例には、前以て充填されているシリンジ、オートインジェクター、針を必要としないインジェクターおよび針を必要としないＩＶ輸液セットが含まれる。
この請求する製品に包装用材料を含める。そのような包装用材料を用いて、規制当局が要求する情報に加えて、本製品の使用を可能にする条件を示す。本発明の包装用材料を用いて、２個の瓶の湿潤／乾燥製品の場合には少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を水性希釈剤に入れて再構成させて溶液を生じさせそしてその溶液を２−２４時間またはそれ以上の時間に渡って用いることができることを示す使用説明書を患者に提供する。１個の瓶の溶液製品の場合には、ラベルを用いて、そのような溶液を２−２４時間またはそれ以上の時間に渡って用いることができることを示す。この請求する製品はヒト製薬学的製品使用で用いるに有用である。
本発明の製剤の調製は、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体と選択した緩衝液、好適には食塩または選択した塩を入れておいた燐酸塩緩衝液を混合することを含んで成る方法を用いて実施可能である。前記少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体と緩衝剤を水性希釈剤に入れて混合することを通常の溶解および混合手順を用いて実施する。適切な製剤を生じさせるには、例えば測定量の少なくとも１種の抗体を水または緩衝液に入れてそれを本蛋白質および緩衝剤が所望の濃度になるに充分な量で水に入れておいた所望緩衝剤と一緒にする。本分野の通常の技術者はそのような方法の変法を認識するであろう。例えば、前記成分を添加する順、追加的添加剤を用いるか否か、当該製剤を調製する時の温度およびｐＨは全部が使用する濃度および投与手段毎に最適にすることができる要因である。
請求する安定もしくは防腐処理製剤を患者に透明な溶液としてか或は凍結乾燥させた少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている瓶とこれを再構成させる時の防腐剤または緩衝剤と賦形剤（水性希釈剤に入っている）が入っている２番目の瓶を包含する２個の瓶として供給してもよい。溶液が入っている単一の瓶または再構成が必要な２個の瓶のいずれも多数回再使用可能であり、患者の処置を１回または多数回実施するに充分であり得、従って、現在利用可能な処置療法に比べてより便利であり得る。
本抗−ＩＬ−６抗体を安定にする他の調製または方法を用いると、結果として、本抗体を含有する凍結乾燥粉末の透明な溶液以外の液が生じる可能性もある。透明ではない溶液は、とりわけ、粒子状懸濁物が入っている製剤であり、前記粒子は寸法がいろいろな構造を有する抗−ＩＬ−６抗体が入っている組成物であり、それは微小球、微小粒子、ナノ粒子、ナノ球またはリポソームとしていろいろ公知である。そのような活性薬剤が入っている相対的に均一で本質的に球形の粒子状製剤の調製は、米国特許第４，５８９，３３０号に教示されているように、その活性薬剤が入っている水相と重合体と非水性相を接触させた後に前記非水性相を蒸発させて前記水相の粒子を合体させることで実施可能である。多孔質微小粒子の調製は、米国特許第４，８１８，５４２号に教示されているように、活性薬剤が入っている１番目の相と連続溶媒の中に分散している重合体を用いそしてその懸濁液から前記溶媒を凍結乾燥または希釈−抽出−沈澱などで除去することで実施可能である。そのような調製に好適な重合体は、ゼラチン、寒天、澱粉、アラビノガラクタン、アルブミン、コラーゲン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコリド−Ｌ（−）ラクチドポリ（エプシロン−カプロラクトン、ポリ（エプシロン−カプロラクトン−コ−乳酸）、ポリ（エプシロン−カプロラクトン−コ−グリコール酸）、ポリ（β−ヒドロキシ酪酸）、ポリエチレンオキサイド、ポリエチレン、ポリ（アルキル−２−シアノアクリレート）、ポリ（メタアクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリアミド、ポリ（アミノ酸）、ポリ（２−ヒドロキシエチルＤＬ−アスパルトアミド）、ポリ（エステル尿素）、ポリ（Ｌ−フェニルアラニン／エチレングリコール／１，６−ジイソシアナトヘキサン）およびポリ（メタアクリル酸メチル）から成る群から選択した天然もしくは合成共重合体もしくは重合体である。特に好適な重合体はポリエステル、例えばポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコリド−Ｌ（−）ラクチドポリ（エプシロン−カプロラクトン、ポリ（エプシロン−カプロラクトン−コ−乳酸）およびポリ（エプシロン−カプロラクトン−コ−グリコール酸などである。そのような重合体および／または活性剤を溶解させるに有用な溶媒には、水、ヘキサフルオロイソプロパノール、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ヘキサン、ベンゼンまたはヘキサフルオロアセトンセスキ水化物が含まれる。活性剤含有相を２番目の相を用いて分散させる方法は、前記１番目の相をノズルの中のオリフィスに通して圧力で押し出すことで液滴を生じさせることを包含し得る。
凍結乾燥以外の方法、例えば噴霧乾燥または蒸発による溶媒抽出または結晶性組成物を沈澱させた後に水性もしくは非水性溶媒を除去する段階を１つ以上設ける方法などを用いて乾燥粉末製剤を生じさせることも可能である。噴霧乾燥抗体製剤の調製が米国特許第６，０１９，９６８号に教示されている。抗体が基になった乾燥粉末組成物の調製は当該抗
体と場合により賦形剤が溶媒に入っている溶液またはスラリーに噴霧乾燥を呼吸性乾燥粉末が生じる条件下で受けさせることで実施可能である。溶媒には、乾燥で容易に除去することができる極性化合物、例えば水およびエタノールなどが含まれ得る。その噴霧乾燥手順を酸素の存在無し、例えば窒素ブランケット下で実施するか或は窒素を乾燥用ガスとして用いることで抗体の安定性を向上させることができる。別の比較的乾燥した製剤は、ＷＯ ９９１６４１９に教示されているように、多数の穴開き微小構造物を典型的にはヒドロフルオロアルカン噴射剤が入っている懸濁用媒体に入れて分散させることで生じさせた分散液である。その安定な分散液を定量投与吸入装置を用いて患者の肺に投与してもよい。噴霧乾燥薬剤の商業的製造で用いるに有用な装置をＢｕｃｈｉ Ｌｔｄ．またはＮｉｒｏ Ｃｏｒｐ．が製造している。
本発明に従い、本明細書に記述する少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を安定または防腐処理製剤または溶液の状態で多様な送達方法を用いて患者に投与してもよく、そのような送達方法には、本技術分野で良く知られているように、ＳＣもしくはＩＭ注入、経皮、肺、経粘膜、移植、浸透圧ポンプ、カートリッジ、ミクロポンプまたは本分野の技術者が理解するであろう他の手段が含まれる。
治療用途
本発明は、また、本発明の少なくとも１種のＩＬ−６抗体を用いて細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連疾患を本技術分野で公知のようにしてか或は本明細書に記述するようにして調節または処置する、例えば前記細胞、組織、器官、動物または患者にＩＬ−６抗体を治療的に有効な量で投与または接触させることなどで調節または処置する方法も提供する。本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連疾患を調節または処置する方法も提供し、そのような疾患には、これらに限定するものでないが、肥満、免疫関連疾患、心臓血管疾患、感染病、悪性疾患または神経学的疾患の中の少なくとも１つが含まれる。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連免疫関連疾患を調節または処置する方法も提供し、それには、これらに限定するものでないが、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性発症若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、胃潰瘍、血清反応陰性関節症、変形性関節症、骨溶解、整形外科用インプラントの無菌性緩み、炎症性大腸炎、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、抗リン脂質症候群、光彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、突発性肺線維症、全身性血管炎／ヴェーゲナー肉芽種症、サルコイドーシス、精巣炎／精管切除術を戻す手術、アレルギー性疾患／アトピー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎、移植、移植臓器拒絶、移植片対宿主病、全身性炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性菌敗血症、グラム陰性菌敗血症、培養陰性菌敗血症、真菌性敗血症、好中球減少性発熱、ウロセプシス（ｕｒｏｓｅｐｓｉｓ）、髄膜炎菌血症、外傷／出血、火傷、電離放射線暴露、急性膵炎、成人呼吸窮迫症候群、関節リウマチ、アルコール性肝炎、慢性炎症性病変、サルコイドーシス、クローン病変、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、超過敏性反応、アレルギー性鼻炎、花粉症、通年性鼻炎、結膜炎、子宮内膜症、喘息、じんま疹、全身性アナファラキス（ａｎａｐｈａｌａｘｉｓ）、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、全ての臓器もしくは組織移植拒絶反応、腎臓移植拒絶反応、心臓移植拒絶反応、肝臓移植拒絶反応、膵臓移植拒絶反応、肺移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、皮膚同種移植拒絶反応、軟骨移植拒絶反応、骨移植拒絶反応、小腸移植拒絶反応、胎児胸腺移植拒絶反応、副甲状腺移植拒絶反応、全ての臓器または組織の異種移植拒絶反応、同種移植拒絶反応、抗受容体過敏性反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、グレーブス病、レイノー病、タイプＢインスリン抵抗性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介細胞傷害、ＩＩＩ型超過
敏性反応、ＰＯＥＭＳ症候群［多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）］、多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症、皮膚変化症候群、抗リン脂質症症候群、天疱瘡、強皮症、混合結合組織病、突発性アジソン病、糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白斑、脈管炎、ＭＩ心臓切開術後症候群（ｐｏｓｔ−ＭＩ ｃａｒｄｉｏｔｏｍｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ＩＶ型過敏症（ｔｙｐｅ ＩＶ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）、接触皮膚炎、過敏性肺炎、同種移植拒絶反応、細胞内生物による肉芽腫、薬物過敏性、代謝性／突発性ウィルソン病、ヘマクロマトーシス（ｈｅｍａｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、アルファ−１−アンチトリプシン欠乏症、糖尿病性網膜症、橋本甲状腺炎、骨粗しょう症、視床下部・下垂体・副腎系評価、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性線維症、新生児慢性肺病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、家族性ヘマトファゴシチック（ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ）リンパ組織球増多症、皮膚病変、乾癬、脱毛症、ネフローゼ症候群、腎炎、糸球体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性（ｔｏｘｉｃｉｔｙ）、子癇前症、ｏｋｔ３療法、抗−ｃｄ３療法、サイトカイン療法、化学療法、放射線療法（例えばこれらに限定するものでないが、無力症、貧血症、悪液質などが含まれる）、慢性サリチル酸塩中毒などの中の少なくとも１つが含まれる。例えばｔｈｅ Ｍｅｒｅｃｋ Ｍａｎｕａｌ、１２−１７版、Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ（１９７２，１９７７，１９８２，１９８７，１９９２，１９９９），Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ 他編集、第２版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（１９９８，２０００），（各々引用することによって全体が組み入れられる）を参照のこと。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種の心臓血管病を調節または処置する方法も提供し、それには、これらに限定するものでないが、カーディアックスタン症候群（ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｕｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞、うっ血性心不全、心臓発作、虚血発作、出血、急性冠症候群、動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、動脈再狭窄、糖尿病性動脈硬化性疾患、高血圧、動脈性高血圧、腎血管性高血圧、失神、ショック、心血管系の梅毒、心不全、肺性心、原発性肺高血圧症、心不整脈、心房異所性拍動、心房粗動、心房細動（持続性または発作性）、かん流後症候群（ｐｏｓｔ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心肺バイパス炎症反応、カオス（ｃｈａｏｔｉｃ）または多源生心房頻拍、レギュラーナロー（ｒｅｇｕｌａｒ ｎａｒｒｏｗ）ＱＲＳ頻拍、特異（ｓｐｅｃｉｆｉｃ）不整脈、心室細動、ヒス束不整脈（Ｈｉｓ ｂｕｎｄｌｅ ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、房室ブロック、脚ブロック、虚血性心筋疾患、冠動脈疾患、狭心症、心不全、心筋症、拡張性うっ血性心筋症、拘束型心筋症、心臓弁膜症、心内膜炎、心膜疾患、心臓腫瘍、大動脈瘤および抹消動脈瘤、大動脈解離、大動脈の炎症、腹部大動脈および分枝の閉塞、抹消血管障害、閉塞性動脈障害、抹消アテローム性動脈硬化症、閉塞性血栓血管炎、機能的抹消動脈障害（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｒｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、レイノー現象およびレイノー病、肢端チアノーゼ、肢端紅痛症、静脈疾患、静脈血栓症、静脈瘤、動静脈瘻、リンフェデルマ（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、脂肪性浮腫、不安定狭心症、再かん流障害、ポストポンプ症候群（ｐｏｓｔ ｐｕｍｐ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、虚血−再かん流障害などの中の少なくとも１つが含まれる。そのような方法に、場合により、そのような修飾、処置または治療を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有して成る組成物もしくは製薬学的組成物を有効量で投与することを含めることも可能である。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連感染疾患を調節または処置する方法も提供し、それには、これらに限定するものでないが、急性または慢性細菌感染、急性および慢性寄生もしくは感染過程（細菌、ウイル
スおよび菌・カビ感染を包含）、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、髄膜炎、肝炎（例えばＡ、ＢまたはＣ型など）、敗血症性関節炎、腹膜炎、肺炎、喉頭蓋炎、大腸菌Ｏ１５７：ｈ７、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、マラリア、デング出血熱、リーシュマニア症、ハンセン病、毒素性ショック症候群、連鎖球菌筋炎、ガス壊疽、ヒト型結核菌、ヒト結核菌細胞内、ニューモシスティスカリニ肺炎、骨盤内炎症性疾患、精巣炎／エピジジミチス（ｅｐｉｄｙｄｉｍｉｔｉｓ）、レジオネラ菌、ライム病、インフルエンザ、エプスタイン・バーウイルス、ウイルス関連ヘマトファゴシチック症候群、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎などの中の少なくとも１つが含まれる。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連悪性疾患を調節または処置する方法も提供し、それには、これらに限定するものでないが、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、上咽頭癌、悪性組織球増殖症、腫瘍随伴症候群／悪性カルシウム血症、固形腫瘍、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭部癌、頸部癌、遺伝性非腺腫性癌、ホジキンリンパ腫、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、精巣癌、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移性疾患、癌関連骨吸収、癌関連骨痛などの中の少なくとも１つが含まれる。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連神経系疾患を調節または処置する方法も提供し、それには、これらに限定するものでないが、神経変性疾患、多発性硬化症、片頭痛、エイズによる認知症、脱髄疾患、例えば多発性硬化症および急性横断性脊髄炎；錐体外路疾患および小脳疾患、例えば皮質脊髄系の病変；基底核疾患；多動性運動障害、例えばハンチントン舞踏病および老人性舞踏病；薬剤誘発運動障害、例えばＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬剤によって誘発される運動障害；運動不全疾患、例えばパーキンソン病；進行性核上性麻痺；小脳の構造的病変；脊髄小脳変性症、例えば脊髄性運動失調症、フリードライヒ失調症、小脳皮質変性症、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ、Ｓｈｉ−ＤｒａｇｅｒおよびＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）；全身性疾患［レフサム病、アベタリポプロテミア（ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、運動失調、毛細血管拡張症およびミトコンドリアマルチシステム疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｕｌｔｉ−ｓｙｓｔｅｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）］；脱髄コア（ｃｏｒｅ）疾患、例えば多発性硬化症、急性横断性脊髄炎；および運動単位疾患、例えば神経原性筋委縮症（前角細胞変性、例えば筋委縮性側索硬化症、乳児脊髄性筋委縮症および若年性脊髄性筋委縮症）；アルツハイマー病、中年におけるダウン症；ディフューズレヴィー小体病（Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌｅｗｙ ｂｏｄｙ
ｄｉｓｅａｓｅ）；レヴィー小体型の老年性認知症；ウェルニッケ・コルサコフ症候群；慢性アルコール依存症；クロイツフェルト・ヤコブ病；亜急性硬化性全脳炎、ハレルフォルデン・スパッツ病；拳闘家認知症；神経外傷損傷（ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ）［例えば脊髄損傷、脳損傷、脳震盪、反復性脳震盪（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ ｃｏｎｃｕｓｓｉｏｎ）；痛覚；炎症性痛覚；自閉症；鬱病；発作；認識力障害；てんかんなどの中の少なくとも１つが含まれる。そのような方法に、場合により、そのような修飾、処置または治療を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に少なくとも１種のＴＮＦ抗体または指定部分または変異体を含有して成る組成物もしくは製薬学的組成物を有効量で投与することを含めることも可能である。例えばｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ、１６版、Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒａｈｗａｙ、ＮＪ（１９９２）を参照のこと。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１種のＩＬ−６関連創傷、外傷または組織傷害または関連慢性状態を調節または処置する方法も提供し、それには、これらに限定するものでないが、肉体的損傷または口腔外科手術［歯根膜手術、抜糸、歯内療法、歯インプラント挿入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｏｔｈ ｉｍｐｌａｎｔｓ）、義歯の適用および使用を包含］に関連した外傷の中の少なくとも１つが含まれ、或は前記創傷は、非感染創、挫傷、切り傷、裂傷、非穿通創、開放創、穿通創、貫通創、刺創、汚染創、梗塞（ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｓ）および皮下創から成る群から選択され、或は前記創傷は、虚血性潰瘍、床擦れ、瘻、ひどい噛み傷、熱傷およびドナー部位創傷（ｄｏｎｏｒ ｓｉｔｅ ｗｏｕｎｄｓ）から成る群から選択され、或は前記創傷は、アフタ性創傷、外傷性創傷またはヘルペス関連創傷である。
創傷および／または潰瘍は一般に皮膚または粘膜表面から突き出ているか或は器官の中の梗塞（「脳梗塞」）の結果として見られる。創傷は軟組織欠陥または病巣または下に位置する状態の結果として生じ得る。これに関連して、用語「皮膚」は動物（ヒトを包含）の体の最外表面に関し、無傷またはほとんど無傷の皮膚ばかりでなく傷害のある皮膚表面を包含する。用語「粘膜」は、動物、例えばヒトなどの損傷を受けたか或は損傷を受けていない粘膜に関し、口、口腔、肛門、鼻、肺、目、胃腸、膣または直腸の粘膜であり得る。
これに関連して、用語「創傷」は、組織構造の正常な一体性の崩壊を伴う体損傷を表す。この用語にまた用語「痛み」、「病巣」、「壊死」および「潰瘍」も包含させることを意図する。一般に、用語「痛み」は、皮膚または粘膜のほとんど全ての病巣に関する一般的用語であり、用語「潰瘍」は、器官または組織の表面の局所的欠陥または掘削であり、これは壊死組織の腐肉形成によって生じる。病巣は一般に全ての組織欠陥に関する。壊死は、感染、損傷、炎症または梗塞の結果としてもたらされる死亡した組織に関する。
これに関連して用いる用語「創傷」は、全ての創傷（創傷の分類分けに関しては以下を参照）および治癒過程の所定段階［治癒が始まる前の段階または外科切開の如き特定の創傷を生じさせる前の段階（予防的処置）を包含］の創傷を示す。本発明に従って予防および／または処置することができる創傷の例は、例えば非感染創、挫傷、切り傷、裂傷、非穿通創（即ち、皮膚は崩壊していないが下に位置する構造物に損傷が存在する創傷）、開放創、穿通創、貫通創、刺創、汚染創、皮下創などである。痛みの例は、床擦れ、口内炎、クロムソア（ｃｈｒｏｍｅ ｓｏｒｅｓ）、ヘルペス、褥創などである。潰瘍の例は、例えば消化性潰瘍、十二指腸潰瘍、胃潰瘍、痛風性潰瘍、糖尿病性潰瘍、高血圧性虚血性潰瘍、うっ血性潰瘍、下腿潰瘍（静脈性潰瘍）、舌下潰瘍、粘膜下潰瘍、症候性潰瘍、栄養障害性潰瘍、熱帯性潰瘍およびベネラル（ｖｅｎｅｒａｌ）潰瘍、例えば淋病（尿道炎、子宮頸内膜炎および直腸炎を包含）によって生じる潰瘍などである。本発明に従って成功裏に処置することができる創傷または痛みに関する状態は、火傷、炭疽、破傷風、ガス壊疽、猩紅熱、丹毒、白癬性毛瘡、毛嚢炎、伝染性膿痂疹または水疱性伝染性膿痂疹などである。用語「創傷」と「潰瘍」および「創傷」と「痛み」の使用の間には特定の重なりがしばしば存在し、その上、これらの用語をしばしば無作為に用いる。従って、これに関連して、上述したように、用語「創傷」は用語「潰瘍」、「病巣」、「痛み」および「梗塞」を包含し、かつこれらの用語を特に明記しない限り無差別に用いる。
本発明に従って処置する創傷の種類には、また、（ｉ）一般的創傷、例えば手術、外傷、感染、虚血、熱、化学的および水泡性創傷など、（ｉｉ）口腔に特異的な創傷、例えば摘出後の創傷、特にシスト（ｃｙｓｔｓ）および膿瘍を処置することに関連した歯内創傷、細菌、ウイルスまたは自己免疫が源の潰瘍および病巣、機械的、化学的、熱、感染および苔癬状創傷など［ヘルペス潰瘍、アフタ性口内炎、急性壊死性潰瘍性歯肉炎および口腔内しゃく熱症候群が具体例である］、および（ｉｉｉ）皮膚上の創傷、例えば腫瘍、火傷
（例えば化学的、熱）、病巣（細菌、ウイルス、自己免疫）、刺傷および外科切開なども含まれる。創傷を分類分けする別の方法は、（ｉ）外科切開、小さな擦傷および小さな刺傷による小さな組織損失、または（ｉｉ）重大な組織損失として分類分けする方法である。後者の群には、虚血性潰瘍、床擦れ、瘻、裂傷、ひどい刺傷、熱傷および供血者部位創傷（軟および硬組織）および梗塞が含まれる。
本発明に関連して重要な他の創傷は、虚血性潰瘍、床擦れ、瘻、ひどい刺傷、熱傷および供血者部位創傷の如き創傷である。虚血性潰瘍および床擦れは、通常は治癒が非常に遅い創傷であり、特にそのようなケースでは、その患者にとって勿論治癒過程を向上させてより速めることが非常に重要である。その上、治癒が改善されかつ治癒がより迅速に起こると、そのような創傷に苦しんでいる患者の処置に伴う費用も顕著に少なくなる。
供血者部位創傷は、例えば体のある部分から硬組織を取り出して体の別の部分に移すこと、例えば移植に関連して移すことなどに関連して起こる創傷である。そのような手術の結果として生じる創傷は非常に痛く、従って、治癒が改善されることは非常に価値のあることである。用語「皮膚」を非常に幅広い意味で用い、これに皮膚の表皮層および皮膚の表面が多少とも損傷を受けている場合にはまた皮膚の真皮層も含まれる。皮膚の表皮層は、角質層以外に、外側（上皮）層であり、そして皮膚のより深い所の結合組織層を真皮と呼ぶ。
本発明は、また、細胞、組織、器官、動物または患者におけるＩＬ−６関連疾患（これらに限定するものでないが、免疫関連疾患、心臓血管疾患、感染、悪性および／または神経学的疾患の中の少なくとも１つを包含）としてこの上に挙げた他の病気の中でとりわけ変形性関節症、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、２型糖尿病および慢性閉塞性肺疾患を調節または処置する方法も提供する。前記方法に、場合により、そのような調節、処置または治療を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有して成る少なくとも１種の組成物もしくは製薬学的組成物を有効量で投与することを含めてもよい。
本発明の方法はいずれもそのような修飾、処置または治療を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有して成る組成物もしくは製薬学的組成物を有効量で投与することを含んで成り得る。前記方法に、場合により更に、そのような病気または疾患を処置するための共投与または組み合わせ治療を含めることも可能であり、その場合、前記少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体、これの特定部分または変異体の投与に、更に、少なくとも１種のＴＮＦアンタゴニスト［例えばこれらに限定するものでないが、ＴＮＦの化学的もしくは蛋白質アンタゴニスト、ＴＮＦのモノクローナルもしくはポリクローナル抗体もしくはフラグメント、可溶ＴＮＦ受容体（例えばｐ５５、ｐ７０またはｐ８５）またはフラグメント、それの融合ポリペプチドまたは低分子ＴＮＦアンタゴニスト、例えばＴＮＦ結合蛋白質ＩまたはＩＩ（ＴＢＰ−１またはＴＢＰ−ＩＩ）、ネレリモンマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト［Ｅｎｂｒｅｌ（商標）］、アダリムラブ［Ｈｕｍｉｒａ（商標）］、ＣＤＰ−５７１、ＣＤＰ−８７０、アフェリモマブ、レネルセプなど］、抗リウマチ剤（例えばメトトレキサート、オーラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサルジン）、筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮痛剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤（例えばアミノグリコシド、抗真菌薬、抗寄生虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルロルキノロン、マクロリド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラシクリン、別の抗菌剤）、乾癬治療薬、コルチコステロイド、蛋白同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養剤、甲状腺用薬剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、制吐薬、抗腫瘍薬、下剤、抗凝血薬、エリスロポイエチン（例えばエポエチ
ンアルファ）、フィルグラスチム（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、予防接種、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制因子、放射性医薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経様作用薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息用薬剤、ベータ作用薬、ステロイド剤吸引、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンまたは類似物、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択した少なくとも１種を前以て、同時および／または後に投与することも含める。適切な投薬は本技術分野で良く知られている。例えばＷｅｌｌｓ他編集、Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，第２版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）；ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，豪華版、Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）；Ｎｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，第２１版、Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ，ＰＡ，２００１；Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ Ｄｒｕｇ Ｇｕｉｄｅ ２００１，編集、Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＪ．（これらの文献の各々は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
本発明の組成物、組み合わせ治療、共投与、機器および／または方法（更に本発明の少なくとも１種の抗体、これの特定部分および変異体も含んで成る）に適切なＴＮＦアンタゴニストには、これらに限定するものでないが、抗−ＴＮＦ抗体（例えばこの上で定義した如き少なくとも１種のＴＮＦアンタゴニスト）、これの抗原結合フラグメント、およびＴＮＦと特異的に結合する受容体分子；ＴＮＦ合成、ＴＮＦ放出またはそれが標的細胞に対して示す作用を防止および／または抑制する化合物、例えばタリドミド、テニダップ、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えばペントキシフィリンおよびロリプラム）、Ａ２ｂアデノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容体強化薬など；ＴＮＦ受容体のシグナル伝達を防止および／または抑制する化合物、例えばマイトジェン活性化蛋白質（ＭＡＰ）キナーゼ阻害剤など；膜ＴＮＦ開裂を阻害および／または抑制する化合物、例えばメタロプロテイナーゼ阻害剤など；ＴＮＦ活性を阻害および／または抑制する化合物、例えばアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えばカプトプリル）など；およびＴＮＦの産生および／または合成を阻害および／または抑制する化合物、例えばＭＡＰキナーゼ阻害剤などが含まれる。
本明細書で用いる如き「腫瘍壊死因子抗体」、「ＴＮＦ抗体」、「ＴＮＦα抗体」またはフラグメントなどは、ＴＮＦα活性をインビトロ、インシトゥおよび／または好適にはインビボで低下、阻害、抑制、無効または妨害する。例えば、本発明の適切なＴＮＦヒト抗体はＴＮＦαと結合する能力を有し、それにはＴＮＦαと特異的に結合する抗−ＴＮＦ抗体、これの抗原結合フラグメントおよび特定の変異体またはドメインが含まれる。また、適切なＴＮＦ抗体またはフラグメントもＴＮＦのＲＮＡ、ＤＮＡまたは蛋白質の合成、ＴＮＦの放出、ＴＮＦ受容体のシグナル伝達、膜ＴＮＦの開裂、ＴＮＦの活性、ＴＮＦの産生および／または合成を低下、阻害、無効、妨害、防止および／または抑制し得る。
ＴＮＦ抗体もしくはアンタゴニストの例はキメラ抗体ｃＡ２である。本発明で使用可能なモノクローナル抗−ＴＮＦ抗体の追加的例は本技術分野で記述されている［例えば米国特許第５，２３１，０２４号；Ｍｏｌｌｅｒ，Ａ他、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ２（３）：１６２−１６９（１９９０）；米国出願番号０７／９４３，８５２（１９９２年９月１１日付けで出願）；Ｒａｔｈｊｅｎ他の国際公開番号ＷＯ ９１／０２０７８（１９９１年２月
２１日付けで公開）；Ｒｕｂｉｎ他のＥＰＯ特許公開番号０２１８８６８（１９８７年４月２２日付けで公開）；Ｙｏｎｅ他のＥＰＯ特許公開番号０２８８０８８（１９８８年１０月２６日）；Ｌｉａｎｇ，他、Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３７：８４７−８５４（１９８６）；Ｍｅａｇｅｒ，他、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙ 他、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎ 他、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：４８９−５０７（１９８７）；および、Ｈｉｒａｉ，他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．９６：５７−６２（１９８７）を参照］。
ＴＮＦ受容体分子
本発明で用いるに有用な好適なＴＮＦ受容体分子は、ＴＮＦαと高い親和力で結合する分子であり［例えばＦｅｌｄｍａｎｎ他の国際公開番号ＷＯ ９２／０７０７６（１９９２年４月３０日付けで公開）；Ｓｃｈａｌｌ他、Ｃｅｌｌ ６１：３６１−３７０（１９９０）；およびＬｏｅｔｓｃｈｅｒ他、Ｃｅｌｌ ６１：３５１−３５９（１９９０）（これらの文献は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を参照］、そしてそれらは場合により低い免疫原性を示す。特に、５５ｋＤａ（ｐ５５ＴＮＦ−Ｒ）および７５ｋＤａ（ｐ７５ＴＮＦ−Ｒ）のＴＮＦ細胞表面受容体が本発明で用いるに有用である。そのような受容体の切断形態［この受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含有する］またはこれの機能的部分［例えばＣｏｒｃｏｒａｎ他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：８３１−８４０（１９９４）を参照］もまた本発明で用いるに有用である。そのようなＥＣＤを含有して成る切断形態のＴＮＦ受容体が３０ｋＤａおよび４０ｋＤａのＴＮＦα阻害結合蛋白質として尿および血清中に検出された［Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，Ｈ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５３１−１５３６（１９９０）］。ＴＮＦ受容体多量体分子およびＴＮＦ免疫受容体融合分子およびこれらの誘導体およびフラグメントまたは部分が本発明の方法および組成物で用いるに有用なＴＮＦ受容体分子の追加的例である。
本発明で用いるに有用なＴＮＦ受容体多量体分子は、１個以上のポリペプチドリンカーまたは他の非ペプチドリンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などで連結している２個以上のＴＮＦ受容体のＥＣＤの全部または機能的部分を含有して成る。前記ＴＮＦ免疫受容体融合分子の例はＴＮＦ受容体／ＩｇＧ融合蛋白質である。ＴＮＦ免疫受容体融合蛋白質およびそれの製造方法は本技術分野に記述されている［（Ｌｅｓｓｌａｕｅｒ 他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２８８３−２８８６（１９９１）；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ 他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１）；Ｐｅｐｐｅｌ 他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３−１４８９（１９９１）：Ｋｏｌｌｓ 他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１５−２１９（１９９４）；Ｂｕｔｌｅｒ 他、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ６（６）：６１６−６２３（１９９４）；Ｂａｋｅｒ 他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２０４０−２０４８（１９９４）；Ｂｅｕｔｌｅｒ他の米国特許第５，４４７，８５１号および米国出願番号０８／４４２，１３３（１９９５年５月１６日付けで出願）（これらの文献は各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）］。また、免疫受容体融合分子を生じさせる方法をＣａｐｏｎ他の米国特許第５，１１６，９６４号、Ｃａｐｏｎ他の米国特許第５，２２５，５３８号およびＣａｐｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５−５３１（１９８９）（これらの文献は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）にも見ることができる。
サイトカインには公知サイトカインのいずれも含まれる。例えばＣｏｐｅｗｉｔｈＣｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｃｏｍ．を参照。サイトカインアンタゴニストには、これらに限定するものでないが、全ての抗体、フラグメントまたは模擬物、全ての可溶受容体、フラグメントまたは模擬物、全ての低分子アンタゴニストまたはこれらの任意組み合わせが含まれる
。
治療処置
本発明の方法はいずれもＩＬ−６媒介疾患を処置する方法を含んで成り得、この方法は、そのような修飾、処置または治療を必要としている細胞、組織、器官、動物または患者に少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有して成る組成物もしくは製薬学的組成物を有効量で投与することを含んで成る。前記方法に、場合により更に、そのような病気または疾患を処置するための共投与または組み合わせ治療を含めることも可能であり、その場合、前記少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体、これの特定部分または変異体の投与に、更に、抗感染薬、心臓血管（ＣＶ）系作用薬、中枢神経系（ＣＮＳ）作用薬、自律神経系（ＡＮＳ）作用薬、呼吸器作用薬、胃腸（ＧＩ）管作用薬、ホルモン薬、体液もしくは電解質平衡用薬剤、血液製剤、抗癌薬、免疫修飾薬、眼、耳もしくは鼻用薬剤、局所用薬剤、栄養薬など、少なくとも１種のＴＮＦアンタゴニスト［例えばこれらに限定するものでないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、それの融合ポリペプチドまたは低分子ＴＮＦアンタゴニスト］、抗リウマチ剤（例えばメトトレキサート、オーラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサルジン）、筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮痛剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤（例えばアミノグリコシド、抗真菌薬、抗寄生虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルロルキノロン、マクロリド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラシクリン、別の抗菌剤）、乾癬治療薬、コルチコステロイド、蛋白同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養剤、甲状腺用薬剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、制吐薬、抗腫瘍薬、下剤、抗凝血薬、エリスロポイエチン（例えばエポエチンアルファ）、フィルグラスチム（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、予防接種、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制因子、放射性医薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経様作用薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息用薬剤、ベータ作用薬、ステロイド剤吸引、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンまたは類似物、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択した少なくとも１種を前以て、同時および／または後に投与することも含める。そのような薬剤は本技術分野で良く知られており、それには本明細書に示す各々の調製、適応、投薬および投与が含まれる（例えばＮｕｒｓｉｎｇ ２００１ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，第２１版、Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ，ＰＡ，２００１；Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ Ｄｒｕｇ Ｇｕｉｄｅ ２００１，編集、Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＪ；Ｐｈａｒｍｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ 他編集、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ，各々引用することによって全体が本明細書に組み入れられるを参照）。
病理学的状態の処置を典型的には少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物を有効な量もしくは投薬量で投与することで実施するが、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体の総量を当該組成物に含有させる活性薬剤の比活性に応じて平均で１回投与当たり患者１キログラム当たり少なくとも約０．０１から５００ミリグラムの範囲、好適には１回もしくは多数回投与当たり患者１キログラム当たり少なくとも約０．１から１００ミリグラムの抗体にする。別法として、有効血清中濃度が１回もしくは多数回投与当たり血清１ｍｌ当たり０．１−５０００μｇの濃度になるようにしてもよい。適切な投薬量は医者に公知であり、勿論、個々の病気状態、投与すべき組成物が示す比活性および処置を受けさせる個々の
患者に依存するであろう。ある場合には、必要な治療量を達成する目的で、投与を繰り返し行う必要があり得る、即ち用量を特別に監視または計量して個別の投与を繰り返し行う必要がり得るが、その場合、個々の投与を必要な１日当たりの投薬量または効果が達成されるまで繰り返す。
好適な投薬量には、場合により、投与１回当たり約０．１−９９および／または１００−５００ｍｇ／ｋｇまたはこれの如何なる範囲も値も分率も含まれ得るか、或は１回もしくは多数回投与当たり血清１ｍｌ当たり約０．１−５０００μｇ濃度の血清中濃度を達成する用量またはこれの如何なる範囲も値も分率も含まれ得る。本発明の抗−ＩＬ−６抗体に好適な投薬範囲は、患者の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇから約３、約６または約１２ｍｇである。
別法として、投薬量を公知要因、例えば個々の薬剤が示す薬物動体特性、それの投与様式および経路；受益者の年齢、健康および体重；症状の性質および度合、現在受けている治療の種類、治療の頻度および必要な効果などに応じて変えることも可能である。有効成分の投薬量を通常は体重１キログラム当たり約０．１から１００ミリグラムにしてもよい。必要な結果を得ようとするに有効な量は、通常、１回投与または持続放出形態において１キログラム当たり０．１から５０、好適には０．１から１０ミリグラムである。
非限定例として、ヒトまたは動物の処置を本発明の少なくとも１種の抗体の１回または定期的投与として１回、輸液または繰り返し投与を用いて１−４０日の中の少なくとも１日、または別法としてとしてか或は追加的に、１５２週の中の少なくとも１週、または別法としてとしてか或は追加的に、１−２０年の中の少なくとも１年またはこれらの任意組み合わせで１日当たり約０．１から１００ｍｇ／ｋｇまたはこれのいずれかの範囲、値または分率で行ってもよい。
体内投与に適した投薬形態物（組成物）の有効成分含有量を単位または容器当たり一般に約０．００１ミリグラムから約５００ミリグラムにする。そのような製薬学的組成物に存在させる有効成分の量を通常は当該組成物の総重量を基準にして約０．５−９９．９９９重量％の量にする。
非経口投与の場合、本抗体を溶液、懸濁液、乳液、粒子、粉末または凍結乾燥粉末として個別にか或は製薬学的に受け入れられる非経口用媒体と一緒に調製してもよい。そのような媒体の例は、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液および約１−１０％のヒト血清アルブミンである。また、リポソームおよび非水性媒体、例えば不揮発性油なども使用可能である。そのような媒体または凍結乾燥粉末に等張性を維持する添加剤（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性を維持する添加剤（例えば緩衝剤および防腐剤）などを含有させてもよい。そのような製剤に滅菌を公知または適切な技術を用いて受けさせる。
適切な製薬学的担体が本分野の標準的な文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａ．Ｏｓｏｌ）の最新版に記述されている。
代替投与
本発明に従う少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を製薬学的に有効な量で投与する目的で数多くの公知および開発された様式を本発明に従って用いることができる。以下の説明では肺投与を用いるが、他の投与様式を本発明に従って用いることでも適切な結果を得ることができる。本発明のＩＬ−６抗体を担体に入れるか、溶液、乳液、コロイドまたは懸濁液としてか或は乾燥粉末として本技術分野の範囲内または公知の吸入またはここに記述する他の様式で投与するに適したいろいろな機器および方法のいずれかを用いて送達して
もよい。
非経口製剤および投与
非経口投与用製剤に無菌水もしくは食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコールなど、植物が源の油、水添ナフタレンなどを一般的賦形剤として含有させてもよい。注射用の水性もしくは油性懸濁液の調製は、適切な乳化剤もしくは湿潤剤および懸濁剤を用いて公知方法に従って実施可能である。注射用の薬剤は、経口では投与不能な無毒の希釈剤、例えば水溶液、無菌注射可能溶液または溶媒に入っている懸濁液であってもよい。使用可能な媒体または溶媒として、水、リンゲル液、等張食塩水などが可能であり、通常の溶媒または懸濁用溶媒として無菌の非揮発性油を用いてもよい。そのような目的で全ての種類の非揮発性油および脂肪酸を用いることができ、それには天然もしくは合成もしくは半合成の脂肪油もしくは脂肪酸、天然もしくは合成もしくは半合成のモノ−もしくはジ−もしくはトリ−グリセリドが含まれる。非経口投与は本技術分野で公知であり、それには、これらに限定するものでないが、通常の注射手段、米国特許第５，８５１，１９８号に記述されている如き気体加圧の無針注射器具、および米国特許第５，８３９，４４６号（引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）に記述されている如きレーザー穴開け装置などが含まれる。
代替送達
本発明は、更に、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻内または経皮手段で投与することにも関する。少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物は、これを非経口（皮下、筋肉内または静脈内）または他のいずれかの投与で用いる場合には、特に液状溶液または懸濁液の形態、膣または直腸投与で用いる場合には、特に半固体形態、例えばこれらに限定するものでないが、クリームおよび座薬など形態、口腔または舌下投与の場合には、例えばこれらに限定するものでないが、錠剤またはカプセルの形態、または鼻内の場合にはこれらに限定するものでないが、粉末、鼻用液滴またはエーロゾルまたは特定の作用剤の形態、または経皮の場合には、これらに限定するものでないが、ゲル、軟膏、ローション、懸濁液、またはパッチ送達系｛皮膚構造を修飾するか或は経皮パッチの中の薬剤濃度を高くする化学的促進剤、例えばジメチルスルホキサイドなど（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ，他、Ｉｎ“Ｄｒｕｇ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ；”Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．編集、５９−９０頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９４，引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）を用いるか或は蛋白質およびペプチドが入っている製剤を皮膚に投与することを可能にする酸化剤（ＷＯ ９８／５３８４７）を用いるか或は一時的輸送経路を作り出す目的で電場をかける（例えばエレクトロポレーション）か或は帯電している薬剤が皮膚を通過する可動性を向上（例えばイオン導入）させるか或は超音波をかける［例えば音波導入（米国特許第４，３０９，９８９号および４，７６７，４０２号）］ことを伴わせて｝などで用いるに適するように調製可能である（この上に示した出版物および特許は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）。
肺／鼻投与
肺投与の場合、好適には、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物を肺もしくは洞の下方気道に到達させるに有効な粒径にして送達する。本発明に従い、治療薬を吸引で投与するに適することが本技術分野で知られているいろいろな吸入もしくは鼻用器具のいずれかを用いて少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を送達することができる。エーロゾル化した製剤を患者の空洞または肺胞の中に付着させる能力を有する器具には、定量吸入器、ネブライザー、乾燥粉末発生装置、噴霧装置などが含まれる。本技術分野ではまた肺または
鼻への抗体投与を指示するに適した適切した他の器具も公知である。そのような器具では、全部で、抗体を投与する目的でエーロゾルの状態で分与するに適した製剤を用いることができる。そのようなエーロゾルを溶液（水性および非水性の両方）または固体粒子のいずれかで構成させてもよい。
Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（商標）定量吸入器の如き定量吸入器では、典型的に、噴射用ガスが用いられておりかつこれを吸入中に作動させる必要がある（例えばＷＯ ９４／１６９７０、ＷＯ ９８／３５８８８を参照）。Ｉｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓが市販している ＴｕｒｂｕｈａｌｅｒＴＭ（Ａｓｔｒａ），Ｒｏｔａｈａｌｅｒ(R)（Ｇｌａ
ｘｏ），Ｄｉｓｋｕｓ(R)（Ｇｌａｘｏ），ＳｐｉｒｏｓＴＭｉｎｈａｌｅｒ（Ｄｕｒａ
）器具の如き乾燥粉末吸入器およびＳｐｉｎｈａｌｅｒ（商標）粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）では、混合粉末を息で作動させることが利用されている［（ＵＳ ４６６８２１８ Ａｓｔｒａ，ＥＰ ２３７５０７ Ａｓｔｒａ，ＷＯ ９７／２５０８６ Ｇｌａｘｏ，ＷＯ ９４／０８５５２ Ｄｕｒａ，ＵＳ ５４５８１３５ Ｉｎｈａｌｅ，ＷＯ ９４／０６４９８ Ｆｉｓｏｎｓ（引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）］。ＡＥＲｘＴＭＡｒａｄｉｇｍ，Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ(R) ネブライザー（Ｍａｌｌｉ
ｎｃｋｒｏｄｔ）およびＡｃｏｒｎ ＩＩ(R) ネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ Ｍｅ
ｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（ＵＳ ５４０４８７１ Ａｒａｄｉｇｍ，ＷＯ ９７／２２３７６），（前記文献は引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）の如きネブライザーでは、溶液からエーロゾルを生じさせるが、定量吸入器、乾燥粉末吸入器などでは小さい粒子のエーロゾルを生じさせる。そのような市販吸入器具の具体例は本発明の実施で用いるに適した具体的な器具の代表例であることを意図したものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものでない。
好適には、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を含有して成る組成物を乾燥粉末吸入器または噴霧器で送達する。本発明の少なくとも１種の抗体を投与するに適した吸入器具に求められる特徴はいくつか存在する。例えば、吸入器具による送達は有利に信頼できて再現性があって正確である。そのような吸入器具を用いて場合により小さい乾燥粒子、例えば約１０μｍ未満、好適には約１−５μｍの粒子を良好な呼吸性で送達することができる。
ＩＬ−６抗体組成物をスプレーとして投与
少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている懸濁液または溶液をノズルの中に通して加圧下で押し出すことでＩＬ−６抗体組成物を含有するスプレーを生じさせることができる。そのノズルの大きさおよび形態、かける圧力および液体供給速度を選択することで必要な放出量および粒径を達成することができる。エレクトロスプレーを例えば電場を毛細管またはノズル供給と伴わせて用いることなどで生じさせることができる。有利には、噴霧装置を用いて送達する少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物の粒子の粒径が約１０μｍ未満、好適には約１μｍから約５μｍの範囲、最も好適には約２μｍから約３μｍになるようにする。
噴霧装置で用いるに適した少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物の製剤には、典型的に、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物の濃度が溶液１ｍｌ当たり約０．１ｍｇから約１００ｍｇ（即ちｍｇ／ｇ）またはこれの中のいずれかの範囲、値または分率である水溶液の状態の抗体組成物が含まれる。そのような製剤に賦形剤、緩衝剤、等張剤、防腐剤、界面活性剤および好適には亜鉛などの如き作用剤を含有させることも可能である。そのような製剤に、また、本抗体組成物を安定にする賦形剤または作用剤、例えば緩衝剤、還元剤、バルク蛋白質または炭水化物などを含有させることも可能である。抗体組成物を調製する時に用いるに有用なバルク蛋白質には、アルブミン、プロタミンなどが含まれる。抗体組成物を調製する時に用いるに有用な典型的な炭水化物には、スクロース、マン
ニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが含まれる。本抗体組成物製剤に、また、エーロゾルを生じさせる時に溶液を噴霧することに伴って抗体組成物が表面で誘発されて凝集する度合を軽減または防止し得る界面活性剤を含有させることも可能である。いろいろな通常の界面活性剤、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどを用いることができる。量を一般的に当該製剤の０．００１から１４重量％の範囲内にする。本発明の目的に特に好適な界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。また、蛋白質、例えばＩＬ−６抗体または特定部分または変異体などの調製に適することが本技術分野で知られている追加的作用剤を本製剤に含有させることも可能である。
ネブライザーによるＩＬ−６抗体組成物の投与
本発明の抗体組成物の投与をネブライザー、例えばジェットネブライザーまたは超音波ネブライザーなどを用いて実施することも可能である。ジェットネブライザーの場合、典型的に、オリフィスを通る高速空気ジェットを生じさせる目的で圧縮空気源を用いる。そのガスが前記ノズルを出て膨張する時に低圧領域が作り出され、それによって、抗体組成物の溶液が液体貯蔵槽と連結している毛細管の中に吸い込まれる。その毛細管から出た液体流れが前記管を出る時にせん断を受けて不安定なフィラメントおよび液滴になることでエーロゾルが作り出される。所定のジェットネブライザーを用いて所望の性能特徴を達成しようとする時にある範囲の形態、流量およびバッフルの種類を用いることができる。超音波ネブライザーの場合には、高周波数の電気エネルギーを用いて振動する機械的エネルギーを作り出すが、典型的には圧電変換器を用いる。そのエネルギーを本抗体組成物の製剤に直接にか或はカップリング流体を通して伝達することで、本抗体組成物を含有するエーロゾルを生じさせる。有利には、ネブライザーで送達する抗体組成物の粒子の粒径が約１０μｍ未満、好適には約１μｍから約５μｍの範囲、最も好適には約２μｍから約３μｍになるようにする。
ネブライザー（ジェットまたは超音波のいずれか）と一緒に用いるに適した少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体製剤に含有させる少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体蛋白質の濃度を典型的に溶液１ｍｌ当たり約０．１ｍｇから約１００ｍｇにする。その製剤に賦形剤、緩衝剤、等張剤、防腐剤、界面活性剤および好適には亜鉛などの如き作用剤を含有させることも可能である。そのような製剤に、また、本少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物を安定にする賦形剤または作用剤、例えば緩衝剤、還元剤、バルク蛋白質または炭水化物などを含有させることも可能である。少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を調製する時に用いるに有用なバルク蛋白質には、アルブミン、プロタミンなどが含まれる。少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物を調製する時に用いるに有用な典型的な炭水化物には、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが含まれる。本少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物製剤に、また、エーロゾルを生じさせる時に溶液を噴霧することに伴って少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が表面で誘発されて凝集する度合を軽減または防止し得る界面活性剤を含有させることも可能である。いろいろな通常の界面活性剤、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどを用いることができる。量を一般的に当該製剤の０．００１から１４重量％の範囲内にする。本発明の目的に特に好適な界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。また、蛋白質、例えば抗体蛋白質などの調製に適することが本技術分野で知られている追加的作用剤を本製剤に含有させることも可能である。
定量吸入器によるＩＬ−６抗体組成物の投与
定量吸入器（ＭＤＩ）では、噴射剤、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６および任意の賦形剤または他の添加剤を液化圧縮ガス含有混合物として容器の中に入れる。定量弁を作動さ
せることで前記混合物をエーロゾル、好適には大きさの範囲が約１０μｍ未満、好適には約１μｍから５μｍ、最も好適には約２μｍから約３μｍの粒子を含有するエーロゾルとして放出させる。本分野の技術者に知られているいろいろな方法を用いて生じさせた抗体組成物製剤を用いることで必要なエーロゾル粒径を得ることができるが、そのような方法には、ジェットミリング、噴霧乾燥、臨界点凝縮などが含まれる。好適な定量吸入器には、３ＭまたはＧｌａｘｏが製造している吸入器が含まれ、それらにはヒドロフルオロカーボン噴射剤が用いられている。定量吸入器で用いるに適した少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体製剤に、一般に、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が非水性媒体に入っている懸濁液、例えば界面活性剤を用いて噴射剤の中に懸濁させた懸濁液として少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体が入っている微細粉末を含有させる。そのような噴射剤はそのような目的で用いられる通常の材料、例えばクロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボンまたは炭化水素などのいずれであってもよく、それにはトリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）などが含まれる。そのような噴射剤は好適にはヒドロフルオロカーボンである。少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体をこれが噴射剤に入っている懸濁液として安定にすること、活性薬剤が化学的劣化に対して抵抗するように保護することなどをもたらす界面活性剤を選択することができる。適切な界面活性剤には、ソルビタントリオレエート、大豆レシチン、オレイン酸などが含まれる。ある場合には、溶媒、例えばエタノールなどを用いた溶液のエーロゾルが好適である。また、蛋白質調製技術で公知の追加的作用剤を本製剤に含有させることも可能である。本分野の通常の技術者は、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体組成物を本明細書に記述しなかった器具を用いて肺投与することで本発明の方法を達成することも可能であることを認識するであろう。
経口製剤および投与
経口投与用製剤は、アジュバント（例えばレゾルシノールおよび非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテル）を一緒に投与して腸壁透過性を人工的に向上させることばかりでなく酵素阻害剤（例えば膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラシロール）を一緒に投与することで酵素の劣化を抑制することに頼っている。親水性薬剤（蛋白質および抗体、および経口、口腔、粘膜、鼻、肺、膣膜貫通または直腸投与を意図する場合の少なくとも２種類の界面活性剤の組み合わせを包含）を送達するための製剤が米国特許第６，３０９，６６３号に教示されている。経口投与用の固体型投薬形態物の有効成分化合物を少なくとも１種の添加剤と混合してもよく、そのような添加剤には、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、澱粉、寒天、アルギン酸塩、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成重合体およびグリセリドが含まれる。そのような投薬形態物にまた他の種類の添加剤、例えば不活性な希釈剤、滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムなど、パラベン、防腐剤、例えばソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロールなど、抗酸化剤、例えばシステインなど、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味剤、風味剤、芳香剤などを含有させることも可能である。
錠剤およびピルにさらなる処理を受けさせることで腸溶性膜被覆製剤にすることも可能である。経口投与用液状製剤には、医学用途に受け入れられる乳液、シロップ、エリキシル、懸濁液および溶液製剤が含まれる。そのような製剤に前記分野で通常用いられる不活性な希釈剤、例えば水などを含有させることも可能である。また、インスリンおよびヘパリン用の薬剤送達系としてリポソームも記述された（米国特許第４，２３９，７５４号）。より最近になって、薬剤を送達する目的で混合アミノ酸の人工重合体の微小球（プロテ
イノイド）が用いられた（米国特許第４，９２５，６７３号）。更に、米国特許第５，８７９，６８１号および米国特許第５，８７１，７５３号に記述されている担体化合物を生物学的活性薬剤を経口送達する目的で用いることも本技術分野で公知である。
粘膜用製剤および投与
生物活性薬剤を経口投与する目的でミクロカプセルがもたらされるように１種以上の生体適合性重合体もしくは共重合体賦形剤、好適には生分解性重合体もしくは共重合体の中に封じ込めておいた製剤を用いると、その結果としてもたらされるミクロカプセルは大きさが適切なことから、結果として、その薬剤が集合リンパ小節（他に、動物の「Ｐｅｙｅｒパッチ」または「ＧＡＬＴ」としても知られる）に到達してそれによって吸収されることから、その薬剤が胃腸管を通ることによって起こる効果損失が起こらない。同様な集合リンパ小節が気管支（ＢＡＬＴ）および大腸にも存在し得る。この上に記述した組織は一般に粘膜関連リンパ細網組織（ＭＡＬＴ）と呼ばれる。粘膜表面を貫通する吸収を起こさせるには、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を投与する組成物および方法に、多数のサブミクロン粒子、粘膜接着性高分子、生物学的活性を示すペプチドおよび水性連続相を含有して成る乳液（乳液粒子の粘膜接着を達成することで粘膜表面を貫通する吸収を助長する）を含める（米国特許第５，５１４，６７０号）。本発明の乳液を付着させるに適した粘膜表面には、角質、結膜、口腔、舌下、鼻、膣、肺、胃、腸および直腸経路の投与が含まれ得る。膣もしくは直腸投与用製剤、例えば座薬などの場合、これに例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、ココアバターなどを賦形剤として含有させてもよい。鼻内投与用製剤は固体であってもよく、これに例えばラクトースを賦形剤として含有させてもよいか、或はそれは鼻液滴の水性もしくは油性溶液であってもよい。口腔投与の場合の賦形剤には、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、前以てゼラチン状にしておいた澱粉などが含まれる（米国特許第５，８４９，６９５号）。
経皮製剤および投与
経皮投与の場合には、少なくとも１種の抗−ＩＬ−６抗体を送達用デバイス、例えばリポソームまたは重合体ナノ粒子、微小粒子、ミクロカプセルまたは微小球（特に明記しない限り、集合的に微小粒子と呼ぶ）の中に封じ込める。適切なデバイスが数多く公知であり、それには合成重合体、例えばポリヒドロキシ酸、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸およびこれらの共重合体、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリホスファゼンなど、および天然重合体、例えばコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他の蛋白質、アルギネートおよび他の多糖などおよびこれらの組み合わせで出来ている微小粒子が含まれる（米国特許第５，８１４，５９９号）。
長期投与および製剤
本発明の化合物を被験体に１回の投与で長期間、例えば１週間から１年間に渡って送達するのが望ましい可能性がある。いろいろな徐放、持続性薬剤または移植投薬形態物を利用することができる。例えば、投薬形態物に体液中の溶解度が低い当該化合物の製薬学的に受け入れられる無毒塩、例えば（ａ）多塩基酸、例えば燐酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノ−もしくはジ−スルホン酸、ポリガラクツロン酸などを用いた酸付加塩、（ｂ）多価金属カチオン、例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどとの塩または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンまたはエチレンジアミンなどを用いて生じさせた有機カチオンとの塩、または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組み合わせ、例えばタンニン酸亜鉛塩などを含有させてもよい。加うるに、本発明の化合物または好適には相対的に不溶な塩、例えばこの直ぐ上に記述した塩などを注射に適するゲル、例えばモノステアリン酸アルミニウムゲルの状態に例えばゴマ油などを用いて調製することも可能である。特に好適な塩は亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモ酸塩などである。他の種類の注射用徐放持続性製剤に、分散させた化合物または塩を含有さ
せ、それを米国特許第３，７７３，９１９号に記述されているように劣化速度が遅い無毒の非抗原性重合体、例えばポリ乳酸／ポリグリコール酸重合体などの中に封じ込めてもよい。そのような化合物または好適には相対的に不溶な塩、例えばこの上に記述した塩などをまたコレステロールマトリクスシラスティックペレット、特に動物に用いるに適したペレットの状態に調製することも可能である。追加的徐放性、持続性もしくは移植製剤、例えば気体または液体状のリポソームなども文献（米国特許第５，７７０，２２２号および“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ 編集、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，１９７８）で公知である。
本発明を一般的に記述してきたが、例示として示すものでありかつ限定として解釈されるべきではない以下の実施例を参照することで前記がより容易に理解されるであろう。
適応症
関節リウマチ（ＲＡ）
関節リウマチ（ＲＡ）は、自己免疫特徴を伴う慢性全身性炎症疾患である。ＲＡの特徴の多くは無調節なＩＬ−６の作用によるものであると説明可能である。
ＲＡに関連している可能性のあるＩＬ−６の作用には、Ｂ細胞分化因子としてＩＬ−６が示す作用によるポリクローナル高ガンマグロブリン血および自己抗体産生（リウマトイド因子）の誘発；ＩＬ−２に呼応して起こる細胞障害Ｔ細胞発生の増進；肝細胞刺激活性による急性期蛋白質（ＣＲＰ、ＳＡＡ、フィブリノーゲン）の産生；破骨細胞活性化による関節周囲骨粗しょう症および骨破壊；巨核球分化因子としての作用によるトロンボサイトーシスの誘発；およびＶＥＧＦの調節、従ってＩＬ−１βおよびＴＮＦαに呼応して起こり得る血管形成が含まれる。
ＩＬ−６はＴＮＦαもしくはＩＬ−１で刺激されたＲＡ滑膜性線維芽細胞によって産生され、ＲＡでは、滑膜液（ＳＦ）および血清の両方の中に高濃度で存在する。血清中濃度と臨床／実験室疾患活動指数の間に相関関係が存在する。
抗−ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ ｍＡｂに活動性ＲＡにかかっている患者に数種の臨床試験を実施することによる試験を受けさせた。今日までに得た結果を以下に簡単に記述する。
フェーズＩ／ＩＩ試験
この試験の１番目として、マウス抗−ＩＬ−６ ｍＡｂ（ＢＥ−８）をＲＡにかかっている５人の患者に連続１０日間に渡って毎日投与し、そして一時的な臨床および実験室改善度合と関連付けた（９）（Ｗｅｎｄｌｉｎｇ，Ｄ他、１９９３ Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０：２５９）。ＲＡにかかっている患者にヒト化抗−ＩＬ−６Ｒ（８０ｋＤａ）ｍＡｂ（ＭＲＡ；Ｃｈｕｇａｉ）を用いた試験をいくつかのフェーズＩ／ＩＩ試験で受けさせた。これらの中の１番目としてＭＲＡを１週間に１回または２回の割合で１−５０ｍｇの用量でＩＶ注入することで投与し、週に５０ｍｇの維持処置を６カ月に及んで実施した。その結果として急性期測定値、Ｃ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）およびフィブリノーゲンが急速に減少し、かつ熱、疲れおよび臨床スコア、例えば朝の硬直および膨れおよび関節圧痛カウント数などは低い度合であった。また、貧血、トロンボサイトーシスおよび高ガンマグロブリン血が改善されたことも注目した。次の試験では、４５人の患者にＭＲＡを０．１−１０ｍｇ／ｋｇの用量で１回ＩＶ注入することによる処置を受けさせ、その結果として、用量濃度を高くすると臨床スコアが改善する傾向があることに加えて急性期反応物質が減少した。
フェーズＩＩ試験
この試験の１番目として、１５人の患者にＭＲＡを用いた処置（２４週間に渡って２週間毎に２、４または８ｍｇ／ｋｇの投薬濃度）を受けさせた結果、２４週間で１５人中１３人にＡＣＲ２０反応が現れ、ＣＲＰ／血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）は正常であった。重要な急性安全懸念は全く存在しなかったが、患者の２／３は顕著なＬＤＬコレステロール濃度上昇を示した。第二フェーズＩＩ試験では、ＤＭＡＲＤ耐性ＲＡにかかっている１６４人の患者にプラセボまたはＭＲＡを用いた処置をＩＶ注入（３カ月に渡って４週間毎に４または８ｍｇ／ｋｇの投薬濃度）で受けさせた結果、１２週の時に示したＡＣＲ２０反応率はプラセボ、４および８ｍｇ／ｋｇの場合それぞれ１１％、５７％および７８％であった。最後に、活動性ＲＡにかかっている３５９人の患者にＭＴＸ単独（１０−２５ｍｇ／週）、ＭＲＡ単独（ＩＶ注入で毎月２、４または８ｍｇ／ｋｇの投薬濃度）またはＭＴＸとＭＲＡを投与した。ＡＣＲ２０反応で測定した時にＭＲＡおよびＭＲＡ＋ＭＴＸの方がＭＴＸ単独よりも有効であった。
全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）
ＳＬＥは、多様な症状を伴う慢性の潜在的に致命的な自己免疫病である。その病因は未知である。この病気の１つの特質は、Ｂ細胞の過増殖、活性化および多様な自己抗原に対して起こる自己抗体の産生を伴う。
ＩＬ−６は、Ｂ細胞の分化を誘発することで抗体産生細胞を生じさせる。ＳＬＥでは、自己抗体（ＡＮＡ、抗−ｄｓＤＮＡ）産生細胞による前記抗体の産生および免疫複合体の沈着量が増加する。ＩＬ−６は、細胞障害Ｔ細胞発生を助長し、肝急性期反応物質、メサンギウム細胞増殖、ケラチノサイト増殖、巨核球分化および血栓形成を増加させる。
ＳＬＥ患者およびマウスＳＬＥモデルの両方ともＩＬ−６濃度が高い。ＩＬ−６受容体がＢ細胞に結合するとＢ細胞が自己抗体産生細胞になる最終的分化が誘発されることが立証された。
Ｌｉｎｋｅｒ−Ｉｓｒａｅｌｉ 他、（Ｌｉｎｋｅｒ−Ｉｓｒａｅｌｉ Ｍ 他、１９９１ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：１１７−１２３）は、ＩＬ−６に対する中和抗体を用いると自然発生的ポリクローナル抗体産生が減少することを示した。Ｋｉｔａｎｉ他（Ｋｉｔａｎｉ Ａ，他、１９９２ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８８：７５−８３）は、ＳＬＥ培養物中のＩＬ−６のインビトロＴ細胞産生量が２倍になることとＳＬＥのＢ細胞がＩＬ−６を産生する量は対照のＢ細胞が産生する量の５倍であることを立証することで前記発見を裏付けた。しかしながら、ＳＬＥにおける自己抗体の病的産生がＩＬ−６の効果のみに限定されることはない。また、ＩＬ−６受容体が果たす役割も研究された。Ｎａｇａｆｕｃｈｉ他は、ＩＬ−６受容体がＳＬＥのＢ細胞の大部分を正常なＢ細胞と比べて上方調節することを示した。抗−ＩＬ−６受容体抗体はそのようなＢ細胞が抗体産生細胞になる最終的分化を阻害した。そのような可溶ＩＬ−６受容体がＳＬＥで果たす役割はまだ確認されていない。
２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）
インスリン耐性（インスリン作用不全）およびβ細胞機能不全（膵臓β細胞によるインスリン分泌の機能的欠乏）がＴ２ＤＭ発症の主原因であると見なされている。インスリン耐性は、抹消組織がインスリンチャレンジに充分な反応を示さないことで血糖値が高くなるとして明らかになる。病気の初期段階でインスリン耐性および血糖値が高くなることに続いて膵臓のβ細胞が補足的にインスリンを過剰に分泌する。Ｔ２ＤＭが進行するにつれて、β細胞がインスリンを分泌する能力が悪化する。
インスリン耐性発症の一因となる基礎的機構は不明である。Ｔ２ＤＭの発症に最も一般的に関連した１つの状態は肥満であり、Ｔ２ＤＭにかかっている患者では減量を適度に行
ったとしても血糖値が有意に高い。
肥満およびインスリン耐性／高インスリン血の両方に加えて脂質異常症、耐糖能異常および高血圧はメタボリック症候群と呼ばれる状態を特徴付けるものである。メタボリック症候群からＴ２ＤＭに自然に進行した人は微細および巨視的血管変化を起こし易く、それによって心臓血管（ＣＶ）病にかかりそして最終的に死亡する可能性がある。肥満、インスリン耐性および高インスリン血がＴ２ＤＭとＣＶ病の間を関連付けている可能性が最も高いと示唆されている。
脂肪組織は、代謝を調節する主要な器官の中の１つであると識別されており、それは、インスリン感受性調節に関与する数多くの分子を分泌するエネルギー貯蔵場所および内分泌器官の両方である。レプチン、レシスチン、アジポネクチンおよびＴＮＦαに加えて、脂肪組織もＩＬ−６を分泌し、このことが肥満と炎症とＴ２ＤＭと心臓血管（ＣＶ）病の間の関連に相当すると示唆されている。
脂肪過多症とＩＬ−６濃度の間に積極的な相互関係が存在することが示された。肥満状態の時に脂肪組織が増加すると循環しているＩＬ−６の増加が維持される可能性があり、それによって、インスリン反応性組織における炎症が助長されることでインスリン感受性が低下するか或はインスリンシグナル伝達カスケードに関係する蛋白質の活性および発現が妨害されることでインスリン耐性が起こる可能性がある。ＩＬ−６がインスリン耐性発症である役割を果たしている可能性を裏付けるか或は否定するインビトロおよびインビボ両方のデータが存在する。
肝臓（ＨｅｐＧ２）（４４）、脂肪（３Ｔ３Ｌ１）または単離ラット膵島細胞を包含する充分に定義された細胞系を用いたインビトロデータは、ＩＬ−６がインスリンシグナル伝達、糖吸収およびインスリン分泌のそれぞれに対して直接的な否定的影響を与えることを示している。他方、骨格筋生検を用いて実施された実験で得られたデータは、運動している筋肉ではＩＬ−６が糖吸収度合を向上させ得ることを示唆している。
ＩＬ−６濃度とインスリン感受性の間の関連に関するインビボデータも同様に混在している。ＩＬ−６過剰発現もしくは完全切除モデルは、ＩＬ−６活性を完全に抑制しても有益な効果は得られない可能性があることを示唆している。例えば、肥満ではない遺伝子導入糖尿病（ＮＯＤ）マウスでは、ヒトＩＬ−６が過剰発現することで糖尿病の発症が遅れかつ寿命が伸びる。加うるに、ＩＬ−６がゼロのマウスを用いたデータは、ＩＬ−６がエネルギー均衡調節である役割を果たしている可能性があることを示唆している、と言うのは、そのような動物は遅発性肥満を発症しかつ血糖値がより高いからである。
ヒトでは、ＩＬ−６プロモーター領域内に自然に起こる変異が存在するとＩＬ−６分泌率が高くなる。そのような変異はインスリン感受性の増大および低下の両方に関係している。
別の組の実験で外因性ＩＬ−６の効果を評価した。正常な被験体では、ＩＬ−６を投与すると血漿中インスリン濃度に影響が生じることなく血糖値が高くなるが、癌患者では、ＩＬ−６を加えると糖処理度合が高くなった。加うるに、ＩＬ−６濃度とインスリン耐性の間の相互関係も試験した。そのような試験で得たデータは、男性および女性の両方とも循環しているＩＬ−６濃度が高くなることとインスリン耐性が高いことが相互に関係していたが、原因と影響の関係は測定すべき状態のままであることを示している。
肥満に関連したインスリン耐性の発症でＩＬ−６がある重要な役割を果たしていることが分かった。しかしながら、それがインスリン耐性である役割を果たしている可能性を裏
付けするか或は否定する両方の相反するインビトロおよびインビボデータが存在する。
変形性関節症（ＯＡ）
ＯＡは、関節軟骨が失われることに関連して軟骨下骨が変化することで特徴づけられる慢性の変性関節疾患である。関節鏡検査または滑膜生検片でいろいろな炎症度合が観察されるが、その病気は主に炎症ではない。むしろ、軟骨細胞および／または骨芽細胞代謝が変化することに由来すると考えられている。ＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−６がそのような変化に最も強力に関連しているサイトカインである。
ＯＡにかかっている患者から得た骨膜液の中にＩＬ−６が検出されるが、その濃度は炎症性関節症で見られる濃度より実質的に低い（Ｂｅｒｔａｚｚｏｌｏ，Ｎ．他 １９９４
Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｃｔｉｏｎｓ ４１：９０−９２）。
ＩＬ−６は、肝急性期蛋白質合成の主要な刺激因子であると認識されており、そしてＣＲＰの濃度と膝にＯＡが存在することが関連しており、ＣＲＰと肥満の間に関連があることが知られていることを考慮に入れたとしても関連している（Ｍｏｈｔａｉ，Ｍ．他、１９９６ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １４：６７−７３）。
ＩＬ−６はＯＡの軟骨に由来する軟骨細胞の中では発現するが、正常な軟骨では発現しない（Ｓｏｗｅｒｓ，Ｍ．他、２００２ Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ １０：５９５−６０１）。機械的応力が軟骨細胞によるサイトカイン発現に対して示す影響をインビトロで試験する実験において、体液によって誘発されたせん断応力によってＩＬ−６ｍＲＮＡおよび蛋白質が顕著に上方調節された。このことは、ＯＡの軟骨にＩＬ−６が発現するのは機械的付加の結果によるものである可能性があることを示唆している。ＩＬ−６はまたＩＬ−１が軟骨細胞に対して示す作用に反応することでも産生され得る（Ｄｏｚｉｎ，Ｂ．他、２００２ Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２１：４４９−４５９）。
ヒト関節軟骨細胞を生体外で培養することによる他の実験において、ＩＬ−６がｓＩＬ−６と一緒になってプロテオグリカン合成の抑制をもたらしたが、そのような影響はＩＬ−１に比べて控えめであった（Ｇｕｅｒｎｅ，Ｐ．他、１９９９ Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌｏｇｙ １８：２５３−２６０）。
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
ＣＯＰＤは、気道狭窄が完全には可逆的ではないことで特徴づけられる病気状態である。気道狭窄は一般に進行性でありかつ肺が毒性粒子および気体に対して異常な免疫反応を示すことに関連している（Ｐａｕｗｅｌｓ ＲＡ 他、２００１ Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６３：１２５６−１２７６）。
ＣＯＰＤは、加齢に伴って見られる正常な肺機能低下が加速することで特徴づけられる。気道狭窄がゆっくりと進行すると身体障害そして早期死亡がもたらされる。ＣＯＰＤは死亡および身体障害の主要な原因ではあるが、細胞および分子の観点から広範な研究が成されたのはほんの最近である（Ｂａｒｎｅｓ Ｐ．Ｊ．他、２００３ Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ ２２：６７２−６８８）。
ＣＯＰＤでは、抹消気道が一定して狭くなりかつ肺胞崩壊（肺気腫）をもたらす慢性的炎症が存在する。その炎症反応は、肺胞マクロファージ、好中球および細胞障害Ｔリンパ球の数が増加しかつ複数の炎症性メディエータ（ケモカイン、サイトカイン、成長因子および脂質）が放出されることで特徴づけられる。酸化応力のレベルが高いことで炎症度合が高くなり得る。また、エラスチン分解度合が高くなりかつ数種のエラスチン分解酵素が関与する証拠も存在する。ＣＯＰＤにおける炎症および蛋白分解はタバコの煙に対する正常な炎症反応が高くなることで起こる。喘息とは対照的に、炎症はコルチコステロイドに耐
性があると思われる（Ｂａｒｎｅｓ Ｐ．Ｊ．他、２００３）。
動物モデルにおいて、細菌のエンドトキシンまたはリポ多糖（ＬＰＳ）およびタバコの煙にさらされることによって好中球増加が誘発されかつ気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液の中に存在するＩＬ−６産生量が増加する。（Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ Ｄ．Ｃ．他、２０００ ＡＪＰＬＣＭＰ ２７９：Ｌ８９５−９０２）。マウス肺の中でＩＬ−６の過剰発現が起こると肺気腫が誘発される（Ｋｕｈｎ ＩＩＩ Ｃｈ．他、２０００ ＡＪＲＣＭＢ ２２：２８９−２９５）。ヒトでは、１秒間努力呼気容量（ＦＥＶ１）とＢＡＬの中のＩＬ−６、ＩＬ−８濃度および多核白血球数は逆の関係にある（Ｓｏｌｅｒ Ｎ．他、１９９９ Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ １４：１０１５−１０２２）。中程度からひどいＣＯＰＤにかかっている被験体では血漿中のＴＮＦα、ＩＬ−６およびＣＲＰ濃度が高い（Ｙａｓｕｄａ Ｎ．他、１９９８ Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ ９２：９９３−９９９）。
ＣＯＰＤの急性増悪期は、患者の状態が安定な状態から正常な日毎の変化を超えて持続的に悪化するとして定義され、それは発症時に急性であることから標準的医療で変化させる必要がある（Ｂｕｒｇｅ Ｓ．他、２００３ Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ ２１：Ｓｕｐｐｌ．４１，４６ｓ−５３ｓ）。肺機能の症状が増大しかつ悪化することが入院（米国では毎年約５００，０００人）する共通した原因であるが、基礎を成す細胞および分子的機構は幅広くは調査されておらずかつ理解度も劣っている（Ｗｅｄｚｉｃｈａ，Ｊ．Ａ．２００２ Ｃｈｅｓｔ １２１：１３６Ｓ−１４１Ｓ）。急性増悪期は長期に渡ることで生活の質に顕著な影響が生じかつＣＯＰＤの進行が加速する可能性がある（Ｓｏｔｏ Ｆ．Ｊ．他、２００３ Ｐｕｌｍ Ｍｅｄ ９：１１７−１２４）。呼吸器感染がＣＯＰＤ増悪の最も一般的な原因である。そのような感染は大部分が細菌によって引き起こされるが、それらの多くはウイルス感染、特にレトロウイルス感染によるものである（Ｓｏｔｏ
Ｆ．Ｊ．他、２００３）。また、環境の要因、空気汚染および温度がある役割を果たしている可能性もある。
ＣＯＰＤにかかっている患者では、増悪期中に好中球が増加しかつ唾液の中に存在するＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦαおよびＬＴＢ４の濃度が増大する。中程度からひどいＣＯＰＤにかかっているある患者は頻繁に増悪期になる傾向がある（１年当たり３回以上の増悪期）。このような群の患者（「増悪期の頻度が高い」）では、ＣＯＰＤが安定している時でさえ、ＩＬ−６の濃度がより高くかつ分泌白血球蛋白分解酵素阻害因子の濃度が低い（Ｂｈｏｗｍｉｋ Ａ．他、２０００ Ｔｈｏｒａｘ ５５：１１４−１２０；Ｇｏｍｐｅｒｔｚ Ｓ．他、２００１ Ｔｈｏｒａｘ ５６：３６−４１；Ｇｏｍｐｅｒｔｚ Ｓ．他、２００１ Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ １７：１１１２−１１１９）。
他の数多くの機構、例えば酸化応力および細菌のコロニー化なども同様にＣＯＰＤ増悪期の病生理学に関係していると思われている。
図１に、ヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体とＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体の結合を示す。 図２に、本発明のヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の結合エピトープを示す。 図３に、ＥＬＩＳＡで測定した時にヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＵ９３７細胞によるＩＬ−６刺激ＭＣＰ−１分泌を抑制することを示す。 図４に、ＥＬＩＳＡで測定した時にヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＨｅｐＧ２細胞によるＩＬ−６およびＩＬ−１β刺激ＳＡＡ分泌を抑制することを示す。 図５に、ゲル電気泳動法で示すウエスタンブロット分析で測定した時にヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＩＬ−６媒介ｓｔａｔ３燐酸化を阻害することを示す。 図６に、ヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体がＢａｌｂ／ＣマウスにおけるヒトＩＬ−６誘発ＳＡＡ産生を抑制することを示す。 図７に、抗−ＩＬ−６ ｍＡｂがＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおける抗−ｄｓＤＮＡ自己抗体産生を抑制することを示す。 図８の上段に、ＩＬ−６がヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の存在有り無しでインスリン誘発Ａｋｔ燐酸化に対して示した影響を示す。図８の下段に、ＩＬ−６がヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の存在有り無しでインスリン誘発Ａｋｔ燐酸化に対して示した影響のウエスタンブロット分析を示す。 図９に、実施例３に記述したＥＬＩＳＡ結合検定の結果を示す。 図１０に、実施例３に記述したＩＬ−６依存細胞株を用いた抗増殖検定の結果を示す。 図１１の上段に、インスリン、ＩＬ−６蛋白質および抗−ＩＬ−６抗体で処置したラット肝細胞におけるＰＩ３キナーゼ活性化を示す。図１１の下段に、ラット肝細胞におけるＰＩ３キナーゼ活性化研究に関する制御を示す。 図１２Ａに、ＩＲのインスリン誘発燐酸化に関してラット肝細胞におけるシグナル伝達に対してＩＬ−６が示した影響を示す。 図１２Ｂに、Ａｋｔのインスリン誘発燐酸化に関してラット肝細胞におけるシグナル伝達に対してＩＬ−６が示した影響を示す。 図１３Ａに、抗−ＩＬ−６抗体で処置した後のＤＩＯマウスにおける血糖値を示す。 図１３Ｂに、抗−ＩＬ−６抗体で処置した後のＤＩＯマウスにおけるインスリン濃度を示す。 図１３Ｃに、抗−ＩＬ−６抗体で処置した後のＤＩＯマウスにおける恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ）指数を示す。 図１４Ａ−Ｆに、抗−ＩＬ−６抗体で処置する前および後の脂質値を示す。 図１５に、腹腔内耐糖能試験（ｉｐＧＴＴ）で抗ＩＬ−６ ｍＡｂを用いてマウスを処置する計画を示す。
哺乳動物細胞を用いたＩＬ−６抗体のクローン化および発現
典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写開始、抗体コード配列および転写物の転写およびポリアデニル化の終止に必要なシグナルを調節する少なくとも１つのプロモーター要素を含有する。追加的要素には、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列およびＲＮＡスプライシング用ドナーおよびアクセプター部位と隣接している介在配列が含まれる。ＳＶ４０に由来する早期および後期プロモーター、レトロウイルス、例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩなどに由来する長い末端反復（ＬＴＲＳ）およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の早期プロモーターを用いて高い効率の転写を達成することができる。しかしながら、また、細胞構成要素（例えばヒトアクチンプロモーター）を用いることも可能である。本発明を実施する時に用いるに適した発現ベクターには、例えばｐＩＲＥＳｌｎｅｏ，ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ，ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ，ＰＬＸＳＮまたはｐＬＮＣＸ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ），ｐｃＤＮＡ ３．１（＋／−），ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ），ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ），ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２），ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ
３７１４６）およびｐＢＣｌ２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）などの如きベクターが含まれる。適切な哺乳動物および他の宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ、２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １、Ｃｏｓ ７およびＣＶ １、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（
ＣＨＯ）細胞が含まれる。別法として、染色体の中に一体化している遺伝子を含有する安定な細胞株を用いて遺伝子を発現させることも可能である。選択可能マーカー、例えばｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシンまたはヒグロマイシンなどを用いた共トランスフェクションを用いて、そのトランスフェクションを受けさせた細胞の同定および単離を行うことができる。
また、その移入させた遺伝子を増幅させることでコード化抗体を多量に発現させることも可能である。興味の持たれる遺伝子のコピーを数百または数千個さえ持つ細胞株を生じさせようとする時にはＤＨＦＲ（ジヒドロホレート還元酵素）マーカーが有用である。別の有用な選択マーカーは酵素であるグルタミン合成酵素（ＧＳ）（Ｍｕｒｐｈｙ，他、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１９９２））である。そのようなマーカーを用いて哺乳動物の細胞を選択性培地の中で増殖させた後、最も高い耐性を示す細胞を選択する。そのような細胞株は染色体の中に一体化している増幅した遺伝子１種または２種以上を含有する。抗体の産生ではしばしばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞が用いられる。
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４はラウス肉腫ウイルスの強力プロモーター（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎ，他、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えてＣＭＶエンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，他、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））を含有する。多数のクローン化部位、例えば制限酵素開裂部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８などを伴う部位を存在させると興味の持たれる遺伝子のクローン化が容易になる。そのようなベクターに３’イントロンに加えてラットプレプロインスリン遺伝子のポリアデニル化および終止シグナルを含有させる。
ＣＨＯ細胞を用いたクローン化および発現
ＩＬ−６抗体を発現させる目的でベクターｐＣ４を用いることができる。プラスミドｐＣ４はプラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣアクセス番号３７１４６）の誘導体である。そのプラスミドは、ＳＶ４０早期プロモーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含有する。そのようなプラスミドを用いたトランスフェクションを受けさせたチャイニーズハムスター卵巣細胞またはジヒドロホレート活性を示さない他の細胞を化学治療薬であるメトトレキセートを補充しておいた選択的培地（例えばアルファマイナスＭＥＭ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）の中で増殖させることで前記細胞を選択することができる。メトトレキセート（ＭＴＸ）に耐性を示す細胞の中でＤＨＦＲ遺伝子を増幅させることは充分に示されている（例えばＦ．Ｗ．１Ａｌｔ，他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ．ＨａｍｌｉｎおよびＣ．Ｍａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０９７：１０７−１４３（１９９０）；およびＭ．Ｊ．ＰａｇｅおよびＭ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１））を参照）。ＭＴＸの濃度を高くして細胞を増殖させながら標的酵素であるＤＨＦＲを過剰に産生させるとＤＨＦＲ遺伝子が増殖する結果として前記薬剤に対する耐性が生じる。２番目の遺伝子を前記ＤＨＦＲ遺伝子と連結させておくと、それが通常は一緒に増殖しかつ過剰に発現する。そのようなアプローチを用いて増殖した遺伝子１種または２種以上のコピーを１，０００個以上担持する細胞株を生じさせることができることが本技術分野で知られている。次に、メトトレキセートを除去した時点で、宿主細胞の１つ以上の染色体と一体化している増幅した遺伝子を含有する細胞株が得られる。
また、ラウス肉腫ウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）の強力なプロモーター以外の高効率プロモーター、例えばヒトβ−アクチンプロモーター、他のレトロウイルス、例えばＨＩＶおよびＨＴＬＶＩなどに由来するＳＶ４０早期もしくは後期プロモーターまたは長い
末端反復などを発現で用いることも可能である。哺乳動物細胞を用いてＩＬ−６抗体を規則的な様式で発現させようとする時にＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現システムおよび同様なシステムを用いることも可能である（Ｍ．ＧｏｓｓｅｎおよびＨ．Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７−５５５１（１９９２））ｍＲＮＡのポリアデニル化では、他のシグナル、例えばヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子に由来するシグナルなども同様に使用可能である。また、染色体と一体化している興味の持たれる遺伝子を担持する安定な細胞株を選択可能マーカー、例えばｇｐｔ、Ｇ４１８またはヒグロマイシンなどを用いた共トランスフェクションで選択することも可能である。開始時に２種以上の選択可能マーカー、例えばＧ４１８とメトトレキセートなどを用いる方が有利であり得る。そのプラスミドｐＣ４を制限酵素で消化させた後、本技術分野で公知の手順を用いて、ウシ腸ホスファターゼを用いて脱燐酸を起こさせる。次に、そのベクターを１％のアガロースゲルを用いて単離する。
完全ＩＬ−６抗体をコードするＤＮＡ配列、例えば本発明のＩＬ−６抗体のＨＣおよびＬＣ可変領域に相当する配列識別番号：９８および９６で示される如き配列をそれぞれ公知方法段階に従って用いる。この構築ではまた安定なヒト定常領域（即ちＨＣおよびＬＣ領域）をコードする単離核酸も用いる。
次に、そのＤＮＡをコードする単離可変と定常領域および脱燐酸ベクターをＴ４ＤＮＡリガーゼで連結させる。次に、大腸菌ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞に遺伝子導入を受けさせた後、例えば制限酵素分析などを用いて、プラスミドｐＣ４の中に挿入したフラグメントを含有する細菌を同定する。
活性ＤＨＦＲ遺伝子を持たないチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションで用いる。リポフェクチンを用いて５ミクログラムの発現プラスミドｐＣ４と０．５ミクログラムのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏを一緒に移入させる。そのプラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは主要な選択可能マーカー、即ちＧ４１８を包含する群の抗生物質に耐性を与える酵素をコードするＴｎ５に由来するｎｅｏ遺伝子を含有する。その細胞をＧ４１８を１ミクログラム／ｍｌ補充しておいたアルファマイナスＭＥＭに種付けする。２日後に細胞をトリプシンで消化させた後、ハイブリドーマクローン化用プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、ドイツ）の中のメトトレキセートを１０、２５または５０ｎｇ／ｍｌに加えてＧ４１８を１ミクログラム／ｍｌ補充しておいたアルファマイナスＭＥＭに種付けする。約１０−１４日後、単一のクローンをトリプシンで消化させた後、メトトレキセートをいろいろな濃度（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）で用いて、６穴ペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに種付けする。次に、最も高いメトトレキセート濃度の時に増殖するクローンをメトトレキセートを更により高い濃度（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）で入れておいた新しい６穴プレートに移す。同じ手順を１００−２００ｍＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す。所望遺伝子産物の発現を分析、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットまたは逆相ＨＰＬＣ分析などで分析する。
抗−ＩＬ−６抗体の構築および選別
ＩＬ−６抗体の変異体（クローンＡＭＥ−Ａ９）を構築しかつ活性に関して選別した。この実施例および本明細書の他の場所に示すＣＤＲはＫａｂａｔが定義した通りであるが、但しＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの定義の合計であるＣＤＲＨ１は除く。全体領域を網羅する２つの個別ライブラリーを構築するにはＣＤＲＨ２の長さにする必要があった。興味の持たれるクローンの配列を決定した後、ＥＬＩＳＡおよび細胞が基になった検定で更に特徴付け、そして速度定数を測定した。
精製ＩｇＧを用いて実施したＥＬＩＳＡの例を図９に示す。このＥＬＩＳＡでは、一般に、ヤギ抗−ヒトカッパ抗体で被覆しておいたＣｏｓｔａｒ ３３６６ミクロタイタープレートを用いた。Ｆａｂ（またはＩｇＧ）の希釈液を前記被覆を受けさせておいた穴の中に入れて２２℃で１時間インキュベートした。次に、前記穴をＰＢＳ（Ｔｗｅｅｎ ２０が０．１％）で洗浄した後、ビオチニル化ＩＬ−６を２００ｎｇ／ｍｌ加えて１時間置いた。洗浄後にＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎのアルカリ性ホスファターゼ接合体を加えた後、２２℃で１時間インキュベートした。強力に洗浄した後に比色分析用基質を加えて、結合したＩＬ−６を測定した。このＥＬＩＳＡの変法に、ビオチニル化ＩＬ−６のインキュベーションを行った後にＰＢＳ（ＢＳＡが０．０１％）を３７℃で用いた洗浄段階をビーカーの中で長時間実施、例えば１８時間の長時間の洗浄を実施することを含めた。
その生じさせた本発明のヒト改変ＩＬ−６反応性ＩｇＧモノクローナル抗体の数種が示した親和定数は１ｘ１０９から９ｘ１０１２の範囲である。そのようなヒト改変モノクローナル抗体は高い親和性を示すことから、ＩＬ−６依存疾患、病気または関連状態における治療用途で用いるに適切である。
前記抗体が有するＣＤＲ領域の中の１つ以上を変えることで多数の異なるヒト改変抗−ＩＬ−６抗体変異体を得た。以下の表３に、個々のＣＤＲライブラリーの中に存在していた有益な変異体の要約を示す（アミノ酸の変化はＡＭＥ−Ａ９変異体を基準にした変化である）。加うるに、以下の表１３に、軽および重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を可能性のある置換位置（「Ｘ」の印を付ける）と一緒に示す。
個々のＣＤＲライブラリーの中に存在する最良のクローン（即ち変異体）を基にして「組み合わせ」ライブラリーを構築した。表４に、その「組み合わせ」ライブラリーに含めた変異体を示す。その組み合わせライブラリーに選別および特徴付けをこの上に記述したようにして受けさせた。より良好なクローンの中の６クローンに見られた変異を以下の表５Ａに示す一方で、そのようなクローンの中のＣＤＲの配列識別番号を表５Ｂに示す。
細胞が基になった検定を用いた抗−ＩＬ−６ＩｇＧの検定
キメラ抗−ＩＬ−６およびヒト改変抗−ＩＬ−６（クローンＡＭＥ−１９ａ）抗体にこれらがＩＬ−６依存細胞株の増殖を防止する能力に関する試験を受けさせた。７ＴＤ１細胞をＣｏｓｔａｒ ３６１０ ９６穴プレートに穴１個当たり２００個の細胞になるように入れて平板培養した。抗体をＩＭＤＭ培地で希釈して前記穴に加えた後、ヒトＩＬ−６を５００ｐｇ／ｍｌの最終濃度になるように加えて、プレートを組織培養インキュベーターの中で６４−７２時間インキュベートした。その時間が経過した時点で穴の全部にＡＴＰｌｉｔｅキット（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の細胞溶解用緩衝液を５０μｌ加えた後、そのプレートを３分間撹拌した。ＡＴＰｌｉｔｅ基質を５０μｌ加えた後のプレートに蓋をして、それを１分間振とうした。照度計を用いて化学発光を測定した。
細胞が基になった検定の結果を図１０に示し、計算したＥＣ５０値を以下の表６に示す。キメラ抗−ＩＬ−６抗体が示したＥＣ５０値は２．７ｘ１０−１１Ｍ（４．０９ｎｇ／ｍｌ）であり、そしてヒト改変抗−ＩＬ−６（クローンＡＭＥ−１９ａ）抗体が示したそれは２．７ｘ１０−１２Ｍ（０．４１ｎｇ／ｍｌ）であった。そのヒト改変抗体が示したＥＣ５０値は改善度が約１０倍であることを示していたが、約１０倍から約６０倍（これらの間の値を包含）のＥＣ５０値改善度を得ることも可能であり得る。
ヒト改変抗−ヒトＩＬ−６抗体の結合速度
前記宿主細胞から精製した抗体がＩＬ−６と濃度依存様式で結合することをＥＬＩＳＡ分析で実証する。このケースでは、前記抗体がこれの同種抗原（エピトープ）に対して示
す親和力を測定する。ＢＩＡｃｏｒｅ分析およびＫｉｎＥｘＡ ３０００装置を用いて定量的結合定数を得る。その結果は、本ヒト改変モノクローナル抗体の数種は１ｘ１０−９から３ｘ１０−１４の範囲のＫＤで非常に高い親和性を示すことを示している。
抗−ヒトＩＬ−６モノクローナル抗体（ＡＭＥ−Ａ９、ＡＭＥ−Ａ１６、ＡＭＥ−１８ａ、ＡＭＥ−２０ｂ、ＡＭＥ−２２ａおよびＡＭＥ−２３ａ）を用いかつ可溶ＩＬ−６受容体であるｓＩＬ−６Ｒと結合したＩＬ−６を検出するための正対照としてＣＮＴＯ ３２８を用いる酵素免疫検定（ＥＩＡ）を実施した。可溶ヒトＩＬ−６受容体であるｓＩＬ−６Ｒおよび組換え型ヒトＩＬ−６をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から入手した（それぞれカタログ番号２２７−ＳＲ−０２５および２０６−ＩＬ−０１０）。西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗−ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖）をＪａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｐｖｅ、ＰＡ）から入手した（カタログ番号１０９−０３５−００３）。過酸化水素およびＯＰＤ錠剤をＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手した（それぞれカタログ番号Ｈ−１００９およびＰ−８２８７）。
ｓｇｐ８０／ＩＬ−６／抗−ＩＬ−６ ｍＡｂ複合体生成に関する酵素結合免疫検定
Ｃｏｓｔａｒ ＥＩＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ／Ｃｏｓｔａｒ、Ａｃｔｏｎ、ＭＡ）（カタログ番号９０１８）にｓＩＬ−６Ｒ（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ、１００μｌ／穴）による被覆を４℃で一晩受けさせた。前記プレートをＴｗｅｅｎ ２０含有量が０．０２％（体積／体積）の０．１５Ｍ食塩水で洗浄した後、ＰＢＳ中１％（重量／体積）のＢＳＡを２００μｌ／穴用いて穴を室温で１時間に渡ってブロックした。前記穴を再び洗浄した後、次のフォーマットで、ＰＢＳ中２００ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−６（１００μｌ／穴）と一緒に室温で１時間インキュベートした。抗体を全ての穴に１０μｇ／ｍｌの出発濃度から１０倍の連続希釈で１００μｌ／穴の量で加えて室温に１時間置いた。前記穴を洗浄した後、ＨＲＰ結合ヤギ抗−ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ）と一緒にして室温で３０分間インキュベートした。前記穴を洗浄した後、クエン酸−燐酸塩基質用溶液（クエン酸が０．１Ｍで燐酸ナトリウムが０．２ＭでＨ２Ｏ２が０．０１％でＯＰＤが１ｍｇ／ｍｌ）を１００μｌ／穴加えて室温に１５分間置いた。４Ｎの硫酸を２５μｌ／穴加えることで反応を停止させた後、自動ＥＬＩＳＡプレート読み取り装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘ Ｐｌｕｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を用いてＯＤ４９０を読み取った。
ＩＬ−６を抗ｈＩＬ−６モノクローナル抗体またはＣＮＴＯ ３２８と一緒に前以てインキュベートした場合の効果を試験する目的で、１０μｇ／ｍｌの抗体量で出発した１０倍の連続的希釈液（１００μｌ）と一緒に２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６（１００μｌ）を室温で１時間インキュベートした。次に、その前以てインキュベートしておいた混合物をｓＩＬ−６Ｒと一緒にして室温で１時間インキュベートした後、ＨＲＰ結合ヤギ抗−ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ）を用いてｓＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−６／抗ヒトＩＬ−６複合体の検出を室温で３０分かけて実施した。その検定条件の残りはこの上のパラグラフに記述した条件と同じであった。
ＥＩＡ ｐｌａｔｅｉｎｔｅｒｎａｌ技術レポートを基にした以前の研究により、被覆しておいたｓＩＬ−６ＲがＩＬ−６を捕捉するとＣＮＴＯ ３２８でそれを検出することができることが分かっていた。加うるに、ＡＭＥ−Ａ９、ＡＭＥ−Ａ１６、ＡＭＥ−１８ａ、ＡＭＥ−２０ｂ、ＡＭＥ−２２ａおよびＡＭＥ−２３ａを用いることでもｓｇｐ８０（ｓＩＬ−６Ｒ）と結合したＩＬ−６をＥＩＡを用いて用量依存様式で検出することができる。ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の各々にＣＮＴＯ ３２８を基準にした評価を受けさせた。しかしながら、ＩＬ−６と前記抗ｈＩＬ−６モノクローナル抗体のいずれかを前以てインキュベートしておくとｓＩＬ−６ＲがＩＬ−６と結合する能力がなくなる。
抗−ＩＬ−６ＩｇＧに関する速度定数の測定
Ｓａｐｉｄｙｎｅが製造しているＫｉｎＥｘＡ ３０００装置を用いて結合速度を測定した。簡単に述べると、ヒトＩＬ−６をアルザクトンビードと共有結合させた後、このビードと遊離ＩｇＧの結合を前記装置を用いて検出した。ＫＤを測定する目的で、ＩｇＧを０．５、１または５ｐＭの一定濃度で入れることに加えて連続的に希釈度を高くしたヒトＩＬ−６を入れておいた個々の管をＢＳＡが０．１％のＰＢＳ中で２０℃で３−４日間インキュベートした。各ＫＤ測定毎に全体で１３個の管を用いた。例えば、キメラ抗−ＩＬ−６抗体を５ｐＭの一定濃度で用い、そして個々の管を０−２００ｐＭのＩＬ−６と一緒にインキュベートした。他のＩｇＧに関するインキュベーションも同様な様式で設定した。インキュベーション後に平衡状態のサンプル各々に入っている遊離ＩｇＧの測定をＫｉｎＥｘＡ ３０００装置をこれの製造業者の指示に従って用いることで実施した。ＫｉｎＥｘＡ ３０００装置を以下により詳細にするようにして用い、ＫｉｎＥｘＡ ３０００ソフトウエアを用いてＫＤ値を決定した。
ｋｏｎを測定する目的で個々のＩｇＧを２００ｐＭの量で１００−２００ｐＭのヒトＩＬ−６と混合した後、ＫｉｎＥｘＡ ３０００装置を用い、アルザクトンビードと共有結合させておいたヒトＩＬ−６との結合を用いることで、結合しなかったＩｇＧを検出した。一連の測定値を経時的に取った。その結果として得たデータを用い、ＫｉｎＥｘＡ ３０００ソフトウエアを用いることで、ｋｏｎを計算した。式ｋＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎを用いてｋｏｆｆを計算した。抗−ＩＬ−６ＩｇＧに関する速度定数の要約を表７に示す。
抗−ＩＬ−６抗体のインビトロ特徴付け
抗−ＩＬ−６抗体の配列、エピトープ特異性、親和力および生物学的活性を特徴付けるインビトロ試験を実施した。
ヒト改変ｍＡｂ
配列分析を用いて、本発明の抗−ＩＬ−６抗体（いろいろな変異体／クローンとして具体化した）が完全にヒトのフレームワークを含有することを立証する。表５ａは、本発明の抗−ＩＬ−６抗体（本抗体のいろいろな変異体）ではＣＤＲ１、２および３の重鎖および軽鎖の両方ともキメラ抗−ＩＬ−６抗体（ＰＣＴ ＷＯ ０４／０３９８２６に記述されている）に比べて全体で１０個のアミノ酸残基が変化したことを示している。
エピトープ特異性
本発明の抗−ＩＬ−６抗体およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体はヒトＩＬ−６上の同様なエピトープを認識する。これらの抗体はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃ＭＡＢ−２０６の商業的マウス抗−ヒトＩＬ−６ ｍＡｂとは競合せず、このことは、それらは前記Ｒ＆Ｄの抗−ＩＬ−６ ｍＡｂが認識するエピトープとはユニークに異なるエピトープを認識することを示唆している。本発明の抗−ＩＬ−６抗体およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体はＲ＆Ｄのラット抗−ヒトＩＬ−６ ｍＡｂとは競合しない。
プレートに結合させておいた抗−ＩＬ−６ ｍＡｂ［マウス抗−ヒトＩＬ−６ ｍＡｂ、即ちＭＡＢ−２０６（これを単にヒトＩＬ−６を捕捉するプレート結合ｍＡｂとして用いた）］（１０μｇ／ｍｌ）を用いてヒトＩＬ−６（２００ｎｇ／ｍｌ）を捕捉させた後、前記プレートに本発明の抗−ＩＬ−６抗体およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体の一連の希釈液を加えた（Ｘ軸に沿って示すように）。ＩＬ−６との結合度合がＯＤ４９０がＹ軸に沿って高くなるとして測定した。本発明の抗−ＩＬ−６抗体およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体の両方ともがＩＬ−６との結合を用量依存様式で示す。
逆に、本発明の抗−ＩＬ−６抗体およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体はヒトＩＬ−６に対して競合的結合を示し、このことは、その２種類の分子がＩＬ−６上の同様な結合エピトープを共有することを示唆している。プレートに結合させておいたＭＡＢ−２０６（１０μｇ／ｍｌ）を用いてヒトＩＬ−６（２００ｎｇ／ｍｌ）を捕捉させた。次に、前記プレートにＸ軸に沿って示す如き本発明の抗−ＩＬ−６抗体の一連の希釈液およびビオチニル化キメラ抗−ＩＬ−６抗体を５０ｎｇ／ｍｌ加えた。ビオチニル化キメラ抗−ＩＬ−６抗体とＩＬ−６の結合をストレプトアビジン−ＨＲＰで検出して、Ｙ軸に沿ったＯＤ４９０読み取り値として測定した。
その上、本ヒト改変抗体およびキメラ抗体はｓＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒ複合体に対する結合に関して同様な特性を示す（図１）。本発明の抗−ＩＬ−６抗体はｓＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒ複合体と結合する。前記プレートに可溶ＩＬ−６受容体（ｓＩＬ−６Ｒ）による被覆を濃度が１０μｇ／ｍｌになるように受けさせた。次に、前記プレートにヒトＩＬ−６を２００ｎｇ／ｍｌの濃度で加えた。次に、前記プレートにＸ軸に沿って示す如き本発明の抗−ＩＬ−６抗体またはキメラ抗−ＩＬ−６抗体の一連の希釈液を加えた後、ＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒ複合体との結合をＨＲＰ−抗−ヒトＩｇＧを用いて検出して、Ｙ軸に沿ったＯＤ４９０読み取り値として測定した。
この上で見いだしたことを更に立証する目的で、７ＴＤ１（ＩＬ−６依存マウスハイブリドーマ細胞株）の細胞が基になった増殖検定を用いて、いろいろな種のＩＦＮγ刺激ＰＢＭＣおよびＬＰＳを用いて生じさせたＩＬ−６含有条件付き上澄み液を用いて異種間反応性試験を実施した。いろいろな霊長類種（ヒト、マーモセット、カニクイザル、チンパンジー、赤毛猿、バブーン、ブタオザルおよびコットントップモンキーを包含）に由来する７ＴＤ１細胞増殖の刺激で前記条件付き上澄み液が示す活性を本発明のヒト改変抗体が中和することが分かり、かつ前記キメラ抗体と比べて同様な異種反応パターンを示した（表８）。
最後に、トリプシン消化方法を用いてエピトープマッピングを実施した時、本ヒト改変抗体およびキメラ抗体がヒトＩＬ−６に対して示す結合エピトープは同じであることを観察し、そしてそれはＨｅｌｉｘ Ｄ貫通アミノ酸残基１６８−１８４上に位置する（図３）。最近の変異分析により、本発明の抗体がＩＬ−６と結合するには残基１７９および１８２が必須であることが分かった。そのエピトープ（アミノ酸残基１６８−１８４）はヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の存在下で重水素を保持するＩＬ−６表面であると同定した。
生物学的活性
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体が示すＩＬ−６中和効力の測定を７ＴＤ１細胞が基になったバイオアッセイで実施した。ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体が７ＴＤ１細胞増殖検定で示した中和効力はキメラ抗−ＩＬ−６抗体が示したそれに比べて１０倍高かった。７ＴＤ１細胞にｈＩＬ−６を５００ｐｇ／ｍｌ用いた刺激を一連の希釈したヒト改変抗−ＩＬ−６抗体またはキメラ抗−ＩＬ−６抗体またはアイソタイプ対照ｍＡｂの存在下で７２時間受けさせた。細胞増殖を１秒当たりのカウント数として測定し、それはＹ軸に示す如くであった。誤差棒グラフは重複したサンプルのＳＤを示している。黒丸はＩＬ−６を用いなかった細胞を示し、白丸は、ｈＩＬ−６を５００ｐｇ／ｍｌ用いた刺激を受けさせた細胞を示す。
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体はまたＵ９３７細胞によるＩＬ−６誘発単球走化性蛋白質−１（ＭＣＰ−１）産生（図３）およびＨｅｐＧ２ヒトヘパトーマ細胞によるＩＬ−６／ＩＬ−１β誘発血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）産生（図４）も抑制する。図３は、ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＵ９３７細胞によるＩＬ−６刺激ＭＣＰ−１分泌を抑制することを示している。穴１個当たり５ｘ１０５個の細胞にｈＩＬ−６を１ｎｇ／ｍｌおよびヒト改変抗
−ＩＬ−６抗体の一連の希釈液を用いた処置を７２時間受けさせた。細胞培養物の上澄み液にＥＬＩＳＡによる分析をＭＣＰ−１の存在に関して三重に受けさせた。
図４は、ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＨｅｐＧ２細胞によるＩＬ−６およびＩＬ−１β刺激ＳＡＡ分泌を抑制することを示している。２．２５ｘ１０５個の細胞にｈＩＬ−６を１００ｎｇ／ｍｌ、ｓＩＬ−６Ｒを２００ｎｇ／ｍｌおよびＩＬ−１βを１ｎｇ／ｍｌ用いた刺激をヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の一連の希釈液の存在下で２４時間受けさせた。次に、細胞培養物の上澄み液にＥＬＩＳＡによる分析をＳＡＡの存在に関して二重に受けさせた。
ＩＬ−６依存Ｓｔａｔ３燐酸化
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＩＬ−６がＩＬ−６Ｒおよびｇｐ１３０と結合する結果としてもたらされるシグナル伝達カスケードを阻害する能力を評価する目的で免疫沈澱検定を実施することで、ｇｐ１３０を細胞表面に発現するＴＨＰ−１細胞におけるＩＬ−６依存ＳＴＡＴ３燐酸化に対する効果を試験した。
ｍＡｂに無菌濾過による濾過殺菌を受けさせた後、ＰＢＳに入れて４℃で貯蔵した。Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）の組換え型ヒトＩＬ−６（２０６−ＩＬ−０１０）およびｓＩＬ−６Ｒ（２２７−ＳＲ−０２５）を用いた。ＲＰＭＩ培地（１１８７５−０８５）、熱不活化ウシ胎仔血清（１６０００−０６９）、Ｌ−グルタミン（２５０３０−８１）、非必須アミノ酸（１１１４０−０５０）およびピルビン酸ナトリウム（１１３６０−０７０）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から入手した。また、ＴＢＳ（１０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５、１００ｍＭのＮａＣｌ）も用いた。
研究細胞銀行から受け取ったＴＨＰ−１、即ちヒト急性単球性白血病細胞株に試験を受けさせた結果、マイコプラズマ陰性で細菌も存在していなかった。前記細胞をウシ胎仔血清を１０％とグルタミンを２ｍＭとピルビン酸ナトリウムを１ｍＭ含有させておいたＲＰＭＩ培地に入れて培養した。培養物が約８５％の密集度に到達した時点で細胞を二次培養するか或は収穫した。細胞を常規通り３日毎に１：５に分割した。
チロシン燐酸化では、細胞をＴ−２２５フラスコの中で密集度が８０−９０％になるまで増殖させた。その培地を除去した後、血清が入っていない新鮮な培地を代わりに入れて、一晩インキュベートした。血清を欠乏させた後の細胞を各フラスコから収穫し、沈澱させた後、各条件毎に最終濃度が２０ｘ１０６個の細胞を血清を含有しない０．５ｍｌの培地に入れて再懸濁させた。
ＲｈＩＬ−６（０．１μｇ／ｍｌ）を下記の反応体と一緒に３７℃で１５分間予備培養した：０．５ｍｌの培養単独、抗−ＩＬ−６ Ａｂ（１０μｇ／ｍｌ）およびｓＩＬ−６Ｒ（０．２μｇ／ｍｌ）。次に、抗−ＩＬ−６ ＡｂおよびｓＩＬ−６Ｒのそれぞれと一緒に予備培養しておいた細胞にＳＩＬ−６Ｒ（０．２μｇ／ｍｌ）および抗−ＩＬ−６ Ａｂ（１０μｇ／ｍｌ）を加えて３７℃で１５分間培養した。次に、その細胞を負対照としての培地およびＩＬ−６／Ａｂ／ｓＩＬ−６Ｒ複合体と一緒にした後、３７℃で６分間インキュベートした。その細胞を氷冷ＴＢＳで２回洗浄した後、細胞沈澱物をセクション５．４に記述する如く処理するか或は−７０℃で貯蔵した。
免疫沈澱では、細胞沈澱物を完全プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（１６９７４９８、Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、スイス）を入れておいた１ｍｌの溶解用緩衝液（５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．５，３００ｍＭ ＮａＣｌ，０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００）（Ｔ−９２８４，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に入れて溶解させた。その細胞
を３０秒間渦巻き撹拌した後、−７０℃で２０−６０分間インキュベートした。細胞の屑を１３，０００ｒｐｍの遠心分離で２０分かけて除去した。非特異的背景染色の度合を低下させる目的で、そのサンプルを２μｇのウサギＩｇＧ（Ｉ５００６、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）と５０μｌの蛋白質Ａアガロース（ＳＣ−２００１、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ）と一緒にしてオービタルミキサー上で４℃で１時間インキュベートすることで前以て奇麗にしておいた。そのアガロースビードを２５００ｒｐｍの遠心分離で５分かけて除去した。その奇麗にした溶解産物をミクロ遠心分離管に移し、抗−ＳＴＡＴ３（２μｇ／ｍｌ）（ＳＣ−７１７９、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と一緒にしてオービタルミキサー上で４℃で一晩インキュベートした後、蛋白質Ａアガロースビードを５０μ加えて、オービタル振とう機上で４℃で２時間インキュベートした。そのアガロースビードを２５００ｒｐｍの遠心分離で５分かけて集めた後、４℃の氷冷ＴＢＳで５回洗浄した。次に、そのアガロースビードを４０μｌのＬａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液とＤＴＴ（ＮＰ０００７−４６５０３０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に入れて懸濁させた後、９５℃に５分間加熱した。
そのサンプルを３−８％のＮｕＰａｇｅ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（ＥＡ０３７５ＢＯＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）上に置いて緩衝液（ＮＰ０００２−４６５０２６、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて１００Ｖで１時間流すことで分離させた。トランスファー緩衝液（ＮＰ０００６−４６５０２９、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて蛋白質をニトロセルロース膜（ＬＣ２００１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に３０Ｖで１時間かけて移した。その膜をＴＢＳ−Ｔ中１０％の無脂肪乾燥乳（Ｎｅｓｔｌｅ、Ｇｌｅｎｄａｌｅ、カリフォルニア）に入れて４℃で一晩ブロッキングを実施した。室温のＴＢＳ−Ｔを用いた洗浄を数回受けさせた後の膜をマウスモノクローナル抗−ｐ−ＳＴＡＴ３ Ａｂ（ＳＣ−８０５９、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ）（ＴＢＳ−Ｔで１：１０００に希釈しておいた）と一緒にしてオービタル振とう機上で４℃で４時間インキュベートした。次に、洗浄を数回受けさせた後の膜をロバ抗−マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（１：１０００）（ＳＣ−２３１８、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ）と一緒にしてオービタルミキサー上で室温で２時間インキュベートした。洗浄を数回受けさせた後のサンプルにＥＣＬｐｌｕｓ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔｓおよび分析用キット（ＲＰＮ２１０８、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を製造業者のプロトコルに従って用いることによる検定を受けさせた後、ＥＣＬフィルムに暴露させることで可視化した。次に、その膜を１００ｍＭのＤＴＴ、２％のＳＤＳ、６２．５％ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．７）に浸漬して１００℃で３０分間撹拌することでＡｂを除去した。次に、その膜をＴＢＳ−Ｔで洗浄した後、それに１０％の無脂肪乾燥乳を用いたブロッキングを一晩受けさせた。その膜を洗浄した後、抗−ＳＴＡＴ３（１：１０００）（ＳＣ−７１７９、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と一緒にＴＢＳ−Ｔに入れて４℃で２時間インキュベートし、５回洗浄した後、ヤギ−抗−ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（１：１０００）（ＳＣ２０３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ）と一緒にして１時間インキュベートし、そしてＥＣＬｐｌｕｓを用いた検出を実施した。あらゆる膜にストリッピングを常規通り受けさせた後、ＳＴＡＴ３を用いた再検査を受けさせることでＳＴＡＴ３蛋白質の存在を立証した。
この結果により、ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がＩＬ−６媒介ｓｔａｔ３燐酸化、即ちＩＬ−６シグナル伝達経路の鍵となる成分を阻害することが分かった（図５Ａおよび５Ｂ）。ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９Ａ）はＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒ誘発ｓｔａｔ３燐酸化を抑制する。組換え型ヒトＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒ誘
発ｓｔａｔ３燐酸化をＴＨＰ−１細胞内で検出した（図５Ｂ）。ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９Ａ）またはキメラ抗−ＩＬ−６抗体を１０μｇ／ｍｌ添加するとｓｔａｔ３燐酸化が完全に抑制された（図５Ｂ）。図５Ａは、いろいろなヒト改変抗−ＩＬ−６クローンに相当するあらゆるサンプル中に存在する燐酸化されていないｓｔａｔ３蛋白質の量が同様であることを示している。本明細書で用いる如きＣＮＴＯ３２８（または３２８）はキメラ、ヒト−マウス抗体［また野生型（ＷＴ）とも呼ぶ］を表し、１５０はクローンＡＭＥ−２２ａを表し、１４３はクローンＡＭＥ−２３ａを表し、１４０はクローンＡＭＥ−２０ｂを表し、１３６はクローンＡＭＥ−１９ａを表し、１３０はクローンＡＭＥ−１８ａを表し、１０６はクローンＡＭＥ−Ａ１６を表し、１０４はクローンＡＭＥ−Ａ９を表す。
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がインビボで示す効力
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体が示す効力を異なる２種類のインビボモデルで評価した。１番目として、ヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体が示す効果をマウスを用いたヒトＩＬ−６誘発マトリゲル血管形成検定で試験して比較した。２００ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−６をマトリゲルプラグに入れた。２個のマトリゲルプラグを各ヌードマウスに注入した。マウスが６匹のグループにヒト改変もしくはキメラ抗−ＩＬ−６抗体を１、３または６ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．注射することで与えた。また、対照グループにはＰＢＳまたはアイソタイプ対照ｍＡｂを投与した。プラグを７日目に取り出した後、そのプラグ中のヘモグロビン含有量、微小血管の長さおよび微小血管の数を用いて血管形成を測定した。マトリゲルプラグモデルを用いて３パラメーター全部で測定した時の結果はヒトＩＬ−６（ＰＢＳグループ）が血管形成を刺激することを示していた。
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９Ａ）はマトリゲルプラグ中の微小血管平均数を抑制する。加うるに、ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９Ａ）はマトリゲルプラグ中の微小血管の平均長も抑制する。また、ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９Ａ）はマトリゲルプラグ中のヘモグロビン濃度も抑制する。
加うるに、ヒト改変（ＡＭＥ−１９Ａ）およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体は両方ともヌードマウスにおけるＩＬ−６媒介血管形成を依存様式で抑制した。最後に、ヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体が試験を実施した最も高い用量である６ｍｇ／ｋｇの時にＩＬ−６誘発血管形成で示した活性は匹敵していた。キメラ抗−ＩＬ−６抗体は３ｍｇ／ｋｇの時に血管長および血管数で測定してヒトＩＬ−６誘発血管形成を有意に抑制したが、そのような用量の時には、ヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体の間に検出された差は統計学的に有意ではなかった。
ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がヒトＩＬ−６誘発急性期反応物質である血清アミロイド蛋白質Ａ（ＳＡＡ）の産生に対して示す効果を更に評価する目的でＢａｌｂ／Ｃマウスを用いた追加的インビボモデルを開発した。マウスにヒトＩＬ−６を５μｇ／ｋｇの量でｉ．ｖ．投与する４時間前にヒト改変抗−ＩＬ−６抗体を０．０１、０．５また５ｍｇ／ｋｇの量でｉ．ｐ．投与することで与えた（図６）。ＰＢＳおよびアイソタイプ対照ｍＡｂを対照として用いた。ＩＬ−６を注入してから１６時間後に血清中ＳＡＡ濃度を測定した。ヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体は両方ともがＢａｌｂ／ＣマウスにおけるヒトＩＬ−６誘発ＳＡＡ産生を０．５および５ｍｇ／ｋｇの時に有意に抑制し、かつヒト改変抗−ＩＬ−６抗体は最も低い試験用量の時にもＳＡＡ産生を有意に抑制した。しかしながら、この試験した３用量全部においてヒト改変およびキメラ抗−ＩＬ−６抗体の間に観察した差は統計学的に有意ではなかった（図６）。
図６は、ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体がヒトＩＬ−６誘発ＳＡＡ産生を抑制することを示している。各点は、各動物毎の平均ＳＡＡ値を示し、そして線は各グループの中のあらゆ
るデータ点の平均を示している。対様式の比較を実施し、そしてＴｕｋｅｙの９５％同時信頼間隔を用いて全体的第１種の過誤を制御した（＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５）。
抗−ＩＬ−６ ｍＡｂに関する治療原理
関節リウマチ。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂがコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）に対して示す効果−関節リウマチの動物モデル
臨床前インビボ病気モデル
いろいろなインビボモデルでＩＬ−６を標的にした。ラット抗−マウスＩＬ−６抗体を標準的マウスモデルで用いるか或はヒト化抗−ＩＬ−６Ｒ（８０ｋＤａ）ｍＡｂ（ＭＲＡ；Ｃｈｕｇａｉ）を霊長類モデルおよびヒト／マウスＳＣＩＤモデルで用いた。マウスコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）において、抗−ＩＬ−６を後期時間点ではない早期（コラーゲンで免疫性を与えてから０または３日後）に用いると病気の予防に有効であった。ヒト滑膜組織を免疫不全マウスに移植したヒト／マウスＳＣＩＤ移植モデルでは、ＭＲＡの処置によって組織移植片が収縮しかつ炎症性細胞および破骨細胞が減少した。カニクイザルにおけるＣＩＡでは、ＭＲＡが関節炎の発症を抑制しかつ急性期測定値を改善した。
代理抗−マウスＩＬ−６ ｍＡｂが病気の発症に対して示す効果をＣＩＡモデルで評価した。その結果は、病気誘発前に抗−マウスＩＬ−６を１ｍｇ／マウス／週でｉ．ｐ．投与すると病気のひどさが顕著に軽減することで示されるようにコラーゲン誘発関節炎の発症が有意に抑制されたことを示している。１００μｇのウシＩＩ型コラーゲンをフロインド完全アジュバント（ＦＣＡ）に入れて８週齢のＤＢＡ／１ ＬａｃＪマウスの尾の基部に皮内注入することで関節炎を誘発した。マウスを病気の発症に関して毎日臨床的に監視した。ＣＩＡを誘発する２日前に抗−ＩＬ−６ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂを１ｍｇ／マウスの量でｉ．ｐ．投与した後、毎週投与した。関節の膨れ、紅斑および変形を基にして関節炎スコアを決定した。
組織病理学データを用いて、抗−マウスＩＬ−６ ｍＡｂを毎週ｉ．ｐ．注入するとコラーゲン誘発関節炎のパラメーターが有意に向上すると言った臨床的観察を立証した。マウスを抗−マウスＩＬ−６で処置すると、対照ｍＡｂで処置した動物に比べて、検査した関節炎パラメーター［炎症反応（滑膜炎およびパンヌス形成）および侵食性変化（侵食および全体的関節構造）を包含］の全部が有意に改善した。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂは組織病理学的レベルで関節炎を抑制した。滑膜炎のスコアを滑膜の厚みを基にして付け、パンヌス形成のスコアを関節空間に対するパンヌスの度合を基にして付け、そして侵食のスコアを軟骨および軟骨下骨への侵食度合を基にして付けた。
マウスを抗−マウスＩＬ−６ ｍＡｂで処置すると軟骨マトリクス蛋白質損失の度合が有意に低下した。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物および対照から試験終了（５３日）時に得た代表的な関節部分をトルイジンブルー染色で軟骨マトリクスに関して検査した。
ミクロ−ＣＴ分析により、抗−マウスＩＬ−６治療の効果が個々の関節の中の病気進行のレベルで現れると言った臨床的観察が裏付けされた。典型的な３Ｄ ＣＴ画像を目で検査した結果、抗−マウスＩＬ−６で処置した動物から得た関節で起こっていた軟組織炎症変化は主に穏やかであることに対比してアイソタイプ対照ｍＡｂで処置したグループでは侵食変化の度合が顕著であることが分かる。これらの実験を対照ｍＡｂで処置した代表的な動物および抗−マウスＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物に関して実施した。
ループス。抗−ＩＬ−６がＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスで示す効果
臨床前インビボ病気モデル
ＳＬＥ用のマウスモデルが存在し、それらはヒト病気と非常に類似している。ＭＲＬ／ｌｐｒおよびＮＺＢ／Ｗ Ｆ１株を用いた試験でＢ細胞の過剰増殖、自己抗体の産生および免疫複合体の沈着がヒトの病気に非常に類似していることを立証した。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂはＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおける自己抗体産生の抑制、タンパク尿の減少および動物生存率の改善に効果があることが分かった。
代理抗−マウスＩＬ−６ ｍＡｂがループス病発症に対して示す効果をＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスを用いて評価した。予備結果は、抗−マウスＩＬ−６ ｍＡｂを１ｍｇ／マウス／週の量で２２週に渡ってｉ．ｐ．投与すると抗−ｄｓＤＮＡ自己抗体、即ちこの病気モデルにおける主要な病原性自己抗体の産生が抑制させることを示していた（図７）。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物の場合の抗−ｄｓＤＮＡ自己抗体濃度は食塩水で処置した動物および対照Ａｂで処置した動物の場合のそれに比べて試験全体に渡って一定して低かった。
この上で考察したように、図７は、ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおける抗−ｄｓＤＮＡ自己抗体の産生を抗−ＩＬ−６ ｍＡｂが抑制することを示している。各サンプル毎の個々のＯ．Ｄ．値を正対照血清に対して正規化し、それを正対照に対する％として示した。各点は各サンプルが正対照に対して示した％を示しており、そして線は、各グループにおけるデータ点全部の平均を示している。差は＊ｐ＜０．０１として示されるように有意である。
加うるに、小さなサブセットの動物に試験を受けさせた時、抗−ＩＬ−６ ｍＡｂはＢ細胞の増殖も抑制しかつ腎臓障害も軽減した。試験終了時におけるＴ細胞増殖にはいろいろな処置群の間に有意な差は存在していなかったが、抗−ＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物では、食塩水で処置したマウスのそれに比べて、抗−ＩｇＧおよび抗−ＣＤ４０で誘発させたＢ細胞増殖が経時的、具体的には３４週後に低くなった。このような結果は、この上に報告したように抗−ｄｓＤＮＡ自己抗体の産生が減少することと一致しており、自己反応性Ｂ細胞が抗−ＩＬ−６ ｍＡｂ処置の主要な直接的標的になる可能性があることを示唆している。
組織病理学的分析により、この試験を受けさせた動物を３つの腎疾患ひどさグループ（穏やか、中程度およびひどい）に分類分けすることができることが分かった（表９）。ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおける腎疾患病理学は、糸球体基底膜の中に混合型リンパ過形成と免疫複合体沈着が存在することを示している。
抗−ＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物では、ひどい腎疾患を発症する度合が低かった。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物には血管周囲の混合型リンパ過形成と蛋白質沈着が存在しなかったが、食塩水で処置した動物および対照Ａｂで処置した動物では、抹消血管周囲の混合型リンパ過形成と蛋白質沈着が中程度およびひどく生じた。その上、糸球体基底膜の中で起こる免疫複合体の沈着も抗−ＩＬ−６ ｍＡｂで処置した動物の方が他の２処置グループが示したそれよりも穏やかであった。抗−ＩＬ−６ ｍＡｂがＢ、Ｔおよびマクロファージ細胞の機能に対して示す作用の機構のさらなる詳細な分析を実施した、と言うのは、そのような細胞はＳＬＥの病因で重要な役割を果たすからである。
２型糖尿病
ＩＬ−６は肥満に関連したインスリン耐性の発症で重要な役割を果たすことが示されている。しかしながら、今日までに得られたインビトロおよびインビボデータは、それがインスリン耐性である役割を果たす可能性の裏付けおよび否定の両方である。
インビトロ実験
ＩＬ−６がインスリンシグナル伝達およびインスリンの生物学的効果および機能、例えば糖吸収、遺伝子調節および関連機構などに対して果たしている可能性のある効果をより良好に理解するための実験をインスリン反応性組織のインビトロモデル（脂肪組織に関しては３Ｔ３ Ｌ１細胞、肝細胞に関してはＨｅｐＧ２細胞、骨格筋に関してはＣ２Ｃ１２細胞）およびインスリン耐性およびＴ２ＤＭのインビボモデル、例えばｄｂ／ｄｂマウスなどを用いて実施した。
インビトロデータは、ＩＬ−６が肝臓におけるインスリンシグナル伝達に対して主要な効果を及ぼすことを示唆している。ＨｅｐＧ２細胞をＩＬ−６で処置するとインスリン誘発Ａｋｔ燐酸化が抑制される。このようにＩＬ−６がインスリンシグナル伝達に対して示す阻害効果は抗−ＩＬ−６抗体によって遮断される。肝臓における糖代謝およびインスリン効果が変化することがインスリン耐性およびＴ２Ｄの発症を推進する原因であると思われる。ＩＬ−６が３Ｔ３ Ｌ１細胞（脂肪細胞株）およびＣ２Ｃ１２（骨格筋細胞株）におけるインスリンシグナル伝達に対して示す効果を測定することでＩＬ−６がＴ２Ｄで示す機構を確認する。
３Ｔ３ Ｌ１
３Ｔ３ Ｌ１マウス脂肪細胞株を用いて実験を実施した。９０％分化した３Ｔ３ Ｌ１細胞を用いて、ＩＬ−６がインスリン誘発糖吸収に対して示す効果を評価した。この実験において、ＴＮＦαを１０ｎｇ／ｍｌ用いた処置を２４時間行うとインスリン誘発糖吸収が一定して抑制される一方、ＩＬ−６を２０ｎｇ／ｍｌ用いても全く影響がなかった。このようなデータは、ＩＬ−６が脂肪組織に対して示す活性は主にＩＬ−６媒介インスリン耐性機構ではなく、むしろ、脂肪組織がＩＬ−６の主要源である可能性があり、それが次に肝臓および筋肉におけるインスリン感受性を妨害していることを示唆している。皮下沈着物に由来する分化した初代ヒト脂肪細胞を用いることでも同じデータが得られた。内蔵脂肪沈着物に由来するヒト初代脂肪細胞を用いてＩＬ−６が糖吸収に対して示す効果を試験した、と言うのは、そのような沈着物はインスリン耐性に関連した肥満に対してより高い関連を示す可能性があるからである。
ＨｅｐＧ２
肝臓組織のインビトロ代表例としてＨｅｐＧ２細胞を選択した。ＨｅｐＧ２細胞はヒトヘパトーマ細胞株であり、この細胞株を用いることでＩＬ−６がインスリンシグナル伝達に対して効果があることが以前に分かっていた。この実験では、ＩＬ−６を２０ｎｇ／ｍｌ用いるとインスリン誘発Ａｋｔ燐酸化、インスリンシグナル伝達経路における重要なキナーゼが阻害され、６０分間のインキュベーション後に最大の効果が観察され、このことは、科学文献に報告された結果と一致している。
ｒｈ ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ）を３０、６０、９０および１２０分間インキュベーションした後に、１０ｃｍの皿に入っている密集未満のＨｅｐＧ２細胞を用いてＡｋｔ燐酸化を測定した。最後の５分間のインキュベーション中にインスリンを０．５ｎＭ、１ｎＭおよび５ｎＭ添加することでＡｋｔ燐酸化を誘発した。修飾ＲＩＰＡ溶解用緩衝液を用いて細胞を溶解させた後、Ｓｅｒ−Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ ＥＬＩＳＡを用いてＡｋｔ燐酸化を測定した。ｐＡｋｔおよびＡｋｔ ＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）を用いて結果を得た。ＩＬ−６を用いた処置を生理学的濃度（０．５−１ｎＭ）のインスリンの存在下で６０分間実施すると、Ａｋｔ燐酸化が対照グループに比較して〜５０％抑制された。Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ蛋白質検定キットを用いて蛋白質の濃度を量化した。
ＩＬ−６抗体の効果
ＩＬ−６がインスリン誘発Ａｋｔ燐酸化に対して示す影響をヒト改変抗−ＩＬ−６抗体
が抑制する能力を測定した。ヒト改変抗−ＩＬ−６抗体を２０μｇ／ｍｌ用いるとＨｅｐＧ２細胞におけるＩＬ−６の影響が抑制され得る。図８Ａおよび８Ｂに、ＩＬ−６がヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の存在有り無しでインスリン誘発Ａｋｔ燐酸化に対して示した影響を示す。
上部の画像（図８Ａ）におけるデータは平均±ＳＥＭを示す［＊（＋）インスリン、ＩＬ−６と比較した有意さ、Ｐ＝０．０２９；＊＊（＋）インスリン＋ＩＬ−６と比較した有意さ、Ｐ＝０．０２］。密集未満のＨｅｐＧ２細胞を２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６で６０分間処置した。最後の５分間の処置中にインスリンを１ｎＭ添加しそして修飾ＲＩＰＡ緩衝液を用いて細胞を溶解させた。サンプルをＥＬＩＳＡで分析した結果、ＡｋｔのＳｅｒ
４７３の所に燐酸化が検出された。あらゆるデータをＥＬＩＳＡで測定した全Ａｋｔに対して正規化した。ＡＭＥ−１９ａによる処置によって正常なＡｋｔシグナル伝達を回復させることができた。
下部の画像（図８Ｂ）に代表的なウエスタンブロットを示す。上部の帯には、ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ、６０分、１ｎＭのインスリンを用いて５分間）、ＡＭＥ−１９ａ（２０ｕｇ／ｍｌ±２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６で６０分間、１ｎＭのインスリンを用いて５分間）または緩衝液を用いて処置したサンプルが含まれている。ブロットを抗−ホスホＳｅｒ／Ａｋｔ抗体（上方のパネル）（ｐＳ４７３、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）で検査した。下方の帯（同じブロットにストリッピングを受けさせた後、ＢｉｏＳｏｕｒｃｅの抗−Ａｋｔを用いて再び検査した）は、レーン毎に相当する蛋白質が充填されたことを示している。
方法：
ＨＥＰＧ２細胞を１００ｍｍの組織培養皿の中で密集するまで増殖させた。細胞をＤＭＥＭ−１％ＢＳＡに入れて一晩絶食状態にした。ＡＭＥ−１９ａ（２０ｕｇ／ｍｌ）を細胞上でＩＬ−６添加に先立って〜３０分間インキュベートした。ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ）±ＡＭＥ−１９ａ（２０ｕｇ／ｍｌ）を細胞に添加する前に〜３０分間インキュベートした。サンプルを細胞上で３７℃において６０分間インキュベートした後、細胞に１ｎＭのインスリン（最終濃度）を加えて室温に５分間置いた。細胞を直ちに氷冷ＰＢＳで３回濯ぐことで洗浄した。プレートを溶解まで凍結させておいた。ＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｓｉｇｍａ）を用いてホスホＡｋｔおよび全Ａｋｔを測定した。文献：ＪＪ Ｓｅｎｎ、ＰＪ Ｋｏｖｅｒ、ＩＡ ＮｏｗａｋおよびＲＡ Ｍｏｏｎｅｙ。インターロイキン６は肝細胞における細胞インスリン耐性を誘発する。Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５１：３３９１−３３９９、２００２。
初代ラット肝細胞
初代肝細胞は、ＩＬ−６および抗−ＩＬ−６抗体（または他のＩＬ−６アンタゴニスト）がインスリンシグナル伝達に対して示す効果およびインスリンが肝臓糖産生に対して示す効果を試験する時に用いるに適したより関連のあるインビトロシステムに相当する。インスリン、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６ ｍＡｂで処置したラット肝細胞におけるＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）活性化を測定する目的で単離細胞にインスリンによる処置を５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６の存在有り無しで受けさせた後、ＥＬＩＳＡ検定およびウエスタンブロット分析を用いて、インスリン受容体であるＩＲＳ−１（図１２Ａ）およびＡｋｔ（図１２Ｂ）の燐酸化を測定した。加うるに、ＩＬ−６がインスリン刺激ＩＲＳ１／ｐ８５結合に対して示す効果も検査した（図１１ＡおよびＢ）。これらの実験を下記の如く実施した。
初代ラット肝細胞（〜２カ月齢）をコラーゲンで被覆しておいた６穴プレートに入れ、Ｈｅｐａｔｏｃｚｙｍｅ培地の中で一晩かけて平衡状態にした。次の日、細胞をＤＭＥＭ−１％ＢＳＡ−ｐｅｎｎ ｓｔｒｅｐに入れて６時間絶食状態にした後、ｈＩＬ−６（５
ｎｇ／ｍｌ）、抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９ａ）（２０ｎｇ／ｍｌ）または抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９ａ）＋ｈＩＬ−６と一緒にして３７℃で９０分間インキュベートした。その組み合わせを添加するに先立って予め細胞を抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９ａ）で１時間処置しておいた。また、その組み合わせを細胞に添加する前にも予備インキュベーションを実施した。５ｎＭのインスリン（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅの）を細胞に加えて５分間置いた後、細胞を吸引で取り出し、そして直ちにＢｉｏＳｏｕｒｃｅ抽出用緩衝液＋蛋白分解酵素阻害剤を用いて溶解させた。溶解物を遠心分離にかけた後、その上澄み液を１：１０に希釈しそしてＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅの）で試験した。
ＩＲＳ１／ｐ８５関連：
等しい量の蛋白質（４５μｇ）を２μｇの抗−ＩＲＳ−１ポリクローナル抗体（Ｕｐｓｔａｔｅの品目＃０６−２４８）と一緒に一晩インキュベートした。次に、そのサンプルに蛋白質Ａビードを用いた免疫沈澱を１時間受けさせた後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ用３ｘサンプル緩衝液で溶離させた。次に、そのＩＰサンプルを４−１２％のＳＤＳ−Ｐａｇｅゲルの上に置いて流した後、ウエスタンブロット分析用の膜に移した。その膜を（１）ＩＲＳ−１関連ｐ８５、即ち活性ＰＩ３Ｋに関しては希釈率が１：１００のｐ８５ ｍＡｂ（Ｕｐｓｔａｔｅの品目＃０５−２１７）（図１１Ａに示す如く）および（２）充填対照としての全ＩＲＳ−１に関しては希釈率が１：６００のＩＲＳ−１ ｍＡｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓの品目＃６１１３９５）を用いて検査した（図１１Ｂに示す如く）。
このデータは、ＩＬ−６で処置するとＩＲ、ＩＲＳ−１およびＡｋｔのインスリン誘発燐酸化の度合が低下することを示している。細胞を抗−ＩＬ−６抗体（クローンＡＭＥ−１９ａ）で前以て処置しておくとそのようなＩＬ−６の効果が無効になった。加うるに、ＩＬ−６はインスリンに誘発されるｐ８５（ＰＩ３Ｋのサブユニット）とＩＲＳ−１の関連を抑制した。再び、抗−ＩＬ−６抗体で前以て処置しておくとそのようなＩＬ−６の効果が抑制された。
インビボ実験
ＩＬ−６がインスリン感受性に対して示す効果を動物で広範に試験することは成されていなかった。抗−ＩＬ−６治療によってインスリン感受性およびＴ２ＤＭが改善するか否かを評価する目的で、脂肪量が多い餌を与えておいたｄｂ／ｄｂマウスおよびＣ５７／Ｂ１６のオスを市販の抗−マウスＩＬ−６抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから得た）で処置した。
ｄｂ／ｄｂマウス
抗ＩＬ−６処置の効果をいろいろな年齢のｄｂ／ｄｂマウスを用いて試験した。年齢が８−１０週の範囲のマウスは高インスリン血およびインスリン耐性で特徴づけられ、従って、病気の早期段階に相当する一方、年齢が１２−１４週のマウスは高インスリン血に加えて血糖値が高いことで特徴づけられ、従って、Ｔ２ＤＭの段階が進行したことに相当していた。両方の年齢グループのマウスを腹腔内耐糖能試験（ｉｐＧＴＴ）で用いることで、抗−ＩＬ−６治療によってインスリン感受性および血糖コントロールが改善される可能性を試験した。
ｄｂ／ｄｂマウスは、レプチン受容体内に変異を有することでレプチンシグナル伝達の機能を持たない。そのようなマウスはマウスの年齢に伴って肥満、高インスリン血およびインスリン耐性を発症し、そのマウスが６−８週齢になった時点で最初の症状が検出される。８および１２週齢の年齢がいろいろなマウスの２グループに抗ＩＬ−６ ｍＡｂを５ｍｇ／ｋｇを用いた処置を受けさせた後、処置してから１日目および７日目に腹腔内耐糖能試験（ｉｐＧＴＴ）を実施した。処置計画を図１５に示す。
８週齢の動物では、ＧＴＴ中に抗ＩＬ−６ ｍＡｂで処置しても糖クリアランスに対して効果がなかった。抗ＩＬ−６ ｍＡｂで処置すると１２週齢の動物では耐糖能（ＧＴ）の改善がもたらされたが、その効果は統計学的には有意でなかった（ｐ＝０．０６３）。そのようなＧＴＴの改善は処置してから７日目に見られた。加うるに、試験を完了する前および完了した後の血清サンプルにアジポカインおよびアジポネクチンプロファイルに関する分析を受けさせた。ＩＬ−６、ＴＮＦαおよびＭＣＰ−１の濃度は検出濃度未満であった。このデータをｉｐＧＴＴで得た結果と一緒にすることで下記が示唆され得る：ｄｂ／ｄｂ動物は抗ＩＬ−６がインスリン耐性に対して示す効果を試験する時の良好なモデルではないこと、そして組織中のＩＬ−６濃度の方がＩＬ−６がインスリン耐性およびＴ２ＤＭの発症で果たす可能性のある役割により関係があること。
食餌誘発肥満（ＤＩＯ）−肥満およびインスリン耐性の動物モデル
Ｃ５７／Ｂ１オスマウスに脂肪含有量が６０％の食餌を２０−３５週間与えた。それらは肥満を発症し（平均体重は５０．５グラムであった）そして空腹時血糖値が高くなった（ＦＢＧ＞１４５ｍｇ／ｄｌ）。加うるに、それらはＧＴが悪化した。ＤＩＯ動物にマウス抗−ＩＬ−６ Ａｂ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を１０ｍｇ／ｋｇ用いた処置を受けさせた。全体として、それらに５０ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−６ ｍＡｂを３週間に渡って与えた。最初の２回の投与後（５日目）、４回目の投与後（１２日および１６日目）および５回目の投与後（２３日目）にｉｐＧＴＴを実施した。それと同時に、血液を採取してアジポサイトカインおよびアジポネクチンの測定を実施した。
抗ＩＬ−６で処置しても５日目および１２日目の耐糖能は向上しなかったが、しかしながら、１６日および２３日目に実施すると、糖クリアランスが改善されるばかりでなく糖エクスカーションの度合が改善されることを観察した。このような改善はＧＴＴ中の３９、６０および９０分の時に統計学的有意さに到達した。
別の組の実験として、ＤＩＯ動物に１０および２０ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−６ Ａｂおよび２０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧアイソタイプ対照を用いた処置をｉ．ｐ経路で毎週受けさせた（１番目の週の間に２回投与しそして次の４週の間に毎週１回投与）。ＨＯＭＡ−ＩＲ（２、４および６週間の処置後）、ｉｐＧＴＴ、ｉｐＩＴＴおよびアジポカインプロファイル（６週間処置時）を実施した。
抗−ＩＬ−６ Ａｂで処置したＤＩＯ動物に関するＨＯＭＡ−ＩＲ分析
この検定では、ＤＩＯ動物を１０および２０ｍｇ／ｋｇのマウス抗−ＩＬ−６ Ａｂおよびアイソタイプ対照で処置すると空腹時血糖値およびインスリン濃度が低くなった。動物の採血を実施した後、Ｔｒａｃｅ／ＤＭＡグルコース（ｏｘ）（ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐ）およびＵｌｔｒａ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｒａｔ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｅｌｉｓａ（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ）を用いてそれぞれ空腹時血糖値およびインスリン濃度を測定した。それらの値を用いてＨＯＭＡ−ＩＲを決定した。ＨＯＭＡ−ＩＲ指数は、インスリン感受性の状態を示し、これはクランプ検定（ｃｌａｍｐ ｓｔｕｄｙ）で確認したことと良好に相互に関係している。ＨＯＭＡ−ＩＲの計算を式：（空腹時血糖値（ｍＭ）ｘ空腹時インスリン（ｍＩＵ／Ｌｉｔ）／２２．５を用いて実施した（図１３Ａ、ＢおよびＣ）。
処置して２、４および６週間後にＨＯＭＡ−ＩＲの改善を観察した（図１３Ａ−Ｃに６週間処置後のデータを示す）。検定終了時にｉｐＧＴＴおよびｉｐＩＴＴを実施した。両方の試験とも、抗−ＩＬ−６処置（２０ｍｇ／ｍｌ）を実施するとアイソタイプで処置した動物に比べて糖エクスカーションおよびクリアランスの両方が有意に改善された。
対照および抗−ＩＬ−６処置動物から採取した血清サンプルのアジポカインおよびサイ
トカインを分析した結果、ＩＬ−６中和によって循環しているＩＬ−６およびＴＮＦａ濃度が減少することに加えてＭＣＰ−１およびレシスチン濃度が減少する傾向があることが分かった。別の組のデータとして、抗−ＩＬ−６の処置に伴ってアジポネクチン濃度が高くなった。
処置グループおよび対照グループから得た肝臓サンプルの組織学的分析を実施した。これらのサンプルにＯｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色による染色を受けさせることで肝実質の中の脂質含有量を測定した。マウス抗−ＩＬ−６抗体による処置に反応してＤＩＯ動物の肝臓脂質含有量が低下した。
染色により、媒体で処置した肝臓サンプルの中の３４％は未処置動物に関連した脂質でありかつ２０ｍｇ／ｋｇの抗−ＩＬ−６で処置した動物では８％のみであることが分かる（図１４Ａ−Ｆ）。図１４ＡおよびＤに対照グループを示し、図１４ＢおよびＥに未処置ＤＩＯ動物を示し、そして図１４ＣおよびＦに抗−ＩＬ−６処置動物を示す。肝臓の脂質含有量が増加したことはインスリン耐性および２型糖尿病の発症と関連していた。従って、ＩＬ−６の中和によって肝臓脂質の代謝が影響を受けることでインスリン感受性およびＴ２ＤＭが改善すると思われる。これらのデータが一緒になってＩＬ−６は２型糖尿病の病因で役割を果たしていることとＩＬ−６の中和によってインスリン感受性が改善する可能性があることを強力に示唆している。
追加的研究
ＩＬ−６がヒト改変抗−ＩＬ−６抗体の存在有り無しでインスリン刺激ＩＲＳ１燐酸化、ｐ８５／Ｐ１３Ｋとの関連、インスリン受容体（ＩＲ）燐酸化、グリコーゲン合成およびＨｅｐＧ２細胞におけるＳＯＣＳ３およびＳＴＡＴシグナル伝達の改善に対して示す影響を監視する。追加的実験でＩＬ−６が膵島による糖誘発インスリン分泌に対して示す影響を検査した。今日までに公開されたデータには、ＩＬ−６がラット膵島によるインスリン分泌に対して阻害ばかりでなく刺激効果の両方を示すことが記述されている。新しく単離したラット膵島（Ｌｉｅｆｓｃａｎｎの）にＩＬ−６およびヒト改変抗−ＩＬ−６抗体（ＡＭＥ−１９ａ）による処置を糖の存在有り無しで受けさせる。膵島から分泌されるインスリンの濃度をいろいろな処置下で測定する。
Ｃ２Ｃ１２
インスリンが骨格筋に対して示す影響を試験する目的でＣ２Ｃ１２細胞を用いる。ＩＲＳ１およびＧｌｕｔ４発現、インスリン誘発ＩＲＳ１燐酸化およびＩＬ−６がアジポネクチン作用に対して示す影響を検査する実験を実施する。
利点：
本発明のＩＬ−６抗体を用いてＩＬ−６の活性を抑制することは有意な治療的進展に相当し得る、と言うのは、それによってインスリン感受性および代謝制御を現存薬剤の副作用無しに改善することができるからである。加うるに、現在の治療を用いてＴ２ＤＭに関連して糖尿病合併症の基礎となる原因であると考えられている全身性炎症を制御するのはほとんど不可能である。本発明のＩＬ−６抗体の如き治療薬は、インスリン感受性を向上させることに加えて、全身性炎症を抑制しかつ糖尿病合併症の発症を防止すると期待する。
Ｔ２ＤＭにかかっている患者の数が増えており、２０２５年までに３００百万人になると推定されている。抗ＩＬ−６抗体は単治療薬としてか或は既に現存する他のＯＡＤ、例えばスルホニル尿素、ビグアニド（例えばＭｅｔｐｈｏｒｍｉｎ）、チアゾリジンジオン、メグリチニド（例えばレパグリニド）、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤（例えばアカルボース）などと組み合わせて使用可能である。加うるに、それをインスリンもしくは他
の治療薬、例えばインスリン感受性および血糖コントロールを向上させかつインスリン処置に関連した低血糖イベントを回避する治療薬などと組み合わせて用いることも可能である。また、抗−ＩＬ−６治療薬はインスリン感受性およびＴ２Ｄおよびメタボリック症候群患者における血糖値調節を改善することに加えてそのような患者にしばしば観察されるＣＶ変化に対して有益な効果を与えるであろうとも期待する。Ｓａｌｔｉｅｌ，ＡＲ，およびＫａｈｎ，ＣＲ．２００１．Ｎａｔｕｒｅ ４１４：７９９−８０６；Ｈａｎｓｅｎ，ＢＣ．，１９９５．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ １８：Ａ２−Ａ９；Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ 研究グループ．２００２．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ Ｍｅｄ．，３４６：３９３−４０３；Ｈａｎｓｅｎ，ＢＣ．，２０００，Ａｎｎ
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ，８９２：１−２４；Ｈｓｕｅｈ．ＷＡ．，ａｎｄ Ｑｕｉｎｏｎｅｓ，ＭＪ．，２００３，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，９３：１０Ｊ−１７Ｊ；Ｒｅｓｎｉｃｋ，ＨＥおよびＨｏｗａｒｄ，ＢＶ．，２００２，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，５３：２４５−２６７；Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ．ａｎｄ Ａｒｏｎｎｅ，Ｌ．，２００３，Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１１１（５）：５６５−５７０；Ｓｋｏｏｇ，Ｔ．，他、２００１．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，４４：６５４：６５５；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｅａｌ，ＪＭ．，およびＲｉｃａｒｔ Ｗ．，２００３，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２４（３）：２７８−３０１；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｅａｌ，ＪＭ．，他、２００１，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
Ｍｅｔａｂ．，８６：１１５４−１１５９；１０ａ．Ｆｒｉｅｄ，Ｓ．，他、１９９８．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．，８３：８４７−８５０；Ｓｅｎｎ，ＪＪ．，他、２００２，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５１：３３９１−３３９９；Ｒｏｔｔｅｒ，Ｖ．，他、２００３，ＪＢＣ ｉｎ ｐｒｅｓｓ，Ｍａｎｕｓ．＃３０１９７７２００；１２ａ．Ｓｔｏｕｔｈａｒｄ，ＪＭ．，他、１９９６，ＢＢＲＣ，２２０：２４１−２４５；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，Ｃ．，他、１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．，２７２：２４３−２４５；Ｓａｎｄｌｅｒ，Ｓ．，他、１９９０，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２６：１２８８−１２９４；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，ＢＫ，他、２００１，Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，５３６：３２９−３３７；ＤｉＣｏｓｍｏ，ＢＦ，他、１９９４，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６：１８２９−１８３７；Ｗａｌｌｅｎｉｕｓ，Ｖ．，他、２００２，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，８：７５−７９；Ｖｏｚａｒｏｖａ，Ｂ．，他、２００３，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ，１１２：４０９−４１３；Ｋｕｂａｓｚｅｋ，Ａ．，他，２００３，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５２：５５８−４６１；Ｔｓｉｇｏｓ，Ｃ．，他、１９９７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ，８２：４１６７−４１７０；Ｓｔｏｕｔｈａｒａｄ，ＪＭ．，他、１９９５，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６８；Ｅ８１３−Ｅ８１９；Ｋｅｒｎ，ＰＡ．，他、２００１，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．，２８０：Ｅ７４５−Ｅ７５１；Ｂａｓｔａｒｄ，ＪＰ．，他、２０００，Ｊ Ｃｌｏｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．，８５：３３３８−３３４２；およびＢａｓｔａｒｄ，ＪＰ．，他、２００２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８７：２０８４−２０８９を参照のこと。
本発明をこの上で行った説明および実施例に詳細に記述した様式とは別の様式で実施することも可能であることは明らかであろう。この上で行った教示に照らすことで本発明のいろいろな修飾形および変形が可能になり、従って、それらも添付請求の範囲内である。以下、本発明の主な態様および特徴を挙げておく。
態様１：配列識別番号：１３２−１３７から成る群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含んでおり、かつ、ヒトＩＬ−６またはこれのフラグメントと結合する単離ＩＬ−６抗体。
態様２：Ｘ１がＡまたはＧであり、Ｘ２がＳまたはＲであり、Ｘ３がＨ、Ｉ、ＳまたはＹであり、Ｘ４がＳまたはＹであり、Ｘ５がＳまたはＦであり、Ｘ６がＦ、Ｌ、ＭまたはＴであり、Ｘ７がＮまたはＥであり、Ｘ８がＡまたはＴであり、Ｘ９がＭ、Ｃ、ＳまたはＱであり、Ｘ１０がＱまたはＣであり、Ｘ１１がＴまたはＱであり、Ｘ１２がＦ、ＳまたはＴであり、Ｘ１３がＳまたはＰであり、Ｘ１４がＬまたはＭであり、Ｘ１５がＡまたはＩであり、Ｘ１６がＳまたはＰであり、Ｘ１７がＹまたはＷであり、Ｘ１８がＴ、ＥまたはＹであり、Ｘ１９がＹまたはＦであり、Ｘ２０がＰ、Ｓ、ＤまたはＹであり、Ｘ２１がＶまたはＤであり、Ｘ２２がＴまたはＡであり、Ｘ２３がＧまたはＰであり、Ｘ２４がＳ、Ｙ、ＴまたはＮであり、そしてＸ２５がＹ、Ｔ、ＦまたはＩである態様１記載の単離抗体。
態様３：少なくとも１つの相補性決定領域を含んでおり、かつ、ヒトＩＬ−６またはこれのフラグメントと結合する単離ヒト改変抗体。
態様４：配列識別番号：９５、９９、１０３、１１８、１２２、１２６および１３０から成る群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖可変領域および／または配列識別番号：９３、９７、１０１、１１６、１２０、１２４および１２８から成る群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様５：少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記軽鎖可変領域が下記：（ａ）配列識別番号：１、３、５、７、９、１１、１３および１５から成る群から選択される相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１７、１９、２１、２３、２５および２７から成る群から選択されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：２９、３１、３３、３５および１３８から成る群から選択されるＣ
ＤＲＬ３アミノ酸配列；
から成る群の少なくとも一員を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様６：少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記重鎖可変領域が下記：（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択される相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１および１１４から成る群から選択されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
から成る群の少なくとも一員を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様７：態様５記載の軽鎖可変領域および請求項６記載の重鎖可変領域を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８：更に前記少なくとも１つの相補性決定領域に隣接して位置する少なくとも１つのヒトフレームワーク領域も含んで成る態様７記載の単離ＩＬ−６抗体。
態様９：前記少なくとも１つのヒトフレームワーク領域が配列識別番号：１０５−１１２から選択される態様８記載の単離ＩＬ−６抗体。
態様１０：少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記軽鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：１、３、５、７、９、１１、１３および１５から成る群から選択される相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１７、１９、２１、２３、２５および２７から成る群から選択されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：２９、３１、３３、３５および１３８から成る群から選択されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様５記載の単離ＩＬ−６抗体。
態様１１：少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択される相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１および１１４から成る群から選択されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様６記載の単離ＩＬ−６抗体。
態様１２：態様１０記載の軽鎖可変領域および態様１１記載の重鎖可変領域を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様１３：更に配列識別番号：１０５のヒト軽鎖フレームワーク領域１（ＦＲＬ１）、配列識別番号：１０６のＦＲＬ２、配列識別番号：１０７のＦＲＬ３、配列識別番号：１０８のＦＲＬ４、配列識別番号：１０９のヒト重鎖フレームワーク領域１（ＦＲＨ１）、配列識別番号：１１０のＦＲＨ２、配列識別番号：１１１のＦＲＨ３および配列識別番号：１１２のＦＲＨ４も含んでおり、かつ、それらが前記相補性決定領域の間に散在している態様１２記載の単離ＩＬ−６抗体。
態様１４：前記軽鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：１、３、５、７、９、１１、１３および１５から成る群から選択されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１７、１９、２１、２３、２５および２７から成る群から選択されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：２９のＣＤＲＬ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様１５：前記軽鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：１、３、５、７、９、１１、１３および１５から成る群から選択されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１７、１９、２１、２３、２５および２７から成る群から選択されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：３５のＣＤＲＬ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様１６：更に配列識別番号：１０５のヒト軽鎖フレームワーク領域１（ＦＲＬ１）、配列識別番号：１０６のＦＲＬ２、配列識別番号：１０７のＦＲＬ３および配列識別番号：１０８のＦＲＬ４も含んで成っていてそれらがＣＤＲＬの間に散在している態様１４または１５記載の単離抗体。
態様１７：前記重鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：８７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様１８：前記重鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：８９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様１９：前記重鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：９１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２０：前記重鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：１１４のＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２１：更に配列識別番号：１０９のヒト重鎖フレームワーク領域１（ＦＲＨ１）、配列識別番号：１１０のＦＲＨ２、配列識別番号：１１１のＦＲＨ３および配列識別番号：１１２のＦＲＨ４も含んで成っていてそれらがＣＤＲＨの間に散在している態様１７−２０のいずれか記載の単離抗体。
態様２２：前記ＣＤＲＬ１が配列識別番号：７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ２が配列識別番号：２１のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ３が配列識別番号
：２９のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ１が配列識別番号：４１のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ２が配列識別番号：７５のアミノ酸配列を含んで成りそして前記ＣＤＲＨ３が配列識別番号：８７のアミノ酸配列を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２３：前記ＣＤＲＬ１が配列識別番号：３のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ２が配列識別番号：２１のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ３が配列識別番号：２９のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ１が配列識別番号：４１のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ２が配列識別番号：７５のアミノ酸配列を含んで成りそして前記ＣＤＲＨ３が配列識別番号：８９のアミノ酸配列を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２４：前記ＣＤＲＬ１が配列識別番号：１５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ２が配列識別番号：２７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ３が配列識別番号：３５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ１が配列識別番号：４７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ２が配列識別番号：６１のアミノ酸配列を含んで成りそして前記ＣＤＲＨ３が配列識別番号：９１のアミノ酸配列を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２５：前記ＣＤＲＬ１が配列識別番号：１５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ２が配列識別番号：２７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ３が配列識別番号：３５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ１が配列識別番号：４７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ２が配列識別番号：５７のアミノ酸配列を含んで成りそして前記ＣＤＲＨ３が配列識別番号：９１のアミノ酸配列を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２６：前記ＣＤＲＬ１が配列識別番号：１５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ２が配列識別番号：１７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ３が配列識別番号：２９のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ１が配列識別番号：４５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ２が配列識別番号：５９のアミノ酸配列を含んで成りそして前記ＣＤＲＨ３が配列識別番号：８９のアミノ酸配列を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２７：前記ＣＤＲＬ１が配列識別番号：７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ２が配列識別番号：１７のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＬ３が配列識別番号：２９のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ１が配列識別番号：４５のアミノ酸配列を含んで成り、前記ＣＤＲＨ２が配列識別番号：７７のアミノ酸配列を含んで成りそして前記ＣＤＲＨ３が配列識別番号：８７のアミノ酸配列を含んで成る態様１２記載の単離抗体。
態様２８：配列識別番号：３の相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、配列識別番号：２１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、配列識別番号：２９のＣＤＲＬ３アミノ酸配列、配列識別番号：３９の相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列識別番号：５９のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列識別番号：８９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様２９：少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記軽鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：１３２の相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１３３のＣＤＲＬ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：１３４から成る群から選択されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列；
を含んで成り、ここで、Ｘ１がＡまたはＧであり、Ｘ２がＳまたはＲであり、Ｘ３がＨ、Ｉ、ＳまたはＹであり、Ｘ４がＳまたはＹであり、Ｘ５がＳまたはＦであり、Ｘ６がＦ、Ｌ、ＭまたはＴであり、Ｘ７がＮまたはＥであり、Ｘ８がＡまたはＴであり、Ｘ９がＭ、Ｃ、ＳまたはＱでありそしてＸ１０がＱまたはＣである単離ＩＬ−６抗体。
態様３０：少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記重鎖可変領域が
（ａ）配列識別番号：１３５の相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１３６のＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：１３７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成り、ここで、Ｘ１１がＴまたはＱであり、Ｘ１２がＦ、ＳまたはＴであり、Ｘ１３がＳまたはＰであり、Ｘ１４がＬまたはＭであり、Ｘ１５がＡまたはＩであり、Ｘ１６がＳまたはＰであり、Ｘ１７がＹまたはＷであり、Ｘ１８がＴ、ＥまたはＹであり、Ｘ１９がＹまたはＦであり、Ｘ２０がＰ、Ｓ、ＤまたはＹであり、Ｘ２１がＶまたはＤであり、Ｘ２２がＴまたはＡであり、Ｘ２３がＧまたはＰであり、Ｘ２４がＳ、Ｙ、ＴまたはＮであり、そしてＸ２５がＹ、Ｔ、ＦまたはＩである単離ＩＬ−６抗体。
態様３１：態様２９記載の軽鎖可変領域および請求項３０記載の重鎖可変領域を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様３２：更に配列識別番号：１０５のヒト軽鎖フレームワーク領域１（ＦＲＬ１）、配列識別番号：１０６のＦＲＬ２、配列識別番号：１０７のＦＲＬ３、配列識別番号：１０８のＦＲＬ４、配列識別番号：１０９のヒト重鎖フレームワーク領域１（ＦＲＨ１）、配列識別番号：１１０のＦＲＨ２、配列識別番号：１１１のＦＲＨ３および配列識別番号：１１２のＦＲＨ４も含んで成っていてそれらが前記相補性決定領域の間に散在している態様２２−２８および３１のいずれか記載の単離ＩＬ−６抗体。
態様３３：少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記軽鎖可変領域が配列識別番号：１０５のヒト軽鎖フレームワーク領域１（ＦＲＬ１）、配列識別番号：１０６のＦＲＬ２、配列識別番号：１０７のＦＲＬ３および配列識別番号：１０８のＦＲＬ４および散在しているＣＤＲ領域を含んで成り、ここで、前記ＣＤＲ領域が
（ａ）配列識別番号：１、３、５、７、９、１１、１３および１５から成る群から選択されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：１７、１９、２１、２３、２５および２７から成る群から選択されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：２９、３１、３３、３５および１３８から成る群から選択されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列；
を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様３４：少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記重鎖可変領域が配列識別番号：１０９のヒト重鎖フレームワーク領域１（ＦＲＨ１）、配列識別番号：１１０のＦＲＨ２、配列識別番号：１１１のＦＲＨ３および配列識別番号：１１２のＦＲＨ４および散在しているＣＤＲ領域を含んで成り、ここで、前記ＣＤＲ領域が
（ａ）配列識別番号：３７、３９、４１、４３、４５および４７から成る群から選択されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列；
（ｂ）配列識別番号：４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７および１１３から成る群から選択されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列；および
（ｃ）配列識別番号：７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１および１１４から成る群から選択されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列；
を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様３５：態様３３記載の軽鎖可変領域および請求項３４記載の重鎖可変領域を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様３６：少なくとも１つの軽鎖可変領域および少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでおり、かつ、配列識別番号：９３および９５、配列識別番号：９７および９９、配列識別番号：１０１および１０３、配列識別番号：１１６および１１８、配列識別番号：１２０および１２２、配列識別番号：１２４および１２６および配列識別番号：１２８および１３０から成る群から選択される軽鎖および重鎖可変領域を含んで成る少なくとも１種の単離ＩＬ−６抗体と一緒に競合的にＩＬ−６と結合する単離ヒトもしくはヒト改変抗体。
態様３７：態様１２記載の単離ＩＬ−６抗体と一緒に競合的にＩＬ−６と結合する単離ヒトもしくはヒト改変抗体。
態様３８：配列識別番号：１１５のアミノ酸１６８−１８４を含んで成る領域と競合的にＩＬ−６と結合する単離ヒトもしくはヒト改変抗体。
態様３９：ヒト改変された態様３６−３８のいずれか記載の抗体。
態様４０：表面プラズモン共鳴またはＫｉｎｅｘａ方法を用いて測定した時に少なくとも１０−９Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも１０−１１Ｍおよび少なくとも１０−１２Ｍ、少なくとも１０−１３Ｍ、少なくとも１０−１４Ｍおよび少なくとも１０−１５Ｍから選択される少なくとも１種の親和力でＩＬ−６と結合する態様１−３９のいずれか記載のＩＬ−６抗体。
態様４１：少なくとも１種のＩＬ−６ポリペプチドが示す少なくとも１種の活性を実質的に調節する態様１−４０のいずれか記載のＩＬ−６抗体。
態様４２：態様１−４０いずれか記載の少なくとも１種の単離ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子。
態様４３：態様４２記載の単離核酸分子を含んで成る単離核酸ベクター。
態様４４：態様４２記載の単離核酸分子を含んで成る原核または真核宿主細胞。
態様４５：ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、Ｈｅｐ Ｇ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫またはリンパ種細胞、またはそれらの誘導体、不死化細胞もしくは形質転換細胞のいずれかから選択される少なくとも１種である態様４４記載の宿主細胞。
態様４６：少なくとも１種のＩＬ−６抗体の産生方法であって、態様４２記載の核酸分子による翻訳をインビトロ、インビボまたはインシトゥ条件下でＩＬ−６抗体が検出可能または回収可能量で発現するように起こさせることを含んで成る方法。
態様４７：態様１−４０いずれか記載の少なくとも１種の単離ＩＬ−６抗体および少なくとも１種の製薬学的に受け入れられる担体もしくは希釈剤を含んで成る組成物。
態様４８：更に検出可能標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心臓血管（ＣＶ）系作用薬、中枢神経系（ＣＮＳ）作用薬、自律神経系（ＡＮＳ）作用薬、呼吸器作用薬、胃腸（ＧＩ）管作用薬、ホルモン薬、体液もしくは電解質平衡用薬剤、血液製剤、抗癌薬、免疫修飾薬、眼、耳もしくは鼻用薬剤、局所用薬剤、栄養薬、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１種の化合物もしくはポリペプチドも含んで成る態様４７記載の組成物。
態様４９：態様１−４０いずれか記載の少なくとも１種の単離ＩＬ−６抗体と特異的に結合する抗イディオタイプ抗体もしくはフラグメント。
態様５０：細胞、組織、器官または動物におけるＩＬ−６関連状態を診断または処置する方法であって、態様１−４０いずれか記載の少なくとも１種の抗体を有効量で含んで成る組成物を前記細胞、組織、器官または動物に接触させるか或は投与することを含んで成る方法。
態様５１：前記ＩＬ−６関連状態が関節リウマチ、変形性関節症、骨溶解、整形外科用インプラントの無菌性緩み、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、２型糖尿病、慢性閉塞性肺疾患および腎細胞癌から成る群から選択される態様５０記載の方法。
態様５２：前記有効量が前記細胞、組織、器官または動物１キログラム当たり約０．００１−５０ｍｇである態様５０記載の方法。
態様５３：前記接触または前記投与を非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻内および経皮から選択した少なくとも１種の様式で実施する態様５０記載の方法。
態様５４：前記接触または投与を実施する前、同時または後に更に検出可能標識もしくはレポーター、抗感染薬、心臓血管（ＣＶ）系作用薬、中枢神経系（ＣＮＳ）作用薬、自律神経系（ＡＮＳ）作用薬、呼吸器作用薬、胃腸（ＧＩ）管作用薬、ホルモン薬、体液もしくは電解質平衡用薬剤、血液製剤、抗癌薬、免疫修飾薬、眼、耳もしくは鼻用薬剤、局所用薬剤、栄養薬、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストから選択した少なくとも１種の化合物もしくはポリペプチドを有効量で含んで成る少なくとも１種の組成物を投
与することも含んで成る態様５０記載の方法。
態様５５：態様１−４０のいずれか記載のＩＬ−６抗体を含んで成る医療機器であって、前記ＩＬ−６抗体を非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻内および経皮から選択した少なくとも１種の様式で接触させるか或は投与するに適する機器。
態様５６：ヒト製薬学的もしくは診断用途用の製品であって、態様１−４０のいずれか記載のＩＬ−６抗体の溶液または凍結乾燥形態物が入っている容器および包装用材料を含んで成る製品。
態様５７：前記容器が非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻内または経皮送達用の機器またはシステムの構成要素である態様５６記載の製品。
態様５８：態様１−４０のいずれか記載の単離ＩＬ−６抗体を製造する方法であって、前記抗体を回収可能量で発現し得る宿主細胞または遺伝子導入動物または遺伝子動物植物もしくは植物細胞を準備することを含んで成る方法。
態様５９：態様５８記載の方法を用いて生じさせたＩＬ−６抗体。
態様６０：ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記軽鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：２、４、６、８、１０、１２、１４および１６から成る群から選択される相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：１８、２０、２２、２４、２６および２８から成る群から選択されるＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：３０、３２、３４および３６から成る群から選択されるＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列；
から成る群の少なくとも一員を含んで成る単離核酸分子。
態様６１：ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、少なくとも１つの重鎖可変領域を含んで成っていて前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３８、４０、４２、４４、４６および４８から成る群から選択される相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６および７８から成る群から選択されるＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：８０、８２、８４、８６、８８、９０および９２から成る群から選択されるＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列；
から成る群の少なくとも一員を含んで成る単離核酸分子。
態様６２：態様６０：ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、態様６０記載の軽鎖可変領域ヌクレオチド配列および態様６１記載の重鎖可変領域ヌクレオチド配列を含んで成る単離核酸分子。
態様６３：ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んで成っていて前記軽鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：２、４、６、８、１０、１２、１４および１６から成る群から選択される相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：１８、２０、２２、２４、２６および２８から成る群から選択されるＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：３０、３２、３４および３６から成る群から選択されるＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る単離核酸分子。
態様６４：ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでおり、かつ、前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３８、４０、４２、４４、４６および４８から成る群から選択される相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６および７８から成る群から選択されるＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：８０、８２、８４、８６、８８、９０および９２から成る群から選択されるＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る単離核酸分子。
態様６５：ＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、態様６３記載の軽鎖可変領域ヌクレオチド配列および請求項６４記載の重鎖可変領域ヌクレオチド配列を含んで成る単離核酸分子。
態様６６：更に配列識別番号：１０５のヒト軽鎖フレームワーク領域１（ＦＲＬ１）、配列識別番号：１０６のＦＲＬ２、配列識別番号：１０７のＦＲＬ３、配列識別番号：１０８のＦＲＬ４、配列識別番号：１０９のヒト重鎖フレームワーク領域１（ＦＲＨ１）、配列識別番号：１１０のＦＲＨ２、配列識別番号：１１１のＦＲＨ３および配列識別番号：１１２のＦＲＨ４をコードするヌクレオチド配列も含んで成っていてそれらが前記相補性決定領域ヌクレオチド配列の間に散在している態様６５記載の単離核酸分子。
態様６７：前記軽鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：２、４、６、８、１０、１２、１４および１６から成る群から選択されるＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：１８、２０、２２、２４、２６および２８から成る群から選択されるＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：３０のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る態様６３記載の単離核酸分子。
態様６８：前記軽鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：２、４、６、８、１０、１２、１４および１６から成る群から選択されるＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：１８、２０、２２、２４、２６および２８から成る群から選択されるＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：３６のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る態様６３記載の単離核酸分子。
態様６９：前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３８、４０、４２、４４、４６および４８から成る群から選択されるＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６および７８から成る群から選択されるＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：８６のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る態様６４記載の単離核酸分子。
態様７０：前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３８、４０、４２、４４、４６および４８から成る群から選択されるＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６および７８から成る群から選択されるＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：８８のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る態様６４記載の単離核酸分子。
態様７１：前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３８、４０、４２、４４、４６および４８から成る群から選択されるＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６および７８から成る群から選択されるＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：９０のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る態様６４記載の単離核酸分子。
態様７２：前記重鎖可変領域が下記：
（ａ）配列識別番号：３８、４０、４２、４４、４６および４８から成る群から選択されるＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列；
（ｂ）配列識別番号：５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６および７８から成る群から選択されるＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列；および
（ｃ）配列識別番号：９２のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列；
を含んで成る態様６４記載の単離核酸分子。
態様７３：配列識別番号：８のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：２２のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３０のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４２のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：７６のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：８８のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様７４：配列識別番号：４のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：２２のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３０のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４０のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：６０のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：９０のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様７５：配列識別番号：４のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：２２のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３０のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４２のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：７６のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：９０のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様７６：配列識別番号：１６のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：２８のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３６のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４８のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：６２のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：９２のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様７７：配列識別番号：１６のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：２８のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３６のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４８のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：５８のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：９２のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様７８：配列識別番号：１６のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：１８のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３０のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４６のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：６０のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：９０のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様７９：配列識別番号：８のＣＤＲＬ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：１８のＣＤＲＬ２ヌクレオチド配列、配列識別番号：３０のＣＤＲＬ３ヌクレオチド配列、配列識別番号：４６のＣＤＲＨ１ヌクレオチド配列、配列識別番号：７８のＣＤＲＨ２ヌクレオチド配列および配列識別番号：８８のＣＤＲＨ３ヌクレオチド配列を含んで成る態様６５記載の単離核酸分子。
態様８０：約２．７ｘ１０−１１Ｍ以下のＥＣ５０値を示す態様１−３９のいずれか記載のＩＬ−６抗体。
態様８１：ＥＣ５０値が約２．７ｘ１０−１２Ｍ以下である態様８０記載の抗体。
態様８２：配列識別番号：９３の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：９５の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８３：配列識別番号：９７の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：９９の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８４：配列識別番号：１０１の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：１０３の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８５：配列識別番号：１１６の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：１１８の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８６：配列識別番号：１２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：１２２の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８７：配列識別番号：１２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：１２６の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８８：配列識別番号：１２８の軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：１３０の重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。
態様８９：配列識別番号：９４、９８、１０２、１１７、１２１、１２５および１２９のヌクレオチド配列の中の１つがコードする軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列識別番号：９６、１００、１０４、１１９、１２３、１２７および１３１のヌクレオチド配列の中の１つがコードする重鎖可変領域アミノ酸配列を含んで成る単離ＩＬ−６抗体。

Claims (6)

  1. 配列識別番号：９８のヌクレオチド配列および配列識別番号：１００のヌクレオチド配列を含んでなるＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子。
  2. 配列識別番号：９７の軽鎖可変領域アミノ酸をコードするヌクレオチド配列および配列識別番号：９９の重鎖可変領域アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなるＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子。
  3. ａ）配列識別番号：３の相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
    ｂ）配列識別番号：２１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、及び
    ｃ）配列識別番号：２９のＣＤＲＬ３アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
    を含む抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドと
    ｄ）配列識別番号：３９の相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
    ｅ）配列識別番号：５９のＣＤＲＨ２アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、及び
    ｆ）配列識別番号：８９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、
    を含む抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
    を含んでなるＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、且つ、
    該ＩＬ−６抗体はＩＬ−６依存細胞株の増殖を防止する能力に関する試験を受けさせたとき２．７×１０-12Ｍ以下のＥＣ50値を示す、
    単離核酸分子。
  4. ａ）相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列をコードする配列識別番号：４のポリヌクレオチド、
    ｂ）ＣＤＲＬ２アミノ酸配列をコードする配列識別番号：２２のポリヌクレオチド、及び
    ｃ）ＣＤＲＬ３アミノ酸配列をコードする配列識別番号：３０のポリヌクレオチドを含む抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドと
    ｄ）相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列をコードする配列識別番号：４０のポリヌクレオチド、
    ｅ）ＣＤＲＨ２アミノ酸配列をコードする配列識別番号：６０のポリヌクレオチド、及び
    f) ＣＤＲＨ３アミノ酸配列をコードする配列識別番号：９０のポリヌクレオチドを含む抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド
    を含んでなるＩＬ−６抗体をコードする単離核酸分子であって、且つ、
    該ＩＬ−６抗体はＩＬ−６依存細胞株の増殖を防止する能力に関する試験を受けさせたとき２．７×１０-12Ｍ以下のＥＣ50値を示す、
    単離核酸分子。
  5. 配列識別番号：３の相補性決定領域軽鎖１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、配列識別番号：２１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列及び配列識別番号：２９のＣＤＲＬ３アミノ酸配列含む抗体の軽鎖、並びに配列識別番号：３９の相補性決定領域重鎖１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列識別番号：５９のＣＤＲＨ２アミノ酸配列及び配列識別番号：８９のＣＤＨ３アミノ酸配列を含む抗体の重鎖
    を含んでなる単離ＩＬ−６抗体であって、かつ、該ＩＬ−６抗体はＩＬ−６依存細胞株の増殖を防止する能力に関する試験を受けさせたとき２．７×１０-12Ｍ以下のＥＣ50値を示す、
    単離ＩＬ−６抗体。
  6. 請求項５に記載の単離ＩＬ−６抗体を有効成分として含んでなるリウマチ様関節炎を抑制するための製薬学的製剤。
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