RU2775692C2

RU2775692C2 - Новые стабильные композиции для fxia антител

Info

Publication number: RU2775692C2
Application number: RU2019125947A
Authority: RU
Inventors: Карстен Ольбрих; Томас ТРИЛЛЬ; Марике ФОЙРИНК
Original assignee: Байер Фарма Акциенгезельшафт
Priority date: 2017-01-19
Filing date: 2018-01-16
Publication date: 2022-07-06

Abstract

Группа изобретений относится к области химии и фармацевтики. 1 и 2 объекты представляют собой жидкую фармацевтическую композицию, обладающую свойствами антикоагулянта, содержащую анти-FXIa антитело BAY1213790 при концентрации 10-40 мг/мл, 10 мM гистидина и 130 мМ глицина, где композиция имеет значение рН 6, в частности, анти-FXIa антитело BAY1213790 при концентрации 25 мг/мл и дополнительно 5% мас/об дигидрата трегалозы в качестве стабилизатора и 0,05% мас/об полисорбата 80 в качестве смачивающего агента. 3 объект – лиофилизат, обладающий свойствами антикоагулянта, получаемый сушкой замораживанием жидкой фармацевтической композиции. 4 объект – жидкую парентеральную лекарственную форму для инъекции или инфузии, содержащую жидкую фармацевтическую композицию. 5 объект – твердую парентеральную лекарственную форму, содержащую лиофилизат, для восстановления с получением раствора для инъекции или инфузии. 6 объект – жидкую фармацевтическую композицию для лечения или профилактики тромботических или тромбоэмболических нарушений. Технический результат заключается в стабильности жидкой фармацевтической композиции анти-FXIa антитела BAY1213790 с содержанием низкого количества агрегатов и продуктов деградации в условиях стресса и ее применимости для получения стабильного лиофилизата. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 11 табл., 1 пр.

Description

Введение

Настоящее изобретение относится к новой жидкой фармацевтической композиции, содержащей человеческое антител против фактора коагуляции FXIa в качестве активного ингредиента, в частности раскрытых в WO2013167669A1. Настоящее изобретение также относится к лиофилизатам указанной жидкой композиции, а также к их применению для лечения и профилактики тромботических или тромбоэмболических нарушений.

Свертывание крови является защитным механизмом организма, который помогает быстро и надежно «запечатать» дефекты в стенке кровеносных сосудов. Таким образом, потери крови можно избежать или свести к минимуму. На гемостаз после повреждения кровеносных сосудов влияет главным образом система коагуляции, в которой запускается ферментативный каскад сложных реакций белков плазмы. В этот процесс вовлечены многочисленные факторы коагуляции крови, каждый из которых при активации превращает, соответственно, следующий неактивный предшественник в его активную форму. В конце каскада происходит превращение растворимого фибриногена в нерастворимый фибрин, что приводит к образованию сгустка крови. При свертывании крови традиционно различают внутреннюю и внешнюю системы, которые заканчиваются в конечном пути совместной реакции.

Фактор коагуляции FXIa является центральным компонентом перехода от инициации к амплификации и распространению коагуляции: в циклах позитивной обратной связи тромбин активирует, помимо фактора V и фактора VIII, также фактор XI в фактор XIa, в результате чего фактор IX превращается в фактор IXa и через комплекс фактор IXa/фактор VIIIa, образуемый таким образом, фактор X активируется, и образование тромбина, в свою очередь, поэтому сильно стимулируется, что приводит к сильному росту тромба и стабилизации тромба. Анти-FXIa антитела известны в данной области техники в качестве антикоагулянтов, т.e. веществ для ингибирования или предотвращения коагуляции крови (смотрите WO2013167669A1). BAY1213790 представляет собой анти-FXIa антитело, содержащее последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2.

Терапевтические белки, такие как, например, человеческие моноклональные антитела, обычно вводят инъекцией в виде жидких фармацевтических композиций благодаря их свойствам. Поскольку многие терапевтически эффективные человеческие моноклональные антитела обладают неблагоприятными свойствами, такими как низкая стабильность или склонность к агрегации, необходимо модулировать эти неблагоприятные свойства с помощью подходящего фармацевтического состава. Агрегатное или денатурированное антитело может иметь, например, низкую терапевтическую эффективность. Агрегатное или денатурированное антитело может также вызывать нежелательные иммунологические реакции. Стабильные фармацевтические составы белков также должны подходить для предотвращения химической нестабильности. Химическая нестабильность белков может привести к деградации или фрагментации и, таким образом, к пониженной эффективности или даже к токсическим побочным эффектам. Следовательно, следует избегать или, по меньшей мере, сводить к минимуму образование или генерацию всех типов низкомолекулярных фрагментов. Это все факторы, которые могут повлиять на безопасность препарата и, следовательно, на них необходимо влиять. Кроме того, низкая вязкость является преимуществом при использовании шприцов или насосов, поскольку это поддерживает требуемое усилие низким и, следовательно, увеличивает впрыскиваемость. Низкая вязкость также является преимуществом при получении, например, обеспечивая точное наполнение препарата. Однако терапевтическое применение человеческого моноклонального антитела часто требует использования высокой концентрации антитела, что часто приводит к проблемам с высокой вязкостью. В своей обзорной статье Daugherty и Mrsny (Adv Drug Deliv Rev. 2006;58(5-6):686-706) обсуждают эту и другие проблемы, которые могут возникнуть в жидкой фармацевтической композиции моноклональных антител.

Жидкая композиция должна стабилизировать антитело в течение максимально возможного периода времени, а также обеспечивать лиофилизацию. Следовательно, подходящая жидкая фармацевтическая композиция должна стабилизировать как биологическую эффективность антитела, так и биофизические свойства человеческого моноклонального антитела. Следовательно, существует потребность в концентрированных жидких композициях моноклональных антител, которые содержат низкую долю агрегатов и продуктов разложения, являются стабильными в течение длительного периода времени, могут лиофилизироваться и иметь минимальную вязкость.

Настоящее изобретение направлено на обеспечение вышеуказанных потребностей и обеспечивает жидкие фармацевтические композиции, содержащие анти-FXIa антитела и низкие количества агрегатов и продуктов разложения, и из которых может быть получен стабильный лиофилизат. Эти композиции также имеют низкую вязкость и поэтому могут просто вводиться пациентам, например, с помощью шприцов или автоинжекторов.

Настоящее изобретение обеспечивает жидкие фармацевтические композиции, содержащие анти-FXIa антитела и гистидин-глициновую буферную систему.

Описание изобретения

В одном варианте выполнения настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит 5-30 мМ гистидина и 100-200 мМ глицина. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит 5-10 мМ гистидина и 130-200 мМ глицина. В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит 10 мМ гистидина и 130 мМ глицина. Кроме того, жидкая фармацевтическая композиция имеет значение рН 5,5 - 7,5. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция имеет значение рН 5,7 - 6,3. В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция имеет значение рН 6. Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит анти-FXIa антитела при концентрациях 5 - 50 мг/мл. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, анти-FXIa антитело присутствует при концентрациях 10 - 40 мг/мл. В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, анти-FXIa антитело имеет концентрацию 25 мг/мл. Во всех вариантах выполнения настоящего изобретения, анти-FXIa антитело в частности представляет собой предпочтительно BAY1213790. Жидкая фармацевтическая композиция также может содержать стабилизатор. Стабилизаторами, например, являются сахара. «Сахара» относится к группе органических соединений, которые растворимы в воде и подразделяются на моносахариды, дисахариды и полиолы. Предпочтительным сахаром является невосстанавливающий дисахарид, особенно предпочтительной является сахароза или дигидрат трегалозы. В одном варианте выполнения настоящего изобретения, стабилизатор присутствует до степени 1-10% мас. к объему (мас/об), предпочтительно до степени 3-7% (мас/об) и особенно предпочтительно до степени 5% (мас/об). В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, дигидрат трегалозы присутствует до степени 1-10% мас. к объему (мас/об), предпочтительно до степени 3-7% (мас/об) и особенно предпочтительно до степени 5% (мас/об). Жидкая фармацевтическая композиция также может содержать смачивающий агент. Термин «смачивающий агент» относится к любому детергенту, имеющему гидрофильную и гидрофобную область, и включает неионные, катионные, анионные и цвиттерионные детергенты. Предпочтительные детергенты могут быть выбраны из группы, состоящей из полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата (также известного как полисорбат 80 или TWEEN 80), полиоксиэтиленсорбитанмонолаурата (также известного как полисорбат 20 или TWEEN 20) и N-лаурилсаркозина. Для раскрытых композиций предпочтение отдается неионному смачивающему агенту. Особое предпочтение отдается использованию полисорбата 80 для композиций по настоящему изобретению. Смачивающий агент может использоваться при концентрации от 0,001% до 0,5% (мас/об), предпочтение отдается диапазону концентраций от 0,005% до 0,1% (мас/об). Особое предпочтение отдается использованию смачивающего агента с концентрацией 0,01% (мас/об).

Консерванты или другие добавки, наполнители, стабилизаторы или носители могут быть необязательно добавлены в жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению. Подходящими консервантами являются, например, октадецилдиметилбензиламмония хлорид, гексаметония хлорид и ароматические спирты, такие как фенол, парабены или м-крезол. Другие фармацевтически приемлемые добавки, стабилизаторы или носители описаны, например, в Remington’s Science And Practice of Pharmacy (22nd edition, Loyd V. Allen, Jr, editor. Philadelphia, PA: Pharmaceutical Press. 2012).

Поэтому настоящее изобретение обеспечивает жидкую фармацевтическую композицию, содержащую анти-FXIa антитело BAY1213790 и гистидин-глицин буферную систему, где композиция содержит 5-30 мМ гистидина и 100-200 мМ глицина, предпочтительно 5-10 мМ гистидина и 130-200 мМ глицина и имеет значение рН 5,5 - 6,5, предпочтительно 5,7 - 6,3. Это обеспечивает достаточную стабилизацию и низкую агрегацию антитела BAY1213790 при низкой вязкости, а также делает возможной лиофилизацию композиции.

Одним вариантом выполнения настоящего изобретения является жидкая фармацевтическая композиция, содержащая

анти-FXIa антитело BAY1213790 при концентрации 5 - 50 мг/мл, предпочтительно 10 - 40 мг/мл,

5-30 мМ гистидина и 100-200 мМ глицина, предпочтительно 5-10 мМ гистидина и 130-200 мМ глицина,

где композиция имеет значение рН 5,5 - 6,5, предпочтительно 5,7 - 6,3. Композиция необязательно содержит дополнительные ингредиенты, выбранные из группы, состоящей из смачивающих агентов, консервантов, носителей и стабилизаторов.

1 - 10% (мас/об) стабилизатора, предпочтительно 3 - 7% (мас/об) дигидрата трегалозы,

В одном варианте выполнения настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит полисорбат 80 в качестве смачивающего агента при концентрации от 0,001% до 0,5% (мас/об), предпочтительно от 0,005% до 0,1% (мас/об).

Предпочтительным вариантом выполнения настоящего изобретения является жидкая фармацевтическая композиция, содержащая

анти-FXIa антитело BAY1213790 при концентрации 10 - 40 мг/мл,

5-10 мМ гистидина и 130-200 мМ глицина,

3 - 7% (мас/об) дигидрата трегалозы, и

полисорбат 80 при концентрации от 0,005% до 0,1% (мас/об),

где композиция имеет значение рН 5,7 - 6,3. Композиция необязательно содержит дополнительные ингредиенты, выбранные из группы, состоящей из консервантов, носителей и стабилизаторов.

Особенно предпочтительным вариантом выполнения настоящего изобретения является жидкая фармацевтическая композиция, содержащая

анти-FXIa антитело BAY1213790 при концентрации 25 мг/мл,

10 мМ гистидина и 130 мМ глицина,

5% (мас/об) дигидрата трегалозы, и

полисорбат 80 при концентрации 0,05% (мас/об),

где композиция имеет значение рН 6. Композиция необязательно содержит дополнительные ингредиенты, выбранные из группы, состоящей из консервантов, носителей и стабилизаторов.

Термин «буфер» описывает в настоящей заявке буферизованный раствор, рН которого изменяется незначительно после добавления кислотных или щелочных веществ. Буферные растворы содержат смесь слабой кислоты и соответствующего основания или слабого основания и соответствующей кислоты.

Термин «пациент» относится к людям или животным, получающим профилактическое или терапевтическое лечение.

Термин «лечение» в данной заявке относится к применению или введению терапевтического вещества на пациента или пациенту, или к применению или введению терапевтического вещества на/в выделенную ткань или на/в клеточную линию пациента, который страдает от заболевания, демонстрирует симптом заболевания или имеет предпосылки заболевания, с целью излечения, улучшения, воздействия, прекращения или облегчения заболевания, его симптомов или предпосылок заболевания.

«Эффективная доза» описывает в настоящей заявке количество активного ингредиента, при котором желаемый эффект может быть, по меньшей мере, частично достигнут. Следовательно, «терапевтически эффективная доза» определяется как количество активного ингредиента, которое является достаточным, чтобы, по меньшей мере, частично излечить заболевание или, по меньшей мере, частично устранить негативные эффекты у пациента, вызванные этим заболеванием. Количество, фактически необходимое для этой цели, зависит от тяжести заболевания и общего иммунного статуса пациента.

«Изотонический раствор» имеет по существу такое же осмотическое давление, что и кровь человека. Следовательно, изотонические растворы обычно имеют осмотическое давление от 250 до 350 мОсм. Термин «гипотонический» описывает композиции, имеющие осмотическое давление ниже, чем у человеческой крови, тогда как «гипертонические» композиции имеют осмотическое давление выше, чем у человеческой крови.

Термин «высокомолекулярные агрегаты» (синоним: «HMW») описывает агрегаты, которые состоят из по меньшей мере двух белковых мономеров.

Настоящее изобретение также содержит продукт, который содержит одну из фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению и предпочтительно также инструкции для применения. В одном варианте выполнения настоящего изобретения, продукт содержит контейнер, который содержит жидкие композиции или лиофилизаты согласно настоящему изобретению. Пригодными контейнерами являются, например, бутылки, флаконы, тюбики или шприцы. Контейнеры могут, например, состоять из стекла или пластика. Шприц может содержать инъекционную иглу, состоящую, например, из металла. Настоящее изобретение также обеспечивает набор, который содержит вышеупомянутые фармацевтические композиции.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения, контейнером является шприц. В другом варианте выполнения настоящего изобретения, шприц содержится в инъекционном устройстве. Предпочтение отдается введению путем внутривенной (быстрой) инфузии после разбавления стандартными инфузионными растворами, такими как 0,9% раствор NaCl.

Композиции согласно настоящему изобретению проявляют повышенную стабильность по сравнению с композициями анти-FXIa антитела, доступными в предшествующем уровне техники. Предпочтительные композиции являются подходящими в качестве жидких композиций, но для более жестких требований также могут быть лиофилизированы. Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению соответственно также может быть восстановленным лиофилизатом. Благодаря этому профилю свойств жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению особенно подходят для парентерального введения. Парентеральные введения включают, среди прочего, внутривенную инъекцию или инфузию, внутриартериальную инъекцию или инфузию (в артерию), внутримышечную инъекцию, интратекальную инъекцию, подкожную инъекцию, внутрибрюшинную инъекцию или инфузию, внутрикостное введение или инъекцию в ткань. Композиции согласно настоящему изобретению особенно подходят для внутривенного или подкожного введения.

Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению проявляют высокую стабильность при длительных испытаниях даже в виде лиофилизата. Они также показывают отличное восстановление при сохранении биологической активности. Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также могут быть высушены замораживанием, так что они содержат самое большее 2% остаточной влаги. Другим вариантом выполнения настоящего изобретения соответственно является лиофилизат, получаемый сушкой замораживанием жидкой композиции согласно настоящему изобретению. Предпочтение отдается лиофилизату, содержащему самое большее 2% остаточной воды. Особое предпочтение отдается лиофилизату, содержащему самое большее 1% остаточной воды.

Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению имеют ценные фармакологические свойства и могут быть использованы для профилактики и лечения заболеваний у людей и животных. Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, которые могут быть использованы для заболеваний и их лечения, в частности, включают группу тромботических или тромбоэмболических заболеваний. Соответственно, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению являются подходящими для лечения и/или профилактики заболеваний или осложнений, которые могут возникнуть в результате образования сгустков.

В контексте настоящего изобретения «тромботические или тромбоэмболические заболевания» включают заболевания, которые возникают как в артериальной, так и в венозной сосудистой сети и которые можно лечить с помощью жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению, в частности нарушения в коронарных артериях сердца, такие как острый коронарный синдром (ACS), инфаркт миокарда с подъемом сегмента ST (STEMI) и без подъема сегмента ST (не STEMI), стабильная стенокардия, нестабильная стенокардия, реокклюзия и рестеноз после коронарные вмешательства, такого как ангиопластика, имплантация стента или аортокоронарное шунтирование, а также тромботические или тромбоэмболические нарушения в других сосудах, приводящие к окклюзионным нарушениям периферических артерий, тромбоэмболии легочной артерии, тромбоэмболии вен, тромбозу вен, особенно в глубоких венах ног и почках, временные ишемические приступы, а также тромботический инсульт и тромбоэмболический инсульт.

Стимуляция системы свертывания может происходить по разным причинам или связанным нарушениям. В контексте хирургических вмешательств, неподвижности, прикованности к постели, инфекций, воспаления или рака или терапии рака, среди прочего, система коагуляции может быть высоко активирована, и могут быть тромботические осложнения, в частности венозные тромбозы. Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению поэтому подходят для профилактики тромбозов в контексте хирургических вмешательств у пациентов, страдающих раком. Таким образом, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также подходят для профилактики тромбозов у пациентов, имеющих активированную систему коагуляции, например, в описанных ситуациях стимуляции.

Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению поэтому также подходят для профилактики и лечения кардиогенных тромбоэмболий, например ишемии головного мозга, инсульта и системных тромбоэмболий и ишемий, у пациентов с острыми, прерывистыми или постоянными нарушениями сердечного ритма, например, мерцательной аритмии, и у пациентов, перенесших кардиостимуляцию электрошоком, а также у пациентов с нарушениями клапанов сердца или с искусственными клапанами сердца.

Кроме того, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению подходят для лечения и профилактики генерализованного тромбогеморрагического синдрома (DIC), который может возникнуть, в частности, в связи с сепсисом, а также вследствие хирургических вмешательств, опухолевых расстройств, ожогов или других травм и может привести к серьезным повреждениям органов вследствие микротромбозов

Кроме того, тромбоэмболические осложнения возникают при микроангиопатических гемолитических анемиях и при контакте крови с инородными поверхностями в контексте экстракорпорального кровообращения, например, гемодиализ, ECMO («экстракорпоральная мембранная оксигенация»), LVAD («вспомогательное устройство левого желудочка») и аналогичные методы, AV фистулами, протезами сосудов и клапанов сердца.

Более того, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению подходят для лечения и/или профилактики нарушений, включающих образование микросгустка или отложение фибрина в кровеносных сосудах головного мозга, которые могут привести к расстройствам деменции, таким как сосудистая деменция или болезнь Альцгеймера. Здесь сгусток может способствовать расстройству как через окклюзию, так и путем связывания других факторов, связанных с заболеванием.

Более того, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут применяться для ингибирования роста опухоли и образования метастаз, а также для профилактики и/или лечения тромбоэмболических осложнений, например, венозные тромбоэмболии у онкологических больных, в частности тех, которые подвергаются серьезным хирургическим вмешательствам или химио- или лучевой терапии.

Кроме того, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также являются подходящими для профилактики и/или лечения легочной гипертензии.

В контексте согласно настоящему изобретению термин «легочная гипертензия» включает легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с расстройствами левого отдела сердца, легочную гипертензию, связанную с легочными нарушениями и/или гипоксией, и легочную гипертензию, вызванную хроническими тромбоэмболиями (CTEPH).

«Легочная артериальная гипертензия» включает идиопатическую легочную артериальную гипертензию (IPAH, ранее также называемую первичной легочной гипертензией), наследственную легочную артериальную гипертензию (FPAH) и ассоциированную легочную артериальную гипертензию (APAH), которая связана с коллагенозами, шунтированием при врожденном системно-легочном пороке, портальной гипертензией, ВИЧ-инфекциями, приемом определенных лекарственных средств и медикаментов, с другими нарушениями (заболевания щитовидной железы, нарушения накопления гликогена, синдром Гоше, наследственная телеангиэктазия, гемоглобинопатия, миелопролиферативные нарушения, спленэктомия), с нарушениями, имеющими значительный венозный/капиллярный вклад, такими как легочно-веноокклюзионное расстройство и легочно-капиллярный ангиоматоз, а также персистирующая легочная гипертензия новорожденных.

Легочная гипертензия, связанная с нарушениями левой половины сердца, включает заболевание левого предсердия или желудочка, а также дефекты митрального или аортального клапана.

Легочная гипертензия, связанная с легочными нарушениями и/или гипоксией, включает хронические обструктивные легочные расстройства, интерстициальное легочное расстройство, синдром апноэ во время сна, альвеолярную гиповентиляцию, хроническую высотную болезнь и врожденные дефекты.

Легочная гипертензия вследствие хронических тромбоэмболий (CTEPH) содержит тромбоэмболическую окклюзию проксимальных легочных артерий, тромбоэмболическую окклюзию периферийных легочных артерий и нетромботические легочные эмболии (опухоли, паразиты, чужеродные тела).

Настоящее изобретение также обеспечивает применение жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению для получения медикаментов для лечения и/или профилактики легочной гипертензии, связанной с саркоидозом, гистиоцитозом X и лимфангиоматозом.

Кроме того, жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также являются подходящими для лечения и/или профилактики диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови в контексте инфекционного заболевания и/или системного воспалительного синдрома (SIRS), септической дисфункции органа, недостаточность септического органной недостаточности и полиорганной недостаточности, синдрома острой дыхательной недостаточности (ARDS), острого повреждения легких (ALI), септического шока и/или септической органной недостаточности.

В ходе инфекции может происходить общая активация системы коагуляции (диссеминированная внутрисосудистая коагуляция крови или коагулопатия потребления, в дальнейшем называемая «DIC») с микротромбозом в различных органах и вторичными геморрагическими осложнениями. Кроме того, может иметь место повреждение эндотелия с повышенной проницаемостью сосудов и диффузией жидкости и белков в экстравазальное пространство. По мере развития инфекции может иметь место нарушение работы органа (например, почечная недостаточность, печеночная недостаточность, дыхательная недостаточность, дефицит центральной нервной системы и сердечно-сосудистая недостаточность) или полиорганная недостаточность.

В случае DIC происходит массивная активация системы коагуляции на поверхности поврежденных эндотелиальных клеток, на поверхностях инородных тел или сшитых внесосудистых тканей. Как следствие происходит коагуляция в мелких сосудах различных органов с гипоксией и последующей дисфункцией органов. Вторичным эффектом является расход факторов свертывания (например, фактор X, протромбин и фибриноген) и тромбоцитов, что снижает свертываемость крови и может привести к сильному кровотечению.

Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также являются подходящими для первичной профилактики тромботических или тромбоэмболических нарушений и/или воспалительных нарушений и/или нарушений с повышенной проницаемостью сосудов у пациентов, у которых генные мутации приводят к повышенной активности ферментов или повышенным уровням зимогенов, и они установлены соответствующими тестами/измерениями активности фермента или концентраций зимогена.

Настоящее изобретение также обеспечивает для применения жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению для лечения и/или профилактики нарушений, особенно нарушений, упомянутых выше.

Настоящее изобретение также обеспечивает для применения жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики нарушений, особенно нарушений, упомянутых выше.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения и/или профилактики нарушений, особенно нарушений, упомянутых выше, применяя терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также обеспечивает жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению для применения в способе лечения и/или профилактики нарушений, особенно нарушений, упомянутых выше, применяя терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению.

Эти хорошо описанные заболевания у людей также могут встречаться с сопоставимой этиологией у других млекопитающих и могут лечиться в этом случае жидкими фармацевтическими композициями согласно настоящему изобретению.

В контексте настоящего изобретения термин «лечение» или «лечить» используется в общепринятом смысле и означает лечение, заботу и уход за пациентом с целью борьбы, уменьшения, ослабления или излечения заболевания или нарушения, и улучшения условий жизни, пострадавших от этого заболевания.

Настоящее изобретение поэтому также обеспечивает применения жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению для лечения и/или профилактики нарушений, особенно нарушений, упомянутых выше.

Настоящее изобретение также обеспечивает для применения жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению в способе лечения и/или профилактики нарушений, особенно вышеупомянутых нарушений.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения и/или профилактики заболеваний, более конкретно вышеуказанных заболеваний, применяя эффективное количество одно из жидких фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, лечением и/или профилактикой является парентеральное введение жидкой фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. Особенно предпочтительным является внутривенное или подкожное введение.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут применяться сами по себе или, если требуется, в комбинации с одним или более другими фармакологически активными веществами, при условии, что эта комбинация не приводит к нежелательным и неприемлемым побочным эффектам. Таким образом, настоящее изобретение также относится к лекарственным средствам, содержащим, по меньшей мере, одну из композиций согласно настоящему изобретению и один или боле дополнительных активных ингредиентов, особенно для лечения и/или профилактики вышеупомянутых заболеваний.

Жидкости согласно настоящему изобретению могут вводиться как единичное лечение, но также могут вводиться многократно подряд или могут назначаться в течение длительного времени после постановки диагноза.

Примеры

Описание аналитических способов

Концентрация белка (Ультрафиолетовая/оптическая спектроскопия):

Концентрация белка определяется по поглощению при 280 нм. Для возможного рассеяния света тест также корректируется при 320 нм.

Скрининг буфера:

Испытания буферов композиций следуют следующему принципу:

Термическая стабильность антитела (разворачивание) определяется с помощью температурного профиля (Т: от 15 до 105 °С) методом ДСК (ДСК: дифференциальная сканирующая калориметрия). Так называемое термическое развертывание (TM₁) является мерой для сравнения различных буферных систем: с увеличением значений TM₁ термическая стабильность белка увеличивается. Следовательно, «более высокий» TM₁ является показателем хорошей стабильности антитела в соответствующей буферной системе.

Визуальная оценка:

Образцы оцениваются визуально защищенным персоналом на наличие видимых частиц и их внешний вид (хлопья/волокна) (визуальный контроль). Растворы должны быть максимально свободными от видимых частиц.

Восстановление белка (C ₂₈₀ ):

В ходе ребуферизации на Äkta (хроматография) можно определить скорость восстановления, так как антитело может накапливаться на различных поверхностях во время процесса. Поэтому высокая степень восстановления во время/после завершения процесса является важной предпосылкой для успешного конечного продукта.

Измерение pH:

Измерения всегда проводятся при одной и той же температуре (20-25 °C). Прибор калибруется 2 стандартными растворами каждый день, после чего измеряется контроль, который не должен отклоняться более чем на 0,05 единиц pH.

SEC (HMW, мономер, LMW) в комбинации с УФ детектором (280 нм):

SEC (эксклюзионная хроматография по размеру) отделяет мономеры от фрагментов (низкомолекулярные LMW) и олигомеров (высокомолекулярные HMW) в зависимости от их пространственного размера. Доля мономера должна быть здесь как можно выше.

DLS (среднее значение):

Дополнительный критерий качества растворов фармацевтических антител может быть определен с помощью динамического рассеяния света (DLS). Здесь рассеяние света молекулами используется для определения их гидродинамического радиуса. Гидродинамический радиус антитела зависит, в частности, от его конформации. Во время стресс-теста конформация антитела может измениться из-за разворачивания или самоассоциации - изменение обнаруживается с помощью DLS.

1) С увеличением концентрации антитела в растворе межмолекулярные взаимодействия возрастают. Если силы оказывают здесь притягивающий эффект, антитела имеют тенденцию к так называемому образованию олигомеров, то есть отдельные мономеры, которые ранее присутствовали, теперь образуют объекты из нескольких антител. Измеренный гидродинамический радиус увеличивается, так как объекты антитела кажутся «большими».

1) Возможно, что окружающая среда имеет благоприятный/неблагоприятный заряд для антитела; в этом случае это может привести к денатурированию (разворачиванию) отдельных мономеров; Таким образом, измеренный гидродинамический радиус также будет выглядеть «увеличенным».

При рассмотрении результатов DLS следует учитывать, что во время разработки для измерений DLS использовались два разных прибора. В Берлине использовался LB-550 от HORIBA Instruments. В Вуппертале использовался Zetasizer Nano-ZS от Malvern. Различия в составе и в измерении образца могут привести к немного другим значениям. По этой причине результаты не должны сравниваться! Тем не менее, тенденция значений с обоими инструментами может быть воспроизведена. Каждая таблица ниже описывает, с помощью какого инструмента были измерены полученные значения.

A2 значение:

При измерении второго вириального коэффициента (значение А2) развитие молекулярной массы регистрируется статическим рассеянием света. В этом случае можно контролировать межмолекулярные взаимодействия, аналогично измерению динамического рассеяния света. Если молекулярные массы увеличиваются сверхпропорционально с увеличением концентрации, антитела имеют тенденцию к агрегации - преобладающие условия в составе называются «притягивающими». Если, напротив, молекулярные массы развиваются субпропорционально, в системе преобладают «отталкивающие» условия. Тенденция к агрегации ограничена.

CGE:

Капиллярный электрофорез является аналитическим методом для разделения молекул в электрическом поле из-за их заряда. Форма и размер молекул также играют роль в разделении гелеподобной средой, так что и здесь - подобно эксклюзионной хроматографии по размеру, антитело и его фрагменты или агрегаты разделяются.

Мутность:

Мутность растворов оценивают с помощью измерения помутнения. В этом случае свет определенной световой эффективности пропускается через раствор, и как много энергии, которая включена на противоположной стороне раствора, может затем быть обнаружено и сообщено. Если мутность увеличивается, помутнение также увеличивается - больше света «задерживается» раствором.

Биоанализ:

Биохимический тест для BAY 1213790 (анти-hFXIa моноклональное антитело) определяет ингибирующую активность антитела в отношении активированного человеческого фактора коагуляции XI (hFXIa). В этом случае функциональную нейтрализацию человеческого FXIa с помощью BAY1213790 определяют с использованием анализа активности флуорогенного фермента. Значение EC50 тестируемого образца сравнивается с эталонным стандартом BAY 1213790. Этот стандарт был получен с помощью сопоставимого производственного процесса и хранился в буфере из 10 мМ гистидина/ 30 мМ глицина при pH 6 при <-60°C.

Biacore:

Связывание тестового образца BAY 1213790 и эталонного стандарта BAY 1213790 с антигеном человеческого фактора XIa (FXIa) определяют с помощью поверхностной плазмонной резонансной спектроскопии (SPR, Biacore). Аффинность связывания тестируемого образца сравнивают с эталонным стандартом BAY 1213790. Этот стандарт был получен с помощью сопоставимого производственного процесса и хранился в буфере из 10 мМ гистидина/ 30 мМ глицина при pH 6 при <-60°C.

Результаты:

Для скрининга буфера диапазон рН буферных систем, который подходит для парентеральных лекарственных форм, был выбран в диапазоне значений рН от 5,0 до 7,5. Концентрация антител в композициях, полученных в первых испытаниях (определение термической стабильности), составляет около 1 мг/мл. Никаких дополнительных вспомогательных средств не было добавлено.

Таблица 1: TM ₁ (DSC метод) BAY1213790 (1 мг/мл) в различных буферных системах

pH	5,0	5,5	6,0	6,5	7,0	7,5
PBS (Sigma P3813)						72,5
50 мM Na ₂ HPO ₄ x 2H ₂ O	67,0	68,6	71,7	72,1	71,8	76,0
50 мM L-гистидин		66,3	69,2	70,7	72,5	73,1
50 мM Na ацетата	69,8	66,4
50 мM Tris						71,4
50 мM Na цитрата	65,4	67,9	69,5	70,9
50 мM L-аргинина			70,6	69,9	70,6	71,0
50 мM L-глицин			72,8	78,7	73,5	78,4
50 мM L-лизина			70,0	69,9	70,2	70,9
10 мM His, 130 мM Gly			72,0	72,3	72,5	73,6

TM₁ значения (температура разворачивания) составляли от 65,4°C до 78,7°C. Композиции, имеющие TM₁ выше 72,0°C, были выбраны для дальнейших испытаний, так как композиции белка, имеющие высокое значение TM_1, являются показателем стабилизирующего состава.

Композиции анти-фактор XIa Ab BAY1213790 с Na₂HPO₄ (pH 6,0 - 7,5), L-глицином (pH 6,0 - 7,5), L-гистидином (pH 7,0 - 7,5) и комбинацией 10 мМ гистидина и 130 мМ глицина (pH 6,0 - 7,5) показал самые высокие термические стабильности.

Поскольку целевая концентрация композиции была установлена на уровне 25 мг/мл, белок был ребуферизован в выбранные буферные системы на следующей стадии с использованием препаративной системы SEC и сконцентрирован с использованием Vivapore 10/20 (от 6 до 40 мг/мл).

Таблица 2: Ребуферизация/концентрация BAY1213790

Буферная система	C _белка [мг/ мл] ¹	Восстановление [%]	SEC HMW [%]	SEC мономер [%]	SEC LMW [%]	Визуально
50 мM Na ₂ HPO ₄ x 2H ₂ O pH 6,0	37,63	93,1	1,28	98,7	0,03	ok
50 мM Na ₂ HPO ₄ x 2H ₂ O pH 6,5	43,48	106,8	1,46	98,5	0,04	ok
50 мM Na ₂ HPO ₄ x 2H ₂ O pH 7,0	43,12	103,7	1,62	98,3	0,03	ok
50 мM Na ₂ HPO ₄ x 2H ₂ O pH 7,5	37,24	91,1
50 мM L-гистидин pH 6,0	38,38	95,4	1,18	97,9	0,96	ok
50 мM L-гистидин pH 6,5	37,98	92,1	-	-	-	ok
50 мM L-гистидин pH 7,0	33,86	83,5	-	-	-	ok
50 мM L-гистидин pH 7,5	33,97	83,7	-	-	-	ok
10 мM L-гистидин, 130 мM L-глицин pH 6,0	39,31	97,8	1,01	98,7	0,29	ok
10 мM L-гистидин, 130 мM L-глицин pH 6,5	34,47	84,5	-	-	-	ok
10 мM L-гистидин, 130 мM L-глицин pH 7,0	30,03	74,6	-	-	-	ok
10 мM L-гистидин, 130 мM L-глицин pH 7,5	24,09	57,7	-	-	-	ok

¹ Вследствие различных буферных композиций и связанных с ними эффектов образцы после ребуферизации имеют разные концентрации

Композиции гистидина и гистидина/глицина проявляли рН-зависимое восстановление белка, причем восстановление уменьшалось с увеличением рН. Хорошее восстановление (≥ 95%) было обнаружено при рН 6,0. Фосфатные буферы не показали эту тенденцию. Для образцов с высокой степенью восстановления дополнительно определяли SEC. Никаких различий в содержании мономера или в визуальном проявлении не было показано.

В общем, белки чувствительны к стрессу от перемешивания. Энергичное встряхивание может потенциально привести к агрегации белка и может образовывать олигомеры (HMW) вплоть до видимых частиц. Известно, что добавки поверхностно-активных веществ, таких как полисорбат 80 и полисорбат 20, оказывают защитное действие на белки от поверхностного напряжения. Полисорбат 80 был добавлен к выбранным композициям так, чтобы композиции содержали в общей сложности 0,01% полисорбата 80.

Стабильность композиций анти-фактор XIa Ab тестировали с помощью стресс-теста с перемешиванием (24 часа при 300 оборотах в минуту и комнатной температуре). Впоследствии композиции были исследованы на предмет изменений с помощью следующих методов:

1) визуальная оценка

2) восстановление белка (C₂₈₀):

3) SEC (HMW, мономер, LMW)

4) DLS (среднее значение)

После стресса перемешиванием, все композиции Na₂HPO₄ показали увеличенные олигомеры (HMW >2%) в SEC. Некоторые образцы дополнительно имели видимые частицы.

Композиции гистидина при рН 6,5-7,5 флокулировали во время перемешивания. Раствор при рН 6,0 вначале выглядел хорошо, но количество олигомеров увеличилось (2,9%), а степень восстановления составила всего 91%.

Это показывает серьезное различие между образцами в зависимости от выбранной буферной системы.

Композиция гистидин/глицин при pH 6,0 показал хорошее содержание мономера 98,0%, и восстановление составляло 95%.

Значения DLS (гидродинамический диаметр) систем гидрофосфата натрия находились в пределах d(H): от 23 до 30 нм, тогда как диаметр антител в предпочтительной композиции оставался на уровне 19 нм. Это различие в конформации является признаком образования относительно крупных агрегатов (вызванных притягивающими межмолекулярными взаимодействиями), что подтверждается в аналитическом исследовании посредством SEC (увеличение HMW) и видимыми частицами в некоторых растворах.

Эти наблюдения показывают, что система гистидин/глицин при рН 6,0 оказывает лучшее стабилизирующее действие на антитело BAY 1213790, чем другие системы, хотя это не было очевидно при рассмотрении неподвергнутых стрессу образцов.

Таблица 3: BAY 1213790 в композициях с 0,01% (мас/об) полисорбатом 80 после испытания стрессом перемешиванием

Буферная система	C _белка [мг/ мл] ¹	Восстановление [%]	SEC HMW [%]	SEC Мономер [%]	SEC LMW [%]	DLS [нм]	Визуально
50 мM Na ₂ HPO ₄ pH 6,0	36,51	97,0	2,61	97,4	0,03	30	частицы
50 мM Na ₂ HPO ₄ pH 6,5	44,72	102,9	3,10	96,8	0,05	28	ok
50 мM Na ₂ HPO ₄ pH 7,0	39,78	92,3	5,99	94,0	0,03	25	частицы
50 мM Na ₂ HPO ₄ pH 7,5	41,19	110,6	7,50	91,8	0,04	23	ok
50 мМ гистидина pH 6,0	34,79	90,6	2,90	96,3	0,72	22	ok
50 мМ гистидина pH 6,5	39,72	104,6	-	-	-	-	мутный
50 мМ гистидина pH 7,0	30,77	90,9	-	-	-	-	хлопья
50 мМ гистидина pH 7,5	21,76	64,1	-	-	-	-	хлопья
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина pH 6,0	37,32	94,9	1,68	98,0	0,35	19	ok
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина pH 6,5	31,40	91,1	-	-	-	-	хлопья
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина pH 7,0	28,27	94,2	-	-	-	-	хлопья
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина pH 7,5	20,37	84,6	-	-	-	-	хлопья

Чтобы иметь возможность отобразить влияние различных концентраций вспомогательных веществ на антитела, в этой области были проведены дальнейшие испытания. В то же время технология определения данных DLS была изменена, и испытания также проводились при другой концентрации (25 мг/мл), так что результаты немного различаются, но сходны по своей тенденции.

Таблица 4: T0: неподвергнутые стрессу образцы BAY 1213790 (25мг/мл) в различных буферных системах, все содержат: 0,01% (мас/об) полисорбата 80 и при pH 6,0 (DLS значения были измерены с применением Zetasizer Nano-ZS от Malvern)

Образец	DLS d(H) [нм]	Визуально	C белка [мг/мл]
5 мМ гистидина, 200 мМ глицина	11,12	ok	25,38 мг/мл
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина	13,85	ok	24,88 мг/мл
30 мМ гистидина, 100 мМ глицина	16,18	ok	26,40 мг/мл
50 мМ гистидина, 50 мМ глицина	16,97	ok	25,77 мг/мл
50 мM Na ₂ HPO ₄	18,36	ok	25,29 мг/мл

Таблица 5: T24 (24 ч, 300 оборотов в минуту): подвергнутый стрессу BAY 1213790 (25 мг/мл) в различных буферных системах, все содержат: 0,01% (мас/об) полисорбата 80 и при pH 6 (DLS значения были измерены с применением Zetasizer Nano-ZS от Malvern)

Образец	DLS d(H) [нм]	Визуально	C белка [мг/мл]
5 мМ гистидина, 200 мМ глицина	11,52	ok	25,04 мг/мл
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина	13,72	ok	24,92 мг/мл
30 мМ гистидина, 100 мМ глицина	16,23	ok	26,23 мг/мл
50 мМ гистидина, 50 мМ глицина	16,93	ok	25,84 мг/мл
50 мM Na ₂ HPO ₄	18,21	Частицы	25,04 мг/мл

Видно, что данные DLS образцов гидрофосфата натрия (образец 5) увеличились по сравнению с предпочтительный композицией (образец 2). Это явление связано с усилением межмолекулярных взаимодействий, что подтверждается определением второго вириального коэффициента (значение А2). В этом случае положительное значение A2 описывает «отталкивающие» взаимодействия внутри системы. Антитела взаимно отталкиваются из-за их поверхностного заряда. Отрицательные значения описывают притягивающие условия в системе - это означает, что чем дальше числовое значение от «0», тем более выражен эффект. На Фиг. 1 приведены измеренные вторые вириальные коэффициенты пяти не подвергнутых стрессу композиций из таблицы 4. Можно видеть, что образец 1 (5 мМ гистидина/ 200 мМ глицина при рН 6,0) является единственным образцом, имеющим положительное значение А2 и, следовательно, имеющим отталкивающие взаимодействия. Однако из-за низкой буферной способности низкой доли гистидина была выбрана композиция 2 (10 мМ гистидина/130 мМ глицина при рН 6,0), который имеет самое низкое отрицательное значение А2 в этой серии и тем не менее способен сохранять рН стабильным в композиции при обработке и хранении.

В дальнейшем композиции были сделаны изотоническими со стабилизаторами дигидрат трегалозы или сахарозы.

Четыре композиции (His/Gly 10/130 мM или 50 мM Na₂HPO_4, каждый с сахарозой или дигидратом трегалозы и 0,05% (мас/об) полисорбата 80) подвергли трем стресс-испытаниям:

1. Испытание стрессом, вызванным перемешиванием (24 ч при 300 оборотах в минуту при RT)

2. FTC -80°C (цикл замораживания-оттаивания -80°C):

3x замораживания и оттаивания (>2h) при комнатной температуре (>2ч)

3. FTC -20°C (цикл замораживания-оттаивания -20°C):

Впоследствии композиции были исследованы на предмет изменения стабильности BAY 1213790, что включало визуальную оценку, восстановление белка (C_белка), SEC (HMW, мономер, LMW), CGE невосстановленный (non-red.) (1H1L, 2H, 2H1L и IgG) и DLS (среднее значение).

Таблица 6a: Композиции после получения и после стресса, вызванного перемешивание

His/Gly: 10 мМ гистидина, 130 мМ глицина, 0,05% (мас/об) полисорбата 80, pH 6 и либо 5% (мас/об) дигидрата трегалозы, либо 5% (мас/об) сахарозы

PO ₄ : 50 мM Na ₂ HPO ₄ , 0,05% (мас/об) полисорбата 80, pH 6 и либо 5% (мас/об) дигидрата трегалозы, либо 5% (мас/об) сахарозы

Все композиции содержали 25 мг/мл BAY1213790

Для упрощения в приведенной ниже таблице использованы следующие сокращения для вспомогательных веществ: Tre = дигидрат трегалозы; Suc = сахароза; Mono = мономер; Vis = визуальная оценка; CGE анализы: 2H = фрагменты, состоящие из двух тяжелых цепей; 2H1L = фрагменты, состоящие из двух тяжелых цепей, и одной легкой цепи. (DLS значения измерили с помощью LB-550 от Horiba)

Образец	C _белка [%]	HMW [%]	Mono [%]	LMW [%]	1H1L [%]	2H [%]	2H1L [%]	IgG [%]	DLS [нм]	Визуально
	После получения
His/Gly, Tre	-	1,05	97,92	1,03	0,18	0,42	2,39	96,18	24	ok
His/Gly, Suc	-	1,03	97,92	1,05	0,18	0,37	2,50	96,13	21	ok
PO ₄ , Tre	-	1,26	97,58	1,12	0,18	0,43	2,59	95,91	27	ok
PO ₄ , Suc	-	1,29	97,63	1,08	0,19	0,41	2,72	95,81	28	ok
	После стресса, вызванного перемешиванием
His/Gly, Tre	101,9	0,99	98,01	1,00	0,13	0,30	2,49	96,51	25	ok
His/Gly, Suc	102,2	0,93	98,11	0,96	0,17	0,28	2,99	95,73	24	ok
PO ₄ , Tre	100,6	1,27	97,68	1,05	0,17	0,31	2,95	95,74	29	ok
PO ₄ , Suc	99,2	1,30	97,71	0,99	0,17	0,34	3,13	95,52	30	ok

Таблица 6b. Композиции после FTC

Все композиции содержали 25 мг/мл BAY1213790

Образец	C _белка [%]	HMW [%]	Mono [%]	LMW [%]	1H1L [%]	2H [%]	2H1L [%]	IgG [%]	DLS [нм]	Визуально
	После FTC -80°C
His/Gly, Tre	100,4	0,97	97,67	1,36	0,16	0,31	2,56	96,19	26	ok
His/Gly, Suc	102,2	0,98	97,95	1,08	0,20	0,33	2,78	96,48	25	ok
PO ₄ , Tre	100,2	1,26	97,71	1,03	0,19	0,36	2,89	95,67	29	ok
PO ₄ , Suc	99,9	1,28	97,73	0,99	0,19	0,29	2,97	95,69	28	ok
	После FTC -20°C
His/Gly, Tre	100,7	0,98	97,94	1,08	0,22	-	2,37	96,67	23	ok
His/Gly, Suc	101,6	0,99	97,97	1,04	0,18	-	2.85	96,02	23	ok
PO ₄ , Tre	100,0	1,27	97,65	1,09	0,16	0,31	2,80	96,08	29	ok
PO ₄ , Suc	99.5	1,28	97,67	1,05	0,18	0,30	2,82	95,85	28	ok

Встречающиеся эффекты (изменения размера DLS) исследуются ниже с различными стабилизаторами (дигидрат трегалозы и сахароза).

Для этой цели были проведены испытания, аналогичные описанным выше: однако следует отметить, что из-за временного расхождения имеются некоторые различия в исходном материале или использовалось другое/новое аналитическое оборудование.

Таблица 7: Исходный материал, FTC (-20°C), с сахарозой в качестве стабилизатора (DLS значения измерили с применением Zetasizer Nano-ZS от Malvern)

Все образцы содержат: 25 мг/мл BAY 1213790, 0,05% (мас/об) полисорбата 80, 5% (мас/об)сахарозы и находятся при pH 6

Образец	Мутность [NTU]	DLS [нм]	Визуально
	Исходный материал
5 мМ гистидина, 200 мМ глицина	7,61	16,42	OK
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина	7,81	16,64	OK
30 мМ гистидина, 100 мМ глицина	9,87	18,51	OK
50 мМ гистидина, 50 мМ глицина	10,1	19,17	OK
50 мM Na ₂ HPO ₄	10,1	20,24	OK
	После FTC (-20°C)
5 мМ гистидина, 200 мМ глицина	7,45	16,41	OK
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина	7,47	16,23	OK
30 мМ гистидина, 100 мМ глицина	10,5	18,35	OK
50 мМ гистидина, 50 мМ глицина	9,72	19,22	OK
50 мM Na ₂ HPO ₄	10,5	19,57	OK

Таблица 8: Исходный материал, FTC (-20 ° C), с дигидратом трегалозы в качестве стабилизатора (значения DLS измеряли с использованием Zetasizer Nano-ZS от Malvern). Все образцы содержат: 25 мг/мл BAY 1213790, 0,05% (мас/об) полисорбата 80, 5% (мас/об) дигидрата трегалозы и имеют рН 6

Образец	Мутность [NTU]	DLS [нм]	Визуально
	Исходный материал
5 мМ гистидина, 200 мМ глицина	7,28	16,49	OK
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина	9,44	17,45	OK
30 мМ гистидина, 100 мМ глицина	8,62	18,39	OK
50 мМ гистидина, 50 мМ глицина	8,98	18,97	OK
50 мM Na ₂ HPO ₄	10,1	20,28	OK
	После FTC (-20°C)
5 мМ гистидина, 200 мМ глицина	11,7	16,39	OK
10 мМ гистидина, 130 мМ глицина	10,8	17,46	OK
30 мМ гистидина, 100 мМ глицина	9,36	18,30	OK
50 мМ гистидина, 50 мМ глицина	10,5	19,00	OK
50 мM Na ₂ HPO ₄	13,0	20,70	OK

Вязкость

Вязкость композиции зависит от концентрации и в зависимости от концентрации белка составляет от 1,14 мПа*с (10 мг/мл BAY 1213790) до 2,25 мПа*с (40 мг/мл BAY 1213790). Для испытаний варьировалась только концентрация белка, в то время как другие составляющие композиции не были изменены (10/130 мМ гистидина/ глицина при рН 6, 5% (мас/об) дигидрата трегалозы и 0,05% (мас/об) полисорбата 80).

Сушка замораживанием

25 мг/мл BAY 1213790 были получены в буфере из 10 мМ гистидина/130 мМ глицина (10/130 His/Gly) при pH 6 с 5% (мас/об) дигидрата трегалозы и 0,05% (мас/об) полисорбата 80. Затем композицию лиофилизировали с использованием цикла сушки замораживанием, описанного в таблице 9.

Таблица 9: Цикл сушки замораживанием композиции (25 мг/мл BAY 1213790 в 10/130 His/Gly, 5% (мас/об) дигидрата трегалозы, 0,05% (мас/об) полисорбата 80 при pH 6)

Установленная температура поверхности [°C]	Время [мин]	Вакуум [мкбар]
Фаза замораживания
-5	30	-
-5	60	-
-45	40	-
-45	210	-
Первичная сушка
-45	60	100
-10	60	100
-10	3500	100
Вторичная сушка
40	60	40
40	720	40

После сушки замораживанием сосуды хранили при 2-8 °С. В таблице 10 приведены данные по стабильности лиофилизированной композиции до и после хранения в течение 36 месяцев.

Также были измерены другие моменты времени между 0 и 36 месяцами, и все данные также были в пределах описания. Следующие данные из таблицы 10 подтверждают, что выбранная композиция может быть лиофилизирована и впоследствии стабильна даже в течение 3 лет.

Таблица 10: Данные по стабильности для лиофилизированного состава (25 мг/мл BAY 1213790 в 10/130 His/Gly, 5% (мас/об) дигидрата трегалозы, 0,05% (мас/об) полисорбата 80 при pH 6)

Испытание	Описание	Хранение при 2-8°C
Испытание	Описание	t ₀	t = 36 месяцев
Состав	стабильный лиофилизат	подтверждено	подтверждено
Цвет	лепешка от белого до беловатого цвета	подтверждено	подтверждено
Прозрачность восстановленного раствора	Прозрачный или не более сильная опалесценция чем RS IV	<RSIII	<RSIII
pH	5,5 - 6,5	6,1	6,1
Остаточная влажность	макс. 2,0%	0,6	0,5
Видимые частицы	Практически без видимых частиц	подтверждено	подтверждено
Размер частиц ≥ 25 мкм (HIAC)	макс. 600 частиц на ампулу	3	3
Размер частиц ≥ 10 мкм (HIAC)	макс. 6000 частиц на ампулу	62	64
Чистота IgG (CGE non-red., основные пики)	мин. 90%	99	99
Чистота IgG (CGE red., сумма HC + LC)	мин. 95%	98	99
Чистота (SEC-HPLC), Мономерная фракция	мин. 93%	98	96
Концентрация белка (UV/VIS)	22,5 - 27,5 мг/мл	25	24,7
Активность относительно ссылки (Bioassay)	60-140%	104	101
Активность относительно ссылки (Biacore ^a /ELISA ^b )	50-150%	108^a	104^b

Заключения:

Благодаря представленным результатам была выбрана буферная система 10 мМ гистидина/130 мМ глицина при рН 6,0, которая при достаточной буферной способности показала оптимальный стабилизирующий эффект во время стресс-тестов.

Хотя неподвергнутые стрессу образцы имеют сходные характеристики стабильности в разных композициях, в подвергнутых стрессу образцах была продемонстрирована ясная разница между системой гистидин-глицин и другими композициями со ссылкой на:

- Конформация белка (DLS)

- Межмолекулярные взаимодействия (A2 значение)

- Мономерная фракция (SEC)

- Видимые частицы (визуальная оценка)

Это показывает, что система гистидин/глицин при рН 6 оказывает лучшее стабилизирующее действие на антитело BAY 1213790, чем другие системы. Это не было предсказуемо по анализу образцов, не подвергнутых стрессу.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Bayer Pharma AG

<120> НОВЫЕ СТАБИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ FXIA АНТИТЕЛ

<130> BHC161051

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 449

<212> PRT

<213> искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь анти-FXIa акнтитела BAY1213790

<400> 1

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 2

<211> 214

<212> PRT

<213> искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь анти-FXIa антитела BAY1213790

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<---

Claims

1. Жидкая фармацевтическая композиция, обладающая свойствами антикоагулянта, содержащая анти-FXIa антитело BAY1213790, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2, при концентрации 10-40 мг/мл, 10 мM гистидина и 130 мМ глицина, где композиция имеет значение рН 6.

2. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 1, дополнительно содержащая ингредиенты, выбранные из группы, состоящей из консервантов, носителей, смачивающих агентов и стабилизаторов.

3. Жидкая фармацевтическая композиция согласно п. 2, содержащая 1-10% мас/об стабилизатора.

4. Жидкая фармацевтическая композиция согласно п. 3, содержащая 3-7% мас/об дигидрата трегалозы в качестве стабилизатора.

5. Жидкая фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 2-4, содержащая смачивающие агенты при концентрации от 0,001% до 0,5% мас/об.

6. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 5, где смачивающий агент представляет собой полисорбат 80.

7. Жидкая фармацевтическая композиция по п. 2, содержащая анти-FXIa антитело BAY1213790 при концентрации 25 мг/мл, 5% мас/об дигидрата трегалозы в качестве стабилизатора и 0,05% мас/об полисорбата 80 в качестве смачивающего агента.

8. Лиофилизат, обладающий свойствами антикоагулянта, получаемый сушкой замораживанием жидкой фармацевтической композиции согласно п. 7.

9. Лиофилизат по п. 8, содержащий самое большее 2% остаточной воды.

10. Жидкая парентеральная лекарственная форма для инъекции или инфузии, содержащая жидкую фармацевтическую композицию согласно любому из пп. 1-7.

11. Лекарственная форма по п. 10, где лекарственная форма представляется в шприце или автоинжекторе.

12. Твердая парентеральная лекарственная форма, содержащая лиофилизат согласно п. 8 или 9, для восстановления с получением раствора для инъекции или инфузии.

13. Жидкая фармацевтическая композиция согласно любому из пп. 1-7 для применения для лечения или профилактики тромботических или тромбоэмболических нарушений.