CN117835965A - 派姆单抗的药物组合物及其用途 - Google Patents

派姆单抗的药物组合物及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN117835965A
CN117835965A CN202280030892.2A CN202280030892A CN117835965A CN 117835965 A CN117835965 A CN 117835965A CN 202280030892 A CN202280030892 A CN 202280030892A CN 117835965 A CN117835965 A CN 117835965A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical composition
cancer
concentration
pembrolizumab
histidine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280030892.2A
Other languages
English (en)
Inventor
A·A·科斯坦迪安
A·A·安德烈耶娃
E·A·洛姆科娃
A·O·雅科夫列夫
D·V·莫洛佐夫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biocard Jsc
Original Assignee
Biocard Jsc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2021112111A external-priority patent/RU2791857C2/ru
Application filed by Biocard Jsc filed Critical Biocard Jsc
Publication of CN117835965A publication Critical patent/CN117835965A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Abstract

本发明涉及药学和医学领域，特别地涉及抗PD‑1抗体派姆单抗的药物组合物，其可以是水性或冻干的组合物。本发明进一步涉及所述组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，以及所述组合物用于生产旨在用于治疗恶性瘤或感染性疾病的医药产品的用途。

Description

派姆单抗的药物组合物及其用途
技术领域
本发明涉及药学和医学领域，特别地涉及抗PD-1抗体派姆单抗的药物组合物，其可以用于治疗恶性瘤或感染性疾病。
背景技术
程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)是CD28受体家族的抑制成员，并且位于T淋巴细胞、B细胞、单核细胞、NK细胞和树突细胞的细胞表面上(Jin H.T.,Ahmed R.,Okazaki T.Roleof PD-1in regulating T-cell immunity.Curr Top Microbiol Immunol.2011；350:17-37)。PD-1是来自免疫球蛋白家族的跨膜受体，并且由288个氨基酸组成。蛋白质结构包括细胞外IgV结构域、间隔臂、跨膜结构域和胞质结构域。后者包括参与细胞中信号传导的2个含酪氨酸的序列(ITIM和ITSM)(Francisco LM,Sage PT,Sharpe AH.The PD-1pathway intolerance and autoimmunity.Immunol Rev.2010；236:219-242.doi:10.1111/j.1600-065X.2010.00923.x)。
PD-1具有2个抑制配体PD-L1和PD-L2，它们也是跨膜受体并在免疫稳态中起重要作用。PD-L1在T细胞和B细胞、树突细胞、巨噬细胞、内皮细胞、造血细胞和上皮细胞上表达。此外，在许多类型的恶性肿瘤的细胞上已检测到PD-L1表达，所述恶性肿瘤例如黑素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌、头颈肿瘤、胃肠道肿瘤、卵巢癌、淋巴瘤、白血病(Han Y.,Liu D.,LiL.PD-1/PD-L1 pathway:current researches in cancer.Am J Cancer Res.2020；10(3):727-742)。PD-L2在活化的巨噬细胞和树突细胞上具有有限的表达，并主要结合PD-1受体。增加PD-L1和PD-L2表达的主要因素是抗炎细胞因子IFNγ。
PD-1受体及其PD-L1配体在恶性瘤的存活和进展中发挥重要作用。如上所述，PD-L1受体表达在许多类型的恶性细胞的表面上增加。PD-L1/PD-1相互作用刺激肿瘤微环境中免疫抑制的发展，并因此保护肿瘤细胞免受细胞毒性CD8+T细胞的活性。PD-1/PD-L1系统是有希望的治疗靶(Wu Y.,Chen W.,Xu Z.P.,Gu W.PD-L1 Distribution and Perspectivefor Cancer Immunotherapy-Blockade,Knockdown,or Inhibition.Front Immunol.2019；10:2022,Ju X.,Zhang H.,Zhou Z.,Wang Q.Regulation of PD-L1 expression incancer and clinical implications in immunotherapy.Am J Cancer Res.2020；10(1):1-11)。
已知抗PD-1抗体派姆单抗，其是人PD-1受体的人源化单克隆G4(IgG4)抗体(PCT/US2008/007463)。其通过将鼠的PD-1受体的高亲和力抗体的可变序列与Fc片段中含有稳定化S228P突变的人IgG4κ框架组合而产生。其选择性阻断PD-1受体与其配体的结合，重新激活抗肿瘤免疫。免疫应答的激活刺激肿瘤细胞的消除。
派姆单抗在治疗各种类型的恶性肿瘤中显示高功效：黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、经典霍奇金淋巴瘤、尿路上皮癌、胃癌、高微卫星不稳定性恶性瘤、肝细胞癌、食管癌、宫颈癌、默克尔细胞癌、肾细胞癌、子宫内膜癌等。还已知派姆单抗用于治疗感染性疾病。目前，正在进行在治疗其中可能期望抑制PD-1活性的其它疾病或病症中的派姆单抗研究。
现有技术提供了可瑞达，一种治疗产品，其包括派姆单抗、蔗糖、聚山梨醇酯80和组氨酸缓冲液(PCT/US2012/031063)。尽管如此，仍然需要新的改进的稳定的派姆单抗的药物组合物。
附图说明
图1是对于测试制剂中的单克隆抗体派姆单抗，通过SE HPLC确定的聚集体含量(％)相对于在25±2℃的温度下的储存时间的图。
图2是对于测试制剂中的单克隆抗体派姆单抗，通过SE HPLC确定的单体含量(％)相对于在25±2℃的温度下的储存时间的图。
图3是对于测试制剂中的单克隆抗体派姆单抗，通过IE HPLC确定的碱性级分含量(％)相对于在25±2℃的温度下的储存时间的图。
图4是对于测试制剂中的单克隆抗体派姆单抗，在非还原性条件下通过CE确定的单体含量(％)相对于在25±2℃的温度下的储存时间的图。
图5是对于测试制剂中的单克隆抗体派姆单抗，在还原性条件下通过CE确定的重链和轻链的总和的含量(％)相对于在25±2℃的温度下的储存时间的图。
图6是对于测试制剂中的单克隆抗体派姆单抗，相对比活性(％)相对于在25±2℃的温度下的储存时间的图。
具体实施方式
定义
除非本文另有定义，否则与本发明结合使用的所有技术和科学术语将具有与本领域技术人员通常理解的相同的含义。
此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数术语，并且复数术语应包括单数术语。
如本说明书和所附权利要求书中所用，除非上下文另有规定，否则词语“具有”、“包括”和“包含”或其变型，例如“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“包含(comprises)”或“包含(包含)”将被理解为暗示包括所述的整体或整体的组，但不排除任何其它整体或整体的组。
术语“药物组合物”是指包含治疗有效量的派姆单抗和赋形剂或辅助物质(载体、稀释剂、填料、溶剂等)的组合物和/或制剂，其选择和比例取决于给予类型和途径以及剂量。
如本文所用，术语“水性组合物”是指水基组合物，组合物中的水可以是：水、注射用水、生理盐水(0.9％-1.0％氯化钠的水性溶液)。
本文所用的术语“冷冻干燥的”是指已经经受本领域称为冷冻干燥的方法的制剂，所述方法包括冷冻制剂，随后从冷冻的内容物中去除冰。
如果活性剂在规定的储存期限期间，在储存温度(例如2-8℃)下保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性，则药物组合物是“稳定的”。另外，活性剂可以保持物理稳定性和化学稳定性两者，以及生物活性。基于在加速老化或自然老化条件下的稳定性测试的结果来调节储存期。
术语“长期储存”或“长期稳定性”应理解为是指药物组合物可以储存三个月或更多、六个月或更多、一年或更多，并且组合物的最小稳定储存期限也可以是至少两年。一般而言，术语“长期储存”和“长期稳定性”进一步包括稳定的储存持续时间，比起抗PD-1抗体派姆单抗的当前可用的商品制剂通常所需的稳定的储存期限，其至少相当或更好，而没有损失使得制剂不适合其预期药物应用的稳定性。
术语“缓冲剂”是指缓冲液或缓冲溶液的酸或碱组分(通常为弱酸或弱碱)。缓冲剂有助于将给定的溶液的pH值保持在预定的值或接近预定的值，并且通常选择缓冲剂以补充预定的值。缓冲剂可以是产生期望的缓冲作用的单一化合物，尤其是当所述缓冲剂与适量(取决于期望的预定的值)的其相应的“酸/碱共轭物”混合(并适当地能够进行质子交换)时。
术语“缓冲液”或“缓冲溶液”是指包含酸(通常为弱酸，例如乙酸、柠檬酸)及其共轭碱(例如乙酸盐或柠檬酸盐，例如乙酸钠、柠檬酸钠，以及所述盐的水合物，例如三水合乙酸钠)的混合物或碱(通常为弱碱，例如组氨酸)及其共轭酸(例如组氨酸盐酸盐或一水合组氨酸盐酸盐或一水合(m/h)L-组氨酸盐酸盐(h/c)或L-组氨酸h/c m/h或组氨酸h/c m/h)的混合物的水性溶液。“缓冲溶液”的pH值在向其中加入少量强碱或强酸时，以及在稀释或浓缩时由于“缓冲剂”所赋予的“缓冲作用”而仅轻微变化。
在本申请中，“缓冲系统”包含一种或多种缓冲剂和/或其一种或多种酸/碱共轭物，并且更适宜地包含一种或多种缓冲剂及其一种或多种酸/碱共轭物，并且最适宜地包含一种缓冲剂及其酸/碱共轭物。除非另有说明，否则本文提及“缓冲系统”的任何浓度(缓冲液浓度)可以适宜地指一种或多种缓冲剂和/或其一种或多种酸/碱共轭物的合并浓度。换句话说，本文提及“缓冲系统”的浓度可以指所有相关缓冲物类(即，彼此动态平衡的物类，例如，柠檬酸盐/柠檬酸)的合并浓度。包含相关缓冲系统的组合物的总体pH反映每种相关缓冲物类(即，一种或多种缓冲剂与其一种或多种酸/碱共轭物的余量)的平衡浓度。
缓冲溶液可以是例如乙酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐和其它缓冲溶液。通常，药物组合物优选pH在4.0-8.0范围内。
“稳定剂”是指提供活性剂的物理和/或化学稳定性的赋形剂或两种或更多种赋形剂的混合物。稳定剂可以是氨基酸，例如但不限于精氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸；表面活性剂，例如但不限于聚山梨醇酯20(商品名：吐温20)、聚山梨醇酯80(商品名：吐温80)、聚乙二醇-聚丙二醇及其共聚物(商品名：泊洛沙姆、普郎尼克、十二烷基硫酸钠(SDS)；抗氧化剂，例如但不限于甲硫氨酸、乙酰半胱氨酸、抗坏血酸、一硫代甘油、亚硫酸盐等；螯合剂，例如但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、柠檬酸钠等。
如本文所用，术语“渗透剂(osmotic agent)”或“张力调节剂”以及“渗透剂(osmolyte)”是指可以提供液体抗体溶液的所需渗透压的赋形剂。在一些实施方案中，张力调节剂可以将液体抗体制剂的渗透压增加至等渗压，使得所述液体抗体制剂与受试者的生物体组织的细胞生理相容。在另一个实施方案中，张力调节剂可以有助于增加抗体的稳定性。“等渗”制剂是具有与人血液相等的渗透压的制剂。等渗制剂的渗透压通常为约239-376mOsm/kg。张力剂可以是对映体(例如L-或D-对映体)或外消旋形式；异构体形式，例如α或β，包括α,α；或β,β；或α,β；或β,α；游离酸或游离碱形式；盐形式；水合形式(例如一水合物或二水合物)或无水形式存在。示例性渗透剂为但不限于糖(海藻糖、二水合海藻糖、蔗糖、葡萄糖)、多元醇(甘露醇、山梨醇)、氨基酸(脯氨酸或L-脯氨酸、精氨酸、甘氨酸)或盐(氯化钠、氯化钾、氯化镁)。
如本文所用，术语“增溶剂”是指药学上可接受的非离子表面活性剂。可以使用一种增溶剂和多种增溶剂的组合两者。示例性增溶剂为但不限于聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、泊洛沙姆184或泊洛沙姆188或
通常，氨基酸是L-氨基酸。例如，如果使用组氨酸和一水合组氨酸盐酸盐，则其通常是L-组氨酸和一水合L-组氨酸盐酸盐。例如，如果使用脯氨酸，则其通常是L-脯氨酸。也可使用氨基酸等价物，例如，药学上可接受的脯氨酸盐(例如，脯氨酸盐酸盐)。
术语“药物”或“制剂”是片剂、胶囊、溶液、软膏和旨在用于恢复、改进或改变人类和动物的生理功能，以及用于治疗和预防疾病，用于诊断、麻醉、避孕、美容及其它的其它现成形式的物质(或药物组合物形式的物质的混合物)。
术语“用途”适用于使用根据本发明的派姆单抗的药物组合物治疗、缓解疾病进程、加速疾病或病症的缓解、降低疾病或病症的复发率的可能性。
术语“治疗方法”适用于使用根据本发明的派姆单抗的药物组合物治疗、缓解疾病进程、加速疾病或病症的缓解、降低疾病或病症的复发率的可能性。“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”、“预防”疾病、病症或病况可以包括预防或延迟在人中发展的疾病、病症或病况的临床症状的发作、抑制疾病、病症或病况，即，停止、降低或延迟疾病的发展或其复发(在维持疗法的情况下)或其至少一个临床或亚临床症状、或减轻或缓和疾病，即，引起疾病、病症或病况退化。
术语“肠胃外给药”是指给予方案，通常通过注射(输注)进行，并且特别包括静脉内、肌内、动脉内、气管内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射或输注。
缩写
IC-来料控制
FT-冻融
kD-扩散相互作用参数
Rh-流体动力学半径，
SH-振动
T-温度，
T ons-熔化起始温度
T1-第一熔化温度，
T2-第二熔化温度，
T agr-聚集温度，
TS-热应力
TS50 96H-在50℃下热应力96小时后的质量参数
ΔTS50 96H-应力(在50℃下热应力96小时)后质量参数的变化
TS50-在50℃下热应力10天后的质量参数，
ΔTS50-应力(在50℃下热应力10天)后质量参数的变化，
Δabs-通过方法21确定的带电荷的变体特性的绝对变化，
SH800 96H-搅拌(振动)96小时后的质量参数，
ΔSH800 96H-应力(搅拌(振动)96小时)后质量参数的变化，
SH800-搅拌(振动)14天后的质量参数，
ΔSH800-应力(搅拌(振动)14天)后质量参数的变化，
FT(-20)*5-5次冷冻循环后的质量参数，
FT(-20)*3-3次冷冻循环后的质量参数，
ΔFT(-20)*5-应力(5次冷冻循环)后质量参数的变化，
ΔFT(-20)*3-应力(3次冷冻循环)后质量参数的变化，
Acid 3.5 1H-酸水解至pH 3.5并老化1小时后的质量参数，
Acid 4.0-酸水解至pH 4.0并老化10天后的质量参数，
ΔAcid 3.5 1H-应力(酸水解至pH 3.5并老化1小时)后质量参数的变化，
ΔAcid 4.0-应力(酸水解至pH 4.0并老化10天)后质量参数的变化，
Basic 8.5 1H-碱水解至pH 8.5并老化1小时后的质量参数，
Basic 8.0-碱水解至pH 8.0并老化10天后的质量参数，
ΔBasic 8.5 1H-应力(碱水解至pH 8.5并老化1小时)后质量参数的变化，
ΔBasic 8.0-应力(碱水解至pH 8.0并老化10天)后质量参数的变化，
Ox 0.1％-用过氧化氢氧化4小时后的质量参数，
ΔOx 0.1％-应力(用过氧化氢氧化4小时)后质量参数的变化，
UV-光应力，剂量ICH×1后的质量参数，
ΔUV-应力(光应力，剂量ICH×1)后质量参数的变化，
n/a-未测定，
UV-UV暴露，
IE HPLC-离子交换高效液相色谱法，
CE-毛细管电泳，
Non-red.-非还原条件，
SW-软件，
Red.-还原条件
SA-比活性(效力)，
SE HPLC-尺寸排阻高效液相色谱法。
本发明公开了抗PD-1抗体派姆单抗的药物组合物，其可以用作用于治疗恶性瘤或感染性疾病的医药产品。
在制剂选择期间，我们考虑药物产品的目的、给予路线和耐受(例如，在给予期间减少不适)，以及制剂内的蛋白质分子的稳定性和活性保持。
一方面，本发明涉及药物组合物，所述组合物包含：
(i)派姆单抗；
(ii)组氨酸
(iii)一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)甘氨酸；
(v)海藻糖和泊洛沙姆188，或
脯氨酸；和
(vi)注射用水。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)派姆单抗；
(ii)组氨酸
(iii)一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)甘氨酸；
(v)海藻糖和泊洛沙姆188；和
(vi)注射用水。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)派姆单抗；
(ii)组氨酸
(iii)一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)甘氨酸；
(v)脯氨酸；和
(vi)注射用水。
包含在本发明的药物组合物中的派姆单抗的浓度可以根据组合物的期望的性质以及药物组合物的特定条件、方法和使用目的而变化。
在本发明的一些实施方案中，派姆单抗以5-50mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，组氨酸以0.087-0.432mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，一水合组氨酸盐酸盐以0.464-0.931mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，甘氨酸以1-2mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，海藻糖以70-130mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，泊洛沙姆188以0.8-1.2mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，脯氨酸以20-34mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)5-50mg/ml派姆单抗；
(ii)0.087-0.432mg/ml组氨酸；
(iii)0.464-0.931mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1-2mg/ml甘氨酸；
(v)70-130mg/ml海藻糖和0.8-1.2mg/ml泊洛沙姆188，或
20-34mg/ml脯氨酸；和
(vi)注射用水至1ml。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)5-50mg/ml派姆单抗；
(ii)0.087-0.432mg/ml组氨酸；
(iii)0.464-0.931mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1-2mg/ml甘氨酸；
(v)70-130mg/ml海藻糖和0.8-1.2mg/ml泊洛沙姆188；和
(vi)注射用水至1ml。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)5-50mg/ml派姆单抗；
(ii)0.087-0.432mg/ml组氨酸；
(iii)0.464-0.931mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1-2mg/ml甘氨酸；
(v)20-34mg/ml脯氨酸；和
(vi)注射用水至1ml。
在本发明的一些实施方案中，派姆单抗以15-35mg/ml、或20-30mg/ml、或25mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，组氨酸以0.200-0.319mg/ml、或0.200-0.250mg/ml、或0.210-0.240mg/ml、或0.210-230mg/ml、或0.215-0.230mg/ml、或0.215-0.225mg/ml、或0.220-0.225mg/ml、或0.221mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，组氨酸是L-组氨酸。
在本发明的一些实施方案中，一水合组氨酸盐酸盐以0.600-0.900mg/ml、或0.650-0.850mg/ml、或0.700-0.800mg/ml、或0.730-0.770mg/ml、或0.750mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，一水合组氨酸盐酸盐是一水合L-组氨酸盐酸盐。
在本发明的一些实施方案中，甘氨酸以1.3-1.7mg/ml、1.4-1.6mg/ml、或1.5mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，海藻糖以70-100mg/ml、或70-90mg/ml、或70-85mg/ml、或75-85mg/ml、或80mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，海藻糖是二水合海藻糖。
在本发明的一些实施方案中，泊洛沙姆188以0.9-1.1mg/ml、或0.95-1.05mg/ml、或1.0mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，脯氨酸以22-32mg/ml、或24-30mg/ml、或27mg/ml的浓度存在。
在本发明的一些实施方案中，脯氨酸是L-脯氨酸。
在本发明的一些实施方案中，组合物的pH为5.1-6.1、5.2-6.0、5.3-5.9、5.4-5.8或5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，组合物的pH为5.6。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188，或
27mg/ml脯氨酸；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml二水合海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)27mg/ml脯氨酸；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，药物组合物的pH为5.6。
一方面，本发明涉及派姆单抗的药物组合物，其以干燥(即，粉末或颗粒)形式提供，用于在给予前在合适的溶剂(例如，水)中重构。这样的制剂可以通过例如冻干(即，本领域称为冷冻干燥的方法)来制备，并且其包括冷冻产品，随后从冷冻的材料中去除溶剂。
一方面，本发明涉及通过冻干任何上述派姆单抗的药物组合物生产的派姆单抗的药物组合物。因此，根据本发明的药物组合物可以是水性药物组合物或冻干的药物组合物(冻干物)。
冻干物用于生产其它剂型。例如，用于生产可注射溶液的冻干物，用于生产浓缩物的冻干物，所述浓缩物用于生产可注射溶液。通过将冻干物溶解在合适的溶剂中(最典型地，在注射用水中)而重构冻干物。此外，冻干的组合物首先在所需体积的溶剂中(最典型地，在水中)重构，并随后在合适的溶剂(例如5％葡萄糖溶液、0.9％氯化钠溶液)中进一步稀释。
在本发明的一些实施方案中，通过冻干根据本发明的派姆单抗的药物组合物来生产派姆单抗的药物组合物。
在本发明的一些实施方案中，通过冻干派姆单抗的药物组合物来生产派姆单抗的药物组合物，所述组合物包含：
(i)5-50mg/ml派姆单抗；
(ii)0.087-0.432mg/ml组氨酸；
(iii)0.464-0.931mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1-2mg/ml甘氨酸；
(v)70-130mg/ml海藻糖和0.8-1.2mg/ml泊洛沙姆188，或
20-34mg/ml脯氨酸；和
(vi)注射用水至1ml。
在本发明的一些实施方案中，通过冻干派姆单抗的药物组合物来生产派姆单抗的药物组合物，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，通过冻干派姆单抗的药物组合物来生产派姆单抗的药物组合物，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml二水合海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，通过冻干派姆单抗的药物组合物来生产派姆单抗的药物组合物，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)27mg/ml脯氨酸；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，由其生产冻干的组合物的派姆单抗的药物组合物的pH为5.6。
一方面，本发明涉及上述派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途。
在一些实施方案中，本发明涉及派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在一些实施方案中，本发明涉及派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml二水合海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在一些实施方案中，本发明涉及派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)27mg/ml脯氨酸；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，派姆单抗的药物组合物的pH为5.6。
在一些实施方案中，本发明涉及通过冻干上述派姆单抗的药物组合物生产的派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途。
在一些实施方案中，本发明涉及通过冻干派姆单抗的药物组合物生产的派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在一些实施方案中，本发明涉及通过冻干派姆单抗的药物组合物生产的派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml二水合海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在一些实施方案中，本发明涉及通过冻干派姆单抗的药物组合物生产的派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)27mg/ml脯氨酸；
(vi)注射用水至1ml；和
其中组合物的pH为5.5-5.7。
在本发明的一些实施方案中，由其生产冻干的组合物的派姆单抗的药物组合物的pH为5.6。
一方面，本发明涉及上述派姆单抗的药物组合物用于生产用于治疗恶性瘤或感染性疾病的医药产品的用途。
在本发明的一些实施方案中，恶性瘤选自：黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、胃癌、高微卫星不稳定性/DNA错配修复缺陷(MMR)恶性瘤、肝细胞癌、宫颈癌、默克尔细胞癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、食管癌、鳞状细胞皮肤癌、基底细胞癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、卵巢癌、胆囊癌、恶性脑肿瘤、成胶质细胞瘤、具有高突变负担的肿瘤。
感染性疾病可以由病毒、细菌或真菌感染引起。在本发明的一些实施方案中，感染性疾病可以例如由人免疫缺陷病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、人乳头瘤病毒、EB病毒、人巨细胞病毒和疱疹病毒引起。许多所述疾病可以是慢性疾病。
在本发明的一些实施方案中，所述本发明的派姆单抗的药物组合物旨在用于肠胃外给药。
在本发明的一些实施方案中，所述本发明的派姆单抗的药物组合物旨在用于肌内、静脉内或皮下给予。
在本发明的一些实施方案中，所述本发明的派姆单抗的药物组合物可以作为输注静脉内给予。
根据本发明的派姆单抗的药物组合物可以在稀释后使用。为此，将所需体积的组合物从小瓶转移至包含无菌0.9％氯化钠溶液或无菌5％葡萄糖溶液的输注容器中。通过轻轻地翻转输注容器来搅拌所得溶液。
根据本发明的派姆单抗的药物组合物的治疗有效量取决于受试者的病况、病况的严重性、先前的疗法和患者的病史和对治疗剂的反应。合适的剂量可以由主治医师决定来调节，使得它可以一次或通过几次注射给予患者。
在本发明的一些实施方案中，治疗的受试者或患者是哺乳动物，优选人受试者。所述受试者可以是任何年龄的雄性或雌性。
根据本发明的药物组合物可以储存在任何合适的容器中。例如玻璃或塑料容器、小瓶、安瓿、注射器、药筒或期望体积的瓶子。容器可以提供有用于给予的另外的装置，例如滴管、自动注射器。
根据本发明的药物组合物可以以单一单位剂量或多个单一单位剂量的形式以现成制剂的形式制造、包装或广泛销售。如本文所用，术语“单一单位剂量”是指含有预定量的活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于待给予受试者的活性成分的剂量，或这样的剂量的适宜部分，例如这样的剂量的一半或三分之一。
药物组合物可以作为单一治疗剂或按需与另外的治疗剂组合来给予。因此，在一个实施方案中，用于治疗和/或预防的本方法与给予治疗有效量的另一种活性剂组合使用。其它活性剂可以在给予根据本发明的药物组合物之前、期间或之后给予。其它活性剂可以作为本组合物的一部分或作为单独的制剂给予。
实施例
方法
1.制备派姆单抗样品。
在应力下在搅拌室(Millipore)中制备浓度为5-50mg/ml的抗体样品。为此，将初始抗体制剂放置在室中，在连续搅拌下在压缩空气流中将蛋白质浓缩至期望的浓度，随后逐步向室中加入至少10倍体积的具有包含缓冲剂、渗透剂和(如果需要)另外的水溶性稳定剂的目标制剂的水性溶液。抗体渗滤后，我们继续浓缩至超过目标浓度的浓度，将其从室中卸载，并通过UV光谱法测量精确的蛋白质浓度。随后向样品中加入泊洛沙姆188的浓缩物和赋形剂的适当溶液，以制备具有目标浓度的蛋白质的溶液。
以切向流模式在Pellicon盒(Millipore)中制备浓度为20mg/ml或更高的蛋白质样品。为此，将初始抗体制剂放置在渗滤槽中，将蛋白质浓缩至期望的浓度，随后将至少10倍体积的具有包含缓冲剂和(如果需要)另外的水溶性稳定剂的目标制剂的溶液供应至系统。渗滤后，我们继续浓缩至超过目标浓度的浓度，将其从系统中卸载，并测量精确的蛋白质浓度。随后向样品中加入泊洛沙姆188和赋形剂的适当溶液的浓缩物，以制备具有目标浓度的蛋白质的溶液。
当获得包含增溶剂(例如泊洛沙姆188)的制剂时，在渗滤和浓缩后将表面活性剂浓缩物加入到抗体中，其中用赋形剂的溶液将抗体最终稀释至目标浓度。
在无菌填充至最终容器(例如，无菌玻璃/塑料容器、小瓶或注射器)期间，使用0.22μm灭菌膜过滤抗体溶液。
2.确定测试样品中的蛋白质浓度
通过UV光谱法，在280nm波长下在UV透明板中测量蛋白质浓度。
用赋形剂的适当溶液将每个样品稀释至约0.5mg/ml的浓度。将150μl稀释的样品放置在UV分光光度计板的孔中。使用板分光光度计在280nm波长下测量板孔中溶液的光密度。赋形剂的适当溶液用作参考溶液。
使用下式计算蛋白质的浓度(C)(mg/ml)：
其中
Α280是在280nm波长下的光密度值；
ε为测试蛋白质的消光系数；
b是样品的总稀释因子；
l是板孔中的层厚度；对于175μl，l＝0.42cm。
3.通过动态光散射确定蛋白质聚集温度。
使用DynaPro Plate Reader II确定测试蛋白质(浓度为1-5mg/ml)的聚集点。为此，将35μl溶液放置在具有光学透明底部的黑色聚合物板的孔中，在仪器中逐渐加热，同时恒定测量散射光强度。
测量设置：
·初始测量温度-25℃。
·θ＝158°处的散射光强度。
·每次重复的测量次数为3。
·每次测量的时间为5秒。
·加热速率为0.15℃/分钟。
·最终温度为80℃。
使用Dynamics V7软件确定温度趋势和聚集点。
4.通过差示扫描荧光测定法确定蛋白质熔点。
将Sypro Orange荧光染色剂加入到蛋白质样品中。在CFX96C1000 Touch ThermalCycler放大器中以实时模式分析样品。从25℃加热至85℃，检测通道为ROX。使用CFXManager(Bio-Rad)软件来处理结果。
5.通过动态光散射确定溶液中颗粒的流体动力学半径
为了分析，将35μl各浓度的样品放置在具有光学透明底部的黑色聚合物板的孔中。使用DynaPro Plate Reader II仪器进行分析。每个孔分析10次。在Dynamics V7软件中处理所得数据。
6.通过动态光散射确定扩散相互作用参数(kD)
通过逐步稀释生产30mg/ml至0.94mg/ml的许多蛋白质溶液。赋形剂的适当溶液用作溶剂。
为了分析，将35μl各浓度的样品放置在具有光学透明底部的黑色聚合物板的孔中。使用DynaPro Plate Reader II仪器进行分析。每个孔分析10次。在Dynamics V7软件中处理所得数据，其中绘制扩散系数对溶液中蛋白质浓度的依赖性，并确定所得依赖性的线倾角。
7.确定在50℃热应力(TS50)下的热稳定性。
将测试样品分成2个等分试样，每个150μl，并放置在单独的玻璃小瓶中：将每种组合物1个小瓶储存在5±3℃的冰箱中，将其余小瓶放置在恒温器中并在50℃下孵育96小时。当选择对照点或随后的加热时，从恒温器中去除小瓶，在室温下保持约15分钟并转移用于分析。
8.确定在振动(SH800)下的胶体稳定性。
将测试样品分成2个等分试样，每个150μl，并放置在玻璃小瓶中，将每种制剂1个小瓶储存在5±3℃的冰箱中，将其余小瓶放置在热振动器中并在800rpm下在5±3℃下振动96小时。在选择对照点或随后的应力期间，从热振动器中去除小瓶并转移用于分析。
9.确定在冻融(FT(-20))下的胶体稳定性。
将测试样品分成2个等分试样并放置在塑料小瓶中：将每种制剂1个小瓶储存在5±3℃的冰箱中，将其余小瓶储存在不高于-18℃的冷冻机中，直到完全冷冻。此后，从冷冻机中去除小瓶，保持在室温下直到内容物完全解冻；使用涡旋混合溶液并放回到冷冻机中。重复至少三次。应力后，从冷冻机中去除小瓶，保持在室温下直到内容物完全解冻；使用涡旋混合溶液并转移用于分析。
10.确定在酸水解(Acid)下的稳定性。
将测试样品分成2个等分试样并放置在聚合物小瓶中：将每种制剂1个小瓶储存在5±3℃的冰箱中(对于所有研究，在储存开始时，输入对照可以转移用于分析一次)，搅拌下用盐酸溶液将其余小瓶的pH调节至3.5±0.1，此后，将它们转移至冰箱中用于在5±3℃下储存。1小时后，通过加入氢氧化钠溶液至初始pH值，在搅拌下猝灭水解。随后转移溶液用于分析。
11.确定在碱性水解(Basic)下的稳定性。
将测试样品分成2个等分试样并放置在聚合物小瓶中：将每种制剂1个小瓶储存在5±3℃的冰箱中(对于所有研究，在储存开始时，输入对照可以转移用于分析一次)，搅拌下用氢氧化钠溶液将其余小瓶的pH调节至8.5±0.1，此后，将它们转移至冰箱中用于在5±3℃下储存。1小时后，通过加入盐酸溶液至初始pH值，在搅拌下猝灭水解。随后转移溶液用于分析。
12.加速老化。
将测试样品分成单独的等分试样(一个等分试样用于输入对照，对于所有研究，在储存开始时，允许转移用于分析一次)并放置在单独的无菌玻璃小瓶中：将每种制剂的小瓶的一部分放置在冰箱中用于在5±3℃下储存(输入对照)，将其余小瓶放置在恒温器中并在25±2℃下孵育6个月，根据计划定期选择对照点。当选择对照点和随后的储存时，从恒温器中去除小瓶并转移用于分析。
13.通过尺寸排阻高效液相色谱法(SE HPLC)确定样品纯度。
柱：Tosoh TSK-GelG3000SWXL 7.8mm ID×30cm，5μm。
预柱：TSK-Gel Guard SWXL，6.0mm ID×4.0cm，7μm，
柱温：25℃。
流动相流速：0.5ml/min。
注射体积：25μl。
样品浓度：0.5mg/ml。
检测器波长：214和360nm。
洗脱时间：30分钟。
流动相：无水磷酸氢二钠14.2mg/ml。氯化钠11.7mg/ml。
用正磷酸将流动相pH调节至6.9。
14.在Caliper LabChip GX II仪器上评价毛细管中的带电荷的变体特性
根据HT蛋白质电荷变体试剂盒的说明书进行分析。通过在0.5ml Amicon Ultra10kDa离心过滤器(Millipore)中稀释或浓缩(取决于样品的初始浓度)将测试样品调节至1mg/ml的蛋白质浓度。在280nm波长下通过UV分光光度法确定蛋白质含量。
将2μl羧肽酶溶液加入到每个所得样品中，并将样品在37±2℃的温度下孵育2小时。在规定时间后，将样品在Amicon Ultra离心管中对水透析，并浓缩至2mg/ml。
96孔板负载如在说明书中规定量的标记缓冲溶液、染料混合物溶液和25μl测试样品，将板放置在暗处10分钟，随后每个孔负载60μl水并混合。
使用板离心机转子离心具有溶液的板，并放置在Caliper LabChip GX II仪器中。分析使用特殊芯片，该芯片充满根据说明书的pH的运行缓冲溶液。用LabChip GX软件处理结果。
15.通过离子交换高效液相色谱法(iE HPLC)确定电荷变体特性。
柱：ProPac WCX-10，4×250mm，粒度：10μm(Thermo Scientific,USA)。
预柱：ProPac WCX-10G，4×50mm，粒度：10μm(Thermo Scientific,USA)。
洗脱液A：20mM 2-(N-吗啉代)-乙磺酸，4％乙腈的溶液，pH＝7.0。
洗脱液B：20mM磷酸钠缓冲液，95mM NaCl溶液，4％乙腈的溶液，pH＝8.0。
流速：0.6ml/min-1.0ml/min。
柱温：45℃。
自动取样器温度：5℃。
检测器：UV，280nm。
参考波长：360nm，100nm带宽
样品体积：80μl。
色谱时间：43分钟。
将测试样品稀释至浓度为1.0mg/ml，并在37±2℃的温度下用羧肽酶B以100:1的比率处理20分钟。
洗脱模式：洗脱液A为从100％至80％，洗脱液B为从0％至20％。
16.在十二烷基硫酸钠存在/不存在下通过毛细管聚丙烯酰胺凝胶电泳(CEred.和non-red.)确定纯度和相关的杂质。
将样品稀释至4.0mg/ml的浓度。将23μL所得溶液放置在1.5mL微管中；向其中加入70μl SDS-MW样品缓冲液、2μl分子量为10kDa的内标、5μl 0.5M碘乙酰胺溶液(CE non-red.)或5μl 2-巯基乙醇(CE red.)。将所得溶液搅拌15秒，以2800rpm的速度离心5秒，并放置在70℃的固态恒温器中30分钟。将溶液冷却至室温。
SDS MW分离-PA 800plus.met分析方法用于32Karat软件。
毛细管凝胶电泳的条件：
毛细管：50μm×30.2cm
毛细管的有效长度：20.0cm
极性：相反，进口在左侧(-)，出口在右侧(+)
毛细管温度：25℃
分析时间和分离电压：35分钟，15kV
检测波长：220nm。
17.确定相对比活性。
使用生物学测试确定比活性，该测试是针对阻断PD-L1依赖性抑制基于T细胞的Jurkat-PD1-NFAT报道细胞系的活化的能力。使用机器人平台液体处理臂(LiHa)处理样品；使用具有25mM HEPES、24mM碳酸氢钠、含有2mM L-谷氨酰胺、10％FBS、50μg/ml庆大霉素的RPMI-1640作为测定培养基(用于定量确定的培养基)。
使用测定培养基(用于定量确定的培养基)将抗体的测试样品稀释至1mg/ml的浓度，并且放置在机器人平台中。机器人平台液体操作臂(LiHa)用于使用测定培养基制备浓度为1 000、50、10、1、0.5、0.25、0.1、0.025、0.01、0.001μg/ml的标准样品和测试样品的三种独立稀释液。我们将稀释液和测定培养基转移到培养板中，加入以(1.00±0.1)×106个细胞/ml的浓度稳定表达PDL-1的Raji-PDL1 cl.3细胞悬浮液、以(1.67±0.1)×106个细胞/ml的浓度的Jurkat-NFAT-PD1 cl.1报道细胞系悬浮液和抗CD3/CD20的双特异性抗体。将培养板放置在CO2培养箱中，在(37±1)℃的温度下，在具有5％二氧化碳含量的加湿空气中培养22-24小时。
孵育期之后，将培养板在室温下保持至少15分钟，并加入BioGlo萤光素酶底物。使用微板读数器和Magellan 7.2软件，以相对发光单位(RLU)测量发光水平。使用发光测量的结果，我们为每个板建立了使用Levenberg-Marquardt算法对标准样品和测试样品优化的四参数曲线，确定测试样品相对于标准样品的相对比活性。
18.通过疏水相互作用的高效液相色谱(疏水相互作用HPLC)确定氧化产物。
柱：TSKgel Phenyl-5PW 7.5×75mm，粒度：10μm(Tosoh Booscience,Japan)。
洗脱液A：5mM磷酸钠缓冲液，2％乙腈的溶液，pH＝7.0。
洗脱液B：5mM磷酸钠缓冲液，400mM硫酸铵，4％乙腈的溶液，pH＝6.9。
流速：0.5ml/min。
柱温：30℃。
自动取样器温度：5℃。
检测器：UV，280nm，带宽：16nm。
参考波长：360nm，100nm带宽
样品体积：25μL。
色谱时间：82分钟。
将测试样品稀释至浓度为3.0mg/ml，并在37±2℃的温度下用羧肽酶B以100:1的比率处理20分钟。
洗脱方式：洗脱液A为0％-100％，洗脱液B为100％-0％。
19.确定在氧化下的稳定性。
将测试样品分成2个等分试样，每个150μl，并放置在单独的玻璃小瓶中：将每种制剂1个小瓶储存在5±3℃的冰箱中，将过氧化氢加入到剩余的样品中至样品中过氧化氢的最终浓度为0.1％，将样品在(5±3)℃下老化4小时。通过加入等量的L-甲硫氨酸来猝灭氧化。
20.确定光稳定性。
将测试样品分成两个等分试样，并放置在单独的玻璃小瓶中。作为深色对照，我们在第二个包装中使用用铝箔紧密包裹的产品。将所有样品放置在具有光源的气候室中，并在1,200,000lux·h和200W·h/m2(剂量ICH×1)下发射光应力程序。在达到期望的应力水平后，将所有样品从室中去除并转移用于分析。
21.结果的处理。
通过下式计算当在应力下时质量指标的绝对变化：
Δ＝(应力后的值-应力前的值)
通过下式计算电荷变体特性的绝对变化(abs)：
Δ＝|应力前酸性级分含量-应力后酸性级分含量|
+|应力前碱性级分含量-应力后碱性级分含量|
+|应力前主要级分含量-应力后主要级分含量|
实施例1.缓冲系统的选择。
在本研究中，选择2种适合肠胃外给药的典型的缓冲体系(乙酸盐和组氨酸缓冲体系)作为药物组合物的基础。在具有两个水平和中心点的完全双因素实验设计中进行研究。研究pH水平(5.0-6.5)和缓冲剂的浓度(5-50mM)作为定量因素。
为了评估缓冲系统的适用性，我们研究了缓冲溶液的性质对蛋白质的胶体和构象稳定性的作用。确定聚集温度、熔点、扩散相互作用参数、热应力后的纯度变化和酸-碱特性作为响应。测试药物组合物示于表1中。
表1-测试制剂
/>
稳定性预测指标的研究。
扩散相互作用参数(kD)反映作为分子浓度函数的样品扩散系数。如果扩散系数随浓度的增加而降低(kD<0)，则给定溶液的多分散性增加，并且在其中形成较大的颗粒。这样的样品具有低溶解度并且倾向于聚集，并且不推荐使用其制剂。
聚集温度和熔点使得可以评估蛋白质的聚集趋势。最稳定的样品是其中颗粒聚集在较高温度下开始并且其中在加热下形成较小颗粒那些。
通过方法3的聚集温度、通过方法4的熔点和通过方法6的扩散相互作用参数的研究结果示于表2中。最佳结果的颜色色调较浅。
表2-稳定性预测指标的研究结果
确定热稳定性。
通过方法7评估热稳定性。在热应力之前和之后，我们通过方法13通过SE HPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法5确定流体动力学半径。结果示于表3中。最佳结果的颜色色调较浅。
表3-确定热稳定性的结果
/>
在Minitab软件中处理所得数据，并建立模型以选择具有最稳定化作用的制剂。只有那些受到因素(pH和缓冲溶液的质量摩尔浓度)的显著作用的反应(质量指标)用于建立模型。对于优化模型中没有考虑的其它反应，假定在研究的因素范围内没有统计学显著差异。基于优化结果，选择pH为5.6的5mM组氨酸缓冲溶液，其用以下制备：
L-组氨酸 0.221mg/ml
一水合L-组氨酸盐酸盐 0.750mg/ml
当制备具有特定含量的L-组氨酸和一水合L-组氨酸盐酸盐的溶液时，pH可能稍微偏离期望值，并且在5.5-5.7(pH 5.6±0.1)的pH范围内变化。
该制剂在所有测试样品中显示最佳的稳定化性质。根据模型的结果，在热暴露下的组氨酸缓冲溶液中预期单体(蛋白质)和聚集体含量的最小变化，并且还预期聚集温度和扩散相互作用参数的高值。与可瑞达缓冲溶液相比，最佳的组成表现出在热暴露下单体含量的较小变化，聚集物含量的较小变化，并且扩散相互作用参数增加，这指示胶体稳定性较高。
实施例2.渗透剂的选择。
测试制剂。
研究了适合肠胃外给药的赋形剂用作渗透剂。测试制剂示于表4中。
表4-测试制剂
稳定性预测指标的研究。
对于渗透剂的选择，通过方法3的聚集温度、通过方法4的熔点和通过方法6的扩散相互作用参数的研究结果示于表5中。最佳结果的颜色色调较浅。
表5-稳定性预测指标的研究结果
/>
确定热稳定性。
通过方法7评估热稳定性。在热应力之前和之后，我们通过方法13通过SE HPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表6中。最佳结果的颜色色调较浅。
表6-确定热稳定性的结果
确定在振动下的稳定性。
通过方法8评估在振动下的稳定性。在振动之前和之后，我们通过方法13通过SEHPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表7中。最佳结果的颜色色调较浅。
表7-确定在振动下的稳定性的结果
确定在冷冻和融化期间的稳定性。
通过方法9评估在冻融下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过方法13通过SEHPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表8中。最佳结果的颜色色调较浅。
表8-确定在冻融下的稳定性的结果
/>
包含二水合海藻糖和L-脯氨酸的制剂在所有测试样品中显示最佳的稳定化性质。包含二水合海藻糖的样品在聚集温度和熔点方面显示最佳结果。此外，该样品在热暴露下显示质量指标的最小变化，观察到在振动下的微小变化。包含L-脯氨酸的样品也显示聚集温度的最佳结果之一和熔点的平均结果。具有L-脯氨酸的组合物在热暴露下显示平均结果，在振动下质量指标的小变化，和在冻融下的最佳结果。
引入为下一步骤选择的二水合海藻糖或L-脯氨酸减少在冻融和热应力下聚集体的形成。而且，所选制剂在振动下表现出轻微的质量变化。
当与含有蔗糖的制剂相比时，所选的渗透剂提供增加的热稳定性；特别地，我们观察到熔点/聚集温度升高，在热暴露下聚集体的形成速率较低，单体含量的较小变化，并且我们还观察到酸-碱特性的较小的绝对变化。在赋形剂中含有二水合海藻糖的样品在扩散相互作用参数方面显示更好的结果，这指示在浓缩和渗滤期间增加的稳定性和更小的聚集倾向。与含有蔗糖的制剂相比，含有二水合海藻糖、山梨醇或L-脯氨酸的所研究的制剂在振动和冷冻下显示明显更小的颗粒流体动力学半径增加，这指示形成了大的高分子颗粒。
为下一步骤选择的赋形剂制剂：
His+Tre 100mg/ml: L-组氨酸 0.221mg/ml
一水合L-组氨酸盐酸盐 0.750mg/ml
二水合海藻糖 100mg/ml
His+Prol 30mg/ml: L-组氨酸 0.221mg/ml
一水合L-组氨酸盐酸盐 0.750mg/ml
L-脯氨酸 30mg/ml
实施例3.渗透剂和稳定剂的筛选。
为了筛选渗透剂和稳定剂，使用适于肠胃外给药的赋形剂。测试制剂示于表9中。根据方法2制备在测试制剂中含有派姆单抗的药物组合物。
表9-测试制剂
/>
/>
稳定性预测指标的研究。
对于渗透剂的选择，通过方法3的聚集温度、通过方法4的熔点和通过方法6的扩散相互作用参数的研究结果示于表10中。最佳结果的颜色色调较浅。
表10-稳定性预测指标的研究结果
确定热稳定性。
通过方法7评估热稳定性。在热应力之前和之后，我们通过方法13通过SE HPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表11中。最佳结果的颜色色调较浅。
表11-确定热稳定性的结果
/>
确定在酸水解下的稳定性。
对于不含泊洛沙姆188的制剂，通过方法10(其中调节至pH 3.5并老化1小时)评估在酸水解下的稳定性。在水解之前和之后，我们通过方法13通过SE HPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表12中。最佳结果的颜色色调较浅。
表12-确定在酸水解下的稳定性的结果
/>
确定在碱水解下的稳定性。
对于不含泊洛沙姆188的制剂，通过方法11(其中调节至pH 8.5并老化1小时)评估在碱水解下的稳定性。在水解之前和之后，我们通过方法13通过SE HPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表13中。最佳结果的颜色色调较浅。
表13-确定在碱水解下的稳定性的结果
/>
确定在振动下的稳定性。
通过方法8评估在振动下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过方法13通过SEHPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表14中。最佳结果的颜色色调较浅。
表14-确定在振动下的稳定性的结果
/>
确定在冷冻和融化期间的稳定性。
通过方法9评估在冻融下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过方法13通过SEHPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表15中。最佳结果的颜色色调较浅。
表15-确定在冻融下的稳定性的结果
在测试样品中，以下制剂在稳定性方面可能是卓越的：
/>
选择含有二水合海藻糖的制剂、二水合海藻糖与甘氨酸的组合的组合物、以及具有L-脯氨酸的组合物、以及具有L-脯氨酸与甘氨酸或甲硫氨酸的组合的组合物用于进一步开发，因为它们在应力下显示积极稳定性结果。
与具有L-脯氨酸的制剂相比，具有二水合海藻糖的所有制剂表现出更高含量的碱性级分。在含有二水合海藻糖的制剂中，具有甘氨酸的制剂显示最佳结果。我们观察到甘氨酸对聚集温度和熔点以及对扩散相互作用参数的积极影响。当在热应力下时，向制剂中加入甘氨酸显示轻微的改进。向制剂中加入甘氨酸显示在应力之前和之后纯度和酸-碱特性的改进。与没有加入表面活性剂的可瑞达赋形剂的制剂中的样品相比，我们观察到熔点和聚集温度的显著增加，以及在酸和碱水解下纯度和酸-碱特性的显著较小的变化。
在含有表面活性剂的制剂中，观察到泊洛沙姆188的积极作用。这些组合物在振动和冷冻下在纯度和带电荷的变体特性方面表现出较小的变化。因此，选择泊洛沙姆188用作下一步骤中的表面活性剂。
实施例4.确定赋形剂制剂的关键定量因素。
在具有两个水平和中心点的阶乘四因子实验设计中进行研究。蛋白质浓度(10-40mg/ml)、pH(5.1-6.1)、渗透剂浓度(70-130mg/ml)、L-甘氨酸浓度(1.5-15mg/ml)和泊洛沙姆188浓度(0.10-1.0mg/ml)作为定量因素进行研究。测试制剂列于表16中。
表16-测试制剂
在表16中，缓冲溶液是指在表17中描述的以下制剂。
表17-缓冲溶液的制剂
稳定性预测指标的研究。
对于渗透剂的选择，通过方法3的聚集温度、通过方法4的熔点和通过方法6的扩散相互作用参数的研究结果示于表18中。最佳结果的颜色色调较浅。
表18-稳定性预测指标的研究结果
确定热稳定性。
通过方法7评估热稳定性。在热应力之前和之后，我们通过方法13通过SE HPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表19中。最佳结果的颜色色调较浅。
表19-确定热稳定性的结果
确定在振动下的稳定性。
通过方法8评估在振动下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过方法13通过SEHPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表20中。最佳结果的颜色色调较浅。
表20-确定在振动下的稳定性的结果
/>
确定在冷冻和融化期间的稳定性。
通过方法9评估在冻融下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过方法13通过SEHPLC确定纯度，通过方法14在毛细管中确定电荷变体特性，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表21中。最佳结果的颜色色调较浅。
表21-确定在冻融下的稳定性的结果
/>
结果用于在Minitab软件中建立模型。L-甘氨酸/泊洛沙姆188的浓度对派姆单抗的稳定性没有统计学显著作用。根据优化结果，L-甘氨酸的推荐浓度为15mg/ml，泊洛沙姆188的推荐浓度为1.0mg/ml，二水合海藻糖的推荐浓度为84.5mg/ml。然而，为了确保组合物的生理同渗质量摩尔浓度，将L-甘氨酸的含量降低到1.5mg/ml，并且将二水合海藻糖的含量降低到80mg/ml。较早选择缓冲溶液、其浓度和pH，结果如实施例1所示。本实施例证实它们对派姆单抗的稳定性的统计学显著作用。在热应力下，表面活性剂可能引起人工高分子量杂质的形成。如果热应力不包括在模型中，可以推断泊洛沙姆188浓度的增加对派姆单抗的稳定性具有积极作用。根据结果，泊洛沙姆188的最佳浓度为1.0mg/ml。
因此，最终选择的制剂如下：
实施例5.确定在应力条件下最终制剂的稳定性
对于应力稳定性测试，选择派姆单抗的最终制剂和可瑞达赋形剂的制剂。测试制剂示于表22中。根据方法2制备在测试制剂中含有派姆单抗的药物组合物。
表22-测试制剂
确定热稳定性。
通过方法7评估热稳定性持续10天。在热应力之前和之后，我们通过SE HPLC方法(方法13)确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法5确定流体动力学半径。结果示于表23中。最佳结果的颜色色调较浅。
表23-确定热稳定性的结果
确定在振动下的稳定性。
通过方法8评估在振动下的稳定性。在振动之前和之后，我们通过SE HPLC方法13确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表24中。最佳结果的颜色色调较浅。
表24-确定在振动下的稳定性的结果
确定在冷冻和融化期间的稳定性。
通过方法9评估在冻融下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过SE HPLC方法13确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表25中。最佳结果的颜色色调较浅。
表25-确定在冻融下的稳定性的结果
确定在酸水解下的稳定性。
通过方法9评估在酸水解下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过SE HPLC方法13确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表26中。最佳结果的颜色色调较浅。
表26-确定在酸水解下的稳定性的结果
确定在碱水解下的稳定性。
通过方法9评估在碱水解下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过SE HPLC方法13确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表27中。最佳结果的颜色色调较浅。
表27-确定在碱水解下的稳定性的结果
确定在氧化下的稳定性。
通过方法9评估在氧化下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过SE HPLC方法13确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表28中。最佳结果的颜色色调较浅。
表28-确定在氧化下的稳定性的结果
确定光稳定性。
通过方法9评估在氧化下的稳定性。在应力之前和之后，我们通过SE HPLC方法13确定纯度，通过IE HPLC方法(方法15)确定带电荷的变体特性，通过疏水相互作用HPLC方法(方法18)确定氧化产物的含量，通过方法6确定流体动力学半径。结果示于表29中。最佳结果的颜色色调较浅。
表29-确定光稳定性的结果
根据应力稳定性测试的结果，与可瑞达的赋形剂制剂相比，派姆单抗的赋形剂制剂在热应力下表现出质量指标的较小变化，特别是流体动力学半径的较小变化、聚集体的较小增加和单体含量的变化、形成氧化形式的显著较低的趋势和带电荷的变体特性的较小变化。
当在振动和冷冻下时，观察到应力后带电荷的变体特性的较小变化。
进而，当在酸水解下时，观察到聚集体的较小增加和单体含量的变化，以及碱性级分含量的较小变化。当在碱性水解下时，派姆单抗制剂内的蛋白质形成聚集体、改变单体含量和改变带电荷的变体特性的倾向较小。
当在光应力下时，与可瑞达赋形剂的制剂相比，观察到明显较低的氧化倾向，以及单体含量的较小变化、聚集体的较小增加和带电荷的变体特性的较小变化。
实施例6.确定在37±2℃的温度下加速老化下的稳定性。
为了预先证实所选制剂的稳定性，在37±2℃的温度下使其经受加速老化。
通过方法1制备蛋白质浓度(25-50mg/ml)、pH(5.1-6.1)、二水合海藻糖浓度(70-90mg/ml)、甘氨酸浓度(1.0-2.0mg/ml)和泊洛沙姆188浓度(0.8-1.2mg/ml)范围内的药物组合物，并在37±2℃的温度下储存用于稳定性测试。
测试制剂示于表30中。
表30-测试制剂
/>
/>
/>
加速老化。
根据技术1通过渗滤制备包含浓度为25、50和37.5mg/ml的蛋白质的药物组合物，并根据技术8放置在37±2℃的温度下用于加速储存。研究结果示于表31中。
表31-在37±2℃的温度下的稳定性的研究结果
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
所有测试制剂均表现出可接受的质量参数变化(通过SE HPLC确定的纯度，在还原和非还原条件下的CE，带电荷的变体特性和比活性)，这通过使用MODDE软件的设计空间证实。根据反映因素(缓冲溶液pH和赋形剂组分含量)对响应(质量参数)的作用的实验空间的结果，在37±2℃下加速老化4周，药物组合物在提供的浓度、pH和赋形剂范围内是稳定的。
实施例7.确定在长期加速老化下的稳定性。
为了证实所选制剂的稳定性，在25±2℃的温度下使其经受加速老化。
通过方法1制备蛋白质浓度(25-50 mg/ml)、pH(5.1-6.1)、二水合海藻糖浓度(70-90 mg/ml)、甘氨酸浓度(1.0-2.0 mg/ml)和泊洛沙姆188浓度(0.8-1.2 mg/ml)范围内的药物组合物，并在25±2℃的温度下储存用于稳定性测试。此外，我们在所有组合物中选择最关键的情况，具有最低和最高赋形剂含量和最高蛋白质含量，以及具有赋形剂含量在所述范围的中心点的制剂。
测试制剂示于表32中。
表32-测试制剂
/>
加速老化。
根据技术1通过渗滤制备包含浓度为25、50和37.5mg/ml的蛋白质的药物组合物，并根据技术8放置在25±2℃的温度下用于加速储存。研究结果示于表33和图1、2、3、4、5和6中。
表33-稳定性的研究结果
/>
/>
/>
/>
在加速储存期间所有药物组合物证明可接受水平的变化。
含有pH范围为5.1-6.1的组氨酸缓冲溶液、70-90mg/ml的二水合海藻糖、1.0-2.0mg/ml的L-甘氨酸和0.8-1.2mg/ml的泊洛沙姆188的药物组合物证明可接受水平的聚集(在25±2℃下6个月内聚集体的增加不超过0.32％)，以及在25mg/ml浓度和至多50mg/ml的增加的浓度的单克隆抗体派姆单抗下酸-碱特性的小变化(碱性级分含量变化不超过13.0％)和在加速老化下比活性的轻微变化。
加入二水合海藻糖有助于增加派姆单抗的聚集温度和熔点。我们还观察到在热应力下质量参数的最小变化，在振动和冷冻后质量参数的轻微变化。此外，甘氨酸对聚集温度和熔点以及对扩散相互作用参数具有积极影响。观察到在酸和碱水解下甘氨酸对蛋白质质量参数的积极影响。向制剂中加入泊洛沙姆188有助于测试蛋白质在振动和冷冻下的稳定化。
根据应力稳定性测试的结果，派姆单抗赋形剂的开发制剂在热应力、酸和碱水解下显示优于可瑞达制剂的显著优点；此外，我们观察到在光应力下显著更低的氧化倾向，其对蛋白质的结构和比活性具有显著作用，并且具有增加的聚集倾向。
我们提供了使用派姆单抗的水性药物组合物的研究的实例。用于进一步研究的水性药物组合物描述于表34中。
表34-派姆单抗的水性药物组合物。
实验揭示，可瑞达产品的制剂具有以下几个缺点：1)抗体的胶体稳定性不足，2)在热应力下稳定性不足，3)在机械应力和冷冻下带电荷的变体特性的稳定性低。
在本发明的框架内，已经生产了具有足够的胶体稳定性和热稳定性以及在机械应力和冷冻下带电荷的变体特性的高稳定性的药物组合物。此外，在其制剂(例如表34中指示的制剂)中含有海藻糖和泊洛沙姆188的药物组合物的进一步特征在于在长期储存下形成高分子量杂质的低倾向，以及在光应力和长期储存下氧化、比活性损失和杂质增加的低倾向。
与药物组合物的稳定性有关的所得数据指示赋形剂彼此之间以及与活性物质之间的相容性。

Claims (34)

1.派姆单抗的药物组合物，所述组合物包含：
(i)派姆单抗；
(ii)组氨酸；
(iii)一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)甘氨酸；
(v)海藻糖和泊洛沙姆188，
或脯氨酸；和
(vi)注射用水。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中派姆单抗以5-50mg/ml的浓度存在。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中组氨酸以0.087-0.432mg/ml的浓度存在。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中一水合组氨酸盐酸盐以0.464-0.931mg/ml的浓度存在。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中甘氨酸以1-2mg/ml的浓度存在。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中海藻糖以70-130mg/ml的浓度存在。
7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中泊洛沙姆188以0.8-1.2mg/ml的浓度存在。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中脯氨酸以20-34mg/ml的浓度存在。
9.根据权利要求1所述的药物组合物，所述组合物包含：
(i)5-50mg/ml派姆单抗；
(ii)0.087-0.432mg/ml组氨酸；
(iii)0.464-0.931mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1-2mg/ml甘氨酸；
(v)70-130mg/ml海藻糖和0.8-1.2mg/ml泊洛沙姆188，或
20-34mg/ml脯氨酸；和
(vi)注射用水至1ml。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中派姆单抗以20-30mg/ml的浓度存在。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中派姆单抗以25mg/ml的浓度存在。
12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中组氨酸以0.200-0.319mg/ml的浓度存在。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中组氨酸以0.221mg/ml的浓度存在。
14.根据权利要求9所述的药物组合物，其中一水合组氨酸盐酸盐以0.650-0.850mg/ml的浓度存在。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中一水合组氨酸盐酸盐以0.750mg/ml的浓度存在。
16.根据权利要求9所述的药物组合物，其中甘氨酸以1.5mg/ml的浓度存在。
17.根据权利要求9所述的药物组合物，其中海藻糖以70-100mg/ml的浓度存在。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中海藻糖以75-85mg/ml的浓度存在。
19.根据权利要求18所述的药物组合物，其中海藻糖以80mg/ml的浓度存在。
20.根据权利要求1所述的药物组合物，其中海藻糖是二水合海藻糖。
21.根据权利要求9所述的药物组合物，其中泊洛沙姆188以1.0mg/ml的浓度存在。
22.根据权利要求9所述的药物组合物，其中脯氨酸以24-30mg/ml的浓度存在。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中脯氨酸以27mg/ml的浓度存在。
24.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为5.1-6.1。
25.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为5.6。
26.根据权利要求1所述的药物组合物，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中所述组合物的pH为5.5-5.7。
27.根据权利要求20所述的药物组合物，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)80mg/ml二水合海藻糖和1.0mg/ml泊洛沙姆188；
(vi)注射用水至1ml；和
其中所述组合物的pH为5.5-5.7。
28.根据权利要求1所述的药物组合物，所述组合物包含：
(i)25mg/ml派姆单抗；
(ii)0.221mg/ml组氨酸；
(iii)0.750mg/ml一水合组氨酸盐酸盐；
(iv)1.5mg/ml甘氨酸；
(v)27mg/ml脯氨酸；
(vi)注射用水至1ml；和
其中所述组合物的pH为5.5-5.7。
29.根据权利要求26-28中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为5.6。
30.派姆单抗的药物组合物，其通过冻干根据权利要求1-29中任一项所述的派姆单抗的药物组合物而生产。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的派姆单抗的药物组合物用于治疗恶性瘤或感染性疾病的用途。
32.根据权利要求31所述的用途，其中所述恶性瘤选自：黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、胃癌、高微卫星不稳定性/DNA错配修复缺陷(MMR)恶性瘤、肝细胞癌、宫颈癌、默克尔细胞癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、食管癌、鳞状细胞皮肤癌、基底细胞癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、卵巢癌、胆囊癌、恶性脑肿瘤、成胶质细胞瘤、具有高突变负担的肿瘤。
33.根据权利要求1-30中任一项所述的派姆单抗的药物组合物用于生产旨在用于治疗恶性瘤或感染性疾病的医药产品中的用途。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述恶性瘤选自：黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、胃癌、高微卫星不稳定性/DNA错配修复缺陷(MMR)恶性瘤、肝细胞癌、宫颈癌、默克尔细胞癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、食管癌、鳞状细胞皮肤癌、基底细胞癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、卵巢癌、胆囊癌、恶性脑肿瘤、成胶质细胞瘤、具有高突变负担的肿瘤。
CN202280030892.2A 2021-04-27 2022-04-27 派姆单抗的药物组合物及其用途 Pending CN117835965A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021112111A RU2791857C2 (ru) 2021-04-27 Фармацевтическая композиция пембролизумаба и ее применение
RU2021112111 2021-04-27
PCT/RU2022/050140 WO2022231481A1 (en) 2021-04-27 2022-04-27 Pharmaceutical composition of pembrolizumab and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117835965A true CN117835965A (zh) 2024-04-05

Family

ID=83848424

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280030892.2A Pending CN117835965A (zh) 2021-04-27 2022-04-27 派姆单抗的药物组合物及其用途

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP4329729A1 (zh)
CN (1) CN117835965A (zh)
AR (1) AR125470A1 (zh)
CO (1) CO2023014166A2 (zh)
CR (1) CR20230527A (zh)
EC (1) ECSP23081880A (zh)
MA (1) MA62939A1 (zh)
TW (1) TW202308692A (zh)
WO (1) WO2022231481A1 (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TN2017000440A1 (en) * 2015-04-17 2019-04-12 Bristol Myers Squibb Co Compositions comprising a combination of an anti-pd-1 antibody and another antibody
US11608357B2 (en) * 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
US10646569B2 (en) * 2017-05-16 2020-05-12 Bhami's Research Laboratory, Pvt. Ltd. High concentration protein formulations with reduced viscosity
WO2020097141A1 (en) * 2018-11-07 2020-05-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
TW202308692A (zh) 2023-03-01
MA62939A1 (fr) 2024-02-29
CO2023014166A2 (es) 2024-02-05
AR125470A1 (es) 2023-07-19
ECSP23081880A (es) 2023-11-30
EP4329729A1 (en) 2024-03-06
WO2022231481A1 (en) 2022-11-03
CR20230527A (es) 2024-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240058263A1 (en) Formulations of antibody
TWI721020B (zh) 一種抗ｐｄ-１抗體製劑及其在醫藥上的應用
AU2013255413C1 (en) Pharmaceutical formulations of TNF-alpha antibodies
AU2004298728A1 (en) Pharmaceutical preparation containing an antibody for the EGF receptor
CN111228479A (zh) 一种抗pd-l1抗体制剂
JP2004536129A (ja) セツキシマブおよびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを含む液体製剤
US10959939B2 (en) Liquid pharmaceutical composition of etanercept with lysine and proline
CN117835965A (zh) 派姆单抗的药物组合物及其用途
RU2791857C2 (ru) Фармацевтическая композиция пембролизумаба и ее применение
CN116510006A (zh) 抗trbv9抗体的药物组合物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination