KR20210028673A - 항-FXIa 항체에 대한 신규한 안정한 고농도 제형물 - Google Patents

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마리에케 포이링크
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Abstract

본 발명은 활성 성분으로서 응고 인자 FXIa에 대한 인간 항체, 특히 WO2013167669에 기재된 것을 포함하는, 피하 투여에 특히 적합하고 장기간에 걸쳐 액체 제형물로서 안정한 신규한 액체 제약 고농도 제형물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 감소된 재구성 시간을 갖는 특정 액체 제형물의 동결건조물 및 또한 혈전성 또는 혈전색전성 장애의 요법 및 예방에서 이들 제형물의 용도에 관한 것이다.

Description

항-FXIa 항체에 대한 신규한 안정한 고농도 제형물
본 발명은 활성 성분으로서 응고 인자 FXIa에 대한 인간 항체, 특히 WO2013167669에 기재된 것을 포함하는, 피하 투여에 특히 적합하고 장기간에 걸쳐 액체 제형물로서 안정한 신규한 액체 제약 고농도 제형물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 감소된 재구성 시간을 갖는 특정 액체 제형물의 동결건조물 및 또한 혈전성 또는 혈전색전성 장애의 요법 및 예방에서 이들 제형물의 용도에 관한 것이다.
혈액 응고는 혈관벽의 결함을 빠르고 확실하게 "밀봉"할 수 있도록 도와주는 유기체의 보호 메커니즘이다. 따라서, 혈액 손실을 피하거나 최소한으로 유지할 수 있다. 혈관 손상 후 지혈은 주로 혈장 단백질의 복잡한 반응의 효소적 캐스케이드가 촉발되는 응고 시스템에 의해 영향을 받는다. 많은 혈액 응고 인자가 이 과정에 관여되며, 각각의 인자는 활성화 시 각각 다음 비활성 전구체를 활성 형태로 전환시킨다. 캐스케이드가 끝나면 가용성 피브리노겐이 불용성 피브린으로 전환되어 혈전이 형성된다. 혈액 응고에서는 통상적으로 최종 합동 반응 경로로 끝나는 내인성 및 외인성 시스템이 구별된다.
응고 인자 XIa는 응고의 시작으로부터 증폭 및 전파로의 이행의 중심 성분이다: 양성 피드백 루프에서, 트롬빈은 인자 V 및 인자 VIII에 추가하여 인자 XI를 인자 XIa로 활성화시키며 이에 의해 인자 IX는 인자 IXa로 전환되며, 이러한 방식으로 생성된 인자 IXa/인자 VIIIa 복합체를 통해 인자 X가 활성화되고, 결국 트롬빈 형성이 고도로 자극되어 강력한 혈전 성장 및 혈전 안정화로 이어진다. 항-FXIa 항체는 선행 기술에서 항응고제, 즉 혈액 응고를 억제 또는 방지하기 위한 물질로 공지되어 있다 (WO2013167669 참조).
예컨대, 인간 모노클로날 항체와 같은 치료 단백질은 일반적으로 액체 제약 제형물로 주사에 의해 투여된다. 많은 치료학적으로 유효한 인간 모노클로날 항체는 낮은 안정성 또는 응집 경향과 같은 바람직하지 못한 특성을 갖기 때문에, 적합한 제약 제형물에 의해 이러한 바람직하지 못한 특성을 조정하는 것이 필요하다. 응집 또는 변성 항체는, 예컨대 낮은 치료 효능을 가질 수 있다. 응집 또는 변성 항체는 또한 원하지 않는 면역 반응을 유발할 수 있다. 단백질의 안정한 제약 제형물은 또한 화학적 불안정성을 방지하는데 적합해야 한다. 단백질의 화학적 불안정성은 분해 또는 단편화로 이어질 수 있으므로 효능이 감소되거나 심지어 독성 부작용이 발생할 수 있다. 따라서, 모든 유형의 저분자량 단편의 형성 또는 생성을 피하거나 적어도 최소화해야 한다. 이들은 제제의 안전성에 영향을 미칠 수 있는 모든 인자이므로 반드시 고려해야 한다. 또한, 주사기 또는 펌프를 사용할 때 낮은 점도가 기본인데, 이는 낮은 점도는 필요한 힘을 낮게 유지하여 주입가능성을 높이기 때문이다. 낮은 점도는 또한 생산하는 동안 기본이 되며, 예컨대 제제의 정확한 충전을 가능하게 한다. 그러나, 인간 모노클로날 항체의 치료적 사용은 종종 높은 항체 농도를 사용해야 하며, 이는 종종 높은 점도에 기인한 문제를 야기한다. 개요 논문에서, 도허티 (Daugherty) 및 므스니 (Mrsny) (Adv Drug Deliv Rev. 2006;58(5-6):686-706)는 모노클로날 항체의 액체 제약 제형물에서 발생할 수 있는 이러한 문제 및 다른 문제를 논의한다.
피하 (s.c.) 주사의 경우, 제형물에 대한 특별한 요구 사항을 추가로 고려해야 한다. 정맥내 적용과 비교하여, 1-2 밀리리터를 초과하는 전달 부피의 제형물은 잘 받아들여지지 않기 때문에, 주사기에 의한 단일 주사에 대해 주사 부피가 제한된다. 이는 동일한 용량을 전달하는데 더 높은 항체 농도가 필요하게 한다. 이는 항체가 약 100 mg/ml 이상의 농도에 도달해야 하는 것을 의미한다. 고농축 단백질 제형물은 단백질 치료제의 제조가능성 및 투여에 많은 문제를 일으킬 수 있다. 또한, 환자의 수용 및 순응도를 보장하기 위해 작은 바늘을 통한 편리한 적용이 요구된다. 고농축 항체 제형물의 경우, 항체 농도가 증가함에 따라 점도가 증가하고 투여를 방해하기 때문에 두 속성이 경쟁한다.
피하 적용에 비해 더 높은 주사 부피를 허용하는 정맥내 (i.v.) 적용에 적합한 항-FXIa 항체를 위한 액체 저농도 제형물이 특허 출원 PCT/EP2018/050951에 기재되어 있다. 이 저농도 제형물은 10-40 mg/ml 항-FXIa 항체 및 5-10 mM 히스티딘 및 130-200 mM 글리신을 포함하는 히스티딘/글리신 버퍼 시스템을 포함하며, 여기서 제형물은 pH 5.7-6.3을 갖는다. 피하 적용을 위한 ≤ 2 ml의 제한된 적용 부피를 고려할 때, PCT/EP2018/050951에 기재된 저농도 제형물은 의도된 치료 관련 용량의 투여에 적합하지 않다. 항-FXIa 항체 농도를 약 100 mg/ml 이상으로 증가시키는 것이 불가피하고 명백하다. 그러나, PCT/EP2018/050951에 기재된 히스티딘/글리신 버퍼 시스템에서 항-FXIa 항체의 농도를 증가시키면 용액의 점도가 허용되지 않는 값으로 기하급수적으로 증가하였다.
고농도 투여 형태와 관련된 문제를 극복하기 위해 다양한 방법이 제안되었다. 예컨대, 고농도 항체 제형물과 관련된 안정성 문제를 해결하기 위해, 항체는 종종 동결건조된 다음 투여 직전에 재구성된다. 재구성은 투여 과정에 추가적인, 때로는 시간 소모적인 단계를 추가하고 제형물에 오염물을 도입할 수 있기 때문에, 일반적으로 최적이 아니다. 또한, 재구성된 항체조차도 응집 및 고점도 문제를 겪을 수 있다. 따라서, 장기간에 걸쳐 안정한 액체 제형물이 유리할 것이다.
점도를 낮추기 위해 상이한 부형제를 사용하는 단백질 및 항체를 위한 여러 액체 고농도 제형물이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예컨대, WO2009043049는 액체 제약 단백질 제형물의 점도를 적어도 70 mg/ml 단백질의 농도로 감소시키기 위해 크레아틴, 크레아티닌, 카르니틴 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 부형제의 사용을 기재한다. 반면에, WO2016065181은 고농도 제형물의 점도를 감소시키기 위한 다양한 n-아세틸 아미노산의 사용을 기재한다.
아르기닌은 점도 감소 부형제로 공지되어 있다. 그러나, 지금까지 충분한 점도 감소를 제공하기 위해 다량의 아르기닌 또는 다량의 아르기닌 및 히스티딘이 필요한 고농도 단백질 제형물만이 공지되어 있다. US20150239970은 항-IL-6 항체의 액체 고농도 제형물을 위한 다량의 아르기닌 (150 mM 초과)의 사용을 기재한다. 반면, US8703126은 아르기닌 또는 히스티딘으로부터 유래된 약 150-200 mM 염 또는 버퍼의 사용을 기재한다.
낮은 분획의 응집체 및 분해 생성물을 포함하고 동결건조할 필요 없이 장기간에 걸쳐 액체로서 안정하며 최소 점도를 갖는 항-FXIa 항체의 고농축 액체 제형물에 대한 요구가 존재한다. 또한, s.c 적용을 위한 제형물의 pH는 4.7 내지 7.4이어야 하고, 삼투압은 240 내지 400 mOsm/kg 범위를 초과하지 않아야 한다.
본 발명은 상술된 요구를 해결하고 장기간에 걸쳐 액체로서 안정한 약 100 mg/ml 이상의 항-FXIa 항체 및 소량의 응집체 및 분해 생성물을 포함하는 액체 고농도 제약 제형물을 제공한다. 이러한 제형물은 또한 점도가 낮으므로 심지어 피하 주사에 의해, 예컨대 주사기, 펜 장치, 자동주입기 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 장치를 사용하여 환자에게 간단히 투여될 수 있다. 액체 고농도 항-FXIa 제형물은 또한 바람직하게는 통상적인 동결-건조 방법보다 훨씬 더 짧은 재구성 시간을 제공하는 특허 출원 EP17170483.6에 기재된 바와 같은 분무-동결-기반 방법에 의해 동결건조될 수 있다.
본 발명은 약 100 mg/ml 이상의 항-FXIa 항체, 및 히스티딘, 글리신 및 아르기닌을 포함하는 4.7-5.3의 낮은 pH의 삼중 버퍼 시스템을 포함하고, 여기서 소량의 아르기닌은 점도를 감소시키기에 충분하고, 장기간에 걸쳐 액체로 안정한, 저점도의, 특히 피하 적용에 적합한 고농도 제약 제형물을 제공한다.
도 1은 감소된 재구성 시간을 갖는 동결-건조된 펠릿을 생성하는 동결-건조 방법 (방법 3)을 위한 장치를 개략적으로 도시한다.
도 2는 항체 용액의 통상적인 동결-건조 (방법 1) 동안 시간에 따라 측정된 온도 및 압력 프로파일을 그래프로 도시한다.
도 3은 방법 2 (WO 2006/008006에 기재된 바와 같음)에 따라 항체 용액의 동결 및 건조 동안 시간에 따라 측정된 온도 및 압력 프로파일을 그래프로 도시한다.
도 4는 본원에 기재된 동결-건조 방법 (방법 3)에 따른 항체 용액의 처리 동안 시간에 따라 측정된 냉각탑의 온도 프로파일을 그래프로 도시한다.
도 5는 본원에 기재된 동결-건조 방법 (방법 3)에 따른 항체 용액의 동결 및 건조 동안 시간에 따라 측정된 온도 및 압력 프로파일을 그래프로 도시한다.
도 6은 본원에 기재된 동결-건조 방법 (방법 3)에 따라 생산된 펠릿의 주사 전자 현미경 (SEM) 사진을 도시한다.
도 7은 통상적인 동결-건조 (방법 1)에 따라 생산된 동결건조물의 주사 전자 현미경 (SEM) 사진을 도시한다.
도 8은 WO2006/008006 (방법 2)에 개시된 동결-건조 공정에 따라 생산된 동결건조물의 주사 전자 현미경 (SEM) 사진을 도시한다.
한 실시양태에서, 액체 제약 제형물은 5-30 mM 히스티딘, 20-100 mM 글리신 및 150 mM 미만의 아르기닌을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 액체 제약 제형물은 10-20 mM 히스티딘, 25-75 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 액체 제약 제형물은 20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌을 포함한다. 또한, 액체 제약 제형물은 pH 4.7-6.0을 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 액체 제약 제형물은 pH 4.7-5.3을 갖는다. 특히 바람직한 실시양태에서, 액체 제약 제형물은 pH 5를 갖는다. 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 약 100 mg/ml 이상의 농도로 항-FXIa 항체를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 약 100-300 mg/ml의 농도로 존재한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 135-165 mg/ml, 가장 바람직하게는 약 150 mg/ml의 농도를 갖는다. 추가의 특히 바람직한 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 약 100 mg/ml의 농도를 갖는다. 모든 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 특히 바람직하게는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D이다.
액체 제약 제형물은 또한 안정화제를 포함할 수 있다. 안정화제는, 예컨대 당이다. "당"은 수용성이며 단당류, 이당류 및 폴리올로 나뉘는 유기 화합물 그룹을 지칭한다. 바람직한 당은 비환원 이당류이며, 트레할로스가 특히 바람직하다. 한 실시양태에서, 안정화제는 1-10% 중량 대 부피 (w/v)의 범위, 바람직하게는 3-7% (w/v)의 범위, 특히 바람직하게는 5% (w/v)의 범위로 존재한다. 바람직한 실시양태에서, 트레할로스 이수화물은 1-10% 중량 대 부피 (w/v)의 범위, 바람직하게는 3-7% (w/v)의 범위, 특히 바람직하게는 5% (w/v)의 범위로 존재한다.
액체 제약 제형물은 또한 계면활성제를 포함할 수 있다. 용어 "계면활성제"는 친수성 및 소수성 영역을 갖는 임의의 세제를 지칭하고, 비이온성, 양이온성, 음이온성 및 쯔비터이온성 세제를 포함한다. 바람직한 세제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트 (폴리소르베이트 80 또는 트윈(TWEEN) 80으로도 공지됨), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 (폴리소르베이트 20 또는 트윈 20으로도 공지됨), 폴록사머 188 (폴리옥시에틸렌과 폴리옥시프로필렌의 공중합체) 및 N-라우릴사르코신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 개시된 조성물에 대해, 비이온성 계면활성제가 바람직하다. 본 발명의 조성물에 대해 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188을 사용하는 것이 특히 바람직하다. 계면활성제는 0.005% 내지 0.5% (w/v)의 농도로 사용될 수 있으며, 0.01% 내지 0.2% (w/v)의 농도 범위가 바람직하다. 0.05%-0.1% (w/v)의 계면활성제 농도를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 특히 바람직한 것은 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80의 사용이다. 더욱 특히 바람직한 것은 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188의 사용이다.
보존제 또는 다른 첨가제, 충전제, 안정화제 또는 담체가 본 발명에 따른 액체 제약 제형물에 임의적으로 첨가될 수 있다. 적합한 보존제는, 예컨대 옥타데실디메틸벤질암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드 및 방향족 알콜, 예컨대 페놀, 파라벤 또는 m-크레졸이다. 추가의 제약상 허용되는 첨가제, 안정화제 또는 담체는, 예컨대 문헌 (Remington's Science And Practice of Pharmacy, 22nd edition, Loyd V. Allen, Jr, editor. Philadelphia, PA: Pharmaceutical Press. 2012)에 기재된다.
따라서, 본 발명은 약 100 mg/ml 이상의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D 및 히스티딘/글리신/아르기닌 버퍼 시스템을 포함하는 액체 제약 고농도 제형물을 제공하며, 여기서 제형물은 5-30 mM 히스티딘, 20-100 mM 글리신 및 150 mM 미만의 아르기닌, 바람직하게는 10-20 mM 히스티딘, 25-75 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌을 포함하고, pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는다. 이는 액체 제형물로서 안정하나 제형물의 임의의 동결건조를 가능하게 하는, 낮은 점도, 충분한 안정화 및 낮은 응집의 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 고농도 제형물이 된다.
본 발명에 따른 한 실시양태는 약 100 mg/ml의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D 및 히스티딘/글리신/아르기닌 버퍼 시스템을 포함하는 액체 제약 제형물이며, 여기서 제형물은 5-30 mM 히스티딘, 20-100 mM 글리신 및 150 mM 미만의 아르기닌, 바람직하게는 10-20 mM 히스티딘, 25-75 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌을 포함하며, pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는다.
본 발명에 따른 한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 M007-H04-CDRL3-N110D,
5-30 mM 히스티딘, 바람직하게는 10-20 mM 히스티딘,
20-100 mM 글리신, 바람직하게는 25-75 mM 글리신 및
150 mM 미만의 아르기닌, 바람직하게는 50-75 mM 아르기닌
을 포함하고,
pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 계면활성제, 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
본 발명에 따른 한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
5-30 mM 히스티딘, 바람직하게는 10-20 mM 히스티딘,
20-100 mM 글리신, 바람직하게는 25-75 mM 글리신 및
150 mM 미만의 아르기닌, 바람직하게는 50-75 mM 아르기닌,
1 내지 10% (w/v) 안정화제, 바람직하게는 3 내지 7% (w/v) 트레할로스 이수화물
을 포함하고,
pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 계면활성제, 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
한 실시양태에서, 액체 제약 제형물은 0.005% 내지 0.5% (w/v), 바람직하게는 0.01% 내지 0.2% (w/v) 농도의 계면활성제로서 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188을 포함한다.
바람직한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
10-20 mM 히스티딘, 25-100 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌,
3-7% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.01% 내지 0.2% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188
을 포함하고,
pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
바람직한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
10-20 mM 히스티딘, 25-100 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌,
3-7% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.01% 내지 0.2% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80
을 포함하고,
pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
추가의 바람직한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
10-20 mM 히스티딘, 25-100 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌,
3-7% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.01% 내지 0.2% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188
을 포함하고,
pH 4.7-5.3, 바람직하게는 pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
특히 바람직한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌,
5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80
을 포함하고,
pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
더욱 특히 바람직한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌,
5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 20
을 포함하고,
pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
더욱 특히 바람직한 실시양태는
약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌,
5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.05% (w/v) 농도의 폴록사머 188
을 포함하고,
pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
더욱 특히 바람직한 실시양태는
약 150 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌,
5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80
을 포함하고,
pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
더욱 특히 바람직한 실시양태는
약 150 mg/ml 이상의 농도에서 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌,
5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 20
을 포함하고,
pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
더욱 특히 바람직한 실시양태는
약 150 mg/ml 이상의 농도에서 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D,
20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌,
5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및
0.05% (w/v) 농도의 폴록사머 188
을 포함하고,
pH 5를 갖는 액체 제약 제형물이다. 제형물은 임의적으로 보존제, 담체 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함한다.
본 발명에 따라 사용될 항-FXIa 항체는 혈장 인자 XI의 활성화된 형태인 FXIa에 결합할 수 있다. 바람직하게는, 항-FXIa 항체는 FXIa에 특이적으로 결합한다. 바람직하게는, 항-FXIa 항체는 혈소판 응집 및 관련 혈전증을 억제할 수 있다. 바람직하게는, 항체 매개된 혈소판 응집 억제는 혈소판-의존적 일차 지혈을 손상시키지 않는다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "지혈을 손상시키지 않는"은 응고 인자 XIa의 억제가 원하지 않는 측정가능한 출혈 사건을 유발하지 않음을 의미한다.
본원에 사용된 "응고 인자 XIa", "인자 XIa" 또는 "FXIa"는 지모겐 인자 XI를 발현하는 임의의 포유동물 종으로부터의 임의의 FXIa를 지칭한다. 예컨대, FXIa는 인간, 비인간 영장류 (예컨대, 개코 원숭이), 마우스, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 토끼, 및 혈류, 응고 및/또는 혈전증의 조절에 관여되는 응고 인자 XI를 발현하는 임의의 다른 종일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 이러한 항체가 이러한 항원과 하나 이상의 기준 (reference) 항원(들)을 구별할 수 있는 경우, 결합 특이성은 절대적인 것이 아니라 상대적인 특성이기 때문에, 항체는 항원 (본원에서, FXIa)에 "특이적으로 결합"하거나, 이에 "특이적"이거나, 이를 "특이적으로 인식"한다. 가장 일반적인 형태에서 (및 정의된 기준이 언급되지 않은 경우), "특이적 결합"은, 예컨대 하기 방법 중 하나에 따라 결정된 관심 항원과 관련되지 않은 항원을 구별하는 항체의 능력을 지칭한다. 이러한 방법은 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-시험 및 펩티드 스캔을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예컨대, 표준 ELISA 검정이 수행될 수 있다. 스코어링은 표준 발색 (예컨대, 2차 항체와 서양고추냉이 퍼옥사이드 및 테트라메틸 벤지딘과 과산화수소)에 의해 수행될 수 있다. 특정 웰에서의 반응은, 예컨대 450 ran에서의 광학 밀도로 스코어링된다. 전형적인 배경 (=음성 반응)은 0.1 OD일 수 있다; 전형적인 양성 반응은 1 OD일 수 있다. 이는 양/음의 차이가 10배 초과일 수 있음을 의미한다. 전형적으로, 결합 특이성의 결정은 단일 기준 항원이 아니라 우유 분말, BSA, 트랜스페린 등과 같은 약 3 내지 5개의 관련되지 않은 항원 세트를 사용하여 수행된다. 그러나, "특이적 결합"은 또한 표적 항원과 기준점으로 사용되는 하나 이상의 밀접하게 관련된 항원(들), 예컨대 상동체를 구별하는 항체의 능력을 지칭할 수 있다. 예컨대, 항체는 기준 항원과 비교하여 표적 항원에 대해 적어도 1.5배, 5 2배, 5배, 10배, 100배, 103배, 104배, 105배, 106배 이상의 상대적 친화도를 가질 수 있다. 추가로, "특이적 결합"은 표적 항원의 상이한 부분들, 예컨대 FXIa의 상이한 도메인 또는 영역을 구별하는 항체의 능력과 관련될 수 있다.
"친화도" 또는 "결합 친화도" KD는 종종 평형 결합 상수 (ka) 및 평형 해리 상수 (kd)를 측정하고 kd 대 ka의 몫 (KD = kd/ka)을 계산함으로써 결정된다. 용어 "면역특이적" 또는 "특이적으로 결합하는"은 바람직하게는 항체가 106M 이하의 친화도 KD (일가 친화도)로 응고 인자 XIa에 결합하는 것을 의미한다. 용어 "고친화도"는 항체가 107M 이하의 친화도 KD (일가 친화도)로 응고 인자 XIa에 결합하는 것을 의미한다. 이러한 친화도는, 통상적인 기술을 사용하여, 예컨대 평형 투석에 의해; 제조업체가 약술되는 일반적인 절차를 사용하여 비아코어 (BIAcore) 2000 기기를 사용하여; 방사성표지된 표적 항원을 사용한 방사면역검정에 의해; 또는 통상의 기술자에게 공지된 또 다른 방법에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 친화도 데이터는, 예컨대 문헌 [Kaufman RJ, Sharp PA. (1982) Amplification and expression of sequences cotransfected with a modular dihydrofolate reductase complementary dna gene. [J Mol Biol.159:601-621]에 기재된 방법에 의해 분석될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 자연으로부터 단리되거나 재조합 수단에 의해 제조된 면역글로불린 분자 (예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY를 포함하는 임의의 유형, 및/또는 IgGI, IgG2, IgG3, IgG4, IgAI 및 IgA2를 포함하는 임의의 부류)를 포함하며, 모든 통상적으로 공지된 항체 및 이의 기능적 단편을 포함한다. 용어 "항체"는 또한 항체 CDR 삽입물을 천연 항체에서 발견되는 것과 동일한 활성 결합 형태로 배향할 수 있는 다른 단백질 스캐폴드로 확장되어 이러한 키메라 단백질로 관찰된 표적 항원의 결합은 CDR이 유래된 천연 항체의 결합 활성에 비례하여 유지된다.
이에 항체/면역글로불린의 "기능적 단편" 또는 "항원-결합 항체 단편"은 항원-결합 영역을 보유하는 항체/면역글로불린의 단편 (예컨대, IgG의 가변 영역)으로 정의된다. 항체의 "항원-결합 영역"은 전형적으로 항체의 하나 이상의 초가변 영역(들), 즉 CDR-I, -2 및/또는 -3 영역에서 발견되며; 그러나, 다양한 "프레임워크" 영역도 CDR에 대해 스캐폴드를 제공하는 것과 같이 항원 결합에서 중요한 역할을 할 수 있다. 바람직하게는, "항원-결합 영역"은 적어도 가변 경쇄 (VL)의 아미노산 잔기 4 내지 103 및 가변 중쇄 (VH)의 잔기 5 내지 109, 보다 바람직하게는 VL의 아미노산 잔기 3 내지 107 및 VH의 아미노산 잔기 4 내지 111을 포함하고, 특히 바람직한 것은 완전한 VL 및 VH 쇄 (VL의 아미노산 위치 1 내지 109 및 VH의 아미노산 위치 1 내지 113; WO 97/08320에 따른 넘버링)이다. 본 발명에서 사용하기 위한 바람직한 부류의 면역글로불린은 IgG이다.
본 발명의 "기능적 단편"은 Fab, Fab1, F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단쇄 항체 분자 (scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체, 디술파이드-연결된 Fv (sdFv) 및 VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편을 포함하며, 이는 온전한 면역글로불린으로부터 제조되거나 재조합 수단에 의해 제조된다.
항원-결합 항체 단편은 가변 영역(들)을 단독으로 또는 하기의 전체 또는 일부와 조합하여 포함할 수 있다: 힌지 영역, CHI, CH2, CH3 및 CL 도메인. 본 발명에는 또한 가변 영역(들)과 힌지 영역, CHI, CH2, CH3 및 CL 도메인의 임의의 조합을 포함하는 항원-결합 항체 단편이 포함된다.
항체 및/또는 항원-결합 항체 단편은 단일특이적 (예컨대, 모노클로날), 이중특이적, 삼중특이적 또는 더 큰 다중특이적일 수 있다. 바람직하게는, 모노클로날 항체가 사용된다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 수득되는 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 지시된다. 또한, 상이한 결정 인자 (에피토프)에 대해 지시되는 상이한 항체들을 전형적으로 포함하는 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제와 달리, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정 인자에 대해 지시된다. 모노클로날 항체는 특이성 외에도 균일 배양에 의해 합성되고 특이성 및 특성이 상이한 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다.
항체 또는 항원-결합 항체 단편은, 예컨대 인간, 인간화, 뮤린 (예컨대, 마우스 및 래트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말 또는 닭일 수 있다. 바람직하게는, 인간 또는 인간화 항-FXIa 항체가 사용된다.
본원에 사용된 "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리, 인간 B 세포, 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대해 트렌스제닉인 동물로부터 단리된 항체뿐만 아니라 합성 인간 항체를 포함한다.
"인간화 항체" 또는 기능적 인간화 항체 단편은 본원에서 (i) 비인간 공급원 (예컨대, 이종 면역계를 보유하는 트랜스제닉 마우스)으로부터 유래된 것으로서, 항체는 인간 배선 서열을 기반으로 하는 것; 또는 (ii) 키메라로서, 여기서 가변 도메인은 비인간 기원으로부터 유래되고 불변 도메인은 인간 기원으로부터 유래되는 것, 또는 (iii) CDR-이식된 것으로서, 여기서 가변 도메인의 CDR은 비인간 기원으로부터 유래되고 가변 도메인의 하나 이상의 프레임워크는 인간 5 기원이고 불변 도메인 (존재하는 경우)은 인간 기원인 것으로 정의된다.
본 발명에 따라 사용될 적합한 항체는, 예컨대 WO 2013/167669에 개시되어 있다. 한 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 WO 2013/167669에 개시되어 있는 바와 같이 i) 가변 경쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호 (SEQ ID NO): 19 및 가변 중쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 20; 또는 ii) 가변 경쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 29 및 가변 중쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 30; 또는 iii) 가변 경쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 27 및 가변 중쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 20을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 WO 2013/167669에 개시된 항체 076D-M007-H04, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, 및 076D-M028-H17로부터 선택된다. 특히 바람직한 실시양태에서, 항-FXIa 항체는 본원에서 가변 중쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 1 및 가변 경쇄 도메인에 대한 아미노산 서열에 대해 서열식별번호: 2로 표시되는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D이다.
본원에 사용된 용어 "제약 제형물" 또는 "제형물"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 허용하는 형태이고, 제형물이 투여되는 대상체에게 허용되지 않을 정도로 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
본원에서 사용된 "점도"는 유동에 대한 유체의 저항이고, 주어진 전단 속도에서 센티포이즈 (cP) 또는 밀리파스칼-초 (mPa*s) 단위로 측정될 수 있으며, 여기서 1cP=1mPa*s이다. 점도는 점도계, 예컨대 엠브록 (mVroc), 레오센스 (RheoSense)와 같은 작은 샘플 점도계를 사용하여 측정될 수 있다. 점도는 임의의 다른 방법 및 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 단위 (예컨대, 절대, 운동학적 또는 동적 점도)를 사용하여 측정될 수 있으며, 중요한 것은 본 발명에 의해 기재된 부형제의 사용에 의해 제공되는 점도의 감소 백분율이라는 것을 이해한다. 점도를 결정하는데 사용되는 방법에 관계 없이, 대조군 제형물에 대비하여 부형제 제형물의 점도 감소 백분율은 주어진 전단 속도에서 거의 동일하게 유지될 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "점도를 감소"시키기에 효과적인 부형제의 양 (또는 이러한 부형제의 "점도-감소" 양 또는 농도)을 함유하는 제형물은, 투여를 위한 최종 형태 (용액인 경우, 또는 분말인 경우, 의도된 양의 희석제로 재구성 시)에서 제형물의 점도가 물, 버퍼, 염과 같은 다른 공지된 점도-감소제 등과 같은 적절한 대조군 제형물 및 예컨대 본원에 예시된 대조군 제형물의 점도보다 적어도 5% 더 낮다는 것을 의미한다.
유사하게, "감소된 점도" 제형물은 대조군 제형물과 비교하여 감소된 점도를 나타내는 제형물이다.
본원에 사용된 용어 "버퍼"는 산성 또는 염기성 물질을 첨가한 후에 pH가 단지 약간 변하는 완충 용액을 의미한다. 완충 용액은 각각 약산과 그의 상응하는 염기, 또는 약염기와 그의 상응하는 산의 혼합물을 함유한다. 예시적인 제약상 허용되는 버퍼는 아세테이트 (예컨대, 나트륨 아세테이트), 숙시네이트 (예컨대, 나트륨 숙시네이트), 포스페이트, 글루탐산, 글루타메이트, 글루코네이트, 히스티딘, 글리신, 시트레이트 또는 기타 유기산 버퍼를 포함한다. 임의적으로, 하나 이상의 전술된 산과 염기의 혼합물이 완충 용액에 사용될 수 있다. 상술된 산 및 염기 각각의 예시적인 버퍼 농도는, 예컨대 버퍼 및 제형물의 원하는 긴장성 (예컨대, 등장성, 고장성 또는 저장성)에 따라 약 1 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 또는 약 20 mM 내지 50 mM일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "완충 시스템"은 전술된 산 및 염기 중 하나 이상의 혼합물을 지칭한다. 본 발명의 바람직한 완충 시스템은 하나 이상의 아미노산을 함유한다. 가장 바람직하게는, 완충 시스템은 히스티딘, 글리신 및 아르기닌의 혼합물을 포함하며, 여기서 150 mM 미만의 소량의 아르기닌이 점도를 감소시키기에 충분하다. 바람직하게는, 아르기닌은 50-75 mM 농도, 가장 바람직하게는 50 mM 농도로 함유된다.
본 발명의 맥락에서, "% (w/v)"는 조성물 내의 성분의 질량 농도를 백분율로 정의하며, 여기서 w는 사용된 성분의 질량 (g, mg 등으로 측정됨)을 의미하고, v는 조성물의 최종 부피 (L, ml 등으로 측정됨)를 의미한다.
용어 "환자"는 예방적 또는 치료적 처치를 받는 인간 또는 동물 개체를 지칭한다.
본원에서 용어 "치료"는 질환, 또는 그의 증상 또는 질환에 대한 소인을 치료하거나, 개선하거나, 영향을 미치거나, 중단하거나, 완화할 목적으로 질환을 앓고 있거나 질환의 증상을 나타내고 있거나 질환의 소인을 갖는 환자에게 치료 물질을 사용 또는 투여하거나, 환자의 단리된 조직 또는 세포주에 치료 물질을 사용 또는 투여하는 것을 지칭한다.
"유효 용량"은 본원에서 원하는 효과가 적어도 부분적으로 달성될 수 있는 활성-성분 양을 기술한다. 따라서, "치료적 유효 용량"은 질환을 적어도 부분적으로 치료하거나, 질환으로 인한 환자에서의 유해 효과를 적어도 부분적으로 제거하기에 충분한 활성-성분 양으로 정의된다. 이 목적을 위해 실제로 필요한 양은 질환의 중증도 및 환자의 일반적인 면역 상태에 의존적이다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 제약 조성물은 활성 성분이 의도된 목적, 즉 특정 질환의 치료를 달성하도록 유효량으로 함유된 조성물을 포함한다. 유효 용량의 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다.
제형물에서 항체와 같은 치료 단백질의 농도는 제약 제형물의 최종 사용에 따라 달라질 것이며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
피하 투여를 위한 치료 단백질은 고농도로 자주 투여된다. 항체를 포함하는 치료 단백질의 특히 고려되는 고농도 (PEG화와 같은 화학적 변형의 무게를 고려하지 않음)는 적어도 약 70, 80, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 또는 500 mg/ml이고/이거나, 약 250, 300, 350, 400, 450 또는 500 mg/ml 미만이다. 제형물에서 항체와 같은 치료 단백질의 예시적인 고농도는 약 100 mg/ml 내지 약 500 mg/ml 범위일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 치료 단백질의 농도는 약 100-300 mg/ml 범위, 보다 바람직하게는 135-165 mg/ml 범위, 가장 바람직하게는 약 150 mg/ml이다. 추가로 가장 바람직한 농도는 약 100 mg/ml이다. 이와 관련하여, "약" 주어진 값의 농도, 예컨대 주어진 농도 범위의 상한 또는 하한은 이 주어진 값으로부터 최대 ±10% 벗어나는 모든 농도를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "고분자량 응집체" (동의어: "HMW")는 적어도 2개의 단백질 단량체로 구성된 응집체를 기술한다.
본 발명은 본 발명에 따른 제약 제형물 중 하나 및 바람직하게는 또한 사용 설명서를 포함하는 제품을 제공한다. 한 실시양태에서, 제품은 본 발명에 따른 액체 제형물을 포함하는 용기를 포함한다. 사용가능한 용기는, 예컨대 병, 바이알, 튜브, 카트리지, 단일 또는 다중-챔버 주사기 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 용기이다. 예컨대, 용기는 유리 또는 플라스틱으로 구성될 수 있다. 예시적인 투여 장치는 바늘이 있거나 없는 주사기, 주입 펌프, 제트 주입기, 펜 장치, 경피 주입기 또는 다른 바늘 없는 주입기를 포함한다. 주사기, 펜 장치, 자동주입기 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 장치는, 예컨대 금속으로 구성된 주사 바늘을 포함할 수 있다. 본 발명은 추가로 전술된 제약 제형물을 포함하는 키트를 제공한다.
일 실시양태에서, 용기는 주사기이다. 추가 실시양태에서, 주사기는 사전-충전된다. 추가 실시양태에서, 주사기는 주사 장치에 함유된다. 추가 실시양태에서 주사 장치는 자동주입기이다. 또 다른 실시양태에서, 용기는 카트리지이다. 추가의 실시양태에서, 카트리지는 펜 장치 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 장치에 포함된다. 또 다른 실시양태에서 용기는 바이알이다.
본 발명에 따른 조성물은 선행 기술에서 이용가능한 항-FXIa 항체에 대한 제형물과 비교하여 높은 항체 농도에서 증가된 안정성을 나타낸다. 바람직한 제형물은 액체 제형물로서 안정하지만 동결건조될 수도 있다. 따라서, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 통상적인 동결-건조 방법 (방법 1), 예컨대 WO2006/008006에 기재되는 바와 같은 분무-동결-기반 방법 (방법 2), 또는 본원에 기재되는 바와 같은 방법 3에 의해 수득되는 재구성된 동결건조물일 수 있다. 바람직하게는, 동결건조물은 감소된 재구성 시간을 갖는 동결-건조된 펠릿을 제공하는 본원에 기재된 바와 같은 분무-동결-기반 방법 3에 의해 수득된다.
통상적인 공정에서, 동결-건조는 일반적으로 (진공) 건조 챔버 내에 하나 이상의 트레이 또는 선반을 포함하는 표준 동결-건조 챔버에서 수행된다. 바이알은 동결-건조될 생성물로 충전되고 이들 트레이에 배열될 수 있다. 이러한 건조기는 전형적으로 온도 제어된 벽이 없으며 건조기 챔버에 놓인 바이알에 균일하지 않은 열 전달을 제공한다. 특히 가장자리에 위치된 바이알은 챔버 벽과 플레이트/선반 적치물 사이의 틈에서 복사 열 전달 및 가스 전도로 인해 플레이트 중앙에 위치된 바이알보다 에너지를 더 집중적으로 교환한다. 이러한 에너지 분포의 불균일성은 가장자리의 바이알과 중앙에 있는 바이알 사이의 동결 및 건조 동역학을 변화시키고 각각의 바이알의 활성 내용물 활성에 변화를 일으키고 생성물 수율 손실을 초래할 수 있다. 최종 생성물의 균일성을 보장하려면 실험실 및 생산 규모 모두에서 광범위한 개발 및 검증 작업을 수행해야 한다.
WO 2006/008006 A1은 바이알과 같은 최종 용기에 펠릿화된 바이오약품 생성물을 동결-건조, 저장, 검정 및 충전하는 것을 포함하는 멸균 제조 공정에 관한 것이다. 기재된 공정은 분무-동결 및 동결-건조를 조합하며, a) 생성물의 액적을 동결시켜 펠릿을 형성하는 단계이며, 여기서 액적은 생성물의 용액을 주파수-보조된된 노즐을 통해 통과시켜 형성되고 펠릿은 상기 액적을 극저온 가스의 역류 유동을 통해 통과시킴으로써 액적으로부터 형성되는 것인 단계; b) 펠릿을 동결-건조시키는 단계; c) 동결-건조된 펠릿을 저장하고 균질화하는 단계; d) 동결-건조된 펠릿이 저장되고 균질화되는 동안 이를 검정하는 단계; 및 e) 동결-건조된 펠릿을 상기 용기에 적재하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 비경구 투여에 적합하다. 비경구 투여는 특히 정맥내 주사 또는 주입, 동맥내 주사 또는 주입 (동맥으로), 근육내 주사, 경막내 주사, 피하 주사, 복강내 주사 또는 주입, 골내 투여 또는 조직으로의 주사를 포함한다. 본 발명에 따른 조성물은 피하 투여에 특히 적합하다. 비경구 투여에 적합한 투여 형태는 특히 용액, 현탁액, 에멀젼 형태의, 액체 형태의, 또는 투여 전에 재구성되는 동결건조물 또는 멸균 분말로서의 주사 또는 주입용 제제이다. 원하는 경우, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 생물학적 활성을 유지하면서 동결-건조되고 투여 전에 재구성될 수 있다. 그러나, 통상적인 방법에 의한 본 발명에 따른 항체 제형물의 동결-건조는 최대 2시간 이상의 재구성 시간을 갖는 동결건조물을 초래한다. 이러한 긴 재구성 시간은 환자와 마찬가지로 의료 종사자에게도 번거롭고 실행 불가능하다. 따라서, 통상적인 동결-건조에 의해 수득되는 동결건조물을 포함하는 FXIa 항체와 비교하여 상당히 감소된 재구성 시간을 나타내는 항-FXIa 항체를 포함하는 동결-건조된 펠릿의 생산을 위한 분무-동결-기반 방법이 개발되었다. 본원에 기재된 바와 같은 이러한 분무-동결-기반 방법 (방법 3)은 약 150 mg/ml의 항체 농도로 재구성 시 재구성 시간이 약 10분인 동결-건조된 항-FXIa 항체를 포함하는 펠릿을 유도한다. 본원에 기재되고 (방법 3) 본 출원의 실시예 7에 적용되는 바와 같은 항-FXIa 항체를 포함하는 동결-건조된 펠릿의 재구성 시간을 감소시키기 위한 분무-동결-건조 방법은
a) 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적을 동결시켜 펠릿을 형성하는 단계;
b) 펠릿을 동결-건조시키는 단계
를 포함하고;
여기서 단계 a)에서 액적은 온도-제어가능한 내벽 표면 및 용액의 동결 온도 미만의 내부 온도를 갖는 냉각탑 내로의 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적 형성에 의해 형성되고, 단계 b)에서 펠릿은 진공 챔버 내부에 수용된 회전 리셉터클에서 동결-건조된다.
방법 3에 대한 동결된 펠릿의 생성은 임의의 공지된 기술에 따라 수행될 수 있다. 그러나, 중요한 것은, 항체를 포함하는 액적을 액체 질소에 떨어뜨려 펠릿을 형성하는 것을 피해야 한다는 것이다.
방법 3의 후속 동결-건조 단계를 고려할 때, 동결된 펠릿은 유리하게 좁은 입자 크기 분포를 갖는다. 그 후, 동결된 펠릿은 멸균 및 저온 조건 하에서 동결 건조기로 운반될 수 있다. 이어서, 펠릿은 리셉터클의 회전에 의해 건조 챔버 내부의 운반 표면에 분산된다. 승화 건조는 원칙적으로 펠릿에 적합한 임의의 종류의 동결 건조기에서 가능하다. 승화 증기 유동, 제어된 벽 온도 및 건조 챔버와 응축기 사이의 적합한 단면적을 위한 공간을 제공하는 동결 건조기가 바람직하다.
방법 3의 단계 a)에서 사용되는 액적은 주파수-보조된 노즐을 통과함으로써 용액의 액적 형성에 의해 형성될 수 있다. 바람직하게는, 진동 주파수는 ≥ 200 Hz 내지 ≤ 5000 Hz, 더욱 특히 ≥ 400 Hz 내지 ≤ 4000 Hz 또는 ≥ 1000 Hz 내지 ≤ 2000 Hz이다.
주파수-보조된 노즐과 무관하게, 노즐 개구의 직경은 100 μm 내지 500 μm 범위, 바람직하게는 200 μm 내지 400 μm 범위, 매우 바람직하게는 300 μm 내지 400 μm 범위일 수 있다. 상기 노즐 직경은 약 200 μm 내지 약 1000 μm 범위, 바람직하게는 약 400 μm 내지 약 900 μm 범위, 매우 바람직하게는 약 600 μm 내지 800 μm 범위의 액적 크기를 초래한다.
이와 관련하여, "약" 주어진 값의 크기, 예컨대 주어진 크기 범위의 상한 또는 하한은 이 주어진 값으로부터 최대 ±30% 벗어나는 모든 액적 크기를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예컨대, 약 400 μm의 생성된 액적 크기는 280 μm 내지 520 μm의 다양한 액적 크기를 포괄한다. 유사하게, 약 100 μm 내지 약 500 μm의 크기 범위는 70 mm 내지 650 μm의 액적 크기를 포괄하는 것으로 이해되어야 한다.
액적은 약 상술된 값인 중앙값 주변의 특정 액적 크기 분포를 나타낸다.
상술된 방법의 단계 a)에서 수득되는 펠릿의 펠릿 크기 중앙값은 약 ≥ 200 μm 내지 약 ≤ 1500 μm이다. 약 ≥ 500 μm 내지 약 ≤ 900 μm의 펠릿 크기 중앙값이 바람직하다.
도 1은 전술된 바와 같이 항-FXIa 항체를 포함하는 동결-건조된 펠릿의 재구성 시간을 감소시키기 위한 분무-동결-건조-기반 방법을 수행하기 위한 장치를 개략적으로 도시한다. 장치는 주요 구성 요소로서 냉각탑(100) 및 진공 건조 챔버(200)를 포함한다. 냉각탑은 내벽(110) 및 외벽(120)을 포함하여 내벽(110)과 외벽(120) 사이에 공간(130)을 형성한다. 이 공간(130)은 배관 형태의 냉각 수단(140)을 수용한다. 냉각제는 도면의 화살표로 표시되는 바와 같이 냉각 수단(140)으로 들어가고 나갈 수 있다. 냉각 수단(140)을 통해 유동하는 냉각제는 내벽(110)을 냉각시키므로 냉각탑(100)의 내부를 냉각시킨다. 동결된 펠릿 (냉동펠릿)의 생산에서, 액체는 노즐(150)을 통해 냉각탑에 분무된다. 액체 액적은 참조 번호(160)로 표시된다. 액체 액적은 결국 아래로 향하는 경로에서 응고 (동결)되며, 이는 참조 번호(170)로 표시된다. 동결된 펠릿(170)은 밸브(190)가 진공 건조 챔버(200)로 들어가는 것을 허용하는 슈트(180)를 따라 이동한다. 본원에는 도시되지 않았지만, 슈트(180)는 펠릿(170)이 폐쇄된 밸브(190) 전에 수집되는 동안 동결 상태를 유지하도록 온도 제어되는 것이 물론 가능하고 심지어 바람직하다. 진공 건조 챔버(200) 내부에는 건조될 동결된 펠릿을 수용할 회전가능한 드럼(210)이 위치된다. 회전은 펠릿으로의 효율적인 에너지 전달을 달성하기 위해 수평 축을 중심으로 발생한다. 열은 드럼을 통하거나 캡슐화된 적외선 히터를 통해 도입될 수 있다. 그 결과, 참조 번호(220)로 표시된 동결-건조된 펠릿이 수득된다.
상술된 방법에 사용된 냉각탑의 내부 표면 온도는 -120℃ 이하, 바람직하게는 ≥ -180℃ 내지 ≤ -120℃이다. 바람직하게는, 온도는 ≥ -160℃ 내지 ≤ -140℃이다.
상기에서 언급된 ≥ -160℃ 내지 ≤ -140℃의 온도는 2 m 내지 4 m, 특히 약 3 m의 거리에서 낙하하는 동안 동결되는 약 ≥ 600 μm 내지 약 ≤ 800 μm 범위의 액적 크기에 최적화된다.
냉각탑의 내부 표면은 내부 표면과 열적 접촉하는 하나 이상의 파이프를 통해 냉각제를 통과시킴으로써 냉각된다. 냉각제는 원하는 온도의 액체 질소 또는 질소 증기일 수 있다.
도 1에 도시된 장치를 사용할 때, 본원에 기재된 바와 같은 항-FXIa 항체를 포함하는 동결-건조된 펠릿의 재구성 시간을 감소시키기 위한 분무-동결-건조 기반 방법 (방법 3)은
a) 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적을 동결시켜 펠릿을 형성하는 단계;
b) 펠릿을 동결-건조시키는 단계
를 포함하고;
여기서 단계 a)에서 액적은 온도-제어가능한 내벽 표면(110) 및 용액의 동결 온도 미만의 내부 온도를 갖는 냉각탑(100) 내로의 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적 형성에 의해 형성되고, 단계 b)에서 펠릿은 진공 챔버(200) 내부에 수용된 회전 리셉터클(210)에서 동결-건조된다.
또한, 방법 3은 단계 b) 이후에
c) 동결-건조된 펠릿을 저장 및 균질화하는 단계
d) 동결-건조된 펠릿을 용기에 적재하는 단계
를 추가로 포함할 수 있다.
저장 및 균질화 단계 c)는 또한 동결-건조에 사용되는 진공 챔버 내의 회전 리셉터클에서 수행될 수 있다. 단계 d)에서 사용자 정의된 양의 동결-건조된 펠릿이 최종 용기에 충전된다. 저장 용기는 격리된 충전 라인으로 전달되고 멸균 도킹 스테이션에 도킹된다. 용기의 내용물은 격리기 내부에서 충전 기계의 저장소로 전달된다. 처리된 항-FXIa 항체에 손상이 없거나 최소화되는 방법 3은 좁은 지정된 범위 내에서 원하는 항체 양을 정확하게 채울 수 있다. 이 방법은 또한 최종 사용을 위해 용기로의 유연하고 개별화된 충전을 허용한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "통상적인 동결-건조" 및 "통상적으로 동결-건조 된"은 (진공) 건조 챔버 내에 하나 이상의 트레이 또는 선반을 포함하는 표준 동결-건조 챔버에서 수행되는 바이알에서의 표준 동결-건조 공정을 지칭하며, 분무-동결의 공정 단계를 포함하지 않는다. 전형적으로, 동결-건조될 생성물은 바이알에 충전된 다음 (진공) 건조 챔버에 배치된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "통상적인 동결-건조에 의해 수득되는 동결건조물과 비교하여 동결-건조된 펠릿의 재구성 시간을 감소시키는"은, 통상적인 동결-건조로 수득되는 동결건조물과 비교하여 재구성 매질, 예컨대 멸균수를 첨가 시 본 발명에 따른 방법에 의해 수득되는 동결-건조된 펠릿의 완전 또는 거의 완전한 용해에 필요한 기간의 감소로 이해되어야 한다. 재구성 시간은 특히 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 감소된다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "동결-건조된 펠릿의 완전 또는 거의 완전한 재구성/용해"는 재구성 매질에서 동결-건조된 펠릿의 고체 함량의 적어도 98%, 더욱 특히 동결-건조된 펠릿의 고체 함량의 적어도 98.5%, 가장 특히 동결-건조된 펠릿의 고체 함량의 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.75% 또는 적어도 99.9%의 용해를 지칭한다.
방법 3의 작동 원리에는 몇몇 뚜렷한 장점을 갖는다. 첫째, 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 분무된 액적은 WO2006/008006 A1에 기재된 것과 같은 역류 방식으로 극저온 가스와 접촉하지 않는다. 냉각탑 내부 공간에 극저온 가스를 도입할 필요가 없으므로 극저온 가스에 대한 모든 취급 및 멸균 단계를 생략할 수 있다. 이 방법의 모든 단계는 멸균 상태에서 개별 단계 사이의 멸균성을 손상시키지 않고 멸균 조건 하에 수행될 수 있다.
둘째, 이 방법 (방법 3)은 항-FXIa 항체에 심각한 손상을 일으키지 않는 것으로 실험적으로 밝혀졌고, 따라서 최종 생성물에서 결합 친화도 손실을 피한다. 실제로, 이 방법 (방법 3)에 의해 수득되는 항-FXIa 항체를 포함하는 동결-건조된 펠릿은 통상적인 동결-건조 (방법 1) 또는 WO 2006/008006에 따른 동결-건조 공정 (방법 2)에 의해 수득되는 항-FXIa 항체를 포함하는 동결건조물과 비교하여 간접적 ELISA에 의해 평가되는 바와 같이 FXIa 항원에 대해 증가된 결합 친화도를 나타내었다. 항-FXIa 항체에 대한 손상을 피하면 좁은 지정된 범위 내에서 원하는 양의 활성 항-FXIa 항체를 정확하게 충전할 수 있다. 또한, 이 방법은 통상적인 동결건조와 비교하여 다양한 부피 및 적용 시스템에서 동결-건조된 펠릿의 파일링에 더 많은 유연성을 허용한다.
셋째, 진공 챔버 내부의 회전 리셉터클에서 동결-건조 단계를 수행함으로써 각각의 개별 펠릿의 공간 위치가 시간이 지남에 따라 고르게 분포된다. 이는 균일한 건조 조건을 보장하고 따라서 선반 상의 동결-건조된 바이알에 대한 경우와 같이 항체 활성, 예컨대 결합 친화도의 공간적 변화를 제거한다.
마지막으로, 이 방법 (방법 3)에 따라 생산된 항-FXIa 항체를 포함하는 펠릿은 특히 통상적인 동결-건조 (방법 1)에 의해 수득되는 항-FXIa 항체를 포함하는 동결건조물 및 WO 2006/008006 A1에 개시된 공정 (방법 2)에 의해 수득되는 펠릿과 비교하여 상당히 단축된 재구성 시간을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
그러나, 장기간에 걸쳐 안정하지 않은 많은 다른 액체 항체 제형물과는 대조적으로, 본 발명에 따른 액체 고농도 항체 제형물은 놀랍게도 장기간 시험에서 높은 안정성을 나타내며, 이는 모든 단점 및 한계를 갖는 동결건조를 일반적으로 불필요하게 만든다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 생물학적 활성 단백질의 "안정한" 제형물은 대조군 제형 샘플과 비교하여 적어도 6개월 동안 2-8℃에서 저장 시 또는 < -60℃에서 적어도 12개월 저장 시 적어도 20%의 생물학적 활성의 감소된 응집 및/또는 감소된 손실을 나타내거나, 대안적으로 열적 스트레스, 예컨대 다수의 동결/해동 주기 또는 교반 스트레스, 예컨대 (3 h 동안 300 rpm) 등의 조건 하에서 감소된 응집 및/또는 감소된 손실을 나타내는 제형물이다.
본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 가치 있는 약리학적 특성을 가지며 인간 및 동물의 질환 예방 및 치료에 사용될 수 있다. 질환 및 이의 치료에 사용될 수 있는 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 특히 혈전성 또는 혈전색전성 질환 그룹을 포함한다. 따라서, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 응괴 형성으로부터 발생할 수 있는 질환 또는 합병증의 치료 및/또는 예방에 적합하다.
본 발명의 맥락에서, "혈전성 또는 혈전색전성 질환"은 동맥 및 정맥 혈관계 둘 다에서 발생하고 본 발명에 따른 액체 제약 제형물로 치료될 수 있는 질환, 특히 심장의 관상 동맥에서의 질환, 예컨대 급성 관상 동맥 증후군 (ACS), ST 분절 상승이 있는 심근 경색 (STEMI) 및 ST 분절 상승이 없는 심근 경색 (비-STEMI), 안정 협심증, 불안정 협심증, 혈관성형술, 스텐트 이식 또는 대동맥-관상동맥 우회술과 같은 관상 동맥 중재술 후 재폐색 및 재협착, 또한 말초 동맥 폐쇄 장애, 폐 색전증, 정맥 혈전색전증, 정맥 혈전증, 특히 깊은 다리 정맥 및 신장 정맥에서의 정맥 혈전증, 일시적 허혈성 발작 및 또한 혈전성 뇌졸중 및 혈전색전성 뇌졸중을 유발하는 추가 혈관에서의 혈전성 또는 혈전색전성 질환을 포함한다.
응고 시스템의 자극은 다양한 원인이나 관련 장애에 의해 발생할 수 있다. 외과적 시술, 고정, 침대 구속, 감염, 염증 또는 암 또는 암 요법과 관련하여, 특히 응고 시스템은 고도로 활성화될 수 있으며 혈전성 합병증, 특히 정맥 혈전증이 있을 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 암을 앓고 있는 환자에서 외과적 시술과 관련하여 혈전증 예방에 적합하다. 따라서, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한, 예컨대 기재된 자극 상황에서 활성화된 응고 시스템을 갖는 환자의 혈전증 예방에 적합하다.
따라서, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 급성, 간헐적 또는 지속성 심장 부정맥, 예컨대 심방 세동을 갖는 환자에서, 및 심장율동전환을 겪는 환자에서, 및 또한 심장 판막 장애를 갖거나 인공 심장 판막을 갖는 환자에서 심인성 혈전색전증, 예컨대 뇌 허혈, 뇌졸중 및 전신 혈전색전증 및 허혈의 예방 및 치료에 적합하다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 특히 패혈증과 관련하여, 또한 외과적 시술, 신생물 장애, 화상 또는 다른 부상에 기인하여 발생할 수 있고 미세혈전증을 통한 심각한 기관 손상을 초래할 수 있는 파종성 혈관내 응고 (DIC)의 치료 및 예방에 적합하다.
혈전색전성 합병증은 또한 미세혈관 용혈성 혈액 빈혈에서 및 체외 순환, 예컨대 혈액투석, ECMO ("체외 막 산소공급"), LVAD ("좌심실 보조 장치") 및 유사한 방법, AV 누관, 혈관 및 심장 판막 보철물과 관련하여 외래 표면과 접촉하는 혈액에 의해 발생한다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 혈관성 치매 또는 알츠하이머 질환과 같은 치매 장애를 유발할 수 있는 대뇌 혈관에서의 미세응괴 형성 또는 섬유소 침착을 수반하는 질환의 치료 및/또는 예방에 적합하다. 본원에서, 응괴는 폐색을 통하고 또한 추가의 질환-관련 인자를 결합함으로써 장애에 기여할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 종양 환자, 특히 주요 외과적 시술 또는 화학요법 또는 방사선요법을 겪는 환자를 위해 종양 성장 및 전이 형성을 억제하고 또한 혈전색전성 합병증, 예컨대 정맥 혈전색전증의 예방 및/또는 치료를 위해 사용될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 류마티스 관절염 (RA)과 같은 염증성 질환, 또는 알츠하이머 질환 (AD)과 같은 신경계 질환의 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있다. 또한, 이러한 항체는 암 및 전이, 혈전성 미세혈관병증 (TMA), 연령 관련 황반 변성, 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 신병증, 및 다른 미세혈관 질환의 치료에 유용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 투석 환자의 치료 및/또는 예방, 특히 혈액투석에서 션트 혈전증의 시미노-누공 (Cimino-fistula) 예방에 사용될 수 있다. 혈액투석은 천연 동정맥 누공, 합성 루프 이식편, 대구경 중앙 정맥 카테터 또는 인공 표면으로 이루어진 다른 장치를 사용하여 수행될 수 있다. 본 발명의 항체의 투여는 투석 중 및 그 직후 모두에 누공 내의 응괴 형성 (및 폐동맥 내의 색전 응괴 전파)을 방지할 것이다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 심폐 우회 수술 (예컨대, ECMO: 체외 막 산소공급) 후 심장내 및 폐내 혈전증을 겪는 환자의 치료 및/또는 예방에 유용하다.
원치 않는 출혈 사건의 위험을 증가시키지 않는 투석 환자에서의 항응고에 대한 필요성이 높으며, 이 집단에서는 정맥 혈전색전증 (VTE) 및 심방 세동 (예컨대, 혈액투석 환자의 말기 신장 질환)의 발생률이 높다. 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 이러한 유형의 환자의 치료 및/또는 예방에 유용하다.
본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 특발성 혈소판감소성 자반병 (IPT)에 걸린 환자의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 이들 환자는 일반 집단과 비교하여 증가된 혈전 위험을 갖는다. 응고 인자 FXI의 농도는 대조군과 비교하여 ITP 환자에서 상당히 높고, aPTT는 ITP 환자에서 상당히 더 길다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 폐 고혈압의 예방 및/또는 치료에도 적합하다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "폐 고혈압"은 폐동맥 고혈압, 좌심장 장애와 관련된 폐 고혈압, 폐 장애 및/또는 저산소증과 관련된 폐 고혈압 및 만성 혈전색전증으로 인한 폐 고혈압 (CTEPH)을 포함한다.
"폐동맥 고혈압"은 특발성 폐동맥 고혈압 (IPAH, 이전에는 원발성 폐 고혈압으로도 지칭됨), 가족성 폐동맥 고혈압 (FPAH) 및 관련된 폐동맥 고혈압 (APAH)을 포함하고, 이는 콜라겐증, 선천성 전신-폐 션트 비티아 (shunt vitia), 문맥 고혈압, HIV 감염, 특정 약물 및 약제의 섭취와, 다른 장애 (갑상선 장애, 글리코겐 저장 장애, 고세병, 유전성 모세혈관확장증, 헤모글로불린이상증, 골수증식 장애, 비장절제)와, 상당한 정맥/모세혈관 기여를 갖는 장애, 예컨대 폐-정맥폐쇄 장애 및 폐-모세혈관 혈관종증, 및 또한 신생아의 지속성 폐 고혈압과 연관된다.
좌심장의 장애와 관련된 폐 고혈압은 병든 좌 심방 또는 심실 및 승모판 또는 대동맥 판막 결함을 포함한다.
폐 장애 및/또는 저산소증과 관련된 폐 고혈압은 만성 폐쇄성 폐 장애, 간질 성 폐 장애, 수면 무호흡 증후군, 폐포 저호흡, 만성 고산병 및 선천성 결함을 포함한다.
만성 혈전색전증으로 인한 폐 고혈압 (CTEPH)은 근위 폐동맥의 혈전색전성 폐색, 원위 폐동맥의 혈전색전선 폐색 및 비혈전성 폐 색전증 (종양, 기생충, 이물질)을 포함한다.
본 발명은 또한 사르코이드증, 조직구증 X 및 림프관종증과 관련된 폐 고혈압의 치료 및/또는 예방용 약제의 생산을 위한 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 감염성 질환, 및/또는 전신 염증 증후군 (SIRS), 패혈성 기관 기능장애, 패혈성 기관 부전 및 다기관 부전, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 급성 폐 부상 (ALI), 패혈성 쇼크 및/또는 패혈성 기관 부전과 관련하여 파종된 혈관내 응고의 치료 및/또는 예방에 적합하다.
감염 과정에서, 다양한 기관에서의 미세혈전증 및 이차 출혈성 합병증과 함께 응고 시스템의 일반화된 활성화 (파종성 혈관내 응고 또는 소모성 응고병증, 이하에서 "DIC"로 지칭됨)가 있을 수 있다. 또한, 혈관의 투과성이 증가하고 유체 및 단백질이 혈관외 공간으로 확산되는 내피 손상이 있을 수 있다. 감염이 진행됨에 따라 기관 부전 (예컨대, 신부전, 간부전, 호흡부전, 중추신경부전 및 심혈관부전) 또는 다기관 부전이 있을 수 있다.
DIC의 경우, 손상된 내피 세포의 표면, 이물질 표면 또는 가교된 혈관외 조직에서 응고 시스템의 대규모 활성화가 있다. 그 결과, 저산소증 및 후속 기관 기능 장애로 인해 다양한 기관의 작은 혈관에 응고가 있다. 2차 효과는 응고 인자 (예컨대, 인자 X, 프로트롬빈 및 피브리노겐) 및 혈소판의 소비이며, 이는 혈액의 응고성을 감소시키고 심한 출혈을 초래할 수 있다.
본 발명에 따른 액체 제약 제형물은 또한 유전자 돌연변이가 효소의 활성을 증강시키거나 지모겐의 수준을 증가시키고 이것은 효소 활성 또는 지모겐 농도의 관련 시험/측정에 의해 확립되는 환자에서 혈전성 또는 혈전색전성 장애 및/또는 염증성 장애 및/또는 증가된 혈관 투과성을 갖는 장애의 일차적 예방에 적합하다.
본 발명은 추가로 장애, 특히 상술된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 장애, 특히 상술된 장애의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 치료적 유효량의 본 발명의 화합물을 사용하여 장애, 특히 상술된 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로 본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량을 사용하여 장애, 특히 상술된 장애의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 본 발명에 따른 액체 제약 제형물을 제공한다.
인간에서의 이러한 잘 기술된 질환은 또한 다른 포유동물에서 유사한 병인으로 발생할 수 있으며, 본 발명의 액체 제약 제형물로 그 곳에서 치료될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "치료" 또는 "치료하다"는 통상적인 의미로 사용되며, 질환 또는 건강 이상을 퇴치, 감소, 약화 또는 완화시킬 목적으로 환자를 돌보고, 보살피고, 간호하며, 이 질환에 의해 손상된 생활 조건을 개선하는 것을 의미한다.
따라서, 본 발명은 추가로 장애, 특히 상술된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 장애, 특히 상술된 장애의 치료 및/또는 예방용 약제의 생산을 위한 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 장애, 특히 전술된 장애의 치료 및/또는 예방 방법에서 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 유효량의 본 발명에 따른 액체 제약 제형물 중 하나의 유효량을 사용하여 질환, 보다 특히 전술된 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.
바람직한 실시양태에서, 치료 및/또는 예방은 본 발명에 따른 액체 제약 제형물의 비경구 투여이다. 피하 투여가 특히 바람직하다.
본 발명에 따른 제약 제형물은 단독으로 또는, 필요한 경우, 조합이 바람직하지 않고 허용되지 않는 부작용을 유발하지 않는다면 하나 이상의 다른 약리학적 활성 물질과 조합하여 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 특히 상술된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 본 발명에 따른 조성물 중 적어도 하나 및 하나 이상의 추가 활성 성분을 포함하는 약제를 제공한다.
본 발명에 따른 액체는 단일 치료제로 투여될 수 있지만, 또한 반복적으로 연속적으로 투여될 수 있거나, 진단 후 장기간 투여될 수 있다.
실시예 1: 점도 및 입자 형성에 대한 항체 농도의 영향
PCT/EP2018/050951은, 특히 정맥내 투여에 적합한, pH 6.0의 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 5% 트레할로스 이수화물, 0.05% 폴리소르베이트 80 중의 25 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 저농도 제형물을 기재한다.
피하 적용을 위해, 특정 제형물에서 농축되었을 때 점도 값 및 입자 형성을 증가시키는 조성물의 최대 농도를 결정하는 것이 중요하다. 필요한 용량에 대한 임상 시나리오는 대략 150 mg/ml의 농도 목표를 제안하였다. 따라서, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 농도를 조성물 및 항체를 분리시키는 30 kDa 필터 막을 함유하는 원심분리-튜브 (머크 밀리포어 (Merck Milipore), 아미콘 울트라-15 (Amicon Ultra-15))와 함께 2000 G에서 원심분리기 (Sigma, Typ 3K30)를 사용하여 증가시켰다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 저농도 제형물에 대해 PCT/EP2018/050951에 기재된 바와 같은 히스티딘/글리신 버퍼 시스템에서 증가하는 농도로 제형화되었다:
(1) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 5% 트레할로스 이수화물, 0.05% 폴리소르베이트 80, pH 6.0.
280 nm의 파장을 흡수하는 UV/VIS 분광계 (나노드롭 2000 (NanoDrop 2000), 써모피셔 사이언티픽 (ThermoFisher Scientific))를 사용하여 이 실시예의 조성물뿐만 아니라 하기 실시예의 조성물을 항체 농도에 대해 분석하였다. 가능한 광산란을 위해, 시험은 320 nm에서 수정되었다.
용액의 동적 점도는 작은 샘플 점도계 (엠브록, 레오센스)를 사용하여 측정되었다. 250 μL의 076D-M007-H04-CDRL3-N110D 샘플을 20℃의 유동 채널을 통해 50 μl/분 내지 100 μl/분의 유속으로 주입하였다.
입자 형성은 유동 세포측정 (MFI, 프로테인심플 (ProteinSimple), 2 μm-100 μm) 및 2 μm 내지 100 μm의 입자 크기 범위를 커버하는 차광 (파마스 SVSS (Pamas SVSS), 파마스)을 사용하여 모니터링되었다.
<표 1>
Figure pct00001
표 1은 조성물 1에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D 농도를 증가시키면서 측정된 점도 및 입자 부하를 요약한 것이다. 입자 형성을 증가시키고 약 30mPa*s의 점도에 대한 허용 한계를 초과하지 않고는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 농도를 대략 150 mg/ml의 제안된 범위까지 증가시킬 수 없었다. 따라서, PCT/EP2018/050951에 기재된 바와 같은 히스티딘/글리신 버퍼 시스템을 포함하는 FXIa 항체에 대한 저농도 제형물 (제형물 1)은 피하 투여에 필요한 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 고농도 제형물에 적합하지 않은 것으로 밝혀졌다.
실시예 2: 상이한 부형제의 영향
점도를 낮추고 항체 농도를 높이기 위해 상이한 부형제의 영향을 시험하였다. 이 실시예는 점도 및 제2 비리얼 계수 속성에 대한 상이한 부형제의 영향을 나타낸다.
제2 비리얼 계수 (B22 값)는 1 mg/ml 내지 10 mg/ml 범위의 조성물 항체 농도에 따라 658nm 파장에서 정적 광 산란 (SLS)을 측정하여 결정되었다 (나노스타 (NanoStar), 야트 테크놀로지즈 (Wyatt Technologies)). 정적 광 산란에 의해 분자간 상호작용을 모니터링할 수 있다. 농도가 증가함에 따라 분자 질량이 불균형하게 증가하면 항체가 응집되는 경향이 있다. 제형물에서 우세한 상태는 "인력적 (attractive)"이라고 한다. 반대로, 분자 질량이 불균형하게 감소하면, 시스템에서 "반발" 상태가 우세하다. 응집 경향이 제한된다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는, 각각 50 mM, 75 mM 및 150 mM 농도의 상이한 부형제와 함께, pH 6.0의 10 mM L-히스티딘 및 130 mM 글리신을 포함하는 히스티딘-글리신 버퍼 시스템 (조성물 2)에 대략 120.0 mg/ml로 제형화되었다. 하기 조성물이 시험되었다:
(2) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, pH 6.0
(3) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 50 mM 염화나트륨, pH 6.0
(4) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM 염화나트륨, pH 6.0
(5) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 150 mM 염화나트륨, pH 6.0
(6) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 50 mM 염화칼슘-이수화물, pH 6.0
(7) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM 염화칼슘-이수화물, pH 6.0
(8) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 150 mM 염화칼슘-이수화물, pH 6.0
(9) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 50 mM L-리신 히드로클로라이드, pH 6.0
(10) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM L-리신 히드로클로라이드, pH 6.0
(11) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 150 mM L-리신 히드로클로라이드, pH 6.0
(12) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, pH 6.0
(13) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, pH 6.0
(14) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 150 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, pH 6.0
<표 2>
Figure pct00002
표 2는 조성물 2 내지 14에 대한 동적 점도 및 제2 비리얼 계수를 요약한 것이다. 점도 값은 39.8mPa*s (추가 부형제 없이 히스티딘-글리신-버퍼 시스템을 포함하는 조성물 2의 경우)로부터 시험된 모든 부형제와 함께 최대 5배까지 감소되었다. 일반적으로, 점도-저하 효과는 부형제의 양이 증가함에 따라 증가하였다. 염화나트륨, 리신, 염화칼슘 및 아르기닌은 150 mM 농도의 용액의 점도를 각각 12.7 mPa*s, 10.7 mPa*s, 7.6 mPa*s 및 7.31 mPa*s로 낮추었다. 그러나, 75 mM 아르기닌을 사용하여 최저 점도를 달성하였으며 생성된 점도는 7.2 mPa*s였다.
아르기닌이 이 시스템에서 점도를 감소시키는데 가장 효과적인 부형제이므로 아르기닌이 선택되었다. 점도 감소제로 아르기닌을 사용하여 추가 실험을 수행하였다. 그러나, 감소된 점도와 항체 안정성의 균형을 맞추기 위한 추가 조사가 여전히 필요하였다.
또한, 조성물 (14)의 동적 점도 값 (표 2)은 상당한 단백질-단백질 상호작용 변화를 나타내었다. 따라서, 조성물 (2) 및 (14)는 스트레스 조건 하에서 예시적으로 시험되었다.
아르기닌이 가장 효과적인 점도 감소제이고 또한 제2 비리얼 계수에 긍정적인 효과를 나타내었기 때문에, 조성물 14 (150 mM 아르기닌 함유)를 출발 조성물 2 (부형제 없음)와 비교하여 상이한 스트레스 조건 하에서 입자 생성을 유발하여 시험하였다. 잠재적으로 가시적 입자에 이르기까지의 단백질 응집 및 올리고머 (HMW) 형성을 초래할 수 있는 3가지의 상이한 스트레스 조건이 조성물 2 및 14에 유도되었다. 시험된 스트레스 조건은 쉐이커 (유형 HS 260C, IKA)를 사용하는 교반 스트레스 (3 h 동안 300 rpm), 각각 6시간 동안 -20℃로부터 20℃까지의 3회의 동결/해동 주기, 및 1주 동안 2-8℃ 저장이었다.
<표 3>
Figure pct00003
표 3에 나타난 바와 같이, 아르기닌의 첨가 (조성물 14)는 점도 감소 부형제가 없는 조성물 2와 비교하여 3가지 스트레스 조건 모두에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 입자 형성 거동에 전반적으로 긍정적인 효과를 가졌다.
실시예 3: pH의 영향
상이한 부형제 외에, pH의 변화는 항체의 점도 및 안정성에 영향을 미칠 수 있다. pH 4.7 내지 7.4의 pH 범위는 피하 적용에 적합한 것으로 간주된다.
제2 비리얼 계수 및 입자 형성은 앞서 기재된 바와 같이 평가되었다. 조성물의 열 안정성은 항체 함유 조성물에서 내인성 및 외인성 트립토판 공급원의 형광을 측정함으로써 결정되었다. 조성물은 시차 주사 형광측정 (DSF) 방법 (프로메테우스 (Prometheus), 나노템퍼 (NanoTemper))을 사용하고 330 nm 및 350 nm 파장에서 형광 데이터를 수집하면서 15℃로부터 95℃까지의 온도 프로파일로 가열되었다. DSF로 측정된 증가된 용융 온도 (Tm)는 증가된 형태 안정성에 대한 강력한 지표이다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 3가지의 상이한 pH-값에서 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신 및 75 mM L-아르기닌 히드로클로라이드에 대략 120 mg/ml로 제형화되었다. 하기 조성물이 시험되었다:
(15) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, pH 6.0
(16) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, pH 5.5
(17) 10 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신, 75 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, pH 5.0
<표 4>
Figure pct00004
표 4는 조성물 15 내지 17의 제2 비리얼 계수, 입자 형성뿐만 아니라 열 안정성을 요약한 것이다. pH 6.0으로부터 각각 pH 5.5 및 pH 5.0으로 pH를 낮추면 제2 비리얼 계수가 7.43E-06 ml*mol/g2로부터 1.14E-04 ml*mol/g2로 증가하였으며, 동일한 샘플 처리로 인해 유도된 입자 형성을 약 294개 입자 (>2 μm)로부터 31개 입자로 감소시켰다. 그러나, Tm 값은 66.38℃로부터 59.36℃로 감소하였다.
제2 비리얼 계수에 대한 긍정적인 효과로 인해 대략 5.0의 감소된 pH가 추가 실험에 바람직한 것으로 결정되었다. 그러나, 감소된 형태 안정성을 갖는 거래가 주목되었으며, 실시예 5에서 추가로 다루어졌다.
실시예 4: 계면활성제 농도의 영향
이 실시예는 2 μm 내지 100 μm의 입자 범위에서 마이크로 플로우 이미징 (Micro Flow Imaging) (MFI 5200, 프로테인 심플)을 사용하여 육안으로 보이지 않는 입자 형성 측면에서 조성물 안정성에 대한 증가하는 계면활성제 농도의 효과를 나타낸다. 조성물은 실시예 2에 기재된 바와 같은 상이한 스트레스 조건에 노출되었다. 선택된 계면활성제는 폴리소르베이트 80이었다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 증가하는 농도의 폴리소르베이트 80과 함께 pH 5.0의 20 mM L-히스티딘에서 대략 150 mg/ml로 제형화되었다. 하기의 조성물이 시험되었다:
(18) 20 mM L-히스티딘, pH 5.0, 0.00% 폴리소르베이트 80
(19) 20 mM L-히스티딘, pH 5.0, 0.01% 폴리소르베이트 80
(20) 20 mM L-히스티딘, pH 5.0, 0.05% 폴리소르베이트 80
(21) 20 mM L-히스티딘, pH 5.0, 0.10% 폴리소르베이트 80
(22) 20 mM L-히스티딘, pH 5.0, 0.15% 폴리소르베이트 80
(23) 20 mM L-히스티딘, pH 5.0, 0.20% 폴리소르베이트 80
<표 5>
Figure pct00005
표 5는 조성물에 교반 스트레스를 유도하면서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 입자 형성을 요약한 것이다.
<표 6>
Figure pct00006
표 6은 조성물에 동결/해동 스트레스를 유도하면서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 입자 형성을 요약한 것이다.
계면활성제의 보호 효과는 조성물 (20)에서 대략 0.05% 폴리소르베이트 80 내지 조성물 23에서 0.20% 폴리소르베이트 80의 농도에서 정체기에 도달하였다. 저장 수명 동안 보호 효과를 보장하고 안전한 견고성 코리도 (corridor)를 생성하기 위해 0.1% 폴리소르베이트 80이 특히 바람직하였다. 추가적으로, 표 6에 나타난 바와 같이 0.1% 폴리소르베이트 80 (조성물 21)의 보호 효과는 동결/해동 스트레스를 유도하면서 조성물 20에서 897개의 입자 (>5 μm)에 비해 637개의 입자 (>5 μm)를 나타내었으며, 이는 폴리소르베이트 80의 농도가 적어도 0.1%이어야 함을 나타낸다.
표 5 및 표 6에 나타난 바와 같이 더 높은 농도의 폴리소르베이트 80은 보호 효과에서 유의한 개선을 나타내지 않았다.
실시예 5: 상이한 부형제의 조합
이 실시예는 이전 실시예의 조합된 접근 방식을 나타낸다. 이의 목적은 아르기닌의 농도 범위에 대한 자세한 정보를 제공하면서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 점도를 낮추고 안정성을 개선하기 위해 앞서 기재된 효과를 최적화하는 것이었다. 조성물의 삼투압을 생리학적 수준 (240-400 mOsm/kg)으로 낮추기 위해 부형제의 전체 농도를 감소시키는 것이 필요하였다.
하기 스크리닝의 목적은 아르기닌 함량을 50 mM으로 감소시키고 더 낮은 농도에서 유익한 효과를 나타내면서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D에 대한 고농도 제형물의 점도 저하 및 입자 형성 방지 특성을 최적화하는 것이었다.
또한, 글리신 및 메티오닌과 조합된 아르기닌의 상승 효과를 조사하였다. 따라서, 다양한 pH 값에서 상이한 부형제 및 이들의 조합을 가진 완충 시스템을 설정하고, 제2 비리얼 계수, 열 안정성 및 점도에 대해 평가하였다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 상이한 조성물에서 대략 150 mg/ml로 제형화되었다:
(24) 20 mM L-히스티딘
(25) 20 mM L-히스티딘, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드
(26) 20 mM L-히스티딘, 30 mM L-아르기닌 히드로클로라이드
(27) 20 mM L-히스티딘, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, 10 mM L-메티오닌
(28) 20 mM L-히스티딘, 130 mM 글리신
(29) 20 mM L-히스티딘, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, 130 mM 글리신
(30) 20 mM 포스페이트 버퍼
(31) 20 mM 아세테이트 버퍼
모든 조성물은 0.2의 단계에서 pH 5.0 내지 6.0의 범위에서 시험되었다.
<표 7>
Figure pct00007
표 7은 조성물 pH에 따른 대략 150 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 상이한 조성물의 제2 비리얼 계수를 요약한 것이다. 실시예 3에 이미 기재된 바와 같이, 전체적으로 감소된 pH는 증가된 제2 비리얼 계수를 초래하였다. B22 값 (분자간 상호작용을 나타냄)은 -2.70E-04 mol*ml/g2와 2.94E-05 mol*ml/g2 사이였다. 조성물 25, 28, 29 및 31은 높은 B22 값이 콜로이드 안정성의 표시이기 때문에 바람직했던 pH 5.2 이하에서 0 초과의 제2 비리얼 계수를 가졌다 (표 7 참조). 대조적으로, 조성물 26은 30 mM 아르기닌을 함유하지만 유의한 개선을 나타내지 않았다. 이러한 관찰된 효과는 단지 30 mM 아르기닌의 농도가 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 가능한 고농도 제형물에 대해 충분하지 않다는 결론을 이끌어내었다.
<표 8>
Figure pct00008
표 8은 조성물 pH에 따른 대략 150 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 상이한 조성물의 열 안정성을 요약한 것이다. Tm 값은 59.7℃ 내지 78.5℃였다. 전반적으로 감소된 pH는 감소된 Tm 값을 초래하였다. 아미노산인 히스티딘, 글리신, 아르기닌 및/또는 메티오닌을 상이한 조합 및 농도로 사용하여 안정화된 조성물 (24 내지 28)은 포스페이트 또는 아세테이트 버퍼를 함유하는 조성물보다 낮은 Tm 값을 가졌다.
놀랍게도, 아미노산을 포함하는 조성물 중에서, 조성물 28은 글리신이 없는 조성물과 비교하여 +4℃ 내지 +5℃의 상당히 더 높은 Tm 값을 나타내었으며, 글리신이 항체에 대한 안정화 효과를 가졌다는 결론을 이끌어내었다.
제2 비리얼 계수에 대한 아르기닌의 긍정적인 효과 및 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 열 안정성에 대한 글리신의 긍정적인 효과는 바람직한 조성물은 히스티딘 외에 두 아미노산을 포함해야 한다는 결론을 이끌어내었다.
조성물 32 (20 mM 히스티딘, 50 mM 아르기닌, 50 mM 글리신, 5% 트레할로스 이수화물, 0.10% 폴리소르베이트 80, pH 5.0)에서 히스티딘에 추가하여 부형제인 글리신 및 아르기닌의 조합은 상승 효과를 강화하였다. 조성물 32의 제2 비리얼 계수는 3.385E-05 ml*mol/g2이었고, 그와 함께 조성물 25, 28 및 29의 범위에 있었다 (표 7에 나타난 바와 같음). 조성물 32의 Tm은 히스티딘에 추가하여 글리신만을 포함하는 조성물 28에 필적하는 63.3℃였다. 이들 데이터는 히스티딘에 추가하여 글리신과 아르기닌의 조합이 단백질-단백질 상호작용 (제2 비리얼 계수)을 감소시키고 동시에 열 안정성 (Tm)을 증가시켰음을 나타낸다.
<표 9>
Figure pct00009
표 9는 pH 5.0 및 pH 6.0에서 대략 150 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 상이한 조성물의 동적 점도를 나타낸다. 조성물 25 및 29의 제2 비리얼 계수가 유사한 범위에 있었지만, 조성물 29의 동적 점도는 pH 5.0에서 25.6 mPa*s의 허용가능한 점도를 유도하는 유일한 제형물이다.
삼투압은 동결점 삼투압계 및 3 포인트 보정 (50, 300, 2000 mOsm/kg - 오스모매트 030 (Osmomat 030), 고노텍 (GonoTech), 베를린)을 사용하여 측정되었다. 조성물 29는 폴리소르베이트 80과 같은 추가 계면활성제 또는 트레할로스 이수화물로서 안정화제를 함유하지 않고 대략 324 mOsm/kg의 삼투압을 유도하였다. 5%의 트레할로스 이수화물을 첨가하면 추가의 145 mOsm/kg을 초래하여 조성물의 삼투압 값을 증가시키는 것으로 공지되었다. 따라서, 5%의 트레할로스 이수화물과 조합된 조성물 29의 결과적인 이론적 삼투압은 고장성이고 240-400 mOsm/kg의 허용가능한 범위를 벗어나는 것으로 예상되는 469 mOsm/kg이었다.
따라서, 조성물 29에서 글리신의 양은 130 mM로부터 50 mM으로 감소되었다 (조성물 32로 이어짐). 이 감소는 241 mOsm/kg의 삼투압을 가져왔다. 안정화제로서 5%의 트레할로스 이수화물과의 조합은 산술적으로 386 mOsm/kg의 허용가능한 삼투압을 유도한다.
이 산술적 값은 조성물 32의 삼투압을 측정함으로써 확인되었으며, 371 mOsm/kg의 삼투압을 나타내었다.
실시예 6: 통상적인 동결-건조에 의한 동결건조
이 실시예는 통상적인 동결건조를 위한 076D-M007-H04-CDRL3-N110D 및 히스티딘-글리신-아르기닌 버퍼 시스템을 포함하는 액체 고농도 조성물의 적합성을 나타낸다. 안정화제로 트레할로스를 첨가하였다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는
(32) 20 mM L-히스티딘, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, 50 mM 글리신, 5% 트레할로스 이수화물, 0.10% 폴리소르베이트 80, pH 5.0
에 대략 150 mg/ml로 제형화되었다.
적합한 동결건조 공정을 개발하려면 1차 건조를 수행할 수 있는 온도를 결정하는 붕괴 온도를 결정하는 것이 필수적이었다. 붕괴 온도는 리오-현미경 (lyo-microscope) (리오스태트 2 (Lyostat 2), 바이오파르마 (Biopharma))을 사용하여 진공 (0.1 mbar)을 끌어오기 전에 조성물을 -50℃로 동결시키고 샘플을 1℃/분의 램프로 20.0℃로 가열함으로써 측정하였다. 가열하는 동안, 조성물 사진을 촬영하고, 시험된 시스템의 붕괴가 관찰될 때까지 분석하였다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 붕괴 온도는 -14.3℃인 것으로 밝혀졌으며, 다음 동결건조 주기를 선택하기 위한 필수 파라미터이다.
항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 액체 조성물 32는 통상적인 동결-건조 방법 (방법 1)에 따라 처리되었다. 150 mg/ml 항-FXIa 항체를 함유하는 용액을 10R 유형 I 유리 바이알에 충전시키고, 통상적인 바이알 동결 건조기에서 동결-건조시켰다. 총 20개의 바이알을 바이알당 2.25 ml 용액으로 충전시키고, 마개를 절반만 씌우고, 버티스 제네시스 (Virtis Genesis) 동결 건조기에 적재하였다. 용액을 -45℃로 동결시키고, 1차 건조를 +10℃에서 수행한 다음, 40℃에서 2차 건조 단계를 수행하였다. 완전한 동결 건조 과정은 대략 38시간이 필요하였다. 바이알을 동결 건조기 내에서 마개를 씌우고, 적재를 푼 후 직접적으로 밀봉하였다.
조성물 32에 대한 통상적인 동결-건조 방법 (방법 1)에 따른 동결건조 주기의 세부 사항은 표 12에 요약되어 있다.
<표 12>
Figure pct00010
이렇게 수행된 통상적인 동결-건조 공정 동안 시간에 따라 측정된 압력 및 온도 프로파일은 도 2에 그래프로 도시된다.
상술된 통상적인 동결건조 방법은 이후에 재구성될 수 있는 황색 케이크 또는 분말을 생성하였다.
동결건조물의 재구성을 위해, 재구성 매질로서 주사용 멸균수 2 ml를 각각의 바이알에 주입하였다. 이어서, 바이알을 약 10 내지 20초 동안 부드럽게 교반하였다. 통상적인 동결-건조에 의해 수득된 이 동결건조물의 재구성은 재구성 시간이 137분이었다.
재구성 후, 어떠한 가시적인 입자도 없는 투명한 황색 용액이 관찰되었다. 응집 또는 응집의 힌트가 검출되지 않았다.
실시예 7: 상이한 분무-동결-건조 방법에 의한 동결건조
실시예 6에 기재된 바와 같이 통상적인 동결-건조 방법 (방법 1)에 의해 수득된 동결건조물의 재구성 시간이 2시간 초과로 허용할 수 없을 정도로 길었기 때문에, 2가지의 상이한 동결-건조 방법을 적용하고 상술된 바와 같은 통상적인 동결-건조와 비교하였다.
먼저, 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 액체 조성물 32를 WO 2006/008006에 기재된 방법 (방법 2)에 따라 처리하였다. 150 mg/ml 항-FXIa 항체를 포함하는 138 ml 용액을 400 μm 노즐을 통해 분무하고, 약 19.5 g/분의 속도 및 220 mbar의 압력 오버레이로 470 Hz의 주파수로 세분화하였다. 액적은 노즐에서 대략 25 cm 아래로 위치되고 공정 동안 교반되는 액체 질소로 충전된 격리된 용기에서 동결되었다. 분무가 완료된 후, 동결된 펠릿을 사전-냉각된 체를 통해 액체 질소를 부어 꺼내고, 플라스틱 호일이 늘어선 강철 랙에서 버티스 아드밴티지 프로 (Virtis Advantage Pro) 동결 건조기의 사전-냉각된 선반 위에 놓고, 동결건조시켰다. 1차 건조는 0℃ 선반 온도에서 33시간 동안 수행한 후, 30℃에서 5시간 동안 2차 건조를 수행하였다. 건조 완료 후, 건조된 펠릿을 유리병에 즉시 전달하고 단단히 폐쇄하였다. 그 후, 520 mg의 펠릿을 건조 질소 분위기 하에서 10R 유형 I 유리 바이알로 무게를 재었다. WO 2006/008006에 기재된 방법에 따른 항체 용액의 동결 및 건조 동안 시간에 따라 측정된 압력 및 온도 프로파일은 도 3에 그래프로 도시된다.
두번째로, 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 포함하는 액체 조성물 32를
a) 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적을 동결시켜 펠릿을 형성하는 단계;
b) 펠릿을 동결-건조시키는 단계
를 포함하고;
여기서 단계 a)에서 액적은 온도-제어가능한 내벽 표면 및 용액의 동결 온도 미만의 내부 온도를 갖는 냉각탑 내로의 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적 형성에 의해 형성되고, 단계 b)에서 펠릿은 진공 챔버 내부에 수용된 회전 리셉터클에서 동결-건조되는 것인,
동결-건조된 펠릿의 재구성 시간을 감소시키기 위한 분무-동결-건조 기반 방법 (본원에 기재된 방법 3)에 따라 처리하였다.
따라서, 150 mg/ml 항-FXIa 항체를 함유하는 250 ml 용액을 벽-냉각된 냉각탑에 분무하여 동결-건조시켰다. 분무 노즐은 직경 400 μm의 하나의 구멍을 가졌다. 이는 약 800 μm의 액적 크기에 해당한다. 진동 주파수는 1445Hz이고 편향 압력은 0.4 bar였으며, 펌프는 14 rpm에서 작동하였다. 건조 완료 후, 건조된 펠릿을 유리병에 즉시 전달하고 단단히 폐쇄하였다. 그 후, 520 mg의 펠릿을 건조 질소 분위기 하에서 10R 유형 I 유리 바이알로 무게를 재었다. 시간에 따라 측정된 냉각탑의 온도 프로파일은 도 4에 그래프로 도시된다. 항체 용액의 동결 및 건조 동안 시간에 따라 측정된 온도 및 압력 프로파일은 도 5에 그래프로 도시된다. 본원에 기재된 방법 3은 좁은 크기 및 중량 분포 및 높은 표면적을 나타내는 균일한 펠릿을 생성하였다. 이 방법으로 수득된 펠릿의 잔류 습도는 0.268%였다.
통상적인 동결-건조 (방법 1)에 의해 수득된 동결건조물은 0.15%의 잔류 수분을 포함하였다.
3가지의 상이한 동결-건조 공정으로 수득된 펠릿의 크기 배제 크로마토그래피 분석은 표 13에 제공된다.
<표 13>
Figure pct00011
종합적으로, 3가지 동결-건조 방법에 대해 크기 배제 크로마토그래피로 비교가능한 분석 데이터를 수득하였다.
샘플에 존재하는 전체 단백질성 성분과 비교하여 온전한 항체의 양을 결정하기 위해, IgG 순도를 모세관 SDS-겔 전기영동 (CGE)으로 분석하였다. 시험 및 참조 샘플은 나트륨 도데실 술페이트 (SDS)의 존재 하에 노출된 융합-실리카 모세관을 사용하여 CGE로 분리되었다. 시험은 비-환원 조건 하에 수행되었다. 분리된 샘플은 220 nm에서 흡광도로 모니터링되었다. 검정의 의도는 환원 후 주요 피크의 피크 면적을 통합하고 부산물을 분석하는 것이었다.
모세관 겔 전기영동 (CGE) 및 ELISA 분석 결과는 표 14에 제공된다.
<표 14>
Figure pct00012
3가지의 상이한 동결-건조 방법으로 수득된 펠릿의 재구성 시간은 하기와 같이 비교되었다. 재구성 매질로서 주사용 멸균수 2 ml를 각각의 바이알에 주입하였다. 사진을 찍은 후, 바이알을 약 10 내지 20초 동안 부드럽게 교반하였다. 시간 경과에 따른 펠릿의 재구성을 시각적으로 관찰하고 사진으로 문서화하였다.
3가지의 상이한 동결-건조 방법으로 수득된 펠릿의 재구성 시간은 하기에 제공된다:
동결-건조 방법 재구성 시간 Ab 농도
방법 1 137분 150 mg/ml
방법 2 16분 150 mg/ml
방법 3 11분 150 mg/ml
본원에 기재된 방법 3에 따라 수득된 동결-건조된 항-FXIa 항체를 포함하는 펠릿의 재구성은 통상적인 동결-건조 (방법 1)로 수득된 동등한 항-FXIa 항체를 포함하는 동결건조물의 재구성보다 상당히 더 빠르고, 또한 WO 2006/008006 (방법 2)에 따라 수득된 동결-건조된 펠릿에 비해서도 더 빨랐다.
이어서, 3가지의 상이한 동결-건조 방법으로 수득된 펠릿을 주사 전자 현미경 (SEM) 측정하였다. 따라서, 샘플 제조는 질소 분위기 하에서 글로브 백에서 수행되었으며, 각각의 샘플은 개별적으로 제조되었다. 샘플을 홀더에 놓고, 금으로 스퍼터링하였다. 그 후, 주사 전자 현미경 측정을 수행하였다. SEM 사진은 도 6-8에 도시된다.
본원에 기재된 방법 3에 따라 생산된 펠릿은 특히 균질한 형태를 나타내며, 이는 이후 공정 단계에서 취급 특성을 개선할 수 있음을 알 수 있다.
실시예 8: 동결건조된 고농도 제형물의 장기간 안정성
이 실시예는 2-8℃ 및 25℃에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 동결건조된 고농도 제형물의 장기간 안정성을 기재한다.
2.25 ml의 조성물 32를 멸균된 6R 유리 바이알에 충전하였다. 액체 제형물은 실시예 6에 기재된 바와 같이 통상적인 동결-건조 방법 (방법 1)에 따라 동결건조되었다. 따라서, 150 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 함유하도록 재구성될 동결건조된 조성물 32는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D mg당 0.047 mg L-히스티딘, 0.158mg L-아르기닌 히드로클로라이드, 0.056 mg 글리신, 0.75 mg 트레할로스 이수화물, 및 0.015 mg 폴리소르베이트 80을 포함하였다.
물로 재구성 시, 동결건조된 조성물은 약 pH 5.0를 가졌다.
동결건조된 조성물은 2-8℃ 및 25℃에서 12개월의 기간 동안 저장되었다. 특정 시점 (3, 6, 9, 12, 18 및 24개월)에 샘플을 멸균수로 재구성하였다.
재구성 후 (최종 부피 2.25 ml/바이알), 액체 조성물을 제약 적용에서의 유용성에 대해 분석하였다. 물리적 안정성 (농도, 응집, 입자 형성, 동적 점도, 삼투압 등)을 측정하는 상술된 분석 방법 외에, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 활성뿐만 아니라 화학적 안정성을 분석하였다.
단량체 함량은 공간 크기를 기준으로 단편 (저분자량, LMW) 및 올리고머 (고분자량, HMW)로부터 단량체를 분리하는 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 사용하여 측정되었다. 분획의 분리는 아질런트 (Agilent) HPLC 1200과 함께 토소 (Tosoh) TSK 겔 슈퍼 SW3000을 사용하여 달성되었다. 샘플은 0.2 ml/분의 유속으로 pH 6.8에서 160 mM PBS/200 mM 아르기닌 버퍼에서 용출되었다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 전하 변이체는 모세관 등전 포커싱 (cIEF)을 사용하여 결정되었다. 이 방법에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 샘플은 전하로 인해 전기장 (SCIEX PA800 인핸스트 (SCIEX PA800 Enhanced), 벡크만 코울터 (Beckman Coulter))에서 분리되었으며 변이체는 UV-vis 방법을 사용하여 검출되었다. 전하 변이체의 포커싱 단계는 정상 극성 하에 25 kV에서 15분 동안 샘플을 유지하여 달성되었다. 화학적 동원은 샘플을 30 kV에서 30분 동안 유지하여 수행되었다. 이 절차 후 데이터 수집이 중지되었다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D에 대한 생화학적 시험은 효소-결합된 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여 결합능으로 보고되었다. 이어서, 결합능을 < -60℃에서 pH 5의 20 mM L-히스티딘/50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드/50 mM 글리신 버퍼, 5% 트레할로스 이수화물 및 0.1% 폴리소르베이트 80을 함유하는 참조 표준과 비교하였다. 참조 표준 및 시험 샘플의 흡수 값을 비교하였다.
입자 형성은 2 μm 내지 100 μm의 입자 크기 범위를 커버하는 차광 (HIAC, 벡크만 코울터)을 사용하여 모니터링되었다. 실험은 10개의 개별 바이알로부터 풀링된 샘플에 대한 3중 시험으로 자동화된 시험 절차로 수행되었다. 각각의 측정에 대해 5 ml의 샘플이 사용되었다.
용액의 탁도 결정은 탁도계 2100N IS (하크란게, 뒤셀도르프)를 사용하여 탁도 측정으로 수행되었다. 3 ml의 076D-M007-H04-CDRL3-N110D를 측정하고 Ph.Eur. (RS I-IV)에 따라 광학 참조 표준과 비교하였다.
<표 15>
Figure pct00013
표 15는 2-8℃에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 동결건조된 고농도 조성물 32의 안정성 연구 결과를 나타낸다. 24개월의 기간 동안 pH 또는 미립자 물질과 같은 안정성 파라미터에 유의한 변화가 관찰되지 않았다.
<표 16>
Figure pct00014
표 16은 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 동결건조된 고농도 조성물 32의 안정성 연구의 추가 결과를 나타낸다. 24개월의 기간 동안 단량체 함량, 결합능, 전하 변이체 또는 단백질 농도와 같은 안정성 파라미터에 유의한 변화가 관찰되지 않았다.
<표 17>
Figure pct00015
표 17은 25℃에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 동결건조된 고농도 조성물 32의 안정성 연구 결과를 나타낸다. 12개월의 기간 동안 pH 또는 미립자 물질과 같은 안정성 파라미터에 유의한 변화가 관찰되지 않았다.
<표 18>
Figure pct00016
표 18은 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 동결건조된 고농도 조성물 32의 안정성 연구의 추가 결과를 나타낸다. 2-8℃에서의 안정성 데이터와 비교하여, 단량체 함량은 98%로부터 94%로 감소하고 전하 변이체 (cIEF)는 74%로부터 68%로 이동하는 것을 관찰할 수 있었다. 그러나, 단백질 농도 및 결합능과 같은 안정성 파라미터는 이 기간 동안 유의한 변화를 나타내지 않았다.
전반적으로 동결건조된 상태의 조성물 32는 적어도 12개월 동안 2-8℃에서 저장 시 안정한 것으로 확인되었다.
실시예 9: 액체 고농도 제형물의 장기간 안정성
이 실시예는 2가지의 상이한 항체 농도 [150 mg/ml (32) 및 100 mg/ml (34)]의 조성물 32에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 액체 고농도 제형물의 장기간 안정성을 아미노산 대신에 버퍼로서 포스페이트를 포함하는 조성물 (34)과 비교하여 기재한다.
076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 하기 조성물:
(32) 20 mM L-히스티딘, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, 50 mM 글리신, 5% 트레할로스 이수화물, 0.01% 폴리소르베이트 80, pH 5.0
또는 포스페이트 버퍼:
(33) 50 mM 포스페이트, 5% 트레할로스 이수화물, 0.1% 폴리소르베이트 80, pH 5.0
에 대략 150 mg/ml로 제형화되었다
또한, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 조성물 32와 동일한 버퍼 시스템에서 대략 100 mg/ml의 항체 농도로 시험되었다:
(34) 20 mM L-히스티딘, 50 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, 50 mM 글리신, 5% 트레할로스 이수화물, 0.01% 폴리소르베이트 80, pH 5.0.
액체 조성물은 2 내지 8℃에서 6개월의 기간 동안 저장되었다. 특정 시점 (2, 4 및 6개월)에서 샘플을 상술된 바와 같이 분석하였다.
또한, 샘플을 모세관 전기 영동 방법 (CGE, red.-SCIEX PA 800 인핸스트, 벡크만 코울터)을 사용하여 환원 조건 (중쇄 및 경쇄) 하에서 IgG 순도에 대해 분석하여 상이한 실시양태의 단편화를 비교하였다.
표 19에 나타난 바와 같이, 결합능, 단량체 함량뿐만 아니라 탁도와 같은 모든 파라미터는 조성물 32 및 34에서 2-8℃에서 6개월 기간 동안 안정하였다.
<표 19>
Figure pct00017
표 19는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 액체 고농도 제형물 32-34의 안정성 연구 결과를 나타낸다. 히스티딘/글리신/아르기닌을 포함하는 조성물인 조성물 32 (150 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D)뿐만 아니라 조성물 34 (100 mg/ml 076D-M007-H04-CDRL3-N110D)는 pH, 탁도, 단백질 농도뿐만 아니라 결합능의 측면에서 안정하였다.
그러나, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 포스페이트 버퍼 (조성물 33)에서 동일한 저장 조건에서 안정하지 않았다. 포스페이트 버퍼 함유 조성물 33은 용액의 pH를 안정화시킬 수 없었으며, 탁도 값은 거의 참조 표준 IV (30 NTU)로 증가하였다.
<표 20>
Figure pct00018
표 20은 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 액체 고농도 제형물 32-34의 오리엔팅 (orienting) 안정성 연구의 추가 결과를 나타낸다. 조성물 32 (150 mg/ml)뿐만 아니라 조성물 34 (100 mg/ml)는 미립자 물질, 전하 변이체 (cIEF)의 형성, 환원 조건 하에서 단편화 (CGE)뿐만 아니라 단량체 함량 (SEC) 측면에서 안정하였다.
그러나, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D는 포스페이트 버퍼 (조성물 34)에서 동일한 저장 조건에서 안정하지 않았다. 입자 형성은 히스티딘-글리신-아르기닌 완버퍼를 포함하는 조성물에 비해 불균형하게 증가하였다. 등전 포커싱 (cIEF)의 결과는 6개월 후 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 전하 변이체가 히스티딘/글리신/아르기닌 버퍼 조성물과 비교하여 포스페이트 버퍼에서 증가하였음을 나타내었다. 또한, CGE를 사용하여 분석된 환원된 단편은 중쇄 및 경쇄의 합의 감소를 나타내었으며 이는 포스페이트 버퍼에서 항체의 단편화를 나타낸다.
액체 제형물의 장기간 안정성 데이터의 분석으로 본 발명에 따른 히스티딘-글리신-아르기닌 버퍼 시스템을 포함하는 조성물 32가 놀랍게도 적어도 6개월 동안 액체 상태의 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 고농도 제형물을 안정화시킨다는 결론에 이르렀다. 본 발명에 따른 제형물의 동결건조는 가능하지만, 본 발명에 따른 항-FXIa 항체의 고농도 제형물이 장기간에 걸쳐 액체 제형물로서 안정하기 때문에 필요하지는 않다.
동결건조가 필요한 경우, 이는 바람직하게는 통상적인 동결-건조에 의해 수득되거나 WO 2006/008006 A1에 개시된 공정에 의해 수득된 동결건조물과 비교하여 상당히 더 짧은 재구성 시간을 제공하는 본원에 기재된 분무-동결-건조 방법에 의해 수행되어야 한다.
표 21 및 22는 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 액체 고농도 조성물 32의 안정성 연구의 추가 결과를 나타낸다. 9개월의 기간에 걸쳐 단량체 함량, 결합능, 전하 변이체 또는 단백질 농도와 같은 안정성 파라미터에 유의한 변화가 관찰되지 않았다.
<표 21>
Figure pct00019
<표 22>
Figure pct00020
실시예 10: 고농도 제형물의 동결된 벌크의 장기간 안정성
이 실시예는 < -60℃에서 18개월의 기간 동안 액체 조성물 (32)에서 076D-M007-H04-CDRL3-N110D의 액체 고농도 제형물의 장기간 안정성을 기재한다.
액체 조성물은 < -60℃에서 12개월 동안 저장되었다. 특정 시점 (1, 2, 3, 6, 9, 12 및 18개월)에서 샘플을 상술된 바와 같이 분석하였다.
표 23에 나타난 바와 같이, pH, 전하 변이체, 단량체 함량, 고분자 함량, 활성 및 단백질 농도와 같은 모든 관련 파라미터는 조성물 32에서 < -60℃에서 18개월의 기간 동안 안정하였다. 전반적으로 동결된 상태의 조성물 32는 적어도 18개월 동안 < -60℃에서 저장 시 안정한 것으로 확인되었다.
<표 23>
Figure pct00021
SEQUENCE LISTING <110> Bayer Pharma AG <120> Novel stable high-concentration formulation for anti-FXIa antibodies <130> BHC181007 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain anti-FXIa abtibody 076D-M007-H04-CDRL3-N110D <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr 20 25 30 Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain anti-FXIa antibody 076D-M007-H04-CDRL3-N110D <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (18)

  1. 약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, 10-20 mM 히스티딘, 25-75 mM 글리신 및 50-75 mM 아르기닌을 포함하고, pH 4.7-5.3을 갖는, 안정한 액체 제약 제형물.
  2. 제1항 또는 제2항에 있어서, 보존제, 담체, 계면활성제 및 안정화제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 성분을 포함하는 액체 제약 제형물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 히스티딘 농도가 20 mM인 액체 제약 제형물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 글리신 농도가 50 mM인 액체 제약 제형물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 아르기닌 농도가 50 mM인 액체 제약 제형물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 1-10% (w/v)의 안정화제를 포함하는 것인 액체 제약 제형물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 3-7% (w/v) 트레할로스 이수화물을 포함하는 액체 제약 제형물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 0.005% 내지 0.2% (w/v) 농도의 계면활성제를 포함하는 액체 제약 제형물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 및 폴록사머 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 액체 제약 제형물.
  10. 약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, 20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌, 5% (w/v) 트레할로스 이수화물 및 0.1% (w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하고, pH 5를 갖는, 안정한 액체 제약 제형물.
  11. 약 100 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, 20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌, 5% (w/v) 트레할로스 이수화물 및 0.05% (w/v) 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188을 포함하고, pH 5를 갖는, 안정한 액체 제약 제형물.
  12. 약 150 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, 20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌, 5% (w/v) 트레할로스 이수화물 및 0.1% (w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하고, pH 5를 갖는, 안정한 액체 제약 제형물.
  13. 약 150 mg/ml 이상의 농도의 항-FXIa 항체 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, 20 mM 히스티딘, 50 mM 글리신 및 50 mM 아르기닌, 5% (w/v) 트레할로스 이수화물 및 0.05% (w/v) 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188을 포함하고, pH 5를 갖는, 안정한 액체 제약 제형물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 액체 제약 제형물을 동결-건조시킴으로써 수득가능한 동결건조물.
  15. 제12항에 있어서,
    a) 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적을 동결시켜 펠릿을 형성하는 단계;
    b) 펠릿을 동결-건조시키는 단계
    를 포함하고;
    단계 a)에서 액적은 온도-제어가능한 내벽 표면(110) 및 용액의 동결 온도 미만의 내부 온도를 갖는 냉각탑(100) 내로의 항-FXIa 항체를 포함하는 용액의 액적 형성에 의해 형성되고,
    단계 b)에서 펠릿은 진공 챔버(200) 내부에 수용된 회전 리셉터클(210)에서 동결-건조되는 것을 특징으로 하는 방법에 의해 수득되는 것인 동결건조물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 액체 제약 제형물 또는 동결건조물을 포함하는 투여 형태.
  17. 제14항에 있어서, 투여 형태가 주사기, 바이알, 펜 장치, 또는 자동주입기인 투여 형태.
  18. 혈전성 또는 혈전색전성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 액체 또는 동결건조된 제약 제형물.
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