TW202034898A - 抗－ＦＸＩａ抗體之新穎穩定高濃度調配物 - Google Patents

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Abstract

本發明是有關於特別適用於皮下投藥的新穎高濃度液體醫藥調配物，其包含對抗凝血因子FXIa的人類抗體作為活性成份，尤其是那些如WO2013167669中所述者，其在長期間內做為液體調配物是穩定的。本發明亦有關於具有減少還原時間之特定液體調配物的凍乾物以及此等調配物在血栓性或血栓栓塞性病症之療法以及預防中的用途。

Description

抗-FXIa抗體之新穎穩定高濃度調配物
本發明是有關於尤其適用於皮下投藥的新穎高濃度液體醫藥調配物，其包含對抗凝血因子FXIa的人類抗體做為活性成份(特別是那些於WO2013167669中所述者)，其在長期間內做為液體調配物是穩定的。本發明亦關於具有減少還原時間之特定液體調配物的凍乾物，以及這些調配物在血栓性或血栓栓塞性病症的療法與預防中的用途。
血液凝固是生物體的一種保護性機制，有助於能夠將血管壁中的缺損快速且可靠地「封閉」。因此，得以避免失血或將失血維持於最低狀態。在血管損傷之後，止血主要是受到凝固系統所影響，在該系統中觸發血漿蛋白之複合反應的酶級聯。許多凝血因子參與這個過程，該等因子的每一者在活化後便將對應下一個不活化前驅物轉化成其活化形式。在級聯結束時，可溶性纖維蛋白原轉化成不可溶纖維蛋白，造成血塊形成。在血液凝固時，結束在最終接合反應路徑的內生性系統以及外生性系統是不同的。
凝血因子XIa是將凝血由引發轉變至放大與傳播的關鍵組份；在正向回饋環中，除了活化因子V與因子VIII以外，凝血酶還活化因子XI為因子XIa，繼而因子IX轉化成因子IXa，且經由以這個方式產生的因子IXa/因子VIIIa 複合體，因子X被活化且因此凝血酶形成復而又被高度刺激，造成強烈血栓生成並穩定血栓。在先前技藝中已知抗-FXIa抗體做為抗凝血劑，亦即用於抑制或預防凝血的物質(參見WO2013167669)。
治療性蛋白(諸如，例如人類單株抗體)通常是做為液體醫藥調配物經由注射被投藥。因為許多治療有效人類單株抗體具有不利的特性(諸如穩定性低或容易聚集)，必須要透過適當醫藥調配物來調節這些不利的特性。聚集體或變性抗體可能具有(例如)低治療效力。聚集體或變性抗體也可能導致不欲的免疫反應。穩定的蛋白質醫藥調配物應該也適於預防化學不穩定性。蛋白質的化學不穩定性可能導致降解或片段化，且因而降低效力或甚至有毒副作用。因此，應避免形成或生成所有類型的低分子量片段或至少將其降至最低。這些是可能影響製備物安全性的所有因素並且因而必須要被納入考量。此外，當使用注射器或泵時，低黏度是很基本的，因為這讓所需之力低並因此增加可注射性。低黏度在製造期間也是基本的，例如，使得製備物能夠精確填充。但人類單株抗體的治療性用途卻經常需要高抗體濃度，這往往造成高黏度的問題。在Daugherty與Mrsny(Adv Drug Deliv Rev.2006；58(5-6)：686-706)的回顧文章中，他們討論到這個以及其它可能在單株抗體之液體醫藥調配物中發生的問題。
就皮下(s.c.)注射來說，必須額外考慮到調配物的特殊規定。與靜脈內施用相較之下，注射器單次注射的注射體積有限，因為遞送體積中的調配物大於1-2毫升便會耐受不良。這造成需要更高濃度抗體以便遞送相同劑量。這意謂著抗體必須達到約100mg/ml或更高的濃度。更濃的蛋白質調配物可能對蛋白質治療劑的可製造性以及投藥造成許多挑戰。再者，習知必須經由小針施用以確保患者接納與順應性。就高濃度抗體調配物來說，隨著抗體濃度增加，這兩個特質相競爭，黏度增加並妨礙投藥。
在專利申請案PCT/EP2018/050951中描述抗-FXIa適於靜脈內(i.v.)施用的低濃度液體調配物，其相較於皮下施用容許注射體積更高。這個低濃度調配物包含10-40mg/ml抗-FXIa抗體以及組胺酸/甘胺酸緩衝系統(含有5-10mM組胺酸與130-200mM甘胺酸)，其中調配物的pH為5.7-6.3。考量到皮下施用的施用體積限於
Figure 108123732-A0202-12-0003-44
2ml，如PCT/EP2018/050951中所述的低濃度調配物不適合期望治療相關劑量的投藥。不可避免且明顯要將抗-FXIa抗體濃度增加至約100mg/ml或更多。但是，在PCT/EP2018/050951中所述的組胺酸/甘胺酸緩衝系統中增加抗-FXIa抗體的濃度會造成溶液的黏度呈指數般增加達到無法接受之值。
已提出各種方法來克服與高濃度劑型有關的挑戰。例如，為了處理與高濃度抗體調配物有關的穩定性問題，抗體經常要被凍乾，然後在投與之前不久還原。還原常常不是最好的，因為其增加投藥程序額外(經常是耗時)的步驟，而且可能將汙染物引入調配物中。此外，經還原抗體甚至可能受聚集和高黏度所困擾。是以，在長期間內穩定的液體調配物將會是有利的。
技藝中已知數種使用不同賦形劑來降低黏度之蛋白質以及抗體的高濃度液體調配物。例如，WO2009043049描述使用選自下列組成之群的賦形劑以供降低濃度為至少70mg/ml蛋白質之液體醫藥蛋白質調配物的黏度：肌酸、肌苷、肉鹼及其混合物。而在WO2016065181中，描述了使用各種n-乙醯基胺基酸來降低高濃度調配物的黏度。
已知精胺酸是降低黏度的賦形劑。但迄今僅知有高濃度蛋白質調配物，其中需要大量精胺酸，或大量精胺酸與組胺酸以提供足夠的黏度降低作用。US20150239970描述使用大量精胺酸(超過150mM)用於抗IL-6抗體的高濃度液體調配物。而在US8703126中，描述使用約150-200mM衍生自精胺酸或組胺酸的鹽或緩衝劑。
需要用於抗-FXIa抗體的液體高濃度調配物，其包含低量聚集體以及降解產物、呈液體在長期間內為穩定的、不需要凍乾，且具有最低黏度。此外，用於s.c.施用的調配物的pH應在4.7至7.4的範圍內，且滲透壓不應超過240至400mOsm/kg的範圍。
本發明滿足以上需要，並且提供包含約100mg/ml或更多抗-FXIa抗體與低量聚集體和降解產物的高濃度液體醫藥調配物，其呈液體在長期間內是穩定的。這些調配物也具有低黏度，並因而可被輕易地投與給患者，甚至是透過皮下注射(例如利用注射器、筆型裝置、自動注射器或技藝中已知的任何其它裝置)。該高濃度液體抗-FXIa調配物也可以被凍乾，較佳地透過如專利申請案EP17170483.6中所述以噴霧冷凍為基礎的方法，其提供比習知冷凍乾燥方法明顯更短的還原時間。
本發明提供具有低黏度的高濃度醫藥調配物，尤其適用於皮下施用，該調配物包含約100mg/ml或更多的抗-FXIa抗體以及在4.7-5.3之低pH下的三重緩衝系統，該緩衝系統包含組胺酸、甘胺酸與精胺酸，其中少量精胺酸就足以降低黏度且該調配物呈液體在長期間內為穩定的。
100‧‧‧冷卻塔
110‧‧‧內壁
120‧‧‧外壁
130‧‧‧空間
140‧‧‧冷卻工具
150‧‧‧噴嘴
160‧‧‧液體液滴
170‧‧‧冷凍丸粒
180‧‧‧斜槽
190‧‧‧閥
200‧‧‧真空乾燥室
210‧‧‧鼓輪
220‧‧‧經冷凍乾燥丸粒
圖1概要顯示用於冷凍乾燥方法(方法3)的裝置，其產生具還原時間減少的經冷凍乾燥丸粒。
圖2以圖描述在抗體溶液的習知冷凍乾燥(方法1)期間，隨著時間所測得的溫度與壓力型態。
圖3以圖描述在抗體溶液依據方法2(如WO2006/008006中所述)的冷凍與乾燥期間，隨著時間所測得的溫度與壓力型態。
圖4以圖描述在抗體溶液依據本文所述冷凍乾燥方法(方法3)的處理期間，隨著時間在冷卻塔中所測得的溫度型態。
圖5以圖描述在抗體溶液依據本文所述冷凍乾燥方法(方法3)的冷凍與乾燥期間，隨著時間所測得的溫度與壓力型態。
圖6顯示依據本文所述之冷凍-乾燥方法(方法3)製造之丸粒的掃描電子顯微鏡(SEM)圖像。
圖7顯示依據習知冷凍乾燥(方法1)製造之凍乾物的掃描電子顯微鏡(SEM)圖像。
圖8顯示依據WO2006/008006中所揭示之冷凍乾燥方法(方法2)製造之凍乾物的掃描電子顯微鏡(SEM)圖像。
在一個具體例中，該液體醫藥調配物包含5-30mM組胺酸、20-100mM甘胺酸以及少於150mM的精胺酸。在一個較佳具體例中，該液體醫藥調配物包含10-20mM組胺酸、25-75mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸。在一個尤佳的具體例中，該液體醫藥調配物包含20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸。此外，該液體醫藥調配物具有4.7-6.0的pH。在一個較佳具體例中，該液體醫藥調配物具有4.7-5.3的pH。在一個尤佳的具體例中，該液體醫藥調配物具有5的pH。依據本發明的液體醫藥調配物包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體。在一個較佳具體例中，抗-FXIa抗體以約100-300mg/ml的濃度存在。在一個尤佳的具體例中，抗-FXIa抗體具有135-165mg/ml的濃度，更佳為約150mg/ml。在又一個更佳的具體例中，抗-FXIa抗體具有約100mg/ml的濃度。在所有具體例中，抗-FXIa抗體尤佳為076D-M007-H04-CDRL3-N110D。
液體醫藥調配物還可包含穩定劑。穩定劑為例如糖。「糖」意指一群有機化合物，其為水溶性且可分成單醣、雙醣與多元醇。偏好的糖為非還原雙醣，尤其偏好海藻糖。在一個具體例中，穩定劑以1-10%重量對體積(w/v)的範圍存在，較佳3-7%(w/v)的範圍且尤佳5%(w/v)的範圍。在一個較佳具體例中，海藻糖二水合物以1-10%重量對體積(w/v)的範圍存在，較佳3-7%(w/v)的範圍且尤佳5%(w/v)的範圍。
液體醫藥調配物還可包含界面活性劑。術語「界面活性劑」意指任何具有親水區以及疏水區的清潔劑，並且包括非離子、陽離子、陰離子與兩性離子清潔劑。偏好的清潔劑可選自由聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯(又稱為聚山梨醇酯80或TWEEN 80)、聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯(又稱為聚山梨醇酯20或TWEEN 20)、帕洛沙姆(poloxamer)188(聚氧乙烯與聚氧丙烯的一種共聚物)以及N-月桂基肌胺酸組成之群。關於所揭示的組合物，偏好非離子界面活性劑。本發明組合物尤其偏好使用聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188。界面活性劑可以0.005%至0.5%(w/v)的濃度，偏好0.01%至0.2%(w/v)的濃度範圍來使用。尤其偏好使用0.05%-0.1%(w/v)的界面活性劑濃度。特別偏好使用濃度為0.1%(w/v)的聚山梨醇酯80。更尤其偏好使用濃度為0.05%(w/v)的聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188。
可視情況添加防腐劑或其它添加物、填料、穩定劑或載劑至本發明之液體醫藥調配物。適宜的防腐劑為例如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨、氯化六甲雙銨以及芳族醇，諸如苯酚、對羥苯甲酸酯或間-甲酚。更多醫藥上可接受的添加物、穩定劑或載劑描述於例如Remington’s Science And Practice of Pharmacy(第22版，Loyd V.Allen,Jr,editor.Philadelphia,PA：Pharmaceutical Press.2012)中。
因此，本發明提供一種高濃度液體醫藥調配物，其包含約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，以及組胺酸/甘胺酸/精胺酸緩衝系統，其中該調配物包含5-30mM組胺酸、20-100mM甘胺酸以及少於150mM的精胺酸，較佳10-20mM組胺酸、25-75mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸並具有4.7-5.3的pH，較佳pH 5。此在低黏度、充份穩定性以及低聚集作用下產生抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D的高濃度調配物，其做為液體調配物是穩定的，也可以使得調配物視情況凍乾。
依據本發明的一個具體例為一種液體醫藥調配物，其包含約100mg/ml抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D以及組胺酸/甘胺酸/精胺酸緩衝系統，其中該調配物包含5-30mM組胺酸、20-100mM甘胺酸以及少於150mM的精胺酸，較佳10-20mM組胺酸、25-75mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸並具有4.7-5.3的pH，較佳pH 5。
依據本發明的一個具體例為一種液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體M007-H04-CDRL3-N110D，
5-30mM組胺酸，較佳10-20mM組胺酸，
20-100mM甘胺酸，較佳25-75mM甘胺酸，以及
少於150mM的精胺酸，較佳50-75mM精胺酸，
其中該調配物具有4.7-5.3的pH，較佳pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：界面活性劑、防腐劑、載劑以及穩定劑。
依據本發明的一個具體例為一種液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
5-30mM組胺酸，較佳10-20mM組胺酸，
20-100mM甘胺酸，較佳25-75mM甘胺酸，以及
少於150mM的精胺酸，較佳50-75mM精胺酸，
1-10%(w/v)穩定劑，較佳3-7%(w/v)海藻糖二水合物，
其中該調配物具有4.7-5.3的pH，較佳pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：界面活性劑、防腐劑、載劑以及穩定劑。
在一個具體例中，該液體醫藥調配物包含濃度為0.005%至0.5%(w/v)，較佳0.01%至0.2%(w/v)的聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188做為界面活性劑。
一個較佳具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
10-20mM組胺酸、25-100mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸，
3-7%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.01%至0.2%(w/v)的聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188，
其中該調配物具有4.7-5.3的pH，較佳pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
一個較佳具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
10-20mM組胺酸、25-100mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸，
3-7%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.01%至0.2%(w/v)的聚山梨醇酯80，
其中該調配物具有4.7-5.3的pH，較佳pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
一個更佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
10-20mM組胺酸、25-100mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸，
3-7%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.01%至0.2%(w/v)的聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188，
其中該調配物具有4.7-5.3的pH，較佳pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
一個尤佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸，
5%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.1%(w/v)的聚山梨醇酯80，
其中該調配物的pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
又一個尤佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸，
5%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.05%(w/v)的聚山梨醇酯20，
其中該調配物的pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
又一個尤佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸，
5%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.05%(w/v)的帕洛沙姆188，
其中該調配物的pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
又一個尤佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約150mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸，
5%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.1%(w/v)的聚山梨醇酯80，
其中該調配物的pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
又一個尤佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約150mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸，
5%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.05%(w/v)的聚山梨醇酯20，
其中該調配物的pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
又一個尤佳的具體例為液體醫藥調配物，其包含濃度為約150mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D，
20mM組胺酸、50mM甘胺酸以及50mM精胺酸，
5%(w/v)海藻糖二水合物，以及
濃度為0.05%(w/v)的帕洛沙姆188，
其中該調配物的pH為5。該調配物視情況包含更多選自由下列組成之群的成份：防腐劑、載劑以及穩定劑。
依據本發明所使用的抗-FXIa抗體能夠結合至活化形式的血漿因子XI、FXIa。較佳地，抗-FXIa抗體特異地結合至FXIa。較佳地，抗-FXIa抗體能夠抑制血小板聚集以及相關的血栓形成。較佳地，抗體媒介的血小板聚集抑 制不會損及血小板依賴性初級止血作用。在本發明的上下文中，術語「不會損及止血作用」表示抑制凝血因子XIa並不會造成不樂見且可測得的出血事件。
如本文所用，「凝血因子XIa」、「因子XIa」或「FXIa」意指表現酶原因子XI之任何哺乳動物物種的任一FXIa。例如FXIa可以是人類、非人類靈長類動物(諸如狒狒)、小鼠、狗、貓、牛、馬、豬、兔以及表現涉及調節血流、凝血及/或血栓形成之凝血因子XI的任何其它物種。
如本文所用，若抗體能夠區別抗原以及一或多種參考抗原，則此等抗體「特異地結合至」抗原、對抗原「具有特異性」或「特異地識別」抗原(在此抗原為FXIa)，因為結合特異性不是一種絕對的，而是相對的性質。以其最為普遍的形式(且當未提到指定參考物時)，「特異性結合」意指抗體區別感興趣抗原以及不相干抗原的能力，例如依據一或多種下列方法所確定。此等方法包含(但不限於)西方墨點、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-測試以及肽掃描。例如，可進行標準ELISA分析。可以透過標準顯色(例如二級抗體與辣根過氧化物以及四甲基聯苯胺與過氧化氫)來進行計分。透過光學密度來對某些孔中的反應進行計分，例如在450ran下進行。典型背景(=陰性反應)可為0.1OD；典型陽性反應可為1OD。這意謂著陽性/陰性的差異可能超過10倍。典型地，測定結合特異性不是藉由使用單一參考抗原，而是一組約三個至五個不相干抗原(諸如奶粉、BSA、運鐵蛋白或類似者)來施行。但是，「特異性結合」也可能意指抗體區別標靶抗原與一或多種極相近抗原(例如同源物，其用做為參考點)的能力。舉例來說，如相較於參考抗原，抗體可能對標靶抗原具有至少至少1.5倍、52倍、5倍、10倍、100倍、103倍、104倍、105倍、106倍或更高的相對親和力。此外，「特異性結合」可能與抗體區別其標靶抗原之不同部分(例如FXIa的不同結構域或區域)的能力有關。
「親和力」或「結合親和力」KD通常是透過測量平衡締合常數(ka)以及平衡解離常數(kd)，並且計算kd相對於ka(KD=kd/ka)之商來決定。術語「免疫特異性」或「特異地結合」較佳地表示抗體以少於或等於106M(單價親和力)的親和力KD結合至凝血因子XIa。術語「高親和力」表示抗體以少於或等於107M(單價親和力)的親和力KD結合至凝血因子XIa。此等親和力可使用習知方法輕易測定，諸如藉由平衡透析；藉由使用BIAcore 2000儀器、使用由製造商所概述的一般程序、藉由使用經放射性標記標靶抗原的放射性免疫分析；或藉由習於技藝者所熟知的另一種方法。藉如可透過[Kaufman RJ,Sharp PA.(1982)Amplification and expression of sequences cotransfected with a modular dihydrofolate reductase complementary dna gene.[J Mol Biol.159：601-621]中所述的方法來分析親和力數據。
如本文所用，術語「抗體」包括從自然界分離而來或透過重組方式製備的免疫球蛋白分子(例如任何類型，包括IgG、IgE1 IgM、IgD、IgA與IgY，及/或任一型包括IgGI、lgG2、lgG3、lgG4、IgAI與IgA2)，且包括所有習知抗體及其功能片段。術語「抗體」也延伸至能夠將抗體CDR指向插入至與天然抗體所見者相同的活性結合構形的其它蛋白構架，以使得標靶抗原與此等嵌合蛋白所發現到的結合得以維持與CDR衍生而來之天然抗體的結合活性相當。
抗體/免疫球蛋白的「功能片段」或「抗原結合抗體片段」從而定意為保有抗原結合區之抗體/免疫球蛋白的片段(例如IgG的可變區)。抗體的「抗原結合區」典型是在抗體的一或多個超變區中發現到，亦即CDR-I、CDR-2及/或CDR-3區；但是，可變「構架」區也可能在抗原結合時扮演重要角色，諸如透過提供CDR的骨架。較佳地，「抗原結合區」包含可變輕(VL)鏈的至少胺基酸殘基4至103以及可變重(VH)鏈的至少胺基酸殘基5至109，更佳為VL的胺基酸殘基3至107以及VH的胺基酸殘基4至111，且尤佳為整個VL與VH鏈(VL的胺基酸位 置1至109以及VH的胺基酸位置1至113；依據WO 97/08320編號)。用於本發明中的一類較佳免疫球蛋白為IgG。
本發明的「功能片段」包括Fab、Fab1、F(ab')2，與Fv片段；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(scFv)；以及由抗體片段經雙硫橋連接之Fv(sdFv)和包含VL或VH域之片段所形成的多特異性抗體，其係由完整免疫球蛋白製備而來或藉由重組方式製備。
抗原結合抗體片段可包含單獨可變區或者與下列之整體或部分的組合：樞紐區、CHI、CH2、CH3以及CL域。包含可變區與下列任一者之組合的抗原結合抗體片段也被納入本發明中：樞紐區、CHI、CH2、CH3以及CL域。
抗體及/或抗原結合抗體片段可為單特異性(例如單株)、雙特異性、三特異性或更多多重特異性。較佳地，使用單株抗體。
術語「單株抗體」如本文所用意指由一群實質上均質的抗體所獲得的抗體，該群實質上均質的抗體意即構成該群的個別抗體除了可能少量出現之天然突變以外均相同。單株抗體為高度特異性，指向對抗單一抗原位點。此外，相對於習知(多株)抗體製備物(其典型包括指向對抗不同決定基(表位)的不同抗體)，各個單株抗體指向對抗抗原上的單一決定基。除了其特異性以外，單株抗體因為它們是透過均質培養物合成，未受到其它具有不同特異性與特徵的免疫球蛋白汙染而有利。修飾詞語「單株」指明抗體由實質上均質的抗體群獲得的特徵，且不被認為是需要透過任何特定方法生產。
例如，抗體或抗原結合抗體片段可為人類、人類化、鼠(例如小鼠與大鼠)、驢、綿羊、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬或雞抗體。較佳地，使用人類或人類化抗-FXIa抗體。
如本文所用，「人類」抗體包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列的抗體，並且包括自人類免疫球蛋白庫、人類B細胞，或自經一或多個人類免疫球蛋白轉殖之動物分離而來的抗體以及合成人類抗體。
「人類化抗體」或功能性人類化抗體片段在本文中定義為(i)衍生自非人類來源(例如轉殖基因小鼠，其帶有異源性免疫系統)的抗體，該抗體是以人類生殖系序列為基礎；或(ii)嵌合抗體，其中可變域衍生自非人類來源而恆定域衍生自人類來源，或(iii)CDR經移植抗體，其中可變域的CDR是來自非人類來源，而可變域的一或多個構架具有人類5來源而恆定域(若有的話)具有人類來源。
依據本發明所使用的合適抗體例如揭示於WO 2013/167669中。在一個具體例中，抗-FXIa抗體包含i)SEQ ID NO：19的可變輕鏈域的胺基酸序列以及SEQ ID NO：20的可變重鏈域的胺基酸序列；或ii)SEQ ID NO SEQ ID NO：29的可變輕鏈域的胺基酸序列以及SEQ ID NO：30的可變重鏈域的胺基酸序列；或iii)SEQ ID NO：27的可變輕鏈域的胺基酸序列以及SEQ ID NO：20的可變重鏈域的胺基酸序列，如WO 2013/167669中所揭示。在較佳具體例中，抗-FXIa抗體選自WO 2013/167669中揭示的抗體076D-M007-H04、076D-M007-H04-CDRL3-N110D，以及076D-M028-H17。在尤佳的具體例中，抗-FXIa抗體為076D-M007-H04-CDRL3-N110D，在本文中以SEQ ID NO：1表示可變重鏈域的胺基酸序列並以SEQ ID NO：2表示可變輕鏈域的胺基酸序列。
術語「醫藥調配物」或「調配物」如本文所用意指一種呈允許其中所含活性成份的生物活性為有效的形式，且不含有對調配物要被投與之個體具有無法接受之毒性的額外組份的製備物。
如本文所用，「黏度」是流體對流動的抗性，且可以公泊(cP)或毫帕-秒(mPa*s)為單位來進行測量，其中在特定剪切速率下1cP=1mPa*s。黏度可以藉由黏度計測量，例如小型樣品黏度計(如mVroc、Rheosense)。黏度可使用 任何其它方法來測量並且呈技藝中所熟知的任何其它單位(例如絕對、運動學或動力學黏度)，要了解因為使用本發明所述之賦形劑而提供的黏度降低百分率很重要。不論測定黏度所使用的方法為何，在賦形劑調配物中於給定剪切速率下相對於對照調配物的黏度降低百分率維持大約相同。
如本文所用，含有有效「降低黏度」之某量賦形劑(或「黏度降低」量或濃度的此賦形劑)的調配物表示呈其最終投與形式(若為溶液，或若為粉劑，在用預期量之稀釋劑還原之後)之調配物的黏度比合適對照調配物(諸如水、緩衝劑、其它已知黏度降低劑，諸如鹽等)與那些對照調配物(例如本文中所例示者)的黏度少了至少5%。
同樣地，「黏度降低的」調配物是一種相較於對照調配物表現出黏度降低的調配物。
術語「緩衝劑」，如本文所用，意指一種緩衝液，其pH在添加酸性或鹼性物質之後僅少量地改變。緩衝液分別含有弱酸與其對應鹼，或弱鹼與其對應酸的混合物。例示性醫藥上可接受的緩衝劑包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)、琥珀酸鹽(諸如琥珀酸鈉)、磷酸鹽、麩胺酸、麩胺酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸、甘胺酸、檸檬酸鹽或其它有機酸緩衝劑。視情況，一或多種前述酸與鹼的混合物可用於緩衝液中。前述酸與鹼中之每一者的例示性緩衝劑濃度可為約1mM至約200mM、約10mM至約100mM，或約20mM至約50mM，取決於例如緩衝劑和調配物的期望張力(例如等張、高張或低張)。
術語「緩衝系統」如本文所用意指一或多種前述酸與鹼的混合物。本發明的一個較佳緩衝系統含有一或多種胺基酸。更佳地，該緩衝系統包含組胺酸、甘胺酸與精胺酸的混合物，其中少量的精胺酸(低於150mM)就足以降低黏度。較佳地，精胺酸以50-75mM的濃度、更佳地以50mM的濃度被包含其中。
在本發明的上下文中，「%(w/v)」定義某個組份在組合物內以百分率表示的質量濃度，其中w表示所採用之組份的質量(以g、mg等測量)，而v表示該組合物的最終體積(以L、mL等測量)。
術語「患者」意指接受預防性或治療性處理的人類或動物個體。
術語「處理」在本文中意指對患者使用治療性物質/對患者投與治療性物質，或對患者的細胞株使用治療性物質/對患者的細胞株投與治療性物質，該患者正罹患疾病、表現疾病的症狀或有該疾病的傾向性，處理目的在於治癒、改善、影響、遏止或減輕疾病、其症狀或有該疾病的傾向性。
「有效劑量」在本文中說明藉其可至少部份達到期望效果的活性成份量。「治療有效劑量」因而被定義為活性成份量，其足以至少部份治癒疾病，或至少部份減輕該患者體內由該疾病所造成之不良反應。此目的實際所需量取決於疾病的嚴重程度以及患者的整體免疫狀態。
適用於本發明的醫藥組合物包括其中含有效量足以達到預期目的(亦即治療特定疾病)之活性成份的組合物。有效劑量的決定充份落在習於那些技藝者的能力範圍內。
治療性蛋白(諸如抗體)在調配物中的濃度將取決於醫藥調配物的最終用途且可由習於技藝者輕易決定。
以高濃度頻繁投與用於皮下投藥的治療性蛋白。(在不考慮化學修飾之重量的情況下，化學修飾為諸如聚乙二醇化)治療性蛋白(包括抗體)的特別預期高濃度為至少約70、80、90、95、105、110、115、120、130、135、140、145、150、155、160、165、175、180、185、190、195、200、250、300、350、400、450或500mg/ml，及/或少於約250、300、350、400、450或500mg/ml。在調配物中，治療性蛋白(諸如抗體)的例示性高濃度在約100mg/ml至約500mg/ml的範圍內。較佳地，依據本發明，治療性蛋白的濃度在約100-300mg/ml的範圍 內，更佳在135-165mg/ml的範圍內，最佳為約150mg/ml。又一個最佳濃度為約100mg/ml。在這個上下文中，某個「約」給定值的濃度(例如給定濃度範圍的上限或下限)應理解為含括與這個給定值偏差至多±10%的所有濃度。
術語「高分子量聚集物」(同義詞：「HMW」)描述由至少兩種蛋白質單體組成的聚集物。
本發明進一步提供一種產物，其包含依據本發明之醫藥調配物之一者且較佳還有使用說明書。在一個具體例中，該產物包含一容器，該容器包含本發明之液體調配物。可使用的容器為例如瓶、小瓶、管、藥匣、單室或多室注射器或技藝中已知的任何其它容器。容器可例如由玻璃或塑料製成。例示性投藥裝置包括帶有或不帶有針的注射器、輸注泵、噴射注射器、筆型裝置、穿皮注射器，或其他無針注射器。注射器、筆型裝置或技藝中已知的任何其他裝置可能包含例如由金屬製成的注射針。本發明進一步提供一種套組，其包含前述醫藥調配物。
在一個具體例中，該容器為注射器。在又一個具體例中，該注射器經預先充填。在又一個具體例中，該注射器包含在一個注射裝置中。在又一個具體例中，注射裝置為自動注射器。在另一個具體例中，該容器為藥匣。在又一個具體例中，藥匣包含在一個筆型裝置或技藝中已知的任何其它裝置中。在另一個具體例中，容器為小瓶。
相較於在先前技藝中可用之抗-FXIa抗體的調配物，依據本發明之組合物在高抗體濃度下表現出增加的穩定性。較佳的調配物作為液體調配物是穩定的，但也可以是凍乾的。依據本發明的液體醫藥調配物也可以是透過習知冷凍乾燥方法(方法1)或藉由以噴霧冷凍為基礎的方法(如WO2006/008006中所述)(方法2)或如本文所述的方法3獲得的經還原凍乾物。較佳地，藉由如本文所 述以噴霧冷凍為基礎的方法3獲得凍乾物，其提供具還原時間減少的冷凍乾燥丸粒。
在習知方法中，冷凍乾燥通常是在標準冷凍乾燥室中進行，該冷凍乾燥室在(真空)乾燥室中包含一或多個托架(tray)或盤架(shelf)。小瓶可充填待冷凍乾燥的產物並且被放置在這些托架上。這些乾燥器通常不具有可控溫壁並對放置於乾燥室中的小瓶提供非均勻熱轉移。因為輻射熱轉移以及室壁與托架/盤架堆之間空隙的空氣傳導，尤其是那些被放置在邊緣的小瓶比那些被放置在盤中央的小瓶更為充份地進行能量交換。能量分布的這個不均勻性導致邊緣處的小瓶與在中央處的那些小瓶之間有冷凍與乾燥動力學差異，而且還可能導致對應小瓶的活性內容物中的活性差異還有產率減損。為了確保最終產物的均勻性，都要以實驗室與生產規模進行大規模開發與評估作業。
WO2006/008006 A1是有關於一種無菌製造方法，包括冷凍乾燥、儲存、並將丸粒化生物醫藥產物充填在最終容器(諸如小瓶)中。所述方法合併了噴霧乾燥以及冷凍乾燥且包含以下步驟：a)冷凍產物液滴以形成丸粒，藉此透過使產物溶液通過頻率輔助型噴嘴形成液滴且透過使液滴通過低溫氣體的逆流形成該等丸粒；b)冷凍乾燥該等丸粒；c)儲存並均質化該等經冷凍乾燥丸粒；d)在該等經冷凍乾燥丸粒被儲存並均質化的同時進行評估；以及e)將該等經冷凍乾燥丸粒裝入至該等容器中。
依據本發明的液體醫藥調配物適用於非經腸投藥。非經腸投藥尤其包括靜脈內注射或輸注、動脈內注射或輸注(至動脈內)、肌肉內注射、鞘內腔注射、皮下注射、腹膜內注射或輸注、骨內投藥或注射至組織內。依據本發明之組合物特別適用於皮下投藥。適用於非經腸投藥的投藥形式尤其是用於注射或輸注的製備物，呈溶液、懸浮液、乳液的形式、呈液體形式或作為凍乾物或無菌粉劑在投藥之前被還原。有需要的話，依據本發明之液體醫藥調配物也可 以被冷凍乾燥並且在投藥之前被還原，同時維持生物活性。但是，藉由習知方法冷凍乾燥依據本發明之抗體調配物產生還原時間至多兩個小時或更久的凍乾物。這樣長的還原時間對於健康照護從業人員還有患者來說既麻煩也行不通。因此，已經開發出以噴霧冷凍為基礎的方法用於生產含有抗-FXIa抗體的經冷凍乾燥丸粒，其相較於含有藉著習知冷凍乾燥獲得之凍乾物明顯更短的還原時間。如本文所述，這個以噴霧冷凍為基礎的方法(方法3)產生包含丸粒的經冷凍乾燥抗-FXIa抗體，當還原成約150mg/ml的抗體濃度時，其還原時間為約10分鐘。如本文所述，用於減少包含抗-FXIa抗體之經冷凍乾燥丸粒的還原時間以及在本發明的實例7中所應用的噴霧冷凍乾燥方法(方法3)包含以下步驟：
a)冷凍包含抗-FXIa抗體之溶液的液滴以形成丸粒；
b)冷凍乾燥該等丸粒；
其中在步驟a)中，藉由使包含抗-FXIa抗體之溶液進入冷卻塔形成液滴的方式來形成該等液滴，該冷卻塔具有可控溫內壁面以及低於溶液的凍結溫度的內部溫度，而在步驟b)中該等丸粒於旋轉槽中被冷凍乾燥，該槽被容納在真空室內。
可依據任何已知技術進行方法3來產生冷凍丸粒。但重要的是，要避免將含有抗體的液滴滴入液態氮中而在其中形成丸粒。
考慮到方法3的後續冷凍乾燥步驟，經冷凍丸粒有利地具有狹窄的粒徑分布。之後，經冷凍丸粒可以在無菌與冷的環境下被運送至冷凍乾燥器。接著透過旋動槽將丸粒分散在乾燥腔內的攜載面。昇華乾燥原則上在合適丸粒之任何類型的冷凍乾燥器中都是可行的。較佳為提供昇華蒸氣流空間、可控溫壁以及在冷凍室與冷凝器之間有合適剖面空間的冷凍乾燥器。
在方法3之步驟a)中所使用的液滴可藉由通過頻率輔助噴嘴使溶液形成液滴的方式來形成。較佳地，振盪頻率為
Figure 108123732-A0202-12-0020-45
200Hz至
Figure 108123732-A0202-12-0020-46
5000Hz，更佳地
Figure 108123732-A0202-12-0020-48
400Hz至
Figure 108123732-A0202-12-0020-49
4000Hz或
Figure 108123732-A0202-12-0020-50
1000Hz至
Figure 108123732-A0202-12-0020-51
2000Hz。
獨立於頻率輔助的噴嘴，噴嘴開口的直徑可以在100μm至500μm的範圍內，較佳地在200μm至400μm的範圍內，特佳在300μm至400μm的範圍內。該噴嘴直徑產生範圍在約200μm至約1000μm內的液滴尺寸，較佳地在約400μm至約900μm的範圍內，特佳在約600μm至800μm的範圍內。
在此上下文內，「約」某個給定值的尺寸(例如給定尺寸範圍的上限或下限)應理解為含括與此給定值偏差至多±30%的所有液滴尺寸。例如，尺寸為約400μm的所得液滴含括尺寸在280μm與520μm之間變化的液滴。同樣地，約100μm至約500μm的尺寸範圍應理解為含括70mm至650μm的液滴尺寸。
液滴展現出中位數值附近的某種液滴尺寸分布，其應為上文所提及之一者。
在上述方法的步驟a)中獲得之丸粒的丸粒尺寸中位數為約
Figure 108123732-A0202-12-0020-52
200μm至約
Figure 108123732-A0202-12-0020-53
1500μm。丸粒尺寸中位數較佳為約
Figure 108123732-A0202-12-0020-54
500μm至約
Figure 108123732-A0202-12-0020-55
900μm。
圖1概要顯示用於實施以噴霧冷凍乾燥為基礎的方法的裝置，其如上述用於降低包含抗-FXIa抗體之經冷凍乾燥丸粒的還原時間。該裝置包含冷卻塔100以及真空乾燥室200做為主要構成要素。冷卻塔包含內壁110以及外壁120，藉此於內壁110和外壁120之間界定出一個空間130。這個空間130容納一個呈管路形式的冷卻工具140。冷媒可如圖式的箭頭所指進入並離開該冷卻工具140。流過該冷卻工具140的冷媒使內壁110冷卻且因此冷卻該冷卻塔100的內部。在產生經冷凍丸粒(低溫丸粒)時，液體經由噴嘴150被噴入冷卻塔中。液體液滴是依據參考標號(numeral)160來表示。液體液滴最終在其向下路徑上固化(冷凍)，其係依據參考標號170來表示。冷凍丸粒170通過斜槽180，其中閥190允 許進入真空乾燥室200內。儘管在此未指明，但是斜槽180當然也可以(且甚至更佳地)以丸粒170於密閉閥190之前收集同時維持在冷凍狀態這樣的方式受到可控溫。在真空乾燥室200內，設置可轉鼓輪210以便容納待乾燥的冷凍丸粒。圍繞著水平軸進行旋轉以使得能量有效率地轉移至丸粒中。熱可以經由鼓輪或經由封套紅外線加熱器被引入。最後，得到由參考標號220表示的經冷凍乾燥丸粒。
用於上述方中的冷卻塔的內表面具有不高於-120℃的溫度，較佳
Figure 108123732-A0202-12-0021-56
-180℃至
Figure 108123732-A0202-12-0021-65
-120℃。較佳地溫度為
Figure 108123732-A0202-12-0021-67
-160℃至
Figure 108123732-A0202-12-0021-59
-140℃。
可以針對尺寸範圍為約
Figure 108123732-A0202-12-0021-68
600μm至
Figure 108123732-A0202-12-0021-62
800μm同時落在2m至4m的距離內(尤其約3m)的液滴將上述溫度最佳化為
Figure 108123732-A0202-12-0021-63
-160℃至
Figure 108123732-A0202-12-0021-69
-140℃。
冷卻塔的內表面是透過使冷媒通過一或多個與內表面熱接觸的管路而受到冷卻。冷媒可以是具有所需溫度的液態氮或氮蒸氣。
當使用如圖1中所述的裝置時，以噴霧冷凍乾燥為基礎之如本文所述用於減少包含抗-FXIa抗體之經冷凍乾燥丸粒之還原時間的方法(方法3)包含以下步驟：
a)冷凍含抗-FXIa抗體之溶液的液滴以形成丸粒；
b)冷凍乾燥該等丸粒；
其中在步驟a)中藉由使包含抗-FXIa抗體之溶液進入冷卻塔(100)形成液滴的方式來形成該等液滴，該冷卻塔具有一可控溫內壁表面(110)以及低於該溶液之凍結溫度的內部溫度，且其中在步驟b)中丸粒在旋轉槽(210)中被冷凍乾燥，該旋轉槽210被容納於真空室(200)內。
此外，方法3在步驟b)之後可進一步包含步驟c)以及d)：
c)儲存並且均質化經冷凍乾燥的丸粒
d)將經冷凍乾燥的丸粒裝填至容器中。
儲存並且均質化步驟c)也可以於旋轉槽中在用以冷凍乾燥的真空室內進行。在步驟d)中，使用者界定量的經冷凍乾燥丸粒被充填至最終容器內。儲存容器被轉移至單獨的填充線並且銜接在無菌對接站。容器的內容物從隔離器內部被轉移至填充裝置的儲存庫。對經處理抗-FXIa抗體不產生或僅有些許損害的方法3容許在狹窄的指定範圍內精確充填預期抗體量。該方法進一步容許靈活且特殊化填充至容器中供最終使用。
在本發明的上下文中，術語「習知冷凍乾燥」以及「經習知冷凍乾燥」意指在小瓶中於標準冷凍乾燥室內進行的標準冷凍乾燥方法，該冷凍乾燥室在(真空)乾燥室內包含一或多個托架或盤架且不包括噴霧冷凍的處理步驟。典型地，待冷凍乾燥的產物被填充至小瓶內，小瓶繼而被放置在(真空)乾燥室內。
在本發明的上下文中，術語「當相較於藉由習知冷凍乾燥獲得的凍乾物時，減少經冷凍乾燥丸粒的還原時間」應理解為當相較於藉由習知冷凍乾燥獲得的凍乾物時，減少藉由依據本發明方法獲得之經冷凍乾燥丸粒在添加還原介質(例如無菌水)之後，完全或近乎完全溶解所需要的時間段。還原時間減少達至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90或至少95%。在本發明的上下文中，術語「經冷凍乾燥丸粒的完全或近乎完全還原/溶解」意指經冷凍乾燥丸粒的至少98%固體內容物在還原介質中溶解，更尤其是經冷凍乾燥丸粒的至少98.5%固體內容物溶解，最尤其是經冷凍乾燥丸粒的至少99%、至少99.5%、至少99.75%或至少99.9%固體內容物溶解。
方法3的操作原理具有數個獨特的優勢。首先，包含抗-FXIa抗體之溶液的經噴霧液滴不與呈逆流的低溫氣體接觸，諸如在WO2006/008006 A1中所述。不需要將低溫氣體引入冷卻塔的內部空間並因而可省略低溫氣體的所有 操作與滅菌步驟。這個方法的所有步驟可以在無菌狀態下進行且不會損及個別步驟之間的無菌性。
其次，實驗發現本方法(方法3)不會對抗-FXIa抗體造成顯著損害，從而避免最終產物的結合親和力喪失。事實上，與藉由習知冷凍乾燥(方法1)或根據WO2006/008006(方法2)的冷凍乾燥方法獲得的包含抗-FXIa抗體之凍乾物相比，如透過間接ELISA評估，藉由本方法(方法3)獲得之包含抗-FXIa抗體的經冷凍乾燥丸粒顯示出對FXIa抗原的結合親和力增加。避免對抗-FXIa抗體的損害容許在狹窄的特定範圍內精確填充所需量的活性抗-FXIa抗體。此外，與習知凍乾相比，在不同體積和施用系統方面本方法容許填充經冷凍乾燥丸粒有更多靈活度。
第三，透過在真空室內的旋轉槽中進行冷凍乾燥步驟，每個單獨丸粒的空間位置隨時間平均分散。這確保了均勻的乾燥條件，並因而消除了抗體活性的空間變異，例如結合親和力，如同經冷凍乾燥小瓶在盤架上的情況般。
最後，發現根據本方法(方法3)產生之包含抗-FXIa抗體的丸粒顯示出還原時間明顯縮短，特別是與藉由習知冷凍乾燥(方法1)獲得之包含抗-FXIa抗體的凍乾物相比，還有與藉由WO2006/008006 A1(方法2)中揭示之方法獲得的丸粒相比。
然而，與許多其它在較長時間段內不穩定的液體抗體調配物相反，根據本發明的高濃度液體抗體調配物出乎意料地在長期試驗中展現出高度穩定性，這使得凍乾的所有缺點和限制通常是多餘的。
如本文所用，生物活性蛋白質的「穩定」調配物是與對照配方樣品相比，在2-8℃下儲存至少6個月後或在<-60℃下儲存至少12個月後表現出聚集減少及/或生物活性損失減少至少20%的調配物。或者，其在熱壓力條件(多次冷 凍/解凍循環或攪動壓力(例如300rpm歷時3小時)等)下表現出聚集減少及/或生物活性損失減少。
根據本發明的液體醫藥調配物具有有價值的藥理學性質，並可用於預防和治療人類和動物的疾病。可用於疾病和其治療的本發明液體醫藥調配物特別包括血栓性或血栓栓塞性疾病。因此，根據本發明的液體醫藥調配物適用於治療及/或預防可能因為血塊形成引起的疾病或併發症。
在本發明的上下文中，「血栓性或血栓栓塞性疾病」包括在動脈中和靜脈血管中均發生並且可以用依據本發明的液體醫藥調配物治療的疾病，特別是心臟的冠狀動脈疾病，諸如急性冠狀動脈症候群(ACS)，心肌梗塞伴隨ST段抬高(STEMI)和無ST段抬高(非STEMI)、穩定型心絞痛、不穩定型心絞痛、再閉塞以及血管成形術(諸如冠狀動脈介入、支架植入術或主動脈冠狀動脈旁路術)後的再狹窄，還有造成下列的血栓性或血栓栓塞性疾病：周邊動脈閉塞性疾病、肺栓塞、靜脈血栓栓塞、靜脈血栓(特別是深靜脈和腎靜脈)、暫時性缺血性發作與血栓性中風和血栓栓塞性中風。
可能因為各種病因或相關病症發生凝血系統的刺激。在外科手術干預、不動、臥床、感染、發炎或癌症或癌症治療的情況下，凝血系統可能被高度活化，並且可能存在血栓性併發症，特別是靜脈血栓形成。因此，依據本發明的液體醫藥調配物適用於在患有癌症的患者中於進行外科手術干預的情況下預防血栓形成。因此，依據本發明的液體醫藥調配物還適用於預防具有活化凝血系統的患者的血栓形成，例如在所述的刺激情況下。
因此，依據本發明的液體醫藥調配物還適用於在患有急性、間歇性或持續性心律不整(例如心房顫動)的患者，以及接受心搏復原的患者，還有患有心臟瓣膜病症或有人工心臟瓣膜的患者中預防和治療心源性血栓栓塞，例如腦缺血，中風和全身性血栓栓塞和局部缺血。
此外，依據本發明的液體醫藥調配物適用於治療和預防彌漫性血管內凝血(DIC)，其尤其可能與敗血症有關，但也可能是因為手術干預、贅瘤性疾病、燒傷或其它損傷而發生，而且可能透過微血栓導致嚴重的器官損傷。
血栓栓塞性併發症也發生在微血管病性溶血性貧血中，還有因為在體外循環的情況下血液與外來表面接觸，體外循環為例如血液透析、ECMO(「體外膜氧合」)、LVAD(「左心室輔助裝置」)和類似方法、AV瘻管、血管和心臟瓣膜假體。
再者，依據本發明的液體醫藥調配物適用於治療及/或預防涉及腦血管中的微血塊形成或纖維蛋白沉積的疾病，其可導致癡呆症(諸如血管性癡呆或阿茲海默症)。在此，血塊可能經由閉塞和透過結合其它疾病相關因子而導致病症。
再者，依據本發明的液體醫藥調配物可用於抑制腫瘤生長和轉移的形成，並且還用於預防及/或治療腫瘤患者(特別是那些正在接受重大手術干預或化學療法或放射性療法的患者)的血栓栓塞性併發症，例如靜脈血栓栓塞。
此外，依據本發明的液體醫藥調配物可用於治療或預防發炎性疾病，像是類風濕性關節炎(RA)或像是阿茲海默症(AD)的神經疾病。此外，這些抗體可用於治療癌症和轉移、血栓性微血管病(TMA)、年齡相關黃斑變性、糖尿病性視網膜病變，糖尿病性腎病變以及其它微血管疾病。
再者，依據本發明的液體醫藥調配物可用於治療及/或預防透析患者，尤其是在血液透析時預防分流器血栓的Cimino-瘻管。可以使用天然動靜脈瘻管、合成環移植物、大口徑中心靜脈導管或由人工表面組成的其它裝置進行血液透析。投與本發明的抗體將防止在透析期間和之後不久於瘻管內形成血塊(以及栓塞的血塊在肺動脈中的傳播)。
而且，依據本發明的液體醫藥調配物還可用於治療及/或預防在心肺旁路手術(例如ECMO：體外膜氧合)後經歷心內和肺內血栓形成的患者。
在不增加不欲的出血事件風險，且在此群體中靜脈血栓栓塞(VTE)和心房顫動(例如血液透析患者的末期腎病)的發生率很高的情況下，透析患者非常需要抗凝血。依據本發明的液體醫藥調配物也可用於治療及/或預防這些類型的患者。
依據本發明的液體醫藥調配物還可用於治療及/或預防患有特發性血小板減少性紫癜(IPT)的患者。與普通群體相比，這些患者的血栓形成風險增大。與對照相比，ITP患者中的凝血因子FXI濃度明顯更高，並且ITP患者中的aPTT明顯更長。
此外，依據本發明的液體醫藥調配物也適用於預防及/或治療肺動脈高血壓。
在本發明的上下文中，術語「肺動脈高血壓」包括肺動脈高血壓、與左心病症相關的肺性高血壓、與肺病及/或缺氧相關的肺性高血壓，以及由於慢性血栓栓塞引起的肺性高血壓(CTEPH)。
「肺動脈高血壓」包括特發性肺動脈高血壓(IPAH，以前也稱為原發性肺高壓)、家族性肺動脈高血壓(FPAH)和相關的肺動脈高血壓(APAH)，其與膠原蛋白病、先天性全身性肺分流缺陷、門脈高壓、HIV感染、攝入某些藥物和藥劑，以及其它病症(甲狀腺疾病、肝醣貯積症、高雪氏病(Morbus Gaucher)、遺傳性毛細血管擴張症、血紅蛋白病、骨髓增生性疾病、脾切除術)，帶有顯著靜脈/毛細血管的病症(如肺靜脈閉塞性病症和肺毛細血管血管瘤病)，以及新生兒持續性肺性高血壓有關。
與左心病症相關的肺性高血壓包括患病的左心房或左心室以及二尖瓣或主動脈瓣膜缺陷。
與肺病及/或缺氧相關的肺性高血壓包括慢性阻塞性肺病、間質性肺病、睡眠呼吸暫停症候群、肺泡換氣不足，慢性高山病以及先天缺陷。
由於慢性血栓栓塞引起的肺性高血壓(CTEPH)包括近端肺動脈的血栓栓塞性閉塞、遠端肺動脈的血栓栓塞性閉塞以及非血栓性肺栓塞(腫瘤、寄生蟲、異物)。
本發明進一步提供了依據本發明的液體醫藥調配物在製造用於治療及/或預防與類肉瘤病、組織細胞增多症X和淋巴管瘤病相關的肺性高血壓的藥劑的用途。
此外，依據本發明的液體醫藥調配物也適用於在傳染病及/或全身性發炎性症候群(SIRS)、敗血性器官功能障礙、敗血性器官衰竭與多重器官衰竭、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、急性肺損傷(ALI)、敗血性休克及/或敗血性器官衰竭的情況下治療及/或預防彌漫性血管內凝血。
在感染過程中，可能存在凝血系統的廣泛性活化(彌漫性血管內凝血或消耗性凝血病，下文稱為「DIC」)，伴隨有在不同器官中的微血栓形成和繼發性出血性併發症。此外，可能存在內皮損傷伴隨著血管滲透性增加、液體和蛋白質擴散到外部空間。隨著感染的進展，可能有器官衰竭(例如腎衰竭、肝衰竭、呼吸衰竭、中樞神經功能缺損和心血管衰竭)或多重器官衰竭。
在DIC的情況下，於受損的內皮細胞表面、異物表面或交聯的血管外組織處有大規模凝血系統活化。結果，在不同器官的小血管中有凝血伴隨著缺氧和隨後的器官功能障礙。繼發效應是凝血因子(例如因子X、凝血酶原和纖維蛋白原)與血小板的消耗，這降低了血液的可凝固性並且可能導致大量出血。
依據本發明的液體醫藥調配物也適用於在患者中初步預防血栓性或血栓栓塞性病症及/或發炎性病症及/或伴有血管通透性增加的病症，其中基 因突變導致酶活性增加或酶原水平升高，而這些是透過酶活性或酶原濃度的相關測試/測量確定的。
本發明進一步提供依據本發明的液體醫藥調配物用於治療及/或預防病症，特別是上述病症的用途。
本發明進一步提供依據本發明的液體醫藥調配物在製造用於治療及/或預防病症，特別是上述病症的藥劑中的用途。
本發明進一步提供使用治療有效量的本發明化合物治療及/或預防病症，特別是上述病症的方法。
本發明進一步提供依據本發明的液體醫藥調配物，其用於使用治療有效量的本發明化合物治療及/或預防病症，特別是上述病症的方法。
這些在人類中已被充分描述的疾病也可以相當的病因發生在其它哺乳動物中，並且可以用本發明的液體醫藥調配物予以治療。
在本發明的上下文中，術語「治療(treatment或treat)」以習知意思使用，並且表示照料，照護和護理患者，目的是要對抗、減輕、減弱或緩和疾病或健康異常，並改善這個疾病所致的生活狀態損害。
因此，本發明進一步提供依據本發明的液體醫藥調配物用於治療及/或預防病症，特別是上述病症的用途。
本發明進一步提供依據本發明的液體醫藥調配物在製造用於治療及/或預防病症，特別是上述病症的藥劑的用途。
本發明進一步提供依據本發明的液體醫藥調配物在治療及/或預防病症，特別是上述病症的方法中的用途。
本發明進一步提供使用有效量之依據本發明液體醫藥調配物之一者治療及/或預防疾病，更特別是上述疾病的方法。
在一個較佳具體例中，治療及/或預防是非經腸投與依據本發明的液體醫藥調配物。尤其偏好皮下投藥。
依據本發明的醫藥調配物可以單獨使用，或者(若需要的話)可以與一或多種其它藥理學活性物質組合使用，前提是這個組合不會導致不希望的和不可接受的副作用。因此，本發明進一步提供包含至少一種本發明組合物以及一或多種其它活性成份的藥劑，特別是用於治療及/或預防上述疾病。
根據本發明的液體可以作為單次治療投藥，不過也可以連續重複投藥，或者可以在診斷後長期投藥。
實例1：抗體濃度對於黏度以及顆粒形成的影響
PCT/EP2018/050951描述抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D的一種低濃度調配物，其包含25mg/ml076D-M007-H04-CDRL3-N110D，在pH 6.0下於10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、5%海藻糖二水合物、0.05%聚山梨醇酯80中，其特別適於靜脈內投藥。
關於皮下施用，重要的是要確定組合物的最大濃度，當在這個特定調配物中濃縮時，最大濃度會導致黏度值和顆粒形成增加。所需劑量的臨床情境提出了約150mg/ml的濃度目標。因此，使用離心機(Sigma,Typ 3K30)在2000G下與含有30kDa濾膜(分離組合物以及抗體)的離心管(Merck Milipore,Amicon Ultra-15)組合增加076D-M007-H04-CDRL3-N110D的濃度。
針對076D-M007-H04-CDRL3-N110D的低濃度調配物，如PCT/EP2018/050951中所述，在組胺酸/甘胺酸緩衝系統中以遞增濃度調配076D-M007-H04-CDRI3-N110D：
(1)在pH 6.0下，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、5%海藻糖二水合物、0.05%聚山梨醇酯80
使用吸收280nm波長的UV/VIS光譜儀(NanoDrop 2000,ThermoFisher Scientific)分析本實例中的組合物以及下面實例中的組合物的抗體濃度。關於可能的光散射，也在320nm下校正測試。
使用小型樣品黏度計(mVroc,RheoSense)測量溶液的動態黏度。在20℃下以50μl/min至100μl/min的流速注入250μL的076D-M007-H04-CDRL3-N110D樣品通過流動通道。
使用流式細胞儀(MFI,ProteinSimple,2μm-100μm)和光遮蔽(Pamas SVSS,Pamas)監測顆粒形成，覆蓋範圍為2μm至100μm的顆粒尺寸。
Figure 108123732-A0202-12-0030-1
表1總結了在組合物1中隨著076D-M007-H04-CDRL3-N110D濃度增加所測量的黏度和顆粒負載。不可能在不增加顆粒形成並在約30mPa*s下超過黏度可接受限值的情況下將076D-M007-H04-CDRL3-N110D的濃度增加至約150mg/ml的建議近似範圍。因此，根據皮下給藥的需要，發現到如PCT/EP2018/050951中所述包含組胺酸/甘胺酸緩衝系統的FXIa抗體的低濃度調配物(調配物1)不適用076D-M007-H04-CDRL3-N110D的高濃度調配物。
實例2：不同賦形劑的影響
為了降低黏度並增加抗體濃度，測試了不同賦形劑的影響。本實例顯示了不同賦形劑對屬性黏度和第二維里係數的影響。
第二維里係數(B22值)是透過在658nm波長下測量靜態光散射(SLS)來決定，其取決於組合物抗體濃度在1mg/ml至10mg/ml的範圍內(NanoStar,Wyatt Technologies)。透過靜態光散射，可以監測分子間交互作用。如果分子質量隨濃度增加而不成比例地增加，則抗體傾向於聚集。調配物中的主要環境稱為「有吸引力」。相反，如果分子質量不成比例地減少，則系統中「排斥」環境占優勢。聚集的趨勢受到限制。
將076D-M007-H04-CDRL3-N110D以約120.0mg/ml調配於組胺酸-甘胺酸緩衝系統中，該系統在pH 6.0下包含10mM L-組胺酸和130mM甘胺酸(組合物2)加上濃度分別為50mM、75mM和150mM的不同賦形劑。測試以下組合物：
(2)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸
(3)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、50mM氯化鈉
(4)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM氯化鈉
(5)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、150mM氯化鈉
(6)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、50mM二水合氯化鈣
(7)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM二水合氯化鈣
(8)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、150mM二水合氯化鈣
(9)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、50mM L-離胺酸鹽酸鹽
(10)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM L-離胺酸鹽酸鹽
(11)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、150mM L-離胺酸鹽酸鹽
(12)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽
(13)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM L-精胺酸鹽酸鹽
(14)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、150mM L-精胺酸鹽酸鹽
Figure 108123732-A0202-12-0032-2
表2總結了組合物2-14的動態黏度和第二維里係數。黏度值從39.8mPa*s(包含組胺酸-甘胺酸-緩衝系統而沒有其它賦形劑的組合物2)開始降低，所有測試的賦形劑最多為降低5倍。大體上，黏度降低效果隨著賦形劑數量增加而增加。氯化鈉、離胺酸、氯化鈣和精胺酸以150mM的濃度分別將溶液黏度降低至12.7mPa*s、10.7mPa*s、7.6mPa*s和7.31mPa*s。然而，使用75mM精胺酸實現最低黏度，得到的黏度為7.2mPa*s。
選擇精胺酸是因為它在這個系統中是降低黏度最有效的賦形劑。使用精胺酸作為黏度降低劑進行更多實驗。然而，仍需要進一步研究以平衡降低的黏度與抗體穩定性。
此外，組合物(14)的動態黏度值(表2)指出蛋白質-蛋白質交互作用的明顯變化。因此，在壓力條件下對組合物(2)和(14)進行例示性測試。
由於精胺酸是最有效的黏度降低劑並且還對第二維里係數顯示出正向效果，因此與起始組合物2(不含賦形劑)進行比較，透過在不同壓力條件下引發顆粒產生來測試組合物14(含有150mM精胺酸)。在組合物2和14引起三種可能導致蛋白質聚集和寡聚物(HMW)形成直至可見顆粒的不同壓力條件。使用振盪器(Type HS 260C,IKA)測試的壓力條件是攪動壓力(300rpm歷時3小時)、3次冷凍/解凍循環(從-20℃至20℃)每次6小時，並在2-8℃下儲存1週。
Figure 108123732-A0202-12-0033-3
如表3中所示，與沒有黏度降低賦形劑的組合物2相比較，在所有三種壓力條件下，添加精胺酸(組合物14)對076D-M007-H04-CDRL3-N110D的顆粒形成行為具有總體正向效果。
實例3：pH的影響
除了不同的賦形劑之外，pH的變化可能影響抗體的黏度和穩定性。pH 4.7至7.4的pH範圍被認為適於皮下施用。
如前所述評估第二維里係數和顆粒形成。透過在含有抗體的組合物中測量內部和外部色胺酸源的螢光來確定組合物的熱穩定性。使用差示掃描螢光測定法(DSF)方法(Prometheus,NanoTemper)在15℃至95℃的溫度分佈中加熱組合物，並在330nm和350nm波長下收集螢光數據。用DSF測量的熔融溫度(Tm)升高強烈指出構形穩定性增加。
在三種不同的pH值下，以約120mg/ml將076D-M007-H04-CDRL3-N110D調配在10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸和75mM L-精胺酸鹽酸鹽中。測試以下組合物：
(15)pH 6.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM L-精胺酸鹽酸鹽
(16)pH 5.5，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM L-精胺酸鹽酸鹽
(17)pH 5.0，10mM L-組胺酸、130mM甘胺酸、75mM L-精胺酸鹽酸鹽
Figure 108123732-A0202-12-0034-4
表4總結了組合物15至17的第二維里係數、顆粒形成以及熱穩定性。將pH從pH 6.0降低至pH 5.5和pH 5.0分別將第二維里係數從7.43E-06ml*mol/g2增加至1.14E-04ml*mol/g2，並且由於樣品處理而誘導顆粒形成從約294個顆粒>2μm減少到31個顆粒。然而，Tm值從66.38℃降至59.36℃。
由於對第二維里係數的正向影響，決定在約5.0的低pH下對於進一步的實驗是較佳的。但是，注意到構形穩定性降低的交換並在實施例5中進一步解決。
實例4：界面活性劑濃度的影響
本實例顯示了使用Micro Flow Imaging(MFI 5200,Protein Simple)在2μm至100μm的顆粒範圍內增加界面活性劑濃度對組合物穩定性在亞可見顆粒形成方面的影響。如實例2中所述，將組合物暴露於不同的壓力條件下。所選擇的界面活性劑是聚山梨醇酯80。
在pH 5.0下以約150mg/ml將076D-M007-H04-CDRL3-N110D調配於20mM L-組胺酸中，同時增加聚山梨醇酯80的濃度。測試以下組合物：
(18)pH 5.0，20mM L-組胺酸、0.00%聚山梨醇酯80
(19)pH 5.0，20mM L-組胺酸、0.01%聚山梨醇酯80
(20)pH 5.0，20mM L-組胺酸、0.05%聚山梨醇酯80
(21)pH 5.0，20mM L-組胺酸、0.10%聚山梨醇酯80
(22)pH 5.0，20mM L-組胺酸、0.15%聚山梨醇酯80
(23)pH 5.0，20mM L-組胺酸、0.20%聚山梨醇酯80
Figure 108123732-A0202-12-0035-5
表5總結在對組合物誘發攪動壓力時，076D-M007-H04-CDRL3-N110D的顆粒形成。
Figure 108123732-A0202-12-0035-6
表6總結在對組合物誘發冷凍/解凍壓力時，076D-M007-H04-CDRL3-N110D的顆粒形成。
在組合物(20)中約0.05%聚山梨醇酯80的濃度至在組合物23中0.20%聚山梨醇酯80的濃度，界面活性劑的保護效用達到穩定水平。為了要確保對儲存壽命的保護效用並產生安全穩健的通道，0.1%聚山梨醇酯80是尤其佳的。另外，如表6中所示，0.1%聚山梨醇酯80(組合物21)的保護效用導致637個顆粒>5μm，相比於組合物20中的897個顆粒>5μm，同時誘發冷凍/解凍壓力，這表示聚山梨醇酯80濃度應至少為0.1%。
如表5與表6中所示，越高濃度的聚山梨醇酯80證實對保護效用沒有顯著增進。
實例5：不同賦形劑的組合
這個實例顯示了前面實例的組合方法。其目的是要優化前述降低076D-M007-H04-CDRL3-N110D之黏度以及增進076D-M007-H04-CDRL3-N110D之穩定性的效用，同時提供有關精胺酸濃度範圍的更詳細資訊。為了將組合物的滲透壓降低至生理水平(240-400mOsm/kg)，必須降低賦形劑的整體濃度。
以下篩選之目的是要優化高濃度076D-M007-H04-CDRL3-N110D調配物的黏度降低性質還有顆粒形成防止性質，同時將精胺酸含量降低至50mM，並在較低濃度下顯示有益效用。
還研究了精胺酸與甘胺酸和甲硫胺酸組合的協同效用。因此，在不同pH值下建立了具有不同賦形劑及其組合的緩衝系統，並評估了第二維里係數、熱穩定性和黏度。
以約150mg/ml將076D-M007-H04-CDRL3-N110D調配於不同組合物中：
(24)20mM L-組胺酸
(25)20mM L-組胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽
(26)20mM L-組胺酸、30mM L-精胺酸鹽酸鹽
(27)20mM L-組胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽、10mM L-甲硫胺酸
(28)20mM L-組胺酸、130mM甘胺酸
(29)20mM L-組胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽、130mM甘胺酸
(30)20mM磷酸鹽緩衝劑
(31)20mM乙酸鹽緩衝劑
在5.0至6.0的pH範圍內以0.2的步進測試所有組合物。
Figure 108123732-A0202-12-0037-7
表7總結了包含約150mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D的不同組合物的第二維里係數，其取決於組合物的pH。如實例3中所述，降低pH總體上導致第二維里係數增加。B22值(代表分子間交互作用)介於-2.70E-04mol*ml/g2和2.94E-05mol*ml/g2之間。組合物25、28、29和31在pH 5.2和更低時具有高於零的第二維里係數(參見表7)，這是較佳的，因為高B22值是膠體穩定性的跡象。相反地，儘管含有30mM精胺酸，但組合物26沒有顯示出顯著的改善。 這個觀察到的效用得出的結論是，僅僅30mM精胺酸的濃度對076D-M007-H04-CDRL3-N110D的可行高濃度調配物來說不夠充分。
Figure 108123732-A0202-12-0038-8
表8總結了包含約150mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D的不同組合物的熱穩定性，其取決於組合物的pH。Tm值介於59.7℃至78.5℃之間。總體降低的pH導致Tm值降低。使用呈不同組合和濃度的胺基酸(組胺酸、甘胺酸，精胺酸及/或甲硫胺酸)來穩定的組合物(24至28)具有比含有磷酸鹽或乙酸鹽緩衝劑的組合物更低的Tm值。
出乎意料的是，在含有胺基酸的組合物中，與不含甘胺酸的組合物相比，組合物28顯示出+4℃至+5℃的顯著更高的Tm值，從而得出甘胺酸對抗體具有穩定效用的結論。
精胺酸對第二維里係數的正向效用以及甘胺酸對076D-M007-H04-CDRL3-N110D的熱穩定性的正向效用得出結論，較佳的組合物除了組胺酸外還應包括兩種胺基酸。
除組合物32(20mM組胺酸、50mM精胺酸、50mM甘胺酸、5%海藻糖二水合物、0.10%聚山梨醇酯80，pH5.0)中的組胺酸外，賦形劑甘胺酸和精胺酸的組合證實了協同效用。組合物32的第二維里係數為3.385E-05 ml*mol/g2，並且在組合物25、28和29的範圍內(如表7中所示)。組合物32的Tm為63.3℃，與除組胺酸外僅包含甘胺酸的組合物28相當。這些數據證明，除了組胺酸外，甘胺酸和精胺酸的組合還降低了蛋白質-蛋白質交互作用(第二維里係數)並同時增加了熱穩定性(Tm)。
Figure 108123732-A0202-12-0039-9
表9顯示了在pH 5.0和pH 6.0下包含約150mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D的不同組合物的動態黏度。儘管組合物25和29的第二維里係數是在相當範圍內，但組合物29的動態黏度在pH 5.0下是產生25.6mPa*s的可接受黏度的唯一調配物。
使用凍結點滲透壓計和三點校準(50、300、2000mOsm/kg-Osmomat 030,GonoTech,Berlin)測量滲透壓。在不含其它界面活性劑(如聚山梨醇酯80)或穩定劑(如海藻糖二水合物)的情況下，組合物29產生滲透壓為約324mOsm/kg。已知加入5%的海藻糖二水合物導致組合物滲透壓值額外增加145mOsm/kg。因此，組合物29與5%海藻糖二水合物的組合所得的理論滲透壓為469mOsm/kg，預期為高滲的且在240-400mOsm/kg的可接受範圍之外。
因此，組合物29中的甘胺酸量從130mM降至50mM(產生組合物32)。這個減少導致滲透壓為241mOsm/kg。與5%海藻糖二水合物作為穩定劑的組合將在算術上產生386mOsm/kg的可接受的滲透壓。
透過測量組合物32的滲透壓證實該算術值，其顯示滲透壓為371mOsm/kg。
實例6：依據習知冷凍乾燥的凍乾法
本實例顯示了包含076D-M007-H04-CDRL3-N110D以及組胺酸-甘胺酸-精胺酸緩衝系統的高濃度液體組合物用於習知凍乾法的適用性。加入海藻糖作為穩定劑。
以約150mg/ml將076D-M007-H04-CDRL3-N110D調配於以下中：
(32)pH 5.0，20mM L-組胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽、50mM甘胺酸、5%海藻糖二水合物、0.10%聚山梨醇酯80
為了開發合適的凍乾方法，必須確定塌陷溫度，該塌陷溫度決定了可在哪個溫度下進行初步乾燥。使用凍乾顯微鏡(Lyostat 2,Biopharma)藉由在抽真空(0.1m巴)之前將組合物凍結至-50℃並以1℃/分鐘的斜率加熱樣品至20.0℃來測量塌陷溫度。在加熱組合物的同時拍攝並分析照片，直到可以觀察到測試系統的塌陷。
發現076D-M007-H04-CDRL3-N110D的塌陷溫度為-14.3℃，並且是選擇下面的凍乾循環的必要參數。
根據習知冷凍乾燥方法(方法1)處理包含抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體組合物32。將含有150mg/ml抗-FXIa抗體的溶液裝入10R第I型玻璃小瓶中，並在習知小瓶冷凍乾燥器中冷凍乾燥。將總共20個小瓶裝滿每瓶2.25ml溶液，半塞並裝入Virtis Genesis冷凍乾燥器中。將溶液凍結至-45℃，並在+10℃下進行初步乾燥，然後在40℃下進行二次乾燥步驟。完全冷凍乾燥程序需要大約38個小時。將小瓶塞在冷凍乾燥器內並在卸載後直接密封。
組合物32依據習知冷凍乾燥方法(方法1)的凍乾循環的細節總結在表12中。
Figure 108123732-A0202-12-0041-10
在如此進行的習知冷凍乾燥方法中隨著時間測量的壓力和溫度曲線圖示於圖2中。
上述習知凍乾方法產生黃色餅或粉末。其隨後可以被還原。
為了還原凍乾物，作為還原介質的2ml無菌注射用水被注入每個小瓶中。然後將小瓶輕輕攪拌約10至20秒。還原這個藉由習知冷凍乾燥獲得的凍乾物的還原時間為137分鐘。
還原後，觀察到沒有任何可見顆粒的透明黃色溶液。未檢測到聚集或微量聚集。
實例7：依據不同噴霧冷凍乾燥方法的凍乾作用
由於透過實例6中所述的習知冷凍乾燥方法(方法1)獲得的凍乾物的還原時間無法接受地長(超過2小時)，應用兩種不同的其它冷凍乾燥方法並與 如上文所述習知冷凍乾燥方法進行比較。
首先，依據WO 2006/008006中描述的方法(方法2)處理包含抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體組合物32。將含有150mg/ml抗-FXIa抗體的138ml溶液噴灑通過400μm噴嘴，並在470Hz的頻率下以約19.5g/min的速率和220m巴的壓力覆蓋率霧化。在充滿液態氮的分離容器中將液滴凍結，液態氮大致定位在噴嘴下方25cm處並在整個過程中攪拌。噴霧完成後，藉由將液態氮倒過預冷篩中而將凍結丸粒取出，且放入襯有塑料薄膜的鋼架上，放在Virtis Advantage Pro冷凍乾燥機的預冷盤架上並凍乾。初步乾燥在0℃盤架溫度下進行持續33小時，然後在30℃下二次乾燥5小時。乾燥完成後，將經乾燥的丸粒立即轉移到牢固密封的玻璃瓶中。隨後，在乾燥氮氣氛下，秤取520mg丸粒至10R第I型玻璃小瓶中。依據WO 2006/008006中所述的方法在抗體溶液的冷凍和乾燥期間隨時間測量的壓力和溫度曲線圖示於圖3中。
其次，依據以噴霧冷凍乾燥為基礎之用於減少經冷凍乾燥丸粒的還原時間的方法(「本文所述的方法3)來處理包含抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體組合物32，該方法包含以下步驟：
a)冷凍包含抗-FXIa抗體之溶液的液滴以形成丸粒；
b)冷凍乾燥該等丸粒；
其中，在步驟a)中，透過將包含抗-FXIa抗體的溶液送至具有可控溫內壁面且內部溫度低於溶液之凍結溫度的冷卻塔中來形成液滴的方式來形成液滴，且在步驟b)中將丸粒於容納在真空室內的旋轉槽中冷凍乾燥。
因此，透過將溶液噴霧至壁冷的冷卻塔中，使含有150mg/ml抗-FXIa抗體的250ml溶液受到冷凍乾燥。噴霧噴嘴具有一個直徑為400μm的孔。這對應於約800μm的液滴尺寸。振盪頻率為1445Hz，偏轉壓力為0.4巴，且泵以14rpm運行。乾燥完成後，將經乾燥的丸粒立即轉移到牢固密封的玻璃瓶中。隨 後，在乾燥氮氣氛下，秤取520mg丸粒至10R第I型玻璃小瓶中。在冷卻塔中隨時間測量的溫度曲線圖示於圖4中。在冷凍和乾燥抗體溶液期間隨時間測量的溫度和壓力曲線圖示於圖5中。如本文所述的方法3產生均勻的丸粒，其展現出狹窄的尺寸和重量分佈以及高表面積。藉由這個方法得到的丸粒中的殘留濕度為0.268%。
藉由習知冷凍乾燥(方法1)所得到的凍乾物包含0.15%殘留水份。
藉由三種不同冷凍乾燥方法所得到之丸粒的尺寸排阻層析分析提供於表13中。
Figure 108123732-A0202-12-0043-11
總之，就三種冷凍乾燥方法來說，藉由尺寸排阻層析獲得了彼此相當的分析數據。
為了確定完整抗體相對於樣品中存在的總蛋白質組份的量，藉由毛細管SDS-凝膠電泳(CGE)分析IgG純度。在十二烷基硫酸鈉(SDS)存在下，使用裸露的熔融石英毛細管藉由CGE分離測試樣品和參考樣品。測試是在非還原條件下進行。透過在220nm下的吸光度監測分離的樣品。分析目的是要求出主峰的峰面積積分並分析還原後的副產物。
毛細管凝膠電泳(CGE)以及ELISA分析的結果提供於表14中。
Figure 108123732-A0202-12-0044-12
藉由三種不同冷凍乾燥方法獲得之丸粒的還原時間如下進行比較。將2ml注射用無菌水作為還原介質注入每個小瓶中。拍照後，將小瓶輕輕攪動約10至20秒。目視觀察丸粒隨時間的還原並以照相方式記錄。
下面提供藉由三種不同冷凍乾燥方法獲得之丸粒的還原時間：
Figure 108123732-A0202-12-0044-13
依據本文所述方法3獲得之包含經冷凍乾燥抗-FXIa抗體的丸粒還原明顯快於藉由習知冷凍乾燥(方法1)獲得之包含等效抗-FXIa抗體之凍乾物的還原，也快於依據WO 2006/008006(方法2)獲得之經冷凍乾燥丸粒。
之後對藉由三種不同冷凍乾燥方法獲得的丸粒進行掃描電子顯微鏡(SEM)測量。因此，在氮氣氛下在手套袋中進行樣品的製備，各個樣品單獨製備。將樣品放在支架上並用金濺射。隨後進行掃描電子顯微鏡測量。SEM照片顯示在圖6至8中。
可以看到，如本文所述方法3生產的丸粒表現出特別均勻的形態，這可以在後續處理步驟中增進處理性能。
實例8：經凍乾高濃度調配物的長期穩定性
本實例說明076D-M007-H04-CDRL3-N110D的經凍乾高濃度調配物在2-8℃和25℃下的長期穩定性。
將2.25ml組合物32填入滅菌的6R玻璃小瓶中。依據如實例6中所述習知冷凍乾燥方法(方法1)將液體調配物凍乾。待還原之含有150mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D的經凍乾組合物32因此包含0.047mg L-組胺酸、0.158mg L-精胺酸鹽酸鹽、0.056mg甘胺酸、0.75mg海藻糖二水合物，和0.015mg聚山梨醇酯80/mg O76D-M007-H04-CDRL3-N110D。
在用水還原之後，經凍乾組合物具有約5.0的pH。
將經凍乾的組合物在2-8℃和25℃下儲存12個月的時間段。在某幾個時間點(3、6、9、12、18和24個月)，用無菌水還原樣品。
在還原(最終體積2.25ml/小瓶)後，分析液體組合物在醫藥應用中的可用性。除了測量物理穩定性(濃度、聚集、顆粒形成、動態黏度、滲透壓等)的上述分析方法之外，還分析了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的化學穩定性以及活性。
使用尺寸排阻層析(SEC)測量單體含量，該尺寸排阻層析是基於其空間尺寸將單體與片段(低分子量，LMW)和寡聚物(高分子量，HMW)分離。使用Tosoh TSK gel super SW3000與Agilent HPLC 1200組合實現溶離份的分離。樣品在pH 6.8下於160mM PBS/200mM精胺酸緩衝液中以0.2ml/min的流速溶離。
使用毛細管等電聚焦(cIEF)測定076D-M007-H04-CDRL3-N110D的電荷變體。在本方法中，076D-M007-H04-CDRL3-N110D的樣品由於它們的電 荷而在電場(SCIEX PA800 Enhanced,Beckman Coulter)中分離，同時使用UV-vis方法偵測變體。於正常極性下使樣品在25kV下保持15分鐘來實現電荷變體的聚焦步驟。進行化學移動，使樣品在30kV下保持30分鐘。在此程序之後，停止數據收集。
使用酶聯免疫吸附分析(ELISA)報告076D-M007-H04-CDRL3-N110D的生物化學測試作為結合能力。然後將結合能力與含有20mM L-組胺酸/50mM L-精胺酸鹽酸鹽/50mM甘胺酸緩衝劑、5%海藻糖二水合物以及0.1%聚山梨醇酯80的參考標準品在pH 5下在<-60℃下進行比較。比較參考標準品和測試樣品的吸光值。
使用覆蓋2μm至100μm顆粒尺寸的光遮蔽(HIAC,，Beckman Coulter)監測顆粒形成。用自動化測試程序進行實驗，來自10個單獨小瓶的合併樣品進行三重複。針對每次測量，使用5ml樣品。
借助於使用濁度計2100N IS(HachLange,Düsseldorf)的濁度測量來確定溶液的濁度。測量3ml的076D-M007-H04-CDRL3-N110D，並與依據Ph.Eur.與光學參考標準品進行比較。(RS I-IV)。
Figure 108123732-A0202-12-0046-14
表15顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的經凍乾高濃度組合物32在2-8℃下的穩定性研究結果。在24個月的時間段內，觀察到如pH或顆粒物質的穩定性參數沒有顯著變化。
Figure 108123732-A0202-12-0047-15
表16顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的經凍乾高濃度組合物32的進一步穩定性研究結果。在24個月的時間段內，觀察到如單體含量、結合能力、電荷變體或蛋白質濃度的穩定性參數沒有顯著變化。
Figure 108123732-A0202-12-0047-43
表17顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的經凍乾高濃度組合物32在25℃下的穩定性研究結果。在12個月的時間段內，觀察到如pH或顆粒物質的穩定性參數沒有顯著變化。
表18：經凍乾076D-M007-H04-CDRL3-N110D在25℃下的穩定性數據。在用無菌水還原之後的進一步測試結果
Figure 108123732-A0202-12-0048-17
表18顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的經凍乾高濃度組合物32的進一步穩定性研究結果。與2-8℃的穩定性數據相比，可以觀察到單體含量從98%降低至94%而電荷變體(cIEF)從74%變動至68%。然而，如蛋白質濃度和結合能力的穩定性參數在這個時間段內顯示出沒有顯著變化。
確認程凍乾狀態的整體組合物32在2-8℃下儲存至少12個月後是穩定的。
實例9：高濃度液體調配物的長期穩定性
本實例說明在兩種不同抗體濃度[150mg/ml(32)和100mg/ml(34)]下，組合物32中076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體高濃度調配物的長期穩定性與含有磷酸鹽代替胺基酸作為緩衝劑的組合物(34)進行比較。
以約150mg/ml將076D-M007-H04-CDRL3-N110D調配於以下組合物中：
(32)pH 5.0，20mM L-組胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽、50mM甘胺酸、5%海藻糖二水合物、0.01%聚山梨醇酯80
或是調配於磷酸鹽緩衝劑中：
(33)pH 5.0，50mM磷酸鹽、5%海藻糖二水合物、0.1%聚山梨醇酯80
另外，在與組合物32相同的緩衝系統中，以約100mg/ml的抗體濃度測試076D-M007-H04-CDRL3-N110D：
(34)pH 5.0，20mM L-組胺酸、50mM L-精胺酸鹽酸鹽、50mM甘胺酸、5%海藻糖二水合物、0.01%聚山梨醇酯80
將液體組合物在2至8℃下儲存6個月的時間段。在指定的時間點(2、4和6個月)，如上述分析樣品。
此外，使用毛細管電泳方法(CGE,red-SCIEX PA 800 Enhanced,Beckman Coulter)在還原條件下分析樣品的IgG純度(重鏈和輕鏈)，以便比較不同具體例的片段化。
如表19中所示，在組合物32和34中，所有參數如結合能力、單體含量以及濁度於2-8℃下歷時6個月時間段是穩定的。
Figure 108123732-A0202-12-0049-18
表19顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體高濃度調配物32-34的穩定性研究結果。包含組胺酸/甘胺酸/精胺酸的組合物(組合物32(150mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D))以及組合物34(100mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D))在pH、濁度，蛋白質濃度以及結合能力方面是穩定的。
然而，076D-M007-H04-CDRL3-N110D於相同儲存條件下在磷酸鹽緩衝劑中(組合物33)並不穩定。含磷酸鹽緩衝劑的組合物33不能穩定溶液的pH值，且濁度值幾乎增加至參考標準品IV(30 NTU)。
Figure 108123732-A0202-12-0050-19
表20顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體高濃度調配物32-34的進一步定向穩定性研究結果。組合物32(150mg/ml)以及組合物34(100mg/ml)在顆粒物質、電荷變體形成(cIEF)、還原條件下的片段化(CGE)以及單體含量(SEC)方面是穩定的。
然而，076D-M007-H04-CDRL3-N110D於相同儲存條件下在磷酸鹽緩衝劑中(組合物34)並不穩定。與包含組胺酸-甘胺酸-精胺酸緩衝劑的組合物相比，顆粒形成不成比例地增加。等電聚焦(cIEF)的結果顯示，與組胺酸/甘胺酸/精胺酸緩衝劑組合物相比，6個月後在磷酸鹽緩衝劑中的076D-M007-H04-CDRL3-N110D電荷變體增加。另外，使用CGE分析的還原片段顯示重鏈和輕鏈的總數減少，表示磷酸鹽緩衝劑中抗體的片段化。
液體調配物的長期穩定性數據分析得到了結論，包含依據本發明的組胺酸-甘胺酸-精胺酸緩衝系統的組合物32出乎意料地穩定了呈液體之 076D-M007-H04-CDRL3-N110D的高濃度調配物歷時至少6個月。依據本發明的調配物的凍乾是可行的但不是必需的，因為依據本發明的高濃度調配物抗-FXIa抗體在長時間段內作為液體調配物是穩定的。
如果需要冷凍乾燥，較佳是藉由本文所述的噴霧冷凍乾燥方法進行，與藉由習知冷凍乾燥獲得的或藉由WO 2006/008006 A1中揭示的方法獲得的凍乾物相比，其提供明顯更短的還原時間。
表21和22顯示了076D-M007-H04-CDRL3-N110D的液體高濃度組合物32的進一步穩定性研究結果。在9個月的時間段內，觀察到如單體含量、結合能力、電荷變體或蛋白質濃度的穩定性參數沒有顯著變化。
Figure 108123732-A0202-12-0051-20
Figure 108123732-A0202-12-0051-21
實例10：高濃度調配物之凍塊(frozen bulk)的長期穩定性
本實例說明在<-60℃下18個月的時間段內液體組合物(32)中的076D-M007-HO4-CDRL3-N110D液體高濃度調配物的長期穩定性。
將液體組合物在<-60℃下儲存12個月的時間段。在指定的時間點(1、2、3、6、9，12和18個月)，如上述分析樣品。
如表23中所示，所有相關參數如pH、電荷變體、單體含量、高分子含量、活性和蛋白質濃度在組合物32中於<-60℃下18個月時間段內是穩定的。冷凍狀態下的整體組成物32在<-60℃下儲存至少18個月後確認是穩定的。
Figure 108123732-A0202-12-0052-22
序列資訊
下面列出揭示於WO 2013/167669中之SEQ ID NO：19、20、27、29與30的序列：
<SEQ ID NO：19；PRT；智人>
Figure 108123732-A0202-12-0052-23
<SEQ ID NO：20；PRT；智人>
Figure 108123732-A0202-12-0052-24
<SEQ ID NO：27；PRT；智人>
Figure 108123732-A0202-12-0053-25
<SEQ ID NO：29；PRT；智人>
Figure 108123732-A0202-12-0053-26
<SEQ ID NO：30；PRT；智人>
Figure 108123732-A0202-12-0053-27
<110> Bayer Pharma AG
<120> 抗-FXIa抗體之新穎穩定高濃度調配物
<130> BHC181007
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D
<400> 1
Figure 108123732-A0202-12-0055-28
Figure 108123732-A0202-12-0056-29
Figure 108123732-A0202-12-0057-30
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D
<400> 2
Figure 108123732-A0202-12-0057-32
Figure 108123732-A0202-12-0058-33
100‧‧‧冷卻塔
110‧‧‧內壁
120‧‧‧外壁
130‧‧‧空間
140‧‧‧冷卻工具
150‧‧‧噴嘴
160‧‧‧液體液滴
170‧‧‧冷凍丸粒
180‧‧‧斜槽
190‧‧‧閥
200‧‧‧真空乾燥室
210‧‧‧鼓輪
220‧‧‧經冷凍乾燥丸粒

Claims (18)

  1. 一種穩定液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D、10-20mM組胺酸、25-75mM甘胺酸以及50-75mM精胺酸，其中該調配物具有4.7-5.3的pH。
  2. 如請求項1及2之液體醫藥調配物，其包含選自下列組成之群的更多成份：防腐劑、載劑、界面活性劑以及穩定劑。
  3. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其中組胺酸濃度為20mM。
  4. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其中甘胺酸濃度為50mM。
  5. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其中精胺酸濃度為50mM。
  6. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其包含1-10%(w/v)的穩定劑。
  7. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其包含3-7%(w/v)海藻糖二水合物。
  8. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其包含濃度為0.005%至0.2%(w/v)的界面活性劑。
  9. 如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物，其中該界面活性劑選自由下列組成之群：聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20以及帕洛沙姆(poloxamer)188。
  10. 一種穩定液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D、20mM組胺酸、50mM甘胺酸與 50mM精胺酸、5%(w/v)海藻糖二水合物以及0.1%(w/v)聚山梨醇酯80，其中該調配物的pH為5。
  11. 一種穩定液體醫藥調配物，其包含濃度為約100mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D、20mM組胺酸、50mM甘胺酸與50mM精胺酸、5%(w/v)海藻糖二水合物以及0.05%(w/v)聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188，其中該調配物的pH為5。
  12. 一種穩定液體醫藥調配物，其包含濃度為約150mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D、20mM組胺酸、50mM甘胺酸與50mM精胺酸、5%(w/v)海藻糖二水合物以及0.1%(w/v)聚山梨醇酯80，其中該調配物的pH為5。
  13. 一種穩定液體醫藥調配物，其包含濃度為約150mg/ml或更高的抗-FXIa抗體076D-M007-H04-CDRL3-N110D、20mM組胺酸、50mM甘胺酸與50mM精胺酸、5%(w/v)海藻糖二水合物以及0.05%(w/v)聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188，其中該調配物的pH為5。
  14. 一種可藉由冷凍乾燥如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物所得到的凍乾物。
  15. 如請求項12之凍乾物，其藉由包含下列步驟的方法獲得：
    a)冷凍包含抗-FXIa抗體之溶液的液滴以形成丸粒；
    b)冷凍乾燥該等丸粒；
    其特徵在於
    在步驟a)中，藉由使包含抗-FXIa抗體之溶液進入冷卻塔(100)形成液滴的方式來形成該等液滴，該冷卻塔具有可控溫內壁面(110)以及低於該溶液的凍結溫度的內部溫度，
    以及在於
    在步驟b)中該等丸粒於旋轉槽(210)中被冷凍乾燥，該旋轉槽被容納在真空室(200)內。
  16. 一種包含如前述請求項中任一項之液體醫藥調配物或凍乾物的劑型。
  17. 如請求項14之劑型，其中該劑型為注射器、小瓶、筆型裝置或自動注射器。
  18. 一種如前述請求項中任一項之液體或經凍乾醫藥調配物，其用於治療或預防血栓性或血栓栓塞性病症。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2019297498A1 (en) * 2018-07-05 2021-01-21 Bayer Aktiengesellschaft Method for the production of freeze-dried pellets comprising an anti-coagulation factor xia (FXIa) antibody
EP4259200A1 (en) * 2020-12-11 2023-10-18 Boehringer Ingelheim International GmbH Formulation for multi-purpose application

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997008320A1 (en) 1995-08-18 1997-03-06 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Protein/(poly)peptide libraries
US8703126B2 (en) 2000-10-12 2014-04-22 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
DK1794524T3 (da) 2004-07-23 2012-04-16 Bayer Technology Services Gmbh Fremgangsmåde til frysning, tørring, lagring, analysering og fyldning (SFD-SAF-fremgangsmåde) (fremgangsmåde til frysetørring af piller til parenterale biologiske lægemidler)
EP2205280B1 (en) 2007-09-27 2019-09-04 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
EP2578974A1 (en) * 2011-10-05 2013-04-10 Sanofi Pasteur Sa Process line for the production of freeze-dried particles
EP2578975A1 (en) 2011-10-05 2013-04-10 Sanofi Pasteur Sa Rotary drum freeze-dryer
PL2847228T3 (pl) 2012-05-10 2019-03-29 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Przeciwciała zdolne do wiązania się z czynnikiem krzepnięcia XI i/lub jego aktywowaną postacią, czynnikiem Xla oraz ich zastosowanie
US9592297B2 (en) * 2012-08-31 2017-03-14 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
KR20150070384A (ko) 2012-10-25 2015-06-24 메디뮨 엘엘씨 안정한 저점도 항체 제제
EA202191513A1 (ru) 2014-10-23 2021-11-30 Эмджен Инк. Снижение вязкости фармацевтических составов
EP3167877A1 (en) * 2015-11-12 2017-05-17 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Method for the production of freeze-dried pellets comprising factor viii
EP3443346B1 (en) * 2016-04-13 2023-08-30 Medimmune, LLC Use of amino acids as stabilizing compounds in pharmaceutical compositions containing high concentrations of protein-based therapeutic agents
EP3254671B1 (en) * 2016-06-10 2019-11-13 Octapharma AG High concentration immunoglobulin composition for pharmaceutical application
EP3559047A1 (en) * 2016-12-23 2019-10-30 Novartis AG Factor xi antibodies and methods of use
AU2019297498A1 (en) * 2018-07-05 2021-01-21 Bayer Aktiengesellschaft Method for the production of freeze-dried pellets comprising an anti-coagulation factor xia (FXIa) antibody

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