KR20150070384A - 안정한 저점도 항체 제제 - Google Patents

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폴 산타크로체
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Abstract

본 발명은 고농도의 항-IL6 항체를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 약 50 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항-IL6 항체, 및 아르기닌을 포함하며, 수용액이고, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이다. 또한 이러한 항체 제제의 제조 방법 및 사용 방법이 제공된다.

Description

안정한 저점도 항체 제제{STABLE, LOW VISCOSITY ANTIBODY FORMULATION}
본 발명은 고농도의 항-IL6 항체를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 약 50 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항-IL6 항체 및 아르기닌을 포함하고, 수용액이며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는, 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이다. 또한 이러한 항체 제제의 제조 방법 및 사용 방법이 제공된다.
항체는 전신 투여 후 높은 선택적 결과를 야기하는 이들의 표적 인식 특이성 때문에 다양한 질환 및 질병의 치료에 사용되어 왔다. 항체가 높은 특이성을 가질 수는 있으나, 환자를 치료하는데 필요한 투여량은, 특히 만성 질병의 경우, 일반적으로 크다. 대량의 고도로 정제된 단일클론 항체의 제조를 제공하는 신규한 제조 및 정제 기술이 개발되어 왔다. 그러나, 이들 항체를 안정화시키는 과제가 여전히 존재하고, 투여에 적합한 제형으로 항체를 제공하는 과제가 또한 존재한다.
특이적인 항체의 많은 투여량으로 환자를 치료하기 위하여, 제형 중의 항체의 농도를 증가시키는 것이 바람직하다. 일반적으로 농도가 높을수록 주입을 위한 주입 부피는 작아진다. 그러나, 고농도에서, 항체는 종종 응집, 침전, 겔화, 낮아진 안정성, 및/또는 증가된 점도를 포함한 고유한 문제점을 나타낸다.
고농도 제형과 관련된 과제를 극복하기 위하여 다양한 방법이 제안되었다. 예를 들면, 고농도 항체 제제와 관련된 안정성 문제를 해결하기 위하여, 항체를 종종 동결건조시킨 다음 투여 직전 복원한다. 복원은 투여 과정에 추가의 단계를 추가하기 때문에 일반적으로 최선이 아니며 제제에 오염물질을 전달할 수 있다. 추가로, 심지어 복원된 항체는 응집 및 고점도를 겪을 수 있다.
또한 항체 제제를 투여하는데 추가적인 문제가 존재한다. 일부 예에서, 항체 제제는 용기로부터 빼내지고 투여 전 적절한 정맥내(IV: intravenous) 백(bag)으로 희석된다. 항체 제제를 함유하는 제조된 IV 백은 '화합된 살균 조제물'(CSP: compounded sterile preparation)로 지칭된다. CSP는 종종 대상에게 투여되기 전에 짧은 시간 동안 유지된다. CSP는 일반적으로 환자에게 주입되기 전에 침전 또는 오염의 징후에 대하여 육안으로 검사된다. CSP의 안정성을 위하여 바람직한 시간-프레임은 항체 제제의 것 보다 짧고, 예를 들면, 실온에서 약 4 내지 8 시간, 및 냉장 조건하에 24 내지 36 시간이다.
IV 백 내로 항체 제제의 배치는 안정성 감소를 야기할 수 있다. 항체 생성물에 있어서, 침전 또는 입자 형성이 발생할 수 있고, IV 용액의 육안 검사, 가시광선-적외선 흡광도에 의한 용량 회수, 및 크기 배제 크로마토그래피(SEC: size exclusion chromatography)에 의한 고분자량 종(HMWS: high molecular weight species)의 형성에 관한 안정성에 의해 평가될 수 있다. 효능 또한 측정될 수 있으며, 일반적으로 생성물-특이적 시험에 의해 평가된다.
다중적인 잠재적 공급원은 CSP의 불안정을 야기할 수 있다. 단백질의 콜로이드성 및 배좌 안정성은 이온 강도, pH, 및 이당류 또는 아미노산과 같은 부형제의 존재와 같은 용액 상태에 영향을 받는다. 계면활성제를 종종 단백질 제형에 첨가하여 계면 응력에 의해 야기된 응집에 대항하여 보호하거나 입자 형성을 억제한다. 제형 부형제가 필요한 수준 보다 낮게 희석되는 경우, 단백질 안정성의 감소가 발생할 수 있다. 추가로, 살균 IV 백에서 높은 이온 강도 환경에의 노출은 일부 단백질의 특이적인 분해 경로를 촉진할 수 있다.
따라서, 이들 많은 도전을 극복할 수 있는 고농도 항체 제제를 제공할 필요성이 존재한다. 추가로, 항체 제제가 분해되거나, 침전되거나, 아니면 희석 동안 효능이 떨어지지 않는 IV 백으로의 항체 제제의 첨가 방법에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은 안정한, 저점도, 고농도 항체 제제에 관한 것이다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항-IL-6 항체, 및 (b) 약 150 mM 초과의 아르기닌을 포함하고, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는, 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이다.
일부 양태에서, 항-IL-6 항체는 가변 중(VH: variable heavy) 도메인 및 가변 경(VL: variable light) 도메인을 포함하고, 여기서 VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)을 포함하고 VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함한다. 하나의 양태에서, 항-IL-6 항체는 서열 번호 1 및 서열 번호 2를 포함한다.
일부 양태에서, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체는 2℃ 내지 8℃에서 12 개월 동안 안정하다.
일부 양태에서, 항체 제제의 점도는 23℃에서 14 cP 미만이다.
아르기닌의 다양한 농도가 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제는 200 mM 초과의 아르기닌을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 220 mM 초과의 아르기닌을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 150 mM 내지 400 mM의 아르기닌을 포함한다.
다양한 다른 성분들이 항체 제제에 포함될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제는 계면활성제를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트, 플루로닉, 브리지(Brij), 및 기타 비이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 일부 양태에서, 항체 제제는 히스티딘을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 제제은 트레할로스를 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 양태에서, 제제은 이당류를 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 양태에서, 제제은 환원당, 비환원당, 또는 당알코올을 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 양태에서 제제은 오스몰라이트(osmolyte)를 실질적으로 함유하지 않는다.
일부 양태에서, 제제은 27 게이지 박벽(thin wall) PFS 바늘(25 Ga 또는 26 Ga 바늘과 동일)을 통해 통과시 8 N 미만의 주입력을 갖는다. 일부 양태에서, 제제은 300 내지 450 mosm/kg의 오스몰 농도를 갖는다.
항체 제제 내의 항체는 다양한 순도 수준을 갖을 수 있다. 일부 양태에서, 항체는 항체 제제의 총 폴리펩티드 조성물의 90%(w/w)를 초과한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는, 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항체, (b) 약 150 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌, (c) 약 0.01% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80, (d) 약 20 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는 항체로서, VH 도메인이 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고 VL 도메인이 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는, 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항체, (b) 약 150 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌, (c) 약 0.01% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80, 및 (d) 약 20 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는 항체로서, VH 도메인이 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인이 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는, 약 150 mg/mL의 항체, (b) 약 220 mM의 아르기닌, (c) 약 0.07%의 폴리소르베이트 80, 및 (d) 약 25 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는 항체로서, VH 도메인이 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인이 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는, 약 150 mg/mL의 항체, (b) 약 150 mM 아르기닌, (c) 약 0.07%의 폴리소르베이트 80, 및 (d) 약 25 mM 히스티딘을 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는 항체로서, VH 도메인이 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인이 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는, 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 항체, (b) 약 20 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌, (c) 약 0.01% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80, (d) 약 5 mM 내지 약 100 mM의 히스티딘, 및 임의로 (e) 약 50 mM 내지 약 400 mM의 트레할로스를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는 항체로서, VH 도메인이 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인이 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는, 약 50 mg/mL의 항체, (b) 약 0.05%의 폴리소르베이트 80, (c) 약 25 mM의 히스티딘, 및 (d) 약 225 mM의 트레할로스를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는 항체로서, VH 도메인이 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인이 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는, 약 100 mg/mL의 항체, (b) 약 25 mM의 아르기닌, (c) 약 0.07%의 폴리소르베이트 80, (d) 약 25 mM의 히스티딘, 및 (e) 약 180 mM의 트레할로스를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다.
일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제의 투여를 포함하는, 대상에서 골관절염과 관련된 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제의 투여를 포함하는, 대상에서 만성 하부 요통과 관련된 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제의 투여를 포함하는, 대상에서 류마티스성 관절염을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 양태에서, 본 발명은 안정한 저점도 항체 제제의 제조 방법에 관한 것이고, 방법은 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL로 농축시키는 단계; 및 (b) (a)의 항체에 아르기닌을 첨가하여 약 150 mM를 초과하는 아르기닌 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 포함하고, 여기서 (b)의 항체 제제는 수용액이고 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖고, (b)의 항체 제제는, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 2℃ 내지 8℃에서 12 개월 동안 안정하다.
도 1은 항-IL6(YTE) 항체에 대한 다양한 부형제들의 예상된 안정화 능력을 나타내는 그래프이다. 당해 항체에 대하여 아르기닌이 가장 큰 콜로이드성 안정화 부형제로 예상되지 않음이 입증된다. 안정화가 가장 큰 부형제는 수크로스 및 트레할로스로 예상되었고, 안정화가 가장 작은 것은 NaCl 및 황산나트륨으로 예상되었다.
도 2는 트레할로스, 수크로스, 소르비톨 및 트레할로스/NaCl에 대한 점도 대 농도 곡선이다.
도 3은 (i) 210 mM 트레할로스, (ii) 180 mM 트레할로스/25 mM 아르기닌, (iii) 170 mM 트레할로스/50 mM 아르기닌, (iv) 180 mM 트레할로스/90 mM 아르기닌, (v) 150 mM 아르기닌, 또는 (vi) 220 mM 아르기닌을 갖는 항체 제제에 대한 점도 대 농도 곡선이다.
도 4는 (i) 210 mM 트레할로스, (ii) 180 mM 트레할로스/25 mM 아르기닌, (iii) 170 mM 트레할로스/50 mM 아르기닌, (iv) 180 mM 트레할로스/90 mM 아르기닌, (v) 150 mM 아르기닌, 또는 (vi) 220 mM 아르기닌을 갖는 항체 제제에 대한 점도 대 농도 곡선이다.
도 5는 (i) 210 mM 트레할로스, (ii) 180 mM 트레할로스/25 mM 아르기닌, (iii) 150 mM 아르기닌, 또는 (iv) 220 mM 아르기닌을 갖는 항체 제제에 대한 점도 대 농도 곡선이다.
도 6은 (i) 150 mM 아르기닌, (ii) 220 mM 아르기닌, 또는 (iii) 75 mM 트레할로스/100 mM 아르기닌을 갖는 항체 제제에 대한 점도 대 농도 곡선이다.
도 7은 150 mM 아르기닌 및 220 mM 아르기닌에서 항체 제제의 점도 비교이다.
도 8은 다양한 부형제를 함유하는 100 mg/mL 및 150 mg/mL의 항체 제제에 대한 점도의 온도 의존성을 입증하였다.
도 9는 pH 6.0에서 25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트, 220 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80 중의 항-IL6(YTE) 항체에 대한 열 안정성 프로파일이다.
도 10은 0.2 미크론 인-라인 필터를 통한 목크-주입(mock-infusion) 및 3 cc 유리 바이알로의 수집 후 IV로부터의 항-IL6(YTE) 항체의 저용량 샘플의 사진이다(초기 시간점).
도 11은 0.2 미크론 인-라인 필터를 통한 목크-주입 및 3 cc 유리 바이알로의 수집 후 IV 백으로부터의 항-IL6(YTE) 항체의 저용량 샘플의 사진이고, 여기서 IV 백은 0.012% w/v 폴리소르베이트 80로 처리되었다.
본원에 제시 및 기재된 특정한 실시는 예시이고, 달리 어떠한 방식으로도 출원의 범위를 제한하는 것을 의도하지 않음이 인식되어야 한다. 또한 본원에 기재된 각각의 양태 및 특징은 어떠한 방식 및 모든 방식으로 조합될 수 있음이 인식되어야 한다.
본원에 언급된 공개된 특허, 특허 출원, 웹사이트, 상호, 및 과학 문헌은 각각이 참조로서 특정하게 및 개별적으로 지시된 경우와 동일한 정도로 이들의 전문이 참조로서 본원에 인용된다. 본원이 기재된 임의의 참조와 당해 명세서의 특정한 교시 사이의 임의의 충돌은 후자의 편에서 해결되어야 할 것이다. 이와 같이, 단어 또는 구의 기술분야에서 이해되는 정의와 당해 명세서에서 특정하게 교시된 단어 또는 구의 정의 사이의 임의의 충돌은 후자의 편에서 해결되어야 할 것이다.
당해 명세서에서 사용되는 바와 같이, 내용이 달리 명백하게 지시하지 않는 경우, 단수형 "하나의"("a", "an" 및 "the")는 또한 특정하게 이들이 지칭하는 용어들의 복수형을 포함한다.
특허 기재 전체에서, 백분율, 비율 등의 모든 표현은 달리 지시되지 않는 경우 "중량"에 의한다. 본원에서 사용되는 "중량에 의한"은 "질량에 의한"과 동의어이고, 본원에 정의된 비율 또는 백분율이 용적, 두께, 또는 일부 기타 단위 보다는 중량에 따라 실시됨을 지시한다.
용어 "약"은 거의, 정도, 대략, 또는 쯤을 의미하는 것으로 본원에서 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이는 기재된 수치값 상한과 하한을 확장함으로써 범위를 변경한다. 일반적으로, 용어 "약"은 본원에서 기재된 값의 수치값 상한 및 하한을 10%의 변화량으로 변경하는데 사용된다.
본원에 사용되는 기술적 및 과학적 용어는, 달리 정의되지 않는 한, 본 출원이 관련된 당해 분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다양한 방법 및 물질에 대한 참조가 본원에서 만들어진다. 재조합 DNA 기술의 일반적인 원리가 기재된 표준 참조서는 문헌 [Sambrook et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York(1989)]; [Kaufman et al., Eds., "Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine," CRC Press, Boca Raton(1995)]; 및 [McPherson, Ed., "Directed Mutagenesis: A Practical Approach," IRL Press, Oxford(1991)]을 포함하고, 상기 각각의 내용은 본원에 참조로서 이의 전문이 인용된다.
본 발명은 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이다. 본원에 기재된 바와 같이, 용어 "항체 제제"는 하나 이상의 항체 분자를 포함하는 조성물을 나타낸다. 본원에서 용어 "항체"는 특정하게 제한되지 않는다. 명확성을 위하여, "항체"는 가장 넓은 의미로 해석되며 이의 면역글로불린(Ig: immunoglobulin), 이의 활성 또는 목적 변종, 및 이의 활성 또는 목적 단편(예를 들면, Fab 단편, 카멜리드 항체(단일쇄 항체), 및 나노바디)을 포함한다. 용어 "항체"는 또한 이량체 또는 다량체를 의미할 수 있다. 항체는 다클론 또는 단클론일 수 있고, 자연적으로 발생되거나 재조합으로 생성될 수 있다. 따라서, 인간, 비인간, 인간화 및 키메라 항체는 모두 용어 "항체"에 포함된다. 전형적으로 항체는 하기 분류: IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA 중 하나의 단클론 항체이고; 보다 전형적으로는 IgG 또는 IgA이다.
본 발명의 항체는 조류 및 포유류를 포함한 임의의 동물 기원으로부터 유래될 수 있다. 일부 양태에서, 본 발명의 방법의 항체는 인간, 쥐(예를 들면, 마우스 및 랫트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말, 또는 닭이다. 본원에서 사용되는 "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대한 형질전환 동물로부터 분리된 항체를 포함하고, 이는 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는다. 예를 들면, 미국 특허 제5,939,598호(Kucherlapati et al.)를 참조한다.
본 발명의 항체는, 예를 들면, 천연 항체, 무손상 단클론 항체, 다클론 항체, 둘 이상의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이적 항체(예를 들면, 이중특이적 항체), 항체 단편(예를 들면, 하나 이상의 항원에 결합하고/결합하거나 이를 인식하는 항체 단편), 인간화 항체, 인간 항체(문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551(1993)]; [Jakobovits et al., Nature 362:255-258(1993)]; [Bruggermann et al., Year in Immunol. 7:33(1993)]; 미국 특허 제5,591,669호 및 제5,545,807호), 항체 파지 라이브러리로부터 단리된 항체 및 항체 단편(문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554(1990)]; [Clackson et al., Nature 352:624-628(1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597(1991)]; [Marks et al., Bio/Technology 10:779-783(1992)]; [Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21:2265-2266(1993)])을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 정제된 항체는 이종 폴리펩티드에 재조합적으로 융합될 수 있거나 폴리펩티드 또는 기타 조성물에 화학적으로 컨쥬게이션(공유결합 및 비공유결합 컨쥬게이션)될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 방법에 의해 정제된 항체는 검출 검정에서 표식으로서 유용한 분자 및 이펙터 분자, 예를 들면, 이종 폴리펩티드, 약물, 또는 독소에 재조합적으로 융합되거나 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들면, PCT 공보 제WO 92/08495호; 제WO 91/14438호; 제WO 89/12624호; 미국 특허 제5,314,995호; 및 제EP 396,387호를 참조한다.
일부 양태에서, 당해 분야에 잘 알려진 바와 같이, 항체는 하나 이상의 항원에 대한 것일 수 있다. 적합한 항염증성 항체의 예는 항-TNF 알파 항체, 예를 들면, 아달리무맙, 인플릭시맙, 에타네르셉트, 골리무맙, 및 세르톨리주맙 페골; 항-IL1β 항체, 예를 들면, 칸나키누맙; 항-IL12/23(p40) 항체, 예를 들면, 우스테키누맙 및 브리아키누맙; 및 항-IL2R 항체, 예를 들면, 다클리주맙을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 적합한 항암성 항체의 예는 항-BAFF 항체, 예를 들면, 벨리무맙; 항-CD20 항체, 예를 들면, 리툭시맙; 항-CD22 항체, 예를 들면, 에프라투주맙; 항-CD25 항체, 예를 들면, 다클리주맙; 항-CD30 항체, 예를 들면, 이라투무맙, 항-CD33 항체, 예를 들면, 겜투주맙, 항-CD52 항체, 예를 들면, 알렘투주맙; 항-CD152 항체, 예를 들면, 이필리무맙; 항-EGFR 항체, 예를 들면, 세툭시맙; 항-HER2 항체, 예를 들면, 트라스투주맙 및 페르투주맙; 항-IL6 항체, 예를 들면, 실툭시맙; 및 항-VEGF 항체, 예를 들면, 베바시주맙; 항-IL6 수용체 항체, 예를 들면, 토실리주맙을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 특정한 양태에서, 항체 제제는 항-IL6 항체를 포함한다.
일부 양태에서, 항체 제제는 항-IL6 항체를 포함하고, 여기서 항-IL6 항체는 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하고, 여기서 VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고 VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함한다.
서열 번호 7
항-IL6 중쇄 CDR1
Figure pct00001
서열 번호 8
항-IL6 중쇄 CDR2
Figure pct00002
서열 번호 9
항-IL6 중쇄 CDR3
Figure pct00003
서열 번호 10
항-IL6 경쇄 CDR1
Figure pct00004
서열 번호 11
항-IL6 경쇄 CDR2
Figure pct00005
서열 번호 12
항-IL6 경쇄 CDR3
Figure pct00006
일부 양태에서, 항체 제제는 항-IL6 항체를 포함하고, 여기서 항-IL6 항체는 각각 서열 번호 5 및 6를 포함하는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다.
서열 번호5
항-IL6 가변 중쇄
Figure pct00007
서열 번호6
항-IL6 가변 경쇄
Figure pct00008
일부 양태에서, 항체 제제는 서열 번호 3-4로 기재된 바와 같은 항-IL6 항체를 포함한다.
서열 번호 3
항-IL6 항체 중쇄
Figure pct00009
서열 번호 4
항-IL6 항체 경쇄
Figure pct00010
일부 양태에서, 항체 제제 중의 항체는 아달리무맙(후미라(Humira)®, Abbott Laboratories), 에쿨리주맙(솔리리스(Soliris)®, Alexion Pharmaceuticals), 리툭시맙(리틱산(Ritixan)®, Roche/Biogen Idec/Chugai), 인플릭시맙(레미카데(Remicade)®, Johnson & Johnson/Schering-Plough/Tanabe), 트라스투주맙(헤르셉틴(Herceptin)®, Roche/Chugai), 베바시주맙(아바스틴(Avastin)®, Chugai/Roche), 팔리비주맙(사이나기스(Synagis)®, MedImmune/Abbott), 알렘투주맙(캄파쓰(Campath)®, Genzyme), 및 모타비주맙(누막스(Numax)®, MedImmune)으로 이루어진 군으로부터 선택된 시판 중인 항체이다.
일부 양태에서, 항-IL6 항체는 변형된 항-IL6 항체이다. 예를 들면, 일부 양태에서, 항-IL6 항체는 서열 번호 1-2로 나타낸 바와 같은, 항-IL6(YTE)의 혈청 반감기를 증가시키는 것으로 나타난, Fc 도메인의 CH2 도메인에서 3개의 아미노산 치환(M252Y/S254T/T256E)을 함유하는 항-IL6(YTE) 항체이다.
서열 번호 1
항-IL6(YTE) 항체 중쇄
Figure pct00011
서열 번호 2
항-IL6(YTE) 항체 경쇄
Figure pct00012
예를 들면, 문헌 [Dall'Acqua et al., J. Immunol 169:5171-5180(2002)]을 참조한다. 항-IL6(YTE) 항체는 잔기 Asn-300에서 Fc 영역에서 하나의 N-연결된 올리고당 부착면을 함유하는, 약 148 kDa의 총 분자량을 갖는 인간 IgG1κ 단클론 항체이다. 항-IL6(YTE) 항체는 IL-6 수용체 알파 리간드 상호작용 및 후속적인 기능적 현상을 차단하는 것으로 여겨진다. 항-IL6(YTE) 항체의 서열은 서열 번호 1 및 2에서 찾을 수 있다. 항-IL-6 항체의 비제한적인 예는 또한 본원에 이들의 전문이 참조로서 인용되는 제WO 2008/065378호, 제WO 2010/088444호, 미국 특허 제8,198,414호 및 미국 특허 출원 제20120034212호에 기재되어 있다.
예를 들면, 인간 IL-6의 뉴클레오티드 서열은 젠뱅크(GenBank) 데이타베이스에서 찾을 수 있다(예를 들면, 허가 번호 NM 000600.2를 참조한다). 인간 IL-6의 아미노산 서열은 젠뱅크 데이타베이스에서 찾을 수 있다(예를 들면, 허가 번호 P05231을 참조한다) 및 미국 특허 제7,414,024호로 등록되고 2002년 12월 4일 출원된 미국 특허 출원 제10/496,793호(컬럼 1 참조); 및 미국 특허 제7,833,755호로 등록되고 2009년 5월 22일 출원된 미국 특허 출원 제12/470,753호(컬럼 19 참조)에서 찾을 수 있다(인간 IL-6의 아미노산 서열은 본원에 참조로서 특정하게 인용된다). 인간 IL-6은 또한 문헌 [Hirano et al., Nature 324(6092), 73-76(1986)]에 기재되었다. 이들 허가 번호, 특허 출원, 및 학술지 논문 각각은 명확하게 본원에 참조로서 인용된다.
하나의 양태에서, IL-6 폴리펩티드는 인간 IL-6, 아날로그, 유도체 또는 이의 단편이다.
일부 양태에서, 본 발명의 항체 제제는 항-IL-6 항체를 포함한다. 본 발명의 항체는 관심있는 항원 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하고 다른 항원 또는 이의 단편에는 특이적으로 결합하지 않는다. 예를 들면, 항-I6 항체는 인터류킨-6 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합할 것이고, 다른 폴리펩티드에 특이적으로 결합하지 않는다. 바람직하게는, IL-6에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은, 다른 폴리펩티드 또는 다른 폴리펩티드의 단편에 대한 친화성과 비교시, IL-6 또는 IL-6 폴리펩티드의 단편에 대한 높은 친화성을 갖는다. 항체의 친화성은 단일 항원-항체 부위에서 특이적인 항원과 이의 결합 척도이고, 본질적으로 항체의 항원-결합 부위와 특정 에피토프 사이의 상호작용에 존재하는 모든 인력과 척력의 합산이다. 특정 항원(예를 들면, IL-6 폴리펩티드 또는 IL-6 폴리펩티드의 단편)에 대한 항체의 친화성은 식 K = [Ag Ab]/[Ag][Ab]로 정의된 평형 상수 K에 의해 표현될 수 있고, 이는 [Ag]는 자유 항원의 농도, [Ab]는 자유 항체의 농도, [Ag Ab]는 항원-항체 착물의 농도인 항체-결합 부위의 친화성이다. 항원과 항체가 함께 강하게 반응하는 곳에서 자유 항원 또는 자유 항체는 거의 없을 것이고, 그러므로 항체의 평형 상수 또는 친화성은 높을 것이다. 높은 친화성의 항체는 항원과 항체 사이의 우수한 적합성이 존재하는 곳에서 확인된다(항체 친화성에 관한 논의를 위하여, 문헌 [Sigal and Ron ed., 1994, Immunology and Inflammation - Basic Mechanisms and Clinical Consequences, McGraw-Hill, Inc. New York at pages 56-57]; 및 [Seymour et ah, 1995, Immunology - An Introduction for the Health Sciences, McGraw-Hill Book Company, Australia at pages 31-32]을 참조한다). 바람직하게는, IL-6 폴리펩티드 또는 이의 단편에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은 다른 항원과 교차 반응하지 않는다. 즉, 다른 폴리펩티드 또는 다른 폴리펩티드의 단편 보다 높은 에너지로 IL-6 폴리펩티드 또는 이의 단편에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편이다(항체 특이성에 관한 논의를 위하여, 예를 들면, 문헌 [Paul ed., 1989, Fundamental Immunology, 2nd ed., Raven Press, New York at pages 332-336]을 참조한다). IL-6 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은, 예를 들면, 면역분석, 예를 들면, 방사면역분석(RIA: radioimmunoassay), 효소 연결 면역흡착 분석(ELISA: enzyme-linked immunosorbent assays), 및 비아코어(BIAcore) 분석 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 기술로 동정할 수 있다(생체내 항체-항원 상호작용을 측정하기 위한 다양한 분석 논의를 위하여, 예를 들면, 문헌 [Seymour et al, 1995, Immunology - An Introduction for the Health Sciences, McGraw-Hill Book Company, Australia at pages 33-41]을 참조한다). IL-6 폴리펩티드 또는 이의 단편에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은 오직 IL-6 폴리펩티드에만 길항작용하고 다른 활성에는 뚜렷하게 길항작용하지 않는다.
항체의 맥락에서 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "아날로그" 또는 "항체 아날로그"는 항체와 유사하거나 동일한 기능을 보유하지만, 항체와 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 항체와 유사하거나 동일한 구조를 보유할 필요가 없는 제2 항체, 즉 항체 아날로그를 의미한다. 유사한 아미노산 서열을 갖는 항체는 하기 하나 이상을 만족하는 항체 아날로그를 의미한다: (a) 항체의 아미노산 서열과 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 아날로그; (b) 5개 이상의 인접 아미노산 잔기, 10개 이상의 인접 아미노산 잔기, 15개 이상의 인접 아미노산 잔기, 20개 이상의 인접 아미노산 잔기, 25개 이상의 인접 아미노산 잔기, 40개 이상의 인접 아미노산 잔기, 50개 이상의 인접 아미노산 잔기, 60개의 인접 아미노산 잔기, 70개 이상의 인접 아미노산 잔기, 80개 이상의 인접 아미노산 잔기, 90개 이상의 인접 아미노산 잔기, 100개 이상의 인접 아미노산 잔기, 125개 이상의 인접 아미노산 잔기, 또는 150개 이상의 인접 아미노산 잔기의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 엄격한 조건하에 혼성화되는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 항체 아날로그; 및 (c) 항체를 코팅하는 뉴클레오티드 서열과 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 항체 아날로그. 항체와 유사한 구조의 항체 아날로그는 항체와 유사한 2차, 3차 또는 4차 구조를 갖는 단백질성 제제를 의미한다. 항체 아날로그 또는 항체의 구조는 펩티드 시퀀싱, X선 결정학, 핵자기 공명, 원편광 이색성, 및 결정학 전자 현미경을 포함하지만 이에 한정되지 않는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법으로 측정할 수 있다.
2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 동정 백분율을 측정하기 위하여, 최적 비교 목적을 위하여 서열을 정렬한다(예를 들면, 제2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적 정렬을 위하여 제1 아미노산 또는 핵산 서열의 서열에 갭을 도입할 수 있다). 그 다음 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열에서 위치가 제2 서열에서 상응하는 위치로서 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 동정 백분율은 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 동정률(%) = 동일한 겹침 위치의 수/위치의 총 수 x 100%). 하나의 양태에서, 2개의 서열은 동일한 길이이다.
2개의 서열 사이의 동정 백분율의 측정은 또한 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 2개의 서열 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 하나의 비제한적인 예는 문헌 [Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5877]에 의해 수정된 문헌 [Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264-2268]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 문헌 [Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215 :403]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 포함된다. BLAST 뉴클레오티드 검색을 NBLAST 뉴클레오티드 프로그램 파라미터 세트, 예를 들면, 스코어=100, 워드길이=12로 실시하여 본 발명의 핵산 분자와 상동인 뉴클레오티드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 검색을 XBLAST 프로그램 파라미터 세트, 예를 들면, 스코어-50, 워드길이=3로 실시하여 본 발명의 단백질 분자와 상동인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교를 위하여 갭이 있는 정렬을 수득하기 위하여, 문헌 [Altschul et al, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기재된 바와 같이 갭이 있는 갭트(Gapped) BLAST를 이용할 수 있다. 대안적으로, PSI-BLAST는 분자 사이의 먼 관계를 검출하는 반복 검색을 실시하는데 사용될 수 있다(Id). BLAST, 갭트 BLAST, 및 PSI-Blast 프로그램을 이용하는 경우, 각각의 프로그램(예를 들면, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다(예를 들면, NCBI 웹사이트 참조). 서열 비교를 위하여 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 바람직한 비제한적인 예는 문헌 [Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11-17]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 팩키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버젼 2.0)에 포함된다. 아미노산 서열 비교를 위하여 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM 120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티를 사용할 수 있다.
일부 양태에서, 항체 제제 중의 항체는 항체 제제에 가해지기 전에 정제된다. 용어 "단리" 및 "정제"는 항체가 상주하는 조성물, 예를 들면, 숙주 세포 단백질을 포함하는 조성물 중의 불순물 또는 다른 오염물질로부터 항체를 분리하는 것을 의미한다. 일부 양태에서, 불순물 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 또는 99.9%(w/w) 이상이 항체로부터 정제된다. 예를 들면, 일부 양태에서, 항체, 예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체의 정제는 조성물에 본래 존재하는 숙주 세포 단백질의 99%(w/w)로부터 항체를 분리하는 것을 포함할 것이다.
일부 양태에서, 용어 "단리" 및 "정제"는 정부 기관, 예를 들면, 세계 보건 기구 또는 미국 식품 의약품 관리국의 지침과 일치하는 정도로 조성물 중의 불순물 또는 다른 오염물질로부터 항체, 예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체를 분리하는 것을 의미한다.
본 발명의 항체 제제는 약제학적 목적을 위하여 사용될 수 있다. 약제학적 적용에서 사용되는 항체는 일반적으로, 특히 세포성 단백질 오염물질, 세포성 DNA 오염물질, 바이러스 및 다른 전염성 제제를 포함하는 세포 배양으로부터의 오염물질에 관하여, 높은 수준의 순도를 가져야 한다. 문헌 ["WHO Requirements for the use of animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals: Requirements for Biological Substances No. 50." No. 878. Annex 1, 1998]을 참조한다. 오염물질에 대한 우려에 대응하여, 세계 보건 기구(WHO: World Health Organization)는 다양한 오염물질의 수준을 한정하였다. 예를 들면, WHO는 단백질 생성물에 대하여 투여량 당 10 ng 미만의 DNA 허용치를 권고하였다. 이와 같이, 미국 식품 의약품 관리국(FDA: United States Food and Drug Administration)은 0.5 pg/mg 단백질 이하의 DNA 허용치를 설정하였다. 따라서, 일부 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 정부 기관, 예를 들면, 미국 식품 의약품 관리국 및/또는 세계 보건 기구에 의해 정의된 바와 같은 오염물질 허용치를 만족하거나 초과하는 항체 제제에 관한 것이다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 제제는 약제학적으로 허용된다. "약제학적으로 허용되는"은, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하여 과도한 독성 또는 다른 문제 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하는데 적합한 항체 제제를 의미한다.
항체 제제의 순도는 다양할 수 있다. 일부 양태에서, 관심있는 치료학적 항체, 예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체는 항체 제제 중에 존재하는 총 폴리펩티드의 90%(wt/wt)를 초과한다. 일부 양태에서, 관심있는 치료학적 항체, 예를 들면, 항-IL6(YTE)는 항체 제제 중에 존재하는 총 폴리펩티드의 95%(wt/wt), 98%(wt/wt), 99%(wt/wt), 99.5%(wt/wt) 또는 99.9%(wt/wt)를 초과한다.
항체 제제 중의 항체의 농도는 다양할 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제 중의 항체 농도는 약 20 mg/mL 초과, 약 50 mg/mL 초과, 약 75 mg/mL 초과, 약 100 mg/mL 초과, 약 125 mg/mL 초과, 약 150 mg/mL 초과, 약 175 mg/mL 초과, 또는 약 200 mg/mL 초과이다. 일부 양태에서, 항체 제제 중의 항체 농도는 약 20 mg/mL 내지 300 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 175 mg/mL, 약 125 mg/mL 내지 약 175 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 100 mg/mL, 또는 약 150 mg/mL이다.
본 발명의 항체 제제는 아르기닌을 포함할 수 있다. 아르기닌은 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 조건부의 비-필수 아미노산이다:
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본원에 사용되는 바와 같이, 아르기닌은 아르기닌의 유리 염기 형태, 뿐만 아니라 이의 임의의 및 모든 염을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 아르기닌은 약제학적으로 허용되는 이의 염을 포함한다. 예를 들면, 아르기닌은 아르기닌 하이드로클로라이드를 포함할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같이, 아르기닌은 또한 모든 거울상이성질체(예를 들면, L-아르기닌 및 D-아르기닌), 및 거울상이성질체의 임의의 조합(예를 들면, 50% L-아르기닌 및 50% D-아르기닌; 90%-100% L-아르기닌 및 10%-0% D-아르기닌 등)을 포함한다. 일부 양태에서, 용어 "아르기닌"은 99% L-아르기닌 초과 및 1% D-아르기닌 미만을 포함한다. 일부 양태에서, 용어 "아르기닌"은 거울상이성질체적으로 순수한 L-아르기닌을 포함한다. 일부 양태에서, 아르기닌은 약제학적 등급의 아르기닌이다.
아르기닌은 다양한 항체, 예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체를 열역학적으로 불안정하게 만드는 것으로 예상된다. 예를 들면, 도 1을 참조한다. 당해 분야의 숙련가는 제공된 단백질, 예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체에 대한 불안정화제, 예를 들면, 아르기닌의 증가된 양이 이의 본래 형태로부터 단백질 구조를 변경하는, 예를 들면, 이를 변성시키는 증가된 능력을 가질 수 있다는 것을 예상할 수 있다. 임의의 특정한 이론과 결부되지 않고, 본 발명자들은, 심지어 항체 제제 중의 아르기닌 양의 증가가, 사실, DSC에 의해 측정된 용융 온도를 감소시킴에도 불구하고, 저장시 SE-HPLC 분해율에 의해 측정된 바와 같이, 아르기닌이 항-IL6(YTE) 항체에 대해 불안정화 효과 보다는 안정화 효과를 제공하였음을 발견하였다. 따라서, 일부 양태에서, 높은 농도의 아르기닌은 항체 제제에 존재할 수 있고 제제 중의 항체에 안정화 효과를 제공할 수 있다.
아르기닌의 다양한 농도가 항체 제제 중에 존재할 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제는 20 mM 초과의 아르기닌, 25 mM 초과의 아르기닌, 50 mM 초과의 아르기닌, 75 mM 초과의 아르기닌, 100 mM 초과의 아르기닌, 125 mM 초과의 아르기닌, 150 mM 초과의 아르기닌, 175 mM 초과의 아르기닌, 200 mM 아르기닌, 205 mM 초과의 아르기닌, 210 mM 초과의 아르기닌, 215 mM 초과의 아르기닌, 220 mM 초과의 아르기닌, 230 mM 초과의 아르기닌, 240 mM 초과의 아르기닌, 250 mM 초과의 아르기닌, 275 mM 초과의 아르기닌, 300 mM 초과의 아르기닌, 또는 350 mM 초과의 아르기닌을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 200 mM 초과의 아르기닌을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 220 mM 초과의 아르기닌을 포함한다.
일부 양태에서, 항체 제제는 800 mM 이하의 아르기닌, 700 mM 이하의 아르기닌, 650 mM 이하의 아르기닌, 600 mM 이하의 아르기닌, 550 mM 이하의 아르기닌, 500 mM 이하의 아르기닌, 450 mM 이하의 아르기닌, 또는 400 mM 이하의 아르기닌을 포함한다.
일부 양태에서, 항체 제제는 25 mM 내지 600 mM의 아르기닌, 50 mM 내지 600 mM의 아르기닌, 75 mM 내지 600 mM의 아르기닌, 100 mM 내지 600 mM의 아르기닌, 125 mM 내지 500 mM의 아르기닌, 150 mM 내지 400 mM의 아르기닌, 175 mM 내지 400 mM의 아르기닌, 200 mM 내지 350 mM의 아르기닌을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 150 mM 내지 400 mM의 아르기닌을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이, 상승된 농도의 아르기닌을 포함하는 항체 제제는 시간이 지남에 따라 증가된 안정성을 갖는다. 항체 제제 중의 항체의 안정성은 다양한 수단으로 측정할 수 있다. 일부 양태에서, 항체 안정성은 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정된다. SEC는 이들의 유체역학적 크기, 확산 계수, 및 표면 특성의 조합을 기반으로 하여 분석물(예를 들면, 단백질 및 항체와 같은 고분자)을 분리한다. 따라서, 예를 들면, SEC는 다양한 상태로 변성된 항체 및/또는 분해된 항체로부터 이의 천연 3차 형태의 항체를 분리할 수 있다. SEC에서, 정지상은 일반적으로 유리 또는 강철 컬럼 사이에서 밀도 높은 3차 매트릭스 내로 팩킹된 불활성 입자로 조성된다. 이동상은 순수한 물, 수성 버퍼, 유기 용매, 이들의 혼합물, 또는 기타 용매일 수 있다. 정지상 입자는 특정한 크기 이하의 종만이 들어가도록 허용하는 작은 기공 및/또는 채널을 갖는다. 큰 입자는 따라서 이들 기공 및 채널로부터 배제되지만, 더 작은 입자는 흐르는 이동상으로부터 제거된다. 입자가 정지상 기공에 고정되는데 소비되는 시간은, 부분적으로, 이들이 어느 범위까지 기공으로 투과될 수 있는지에 따라 좌우된다. 이동상 흐름으로부터 이들의 제거는 컬럼으로부터 용리되는 시간이 더 길어짐을 유발하고, 이들의 크기 차이를 기반으로 한 입자 사이의 분리를 야기한다.
일부 양태에서, SEC는 단백질, 또는 이의 단편을 동정하거나 특성화하는 동정 기술과 조합된다. 단백질 동정 및 특성화는 크로마토그래피 기술, 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC: high-performance liquid chromatography), 면역분석법, 전기영동, 자외선/가시광선/적외선 분광법, 라만 분광법, 표면 증강 라만 분광법, 질량 분광법, 기체 크로마토그래피, 정적 광 산란(SLS: static light scattering), 푸리에 변환 적외선 분광법(FTIR: Fourier Transform Infrared Spectroscopy), 원편광 이색성(CD: circular dichroism), 우레아-유도 단백질 언폴딩 기술, 고유 트립토판 형광, 시차 주사 열량법, 및/또는 ANS 단백질 결합을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다.
일부 양태에서, 단백질 동정은 고압 액체 크로마토그래피에 의해 달성된다. HPLC를 실시하기 위하여 다양한 장치 및 기구가 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 일반적으로 HPLC는 분리가 발생하는 분리 컬럼 상에 관심있는 단백질을 함유하는 액체 용매를 로딩하는 것을 포함한다. HPLC 분리 컬럼은 고체 입차(예를 들면, 실리카, 중합체, 또는 흡착제)로 채워지고, 시료 혼합물은 컬럼 입자와 상호작용함으로써 화합물로 분리된다. HPLC 분리는 액체 용매의 조건(예를 들면, 압력, 온도), 시료 혼합물과 액체 용매 사이의 화학적 상호작용(예를 들면, 소수성, 양성자부가 등), 시료 혼합물과 분리 컬럼 내부에 팩킹된 고체 입자 사이의 화학적 상호작용(예를 들면, 리간드 친화성, 이온 교환 등)에 영향을 받는다.
일부 양태에서, SEC 및 단백질 동정은 동일한 장치 내에서, 또는 동시에 발생한다. 예를 들면, SEC 및 HPLC는 조합될 수 있고, 이는 SE-HPLC로 종종 언급된다.
본원에서 확인된 이들 기술과 같은 공지된 기술을 사용하여 다양한 항체 및 항체 분해 생성물을 분리함으로써, 항체 제제 중의 항체 안정성을 측정할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "안정성"은 일반적으로 생물학적 활성제, 예를 들면, 단백질, 펩티드 또는 또 다른 생활성 고분자의 온전함을 유지하는 것 또는 이들의 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩을 최소화하는 것에 관한 것이다. 본원에서 사용되는 "개선된 안정성"은 일반적으로, 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩을 야기하는 것으로 알려진 조건하에, 관심있는 단백질(예를 들면, 항-IL6(YTE)와 같은 항체), 펩티드 또는 또 다른 생활성 고분자가 대조군 단백질, 펩티드 또는 또 다른 생활성 고분자에 비해 더 큰 안정성을 유지하는 것을 의미한다. 예를 들면, 구 "아르기닌 존재하에 개선된 안정성"은 아르기닌 존재하에 관심있는 단백질, 예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체가, 아르기닌 부재하에 동일한 항체에 비해, 항-IL6(YTE) 항체의 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩의 감소된 양을 갖는 것을 반영할 것이다.
일부 양태에서, 안정성은 검출되지 않는 수준으로 낮은 응집을 갖는 항체 제제를 의미한다. 본원에서 사용되는 구절 "검출되지 않는 수준으로 낮은 응집"은 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC: high performance size exclusion chromatography), 정적 광 산란(SLS), 푸리에 변환 적외선 분광법(FTIR), 원편광 이색성(CD), 우레아-유도 단백질 언폴딩 기술, 고유 트립토판 형광, 시차 주사 열량법, 및 1-아닐리노-8-나프탈렌설폰산(ANS) 단백질 결합 기술에 의해 측정될 때, 단백질 중량의 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하, 1% 이하 및 0.5% 이하의 응집을 함유하는 시료를 의미한다.
일부 양태에서, 항체 제제는 검출되지 않는 수준으로 낮은 단편화를 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "검출되지 않는 수준으로 낮은 단편화"는 분해되지 않은 항체 또는 분해되지 않은 이의 단편을 나타내는, 예를 들면, HPSEC에 의해 측정될 때, 단일 피크로 또는 환원 모세관 겔 전기영동(rCGE: reduced Capillary Gel Electrophoresis)에 의한 바, 2개의 피크(예를 들면, 중쇄 및 경쇄)(또는 하위단위가 존재하는 만큼 많은 피크)로 총 단백질의 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 이상을 함유하고, 총 단백질의 5% 초과, 4% 초과, 3% 초과, 2% 초과, 1% 초과, 또는 0.5% 초과하는 다른 단일 피크를 함유하지 않는 시료를 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "환원 모세관 겔 전기영동"은 항체 중의 이황화 결합을 환원시키기에 충분한 환원 조건하에 모세관 겔 전기영동을 의미한다.
당해 분야의 숙련가는 단백질의 안정성이 제제의 조성물 이외에 다른 특징에 따라 좌우된다는 것을 인식할 것이다. 예를 들면, 안정성은 온도, 압력, 습도, 및 방사선의 외형에 영향을 받을 수 있다. 따라서, 달리 특정되지 않는 한, 본원에서 지칭되는 안정성은 2-8℃, 1 대기압, 60% 상대 습도, 및 방사선의 정상 바탕 준위에서 측정되는 것으로 여겨진다.
용어 "안정한"은 상대적인 것이고 절대적이지 않다. 따라서, 본원에서 목적을 위하여, 일부 양태에서 항체를 2℃ 내지 8℃에서 6 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서, 항체를 2℃ 내지 8℃에서 12 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서, 항체를 2℃ 내지 8℃에서 18 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서, 항체를 2℃ 내지 8℃에서 24 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다.
일부 양태에서, 항체를 23℃ 내지 27℃에서 3 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서, 항체를 23℃ 내지 27℃에서 6 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서, 항체를 23℃ 내지 27℃에서 12 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서, 항체를 23℃ 내지 27℃에서 24 개월 동안 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다.
일부 양태에서 항체를 40℃에서 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 개월 당 항체의 6% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다. 일부 양태에서 항체를 5℃에서 저장시, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 개월 당 항체의 6% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만이 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩되는 경우에 항체는 안정하다.
일부 양태에서, 본 발명의 항체 제제는 예를 들면, ELISA 등과 같은 당해 분야의 숙련가에게 알려진 항체 결합 분석에 의해 측정될 때, 참조 항체와 비교하여 8 주, 4 개월, 6 개월, 9 개월, 12 개월 또는 24 개월의 기간 동안 항체가 제제의 항체(이의 항체 단편 포함)의 결합 활성의 손실이 매우 적거나 없는 것으로 나타내는 경우, 본 발명의 항체 제제는 안정하다고 여겨질 수 있다.
본원에 기재된 항체 제제는 다양한 점도를 갖을 수 있다. 항체 제제의 점도 측정 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있고, 예를 들면, 레오미터(예를 들면, 50 mm, 40 mm 또는 20 mm 콘 액세서리가 있는 안톤 파아르(Anton Paar) MCR301 레오미터)를 포함할 수 있다. 본 발명의 일부 양태에서, 점도는 초 당 1000 전단 속도의 고 전단 한계에서 보고되었다. 일부 양태에서, 항체 제제는 20 cP 미만, 18 cP 미만, 15 cP 미만, 13 cP 미만, 또는 11 cP 미만의 점도를 갖는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 14 cP 미만의 점도를 갖는다. 당해 분야의 숙련가는 점도가 온도에 따라 좌우된다는 것을 인식할 것이고, 따라서, 달리 특정되지 않는 한, 본원에 제공된 점도는 달리 특정되지 않는 한 23℃에서 측정된다. 일부 양태에서, 항체 제제의 점도는 23℃에서 14 cP 미만이다.
용어 "주입력"은 바늘을 통해 항체 제제를 통과하는데 필요한 압력의 양(뉴턴 단위)이다. 주입력은 대상에 항체 제제를 투여시 항체 제제에 의해 제공된 저항의 양과 상관이 있다. 주입력은 투여 바늘의 게이지, 뿐만 아니라 온도에 따라 좌우될 것이다. 일부 양태에서, 항체 제제는 국제 표준화 기구(ISO: International Organization for Standardization) 문서 ["Stainless steel needle tubing for the manufacture of medical devices"(ISO 9626:1991)]에서 정의되고 BD 메디칼, 파라마슈티컬 시스템스(BD Medical, Pharmaceutical Systems, Franklin Lakes, NJ)에 의해 제조된 27 Ga 박벽 PFS 바늘을 통해 통과시 15 N, 12 N, 10N, 또는 8 N 미만의 주입력을 갖는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 25 또는 26 게이지 바늘을 통해 통과시 15 N, 12 N, 10N, 또는 8 N 미만의 주입력을 갖는다.
항체 제제는 상이한 오스몰 농도를 갖을 수 있다. 항체 제제의 오스몰 농도 측정 방법은 당해 분야의 숙련가에게 알려져 있고, 예를 들면, 삼투압계(예를 들면, 어드밴스드 인스트루먼트 인크 2020(Advanced Instrument Inc 2020) 어는점 내림 삼투압계)를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 제제은 200 내지 600 mosm/kg, 260 내지 500 mosm/kg, 또는 300 내지 450 mosm/kg의 오스몰 농도를 갖는다. 일부 양태에서, 제제은 오스몰라이트를 포함하지 않는다.
본 발명의 항체 제제는 다양한 pH 수준을 갖을 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제의 pH는 4 내지 7, 4.5 내지 6.5, 또는 5 내지 6이다. 일부 양태에서, 항체 제제의 pH는 6.0이다. 적절한 버퍼의 첨가를 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 수단을 목적하는 pH 수준을 달성하기 위하여 사용할 수 있다.
다양한 기타 성분이 항체 제제에 포함될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제는 버퍼(예를 들면, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 버퍼), 계면활성제(예를 들면, 폴리소르베이트), 및/또는 안정화제(예를 들면, 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 항체 제제는, 예를 들면, 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 혈청 단백질, 예를 들면, 인간 혈청 알부민, 버퍼 성분, 예를 들면, 포스페이트, 수크로스, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분적 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예를 들면, 황산프로타민, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 약제학적 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 항체 제제는 추가로 계면활성제를 포함한다. 일부 양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트, 플루로닉, 브리지, 및 기타 비이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 제제 중의 계면활성제 농도는 다양할 수 있다. 예를 들면, 일부 양태에서 제제 중의 계면활성제 농도는 약 0.001% 내지 약 1%, 약 0.005% 내지 약 0.5%, 약 0.0.01% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.05% 내지 약 0.07%이다.
일부 양태에서, 항체 제제는 추가로 히스티딘을 포함한다. 일부 양태에서, 제제 중의 히스티딘 농도는 약 5 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 약 20 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 25 mM이다.
일부 양태에서, 다양한 성분이 항체 제제로부터 제외될 수 있거나, 그 성분을 "실질적으로 함유하지 않을" 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "실질적으로 함유하지 않음"은 상기 제제가 지정된 성분을 0.01% 미만, 0.001% 미만, 0.0005% 미만, 0.0003% 미만, 또는 0.0001% 미만으로 함유하는 항체 제제를 의미한다.
일부 양태에서, 제제은 트레할로스를 실질적으로 함유하지 않고, 즉, 항체 제제는 트레할로스를 0.01% 미만, 0.001% 미만,% 0.0005% 미만, 0.0003% 미만, 또는 0.0001% 미만으로 함유한다. 일부 양태에서, 제제은 트레할로스를 약 10 mM 내지 약 1000 mM, 약 50 mM 내지 약 500 mM, 약 100 mM 내지 약 350 mM, 약 150 mM 내지 약 250 mM, 약 180 mM 또는 약 225 mM 농도로 포함한다. 일부 양태에서, 트레할로스는 아르기닌과 조합으로 사용된다. 아르기닌 및 트레할로스의 농도는 다양할 수 있고 서로 독립적일 수 있다. 일부 양태에서, 아르기닌:트레할로스의 몰비는 약 0:1, 약 1:20, 약 1:10, 약 1:8, 약 1:5, 약 1:2, 약 1:1, 약 2:1, 약 5:1, 약 10:1, 또는 약 10:0일 수 있다.
일부 양태에서, 항체 제제는 당류를 실질적으로 함유하지 않고, 즉 상기 항체 제제는 당류를 0.01% 미만, 0.001% 미만, 0.0005% 미만, 0.0003 미만%, 또는 0.0001% 미만으로 함유한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "당류"는 다가 알코올의 유도체인 분자 분류를 의미한다. 당류는 통상적으로 탄수화물로서 지칭되며 상이한 양의 당(당류) 단위, 예를 들면, 단당류, 이당류 및 다당류를 함유할 수 있다. 일부 양태에서, 제제은 이당류를 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 양태에서, 제제은 환원당, 비환원당, 또는 당알코올을 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 히스티딘, 프롤린, 글루타메이트, 소르비톨, 이가 금속 이온, 및/또는 석시네이트를 실질적으로 함유하지 않는다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 항체, 예를 들면, 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항-IL6 항체, (b) 150 mM 내지 400 mM의 아르기닌, (c) 0.01% 내지 0.1%의 폴리소르베이트 80, (d) 5 mM 내지 100 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 항체, 예를 들면, 항-IL6 항체 150 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 220 mM 아르기닌(예를 들면, 아르기닌 HCl), 및 (d) 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 항체, 예를 들면, 항-IL6 항체 150 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 150 mM 아르기닌(예를 들면, 아르기닌 HCl), 및 (d) 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 항체, 예를 들면, 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 항-IL6 항체, (b) 20 mM 내지 400 mM의 아르기닌, (c) 0.01% 내지 0.1%의 폴리소르베이트 80, (d) 5 mM 내지 100 mM의 히스티딘, 및 임의로 (e) 약 50 mM 내지 약 400 mM의 트레할로스를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 항체, 예를 들면, 항-IL6 항체 50 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 225 mM 트레할로스, 및 (d) 0.05%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 항체, 예를 들면, 항-IL6 항체 100 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 180 mM 트레할로스, (d) 25 mM 아르기닌, 및 (e) 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항체, (b) 150 mM 내지 400 mM의 아르기닌, (c) 0.01% 내지 0.1%의 폴리소르베이트 80, (d) 10 mM 내지 50 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 150 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 220 mM 아르기닌(예를 들면, 아르기닌 HCl), 및 (d) 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 150 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 150 mM 아르기닌(예를 들면, 아르기닌 HCl), 및 (d) 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 항체, (b) 20 mM 내지 400 mM의 아르기닌, (c) 0.01% 내지 0.1%의 폴리소르베이트 80, (d) 5 mM 내지 100 mM의 히스티딘, 및 임의로 (e) 약 50 mM 내지 약 400 mM의 트레할로스를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제에 관한 것이고, 여기서 항체 제제는 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 50 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 225 mM 트레할로스, 및 (d) 0.05%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 제제는 pH 6.0에서 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 100 mg/mL, (b) 25 mM 히스티딘(예를 들면, L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트), (c) 180 mM 트레할로스, (d) 25 mM 아르기닌, 및 (e) 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제를 투여함으로써 염증성 통증 요소가 있는 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제를 투여함으로써 활성화된 IL-6 의존 경로가 있는 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 대상에서 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제의 투여를 포함하는, 대상에서 골관절염과 관련된 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제의 투여를 포함하는, 대상에서 만성 하부 요통과 관련된 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 "대상"은 "환자"와 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 인간 및 비-인간, 예를 들면, 이로써 한정되지 않지만, 가축 및 사육 동물, 동물원 동물, 스포츠 동물, 및 애완동물을 포함하는 포유동물로서 분류되는 임의의 동물을 의미한다.
용어 "치료하다" 및 "치료"는 치료학적 및 예방학적 치료 둘 다, 유지, 또는 예방책을 의미하고, 여기서 목적은 원치않는 생리학적 상태, 장애 또는 질환을 예방하거나 완화(경감)시키는 것 또는 유리하거나 목적하는 임상적 결과를 수득하는 것이다. 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료함"은 이러한 질환 또는 장애(예를 들면, IL-6 폴리펩티드의 일탈적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-6 수용체 또는 이의 하나 이상의 하위단위의 일탈적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 증식성 질환, 또는 감염(바람직하게는, 호흡기 감염))의 진행, 중증도, 및/또는 지속기간의 감소 또는 완화 또는 하나 이상의 요법(하나 이상의 예방학적 또는 치료학적 제제의 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다) 투여로부터 야기된 이의 하나 이상의 증상의 완화를 의미한다. 특정한 양태에서, 이러한 용어들은 다양한 상태와 관련된 통증의 감소를 의미한다. 다른 양태에서, 이러한 용어들은 비만 세포에 의한 염증성 물질의 방출의 감소, 또는 이러한 염증성 물질의 생물학적 효과의 감소를 의미한다. 다른 양태에서, 이러한 용어들은 과증식성 세포(예를 들면, 암 세포)의 수에서 성장, 형성 및/또는 증가의 감소를 의미한다. 다른 양태에서, 이러한 용어들은 원발성, 지역적 또는 전이성 암의 박멸, 제거 또는 제어(예를 들면, 암 확산의 최소화 또는 지연)를 의미한다. 다른 양태에서, 이러한 용어들은 비소세포 폐암의 박멸, 제거 또는 제어(예를 들면, 암 확산의 최소화 또는 지연)을 의미한다. 다른 양태에서, 이러한 용어들은 류마티스성 관절염의 박멸, 제거 또는 제어를 의미한다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제의 투여를 포함하는, 대상에서 류마티스성 관절염을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 제제의 치료학적 유효량을 투여하여 상태를 치료한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료학적 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들면, IL-6 폴리펩티드의 일탈적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-6 수용체 또는 이의 하나 이상의 하위단위의 일탈적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 증식성 질환, 또는 감염(바람직하게는, 호흡기 감염) 또는 이의 하나 이상의 증상)의 중증도 감소, 호흡기 상태의 지속기간 감소, 이러한 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 완화, 이러한 질환 또는 장애의 발달의 예방, 이러한 질환 또는 장애의 퇴행 유발, 또 다른 요법의 치료학적 효과(들)의 강화 또는 개선하는데 충분한 요법(예를 들면, IL-6 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체)의 양을 의미한다. 일부 양태에서, 치료학적 유효량은 사전에 특정될 수 있고, 다양한 수단, 예를 들면, 용량 적정을 사용하여 간병인, 예를 들면, 의사 또는 다른 의료진에 의해 결정될 수 있다. 적절한 치료학적 유효량은 또한, 예를 들면, 동물 모델을 사용하여 일상적 실험에 의해 결정될 수 있다.
용어 "요법들" 및 "요법"은 질환 또는 장애(예를 들면, IL-6 폴리펩티드의 일탈적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-6 수용체 또는 이의 하나 이상의 하위단위의 일탈적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 증식성 질환, 또는 감염(바람직하게는, 호흡기 감염) 또는 이의 하나 이상의 증상)의 예방, 치료, 관리, 또는 완화에 사용될 수 있는 임의의 프로토콜(들), 방법(들), 및/또는 제제(들)를 의미할 수 있다. 특정한 양태에서, 용어 "요법들" 및 "요법"은 항바이러스 요법, 항박테리아 요법, 항진균 요법, 생물학적 요법, 지지 요법, 및/또는 이러한 질환 또는 장애 또는 숙련된 의료진에게 공지된 하나 이상의 증상의 치료, 관리, 예방, 또는 완화에 유용한 기타 요법을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료학적 프로토콜"은 치료학적 효과를 갖는 하나 이상의 요법(예를 들면, 치료학적 제제)의 투여의 용량 및 시기를 위한 계획을 의미한다.
본 발명의 항체 제제의 투여 경로는, 예를 들면, 투여의 경구, 비경구, 흡입 또는 국소적 방식을 경유할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 비경구는, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피하, 직장 또는 질 투여를 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 항체는 항-IL6 항체(예를 들면, 항-IL6(YTE) 항체)이고, 투여 경로는 피하 주입이다. 모든 이러한 투여 형태는 본 발명의 범위 내로 분명하게 고려된다. 일부 양태에서, 항체 제제는 주입를 통한 투여, 특히 정맥내 또는 동맥내 주입 또는 드립에 적합하다.
일부 양태에서, 항체 제제는 대상에게 투여 전에 정맥내 제제으로 희석된다. 일부 예에서, 정맥내 제제, 예를 들면, IV 백으로 항체 제제 희석시 가시적 입자 형성이 발생할 수 있다. 입자 형성을 해결하기 위하여, 일부 양태에서, 항체 제제에 첨가 전 정맥내 백으로 버퍼 및 계면활성제를 첨가하는 것을 포함함으로써 정맥내 백으로 항체 제제 희석시 입자 형성을 감소시키는 방법이 제공된다.
용어 "IV 백 보호제"는 정맥내 백으로 본원에 기재된 항체 제제의 희석 전에 정맥내 백에 첨가된 계면활성제를 의미한다. IV 백 보호제는 또한 당해 분야의 숙련가에게 알려진 다른 항체 제제, 예를 들면, 동결건조된 항체 제제의 첨가 전에 정맥내 백에 첨가될 수 있다.
IV 백 보호제로서 사용에 적합한 계면활성제는 일반적으로 IV 제제에 사용하기에 적합한 것들일 것이다. 일부 양태에서, IV 백 보호제에 사용되는 계면활성제는 항체 제제에 사용되는 동일한 버퍼이다. 예를 들면, 항체 제제가 계면활성제로서 폴리소르베이트 80을 포함하는 경우, 정맥내 백에 항체 제제 첨가 전에 폴리소르베이트 80을 정맥내 백에 첨가할 수 있다.
일부 양태에서, IV 백 보호제는, IV 제제에 첨가시, IV 제제 중의 약 0.006% 내지 약 0.018% 계면활성제, 약 0.008% 내지 약 0.015% 계면활성제, 약 0.009% 내지 약 0.012% 계면활성제, 약 0.009% 계면활성제, 약 0.010% 계면활성제, 약 0.011% 계면활성제 또는 약 0.012% 계면활성제 범위의 계면활성제 농도를 제공할 계면활성제를 포함한다. 일부 양태에서, 계면활성제는, IV 제제에 첨가시, IV 제제 중의 약 0.006% 내지 약 0.018% 계면활성제, 약 0.008% 내지 약 0.015% 계면활성제, 약 0.009% 내지 약 0.012% 계면활성제, 약 0.009% 계면활성제, 약 0.010% 계면활성제, 약 0.011% 계면활성제 또는 약 0.012% 계면활성제 범위의 계면활성제 농도를 생성할 폴리소르베이트 80(PS80)이다. 일부 양태에서, IV 보호제 첨가를 야기하는 IV 백 중의 계면활성제 농도는 항체 제제 중의 계면활성제 농도와 동일하거나, 약 절반이거나, 약 7분의 1일 것이다.
IV 백 중의 계면활성제의 목적하는 최종 농도를 아는 경우, IV 백 보호제 중의 계면활성제의 목적하는 농도를 제형화할 수 있다. 예를 들면, 일부 양태에서, IV 백 보호제는 약 0.01% 내지 약 10.0% 계면활성제, 약 0.05% 내지 약 5% 계면활성제, 약 0.1% 내지 약 2% 계면활성제, 또는 약 0.5% 내지 약 1% 계면활성제를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명은 (1) 항체 제제, 및 (2) IV 보호제 제제을 포함하는 키트에 관한 것일 수 있다. 일부 양태에서, 본 발명은 (1) 항체 제제, 및 (2) IV 보호제를 포함하는 키트에 관한 것일 수 있고, IV 보호제는 계면활성제를 포함한다. 일부 양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 일부 양태에서, 본 발명은 (1) 본원에 기재된 항체 제제, 및 (2) IV 보호제를 포함하는 키트에 관한 것일 수 있다. 일부 양태에서, 본 발명은 (1) 본원에 기재된 항체 제제, 및 (2) IV 보호제를 포함하는 키트에 관한 것일 수 있고, 여기서 (i) IV 보호제는 IV 제제에 첨가시 약 0.006% 내지 약 0.018% 범위의 폴리소르베이트 80을 생성하는데 충분한 양으로 폴리소르베이트 80을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 IV 제제으로 항체 제제의 희석 전에 IV 제제, 예를 들면, IV 백을 전처리하는 방법에 관한 것이고, 방법은 (1) 본원에 기재된 바와 같은 IV 보호제를 IV 제제에 첨가하는 단계, 및 (2) 항체 제제를 첨가하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 항체를 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL로 농축하는 단계; 및 (b) (a)의 항체에 아르기닌을 첨가하여 약 150 mM 초과의 아르기닌 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제의 제조 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 방법은 (c) 히스티딘을 가하여 10 mM 내지 100 mM의 히스티딘 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 (d) 계면활성제, 예를 들면, 폴리소르베이트 80를 가하여 0.02% 내지 0.1%의 계면활성제 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 항체를 약 100 mg/mL 내지 약 400 mg/mL로 농축하는 단계; 및 (b) (a)의 항체에 아르기닌을 첨가하여 약 100 mM 내지 약 200 mM의 아르기닌 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제의 제조 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 방법은 (c) 히스티딘을 가하여 10 mM 내지 100 mM의 히스티딘 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 (d) 계면활성제, 예를 들면, 폴리소르베이트 80를 가하여 0.02% 내지 0.1%의 계면활성제 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 트레할로스를 가하여 약 100 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스 농도를 갖는 항체 형성을 달성하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 항체를 약 50 mg/mL 내지 약 400 mg/mL로 농축하는 단계; 및 (b) 트레할로스를 (a)의 항체에 가하여 약 100 mM 내지 약 400 mM의 트레할로스 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제의 제조 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 방법은 (c) 히스티딘을 가하여 10 mM 내지 100 mM의 히스티딘 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 (d) 계면활성제, 예를 들면, 폴리소르베이트 80를 가하여 0.02% 내지 0.1%의 계면활성제 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL로 농축시키는 단계; 및 (b) 아르기닌를 (a)의 항체에 가하여 약 150 mM 초과의 아르기닌 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계를 포함하는 안정한 저점도 항체 제제의 제조 방법에 관한 것이고, 여기서 (b)의 항체 제제는 수용액 중이고 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖고, 여기서 (b)의 항체 제제는 SEC HPLC에 의해 측정될 때, 2℃ 내지 8℃에서 12 개월 동안 안정하다.
일부 양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 제조자가 비용 감소, 방법 단계 감소, 오류 기회 감소, 안전하지 않거나 부적절한 첨가제의 도입 기회 감소 등으로 보다 효과적인 방식으로 인간에게 투여하기에 적합한 항체 제제를 제조할 수 있도록 한다. 본 발명에서, 항체 제제는 동결건조된 항체의 재구성 없이 투여될 수 있다.
실시예
실시예 1
< 물질 및 방법 >
물질
사용된 모든 물질은 USP 또는 다중공정서 등급(Multicompendial grade)이었다. 모든 용액 및 버퍼는 USP 또는 HPLC 물을 사용하여 제조하였고, 추가의 사용 전에 0.2 ㎛ PVDF 필터(Millipore, Millex GV, SLG033RB)를 통해 여과하였다. 정제된 항-IL6(YTE)를 정제하였다. 안정성 연구를 위하여 정제된 항-IL6(YTE) 시료를 생물안전 캐비넷 후드(BSC: Biosafety Cabinet Hood)에서 살균 무균성 조건하에 제조하였다. 벌크 물질을 2-8℃에서 저장하였다.
방법
i. 단백질 농도 측정
애질런트(Agilent) UV-Vis 분광광도계로 280 nm에서 흡광도를 측정함으로써 항-IL6(YTE) 항체 농도를 측정하였다. 1.71(mg/mL)-1cm-1의 측정된 흡광 계수를 사용하여 단백질 농도를 계산하였다.
ii. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 순도 측정
280 nm에서 UV 검출로 TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA)이 있는 애질런트 HPLC 시스템에서 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석을 실시하였다. 0.1 M 인산나트륨, 0.1 M 황산나트륨, 및 0.05%(w/v) 아지드화나트륨을 함유하는 pH 6.8 이동상을 사용하여 20 분 동안 1.0 mL/분의 유속을 사용하여 시료를 분석하였다. 단백질 약 250 마이크로그램을 주입하였다. 가용성 응집체, 단량체, 및 단편의 용리가 각각 대략 6 내지 8 분, 8.5 분, 및 9 내지 11.5 분에서 발생하였다.
iii. 역상 크로마토그래피에 의한 단편화 수준의 측정
미크롬 바이오리소시스(Michrom Bioresources) PLRP-S CM810092/00 컬럼이 있는 애질런트 HPLC 시스템을 사용하여 단편화 수준을 측정하였다.
iv. 가시적 외양
PhEur로부터 개조된 과정에 따라(각각 섹션 2.9.20, 2.2.1 및 2.2.2) 가시적 입자, 투명성/유백광, 및 색상에 대하여 육안 검사를 실시하였다.
v. 비-가시적 입자 분석
차광(HIAC 9705) 또는 플로우(Flow) 현미경(Brightwell Microflow Imager, MFI)을 사용하여 비-가시적 입자 분석을 실시하였다.
vi. 오스몰 농도
어드밴스 인스트루먼트 인크 2020 어는 점 내림 삼투압계를 사용하여 오스몰 농도를 측정하였다.
vii. 점도 평가
안톤 파아르 MCR301 레오미터를 사용하여 다양한 농도에서 항-IL6(YTE) 제제의 점도를 측정하였다.
viii. 제제 안정성 연구
상이한 부형제와 제형화된 항-IL6(YTE) 항체를 투명한 3 cc, 13 mm 유리 바이알에 채웠다. 가속화된 스크리닝을 위하여, 시료를 40℃/75% RH 및 25℃/60% RH 및 5℃에서 안정성에 대해 배치하였다. 시료를 SEC HPLC, RP HPLC로 분석하고, 바이알을 입자에 대해 육안으로 검사하였다. 선택된 것 이외에 시간점에서, 적절한 경우, 효능, 오스몰 농도, pH, HIAC, 및 MFI에 대해 분석하였다.
ix. 혼탁도를 이용한 콜로이드성 안정성 스크리닝
약 62℃의 상승된 온도에 적용시 캐리 이클립스(Cary Eclipse) 멀티셀 UV-Vis 분광광도계를 사용하여 다양한 항-IL6 항체 제제의 혼탁도 대 시간을 측정함으로써 콜로이드성 안정성을 스크리닝하였다. 시간이 지남에 따라 이들이 입자 및 침전물을 형성함으로써 덜 안정한 제제은 탁해지는 반면(즉, 360 nm에서 더 높은 흡광도를 갖는다), 보다 콜로이드성으로 안정한 제제은 더 장기간 동안 투명하게 남는다.
x. 시차 주사 열량측정을 사용한 열 안정성
1 mg/mL의 단백질 농도에서 96 웰 플레이트를 사용하여 VP-DSC 울트라센스티브(Ultrasensitive) 시차 주사 열량계(Microcal, Northampton, MA)에서 시차 주사 열량측정(DSC) 실험을 실시하였다. 시간 당 90℃의 속도로 시료를 20℃로부터 100℃로 가열하였다. 정상화된 열용량(Cp) 데이타를 버퍼 기초선을 위하여 수집하였다. 제1 용융 전이(Tm1) 및 제2 용융 전이(Tm2)를 사용하여 단백질의 형태적 안정성에 대한 이들의 안정화 효과에 따른 부형제 순위를 매겼다.
xi. 시차 주사 형광분석을 사용한 열 안정성
5X 수준으로(원래 농도는 5000X이다) SYPRO 오렌지 염료(Invitrogen, S6651)를 사용하여 약 0.5 mg/mL의 단백질 농도에서 시차 주사 형광분석(DSF:Differential Scanning Fluorometry) 실험을 실시하였다. 부형제의 스톡을 단백질/염료 스톡(약 5 mg/mL 단백질 및 50X 염료)과 9:1 비율로 혼합하여 다양한 부형제의 등장성 용액으로 제형화된 표적 수준을 달성하였다. 단백질 용액 및 버퍼/부형제와 함께 염료를 96 웰 플레이트에서 웰 당 25 ㎕로 완전히 혼합하였다. 바이오라드 C1000 써멀 사이클러 PCR 플레이트 리더(BioRad C1000 Thermal Cycler PCR plate reader)를 사용하여 언폴딩된 단백질 분자에 대한 염료-결합으로 인한 형광성 증가를 측정하였다. 시료를 3회 운행시키고, 1.2℃/분의 속도를 야기하는 리딩 당 10 s 동안 0.2℃ 증분으로 20℃로부터 90℃로 가열하였다. 형광성의 변곡점을 Th, 단백질의 형태적 안정성의 척도로서 기록하였다.
실시예 2
< 형태적 열 안정성 >
다양한 부형제가 항-IL6(YTE) 항체의 형태적(열) 안정성에 대해 갖는 효과를 실시예 1에 기재된 바와 같이 조사하였다. 결과를 표 1에 나타낸다.
[표 1] 형태적(열) 안정성: 순위 매김된 부형제 효과
Figure pct00014
표 1에서 볼 수 있듯이, 아르기닌은, 특히 25 mM 히스티딘의 염기 버퍼 조건과 비교시, 가장 적은 형태적 안정화 부형제이었다.
추가의 조사는 아르기닌이 심지어 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이 항-IL6(YTE) 항체에 대해 가장 큰 콜로이드성 안정화 부형제로 예상되지 않았다는 것을 입증하였다. 가장 큰 콜로이드성 안정화 부형제는 수크로스 및 트레할로스이었고, 가장 작은 안정화는 NaCl 및 황산나트륨이었다.
실시예 3
< 점도 및 안정화 스크리닝 평가 >
다중 항-IL6(YTE) 항체 제제의 점도 프로파일, 및 안정성을 실시예 1에 기재된 바와 같이 평가하였고, 안정성 및 예상된 주사기 기능성 관점 둘 다에서 허용되는 것으로 확인되었다. 14 cP의 점도는 다시 채운 주사기 생성물에 있어서 박벽 27 게이지 바늘을 사용하여 허용되는 주사기 글라이딩 힘 성능을 야기하는 것으로 예상되었다(약 7 N 주입력 및 9-16 s 주입 시간).
표 2는 100 mg/mL의 항-IL6(YTE) 제제의 안정성 및 점도에 대한 pH, 버퍼 유형, 히스티딘 수준, 및 아르기닌 수준의 영향에 대한 조사를 요약한다.
[표 2]
Figure pct00015
시료 1, 2, 및 3은 항-IL6(YTE) 항체 제제가 더 낮은 pH에서 덜 안정하고 더 점성이 있다는 것을 보여준다. 시료 5, 4, 및 3은 항-IL6(YTE) 항체 제제 중의 아르기닌 수준의 증가가, 둘 다 바람직한 특성인, 더 높은 안정성 및 더 낮은 점도를 야기한다는 것을 보여준다. 시료 5 및 6은 히스티딘 버퍼 강도의 증가가 또한 점도를 감소시키고 안정성을 증가시킬 수 있다는 것을 보여준다. 히스티딘 첨가의 접근은 시간이 지남에 따라 황색화되는 알려진 잠재적인 문제로 인하여 추가로 추구되지 않았다. 이들 결과는 모든 시험된 조합에 있어서 점도 및 안정성은 pH 5 내지 6 범위에서 허용되었다는 것을 보여준다. pH 6.0에서 더 높은 아르기닌 수준은 항-IL6(YTE)의 안정성 및 점도 둘 다에 최적인 것으로 보인다.
다양한 부형제를 사용하는 항-IL6(YTE) 항체 제제의 점도 프로파일을 평가하여 어떤 조건이 150 mg/mL 제제에 최적일 수 있는지 평가하였다. 도 2A를 참조한다. 트레할로스, 수크로스 및 소르비톨은 서로 유사한 점도 프로파일을 가졌고, 염은 점도를 효과적으로 감소시키지 않았다. 데이타는 염이 항체 제제의 점도를 감소시키는데 무능함을 갖는 것을 나타낸다. 도 2B는 아르기닌, 글루타메이트, 염화나트륨, 및 트레할로스가 점도에 대하여 갖는 효과를 입증한다.
항-IL6(YTE) 항체 제제 점도에 대한 다양한 추가의 부형제의 효과를 조사하였다. 결과는 표 3에서 확인된다.
[표 3]
Figure pct00016

증가된 아르기닌 수준은 더 낮은 점도 프로파일을 야기하였다(도 3 및 도 4). 25 mM 만큼 낮은 아르기닌은 100 mg/mL에서 명목상 10 cP 미만으로 점도를 감소시킬 수 있다. 150 mg/mL 항체 제제를 달성하기 위하여, 150 mM 아르기닌 및 220 mM 아르기닌은 둘 다 명목상 약 15 cP 미만으로 점도를 감소시킬 수 있고, 220 mM 아르기닌 선택사항이 높을수록 약 10 cP(도 5)에서 실질적으로 더 낮아진다. 데이타는 75 mM 트레할로스와 100 mM 아르기닌의 시도에서 보여지듯이(도 6) <20 cP를 목표로 만족시키기 위하여 150 mM 아르기닌이 필요하다는 것을 제안한다. 220 mM 아르기닌 항-IL6(YTE) 제제은 약 185 mg/mL(초과-농도 수준)에서 약 5 cP 만큼 150 mM 아르기닌 보다 낮은 점도 프로파일을 갖는다(도 7 참조). 도 8은 주요 100 및 150 mg/mL 제제에 대한 점도의 온도 의존성을 보여준다.
실시예 4
< 안정성 및 점도에 대한 부형제의 효과 연구 >
다중 제형 파라미터에 대한 트레할로스 및 아르기닌의 영향을 평가하는 실험을 실시하였다. 항체 제제를 40℃ 또는 5℃에서 저장하였고, 순도 손실을 다양한 시간에 측정하였다. 실시예 1에 기재된 바와 같이 TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA)을 사용하여 280 nm에서 UV 검출로 고성능 크기 배제 크로마토그래피를 실시하였다. 결과를 표 4에 제공한다.
[표 4]
Figure pct00017

"통과"는 제제가 가시적 입자를 사실상 함유하지 않았음을 지시하였다. 이들 평가는 항-IL6(YTE)가 상기 제공된 트레할로스 및 아르기닌 제제 중의 100 mg/mL 이상에서 안정하다는 것을 입증한다.
실시예 5
< 항-IL6(YTE) 열안정성 >
25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트, 220 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 6.0 중의 150 mg/mL로 항-IL6 항체를 함유하는 항-IL6 항체 제제를 제조되었다. 당해 제제의 조성은 표 5에 기재된다.
[표 5]
Figure pct00018
EP = 유럽 약전; NA = 해당 없음; NF = 국민 의약품집; USP = 미국 약전.
25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트, 150 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 6.0 중의 150 mg/mL로 항-IL6 항체를 함유하는 항-IL6 항체 제제를 제조하였다. 당해 제제의 조성은 표 6에 기재된다.
[표 6]
Figure pct00019
EP = 유럽 약전; NA = 해당 없음; NF = 국민 의약품집; USP = 미국 약전.
약품을 3 cc 유리 바이알에 무균으로 채우고 마개로 막고 알루미늄 오버씰(overseal)로 밀봉하였다.
항-IL6(YTE) 항체의 열 안정성
표 5에 나타낸 제제(25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트, 220 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 0.07%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 6.0.)으로 약 1 mg/mL의 항-IL6(YTE)에 대하여 DSC를 실시하였다. 열 안정성 프로파일을 도 9에 제공한다.
실시예 6
< IV 백 보호제 >
i. 물질
동결건조된 제제를 사용하여 여러 판매자로부터의 다양한 유형의 정맥내 주입(IV) 백 및 선으로 항-IL6(YTE) 항체의 혼화성을 평가하였다. 항-IL6(YTE) 항체는, 재구성시, 25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 모노하이드레이트, 225 mM(8.5% [w/v]) 트레할로스 디하이드레이트, 0.05%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 6.0 중의 50 mg/mL 항-IL6(YTE) 항체가 수득되는, 동결건조된 형태이었다.
ii. 방법
(a) 혼화성 시험 절차
항-IL6(YTE) 항체 CSP의 사용중 안정성은 IV 백(또는 병), IV 필터 확장 세트를 사용하여 유지되고 전달되었고, 진료소에서 사용가능한 다양한 유형의 관련 접촉 물질이 평가되었다. 시험 범위는 100 mL IV 백을 사용하여 20 mg 내지 600 mg(0.2 mg/mL 내지 6 mg/mL)이었다. 계산된 항-IL6(YTE) 항체 투여량 용적을 백에 가하고 부드럽게 혼합하였다. IV 백을 실온(RT, 대략 23℃) 및 또한 냉장 조건하에(2-8℃) 24 시간 동안 덮여있지 않은 채로 저장하였다. 적절한 배양 시간 후, IV 백의 CSP를 IV 투여, 필터, 및 바늘이 있는 확장 세트를 통해 펌프 또는 중력에 의해 100 mL/hr에서 목크-주입으로 수집하였다. CSP에서 입자 형성/침전 안정성, 및 항-IL6(YTE) 항체의 회수를 육안 검사, HPSEC 및 자외선-가시광선(UV-Vis) 흡광도로 평가하였다.
(b) 육안 검사
육안 검사를 IV 백 및 또한 3 cc 유리 약물 바이알로 목크-주입된 물질에 대하여 PhEur로부터 개조된 절차에 따라(각각 섹션 2.9.20, 2.2.1 및 2.2.2) 가시적 입자, 투명성/유백광, 및 색상에 관하여 직접적으로 실시하였다. 출발 항-IL6(YTE) 항체 제제는 살짝 유백광 및 무색 내지 담황색이었다. 목크-주입 후, 항-IL6(YTE) 항체 CSP는 모든 CSP 시료에 대하여 투명 및 무색 내지 담황색이었다. 그러나, IVBP를 사용하지 않는 경우, IV 백으로 항-IL6(YTE) 항체 희석시 증가된 입자 수준이 관찰되었다. IVBP의 사용은 CSP 중의 입자 형성을 경감시켰다.
(c) 순도 및 가용성 응집
TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosoh Bioscience LLC, Montgomeryville, PA)을 사용하여 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC)를 실시하여 CSP 시료의 순도 및 가용성 응집을 평가하였다.
(d) 농도 및 회수
단백질 회수를 280 nm에서 자외선-가시광선(UV-Vis) 흡광도로 평가하여 애질런트 모델 8453 UV-Vis 분광광도계(Santa Clara CA)를 사용하여 단백질 농도를 분석하였다. UV-Vis의 양자화 한계 이하의 투여량을 위하여, 선형 피크 면적 표준 보정 곡선을 사용하여 단백질을 분석하는데 280 nm에서의 형광 여기 및 335 nm에서의 방출의 HPSEC를 사용하였다.
iii. 결과 및 논의
(a) 식염수 IV 백 중의 입자 형성
IVBP의 사용 없이 초기 시험에서, 0.2 미크론 인-라인 필터를 통해 목크-주입 후 3 cc 유리 바이알로 수집된 100 mL 식염수 IV 백 중의 항-IL6(YTE) 항체 및 물질에 대하여 가시적 입자가 관찰되었다(도 10). 모든 다른 시험들 결과는 허용가능한 것이었다. 가시적 입자가 일반적으로 70 mm 보다 크기 때문에, 이들 가시적 입자는 0.22 미크론 인-라인 필터 후 형성되었어야 한다. 사실상, 3 cc 유리 바이알에 수집된 시료가 수동적인 육안 검사 과정 동안 역전 및 소용돌이 교반의 과정에 따라 입자의 증가된 수준을 발달시켰음이 관찰되었다. 본 발명자들은 입자 형성이 용액 중에 불충분한 계면활성제가 존재한다는 사실로 인한 것이라고 가정하였다. 이를 조사하기 위하여, 추가의 폴리소르베이트를 IV 백에 첨가하였다.
(c) 입자 형성에 대한 계면활성제의 영향 조사
폴리소르베이트의 대략 250 배 이하의 희석의 효과를 평가하였다(100 mL/0.4 mL = 250 배 희석). 항-IL6(YTE) 항체를 IV 백으로 투여하기 전에 폴리소르베이트 80 첨가로 식염수 IV 유액을 개질시켰다. 첨가된 폴리소르베이트 80는 0% 내지 0.018% w/v로 다양하였고, 육안 검사를 실시하였다(표 7).
[표 7]
Figure pct00020
20 mg 투여량에 있어서, 첨가된 항-IL6(YTE) 항체 제제 용적 중에 폴리소르베이트 희석으로부터 잔여 0.0002% PS80가 기여되었음을 주의한다(0.05%/250 = 0.0002%). 이들 데이타를 기초로 하여, 0.009% w/v 초과의 폴리소르베이트 80은 CSP 중에 관찰된 입자 형성을 효과적으로 경감시킬 수 있었다. 도 11은 0.012% w/v의 첨가된 폴리소르베이트 80를 갖는 식염수 중의 항-IL6(YTE) 항체의 사진을 보여준다.
(d) IV 백 중의 입자 형성을 경감시키는 IV 백 보호제(IVBP)의 사용
항-IL6(YTE) 항체의 안정성을 유지하는데 필요한 폴리소르베이트의 더 높은 수준을 제공하는데 IVBP를 사용하였다. 0.012% w/v 폴리소르베이트 80의 최종 수준은 오류 및 넘치게 채운 백의 가변성을 계산하는 수준에서 강인성을 목표로 하였다. 사용된 IV 백 보호제(IVBP: IV bag protectant)는 pH 6.0의 시트레이트 버퍼 중에 제형화된 0.65%(w/v) 폴리소르베이트 80이었다. IVBP 1.8 mL 용적 첨가를 요구하는 IV 백 제조 과정을 변경하였고, 이는 항-IL6(YTE) 항체 투여량이 첨가되기 전에 부드럽게 혼합된다. 이는 저용량의 경우 약 0.012%의 폴리소르베이트 수준 및 고용량의 경우 0.018% w/v를 야기하였다. 5종의 상이한 식염수 IV 백에서 혼화성 연구를 IVBP와 함께 실시하였다. 이들은 IVBP가 사용되는 경우, 항-IL6(YTE) 항체와 혼화성인 것으로 확인되었다.
iv. 결론
당해 사례 연구에서, IV 백에서 CSP 중의 단백질성 입자의 형성은 이의 보호 수준 미만의 폴리소르베이트 80의 희석에 의해 야기되었다. 백 희석의 IV 백 보호제(IVBP) 전처리는 IV 백 중의 폴리소르베이트 수준을 항-IL6(YTE) 항체 임상 살균 제제(CSP)의 입자 형성을 경감시키는데 필요한 수준 이상(약 0.009% 이상)으로 유지하는 것이 필요하다는 것이 입증되었다. 사용된 IV 백 보호제(IVBP)는 pH 6.0의 시트레이트 버퍼 중에 제형화되고 항-IL6(YTE) 항체 전에 백에 첨가된 0.65%(w/v) 폴리소르베이트 80이었다. 폴리소르베이트-함유 IV 백 보호제(IVBP)의 실시는 항-IL6(YTE) 항체 CSP의 입자 형성을 완전하게 경감시켰다.
실시예 7
< 비-항-IL6 항체에 있어서 안정성 및 점도에 대한 부형제의 영향 연구 >
다중 제형 파라미터에 대한 프롤린 및 아르기닌의 영향을 평가하는 실험을 실시하였다. 항-IL6 항체 및 비-항-IL6 항체(항체 X) 제제를 40℃ 및 5℃에서 저장하고, 순도 손실 및 가시적 입자 외양을 다양한 시간에서 측정하였다. DSC(VP-DSC, Microcal, Northampton, MA)를 사용하여 열 안정성을 측정하였다. 안톤 파아르 MCR301 레오미터를 사용하여 제제의 점도를 측정하였다. 280 nm에서 UV 검출로 TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA)을 사용하여 실시예 1에 기재된 바와 같이 고성능 크기 배제 크로마토그래피를 실시하였다. DSC를 사용하여 열 안정성을 측정하였다.
결과를 표 8에 제공한다. 두 항체 X 제제를 비교하였다. 두 항체 X 제제는 하나는 50 mM 아르기닌을 갖고 다른 하나는 50 mM 프롤린을 갖는 것 외에는 동일하였다. 결과는 항체 X에 있어서 아르기닌 제제 중의 입자의 가시적 외양은 5℃에서 11 주 후 허용되지 않는 수준인 반면, 프롤린-함유 제제는 가시적 입자를 사실상 함유하지 않은 채로 남아 있었다는 것을 나타낸다. 따라서, 아르기닌은 항체 X 제제의 입자 형성에 부정적인 영향을 주었다. 두 항체 X 제제 모두 안정성에 대하여 유사한 순도 손실을 갖고, 이는 아르기닌이, HP-SEC에 의해 측정될 때, 항체 X를 안정화시키거나 불안정화시키지 않는다는 것을 지시한다. 아르기닌은 항체 X 제제의 점도를 감소시키지 않았다. 트레할로스/아르기닌 제제 중의 항체 X에 있어서 Tm1이 아르기닌 제제 중의 항-IL6 항체 보다 실질적으로 높고, 더 낮은 순도 손실률 및 가시적 입자로부터 사실상 함유하지 않은 채로 남아 있다는 사실에 의해 지시되는 바와 같이 항-IL6 항체의 안정성이 매우 더 크다는 것이 주목할 만하다. 이들 비교 실시예는 아르기닌이 항-IL6 항체가 안정화된 것과 동일한 방식으로 항체 X를 안정화시키지 않는다는 것을 보여준다. 항체 X의 순도 손실률은 아르기닌에 의해 낮아지지 않지만(동일한 채로 남아있다), 아르기닌은 입자 형성에 관하여 불안정성을 야기하지 않았다.
[표 8]
Figure pct00021

실시예 8
< 4개의 상이한 항체의 안정성에 대한 아르기닌 및 기타 부형제의 영향 >
항-IL6 항체 및 또한 몇몇 상이한 비-항-IL6 항체의 안정성에 대한 다양한 부형제의 영향을 평가하는 실험을 다중 농도에서 실시하였다. 연구된 부형제는 염기성 버퍼(부형제를 함유하지 않음), 트레할로스, 염, 및 아르기닌 하이드로클로라이드이었다. 다양한 항체에 대하여 DSC를 사용하여 열 안정성을 측정하였다. 항체 제제를 40℃에서 저장하고, HP-SEC를 사용하여 순도 손실률을 측정하였다. 280 nm에서 UV 검출로 TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosh Bioscience LLC, Mongomeryville, PA)을 사용하여 실시예 1에 기재된 바와 같이 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC)를 실시하였다.
연구의 결과는 표 9에 요약된다. 모든 항체에 대하여 오직 버퍼의 기본 상태와 비교한 아르기닌의 영향은 표 10에 요약된다. 심지어 모든 항체에 대하여 아르기닌이 Tm1의 감소를 야기함에도 불구하고, 4개의 항체에 있어서 순도 손실률에 대한 아르기닌의 영향에는 일정한 경향이 있지 않았다. 항-IL6 항체는 이들 4개의 항체 중 아르기닌에 의해 실질적으로 안정화되는 유일한 항체이었다. 아르기닌은 2개의 항체에 있어서 순도 손실률에 영향을 주지 않았다(개월 당 약 0.2% 순도 손실 차이 또는 그보다 적은 분석 변동성 내). 하나의 항체는 아르기닌에 의해 불안정화되었다(항체 B, 표 9, 14열).
항-IL6 항체(표 9, 1-6열)에 있어서, 아르기닌 제제는 더 낮은 측정된 Tm1를 갖지만, 순도 손실률 평가시, 가장 안정하였다. 대조적으로, 아르기닌은 항체 B에 대하여 Tm1을 감소시키고, 또한 순도 손실률을 증가시킨 반면, 트레할로스는 Tm1을 증가시키고 순도 손실률을 감소시켰다(표 9, 11-14열). 항체 A 및 C에 있어서, Tm1은 트레할로스의 경우 증가하였고, 염 및 아르기닌의 경우 감소하였지만, 순도 손실률은 개월 당 0.2%로 남아 있었고(예상된 분석 변동 내), 이는 모든 제제가 유사한 안정성을 갖는다는 것을 제안한다.
[표 9]
Figure pct00022

[표 10]
Figure pct00023
본원에 기재된 모든 다양한 양태 또는 선택사항은 임의의 및 모든 변형예로 조합될 수 있다. 본 발명이 이의 일부 양태를 참조하여 특정하게 표현되고 기재되지만, 이들은 한정이 아닌 오직 예시의 방식으로 표현되며 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않고 형태 및 세부사항에서 다양한 변화가 그 안에서 만들어질 수 있다는 것을 당해 분야의 숙련가는 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 폭 및 범위는 상기 기재된 어떠한 예시적인 양태에 의해 한정되지 않아야 하고, 하기 청구항 및 이의 등가물에 따라서만 정의되어야 한다.
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SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE, LLC <120> STABLE, LOW VISCOSITY ANTIBODY FORMULATION <130> IL6-400WO1 <140> PCT/US2013/066313 <141> 2013-10-23 <150> 61/718,379 <151> 2012-10-25 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asp Leu Tyr Tyr Tyr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Asp Asp His Pro Pro Trp Ile Asp Leu Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile 245 250 255 Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 2 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp Leu Gly Gly Ser 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 3 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asp Leu Tyr Tyr Tyr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Asp Asp His Pro Pro Trp Ile Asp Leu Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 4 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp Leu Gly Gly Ser 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 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<400> 10 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 11 Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser 1 5 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Gln Gln Ser Trp Leu Gly Gly Ser 1 5

Claims (30)

  1. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항-IL-6 항체, 및
    b. 약 150 mM 초과의 아르기닌
    을 포함하며, 수용액이고, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  2. 제1항에 있어서, 항-IL-6 항체는 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체 제제.
  3. 제2항에 있어서, 항-IL-6 항체는 서열 번호 1 및 서열 번호 2를 포함하는 것인 항체 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 SEC HPLC에 의해 측정될 때, 2℃ 내지 8℃에서 12 개월 동안 안정한 것인 항체 제제.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 제제의 점도가 23℃에서 14 cP 미만인 항체 제제.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 200 mM 초과의 아르기닌을 포함하는 항체 제제.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 220 mM 초과의 아르기닌을 포함하는 항체 제제.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 150 mM 내지 400 mM의 아르기닌을 포함하는 항체 제제.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제를 추가로 포함하는 항체 제제.
  10. 제7항에 있어서, 계면활성제는 폴리소르베이트, 플루로닉, 브리지(Brij), 및 기타 비이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항체 제제.
  11. 제8항에 있어서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80인 항체 제제.
  12. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 히스티딘을 추가로 포함하는 것인 항체 제제.
  13. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 트레할로스를 실질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  14. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 이당류를 실질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  15. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 환원당, 비환원당, 또는 당알코올을 실질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  16. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 오스몰라이트(osmolyte)를 실질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  17. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 27 Ga 박벽(thin wall) PFS 바늘을 통과시 8 N 미만의 주입력을 갖는 것인 항체 제제.
  18. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제제는 300 내지 450 mosm/kg의 오스몰 농도를 갖는 것인 항체 제제.
  19. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 항체 제제의 총 폴리펩티드 조성물의 90%(w/w) 초과인 항체 제제.
  20. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는, 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항체,
    b. 약 150 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌,
    c. 약 0.01% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80, 및
    d. 약 20 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘
    을 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  21. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는, 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL의 항체로서, VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체,
    b. 약 150 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌,
    c. 약 0.01% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80, 및
    d. 약 20 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘
    을 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  22. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는, 약 150 mg/mL의 항체로서, VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체,
    b. 약 220 mM의 아르기닌,
    c. 약 0.07%의 폴리소르베이트 80, 및
    d. 약 25 mM의 히스티딘
    을 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  23. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는, 약 150 mg/mL의 항체로서, VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체,
    b. 약 150 mM의 아르기닌,
    c. 약 0.07%의 폴리소르베이트 80, 및
    d. 약 25 mM의 히스티딘
    을 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  24. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는, 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 항체로서, VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체,
    b. 약 20 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌,
    c. 약 0.01% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80,
    d. 약 5 mM 내지 약 100 mM의 히스티딘, 및 임의로
    e. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 트레할로스
    를 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  25. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는, 약 50 mg/mL의 항체로서, VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체,
    b. 약 0.05%의 폴리소르베이트 80,
    c. 약 25 mM의 히스티딘, 및
    d. 약 225 mM의 트레할로스
    를 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  26. 안정한 저점도 항체 제제로서,
    a. 가변 중(VH) 도메인 및 가변 경(VL) 도메인을 포함하는, 약 100 mg/mL의 항체로서, VH 도메인은 서열 번호 7, 8 및 9를 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, VL 도메인은 서열 번호 10, 11 및 12를 포함하는 CDR을 포함하는 것인 항체,
    b. 약 25 mM의 아르기닌,
    c. 약 0.07%의 폴리소르베이트 80,
    d. 약 25 mM의 히스티딘, 및
    e. 약 180 mM의 트레할로스
    를 포함하며, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제제.
  27. 대상에서 골관절염과 관련된 통증을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제3항 및 제20항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 제제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  28. 대상에서 만성 하부 요통과 관련된 통증을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제3항 및 제20항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 제제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  29. 대상에서 류마티스성 관절염을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제3항 및 제20항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 제제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  30. 안정한 저점도 항체 제제를 제조하는 방법으로서,
    a. 서열 번호 1 및 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 약 150 mg/mL 내지 약 400 mg/mL로 농축하는 단계,
    b. (a)의 항체에 아르기닌을 첨가하여 약 150 mM 초과의 아르기닌 농도를 갖는 항체 제제를 달성하는 단계
    를 포함하며, (b)의 항체 제제는 수용액이고, 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 가지며, (b)의 항체 제제는, SEC HPLC에 의해 측정될 때, 2℃ 내지 8℃에서 12 개월 동안 안정한 것인 방법.
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