MX2015004668A - Formulacion estable de anticuerpos de baja viscosidad. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, donde la formulación comprende una concentración elevada de un anticuerpo anti5 IL6. En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja que comprende de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo anti-IL6 y arginina, donde la formulación de anticuerpos es una solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C También se proporcionan métodos para preparar y métodos para utilizar tales formulaciones de anticuerpos.

Description

FORMULACIÓN ESTABLE DE ANTICUERPOS DE BAJA VISCOSIDAD CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad, donde la formulación comprende una concentración elevada de un anticuerpo anti-IL6. En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo anti-IL6 y arginina, donde la formulación de anticuerpos es una solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C. También se proporcionan métodos para preparar y métodos para utilizar tales formulaciones de anticuerpos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los anticuerpos han sido utilizados en el tratamiento de varias enfermedades y afecciones debido a su especificidad a la hora de reconocer la diana, con lo cual generan unos resultados muy selectivos tras su administración sistémica. Aunque los anticuerpos pueden presentar una especificidad elevada, las dosis requeridas para tratar a los pacientes, particularmente para una afección crónica, son normalmente elevadas. Se han desarrollado nuevas téenicas de producción y purificación para conseguir que se puedan producir grandes cantidades de anticuerpos monoclonales altamente purificados.

Ref.:255093 Sin embargo, siguen existiendo dificultades a la hora de estabilizar estos anticuerpos y todavía existen más dificultades para proporcionar los anticuerpos en una forma farmacéutica que sea adecuada para la administración.

Con el fin de tratar a los sujetos con grandes cantidades de dosis de un anticuerpo específico, es deseable incrementar la concentración del anticuerpo en la formulación farmacéutica. Una concentración más elevada proporciona generalmente un volumen de inyección más pequeño para la inyección. Sin embargo, en concentraciones más elevadas, los anticuerpos suelen exhibir problemas característicos, que incluyen la agregación, precipitación, gelación, reducción de la estabilidad y/o incremento de la viscosidad.

Se han propuesto varios métodos para resolver las dificultades asociadas con las formas farmacéuticas de concentración elevada. Por ejemplo, para resolver el problema de la estabilidad asociado con formulaciones de anticuerpos de concentración elevada, a menudo se liofiliza el anticuerpo y a continuación se reconstituye poco antes de su administración. Por lo general, la reconstitución no es óptima, ya que añade un paso adicional en el proceso de administración y podría introducir contaminantes en la formulación. Además, incluso los anticuerpos reconstituidos pueden presentar problemas de agregación y viscosidad elevada.

También existen otros problemas a la hora de administrar formulaciones de anticuerpos. En algunos casos, la formulación de anticuerpos se retira de su envase y se diluye en una bolsa intravenosa (IV) adecuada antes de su administración. La bolsa IV preparada que contiene la formulación de anticuerpos se denomina "preparado estéril compuesto" (CSP, por sus siglas en inglés). El CSP se suele retener durante un tiempo corto antes de ser administrado a un sujeto. Normalmente, el CSP se inspecciona visualmente para detectar signos de precipitación o contaminación antes de su infusión en el paciente. El marco temporal deseado para la estabilidad de un CSP es más corto que el de una formulación de anticuerpos, p. ej., de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 horas a temperatura ambiente y de 24 a 36 horas en condiciones de refrigeración.

La colocación de la formulación de anticuerpos en las bolsas IV puede provocar una reducción de la estabilidad. Para productos de anticuerpos, se puede producir una precipitación o formación de partículas y esta se puede evaluar mediante la inspección visual de la solución IV, la recuperación de la dosis por absorbancia ultravioleta-visible y su estabilidad respecto a la formulación de especies con un peso molecular elevado (HMWS, por sus siglas en inglés) mediante cromatografía por exclusión de tamaño (SEC, por sus siglas en inglés). También se puede medir la potencia y esta se evalúa por lo general con una prueba específica para el producto.

Múltiples posibles fuentes pueden provocar la inestabilidad del CSP. La estabilidad coloidal y conformacional de las proteínas se ve afectada por las condiciones de la solución tales como la fuerza iónica, el pH y la presencia de excipientes tales como disacáridos o aminoácidos. A menudo se añaden tensioactivos a las formulaciones de proteínas para protegerlas frente a la agregación provocada por tensiones interfaciales o para inhibir la formación de partículas. Se podría producir una reducción de la estabilidad de las proteínas si un excipiente de la formulación se diluyera por debajo de su nivel necesario. Además, la exposición a un entorno de fuerza iónica elevada en las bolsas IV salinas puede acelerar vías de degradación específicas para algunas proteínas.

Por lo tanto, se necesita disponer de formulaciones de anticuerpos de concentración elevada que puedan resolver muchas de estas dificultades. Además, se necesita disponer de un método para añadir una formulación de anticuerpos a una bolsa IV, donde la formulación de anticuerpos no se degrade, precipite ni pierda de otro modo su eficacia durante la dilución.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a formulaciones de anticuerpos estables de viscosidad baja y concentración elevada.

En algunas modalidades, la presente invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo anti-IL6 y (b) una concentración superior a aproximadamente 150 mM de arginina, donde la formulación de anticuerpos se encuentra en una solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, el anticuerpo anti-IL6 comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12. En una modalidad, el anticuerpo anti-IL6 comprende la SEQ ID NO:l y SEQ ID NO:2.

En algunas modalidades, el anticuerpo es estable a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 12 meses, según se determina mediante SEC HPLC.

En algunas modalidades, la viscosidad de la formulación de anticuerpos es inferior a 14 cP a 23 °C.

Se pueden utilizar varias concentraciones de arginina. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración superior a 200 mM de arginina. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración superior a 220 mM de arginina. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración de 150 mM a 400 mM de arginina.

Se pueden incluir otros componentes diferentes en la formulación de anticuerpos. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende además un tensioactivo. En algunas modalidades, el tensioactivo se selecciona del grupo constituido por polisorbato, pluronics, Brij y otros tensioactivos no iónicos. En algunas modalidades, el tensioactivo es polisorbato 80. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende además histidina. En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de trealosa. En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de un disacárido. En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de un azúcar reductor, un azúcar no reductor o un alcohol de un azúcar. En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de un osmolito.

En algunas modalidades, la formulación presenta una fuerza de inyección inferior a 8 N cuando se hace pasar a través de una aguja de PFS de pared delgada de calibre 27 (equivalente a una aguja de calibre 25 o calibre 26). En algunas modalidades, la formulación presenta una osmolaridad comprendida entre 300 y 450 mosm/kg.

El anticuerpo de la formulación de anticuerpos puede presentar varios niveles de pureza. En algunas modalidades, el anticuerpo representa más de un 90% (p/p) de la composición polipeptídica total de la formulación de anticuerpos.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 400 mM de arginina, (c) de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 0.1% de polisorbato 80, (d) una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 30 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, (b) una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 400 mM de arginina, (c) de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 0.1% de polisorbato 80 y (d) una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 30 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °c.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) aproximadamente 150 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, (b) una concentración de aproximadamente 220 mM de arginina, (c) aproximadamente un 0.07% de polisorbato 80 y (d) una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) aproximadamente 150 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, (b) una concentración de aproximadamente 150 mM de arginina, (c) aproximadamente un 0.07% de polisorbato 80 y (d) una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 200 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, (b) una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 400 mM de arginina, (c) de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 0.1% de polisorbato 80, (d) una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM de histidina y opcionalmente (e) una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 400 mM de trealosa, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) aproximadamente 50 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, (b) aproximadamente un 0.05% de polisorbato 80, (c) una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina y (d) una concentración de aproximadamente 225 mM de trealosa, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad que comprende: (a) aproximadamente 100 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, (b) una concentración de aproximadamente 25 mM de arginina, (c) aproximadamente un 0.07% de polisorbato 80, (d) una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina y (e) una concentración de aproximadamente 180 mM de trealosa, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar el dolor asociado con la osteoartritis en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente. En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar el dolor asociado con el dolor lumbar crónico en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente. En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar la artritis reumatoide en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para preparar una formulación estable de anticuerpos de baja viscosidad, donde el método comprende: (a) concentrar un anticuerpo hasta obtener de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL, donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2; y (b) añadir arginina al anticuerpo de (a) para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de arginina superior a aproximadamente 150 mM, donde la formulación de anticuerpos de (b) se encuentra en solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C, y donde la formulación de anticuerpos de (b) es estable a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 12 meses según se determina mediante SEC HPLC.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La FIG. 1 es una gráfica que muestra la capacidad estabilizante prevista de varios excipientes para un anticuerpo anti-IL6(YTE). Demuestra que no se prevé que la arginina sea el excipiente más estabilizante coloidalmente para este anticuerpo. Se previo que los excipientes más estabilizantes eran la sacarosa y trealosa, en cambio se previo que los menos estabilizantes eran el sulfato de sodio y NaCl.

Las FIGS. 2a-2b es una curva de la viscosidad frente a la concentración para trealosa, sacarosa, sorbítol y trealosa/NaCl.

La FIG. 3 es una curva de la viscosidad frente a la concentración para una formulación de anticuerpos con (i) trealosa 210 mM, (ii) trealosa 180 mM/arginina 25 mM, (iii) trealosa 170 mM/arginina 50 mM, (iv) trealosa 180 mM/arginina 90 M, (v) arginina 150 mM o (vi) arginina 220 mM.

La FIG. 4 es una curva de la viscosidad frente a la concentración para una formulación de anticuerpos con (i) trealosa 210 mM, (ii) trealosa 180 mM/arginina 25 mM, (iii) trealosa 170 mM/arginina 50 mM, (iv) trealosa 180 mM/arginina 90 mM, (v) arginina 150 mM o (vi) arginina 220 mM.

La FIG. 5 es una curva de la viscosidad frente a la concentración para una formulación de anticuerpos con (i) trealosa 210 mM, (ii) trealosa 180 mM/arginina 25 mM, (iii) arginina 150 mM o (iv) arginina 220 mM.

La FIG. 6 es una curva de la viscosidad frente a la concentración para una formulación de anticuerpos con (i) arginina 150 mM, (ii) arginina 220 mM o (iii) trealosa 75 mM/arginina 100 mM.

La FIG. 7 es una comparación de la viscosidad de la formulación de anticuerpos con arginina 150 mM y arginina 220 mM.

La FIG. 8 demostró la dependencia de la viscosidad respecto a la temperatura para formulaciones de 100 mg/mL y 150 mg/mL de anticuerpo que contenían varios excipientes.

La FIG. 9 es el perfil de estabilidad térmica para el anticuerpo anti-IL6(YTE) en clorhidrato de L-histidina monohidratado/L-histidina 25 M, clorhidrato de arginina 220 mM, 0.07% (p/v) de polisorbato 80, pH 6.0.

La FIG.10 es una fotografía de la muestra de dosis baja del anticuerpo anti-IL6(YTE) de una bolsa IV tras la infusión simulada a través de un filtro en línea de 0.2 mieras y la recolección en un vial de vidrio de 3 cc (punto de evaluación inicial).

La FIG.11 es una fotografía de la muestra de dosis baja del anticuerpo anti-IL6(YTE) de una bolsa IV tras la infusión simulada a través de un filtro en línea de 0.2 mieras y la recolección en un vial de vidrio de 3 cc, donde la bolsa IV se trató con un 0.012% p/v de polisorbato 80.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se debe apreciar que las implementaciones particulares que se muestran y describen en la presente son ejemplos y no se pretende que limiten de ningún modo el alcance de la solicitud. También se debe apreciar que cada una de las modalidades y características de la invención que se describen en la presente se pueden combinar de cualquier modo y de todos los modos.

Las patentes publicadas, solicitudes de patente, páginas web, nombres de compañías y bibliografía científica que se mencionan en la presente se incorporan por referencia a la presente en su totalidad del mismo modo que si se indicara específica e individualmente que cada una de ellas se incorpora por referencia. Cualquier conflicto entre cualesquiera referencias citadas en la presente y el contenido específico de esta descripción deberá resolverse a favor de la última. Del mismo modo, cualquier conflicto entre una definición de un término o expresión según se interpreta en la téenica y una definición del término o expresión según se indica específicamente en esta descripción deberá resolverse a favor de la última.

Las formas del singular "un", "uno/a" y "el/la", tal como se utilizan en esta descripción, también engloban específicamente las formas en plural de los términos a los cuales hacen referencia, a menos que el contenido indique claramente lo contrario.

A lo largo de la presente exposición, todas las expresiones de porcentaje, relación y similares son "en peso", a menos que se indique lo contrario. Lá expresión "en peso", tal como se utiliza en la presente, es sinónima de la expresión "en masa" e indica que una relación o porcentaje definido en la presente se obtiene de acuerdo con el peso en lugar del volumen, espesor o cualquier otra medida.

El término "aproximadamente" se utiliza en la presente para referirse a de forma aproximada, en la región de, más o menos, o alrededor de. Cuando el término "aproximadamente" se utiliza conjuntamente con un intervalo numérico, este modifica al intervalo extendiendo sus límites por encima y por debajo de los valores numéricos expuestos. En general, el término "aproximadamente" se utiliza en la presente para modificar un valor numérico por encima y por debajo del valor indicado con una varianza de un 10%.

Los términos téenicos y científicos utilizados en la presente tienen el significado que interpreta habitualmente un experto en la técnica a la cual pertenece la presente solicitud, a menos que se defina de otro modo. En la presente se hace referencia a varias metodologías y materiales conocidos por los expertos en la técnica. Los trabajos de referencia estándar que exponen los principios generales de la teenología de ADN recombinante incluyen Sambrook et al ., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2.a Ed., Coid Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York (1989); Kaufman et al., Eds., "Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine", CRC Press, Boca Ratón (1995); y McPherson, Ed., "Directed Mutagenesis: A Practical Approach", IRL Press, Oxford (1991), las descripciones de cada uno de los cuales se incorporan a la presente por referencia en su totalidad.

La presente invención se refiere a formulaciones de anticuerpos estables de viscosidad baja. La expresión "formulación de anticuerpos", tal como se describe en la presente, se refiere a una composición que comprende una o más moléculas de anticuerpos. El término "anticuerpo" no está particularmente limitado en la presente invención. Para mayor claridad, se considera un "anticuerpo" en su sentido más amplio y este incluye cualquier inmunoglobulina (Ig), variantes activas o deseadas de esta, y fragmentos activos o deseables de esta (p. ej., fragmentos Fab, anticuerpos camélidos (anticuerpos monocatenarios) y nanocuerpos). El término "anticuerpo" también se puede referir a dímeros o multímeros. El anticuerpo puede ser policlonal o monoclonal y puede ser de origen natural o producido de forma recombinante . De este modo, en el término "anticuerpo" se incluyen todos los anticuerpos humanos, no humanos, humanizados y quiméricos. Normalmente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal de una de las siguientes clases: IgG, IgE, IgM, IgD e IgA; y más habitualmente es una IgG o IgA.

Un anticuerpo de la invención puede ser de cualquier origen animal, incluidos los mamíferos y las aves. En algunas modalidades, el anticuerpo de los métodos de la invención es humano, de murino (p. ej., ratón y rata), asno, oveja, conejo, cabra, conejillo de Indias, camello, caballo o gallina. Los anticuerpos "humanos", tal como se utilizan en la presente, incluyen anticuerpos que contienen la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana e incluyen anticuerpos aislados a partir de colecciones de inmunoglobulinas humanas o de animales transgénicos para una o más inmunoglobulinas humanas y que no expresan inmunoglobulinas endógenas. Remítase, p. ej., a la Patente de EE. UU. N.° 5,939,598 de Kucherlapati et al.

Un anticuerpo de la invención puede incluir, p. ej., anticuerpos nativos, anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (p. ej., anticuerpos biespecíficos) formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos, fragmentos de anticuerpos (p. ej., fragmentos de anticuerpos que reconocen y/o se unen a uno o más antígenos), anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos (Jakobovits et al., Proc . Nati . Acad. Sci . USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggermann et al . , Year in Immunol . 7:33 (1993); Patentes de EE. UU. N.os 5.591.669 y 5.545.807), anticuerpos y fragmentos de anticuerpos aislados a partir de colecciones de fagos para anticuerpos (McCafferty et al . , Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al . , Nature 352:624-628 (1991); Marks et al . , J. Mol . Biol . 222:581-597 (1991); Marks et al . , Bio/Technology 10:779-783 (1992); Waterhouse et al . , Nucí . Acids Res. 21:2265-2266 (1993)). Un anticuerpo purificado mediante el método de la invención se puede fusionar de forma recombinante con un polipéptido heterólogo en el extremo N o C o se puede conjugar químicamente (incluidas las conjugaciones covalentes y no covalentes) con polipéptidos u otras composiciones. Por ejemplo, un anticuerpo purificado mediante el método de la presente invención se puede fusionar o conjugar de forma recombinante con moléculas útiles como marcadores en ensayos de detección y moléculas efectoras tales como polipéptidos heterólogos, fármacos o toxinas. Remítase, p. ej., a las publicaciones de PCT WO 92/08495, WO 91/14438, WO 89/12624; la Patente de EE. UU. N.° 5,314,995; y EP 396,387.

En algunas modalidades, el anticuerpo se puede dirigir contra uno o más antígenos, según se sabe bien en la téenica. Los ejemplos de anticuerpos antiinflamatorios adecuados incluyen, sin carácter limitante, anticuerpos anti-TNF alfa tales como adalimumab, infliximab, etanercept, golimumab y certolizumab pegol; anticuerpos anti-IL13 tales como canakinumab; anticuerpos anti-IL12/23 (p40) tales como ustekinumab y briakinumab; y anticuerpos anti-IL2R tales como daclizumab. Los ejemplos de anticuerpos contra el cáncer adecuados incluyen, sin carácter limitante, anticuerpos anti-BAFF tales como belimumab; anticuerpos anti-CD20 tales como rituximab; anticuerpos anti-CD22 tales como epratuzumab; anticuerpos anti-CD25 tales como daclizumab; anticuerpos anti-CD30 tales como iratumumab, anticuerpos anti-CD33 tales como gemtuzumab, anticuerpos anti-CD52 tales como alemtuzumab; anticuerpos anti-CD152 tales como ipilimumab; anticuerpos anti-EGFR tales como cetuximab; anticuerpos anti-HER2 tales como trastuzumab y pertuzumab; anticuerpos anti-IL6 tales como siltuximab; y anticuerpos anti-VEGF tales como bevacizumab; anticuerpos anti-receptor de IL6 tales como tocilizumab. En una modalidad particular, la formulación de anticuerpos comprende un anticuerpo anti-IL6.

En algunas modalidades, las formulaciones de anticuerpos comprenden un anticuerpo anti-IL6, donde el anticuerpo anti-IL6 comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12.

SEQ ID NO:7 CDR1 de la cadena pesada anti-IL6 SNYMI SEQ ID NO:8 CDR2 de la cadena pesada anti-IL6 DLYYYAGDTYYADSVKG SEQ ID NO:9 CDR3 de la cadena pesada anti-IL6 WADDHPPWIDL SEQ ID NO:10 CDR1 de la cadena ligera anti-IL6 RASQGISSWLA SEQ ID NO:11 CDR2 de la cadena ligera anti-IL6 KASTLES SEQ ID NO:12 CDR3 de la cadena ligera anti-IL6 QQSWLGGS En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende un anticuerpo anti-IL6, donde el anticuerpo anti-IL6 comprende un dominio VH y un dominio VL que comprende las SEQ ID NOs: 5 y 6, respectivamente.

SEQ ID NO:5 Cadena pesada variable anti-IL6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTISSNYMIWVRQAPGKGLEWVSDLYYYAG DTYYADSVKGRFTMSRDISKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARWADDHPPWIDLWGRGTLVT VSS SEQ ID NO:6 Cadena ligera variable anti-IL6 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKVLIYKASTLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSWLGGSFGQGTKLEIK En algunas modalidades, las formulaciones de anticuerpos comprenden un anticuerpo anti-IL6 según se describe en las SEQ ID NOS: 3-4.

SEQ ID NO: 3 Cadena pesada del anticuerpo anti-IL6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTISSNYMIWVRQAPGKGLEWVSDLYYYAG DT YYADS VKGRFTMSRD I S KNTVYLQM S LRAEDTAVYY CARWADDHPPW I DLWGRGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVF S C S VMHE ALHNH YTQKS LS L S PGK SEQ ID NO: 4 Cadena ligera del anticuerpo anti-IL6 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKVLIYKASTLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSWLGGSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC En algunas modalidades, el anticuerpo de la formulación de anticuerpos es un anticuerpo que se puede adquirir de proveedores comerciales, seleccionado del grupo constituido por adalimumab (Humira®, Abbott Laboratories), eculizumab (Soliris®, Alexion Pharmaceuticals), rituximab (Ritixan®, Roche/Biogen Idec/Chugai), infliximab (Remicade®, Johnson & Johnson/Schering-Plough/Tanabe), trastuzumab (Herceptin®, Roche/Chugai), bevacizumab (Avastin®, Chugai/Roche), palivizumab (Synagis®, Medlmmune /Abbott), alemtuzumab (Campath®, Genzyme) y motavizumab (Numax®, Medlmmune).

En algunas modalidades, el anticuerpo anti-IL6 es un anticuerpo anti-IL6 modificado. Por ejemplo, en algunas modalidades, el anticuerpo anti-IL6 es un anticuerpo anti-IL6(YTE), que contiene tres sustituciones de aminoácidos (M252Y/S254T/T256E) en el dominio CH2 del dominio Fe, que se ha demostrado que incrementan la semivida en suero de anti-IL6(YTE), según se representa en las SEQ ID NOS: 1-2.

SEQ ID NO: 1 Cadena pesada del anticuerpo anti-IL6(YTE) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTISSNYMIWVRQAPGKGLEWVSDLYYYAG DTYYADS VKGRFTMSRD I S KNTVYLQMNS LRAEDTAVYYCARWADDHPPW I DLWGRGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRW SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 2 Cadena ligera del anticuerpo anti-IL6(YTE) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKVLIYKASTLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSWLGGSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Remítase, p. ej., a Dall'Acqua et al . , J. Immunol 169:5171-5180 (2002). El anticuerpo anti-IL6(YTE) es un anticuerpo monoclonal humano de tipo IgGlK con un peso molecular global de aproximadamente 148 kDa, que contiene un sitio de unión de oligosacáridos enlazado a través de N en la región Fe en el residuo Asn-300. Se cree que el anticuerpo anti-IL6(YTE) bloquea las interacciones del ligando del receptor alfa de IL6 y los eventos funcionales posteriores. La secuencia del anticuerpo anti-IL6(YTE) se puede encontrar en las SEQ ID NOS:1 y 2. También se describen ejemplos no limitantes de anticuerpos anti-IL6 en WO 2008/065378, WO 2010/088444, la patente de EE. UU. N.° 8,198,414 y la Solicitud de Patente de EE. UU. N.° 20120034212, que se incorporan a la presente por referencia en su totalidad.

Por ejemplo, la secuencia de nucleótidos de IL6 humana se puede encontrar en la base de datos de GenBank (remítase, p. ej., al N.° de acceso NM 000600.2). La secuencia de aminoácidos de IL6 humana se puede encontrar en la base de datos de GenBank (remítase, p. ej., al N.° de acceso P05231) y en la Solicitud de Patente de EE. UU. N.° 10/496,793, presentada el 4 de diciembre de 2002, publicada como la Patente de EE. UU. N.° 7,414,024 (remítase a la columna 1); y la Solicitud de Patente de EE. UU. N.° 12/470.753, presentada el 22 de mayo de 2009, publicada como la Patente de EE. UU. N.° 7,833,755 (remítase a la columna 19)(la secuencia de aminoácidos de IL6 humana se incorpora específicamente a la presente por referencia). La IL6 humana también se ha descrito en Hirano et al., Nature 324 (6092), 73-76 (1986). Cada uno de estos números de acceso, solicitudes de patente y artículos de revistas se incorporan expresamente por referencia a la presente.

En una modalidad, un polipéptido de tipo IL6 es la IL6 humana, un análogo, derivado o fragmento de esta.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos de la presente invención comprende un anticuerpo anti-IL6. Los anticuerpos de la presente invención se unen específicamente a un antígeno de interés o un fragmento de este, y no se unen específicamente a otros antígenos o fragmentos de estos. Por ejemplo, un anticuerpo anti-I6 se unirá inmunoespecíficamente a un polipéptido de tipo interleucina-6 y no se unirá específicamente a otros polipéptidos. Preferentemente, los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a una IL6 presentan una afinidad más elevada por una IL6 o un fragmento de un polipéptido de tipo IL6 en comparación con la afinidad por otros polipéptidos o fragmentos de otros polipéptidos. La afinidad de un anticuerpo es una medida de su unión con un antígeno específico en un único sitio antígeno-anticuerpo y en esencia es la suma de todas las fuerzas de atracción y repulsión presentes en la interacción entre el sitio de unión al antígeno de un anticuerpo y un epítopo particular. La afinidad de un anticuerpo por un antígeno particular (p. ej., un polipéptido de tipo IL6 o un fragmento de un polipéptido de tipo IL6) se puede expresar mediante la constante de equilibrio K, definida por la ecuación K = [Ag Ab]/[Ag][Ab], que corresponde a la afinidad del sitio de combinación del anticuerpo, donde [Ag] es la concentración de antígeno libre, [Ab] es la concentración de anticuerpo libre y [Ag Ab] es la concentración del complejo antígeno-anticuerpo. Cuando el antígeno y el anticuerpo reaccionan intensamente entre sí, habrá muy poco antígeno libre o anticuerpo libre y, por lo tanto, la constante de equilibrio o afinidad del anticuerpo será elevada. Se obtienen anticuerpos con una afinidad elevada cuando se produce un buen ajuste entre el anticuerpo y el antígeno (para consultar una discusión sobre la afinidad de los anticuerpos, remítase a Sigal y Ron ed., 1994, Immunology and Inflammation - Basic Mechanisms and Clinical Consequences , McGraw-Hill, Inc. Nueva York en las páginas 56-57; y Scymour et al . , 1995, Immunology - An Introduction for the Health Sciences , McGraw-Hill Book Company, Australia en las páginas 31-32). Preferentemente, los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a un polipéptido de tipo IL6 o un fragmento de este no presentan reactividad cruzada con otros antígenos. Es decir, los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a un polipéptido de tipo IL6 o un fragmento de este con una energía más elevada que con otros polipéptidos o fragmentos de otros polipéptidos (remítase, p. ej., a Paul ed., 1989, Fundamental Immunology, 2.a ed., Raven Press, Nueva York en las páginas 332-336 para consultar una discusión sobre la especificidad de los anticuerpos). Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a un polipéptido de tipo IL6 se pueden identificar, por ejemplo, mediante inmunoensayos tales como radioinmunoensayos (RIA), enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA) y ensayos BIAcore u otras téenicas conocidas por los expertos en la técnica (remítase, p. ej., a Seymour et al . , 1995, Immunology - An Introduction for the Heal th Sciences , McGraw-Hill Book Company, Australia en las páginas 33-41 para consultar una discusión sobre varios ensayos para determinar las interacciones anticuerpo-antígeno in vivo). Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a un polipéptido de tipo IL6 o un fragmento de este solo antagonizan un polipéptido de tipo IL6 y no antagonizan significativamente otras actividades.

El término "análogo" o la expresión "análogo de un anticuerpo", tal como se utilizan en la presente, en el contexto de un anticuerpo se refieren a un segundo anticuerpo, es decir, un análogo del anticuerpo, que posee unas funciones similares o idénticas a las del anticuerpo, pero que no comprende necesariamente una secuencia de aminoácidos similar o idéntica a la del anticuerpo, ni posee una estructura similar o idéntica a la del anticuerpo. Un anticuerpo que presenta una secuencia de aminoácidos similar se refiere a un análogo del anticuerpo que satisface al menos uno de los siguientes criterios: (a) un análogo del anticuerpo que presenta una secuencia de aminoácidos con una identidad de al menos un 30%, al menos un 35%, al menos un 40%, al menos un 45%, al menos un 50%, al menos un 55%, al menos un 60%, al menos un 65%, al menos un 70%, al menos un 75%, al menos un 80%, al menos un 85%, al menos un 90%, al menos un 95% o al menos un 99% respecto a la secuencia de aminoácidos del anticuerpo; (b) un análogo del anticuerpo codificado por una secuencia de nucleótidos que se híbrida en condiciones rigurosas con una secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo de al menos 5 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 10 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 15 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 20 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 25 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 40 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 50 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 60 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 70 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 80 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 90 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 100 residuos aminoacídicos contiguos, al menos 125 residuos aminoacídicos contiguos o al menos 150 residuos aminoacídicos contiguos; y (c) un análogo del anticuerpo codificado por una secuencia de nucleótidos que presenta una identidad de al menos un 30%, al menos un 35%, al menos un 40%, al menos un 45%, al menos un 50%, al menos un 55%, al menos un 60%, al menos un 65%, al menos un 70%, al menos un 75%, al menos un 80%, al menos un 85%, al menos un 90%, al menos un 95% o al menos un 99% respecto a la secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo. Un análogo del anticuerpo con una estructura similar a la del anticuerpo se refiere a un agente proteináceo que presenta una estructura secundaria, terciaria o cuaternaria similar a la del anticuerpo. La estructura de un anticuerpo o de un análogo de un anticuerpo se puede determinar utilizando métodos conocidos por los expertos en la téenica, que incluyen, sin carácter limitante, la secuenciación del péptido, cristalografía de rayos X, resonancia magnética nuclear, dicroísmo circular y microscopía electrónica cristalográfica.

Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácidos o de dos secuencias de ácido nucleico, las secuencias se alinean con el fin de realizar una comparación óptima (p. ej., se pueden introducir huecos en la secuencia de una primera secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico para una alineación óptima con una segunda secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico) . A continuación, se comparan los residuos aminoacídicos o los nucleótidos de las posiciones aminoacídicas o posiciones nucleotídicas correspondientes. Cuando una posición de la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo aminoacídico o el mismo nucleótido que la posición correspondiente de la segunda secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, % de identidad = número de posiciones superpuestas idénticas/número total de posiciones x 100%). En una modalidad, las dos secuencias tienen la misma longitud.

La determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias también se puede llevar a cabo utilizando un algoritmo matemático. Un ejemplo no limitante de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de dos secuencias es el algoritmo de Karlin y Altschul, 1990, Proc . Nati . Acad. Sci . U. S.A. 87:2264-2268, modificados según Karlin y Altschul, 1993, Proc. Nati . Acad. Sci . U.S.A. 90:5873-5877. Un algoritmo de este tipo está incorporado en los programas NBLAST y XBLAST de Altschul et al., 1990, J. Mol . Biol . 215 :403. Se pueden realizar búsquedas de nucleótidos en BLAST con los parámetros del programa de nucleótidos NBLAST fijados, p. ej., para una puntuación = 100 y una longitud de palabra = 12 con el fin de obtener secuencias de nucleótidos homologas respecto a una molécula de ácido nucleico de la presente invención. Se pueden realizar búsquedas de proteínas en BLAST con los parámetros del programa XBLAST fijados, p. ej., para una puntuación = 50 y una longitud de palabra = 3 con el fin de obtener secuencias de aminoácidos homologas respecto a una molécula proteica de la presente invención. Con el fin de obtener alineaciones con huecos para fines comparativos, se puede utilizar Gapped BLAST según se describe en Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Como alternativa, se puede utilizar PSI-BLAST para realizar una búsqueda iterada que detecte correlaciones distantes entre las moléculas (Id). Cuando se utilizan los programas BLAST, Gapped BLAST y PSI-Blast, se pueden utilizar los parámetros por defecto de los programas respectivos (p. ej., de XBLAST y NBLAST) (remítase, p. ej., a la página web del NCBI) . Otro ejemplo no limitante preferido de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de secuencias es el algoritmo de Myers y Miller, 1988, CABIOS 4:11-17. Un algoritmo de este tipo está incorporado en el programa ALIGN (versión 2.0), que forma parte del paquete de software de alineación de secuencias GCG. Cuando se utiliza el programa ALIGN para comparar secuencias de aminoácidos, se puede utilizar una tabla de residuos ponderales PAM120, una penalización por la longitud del hueco de 12 y una penalización por el hueco de 4.

En algunas modalidades, el anticuerpo de la formulación de anticuerpos se purifica antes de añadirlo a la formulación de anticuerpos. Los términos "aislar" y "purificar" se refieren a separar el anticuerpo de una impureza u otros contaminantes en la composición en la que reside el anticuerpo, p. ej., una composición que comprende proteínas de la célula huésped. En algunas modalidades, se purifica al menos un 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5% o 99.9% (p/p) de una impureza del anticuerpo. Por ejemplo, en algunas modalidades, la purificación de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6(YTE), comprendería separar el anticuerpo de un 99% (p/p) de las proteínas de la célula huésped presentes originariamente en la composición.

En algunas modalidades, los términos "aislar" y "purificar" se refieren a separar un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6(YTE), de una impureza u otros contaminantes en la composición hasta un grado conforme con las directrices de una organización gubernamental, p. ej., la Organización Mundial de la Salud o la Administración de Medicamentos y Alimentos de los Estados Unidos.

La formulación de anticuerpos de la presente invención se puede utilizar con fines farmacéuticos. Los anticuerpos utilizados en aplicaciones farmacéuticas deben presentar por lo general un nivel elevado de pureza, especialmente en lo que respecta a contaminantes del cultivo celular, incluidos los contaminantes de proteínas celulares, contaminantes de ADN celular, virus y otros agentes transmisibles. Remítase a "WHO Requirements for the use of animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals: Requirements for Biological Substances No. 50". N.° 878. Anexo 1, 1998. Como respuesta a la preocupación por los contaminantes, la Organización Mundial de la Salud (OMS) estableció límites en los niveles de varios contaminantes. Por ejemplo, la OMS recomienda un límite de ADN inferior a 10 ng por dosis para productos proteicos. De un modo similar, la Administración de Medicamentos y Alimentos de los Estados Unidos (FDA, por sus siglas en inglés) fijó un límite de ADN inferior o igual a 0.5 mg/mg de proteína. De este modo, en algunas modalidades, la presente invención se refiere a formulaciones de anticuerpos que exceden o cumplen con los límites para contaminantes definidos por una o más organizaciones gubernamentales, p. ej., la Administración de Medicamentos y Alimentos de los Estados Unidos y/o la Organización Mundial de la Salud.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos descrita en la presente es farmacéuticamente aceptable. La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a una formulación de anticuerpos que es, a criterio médico, adecuada para ponerla en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin provocar excesiva toxicidad u otras complicaciones, con una relación beneficio/riesgo razonable.

La pureza de las formulaciones de anticuerpos puede variar. En algunas modalidades, el anticuerpo terapéutico de interés, p. ej., el anticuerpo anti-IL6(YTE) representa más de un 90% (p/p) de los polipéptidos totales presentes en la formulación de anticuerpos. En algunas modalidades, el anticuerpo terapéutico de interés, p. ej., anti-IL6(YTE), representa más de un 95% (p/p), 98% (p/p), 99% (p/p), 99.5% (p/p) o 99.9% (p/p) del polipéptido total presente en la formulación de anticuerpos.

La concentración de anticuerpo en la formulación de anticuerpos puede variar. En algunas modalidades, la concentración de anticuerpo en la formulación de anticuerpos es superior a aproximadamente 20 mg/mL, superior a aproximadamente 50 mg/mL, superior a aproximadamente 75 mg/mL, superior a aproximadamente 100 mg/mL, superior a aproximadamente 125 mg/mL, superior a aproximadamente 150 mg/mL, superior a aproximadamente 175 mg/mL o superior a aproximadamente 200 mg/mL. En algunas modalidades, la concentración de anticuerpo en la formulación de anticuerpos es de aproximadamente 20 mg/mL a 300 mg/mL, de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 250 mg/mL, de aproximadamente 75 mg/mL a aproximadamente 200 mg/mL, de aproximadamente 100 mg/mL a aproximadamente 175 mg/mL, de aproximadamente 125 mg/mL a aproximadamente 175 mg/mL, de aproximadamente 50 mg/mL, aproximadamente 100 mg/mL o aproximadamente 150 mg/mL.

La formulación de anticuerpos de la presente invención puede comprender arginina. La arginina es un aminoácido no esencial condicionalmente que se puede representar mediante la fórmula: La arginina, tal como se utiliza en la presente, puede incluir la forma de base libre de la arginina, así como también todas y cada una de sus sales. En algunas modalidades, la arginina incluye una sal farmacéuticamente aceptable de esta. Por ejemplo, la arginina incluiría el clorhidrato de arginina. La arginina, tal como se utiliza en la presente, también incluye todos sus enantiómeros (p. ej., L-arginina y D-arginina) y cualquier combinación de enantiómeros (p. ej., un 50% de L-arginina y un 50% de D-arginina; un 90%-100% de L-arginina y un 10%-0% de D-arginina, etc.). En algunas modalidades, el término "arginina" incluye más de un 99% de L-arginina y menos de un 1% de D-arginina. En algunas modalidades, el término "arginina" incluye una L-arginina enantioméricamente pura. En algunas modalidades, la arginina es una arginina de grado farmacéutico.

Cabe esperar que la arginina desestabilice termodinámicamente varios anticuerpos, p. ej., los anticuerpos anti-IL6(YTE). Remítase, p. ej., a la FIG.1. Un experto en la téenica esperaría que cantidades cada vez mayores de agentes desestabilizantes, p. ej., arginina, para una proteína determinada, p. ej., los anticuerpos anti-IL6(YTE), tendrían una mayor capacidad para alterar la estructura proteica de su forma nativa, p. ej., desnaturalizarla. Sin pretender vincularse a ninguna teoría particular, los inventores han descubierto que, aunque cantidades cada vez mayores de arginina en la formulación de anticuerpos redujeron, de hecho, la temperatura de fusión medida por CDB, la arginina ejerció un efecto estabilizante, en lugar de un efecto desestabilizante, sobre el anticuerpo anti-IL6 (YTE), que se midió según la tasa de degradación por SE-HPLC tras su almacenamiento. De este modo, en algunas modalidades, puede haber unas concentraciones elevadas de arginina presentes en la formulación de anticuerpos y estas pueden ejercer un efecto estabilizante sobre el anticuerpo en la formulación.

Puede haber varias concentraciones de arginina presentes en la formulación de anticuerpos. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración superior a 20 mM de arginina, superior a 25 mM de arginina, superior a 50 mM de arginina, superior a 75 mM de arginina, superior a 100 mM de arginina, superior a 125 mM de arginina, superior a 150 mM de arginina, superior a 175 mM de arginina, superior a 200 mM de arginina, 205 mM de arginina, superior a 210 mM de arginina, superior a 215 mM de arginina, superior a 220 mM de arginina, superior a 230 mM de arginina, superior a 240 mM de arginina, superior a 250 mM de arginina, superior a 275 mM de arginina, superior a 300 mM de arginina o superior a 350 mM de arginina. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración superior a 200 mM de arginina. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración superior a 220 mM de arginina.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración de hasta 800 mM de arginina, hasta 700 mM de arginina, hasta 650 mM de arginina, hasta 600 mM de arginina, hasta 550 mM de arginina, hasta 500 mM de arginina, hasta 450 mM de arginina o hasta 400 mM de arginina.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración de 25 mM a 600 mM de arginina, de 50 mM a 600 mM de arginina, de 75 mM a 600 mM de arginina, de 100 mM a 600 mM de arginina, de 125 mM a 500 mM de arginina, de 150 mM a 400 mM de arginina, de 175 mM a 400 mM de arginina, de 200 mM a 350 mM de arginina. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende una concentración de 150 mM a 400 mM de arginina.

Según se describe en la presente, las formulaciones de anticuerpos que comprenden unas concentraciones elevadas de arginina presentan una mayor estabilidad en función del tiempo. La estabilidad del anticuerpo en la formulación de anticuerpos se puede determinar utilizando varios medios. En algunas modalidades, la estabilidad del anticuerpo se determina mediante cromatografía por exclusión de tamaño (SEC). La SEC separa analitos (p. ej., macromoléculas tales como proteínas y anticuerpos) basándose en una combinación de su tamaño hidrodinámico, coeficiente de difusión y propiedades de superficie. De este modo, por ejemplo, la SEC puede separar anticuerpos en su conformación tridimensional natural de anticuerpos en varios estados de desnaturalización y/o anticuerpos que han sido degradados. En la SEC, la fase estacionaria está compuesta en general por partículas inertes empaquetadas en una matriz tridimensional densa en el interior de una columna de vidrio o acero. La fase móvil puede ser agua pura, un amortiguador acuoso, un disolvente orgánico, mezclas de estos u otros disolventes. Las partículas de la fase estacionaria tienen unos poros y/o canales pequeños que permitirán que tan solo especies con un tamaño inferior a un tamaño determinado puedan entrar. Por consiguiente, las partículas grandes quedan excluidas de estos poros y canales, mientras que las partículas más pequeñas se eliminan de la fase móvil en flujo. El tiempo que las partículas pasan inmovilizadas en los poros de la fase estacionaria depende, en parte, de la profundidad a la que hayan podido penetrar en el poro. Su eliminación del flujo de fase móvil provoca que su elución de la columna lleve más tiempo y como resultado se obtiene una separación entre las partículas basada en las diferencias de su tamaño.

En algunas modalidades, la SEC se combina con una téenica de identificación para identificar o caracterizar proteínas o fragmentos de estas. La identificación y caracterización de proteínas se puede llevar a cabo utilizando varias técnicas, que incluyen, sin carácter limitante, técnicas cromatográficas, p. ej., cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), inmunoensayos, electroforesis, espectroscopia ultravioleta/visible/infrarroja, espectroscopia Raman, espectroscopia Raman amplificada en superficie, espectroscopia de masas, cromatografía de gases, dispersión estática de luz (SLS), espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier (FTIR), dicroísmo circular (CD), téenicas de desplegamiento de proteínas inducido por urea, fluorescencia intrínseca de triptófano, calorimetría diferencial de barrido y/o unión de proteínas a ANS.

En algunas modalidades, la identificación de proteínas se lleva a cabo mediante cromatografía líquida de alta resolución. Los expertos en la técnica conocen varios instrumentos y aparatos para realizar la HPLC. Generalmente, la HPLC implica introducir un disolvente líquido que contiene la proteína de interés en una columna de separación, en la cual tiene lugar la separación. La columna de separación de HPLC se rellena con partículas sólidas (p. ej., sílice, polímeros o sorbentes) y la mezcla de la muestra se separa en compuestos a medida que interacciona con las partículas de la columna. La separación por HPLC se ve afectada por las condiciones del disolvente liquido (p. ej., presión, temperatura), las interacciones químicas entre la mezcla de la muestra y el disolvente líquido (p. ej., hidrofobicidad, protonación, etc.) y las interacciones químicas entre la mezcla de la muestra y las partículas sólidas empaquetadas dentro de la columna de separación (p. ej., afinidad del ligando, intercambio iónico, etc.).

En algunas modalidades, la SEC y la identificación de proteínas tienen lugar en el mismo aparato o de forma simultánea. Por ejemplo, la SEC y la HPLC se pueden combinar, lo cual se denomina a menudo SE-HPLC.

La estabilidad del anticuerpo en la formulación de anticuerpos se puede determinar separando los diferentes anticuerpos y productos de degradación de los anticuerpos empleando téenicas conocidas tales como las técnicas identificadas en la presente. El término "estabilidad", tal como se utiliza en la presente, se refiere en general a mantener la integridad o minimizar la degradación, desnaturalización, agregación o desplegamiento de un agente biológicamente activo tal como una proteína, un péptido u otra macromolécula bioactiva. La expresión "estabilidad mejorada", tal como se utiliza en la presente, se refiere en general a que, en condiciones que se sabe que provocan degradación, desnaturalización, agregación o desplegamiento, la proteína (p. ej., un anticuerpo tal como un anticuerpo anti-IL6 (YTE)), el péptido u otra macromolécula bioactiva de interés mantiene una estabilidad mayor en comparación con una proteína, péptido u otra macromolécula bioactiva de control. Por ejemplo, la expresión "estabilidad mejorada en presencia de arginina" reflejaría que una proteína de interés, p. ej., un anticuerpo anti-IL6(YTE), en presencia de arginina, presentaría unas cantidades menores de degradación, desnaturalización, agregación o desplegamiento del anticuerpo anti-IL6(YTE) en comparación con el mismo anticuerpo que no se encuentre en presencia de arginina.

En algunas modalidades, la estabilidad se refiere a una formulación de anticuerpos con unos niveles de bajos a indetectables de agregación. La expresión "unos niveles de bajos a indetectables de agregación", tal como se utiliza en la presente, se refiere a muestras que no contienen más de un 5%, más de un 4%, más de un 3%, más del 2%, más de 1% y más de un 0.5% de agregación en peso de la proteína que se mide mediante cromatografía por exclusión de tamaño de alta resolución (HPSEC), dispersión estática de luz (SLS), espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier (FTIR), dicroísmo circular (CD), téenicas de desplegamiento de proteínas inducido por urea, fluorescencia intrínseca de triptófano, calorimetría diferencial de barrido y técnicas de unión de proteínas al ácido l-anilino-8-naftalenosulfónico (ANS).

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos presenta unos niveles de bajos a indetectables de fragmentación. La expresión "unos niveles de bajos a indetectables de fragmentación", tal como se utiliza en la presente, se refiere a muestras que contienen una cantidad equivalente o superior a un 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de la proteína total, por ejemplo, en un único pico que se determina mediante HPSEC o en dos picos (p. ej., cadenas ligera y pesada) (o tantos picos como subunidades haya) mediante electroforesis capilar reducida en gel (rCGE), que representan el anticuerpo no degradado o un fragmento no degradado de este, y que no contienen ningún otro pico individual que contenga más de un 5%, más de un 4%, más de un 3%, más de un 2%, más de un 1% o más de un 0.5% de la proteína total en cada uno de ellos. La expresión "electroforesis capilar reducida en gel", tal como se utiliza en la presente, se refiere a la electroforesis capilar en gel en condiciones reductoras suficientes para reducir los enlaces disulfuro en un anticuerpo.

Un experto en la téenica apreciará que la estabilidad de una proteína depende de otras características, además de la composición de la formulación. Por ejemplo, la estabilidad se puede ver afectada por la temperatura, presión, humedad y formas externas de radiación. De este modo, a menos que se especifique de otro modo, se considera que la estabilidad a la que se hace referencia en la presente se mide a 2-8 °C, presión de una atmósfera, humedad relativa de un 60% y unos niveles de radiación de fondo normales.

El término "estable" es relativo y no absoluto. De este modo, a los efectos de la presente, en algunas modalidades el anticuerpo es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o ménos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 6 meses. En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 12 meses. En algunas modalidades, el anticuerpo de la formulación de anticuerpos es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 18 meses. En algunas modalidades, el anticuerpo de la formulación de anticuerpos es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 24 meses.

En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 23 °C y 27 °C durante 3 meses. En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 23 °C y 27 °C durante 6 meses. En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 23 °C y 27 °C durante 12 meses. En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 20%, menos de un 15%, menos de un 10%, menos de un 5% o menos de un 2% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a una temperatura comprendida entre 23 °C y 27 °C durante 24 meses.

En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 6%, menos de un 4%, menos de un 3%, menos de un 2% o menos de un 1% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega por mes, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a 40 °C. En algunas modalidades, el anticuerpo es estable si menos de un 6%, menos de un 4%, menos de un 3%, menos de un 2% o menos de un 1% del anticuerpo se degrada, desnaturaliza, agrega o despliega por mes, lo cual se determina mediante SEC HPLC, cuando el anticuerpo se almacena a 5 °C.

En algunas modalidades, se puede considerar que las formulaciones de anticuerpos de la presente invención son estables si el anticuerpo exhibe una pérdida muy pequeña o nula de la actividad de unión del anticuerpo (incluidos sus fragmentos de anticuerpo) de la formulación en comparación con un anticuerpo de referencia, lo cual se mide mediante ensayos de unión del anticuerpo conocidos por los expertos en la téenica tales como, p. ej., ELISA, etc., durante un periodo de 8 semanas, 4 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses o 24 meses.

Las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente pueden presentar varias viscosidades. Los métodos para medir la viscosidad de formulaciones de anticuerpos son conocidos por los expertos en la técnica y pueden incluir, p. ej ., un reómetro (p. ej., un reómetro Antón Paar MCR301 con un accesorio de cono de 50 mm, 40 mm o 20 mm). En algunas modalidades de la presente invención, las viscosidades se registran con un límite de cizallamiento elevado de 1000 por segundo para la tasa de cizallamiento. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP, inferior a 18 cP, inferior a 15 cP, inferior a 13 cP o inferior a 11 cP. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 14 cP. Un experto en la téenica apreciará que la viscosidad depende de la temperatura, por lo tanto, a menos que se especifique de otro modo, las viscosidades proporcionadas en la presente se miden a 23 °C, a menos que se especifique de otro modo. En algunas modalidades, la viscosidad de la formulación de anticuerpos es inferior a 14 cP a 23 °C.

La expresión "fuerza de inyección" se refiere a la cantidad de presión (en Newtons) necesaria para hacer pasar la formulación de anticuerpos a través de una aguja. La fuerza de inyección se correlaciona con la cantidad de resistencia proporcionada por la formulación de anticuerpos cuando se administra la formulación de anticuerpos a un sujeto. La fuerza de inyección dependerá del calibre de la aguja utilizada para la administración, así como también de la temperatura. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos presenta una fuerza de inyección inferior a 15 N, 12 N, 10 N u 8 N cuando se hace pasar a través de una aguja de PFS de pared delgada de calibre 27, según se define en el documento de la Organización Internacional de Normalización (ISO, por sus siglas en inglés) "Stainless Steel needle tubing for the manufacture of medical devices" (ISO 9626:1991) y fabricada por BD Medical, Pharmaceutical Systems (Franklin Lakes, NJ). En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos presenta una fuerza de inyección inferior a 15 N, 12 N, 10 N u 8 N cuando se hace pasar a través de una aguja de calibre 25 o 26.

Las formulaciones de anticuerpos pueden presentar diferentes concentraciones de osmolaridad. Los métodos para medir la osmolaridad de formulaciones de anticuerpos son conocidos por los expertos en la téenica y pueden incluir, p. ej., un osmómetro (p. ej., un osmómetro de descenso del punto de congelación Advanced Instrument Inc 2020). En algunas modalidades, la formulación presenta una osmolaridad comprendida entre 200 y 600 mosm/kg, entre 260 y 500 mosm/kg, o entre 300 y 450 mosm/kg. En algunas modalidades, la formulación no comprende ningún osmolito.

La formulación de anticuerpos de la presente invención puede presentar diferentes niveles de pH. En algunas modalidades, el pH de la formulación de anticuerpos está comprendido entre 4 y 7, entre 4.5 y 6.5, o entre 5 y 6. En algunas modalidades, el pH de la formulación de anticuerpos es de 6.0. Se pueden utilizar varios medios para conseguir el nivel de pH deseado, que incluyen, sin carácter limitante, la adición del amortiguador adecuado.

Se pueden incluir otros componentes diferentes en la formulación de anticuerpos. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos puede comprender un amortiguador (p. ej., un amortiguador de acetato, fosfato o citrato), un tensioactivo (p. ej ., polisorbato) y/o un agente estabilizante (p. ej., albúmina humana), etc. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos puede comprender portadores farmacéuticamente aceptables, que incluyen, p. ej., intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas del suero, tales como la albúmina de suero humano, sustancias amortiguadoras tales como fosfatos, sacarosa, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas constituidas por glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, y polietilenglicol.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende además un tensioactivo. En algunas modalidades, el tensioactivo se selecciona del grupo constituido por polisorbato, pluronics, Brij y otros tensioactivos no iónicos. En algunas modalidades, el tensioactivo es polisorbato 80. La concentración de tensioactivo en la formulación puede variar. Por ejemplo, en algunas modalidades, la concentración de tensioactivo en la formulación es de aproximadamente un 0.001% a aproximadamente un 1%, de aproximadamente un 0.005% a aproximadamente un 0.5%, de aproximadamente un 0.0.01% a aproximadamente un 0.1% o de aproximadamente un 0.05% a aproximadamente un 0.07%.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende además histidina. En algunas modalidades, la concentración de histidina en la formulación es de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 200 mM, de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 100 mM, de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 50 mM o de aproximadamente 25 mM.

En algunas modalidades, se pueden omitir varios componentes de la formulación de anticuerpos o esta puede estar "sustancialmente exenta" de ese componente. La expresión "sustancialmente exenta", tal como se utiliza en la presente, se refiere a una formulación de anticuerpos donde la formulación contiene menos de un 0.01%, menos de un 0.001%, menos de un 0.0005%, menos de un 0.0003% o menos de un 0.0001% del componente designado.

En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de trealosa, es decir, la formulación de anticuerpos contiene menos de un 0.01%, menos de un 0.001%, menos de un 0.0005%, menos de un 0.0003% o menos de un 0.0001% de trealosa. En algunas modalidades, la formulación comprende una concentración de trealosa de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 1000 mM, de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 500 mM, de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 350 mM, de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 250 mM, de aproximadamente 180 mM o de aproximadamente 225 mM. En algunas modalidades, la trealosa se utiliza combinada con arginina. Las concentraciones de arginina y trealosa pueden variar y pueden ser independientes unas de las otras. En algunas modalidades, la relación molar de arginina:trealosa puede ser de aproximadamente 0:1, aproximadamente 1:20, aproximadamente 1:10, aproximadamente 1:8, aproximadamente 1:5, aproximadamente 1:2, aproximadamente 1:1, aproximadamente 2:1, aproximadamente 5:1, aproximadamente 10:1 o aproximadamente 10:0.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos está sustancialmente exenta de un sacárido, es decir, la formulación de anticuerpos, la formulación contiene menos de un 0.01%, menos de un 0.001%, menos de un 0.0005%, menos de un 0.0003% o menos de un 0.0001% de un sacárido. El término "sacárido", tal como se utiliza en la presente, se refiere a una clase de moléculas que son derivados de alcoholes polihídricos . Los sacáridos se denominan habitualmente carbohidratos y pueden contener diferentes cantidades de unidades de azúcar (sacárido), p. ej., monosacáridos , disacáridos y polisacáridos . En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de disacárido. En algunas modalidades, la formulación está sustancialmente exenta de un azúcar reductor, un azúcar no reductor o un alcohol de un azúcar. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos está sustancialmente exenta de histidina, prolina, glutamato, sorbitol, iones metálicos divalentes y/o succinato.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja que comprende: (a) de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6 (b) una concentración de 150 mM a 400 mM de arginina, (c) de un 0.01% a un 0.1% de polisorbato 80, (d) una concentración de 5 mM a 100 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 150 mg/mL de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 220 mM de arginina (p. ej ., arginina HCl) y (d) un 0.07% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 150 mg/mL de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 150 mM de arginina (p. ej., arginina HCl) y (d) un 0.07% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja que comprende: (a) de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 200 mg/mL de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6, (b) una concentración de 20 mM a 400 mM de arginina, (c) de un 0.01% a un 0.1% de polisorbato 80, (d) una concentración de 5 mM a 100 mM de histidina y opcionalmente (e) una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 400 mM de trealosa, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 50 mg/mL de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 225 mM de trealosa y (d) un 0.05% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 100 mg/mL de un anticuerpo, p. ej., un anticuerpo anti-IL6, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 180 mM de trealosa, (d) una concentración 25 mM de arginina y (e) un 0.07% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja que comprende: (a) de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración de 150 mM a 400 mM de arginina, (c) de un 0.01% a un 0.1% de polisorbato 80, (d) una concentración de 10 mM a 50 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 150 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 220 mM de arginina (p. ej., arginina HCl) y (d) un 0.07% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 150 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 150 mM de arginina (p. ej., arginina HCl) y (d) un 0.07% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0.

En algunas modalidades, la invención se refiere a una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja que comprende: (a) de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 200 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración de 20 mM a 400 mM de arginina, (c) de un 0.01% a un 0.1% de polisorbato 80, (d) una concentración de 5 mM a 100 mM de histidina y opcionalmente (e) una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 400 mM de trealosa, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 50 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración 25 M de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 225 mM de trealosa y (d) un 0.05% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0. En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos comprende (a) 100 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2, (b) una concentración 25 mM de histidina (p. ej., L-histidina/clorhidrato de L-histidina monohidratado), (c) una concentración 180 mM de trealosa, (d) una concentración 25 mM de arginina y (e) un 0.07% (p/v) de polisorbato 80, a un pH de 6.0.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar a un paciente con un componente de dolor inflamatorio mediante la administración de la formulación de anticuerpos descrita en la presente. En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar a un paciente con una vía dependiente de IL6 activada mediante la administración de la formulación de anticuerpos descrita en la presente. En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar el dolor en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente. En algunas modalidades, ía invención se refiere a un método para tratar el dolor asociado con la osteoartritis en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente. En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar el dolor asociado con el dolor lumbar crónico en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente.

El término "sujeto", tal como se utiliza en la presente, se puede utilizar indistintamente con "paciente" y se refiere a cualquier animal clasificado como un mamífero, incluidos los seres humanos y no humanos tales como, sin carácter limitante, animales de granja y domésticos, animales de zoológico, animales que participan en deportes y mascotas. En algunas modalidades, el sujeto se refiere a un ser humano.

Los términos "tratar" y "tratamiento" se refieren tanto a un tratamiento terapéutico como a medidas profilácticas, de mantenimiento o preventivas, donde el objeto es prevenir o aliviar (atenuar) una afección, trastorno o enfermedad fisiológica indeseada u obtener unos resultados clínicos deseados o beneficiosos. Los términos "tratar", "tratamiento" y "que trata" se refieren a la reducción o la mejora de la evolución, gravedad y/o duración de tal enfermedad o trastorno (p. ej., una enfermedad o trastorno caracterizado por la actividad y/o expresión anómala de un polipéptido de tipo IL6, una enfermedad o trastorno caracterizado por la actividad y/o expresión anómala de un receptor de IL6 o una o más subunidades de este, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa o una infección (preferentemente, una infección respiratoria)) o la mejora de uno o más de sus síntomas, como resultado de la administración de una o más terapias (que incluyen, sin carácter limitante, la administración de uno o más agentes terapéuticos o profilácticos). En ciertas modalidades, tales términos se refieren a la reducción del dolor asociado con varias afecciones. En otras modalidades, tales términos se refieren a la reducción de la liberación de agentes inflamatorios por parte de los mastocitos o a la reducción del efecto biológico de tales agentes inflamatorios. En otras modalidades, tales términos se refieren a una reducción del crecimiento, la formación y/o el incremento del número de células hiperproliferativas (p. ej., células cancerosas). En otras modalidades más, tales términos se refieren a la erradicación, eliminación o control de un cáncer primario, regional o metastásico (p. ej., la minimización o ralentización de la propagación del cáncer). En otras modalidades más, tales términos se refieren a la erradicación, eliminación o control (p. ej., la minimización o ralentización de la propagación del cáncer) de un cáncer de pulmón no microcítico. En otras modalidades más, tales términos se refieren a la erradicación, eliminación o control de la artritis reumatoide. En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para tratar la artritis reumatoide en un sujeto, donde el método comprende administrar las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente.

En algunas modalidades, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de las formulaciones de anticuerpos descritas en la presente para tratar una afección. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", tal como se utiliza en la presente, se refiere a la cantidad de una terapia (p. ej., un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a un polipéptido de tipo IL6) que es suficiente para reducir la gravedad de una enfermedad o trastorno (p. ej., una enfermedad o trastorno caracterizado por la actividad y/o expresión anómala de un polipéptido de tipo IL6, una enfermedad o trastorno caracterizado por la actividad y/o expresión anómala de un receptor de IL6 o una o más subunidades de este, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa o una infección (preferentemente, una infección respiratoria) o uno o más de sus síntomas), reducir la duración de una afección respiratoria, mejorar uno o más síntomas de tal enfermedad o trastorno, prevenir el avance de tal enfermedad o trastorno, provocar la regresión de tal enfermedad o trastorno, o potenciar o mejorar el o los efectos terapéuticos de otra terapia. En algunas modalidades, la cantidad terapéuticamente eficaz no se puede especificar por adelantado y puede ser determinada por un cuidador, por ejemplo, por un médico u otro profesional sanitario, utilizando varios medios, por ejemplo, la titulación de la dosis. Las cantidades terapéuticamente eficaces adecuadas también se pueden determinar mediante experimentación rutinaria utilizando, por ejemplo, modelos con animales.

Los términos "terapias" y "terapia" se pueden referir a cualquier o cualesquiera protocolos, métodos y/o agentes que se pueden utilizar en la prevención, el tratamiento, la gestión o la mejora de una enfermedad o trastorno (p. ej., una enfermedad o trastorno caracterizado por la actividad y/o expresión anómala de un polipéptido de tipo IL6, una enfermedad o trastorno caracterizado por la actividad y/o expresión anómala de un receptor de IL6 o una o más subunidades de este, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa o una infección (preferentemente, una infección respiratoria) o uno o más de sus síntomas). En ciertas modalidades, los términos "terapia" y "terapia" se refieren a una terapia antivírica, terapia antibacteriana, terapia antifúngica, terapia biológica, terapia de apoyo y/u otras terapias útiles en el tratamiento, la gestión, la prevención o la mejora de tal enfermedad o trastorno o uno o más síntomas conocidos por el personal médico experto.

La expresión "protocolo terapéutico", tal como se utiliza en la presente, se refiere a un régimen para dosificar y programar la administración de una o más terapias (p. ej., agentes terapéuticos) que presenta una eficacia terapéutica.

La vía de administración de la formulación de anticuerpos de la presente invención puede ser mediante, por ejemplo, modos de administración orales, parenterales, de inhalación o tópicos. El término "parenteral ", tal como se utiliza en la presente, incluye, p. ej., la administración intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, rectal o vaginal. En algunas modalidades, el anticuerpo aislado es un anticuerpo anti-IL6 (p. ej., un anticuerpo anti-IL6(YTE)) y la vía de administración es una inyección subcutánea. Aunque se contempla claramente que todas estas formas de administración se encuentran dentro del alcance de la invención, en algunas modalidades, la formulación de anticuerpos es adecuada para la administración mediante inyección, en particular para el goteo o la inyección intraarterial o intravenosa.

En algunas modalidades, la formulación de anticuerpos se diluye en una formulación intravenosa antes de su administración a un sujeto. En algunos casos, se puede producir una formación visible de partículas al diluir la formulación de anticuerpos en la formulación intravenosa, p. ej., una bolsa IV. Para resolver el problema de la formación de partículas, en algunas modalidades, se proporciona un método para reducir la formación de partículas cuando se diluye una formulación de anticuerpos en una bolsa intravenosa, donde el método comprende añadir un amortiguador y un tensioactivo a la bolsa intravenosa antes de añadir la formulación de anticuerpos.

La expresión "protector de la bolsa IV" se refiere al tensioactivo añadido a la bolsa intravenosa antes de la dilución de la formulación de anticuerpos descrita en la presente en la bolsa intravenosa. El protector de la bolsa IV también se puede añadir a la bolsa intravenosa antes de la adición de otras formulaciones de anticuerpos conocidas por los expertos en la téenica, p. ej., una formulación de anticuerpos liofilizada.

Los tensioactivos adecuados para ser utilizados como un protector de la bolsa IV serán generalmente aquellos que sean adecuados para ser utilizados en formulaciones IV. En algunas modalidades, el tensioactivo utilizado en el protector de la bolsa IV es el mismo amortiguador empleado en la formulación de anticuerpos. Por ejemplo, si la formulación de anticuerpos comprende polisorbato 80 como tensioactivo, entonces el polisorbato 80 se añadiría a la bolsa intravenosa antes de añadir la formulación de anticuerpos a la bolsa intravenosa.

En algunas modalidades, el protector de la bolsa IV comprende un tensioactivo que, cuando se añade a una formulación IV, producirá una concentración de tensioactivo comprendida en el intervalo de aproximadamente un 0.006% a aproximadamente un 0.018% de tensioactivo, de aproximadamente un 0.008% a aproximadamente un 0.015% de tensioactivo, de aproximadamente un 0.009% a aproximadamente un 0.012% de tensioactivo, aproximadamente un 0.009% de tensioactivo, aproximadamente un 0.010% de tensioactivo, aproximadamente un 0.011% de tensioactivo o aproximadamente un 0.012% de tensioactivo en la formulación IV. En algunas modalidades, el tensioactivo es polisorbato 80 (PS80) el cual, cuando se añade a una formulación IV, producirá una concentración de tensioactivo comprendida en el intervalo de aproximadamente un 0.006% a aproximadamente un 0.018% de tensioactivo, de aproximadamente un 0.008% a aproximadamente un 0.015% de tensioactivo, de aproximadamente un 0.009% a aproximadamente un 0.012% de tensioactivo, aproximadamente un 0.009% de tensioactivo, aproximadamente un 0.010% de tensioactivo, aproximadamente un 0.011% de tensioactivo o aproximadamente un 0.012% de tensioactivo en la formulación IV. En algunas modalidades, la concentración de tensioactivo en la bolsa IV resultante de la adición del protector IV será aproximadamente la misma, aproximadamente la mitad o aproximadamente una séptima parte de la concentración de tensioactivo en la formulación de anticuerpos.

Sabiendo la concentración final deseada de tensioactivo en la bolsa IV, se puede formular la concentración deseada de tensioactivo en el protector de la bolsa IV. Por ejemplo, en algunas modalidades, el protector de la bolsa IV puede comprender de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 10.0% de tensioactivo, de aproximadamente un 0.05% a aproximadamente un 5% de tensioactivo, de aproximadamente un 0.1% a aproximadamente un 2% de tensioactivo o de aproximadamente un 0.5% a aproximadamente un 1% de tensioactivo.

En algunas modalidades, la invención puede referirse a un kit, donde el kit comprende (1) una formulación de anticuerpos y (2) una formulación de un protector IV. En algunas modalidades, la invención puede referirse a un kit, donde el kit comprende (1) una formulación de anticuerpos y (2) un protector IV, comprendiendo el protector IV un tensioactivo. En algunas modalidades, el tensioactivo es polisorbato 80. En algunas modalidades, la invención puede referirse a un kit, donde el kit comprende (1) una formulación de anticuerpos según se describe en la presente y (2) un protector IV. En algunas modalidades, la invención puede referirse a un kit, donde el kit comprende (1) una formulación de anticuerpos según se describe en la presente y (2) un protector IV, donde (i) el protector IV comprende polisorbato 80 en una cantidad suficiente para producir polisorbato 80 en el intervalo de aproximadamente un 0.006% a aproximadamente un 0.018% cuando se añade a una formulación IV.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para pretratar una formulación IV, p. ej., una bolsa IV, antes de la dilución de una formulación de anticuerpos en la formulación IV, donde el método comprende (1) añadir un protector IV según se describe en la presente a la formulación IV y (2) añadir la formulación de anticuerpos.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para preparar una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, donde el método comprende: (a) concentrar un anticuerpo hasta obtener de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL y (b) añadir arginina al anticuerpo de (a) para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de arginina superior a aproximadamente 150 mM. En algunas modalidades, el método comprende además (c) añadir histidina para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de histidina de 10 mM a 100 mM. En algunas modalidades, el método comprende además (d) añadir un tensioactivo, p. ej., polisorbato 80, para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de tensioactivo de un 0.02% a un 0.1%.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para preparar una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, donde el método comprende: (a) concentrar un anticuerpo hasta obtener de aproximadamente 100 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL y (b) añadir arginina al anticuerpo de (a) para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de arginina de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 200 mM. En algunas modalidades, el método comprende además (c) añadir histidina para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de histidina de 10 mM a 100 mM. En algunas modalidades, el método comprende además (d) añadir un tensioactivo, p. ej ., polisorbato 80, para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de tensioactivo de un 0.02% a un 0.1%. En alguna modalidad, el método comprende además añadir trealosa para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de trealosa de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 300 mM.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para preparar una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, donde el método comprende: (a) concentrar un anticuerpo hasta obtener de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL y (b) añadir trealosa al anticuerpo de (a) para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de trealosa de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 400 mM. En algunas modalidades, el método comprende además (c) añadir histidina para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de histidina de 10 mM a 100 mM. En algunas modalidades, el método comprende además (d) añadir un tensioactivo, p. ej., polisorbato 80, para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de tensioactivo de un 0.02% a un 0.1%.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método para preparar una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, donde el método comprende: (a) concentrar un anticuerpo hasta obtener de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL, donde el anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2; y (b) añadir arginina al anticuerpo de (a) para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de arginina superior a aproximadamente 150 mM, donde la formulación de anticuerpos de (b) se encuentra en solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C, y donde la formulación de anticuerpos de (b) es estable a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 12 meses según se determina mediante SEC HPLC .

En algunas modalidades , las composiciones y los metodos de la presente invención permiten a un fabricante producir una formulación de anticuerpos adecuada para la administración a un ser humano de un modo más eficaz, ya sea reduciendo costos, reduciendo pasos del método, reduciendo las oportunidades de error, reduciendo las oportunidades para introducir aditivos inadecuados o no seguros, etc. En la presente invención, las formulaciones de anticuerpos se pueden administrar sin reconstituir el anticuerpo liof ilizado .

EJEMPLOS Ejemplo 1 Materiales y métodos Materiales Todos los materiales utilizados fueron de grado muíticompendio o USP. Todas las soluciones y amortiguadores se prepararon utilizando agua para HPLC o USP y se filtraron a través de filtros de PVDF de 0.2 mm (Millipore, Millex GV, SLG033RB) antes de su uso posterior. Se purificó el anticuerpo anti-IL6(YTE) purificado. Las muestras del anticuerpo anti-IL6(YTE) purificado para los estudios de estabilidad se prepararon en condiciones asépticas estériles en una cabina de bioseguridad (BSC, por sus siglas en inglés). El material a granel se almacenó a 2-8 °C.

Métodos i. Determinación de la concentración de proteína Las concentraciones del anticuerpo anti-IL6(YTE) se determinaron midiendo la absorbancia a 280 nm con un espectrofotómetro UV-Vis Agilent. Se utilizó un coeficiente de extinción medido de 1.71 (mg/mL)^enr1 para calcular las concentraciones de proteína. ii. Determinación de la pureza mediante cromatografía por exclusión de tamaño El análisis de cromatografía por exclusión de tamaño (SEC) se llevó a cabo en un sistema de HPLC Agilent con una columna TSK-GEL G3000SWXL y una columna protectora SW (Tosh Bioscience LLC, Mongo eryville, PA) con detección UV a 280 nm. Para evaluar las muestras, se utilizó una tasa de flujo de 1.0 mL/min durante 20 minutos empleando una fase móvil de pH 6.8 que contenía fosfato de sodio 0.1 M, sulfato de sodio 0.1 M y un 0.05% (p/v) de azida de sodio. Se inyectaron aproximadamente 250 microgramos de proteína. La elución de agregados solubles, monómero y fragmentos se produjo a aproximadamente 6-8 minutos, 8.5 minutos y 9-11.5 minutos, respectivamente. iií. Determinación del nivel de fragmentación mediante cromatografía de fase inversa Los niveles de fragmentación se midieron utilizando un sistema de HPLC Agilent con una columna Michrom Bioresources PLRP-S CM810092/00. iv. Aspecto visual Se realizó una inspección visual para evaluar las partículas visibles, la claridad/opalescencia y el color siguiendo procedimientos adaptados de la PhEur (secciones 2.9.20, 2.2.1 y 2.2.2 respectivamente). v. Análisis de partículas subvisibles El análisis de partículas subvisibles se llevó a cabo utilizando o bien oscurecimiento óptico (HIAC 9705) o microscopía de flujo (generador de imágenes de microflujo Brightwell, MFI). vi . Osmolalidad La osmolalidad se midió utilizando un osmó etro de descenso del punto de congelación Advanced Instrument Inc. 2020. vii . Evaluación de la viscosidad Las viscosidades de las formulaciones de anti-IL6(YTE) con varias concentraciones se midieron utilizando un reómetro Antón Paar MCR301. viii . Estudios de estabilidad de la formulación El anticuerpo anti-IL6(YTE) formulado con diferentes excipientes se introdujo en viales de vidrio de 3 cc, 13 mm. Para un cribado acelerado, las muestras se estabilizaron a 40 °C/75% de HR y a 25 °C/60% de HR y 5 °C. Las muestras se analizaron mediante SEC HPLC, RP HPLC y los viales se inspeccionaron visualmente para detectar partículas. Además, se analizaron puntos de evaluación seleccionados para determinar la potencia, osmolalidad, pH, HIAC y MFI según procediera. ix. Cribado de estabilidad coloidal utilizando la turbidez La estabilidad coloidal se cribó midiendo la turbidez de varias formulaciones del anticuerpo anti-IL6 en función del tiempo utilizando un espectrofotómetro UV-Vis de múltiples celdas Cary Eclipse cuando se sometieron a una temperatura elevada de aproximadamente 62 °C. Las formulaciones menos estables se vuelven turbias a medida que forman materiales particulados y precipitados (es decir, presentan una absorbancia más elevada a 360 nm) con el tiempo, mientras que las formulaciones más estables coloidalmente permanecen transparentes durante un periodo más prolongado. x. Estabilidad termica utilizando calorimetría diferencial de barrido Los experimentos de calorimetría diferencial de barrido (CDB) se llevaron a cabo en un calorímetro diferencial de barrido ultrasensible VP-DSC (Microcal, Northampton, MA) utilizando una placa de 96 pocilios con una concentración de proteína de 1 mg/mL. Las muestras se calentaron desde 20 hasta 100 °C con una tasa de 90 °C por hora. Los datos de la capacidad calorífica normalizada (Cp) se corrigieron para tener en cuenta la línea base del amortiguador. La primera transición de fusión (Tmi) y la segunda transición de fusión (Tm2) se utilizaron para clasificar los excipientes por orden de acuerdo con su efecto estabilizante sobre la estabilidad conformacional de la proteína. xi . Estabilidad termica utilizando fluorimetría diferencial de barrido Los experimentos de fluorimetría diferencial de barrido (FDB) se realizaron con una concentración de proteína de aproximadamente 0.5 mg/mL con tinte naranja SYPRO (Invitrogen, S6651) para un nivel 5X (la concentración original es de 5000X). Se mezclaron patrones de los excipientes con patrón de proteína/tinte (aprox.5 mg/mL de proteína y 50X de tinte) con una proporción 9:1 para obtener los niveles objetivo formulados en soluciones isotónicas de varios excipientes. El tinte, junto con la solución de proteína y el amortiguador/excipiente, se mezcló completamente para 25 mL por pocilio en una placa de 96 pocilios. Se midieron los incrementos de fluorescencia debidos a la unión del tinte a moléculas proteicas desplegadas utilizando un lector de placas de PCR BioRad C1000 Thermal Cycler. Las muestras se analizaron por triplicado y se calentaron desde 20 hasta 90 °C con incrementos de 0.2 °C durante 10 s por lectura, lo cual dio como resultado una tasa de 1.2 °C/min. El punto de inflexión en la fluorescencia se registró como Th, una medida de la estabilidad conformacional de la proteína.

Ejemplo 2 Estabilidad térmica conformacional Se investigó el efecto que ejercen varios excipientes sobre la estabilidad conformacional (térmica) del anticuerpo anti-IL6(YTE) según se ha descrito en el Ejemplo 1. Los resultados se presentan en la Tabla 1.

Tabla 1: Estabilidad conformacional (térmica): evaluación de los efectos de los excipientes Tabla 1: Estabilidad conformacional (térmica): evaluación de los efectos de los excipientes Como se puede observar en la Tabla 1, la arginina fue el excipiente menos estabilizante conformacionalmente, especialmente en comparación con las condiciones de amortiguador base de histidina 25 mM.

Investigaciones adicionales demostraron que ni siquiera se predecía que la arginina fuera el excipiente más estabilizante coloidalmente para el anticuerpo anti-IL6(YTE), según se puede observar en la FIG. 1. Los excipientes más estabilizantes coloidalmente fueron la sacarosa y la trealosa, mientras que los menos estabilizantes fueron el sulfato de sodio y NaCl.

Ejemplo 3 Evaluaciones del cribado de viscosidad y estabilidad Se evaluaron los perfiles de viscosidad y la estabilidad de múltiples formulaciones del anticuerpo anti-IL6(YTE) según se ha descrito en el Ejemplo 1 y se observó que eran aceptables tanto desde el punto de vista de la estabilidad como de la funcionalidad prevista en una jeringa. Era de esperar que una viscosidad de 14 cP proporcionara un comportamiento aceptable de la fuerza de deslizamiento en la jeringa utilizando agujas de calibre 27 de pared delgada para productos en agujas prerrellenadas (fuerza de inyección de aprox. 7 N y tiempo de inyección de 9-16 s).

La Tabla 2 resume una investigación sobre el impacto del pH, el tipo de amortiguador, el nivel de histidina el nivel de arginina sobre la estabilidad y la viscosidad de formulaciones de 100 mg/mL de anti-IL6(YTE).

Tabla 2 Las muestras 1, 2 y 3 muestran que las formulaciones del anticuerpo anti-IL6(YTE) son menos estables y más viscosas a pH más bajos. Las muestras 5, 4 y 3 muestran que el hecho de incrementar los niveles de arginina en las formulaciones del anticuerpo anti-IL6(YTE) da como resultado una estabilidad más elevada y una viscosidad más baja, las cuales son ambas propiedades deseables. Las muestras 5 y 6 muestran que el hecho de incrementar la concentración del amortiguador de histidina también puede reducir la viscosidad e incrementar la estabilidad. La estrategia de añadir histidina no se investigó adicionalmente debido a los posibles problemas conocidos relacionados con la aparición de un color amarillento con el tiempo. Estos resultados muestran que la viscosidad y la estabilidad fueron aceptables en el intervalo de pH de 5 a 6 con todas las combinaciones evaluadas. Al parecer, unos niveles más elevados de arginina a pH 6.0 son óptimos tanto para la estabilidad como para la viscosidad de anti-IL6(YTE).

Se evaluó el perfil de viscosidad de las formulaciones del anticuerpo anti-IL6(YTE) utilizando varios excipientes para determinar qué condiciones serían óptimas para una formulación de 150 mg/mL. Remítase a la FIG.2A. La trealosa, la sacarosa y el sorbitol presentaron unos perfiles de viscosidad similares entre sí y la sal no redujo de forma eficaz la viscosidad. Los datos indican que las sales son incapaces de reducir la viscosidad de las formulaciones de anticuerpos. La FIG. 2B demuestra el efecto que la arginina, el glutamato, el cloruro de sodio y la trealosa ejercen sobre la viscosidad.

Se investigó el efecto de varios excipientes adicionales sobre la viscosidad de las formulaciones del anticuerpo anti-IL6 (YTE). Los resultados se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3 Un incremento de los niveles de arginina dio como resultado unos perfiles de viscosidad más bajos (FIG. 3 y FIG. 4) . Una concentración de arginina de tan solo 25 mM es capaz de reducir la viscosidad por debajo de 10 cP nominal para 100 mg/mL. Para obtener una formulación de anticuerpos de 150 mg/mL, tanto una concentración 150 mM de arginina como una concentración 220 mM de arginina son capaces de reducir la viscosidad por debajo de aproximadamente 15 cP nominal, siendo la opción con una concentración más elevada de arginina de 220 mM sustancialmente inferior a aproximadamente 10 cP (FIG. 5). Los datos sugieren que es necesaria una concentración 150 mM de arginina para obtener el objetivo de una viscosidad < 20 cP, según se muestra en el intento de utilizar arginina 100 mM con trealosa 75 mM (FIG. 6). La formulación de anti-IL6(YTE) con arginina 220 mM presenta un perfil de viscosidad más bajo que en el caso de arginina 150 mM, con una diferencia de aprox.5 cP, para 185 mg/mL (el nivel de sobreconcentración), remítase a la FIG.7. La FIG.8 muestra la dependencia de las viscosidades respecto a la temperatura para las formulaciones principales de 100 y 150 mg/mL.

Ejemplo 4 Estudio del impacto del excipiente sobre la estabilidad y la viscosidad Se realizaron experimentos para evaluar el impacto de la trealosa y la arginina sobre múltiples parámetros de la formulación. La formulación de anticuerpos se almacenó a 40 °C o 5 °C y se determinó la pérdida de pureza en diferentes momentos. Se llevó a cabo una cromatografía por exclusión de tamaño de alta resolución según se ha descrito en el Ejemplo 1, utilizando una columna TSK-GEL G3000SWXL y una columna protectora SW (Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA) con detección UV a 280 nm. Los resultados se proporcionan en la Tabla 4.

Tabla 4 "Pasa" indica que la formulación estaba prácticamente exenta de partículas visibles. Estas evaluaciones demuestran que anti-IL6(YTE) es estable para una concentración de 100 mg/mL o superior en las formulaciones de trealosa y arginina proporcionadas anteriormente.

Ejemplo 5 Termoestabilidad de anti-IL6(YTE) Se preparó una formulación del anticuerpo anti-IL6 que contenía 150 mg/mL del anticuerpo anti-IL6 (YTE) en clorhidrato de L-histidina monohidratado/L-histidina 25 mM, clorhidrato de arginina 220 mM, 0.07% (p/v) de polisorbato 80, pH 6.0. La composición de esta formulación se muestra en la Tabla 5.

Tabla 5 Tabla 5 EP = Farmacopea Europea; NA = no se aplica; NF = Formulario Nacional; USP = Farmacopea de los Estados Unidos Se preparó una formulación del anticuerpo anti-IL6 que contenía 150 mg/mL del anticuerpo anti-IL6(YTE) en clorhidrato de L-histidina monohidratado/L-histidina 25 mM, clorhidrato de arginina 150 mM, 0.07% (p/v) de polisorbato 80, pH 6.0. La composición de esta formulación se muestra en la Tabla 6.

Tabla 6 EP = Farmacopea Europea; NA = no se aplica; NF = Formulario Nacional; USP = Farmacopea de los Estados Unidos El producto farmacológico se introdujo de forma aséptica en viales de vidrio de 3 cc, se tapó y se selló con un sobresello de aluminio.

Estabilidad termica del anticuerpo anti-IL6 (YTE) Se llevó a cabo una CDB sobre anti-IL6(YTE) con una concentración de aproximadamente 1 mg/mL en la formulación presentada en la Tabla 5 (clorhidrato de L-histidina monohidratado/L-histidina 25 inM, clorhidrato de arginina 220 mM, 0.07% (p/v) de polisorbato 80, pH 6.0.) El perfil de estabilidad térmica se muestra en la FIG.9.

Ejemplo 6 Protector de la bolsa IV i. Materiales Se utilizó una formulación liofilizada para evaluar la compatibilidad del anticuerpo anti-IL6(YTE) en bolsas para infusión intravenosa (IV) y líneas de varios tipos de múltiples proveedores. El anticuerpo anti-IL6(YTE) se encontraba en una forma liofilizada, la cual, una vez reconstituida, proporcionó 50 mg/mL del anticuerpo anti-IL6 (YTE) en clorhidrato de L-histidina monohidratado/L-histidina 25 mM, trealosa dihidratada 225 mM (8.5% [p/v]), 0.05% (p/v) de polisorbato 80, pH 6.0. ii. Métodos (a) Procedimiento para evaluar la compatibilidad Se evaluó la estabilidad en uso del CSP de anticuerpo anti-IL6 (YTE) conservado y suministrado utilizando bolsas (o botellas) IV, kits de extensión con filtro IV y materiales de contacto relacionados de varios tipos disponibles en los hospitales. El intervalo de evaluación estuvo comprendido entre 20 mg y 600 mg utilizando bolsas IV de 100 mL (de 0.2 mg/mL a 6 mg/mL). Se añadió el volumen calculado de la dosis de anticuerpo anti-IL6 (YTE) a las bolsas y se mezcló cuidadosamente. Las bolsas IV se almacenaron sin ser cubiertas tanto a temperatura ambiente (TA, aproximadamente 23 °C) como también en condiciones de refrigeración (2-8 °C) durante 24 horas. Después del tiempo de incubación adecuado, el CSP de las bolsas IV se recolectó mediante una infusión simulada a 100 mL/h con una bomba o por gravedad mediante una administración IV, un filtro y un kit de extensión con aguja. Se evaluó la estabilidad relacionada con la precipitación/formación de partículas y la recuperación del anticuerpo anti-IL6(YTE) en el CSP mediante una inspección visual, HPSEC y absorbancia ultravioleta-visible (UV-Vis). (b) Inspección visual Se realizó una inspección visual directamente en las bolsas IV y también en el material sometido a infusión simulada en viales de vidrio de 3 cc con el fármaco para evaluar las partículas visibles, la claridad/opalescencia y el color siguiendo procedimientos adaptados de la PhEur (secciones 2.9.20, 2.2.1 y 2.2.2 respectivamente). La formulación del anticuerpo anti-IL6(YTE) de partida era ligeramente opalescente y de incolora a ligeramente amarillenta. Después de la infusión simulada, los CSP del anticuerpo anti-IL6(YTE) eran transparentes y de incoloros a ligeramente amarillentos para todas las muestras de CSP. Sin embargo, cuando no se utilizó un IVBP, se observó un incremento de los niveles de partículas tras la dilución del anticuerpo anti-IL6(YTE) en las bolsas IV. El uso de IVBP mitigó la formación de partículas en el CSP. (c) Pureza y agregación soluble Se llevó a cabo una cromatografía por exclusión de tamaño de alta resolución (HPSEC) utilizando una columna TSK-GEL G3000SWXL y una columna protectora SW (Tosoh Bioscience LLC, Montgomeryville, PA) para evaluar la pureza y la agregación soluble de las muestras de CSP. (d) Concentración y recuperación La recuperación de proteína se evaluó mediante absorbancia ultravioleta-visible (UV-Vis) a 280 nm para analizar la concentración de proteína utilizando un espectrofotómetro UV-Vis Agilent Modelo 8453 (Santa Clara CA). Para las dosis que se encontraban por debajo del límite de cuantificación del UV-Vis, se utilizó HPSEC con excitación de fluorescencia a 280 nm y emisión a 335 nm, para analizar la proteína utilizando una curva de calibración patrón para el área del pico lineal. iii. Resultados y discusión (a) Formación de partículas en bolsas salinas IV En una prueba inicial sin el uso de IVBP, se observaron partículas visibles para el anticuerpo anti-IL6(YTE) en bolsas salinas IV de 100 mL y en el material recolectado en viales de vidrio de 3 cc tras la infusión simulada a través de un filtro en línea de 0.2 mieras (FIG 10). Todos los demás resultados de las pruebas fueron aceptables. Debido a que las partículas visibles presentan en general un tamaño superior a 70 mm, estas partículas visibles se deben haber formado después del filtro en línea de 0.22 mieras. De hecho, se observó que las muestras recolectadas en los viales de vidrio de 3 cc desarrollaron un incremento de los niveles de partículas durante el transcurso de las inversiones y la agitación en remolino durante el proceso de inspección visual manual. Nuestra hipótesis es que la formación de partículas se debió al hecho de que hay una cantidad insuficiente de tensioactivo presente en la solución. Para investigar esto, se añadió polisorbato adicional a las bolsas IV. (c) Investigación del impacto del nivel de tensioactivo sobre la formación de partículas Se evaluó el efecto de la dilución de polisorbato hasta aproximadamente un factor de 250 (100 mL/0.4 mL = 250, factor de dilución). El fluido salino IV se modificó con la adición de polisorbato 80 antes de añadir la dosis del anticuerpo anti-IL6(YTE) a la bolsa IV. La cantidad de polisorbato 80 añadida varió desde un 0% hasta un 0.018% p/v y se llevó a cabo la inspección visual (Tabla 7).

Tabla 7 Cabe destacar que para las dosis de 20 mg, se añadió un 0 .0002% de PS80 residual procedente de la dilución del polisorbato en el volumen de la formulación de anticuerpo anti - IL6 (YTE) añadido ( 0. 05%/250 = 0 . 0002%) . Basándose en estos datos, una cantidad superior a un 0.009% p/v de polisorbato 80 podría mitigar de forma eficaz la formación de partículas observada en el CSP. La FIG. 11 muestra una fotografía del anticuerpo anti-IL6 (YTE) en solución salina con un 0.012% p/v de polisorbato 80 añadido. (d) Uso de un protector de la bolsa IV (IVBP, por sus siglas en inglés) para mitigar la formación de partículas en bolsas IV Se utilizó un IVBP para proporcionar un nivel más elevado de polisorbato necesario para mantener la estabilidad del anticuerpo anti-IL6 (YTE) . Se fijó como objetivo un nivel final de un 0.012% p/v de polisorbato 80 para garantizar la solidez en el nivel cuando se tienen en cuenta errores y la variabilidad en el rellenado de las bolsas . El protector de la bolsa IV ( IVBP) utilizado fue un 0 .65% (p/v) de polisorbato 80 formulado en amortiguador de citrato a pH 6 . 0 . El procedimiento de preparación de la bolsa IV se modificó para tener en cuenta la adición de un volumen de 1 . 8 mL de IVBP, que se ha de mezclar cuidadosamente antes de añadir la dosis del anticuerpo anti - IL6 (YTE) . Esto proporcionó un nivel de polisorbato de aproximadamente un 0 . 012% p/v para las dosis baj as y de un 0. 018% p/v para las dosis elevadas . Se realizaron estudios de compatibilidad con el IVBP en cinco tipos de bolsas salinas IV diferentes . Se determinó que estas eran compatibles con el anticuerpo anti -IL6 (YTE) cuando se utilizó el IVBP . iv. Conclusiones En este caso práctico, la formación de partículas proteináceas en el CSP de las bolsas IV fue provocada por la dilución del polisorbato 80 por debajo de su nivel protector. Se determinó que era necesario realizar un pretratamiento con un protector de la bolsa IV (IVBP) del diluyente de la bolsa para mantener el nivel de polisorbato en la bolsa IV por encima del nivel necesario para mitigar la formación de partículas (por encima de aproximadamente un 0.009%) en el preparado estéril clínico (CSP) del anticuerpo anti-IL6(YTE). El protector de la bolsa IV (IVBP) utilizado fue un 0.65% (p/v) de polisorbato 80 formulado en amortiguador de citrato a pH 6.0 y se añadió a la bolsa antes de añadir el anticuerpo anti-IL6 (YTE). La implementación de un protector de la bolsa IV (IVBP) que contenía polisorbato mitigó completamente la formación de partículas para el CSP del anticuerpo anti-IL6 (YTE).

Ejemplo 7 Estudio del impacto del excipiente sobre la estabilidad y la viscosidad para un anticuerpo que no sea anti-IL6 Se realizaron experimentos para evaluar el impacto de la prolina y la arginina sobre múltiples parámetros de la formulación. La formulación del anticuerpo anti-IL6 y del anticuerpo que no es anti-IL6 (anticuerpo X) se almacenaron a 40 °C y 5 °C y se determinaron la pérdida de pureza y el aspecto de las partículas visibles en diferentes momentos. La estabilidad térmica se determinó utilizando CDB (VP-DSC, Microcal, Northampton, MA) . Las viscosidades de las formulaciones se midieron utilizando un reómetro Antón Paar MCR301. Se llevó a cabo una cromatografía por exclusión de tamaño de alta resolución según se ha descrito en el Ejemplo 1, utilizando una columna TSK-GEL G3000SWXL y una columna protectora SW (Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA) con detección UV a 280 nm. La estabilidad térmica se determinó utilizando CDB.

Los resultados se proporcionan en la Tabla 8. Se compararon dos formulaciones del anticuerpo X. Las dos formulaciones del anticuerpo X eran iguales, excepto que una contenía arginina 50 mM y la otra contenía prolina 50 mM. Los resultados muestran que, para el anticuerpo X, la aparición visible de partículas en la formulación de arginina fue inaceptable después de 11 semanas a 5 °C, mientras que la formulación que contenía prolina permaneció prácticamente exenta de partículas visibles. Por consiguiente, la arginina presentó un impacto negativo sobre la formación de partículas para la formulación del anticuerpo X. Ambas formulaciones del anticuerpo X presentaron unas tasas de pérdida de pureza similares en cuanto a la estabilidad, esto indica que la arginina no estabilizó ni desestabilizó el anticuerpo X, lo cual se midió por HP-SEC. La arginina redujo la viscosidad de la formulación del anticuerpo X. Cabe destacar que la Tml para el anticuerpo X en la formulación de trealosa/arginina fue significativamente superior a la del anticuerpo anti-IL6 en la formulación de arginina y, aún así, la estabilidad del anticuerpo anti-IL6 fue mucho mayor, según indican la tasa de perdida de pureza más baja y el hecho de que permaneció prácticamente exenta de partículas visibles. Estos ejemplos comparativos muestran que la arginina no estabilizó el anticuerpo X del mismo modo que estabilizó el anticuerpo anti-IL6. La tasa de pérdida de pureza del anticuerpo X no fue inferior en presencia de arginina (permaneció igual) , pero la arginina dio como resultado inestabilidad respecto a la formación de partículas .

Tabla 8 Ejemplo 8 Impacto de la arglnina y otros excipientes sobre la estabilidad de cuatro anticuerpos diferentes Se llevaron a cabo experimentos con el fin de evaluar el 0 impacto de varios excipientes sobre la estabilidad del anticuerpo anti-IL6 y también de varios anticuerpos diferentes que no eran anti-IL6 para múltiples concentraciones. Los excipientes estudiados fueron el amortiguador base (sin excipientes), trealosa, sal y 5 clorhidrato de arginina. La estabilidad térmica se determinó utilizando CDB para los diferentes anticuerpos. Las formulaciones de los anticuerpos se almacenaron a 40 °C y la tasa de pérdida de pureza se midió utilizando HP-SEC. Se llevó a cabo una cromatografía por exclusión de tamaño de 0 alta resolución (HP-SEC) según se ha descrito en el Ejemplo 1, utilizando una columna TSK-GEL G3000SWXL y una columna protectora SW (Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA) con detección UV a 280 nm.

Los resultados de los estudios se resumen en la Tabla 9. 5 El impacto de la arginina comparado con el caso base de solo amortiguador se resume en la Tabla 10 para todos los anticuerpos. No se observó ninguna tendencia uniforme del impacto de la arginina sobre las tasas de pérdida de pureza para los cuatro anticuerpos, aunque la arginina provocó una reducción de la Tml para todos los anticuerpos. El anticuerpo anti-IL6 fue el único anticuerpo que se vio sustancialmente estabilizado por la arginina, de entre estos cuatro anticuerpos. La arginina no tuvo ningún impacto sobre la tasa de pérdida de pureza para dos de los anticuerpos (dentro de la variabilidad del ensayo de aproximadamente un 0.2% de diferencia en la pérdida de pureza por mes o inferior). Un anticuerpo fue desestabilizado por la arginina (anticuerpo B, Tabla 9, fila 14).

Para el anticuerpo anti-IL6 (Tabla 9, filas 1-6), las formulaciones de arginina presentaron una Tml medida inferior, pero fueron las más estables cuando se evaluó la tasa de pérdida de pureza. Por el contrario, la arginina redujo la Tml para el anticuerpo B y también incrementó la tasa de pérdida de pureza, mientras que la trealosa incrementó la Tml y redujo la tasa de pérdida de pureza (Tabla 9, filas 11-14). Para los anticuerpos A y C, la Tml aumentó para la trealosa y se redujo tanto para la sal como para la arginina, a pesar de ello la tasa de pérdida de pureza se mantuvo en un 0.2% por mes (dentro de la variación esperada del ensayo), lo cual sugiere que todas las ildlFaea forbltaamulaciones presentaron una estabilidad similar.

Tabla 9 Tabla 10 Todas las diferentes modalidades u opciones descritas en la presente se pueden combinar en todas y cada una de sus variaciones. Aunque la invención se ha presentado y descrito particularmente haciendo referencia a algunas modalidades de esta, los expertos en la téenica sobreentenderán que estas se han presentado únicamente a modo ilustrativo y sin carácter limitante, y que se pueden realizar varios cambios en la forma y los detalles de la presente sin alejarse de la naturaleza y el alcance de la invención. Por lo tanto, la extensión y el alcance de la presente invención no deben estar limitados por ninguna de las modalidades ilustrativas descritas anteriormente, sino que se deben definir únicamente de acuerdo con las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes.

Todos los documentos citados en la presente, incluidos los artículos o resúmenes de revistas, solicitudes de patente extranjeras o de los EE. UU. correspondientes o publicadas, patentes extranjeras o presentadas, o cualesquiera documentos adicionales, se incorporan, cada uno de ellos, por completo a la presente por referencia, incluidos todos los datos, tablas, figuras y texto que se presentan en los documentos citados.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (30)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo anti-IL6 y b. una concentración superior a 150 mM de arginina, donde la formulación de anticuerpos se encuentra en solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23 °C.

2. La formulación de anticuerpos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo anti-IL6 comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12.

3. La formulación de anticuerpos de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el anticuerpo anti-IL6 comprende la SEQ ID NO:1 y la SEQ ID NO:2.

. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque el anticuerpo es estable a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 12 meses, según se determina mediante SEC HPLC.

5. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque la viscosidad de la formulación de anticuerpos es inferior a 14 cP a 23 °C.

6. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque comprende una concentración superior a 200 mM de arginina.

7. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque comprende una concentración superior a 220 mM de arginina.

8. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque comprende una concentración de 150 mM a 400 mM de arginina.

9. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque comprende además un tensioactivo.

10. La formulación de anticuerpos de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el tensioactivo se selecciona del grupo constituido por polisorbato, pluronics, Brij y otros tensioactivos no iónicos.

11. La formulación de anticuerpos de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el tensioactivo es polisorbato 80.

12 . La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque la formulación comprende además histidina.

13. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque está sustancialmente exenta de trealosa.

14. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque está sustancialmente exenta de un disacárido.

15. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque está sustancialmente exenta de un azúcar reductor, un azúcar no reductor o un alcohol de un azúcar.

16. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque está sustancialmente exenta de un osmolito.

17. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque presenta una fuerza de inyección inferior a 8 N cuando se hace pasar a través de una aguja de PFS de pared delgada de calibre 27.

18. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque presenta una osmolaridad comprendida entre 300 y 450 mosm/kg.

19. La formulación de anticuerpos de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque el anticuerpo representa más de un 90% (p/p) de la composición polipeptídica total de la formulación de anticuerpos.

20. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID N0S:1 y 2, b. una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 400 mM de arginina, c. de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 0.1% de polisorbato 80 y d. una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 30 mM de histidina, en donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

21. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, b. una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 400 mM de arginina, c. de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 0.1% de polisorbato 80 y d. una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 30 mM de histidina, en donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

22. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. aproximadamente 150 mg/mL de un anticuerpo, en donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, b. una concentración de aproximadamente 220 mM de arginina, c. aproximadamente un 0.07% de polisorbato 80 y d. una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina, en donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

23 . Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. aproximadamente 150 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, b. una concentración de aproximadamente 150 mM de histidina, c. aproximadamente un 0.07% de polisorbato 80 y d. una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina, donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

24. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 200 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), en donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, b. una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 400 mM de arginina, c. de aproximadamente un 0.01% a aproximadamente un 0.1% de polisorbato 80, d. una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM de histidina y opcionalmente e. una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 400 mM de trealosa en donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

25. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. aproximadamente 50 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, b. aproximadamente un 0.05% de polisorbato 80, c. una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina y d. una concentración de aproximadamente 225 mM de trealosa en donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

26. Una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizada porque comprende: a. aproximadamente 100 mg/mL de un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende un dominio pesado variable (VH) y un dominio ligero variable (VL), donde el dominio VH comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que comprenden las SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 y el dominio VL comprende CDR que comprenden las SEQ ID NOs: 10, 11 y 12, b. una concentración de aproximadamente 25 mM de arginina, c. aproximadamente un 0.07% de polisorbato 80, d. una concentración de aproximadamente 25 mM de histidina y e. una concentración de aproximadamente 180 mM de trealosa, en donde la formulación de anticuerpos presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C.

27. Un método para tratar el dolor asociado con la osteoartritis en un sujeto, caracterizado porque el método comprende administrar la formulación de anticuerpos de cualquiera de conformidad con las reivindicaciones 1-3 y 20-26.

28. Un método para tratar el dolor asociado con el dolor lumbar crónico en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar la formulación de anticuerpos de cualquiera de conformidad con las reivindicaciones 1-3 y 20-26.

29. Un método para tratar la artritis reumatoide en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar la formulación de anticuerpos de cualquiera de conformidad con las reivindicaciones 1-3 y 20-26.

30. Un método para preparar una formulación de anticuerpos estable de viscosidad baja, caracterizado porque comprende: a. concentrar un anticuerpo hasta obtener de aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 400 mg/mL, en donde el anticuerpo comprende secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS:1 y 2; b. añadir arginina al anticuerpo de (a) para obtener una formulación de anticuerpos con una concentración de arginina superior a aproximadamente 150 mM, en donde la formulación de anticuerpos de (b) se encuentra en solución acuosa y presenta una viscosidad inferior a 20 cP a 23°C, y donde la formulación de anticuerpos de (b) es estable a una temperatura comprendida entre 2 °C y 8 °C durante 12 meses según se determina mediante SEC HPLC.