JP2015536934A - 安定した低粘度の抗体製剤 - Google Patents
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Abstract
本発明は、高濃度の抗IL6抗体を含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、約50mg/mL〜約400mg/mLの抗IL6抗体と、アルギニンとを含んでなり、水溶液中にあって、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。このような抗体製剤を製造する方法、および使用する方法もまた提供される。【選択図】図1
Description
本発明は、高濃度の抗IL6抗体を含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、約50mg/mL〜約400mg/mLの抗IL6抗体と、アルギニンとを含んでなり、水溶液中にあって、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。このような抗体製剤を製造する方法、および使用する方法もまた提供される。
抗体は、それらの標的認識特異性のために、様々な疾患および病状の治療で使用され、それによって全身投与に続いて非常に選択的な成果をもたらす。抗体は高い特異性を有し得る一方で、患者を治療するのに必要な用量は、特に慢性症状で典型的に高い。製造される大量の高純度モノクローナル抗体を提供するための、新しい製造および精製技術が開発されている。しかしこれらの抗体を安定化させるという難題が依然として存在し、投与に適した剤形で抗体を提供するという、さらにより大きな難題も存在する。
高用量の特異的抗体を用いて対象を治療するためには、用量剤形中の抗体濃度を増大させることが望ましい。濃度が高いほど、一般に、注射のための注入容積が小さくなる。しかし抗体は、より高い濃度では、凝集、沈殿、ゲル化、安定性低下、および/または粘度増大をはじめとする、特徴的な問題を提示することが多い。
高濃度剤形に付随する難題を克服するための、様々な方法が提案されている。例えば高濃度抗体製剤に伴う安定性問題に対処するために、抗体は頻繁に凍結乾燥され、次に投与直前に戻されることが多い。水戻しは投与過程に追加的なステップを付け加え、製剤に汚染物質を導入し得るので、概して最適ではない。さらに抗体を戻しても、凝集および高粘度の問題を抱え得る。
抗体製剤の投与にはまた、追加的な問題も存在する。場合によっては、抗体製剤は、投与前にその容器から取り出されて、適切な静注(IV)バッグ内で希釈される。抗体製剤を含有する調製されたIVバッグは、「混合無菌製剤」(CSP)と称される。CSPは、対象への投与前に短時間保持されることが多い。CSPは、通常、患者に輸液する前に、沈殿または汚染の徴候について視覚的に検査される。CSPの安定性のための所望時間枠は、抗体製剤よりも短く、例えば室温で約4〜8時間、そして冷蔵条件下で24〜36時間である。
抗体製剤をIVバッグに入れることは、安定性の低下を引き起こし得る。抗体製品では、沈殿または粒子形成が起こり得て、IV溶液の外観検査、紫外可視吸光度による用量回収率、およびサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)による高分子量化学種(HMWS)形成に関する安定性によって、評価され得る。効力もまた評価され得て、一般に生成物特異的試験によって評価される。
複数の可能な原因が、CSPの不安定性を引き起こし得る。タンパク質のコロイドおよび立体構造安定性は、イオン強度、pH、および二糖類またはアミノ酸などの賦形剤の存在などの溶液条件によって影響を受ける。界面活性剤は、界面応力によって引き起こされる凝集から保護するために、または粒子形成を阻害するために、タンパク質製剤に添加されることが多い。製剤賦形剤が、必要なレベル未満に希釈された場合に、タンパク質の安定性低下が起こり得る。さらに生理食塩水IVバッグ中における高イオン強度環境への曝露が、いくつかのタンパク質の特異的分解経路を加速することもある。
したがってこれらの難題の多くを克服し得る、高濃度抗体製剤を提供する必要性が存在する。さらに抗体製剤が、希釈中に分解、沈殿せず、または別の様式で効力を失わない、抗体製剤をIVバッグに入れる方法に対する必要性が存在する。
本発明は、安定した低粘度の高濃度抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)約150mg/mL〜約400mg/mLの抗IL−6抗体と、(b)約150mMを超えるアルギニンとを含んでなり、水溶液中にあって、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、抗IL−6抗体は、可変重鎖領域(VH)および可変軽鎖領域(VL)を含んでなり、VH領域が配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなり、VL領域が配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる。一実施形態では、抗IL−6抗体は、配列番号1および配列番号2を含んでなる。
いくつかの実施形態では、抗体は、SEC HPLCによる測定で、2℃〜8℃で12ヶ月間にわたり安定している。
いくつかの実施形態では、抗体製剤の粘度は、23℃で14cP未満である。
様々な濃度のアルギニンが、使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、200mMを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、220mMを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、150mM〜400mMのアルギニンを含んでなる。
様々なその他の成分が、抗体製剤に含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、界面活性剤をさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、プルロニック、ブリジ、およびその他の非イオン性界面活性剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート80である。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジンをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、二糖類を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、オスモライトを実質的に含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、27ゲージ肉薄PFS針(25Gaまたは26Ga針に相当する)の通過時に、8N未満の射出力を有する。いくつかの実施形態では、製剤は、300〜450mosm/kgのモル浸透圧濃度を有する。
抗体製剤中の抗体は、様々な純度を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体製剤の全ポリペプチド組成の90%を超える(w/w)。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、約150mg/mL〜約400mg/mLの抗体、(b)約150mM〜約400mMのアルギニン、(c)約0.01%〜約0.1%のポリソルベート80、(d)約20mM〜約30mMのヒスチジンを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約150mg/mL〜約400mg/mLの抗体、(b)約150mM〜約400mMのアルギニン、(c)約0.01%〜約0.1%のポリソルベート80、(d)約20mM〜約30mMのヒスチジンを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約150mg/mLの抗体、(b)約220mMのアルギニン、(c)約0.07%のポリソルベート80、および(d)約25mMのヒスチジンを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約150mg/mLの抗体、(b)約150mMのアルギニン、(c)約0.07%のポリソルベート80、および(d)約25mMのヒスチジンを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約50mg/mL〜約200mg/mLの抗体、(b)約20mM〜約400mMのアルギニン、(c)約0.01%〜約0.1%のポリソルベート80、(d)約5mM〜約100mMのヒスチジン、および場合により(e)約50mM〜約400mMのトレハロースを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約50mg/mLの抗体、(b)約0.05%のポリソルベート80、(c)約25mMのヒスチジン、および(d)約225mMのトレハロースを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約100mg/mLの抗体、(b)約25mMのアルギニン、(c)約0.07%のポリソルベート80、(d)約25mMのヒスチジン、および(e)約180mMのトレハロースを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において骨関節炎に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において慢性腰痛に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において関節リウマチを治療する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる抗体を約150mg/mL〜約400mg/mLに濃縮するステップと、(b)アルギニンを(a)の抗体に添加して、約150mMを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなり、(b)の抗体製剤が、水溶液中にあり、23℃で20cP未満の粘度を有し、(b)の抗体製剤が、SEC HPLCによる測定で、2℃〜8℃で12ヶ月間にわたり安定している、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。
本明細書に示され記載される特定の実装は例であり、本出願の範囲をどのようにも限定しないものと理解される。本明細書に記載される本発明の実施形態および特性のそれぞれは、あらゆる全ての方法で併用し得るものと理解される。
本明細書で参照される公開特許、特許出願、ウェブサイト、企業名、および学術文献は、それぞれが具体的かつ個別に参照によって援用されると示されるのと同程度に、その内容全体を参照によって本明細書に援用する。本明細書で参照されるあらゆる参考文献と、本明細書の特定の教示間のあらゆる矛盾は、本教示を支持して解決されるものとする。同様に、当該技術分野で理解される語または語句の定義と、本明細書で具体的に教示される語または語句の定義の間のあらゆる矛盾は、本教示を支持して解決されるものとする。
本明細書の用法では、単数形「a」、「an」、および「the」は、内容が明確に指示しない限り、それが言及する用語の複数形もまた具体的に包含する。
本開示全体にわたり、百分率、比率などの全ての表現は、特に断りのない限り、「重量基準」である。本明細書の用法では、「重量基準」は、「質量基準」という用語と同義であり、本明細書で定義される比率または百分率が、容積、厚さ、またはその他の尺度でなく、重量に準拠することを示す。
「約」という用語は、本明細書では、およそ、範囲、大体、または前後を意味するために使用される。数値範囲に関連して「約」という用語が使用される場合、それは記載される数値の上下の境界を延長することで、範囲を修飾する。一般に「約」という用語は、規定値の上下の数値を10%の差異で修飾するために、本明細書で使用される。
本明細書で使用される技術的および科学的用語は、特に断りのない限り、本出願が関係する技術分野の当業者によって通常理解される意味を有する。本明細書では、当業者に知られている様々な方法論および材料に言及する。その各開示内容全体を参照によって本明細書に援用する、Sambrook et al.,“Molecular Cloning:A Laboratory Manual,”2nd Ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York(1989);Kaufman et al.,Eds.,“Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine,”CRC Press,Boca Raton(1995);およびMcPherson,Ed.,“Directed Mutagenesis:A Practical Approach,”IRL Press,Oxford(1991)をはじめとする標準的基準研究が、組み換えDNA技術の一般的原理を記載している。
本発明は、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。本明細書に記載される「抗体製剤」という用語は、1つまたは複数の抗体分子を含んでなる組成物を指す。本発明の「抗体」という用語は、特に限定的でない。明確さのために、「抗体」はその最も広い意味で解釈され、あらゆる免疫グロブリン(Ig)、その活性変異体または所望の変異体、およびその活性断片または望ましい断片(例えばFab断片、ラクダ科動物抗体(一本鎖抗体)、およびナノボディ)を含む。「抗体」という用語はまた、二量体または多量体をも指し得る。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得て、天然にまたは組み換え的に生成され得る。したがってヒト、非ヒト、ヒト化、およびキメラ抗体は、全て「抗体」という用語に包含される。典型的に、抗体は、IgG、IgE、IgM、IgD、およびIgAクラスの1つのモノクローナル抗体であり、より典型的には、IgGまたはIgAのモノクローナル抗体である。
本発明の抗体は、鳥および哺乳類をはじめとする、あらゆる動物起源であり得る。いくつかの実施形態では、本発明の方法の抗体は、ヒト、マウス(例えばマウスおよびラット)、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書の用法では、「ヒト」抗体としては、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が挙げられ、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または1つまたは複数のヒト免疫グロブリンで組み換えられて内在性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体が含まれる。例えばKucherlapatiらに付与された、米国特許第5,939,598号明細書を参照されたい。
本発明の抗体としては、例えば、天然抗体、無処理モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの無処理抗体から生成される多特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、抗体断片(例えば1つまたは複数の抗原と結合しおよび/またはそれを認識する抗体断片)、ヒト化抗体、ヒト抗体(Jakobovits et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993);Jakobovits et al.,Nature 362:255−258(1993);Bruggermann et al.,Year in Immunol.7:33(1993);米国特許第5,591,669号明細書および米国特許第5,545,807号明細書)、抗体ファージライブラリーから単離される抗体群および抗体断片(McCafferty et al.,Nature 348:552−554(1990);Clackson et al.,Nature 352:624−628(1991);Marks et al.,J.Mol.Biol.222:581−597(1991);Marks et al.,Bio/Technology10:779−783(1992);Waterhouse et al.,Nucl.Acids Res.21:2265−2266(1993))が挙げられる。本発明の方法によって精製される抗体は、N−またはC末端で、異種ポリペプチドと組み換え的に融合し得て、またはポリペプチドまたはその他の組成物と化学的に結合し得る(共有結合および非共有結合を含む)。例えば本発明の方法によって精製される抗体は、検出アッセイ中で標識として有用な分子と、および異種ポリペプチド、薬剤、または毒素などのエフェクター分子と、組み換え的に融合または共役し得る。例えばPCT公開国際公開第92/08495号パンフレット;国際公開第91/14438号パンフレット;国際公開第89/12624号パンフレット;米国特許第5,314,995号明細書;および欧州特許第396,387号明細書を参照されたい。
いくつかの実施形態では、抗体は、当該技術分野で周知のように、1つまたは複数の抗原に対するものであり得る。適切な抗炎症性抗体の例としては、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、およびセルトリズマブペゴルなどの抗TNFα抗体;カナキヌマブなどの抗IL1β抗体;ウステキヌマブおよびブリアキヌマブなどの抗IL12/23(p40)抗体;およびダクリズマブなどの抗IL2R抗体が挙げられるが、これに限定されるものではない。適切な抗がん抗体の例としては、ベリムマブなどの抗BAFF抗体;リツキシマブなどの抗CD20抗体;エピラツズマブなどの抗CD22抗体;ダクリズマブなどの抗CD25抗体;イラツムマブなどの抗CD30抗体、ゲムツズマブなどの抗CD33抗体、アレムツズマブなどの抗CD52抗体;イピリムマブなどの抗CD152抗体;セツキシマブなどの抗EGFR抗体;トラスツズマブおよびペルツズマブなどの抗HER2抗体;シルツキシマブなどの抗IL6抗体;およびベバシズマブなどの抗VEGF抗体;トシリズマブなどの抗IL6受容体抗体が挙げられるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、抗体製剤は、抗IL6抗体を含んでなる。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、抗IL6抗体を含んでなり、抗IL−6抗体は、可変重鎖領域(VH)および可変軽鎖領域(VL)を含んでなり、VH領域は配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなり、VL領域は配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる。
配列番号7
抗IL6重鎖CDR1
配列番号8
抗IL6重鎖CDR2
配列番号9
抗IL6重鎖CDR3
配列番号10
抗IL6軽鎖CDR1
配列番号11
抗IL6軽鎖CDR2
配列番号12
抗IL6軽鎖CDR3
配列番号7
抗IL6重鎖CDR1
配列番号8
抗IL6重鎖CDR2
配列番号9
抗IL6重鎖CDR3
配列番号10
抗IL6軽鎖CDR1
配列番号11
抗IL6軽鎖CDR2
配列番号12
抗IL6軽鎖CDR3
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、抗IL6抗体を含んでなり、抗IL6抗体は、それぞれ配列番号5および6を含んでなる、VH領域およびVL領域を含んでなる。
配列番号5
抗IL6可変重鎖
配列番号6
抗IL6可変軽鎖
配列番号5
抗IL6可変重鎖
配列番号6
抗IL6可変軽鎖
いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体は、アダリムマブ(ヒュミラ(登録商標)、Abbott Laboratories)、エクリズマブ(Soliris(登録商標)、Alexion Pharmaceuticals)、リツキシマブ(Ritixan(登録商標)、Roche/Biogen Idec/Chugai)、インフリキシマブ(レミケード(登録商標)、Johnson&Johnson/Schering−Plough/Tanabe)、トラスツズマブ(ハーセプチン(登録商標)、Roche/Chugai)、ベバシズマブ(アバスチン(登録商標)、Chugai/Roche)、パリビズマブ(シナジス(登録商標)、MedImmune/Abbott)、アレムツズマブ(キャンパス(登録商標)、Genzyme)、およびモタビズマブ(ヌマックス(登録商標)、MedImmune)からなる群から選択される、市販の抗体である。
いくつかの実施形態では、抗IL6抗体は、修飾抗IL6抗体である。例えばいくつかの実施形態では、抗IL6抗体は、FcドメインのCH2ドメインに、3つのアミノ酸置換(M252Y/S254T/T256E)を含有する抗IL6(YTE)抗体であり、置換は、配列番号1〜2で表わされる抗IL6(YTE)の血清半減期を増大させることが示されている。
配列番号1
抗IL6(YTE)抗体重鎖
配列番号2
抗IL6(YTE)抗体軽鎖
配列番号1
抗IL6(YTE)抗体重鎖
配列番号2
抗IL6(YTE)抗体軽鎖
例えばDall’Acqua et al.,J.Immunol 169:5171−5180(2002)を参照されたい。抗IL6(YTE)抗体は、全体的な分子量がおよそ148kDaのヒトIgG1κモノクローナル抗体であり、Fc領域内の残基Asn−300に、N結合オリゴ糖付着部位を1つ含有する。抗IL6(YTE)抗体は、IL−6受容体αリガンド相互作用と、引き続く機能的事象を阻止すると考えられる。抗IL6(YTE)抗体の配列は、配列番号1および2に見ることができる。抗IL−6抗体の非限定的例はまた、参照によってその内容全体を本明細書に援用する、国際公開第2008/065378号パンフレット、国際公開第2010/088444号パンフレット、米国特許第8,198,414号明細書、および米国特許出願公開第20120034212号明細書にも記載される。
例えばヒトIL−6のヌクレオチド配列は、GenBankデータベースに見ることができる(例えば受入番号NM000600.2を参照されたい)。ヒトIL−6のアミノ酸配列は、GenBankデータベース(例えば受入番号P05231を参照されたい)、2002年12月4日に出願されて米国特許第7,414,024号明細書として付与された米国特許出願第10/496,793号明細書(1欄を参照されたい);および2009年5月22日に出願されて米国特許第7,833,755号明細書として付与された米国特許出願第12/470,753号明細書(19欄を参照されたい)に見ることができる(ヒトIL−6のアミノ酸配列は、具体的に参照によって本明細書に援用する)。ヒトIL−6はまた、Hirano et al.,Nature324(6092),73−76(1986)にも記載された。これらの受入番号、特許出願、および学術誌論文のそれぞれは、明示的に参照によって本明細書に援用する。
一実施形態では、IL−6ポリペプチドは、ヒトIL−6、その類似体、誘導体または断片である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体製剤は、抗IL−6抗体を含んでなる。本発明の抗体は、関心のある抗原またはその断片と特異的に結合し、その他の抗原またはその断片とは特異的に結合しない。例えば抗I6抗体は、インターロイキン−6ポリペプチドと免疫特異的に結合し、その他のポリペプチドとは特異的に結合しない。好ましくは、IL−6と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、その他のポリペプチドまたはその他のポリペプチド断片に対する親和性と比較して、IL−6またはIL−6ポリペプチド断片に対してより高い親和性を有する。抗体の親和性は、単一抗原−抗体部位における特異的抗原に対する結合の尺度であり、本質的に、抗体の抗原結合部位と特定のエピトープとの間の相互作用に存在する、全ての引力および斥力の総和である。特定の抗原(例えばIL−6ポリペプチドまたはIL−6ポリペプチド断片)に対する抗体の親和性は、式、K=[Ag Ab]/[Ag][Ab]によって定義される平衡定数Kによって表されてもよく、それは抗体結合部位の親和性であり、式中、[Ag]は遊離抗原の濃度であり、[Ab]は遊離抗体の濃度であり、[Ag Ab]は抗原−抗体複合体の濃度である。抗原および抗体が共に強力に反応する場合、遊離抗原または遊離抗体は非常にわずかとなり、したがって抗体の平衡定数または親和性は高くなる。高親和性抗体は、抗原と抗体の間に良好な適合がある場合に見られる(抗体親和性の考察については、Sigal and Roned.,1994,Immunology and Inflammation−Basic Mechanisms and Clinical Consequences,McGraw−Hill,Inc.New York,pp.56−57;およびSeymour et ah,1995,Immunology−An Introduction for the Health Sciences,McGraw−Hill Book Company,Australia,pp.31−32を参照されたい)。好ましくは、IL−6ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、その他の抗原と交差反応しない。すなわち、その他のポリペプチドまたはその他のポリペプチド断片に対するよりも高いエネルギーで、IL−6ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片(例えば抗体特異性の考察については、Paul ed.,1989,Fundamental Immunology,2nd ed.,Raven Press,New York,pp.332−336を参照されたい)。IL−6ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、例えば、放射免疫測定法(RIA)などの免疫測定法、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)、およびBIAcoreアッセイ、または当業者に知られているその他の技術によって同定し得る(例えばインビボで抗体−抗原相互作用を判定するための様々なアッセイの考察については、Seymour et al,1995,Immunology−An Introduction for the Health Sciences,McGraw−Hill Book Company,Australia,pp.33−41を参照されたい)。IL−6ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、IL−6ポリペプチドのみと拮抗し、その他の活性とは顕著に拮抗しない。
本明細書の用法では、抗体の文脈で「アナログ」または「抗体アナログ」という用語は、第2の抗体、すなわち抗体と同様または同一の機能を持つが、必ずしも抗体と同様または同一のアミノ酸配列を含まず、または抗体と同様または同一の構造を有しない、抗体アナログを指す。同様のアミノ酸配列を有する抗体とは、以下の少なくとも1つを満たす抗体アナログを指す:(a)抗体のアミノ酸配列と、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%同一のアミノ酸配列を有する抗体アナログ;(b)少なくとも5連続アミノ酸残基、少なくとも10連続アミノ酸残基、少なくとも15連続アミノ酸残基、少なくとも20連続アミノ酸残基、少なくとも25連続アミノ酸残基、少なくとも40連続アミノ酸残基、少なくとも50連続アミノ酸残基、少なくとも60連続アミノ残基、少なくとも70連続アミノ酸残基、少なくとも80連続アミノ酸残基、少なくとも90連続アミノ酸残基、少なくとも100連続アミノ酸残基、少なくとも125連続アミノ酸残基、または少なくとも150連続アミノ酸残基の抗体をコードするヌクレオチド配列と、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる抗体アナログ;および(c)抗体をコードするヌクレオチド配列と、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%同一のヌクレオチド配列によってコードされる抗体アナログ。抗体と同様の構造がある抗体アナログとは、抗体と同様の二次、三次または四次構造を有するタンパク性作用物質を指す。抗体アナログまたは抗体の構造は、ペプチド配列決定、X線結晶構造解析、核磁気共鳴、円二色性、および結晶学的電子顕微鏡検査をはじめとするが、これに限定されるものではない、当業者に知られている方法によって判定し得る。
2つのアミノ酸配列または2つの核酸配列の%同一性を判定するために、最適比較目的で配列を整列させる(例えば第2のアミノ酸または核酸配列との最適アラインメントのために、第1のアミノ酸配列または核酸配列の中にギャップを導入し得る)。次に対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド配列部位にある、アミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第1の配列中の位置が、第2の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子はその位置において同一である。2つの配列間の%同一性は、配列により共有される同一位置数の関数である(すなわち%同一性=同一重複位置数/位置総数×100%)。一実施形態では、2つの配列は長さが同じである。
2つの配列間の%同一性の判定は、数学的アルゴリズムを使用しても達成し得る。2つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの非限定的一例は、Karlin and Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87:2264−2268に記載され、Karlin and Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:5873−5877に記載されるように修正されている、アルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Altschul et ah,1990、J.Mol.Biol.215:403のNBLASTおよびXBLASTプログラムに組み込まれている。本発明の核酸分子と相同的なヌクレオチド配列を得るために、例えばscore=100、wordlength=12のNBLASTヌクレオチドプログラムパラメータセットで、BLASTヌクレオチド検索を実施し得る。本発明のタンパク質分子と相同的なアミノ酸配列を得るために、例えばscore=−50、wordlength=3のXBLASTプログラムパラメータセットで、BLASTタンパク質検索を実施し得る。比較目的で、ギャップありアラインメントを得るために、Altschul et al,1997,Nucleic Acids Res.25:3389−3402に記載されるGapped BLASTを利用し得る。代案としては、PSI−BLASTを使用して、分子間の距離関係(Id)を検出する反復サーチを実施し得る。BLAST、Gapped BLAST、およびPSI−BLASTプログラムを使用する場合、それぞれのプログラムの(例えばXBLASTおよびNBLASTの)デフォルトパラメータを使用し得る(例えばNCBIウェブサイトを参照されたい)。配列比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的例は、Myers and Miller,1988,CABIOS 4:11−17のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、GCG配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるALIGNプログラム(バージョン2.0)に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにALIGNプログラムを使用する場合、PAM 120 weight residue table、gap length penalty=12、およびgap penalty=4を使用し得る。
いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体は、抗体製剤に添加される前に精製される。「単離する」および「精製する」という用語は、例えば宿主細胞タンパク質を含んでなる組成物など、抗体がその中にある組成物中の不純物またはその他の汚染物質からの抗体の分離を指す。いくつかの実施形態では、抗体から、少なくとも50%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、99.5%、または99.9%(w/w)の不純物が浄化される。例えばいくつかの実施形態では、例えば抗IL6(YTE)抗体などの抗体の精製は、組成物中に元々存在する、99%(w/w)の宿主細胞タンパク質からの抗体の分離を含んでなるであろう。
いくつかの実施形態では、「単離する」、および「精製する」という用語は、例えば世界保健機関または米国食品医薬品局など、政府機関のガイドラインに一致する程度に、例えば抗IL6(YTE)抗体などの抗体を組成物中の不純物またはその他の汚染物質から分離することを指す。
本発明の抗体製剤は、製薬目的で使用し得る。製薬用途で使用される抗体は、概して、特に細胞タンパク質汚染物質、細胞DNA汚染物質、ウイルスおよびその他の伝染性作用物質をはじめとする、細胞培養物からの汚染物質に関して、高レベルの純度を有しなくてはならない。“WHO Requirements for the use of animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals:Requirements for Biological Substances No.50.”No.878.Annex 1,1998.を参照されたい。汚染物質に対する懸念に応えて、世界保健機関(WHO)は、様々な汚染物質のレベルに対する制限を設けた。例えばWHOは、タンパク質製品の投与あたり10ng未満のDNA制限を推奨する。同様に米国食品医薬品局(FDA)は、0.5pg/mgタンパク質以下のDNA制限を設定した。したがっていくつかの実施形態では、本発明は、例えば米国食品医薬品局および/または世界保健機関などの1つまたは複数の政府機関によって規定される、汚染物質制限を満たし、またはそれを上回る、抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、抗本明細書に記載される抗体製剤は、薬学的に許容可能である。「薬学的に許容可能」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性またはその他の合併症なしに、ヒトおよび動物組織との接触に適する、妥当な利点/リスク比に見合った抗体製剤を指す。
抗体製剤の純度は、変動し得る。いくつかの実施形態では、例えば抗IL6(YTE)抗体などの関心のある治療用抗体は、抗体製剤中に存在する全ポリペプチドの90%(wt/wt)を超える。いくつかの実施形態では、例えば抗IL6(YTE)などの関心のある治療用抗体は、抗体製剤中に存在する全ポリペプチドの95%(wt/wt)、98%(wt/wt)、99%(wt/wt)、99.5%(wt/wt)または99.9%(wt/wt)を超える。
抗体製剤中の抗体濃度は、変動し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体濃度は、約20mg/mLを超え、約50mg/mLを超え、約75mg/mLを超え、約100mg/mLを超え、約125mg/mLを超え、約150mg/mLを超え、約175mg/mLを超え、または約200mg/mLを超える。いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体濃度は、約20mg/mL〜300mg/mL、約50mg/mL〜約250mg/mL、約75mg/mL〜約200mg/mL、約100mg/mL〜約175mg/mL、約125mg/mL〜約175mg/mL、約50mg/mL、約100mg/mL、または約150mg/mLである。
本発明の抗体製剤は、アルギニンを含んでなり得る。アルギニンは、式、
によって表わし得る、条件的非必須アミノ酸である。本明細書の用法では、アルギニンは、アルギニンの遊離塩基形態、ならびにあらゆる全てのそれらの塩を含み得る。いくつかの実施形態では、アルギニンは、その薬学的に許容可能な塩を含む。例えばアルギニンは、塩酸アルギニンを含むであろう。本明細書の用法では、アルギニンは、全ての鏡像異性体(例えばL−アルギニンおよびD−アルギニン)、および鏡像異性体の任意の組み合わせ(例えば50%のL−アルギニンと50%のD−アルギニン;90%〜100%のL−アルギニンと10%〜0%のD−アルギニンなど)もまた含む。いくつかの実施形態では、「アルギニン」という用語は、99%を超えるL−アルギニンおよび1%未満のD−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、「アルギニン」という用語は、鏡像異性的に純粋なL−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、アルギニンは製薬等級のアルギニンである。
アルギニンは、例えば抗IL6(YTE)抗体などの様々な抗体を、熱力学的に不安定化することが予測される。例えば、図1を参照されたい。当業者は、例えば抗IL6(YTE)抗体などの所与のタンパク質について、例えばアルギニンなどの不安定化作用物質の量の増大が、例えばタンパク質構造を変性させるなど、タンパク質構造をその天然形態から変化させる能力を増大させるであろうことを予測であろう。いかなる特定の理論よる限定も受けないが、本発明者らは、抗体製剤中のアルギニン量の増大が、事実上、DSCによって測定される融解温度を低下させるにもかかわらず、アルギニンは、実際には、保存時のSE−HPLC分解速度による測定で、抗IL6(YTE)抗体に対して不安定化効果でなく、安定化効果を提供することを見出した。したがっていくつかの実施形態では、抗体製剤中に高濃度のアルギニンが存在して、製剤中の抗体に対する安定化効果を提供し得る。
様々な濃度のアルギニンが、抗体製剤中に存在し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、20mMを超えるアルギニン、25mMを超えるアルギニン、50mMを超えるアルギニン、75mMを超えるアルギニン、100mMを超えるアルギニン、125mMを超えるアルギニン、150mMを超えるアルギニン、175mMを超えるアルギニン、200mMのアルギニン、205mMを超えるアルギニン、210mMを超えるアルギニン、215mMを超えるアルギニン、220mMのを超えるアルギニン、230mMを超えるアルギニン、240mMを超えるアルギニン、250mMを超えるアルギニン、275mMを超えるアルギニン、300mMを超えるアルギニン、または350mMを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、200mMを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、220mMを超えるアルギニンを含んでなる。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、最大で800mMのアルギニン、最大で700mMのアルギニン、最大で650mMのアルギニン、最大で600mMのアルギニン、最大で550mMのアルギニン、最大で500mMのアルギニン、最大で450mMのアルギニン、または最大で400mMのアルギニンを含んでなる。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、25mM〜600mMのアルギニン、50mM〜600mMのアルギニン、75mM〜600mMのアルギニン、100mM〜600mMのアルギニン、125mM〜500mMのアルギニン、150mM〜400mMのアルギニン、175mM〜400mMのアルギニン、200mM〜350mMのアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、150mM〜400mMのアルギニンを含んでなる。
本明細書に記載されるように、アルギニン濃度が上昇している抗体製剤は、経時的に安定性が増大している。抗体製剤中の抗体安定性は、様々な手段によって判定し得る。いくつかの実施形態では、抗体安定性は、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によって判定される。SECは、それらの流体力学的サイズ、拡散係数、および表面特性の組み合わせに基づいて、分析物(例えばタンパク質および抗体などの巨大分子)を分離する。したがって例えばSECは、様々な変性状態にある抗体および/または分解された抗体から、天然の三次元立体構造にある抗体を分離し得る。SECでは、固定層は、一般に、ガラスまたは鋼鉄カラム内の緻密な三次元マトリックスに充填された、不活性粒子から構成される。移動相は、純水、水性緩衝液、有機溶剤、これらの混合物、またはその他の溶媒であり得る。固定相粒子は、特定サイズ未満の化学種のみを進入させる小さな孔および/またはチャンネルを有する。したがって大型粒子は、これらの孔およびチャンネルから排除されるが、より小型の粒子は、流動移動相から取り出される。粒子が、固定相孔内で固定化状態にある時間は、それらが孔内にどの程度浸透したかに、ある程度左右される。移動相流から取り出されることで、それらのカラムからの溶出にはより長い時間がかかり、サイズの違いに基づいて粒子間の分離がもたらされる。
いくつかの実施形態では、SECを同定技術と組み合わせて、タンパク質またはその断片を同定し、または特性解析する。タンパク質同定および特性解析は、例えば高速液体クロマトグラフィー(HPLC)などのクロマトグラフィー技術、免疫測定法、電気泳動、紫外線/可視/赤外線分光法、ラマン分光法、表面増強ラマン分光法、質量分光分析、ガスクロマトグラフィー、静的光散乱(SLS)、フーリエ変換赤外線分光法(FTIR)、円二色性(CD)、尿素誘導タンパク質アンフォールディング技術、内在性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および/またはANSタンパク質結合をはじめとするがこれに限定されない、様々な技術によって達成し得る。
いくつかの実施形態では、タンパク質同定は、高圧液体クロマトグラフィーによって達成される。HPLC実施するための様々な手段および装置が、当業者に知られている。一般にHPLCは、その中で分離が起きる分離カラムに、関心のあるタンパク質を含有する液体溶媒を装填することを伴う。HPLC分離カラムは、固体粒子(例えばシリカ、ポリマー、または吸着材)で充填され、サンプル混合物は、カラム粒子との相互作用に伴って、化合物に分離される。HPLC分離は、液体溶媒条件(例えば圧力、温度)、サンプル混合物と液体溶媒との化学相互作用(例えば疎水性、プロトン付加など)、およびサンプル混合物と分離カラム内に充填された固体粒子との化学相互作用(例えばリガンド親和性、イオン交換など)の影響を受ける。
いくつかの実施形態では、SECおよびタンパク質の同定は、同一装置内で、または同時に行われる。例えばSECとHPLCは併用し得て、SE−HPLCと称されることが多い。
本明細書で特定される技術などの既知の技術を使用して、様々な抗体および抗体分解産物を分離することで、抗体製剤中の抗体安定性を判定し得る。本明細書の用法では、「安定性」という用語は、一般に、タンパク質、ペプチド、または別の生理活性高分子などの生物活性作用物質の完全性維持、または分解、変性、凝集またはアンフォールディングの最小化に関連する。本明細書の用法では,「改善された安定性」とは、一般に、分解、変性、凝集またはアンフォールディングをもたらすことが知られている条件下で、関心のあるタンパク質(例えば抗IL6(YTE)などの抗体)、ペプチドまたは別の生理活性高分子が、対照タンパク質、ペプチドまたは別の生理活性高分子と比較して、より大きな安定性を維持することを意味する。例えば「アルギニン存在下における改善された安定性」という語句は、例えば抗IL6(YTE)抗体などの関心のあるタンパク質が、アルギニン不在下の同一抗体と比較して、アルギニン存在下で抗IL6(YTE)抗体の分解、変性、凝集またはアンフォールディングの低下した量を有するであろうことを示す。
いくつかの実施形態では、安定性とは、低から検出不能レベルの凝集を有する抗体製剤を指す。「低から検出不能レベルの凝集」という語句は、本明細書の用法では、高性能サイズ排除クロマトグラフィー(HPSEC)、静的光散乱(SLS)、フーリエ変換赤外線分光法(FTIR)、円二色性(CD)、尿素誘導タンパク質アンフォールディング技術、内在性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および1−アニリノ−8−ナフタレンスルホン酸(ANS)タンパク質結合技術による測定で、タンパク質の重量を基準にして5%以下、4%以下、3%以下、2%以下、1%以下、および0.5%以下の凝集を含有するサンプルを指す。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、低から検出不能レベルの断片化を有する。「低から検出不能レベルの断片化」という用語は、本明細書の用法では、例えば、HPSECによる測定で単一ピーク内に、または還元キャピラリーゲル電気泳動(rCGE)による測定で2ピーク(例えば重鎖および軽鎖)(またはサブユニット内の全てのピーク)内に、非分解抗体またはその非分解断片に相当する、80%、85%、90%、95%、98%または99%以上の総タンパク質を含有し、5%を超え、4%を超え、3%を超え、2%を超え、1%を超え、または0.5%を超える総タンパク質をそれぞれ有する、その他の単一ピークを含有しないサンプルを指す。「還元キャピラリーゲル電気泳動」という用語は、本明細書の用法では、抗体中のジスルフィド結合を還元するのに十分な還元条件下における、キャピラリーゲル電気泳動を指す。
当業者は、タンパク質の安定性が、製剤組成に加えて、その他の特性に左右されることを理解するであろう。例えば安定性は、温度、圧力、湿度、および外部放射線形態によって影響され得る。したがって特に断りのない限り、本明細書で言及される安定性は、2〜8℃、1気圧、相対湿度60%、および標準的バックグラウンド放射線レベルで測定されると見なされる。
「安定した」という用語は、相対的であり、絶対的でない。したがって本明細書の目的で、いくつかの実施形態では、抗体を2℃〜8℃で6ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を2℃〜8℃で12ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を2℃〜8℃で18ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体製剤中の抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を2℃〜8℃で24ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体製剤中の抗体は安定している。
いくつかの実施形態では、抗体を23℃〜27℃で3ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を23℃〜27℃で6ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を23℃〜27℃で12ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を23℃〜27℃で24ヶ月間保存した際に、SEC HPLCによる測定で、20%未満、15%未満、10%未満、5%未満または2%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。
いくつかの実施形態では、抗体を40℃で保存した際に、SEC HPLCによる測定で、1ヶ月あたり、6%未満、4%未満、3%未満、2%未満または1%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を5℃で保存した際に、SEC HPLCによる測定で、1ヶ月あたり、6%未満、4%未満、3%未満、2%未満または1%未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。
いくつかの実施形態では、8週間、4ヶ月、6ヶ月、9ヶ月、12ヶ月または24ヶ月間にわたり、例えばELISAなどの当業者に知られている抗体結合アッセイによる測定で、抗体が、参照抗体と比較して、製剤の抗体(その抗体断片を含む)の結合活性に、非常にわずかまたは皆無の低下を示す場合に、本発明の抗体製剤は安定していると見なし得る。
本明細書に記載される抗体製剤は、様々な粘度を有し得る。抗体製剤の粘度測定法は当業者に知られており、例えばレオメータ(例えば50mm、40mmまたは20mmコーンアクセサリー付きAnton Paar MCR301レオメータ)が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態では、粘度は、毎秒剪断速度1000の高剪断限界で報告された。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、20cP未満、18cP未満、15cP未満、13cP未満、または11cP未満の粘度を有する。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、14cP未満の粘度を有する。当業者は、粘度が温度に左右され、したがって特に断りのない限り、本明細書で提供される粘度は、特に断りのない限り23℃で測定されることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、抗体製剤の粘度は、23℃で14cP未満である。
「射出力」という用語は、抗体製剤を針を通過させるのに必要な圧力の量(ニュートン単位)である。射出力は、抗体製剤を対象に投与する際に、抗体製剤によって提供される抵抗性と相関する。射出力は、投与する針のゲージ、ならびに温度に左右される。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、国際標準化機構(ISO)文献「Stainless steel needle tubing for the manufacture of medical devices」(ISO 9626:1991)で定義され、BD Medical,Pharmaceutical Systems(Franklin Lakes,NJ)によって製造される27Ga肉薄PFS針の通過時に、15N、12N、10N、または8N未満の射出力を有する。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、25または26ゲージ針の通過時に、15N、12N、10N、または8N未満の射出力を有する。
抗体製剤は、異なるモル浸透圧濃度を有し得る。抗体製剤のモル浸透圧濃度の測定法は、当業者に知られており、例えば浸透圧計(例えばAdvanced Instrument Inc 2020凝固点降下浸透圧計)が挙げられる。いくつかの実施形態では、製剤は、200〜600mosm/kg、260〜500mosm/kg、または300〜450mosm/kgのモル浸透圧濃度を有する。いくつかの実施形態では、製剤は、オスモライトを含まない。
本発明の抗体製剤は、様々なpHレベルを有し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤のpHは、4〜7、4.5〜6.5、または5〜6である。いくつかの実施形態では、抗体製剤のpHは6.0である。適切な緩衝液の添加をはじめとするが、これに限定されるものではない、様々な手段を利用して、所望のpHレベルを得てもよい。
抗体製剤には、様々なその他の成分が含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、緩衝液(例えば酢酸エステル、リン酸またはクエン酸緩衝液)、界面活性剤(例えばポリソルベート)、および/または安定剤(例えばヒトアルブミン)などを含んでなり得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、例えばイオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、スクロース、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミンやリン酸水素二ナトリウムやリン酸水素カリウムや塩化ナトリウムや亜鉛塩などの塩または電解質、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、およびポリエチレングリコールをはじめとする、薬学的に許容可能な担体を含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、界面活性剤をさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、プルロニック、ブリジ、およびその他の非イオン性界面活性剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート80である。製剤中の界面活性剤濃度は、変動し得る。例えばいくつかの実施形態では、製剤中の界面活性剤濃度は、約0.001%〜約1%、約0.005%〜約0.5%、約0.0.01%〜約0.1%、または約0.05%〜約0.07%である。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジンをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、製剤中のヒスチジン濃度は、約5mM〜約200mM、約10mM〜約100mM、約20mM〜約50mM、または約25mMである。
いくつかの実施形態では、抗体製剤から様々な成分を省き得て、または抗体製剤は、その成分を「実質的に含まない」ことができる。「実質的に含まない」という用語は、本明細書の用法では、0.01%未満、0.001%未満、0.0005%未満、0.0003%未満、または0.0001%未満の指定された成分を含有する、抗体製剤を指す。
いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを実質的に含まず、すなわち抗体製剤は、0.01%未満、0.001%未満、%0.0005%未満、0.0003%未満、または0.0001%未満のトレハロースを含有する。いくつかの実施形態では、製剤は、約10mM〜約1000mM、約50mM〜約500mM、約100mM〜約350mM、約150mM〜約250mM、約180mMまたは約225mM濃度のトレハロースを含んでなる。いくつかの実施形態では、トレハロースは、アルギニンと組み合わせて使用される。アルギニンおよびトレハロースの濃度は変動し得て、互いに独立であり得る。いくつかの実施形態では、アルギニン:トレハロースのモル比は、約0:1、約1:20、約1:10、約1:8、約1:5、約1:2、約1:1、約2:1、約5:1、約10:1、または約10:0であり得る。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は糖類を実質的に含まず、すなわち抗体製剤、前記製剤は、0.01%未満、0.001%未満、0.0005%未満、0.0003%未満、または0.0001%未満の糖類を含有する。「糖類」という用語は、本明細書の用法では、多価アルコール誘導体である分子のクラスを指す。糖類は、通常、炭水化物と称され、例えば単糖類、二糖類、および多糖類などの異なる量の糖(糖類)単位を含有してもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、二糖類を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない製剤。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジン、プロリン、グルタミン酸、ソルビトール、二価の金属イオン、および/またはコハク酸を実質的に含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)例えば抗IL6抗体などの約150mg/mL〜約400mg/mLの抗体、(b)150mM〜400mMのアルギニン、(c)0.01%〜0.1%のポリソルベート80、(d)5mM〜100mMのヒスチジンを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)例えば抗IL6抗体などの150mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)220mMのアルギニン(例えばアルギニンHCl)、および(d)0.07%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)例えば抗IL6抗体などの150mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)150mMのアルギニン(例えばアルギニンHCl)、および(d)0.07%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)例えば抗IL6抗体などの約50mg/mL〜約200mg/mLの抗体、(b)20mM〜400mMのアルギニン、(c)0.01%〜0.1%のポリソルベート80、(d)5mM〜100mMのヒスチジン、および場合により(e)約50mM〜約400mMのトレハロースを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)例えば抗IL6抗体などの50mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)225mMのトレハロース、および(d)0.05%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)例えば抗IL6抗体などの100mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)180mMのトレハロース、(d)25mMのアルギニン、および(e)0.07%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、約150mg/mL〜約400mg/mLの抗体、(b)150mM〜400mMのアルギニン、(c)0.01%〜0.1%のポリソルベート80、(d)10mM〜50mMのヒスチジンを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる150mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)220mMのアルギニン(例えばアルギニンHCl)、および(d)0.07%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、150mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)150mMのアルギニン(例えばアルギニンHCl)、および(d)0.07%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、約50mg/mL〜約200mg/mLの抗体、(b)20mM〜400mMのアルギニン、(c)0.01%〜0.1%のポリソルベート80、(d)5mM〜100mMのヒスチジン、および場合により(e)約50mM〜約400mMのトレハロースを含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、50mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)225mMのトレハロース、および(d)0.05%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、pH6.0で、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、100mg/mLの抗体、(b)25mMのヒスチジン(例えばL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物)、(c)180mMのトレハロース、(d)25mMのアルギニン、および(e)0.07%(w/v)のポリソルベート80を含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与することで、炎症性疼痛構成要素がある患者を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与することで、活性化IL−6依存性経路がある患者を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において骨関節炎に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において慢性腰痛に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。
本明細書の用法では、「対象」は、「患者」と同義的に使用し得て、ヒト、ならびに飼育動物および家畜、動物園動物、スポーツ用動物、およびペットなどであるが、これに限定されるものではない、非ヒトをはじめとする、哺乳類に分類されるあらゆる動物を指す。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトを指す。
「治療する」および「治療」という用語は、治療処置と、予防的、保全的、またはは防止的手段との双方を指し、目的は、望まれない生理学的な病状、障害または疾患を予防または緩和(軽減)し、あるいは有益なまたは所望の臨床結果を得ることである。「治療する(treat)」、「治療(treatment)」、および「治療する(treating)」という用語は、(1つまたは複数の予防薬または治療薬の投与をはじめとするが、これに限定されるものではない)1つまたは複数の治療法の実施から得られる、このような疾患または障害(例えばIL−6ポリペプチドの異常な発現および/または活性によって特徴付けられる疾患または障害、IL−6受容体またはその1つもしくは複数のサブユニットの異常な発現および/または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症(好ましくは呼吸器感染症))の進行、重症度、および/または持続期間の低下または改善、あるいはその1つまたは複数の症状の改善を指す。特定の実施形態では、このような用語は、様々な病状に伴う疼痛の低下を指す。別の実施形態では、このような用語は、肥満細胞による炎症性作用物質放出の低下、またはこのような炎症性作用物質による生物学的効果の低下を指す。別の実施形態では、このような用語は、過剰増殖性細胞(例えばがん性細胞)の増殖、形成および/または増加の低下を指す。なおも別の実施形態では、このような用語は、原発性、局所的または転移性がんの根除、除去または抑制を指す(例えばがんの拡大の最小化または遅延)。なおも別の実施形態では、このような用語は、非小細胞肺がんの根除、除去または抑制を指す(例えばがんの拡大の最小化または遅延)。なおも別の実施形態では、このような用語は、関節リウマチの根除、除去または抑制を指す。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において関節リウマチを治療する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体製剤の治療有効量が投与されて、病状が治療される。本明細書の用法では、「治療有効量」という用語は、疾患または障害(例えばIL−6ポリペプチドの異常な発現および/または活性によって特徴付けられる疾患または障害、IL−6受容体またはその1つまたは複数のサブユニットの異常な発現および/または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症(好ましくは呼吸器感染症)あるいは1つまたは複数のその症状)の重症度を低下させ、呼吸器病状の持続期間を低下させ、このような疾患または障害の1つまたは複数の症状を改善し、このような疾患または障害の進行を予防し、このような疾患または障害の退縮を引き起こし、または別の治療法の治療効果を高めまたは改善するのに十分な治療法(例えばIL−6ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体)の量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、前もって特定され得ず、例えば用量漸増などの様々な手段を使用して、例えば医師またはその他の保健医療提供者などの介護者によって判定され得る。適切な治療有効量はまた、例えば動物モデルを使用して、日常的実験法によって判定し得る。
「治療法(therapies)」および「治療法(therapy)」という用語は、疾患または障害(例えばIL−6ポリペプチドの異常な発現および/または活性によって特徴付けられる疾患または障害、IL−6受容体またはその1つもしくは複数のサブユニットの異常な発現および/または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症(好ましくは呼吸器感染症)あるいはその1つまたは複数の症状)の予防、治療、管理、または改善において使用し得る、あらゆるプロトコル、方法、および/または作用物質を指し得る。特定の実施形態では、「治療法(therapy)」および「治療法(therapy)」という用語は、熟練した医療関係者に知られている、そのような疾患または障害あるいは1つまたは複数の症状の治療、管理、予防、または改善において有用な、抗ウイルス療法、抗細菌療法、抗真菌療法、生物学的療法、支持療法、および/またはその他の治療法を指す。
本明細書の用法では、「治療法プロトコル」という用語は、投薬および治療的に有効な1つまたは複数の治療法(例えば治療薬)の実施のタイミングのためのレジメンを指す。
本発明の抗体製剤の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入または局所投与法を介し得る。非経口という用語は、本明細書の用法では、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または膣内投与を含む。いくつかの実施形態では、単離抗体は、抗IL6抗体(例えば抗IL6(YTE)抗体)であり、投与経路は皮下注射である。これらの投与形態は全て、本発明の範囲内として明確に検討される一方で、いくつかの実施形態では、抗体製剤は、注射、特に静脈内もしくは動脈内注射または点滴による投与に適する。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、対象への投与前に静注製剤中で希釈される。場合によっては、例えばIVバッグなどの静注製剤中の抗体製剤の希釈に際して、可視粒子の形成が起こり得る。粒子形成に対処するために、いくつかの実施形態では、抗体製剤を入れる前に、緩衝液と界面活性剤を静注バッグに添加するステップを含んでなる、抗体製剤の静注バッグ内での希釈に際して、粒子形成を低下させる方法が提供される。
「IVバッグ保護剤」という用語は、本明細書に記載される抗体製剤の静注バッグ内での希釈前に、静注バッグに添加される界面活性剤を指す。IVバッグ保護剤はまた、例えば凍結乾燥抗体製剤などの当業者に知られているその他の抗体製剤の添加前に、静注バッグに添加し得る。
IVバッグ保護剤として使用するのに適する界面活性剤は、一般に、IV製剤中での使用に適するものであろう。いくつかの実施形態では、IVバッグ保護剤中で使用される界面活性剤は、抗体製剤で使用されるのと同じ緩衝液である。例えば抗体製剤が、界面活性剤としてポリソルベート80を含んでなる場合、抗体製剤を静注バッグに入れる前に、ポリソルベート80が静注バッグに添加される。
いくつかの実施形態では、IVバッグ保護剤は界面活性剤を含んでなり、それは、IV製剤に添加すると、IV製剤中で、約0.006%〜約0.018%の界面活性剤、約0.008%〜約0.015%の界面活性剤、約0.009%〜約0.012%の界面活性剤、約0.009%の界面活性剤、約0.010%の界面活性剤、約0.011%の界面活性剤または約0.012%の界面活性剤の範囲の界面活性剤濃度を生じる。いくつかの実施形態では、界面活性剤はポリソルベート80(PS80)であり、それは、IV製剤に添加すると、IV製剤中で、約0.006%〜約0.018%の界面活性剤、約0.008%〜約0.015%の界面活性剤、約0.009%〜約0.012%の界面活性剤、約0.009%の界面活性剤、約0.010%の界面活性剤、約0.011%の界面活性剤または約0.012%の界面活性剤の範囲の界面活性剤濃度を生じる。いくつかの実施形態では、IV保護剤の添加から得られるIVバッグ内の界面活性剤濃度は、抗体製剤中の界面活性剤濃度とほぼ同じ、その約半分、またはその約7分の1である。
IVバッグ内の界面活性剤の所望の最終濃度が分かれば、IVバッグ保護剤中に所望の濃度の界面活性剤を調合し得る。例えばいくつかの実施形態では、IVバッグ保護剤は、約0.01%〜約10.0%の界面活性剤、約0.05%〜約5%の界面活性剤、約0.1%〜約2%の界面活性剤、または約0.5%〜約1%の界面活性剤を含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、(1)抗体製剤、および(2)IV保護剤を含んでなる、キットを対象とし得る。いくつかの実施形態では、本発明は、(1)抗体製剤、および(2)界面活性剤を含んでなるIV保護剤を含んでなる、キットを対象とし得る。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート80である。いくつかの実施形態では、本発明は、(1)本明細書に記載される抗体製剤、および(2)IV保護剤を含んでなるキットを対象とし得る。いくつかの実施形態では、本発明は、(1)本明細書に記載される抗体製剤、および(2)IV保護剤を含んでなるキットを対象とし得て、(i)IV保護剤は、IV製剤への添加時に、約0.006%〜約0.018%の範囲のポリソルベート80を生じるのに十分な量のポリソルベート80を含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(1)本明細書に記載されるIV保護剤をIV製剤に添加するステップと、(2)抗体製剤を添加するステップとを含んでなる、抗体製剤をIV製剤中で希釈する前に、例えばIVバッグなどのIV製剤を前処理する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)抗体を約150mg/mL〜約400mg/mLに濃縮するステップと、(b)アルギニンを(a)の抗体に添加して、約150mMを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、(c)ヒスチジンを添加して、10mM〜100mM濃度のヒスチジンを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、(d)例えばポリソルベート80などの界面活性剤を添加して、0.02%〜0.1%濃度の界面活性剤を有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)抗体を約100mg/mL〜約400mg/mLに濃縮するステップと、(b)アルギニンを(a)の抗体に添加して、約100mM〜約200mM濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、(c)ヒスチジンを添加して、10mM〜100mM濃度のヒスチジンを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、(d)例えばポリソルベート80などの界面活性剤を添加して、0.02%〜0.1%濃度の界面活性剤を有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、トレハロースを添加して、約100mM〜約300mM濃度のトレハロースを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)抗体を約50mg/mL〜約400mg/mLに濃縮するステップと、(b)トレハロースを(a)の抗体に添加して、約100mM〜約400mM濃度のトレハロースを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、(c)ヒスチジンを添加して、10mM〜100mM濃度のヒスチジンを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、(d)例えばポリソルベート80などの界面活性剤を添加して、0.02%〜0.1%濃度の界面活性剤を有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる抗体を約150mg/mL〜約400mg/mLに濃縮するステップと;(b)アルギニンを(a)の抗体に添加して、約150mMを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなり、(b)の抗体製剤が、水溶液中にあり、23℃で20cP未満の粘度を有し、(b)の抗体製剤が、SEC HPLCによる測定で、2℃〜8℃で12ヶ月間にわたり安定している、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、コストの削減、方法段階の削減、誤りの機会の減少、安全でないまたは不適切な添加剤の導入の機会の減少などのいずれかによって、製造会社がより効率的な−方法で、ヒトへの投与に適した抗体製剤を製造できるようにする。本発明の抗体製剤は、凍結乾燥抗体を戻すことなく投与し得る。
実施例1
材料と方法
材料
使用された全ての材料は、USPまたは複数公定等級であった。全ての溶液および緩衝液は、USPまたはHPLC水を使用して調製し、さらなる使用前に、0.2μmのPVDFフィルター(Millipore,Millex GV,SLG033RB)を通して濾過した。精製抗IL6(YTE)は、浄化した。バイオセーフティーキャビネットHood(BSC)内の無菌条件下で、安定性試験のための精製抗IL6(YTE)サンプルを調製した。バルク材料は、2〜8℃で保存した。
材料と方法
材料
使用された全ての材料は、USPまたは複数公定等級であった。全ての溶液および緩衝液は、USPまたはHPLC水を使用して調製し、さらなる使用前に、0.2μmのPVDFフィルター(Millipore,Millex GV,SLG033RB)を通して濾過した。精製抗IL6(YTE)は、浄化した。バイオセーフティーキャビネットHood(BSC)内の無菌条件下で、安定性試験のための精製抗IL6(YTE)サンプルを調製した。バルク材料は、2〜8℃で保存した。
方法
i.タンパク質濃度判定
抗IL6(YTE)抗体濃度は、Agilent UV−Vis分光光度計を用いて、280nmにおける吸光度測定によって判定された。測定された1.71(mg/mL)-1cm-1の吸光係数を使用して、タンパク質濃度を計算した。
i.タンパク質濃度判定
抗IL6(YTE)抗体濃度は、Agilent UV−Vis分光光度計を用いて、280nmにおける吸光度測定によって判定された。測定された1.71(mg/mL)-1cm-1の吸光係数を使用して、タンパク質濃度を計算した。
ii.サイズ排除クロマトグラフィーによる純度判定
280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を用いて、Agilent HPLCシステム上で、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)分析を実施した。0.1Mのリン酸ナトリウム、0.1Mの硫酸ナトリウム、および0.05%(w/v)のアジ化ナトリウムを含有する、pH6.8の移動相を使用して、20分間にわたり1.0mL/分の流速を使用して、サンプルをアッセイした。約250マイクログラムのタンパク質を注入した。可溶性凝集体、モノマー、および断片の溶出は、それぞれおよそ6〜8分、8.5分、および9〜11.5分で起きた。
280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を用いて、Agilent HPLCシステム上で、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)分析を実施した。0.1Mのリン酸ナトリウム、0.1Mの硫酸ナトリウム、および0.05%(w/v)のアジ化ナトリウムを含有する、pH6.8の移動相を使用して、20分間にわたり1.0mL/分の流速を使用して、サンプルをアッセイした。約250マイクログラムのタンパク質を注入した。可溶性凝集体、モノマー、および断片の溶出は、それぞれおよそ6〜8分、8.5分、および9〜11.5分で起きた。
iii.逆相クロマトグラフィーによる断片化レベルの判定
断片化レベルは、Michrom Bioresources PLRP−S CM810092/00カラムを用いて、Agilent HPLCシステムを使用して評価した。
断片化レベルは、Michrom Bioresources PLRP−S CM810092/00カラムを用いて、Agilent HPLCシステムを使用して評価した。
iv.外観
PhEur(それぞれ2.9.20、2.2.1および2.2.2節)から適応された手順に従って、可視粒子、透明度/乳白光、および色について外観検査を実施した。
PhEur(それぞれ2.9.20、2.2.1および2.2.2節)から適応された手順に従って、可視粒子、透明度/乳白光、および色について外観検査を実施した。
v.肉眼不可視粒子の分析
光掩蔽(HIAC9705)またはフロー顕微鏡検査(Brightwell Microflow Imager,MFI)のどちらかを使用して、肉眼不可視粒子の分析を実施した。
光掩蔽(HIAC9705)またはフロー顕微鏡検査(Brightwell Microflow Imager,MFI)のどちらかを使用して、肉眼不可視粒子の分析を実施した。
vi.浸透圧
Advance Instrument Inc.2020凝固点降下浸透圧計を使用して、浸透圧を測定した。
Advance Instrument Inc.2020凝固点降下浸透圧計を使用して、浸透圧を測定した。
vii.粘度評価
Anton Paar MCR301レオメータを使用して、様々な濃度における抗IL6(YTE)製剤の粘度を評価した。
Anton Paar MCR301レオメータを使用して、様々な濃度における抗IL6(YTE)製剤の粘度を評価した。
viii.製剤安定性試験
異なる賦形剤を用いて調合した抗IL6(YTE)抗体を、清澄な3ccの13mmガラスバイアルに充填した。加速スクリーニングのために、サンプルを40℃/75%RHおよび25℃/60%RHおよび5℃で安定化した。SEC HPLC、RP HPLCを用いて、サンプルを分析し、バイアルを粒子について視覚的に検査した。さらに必要に応じて、選択された時点を効力、浸透圧、pH、HIAC、およびMFIについて分析した。
異なる賦形剤を用いて調合した抗IL6(YTE)抗体を、清澄な3ccの13mmガラスバイアルに充填した。加速スクリーニングのために、サンプルを40℃/75%RHおよび25℃/60%RHおよび5℃で安定化した。SEC HPLC、RP HPLCを用いて、サンプルを分析し、バイアルを粒子について視覚的に検査した。さらに必要に応じて、選択された時点を効力、浸透圧、pH、HIAC、およびMFIについて分析した。
ix.濁度を使用したコロイド安定性スクリーニング
Cary EclipseマルチセルUV−Vis分光光度計を使用して、約62℃の高温に曝した際の様々な抗IL6抗体製剤の濁度を時間に対して測定することで、コロイド安定性をスクリーニングした。より不安定な製剤は、時間経過と共に微粒子および沈殿物が形成する(すなわち360nmでより高い吸光度を有する)ために濁るのに対し、コロイド的により安定している製剤は、より長時間にわたり透明なままである。
Cary EclipseマルチセルUV−Vis分光光度計を使用して、約62℃の高温に曝した際の様々な抗IL6抗体製剤の濁度を時間に対して測定することで、コロイド安定性をスクリーニングした。より不安定な製剤は、時間経過と共に微粒子および沈殿物が形成する(すなわち360nmでより高い吸光度を有する)ために濁るのに対し、コロイド的により安定している製剤は、より長時間にわたり透明なままである。
x.示差走査熱量測定を使用した熱安定性
1mg/mLのタンパク質濃度で96ウェルプレートを使用して、VP−DSC超高感度示差走査熱量計(Microcal,Northampton,MA)上で、示差走査熱量測定(DSC)実験を実施した。サンプルを1時間あたり90℃の速度で、20から100℃まで加熱した。正規化した熱容量(Cp)データは、緩衝液ベースラインについて補正した。第1の融解転移(Tm1)および第2の融解転移(Tm2)を使用して、タンパク質の立体構造安定性に対するそれらの安定効果に従って、賦形剤を順位付けした。
1mg/mLのタンパク質濃度で96ウェルプレートを使用して、VP−DSC超高感度示差走査熱量計(Microcal,Northampton,MA)上で、示差走査熱量測定(DSC)実験を実施した。サンプルを1時間あたり90℃の速度で、20から100℃まで加熱した。正規化した熱容量(Cp)データは、緩衝液ベースラインについて補正した。第1の融解転移(Tm1)および第2の融解転移(Tm2)を使用して、タンパク質の立体構造安定性に対するそれらの安定効果に従って、賦形剤を順位付けした。
xi.示差走査型蛍光定量法を使用した熱安定性
5倍レベル(元の濃度は5000倍)でSYPROオレンジ染料(Invitrogen,S6651)を用いて、約0.5mg/mLのタンパク質濃度で、示差走査蛍光光度分析(DSF)実験を実施した。賦形剤原液とタンパク質/染料原液(約5mg/mLのタンパク質と50倍の染料)を9:1の比率で混合して、様々な賦形剤の等張溶液に調合された標的レベルを得た。96ウェルプレートのウェルあたり25μlで、染料をタンパク質溶液および緩衝液/賦形剤と共に完全に混合した。BioRad C1000サーマルサイクラーPCRプレートリーダーを使用して、折り畳まれていないタンパク質分子への染料結合に起因する蛍光増大を測定した。サンプルを三重反復試験にかけて、1.2℃/分の速度をもたらす、読み取りあたり10秒間で0.2℃の増分で、20から90℃まで加熱した。蛍光中の変曲点は、タンパク質の立体構造安定性尺度であるThとして報告された。
5倍レベル(元の濃度は5000倍)でSYPROオレンジ染料(Invitrogen,S6651)を用いて、約0.5mg/mLのタンパク質濃度で、示差走査蛍光光度分析(DSF)実験を実施した。賦形剤原液とタンパク質/染料原液(約5mg/mLのタンパク質と50倍の染料)を9:1の比率で混合して、様々な賦形剤の等張溶液に調合された標的レベルを得た。96ウェルプレートのウェルあたり25μlで、染料をタンパク質溶液および緩衝液/賦形剤と共に完全に混合した。BioRad C1000サーマルサイクラーPCRプレートリーダーを使用して、折り畳まれていないタンパク質分子への染料結合に起因する蛍光増大を測定した。サンプルを三重反復試験にかけて、1.2℃/分の速度をもたらす、読み取りあたり10秒間で0.2℃の増分で、20から90℃まで加熱した。蛍光中の変曲点は、タンパク質の立体構造安定性尺度であるThとして報告された。
実施例2
立体構造熱安定性
実施例1に記載されるようにして、様々な賦形剤が抗IL6(YTE)抗体の立体構造(熱)安定性に及ぼす効果を調べた。結果は、表1に示される。
立体構造熱安定性
実施例1に記載されるようにして、様々な賦形剤が抗IL6(YTE)抗体の立体構造(熱)安定性に及ぼす効果を調べた。結果は、表1に示される。
表1から分かるように、アルギニンは、特に25mMヒスチジンの塩基緩衝液条件と比較して、立体構造的に最も安定化させない賦形剤であった。
さらなる調査は、図1に見られるように、アルギニンが、抗IL6(YTE)抗体に対してコロイド的に最も安定化させる賦形剤であると、予測すらされなかったことを実証した。コロイド的に最も安定化させる賦形剤が、スクロースおよびトレハロースであった一方で、最も安定化させなかったのは、NaClおよび硫酸ナトリウムであった。
実施例3
粘度および安定性スクリーニングアセスメント
実施例1に記載されるようにして、複数抗IL6(YTE)抗体製剤の粘度プロファイル、および安定性を評価し、安定性および予測されるシリンジ機能性観点の双方について、許容可能であることが分かった。14cPの粘度は、薬剤充填済みシリンジ製品のための肉薄27ゲージ針を使用して、許容可能なシリンジ滑り力性能をもたらすことが予測された(約7Nの射出力および9〜16秒の注入時間)。
粘度および安定性スクリーニングアセスメント
実施例1に記載されるようにして、複数抗IL6(YTE)抗体製剤の粘度プロファイル、および安定性を評価し、安定性および予測されるシリンジ機能性観点の双方について、許容可能であることが分かった。14cPの粘度は、薬剤充填済みシリンジ製品のための肉薄27ゲージ針を使用して、許容可能なシリンジ滑り力性能をもたらすことが予測された(約7Nの射出力および9〜16秒の注入時間)。
表2は、100mg/mLにおける抗IL6(YTE)製剤の安定性および粘度に対する、pH、緩衝液タイプ、ヒスチジンレベル、およびアルギニンレベルの影響の調査を要約する。
サンプル1、2、および3は、抗IL6(YTE)抗体製剤が、より低いpHにおいて、より不安定でより粘質であることを示す。サンプル5、4、および3は、抗IL6(YTE)抗体製剤中のアルギニンレベルの増大が、どちらも望ましい特性である、より高い安定性と、より低い粘度をもたらすことを示す。サンプル5および6は、ヒスチジン緩衝液強度の増大が、粘度も低下させ安定性も増大させ得ることを示す。ヒスチジンを添加するアプローチは、既知の潜在的な経時的黄変問題のために、さらに追究しなかった。これらの結果は、試験した全ての組み合わせについて、5〜6のpH範囲で、粘度および安定性が許容可能であったことを示す。pH6.0におけるより高いアルギニンレベルが、抗IL6(YTE)の安定性と粘度の双方に対して、最適なようである。
様々な賦形剤を使用した抗IL6(YTE)抗体製剤の粘度プロファイルを評価し、150mg/mLの製剤について、どの条件が最適であるかを判定した。図2Aを参照されたい。トレハロース、スクロース、およびソルビトールは、互いに同様の粘度プロファイルを有し、塩は、粘度を効果的に低下させなかった。データは、塩が抗体製剤の粘度を低下できないことを示す。図2Bは、粘度に対する、アルギニン、グルタミン酸、塩化ナトリウム、およびトレハロースの効果を実証する。
抗IL6(YTE)抗体製剤粘度に対する、様々な追加的な賦形剤の効果を調べた。結果は、表3に見られる。
アルギニンレベルの増大は、より低い粘度プロファイルをもたらした(図3および図4)。25mM程度に低いアルギニンが、100mg/mLで名目上10cP未満に粘度を低下できた。150mg/mLの抗体製剤を得るための150mMのアルギニンおよび220mMのアルギニンは、どちらも粘度を名目上約15cP未満に低下でき、より高い220mMのアルギニンのオプションは、実質的に約10cPに低下させた(図5)。100mMアルギニンと75mMトレハロースの試みで示されるように、データは、<20cPの標的を達成するために、150mMのアルギニンが必要であることを示唆する(図6)。220mMのアルギニン抗IL6(YTE)製剤は、約185mg/mL(過剰濃度レベル)で、150mMのアルギニンよりも約5cP低い粘度プロファイルを有する。図7を参照されたい。図8は、先行する100および150mg/mLの製剤について、粘度の温度依存性を示す。
実施例4
安定性および粘度に対する賦形剤の影響の調査
複数の製剤パラメータに対する、トレハロースおよびアルギニンの影響を評価する実験を実施した。抗体製剤を40℃または5℃のいずれかで保存して、様々な時点で純度低下を判定した。280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を使用して、実施例1に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。結果は、表4に提供される。
安定性および粘度に対する賦形剤の影響の調査
複数の製剤パラメータに対する、トレハロースおよびアルギニンの影響を評価する実験を実施した。抗体製剤を40℃または5℃のいずれかで保存して、様々な時点で純度低下を判定した。280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を使用して、実施例1に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。結果は、表4に提供される。
「合格」は、製剤が、可視粒子を事実上含まなかったことを示す。これらのアセスメントは、上で提供されるトレハロースおよびアルギニン製剤中で、抗IL6(YTE)が100mg/mL以上で安定していることを実証する。
実施例5
抗IL6(YTE)熱安定性
25mMのL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、220mMの塩酸アルギニン、0.07%(w/v)のポリソルベート80、pH6.0の中に150mg/mLの抗IL6抗体を含有する、抗IL6抗体製剤を製造した。この製剤の組成は、表5に概説される。
抗IL6(YTE)熱安定性
25mMのL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、220mMの塩酸アルギニン、0.07%(w/v)のポリソルベート80、pH6.0の中に150mg/mLの抗IL6抗体を含有する、抗IL6抗体製剤を製造した。この製剤の組成は、表5に概説される。
25mMのL−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、150mMの塩酸アルギニン、0.07%(w/v)のポリソルベート80、pH6.0の中に150mg/mLの抗IL6抗体を含有する、抗IL6抗体製剤を製造した。この製剤の組成は、表6に概説される。
医薬品を3ccガラスバイアルに無菌充填し、栓をしてアルミニウムオーバーシールで密封した。
抗IL6(YTE)抗体の熱安定性
表5に提示される製剤中の約1mg/mLの抗IL6(YTE)(25mML−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、220mM塩酸アルギニン、0.07%(w/v)ポリソルベート80、pH6.0)について、DSCを実施した。熱安定性プロファイルは、図9に記載される。
表5に提示される製剤中の約1mg/mLの抗IL6(YTE)(25mML−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、220mM塩酸アルギニン、0.07%(w/v)ポリソルベート80、pH6.0)について、DSCを実施した。熱安定性プロファイルは、図9に記載される。
実施例6
IVバッグ保護剤
i.材料
凍結乾燥製剤を使用して、複数供給業者からの様々なタイプの静脈輸液(IV)バッグおよびライン内における、抗IL6(YTE)抗体の適合性を評価した。抗IL6(YTE)抗体は凍結乾燥形態であり、それを戻して、25mML−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、225mM(8.5%[w/v])トレハロース二水和物、0.05%(w/v)ポリソルベート80、pH6.0中の50mg/mLの抗IL6(YTE)抗体を得た。
IVバッグ保護剤
i.材料
凍結乾燥製剤を使用して、複数供給業者からの様々なタイプの静脈輸液(IV)バッグおよびライン内における、抗IL6(YTE)抗体の適合性を評価した。抗IL6(YTE)抗体は凍結乾燥形態であり、それを戻して、25mML−ヒスチジン/L−ヒスチジン塩酸塩一水和物、225mM(8.5%[w/v])トレハロース二水和物、0.05%(w/v)ポリソルベート80、pH6.0中の50mg/mLの抗IL6(YTE)抗体を得た。
ii.方法
(a)適合性試験手順
診療所で利用できるIVバッグ(またはボトル)、IVフィルター延長セット、および様々なタイプの関連接触材料を使用して保持され送達される、抗IL6(YTE)抗体CSPの使用時安定性を評価した。試験範囲は、100mLのIVバッグを使用した20mg〜600mgであった(0.2mg/mL〜6mg/mL)。計算された抗IL6(YTE)抗体用量容積をバッグに入れて、穏やかに混合した。IVバッグを覆わずに、室温(RT、およそ23℃)および冷蔵条件下(2〜8℃)の双方で、24時間保存した。適切なインキュベーション時間後、IV投与、フィルター、および針付き延長セットを通じた、ポンプまたは重力のいずれかによる100mL/時間での模擬点滴によって、IVバッグ内のCSPを収集した。外観検査、HPSEC、および紫外可視(UV−Vis)吸光度によって、CSPにおける抗IL6(YTE)抗体の粒子形成/沈殿安定性および回収率を評価した。
(a)適合性試験手順
診療所で利用できるIVバッグ(またはボトル)、IVフィルター延長セット、および様々なタイプの関連接触材料を使用して保持され送達される、抗IL6(YTE)抗体CSPの使用時安定性を評価した。試験範囲は、100mLのIVバッグを使用した20mg〜600mgであった(0.2mg/mL〜6mg/mL)。計算された抗IL6(YTE)抗体用量容積をバッグに入れて、穏やかに混合した。IVバッグを覆わずに、室温(RT、およそ23℃)および冷蔵条件下(2〜8℃)の双方で、24時間保存した。適切なインキュベーション時間後、IV投与、フィルター、および針付き延長セットを通じた、ポンプまたは重力のいずれかによる100mL/時間での模擬点滴によって、IVバッグ内のCSPを収集した。外観検査、HPSEC、および紫外可視(UV−Vis)吸光度によって、CSPにおける抗IL6(YTE)抗体の粒子形成/沈殿安定性および回収率を評価した。
(b)外観検査
IVバッグに対して直接、また3ccガラス薬物バイアル内に模擬輸液した材料についても、可視粒子、透明度/乳白光、および色について、PhEurから適応された手順(それぞれ2.9.20、2.2.1、および2.2.2節)に従って、外観検査を実施した。出発抗IL6(YTE)抗体製剤は、わずかに乳白光があり無色から淡黄色であった。模擬点滴後、抗IL6(YTE)抗体CSPは、全てのCSPサンプルで透明無色から淡黄色であった。しかしIVBPを使用しなかった場合は、IVバッグ内での抗IL6(YTE)抗体の希釈に際して、粒子レベルの増大が観察された。IVBPの使用は、CSP中の粒子形成を軽減した。
IVバッグに対して直接、また3ccガラス薬物バイアル内に模擬輸液した材料についても、可視粒子、透明度/乳白光、および色について、PhEurから適応された手順(それぞれ2.9.20、2.2.1、および2.2.2節)に従って、外観検査を実施した。出発抗IL6(YTE)抗体製剤は、わずかに乳白光があり無色から淡黄色であった。模擬点滴後、抗IL6(YTE)抗体CSPは、全てのCSPサンプルで透明無色から淡黄色であった。しかしIVBPを使用しなかった場合は、IVバッグ内での抗IL6(YTE)抗体の希釈に際して、粒子レベルの増大が観察された。IVBPの使用は、CSP中の粒子形成を軽減した。
(c)純度および可溶性凝集
TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosoh Bioscience LLC,Montgomeryville,PA)を使用して、高性能サイズ排除クロマトグラフィー(HPSEC)を実施し、CSPサンプルの純度と可溶性凝集を評価した。
TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosoh Bioscience LLC,Montgomeryville,PA)を使用して、高性能サイズ排除クロマトグラフィー(HPSEC)を実施し、CSPサンプルの純度と可溶性凝集を評価した。
(d)濃度および回収率
Agilentモデル8453 UV−Vis分光光度計(Santa Clara CA)を使用して、280nmにおける紫外可視(UV−Vis)吸光度によって、タンパク質回収率を評価し、タンパク質濃度をアッセイした。UV−Visの量子化限界未満の用量では、280nmでの蛍光励起および335nmでの発光があるHPSECを使用して、線形ピーク面積標準検量線を使用して、タンパク質をアッセイした。
Agilentモデル8453 UV−Vis分光光度計(Santa Clara CA)を使用して、280nmにおける紫外可視(UV−Vis)吸光度によって、タンパク質回収率を評価し、タンパク質濃度をアッセイした。UV−Visの量子化限界未満の用量では、280nmでの蛍光励起および335nmでの発光があるHPSECを使用して、線形ピーク面積標準検量線を使用して、タンパク質をアッセイした。
iii.結果と考察
(a)生理食塩水IVバッグ内の粒子形成
IVBPを使用しなかった最初の試験では、抗IL6(YTE)抗体について、100mLの生理食塩水IVバッグ内に、および0.2ミクロンインラインフィルターを通じた模擬点滴後に3ccガラスバイアル内に収集された材料中に、可視粒子が観察された(図10)。その他の全ての検査結果は、許容可能だった。可視粒子は、一般に70・mよりも大型であるため、これらの可視粒子は、0.22ミクロンインラインフィルターの後に形成されていなくてはならない。事実上、3ccガラスバイアル内に収集されたサンプルは、手動外観検査過程で反転および旋回撹拌する間に、粒子レベルが増大したことが観察された。本発明者らは、粒子形成が、溶液中に存在する界面活性剤が不十分であるという事実に起因するという、仮説を立てた。これを調査するために、追加的なポリソルベートをIVバッグ内に添加した。
(a)生理食塩水IVバッグ内の粒子形成
IVBPを使用しなかった最初の試験では、抗IL6(YTE)抗体について、100mLの生理食塩水IVバッグ内に、および0.2ミクロンインラインフィルターを通じた模擬点滴後に3ccガラスバイアル内に収集された材料中に、可視粒子が観察された(図10)。その他の全ての検査結果は、許容可能だった。可視粒子は、一般に70・mよりも大型であるため、これらの可視粒子は、0.22ミクロンインラインフィルターの後に形成されていなくてはならない。事実上、3ccガラスバイアル内に収集されたサンプルは、手動外観検査過程で反転および旋回撹拌する間に、粒子レベルが増大したことが観察された。本発明者らは、粒子形成が、溶液中に存在する界面活性剤が不十分であるという事実に起因するという、仮説を立てた。これを調査するために、追加的なポリソルベートをIVバッグ内に添加した。
(c)粒子形成に対する界面活性剤レベルの影響の調査
最高およそ250倍のポリソルベート希釈の効果を評価した(100mL/0.4mL=250倍希釈)。抗IL6(YTE)抗体をIVバッグ内に投入する前に、生理食塩水IV液をポリソルベート80の添加によって改質した。添加されるポリソルベート80は0%〜0.018%w/vで変動し、外観検査を実施した(表7)。
最高およそ250倍のポリソルベート希釈の効果を評価した(100mL/0.4mL=250倍希釈)。抗IL6(YTE)抗体をIVバッグ内に投入する前に、生理食塩水IV液をポリソルベート80の添加によって改質した。添加されるポリソルベート80は0%〜0.018%w/vで変動し、外観検査を実施した(表7)。
20mgの使用量では、残留する0.0002%のPS80は、添加された抗IL6(YTE)抗体製剤容積中のポリソルベートの希釈によって、寄与されたことに留意されたい(0.05%/250=0.0002%)。これらのデータに基づいて、0.009%w/vを超えるポリソルベート80は、CSP中で観察された粒子形成を効果的に軽減し得た。図11は、0.012%w/vのポリソルベート80が添加された、生理食塩水中の抗IL6(YTE)抗体の写真を示す。
(d)IVバッグ内の粒子形成を軽減するためのIVバッグ保護剤(IVBP)の使用
IVBPを使用して、抗IL6(YTE)抗体の安定性を維持するのに必要なより高レベルのポリソルベートを提供した。誤差およびバッグ過充填変動性を考慮した、レベルの頑強性のために、0.012%w/vの最終ポリソルベート80レベルを目標とした。使用されたIVバッグ保護剤(IVBP)は、pH6.0のクエン酸緩衝液中で調合された、0.65%(w/v)のポリソルベート80であった。IVバッグの調製手順を変更し、抗IL6(YTE)抗体用量を添加する前に、1.8mLの容積のIVBPを添加して、穏やかに混合した。これは、低用量で約0.012%w/v、高用量で0.018%w/vのポリソルベートレベルをもたらした。5種の異なる生理食塩水IVバッグタイプ内のIVBPを用いて、適合性試験を実施した。IVBPを使用した場合、これらは抗IL6(YTE)抗体と適合性であることが分かった。
IVBPを使用して、抗IL6(YTE)抗体の安定性を維持するのに必要なより高レベルのポリソルベートを提供した。誤差およびバッグ過充填変動性を考慮した、レベルの頑強性のために、0.012%w/vの最終ポリソルベート80レベルを目標とした。使用されたIVバッグ保護剤(IVBP)は、pH6.0のクエン酸緩衝液中で調合された、0.65%(w/v)のポリソルベート80であった。IVバッグの調製手順を変更し、抗IL6(YTE)抗体用量を添加する前に、1.8mLの容積のIVBPを添加して、穏やかに混合した。これは、低用量で約0.012%w/v、高用量で0.018%w/vのポリソルベートレベルをもたらした。5種の異なる生理食塩水IVバッグタイプ内のIVBPを用いて、適合性試験を実施した。IVBPを使用した場合、これらは抗IL6(YTE)抗体と適合性であることが分かった。
iv.結論
この事例研究では、IVバッグ内のCSP中のタンパク質性粒子の形成が、保護レベル未満へのポリソルベート80の希釈によって引き起こされた。バッグ希釈剤のIVバッグ保護剤(IVBP)による前処置は、抗IL6(YTE)抗体臨床用無菌製剤(CSP)の粒子形成を軽減するのに必要なレベル以上(約0.009%超)に、IVバッグ内のポリソルベートレベルを維持するために必要であると判定された。使用されたIVバッグ保護剤(IVBP)は、pH6.0のクエン酸緩衝液中で調合された、0.65%(w/v)のポリソルベート80であり、抗IL6(YTE)抗体の前に、バッグに添加された。ポリソルベート含有IVバッグ保護剤(IVBP)の実装は、抗IL6(YTE)抗体CSPの粒子形成を完全に軽減した。
この事例研究では、IVバッグ内のCSP中のタンパク質性粒子の形成が、保護レベル未満へのポリソルベート80の希釈によって引き起こされた。バッグ希釈剤のIVバッグ保護剤(IVBP)による前処置は、抗IL6(YTE)抗体臨床用無菌製剤(CSP)の粒子形成を軽減するのに必要なレベル以上(約0.009%超)に、IVバッグ内のポリソルベートレベルを維持するために必要であると判定された。使用されたIVバッグ保護剤(IVBP)は、pH6.0のクエン酸緩衝液中で調合された、0.65%(w/v)のポリソルベート80であり、抗IL6(YTE)抗体の前に、バッグに添加された。ポリソルベート含有IVバッグ保護剤(IVBP)の実装は、抗IL6(YTE)抗体CSPの粒子形成を完全に軽減した。
実施例7
非抗IL6抗体の安定性と粘度に対する賦形剤の影響の調査
複数の製剤パラメータに対する、プロリンおよびアルギニンの影響を評価する実験を実施した。抗IL6抗体および非抗IL6抗体(抗体X)製剤を40℃および5℃で保存し、様々な時点で、純度低下および可視粒子外観を判定した。DSC(VP−DSC,Microcal,Northampton,MA)を使用して、熱安定性を判定した。Anton Paar MCR301レオメータを使用して、製剤粘度を測定した。280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を使用して、実施例1に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。DSCを使用して、熱安定性を判定した。
非抗IL6抗体の安定性と粘度に対する賦形剤の影響の調査
複数の製剤パラメータに対する、プロリンおよびアルギニンの影響を評価する実験を実施した。抗IL6抗体および非抗IL6抗体(抗体X)製剤を40℃および5℃で保存し、様々な時点で、純度低下および可視粒子外観を判定した。DSC(VP−DSC,Microcal,Northampton,MA)を使用して、熱安定性を判定した。Anton Paar MCR301レオメータを使用して、製剤粘度を測定した。280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を使用して、実施例1に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。DSCを使用して、熱安定性を判定した。
結果は、表8に提供される。2つの抗体X製剤を比較した。2つの抗体X製剤は、1つが50mMのアルギニンを有し、もう1つが50mMのプロリンを有したこと以外は、同一であった。結果は、抗体Xでは、アルギニン製剤中の粒子の可視外観が、5℃で11週間後に許容不能であったのに対し、プロリン含有製剤は、目に見える粒子を実質的に含まないままであったことを示す。したがってアルギニンは、抗体X製剤の粒子形成に悪影響を及ぼした。どちらの抗体X製剤も、HP−SECによる測定で、安定性で同様の純度低下率を有し、アルギニンが、抗体Xを安定化も不安定化もしなかったことを示す。アルギニンは、抗体X製剤の粘度を低下させた。トレハロース/アルギニン製剤中の抗体XのTm1は、アルギニン製剤中の抗IL6抗体よりも実質的に高かったが、それでもなお、より低い純度低下率と、可視粒子を事実上含まないままであるという事実によって示されるように、抗IL6抗体の安定性が、はるかにより高かったことは、注目すべきである。これらの比較例は、アルギニンが、抗IL6抗体を安定化したのと同じようには、抗体Xを安定化しなかったことを示す。抗体Xの純度低下率は、アルギニンではより低くはなかったが(同じ状態のまま)、アルギニンは粒子形成に関する不安定性をもたらさなかった。
実施例8
4種の異なる抗体の安定性に対するアルギニンおよびその他の賦形剤の影響
抗IL6抗体の安定性、そしてまたいくつかの異なる非抗IL6抗体の安定性に対する、様々な賦形剤の影響を評価する実験を複数濃度で実施した。試験された賦形剤は、塩基緩衝液(賦形剤なし)、トレハロース、塩、および塩酸アルギニンであった。様々な抗体について、DSCを使用して熱安定性を判定した。抗体製剤を40℃で保存して、HP−SECを使用して純度低下率を測定した。280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を使用して、実施例1に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィー(HP−SEC)を実施した。
4種の異なる抗体の安定性に対するアルギニンおよびその他の賦形剤の影響
抗IL6抗体の安定性、そしてまたいくつかの異なる非抗IL6抗体の安定性に対する、様々な賦形剤の影響を評価する実験を複数濃度で実施した。試験された賦形剤は、塩基緩衝液(賦形剤なし)、トレハロース、塩、および塩酸アルギニンであった。様々な抗体について、DSCを使用して熱安定性を判定した。抗体製剤を40℃で保存して、HP−SECを使用して純度低下率を測定した。280nmにおけるUV検出がある、TSK−ゲルG3000SWXLカラムおよびSWガードカラム(Tosh Bioscience LLC,Mongomeryville,PA)を使用して、実施例1に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィー(HP−SEC)を実施した。
試験結果を表9に要約する。全ての抗体に対する、塩基緩衝液のみの場合と比較したアルギニンの影響を表10に要約する。アルギニンは、全ての抗体中でTm1の低下を引き起こしたにもかかわらず、4種の抗体の純度低下率に対するアルギニンの影響に、一貫した傾向はなかった。抗IL6抗体は、これらの4つの抗体の内、アルギニンによって実質的に安定化された唯一の抗体であった。アルギニンは、抗体の内2種の純度低下率に影響を及ぼさなかった(アッセイの変動性範囲内である、1ヶ月あたり約0.2%以下の純度低下)。1種の抗体がアルギニンによって不安定化された(抗体B、表9、14行)。
抗IL6抗体(表9、1〜6行)では、アルギニン製剤は、より低い測定されたTm1を有したが、それらは純度低下率を評価した際に最も安定していた。対照的に、アルギニンが抗体BのTm1を低下させ、純度低下率もまた増大させた一方で、トレハロースは、Tm1を増大させ、純度低下率を減少させた(表9、11〜14行)。抗体AおよびCでは、Tm1は、トレハロースで増大し、塩およびアルギニンの双方で低下したが、なおも純度低下率は1ヶ月あたり0.2%(アッセイの予測される変動以内)であり続け、全ての製剤が同様の安定性を有したことが示唆された。
本明細書に記載される全ての様々な実施形態または選択肢は、あらゆる全てのバリエーションで組み合わせ得る。そのいくつかの実施形態を参照して、本発明を具体的に示し説明したが、当業者は、それらが単なる例として提示され、限定でなく、本発明の精神と範囲を逸脱することなく、形態および詳細の様々な変更が可能であることを理解するであろう。したがって本発明の広さおよび範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびそれらの均等物によってのみ定義されるべきである。
学術誌論文または抄録、公開されたまたは対応する米国または外国特許出願、付与された特許もしくは外国特許、またはあらゆるその他の文献をはじめとする、本明細書で引用される全ての文献は、引用された文献中に提示される全てのデータ、表、数値、および文章を含めて、それぞれその全体を参照によって本明細書に援用する。
Claims (30)
- a.約150mg/mL〜約400mg/mLの抗IL−6抗体、および
b.約150mMを超えるアルギニン
を含んでなり、水溶液中にあって、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - 前記抗IL−6抗体が可変重鎖領域(VH)および可変軽鎖領域(VL)を含んでなり、前記VH領域が配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなり、前記VL領域が配列番号10、11、および12を含んでなるCDRを含んでなる、請求項1に記載の抗体製剤。
- 前記抗IL−6抗体が、配列番号1および配列番号2を含んでなる、請求項2に記載の抗体製剤。
- 前記抗体が、SEC HPLCによる測定で、2℃〜8℃で12ヶ月間にわたり安定している、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 前記抗体製剤の前記粘度が、23℃で14cP未満である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 200mMを超えるアルギニンを含んでなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 220mMを超えるアルギニンを含んでなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 150mM〜400mMのアルギニンを含んでなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 界面活性剤をさらに含んでなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 前記界面活性剤が、ポリソルベート、プルロニック、ブリジ、およびその他の非イオン性界面活性剤からなる群から選択される、請求項7に記載の抗体製剤。
- 前記界面活性剤が、ポリソルベート80である、請求項8に記載の抗体製剤。
- ヒスチジンをさらに含んでなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- トレハロースを実質的に含まない、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 二糖類を実質的に含まない、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- オスモライトを実質的に含まない、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 27Ga肉薄PFS針の通過時に8N未満の射出力を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 300〜450mosm/kgのモル浸透圧濃度を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- 前記抗体が、前記抗体製剤の全ポリペプチド組成の90%(w/w)を超える、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体製剤。
- a.配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる、約150mg/mL〜約400mg/mLの抗体、
b.約150mM〜約400mMのアルギニン、
c.約0.01%〜約0.1%のポリソルベート80、および
d.約20mM〜約30mMのヒスチジン
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - a.配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約150mg/mL〜約400mg/mLの抗体、
b.約150mM〜約400mMのアルギニン、
c.約0.01%〜約0.1%のポリソルベート80、および
d.約20mM〜約30mMのヒスチジン
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - a.配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約150mg/mLの抗体、
b.約220mMのアルギニン、
c.約0.07%のポリソルベート80、および
d.約25mMのヒスチジン
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - a.配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約150mg/mLの抗体、
b.約150mMのアルギニン、
c.約0.07%のポリソルベート80、および
d.約25mMのヒスチジン
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - a.配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約50mg/mL〜約200mg/mLの抗体、
b.約20mM〜約400mMのアルギニン、
c.約0.01%〜約0.1%のポリソルベート80、
d.約5mM〜約100mMのヒスチジン、および場合により
e.約50mM〜約400mMのトレハロース
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - a.配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約50mg/mLの抗体、
b.約0.05%のポリソルベート80、
c.約25mMのヒスチジン、および
d.約225mMのトレハロース
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - a.配列番号7、8および9を含んでなる相補性決定領域(CDR)を含んでなる可変重鎖領域(VH)と、配列番号10、11および12を含んでなるCDRを含んでなる可変軽鎖領域(VL)とを含んでなる、約100mg/mLの抗体、
b.約25mMのアルギニン、
c.約0.07%のポリソルベート80、
d.約25mMのヒスチジン、および
e.約180mMのトレハロース
を含んでなり、23℃で20cP未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。 - 請求項1〜3および20〜26のいずれか一項に記載の前記抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において骨関節炎に伴う疼痛を治療する方法。
- 請求項1〜3および20〜26のいずれか一項に記載の前記抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において慢性腰痛に伴う疼痛を治療する方法。
- 請求項1〜3および20〜26のいずれか一項に記載の前記抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において関節リウマチを治療する方法。
- a.配列番号1および2のアミノ酸配列を含んでなる抗体を約150mg/mL〜約400mg/mLに濃縮するステップと;
b.アルギニンを(a)の前記抗体に添加して、約150mMを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップと
を含んでなり、(b)の前記抗体製剤が、水溶液中にあり、23℃で20cP未満の粘度を有し、(b)の前記抗体製剤が、SEC HPLCによる測定で、2℃〜8℃で12ヶ月間にわたり安定している、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法。
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